BRPI0721724B1

BRPI0721724B1 - Atividades antimicrobiana de extratos obtidos do cultivo do fungo trametes sp. 11e4 (polyporacea basidiomycetes) isolado na amazônia

Info

Publication number: BRPI0721724B1
Application number: BRPI0721724-2A
Authority: BR
Inventors: Helenires Quieroz De Souza; Luiz Antonio De Oliveira
Original assignee: Instituto Nacional De Pesquisas Da Amazônia - Inpa
Priority date: 2007-12-28
Filing date: 2007-12-28
Publication date: 2022-01-25
Also published as: BRPI0721724A2; US20100285054A1; WO2009082792A1; EP2222317A1; EP2222317A4

Abstract

ATIVIDADES ANTIMICROBIANA DE EXTRATOS OBTIDOS DO CULTIVO DO FUNGO TRAMETES SP. 11E4 (POLYPORACEA BASIDIOMYCETES) ISOLADO NA AMAZONIA. A presente invenção é direcionada ao extrato de fungo compreendendo atividade antimicrobiana. Mais especificamente, os fungos usados pertencem a família dos Polyporaceae, especificamente gênero Trametes, nomeado Trametes sp. 11E4. Especificamente, o extrato demonstrou atividade contra bactérias tais como R.sonalacearum, E.coli, S.aureus, B.cereus and S.anatum. Este pode ser usado na composição, tal como composição antiparasitas, que seria usado na agricultura, i.e. tratamento da proliferação bacteriana e medicina.

Description

Campo da Invenção

A presente invenção é direcionada a extrato de fungo compreendendo atividade antimicrobiana. Mais especificamente, os fungos usados pertencem a família dos Polyporaceae, especificamente gênero Trametes, nomeado Trametes sp. 11E4.

Especificamente, o extrato demonstrou atividade contra bactérias tais como R.sonalacearum, E.coli, S.aureus, B.cereus and S.anatum. Este pode ser usado em composições, tais como composições antiparasíticas, as quais são utilizadas na agricultura como, por exemplo, tratamento da proliferação bacteriana e na medicina.

Antecedentes da Invenção

As plantas estão sujeitas a ataques por um grande número de patógenos. Estes patógenos podem ser, por exemplo, bactérias, fungos ou nematóides. Compostos pesticidas têm sido muito utilizados para aumentar o rendimento e ampliar a capacidade de produção agrícola em novas áreas. Eles também têm sido extremamente importantes ferramentas para melhorar diferenças de rendimento de acordo com a estação e qualidade causada por variações temporais.

A futura função de pesticidas na agricultura está cada vez mais ameaçada por vários fatores, incluindo o desenvolvimento de pragas resistentes, aumento a preocupação em relação a segurança alimentar, e acumulo ambiental de compostos tóxicos. Como pesticidas mais antigos são removidos do mercado devido a alterações regulamentares, e novos pesticidas se tornam cada vez mais caros para registro, há uma crescente necessidade de encontrar maneiras mais sensatas, e seguras de uso dos pesticidas. Isto é particularmente verdade para as muitas combinações de colheitas/doenças as quais não representam mercados grandes o suficiente para pagar o custo de novos registros de compostos. Uma utilização mais inteligente de pesticidas inclui formas de reduzir taxas de aplicação (e portanto, potenciais resíduos), encontrar maneiras de prorrogar registros para novas culturas, e identificar novos composições e tratamentos para combater o desenvolvimento de pragas resistentes.

R.solanacearum é um importante fitopatógeno com distribuição mundial e com um grande número de hospedeiros, mais de 200 espécies em 50 famílias. Alguns dos mais importantes hospedeiros incluem tomate (Lycopersicum escutentum Mill.), pimentão (Capsicul frutescens L.), batata (Ipomoea sp.), tabaco (Nicotiana tabacul L.), banana (Musa sp.), ervilhas (Pisum sativum L .), amendoim (Arachis hypogaea L.), caju (Anacardium occidentals L.), mamão (Carica papaya L.)e azeite (Olea europaea L.).

Várias estratégias de controle de pragas resistentes incluem plantas hospedeiras, plantas transgênicas, correção do solo e controle biológico. Os agentes biológicos usados no controle das bactérias no tomate incluem vírus mutantes e não mutantes de R.solanacearum, bactérias antagonistas engenheiramente genéticas e algumas naturalmente rozobactérias antagonistas tais como Bacillus spp., Pseudomonas spp., Streptomyces spp.

Pesticidas químicos têm proporcionado um método eficaz de controle, porém, o público tornou-se preocupado com a quantidade de produtos químicos que possam ser encontrados em alimentos, na água e no ambiente. Severas restrições recentes sobre o uso de produtos químicos e da eliminação de alguns eficazes pesticidas do mercado local poderia limitar opções econômicas e eficazes para controlar pragas. Além disso, o uso regular de toxinas químicas para controlar organismos indesejáveis pode selecionar estirpes resistentes.

Moura et al. (1998) avaliou o potencial antagônico de 190 actinomicetos isolados, obtidos de diferentes solos, rizosfera, rizoplano e tecidos internos de plantas sadias contra isolados de R.solanacearum. Sementes de tomates foram tratadas com actinomicetos propágulos sob agitação durante 10 minutos, e cultivados em solo infestado de patógenos. Dezoito isolados forneceram 100% de controle.

O documento WO 2006/065985 revela uma composição para lutar contra proliferação bacteriana em colheitas usando um extrato de planta Yucca. A presente invenção difere deste documento pelo fato de utilizar um extrato de fungo em vez de um extrato vegetal para controlar a proliferação bacteriana.

O documento EP 935918 revela uma composição de 3-(3-indolil)-ácido butanóico capaz de suprir seletivamente o crescimento Ralstonia solanacearum em plantas. A presente invenção difere deste documento pelo fato de utilizar um extrato de fungo em vez de uma substância sintetizada para controlar a proliferação bacteriana.

O documento EP 1 762 613 revela a inserção de elementos que têm a capacidade de recombinação com o material genético de R.solanacearum, prevenção de novas infecções a partir desta bactéria em culturas. A presente invenção difere deste documento pelo fato de utilizar extrato de fungo em vez de um elemento para controlar a inserção da proliferação bacteriana.

O documento WO 2006/06133708 descreve polissacarídeos obtidos a partir de diversas espécies de fungos contendo atividade biológica antineoplasica. Um gênero adequado é o Trametes sp. A presente invenção difere deste documento pelo fato de utilizar um extrato e cultura filtradas contra a proliferação bacteriana e, não, contra o câncer conforme o referido documento. Além disso, a presente invenção compreende uma etapa de precipitação de polissacarídeos.

O documento US 2007/093387 revela uma composição compreendendo uma lacase com propriedades antimicrobianas/antivirais que pode ser obtida a partir de vários microorganismos, como fungos do gênero Trametes. A presente invenção difere deste documento pelo fato de utilizar extratos, ao invés de enzimas isoladas como agente microbianos.

Portanto, podemos ver a partir do estado da arte anterior que o uso de extratos de Trametes sp. como antimicrobiano, especialmente no controle de proliferação de bactérias, assim como o processo para produção do extrato, nunca foi anteriormente sugerido ou descrito.

Sumário da Invenção

É um objeto da presente invenção, uma composição antimicrobiana compreendendo: a) extrato de fungo pertencente a família Potyporaceae; e b) veículo aceitável.

É ainda um objeto adicional da presente invenção, um processo para produzir um extrato de fungo pertencente a família Potyporaceae compreendendo as etapas de: a) crescer em um meio líquido fungo pertencente a família Polyporaceae; e b) remover os micélios do meio líquido.

É também um objeto adicional da presente invenção, um método para proteger organismos de infecção por microorganismos patogênicos compreendendo as etapas de: a) contato da planta com uma composição compreendendo: i) extrato de fungo pertencente a família Polyporaceae; e ii) veículo aceitável.

Em uma realização preferencial, o processo compreende etapa adicional de contacto do meio líquido com um solvente orgânico adequado.

Em uma realização preferencial, o fungo é escolhido a partir do gênero Trametes. Mais especificamente, o fungo é o Trametes sp. 114E.

Em uma realização preferencial, o extrato é uma cultura filtrada a partir de um meio líquido de crescimento. Adicionalmente, solventes orgânicos adequados podem ser escolhidos do grupo que compreende hexano, diclorometano, etil acetato e butanol.

Breve Descrição das Figuras

A figura 1 mostra o procedimento para inoculação da bactéria em meio sólido.

A figura 2 mostra a pontuação dada de acordo com o crescimento bacteriano em placas de Petri em meio sólido.

Descrição Detalhada da Invenção

Os exemplos aqui mostrados têm o intuito somente de exemplificar uma das inúmeras maneiras de se realizar a invenção, contudo sem limitar, o escopo da mesma.

Fungos pertencentes a família Polyporaceae

Fungos adequados de acordo com a presente invenção incluem fungos pertencentes a família Polyporaceae. Exemplos de fungos pertencentes a essa família incluem, sem limitação, os gêneros Ganoderma, Coriolus, Trametes e outros fungos relacionados.

Em uma realização preferencial, os fungos escolhidos são do gênero Trametes, da espécie Trametes sp 11E4.

Microorganismos patogênicos

De acordo com a presente invenção, os microorganismos patogênicos incluem, sem limitação, bactérias, fungos, vírus e protozoários. Os microorganismos podem também ser um microorganismo fitopatogênico.

Bactérias adequadas incluem, sem limitação, bactérias gram-positivas e gran-negativas pertencente aos seguintes gêneros: Staphylococcus, Ralstonia, Escherichia, Salmonella, Pseudomonas, Bacillus, Streptococcus e misturas dos mesmos.

A composição da presente invenção tem uma seletividade especial para E. coli, S. aureus, B. cereus, S. anatum e R. solanacearum.

Organismos

Organismos adequados, de acordo com a invenção, incluem, sem limitação, plantas e animais.

Animais adequados incluem, sem limitação, mamíferos, como humanos.

Plantas adequadas incluem, sem limitação, sementes, bulbos, raízes, flores, folhas, raízes expostas e frutas de plantas incluindo, mas não se limitando a, uvas, figos, maçãs, peras, nectarinas, cerejas, apricós, limões, limas, laranjas, mangas, bananas, abacaxis e tangerinas. Qualquer planta que seja suscetível a proliferação bacteriana causada por R. solanacearum está dentro do escopo da presente invenção. As plantas que podem ser tratadas incluem, mas não se limitam a, tomates, batata, ervilha, alfafa, repolho, trevo, couve, lentilha, soja, batata doce, rabanete, algodão, girassol, colza, chicória, grão de bico, sorgo, cebola, coco, lírio, cana de açúcar, pepino, abóbora, abobrinha, berinjela, pimenta-chili, pimentão, tabaco, amendoim, alface, melão, gengibre, arroz, milho, trigo, aveia, cevada, centeio, milheto, erva-daninha, gerânios, dama da noite, amêndoas e combinações destas.

Composição antimicrobiana

A composição antimicrobiana da presente invenção compreende: a) extrato de fungo pertencente a família Polyporaceae; e b) veículo aceitável.

A composição antimicrobiana pode ser incorporada em composições cosméticas, farmacêuticas e/ou de agricultura, a fim de embutir as propriedades antimicrobianas nas composições iniciais (parentais).

Em uma realização preferencial, a composição antimicrobiana é adicionada a uma composição de agricultura útil na proteção de plantações, a fim de proteger as plantações das infecções, como proliferações bacterianas.

Exemplo 1. Microorganismos com atividade antimicrobiana

A bactéria patogênica usada nos ensaios foram Escherichia coH, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Salmonella anatum e Ralstonia solanacearum.

A Ralstonia solanacearum foi originalmente isolada a partir de várias plantas, como tomates, melancias, bananas, beringelas, capsicum e moringa.

A bactéria foi cultivada em meio especifico de cultura compreendendo: R. solanacearum foi purificada em meio LPGA (5 g/L extrato de levedura, 5 g/L peptona, 5 g/L glucose 15 g/L agar, água, pH 7.0) e crescida em 10 mL de meio LPG, a 28°C por 48 horas. E. coH, S. aureus, B. cereus e S. anaturrr todos foram purificados em nutriente agar (3 g/L extrato de carne, 10 g/L peptona, 5 g/L cloreto de sódio, 20 g/L agar, água, pH 7.0) e crescidos em 10 mL de meio líquido LB (10 g/L peptona, 5 g/L NaCI, 10 g/L extrato de levedura, pH 7.0), incubados a 37°C por 24 hours sem agitação.

Exemplo 2. Meio de cultura líquido

Os fungos Trametes sp. 11E4, coletados na Amazônia, foram subcultivados em placas de Petri contendo BDA (batata, 20 g/L dextrose, 15g/L agar) e GPY (20 g/L glucose, 10 g/L peptona, 2 g/L extrato de levedura, 15 g/L agar, água; pH 6.6) e incubados a 28°C por 10 dias. Após o crescimento em meio BDA e GPY, três plugs de micélio (10 mm) foram transferidos para 125 mL Erlenmeyers contendo 50 mL de meio BD (batata e 20 g/L dextrose) e GPY.

Esses Erlenmeyers foram incubados no escuro a 28°C, por 30 dias. Após isso, as amostras foram filtradas em papel esterilizado para separar o micélio. As culturas filtradas foram estocadas a 4°C antes do uso.

Exemplo 3. Curva de crescimento em meio líquido

Os fungos foram previamente culticados em meio GPY (20 g/L glucose, 10 g/L peptona, 2 g/L extrato de levedura, 15 g/L agar, água; pH 6.6) e incubado a 28°C por 10 dias.

Após a cultura do GPY sólido, três placas de micélio foram inoculadas em 16 frascos Erlenmeyer contendo 50 mL de meio líquido. Estes foram incubados a 28°C durante 8 semanas, pelo menos.

Ao final da semana de incubação, duas amostras foram coletadas e filtradas para separação do micélio. A cultura filtrada foi estocada a 4°C antes do uso. O micélio da cultura líquida foi colocado em placas de Petri com folhas de alumínio e secas a 90°C até ter peso constante.

Exemplo 4. Avaliação da produção antimicrobiana durante o crescimento de micélio de Trametes sp.

A produção antimicrobiana foi realizada durante as oito semanas de cultura.

A linhagem de R. so/anacearum V55 foi escolhida como microorganismo teste. A bactéria foi cultivada em LPG líquido, sob agitação, por 24 horas. Então, várias e seqüenciais diluições da cultura de bactérias foram realizadas em MgSO4 2 g/L, variando de 10'1 a 10’7.

Amostras a partir da suspensão de bactérias (1 ml_ contendo 105 bactéria) mais um volume de cultura de fungos filtrada foram colocadas em tubos de ensaio. Como controle, um tubo com MgSO4 2 g/L foi utilizado, e todos os tubos foram incubados a 30°C por 24 horas. A tabela abaixo dá detalhes de cada tubo de ensaio. Tabela 1 - Tratamentos para avaliação antimicrobiana durante 8 semanas de cultura do Trametes sp. 11E4 contra R. solanacearum\J55.

Uma amostra de cada tubo de teste foi removida com um platinum-loop e colocadas em placas de LPGA Petri, de acordo com a Figura 1. Essa técnica consiste em um sistema de pontuação do crescimento de bactérias solubilizadora de fosfato (BSF). Faixas intermediárias são dados e subdivididas em 0.25, por exemplo, 1.00, 1.25, 1.50, 1.75, 2.00 até 4.00, com precisão aumentada, de acordo com a Figura 2.

Bactérias com taxas maiores que 3.06 foram consideradas como tolerantes.

As placas foram incubadas por 24 horas e então foi dada a pontuação para o crescimento. Essa pontuação foi convertida em uma porcentagem % de crescimento da bactéria, onde a pontuação de 4.0 corresponde a 100% do crescimento.

Considerando o potencial antimicrobiano do Trametes sp., a partir da sua curva de crescimento, pode ser visto que a produção de compostos antimicrobianos começa na primeira semana de cultura.

Exemplo 5. Avaliação do efeito antimicrobiano da cultura filtrada em diferentes diluições

A cultura de fungos filtrada, cresceu durante 30 dias, foi diluida em diluições seqüenciais de solução de MgSO4 2 g/L, a partir de 10‘1 a 10'6.

Amostras de suspensões de bactérias mais um volume de: a) MgSO4 2 g/L; b) cultura filtrada crua; e c) cultura filtrada diluida, e todos os tubos foram incubados a 30°C por 24 horas. A tabela abaixo dá detalhes de cada tubo de ensaio. Tabela 2 - Tratamentos para avaliação antimicrobiana de cultura filtrada de Trametes sp. 11E4 contra R. solanacearum.

Uma amostra de cada tubo de teste foi removida com platinum-loop e colocadas em placas de Petri de LPGA, de acordo com a técnica de pontuação descrita acima.

A cultura filtrada crua produzida pelos fungos apresenta atividade antimicrobiana contra E. coH, S. aureus, B. cereus e S. anatum. Os ensaios com diferentes suspensões de R. solanacearum (106 a 102) com cultura filtrada crua, não foi observado crescimento de bactérias. O efeito antibacteriano persistiu nas culturas diluídas até 10 vezes.

Exemplo 6. Precipitação de polissacarídeos para obter a fração com metabólitos

Uma amostra de 50 mL de cultura filtrada foi adicionada fria a 150 mL (8°C) de acetone e colocada para descansar a 4°C por 24 horas para precipitação de polissacarídeos. Após isso, duas fases foram observadas, uma fase branca no fundo e uma fase sem cor no topo. A fase sem cor, contendo acetona mais os metabolites foi transferida para um novo frasco e liofilizada.

Exemplo 7. Detecção de metabólitos antibacterianos por difusão

Discos de filtro de papel de 6 mm de diâmetro foram molhados com a culuta filtrada, ca. 10 μL, e colocados sobre o meio LPGA (para bactéria fitopatogenica) e meio LB (para bactéria patogênica), ambos meios contendo amostras de bactéria espalhadas sobre a superfície.

As placas foram incubadas a 4°C por 4 horas, para difusão de metabólitos no meio. Então foram incubados a 30°C por 48 horas (por bactéria fitopatogenica) e a 37°C por 24 horas (para bactéria patogênica).

Atividade antibacteriana foi determinada pela medida da inibição da zona de diâmetro (em mm) e a média foi feita de acordo com o numero de repetições.

Exemplo 8. Detecção de metabólitos antibacterianos pela técnica com cup- plate

Onze linhagens de R. solanacearum foram testadas. Bactérias foram cultivadas em LPGA sólido por cerca de 48 a 72 horas e então crescidas em 50 mL de LPG líquido e incubado a 28°C por 24 horas sob agitação. Diluições foram feitas pela remoção de amostras de 1 mL e adicionar 9 mL de solução de salina esterilizada de MgSO4 2 g/L.1 mL de cada diluição foi transferida para placas de Petri esterilizadas com LPGA a 40°C. Após solidificação do meio, cup-plate foram feitas com tubos de teste de 6 mm de diâmetro.

Cada amostra recebeu 100 μL de cultura de fungo filtrada. As placas foram incubadas a 28°C por 24 hours e observadas para inibição dos halos das bactérias medidos com um caliper.

Example 9. Partição da cultura filtrada

Testes de partição foram realizados em 2 L de frascos de separação, contendo 300 mL de cultura filtrada e 300 mL de hexano. O frasco foi gentilmente agitado e aberto para a liberação de vapores. O sistema foi colocado para descansar até a fase de separação ficar evidente. A fase do hexano foi separada da fase aquosa.

A fase aquosa foi colocada em um frasco contendo 300 mL de diclorometano. O frasco foi gentilmente agitado e abertopara liberação de vapores. O sistema foi colocado para descansar até a fase de separação ficar evidente. A fase de diclorometano foi separada da fase aquosa.

O processo foi repetido com diferentes solvents até o aumento da polaridade.

A fase aquosa sofreu mais duas extrações: uma vez com 300 mL de etil acetato e três vezes com 300 mL de butanol por vez.

Todos os extratos (hexano, diclorometano, etil acetato and butanol) tiveram seus solvents evaporados sob pressão reduzida e temperaturas adequadas.

O resíduo formado após cada evaporação foi transferido para recipients adequados e protegido com folhas de alumínio.

A fase aquosa que restou foi congelada e então liofilizada.

Exemplo 10, Ensaios biológicos com extratos de cultura filtrada

Os extrados obtidos a partir da cultura filtrada foram biologicamente testados para verificar qual fração contém o princípio ativo contra R.solanacearum detectado na cultura filtrada.

A linhagem R. so/anacearum V55 foi cultivada em LPGA a 28°C por 24 horas. Então ela foi transferida para um frasco contendo 50 mL de LPG, o qual foi incubado por 24 horas a 28°C sob agitação.50 μL de suspensão cellular de bactéria (108 UFC/mL - Colony Forming Unity) foram inoculados no centro da placa de LPGA com urn platinum loop através da técnica de espalhamento da placa {spreadplate technique).

Discos de filtro de papel de 6 mm foram molhados com 10 μL de extratos e secos por uma hora e meia até a evaporação do solvente. Então eles foram colocados sobre as placas de LPGA, as quais foram incubadas a 28°C por 24 horas e observadas quanto a inibição dos halos das bactérias, medidas com um caliper digital.

Os controles usados foram discos com água, methanol, diclorometano e disco de filtro de papel seco.

Os extratos crus e semi-purificados apresentaram atividade antibacteriana contra R. solanacearum. A inibição do halo foi maior para a fração hexanica (10.7 mm de diâmetro) quando comparado com fração diclorometanica (7.4 mm de diâmetro).

Exemplo 11. Análise de constituintes de extratos químicos por cromatografia de camada fina comparativa (TLC comparativa)

Os extratos obtidos a partir dos experimentos de partição foram analisados por cromatografia de camada fina. Para cada extrato, um solvente adequado para sua solubilização foram determinados. O processo começa com solventes de baixa polaridade até obter um extrato limpo sem partículas em suspensão ser obtido.

As amostras foram aplicadas em silica gel GF254 Merck chromatopapers 5 (5x3 cm) e testadas em diferentes solventes para escolher um sistema de eluição adequada. As placas foram observadas sob lâmpada UV (254 e 366 nm) e então reveladas com vanilina sulfúrica e aquecimento (110°C) até a observação de cor.

Os resultados revelaram que os terpenóides e esteróides estão 10 presentes nos extratos.

Exemplo 12. Análise de espectroscopia infravermelha

As amostras foram solubilizadas em solventes adequados e aplicadas a superfície de um pellet KBr. A leitura foi realizada na faixa de 4000 a 400 cm’1 de espectro infravermelho.

O espectro IR da cultura filtrada apresentou regiões típicas de uma mistura de substâncias sugerindo, além de outras funções, álcoois e carbonils. O espectro das fases de acetato e butanol foram similares. O espectro das fases de hexano e diclorometano também foram similares, mostrando a presence de ácidos graxos e ausência de proteínas.

Claims

1. Composição antimicrobiana compreendendo extrato de fungo CARACTERIZADA por compreender: a. de 1% m/m a 99% m/m de um extrato de fungo Trametes sp. 11E4 e b. veículo adequado.

2. Composição antimicrobiana, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de o referido veículo adequado ser composições agrícolas, farmacêuticas e combinações destas.

3. Processo de produção do extrato de fungo conforme descrito na reivindicação 1 CARACTERIZADO por compreender as etapas de: a. cultivo de pelo menos um fungo Trametes sp. 11E4 em meio líquido adequado; e b. filtragem do meio líquido.

4. Processo de produção do extrato de fungo, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato do meio líquido compreender uma mistura de batata, dextrose, ágar-ágar, glicose, peptona, extrato de levedura e água com pH 6.6.

5. Processo de produção do extrato de fungo, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato da cultura ocorrer no escuro e a uma temperatura entre 25oC a 30oC.

6. Processo de produção do extrato de fungo, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato da cultura ocorrer em um período de 7 a 60 dias.

7. Processo de produção do extrato de fungo, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato da cultura ocorrer em um período de 30 dias.

8. Processo de produção do extrato de fungo, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato do fungo ter sido cultivado previamente em um meio sólido.

9. Processo de produção do extrato de fungo, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato do meio filtrante ter sido armazenado a aproximadamente 4oC, antes de ser utilizado.

10. Processo de produção do extrato de fungo, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de compreender uma etapa de extração com um solvente orgânico.

11. Processo de produção do extrato de fungo, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de o solvente orgânico ser escolhido de um grupo compreendendo hexano, diclorometano, acetato de etil, butanol, acetona e combinações destes.

12. Processo de produção do extrato de fungo, de acordo com a reivindicação 3 ou 10, CARACTERIZADO pelo fato de compreender uma etapa adicional de liofilização.

13. Método de proteção de plantas, CARACTERIZADO pelo fato de compreender a etapa de contato de plantas com uma composição formada por: a. extrato de fungo Trametes sp. 11E4 conforme descrito na reivindicação 1; e b. veículo adequado.

14. Método, de acordo com a reivindicação 13, CARACTERIZADO pelo fato das plantas serem escolhidas de um grupo compreendendo sementes, bulbos, flores, caules, folhas, raízes expostas, e frutos como uvas, peras, maçãs, pêssegos, nectarinas, toranjas, cerejas, damascos, limões, limas, laranjas, manga, banana, abacaxi, tangerinas, tomates, batata, ervilha, alfafa, repolho, trevo, couve, lentilha, soja, batata-doce, rabanete, algodão, girassol, colza, chicória, grão-de-bico, sorgo, cebola, coco, lírio, cana-de- açúcar, pepino, abóbora, abobrinha, berinjela, pimenta- chili, pimentão, tabaco, amendoim, alface, melão, gengibre, arroz, milho, trigo, aveia, cevada, centeio, milheto, erva- daninha, gerânios, dama-da-noite, amêndoas e combinações destas.

15. Método, de acordo com a reivindicação 13, CARACTERIZADO pelo fato de a composição ser útil contra bactérias pertencentes aos gêneros Staphylococcus, Ralstonia, Escherichia, Salmonella, Pseudomonas, Bacillus, Streptococcus e combinações destas.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, CARACTERIZADO pelo fato de as bactérias serem escolhidas de um grupo compreendendo E. coli, S. aureus, B. cereus, S. anatum, R. solanacearum e combinações destas.