CH335490A

CH335490A - Verfahren zur Herstellung von Cholenderivaten

Info

Publication number: CH335490A
Authority: CH
Inventors: Charles Murray Herbert; Harold Peterson Durey
Original assignee: Upjohn Co
Priority date: 1952-02-23
Filing date: 1952-07-08
Publication date: 1958-12-31

Description


      Zusatzpatent    zum Hauptpatent Nr. 329194    Verfahren zur Herstellung von     Cholenderivaten       Die     Erfindung    betrifft die Herstellung  neuer     Cholenderivate,    nämlich des     3-Keto-          bisnor-4-eholen-11a;22-diols    und eines     3-Keto-          bisnor-4-cholen-triols.     



  Diese Verbindungen werden erfindungs  gemäss hergestellt, indem man     3-Keto-bisnor-          4-cholen-22-al        (Heyl    und Mitarbeiter,     .l.    A.  C. S., Band 72, S. 2617, 1950) einer bioche  mischen Oxydation mittels Enzymen unter  wirft, die von einer Pilzart der Gattung       Rhizopus,    welche der Ordnung     Mucorales    an  gehört, erzeugt werden. Es können die von  diesen Pilzen erhältlichen und abgetrennten  Enzyme verwendet werden.

   Vorzugsweise  werden aber ein lebensfähiger Pilz, zum Bei  spiel     Rhizopus        arrhizus    oder     Rhizopus        nigri-          cans,    und das     Ausgangssteroid    unter     Fermen-          tat.ionsbedingungen    in Anwesenheit     eines          Nährbodens    für den Pilz zusammengebracht.  Die erfindungsgemäss hergestellten Verbin  dungen sind als chemische Zwischenprodukte  wertvoll und auch selbst pharmakologisch  wirksam.  



  Im folgenden ist das erfindungsgemässe  Verfahren an Hand eines Beispiels erläutert.  <I>Beispiel</I>       3-Keto-bisnor-4-cholen-11a,')'2-diol    und       3-Keto-bisnor-4-cholen-triol.     Aus 20 g     Lactalbuminauszug,    3 g Mais  quellwasser und 50 g     technischer    Dextrose    wurde durch Verdünnung mit Leitungswasser  auf 1 Liter ein Nährboden hergestellt und  auf einen     pH-Wert    von     4,3-4,5    eingestellt.

    12 Liter dieses sterilisierten Nährbodens wur  den mit     Rhizopus        nigricans    minus     (ATCC     Nr.     622:7b)    geimpft und 24 Stunden lang bei  einer Temperatur von     28     C mit einer solchen  Luftzufuhr und unter Rühren bebrütet, dass  die Sauerstoffaufnahme 6,3 bis 7     Millimol     je Stunde und Liter     Na2S03-lösung    betrug  (Cooper,     Fernstrom    und     Miller        Ind.    Eng.       Chem.    Band 36, Seite 50411944).

   Zu diesem  eine 24 Stunden alte Kultur     des    Pilzes ent  haltenen Nährboden wurden 3 g     3-Keto-bisnor-          4-cholen-22-al    in     200        cm3    Äthanol hinzuge  fügt, um eine Suspension des     Steroids    in  der Kultur zu erzeugen. Nach einer weiteren,  unter denselben Temperatur- und     Belüftung#s-          bedingungen    durchgeführten     Bebrütung    von  48 Stunden wurden die Würze und das     Xlycel     extrahiert.

   Das     Mycel    wurde filtriert, zwei  mal     jeweils    mit. einer seinem Volumen etwa  gleichen Menge     Azeton    gewaschen und zwei  mal jeweils mit einer seinem Volumen etwa  gleichen Menge     Methylenchlorid    extrahiert..  Die Azeton- und     Methylenchloridauszüge    wur  den mit dem     Würzefiltrat    vereinigt. Die     Mi-          schung    der Extrakte mit dem     Würzefiltrat     wurde nacheinander dreimal jeweils mit  3 Liter     Methylenchlorid    extrahiert..

   Die ver  einigten     Xethylenchloridextrakte    wurden      zweimal mit je 750 ein-'     2:prozentiger    wässe  riger     Natriumbicarbonatlösung    und zweimal  mit je 7'50     cm3        Wasser    gewaschen. Nach Trock  nung der     Methylencliloridauszüge    mit. etwa  3 bis 5 g wasserfreiem Natriumsulfat pro  Liter Lösungsmittel und Filtrieren wurde das  Lösungsmittel     abdestilliert,    wobei 4,03 g eines  halbkristallinischen Rückstandes erhalten wur  den.

   Der Rückstand des Auszuges wurde in  400     ein-        Äthylendichlorid    gelöst und     über     320 g      Florisil     (synthetisches Magnesium  silikat)     chromatographiert,    wobei jeweils  500     cm_3    Lösungsmittel nach Tabelle I ver  wendet wurden.

      Die Fraktionen 11 bis einschliesslich 16  wurden vereinigt und aus 10     em3    Azeton  durch     Zutropfen    von Äther bis zum Kristalli  sationsbeginn     umkristallisiert..    Die     Kristalle     wurden abgetrennt und erneut aus 10     cm3     Azeton zu 550,5 mg     3-Keto-bisnor-4-cliolen-          11a,22    -     diol.        umkristallisiert,        Sehmelzptinl;

  t     130 bis 133 C, Das     Infrarotspektruni        zeigte     die Anwesenheit zweier     Ozy-Gruppen    und  das Verschwinden der     Aldehyd-Gruppe    an.  Die optische     Drehung        [a@I        D    war + 78   (c = 1,0175 in. Chloroform) und die     Ultra-          violettabsorption        K243    war 38,39.

    
EMI0002.0033     
  
    Analyse: <SEP>  /o <SEP> berechnet <SEP> für <SEP> C."2TI3403: <SEP> C <SEP> -_ <SEP> 76,26; <SEP> 1I <SEP> --_ <SEP> 9,8:9
<tb>   /a <SEP> gefunden: <SEP> C <SEP> = <SEP> 75,86; <SEP> H <SEP> = <SEP> <B>9,77.</B>       Die erhaltenen Fraktionen 17 bis ein  schliesslich 21 wurden aus 15     cm3    einer Mi  schung von Methanol und Azeton im Ver  hältnis 1:1 umkristallisiert.

   Die derart er  haltenen     Kristalle    wurden erneut aus 10     em3     einer Mischung eines Teils Methanol und    eines Teils     t1zeton    zu 401,0     ing    eines     3-heto-          bisnor-4-cholen-triols        umkristallisiert.;

      Schmelz  punkt<B>2318</B> bis     240     C,     [a]    D = + 22  (c  0,387 in Methanol),     Utraviolettabsorption     h238 =     3',5,51.    Die Struktur wurde     dureh     Infrarot- und     Ultraviolettspektren        bestätigt.     
EMI0002.0049     
  
    Analyse: <SEP> <B>%</B> <SEP> berechnet <SEP> für <SEP> C.,21-13404: <SEP> C <SEP> = <SEP> 72',89; <SEP> 1I <SEP> = <SEP> 9,45
<tb>   /u <SEP> gefunden: <SEP> C <SEP> = <SEP> 73,04; <SEP> 1-4 <SEP> = <SEP> 9,59.

       
EMI0002.0050     
  
    Tabelle <SEP> I
<tb>  Fraktion <SEP> Lösungsmittel <SEP> Ausbeute <SEP> in <SEP> mg
<tb>  1 <SEP>  < @tliylendichlorid <SEP> 194,0
<tb>  2 <SEP> Äthylendichlorid <SEP> 60,5
<tb>  3 <SEP> Äthylendichlorid-Azeton <SEP> 25:1. <SEP> 33!5,0
<tb>  4 <SEP> Äthylendichlorid-Azeton <SEP> 2:5:1 <SEP> 154,0
<tb>  5 <SEP> Äthylendichlorid-Azeton <SEP> 15:1 <SEP> 199,N
<tb>  6 <SEP> Äthylendichlorid-Azeton <SEP> 1:5:1 <SEP> 11'6,0
<tb>  7 <SEP> @lthylendiclilorid-Azeton <SEP> 1'5:1 <SEP> :51_,0
<tb>  8 <SEP> Äthylendichlorid-Azeton <SEP> 1 2-:1. <SEP> 31,0
<tb>  9 <SEP> Ä <SEP> thylendiclilorid-Azeton <SEP> 12;1 <SEP> 28,0
<tb>  10 <SEP> Äthylendichlorid-Azeton <SEP> 10:1 <SEP> :54,0
<tb>  11 <SEP> Ä <SEP> thylendichlorid-Azeton <SEP> 10:1. <SEP> 87,5
<tb>  12 <SEP> Äthylendiehlorid-Azeton <SEP> 10:

  1_ <SEP> 132,5
<tb>  13 <SEP> Athylendichlorid-Azeton <SEP> 8:1 <SEP> ?34,1
<tb>  14 <SEP> Athylendichlorid-Azeton <SEP> 8:1 <SEP> 249,0
<tb>  15 <SEP> Ä <SEP> thylendichlorid-Azeton <SEP> 8:1 <SEP> 264,0
<tb>  16 <SEP> Ä <SEP> thylendichlorid-Azeton <SEP> 5:1 <SEP> 375,0
<tb>  - <SEP> 17 <SEP> Äth-#-lendielilorid-Azeton <SEP> <B>5:1 <SEP> 26</B>6<B>,5</B>       
EMI0003.0001     
  
    Tabelle <SEP> I <SEP> (Fortsetzung)
<tb>  Fraktion <SEP> Lösungsmittel <SEP> Ausbeute <SEP> in <SEP> mg
<tb>  18 <SEP> Äthylendichlorid-Azeton <SEP> 5:1 <SEP> <B>192,0</B>
<tb>  19 <SEP> Äthylendichlorid-Azeton <SEP> 2:1 <SEP> 440,5
<tb>  20 <SEP> Äthylendichlorid-Azeton <SEP> 2:1 <SEP> 179,5
<tb>  21 <SEP> llthylendiclilorid-Azeton <SEP> 21 <SEP> 81.,0
<tb>  2'2 <SEP> Azeton <SEP> 91,5

Claims

PATENTANSPRUCH Verfahren zur Herstellung neuer Cholen- derivate, dadurch gekennzeichnet, dass 3-Keto- hisnor-4-cliolen-22-al einer biochemischen Oxy- < lation mittels Enzymen unterworfen wird, die von einer Pilzart der Gattung Rhizopus erzeugt werden, wobei 3-Keto-bisnor-4-cholen- 11.a,22-diol und ein 3-Keto-biszlor-4-cholen- triol gebildet werden. jTNTERANSPRÜCHF 1.

Verfahren nach Patentansprueli, da durch gekennzeichnet, dass als Pilz Rhizopus arrhizus verwendet wird. 2. Verfahren nach Patentansprueli, da durch gekennzeichnet, dass als Pilz Rhizoptts nigricans verwendet wird. 3.

Verfahren nach Patentanspruch, da durch gekennzeichnet, dass das 3-Keto-bisnor- 4-cholen-22-al mit einem lebensfähigen Pilz dieser Gattung unter Fermentationsbedingun- gen in Anwesenheit eines Nährmediums für den Pilz zusammengebracht wird.