CH651577A5

CH651577A5 - Tetra- ou pentapeptides, leur preparation et les medicaments qui les contiennent.

Info

Publication number: CH651577A5
Application number: CH4990/80A
Authority: CH
Inventors: Jean Bouchaudon; Daniel Farge; Claude James
Original assignee: Rhone Poulenc Ind
Priority date: 1979-06-29
Filing date: 1980-06-27
Publication date: 1985-09-30
Also published as: IT8023072A0; ZA803887B; SE8004792L; LU82567A1; AU5970080A; SE448302B; IE51058B1; NL8003762A; JPS5636440A; BE884077A; DK154940C; AU544863B2; US4742048A; DK154940B; FR2460290B1; DE3024281A1; GB2053231B; IT1131395B; DK277780A; FR2460290A1

Description

La présente invention concerne de nouveaux tètra- ou pentapeptides de formule générale:

R-NH-C H-CO-NH-C H-CO-Rt

35

CH,

I

CH2CH2-CO-NH-CH-R2 (CH2)3 r3-NH-CH-r4

a)

40

et leurs sels, leur préparation et les médicaments qui les contiennent.

Les parois bactériennes, par exemple les parois de myco-batéries, sont constituées essentiellement d'un peptidoglycane 45 formé d'acide N-acétylmuramique sur lequel sont fixés des peptides renfermant l'enchaînement L Ala-D Glu-DAP. Par ailleurs, les parois bactériennes sont très riches en lipides dont certains sont libres et extractibles et d'autres sont liés à la structure de la paroi et sont constitués par des acides mycoli- 50 ques (acides gras géants, a-ramifïés et P-hydroxylés). L'ensemble des constituants de la paroi cellulaire forme une structure covalente composée d'un peptidoglycane et d'un myco-late d'arabinogalactane liés entre eux par des liaisons phos-phodiesters. Ces parois bactériennes présentent la plupart des 55 propriétés biologiques des cellules entières lorsqu'elles sont associées à une huile minérale ou végétale et administrées après mise en suspension dans du soluté physiologique.

Dans les brevets belges 821 385,852 348 et 852 349 sont décrits des peptides, couplés avec l'acide N-acétylmuramique, 60 qui contiennent l'enchaînement L Ala-D Glu ou L Ser-D Glu et qui sont efficaces comme adjuvants immunologiques et comme agents antiinfectieux.

Dans le brevet français 75.24440, publié sous le numéro 2 320 107, sont décrits des produits de couplage entre un acide gras et un saccharide heptapeptide isolé à partir d'une mycobactérie contenant une cire «D» et qui peuvent être représentés par la formule suivante:

NAG - Np

Ala I

Glu DAP

1

Ala-

NAG - NAM

Ala l

Glu

I

»DAP

(R COOH)

n m

ai)

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dans laquelle en particulier:

NAG = N-acétylglucosamine; NAM = acide N-acétylmuramique R= radical alcoyle contenant 9 à 17 atomes de carbone.

Ces produits sont des adjuvants immunologiques de la production d'anticorps et de l'hypersensibilité retardée capables d'agir seuls, c'est-à-dire sans qu'il soit nécessaire de les administrer en solution huileuse.

Tous ces produits se caractérisent par la présence d'acide N-acétylmuramique qui, d'après KASUMOTO et al., Tetra-hedron Letters 49,4899 (1978), est considéré comme lié à l'activité immunologioue.

Il a maintenant été trouvé que les peptides de formule générale (I) présentent, malgré l'absence d'acide N-acétylmura-mique, des propriétés adjuvantes et immunostimulantes remarquables. Par ailleurs ces composés, qui sont bien définis, peuvent être obtenus aisément avec la pureté suffisante requise pour l'emploi en thérapeutique.

Dans la formule générale (I),

R représente un atome d'hydrogène ou un reste d'acide gras,

R3 représente un atome d'hydrogène ou un reste d'acide gras ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est éventuellement substituée par un reste d'acide gras, étant entendu que l'un au moins des symboles R et R3 représente ou contient un reste d'acide gras,

Ri représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, l'un des symboles R2 ou R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyl dont la partie alcoyle qui contient 1 à 4 atomes de carbone est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, ou un radical N-carbonylglycyle (-CO-NH-CH2-COOH) ou N-carbonyl D alanyle [-CO-NH-CH(CH3)-COOH] éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone (éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle), et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle qui contient 1 à 4 atomes de carbone est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, étant entendu que R2 et R4 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène et étant entendu que l'un au moins des symboles R2, R3 ou R4 représente ou contient un reste glycyle ou D alanyle.

Dans la formule générale (I), l'alanine liée à l'acide gluta-mique est sous forme L, l'acide glutamique est sous Forme D, la lysine ou ses dérivés, lorsque l'un des symboles R2 ou R4 représente un atome d'hydrogène, est sous forme L, et l'acide diamino-2,6 pimélique ou ses dérivés, lorsque R2 et R4 représentent un radical carboxy ou un dérivé de la fonction acide, est sous forme D,D; L,L; DD, LL (racémique) ou D,L (méso).

Par reste d'acide gras, il faut entendre de préférence un radical alcanoyle contenant 1 à 45 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical hydroxy, phényle ou cyclo-hexyle, un radical alcénoyle contenant 3 à 30 atomes de car-

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bone et pouvant contenir plus d'une double liaison ou un reste d'acide mycolique tel que rencontré dans la structure de la paroi bactérienne des mycobactéries, de Nocardia ou de corynebactéries.

Selon la présente invention, les nouveaux peptides de formule générale (I) peuvent être obtenus selon les méthodes généralement utilisées en chimie peptidique. Les différentes réactions sont mises enjeu après blocage par des groupements protecteurs convenables des fonctions amine ou acide qui ne doivent pas participer à la réaction et sont suivies éventuellement du déblocage de ces fonctions.

Selon la présente invention, les nouveaux produits de formule générale (I) peuvent être obtenus par action d'un aminoacide de formule générale:

R5-NH-CH-C0 R' (ni)

dans laquelle R5 représente un atome d'hydrogène, un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine tel que le radical benzyloxycarbonyle ou tbutyloxycar-bonyle, R6 représente un atome d'hydrogène ou un radical méthyle étant entendu dans ce cas que l'alanine est sous forme D, et R' représente un radical hydroxy ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle sur un tri- ou tétra-peptide de formule générale:

Rr-NH-CH-CO-NH-Œ-CO-Rg

I I

ch3 ch2ch2-co-nh-ch-r9

l

(CH2)3

1 (TV)

R10-NH-CH-R4

dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine tel que le radical benzyloxycarbonyle ou t.butyloxycarbonyle, R8 représente un radical hydroxy ou amino ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, l'un des symboles R4 ou R9 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-car-bonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, étant entendu que R4 et R9 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène, et R10 représente un atome d'hydrogène ou un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine tel que le radical benzyloxycarbonyle ou t.butyloxycarbonyle ou un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est éventuellement substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de la fonction amine tel que le radical benzyloxycarbonyle ou t.butyloxycarbonyle, étant entendu que l'un au moins des radicaux R7 ou R,o représente ou contient un reste d'acide gras et que, R4 et R9 étant définis comme précédemment, Rio représente un atome d'hydrogène, et que l'un des symboles R4 ou R9 représentant un radical carboxy, l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, R!0 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de la fonction amine, suivie du remplacement des radicaux R5, R7 et/ou R]0 (lorsqu'ils représentent ou contiennent un groupement protecteur de la fonction amine) par un atome d'hydrogène.

Plus particulièrement, les nouveaux peptides de formule générale (I) dans laquelle R, R] et R3 sont définis comme précédemment et l'un des symboles R2 ou R4 représente un radical N-carbonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle peuvent être obtenus par action d'un aminoacide de formule générale (III), dans laquelle R6 et R' sont définis comme précédemment et R5 représente un atome d'hydrogène sur un tri- ou tétrapeptide de formule générale (IV) dans laquelle R7 est défini comme précédemment, R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, l'un des symboles R4 ou R9 représente un radical carboxy et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et Ri0 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine, étant entendu que l'un au moins des symboles R7 ou R10 représente ou contient un reste d'acide gras, suivie du remplacement du radical R7 ou R10, lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine, par un atome d'hydrogène.

Généralement, il est nécessaire d'activer la fonction acide libre du peptide de formule générale (IV) préalablement à l'action de l'aminoacide de formule générale (III). De préférence, le dérivé activé du peptide de formule générale (IV) est un anhydride mixte préparé in situ par action d'un halogéno-formiate d'alcoyle tel que le chloroformiate d'isobutyle sur le peptide de formule générale (IV). La condensation du dérivé activé s'effectue dans un solvant organique tel que le di-oxanne, le tétrahydrofuranne, le chloroforme, le toluène ou le diméthylformamide ou en milieu hydroorganique, en présence d'une base (minérale, telle que la soude, ou organique, telle que la triéthylamine), à une température comprise entre -10 et+30 °C.

Le remplacement éventuel des radicaux protecteurs R7 ou R10 par un atome d'hydrogène et des radicaux protecteurs R8 et R' par des radicaux hydroxy peut être effectué selon les méthodes connues, en fonction de la nature de ces groupements. Il est particulièrement avantageux de choisir les radicaux R7 ou Rio, R8 et R' de telle manière que leur remplacement par un atome d'hydrogène ou par un radical hydroxy ou carboxy puisse s'effectuer en une seule étape. Par exemple, R7 ou R10 peuvent représenter un radical benzyloxycarbonyle et les symboles R8 et R' représenter un radical benzyloxy ou benzyloxycarbonyle, et, dans ces conditions le remplacement de ces radicaux par des atomes d'hydrogène ou par un radical hydroxy ou carboxy selon les cas s'effectue par hydrogénolyse en opérant dans un solvant organique approprié tel que l'acide acétique (éventuellement en mélange avec un autre solvant organique tel que le méthanol) ou dans un solvant hydroorganique, en présence d'un catalyseur tel que le palladium, par exemple le palladium sur noir, à une température voisine de 20 °C et sous une pression voisine de 760 mm de mercure. Cependant, il peut être nécessaire d'éliminer un ou plusieurs de ces groupements protecteurs sans toucher aux autres. Dans ce cas les groupements protecteurs des fonctions aminés pourront être,

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par exemple, l'un un radical t.butyloxycarbonyle (éliminable par hydrolyse acide) et l'autre un radical benzyloxycarbonyle (éliminable par hydrogénolyse) et les groupements protecteurs des fonctions acides pourront être, par exemple, l'un un radical méthyle ou t.butyle (éliminable par hydrolyse acide ou basique) et l'autre un radical benzyle (éliminable par hydrogénolyse).

Plus particulièrement, les nouveaux peptides de formule générale (I) dans laquelle R, Rh R2 et R4 sont définis comme précédemment, et R3 représente un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est éventuellement substituée par un reste d'acide gras, peuvent être obtenus par action d'un aminoacide de formule générale (III) dans laquelle R6 est défini comme précédemment, R5 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine et R' représente un radical hydroxy, sur un tri- ou tétrapeptide de formule générale (IV) dans laquelle R4, R7, R8 et R9 sont définis comme précédemment et R10 représente un atome d'hydrogène, étant entendu que l'un au moins des symboles R5 et R7 représente un reste d'acide gras, suivie du remplacement du radical R5 ou R7, lorsqu'il représente un groupement protecteur de la fonction amine, par un atome d'hydrogène.

Généralement, il est nécessaire d'activer la fonction acide de l'aminoacide de formule générale (III) préalablement à son action sur le peptide de formule générale (IV). Généralement, le dérivé activé de l'aminoacide de formule générale (III) est un anhydride mixte préparé in situ par action d'un halogéno-formiate d'alcoyle (tel que le chloroformiate d'isobutyle) sur l'aminoacide de formule générale (III). La condensation du dérivé activé s'effectue dans un solvant organique tel que le dioxanne, le tétrahydrofuranne, la chloroforme, le toluène ou le diméthylformamide ou dans un milieu hydroorganique, en présence d'une base (minérale, telle que la soude, ou organique, telle que la triéthylamine), à une température comprise entre —10 et +30 °C.

Lorsque l'on utilise l'acide de formule générale (III), la condensation est effectuée généralement en présence d'un agent de condensation tel que le dicyclohexylcarbodiimide en opérant dans un solvant organique tel que le chlorure de méthylène ou le diméthylformamide à une température comprise entre -10 et + 30 °C.

Le remplacement des radicaux protecteurs R5 ou R7 par un atome d'hydrogène et des radicaux protecteurs R8 par un radical hydroxy selon les cas peut être effectuée selon les méthodes connues en fonction de la nature de ces groupements. Il est particulièrement avantageux d'effectuer ce remplacement dans les conditions données précédemment.

Selon la présente invention, les nouveaux peptides de formule générale (I) peuvent être obtenus par action d'un dipep-tide de formule générale:

rr-nh-c h-co-nh-c h-co-rg (v)

I I

ch3 ch2ch2cooh dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine et Rg représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, sur un di- ou tripeptide de formule générale:

h2n-ch-r9

(ch2)3 (vi)

I

R,0-NH-CH-R4 dans laquelle l'un des symboles R4 ou R9 représente un atome

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d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-carbonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, étant entendu que R4 et R9 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène et R10 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle (dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine), l'un au moins des symboles R4 ou R9 et Rio représentant ou contenant un radical glycyle ou D alanyle tel que défini ci-avant et l'un au moins des symboles R7 et R10 représentant ou contenant un reste d'acide gras, suivie du remplacement du radical R7 ou R10 (lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine) par un atome d'hydrogène et du radical R8 lorsqu'il represente un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle par un radical hydroxy.

Généralement il est nécessaire d'activer la fonction acide libre du dipeptide de formule générale (V) préalablement à son action sur le peptide de formule générale (VI) De préférence, le dérivé activé du dipeptide de formule générale (V) est un anhydride mixte, préparé in situ par action d'un halogéno-formiate d'alcoyle tel que le chloroformiate d'isobutyle. Dans ces conditions la condensation s'effectue comme indiqué ci-dessus pour l'action d'un aminoacide de formule générale (III) sur un tripeptide de formule générale (IV).

Le remplacement éventuel des radicaux protecteurs R7 ou Rio par un atome d'hydrogène et des radicaux protecteurs Rg par un radical hydroxy selon les cas s'effectue selon les méthodes connues indiquées précédemment.

Selon la présente invention, les nouveaux peptides de formule générale (I) peuvent être obtenus par action d'un dérivé de la L alanine de formule générale:

Rt-NH-ch-cooh (vii)

I

dans laquelle r7 représente un reste d'acide gras ou un groupement procteteur de la fonction amine, sur un tri- ou tétrapeptide de formule générale:

h2n-ch-co-r8

ch2ch2-co-nh-çh-r9

(ch2)3

R,o-NH-ch-r4 (viii)

dans laquelle l'un des symboles r4 ou r9 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-carbonyl glycyle ou N-car-bonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre repré-

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sente un atome d'hydrogène ou xm radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, étant entendu que R4 et R9 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène, Rg représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, et RI0 représente un reste d'acide gras, un groupement protecteur de la fonction amine ou un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine, l'un au moins des symboles R4 ou R9 et R10 représentant ou contenant un radical glycyle ou D alanyle tel que défini ci-avant et l'un au moins des symboles R7 et R10 représentant ou contenant un reste d'acide gras, suivie du remplacement du radical R7 ou Rio (lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine) par un atome d'hydrogène et un radical Rg (lorsqu'il représente un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle par un radical hydroxy, dans les conditions décrites ci-dessus pour l'action d'un aminoacide de formule générale (III) sur un tri- ou tétrapeptide de formule générale (TV).

Selon la présente invention, les nouveaux peptides de formule générale (I) peuvent être obtenus par action d'un acide de formule générale:

R"-CO-OH (IX)

(dans laquelle R"-CO- représente un reste d'acide gras tel que défini ci-avant) sur un tètra- ou pentapeptide de formule générale:

R„-NH-C H-CO-NH-C H-CO-R8

CH3 CH2CH2-CO-NH-ÇH-R9

(CH2)3

r10-NH-CH-r4 (X)

dans laquelle l'un des symboles R4 ou R9 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-carbonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, étant entendu que R4 et R9 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène, Rg représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, Ri0 représente un atome d'hydrogène, un reste d'acide gras, un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine libre est éventuellement substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine et Rn représente un atome d'hydrogène, un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, étant entendu que l'un au moins des symboles R4 ou R9 et R10 représente ou contient un reste glycyle ou D alanyle tel que défini ci-avant et que l'un au moins des symboles R]0 et Ri 1 représente un atome d'hydrogène ou, pour Rio, un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est libre, et que lorsque l'un des radicaux R]0 ou Rn représente ou contient un reste d'acide gras celui-ci et le reste R"-CO- sont identiques ou différents, suivis du remplacement du radical Ri0 ou Ru (lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine) par un atome d'hydrogène et du radical Rg lorsqu'il représente un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle par un radical hydroxy.

Lorsque, dans la formule générale (X), le symbole Rg représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'un des symboles R4 ou R9 représente un reste N-carbonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle ou un radical alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, la condensation de l'acide de formule générale (IX) est effectuée généralement en présence d'un agent de condensation tel que le dicy-clohexylcarbodiimide en opérant dans un solvant organique tel que le chlorure de méthylène ou le diméthylformamide, à une température comprise entre —10 et + 30 °C.

Lorsque, dans la formule générale (X), l'un des symboles Rg représente ou contient un radical hydroxy et R4 et/ou R9 représente ou contient un radical carboxy, il est nécessaire d'activer l'acide de formule générale (IX) préalablement à son action sur le tètra- ou pentapeptide de formule générale (X). Comme dérivé activé de l'acide de formule générale (IX) il est particulièrement avantageux d'utiliser un halogénure d'acide ou un anhydride mixte préparé in situ par action d'un halogé-noformiate d'alcoyle, tel que le chloroformiate d'isobutyle, en présence d'une base.

Lorsque l'on utilise l'acide de formule générale (IX) sous forme d'halogénure d'acide, de préférence le chlorure, la réaction s'effectue dans un solvant organique tel que l'éther diéthylique ou le chlorure de méthylène, en présence d'une base (minérale, telle que la soude, ou organique, telle que la triéthylamine), à une température comprise entre 0 et 30 °C.

Lorsque l'on utilise l'acide de formule générale (IX) sous forme d'un anhydride mixte, la réaction s'effectue dans un solvant organique tel que le dioxanne, le tétrahydrofuranne, le chloroforme, le toluène ou le diméthylformamide ou dans un milieu hydroorganique, en présence d'une base (minérale, telle que la soude, ou organique, telle que la triéthylamine), à une température comprise entre —10 et +30 °C.

Le remplacement éventuel des radicaux R)0 et/ou R], par un atome d'hydrogène et du radical Rg par un radical hydroxy s'effectue selon les méthodes connues indiquées précédemment.

Pour obtenir Un produit de formule générale (I) dans laquelle R représente un reste d'acide gras et R3 représente le reste du même acide gras ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par le reste du même acide gras, la condensation de l'acide de formule générale (IX) s'effectue sur un produit de formule générale (X) dans laquelle R]0 représente un atome d'hydrogène ou un reste glycyle ou D alanyle et Rj 1 représente un atome d'hydrogène ou sur un produit de formule générale (X) dans laquelle Rio représente ou contient un reste d'acide gras identique à celui de l'acide de formule générale (IX) mis en œuvre et Ri 1 représente un atome d'hydrogène ou bien sur un produit de formule générale (X) dans laquelle R]0 représente un atome d'hydrogène ou un reste glycyle ou D alanyle et R, ] représente

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un reste d'acide gras identique à celui de l'acide de formule générale (IX) mis en œuvre, en opérant dans les conditions habituelles.

Pour obtenir un produit de formule générale (I) dans laquelle les symboles R et R3 représentent ou contiennent des restes d'acides gras différents, il est nécessaire d'effectuer la condensation d'un acide de formule générale (IX) sur un produit de formule générale (X) dans laquelle R10 représente ou contient un reste d'acide gras différent de celui de l'acide de formule générale (IX) mis en œuvre ou un groupement protecteur de la fonction amine et Ru représente un atome d'hydrogène ou bien sur un produit de formule générale (X) dans laquelle R10 représente un atome d'hydrogène ou un reste glycyle ou D alanyle et Rn représente un reste d'acide gras différent de celui de l'acide de formule générale (IX) mis en œuvre ou un groupement protecteur de la fonction amine, puis, le cas échéant, après élimination de ce groupement protecteur, d'effectuer la condensation d'un autre acide gras de formule générale (IX), en opérant dans les conditions habituelles.

L'aminoacide de formule générale (III) dans laquelle R^ représente un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, R' représente un radical hydroxy ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et R5 représente un reste d'acide gras, peut être obtenu par action d'un acide de formule générale (IX) ou d'un dérivé activé de cet acide sur la glycine ou la D alanine dont la fonction acide est éventuellement protégée sous forme d'ester suivie, le cas échéant, de l'élimination du groupement protecteur de la fonction acide.

Que la fonction acide de la glycine ou de la D alanine soit protégée ou non, la condensation s'effectue dans les conditions indiquées précédemment pour la condensation de l'acide de formule générale (IX) sur la tètra- ou pentapeptide de formule générale (X).

Le tri- ou tétrapeptide de formule générale (IV) dans laquelle l'un des symboles R4 et R9 représente un radical carboxy et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et R10 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle substitué par un reste d'acide gras ou par un groupement, protecteur de la fonction amine peut être obtenu par action, de préférence dans les conditions habituelles, d'un dipeptide de formule générale (V), dans laquelle R7 et R8 sont définis comme ci-dessus, sur un aminoacide ou un dipeptide de formule générale (VI), dans laquelle R10 est défini comme ci-dessus et l'un des symboles R4 ou R9 représente un radical carboxy ou un radical alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle.

En particulier, lorsque R8 forme avec le groupement car-bonyle auquel il est lié une fonction ester, et R4 et R9 représentent une fonction ester, il peut être nécessaire que les radicaux R8, R4 et R9 soient différents et choisis de telle manière que le remplacement d'un des radicaux R4 ou R9 par un radical carboxy s'effectue sans toucher au radical Rg et à l'autre radical R4 ou R9. Par exemple, l'un des radicaux R4 ou R9 peut représenter un radical benzyloxycarbonyl éliminable par hydro-

651 577

génolyse et le radical R8 et l'autre radical R» ou R9 un radical méthoxy qui n'est pas sensible à l'hydrogénolyse.

Le tri- ou tétrapeptide de formule générale (IV) dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, l'un des symboles R4 ou R9 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle ou N-carbonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, R4 et R9 ne pouvant pas représenter simultanément un atome d'hydrogène et R10 représente un atome d'hydrogène peut être obtenu par action, dans les conditions habituelles, d'un dipeptide de formule générale (V) dans laquelle R7 et R8 sont définis comme ci-dessus sur un aminoacide ou un dipeptide de formule générale (VI) dans laquelle R4 et R9 sont définis comme ci-dessus et R10 représente un groupement protecteur de la fonction amine, suivie du remplacement de ce groupement protecteur par un atome d'hydrogène, sans toucher au reste de la molécule. En particulier les groupements protecteurs de la fonction amine définis pour R7 et Rio doivent être différents et choisis de telle manière que le remplacement du radical Ri0 par un atome d'hydrogène s'effectue sans toucher au radical R7.

Le dipeptide de formule générale (V) peut être obtenu par action d'un dérivé activé de la L alanine de formule générale (VII) dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine sur un dérivé de l'acide D glutamique de formule générale:

H2N-CH-CO-R8 (XI)

CH2CH2-COOH

dans laquelle Rs représente un radical amino ou alcoyloxy-contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, dans les conditions décrites ci-dessus pour l'action de l'aminoacide de formule générale (VII) sur le peptide de formule générale (VIII).

Le dipeptide de formule générale (V) dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras peut aussi être obtenu par action d'un acide de formule générale (IX) sur un dipeptide de formule générale:

H2N-C H-CO-NH-C H-CO-R8 (XII)

CH3 CH2CH2COOH

dans laquelle R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, dans les conditions décrites précédemment pour l'action d'un acide de formule générale (IX) sur un tètra- ou pentapeptide de formule générale (X).

L'aminoacide de formule générale (VI) dans laquelle R4 représente un radical carbamoyle, R9 représente un radical carboxy et R10 représente un radical benzyloxycarbonyle sous forme méso, et plus précisément le D monoamide de l'acide benzyloxycarbonyl-(D)-méso-diamino-2,6 pimélique, peut être préparé selon la procédé décrit dans le brevet belge 821 385.

9

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

651577 10

L'aminoacide ou le dipeptide de formule générale (VI) ainsi formé est déplacé par action de l'hydrogène sulfuré pour dans laquelle R4 représente un radical carbamoyle, R9 repré- donner l'aminoacide de formule générale (VI) dans laquelle sente un radical carboxy et R10 représente un reste d'acide r4 représente un radical carbamoyle, R9 représente un radical gras, un groupement protecteur de la fonction amine ou un carboxy et RI0 représente un groupement protecteur de la reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substi- 5 fonction amine. Le radical amino en a du groupement carb-tuée par un reste d'acide gras ou par un groupement protec- oxy peut être protégé par un groupement protecteur ou acylé teur de fonction amine, sous forme racémique, D,D ou L,L par action d'un dérivé activé d'un acide de formule générale peut être préparé à partir de l'acide diamino-2,6 pimélique (IX) ou d'un aminoacide de formule générale (III) dans la-correspondant. A cet effet on prépare selon les méthodes con- quelle R5 représente un reste d'acide gras ou un groupement nues l'ester dibenzylique de l'acide dibenzyloxycarbonylami- 10 protecteur de la fonction amine et R' représente un radical no-2,6 pimélique, qui est monosaponifié selon la méthode dé- hydroxy. Après remplacement du radical R10 par un atome crite par A. ARENDT et coll., Roczniki Chemii Anu. Soc. d'hydrogène par des méthodes qui ne touchent pas au reste de Chim. Polonorum, 48,1305 (1974), [Chem. Abstr., 82, la molécule, on obtient le produit de formule générale (VI)

31497 g (1975)] puis transformé par action du méthanol am- dans laquelle R4 représente un radical carboxy, R9 représente moniacal en monoamide de formule générale: 15 un radical carbamoyle et R]0 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste Z-NH-C H-COOH (XIII) glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par

I un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonc-

(CH2)3 tion amine.

I 20 L'aminoacide ou le dipeptide de formule générale (VI)

Z-NH-C H-conh2 (jans laquelle R, représente un radical carbamoyle, R9 repré

sente un radical carboxy et R10 représente un reste d'acide (dans laquelle Z represente le radical benzyloxycarbonyle) ' gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un qui, après hydrogénolyse en présence de palladium sur noir, reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substi-fournit 1 acide diamino-2,6 pimélamique. ^ 25 tuée par un reste d'acide gras ou par un groupement protec-

Par action d un sel de cuivre, tel que le bromure cuivrique teur de la fonction amine, sous forme méso, dans lequel l'atome de carbone porteur des radicaux R4 et RI0 est sous forme D, peut être préparé par action d'un dérivé activé d'un acide de formule générale (IX) ou d'un aminoacide de formule générale (III) dans laquelle R5 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou d'un halogénoformiate d'alcoyle ou de benzyle sur le complexe cuivrique du (D) monoamide de l'acide méso-diamino-2,6 pimélique (obtenu à partir du (D) monoamide de l'acide benzyl-oxycarbonyl-(D) méso-diamino-2,6 pimélique par hydrogénolyse).

L'aminoacide ou le dipeptide de formule générale (VI) dans laquelle R4 représente un radical carboxy, R9 représente un radical carbamoyle et R10 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de la fonction amine, sous forme méso, dans lequel l'atome de carbone porteur des radicaux R4 et R10 est sous forme L, peut être préparé par action d'un réactif de blocage de la fonction amine ou d'un dérivé activé d'un acide de formule générale (IX) ou d'un aminoacide de formule générale (III) dans laquelle R5 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine sur le (D) monoamide de l'a-peut être acylé par action d'un dérivé activé d'un acide de for- 50 cide benzyloxycarbonyl-(D)-méso-diamino-2,6 pimélique, mule générale (DC) ou d'un aminoacide de formule générale suivie du remplacement du radical benzyloxycarbonyle par (III) dans laquelle R5 représente un reste d'acide gras ou un un atome d'hydrogène sans toucher au reste de la molécule, groupement protecteur de la fonction amine et R' représente L'aminoacide, di- ou tripeptide de formule générale (VI),

un radical hydroxy, ou protégé par action d'un halogénofor- dans laquelle R4 représente un radical carbamoyle, R9 repré-miate d'alcoyle ou de benzyle. Le complexe ainsi formé est 55 sente un radical alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes déplacé par action de l'hydrogène sulfuré pour donner l'ami- de carbone éventuellement substitué par un radical phényle noacide ou le dipeptide de formule générale (VI) dans laquelle ou nitrophényle ou un reste N-carbonylglycyle ou N-car-R9 représente un radical carboxy, R4 représente un radical bonyl-D alanyle éventuellement estérifié par un radical al-

carbamoyle et R10 est défini comme ci-dessus. coyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement subs-

Pour obtenir un produit de formule générale (VI) dans la- 60 titué par un radical phényle ou nitrophényle et R]0 représente quelle R4 représente un radical carboxy, R9 représente un ra- un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de fonc-dical carbamoyle et R)0 représente un reste d'acide gras ou un tion amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction groupement protecteur de la fonction amine ou un reste amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un grou-

glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par pement protecteur de fonction amine, peut être obtenu par ac-un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonc- 65 tion dans les conditions habituelles d'un aminoacide de for-tion amine, on protège la fonction amine en a du groupement mule générale (III) dans laquelle R5 représente un atome carbamoyle du produit de formule générale (XIV) par action d'hydrogène, ou d'un aminoester correspondant, ou d'un al-d'un halogénoformiate d'alcoyle ou de benzyle. Le complexe cool aliphatique contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuel-

ou le carbonate basique ae cuivre, sur 1 aciae aiamino-/,o pimélamique, il se forme un complexe qui peut être représenté par la formule:

H.N - GH - CONHL

2 I 2

(CH,),

1 2 3 35

H„N - CH - CC£

2 *

^ Cu'

ÖCO - CH -VNH0

I 2

(fV3

H2N - CO - CH - NH2

(XIV)

40

45

dans laquel le reste amino en a du groupement carbamoyle

11

lement substitué par un radical phényle ou nitrophényle ou de ses dérivés, sur un aminoacide ou un dipeptide de formule générale:

Y-NH-C H-COOH (XV) 5

(CH2)3 I

Rio-NH-CH-CONH2

dans laquelle R10 est défini comme ci-dessus et Y représente 10 un groupement protecteur de fonction amine, un opérant dans les conditions habituelles suivie du remplacement du groupement protecteur Y par un atome d'hydrogène et éventuellement du groupement ester (porté par le reste glycyle ou D alanyle) par un radical hydroxy, sans toucher au reste de la molécule. En particulier lorsque R10 représente ou contient un groupement protecteur de fonction amine, il importe de choisir Y de telle manière que son remplacement par un atome d'hydrogène s'effectue sans toucher au radical R10.

Le di- ou tripeptide de formule générale (VI) dans laquelle R4 représente un radical carbamoyle, R9 représente un radical alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone et éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D 2S alanyle éventuellement estérifié et R10 représente un reste d'acide gras ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine peut être obtenu par action dans les conditions habituelles d'un dérivé activé d'un 30 acide de formule générale (IX) ou d'un aminoacide de formule générale (III), dans laquelle R5 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine et R' représente un radical hydroxy sur un produit de formule générale:

35

Y-NH-C H-R9 (XVI)

NH2-CH-CONH2

dans laquelle R9 est défini comme ci-dessus et Y représente un groupement protecteur de la fonction amine, en opérant dans les conditions habituelles, suivie du remplacement du groupement Y par un atome d'hydrogène sans toucher au reste de la molécule. so

L'aminoacide, di- ou tripeptide de formule générale (VI) dans laquelle R9 représente un radical carbamoyle, R4 représente un radical alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou un reste N-carbonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle conte- ss nant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et R]0 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement «o protecteur de la fonction amine peut être obtenu par action dans les conditions habituelles d'un aminoacide de formule générale (III) dans laquelle R5 représente un atome d'hydrogène et R' représente un radical hydroxy, ou d'un aminoester correspondant, ou d'un alcool aliphatique contenant 1 à 4 65 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle ou de ses dérivés, sur un aminoacide ou un dipeptide de formule générale:

651 577

Y-NH-C H-CONH2 (XVa)

(CH2)3 I

R10-NH-C H-COOH

dans laquelle R10 est défini comme ci-dessus et Y représente un groupement protecteur de la fonction amine, en opérant dans les conditions habituelles suivie du remplacement du groupement protecteur Y par un atome d'hydrogène et éventuellement du groupement ester (porté par le reste glycyle ou D alanyle) par un radical hydroxy, sans toucher au reste de la molécule. En particulier lorsque RI0 représente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine, il importe de choisir Y de telle manière que son remplacement par un atome d'hydrogène s'effectue sans toucher au radical Ri0.

Lorsque l'on fait régair l'aminoacide de formule générale (III) éventuellement estérifié sur l'aminoacide de formule générale (XVa) on opère dans les conditions connues qui permettent la création d'une liaison peptidique sans toucher au reste de la molécule. Lorsque l'on fait réagir un alcool aliphatique contenant I à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, on opère dans des conditions douces d'estérification afin de ne pas toucher aux groupements protecteurs Y et R10 et plus particulièrement selon la méthode de V. Bocchi, Synthesis; p. 961 (1979).

Le di- ou tripeptide de formule générale (VI) dans laquelle R9 représente un radical carbamoyle, R4 représente un radical alcoyloxycarbonyle ou un reste N-carbonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié et R10 représente un reste d'acide gras ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de la fonction amine peut être obtenu par action dans les conditions habituelles d'un dérivé activé d'un acide de formule générale (IX) ou d'un aminoacide de formule générale (III), dans laquelle R5 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine et R' représente un radical hydroxy sur un aminoacide ou un dipeptide de formule générale:

Y-NH-C H-CONH2 (XVIa)

(CH2)3 I

H2N-CH-R4

dans laquelle R4 est défini comme ci-dessus et Y représente un groupement protecteur de la fonction amine, en opérant dans les conditions habituelles, suivie du remplacement du groupement Y par un atome d'hydrogène.

Les produits de formules générales (XVI) et (XVIa) peuvent être obtenus selon les méthodes habituelles utilisées en chimie peptidique pour l'introduction d'un groupement protecteur de la fonction amine à partir d'un aminoacide ou d'un dipeptide de formule générale (VI) dans laquelle l'un des radicaux R4 ou R9 représente un radical carbamoyle, et l'autre représente un radical alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-carbonyl glycyle, ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié et Rio représente un groupement protecteur de la fonction amine, suivies du remplacement du groupement protecteur R10 par un atome d'hydrogène sans toucher au reste de la molécule. En particulier les groupements protecteurs des fonctions aminés de l'acide diamino-2,6 pimélamique seront différents et choisis de telle manière que le remplacement de R10 n'entraîne pas le remplacement de Y.

651577 12

Le di- ou tripeptide de formule générale (VI) dans laquelle l'un des radicaux R4 ou R9 représente un atome d'hydrogène et l'autre représente un reste glycyle ou D alanyle et R10 représente un reste d'acide gras ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras 5 ou par un groupement protecteur de la fonction amine peut être obtenu à partir de la L lysine en appliquant les méthodes utilisées pour la préparation du di- ou tripeptide de formule générale (VI) dans laquelle R9 représente un radical carbamoyle et R4 et Rjo ont les définitions correspondantes. 10

L'aminoacide de formule générale (VII) dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras peut être obtenu par action d'un acide de formule générale (IX) ou d'un dérivé activé de cet acide sur la L alanine dont la fonction acide est éventuellement protégé sous forme d'ester, suivie éventuellement du 15 remplacement de la fonction ester par la fonction carboxy, en opérant dans les conditions indiquées ci-dessus pour l'action de l'acide de formule générale (IX) sur le tètra- ou pentapeptide de formule générale (X).

Le tri- ou tétrapeptide de formule générale (VIII) peut être 20 obtenu par action, dans les conditions habituelles, d'un dérivé de l'acide D glutamique de formule générale (XI) dont la fonction amine est protégé et, dans laquelle R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou ni- 25 trophényle, sur un di- ou tripeptide de formule générale (VI) dans laquelle l'un des symboles R4 ou R9 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle ou un 30 reste N-carbonyl glycyle ou N- carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont 35 la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, étant entendu que R4 et R9 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène et Ri0 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de fonction amine 40 ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de fonction amine (l'un au moins des symboles R4 ou R9 et Rio représentant un radical glycyle ou D alanyle tel que défini précédemment), suivie du remplacement éventuel du radi- 45 cal Rg et/ou R4 et/ou R9 (lorsqu'ils représentent ou contiennent un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle) par un radical hydroxy ou carboxy selon les cas, sans toucher au reste de la molécule. Toutefois, lorsque R8 forme avec le groupement 50 carbonyle auquel il est lié une fonction ester, et R4 et/ou R9 représentent une fonction ester, il peut être nécessaire que les radicaux Rg et R4 et/ou R9 soient différents et choisis de telle manière que le remplacement d'un des radicaux R4 ou R9 par un radical carboxy s'effectue sans toucher au radical R8 et à 55 l'autre radical Rt ou R9. Par exemple l'un des radicaux R} ou R9 peut représenter un radical benzyloxycarbonyle, éliminable par hydrogénolyse et le radical Rg un radical alcoxy et l'autre radical R( ou R9 un radical alcoyloxycarbonyle qui ne sont pas sensibles à l'hydrogénolyse. eo

Le tètra- ou pentapeptide de formule générale (X) peut être obtenu, dans les conditions habituelles, par action d'un dérivé activé de la L alanine de formule générale (VII) dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine sur un tri- ou tétrapeptide de 65 formule générale (VIII) dans laquelle Rg représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, l'un des symboles R4 ou R9 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-carbonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle. éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, étant entendu que R4 et R9 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène, et R10 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine, étant entendu que l'un au moins des radicaux R4 ou R9 et Ri0 représente un reste glycyle ou D alanyle tel que défini ci-avant et que l'un des radicaux R7 ou Rio représente ou contient un groupement protecteur de fonction amine, suivie du remplacement du radical R7 et/ou Rio (lorsqu'ils représentent ou contiennent un groupement protecteur de la fonction amine) par un atome d'hydrogène et du remplacement éventuel des radicaux Rg et/ou R4 et/ou R9 (lorsqu'ils représentent ou contiennent un radical alcoyloxy ou alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle) par un radical hydroxy ou carboxy selon les cas sans toucher au reste de la molécule. Lorsque les symboles R7 et Rio représentent ou contiennent des groupements protecteurs de fonction amine, il est possible de choisir des groupements protecteurs différents et choisis de telle manière que le remplacement d'un de ces groupements s'effectue sans toucher à l'autre.

Lorsque Rg, R4 et R9 forment une fonction ester il est possible que les radicaux Rg, R4 et R9 soient différents et choisis de telle manière que le remplacement d'un des radicaux Rt ou R9 par un radical carboxy s'effectue sans toucher au radical Rg et à l'autre radical R4 ou R9. Par exemple, l'un des radicaux R4 ou R9 peut représenter un radical benzyloxycarbonyle éliminable par hydrogénolyse et le radical Rg un radical méthoxy et l'autre radical R4 ou R9 un radical alcoyloxycarbonyle qui ne sont pas sensibles à l'hydrogénolyse.

Le tètra- ou pentapeptide de formule générale (X) peut être obtenu par action, dans les conditions habituelles, d'un dipeptide de formule générale (V) sur le di- ou tripeptide de formule générale (VI) dans les conditions données précédemment pour préparer le tri- ou tétrapeptide de formule générale (IV), suivie de l'élimination des groupements protecteurs R7 et/ou Rio dans les conditions données ci-dessus.

Les nouveaux tètra- ou pentapeptides de formule générale (I) peuvent être éventuellement purifiés par des méthodes physiques (telles que la cristallisation ou la Chromatographie) ou chimiques (telles que formation d'un sel, cristallisation de celui-ci puis décomposition).

Les nouveaux produits selon l'invention peuvent être transformés en sels d'addition avec les acides ou en sels métalliques ou en sels d'addition avec les bases organiques selon la nature des substituants.

Les sels d'addition avec les acides peuvent être obtenus par action des nouveaux produits sur des acides dans un solvant approprié. Généralement on solubilise le produit dans l'eau par addition de la quantité théorique d'acide puis on lyophilise la solution obtenue.

Les sels métalliques ou les sels d'addition avec les bases organiques peuvent être obtenus par action des nouveaux composés sur des bases minérales ou organiques dans un solvant approprié. Généralement on solubilise le produit dans

l'eau par addition de la quantité théorique de base puis on lyophilise la solution obtenue.

Les nouveaux composés selon la présente invention sont des adjuvants et des stimulants de l'immunité: ils augmentent les réactions d'hypersensibilité et/ou la production d'anticorps circulants vis-à-vis des antigènes avec lesquels ils sont administrés et ils stimulent de manière non spécifique des réactions de défense contre certaines infections (par exemple l'infection de la souris par la bactérie intracellulaire Listeria -monocytogenes).

In vitro, ils sont actifs à des concentrations molaires généralement comprises entre 10~3 et 10~8, en particulier dans les tests suivants:

- stimulation de la synthèse de l'ADN (pouvoir mito-gène) selon la technioue de G. MARCHAL, Ann. Immunol. (Inst. Pasteur), 125C. 519 (1974).

- stimulation de la réaction allogénique (réaction d'histo-incompatibilité) selon la technique de R.W. DUTTON, J. exp. Med. 122,759 (1966) et A.B. PECK et F.H. BACH, J. Immunol. Methods, 3,147 (1973)

- stimulation de la production d'anticorps selon la technique de P.H. KLESIUS, Proc. Soc. exp. Biol. Med. (N.Y.) 135.155 (1970) et H. VAN DIJK et N. BLOKSMA, J. Immunol. Methods, 14,325 (1977)

- augmentation du nombre de macrophages phagocytai-res selon la technique de J. MICHL et coll., J. exp. Med., 144. 1465(1976)

- stimulation de l'activité phosphatase acide et N-acétyl-glucosamidinase (enzymes lysosomiales des macrophages) en l'absence d'une augmentation de la deshydrogénase lactique selon la technique de P. DAVIES et coll., J. exp. Med., 139. 1262(1974).

In vivo, chez la souris, à des doses comprises entre 1 et 30 mg/kg, ils augmentent l'hypersensibilité retardée et la production d'anticorps en particulier selon la technique de T.E. MILLER et coll., J. Nath. Cancer Inst., 51, 1669 (1973).

Chez le cobaye, ils augmentent la réaction d'hypersensibilité et de production d'anticorps contre la gammaglobuline bovine couplée avec l'haptène dinitrophénol selon la technique de F. FLOC'H et coll., Immunol. Communie., 7,41 (1978).

Chez la souris, ils stimulent les réactions de défense contre l'infection de la souris à Listeria monocytogenes à des doses comprises entre 1 et 100 mg/kg selon la technique de R.M. FAUVE et B. HEVIN, C.R. Acad. Sci. (D), 285,1589 (1977).

Chez la souris, ils stimulent le pouvoir d'élimination du carbone colloïdal par le système réticulo-endothélial suivant la technioue de B.N. HALPERN et coll., Ann. Institut Pasteur, 80,582(1951).

Chez le lapin, à des doses généralement comprises entre 0,1 et 3 mg/kg, ils stimulent la formation d'anticorps sériques antivirus grippal selon la technique de G.H. WERNER et coll., Biomedicine, 22,440 (1975).

D'un intérêt tout particulier sont les produits de formule générale (I) dans laquelle R représente un radical alcanoyle contenant 8 à 16 atomes de carbone, R! représente un radical hydroxy, R2 représente un radical carboxy ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone ou un reste N-carbonylglycyle ou N-carbonyl D alanyle, R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle et R3 représente un atome d'hydrogène ou un reste glycyle ou D alanyle.

Les exemples suivants, donnés à titre non limitatif, illustrent la présente invention.

Les produits selon la présente invention peuvent former des complexes avec les métaux alcalins ou alcalino-terreux; il en résulte que les résultats de l'analyse élémentaire des produits peuvent sensiblement s'écarter des valeurs théoriques.

651 577

Cependant la structure des produits est confirmée par le rapport C/N qui est en accord avec la thérorie, par la teneur en acides aminés, et par leur homogénéité en Chromatographie sur couche mince de silicagel.

Exemple 1

On ajoute 0,27 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 5 °C, de 363 mg de N-t.butyloxycar-bonylglycine dans 40 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,29 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à —5 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 5 °C, de 1,26 g de chlorhydrate d'acide N2-(N-lauroyl L alanyl-y-D glut-amyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans un mélange de 14,5 4, cm3 d'eau et de 6,2 cm3 de soude IN. Le mélange réac-tionnel est agité pendant 20 heures à une température vosine de 20 °C. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 40 °C; le concentrât est refroidi vers 10 °C, acidifié à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique IN, puis extrait 4 fois par 400 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées par 20 <| cm3 d'eau, séchées sur sulfate de magnésium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. Le résidu ainsi obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther jusqu'à pulvérisation totale. Après filtration et séchage sous pression réduite (20 mm de mercure), on obtient 1,11g d'une poudre à laquelle on ajoute 440 mg d'un produit préparé dans les mêmes conditions et on Chromatographie sur 77 g de gel de silice neutre (0,0635-0,20 mm) contenus dans une colonne de 2,3 cm de diamètre. On élue successivement par 120 cm3 d'acétate d'éthyle, 210 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), 120 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (85-15 en volumes), 120 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes), 90 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (7-3 en volumes), 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (6-4 en volumes) et 150 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 30 cm3. Les fractions 15 à 34 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 40 °C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 1,12 g d'acide N2-(N-lauroyl L alanyl-y-D glutamyl)N6-(N-t. butyloxycarbonylglycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique.

Rf = 0,56 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

On dissout 1,12 g d'acide N2-(N-lauroyl L alanyl-y-D glutamyl)N6-(N-t.butyloxycarbonylglycyl) DD, LL diami-no-2,6 pimélamique dans 5 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,65 N dans l'acide acétique. On agite pendant 4 heures à une température voisine de 20 °C puis on ajoute le milieu réactionnel à 100 cm3 d'éther anhydre. Le précipité blanc obtenu est séparé par filtration, lavé par 20 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (20 mm de mercure). On obtient ainsi 1,05 g d'une poudre blanche que l'on Chromatographie sur une colonne de Sephadex G15 (diamètre: 2 cm; hauteur: 2 m). On élue par de l'eau en recueillant des fractions de 14 cm3. Les fractions 26 à 29 sont réunies et lyophilisées. On obtient ainsi 0,5 g de chlorhydrate d'acide N2-(N-lauroyl L alanyl-y-D glutamyl)N6-glycyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique.

Rf = 0,29 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Analyse: Calc.%- C 52,36 H 8,03 N 12,63 Tr. 52,5 7,0 12,4

13

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

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14

Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Tech-nicon révèle la présence des acides aminés suivants:

Ala 1,10 (théorie = 1)

Dap 1,01 (théorie = 1)

Glu 1,12 (théorie =1) s

Gly 1,00 (théorie = 1)

L'acide N2-(N-lauroyl L alanyl-y-D glutamyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 4,07 g d'acide ISP-fO'-benzyl N-(N-lauroyl L i0 alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diami-no-2,6 pimélamique dans 200 cm3 d'acide acétique. On ajoute 4 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 7 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite xs (20 mm de mercure) à 60 °C, la meringue obtenue est reprise par 45 cm3 au total de méthylcyclohexane et amenée chaque fois à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 60 °C. La poudre ainsi obtenue est séchée sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 50 °C. On obtient 2,76 g d'acide N2- 20 (N-lauroyl L alanyl-y-D glutamyl) DD,LL diamono-2,6 pimélamique.

Rf = 0,49 (silicagel; acide acétique)

Analyse: Calc.% C 56,72 H 8,64 N 12,25 Tr. 53,4 8,5 10,9 25

Ala 1,00 (théorie = 1)

Dap 0,99 (théorie = 1)

Glu 1,05 (théorie = 1). 30

L'acide N2-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 3,17 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue vers 10 °C, de 11,96 g de N-lauroyl L 35 alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 490 cm3 de dioxanne et de 3,43 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 20 minutes vers 10 °C, puis on ajoute ime solution de 8,87 g d'acide N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique à 88,8% (dosage perchlorique) dans un 40 mélange de 219 cm3 d'eau et de 24,4 cm3 de soude IN. Le mélange réactionnel est agité pendant 2 heures à irne température voisine de 10 °C puis pendant 15 heures à une température voisine de 20 °C; il est ensuite filtré. Au filtrat, on ajoute 360 cm3 d'eau et on sépare par filtration un léger insoluble 45 formé. Le filtrat est acidifié à pH 2 par addition de 49 cm3 d'acide chlorhydrique IN. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 3 fois par 750 cm3 au total d'eau et séché. On obtient ainsi 16,3 g d'une poudre blanche que l'on Chromatographie sur 800 g de gel de silice neutre (0,0635-0,20 mm) 50 contenus dans une colonne de 6 cm de diamètre. Pour cela on dissout les 16,3 g de poudre dans 800 cm3 de méthanol et à la solution obtenue, on ajoute 160 g de sable de Fontainebleau. On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 60 °C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la co- 55 lonne de silice. On élue successivement avec 1 litre d'acétate d'éthyle, 4 litres d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), 7 litres d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (85-15 en volumes) et 4 litres d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 60 250 cm3. Les fractions 45 à 60 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 60 °C. On obtient ainsi 9,4 g d'acide N2-[0]-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique. 65

Rf = 0,83 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24) en volumes)].

Le N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé selon l'une des deux méthodes suivantes:

a) A une solution de 12,75 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans 75 cm3 de soude IN, on ajoute simultanément en 37 minutes, 8 g de chlorure de lauroyle dissous dans 75 cm3 d'éther et 37,4 cm3 de soude IN de façon à maintenir le pH de mélange réactionnel compris entre 8 et 9. Le mélange est agité pendant 1 heure 20 minutes. Après décantation, la phase aqueuse est acidifiée à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique IN (60 cm3) et extraite 3 fois par

300 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les extraits organiques réunis sont lavés par 25 cm3 d'eau, séchés sur du sulfate de sodium anhydre et concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 7,4 g d'un solide blanc que l'on Chromatographie sur 80 g de gel de silice neutre contenus dans une colonne de 2 cm de diamètre. On élue successivement par 100 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes) et 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes), en recueillant des fractions de 50 cm3. La fraction 1 est concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 2 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle fondant à 130 °C. Les fractions 2 à 4 sont de même concentrées à sec et chromatographiées sur 100 g de gel de silice neutre (0,063-0,20 cmm) contenus dans une colonne de 2 cm de diamètre. On élue par 250 cm3 d'acétone en recueillant des fractions de 25 cm3. Les fractions 1 et 2 sont concentrées à sec sous pression réduite (20 cmm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 4,07 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle fondant à 130 °C dont les caractéristiques sont les suivantes:

Rf = 0,9 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse Calc.% C 66,10 H 8,63 N 5,71 Tr. 66,3 8,8 5,6

b) On ajoute 31 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à une température voisine de 10 °C, de 47,75 g d'acide laurique dans 3 litres de dioxanne et 33,3 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 10 °C, puis on ajoute en 10 minutes une solution, refroidie à 10 °C, de 88,95 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle, dans un mélange de 1 litre de dioxanne, de

476 cm3 d'eau et de 476 cm3 de soude IN. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à 10 °C, puis pendant 18 heures à une température voisine de 20 °C; il est ensuite dilué par addition de 4 litres d'eau, acidifié à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique IN (environ 475 cm3) et conservé pendant 2 heures à 0 °C. Le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé successivement par 500 cm3 d'eau et 500 cm3 d'éther,

puis séché sous pression réduite (20 cmm de mercure) à 20 °C. Le produit est mis en suspension dans 800 cm3 d'éther, agité pendant 1 heure, séparé par filtration et lavé 2 fois par 200 cm3 au total d'éther. Après séchage sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20 °C, on obtient 71,79 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle fondant à 130 °C.

Rf = 0,77 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (4-1 en volumes)].

Le chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 97,16 g de N-t.butyloxycarbonyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans 970 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrioue 1,7 N dans l'acide acétique. On agite pendant 2 heures, puis on ajoute rapidement 3,8 litres d'éther anhydre et on laisse reposer pendant 2 heures à 0 °C. Le précipité huileux qui s'est formé, séparé du surnageant par décantation, est dissous dans 500 cm3 d'acétone; la solution ainsi obtenue est concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de

15

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mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 88,9 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle.

Le N-t.butyloxycarbonyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé selon la méthode de E. BRICAS et coll., Biochemistry 9,823(1970). 5

L'acide N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

A une solution de 9,7 g de dichlorhydrate de l'acide DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 63 cm3 d'eau amenée à pH 10 par addition de 37 cm3 de soude IN, on ajoute 4,35 g 10 de bromure cuivrique dissous dans 44 cm3 d'eau. On agite le mélange réactionnel pendant 2 heures à 20 °C environ. On sépare par filtration un léger insoluble, puis on refroidit le filtrat à une température comprise entre - 3 °C et 0 °C. On ajoute 9,2 g de bicarbonate de sodium et ensuite, goutte à goutte en 15 30 minutes, 7,9 cm3 de chloroformiate de benzyle. Le mélange réactionnel est agité pendant 18 heures à une température voisine de 20 °C. Le précipité bleu formé est séparé par filtration, lavé par 15 cm3 d'eau, 2 fois par 30 cm3 au total d'éthanol et 15 cm3 d'éther. Après séchage sous pression réduite (20 cmm 20 de mercure) à 50 °C, on obtient 9,6 g de complexe cuivrique de l'acide N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique que l'on ajoute à 60 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On agite pendant 1 heure à une température voisine de 20 °C. Un insoluble est séparé par filtration. Au filtrat, on ajoute 25 30 cm3 de méthanol puis on fait passer un courant d'hydrogène sulfuré pendant 1 heure >/2. On laisse reposer pendant 16 heures. La bouillie noire obtenue est filtrée, lavée 4 fois par 160 cm3 au total d'eau. Les filtrats réunis sont concentrés jusqu'à un volume de 30 cm3 sous pression réduite (20 mm de m mercure) à 50 °C, amenés à pH 9 par addition de 7,5 cm3 de triéthylamine, dilués par addition de 20 cm3 d'eau et amenés à pH 6 par addition de 5,5 cm3 d'acide chlorhydrique IN. La bouillie blanche ainsi obtenue est conservée à 0 °C pendant 2 heures. Le produit qui se sépare par filtration est lavé successi-35 vement par 20 cm3 d'eau et 20 cm3 d'éthanol et séché sous pression réduite. On obtient ainsi 5,8 g d'acide N6-benzyloxy-carbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique à 96% (dosage perchlorique).

Le dichlorhydrate de l'acide DD,LL diamino-2,6 pimél- 40 amique peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 83 g d'acide DD,LL dibenzyloxycarbonylami-no-2,6 pimélamique dans un mélange de 1,6 litre de méthanol et de 14,6 cm3 d'acide chlorhydrique concentré (d= 1,19). On ajoute 83 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on 45 fait passer un courant d'hydrogène pendant 10 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 60 °C, on obtient 40,5 g de dichlorhydrate de l'acide DD,LL diamino-2,6 pimélamique sous forme de meringue. 50

L'acide DD,LL dibenzyloxycarbonylamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 168 g d'ester monobenzylique de l'acide DD,LL dibenzyloxycarbonylamino-2,6 pimélamique dans 55 1,68 litre de méthanol. On refroidit cette solution vers 0 °C et on la sature d'ammoniac. Dès qu'elle est saturée, on la transvase dans 3 autoclaves de 1 litre. Après avoir fermé ces autoclaves, on les conserve pendant 40 heures à 20 °C environ.

Après dégazage, la solution ainsi obtenue est concentrée sous 60 pression réduite (20 mm de mercure) à 60 °C. Le résidu est dissous dans 2 litres d'eau et la solution obtenue est amenée à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 4N. Il se forme un précipité gommeux qu'on isole par décantation, triture avec 2 litres d'éther, sépare par filtration, lave 2 fois par 400 cm3 au 65 total d'éther et 2 fois par 400 cm3 au total d'eau. Après séchage, on obtient 83,5 g d'acide DD,LL dibenzyloxycarbonylamino-2,6 pimélamique fondant à 145-150 °C.

Rf = 0,69 [silicagel; n.butanol-éthanol-eua-ammoniaque concentrée (4-4-1-1 en volumes)].

Le monoester benzylique de l'acide DD,LL dibenzyloxy-carbonylamino-2,6 pimélique peut être préparé selon la méthode de A. ARENDT et coll., Roczniki Chemii Ann. Soc. Chim. Polonorum 48,1305 (1974) [Chem. Abstr., 82,31497 g (1975)].

Exemple 2

On ajoute 0,42 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 0 °C, de 557 mg de N-t.butyloxycar-bonylglycine dans un mélange de 60 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,45 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 0 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 0 °C, de 1,68 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysine dans un mélange de 14 cm3 d'eau et de 6,36 cm3 de soude IN. Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes à 0 °C, puis pendant 18 heures à 20 "C environ. Il est ensuite concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 40 °C. Le résidu est repris par 60 cm3 d'eau amenée à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique IN (7 cm3). La phase aqueuse ainsi obtenue contenant un précipité huileux est extraite 4 fois par 200 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques 25 cm3 d'eau et séchées sur du sulfate de magnésium anhydre. Après concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 40 °C, on obtient 2,9 g d'un produit que l'on Chromatographie sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 60 g de gel de silice neutre. On élue successivement par 150 cm3 d'acétate d'éthyle, 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (95-5 en volumes), 50 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes) et 300 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 9 à 15 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 40 °C. On obtient ainsi 1,44 g de N-a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(t. butyloxy-carbonylglycyl) L lysine.

Rf = 0,55 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

On dissout 1,44 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(t.butyloxycarbonylglycyl) L lysine dans 22 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N dans l'acide acétique. On agite pendant 2 heures, puis on ajoute 220 cm3 d'éther anhydre. Le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé par 20 cm3 d'éther anhydre et séché sous pression réduite (0,15 mm de mercure) à 20 0 C. On obtient ainsi 1,31 g d'une poudre blanche que l'on dissout dans 5 cm3 d'eau et Chromatographie sur Sephadex G10 (colonne de 2,5 cm de diamètre et 2 m de hauteur). On élue par 400 cm3 d'eau en recueillant des fractions de 14 cm3. Les fractions 23 à 28 sont réunies et lyophilisées. Le lyophilisât est dissous dans 50 cm3 d'eau et 1,5 cm3 d'acide chlorhydrique IN à nouveau lyophilisé. On obtient ainsi 710 mg de chlorhydrate de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl)] N e-glycyl L lysine.

Rf = 0,25 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24) en volumes)].

Analyse Calc.% C 54,05 H 8,42 Cl 5,70 N 11,25 Tr. 54,0 7,9 5,4 11,2

Ala 0,99 (théorie = 1)

Glu 1,04 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

Lys 0,97 (théorie = 1)

Le N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysine peut être préparé selon l'une des méthodes suivantes:

651577 16

a) On dissout 1,77 g de N a-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonyl L lysine dans 177 cm3 de méthanol. On ajoute 1,77 g de palladium sur noir (à 3%) de palladium) puis on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 4 heures. Après filtration, concentra- 5 tion à sec du filtrat, l'huile résiduelle est reprise par 20 cm3 d'acétone. On obtient ainsi 1,06 g d'un solide blanc que l'on recristallise dans un mélange d'éthanol (12 cm3) et d'acétone (24 cm3). On obtient ainsi 0,9 g de N a-[N-(N-Iauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysine fondant à 180-186 ° C (fusion io pâteuse).

Rf = 0,29 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24) en volumes)].

Analyse Calc.% C 59,07 H 9,15 N 10,60 Tr. 58,4 8,8 10,0 is b) On dissout 2,65 g de N a-fO'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonyl L lysinate de benzyle dans 265 cm3 d'acide acétique. On ajoute 2,65 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 3 heures. Après filtration et 20 concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient 1,81 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysine identique au produit obtenu sous a).

Le N a-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] 25 N e-benzyloxycarbonyl L lysine peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 1,88 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 10 °C, de 7,03 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 280 cm3 de di- 30 oxanne et 2,0 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 10 °C puis on ajoute une solution de 4,04 g de N e-benzyloxycarbonyl L lysine dans un mélange de 30 cm3 de dioxanne et de 14,4 cm3 de soude IN. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 heures à 18 ° C environ. L'in- 35 soluble formé est dissous par addition de 280 cm3 d'eau. La solution obtenue est agitée encore pendant 1 heure, puis acidifiée à pH 3 par addition de 20 cm3 d'acide chlorhydrique IN. L'insoluble formé est séparé par filtration, lavé par 20 cm3 d'eau et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 40 20 °C. On obtient ainsi 7,72 g d'un solide blanc que l'on Chromatographie sur une colonne de 3,5 cm de diamètre contenant 230 g de gel de silice neutre. On élue successivement par 700 cm3 d'un mélange acétone-cyclohexane (9-1 en volumes), 1,1 litre d'acétone et 1,7 litre de méthanol en recueillant des 45 fractions de 100 cm3. Les fractions 22 à 35 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 5,97 g de N a-fO'-benzyl N-(N-lau-royl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonyl L lysine.

Rf = 0,84 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique- 50 eau (50-20-6-24 en volumes)].

La N e-benzyloxycarbonyl L lysine peut être préparée selon la méthode de A. Neuberger et coll., Biochem. J., 37,515 (1943).

Le N a-[N-(0'-benzyl N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] 55 N e-benzyloxycarbonyl L lysinate de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 0,65 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à —10 "C, de 2,45 g de N-lauroyl L alanyl-a -D glutamate de benzyle dans un mélange de 80 cm3 60 de tétrahydrofuranne et 0,70 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à -10 °C puis on ajoute une solution, refroidie à -10 °C, de 2,24 g de chlorhydrate de N e-benzyloxycarbonyl L lysinate de benzyle dans un mélange de 40 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,77 cm3 de triéthyl- 65 amine. Le mélange réactionnel est agité pendant 2 heures à—10 °C, puis pendant 2 jours à 20 °C environ. On concentre ensuite le mélange réactionnel à sec sous pression réduite

(20 mm de mercure) à 40 °C. Le solide blanc obtenu est repris dans 100 cm3 d'acétate d'éthyle à 40 °C, trituré jusqu'à pulvérisation, séparé par filtration, trituré à nouveau dans 50 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1 N, séparé par filtration et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure). On obtient ainsi 2,69 g de N a-fN-fO'-benzyl N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonyl L lysinate de benzyle.

Rf = 0,80 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes)].

Le N e-benzyloxycarbonyl L lysinate de benzyle peut être préparé selon la méthode de T. Shiba et coll., Bull. Chem. Soc. Japan, 33,1721 (1960).

Exemple 3

On ajoute 0,48 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue vers -10 °C, de 1,82 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 90 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,52 cm3 de triéthylamine.

Le mélange est agité pendant 20 minutes à —10 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à —10 °C, de 1,74 g de N e-(benzyloxycarbonylglycyl) L lysinate de benzyle dans 90 cm3 de tétrahydrofuranne. Le mélange réactionnel est agité pendant 2 heures à une température comprise entre —10 °C et 0 °C, puis pendant 18 heures à 20 °C environ. On obtient une masse réactionnelle d'aspect gélatineux que l'on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 40 °C. On reprend le résidu par un mélange de 50 cm3 d'acétate d'éthyle et de 50 cm3 d'eau, on agite, on sépare l'insoluble par filtration et le lave successivement 2 fois par 50 cm3 au total de soude N/10 et par 25 cm3 d'eau. Après séchage, l'insoluble est lavé 4 fois par 100 cm3 au total d'acétate d'éthyle à 20 °C et puis par 25 cm3 d'acétate d'éthyle à 75 °C et enfin séché. On obtient ainsi 1,51 g de N a-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonylglycyl) L lysinate de benzyle.

La phase acétate d'éthyle de lavage (125 cm3) est chargée sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 150 g de gel de silice neutre. On élue par 835 cm3 d'acétate d'éthyle, 320 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes) et 400 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (90-10 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 34 à 38 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 0,42 g de N a-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonylglycyl) L lysinate de benzyle.

Rf = 0,84 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes)].

On dissout 1,93 g de N a-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(benzyloxycarbonylglycyl) L lysinate de benzyle dans 100 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,93 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 2 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, l'huile résiduelle est triturée dans 50 cm3 d'éther. On obtient un précipité qui est séparé par filtration et est dissous dans 15 cm3 d'acide acétique. Cette solution est filtrée, puis on ajoute au filtrat 100 cm3 d'éther. Après 30 minutes d'agitation le précipité obtenu est séparé par filtration. Après séchage sous pression réduite (0,15 mm de mercure) à 20 °C, on obtient 1,16 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-glycyl L lysine fondant à 140-142 °C (fusion pâteuse).

Rf = 0,31 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Analyse Calc.% C 57,41 H 8,78 N 11,96 Tr. 55,3 8,6 11,2

17

651 577

Ala 1,00 (théorie = 1)

Glu 1,11 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

Lys 0,95 (théorie = 1).

Le N e-(N-benzyloxycarbonylglycyl) L lysinate de benzyle 5 peut être préparé selon la méthode de M. KHOSLA et coll., J. Sci. Ind. Res. (India) 21 B, 318 (1962).

Exemple 4

On ajoute 0,13 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une 10 solution, maintenue à —10 °C, de 491 mg de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 25 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,14 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 10 minutes à —10 °C puis on ajoute une solution, refroidie à 0 °C, de 337 mg de N s-(benzyloxy- 15 carbonylglycyl) L lysine dans 25 cm3 de tétrahydrofuranne et

1 cm3 de soude IN. Le milieu réactionnel est agité pendant 2 heures à 10 "C, puis pendant 20 heures à une température voisine de 20 °C. Il est ensuite acidifié à pH 1 par addition de

2 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On évapore le tétrahydrofu- 20 ranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 40 °C. La solution aqueuse restante est extrait par 50 cm3 d'acétate d'éthyle, la phase organique est lavée 2 fois par 20 cm3 au total d'acide chlorhydrique 0,1 N et 10 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium et séchée sur sulfate de magnésium 25 anhydre. Après concentration à sec sous pression réduite

(20 mm de mercure) à 40 °C on obtient 600 mg d'un solide blanc qui est chromatographié sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 30 g de gel de silice neutre. On élue successivement par 60 cm3 d'acétate d'éthyle, 100 cm3 d'un mé- 30 lange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate e'éthyle-méthanol (8-2 en volumes) et 80 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 10 à 13 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm 35 de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 430 mg de N a-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonylglycyl) L lysine.

Rf = 0,77 [silicagel; n.butanol-acide acétique-eau (7-1-2 en volumes)]. 40

On dissout 420 mg de N a-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(benzyloxycarbonylglycyl) L lysin dans 25 cm3 de méthanol. On ajoute 420 mg de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 3 heures. Après filtration et concentra- « tion à sec du filtrat, on obtient 270 mg de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-glycyl L lysine.

Le N e-(benzyloxycarbonylglycyl) L lysine peut être préparé selon la méthode de D. THEODOROPOULOS J. Org. Chem. 23, 140 (1985). 50

Exemple 5

On ajoute 1,2 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 10 °C, de 4,42 g de N-lauroyl L alanyl- 55 a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 180 cm3 de dioxanne et de 1,3 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 20 minutes à une température voisine de 10 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 10 °C, de 4,09 g de chlorhydrate de N e-benzyloxycarbonyl L lysyl-D alaninate de 6C benzyle dans un mélange de 30 cm3 de dioxanne, de 5 cm3 d'eau et de 1,3 cm3 de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 heures à une température voisine de 20 °C. On ajoute ensuite 500 cm3 d'eau et on refroidit le mélange à 0 ° C. Après 2 heures à 0 0 C, l'insoluble est séparé par 65 filtration, lavé par 100 cm3 d'eau et séché. On obtient ainsi 7,86 g de N a-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonyl L lysyl-D alaninate de benzyle.

Rf = 0,92 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (4-1 en volumes)].

On dissout 7,80 g de N a-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonyl L lysyl-D alaninate de benzyle dans un mélange de 250 cm3 de méthanol et de 530 cm3 de dioxanne. On ajoute 7,80 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 5 heures. On observe une cristallisation sur le palladium sur noir. Le catalyseur est séparé par filtration, lavé par 100 cm3 d'un mélange méthanol-dioxanne (1-2 en volumes) puis par 5 fois 500 cm3 au total de méthanol entraînant ainsi le produit cristallisé. La phase méthanolique est concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient 1,5 g d'une poudre qui est chromatogra-phiée sur une colonne de Sephadex LH 20 (diamètre: 2 cm; hauteur: 2 m). On élue avec du méthanol en recueillant des fractions de 5 cm3. Les fractions 41 à 69 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On dissout le résidu dans 50 cm3 de méthanol bouillant puis on ajoute 120 cm3 de dioxanne. On laisse revenir à une température voisine de 20 °C. Après 5 jours de repos, le précipité apparu est séparé par filtration, lavé par 10 cm3 de dioxanne puis séché sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 60 °C. On obtient ainsi 1,37 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysyl-D alanine fondant à 170 °C (fusion pâteuse).

Rf = 0,26 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Analyse Calc.% C 58,07 H 8,91 N 11,68 Tr. 57,4 8,9 11,4

Ala 2,00 (théorie = 2)

Glu 1,04 (théorie = 1)

Lys 1,01 (théorie = 1).

Le chlorhydrate de N e-benzyloxycarbonyl L lysyl-D alaninate de benzyle peut être préparé selon la méthode de S. KUSUMOTO et coll., Bull. Chem. Soc. Japan, 49,533 (1976).

Exemple 6

On ajoute 1,3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 10 "C, de 4,91 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 200 cm3 de dioxanne et de 1,4 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 20 minutes à une température voisine de 10 °C, puis on ajoute une solution de 4,64 g de chlorhydrate de N e-benzyloxycarbonyl L lysyl-glycinate de benzyle dans un mélange de 30 cm3 de dioxanne, de 5 cm3 d'eau et de 1,4 cm3 de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 heures à 20 °C environ. On verse ensuite le mélange réactionnel dans 500 cm3 d'eau. L'insoluble formé est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 d'eau puis séché. On obtient ainsi 8,94 g d'une poudre blanche qui est dissoute dans 500 cm3 de diméthylformamide à 60 °C. On ajoute 500 cm3 d'eau. Après refroidissement à 0 °C l'insoluble est séparé par filtration, essoré, lavé avec 100 cm3 d'eau puis séché. On obtient ainsi 6,26 g de N a-fO^benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonyl L lysyl-glycinate de benzyle.

Rf = 0,89 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (5-1 en volumes)].

On dissout 6,20 g de N a-tO'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonyl L lysyl-glycinate de benzyle dans un mélange à 60 °C de 425 cm3 de dioxanne et de 125 cm3 de méthanol. On refroidit la solution à 40 °C, on ajoute 6,20 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) puis on fait passer un courant d'hydrogène pendant 4

651577 18

heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous 43 et 44 réunies sont concenttrées à sec sous pression réduite pression réduite (20 mm de mercure) à 50 "C, on obtient (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 850 mg de N a-

5,44 g d'un mélange contenant encore du produit de départ. [N-(N-t,butyloxycarbonyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(N-

Le résidu est dissous dans un mélange à 60 ° C de 1 litre de lauroyl glycine) L lysine.

méthanol et de 200 cm3 de dioxanne. On refroidit la solution s Rf = 0,50 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-

à 30 °C, on ajoute 5,44 g de palladium sur noir (à 3 % de pal- eau (50-20-6-24 en volumes)].

ladium) et on fait passer un courant d'hydrogène pendant 4 On dissout 830 mg de N a-[N-(N-t.butyloxycarbonyl L

heures. On filtre le mélange réactionnel, on lave le filtre 2 fois alanyl)-y-D glutamyl] N s-(N-lauroyl glycyl) L lysine dans par 200 cm3 au total de méthanol et 4 fois par 800 cm3 au to- 20 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N

tal de méthanol bouillant. La phase de lavage obtenue avec le io dans l'acide acétique. On agite pendant 2 heures, on ajoute méthanol bouillant est concentrée à sec sous pression réduite ensuite 100 cm3 d'éther. Le précipité obtenu est séparé par fil-

(20 mm de mercure) à 40 °C. Le résidu obtenu est trituré dans tration, lavé par 50 cm3 d'éther et séché sous pression réduite

100 cm3 d'éther jusqu'à pulvérisation. Après séparation de la (0,2 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 790 mg de poudre par filtration et séchage, on obtient 1,74 g de N a-[N- chlorhydrate de N <x-[N-L alanyl-y-D glutamyl] N s-(N-lau-

(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysyl-glycine fondant à 15 royl glycyl) L lysine.

165-170 °C (fusion pâteuse). Rf = 0,34 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-

Rf = 0,39 [silicagel; méthanol] eau (50-20-6-24 en volumes)].

Analyse Calc.% C 57,41 H 8,78 NI 1,96 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Tech-

Tr. 57,4 9,1 11,8 nicon révèle la présence des acides aminés suivants:

Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Tech- 20 Ala 1,04 (théorie = 1)

nicon révèle la présence des acides aminés suivants: Glu 1,02 (théorie = 1)

Ala 1,00 (théorie = 1) Gly 1,00 (théorie = 1)

Glu 1,01 (théorie = 1) Lys 1,00 (théorie = 1)

Gly 1,01 (théorie =1) Le N a-[N-(N-t.butyloxycarbonyl L alanyl)-y-D glut-

Lys 0,84 (théorie =1) 25 amyl] L lysine peut être préparé de la façon suivante:

Le chlorhydrate de N s-benzyloxycarbonyl L lysyl-glyci- On dissout 4,95 g de N a-(0'-benzyl N-t.butyloxycar-

nate de benzyle peut être préparé selon la méthode de V. Bon- bonyl L alanyl)-y-D glutamyl] N s benzyloxycarbonyl L lysi-

dar et coll., Dokl. Akad. Nauk. Tadzh. SSR13 14 (1970), nate de benzyle dans 250 cm3 d'acide acétique. On ajoute

(Chem. Abstr. 73,66884 e). 4,95 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait

30 passer un léger courant d'hydrogène pendant 2 heures. Après

Exemple 7 filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite

On ajoute 0,85 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une (0,2 mm de mercure), on obtient 3,74 g de N a-[N-(N-t.butyl-

solution, maintenue à —4 °C, de 1,67 g de N-lauroyl glycine oxycarbonyl L alanyl)-y-D glutamyl L lysine.

dans 150 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,91 cm3 de triéthyl- Rf = 0,20 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-

amine. La solution est agitée pendant 20 minutes à — 4 ° C 35 eau (50-20-6-24 en volumes)]

puis on ajoute une solution, refroidie à 2 °C, de 3,74 g de N a- Le N a-fO'-benzyl N-(N-t.butyloxycarbonyl L alanyl)-

[N-(N-t.butyloxycarbonyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysine y-D glutamyl] N s-benzyloxycarbonyl L lysinate de benzyle dans un mélange de 50 cm3 de tétrahydrofuranne et de 13 cm3 peut être préparé de la façon suivante:

de soude IN. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 On ajoute 1,95 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une heure à 0 °C, puis pendant 18 heures à 20 °C environ. On éva- 40 solution, maintenue à —10 °C, de 6,13 g de t.butyloxycar-pore ensuite le tétrahydrofuranne par concentration sous bonyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans 200 cm3 de té-pression réduite (20 mm de mercure) à 40 °C; le concentrât est trahydrofuranne et 2,1 cm3 de triéthylamine. La solution est dilué par addition de 50 cm3 d'eau, adidifié à pH 2 par addi- agitée pendant 20 minutes à —10 °C puis on ajoute une solution d'acide chlorhydrique IN. L'insoluble est séparé par fil- tion de 6,71 g de chlorhydrate de N s-benzyloxycarbonyl L tration, lavé par 50 cm3 d'eau puis séché. On obtient ainsi « lysinate de benzyle dans 100 cm3 de tétrahydrofuranne et 5,8 g d'une poudre qui est chromatographiée sur une colonne 2,3 cm3 de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité de 12 mm de diamètre contenant 50 g de gel de silice neutre pendant 30 minutes à — 5 °C, puis pendant 66 heures à 20 °C (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 220 cm3 d'acé- environ. Le mélange réactionnel est ensuite concentré à sec tate d'éthyle, 120 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méth- sous pression réduite (20 mm de mercure) à 30 °C. On obtient anol (95—5 en volumes), 80 cm3 d'un mélange acétate d'éthy- 50 ainsi 15,95 g d'une huile qui est chromatographiée sur une le-méthanol (9-1 en volumes), 180 cm3 d'uj mélange acétate colonne de 3 cm de diamètre contenant 150 g de gel de silice d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes), 100 cm3 d'un mélange neutre (0,063-0,20 mm). On élue successivement par 400 cm3 acétate d'éthyle-méthanol (7-3 en volumes) et 60 cm3 d'un d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohexane (4-6 en volumes), mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes) en re- 240 cm3 d'un mélenge acétate d'éthyle-cyclohexane (6-4 en cueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 21 à 38 réunies 55 volumes) et 560 cm3 d'acétate d'éthyle en recueillant des frac-sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mer- tions de 40 cm3. Les fractions 15 à 23 réunies, sont concen-cure) à 50 °C. On obtient ainsi 780 mg d'une poudre à la- trées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 40 °C. quelle on ajoute 270 mg d'un produit préparé dans les mêmes On obtient ainsi 9,25 g d'une huile cristallisant partiellement conditions et on dissout l'ensemble dans 25 cm3 de méthanol qui est dissoute dans 40 cm3 d'acétate d'éthyle à 45 °C. On contenant 5 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On con- 60 ajoute 100 cm3 de cyclohexane. On laisse revenir à une tempé-centre à sec le mélange et on charge l'ensemble sur ime co- rature voisine de 20 °C. L'insoluble est séparé par filtration, lonne de 12 mm de diamètre contenant 50 g de gel de silice lavé par 25 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohexane neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 200 cm3 (4-6 en volumes) puis séché. On obtient ainsi 4,99 g de N a-d'acétate d'éthyle, 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle- [O'-benzyl N-(N-t.butyloxycarbonyl L alanyl)-y-D glutamyl] méthanol (98-2 en volumes), 560 cm3 d'un mélange acétate 65 N s-benzyloxycarbonyl L lysinate de benzyle. d'éthyle-méthanol (96-4 en volumes), 680 cm3 d'un mélange Rf = 0,80 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes) et 280 cm3 de volumes)]

méthanol en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions Spectrométrie de masse: M = 760 (théorie = 760)

Exemple 8

On ajoute 0,41 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à - 5 °C, de 808 mg de N-lauroyl glycine dans 50 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,44 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 20 minutes à - 5 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 0 °C, de 1,81 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysine dans un mélange de 20 cm3 de tétrahydrofuranne et de 6,3 cm3 de soude IN. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure vers — 5 °C, puis pendant 18 heures à 20 °C environ. On acidifie ensuite le mélange réactionnel vers pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique IN, on évapore la tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C, puis on ajoute au concentrât 50 cm3 d'acétate d'éthyle et 30 cm3 d'eau. L'insoluble est séparé par filtration, lavé par 20 cm3 d'acétate d'éthyle et 10 cm3 d'eau et séché sous pression réduite (20 mm de mercure). On obtient ainsi 1,18g d'une poudre qui est chromatographiée sur une colonne de 12 mm de diamètre contenant 50 g de gel de silice neutre (0,063-0,20 mm). On élue successivement par 80 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (75-25 en volumes), 320 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes) et 120 cm3 de méthanol en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 4 à 8 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On obtient 0,88 g d'une poudre qui est chromatographiée sur une colonne de 12 mm de diamètre contenant 20 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 180 cm3 d'acétate d'éthyle, 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (99-1 en volumes), 100 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (98-2 en volumes), 260 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (95-5 en volumes),

120 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (85—15 en volumes), 280 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes), 40 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (7-3 en volumes), 40 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (6-4 en volumes) et 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 41 à 60 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 740 mg de N a-[N(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(N-lauroyl glycyl) L lysine fondant à 167-171 °C (fusion pâteuse).

Rf = 0,58 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Calc.% C 62,55 H 9,58 N 9,12 Tr.

(corrigé) 62,5 9,6 9,3

Ala 1,01 (théorie = 1)

Glu 0,95 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

Lys 0,97 (théorie = 1)

Exemple 9

On ajoute 0,5 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 12 °C, de 1,89 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans 75 cm3 de dioxanne et 0,54 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 12 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 10 °C, de 1,95 g de chlorhydrate de N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-glycinate de benzyle dans un mélange de 20 cm3 de dioxanne, de 1,5 cm3 d'eau et de 0,54 cm3 de triéthylamine Le mélange réactionnel est agité pendant 18 heures à une température voisine de 20 °C, puis dilué par ad651 577

dition de 150 cm3 d'eau et acidifié à pH 1 par addition de 5 cm3 d'acide chlorhydrique IN. Le précipité ainsi obtenu est séparé par filtration, lavé 3 fois par 75 cm3 au total d'eau et séché. On obtient 3,36 g d'un produit blanc qui est chromato-graphié sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 60 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). Pour cela, le produit est dissous dans 30 cm3 d'acide acétique. A la solution obtenue, on ajoute 20 g de silice puis on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. Le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne et on élue successivement par 160 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes), 1040 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes) et 360 cm3 d'acide acétique en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 10 à 16 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 1,09 g de N2-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoylglycinate de benzyle fondant à 204-206 °C. Les fractions 17 à 48 sont réunies et concentrées à sec. Le résidu est chromatographié sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 40 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue par 280 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 4 et 5 réunies sont concentrées à sec. Le résidu est trituré dans 20 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 0,7 g de N2-[0' -benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D-glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-glycinate de benzyle fondant à 204-206 °C.

Rf = 0,83 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)].

On dissout 1,74 g de N2-[0]-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diami-no-2,6 pimélamoyl-glycinate de benzyle dans 50 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,74 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) puis on fait passer un lent courant d'hydrogène pendant 2 heures. Après filtration, on ajoute 200 cm3 d'éther au filtrat. Après 1 heure de repos à 20 °C, le précipité formé est séparé par filtration, lavé par 25 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 1,09 g de N2-[N-(N-lauroyl L aIanyl)-y-D glutamyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-glycine fondant à 180-182 °C (fusion pâteuse) et contenant 1,4% d'eau (méthode de Fischer).

Rf = 0,30 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Analyse: Calc.% C 55,40 H 8,34 N 13,36 Tr. 53,4 8,5 12,4

Cendres sulfuriques % = 0,8.

Ala = 1,02 (théorie = 1)

Glu = 1,01 (théorie = 1)

Gly = 1,00 (théorie = 1)

Dap = 0,98 (théorie = 1)

Le chlorhydrate de N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-glycinate de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 2,48 g de N2-t.butyloxycarbonyl N6-benzyl-oxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-glycinate de benzyle dans 12,5 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N dans l'acide acétique. On agite pendant 2 heures, puis on ajoute 200 cm3 d'éther. Le précipité pâteux qui s'est formé, séparé du surnageant par décantation, est dissous dans 150 cm3 d'acétone chaud. Après refroidissement on ajoute 150 cm3 d'éther. Les cristaux formés sont séparés par

19

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

651577

20

filtration, lavés 2 fois par 40 cm3 au total d'éther et séchés sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 1,95 g de chlorhydrate de N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-glycinate de benzyle.

Rf = 0,61 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique- 5 eau (50-20-6-24 en volumes)]

Le N2-t.butyloxycarbonyl N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-glycinate de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 1,17 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans io une solution, maintenue à — 1 °C, de 3,81 g d'acide N2-t.butyloxycarbonyl N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diami-no-2,6 pimélamique dans 90 cm3 de tétrahydrofuranne et 1,26 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 1 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 15 — 1 °C, de 3,028 g de p.toluènesulfonate de glycinate de benzyle dans 90 cm3 de tétrahydrofuranne et 1,3 cm3 de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité pendant 2 heures à — 1 °C, puis pendant 70 heures à 20 °C environ. Il est ensuite concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mer- 20 cure) à 35 °C. On reprend le résidu par 100 cm3 d'acétate d'éthyle. La solution obtenue est lavée successivement par 20 cm3 d'eau, 3 fois par 60 cm3 au total d'une solution à 5% de bicarbonate de sodium, 3 fois par 60 cm3 au total d'une solution saturée d'acide citrique puis par 10 cm3 d'une solution 25 saturée de chlorure de sodium. La phase organique est séchée sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 4,8 g d'une meringue crème qui est chromatographiée sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 100 g de gel de silice 30 neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 320 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (1-1 en volumes), 360 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (1-3 en volumes) et 640 cm3 d'acétate d'éthyle, en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 13 à 23 réunies sont concentrées35 à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 2,29 g de N2-t.butyloxycarbonyl N6-benzyloxy-carbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-glycinate de benzyle.

Rf = 0,26 [silicagel; acétate d'éthyle] 40

L'acide N2-t.butyloxycarbonal N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

Aune suspension de 8,08 g d'acide N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique et de 2,65 g de carbonate 45 de sodium dans un mélange de 50 cm3 d'eau et de 150 cm3 de dioxanne, on ajoute 6 g de dicarbonate de di t.butyle en solution dans 50 cm3 de dioxanne. Le mélange réactionnel est agité pendant 16 heures à une température voisine de 20 °C. L'insoluble est séparé par filtration et le filtrat est concentré à 50 sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. Le résidu est repris par 50 cm3 d'eau et 50 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase aqueuse est acidifiée à pH 3 par addition de 20 cm3 d'une solution saturée d'acide citrique. La phase organique est séparée par décantation puis la phase aqueuse est extraite 55 2 fois par 50 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont réunies, lavées par 20 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchées sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 7,47 g d'acide N2-t.butyl- 60 oxycarbonyl N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique sous forme d'une meringue blanche.

Rf = 0,62 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes)]

65

Exemple 10

On ajoute 0,30 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 5 °C, de 484 mg de N-benzyloxycar-

bonyl glycine dans 50 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,323 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à —5 °C, puis on ajoute 1,32 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamique en solution dans un mélange refroidi à 2 °C de 50 cm3 d'eau, 25 cm3 de tétrahydrofuranne et 2,31 cm3 de soude IN. Le mélange est agité pendant 1 heure à 5 °C et 18 heures à 20 °C environ. Ensuite, on évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et on acidifie à pH 1 le concentrât par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique IN. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 3 fois par 30 cm3 au total d'eau et séché. On obtient ainsi 1,57 g de poudre beige que l'on Chromatographie sur 30 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 15 mm de diamètre. On élue successivement par 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (7-3 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (6-4 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-3 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 11 à 17 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. L'huile résiduelle est triturée dans 50 cm3 d'éther. Après filtration et séchage, on obtient 1,02 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl] N6-benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique sous forme d'un solide blanc fondant à 115-120 °C (fusion pâteuse).

Rf = 0,41 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes)]

On dissout 1 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl] N6-(benzyloxycarbonylglycyl) DD,LL-diami-no-2,6 pimélamique dans 25 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) puis on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 3 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, le résidu obtenu est trituré dans 30 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé par 10 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 790 mg d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl] N6-(glcyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique fondant à 170-174 °C (fusion pâteuse).

Rf = 0,34 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Calc.% C 55,48 H 8,51 N 15,62 Tr. 54,25 8,3114,82

Cendres sulfuriques % = 3,7

Ala 1,02 (théorie =1)

Dap 0,98 (théorie = 1)

Glu 1,05 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

L'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminvll DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 1,76 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl] N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 80 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,76 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) puis on fait passer un courant d'hydrogène pendant 2 heures et demie. Après filtration, le filtrat est concentré à 5 cm3 environ et dilué par addition de 100 cm3 d'éther. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 2 fois par 40 cm3 au total d'éther et sèche. On obtient ainsi 1,37 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique.

21 651577

Rf = 0,40 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique- tient une masse réactionnelle d'aspect gélatineux à laquelle on eau (50-20-6-24 en volumes) ajoute 150 cm3 d'acétate d'éthyle. Le précipité est séparé par

L'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl] N6- filtration, lavé par 30 cm3 d'eau puis séché. On obtient 7,6 g benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut de N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle sous être préparé de la façon suivante: s forme d'une poudre blanche. La phase aqueuse du filtrat pré-

On ajoute 0,81 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans cèdent est extraite 2 fois par 100 cm3 au total d'acétate une solution, maintenue à - 5 °C, de 2,5 g de N-lauroyl L d'éthyle, cette phase acétate d'éthyle est réunie avec la phase alanyl-D isoglutamine dans 150 cm3 de diméthylformamide organique du filtrat, lavée par 125 cm3 d'acide chlorhydrique et 0,87 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 0,1 N, 120 cm3 d'eau, séchée sur sulfate de magnésium puis minutes à - 5 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à io concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à +2 °C, de 2,02 g d'acide N6-benzyloxycarbonyl DD,LL di- 50 °C. On obtient à nouveau 1,5 g de N-lauroyl L alanyl-D amino-2,6 pimélamique dans un mélange de 62,5 cm3 d'eau et isoglutaminate de benzyle. Le produite (7,6 g et 1,5 g) est re-6,25 cm3 de soude IN. Le mélange réactionnel est agité pen- cristallisé dans 120 cm3 de méthanol. On obtient ainsi 6,6 g de dant 1 heure à 0 °C puis pendant 18 heures à 20 °C environ, et N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle fondant à est ensuite filtré. Le filtrat, dilué par addition de 300 cm3 is 169 °C.

d'eau, est acidifié à pH 1 par addition de 15 cm3 d'acide Rf = 0,13 [silicagel; acétate d'éthyle]

chlorhydrique IN. Le précipité apparu est séparé par filtra- Le chlorhydrate de L alanyl-D isoglutaminate de benzyle tion, lavé 3 fois par 30 cm3 au total d'eau puis séché. On ob- peut être préparé selon le procédé de S. KUSUMOTO, Bull.

tient ainsi 2,03 g d'un solide blanc auquel on ajoute 680 mg Chem. Soc. Japon 49,533 (1976).

d'un produit obtenu dans des conditions analogues. Le mé- 20

lange est dissous dans 30 cm3 d'acide acétique contenant 5 g Exemple 11

de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec On ajoute 0,44 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans puis on dépose le résidu sur une colonne de 2 cm de diamètre une solution maintenue à — 5 °C de 710 mg de N-benzyloxy-contenant 60 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On carbonyl glycine dans 67 cm3 de tétrahydrofuranne et élue successivement par 400 cm3 d'un mélange acétate d'éthy- 25 0,475 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 le-acide acétique (9-1 en volumes), 360 cm3 d'un mélange acé- minutes à — 5 °C, puis on ajoute 1,75 g d'acide N2-[N-(N-oc-tate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes), 240 cm3 d'un tanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] DD,LL diamino-2,6 pimél-mélange acétate d'éthyle-acide acétique (7-3 en volumes), amique en solution dans un mélange refroidi à 2 °C de 6,7 cm3 160 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en d'eau et 6,78 cm3 de soude IN. Le mélange réactionnel est volumes) et 480 cm3 d'acide acétique en recueillant des frac- 30 agité pendant1 fi heure à 0 °C et 18 heures à 20 °C environ, tions de 40 cm3. Les fractions 17 à 49, sont réunies et concen- Ensuite, on évapore le tétrahydrofuranne sous pression rédui-trées à sec. On obtient ainsi 1,78 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L te (20 mm de mercure) à 45 °C; la phase aqueuse restante est alanyl)-D isoglutaminyl] N6-benzyloxycarbonyl DD,LL dia- diluée par 50 cm3 d'eau et acidifiée à pH 1 par addition de mino-2,6 pimélamique 10 cm3 d'acide chlorhydrique IN. Le précipité formé est sépa-

Rf = 0,65 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 35 ré par filtration, lavé 3 fois par 30 cm3 au total d'eau et séché, en volumes)] On obtient ainsi 1,65 g de poudre blanchâtre que l'on chro-

Le N-lauroyl L alanyl-D isoglutamine peut être préparé matographie sur 33 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 de la façon suivante: mm) contenus dans une colonne de 22 mm de diamètre. Pour

On dissout 6,6 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate cela, on la dissout dans 20 cm3 d'acide acétique, on ajoute 5 g de benzyle dans 330 cm3 d'acide acétique. On ajoute 6,6 g de 40 de silice et on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de palladium sur noir (à 3% de palladium) puis on fait passer un mercure) à 50 °C. Le résidu ainsi obtenu est chargé sur le co-lent courant d'hydrogène pendant 2 heures. Après filtration lonne et on élue successivement par 280 cm3 d'un mélange du mélange réactionnel, on verse le filtrat dans 3 litres d'eau. acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 160 cm3 d'un Après 2 heures de repos à 0 °C, le précipité apparu est séparé mélange acétate d'éthyle-acide acétique (85-15 en volumes), par filtration, lavé 2 fois par 80 cm3 au total d'eau, puis séché. 45 560 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en On obtient ainsi 5,16 g de produit auquel on ajoute 0,5 g d'un volumes), en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions produit obtenu dans des conditions analogues. Ce mélange 11 à 24 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite est dissous dans 90 cm3 de méthanol bouillant et à la solution (20 mm de mercure) à 50 °C. L'huile résiduelle est triturée obtenue on ajoute 45 cm3 d'eau. Après 2 heures de repos à dans 40 cm3 d'éther. Après filtration et séchage, on obtient une température voisine de 20 °C, les cristaux apparus sont sé-50 1,37 g d'acide N2-[N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] parés par filtration, lavés 2 fois par 60 cm3 au total d'eau et sé- N6-(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 piméla-chés sous pression réduite (20 mm de mercure). On obtient mique sous forme d'un solide blanc fondant vers 100 °C (fu-ainsi 5,1 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutamine fondant à sion pâteuse).

163 °C.

Rf = 0,18 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (4-1 en 55 Rf = 0,47 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 volumes)] en volumes)]

Analyse: Calc.% C 60,12 H 9,33 N 10,52 On dissout 1,35 g d'acide N2-[N-(N-octanoyl L alanyl)-Tr. 60,2 9,5 10,9 y-D glutamyl] N6-(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diami-

Le N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle peut no-2,6 pimélamique dans 30 cm3 d'acide acétique. On ajoute être préparé de la façon suivante: 60 1,3 5 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait

On ajoute 2,54 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans passer un léger courant d'hydrogène pendant 3 heures. Après une solution, maintenue à 0 °C, de 3,9 g d'acide laurique dans filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite 156 cm3 de toluène anhydre et 2,7 cm3 de triéthylamine. Le (20 mm de mercure) à 50 °C, le résidu obtenu est trituré dans mélange est agité pendant 20 minutes à 0 °C, puis on ajoute 50 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé par 10 cm3 d'éther et une solution, refroidie à 0 °C, de 6,7 g de chlorhydrate de L 65 séché sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 50 °C. On alanyl-D isoglutaminate de benzyle dans 52 cm3 d'eau et obtient ainsi 1,05 g d'acide N2-[N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D

2,7 cm3 de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité glutamyl] N6-(glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique fon-pendant 65 heures à une température voisine de 20 °C. On ob- dant à 170-174 °C (fusion pâteuse).

651 577

22

Rf = 0,24 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Calc.% C 52,44 H 7,74 N 14,68 Tr. 51,29 7,96 14,00

Cendres sulfuriques %=4

Ala 1,01 (théorie = 1) io

Dap 0,98 (théorie = 1)

Glu 1,03 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

L'acide N2-[N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl]

DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la fa- is çon suivante:

On dissout 2,82 g d'acide N2-[0'-benzyl N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diami-no-2,6 pimélamique dans 80 cm3 d'acide acétique. On ajoute 2,82 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) puis on fait 20 passer un courant d'hydrogène pendant 2 heures 1/2. Après filtration, le filtrat est concentré à 5 cm3 environ sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et dilué par addition de 100 cm3 d'éther. On obtient un précipité qui est séparé par filtration, lavé par 20 cm3 d'éther puis séché. On obtient ainsi 25 2,0 g d'acide N2-[N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamoyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamique fondant à 160-164 °C (fusion pâteuse).

Rf = 0,30 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] 30

Analyse: Calc.% 53,58 H 8,02 N 13,58

Tr. 53,05 8,1713,06

Cendres sulfuriques % = 1,8

Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Tech- 35 nicon révèle la présence des acides aminés suivants:

Ala 1,00 (théorie = 1)

Dap 0,95 (théorie = 1)

Glu 1,02 (théorie = 1)

L'acide N2-[0'-benzyl N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glut- 40 amyl] N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 0,91 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à 0 °C, de 3,04 g de N-octanoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans 150 cm3 de tétrahydro- 45 furanne et 0,98 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 0 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 2 °C, de 2,26 g d'acide N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans un mélange de 70 cm3 d'eau et de 7 cm3 de soude IN. Le mélange réactionnel est 50 agité pendant 1 heure à 0 °C, puis pendant 20 heures à une température voisine de 20 °C. Le tétrahydrofuranne est ensuite évaporé sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le concentrât est dilué par addition de 50 cm3 d'eau et acidifié à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique 55 IN. Le précipité blanc obtenu est séparé par filtration, lavé 3 fois par 75 cm3 au total d'eau puis séché. On obtient ainsi 4,73 g d'un solide blanc qui est chromatographié sur une colonne de 2,2 cm de diamètre contenant 100 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). Pour cela, le produit est dissous dans 60 20 cm3 d'acide acétique. A la solution obtenue, on ajoute 10 g de gel de silice neutre et concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 "C. Le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne et on élue successivement par 280 cm3 d'acétate d'éthyle, 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acéti- 65 que (9-1 en volumes), 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes), 160 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 13 à 23 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient une huile qui se solidifie dans l'éther. Après séparation par filtration et séchage, on obtient 2,84 g d'acide N2-[0'-benzyl N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique.

Rf = 0,68 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)]

Le N-octanoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 3,6 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à — 1 °C, de 3,95 g d'acide octanoïque dans 140 cm3 de tétrahydrofuranne et 3,8 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 1 °C,

puis on ajoute une solution, refroidie à 0 °C, de 9,45 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 54,8 cm3 de soude IN et 30 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à — 1 °C puis pendant 20 heures à 20 "C environ. Il est ensuite acidifié à pH 1 par addition d'acide chlorhydrique IN. Le tétrahydrofuranne est évaporé sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C, puis le concentrât est extrait par 100 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique ainsi obtenue est lavée 2 fois par 50 cm3 au total d'acide chlorhydrique IN et par 25 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium et concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 10 g d'une huile jaune pâle qui est chromatographiée sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 200 g de gel de silice neutre (0,063-0,20 mm). On élue avec de l'acétate d'éthyle en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 7 à 9 réunies sont concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. Le résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'un mélange éther-éther de pétrole (P.E. = 35-60 °C) (1-4 en volumes), séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 3,27 g de N-octa-noyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle sous forme d'une poudre blanche.

Rf = 0,56 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes)]

Exemple 12

On ajoute 0,32 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution maintenue à — 5 °C de 512 mg de N-benzyloxy-carbonyl glycine dans 25 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,35 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité 20 minutes à - 5 °C, puis on ajoute 1,54 g d'acide N2-[N-(N-palmitoyl L alanyl)-y-D glutamyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamique en solution dans un mélange refroidi à 2 °C de 5 cm3 d'eau, et 4,9 cm3 de soude IN. Le mélange réactionnel est agité 1 heure à - 5 °C et 18 heures à 20 °C environ. Ensuite, on évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. La phase auquese restante est diluée par 50 cm3 d'eau et acidifiée à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique IN. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 3 fois par 30 cm3 au total d'eau et séché. On obtient ainsi 1,80 g de poudre beige que l'on Chromatographie sur 36 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 22 mm de diamètre. Pour cela, on le dissout dans 20 cm3 d'acide acétique, on ajoute 5 g de silice et on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne et élue successivement par 120 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle - acide acétique (9-1 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate d'iéthy-le-acide acétique (7-3 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) et 80 cm3 d'acide acétique, en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 10 à 16 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. L'huile résiduelle est tritu-

rèe dans 50 cmJ d'éther. Après filtration et séchage, on obtient 0,83 g d'acide N2-[N-(N-palmitoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique fondant à 124-128 °C (fusion pâteuse).

Rf = 0,50 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 s en volumes)]

On dissout 1,14 g d'acide N2-[N-(N-palmitoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-(benzyloxycarbonal glycyl) DD,LL diami-no-2,6 pimélamique dans 30 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,14 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait io passer un léger courant d'hydrogène pendant 3 heures. Ensuite, on chauffe le milieu réactionnel vers 65 °C, le filtre et le concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C; le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé par 10 cm3 d'éther et séché sous pression u réduite (0,2 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 880 mg d'acide N2-[N-(N-palmitoyl L alanyl)-y-D glutamil] N6-(glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique fondant à 198-200 °C (fusion pâteuse).

Rf = 0,28 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique- 20 eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Calc.% C 57,87 H 8,83 N12,27 Tr. 54,64 8,67 10,98

Cendres sulfuriques % = 4,7

Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Tech- 25 nicon révèle la présence des acides aminés suivants:

Ala 1,00 (théorie = 1)

Dap 1,02 (théorie = 1)

Glu 1,05 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1) 30

L'acide N2-[N-(N-palmitoyl L alanyI)y-D glutamyl]

DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 2,14 g d'acide N2-[0'-benzyl N(N-palmitoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diami- 35 no-2,6 pimélamique dans 80 cm3 d'acide acétique. On ajoute 2,14 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) puis on fait passer un lent courant d'hydrogène pendant 2 heures >/2.

Après filtration, le filtrat est concentré à 5 cm3 environ sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C puis est dilué par 40 addition de 100 cm3 d'éther. On obtient un précipité qui est séparé par filtration, lavé 2 fois par 20 cm3 au total d'éther et séché. On obtient ainsi 1,58 g d'acide N2-[N-(N-palmitoyl L alanyl)y-D glutamyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamique.

L'acide N2-[0'-benzyl N-(N-palmitoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 0,70 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à 2 °C, de 2,91 g de N-palmitoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans 120 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,75 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 2 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 2 °C, de 1,726 g d'acide N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans un mélange de 53,4 cm3 d'eau et de 5,34 cm3 de soude 1 N. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à 2 °C, puis pendant 18 heures à une température voisine de 20 °C. Le tétrahydrofuranne est évaporé sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 "C. 60 Le concentrât est dilué par addition de 50 cm3 d'eau et acidifié à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. Le précipité blanc obtenu est séparé par filtration, lavé 3 fois par 75 cm3 au total d'eau et séché. On obtient ainsi 4,15 g d'un solide blanc qui est chromatographié sur une colonne de 3 cm 65 de diamètre contenant 85 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). Pour cela, le produit est dissous dans de l'acide acétique à 60 °C. A la solution obtenue on ajoute 10 g de gel de silice

23 651577

neutre puis on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne et on élue successivement par 320 cm3 d'acétate d'éthyle, 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 320 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 14 à 22 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 "C.

Le résidu obtenue est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration, et séché. On obtient ainsi 2,20 g d'acide N^O1-benzyl N-(N-palmitoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyl-oxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique.

Rf = 0,75 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)]

Le N-palmitoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 3,6 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à 0 °C de 7,03 g d'acide palmitique dans 140 cm3 de tétrahydrofuranne et 3,8 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 0 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 0 °C, de 9,45 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 54,8 cm3 de soude 1 N et de 30 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à 0 °C, puis pendant 18 heures à 20 °C environ; il est ensuite acidifié à pH 1 par addition de 70 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 5 fois par 200 cm3 au total d'eau et séché. On obtient ainsi 12,11 g d'une poudre blanche qui est chromatographiée sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 200 g de gel de silice neutre (0,063-0,20 mm). On élue successivement par 200 cm3 d'acétate d'éthyle, 300 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), 1,6 litre d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes), 400 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (6-4 en volumes) en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 5 à 23 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 "C. On obtient ainsi 5,18 g d'un solide que l'on triture dans 50 cm3 d'éther bouillant pendant l/2 heure. Après refroidissement à une température voisine de 20 "C, l'insoluble est séparé par filtration, lavé 3 fois par 75 cm3 au total d'éther puis séché. On obtient ainsi 2,94 g de N-palmitoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle. Rf = 0,77 [silicagel; acétate d'éthyle]

Exemple 13

On ajoute 0,46 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à - 7 "C, de 738 mg de N-benzyloxycar-bonyl glycine dans 65 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,494 cm3 de triétylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à - 7 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 2 °C, de 2,02 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 10 cm3 d'eau et 7,06 cm3 de soude 1 N. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure vers - 5 "C et pendant 18 heures à 20 °C environ. Ensuite, on évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. La phase aqueuse restante est diluée par addition de 50 cm3 d'eau et acidifiée à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé par 25 cm3 d'eau et séché. Le résidu obtenu est dissous dans 5 cm3 d'acide acétique. On ajoute 10 g de silice puis on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 "C. Le résidu obtenu est chargé sur une colonne de 35 mm diamètre, contenant 100 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 160 cm3 d'acétate d'éthyle, 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes), 200 cm3 d'un mélange acetate d'éthyle-acide acétique (7-3 en

45

50

55

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24

volumes), 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (6-4 en volumes) et 440 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3.

Les fractions 23 à 32 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. L'huile résiduelle est triturée dans 50 cm3 d'éther jusqu'à pulvérisation totale du produit. Le produit est séparé par filtration et séché. On obtient ainsi, sous forme d'une poudre blanche 1,7 g d'acide JNP-fN-CN-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-(benzyl-oxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique fondant à 134-136 °C (fusion pâteuse).

Rf = 0,76 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes)]

Analyse: Calc.% C58,25 H 7,66 N 11,02 Tr. 55,7 7,6 10,2

Ala 1,00 (théorie = 1)

Dap 0,93 (théorie = 1)

Glu 1,02 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

On dissout 1,7 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diami-no-2,6 pimélamique dans 45 cm3 d'acide acétique. On ajoute 17 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 3 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé par 10 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 1,32 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-(glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique fondant à 180-184 °C (fusion pâteuse).

Rf = 0,23 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Calc.% C 55,40 H 8,74 N 13,36 Tr. 54,31 7,96 12,55

Ala 0,99 (théorie = 1)

Dap 0,96 (théorie =1)

Glu 1,01 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

Exemple 14

On ajoute 0,52 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à 12 °C, de 1,96 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans 80 cm3 de dioxanne et 0,56 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 20 minutes à 12 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 5 °C, de 1,78 g de chlorhydrate de N e-benzyloxycarbonyl glycyl L lysyl-D alanine dans un mélange de 10 cm3 d'eau et de 8 cm3 de soude 1 N. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 heures à une température voisine de 20 °C. On acidifie ensuite le milieu réactionnel à pH 2 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique 1N et on ajoute 150 cm3 d'eau. L'insoluble est séparé par filtration et lavé par 100 cm3 d'eau. Après séchage, on obtient 3,14 g d'une poudre blanche qui est recristallisée dans un mélange bouillant de 500 cm3 d'acétate d'éthyle et de 60 cm3 de méthanol. Après 18 heures de repos à 5 °C, les cristaux apparus sont séparés par filtration et séchés. On obtient ainsi 2,26 g de N a-tO'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N y-benzyloxycarbonyl glycyl L lysyl-D alanine fondant à 193-196 °C.

Rf = 0,76 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

On dissout 2,23 g de N a-fo'-benzyl N-(N-lauroyl L

alanyl)-y-D glutamyl] N s-benzyloxycarbonyl glycyl L lysyl-D alanine dans 250 cm3 de méthanol à 60 "C. On refroidit la solution à 40 °C, puis on ajoute 2,23 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un lent courant d'hydrogène pendant 5 heures. On filtre le mélange réactionnel, on lave le palladium sur noir 5 fois par 300 cm3 au total de méthanol bouillant. Les filtrats réunis sont concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'éther. Après filtration, lavage par 100 cm3 d'éther et séchage, on obtient 1,31 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl-y -D glutamyl] Ne-glycyl L lysyl-D alanine fondant à 155-158 °C.

Rf = 0,48 [silicagel; méthanol]

Analyse: Calc.% C 56,69 H 8,59 N 12,80 Tr. 57,0 9,1 13,1

Ala 1,98 (théorie = 2)

Glu 1,06 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

Lys 1,00 (théorie = 1)

Le chlorhydrate de N s-benzyloxycarbonyl glycyl L lysyl-D alanine peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 3,20 g de N a-t.butyloxycarbonyl N s-benzyloxycarbonyl glycyl L lysyl-D alanine dans 15 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N dans l'acide acétique. Après 5 minutes d'agitation du mélange réactionnel, il se forme un précipité. Après 2 heures de repos, on ahoute 50 cm3 d'éther, on sépare le précipité par filtration, le lave 2 fois par 50 cm3 au total d'éther puis le sèche. On obtient ainsi 2,73 g de chlorhydrate de N s-benzyloxycarbonyl glycyl L lysyl-D alanine.

Rf = 0,40 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Le N a-t.butyloxycarbonyl N e-benzyloxycarbonyl glycyl-L lysyl-D alanine peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 2,60 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution maintenue à 10 °C de 3,54 g de N-benzyloxycar-bonyl glycine dans 200 cm3 de dioxanne et 2,8 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 20 minutes vers 10 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 10 °C, de 6,35 g de N a-t.butyloxycarbonyl L lysyl-D alanine dans un mélange de 40 cm3 d'eau et de 20 cm3 de soude 1 N. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 heures à 20 °C environ. Il est ensuite acidifié jusqu'à pH 3 par addition d'acide chlorhydrique 1 N. On évapore le dioxanne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On extrait le concentrât 3 fois par 300 cm3 au total d'acétate d'éthyle; la phase organique est lavée 2 fois par 100 cm3 au total d'une solution saturée d'acide citrique et par 20 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium puis concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient 12,89 g d'une huile qui est chromatographiée sur colonne de 3 cm de diamètre contenant 200 g de gel de silice neutre (0,063-0,2 mm). On élue par de l'acétone en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 5 et 6 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient 10,15 g d'une huile qui est chromatographiée sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 200 g de gel de silice neutre (0,063-0,2 mm). On élue successivement par 100 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétone (9-1 en volumes), 500 cm3 d'un mélange cyclohecane-acétone (8-2 en volumes), 500 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétone (7-3 en volumes), 400 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétone (6-4 en volumes), 500 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétone (1-1 en volumes), 1 litre d'un mélange cyclohexane-acétone (4-6 en volumes) et 200 cm3 d'acétone en recueillant des fractions de 100 cm3. Les frac-

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20

25

30

35

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50

55

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tions 25 à 32 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 3,21 g de N a-t.butyloxycarbonyl N e-benzyloxycarbonyl glycyl-L lysyl-D alanine.

Rf = 0,69 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Le N a-t.butyloxycarbonyl L lysyl-D alanine peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 16,23 g de N a-t.butyloxycarbonyl N e-benzyloxycarbonyl L lysyl-D alaninate de benzyle dans 200 cm3 de méthanol. On ajoute 16,23 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) puis on fait passer un lent courant d'hydrogène pendant 4 heures. On filtre le mélange réactionnel, puis on lave le palladium sur noir 3 fois par 60 cm3 au total de méthanol. Les filtrats réunis sont concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 8,87 g de N a-t.butyloxycarbonyl L lysyl-D alanine sous forme de meringue.

Rf = 0,08 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (4-1 en volumes)]

Exemple 15

On ajoute 0,5 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à 13 °C, de 1,91 g de N-(N-lauroyl L alanyl)-a-D glutamate de benzyle dans 80 cm3 de dioxanne et 0,55 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 13 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 4 °C, de 1,90 g de chlorhydrate de N6-(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine dans 7,8 cm3 de soude IN. Le mélange réactionnel est agité pendant 18 heures à 20 °C environ, puis acidifié à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique IN et dilué par addition de 120 cm3 d'eau. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé par 20 cm3 d'eau et séché. On obtient ainsi 3,21 g d'une poudre blanche qui est chromatographiée sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 60 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue avec 40 cm3 d'acide acétique et 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 5 à 10 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 2,88 g d'une poudre blanche qui est chromatographiée sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 60 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 180 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 180 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes) et 100 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (6-4 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 4 à 17 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. Le résidu obtenu est dissous dans 25 cm3 d'acide acétique bouillant et la solution obtenue, additionnée de 0,2 g de noir décolorant, est filtrée à chaud; le filtrat est dilué par addition de 100 cm3 d'acétate d'éthyle. Après 1 heure de repos à 20 °C environ, les cristaux apparus sont séparés par filtration, lavés 2 fois par 10 cm3 au total d'acétate d'éthyle et séchés. On obtient ainsi 1,53 g de N2-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-(benzyloxy-carbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine fondant à 225-227 °C.

Rf = 0,71 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

On dissout 1,51 g de N2-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine dans 75 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,51 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) puis on fait passer un lent courant d'hydrogène pendant 2 heures. Après filtration, on ajoute 500 cm3 d'éther au filtrat. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé par

651 577

50 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 710 mg de N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-glycyl DD,LL diamino-2,6 pimél-amoyl-D alanine contenant 0,4% d'eau (méthode de Fischer).

Rf = 0,32 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse: Calc.% C 54,92 H 8,21 N 14,01 Tr. 52,6 8,0 12,3

Cendres sulfuriques % = 1,1

Ala 2,00 (théorie = 2)

Dap 0,98 (théorie =1)

Glu 1,05 (théorie = 1)

Gly 0,95 (théorie = 1)

Le chlorhydrate de N6-(benzyloxycarbonyl glycyl)

DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 2,21 g de N2-t.butyloxycarbonyl N6-(benzyl-oxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine dans 20 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N dans l'acide acétique. On agite pendant 2 heures à 20 °C environ, puis on ajoute 250 cm3 d'éther. Le précipité formé est séparé par décantation, et trituré dans 100 cm3 d'acétone. Après filtration, lavage par 25 cm3 d'éther et séchage, on obtient 1,96 g de chlorhydrate de N6-(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine.

Rf = 0,46 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Le N2-t.butyloxycarbonyl N6-(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 0,89 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 1 °C, de 1,20 g de N-benzyloxycar-bonyl glycine dans 68 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,95 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 1 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 2 °C, de 2,45 g de N2-t.butyloxycarbonyl DD,LL pimélamoyl-D alanine dans 13,6 cm3 de soude 0,5 N. Le mélange réactionnel est agité pendant 4 heures vers 5 °C. On évapore ensuite le tétryhdrofu-ranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C; la phase aqueuse restante est diluée par addition de 50 cm3 d'eau, acidifiée à pH 3 par addition d'une solution saturée d'acide citrique et extraite 5 fois par 125 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées par 10 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, sé-chées sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On ob-tientune meringue blanche qui est chromatographiée sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 90 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 800 cm3 d'acétate d'éthyle, 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), 400 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 25 à 28 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 2,4 g de N2-t.butyloxycarbonyl N6-(benzyloxy-carbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine.

Rf = 0,67 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Le N2-t.butyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimél-amoyl-D alanine peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 4,52 g de N2-t.butyloxycarbonyl N6-benzyl-oxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alaninate de benzyle dans 45 cm3 d'acide acétique. On ajoute 4,52 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) puis on fait passer un lent courant d'hydrogène pendant 3 heures. Après filtration,

25

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

651 577

26

on verse le filtrat dans 800 cm3 d'éther; après 30 minutes d'agitation, on sépare le précipité formé par filtration, le lave par 100 cm3 d'éther et le sèche. On obtient ainsi 2,5 g de N2-t. butyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine. s

Rf = 0,37 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20^6-24 en volumes)]

Le N2-t.butyloxycarbonyl N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alaninate de benzyle peut être préparé de la façon suivante: io

On ajoute 1,53 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à -1 °C, de 5 g d'acide N2-t.butyIoxy-carbonyl N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 120 cm3 de tétrahydrofuranne et 1,65 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à is — 1 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 0 °C, de 4,15 g de p-toluènesulfonate de D alaninate de benzyle dans 120 cm3 de tétrahydrofuranne et 1,65 cm3 de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à — 1 °C, puis pendant 18 heures à 20 °C environ. liest ensuite concentré sous 20 pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On reprend le résidu par 100 cm3 d'acétate d'éthyle. La solution obtenue est lavée successivement par 25 cm3 d'eau, 4 fois par 80 cm3 au total d'une solution saturée de bicarbonate de sodium, 4 fois par 80 cm3 au total d'une solution saturée d'acide citrique et 25 10 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchée sur du sulfate de magnésium anhydre puis concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 6,64 g d'une meringue rosée qui est chromatographiée sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 120 g de gel de30 silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 40 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohexane (1-1 en volumes), 80 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohexane (3-1 en volumes), 1,16 litre d'acetate d'éthyle et 520 cm3 d'acétone en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 10 35 à 39 réunies sont concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 4,52 g de N2-! butyloxycarbonyl N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alaninate de benzyle.

40

Rf = 0,37 [silicagel; acétate d'éthyle]

Exemple 16

On ajoute 0,52 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 10 °C, de 2,52 g de N-docosanoyl L 45 alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 120 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,56 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 6 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 6 °C, de 1,484 g de N e-benzyloxycar-bonylglycyl L lysine dans un mélange de 4,4 cm3 de soude IN 50 et de 4,4 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant quelques minutes à 6 °C, puis pendant 2 jours à 20 °C environ. On évapore ensuite le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C; le concentrât est acidifié par 10 cm3 d'acide chlorhydrique IN. L'insoluble obtenu 55 après 1 heure d'agitation, est séparé par filtration, lavé 5 fois par 50 cm3 au total d'acide chlorhydrique 0,1N et par 10 cm3 d'eau, puis séché sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 5,46 g d'une poudre qui est dissoute dans 40 cm3 d'acide acétique contenant 20 g de gel de silice 60 neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 38 mm de diamètre contenant 200 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 600 cm3 d'acétate d'éthyle, 440 cm3 d'un mé- 65 lange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes),

360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes), 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (7-3 en volumes), 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (6-4 en volumes) et 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1—1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3.

Les fractions 26 à 57 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. Le concentrât est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 1,71 g de N^fO'-benzyl N-(N-docosanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonylglycyl L lysine.

Rf = 0,76 [silicagel; n.butanol-pyridin-acide acétique-eau 50-20-6-24 en volumes)].

On dissout 2,17 g d'acide N2-^'-benzyl N-(N-docosa-noyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonylglycyl L lysine dans 80 cm3 d'acide acétique tiédi à 30 °C. On ajoute 2,17 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 2 heures1 /2. On chauffe ensuite le milieu réactionnel à 50 °C, le filtre, lave 3 fois l'insoluble par 30 cm3 au total d'acide acétique chauffé à 50 °C. Les filtrats sont réunis et concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 1,74 g d'une poudre qui est chromatographiée sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 35 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue par de l'acide acétique en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 23 à 41, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le solide obtenu est repris dans 50 cm3 d'éther, trituré jusqu'à pulvérisation, séparé par filtration et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure). On obtient ainsi 410 mg de N2-[N-(N-docosanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-glycyl L lysine.

Rf = 0,30 [silicagel; acide acétique]

Analyse Calc.% C 62,87 H 9,86 N 9,64 Tr. 61,5 9,3 9,2

Cendres sulfuriques = 0,5%

Ala 1,00 (théorie = 1)

Glu 0,95 (théorie = 1)

Gly 1,03 (théorie = 1)

Lyo 1,00 (théorie = 1)

Le N-docosanoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 1,95 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 25 °C, de 5,19 g d'acide docosanoïque dans un mélange de 150 cm3 de tétrahydrofuranne et de 2,1 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 25 °C, puis on ajoute une solution de 5,69 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 33 cm3 de soude IN et 17 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 30 minutes vers 30 °C, puis pendant 18 heures vers 20 °C environ. On ajoute alors 100 cm3 d'eau et on acidifie à pH 1. On obtient un précipité que l'on sépare par filtration, lave 3 fois par 75 cm3 au total d'eau et sèche sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 6,53 g d'une poudre blanche. On en dissout 6 g dans 50 cm3 de tétrahydrofuranne contenant 20 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 3,5 cm de diamètre contenant 180 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par:

1300 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (1-1 en volumes)

600 cm3 d'acétate d'éthyle

500 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne (95-5 en volumes)

900 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne (9-1 en volumes)

27

651 577

800 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne (8-2 en volumes)

1000 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne (6-4 en volumes)

900 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne (4-6 en volumes)

500 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne (2-8 en volumes) et

600 cm3 de tétrahydrofuranne en recueillant des fractions de 100 cm3.

Les fractions 17 à 68 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 3,31 g de N-docosanoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle.

Rf = 0,54 [silicagel; acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne (8-2 en volumes)]

Exemple 17

On ajoute 0,94 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 2 °C, de 3,23 g de N-(cyclohexyl-3 propionyl) L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 200 cm3 de tétrahydrofuranne et 1 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 2 °C,

puis on ajoute une soluteion refroidie à 2 °C, de 2,44 g de N e-benzyloxycarbonylglycyl L lysine dans un mélange de 7,23 cm3 de soude IN et 7 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 15 minutes à - 2 °C, puis pendant 20 heures à 20 °C environ. Ensuite il est acidifié à pH 1 par addition de 20 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 "C. Dans le concentrât, apparaît un précipité qui est séparé par filtration, lavé 5 fois par 50 cm3 au total d'eau et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20 °C. Le produit ainsi obtenu (5,3 g) est dissous dans 50 cm3 d'acide acétique contenant 10 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange et on charge l'ensemble sur une colonne de 2,2 cm de diamètre contenant 100 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 100 cm3 d'acétate d'éthyle, 700 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) et 1,2 litre d'acide acétique en recueillant des fractions de 100 cm3.

Les fractions 5 à 13 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. Le concentrât est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 4,21 g de N2-{0'-benzyl N-[N-(cyclohexyl-3 propionyl) L-alanyl]-a-D glutamyl}N6-benzyloxycar-bonylgylcyl L lysine.

Rf = 0,84 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

On dissout 2 g de N2-{0'-benzyl N-[N-(cyclohexyl-3 propionyl) L alanyl]-y-D glutamyl} N6-benzyloxycarbonylglycyl L lysine dans 50 cm3 d'acide acétique. On ajoute 2 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 2 heures. Le catalyseur est séparé par filtration, lavé 3 fois par 15 cm3 au total d'acide acétique; les filtrats, réunis, sont concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient 1,42 g d'une poudre qui est chromatographiée sur une colonne de 2,3 cm de diamètre contenant 28 g de gel de silice neutre 0,04-0,063 mm). On élue successivement par 560 cm3 d'acide acétique et 120 cm3 d'un mélange n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 8 à 32 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 "C. Le résidu ainsi obtenu (990 mg) est dissous dans 30 cm3 d'acide acétique contenant 5 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de

2,3 cm de diamètre contenant 20 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 880 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes), 320 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes), 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-3 en volumes) et 440 cm3 d'acide acétique en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 35 à 46, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le concentrât est trituré jusqu'à pulvérisation dans 40 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 840 mg de N2-{N-[N-(cyclohexyl-3 propionyl) L alanyl]-y-D glutamyl} N6-glycyl L lysine fondant vers 147-150 °C (point de fusion pâteux).

Rf = 0,23 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Analyse Calc.% C 55,44 H 8,00 N 12,93 Tr. 53,8 7,4 11,8

Cendres sulfuriques = 1,6%

Ala 1,00 (théorie = 1)

Glu 0,97 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

Lys 0,98 (théorie = 1)

Le N-(cyclohexyl-3 propionyl) L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à - 5 °C, de 3,605 g d'acide cyclohexane-3 propionique dans un mélange de 100 cm3 de tétrahydrofuranne et 3,23 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 5 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 5 °C, de 7,96 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 46,2 cm3 de soude IN et 13,8 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes à 0 °C, puis pendant 2 jours à 20 °C environ. On évapore ensuite le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le concentrât est extrait 2 fois par 80 cm3 au total d'éther, acidifié à pH 1 par addition de 50 cm3 d'acide chlorhydrique IN. L'huile qui décante du milieu réactionnel est extraite 4 fois par 200 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases acétate d'éthyle réunies sont lavées par 25 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium et sé-chées sur sulfate de magnésium anhydre. Après concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient une huile qui cristallise spontanément. Ces cristaux (7,3 g) sont dissous dans 40 cm3 d'acide acétique contenant 20 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange et on charge l'ensemble sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 50 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue par de l'acétate d'éthyle en recueillant des fractions de 100 cm3. La quatrième fraction est concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 1,86 g de N-(cyclohexyl-3 propiony) L alanyl-a-D glutamate de benzyle fondant à 126-128 °C. Les fractions 3 et 5 sont réunies et concentrées à sec. Le solide amorphe est chromatographié sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 68 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 520 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (1-1 en volumes) et 520 cm3 d'acétate d'éthyle en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 11 à 28, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 1,37 g de N-(cyclohexyl-3 propionyl) L alanyl-a-D glutamate de benzyle fondant à 128-130 °C.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

651577 28

Rf = 0,14 [silicagel; acétate d'éthyle] Ala 1,01 (théorie = 1)

Dap 0,95 (théorie = 1)

Exemple 18 Glu 1,00 (théorie = 1)

On ajoute 0,468 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une Gly 1,00 (théorie = 1)

solution, maintenue à — 3 °C, de 753 mg de N-benzyloxycar- 5 L'acide N2-{N-[N-(triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanyl]-

bonylglycine dans un mélange de 36 cm3 de tétrahydrofu- y-D glutamyl} DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être ranne et de 0,5 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité préparé de la façon suivante:

pendant 20 minutes à — 3 °C, puis on ajoute une solution re- On dissout 2,76 g d'acide N^fO'-benzoyl N-[N-(tri-

froidie à 0 °C de 2,07 g d'acide N2-{N[N-(triméthyl-3,5,5 méthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanyl]-y-D glutamyl} N6-benzyl-

hexanoyl) L alanyl]-y-D glutamyl} DD,LL, diamino-2,6 io oxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 100 cm3

pimélamique dans un mélange de 7,2 cm3 de soude IN et d'acide acétique. On ajoute 2,76 g de palladium sur noir (à

30 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 3 % de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydro-

heure vers 0 °C, puis pendant 20 heures vers 20 °C environ. gène pendant 2 heures1 /2. Après filtration et concentration à

Ensuite, on l'acidifie à pH 1 par addition de 12 cm3 d'acide sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à

chlorhydrique IN. On évapore le tétrahydrofuranne par con- is 50 °C, l'huile est triturée dans 50 cm3 d'éther. On obtient un centration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. précipité qui est séparé par filtration et séché sous pression ré-

Le concentrât est extrait 4 fois par 100 cm3 au total d'acétate duite (0,3 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 2,07 g d'éthyle. Les phases acétate d'éthyle réunies, sont lavées par d'acide N2-{N-[N-(triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanyl]-y-D

25 cm3 d'acide chlorhydrique 0, IN et séchées sur sulfate de glutamyl} DD,LL diamino-2,6 pimélamique.

sodium. Après filtration et concentration à sec sous pression 20 Rf = 0,32 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-

réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient 2,13 g de so- eau (50-20-6-24 en volumes)]

lide amorphe que l'on dissout dans 20 cm3 d'acide acétique Rf = 0,31 [silicagel; acide acétique].

contenant 5 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On con- L'acide N2-{0'-ben2yl N-[N-(triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L centre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mer- alanyl]-y-D glutamyl} N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diami-cure) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 2 cm « no-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante: de diamètre contenant 40 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 On ajoute 0,91 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une mm). On élue successivement par 400 cm3 d'un mélange acé- solution, maintenue à 0 °C de 3,14 g de N-(triméthyl-3,5,5 he-tate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 160 cm3 d'un xanoyl) L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes), de 150 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,98 cm3 de triéthyl-200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (7-3 en 30 amine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 0 °C, puis volume), 200 cm3 d'un mélange acétate d'ethyle-acid acétique on ajoute une solution refroidie à 0 °C de 2,263 g d'acide N6-(1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans fractions 9 à 19 réunies, sont concentrées à sec sous pression un mélange de 7 cm3 de soude IN et 70 cm3 d'eau. Le mélange réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le solide amorphe ob- réactionnel est agité pendant 1 heure vers 0 °C, puis pendant tenu est repris par 40 cm3 d'éther, trituré jusqu'à pulvérisation 35 20 heures vers 22 °C environ. Ensuite, on élimine un léger intotale, séparé par filtration et séché sous pression réduite soluble par filtration, on acidifie à pH 1 par addition de (0,3 mm de mercure). On obtient ainsi 1,49 g d'acide N2-{N- 12 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On évapore le tétrahydro-[N-(triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanyl]-y-D glutamyl} N6- furanne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le benzyloxycarbonylglycyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique. concentrât est extrait 3 fois par 150 cm3 au total d'acétate Rf = 0,70 [silicagel; acide acétique] 40 d'éthyle. Les phases acétate d'éthyle, réunies, sont lavées par Rf = 0,53 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 20 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1N, séchées sur sulfate de so-en volumes)]. dium. Après concentration à sec sous pression réduite (20 mm On dissout 1,45 g d'acide ^-{N-tN-^riméthyl-SjSjS hexa- de mercure) à 50 °C, on obtient 5,14 g de solide amorphe que noyl) L alanyl]-y-D glutamyl{ N6-benzyloxycarbonylglycyl l'on dissout dans 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 40 cm3 d'acide acéti- 45 acétique (1-1 en volumes) contenant 10 g de gel de silice neu-que. On ajoute 1,45 g de palladium sur noir (à 3% de palla- tre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pres-dium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant sion réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et on charge l'ensem-1 heure l/i. Après filtration et concentration à sec du filtrat ble sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 100 g de sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, le solide gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement amorphe est trituré dans 50 cm3 d'éther. On obtient ainsi 50 par 400 cm3 d'acétate d'éthyle, 200 cm3 d'un mélange acétate 1,18 g de solide que l'on met en suspension dans 150 cm3 d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 200 cm3 d'un mé-d'eau. Après 68 heures d'agitation, on obtient une solution lange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes), limpide que l'on charge sur une colonne de 2,3 cm de diamè- 160 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (6-4 en tre contenant 250 g de Sephadex G-10. On élue par de l'eau en volumes), 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acéti-recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 2 et 3 réu- 55 que (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3, nies, sont lyophilisées et séchées sous vide (0,3 mm de mer- Les fractions 15 à 25, réunies, sont concentrées à sec sous cure). On obtient ainsi 930 mg d'acide N2-{N-[N-(tri- pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. L'huile obtenue méthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanyl]-y-D glutamyl} N6-glycyl est reprise par 50 cm3 d'éther, triturée jusqu'à pulvérisation, DD,LL diamino-2,6 pimélamique. séparée par filtration et séchée sous pression réduite (0,3 mm Rf = 0,23 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acéti- 6°de mercure). On obtient 2,85 g d'acide N2-{0'-benzyl N-[N-que-eau (50-20-6-24 en volumes)]. (triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanyl]-y-D glutamyl} N6-benz-Analyse Calc.% C 53,23 H 7,90 N 14,33 yloxycarbonyl DD, LL diamino-2,6 pimélamique.

Tr. 49,9 6,5 13,3 Rf = 0,82 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1

en volumes)].

65 Le N-(triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanyl-a-D glutamate

Cendres sulfuriques = 12,4% de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Tech- On ajoute 4,3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une so-

nicon révèle la présence des acides aminés suivants: lution, maintenue à - 6 °C, de 7,59 g de N-(triméthyl-3,5,5

29

hexanoyl) L alanine dans un mélange de 400 cm3 de tétrahydrofuranne et 4,63 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à - 6 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 3 °C de 9,06 g de chlorhydrate de a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 66,2 cm3 de soude IN et 14 cm3 5 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 15 minutes vers - 5 °C, puis pendant 66 heures vers 18 °C environ; il est ensuite acidifié à pH 1 par addition de 75 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 ° C. Le concentrât 10 est extrait 5 fois par 200 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases acétate d'éthyle, réunies, sont lavées par 40 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1N et séchées sur sulfate de magnésium. Après filtration et concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient 14,8 g d'huile que 15 l'on dissout dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle contenant 30 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 2,8 cm de diamètre contenant 280 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue 20 successivement par 21 de cyclohexane, 11 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (95/5 en volumes), 1,51 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (90/10 en volumes), 5 1 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (80/20 en volumes), 1,51 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (70/30 25 en volumes) et 3,51 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (50/50 en volumes) en recueillant des fractions de 500 cm3. Les fractions 23 à 29 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 10,86 g de N-(triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanyl-a-D 30 glutamate de benzyle sous forme d'huile qui cristallise.

RF = 0,37 [silicagel; acétate d'éthyle]

La N-(triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanine peut être préparée de la façon suivante.

On ajoute 6,5 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une so- 35 lution, maintenue à — 5 °C, de 7,912 g d'acide triméthyl-3,5,5 hexanoïque dans un mélange de 125 cm3 de tétrahydrofuranne et de 7 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à - 5 °C, puis on ajoute une solution, refroidie à 5 °C, de 4,495 g de L alanine dans 50 cm3 de soude IN. 40 Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes vers 0 °C, puis pendant 18 heures à 25 °C environ. On évapore ensuite le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le concentrât est extrait 2 fois par 40 cm3 au total d'éther, acidifié à pH 1 par addition de 55 cm3 d'acide « chlorhydrique IN. Le précipité huileux qui se forme est extrait 5 fois par 250 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases acétate d'éthyle sont réunies, lavées par 25 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium et séchées sur sulfate de magnésium. Après filtration et concentration à sec sous pression ré- so duite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient 11,79 g d'huile que l'on dissout dans 40 cm3 d'acétate d'éthyle contenant 20 g de gel de silice neutre (0,063-0,20 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 3 cm de diamètre ss contenant 120 g de gel de silice neutre (0,063-0,20 mm). On élue successivement par 600 cm3 de cyclohexane, 300 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (95/5 en volumes), 300 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (90/10 en volumes), 300 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle 60 (80/20 en volumes), 700 cm3 d'un mélange cyclohexane-acé-tate d'éthyle (50/50 en volumes), 300 cm3 d'acétate d'éthyle et 300 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (90/10 en volumes) en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 17 à 28 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite 65 (20 mm de mercure) à 45 °C. On obtient ainsi 10,16 g d'huile que l'on dissout dans 25 cm3 d'éther. Par addition de 150 cm3 d'éther de pétrole, on obtient une huile qui l'on sépare par dé651577

cantation. Après séchage sous vide (0,2 mm de mercure), on obtient 7,59 g de N-(triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanine. Rf = 0,43 [silicagel; acétate d'éthyle]

Exemple 19

On ajoute 0,91 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 0 °C, de 3,14 g de N-(triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 150 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,98 cm3 d3 triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à - 2 °C, puis ajoute une solution refroidie à 2 °C de 2,36 g de N e-benzyloxycarbonylglycyl L lysine dans un mélange de 7 cm3 de soude IN et 20 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heures vers 0 °C, puis pendant 20 heures vers 20"C environ. On l'acidifie ensuiteà pH 1 par addition de 12 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le concentrât est extrait 5 fois par 125 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases acétate d'éthyle réunies, sont lavées par 25 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1 N et séchées sur sulfate de sodium. Après filtration et concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient 4,41 g de solide amorphe que l'on dissout dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle contenant 15 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 3,5 cm de diamètre contenant 100 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 480 cm3 d'acétate d'éthyle, 160 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes), 440 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 16 à 46 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 "C. On obtient ainsi 4,38 g de N a-{0'-benzyl N-[N-(tri-méthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanyl]-Y-D glutamyl} N e-benzyl-oxycarbonylglycyl L lysine sous forme d'huile.

Rf = 0,84 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)].

On dissout 2,14 g de N a-{0'-benzyl N-[N-(triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanyl-y-D glutamyl} N e-benzyloxycarbonylglycyl L lysine dans 100 cm3 d'acide acétique. On ajoute 2,14 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 1 heure 40 minutes. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, le solide amorphe est trituré dans 50 cm3 d'éther. On obtient un précipité qui est séparé par filtration et séchée sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 1,11 g de N a-(N-[N-(triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanyl]-y-D glutamyl} N e-glycyl L lysine.

Rf = 0,37 [silicagel; acide acétique]

Rf = 0,28 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Analyse Calc.% C 55,23 H 8,35 N 12,88 Tr. 52,2 7,7 11,9

Cendres sulfuriques = 2%

Ala 1,00 (théorie = 1)

Glu 0,94 (théorie = 1)

Gly 1,02 (théorie = 1)

Lys 1,02 (théorie = 1)

Exemple 20

On ajoute 1,26 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 10 °C, de 1,52 g d'acide nonanoique dans un mélange de 120 cm3 de dioxanne et de 1,35 cm3 de tri-

651 577

30

éthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 10 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 10 °C de 3,5 g de chlorhydrate de N a-[0'-benzyl N-L alanyl-y-D glutamyl] N e-(benzyloxy-carbonylglycyl) L lysine dans un mélange de 9,6 cm3 de soude IN et 10 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant quelques minutes vers 10 °C puis pendant 15 minutes vers 20 °C environ. On concentre ensuite le milieu réactionnel sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. Au concentrât, on ajoute 160 cm3 d'eau et on acidifie à pH 2 par addition de 5 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On extrait 3 fois par 150 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases acétate d'éthyle, réunies, sont lavées par 100 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchées sur sulfate de magnésium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. La masse gélatineuse ainsi obtenue est reprise par 100 cm3 d'éther, triturée jusqu'à pulvérisation totale, séparée par filtration, lavée 4 fois par 200 cm3 au total d'éther et sé-chée à l'air libre. On obtient 2,2 g de poudre blanche que l'on dissout dans 30 cm3 d'acide acétique contenant 4 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite) (20 mm de mercure) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 100 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue par un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 8 à 22 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. L'huile obtenue est reprise par 100 cm3 d'éther, triturée jusqu'à pulvérisation totale, séparée par filtration et séchée sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 1,3 g de N a-[0'-benzyl N-(N-nonanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonylglycyl) L lysine.

Rf = 0,74 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Dans une solution de 1,2 g de N a-fO'-benzyl N-(N-nona-noyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(benzyoloxycarbonylglycyl) L lysine dans 100 cm3 d'acide trifluoracétique, on fait barboter de l'acide bromhydrique pendant 90 minutes. Ensuite, on concentre à sec la solution sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient une huile que l'on reprend par 50 cm3 d'acétate d'éthyle, triture jusqu'à pulvérisation totale, sépare par filtration, lave 3 fois par 150 cm3 au total d'éther et sèche sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 0,9 g de poudre que l'on Chromatographie sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 50 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue par un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 21 à 57 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient une huile que l'on reprend par 50 cm3 d'acétate d'éthyle, triture jusqu'à pulvérisation totale, sépare par filtration, lave 2 fois par 60 cm3 au total d'éther et sèche sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 0,49 g de bromhydrate de N a-[N-(N-nonanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-glycyl L lysine.

Analyse Calc.% C 48,07 H 7,42 N 11,21 Tr. 45,3 7,3 10,5

Cendres sulfuriques = 5,1%

Ala 1,00 (théorie = 1)

Glu 1,03 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

Lys 1,04 (théorie = 1)

Le chlorhydrate de N a-[0'-benzyl N-L alanyl-y-D glutamyl] N e-(ben2yloxycarbonylglycyl) L lysine peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 3,5 g de N a-[0!-benzyl N-t.butyloxycarbonyl L alanyl-y-D glutamyl] N e-(benzyloxycarbonylglycyl) L lysine dans 20 cm3 d'une solution saturée anhydre d'acide acétique chlorhydrique. On laisse en contact pendant 1 heure à 20 °C, ensuite on coule la solution dans 1 litre d'éther. On obtient un précipité que l'on sépare par filtration, lave 2 fois par 200 cm3 au total d'éther et sèche sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 3,5 g de chlorhydrate de N a-[01-ben2yl N-L alanyl-y-D glutamyl] N e-(benzyloxycarbonylglycyl) L lysine.

Exemple 21

On ajoute 0,27 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 4 °C, de 425 mg de N-benzyloxycar-bonyl glycine dans un mélange de 40 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,28 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 4 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 0 °C de 1,16 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] LL diamino-2,6 pimélamique dans un mélange de 4 cm3 de soude IN et 6 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 15 minutes vers — 5 °C, puis pendant 20 heures vers 20 °C environ. Ensuite, on élimine un léger trouble par filtration, on concentre le filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C; au concentrât, on ajoute 30 cm3 d'eau. Un précipité se forme lentement. On le sépare par filtration, le lave par 20 cm3 d'eau et le sèche à l'air libre. On obtient ainsi 1,38 g de poudre crème que l'on Chromatographie sur 70 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,8 cm de diamètre. On élue successivement par 250 cm3 d'acétate d'éthyle, 950 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes), 800 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 800 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes), 350 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (7-3 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 38 à 62, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. L'huile obtenue est reprise par 100 cm3 d'éther, triturée jusqu'à pulvérisation totale, séparée par filtration et séchée sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 40 °C. On obtient ainsi 1,03 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-ben2yloxycar-bonylglycyl LL diamino-2,6 pimélamique.

Rf -= 0,54 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes)].

On dissout 1,18 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonylglycyl LL diamino-2,6 pimélamique dans 32 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,18 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 5 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, le produit amorphe obtenu est trituré dans 30 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration, lavé 2 fois par 40 cm3 au total d'acétate d'éthyle et 20 cm3 d'éther. On obtient ainsi 0,88 g de poudre crème que l'on dissout dans 20 cm3 d'acide acétique contenant 1,6 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 1,8 cm de diamètre contenant 16 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 650 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) et 1,4 litre d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-3 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 15 à 30, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le produit amorphe ainsi obtenu est repris par 50 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration, lavé 2 fois par 40 cm3 au total d'acétate

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d'éthyle, puis par 30 cm3 d'éther. Après séchage sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 40 °C, on obtient 0,44 g d'acide N2[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-glycyl LL diamino-2,6 pimélamique.

Rf = 0,30 [silicagel; n-butanol-pyridine-acide acétique- 5 eau (50-20-6-24 en volumes)].

Analyse Calc.% C 55,40 H 8,34 N 13,36 Tr. 53,0 8,3 12,6

Cendres sulfuriques = 3,2%

Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Tech- 10 nicon révèle la présence des acides aminés suivants:

Ala 1,04 (théorie = 1)

Dap 0,98 (théorie = 1)

Glu 1,00 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1) is

L'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 1,36 g d'acide N2-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyI)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyI LL diamino-2,6 20 pimélamique dans 40 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,4 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 4 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 55 °C, l'huile obtenue est reprise par 100 cm3 d'é- 25 ther, triturée jusqu'à pulvérisation totale, séparée par filtration et séchée à l'air. On obtient ainsi 0,96 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] LL diamino-2,6 pimélamique.

Rf = 038 (silicagel; n-butanol-pyridine-acide acétique- 30 eau (50-20-6-24 en volumes)].

L'acide N2-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 0,69 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une 35 solution, maintenue à - 5 °C, de 2,57 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 120 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,74 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 5 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 0 °C de 1,7 g d'acide N6-benzyloxy- 40 carbonyl LL diamino-2,6 pimélamique dans un mélange de 5,25 cm3 de soude IN et 35 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 minutes vers - 3 °C, puis pendant 22 heures vers 20 °C environ. Ensuite, on l'acidifie à pH 2 par addition de 20 cm3 d'acide chlorhydrique IN. Le précipité 45 formé est séparé par filtration, lavé 3 fois par 60 cm3 au total d'acide chlorhydrique 0,IN et 3 fois par 60 cm3 au total d'eau. Après séchage à l'air libre, on obtient 3,97 g de poudre blanche que l'on Chromatographie sur 200 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 3,8 cm de 50 diametre.

On élue successivement par:

600 cm3 d'acétate d'éthyle,

500 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95/5 en volumes), 55

800 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9/1 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 24 à 30, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. L'huile obtenue est reprise par 100 cm3 d'éther, triturée jusqu'à pulvérisation totale, sé- 60 parée par filtration et séchée sous pression réduite (0,3 mm de mercure). On obtient ainsi 1,24 g d'acide N2-[0]-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl LL diamino-2,6 pimélamique.

Rf = 0,85 [silicagel; n-butanol-pyridine-acide acétique- 65 eau (50-20-6-24 en volumes)].

Rf = 0,76 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)].

L'acide N6-benzyloxycarbonyl LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

A une solution de 5 g de dichlorhydrate de l'acide LL diamino-2,6 pimélamique dans 15 cm3 d'eau amenée à pH 10 par addition de 45 cm3 de soude IN, on ajoute 2,14 g de bromure cuivrique dissous dans 20 cm3 d'eau. On agite le mélange réactionnel pendant 2 heures à 20 °C environ. On sépare par filtration un léger insoluble, puis on refroidit le filtrat à une température comprise entre - 3 °C et 0 °C. On ajoute 4,8 g de bicarbonate de sodium et ensuite, goutte à goutte en 30 minutes, 4,1 cm3 de chloroformiate de benzyle. Le mélange réactionnel est agité pendant 18 heures à une température voisine de 20 °C. Le précipité bleu formé est séparé par filtration, lavé 3 fois par 90 cm3 au total d'eau, 3 fois par 90 cm3 au total d'éthanol et 3 fois par 90 cm3 au total d'éther. Après séchage sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient 4,18 g de complexe cuivrique de l'acide N6-benzyloxycar-bonyl LL diamino-2,6 pimélamique que l'on ajoute à 28 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On agite pendant 1 heure à une température voisine de 20 °C. Un insoluble est séparé par filtration. Au filtrat, on ajoute 14 cm3 de méthanol puis on fait passer un courant d'hydrogène sulfuré pendant 6 heures. On laisse reposer pendant 16 heures. La bouillie noire obtenue est filtrée, lavée 3 fois par 15 cm3 au total d'eau. Les filtrats réunis sont concentrés jusqu'à un volume de 10 cm3 sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, amenés à pH 7 par addition de 5 cm3 de triéthylamine, et amenés à pH 6,8 par addition de 5 cm3 d'acide chlorhydrique IN. La bouillie blanche ainsi obtenue est conservée à 0 °C pendant 2 heures. La produit qui se sépare par filtration est lavé successivement 3 fois par 30 cm3 au total d'eau, 3 fois par 30 cm3 au total d'éthanol et 3 fois par 30 cm3 au total d'éther. Après séchage à 60 °C sous pression réduite (0,3 mm de mercure), on obtient 1,78 g d'acide N6-benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6 pimélamique.

[a]g°= +ll°(c= 1, HCl IN)

Rf = 0,45 [silicagel; n-butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Le dichlorhydrate de l'acide L,L diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 17 g d'acide L,L dibenzyloxycarbonylami-no-2,6 pimélamique dans un mélange de 300 cm3 de méthanol et de 5,9 cm3 d'acide chlorhydrique concentré (d= 1,19). On ajoute 17 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un courant d'hydrogène pendant 4 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 55 °C, on obtient 8,8 g de dichlorhydrate de l'acide L,L diamino-2,6 pimélamique sous forme de meringue.

L'acide L,L dibenzyloxycarbonylamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 19 g de L,L N2,N6-dibenzyloxycarbonyl diamino-2,6 pimélate acide de benzyle dans 190 cm3 de méthanol. On refroidit cette solution vers 0 °C et on la sature d'ammoniac. Dès qu'elle est saturée, on la transvase dans un autoclave de 1 litre. Après avoir fermé cet autoclave, on le conserve pendant 6 jours à 20 °C environ. Après dégazage, la solution ainsi obtenue est concentrée sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le résidu est dissous dans 250 cm3 d'eau et la solution obtenue est amenée à pH 2 par addition de 30 cm3 d'acide chlorhydrique 4N, extraite 3 fois par 300 cm3 au total d'acétate d'éthyle; cette phase organique est lavée par 100 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchée sur sulfate de sodium et concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi

651 577

32

17 g d'acide L,L-dibenzyloxycarbonylamino-2,6 pimélamique sous forme d'huile.

Rf = 0,68 [silicagel; n-butanol-pyridine-acide acétique-eau (50/20/6/24 en volumes)].

Le L,L N2,N6-dibenzyloxycarbonyl diamino-2,6 pimélate 5 acide de benzyle peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 55 g de L,L N2,N6-dibenzyloxycarbonyl diamino-2,6 pimélate de benzyle dans 400 cm3 d'alcool benzyli-que tiédi à 40 °C. Ensuite on coule sur cette solution maintenue à 40 °C pendant 1 heure environ, une solution de 4,8 g de 10 potasse en pastilles à 86% dans 400 cm3 d'alcool benzylique en 6 heures xji. On continue d'agiter le milieu réactionnel à 20 °C environ pendant 16 heures, ensuite on concentre à sec sous pression réduite (0,5 mm de mercure) à 90 °C. On obtient ainsi une huile que l'on dissout dans 1 litre d'eau, extrait 15 3 fois par 900 cm3 au total d'acétate d'éthyle. La phase aqueuse ainsi extraite est acidifiée à pH 2 par addition de 45 cm3 d'acide chlorhydrique 4N, extraite 3 fois par 1,51 au total d'acétate d'éthyle. La phase acétate d'éthyle ainsi obtenue est lavée avec 500 cm3 d'une solution saturée de chlorure 2o de sodium et séchée sur sulfate de sodium anhydre. Après séparation par filtration du sulfate de sodium, on ajoute 17 cm3 de dicyclohexylamine et on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 40 °C. On obtient une huile jaune que l'on dissout dans 100 cm3 d'éthanol auquel on ajoute 25 100 cm3 d'eau. Après 20 h de repos à 0 °C on obtient un solide blanc que l'on sépare par filtration, lave 2 fois par 100 cm3 au total d'eau et reprend dans un mélange de 200 cm3 d'acétate d'éthyle et 200 cm3 d'eau. On acidifie la phase aqueuse par addition de 40 cm3 d'une solution normale d'acide méthane- 30 sulfonique. Après décantation, la phase organique est lavée 2 fois par 100 cm3 au total d'eau, séchée sur sulfate de sodium anhydre et concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 "C. On obtient ainsi 15 g de L,L N2,N6-di-benzyloxycarbonyl diamino-2,6 pimélate acide de benzyle 35 sous forme d'huile.

Rf = 0,76 [silicagel, n-butanol-pyridine-acide acétique-eau (50/20/6/24 en volumes)].

Le L,L N2,N6-dibenzyloxycarbonyl diamino-2,6 pimélate de dibenzyle peut être préparé de la façon suivante: 40

Dans un tricol de 500 cm3, muni d'une agitation centrale et d'un appareil Dean Stark, on ajoute un mélange de 44,7 g d'acide L,L N2,N6-dibenzyloxycarbonyl diamino-2,6 pimélique, 3 g d'acide p-toluène-sulfonique, 30 cm3 d'alcool benzylique et 300 cm3 de toluène. On porte le milieu réactionnel au 45 reflux pendant 5 heures. Ensuite, après 16 heures d'agitation à 20 °C, on sépare l'insoluble blanc par filtration, le lave 2 fois par 400 cm3 au total d'une solution à 5% de carbonate de sodium et 2 fois par 400 cm3 au total d'eau. Après séchage à l'air libre, on obtient 55,4 g de L,L N2,N6-dibenzyloxycarbonyl 50 diamino-2,6 pimélate de dibenzyle fondant à 118 °C.

Rf = 0,53 [silicagel; acide acétique-acétate d'éthyle (8/2 en volumes)].

L'acide L,L N2,N6-dibenzyloxycarbonyl diamino-2,6 pimélique peut être préparé selon la méthode de A. ARENDT 55 et coll., Roczniki Chemii Ann. Soc. Chim. Polonorum 48,635 (1974).

60

Exemple 22

On ajoute 0,45 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à —5 °C, de 410 mg de N-acétylglycine dans un mélange de 70 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,49 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 5 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 5 °C de 2 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] 65 DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans un mélange de 7 cm3 de soude IN et 10 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant quelques minutes vers 0 °C, puis pendant 20 heures vers 20 °C. On l'acidifie ensuite à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On reprend le solide amorphe par 20 cm3 d'acide acétique contenant 5 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 70 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 280 cm3 d'acétate d'éthyle, 160 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 440 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (75-25 en volumes), 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes), 920 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-4 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3.

Les fraction 33 à 41, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le solide amorphe obtenu est repris par 50 cm3 d'éther, trituré jusqu'à pulvérisation totale, séparé par filtration et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure). On obtient ainsi 920 mg de poudre blanche que l'on Chromatographie sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 25 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 50 cm3 d'acétate d'éthyle, 100 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 100 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes), 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes), 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-3 en volumes) et 75 cm3 d'acide acétique en recueillant des fractions de 25 cm3. Les fractions 17 à 27, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le solide amorphe obtenu est repris par 50 cm3 d'éther, trituré jusqu'à pulvérisation totale, séparé par filtration et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 60 °C. On obtient ainsi 720 mg d'acide N2[N-(N-lauroyl L alanyl-y-D glutamyl] N6-(N-acétylglycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique fondant à partir de 135 °C (point de fusion pâteux).

Rf = 0,45 [silicagel; acide acétique]

Analyse Calc.% C 55,51 H 8,11 N 12,53 Tr. 54,3 8,0 12,3

Cendres sulfuriques = 4,36%

Ala 1,04 (théorie = 1)

Dap 0,97 (théorie =1)

Glu 1,02 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

Exemple 23

On ajoute 0,45 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 5 °C, de 781 mg de N-benzyloxycar-bonyl D alanine dans un mélange de 70 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,49 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 5 0 C, puis on ajoute une solution refroidie à 5 °C de 2 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans un mélange de 7 cm3 de soude IN et 10 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant quelques minutes vers 0 °C, puis pendant 20 heures vers 20 °C environ. On l'acidifie ensuite à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le concentrât est extrait 3 fois par 180 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases acétate d'éthyle réunies, sont lavées par 20 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1N, 20 cm3 d'eau, séchées sur sulfate de sodium. Après concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient 3 g de poudre que l'on dissout dans 60 cm3 d'acide acétique contenant 6 g de gel de silice neutre

33

(0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 82 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 250 cm3 d'acétate d'éthyle, 250 cm3 d'un mélange acétate 5 d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes), 250 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes),

300 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (85—15 en volumes), 750 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes), 250 cm3 d'un mélange acétate d'éthy- io le-acide acétique (7-3 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 23 à 34, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le solide amorphe ainsi obtenu est repris par 100 cm3 d'éther, trituré jusqu'à pulvérisation totale, séparé par filtration et séché îs sous pression réduite (0,3 mm de mercure). On obtient 1,15 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-(N-benzyloxycarbonyl D alanyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique sous forme de poudre blanche.

Rf = 0,68 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 20 en volumes)].

On dissout 1,09 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-(N-benzyloxycarbonyl D alanyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 26 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,09 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait 25 passer un léger courant d'hydrogène pendant 2 heures. Les catalyseur est séparé par filtration, le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. L'huile ainsi obenue est reprise par 40 cm3 d'éther, triturée jusqu'à pulvérisation totale, séparée par filtration, lavée 2 fois par 30 20 cm3 au total d'éther et séchée sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 820 mg de poudre que l'on Chromatographie sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 25 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 120 cm3 d'un mélange acétate d'éthy- 35 le-acide acétique (9-1 en volumes), 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (75-25 en volumes), 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes), 720 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-3 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions "0 18 à 33, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. L'huile obtenue est reprise par 40 cm3 d'éther, triturée jusqu'à pulvérisation totale, séparée par filtration et séchée sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 60 °C. On obtient ainsi 480 mg d'acide N2-[N-(N-lau- « royl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-D alanyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique.

Rf = 0,14 [silicagel; acide acétique]

Analyse Calc.% C 56,06 H 8,47 N 13,07 Tr. 52,5 8,0 12,5 so

Cendres sulfuriques = 5,3%

Ala 2,01 (théorie = 2)

Dap 1,00 (théorie = 1) ss

Glu 1,10 (théorie = 1)

Exemple 24

On ajoute 0,42 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 5 "C, de 670 mg de N-benzyloxycar- 60 bonyl glycine dans un mélange de 60 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,45 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 5 "C, puis on ajoute une solution refroidie à 5 °C de 1,87 g d'acide N2-[N-(N-undécanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] LL,DD diamino-2,6 pimélamique dans65 un mélange de 6,4 cm3 de soude IN et 10 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant quelques minutes vers 0 °C, puis pendant 18 heures vers 20 °C environ. On l'acidifie

651577

ensuite à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 "C. Le concentrât est extrait par 100 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase acétate d'éthyle est lavée par 50 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1N, séchée sur sulfate de sodium. Après concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient 2,3 g de solide que l'on dissout dans 20 cm3 d'acide acétique contenant 5 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 2,3 cm de diamètre contenant 50 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 140 cm3 d'acétate d'éthyle, 80 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95—5 en volumes), 80 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 160 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (85-15 en volumes), 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes), 320 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (7-3 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 29 à 46, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. L'huile obtenue est reprise par 60 cm3 d'éther, triturée jusqu'à pulvérisation totale, séparée par filtration et séchée sous pression réduite (0,3 mm de mercure). On obtient ainsi 1,32 g d'acide N2-[N-(N-undécanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6 (benzyloxycarbonylglycyl) LL,DD diamino-2,6 pimélamique.

Rf = 0,85 [silicagel; acide acétique]

Rf = 0,68 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes)].

On dissout 1,32 g d'acide N2-[N-(N-undécanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-(benzyloxycarbonylglycyl) LL,DD diamino-2,6 pimélamique dans 18 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,32 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 3 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, l'huile obtenue est triturée dans 50 cm3 d'éther jusqu'à pulvérisation totale, séparée par filtration et séchée sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20 °C. On obtient 1,16 g de poudre que l'on Chromatographie sur une colonne de 1,8 cm de diamètre contenant 25 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue par de l'acide acétique en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 5 à 19, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le solide obtenu est repris par 40 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 60 °C. On obtient ainsi 580 mg d'acide N2-[N-(N-undécanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-glycyl LL,DD diamino-2,6 pimélamique.

Rf = 0,24 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Analyse Calc.% C 54,71 H 8,20 N 13,67 Tr. 53,2 8,2 13,6

Cendres sulfuriques = 1,7%

Ala 1,01 (théorie = 1)

Dap 0,94 (théorie = 1)

Glu 1,00 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

L'acide N2-[N-(N-undécanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] LL,DD diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 2,55 g d'acide N2-[0'-benzyl N-(N-undéca-noyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl LL,DD diamino-2,6 pimélamique dans 35 cm3 d'acide acétique. On ajoute 2,55 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on

651 577

34

fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 2 heures '/2. Le catalyseur est séparé par filtration et lavé 3 fois par 30 cm3 au total d'acide acétique. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le solide amorphe est repris par 50 cm3 d'éther, filtré et séché sous pression 5 réduite (20 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 1,87 g d'acide N2-[N-(N-undécanoyl L alanyl)-y-D glutamyl]

LL,DD diamino-2,6 pimélamique.

Rf = 0,75 (silicagel; acide acétique).

L'acide N2-[0'-benzyl N-(N-undécanoyl L alanyl)-y-D 10 glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl LL,DD diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 0,65 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 5 °C, de 2,383 g de N-undécanoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 100 cm3 15 de tétrahydrofuranne et de 0,7 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 30 minutes à - 5 °C, puis on ajoute une solution refroidie àO°Cdel,617g d'acide N6-benzyloxy-carbonyl LL,DD diamino-2,6 pimélamique dans un mélange de 5 cm3 de soude IN et 50 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel 20 est agité pendant quelques minutes vers 0 °C, puis pendant 40 heures vers 20 °C environ. Le mélange réactionnel est acidifié ensuite à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Dans le concentrât, on a un pré- 25 cipité que l'on sépare par filtration, lave 3 fois par 60 cm3 au total d'acide chlorhydrique N/10 et 20 cm3 d'eau. Après séchage sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20 °C, on obtient 3,66 g de solide blanc que l'on dissout dans 20 cm3 d'acide acétique contenant 10 g de gel de silice neutre 30

(0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 3,5 cm de diamètre contenant 75 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par:

600 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohexane (1/1 35 en volumes),

600 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohexane (3/1 en volumes),

400 cm3 d'acétate d'éthyle,

600 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique 40 (95/5 en volumes),

500 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9/1 en volumes),

1200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (85/15 en volumes), en recueillant des fractions de 100 cm3. 45 Les fractions 22 à 32, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le solide amorphe obtenu est repris par 80 cm3 d'éther, trituré jusqu'à pulvérisation totale, séparé par filtration et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure). On obtient ainsi 2,58 g d'acide 50 N2-[0'-benzyl N-(N-undécanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl LL,DD diamino-2,6 pimélamique.

Rf = 0,62 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (9/1 en volumes)].

Le N-undécanoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut 55 être préparé de la façon suivante:

On ajoute 3,56 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à - 5 °C, de 5,1 g d'acide undécanoïque dans un mélange de 140 cm3 de tétrahydrofuranne et de 3,84 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 °o minutes à — 5 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 0 °C de 9,45 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 54,8 cm3 de soude IN et 30 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes vers — 5 °C, puis pendant 20 heures vers 20 °C environ. Le 65 mélange réactionnel est acidifié ensuite à pH 1 par addition de 60 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le concentrât est extrait 2 fois par 80 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases acétate d'éthyle, réunies, sont lavées par 40 cm3 d'eau et séchées sur du sulfate de sodium. Après filtration et concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient 11,89 g d'huile que l'on Chromatographie sur une colonne de 4,5 cm de diamètre contenant 250 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue par de l'acétate d'éthyle en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 3 à 5, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 5,85 g d'un solide pâteux que l'on Chromatographie sur une colonne de 3,2 cm de diamètre contenant 115 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 11 d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohe-xane (1/1 en volumes), 1,71 d'acétate d'éthyle et 600 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (99/1 en volumes) en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 11 à 30, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 2,47 g de N-undécanoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle sous forme d'un solide blanc.

Rf = 0,71 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (9/1 en volumes)].

Exemple 25

On ajoute 1,14 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 5 °C, de 1,83 g de N-benzyloxycar-bonylglycine dans un mélange de 165 cm3 de tétrahydrofuranne et de 1,22 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 5 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 5 °C de 5 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] méso diamino-2(L), 6(D) pimélamique dans un mélange de 17,5 cm3 de soude IN et 25 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes vers 0 °C, puis pendant 70 heures vers 20 °C environ. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le concentrât, acidifié à pH 1 par addition de 21 cm3 d'acide chlorhydrique IN, donne un précipité blanc que l'on sépare par filtration, lave par 200 cm3 d'eau et sèche à l'air libre. On obtient ainsi 5,97 g de poudre que l'on dissout dans 100 cm3 d'acide acétique contenant 12 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 4 cm de diamètre contenant 280 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 1360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 320 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (85-15 en volumes), 3840 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes) en recueillant des fractions de 80 cm3. Les fractions 41 à 68, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. L'huile obtenue est reprise par 150 cm3 d'éther, triturée jusqu'à pulvérisation totale, séparée par filtration et séchée sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 60 °C. On obtient ainsi 2,37 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-(benzyloxycarbonylglycyl) méso diamino-2(L), 6(D) pimélamique.

Rf = 0,47 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Rf = 0,55 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes)].

On dissout 2,35 g d'acide N2[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-(benzyloxycarbonylglycyl) méso diamino-2(L), 6(D) pimélamique dans 70 cm3 d'acide acétique. On ajoute 2,4 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 4 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, l'huile obtenue est triturée dans

35

651 577

100 cm3 d'éther jusqu'à pulvérisation totale, séparée par filtration, lavée 2 fois par 100 cm3 au total d'éther et séchée,

sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 55 °C. On obtient 1,91 g de poudre beige que l'on dissout dans 30 cm3 d'acide acétique et filtre sur une colonne de gel de silice neutre 5 (0,04-0,063 mm) de 2 cm de diamètre et 2 cm de hauteur. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. L'huile obtenue est triturée dans 100 cm3 d'éther jusqu'à pulvérisation totale, séparée par filtration et séchée sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 58 °C. On i0 obtient ainsi 1,62 g d'acide N2[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-glycyl méso diamino-2(L), 6(D) pimélamique.

Rf = 0,28 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse Cale. % C 55,40 H 8,34 N 13,36 is Tr. 52,0 7,7 12,1

Cendres sulfuriques % = 9,1

Ala 1,05 (théorie =1) 20

Dap 0,98 (théorie =1)

Glu 1,00 (théorie = 1)

Gly 0,96 (théorie = 1)

L'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-D-glutamyl] meso 25 diamino-2(L), 6(D) pimélamique peut être préparé de la manière suivante:

On ajoute 1,6 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 5 °C, de 6,07 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 280 cm3 de té- 30 trahydrofuranne et de 1,74 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 5 °C; puis on ajoute une solution refroidie à 3 °C de 4 g d'acide N6-benzyloxycarbonyl méso diamino-2(L), 6(D) pimélamique dans un mélange de 12,4 cm3 de soude IN et 124 cm3 d'eau. Le mélange réaction- 35 nel est agité pendant 10 minutes vers 0 °C, puis pendant 70 heures vers 20 °C environ. Le mélange réactionnel est acidifié ensuite à pH 1 par addition de 20 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Dans le concen- 10 trat, on a un précipité blanc que l'on sépare par filtration, lave 3 fois par 150 cm3 au total d'acide chlorhydrique 0,1N et 3 fois par 150 cm3 au total d'eau et sèche sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 9,15 g de poudre blanche que l'in dissout dans 100 cm3 d'acide acétique 45 contenant 20 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange et on charge l'ensemble sur une colonne de 5 cm de diamètre contenant 400 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm).

On élue successivement par: 50

1,61 d'acétate d'éthyle,

900 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (97,5/2,5 en volumes)

1200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95/5 en volumes) 55

900 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (92,5/7,5 en volumes)

900 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (90/10 en volumes)

300 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique 60 (85/15 en volumes)

3200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (80/20 en volumes) en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 61 à 90, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le solide blanc « obtenu est lavé 2 fois avec 100 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 60 °C. On obtient ainsi 6,3 g d'acide N2-[01 -benzyl-N-(N-lauroyl L

alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl méso diami-no-2(L), 6(D) pimélamique.

Rf = 0,77 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3/1 en volumes)]

On dissout 8,2 g d'acide N2-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl méso diami-no-2(L),6(D) pimélamique dans 225 cm3 d'acide acétique. On ajoute 8,2 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 3 heures 1/2. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, l'huile obtenue est triturée dans 100 cm3 d'éther jusqu'à pulvérisation totale, séparée par filtration et séchée sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 5,9 g de poudre. 0,9 g de cette poudre est mis en solution dans de l'acide acétique et filtré sur une colonne de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) de 2 cm de diamètre et de 2 cm de hauteur. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le résidu obtenu est repris par 50 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 55 °C. On obtient ainsi 0,75 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] méso diamino-2(L),6(D) pimélamique.

Rf = 0,38 [silicagel; n-butanol-pyridine-acide acétique-eau (50/20/6/24 en volumes)]

Analyse Cale. % C 56,72 H 8,64 N 12,25 Tr. 52,8 8,1 11,6

Cendres sulfuriques = 6,9%

Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Tech-nicon révèle la présence des acides aminés suivantes:

Ala = 1,02 (théorie = 1)

Dap=0,96 (théorie = 1)

Glu= 1,00 (théorie = 1)

L'acide N6-benzyloxycarbonyl méso diamino-2(L),6(D) pimélamique peut être préparé selon le procédé décrit dans le brevet belge 821 385.

Exemple 26

On ajoute 0,433 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 5 °C, de 698 mg de N-benzyloxycar-bonylglycine dans un mélange de 65 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,467 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 5 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 0 °C de 1,81 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysinate de méthyle dans un mélange de 3,33 cm3 de soude IN et 10 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 40 minutes vers — 5 °C puis pendant 36 heures vers 19 "C environ, puis est acidifié à pH 1 par addition de 6 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le concentrât est extrait 5 fois par 150 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases acétate d'éthyle réunies sont lavées par 30 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1N, séchées sur sulfate de sodium. Après concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient 2,53 g d'huile que l'on dissout dans 100 cm3 d'acétate d'éthyle contenant 6 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange et on charge l'ensemble sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 50 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm).

On élue successivement par 80 cm3 d'acétate d'éthyle, 280 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 4 à 8, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 "C.

On obtient 2,33 g d'huile qui est à nouveau chromatographiée. On dissout cette huile dans 60 cm3 d'acide acétique contenant 5 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange et on charge l'ensemble sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 100 g de gel de silice neutre

651577 36

(0,04-0,063 mm). On élue successivement par 680 cm3 d'acétate d'éthyle,

360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle acide acétique (97,5-2,5 en volumes)

360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique 5 (95-5 en volumes)

360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (90-10 en volumes)

240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (80-20 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les i0 fractions 32 à 41 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C.

On obtient ainsi 1,35 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(benzyloxycarbonyl glycyl) L lysinate de méthyle sous forme d'huile. 15

Rf = 0,47 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes)].

On dissout 1,3 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(benzyloxycarbonyl glycyl) L lysinate de méthyle dans 35 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,3 g de palladium 20 sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 2 heures et demie. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient un résidu huileux que l'on triture jusqu'à pulvérisation dans 50 cm3 d'éther. On sépare le pou- 5 dre par filtration, la sèche à l'air. On obtient ainsi 910 mg de produit brut que l'on Chromatographie sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 40 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 160 cm3 d'acétate d'éthyle, 80 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acé- 30 tique (50-50 en volumes) et 420 cm3 d'acide acétique en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 14 à 20, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le résidu obtenu est trituré dans 40 cm3 d'éther. Après filtration et séchage à l'air, on obtient 370 mg de 35 N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-glycyl L lysinate de méthyle sous forme de poudre crème.

Rf = 0,50 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Rf = 0,27 [silicagel; acide acétique) 40

Analyse Calc.% C 58,07 H 8,91 N 11,68 Tr. 57,0 8,6 11,1

Cendres sulfuriques: 22%

Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Tech-nicon révélé la présence des acides aminés suivants: 45

Ala 1,00 (théorie = 1)

Glu 1,01 (théorie = 1)

Gly 0,98 (théorie = 1)

Lys 0,96 (théorie = 1)

Le N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysinate 50 de méthyle peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 1,3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 5 °C, de 4,91 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 250 cm3 de tétrahydrofuranne et de 1,4 cm3 de triéthylamine. Le mélange 55 est agité pendant 20 minutes à — 5 °C, puis on ajoute une solution refroidie a 0 °C de 3,32 g de chlorhydrate de N e-benzyloxycarbonyl L lysinate de méthyle dans un mélange delO cm3 de soude IN et 10 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes vers — 5 °C, puis pendant 4 60 jours à une température voisine de 20 °C. Ensuite, le mélange réactionnel est acidifié à pH 1 par addition de 20 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. Le concentrât est extrait 5 fois par 150 cm3 au total de chloro- 65 forme. Les phases chloroformiques, réunies, sont lavées par 40 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1N et séchée sur sulfate de sodium. Après concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient une huile jaune pâle que l'on dissout dans 60 cm3 de chloroforme contenant 15 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange et on charge l'ensemble sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 150 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 2,51 d'acétate d'éthyle et 400 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95/5 en volumes) en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 6 à 27, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 "C. On obtient ainsi 3,47 g de N a-[0'-benzyl-N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyl-oxycarbonyl L lysinate de méthyle sous forme de poudre blanche.

Rf = 0,70 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (95/5 en volumes)]

Rf = 0,40 [silicagel; acétate d'éthyle]

On dissout 3,43 g de N a-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonyl L lysinate de méthyle dans 70 cm3 d'acide acétique. On ajoute 3,43 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) puis on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 2 heures. Le catalyseur est séparé par filtration, lavé 2 fois par 20 cm3 au total d'acide acétique, les filtrats réunis sont concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le résidu est trituré dans 50 cm3 d'éther. On obtient ainsi une poudre que l'on sépare par filtration et que l'on sèche à l'air. On obtient ainsi 1,89 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysinate de méthyle.

Rf = 0,50 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Rf = 0,29 [silicagel; acide acétique].

Exemple 27

On ajoute 1,07 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 5 °C, de 4,026 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 135 cm3 de tétrahydrofuranne et de 1,15 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 7 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 4 °C de chlorhydrate de N a-(benzyl-oxycarbonylglycyl) L lysinamide dans un mélange de 8,2 cm3 de soude IN et 22 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes vers — 5 "C, puis pendant 65 heures vers 20 °C environ, puis est acidifié à pH 1 par addition de 11 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. Le concentrât est dilué par addition de 50 cm3 d'eau. Le précipité formé dans le concentrât est séparé par filtration, lavé 3 fois par 75 cm3 au total d'eau et séché. On obtient ainsi 5,58 g de solide blanc que l'on dissout dans 70 cm3 d'acide acétique contenant 12 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange et on charge l'ensemble sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 100 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm).

On élue successivement par 350 cm3 d'acétate d'éthyle 250 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes)

850 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes)

450 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (75-25 en volumes)

350 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 34 à 39, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C.

La meringue obtenue est reprise par 50 cm3 d'éther, triturée jusqu'à pulvérisation totale, séparée par filtration et séchée sous pression réduite (0,3 mm de mercure). On obtient ainsi 1,43 g de N a-(benzyloxycarbonyl glycyl) N e-tO'-benzyl

37

651 577

N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysinamide.

• Rf = 0,88 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Rf = 0,37 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)].

On dissout 1,43 g de N a-(benzyloxycarbonylglycyl) N e-[O'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysinamide dans 85 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,43 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 2 heures. Le catalyseur est séparé par filtration, lavé 2 fois par 20 cm3 au total d'acide acétique, les filtrats réunis sont concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le résidu huileux ainsi obtenu est trituré dans 75 cm3 d'éther et donne un solide que l'on sépare par filtration. On obtient ainsi 990 mg de solide blanc auquel on joint 490 mg d'un produit analogue obtenu de la même façon, et que l'on Chromatographie sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 29 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue avec de l'acide acétique en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 13 à 32, réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 510 mg de N a-glycyl N e-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysinamide.

Rf = 0,42 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]

Analyse Calc.% C 57,51 H 8,97 N 14,37 Tr. 54,9 8,6 13,3

Cendres sulfuriques: 1,6%

Ala 1,04 (théorie = 1)

Glu 0,99 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

Lys 0,95 (théorie = 1)

Le chlorhydrate de N a-(benzyloxycarbonyl glycyl) L lysinamide peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 4,18 g de N a-(benzyloxycarbonyl glycyl) N e-t. butyloxycarbonyl L lysinamide dans 80 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7N dans l'acide acétique. On agite pendant 2 heures à une température voisine de 20 °C, puis on ajoute le milieu réactionnel à 400 cm3 d'éther anhydre. Un précipité huileux est séparé par décantation, lavé par 200 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure). On obtient ainsi 3,16 g de chlorhydrate de N a-(benzyloxycarbonylglycyl) L lysinamide sous forme d'une pâte.

Rf = 0,48 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Le N a-(benzyloxycarbonyl glycyl) N e-t.butyloxycar-bonyl L lysinamide peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 1,267 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 1 °C, de 2,397 g de N-benzyloxycar-bonyl glycine dans un mélange de 35 cm3 de tétrahydrofuranne et de 1,365 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 3 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 5 °C de 3,25 de N e-t.butyloxycarbonyl L lysinamide dans 50 cm3 de tétrahydrofuranne. Le mélange réactionnel est agité pendant 15 minutes vers — 5 °C, puis pendant 20 heures vers 20 °C environ. On sépare l'insoluble par filtration, puis on évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C. Le concentrât est dilué par addition de 150 cm3 d'eau, extrait 3 fois par 225 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases acétates d'éthyle, réunies, sont lavées successivement par 60 cm3 d'acide chlorhydrique glacé 0,1N, 60 cm3 d'une solution à 10% de carbonate de sodium et 2 fois par 120 cm3 au total d'une solution saturée de chlorure de sodium et séchées sur sulfate de sodium. Après concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 °C,

on obtient 4,18 g de N a-(benzyloxycarbonyl glycyl) N e-t. butyloxycarbonyl L lysinamide sous forme d'huile.

Rf = 0,77 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)].

5 Le N e-t.butyloxycarbonyl L lysinamide peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 1,3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution maintenue à - 5 "C de 3,8 g de N a-benzyloxycarbonyl N e-t.butyloxycarbonyl L lysine dans un mélange de 38 cm3 io de chloroforme et de 1,4 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à - 5 °C, puis on envoie un léger courant d'ammoniac pendant 3 heures. Ensuite, le milieu réactionnel est dilué par addition de 100 cm3 de chloroforme, lavé 2 fois par 100 cm3 au total d'une solution à 10% de caris bonate de sodium, 5 fois par 250 cm3 au total d'eau et séché sur sulfate de sodium. Après concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient 3,76 g de N a-benzyloxycarbonyl N e-t.butyloxycarbonyl L lysinamide fondant à 142-144 °C.

20 Rf = 0,52 [silicagel; acétate d'éthyle].

On dissout 3,7 g de N a-benzyloxycarbonyl N e-t.butyloxycarbonyl L lysinamide dans 130 cm3 d'acide acétique. On ajoute 3,7 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 2 heures. Le 25 catalyseur est séparé par filtration, lavé 2 fois par 20 cm3 au total d'acide acétique; les filtrats réunis sont concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le résidu huileux est trituré dans 200 cm3 d'éther. Après décantation et séchage, on obtient 3,25 g de N e-t.butyloxycarbonyl L lysin-30 amide.

Rf = 0,60 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Exemple 28

35 On ajoute 0,31 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à -11 °C, de 506 mg de N-benzyloxy-carbonyl glycine dans un mélange de 40 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,34 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à -11 °C, puis on ajoute une solution reto froidie à 5 °C de 1,69 g de chlorhydrate de l'acide N6-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans un mélange de 4,84 cm3 de soude IN et 40 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant quelques minutes vers —10 "C, puis pendant 65 heures vers « 20 °C environ. Ensuite, on l'acidifie à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique IN. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le précipité blanc apparu dans le concentrât est séparé par filtration, lavé 4 fois par 80 cm3 au total 50 d'eau et séché à l'air libre. On obtient 1,74 g de produit brut que l'on dissout dans 30 cm3 d'acide acétique contenant 5 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 30 mm de diamètre 55 contenant 60 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm).

On élue successivement par 160 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes) 560 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 16 à 25 réunies, 60 sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le solide amorphe obtenu est repris par 30 cm3 d'éther, trituré jusqu'à pulvérisation totale, séparé par filtration et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure). On obtient ainsi 320 mg d'acide N6-0'-benzyl N-(N-lauroyl L 55 alanyl)-y-D glutamyl] N2-benzyloxycarbonyl glycyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique.

On dissout 320 mg d'acide N^tO'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N2-benzyloxycarbonyl glycyl DD,LL

651 577

diamino-2,6 pimélamique dans 25 cm3 d'acide acétique. On ajoute 320 mg de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 2 heures !/4. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient 290 mg de solide que l'on Chromatographie sur une colonne de 1 cm de diamètre contenant 6 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue par de l'acide acétique en recueillant des fractions de 5 cm3. Les fractions 25 à 32 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le solide amorphe obtenu est repris par 20 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 20 mg d'acide N6-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N2-glycyl DD,LL diami-no-2,6 pimélamique.

Rf = 0,22 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)].

Ala 0,95 (théorie = 1)

Glu 1,04 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

Dap 1,00 (théorie = 1)

Le chlorhydrate de l'acide N6-[0'-benzyl-N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] LL,DD diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On ajoute 0,56 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 5 °C, de 2,12 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 86 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,6 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 30 minutes à — 5 °C, puis on ajoute une solution refroidie à 2 °C de 1,25 g d'acide N2-t.butyloxy-carbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans un mélange de 4,32 cm3 de soude IN et 43 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant quelques minutes vers — 5 °C, puis pendant 18 heures vers 20 °C environ. Ensuite, on l'acidifie par addition de 50 cm3 d'une solution saturée d'acide citrique. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le concentrât est extrait 5 fois par 200 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases acétate d'éthyle réunies, sont lavées par 25 cm3 d'eau, séchées sur sulfate de sodium. Après concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C, on obtient ime huile que l'on dissout dans un mélange de 50 cm3 d'acétate d'éthyle et 10 cm3 d'acide acétique contenant 10 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C et on charge l'ensemble sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 50 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm).

On élue successivement par 200 cm3 d'acétate d'éthyle, 280 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes) 320 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 5 à 13 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 2,23 g d'acide N6-[0]-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N2-t.butyloxycarbonyl LL,DD diamino-2,6 pimélamique sous forme d'huile.

Rf = 0,39 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes)].

On dissout 2,19 g d'acide N6-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-Y-D-glutamyl] N2-t.butyloxycarbonyl DD,LL diami-no-2,6 pimélamique dans 22 cm3 d'une solution saturée anhydre d'acide acétique chlorhydrique. On laisse en contact pendant 3 heures à 20 °C, ensuite on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 1,74 g de chlorhydrate de l'acide N6-[0'-benzyl N-(N-lauroyl L

38

alanyl)-y-D glutamyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamique sous forme d'huile partiellement cristallisée.

5 Rf = 0,26 [silicagel; acide acétique].

L'acide N2-t.butyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante:

On dissout 4 g d'acide N2-t.butyloxycarbonyl N6-benzyl-oxy-carbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans io 100 cm3 d'acide acétique. On ajoute 4 g de palladium sur noir (à 3% de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 3 heures. Le catalyseur est séparé par filtration, lavé par 10 cm3 d'acide acétique, les filtrats réunis sont concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mer-15 cure) à 50 °C. Le résidu huileux ainsi obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther jusqu'à pulvérisation totale. On obtient ainsi après filtration et séchage 3 g d'acide N^t.butyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique.

Rf = 0,34 silicagel; acide acétique].

20

Exemple 29

A une solution de 7,87 g de N a-t.butyloxycarbonyl N e-(benzyloxycarbonyl glycyl)-lysine dans 70 cm3 d'éthanol, on ajoute 15 g de copolymère styrène-divinylbenzène (98-2 chlo-25 rométhylé contenant 1,2 milUéquivalent de chlore par gramme. On agite le milieu réactionnel pendant 10 minutes à 20 °C, ensuite on ajoute 2,25 cm3 de triéthylamine puis on poursuit l'agitation pendant 65 heures à 78 °C. Le polymère est filtré, lavé successivement par 3 fois 300 cm3 au total 3o d'éthanol et 3 fois 300 cm3 au total de chlorure de méthylène, puis séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi le N a-t.butyloxycarbonyl N e-(benzyloxy-carbonyl glycyl) L lysyl-polymère.

Après hydrolyse totale l'analyse sur autoanalyseur Tech-35 nicon révèle la présence des acides aminés suivants:

Gly 0,35 mmole par gramme de polymère

Lys 0,33 mmole par gramme de polymère

L'acide D glutamique est accroché sur le dipeptide bloqué-polymère en effectuant la suite d'opérations suivantes 40 dans un réacteur muni d'un agitateur et, à sa base, d'un filtre en verre fritté:

1) On effectue 3 lavages successifs du dipeptide bloqué-polymère par 100 cm3 de chlorure de méthylène à chaque fois. Chaque addition de solvant est suivie d'une agitation de 3 mi-

« nutes, puis d'un essorage.

2) Le groupement protecteur t.butyloxycarbonyle est ensuite éliminé par addition de 100 cm3 d'un mélange acide tri-fluoroacétique-chlorure de méthylène (1-1-en volumes), agitation pendant 20 minutes puis essorage.

so 3) La résine est alors lavée successivement par:

a) 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène b) 3 fois 100 cm3 de méthanol c) 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de solvant et en esso-

55 rant à chaque fois.

4) On neutralise alors le dipeptide-polymère par addition de 100 cm3 d'un mélange chlorure de méthylène-triéthylamine (9-1 en volumes) agitation pendant 10 minutes puis essorage.

5) La résine est lavée ensuite par:

e» 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de solvant et en essorant à chaque fois.

6) On ajoute 5,2 g d'acide N-t.butyloxycarbonyl O1-benzyl 05-succinimido D glutamique en solution dans

65100 cm3 de chlorure de méthylène et on agite pendant 18 heures et essore.

7) On lave la résine successivement par:

a) 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène

39

651 577

b) 3 fois 100 cm3 d'acide acétique c) 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de solvant et en essorant à chaque fois.

8) On ajoute 5,2 g d'acide N-t.butyloxycarbonyl O1-benzyl 05-succinimido D glutamique en solution dans

100 cm3 de chlorure de méthylène et on agite pendant 18 heures et essore.

9) On lave la résine successivement par:

a) 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène b) 3 fois 100 cm3 d'acide acétique c) 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de solvant et en essorant à chaque fois.

On obtient ainsi le N a-(0'-benzyl N-t.butyloxycarbonyl D glutamyl) N e-(benzyloxycarbonyl glycyl) L lysyl-polymère.

La L alanine est accrochée sur le tripeptide bloqué-poly-mère en répétant les opérations précédentes n° 1,2,3,4, 5,6 et 9.

L'opération n° 6 est modifiée comme suit:

On ajoute successivement:

a) 4,7 g de N-t.butyloxycarbonyl L alanine en solution dans 100 cm3 de chlorure de méthylène et on agite pendant 10 minutes b) 5,16 g de dicyclohexylcarbodiimide et on agite pendant 16 heures et essore.

On obtient ainsi le N a-[0'-benzyl N-(t.butyloxycarbonyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(benzyloxycarbonyl glycyl) L lysyl-polymère.

L'acide octanoïque est accroché sur le tétrapeptide blo-qué-polymère en répétant les opérations précédentes n° 1,2,3, 4,5,6 et 9.

L'opération n° 6 est modifiée comme suit:

On ajoute successivement:

a) 1,64 g d'acide octanoïque en solution dans 100 cm3 de chlorure de méthylène et on agite pendant 10 minutes b) 2,35 g de dicyclohexylcarbodiimide et on agite pendant 16 heures et essore.

On obtient ainsi le N a-[0'-benzyl N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl N e-(benzyloxycarbonyl glycyl) L lysyl-polymère.

Ce polymère est mis en suspension dans 100 cm3 d'acide trifluoracétique contenu dans un réacteur muni d'un agitateur et, à sa base, d'un filtre en verre fritté. Dans cette suspension, on fait passer un courant d'acide bromhydrique pendant 90 minutes. Ensuite, on essore la résine et on la lave 3 fois par 300 cm3 au total d'acide acétique en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de l'acide acétique et en essorant à chaque fois. Les filtrats sont réunis et concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le résidu huileux obtenu est repris 2 fois par 50 cm3 au total de méthanol et concentré à sec chaque fois sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi environ 2 g d'huile que l'on Chromatographie sur une colonne de 1,6 cm de diamètre contenant 15 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm).

On élue successivement par:

300 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)

250 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes)

250 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-3 en volumes)

et 350 cm3 d'acide acétique en recueillant des fractions de 50 cm3.

Les fractions 8 à 23 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 0,94 g d'une poudre crème qui est chromatographiée à nouveau sur une colonne de 1,5 cm de diamètre contenant 10 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 100 cm3 d'acétate d'éthyle et 500 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 6 à 10 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 390 mg de bromhydrate de N a-fO'-méthyl N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-glycyl L lysinate de méthyle.

Rf = 0,75 [silicagel; alcool isoamylique-pyridine-eau (35-35-30 en volumes)]

Analyse Calc.% C 48,90 H 7,58 N 10,97 Tr. 45,3 6,8 10,1

Cendres sulfuriques: 5,21%

Ala 1,00 (théorie = 1)

Glu 0,90 (théorie = 1)

Gly 1,16 (théorie = 1)

Lys 1,10 (théorie = 1)

Le N a-t.butyloxycarbonyl N s-(benzyloxycarbonyl glycyl) L lysine peut être préparé selon la méthode de M. KHOSLA et coll., Indian J. Chem. 5,237 (1967).

Exemple 30

A une solution de 10 g de N a-[0'-benzyl N-(t.-butyloxy-carbonyl L alanyl)-y-D glutamyl] N s-(benzyloxycarbonyl glycyl) L lysine dans 50 cm3 d'éthanol, on ajoute 15 g de co-polymère styrène-divinylbenzène (98-2) chlorométhylé contenant 1,2 milliéquivalent de chlore par gramme. On agite le milieu réactionnel pendant 10 minutes à 20 °C, ensuite, on ajoute 1,92 cm3 de triéthylamine et on agite le milieu réactionnel pendant 65 heures à 78 °C. Le polymère est filtré, lavé successivement par 3 fois 300 cm3 au total d'éthanol et 3 fois 300 cm3 au total de chlorure de méthylène, puis séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20 °C. On obtient ainsi 18,8 g de Na-[01-benzyl-N-(t.-butyloxycarbonyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(benzyloxycarbonylglycyl) L lysyl-polymère.

Ala=0,19 mmole par gramme de polymère Glu=0,18 mmole par gramme de polymère Gly=0,18 mmole par gramme de polymère Lys=0,17 mmole par gramme de polymère L'acide hexanoïque est accroché sur le tétrapeptide bloqué-polymère en effectuant la suite d'opérations suivante dans un réacteur muni d'un agitateur et à sa base d'un filtre en verre fritté:

1) On effectue 3 lavages successifs du tétrapeptide bloqué polymère par 100 cm3 de chlorure de méthylène à chaque fois Chaque addition de solvant est suivie d'une agitation de 3 minutes, puis d'un essorage.

2) Le groupement protecteur t.-butyloxycarbonyle de l'alanine est ensuite éliminé par addition de 100 cm3 d'un mélange acide trifluoroacétique-chlorure de méthylène (1/1 en volumes), agitation pendant 20 minutes puis essorage.

3) la résine est alors lavée successivement par:

a) 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène b) 3 fois 100 cm3 de méthanol c) 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de solvant et en essorant à chaque fois.

4) On neutralise alors le tétrapeptide-polymère par addition de 100 cm3 d'un mélange chlorure de méthylène -N-

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méthylmorpholine (9/1 en volumes), agitation pendant 10 minutes puis essorage.

5) La résine est lavée ensuite par:

3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de solvant et en essorant à chaque fois.

6) On ajoute alors successivement:

a) 1,16 g d'acide hexanoïque en solution dans 100 cm3 de chlorure de méthylène et on agite pendant 10 minutes b) 2,06 g de dicyclohexylcarbodiimide et on agite pendant 20 heures et essore.

7) On lave la résine successivement par:

8) On ajoute alors successivement:

a) 1,16 g d'acide hexanoïque et on agite pendant 10 minutes b) 2,06 g de dicyclohexylcarbodiimide et on agite pendant 20 heures et essore.

9) O lave la résine successivement par:

On obtient ainsi le N a-[0'-benzyl N-(N-hexanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(benzyloxycarbonyl glycyl) L lysyl-polymère. Ce polymère est mis en suspension dans 100 cm3 d'acide trifluoroacétique contenu dans un réacteur muni d'un agitateur et, à sa base, d'un filtre en verre fritté. Dans cette suspension, on fait passer un courant d'acide bromhydrique pendant 90 minutes. Ensuite, on essore la résine et on la lave 3 fois par 300 cm3 au total d'acide acétique en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de l'acide acétique et en essorant à chaque fois. Les filtrats sont réunis et concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 55 °C. Le résidu huileux ainsi obtenu est trituré dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle jusqu'à pulvérisation totale séparé par filtration et lavé 3 fois par 90 cm3 au total d'éther. On obtient ainsi 1,15 g de poudre beige que l'on Chromatographie sur une colonne de 1,8 cm de diamètre contenant 15 g de gel de silice neutre (0,04- 0,063 mm). On élue par un mélange d'acétate d'éthyle-acide acétique (1/1 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 13 à 24 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 "C; le résidu obtenu est dissous dans 5 cm3 d'acide acétique et précipité par addition de 300 cm3 d'éther. Après séparation par filtration et séchage, on obtient 470 mg de bromhydrate de N a-[N-(N-hexanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-glycyl L lysine.

Rf = 0,26 [silicagel; n-butanol-pyridine-acide acétique-eau (50/20/6/24 en volumes)].

Analyse Cale. % C 45,36 H 6,92 N 12,02 Tr. 42,3 7,0 11,2

Ala 1,05 (théorie = 1)

Glu 0,95 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

Lys 0,97 (théorie = 1)

LaN a-[0'-benzyl N-(t.-butyloxycarbonyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(benzyloxycarbonyl glycyl) L lysine peut être préparée de la façon suivante:

On ajoute 4,57 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à — 8 °C, de 14,3 g de N-t.-butyloxycar-

bonyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 420 cm3 de tétrahydrofuranne et de 4,92 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à — 8 °C, puis on ajoute une solution refroidie à5°Cdell,8gdeN e-benzyloxycarbonylglycyl) L lysine dans un mélange de 35 cm3 de soude IN et 35 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes vers 0 °C, puis pendant 16 heures vers 20 °C environ. Ensuite, on évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 5 °C. On acidifie le concentrât refroidi à 0 °C à pH 2 par addition de 70 cm3 d'acide chlorhydrique IN, extrait 3 fois par 600 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases acétate d'éthyle réunies sont lavées par 100 cm3 d'eau et 100 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchées sur sulfate de sodium et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. On obtient ainsi 24,3 g de meringue que l'on Chromatographie sur une colonne de 4,8 cm de diamètre, contenant 450 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 520 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohexane (1/1 en volumes),

360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohexane (3/1 en volumes),

480 cm3 d'acétate d'éthyle,

520 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95/5 en volumes)

1040 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (90/10 en volumes)

520 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (80/20 en volumes)

1080 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (70/30 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 57 à 101 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 °C. Le produit ainsi obtenu est recristallisé dans l'acétate d'éthyle.

On obtient ainsi 13,9 g de N a-[0'-benzyl N-(t.-butyloxy-carbonyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(benzyloxycarbonyl glycyl) L lysine fondant vers 90 °C (point de fusion pâteuse).

Rf = 0,55 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3/1 en volumes)].

Ala 1,00 (théorie =1)

Glu 1,03 (théorie = 1)

Gly 1,00 (théorie = 1)

Lys 0,94 (théorie = 1)

La présente invention concerne également les compositions pharmaceutiques qui contiennent au moins un composé selon l'invention en association avec un ou plusieurs diluants ou excipients compatibles et pharmaceutiquement acceptables. Ces compositions peuvent être utilisées soit comme adjuvants de vaccins soit comme stimulants non spécifiques de l'immunité anti-infectieuse et anti-tumorale.

Utilisés comme adjuvants de vaccins, les produits selon l'invention sont administrés en même temps et par la même voie que l'antigène (viral, bactérien, parasitaire ou d'autre nature) contre lequel on souhaite augmenter chez le sujet immunisé (homme ou animal domestique) les réactions d'immunité cellulaire (hypersensibilité du type retardé) ou la production d'anticorps circulants ou locaux.

Les produits sont administrés à des doses relativement faibles (de l'ordre du mg), mélangés avec l'antigène et par la même voie (intramusculaire, sous-cutanée, intraveineuse, intranasale, buccale). Si nécessaire, le produit et l'antigène peuvent être émulsifiés dans un excipient huileux approprié ou incorporés dans des liposomes.

En tant qu'immunostimulants non spécifiques, ils sont administrés à des doses comprises entre 0,1 et 50 mg/kg par voie parentérale (intraveineuse, sous-cutanée, intramuscu-

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laire), intranasale, buccale, rectale, ou éventuellement intratu- vent être dissoutes dans de l'eau stérile ou dispersées dans tout morale. autre milieu stérile injectable, éventuellement au moment de

Comme compositions solides pour administration orale l'emploi.

peuvent être utilisés des comprimés, des pillules, des poudres Les compositions pour administration intra-nasale peu-

ou des granulés. Dans ces compositions le produit actif est 5 vent être des solutions stériles aqueuses, des suspensions ou mélangé à un ou plusieurs diluants tels que saccharose, lac- des émulsions qui peuvent être éventuellement associées à un tose ou admidon. Ces compositions peuvent également com- agent propulseur compatible.

prendre des substances autres que les diluants, par exemple un Les compositions pour administration rectale sont des lubrifiant, tel que le stéarate de magnésium. suppositoires qui peuvent contenir, outre le produit actif, des

Comme compositions liquides pour administration orale, 10 excipients, tels que le beurre de cacao ou la suppo-cire.

on peut utiliser des émulsions pharmaceutiquement acceptables, des solutions, des suspensions, des sirops ou des élixirs Les exemples suivants, donné à titre non limitatif, illus-contenant des diluants inertes, tels que l'eau ou l'huile de pa- trent des compositions selon l'invention:

raffine. Ces compositions peuvent comprendre des substances autres que les diluants, par exemple des produits mouillants, 15 Exemple 1

édulcorants ou aromatisants. On prépare selon la technique habituelle, une solution ad-

Les compositions pour administration parentérale peu- ministrable par voie intraveineuse ayant la composition vent être des solutions stériles aqueuses, des suspensions ou suivante:

des émulsions. Comme véhicule dans ces derniers cas, on peut - acide N2-(N-lauroyl L alanyl-y-D glutamyl)

employer le polyéthylèneglycol, le propylèneglycol, les huiles 20 DD,LL N6-glycyl diamino-2,6 pimélamique 0,5 g végétales, en particulier l'huile d'olive, et les esters organiques - soluté injectable 5 cm3 injectables, par exemple l'oléate d'éthyle. Ces compositions peuvent contenir également des adjuvants, en particulier des Exemple 2

agents mouillants, émulsifiants ou dispersants. On prépare selon la technique habituelle une solution ad-

La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exem- 25 ministrable par voie intraveineuse ayant la composition pie à l'aide d'un filtre bactériologique, en incorporant à la suivante:

composition des agents stérilisants ou par chauffage. Elles - N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl]

peuvent être également préparées sous forme de compositions N e-glycyl L lysinate de méthyle 0,5 g solides, rendues stériles par exemple par irradiation, qui peu- - Soluté injectable 5 cm3

C

Claims

651 577 REVENDICATIONS

1 (iv)

rio-nh-ch-r4 v }

dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, l'un des symboles R4 ou R9 représente un radical carboxy et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et R]0 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de la fonction amine, étant entendu que l'un au moins des symboles R7 ou R10 représente un reste d'acide gras, puis remplace le radical R7 ou R10, lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine par un atome d'hydrogène, et isole le produit obtenu éventuellement sous forme d'un sel.

1. Tètra- ou pentapeptide caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale:

R-NH-CH-CO-NH-CH-CO-R!

I I

ch3 ch2ch2-co-nh-ch-r2

!

(CH2)3

r3-NH-CH-r4 (i)

dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un reste d'acide gras, R] représente un radical hydroxy, amino ou al-coyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, l'un des symboles R2 ou R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle qui contient 1 à 4 atomes de carbone est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, ou un radical N-carbonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyl-oxycarbonyl dont la partie alcoyle qui contient 1 à 4 atomes de carbone est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, R3 représente un atome d'hydrogène ou un reste d'acide gras ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est éventuellement substituée par un reste d'acide gras, étant entendu que les symboles R2 et R4 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène, et étant entendu que l'un des symboles R2, R3 et R4 représente ou contient un reste glycyle ou D alanyle et que l'un au moins des symboles R et R3 représente ou contient un reste d'acide gras, et étant entendu que l'alanine liée à l'acide gluta-mique est sous forme L, l'acide glutamique ou ses dérivés est sous forme D, la lysine ou ses dérivés, lorsque l'un des symboles R2 ou R4 représente un atome d'hydrogène est sous forme L et l'acide diamino-2,6 pimélique ou ses dérivés, lorsque R2 et R4 représentent un radical carboxy ou un dérivé de la fonction acide est sous forme D,D; L,L; DD,LL c'est à dire racé-mique ou D,L c'est à dire méso, ainsi que ses sels.

2

2. Tètra- ou pentapeptide selon la revendication 1, caractérisé en ce que le reste d'acide gras est un radical alcanoyle contenant 1 à 45 atomes de carbone, éventuellement substitué par un radical hydroxy, phényle ou cyclohexyle, un radical al-cénoyle contenant 3 à 30 atomes de carbone et pouvant contenir plus d'une double liaison, ou un reste d'acide mycolique.

3

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par un radical phényle ou nitrophényle et R6 représente un atome d'hydrogène ou le radical méthyle, sur un tri- ou tétra-peptide de formule générale r7 nh-ch-conh- ch-co-r8

I I

ch3 ch2ch2-co-nh-çh-r9

(CH2)3

3. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon les revendications 1 ou 2 caractérisé en ce que l'on fait agir un aminoacide de formule générale r5-NH-CH-COR' (III)

Re dans laquelle R5 représente un atome d'hydrogène ou un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, R6 représente un atome d'hydrogène ou le radical méthyle, étant entendu que dans ce cas l'alanine est sous forme D et R' représente un radical hydroxy ou un radical al-coyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle sur un tri-ou tétrapeptide de formule générale

Rt-NH-CH-CO-NH-CH-CO-R8

I I

ch3 ch2ch2-co-nh-ch-r9

!

(CH2)3

I

R,o-NH-CH-R4 (IV)

dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, R8 représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, l'un des symboles R4 ou R9 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-carbonyle glycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, étant entendu que R4 et R9 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène, et R10 représente un atome d'hydrogène ou un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est éventuellement substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de la fonction amine, étant entendu que l'un au moins des radicaux R7 ou R10 représente ou contient un reste d'acide gras et que, R4 ou R9 étant définis comme précédemment, R10 représente un atome d'hydrogène et que, l'un des symboles R4 ou R9 représentant un radical carboxy, l'autre représentant un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, R]0 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine puis remplace des radicaux R5, R7 et/ou R10 lorsqu'ils représentent ou contiennent un groupement protecteur de la fonction amine par un atome d'hydrogène et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

4

4. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon les revendications 1 ou 2 dans la formule duquel R] représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'un des symboles R2 ou R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle qui contient 1 à 4 atomes de carbone est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un radical N-carbonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou ni-trophyle caractérisé en ce que l'on fait agir un aminoacide de formule générale

NH2-CH-COR'

I

r6

dans laquelle R' représente un radical hydroxy ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué

5

5. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon les revendications 1 ou 2 dans la formule duquel R! représente un radical hydroxy et l'un des symboles R2 ou R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle qui contient 1 à 4 atomes de carbone est éventuellement subsi4substi-tuée par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un radical n-carbonyl glycyle ou n-carbonyle D alanyle caractérisé en ce que l'on fait réagir un aminoacide de formule générale nh2-c h-cor'

I

r6

dans laquelle R' représente un radical hydroxy et R6 représente un atome d'hydrogène ou le radical méthyle, sur un tri-ou tétrapeptide de formule générale rr-nh-ch-conh-c h-cor»

I I

ch3 ch2ch2-co-nh-ch-r9

J

(ch2)3

r10-nh-ch-r4 (iv)

dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, l'un des symboles R4 ou R9 représente un radical carboxy et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, et R]0 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, étant entendu que l'un au moins des symboles R7 ou RI0 représente un reste d'acide gras, puis remplace le radical R7 ou R]0, lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine par un atome d'hydrogène et le radical Rg par un radical hydroxy et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

5

6. Procédé selon la revendication 3 pour la préparation d'un composé selon la revendication 1 ou 2 dans la formule duquel R3 représente un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est éventuellement substituée par un reste d'acide gras, caractérisé en ce que l'on fait réagir un aminoacide de formule générale

Rs-NH-C H-COOH I

Re dans laquelle R5 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine et R6 représente un atome d'hydrogène ou le radical méthyle, sur un tri- ou tétrapeptide de formule générale:

Rt-NH-C h-co-nh-c h-co-r8

I I

ch3 ch2ch2-co-nh-ch-r9

(CH2)3

NH2-CH-R4 (IV)

dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, R8 représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, l'un des symboles R4 ou R9 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, N-carbonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle dont la fonction acide est éventuellement protégée, et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, étant entendu que R4 et R9 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène, et étant entendu que l'un au moins des symboles R5 et R7 représente un reste d'acide gras, puis remplace le radical R5 ou R7, lorsqu'il représente un groupement protecteur de la fonction amine, par un atome d'hydrogène et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

7. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon la revendication 1 ou 2 dans la formule duquel R] représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, caractérisé en ce que l'on fait réagir un di-peptide de formule générale

Rt-NH-C H-CO-NH-C H-CO-R8 (V)

CH3 CH2CH2-COOH

dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine et R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, sur un di- ou tripeptide de formule générale:

8. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon la revendication 1 ou 2 dans la formule duquel R! représente un radical hydroxy caractérisé en ce que l'on fait réagir un dipeptide de formule générale (V) dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine et R8 représente un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, sur un di- ou tripeptide de formule générale (VI) dans laquelle l'un des symboles R4 ou Rg représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-car-bonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, étant entendu que R4 et R9 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène et R]0 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, l'un au moins des symboles R4 ou R9 et R10 représentant ou contenant un radical glycyle ou D alanyle et l'un au moins des symboles R7 ou R10 représentant ou contenant un reste d'acide gras puis remplace le radical R7 ou Rio lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine par un atome d'hydrogène et le radical R8 par un radical hydroxy et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

9. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l'on fait réagir un dérivé de la L alanine de formule générale:

Rt-NH-CH-COOH (VII)

ch3

dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, sur un tri- ou tétra-peptide de formule générale:

H2N-C H-CO-Rg ch2ch2-co-nh-c:h-r9

(CH2)3

r10-NH-CH-r4 (VIII)

dans laquelle R8 représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, l'un des symboles R4 ou R9 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-carbonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, étant entendu que R4 et R9 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène, et R10 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, l'un au moins des symboles R4 ou R9 et RI0 représentant ou contenant un reste glycyle ou D alanyle et l'un au moins des symboles R7 et RI0 représentant ou contenant un reste d'acide gras, puis remplace le radical R7 ou RI0, lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine par un atome d'hydrogène et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

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sente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radicai phényle ou nitrophényle, étant entendu que R4 et R9 ne peuvent pas représenter simultanément un atome 5

d'hydrogène, R8 représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et Ri0 représente un atome d'hydrogène, un reste d'acide gras, un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D 10 alanyle dont la fonction amine est éventuellement substituée par un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, Rn représente un atome d'hydrogène, un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, étant entendu que l'un au moins des symboles R4 ou 15 R9 et R10 représente ou contient un reste glycyle ou D alanyle et que l'un au moins des symboles RI0 et Rn représente un atome d'hydrogène ou, pour R10, un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est libre et que lorsque l'un des radicaux R10 ou R] 1 représente ou contient un reste d'acide 20 gras celui-ci et le reste R"-CO- sont identique ou différents,

puis, remplace le radical R10 ou Rn, lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine, par un atome d'hydrogène et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel. 25

10. Procédé de préparation d'un produit selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l'on fait réagir un acide de formule générale:

r"_CO~OH (IX)

dans laquelle R"-CO- représente un reste d'acide gras, ou un dérivé activé de cet acide, sur un tètra- ou pentapeptide de formule générale:

R[ ,-NH-C H-CO-NH-C H-CO-R8 I I

ch3 ch2ch2-co-nh-ch-r9

(CH2)3 R,0-NH-CH-R4 (X)

dans laquelle l'un des symboles R4 ou R9 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-carbonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre repré-

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H2N-C H-R9 (VI)

(CH2)3

I

R10-NH-CH-R4

dans laquelle l'un des symboles R4 ou R9 représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-carbonyl glycyle ou N-carbonyl D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radical carboxy, carbamoyle ou alcoyloxycarbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atomes de carbone et est éventuellement substituée par un radical phényle ou nitrophényle, étant entendu que R4 et R9 ne peuvent pas représenter simultanément un atome d'hydrogène, et RI0 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, l'un au moins des symboles R4 ou R9 et R10 représentant ou contenant un radical glycyle ou D alanyle et l'un au moins des symboles R7 et R10 représentant ou contenant un reste d'acide gras, puis remplace le radical R7 ou Ri0 lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine, par un atome d'hydrogène et isole le produit obtenu éventuellement sous forme de sel.

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11. Médicament caractérisé en ce qu'il est constitué par le composé selon la revendication 1 à l'état pur ou en présence d'un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles et phar-maceutiquement acceptables.