CH645537A5 - Antithrombin product and process for its production - Google Patents

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CH645537A5
CH645537A5 CH116681A CH116681A CH645537A5 CH 645537 A5 CH645537 A5 CH 645537A5 CH 116681 A CH116681 A CH 116681A CH 116681 A CH116681 A CH 116681A CH 645537 A5 CH645537 A5 CH 645537A5
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CH
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antithrombin
iii
dry
preparation
stabilizer
Prior art date
Application number
CH116681A
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English (en)
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Yahiro Uemura
Midori Nagatomo
Satoshi Funakoshi
Tadakazu Suyama
Original Assignee
Green Cross Corp
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Description

Diese Erfindung liefert ferner ein trockenes Antithrombinpräparat, welches Antithrombin-III als Hauptkomponente, sowie eine wirksame Menge von mindestens einer Stabilisatorsorte ausgewählt aus der folgenden Gruppe bestehend aus Proteinen, Zucker, Aminosäuren, anorganischen Salzen und Salzen von organischen Säuren enthält.
Weiter, entsprechend dieser Erfindung, wird zur Herstellung eines trockenen Antithrombinpräparates ein Prozess geliefert, der durch Gefriertrocknung einer wässrigen Lösung von menschlichem Antithrombin-III in Gegenwart von mindestens einer Stabilisatorsorte ausgewählt aus der folgenden Gruppe bestehend aus Proteinen, Zucker, Aminosäuren, anorganischen und organischen Salzen gekennzeichnet ist.
Das in dieser Erfindung verwendete Antithrombin-III kann ein beliebiges Antithrombin-III sein, das durch irgend ein beschriebenes Verfahren auf einen Reinheitsgrad von 30% und höher gereinigt worden ist, und das Antithrombin-III selber ist nicht genau begrenzt.
Der bei der Gefriertrocknung von Antithrombin-III verwendete Stabilisator sollte physiologisch annehmbar sein. Beispiele des genannten Stabilisators schliessen anorganische Salze wie Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Natriumphosphat, Kaliumphosphat, Natriumbicarbonat und ähnliche, organische Salze wie Natriumeitrat, Kaliumeitrat, Natrium-acetat, Kaliumoxalat und ähnliche, Proteine wie Albumin, Globulin, Fibrinogen, Urokinase, Plasminogen, Gelatine und ähnliche, Zucker wie Mannitol, Glukose, Saccharose, Heparin und ähnliche, sowie Aminosäuren wie Glycin, Lysin und ähnliche ein. Diese Stabilisatoren haben auch in der Hitzebehandlung zur Inaktivierung des Hepatitis Virus, welcher im Antithrombin-III enthalten sein kann, \yirkung.
Eine wirksame Menge eines jeden Stabilisators kann ausreichend erhalten werden durch Zufügen von 0.1-5.0 Gewichtsteilen Stabilisator zu einer wässrigen Lösung, welche 1 Gewichtsteil Antithrombin-III enthält. Unter den oben erwähnten Stabilisatoren können Proteine, Zucker und Aminosäuren auch als Präparatenträger dienen, sodass deren kombinierte Verwendung mit anderen Stabilisatoren vorteilhaft ist. Wenn zwei oder mehr Stabilisatorsorten als Mischung verwendet werden, so sollte die gesamte zugefügte Menge im oben erwähnten Bereich sein.
Bei der Verwendung dieser Stabilisatoren wird eine spezifische Menge davon in einer wässrigen Lösung von Antithrombin-III in einer angemessenen Konzentration und einem angemessenen pH gelost. Die Konzentration der resultierenden Lösung sollte im Bereich der 0.1-3fachen isotonischen Konzentration, vorzugsweise gleich der isotonischen Konzentration sein. Der pH der wässrigen Lösung sollte auf 6.2-9.0, vorzugsweise auf 7-8 eingestellt sein.
Die wässrige Antithrombin-III und Stabilisator enthaltende Lösung wird einer Hitzebehandlung (60 CC, 10 Stunden) zur Inaktivierung von Hepatitis Virus oder einer Sterilfiltration oder beidem, wenn nötig, unterworfen, worauf sie in Portionen entsprechend der Verpackungseinheit aufgeteilt wird, wobei eine Verpackungseinheit 1000-100 000 Einheiten Antithrombin-III enthält. Danach werden die geteilten Lösungen rasch zu einem pulverförmigen Präparat gefriergetrocknet.
Die so erhaltenen trockenen Antithrombin-III Präparate enthalten pro 1 Gewichtsteil Antithrombin-III 0.1-5.0 Gewichtsteile Stabilisator.
Um das Präparat dieser Erfindung bei Patienten mit DIC oder Fibrinopenie anwendenzukönnen, wird es mit destilliertem Wasser zu einer 1-10% G/V Antithrombin-III enthaltenden Lösung für die Injektion gelöst, oder besser zu einer Lösung mit physiologischer isotonischer Salzkonzentration, welche dann intravenös verabreicht werden kann. Obwohl die Dosis entsprechend dem Bedarf gewählt werden kann, wird das Präparat entsprechend der Verpackungseinheit verwendet. Das Präparat dieser Erfindung verliert durch die Gefriertrocknung keinesfalls seine Aktivität und besitzt eine so grosse Zeitstabilität, dass es selbst nach 24monatiger Lagerung bei 37 °C völlig stabil bleibt. Daher ist es sehr wertvoll auf medizinischem Gebiet als Antithrombinpräparat, welches als Hauptkomponente Antithrombin-III enthält.
Die in der Patentschrift und in den Ansprüchen erwähnte Titer von Antithrombin-III wurden dadurch bestimmt, dass eine Probe mit Thrombin während 5 Minuten bei 23 °C zur Reaktion gebracht wurde, die Verlängerung der Koagulationszeit, welche durch Hinzufügen von Fibrinogen zur Reaktionsmischung bewirkt wurde, gemessen wurde und daraus der Titer bezüglich einer zuvor hergestellten Kalibra-tionskurve berechnet wurde. Die Antithrombinaktivitätsein-heit wird der Einfachheit halber so gewählt, dass die Anti-thrombinaktivität einer nach 3minütiger Hitzebehandlung von normalem menschlichem Serum bei 56 °C und anschliessender Fibrinentfernung aus dem Reaktionsgemisch erhaltenen überstehenden Lösung gleich 100 Einheiten/ml gesetzt wird.
G/V % bedeutet in der Patentschrift und in den Ansprüchen Gewichtsprozent von Gelöstem pro Volumenprozent der wässrigen Lösung.
Diese Erfindung wird durch die folgenden Beispiele und experimentellen Beispiele noch ausführlicher erläutert.
Bester Weg zur Ausführung der Erfindung Beispiel 1
10 kg der nach Chon's Fraktioniermethode mittels kaltem Alkohol erhaltenen Fraktion IV-1 Paste wird in 100 Litern physiologischer Kochsalzlösung suspendiert. 5 G/V % Bariumsulfat wurde zur Suspension gefügt und die Mischung für 30 min bei Raumtemperatur gerührt, wobei die vorhandene geringe Menge Prothrombin auf dem Bariumsulfat adsorbiert und entfernt wurde. Zur überstehenden Lösung wurde 13 G/V % Polyäthylenglycol 4000 hinzugefügt und die resultierende Fällung durch Zentrifugieren entfernt; weitere 30 G/V % Polyäthylenglycol 4000 wurden dort hinzugefügt und die resultierende Fällung wurde durch Zentrifugieren wiedergewonnen. Die Fällung wurde in ungefähr 20 Litern kalter physiologischer Kochsalzlösung gelöst und auf eine zuvor hergestellte Kolonne von Heparin-Sepha-lose geleert, um darauf das Antithrombin III zu adsorbieren. Die Kolonne wurde zur Entfernung von verunreinigenden Proteinen mit 0.4 M Natriumchloridlösung gewaschen und
5
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4
darauf wurde 2.0 M Natriumchloridlösung auf die Säule geleert und das Eluat als Antithrombin III Fraktion gesammelt. Die Ausbeute betrug 510 x 104 Einheiten und die wiedergefundene Menge bezüglich Ausgangsmaterial 50%.
Die so erhaltene wässrige Lösung von gereinigtem Antithrombin III wurde über Nacht gegen 0.5 G/V % Natriumeitrat und 0.4 G/V % Natriumchlorid dialysiert, was eine 1 G/V % wässrige Antithrombin III-Lösung ergab. 1 G/V % menschliches Albumin wurde hinzugefügt, die Mischung mittels eines sterilen Milliporfilters einer Sterilfiltration unterworfen und das Filtrat in Portionen zu 50 000 Einheiten aufgeteilt, welche gefriergetrocknet trockene Präparate ergab.
Der Titer nach der Gefriertrocknung war 50 000 Einheiten, was auf keinen Titerverlust während der Gefriertrocknung hinweist. Selbst nach 24monatigem Stehenlassen bei 37 C zeigte das Präparat weder einen Titerabfall noch eine Verschlechterung der Löslichkeit, was seine extreme Stabilität beweist. Wenn dieses gefriergetrocknete Präparat zur Injektion in destilliertem Wasser gelöst wurde und fünf Mäusen die 40 000 Einheiten/kg entsprechende Menge der Lösung durch die Schwanzvene gespritzt wurde, konnte man während der folgenden 7 Tage keine Abnormalitäten beobachten. Wenn dieselbe Lösung mit einer Dosis von 5000 Einheiten/kg an Kaninchen verabreicht wurde, konnte in den darauffolgenden 24 Stunden keine abnorme Veränderung der Körpertemperatur festgestellt werden.
Beispiel 2
1 Liter normales menschliches Plasma wurde 3 Minuten lang auf 56 C erhitzt und das abgelagerte Fibrin durch Zen-trifugation entfernt. Die überstehende Lösung wurde mit 5 G/V % Bariumsulfat gemischt und für 1 Stunde gerührt, wonach das Bariumsulfat durch Zentrifugation entfernt wurde. Die überstehende Lösung wurde entsprechend Monkhouse et al. einer Adsorptionsbehandlung an Aluminiumhydroxid unterworfen und eluiert, was ein halbgereinigtes Antithrombin-III ergab. Das Eluat wurde auf eine DEAE-Zellulose-Kolonne geleert, welche zuvor mit 0.02 M Acetatpufferlö-sung äquilibriert wurde, um das Antithrombin-III darauf zu adsorbieren. Die Kolonne wurde mit der gleichen Pufferlösung wie oben gewaschen und dann mit 1 M Natriumchlorid nach der Konzentrationsgradientenmethode eluiert, wodurch eine Fraktion mit hoher Antithrombin-III Aktivität gewonnen werden konnte. Deren Ausbeute betrug 2.3 x 104 Einheiten. Zur wässrigen Antithrombin-III Lösung wurde Natriumeitrat hinzugefügt, bis die Natriumcitratkonzentra-tion 0.6 M und der pH-Wert 7.8 betrug, wonach während 10 Stunden eine Hitzebehandlung bei 60 °C zur Inaktivierung des Hepatitis Virus erfolgte; danach wurde über Nacht gegen eine 0.9%ige Natriumchloridlösung dialysiert, und die darauffolgende Zentrifugation lieferte eine transparente Lösung.
Diese 1 G/V % wässrige Antithrombin-III Lösung wurde mit 2 G/V % Mannitol und 0.2 G/V % Natriumeitrat gemischt, die Mischung mit wenig kaltem destilliertem Wasser verdünnt, sodass die Natriumchloridkonzentration auf 0.5 G/V % eingestellt wurde, und der pH mit 1 N Natronlauge auf 7.6 eingestellt. Die Mischung wurde mittels eines sterilen Milliporfilters einer Sterilfiltration unterworfen, das Filtrat in Portionen zu 5000 Einheiten aufgeteilt und zu trockenen Präparaten gefriergetrocknet.
Das Präparat zeigte nach der Gefriertrocknung einen Titer von 4950 Einheiten, was keinem grossen Titerverlust entspricht. Es zeigte selbst nach 24monatigem und längerem Stehenlassen bei Raumtemperatur weder eine Veränderung s der Löslichkeit noch einen Titerverlust.
Wie in Beispiel 1 wurden Mäusen 10 000 Einheiten/kg verabreicht, und die Tiere während 7 Tagen beobachtet. Die Tiere zeigten keine Abnormalitäten mit normaler Gewichtszunahme, was die Sicherheit des Präparates belegt. Die glei-lo che Lösung wie oben wurde Kaninchen in einer Dosis von 2000 Einheiten/kg verabreicht. Während der darauffolgenden 24 Stunden wurden keine Abnormalitäten beobachtet.
Beispiel 3
15 1 G/V % Glyqin, 0.2 G/V % Natriumchlorid und 1 G/V % menschliches Albumin wurden zu der in Beispiel 1 erhaltenen 1 G/V % wässrigen gereinigten Antithrombin-III Lösung gegeben. Nachdem der pH der Mischung auf 7.2 eingestellt wurde, erfolgte eine Sterilfiltration mittels eines sterilen 20 Milliporfilters und die Aufteilung in Portionen zu 50 000 Einheiten mit darauffolgender Gefriertrocknung. Nach dem Trocknen konnte kein Titerverlust festgestellt werden und die Löslichkeit blieb gut.
25 Beispiel 4
0.5 G/V % (5000 Einheiten/ml) Urokinase (hergestellt durch die Green Cross Corporation), 0.3 G/V % Natriumchlorid und 1 G/V % Mannitol wurden zu der in Beispiel 1 erhaltenen 1 G/V % wässrigen gereinigten Anti-30 thrombin-III Lösung gegeben. Nachdem der pH der Mischung auf 7.2 eingestellt wurde, erfolgte eine Sterilfiltration mittels eines sterilen Milliporfilters und die Aufteilung in Portionen zu 50 000 Einheiten mit darauffolgender Gefriertrocknung. Nach dem Trocknen konnte kein Titerverlust 35 festgestellt werden und die Löslichkeit blieb gut. Die Antithrombin-III Aktivität war auch noch nach 24monatigem Stehen bei 37 °C stabil.
Beispiel 5
Ein trockenes Präparat wurde durch die Wiederholung 40 des Verfahrens von Beispiel 4 erhalten, mit der Ausnahme, dass die Urokinase durch 0.1 G/V % Heparin ersetzt wurde. Nach dem Trocknen konnte kein Titerverlust festgestellt werden und die Löslichkeit blieb gut. Die Antithrombin-III Aktivität war auch noch nach 24monatigem Stehen bei 37 °C 45 stabil.
Experimentelles Beispiel Unter Verwendung von Antithrombin-III, welches entsprechend Beispiel 1 gereinigt und gewonnen wurde, wurden so die durch das Hinzufügen von verschiedenen Stabilisatoren erwirkten Stabilitäten in Zeitabhängigkeit experimentell verglichen. So wurde in diesem Beispiel eine grössere Antithrombin-III enthaltende Menge Flüssigkeit mit verschiedenen Stabilisatoren gemischt und gefriergetrocknet und dann 55 die Restaktivitäten direkt nach dem Trocknen und im Verlauf von einem Jahr untersucht, indem man die Aktivität vor dem Trocknen gleich 100 setzte. Die Proben wurden so hergestellt, dass der pH von 10 ml einer wässrigen 50 000 Einheiten Antithrombin-III (0.5 G/V %) enthaltende Lösung 60 auf 7.5-7.7 eingestellt und verschiedene Stabilisatoren im in folgender Tabelle dargestellten Verhältnis dazugefügt wurden. Die Resultate dieses Experimentes werden in der folgenden Tabelle zusammengefasst.
5 645 537
Stabilisator und sein Restaktivitäten Verhältnis
Nach Nach 3 Nach 6 Nach 12 Trocknung Monaten Monaten Monaten
Albumin (1%) 100 100 100 100
Albumin (1%) und
Natriumchlorid
(0.5%)
108
103
100
100
Natriumchlorid (1 %)
101
101
102
101
Albumin (1%) und
Natriumeitrat (0.4%)
100
103
102
100
Natriumeitrat (1 %)
100
100
101
102
Mannitol (1%)
100
103
101
101
Mannitol (1 %) und
Kaliumoxalat (0.5%)
100
100
101
101
Gelatine (1 %)
101
101
102
102
Lysin (1.5%)
100
100
100
101
Albumin (1 %) und
Natriumeitrat (0.4%)
und Natriumchlorid
(0.5%)
102
103
103
102
Ohne Stabilisator
67
60
0
0

Claims (13)

  1. 645 537
    2
    PATENTANSPRÜCHE
    1. Ein trockenes Antithrombinpräparat dadurch gekennzeichnet, dass es eine wirksame Menge Antithrombin III, sowie eine wirksame Menge von mindestens einer Stabilisator-Komponente, ausgewählt aus der Gruppe Proteine, Zucker, Aminosäuren, anorganische Salze und Salze von organischen Säuren, enthält.
  2. 2. Ein trockenes Antithrombinpräparat gemäss Anspruch 1, worin die Menge des genannten Stabilisators 0.1-5.0 Gewichtsteile bezogen auf 1.0 Gewichtsteil Antithrombin III beträgt.
  3. 4. Ein trockenes Antithrombinpräparat gemäss Anspruch 1, worin der genannte Stabilisator ein Gemisch von mindestens einer der folgenden Komponenten wie Proteine, Zucker und Aminosäuren und mindestens einer Komponente aus anorganischen Salzen und Salzen von organischen Säuren ist.
  4. 5. Ein trockenes Antithrombinpräparat gemäss Anspruch 4, worin die Menge mindestens einer der genannten Stabilisatorkomponenten ausgewählt aus Proteinen, Zucker und Aminosäuren gross genug ist, um als Arzneimittelträger zu wirken.
  5. 6. Ein trockenes Antithrombinpräparat gemäss Anspruch 1, worin das genannte Protein mindestens eines aus der folgenden Gruppe bestehend aus Albumin, Globulin, Fibrinogen, Urokinase, Plasminogen und Gelatine ist.
  6. 7. Ein trockenes Antithrombinpräparat gemäss Anspruch 1, worin der genannte Zucker mindestens einer aus der folgenden Gruppe bestehend aus Mannitol, Glucose, Saccharose und Heparin ist.
  7. 8. Ein trockenes Antithrombinpräparat gemäss Anspruch 1, worin die genannte Aminosäure mindestens eine aus der folgenden Gruppe bestehend aus Glycin und Lysin ist.
  8. 9. Ein trockenes Antithrombinpräparat gemäss An-
    s spruch 1, worin das genannte anorganische Salz mindestens eines aus der folgenden Gruppe bestehend aus Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Natriumphosphat, Kaliumphosphat und Natriumhydrogencarbonat ist.
  9. 10. Ein trockenes Antithrombinpräparat gemäss An-10 spruch 1, worin das genannte Salz einer organischen Säure mindestens eines aus der folgenden Gruppe bestehend aus Salzen der Zitronensäure, aus Salzen der Essigsäure und aus Salzen der Oxalsäure ist.
  10. 11. Verfahren zur Herstellung eines trockenen Anti-
    15 thrombinpräparates gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass eine wässrige Antithrombin III als Hauptkomponente enthaltende Lösung in Gegenwart einer wirksamen Menge von mindestens einer Stabilisator-Komponente, ausgewählt aus der Gruppe Proteine, Zucker, Aminosäuren, 20 anorganische Salze und Salze von organischen Säuren, gefriergetrocknet wird.
  11. 12. Verfahren gemäss Anspruch 11, worin der pH der genannten wässrigen Lösung 6.2-9.0 beträgt.
  12. 13. Verfahren gemäss Anspruch 11, worin die den genannten Stabilisator und Antithrombin III enthaltende wässrige Lösung vor der Gefriertrocknung zur Inaktivierung des Hepatitis Virus hitzebehandelt wird.
  13. 14. Verfahren gemäss Anspruch II, worin die den ge-30 nannten Stabilisator und Antithrombin III enthaltende wässrige Lösung eine Konzentration aufweist, welche 0.1-3.0mal der isotonischen Konzentration entspricht.
    25
    Technisches Gebiet Diese Erfindung bezieht sich auf trockenes Antithrombinpräparat, welches Antithrombin-III menschlichen Ursprungs als Hauptkomponente enthält, sowie auf ein Verfahren zu dessen Herstellung.
    Stand der Technik Es ist bekannt, dass Thrombin mit seiner Blut koagulierenden Eigenschaft auf Fibrin wirkt, ein Fibrinmonomer produziert und dieses Fibrinmonomer zu einem Netzwerk einer Fibrinfaser polymerisiert und dieses Netzwerk gleichzeitig Blutkörperchen in sich aufnimmt, was einen Thrombus liefert, mit welchem die Blutungen gestoppt werden.
    Obwohl Thrombin gewöhnlich als inaktives Prothrombin im lebenden Körper vorhanden ist, kann es gelegentlich nach und nach zu Thrombin aktiviert werden. Dieses Thrombin wird jedoch durch Antithrombine, welche gleichzeitig im lebenden Körper vorkommen, neutralisiert, sodass eine Koagulation des Blutes nicht sofort eintritt.
    In Fällen von intravaskulär verbreiteter Koagulation (DIC) und Fibrinopenie ist die Aktivierung von Prothrombin abnormal beschleunigt und übersteigt die Neutralisationsfähigkeit von Antithrombinen, wodurch Blutkoagula-tion auftritt und Thrombin an verschiedenen Orten des lebenden Körpers gebildet wird.
    Folglich können Abnormalitäten wie DIC geheilt werden durch Verstärkung der Antithrombinwirkung. Substanzen, welche in vivo Antithrombinwirkung zeigen, schliessen Antithrombin-III, Fibrin und seine Zersetzungsprodukte, a2-Makroglobulin und ähnliche ein, unter welchen Antithrom-bin-III die stärkste Aktivität aufweist, sodass die Herstellung eines stabilen Präparates davon erwartet wird.
    Das hier erwähnte Antithrombin-III ist eine Substanz mit der Fähigkeit, menschliches Thrombin zu inaktivieren. Es kann aus menschlichem Gesamtblut, Plasma oder Serum 40 gewonnen werden. Ein von koaguliertem Blut befreites Serum enthält diese Substanz, welche gereinigtes Fibrinogen nicht koagulieren kann.
    Als Methoden für die Reinigung von Antithrombin-III können die Aluminiumhydroxid Adsorptionsmethode, 45 DEAE-Zellulose Ionenaustausch-Chromatographie und die Heparin-Sephalose Adsorptionsmethode (Jap. Pat. Kokai (Offenlegung) Nr. 35 017/1973, US-Patentschrift 3 842 061) erwähnt werden. Obwohl das nach diesen Methoden erhaltene Antithrombin-III in flüssigem Zustand relativ stabil ist, so ist der Verlust an Antithrombin-III im Moment des Einfrierens oder der Gefriertrocknung, was für eine Langzeitstabilisierung von Eiweissen und Ähnlichem am effektvollsten gilt, ziemlich bedeutend.
    Da Antithrombin-III in flüssigem Zustand gewisse Stabi-55 lität aufweist, sollte es möglich sein, ein flüssiges Antithrombin-III Präparat herzustellen. Flüssige Präparate sind jedoch unerwünscht, da die Aktivität von flüssigen Präparaten nach längerer Lagerung abnimmt und da sich in einigen Präparaten unlösliches Material absetzen kann.
    60 Obwohl über verschiedene Verfahren zur Reinigung von Antithrombin-III wie oben erwähnt schon berichtet worden ist, ist das Verfahren zur Herstellung eines medizinischen Präparates davon noch nicht vollkommen, was darauf zurückzuführen ist, dass noch keine Technik zur Stabilisierung 65 von gereinigtem Produkt über eine längere Zeitperiode entwickelt worden ist.
    Die jetzigen Erfinder leiteten ein ununterbrochenes Studium des Verfahrens, um Antithrombin-III in ein Präparat
    3
    645 537
    zu bringen und der Methode einer Stabilisierung von Antithrombin-III während der Gefriertrocknung. Das Resultat war, dass die Erfinder Erfolg hatten durch die Entdeckung eines für diesen Zweck nützlichen Stabilisators und die Entwicklung eines Antithrombinpräparates, welches als Hauptkomponente ein gefriergetrocknetes Antithrombin-III in sicherer und über längere Zeit stabiler Form enthält. Aufgrund dieses Erfolges wurde diese Erfindung vollendet.
    Es ist Gegenstand dieser Erfindung, ein trockenes Antithrombinpräparat zu liefern, welches als Hauptkomponente Antithrombin-III enthält, das sicher und stabil ist für eine längere Zeitperiode, sowie auch ein Verfahren zu dessen Herstellung.
    Darstellung der Erfindung
    Weitere Gegenstände und Vorteile dieser Erfindung, welche durch die unten gegebene Beschreibung offenbar werden.
    Entsprechend dieser Erfindung wird ein trockenes, stabiles Antithrombinpräparat geliefert, welches Antithrombin-III menschlichen Ursprungs enthält.
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