w N.. Procédé pour séparer, dans une solution, une ptéridine des impuretés qui l'àpaent. Il est décrit ct revendiqué, au brevet prin cipal, un procédé pour séparer, dans une solu- tion contenant une ptéridine correspondant à la formule générale:
EMI0001.0008
où R est le reste d'un aminoacide ou d'un peptide, ladite ptéridine des impuretés qui l'accompagnent et notamment de ptéridines de formule autre que la formule ci-dessus.
Il a été découvert maintenant que ce même processus peut s'appliquer, avec tous les avan tages mentionnés au brevet principal, aux ptéridines renfermant le groupement:
EMI0001.0014
dans lequel R est le reste d'un aminoacide.
La présente invention a donc pour objet un procédé pour séparer, dans une solution contenant une ptéridine présentant le groupe ment
EMI0001.0016
dans lequel R est le reste d'un aminoacide, ladite ptéridine des impuretés qui l'accom- pagnent et notamment des ptéridines de for mule autre que' la formule ci-dessus, ce pro- cédé étant caractérisé par le fait qu'on ajoute, à cette solution contenant une ptéridine ayant la formule générale ci-dessus, un sel soluble de zinc,
de préférence un sel acide de zinc à une solution alcaline d'un mélange réactionnel cru, et règle le pH du liquide à une valeur comprise entre 10,5 et 11,2 et en ce qu'on sépare les matières précipitées; constituées essentiellement desdites impuretés sous forme de combinaisons de zinc, d'avec la solution qui. contient la majeure partie de la ptéridine désirée sons forme d'iun sel de zinc soluble, et régénère finalement cette ptéridine. La pré cipitation peut avoir lieu aussi bien dans une solution froide que chaude.
Pour la régénération, le pH de la solution débarrassée des impuretés peut ensuite être ré duit jusqu'aux limites comprises entre 6,5 et 7 environ, en ajoutant des quantités supplé mentaires d'un sel acide de zinc ou par l'addi tion d'acide. Dans ces conditions, les sels de zinc des composés désirés ont une solubilité minimum et précipitent. Ils sont recueillis et transformés en ptéridines libres.
Etant donné que la solubilité des sels de zinc des ptéridines désirées n'augmente que faiblement ou pas du tout lorsqu'on élève la température, tandis que la solubilité des sels des autres ptéridines tend à augmenter, il est indiqué que la précipitation des sels de zinc des ptérid'ines désirées s'effectue à une tempé rature élevée, de préférence entre 50 et 95 C environ.
Bien que les sels de zinc précipités aient une pureté sensiblement améliorée, il est ordi nairement désirable de répéter le processus jusqu'à l'élimination pratiquement totale des impuretés. A cet effet, on dissout par exemple les sels de zinc dans une solution aqueuse d'un alcali (hydrate de sodium, de calcium, de baryum ou autres) à un pg supérieur à 11,5.
L'hydrate insoluble de zinc ainsi que d'autres substances insolubles peuvent être alors éliminées par filtration, puis on répète l'opération qu'on vient de décrire.
Lorsqu'on estime que la purification a été suffisamment poussée, en traitant le sel de zinc avec un acide pour abaisser le pH à une valeur inférieure à 5 et de préférence à 3, on obtient la précipitation de. la ptéridine libre. Le produit peut être séparé de son eau-mère puis séché ou conditionné pour obtenir des produits pharmaceutiques de diffé rentes sortes.
L'invention est décrite avec plus de détails dans les exemples qui suivent. <I>Exemple 1:</I> Du produit cru provenant de la réaction de sulfate de 2,4,5,6-tétraminopyrimidine, de dibromopropionaldéhyde et d'acide p-amino- benzoylglutamique et contenant 2 parties d'acide N- (4- [2,4-diaminopyrimido[4,5-b]- py-ra7-yl - 6 - méthylamino ] benzoyl) -glutamique, appelé également acide 4-amino-ptéroylghit- amique, est mélangé avec 4 parties de chaux et 2000 parties d'eau à 60-70 C pendant 15 minutes.
On ajoute un auxiliaire de filtra tion, puis ensuite on filtre le mélange. On traite le filtrat avec l'auxiliaire de filtration et une solution à 20% de chlorure de zinc jusqu'à obtenir un pH de<B>10,6.</B> La bouillie est. ensuite filtrée et on chauffe le filtrat à 80 C. On ajoute la solution de chlorure de zinc jus qu'au pH de 6,8 et on filtre le sel de zinc avec l'auxiliaire de filtration. Le gâteau est mélangé avec 4 parties de chaux et 1000 par ties d'eau à 90 C, puis on le filtre. On règle le filtrat à un pH de 4 avec de l'acide chlor hydrique dilué, on refroidit et on filtre avec l'auxiliaire de filtration. On mélange ensuite le gâteau avec 4 parties de carbonate de magnésium et 700 parties d'eau à 85-90 C, on agite avec 1,5 partie de charbon de bois pendant 5 minutes, puis on filtre.
On règle le filtrat à un pH de 4, on le refroidit, puis on filtre. Le produit pèse 1,1 partie et donne à l'analyse 74,31/0 d'acide 4-aminoptéroylglut- amique, ce qui représente une amélioration considérable de la pureté par rapport à celle du mélange réactionnel cru. Exemple <I>2:</I> Un mélange de 32,9 parties de sulfate de 2,4,5,6-tétraamino-pyrimidine dihydraté, de 29,3 parties de chlorure de baryum dihydraté et de 600 parties d'eau a été chauffé à 60 C puis refroidi à 40 C.
On a ajouté 13,3 parties d'acide p-aminobenzoylglutamique, puis on a réglé le<B>pli</B> à 3. On a ajouté ensuite une solu tion de 17,5 parties de butylchloral dans 25 parties d'acide acétique glacial en l'espace de 20 minutes à 40-45 C en ajoutant de la soude caustique pour maintenir un pH de 2,8 à 3,0. On a agité le mélange à la même tempé rature et au même pH pendant une demi-heure encore et enfin on l'a refroidi, on l'a filtré et on l'a séché. Le rendement fut de 45 parties et l'analyse indique 11,91/o de substance active. De ce produit cru (5 parties de substance active) est mélangé avec 10 parties de chaux et 2000 parties d'eau à 80 C, puis filtré et lavé à l'eau chaude.
On règle le pH du filtrat à 10,6 à l'aide d'une solution aqueuse de chlorure de zinc, on filtre, on acidifie jusqu'au pH de 4, on refroidit et enfin on filtre. On mélange le gâteau avec 2500 parties d'eau à 80 C et de la soude caustique pour atteindre un pH de 12. On refroidit ensuite lentement le mélange, on le traite avec du gaz carboni que jusqu'au pH de 7 à 20 C, on filtre, puis on acidifie jusqu'au pH de 4, on refroidit et enfin on filtre. On mélange le gâteau avec 5 parties de carbonate de magnésium, 2,5 parties de charbon actif et 1000 parties d'eau à .80 C, puis le mélange est filtré, acidifié au pH de 4, refroidi, filtré et séché.
Le rendement était de 1,662 partie et l'analyse chimique a donné 69,3% d'acide N-[4-{[1-(2,4-diamino-6-ptéri- dyl)-éthyl] amino } -benzoyl]glutamique.
<I>Exemple 3:</I> Un mélange de sulfate de 2,4,5,6-tétra- aminopyrimidine (6,4 g) et d'acide p-amino- benzoylaspartique (3,3 g) dans 100 cuis d'eau a été traité avec 3,5 cm3 de tribromoacétone. Le mélange, bien agité, a été chauffé à 80 C pendant 30 minutes en maintenant le pH à 2,0 par l'addition de soude caustique 2,5 N, sui vant le besoin. Puis on a réglé le pH du mé lange à 3,9 et on a, refroidi et filtré. Le gâteau filtré a été lavé à l'eau, à l'acétone et à l'éther puis séché. Le rendement a été de 5,5 g et l'analyse chimique a donné 28,91/o.
La substance ci-dessus (5,0 g) est mise en suspension dans 1400 cuis d'eau chaude, puis dissoute par l'addition de 14 cuis de soude caustique 10 N. La solution filtrée est chauf fée à 80-85 C et on ajoute ensuite 5 g de terre d'infusoire et 26 cm3 d'une solution à 30% de chlorure de calcium. Ce mélange est filtré à chaud et on jette le gâteau filtré.
Le filtrat, contenant 0,83 g de substance active, déterminée par analyse chimique, est ré chauffé à 80 C puis traité avec environ 90 cm3 d'une solution de chlorure de zinc à 5 0/u au pg de 10,9 puis filtré avec 5 g de terre d'infusoire. Le gâteau filtré est jeté.
Le filtrat, contenant 0,63 g de substance active, déter minée par l'analyse chimique, est refroidi à 40 C, puis on règle le<B>pi, *à</B> 6,8 en ajoutant environ 35 cuis d'une solution à 30% de chlo- rure de zinc. Le eel de zinc précipité est en suite recueilli et on jette le filtrat.
Le sel de zinc ci-dessus est agité pendant 15 minutes avec 200 cm3 d'eau et 5 ems de soude caùs- tique 10N (pH 11,8), puis on filtre. Ensuite, on acidifie le filtrat au p,i de 3,8 avec de l'acide chlorhydrique, on refroidit .dans un bain de glace et on recueille enfin le préci pité sur le filtre. Ce précipité est mis en sus pension dans 200 cm3 d'eau, on règle le pH à 11,5 et on chauffe la solution à 60 C avant de régler le pH à 7 en introduisant dans le mélange des bulles de gaz carbonique. Après avoir refroidi à 10 C, on filtre le mélange et jette le gâteau filtré.
Le filtrat, contenant 0,38 g de matière active, est acidifié jusqu'au pH de 3,8, bien refroidi et enfin on recueille le précipité. Ce dernier est mis en suspen sion dans 50 cm3 d'eau environ, puis agité avec 0,4 g d'oxyde de magnésium jusqu'à l'alcalinité, puis on chauffe le mélange à 80 à 90 C et enfin on filtre à chaud. On déco lore le filtrat chaud avec un peu de charbon actif et on filtre de nouveau.
Au refroidisse ment, le filtrat dépose un précipité cristallin et jaune de sel de magnésium d'acide 4-amino- ptéroylaspartique. On recristallise cette ma- tière à partir de 60 cms environ d'eau chaude, on lave à l'eau, à l'acétone et à l'éther, puis on sèche au-dessus de pentoxyde phosphoreux sous vide à 100 C.
Le rendement a été de 0,2 g et l'analyse chimique a donné 89,51/o. Le sel est dissous dans l'eau chaude, le PH réglé à 4 avec de l'acide chlorhydrique et l'acide libre est isolé comme indiqué dans les exemples précédents.