JPS61130235A - 感染症治療薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は食細胞機能賦活剤、さらに詳しくは、特定の組
成を有する液体培地で培養したマンネンタケ菌糸体培養
物を有効成分とする、食細胞の機能を賦活し、ヒトやそ
の他の哺乳動物における細菌やウィルスなどによる感染
症や悪性腫瘍を治療するのに有用な医薬および獣医薬組
成物に関する。

発明の背景 好中球などの食細胞は生体内において、外界からの異物
を貧食、消化し、無毒化することにより生体防禦に重要
な役割を果たしている。近年、細菌やウィルスなどによ
る感染症や悪性腫瘍において、宿主の食細胞やリンパ球
などの機能か低下しており、これらの機能か低下すると
、感染症かおこりやすく、また、重４寞化することが判
明している。このような事情から、食細胞やリンパ球の
機能賦活について種々研究がなされ、すでに、リンパ球
機能賦活に有用な薬剤が開発され、悪性腫瘍や感染症の
治療に用いられている。しかしなから、食細胞機能を賦
活する薬剤としては、レバミゾールなどの数種のものか
知られているにすぎない。

一方、マンネンタケはヒダナンタケ目サルノコ７カケ科
に属する担子菌で、霊芝ともいわれ、古くから生薬とし
て珍重されており、最近、その成分の薬理作用が種々研
究されている。しかしなから、マンネンタケが食細胞機
能賦活作用を打するとの報告は未だ見当たらない。

本発明音らはマンネンタケの薬理作用について種々研究
を重ねる間に、轡外にも、本出願人の特願昭５８−１５
１８４６号に開示されろごとく、特定の組成を有する液
体培地で液体培養しんマンネンタケ菌糸体培養物が食細
胞の運動作用等を冗進し、食細胞機能の賦活に有効であ
ることを見出し、本発明を完成するにいたった。

発明の概要 本発明は、グルコース０２〜１０Ｗ／Ｖ％および小麦胚
芽０２〜２Ｗ／Ｖ％を含有する液体培地中でマンネンタ
ケ菌糸体を培養して得られた培養物を有効成分としてな
る食細胞機能賦活剤を撓供するものである。該マンネン
タケ菌糸体培養物は非常に低毒性であり、本発明の食細
胞機能賦活剤は感染症や悪性腫瘍の治療のため、通常、
経口または外用によりヒトまたは他の哺乳動物に投与す
るのに有用である。

発明の詳細 な説明の食細胞機能賦活剤の有効成分として配合するマ
ンネンタケ菌糸体培養物とは、面記の特願昭５８−１５
１８４６号に記載の方法に従ってマンネンタケ菌糸体を
液体培養して得られる全培養物濃縮物、菌糸体を分離し
た培養液濃縮物、分離菌糸体あるいは、全培養物、培Ｉ
ｒｆｆ１、それらの濃縮物または分離菌糸体の溶媒抽出
物を包含する。

すなわち、本発明に用いるマンネンタケ菌糸体培養物を
得るには、まず、マンネンタケ種菌糸をグルコースおよ
び小麦胚芽を必須成分とする液体培地中で液体培養する
。

該培地成分として用いるグルコースおよび小麦胚芽は培
地成分として通常人手しうるらのであればいずれでもよ
い。グルコースは培地全量に基いて０．２〜Ｉ　ＯＷ／
Ｖ％、好ましくは、Ｉ　〜８Ｗ／■％の割合で用いる。

グルコースの量が０２Ｗ／Ｖ％より低くても、また、１
０Ｗ／Ｖ％を超えても菌糸体の収量が低下する。小麦胚
芽は培地全量に基いて０２〜２Ｗ／Ｖ％、好ましくは、
０５〜Ｉ　、　ＯＷ／Ｖ％の割合で用いる。小麦胚芽の
量も０　、２　Ｗ／Ｖ％より低いと菌糸体の収量か低下
し、また、２Ｗ／Ｖ％を超えると経済的に不利となる。

ことに、該液体培地中の小麦胚芽・グルコースの重量比
を１１〜８とすることか好ましく、これにより、マンネ
ンタケ菌糸体の収率か向上する。

所望により、該液体培地には、リン、マンガン、マグ不
ノウム、カルシウム、鉄などの塩類のごときミネラル成
分や、他の穀類胚芽、米ぬか、コーン・ステイープ・リ
カー、ヒダミノ類、核酸類、澱粉、アミノ酸類、酵母エ
キス、ペプトンなどのごとき他の栄養成分を適宜添加し
てもよい。

該液体培地は常法に従って調製することかでき例えば、
所定の各成分を滅菌水に添加し、分散、溶解させる。得
られた培地は、通常、１２０〜１３０℃で、１５〜３０
分間滅菌処理した後、マンネンタケ菌糸体の培養に用い
られる。

マンネンタケ菌糸体の培養は、該液体培地に適当量の種
菌糸を接種し、好気的条件下に行なわれる。

用いる種菌糸は担子菌類に属するヒダナノタケ目サルノ
コノカケ科マン不ノタケの乙のであればいずれでもよく
、例えば、（株）同村式椎茸研究所（静岡県藤枝市青葉
町ｌ−１−１１）より人手できる。

通常、種菌糸の接種量は約５〜ｌ　Ｏｘ９／　Ｉ　００
ｚＱ培地で十分であり、２００〜３００ｒ、ｐ、ｍの攪
拌下、温度２５〜３０℃、通気ｆｉ　０　、５〜３．Ｑ
Ｖ、　ＶＩｌｌ、で７〜２１日間暗所において培養を行
なうことにより、マンネンタケ菌糸体が高収率で得られ
る。

培養終了後、全培養物（菌糸体と培養液の混合物）また
はそれから菌糸体を分離した培養液を、例えば、減圧下
、４０〜５０℃でａ縮し、所望により乾固し、要すれば
、濃縮乾固の前または後に常法に従って粉砕して本発明
の食細胞機能賦活剤に用いるマンネンタケ菌糸体培養物
を得る。培養物から菌糸体の分離は濾過、遠心分離など
の常法に従って行なうことかできる。

分離した菌糸体は、一般に、径ｌ〜５ｍｍの球状を呈し
ており、これも、例えば、減圧下、４０〜５０°Ｃで乾
燥し、粉砕し、マンネンタケ菌糸体培養物として本発明
の食細胞機能賦活剤に用いることができる。

また、本発明においては、全培養物、菌糸体を分離した
培養液、それらのａ輸動または乾固物あるいは分離した
菌糸体またはその乾燥物の溶媒抽出物も同様に用いるこ
とができる。

かかる抽出は、必要により、適宜菌糸体を切断した後、
水、アルコール（ＩＭＩえば、メタノール、エタノール
、ｎ−ブタノールなど、クロロホルム、エーテル、酢酸
エチル、ベンゼン、ヘキサンおよびこれらの混合液溶媒
（例えば、５０％エタノール水溶液、８０％メタノール
水溶液など）からな曝る群から選ばれる溶媒を用いて行
なわれる。該抽出は、一般に、被抽出物に対して重量比
約１０〜１００倍の溶媒を用い、１５℃〜溶媒の沸点ま
での温度で１〜２４時間行なう。通常、この操作を１〜
３回行なえば充分である。得られた抽出液を、好ましく
は、減圧下に４０〜５０℃で濃縮し、要すれば乾燥して
用いる。

これらのマンネンタケ菌糸体培養物は、一般に、ニンヒ
ドリン反応、α−ナフトール反応、フェーリング反応、
フェニルヒドラジン試薬反応、アンスロン−硫酸試薬反
応、ヒラレット試薬反応および塩化第二鉄試薬反応にお
いていずれら陽性であり、エルソン・モルガン反応にお
いては擬陽性を呈する。また、きわめて低毒性であり、
例えば、培養液濃縮乾固物はマウスおよびラットを用い
る急性毒性試験において、投与できる最高量の２，５９
７ｋｇの経口投与でも死亡例はなかった。

かくして、本発明の食細胞機能賦活剤は通常の製剤化技
術に従って、該マンネンタケ菌糸体培養物を医薬または
獣医薬担体と合して、好ましくは、経口投与または外用
に適した網形、例えば、散剤、錠剤、カプセル剤、軟膏
剤、液剤などとすることができる。本発明の食細胞機能
賦活剤は感染症や悪性腫瘍の治療のためにヒトやその他
の哺乳動物に、好ましくは、経口や外用経路で投与する
ことができる。例えば、ヒトの場合、チェディアク−東
症候群、レイジ−ロイコサイト症候群、慢性肉芽腫症や
、若年性歯周疾患などの食細胞機能異常による感染症の
治療にきわめて有用である。投与量は用いるマンネンタ
ケ菌糸体培養物の種類、治療すべき症状、投与経路など
によって適宜選択できるが、例えば、成人Ｘ日当たり、
マンネンタケ菌糸体抽出物粉末の場合５０〜３０００ｚ
９、培養液濃縮乾固物の場合、！００〜５０００ｕ程度
が好ましい。

実施例 つぎに参考例および実施例を挙げて本発明をさらに詳し
く説明する。

参考例 ジャーファーメンタ−を用いてマンネンタケ菌糸体の培
養をっぎのとおり行なった。

ツヤ−ファーメンタ−（ｌ　ＯＱ容）のジャー中でグル
コース１００ｇおよび小麦胚芽２５ｇを、ＩＵＩ冷却し
た水道水５Ｑと混合し、ついで、ジャーを密栓して１２
＋’ｃで３０分間オートクレーブ処理して液体培地を調
製した。ジャーをツヤ−ファー　゛メンターに取り付け
、同じ培地で２５℃、１４日間振盪培養した種菌糸培養
物１５０ｚ＆を無菌条件下に接種した。３００ｒ　　ｐ
　１１１　の攪拌下、３０Ｑ／分の流速で空気を通気し
ながら、２８℃にて１４日間培養しん。得られた培養物
をガーゼて濾過して菌糸体０．８４に９（湿潤量ｆｆ１
）および培養液３．５ｅを得た。

分離した菌糸体に水２ｅを加え、９０〜１００℃で３時
間加熱抽出し、抽出液を減圧下、４０℃で濃縮乾固して
、茶褐色無品性の粉末状培養物２５２を得た。

また、分離した培養液を減圧下、４０℃で濃縮乾固し、
茶褐色無品性の粉末状培養物５５ｇを得た。

実施例１ 顆粒剤 成分　　　　　　　　量 マンネンタケ菌糸体培養物（参考例　　　　２５ｇで得
られた培養液の濃縮乾固粉末） 乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　　５０７とうら
ろこし澱粉　　　　　　　　　　　２３ｇメチルセルロ
ース　　　　　　　　　　　　２９マンネンタケ菌糸体
培養物、乳糖およびとうもろこし澱粉を均一に混合し、
これにメチルセルロースの水溶液を加え、湿式顆粒造粒
法により顆粒を調製する。この顆粒を２００ηつつステ
ィック包装して投与単位形の経口投与用顆粒剤を得る。

実施例２ 錠剤 成分　　　　　　　　量 マンネンタケ菌糸体培養物（参考例　　　　３０ｇで得
られた培養液の濃縮乾固粉末） 乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　　４０９とうも
ろこし澱粉　　　　　　　　　　　２６ｇ。

メチルセルロース　　　　　　　　　　　　２９ステア
リン酸マグネンウム　　　　　　　　２ｇ実施例１と同
様にして顆粒を間装する。この顆粒を乾燥し、ステアリ
ン酸マグネノウムと混合した後、圧縮打錠して２５０ｚ
ｙの投与単位形の経口投与用錠剤を得る。

実施例３ カプセル剤 成分　　　　　　　　量 マンネンタケ菌糸体培養物（参考例　　　４０ｇで得ら
れた培養液の濃縮乾固粉末） 乳ｖＪ　　　　　　　　　　　　　　　　　４８ｇノヨ
糖脂肪酸エステル　　　　　　　　　　２ｇこれらの成
分を均一に混合し、Ｎｏ、！ハードゼラチンカプセルに
５００ｚｇづつ充填して投与単位形の経口投与用カプセ
ル剤を得る。

実施例４ 軟膏剤 成分　　　　　　　　量 マンネンタケ菌糸体培養物（参考例　　　　ｔａｙで得
られた菌糸体培養物の５０％エ タノール抽出物） 白色ワセリン　　　　　　　　　　　　　　３０９セタ
ノール　　　　　　　　　　　　　　　１８９ラウロマ
クロゴール　　　　　　　　　　０，５ｇセスキオレイ
ン酸ソルビタン　　　　　　　′５９パラオキシ安息香
酸メチル　　　　　　　０．１ｇパラオキン安息香酸ブ
チル　　　　　　　０．１ｇ精製水　　　　　　　　　
　　全量１００ｇに調整白色ワセリン、セタノール、パ
ラオキン安息香酸ブチル、ラウロマクロゴールおよびセ
スキオレイン酸ソルビタンを７５℃に保ちなから、パラ
オキン安息香酸メチルと精製水を加え、８０℃に加温し
て混合、溶解する。加温をやめ、攪拌下に固化させ、マ
ンネンタケ菌糸体培養物を加え、混合して軟膏剤を得る
。

発明の効果 マンネンタケ菌糸体培養物の食細胞機能賦活作用を試験
した。以下にその結果を示す。

（１）好中球の運動能に対する作用（（）ヒト末梢血か
ら好中球を分離し、ボイデン・チャンバーを用い、マン
ネンタケ菌糸体培養物の好中球のランダム運動能および
走化性に対する作用を測定した。

２．５Ｘ　ｌ　Ｏ”個／ｆ＋２の好中球懸濁液にマンネ
ンタケ菌糸体培養物（参考例で得られた培養液の濃縮乾
固粉末）１〜１０００μ９７ＲＱを加え、・３７℃で１
５分間インキュベーノヨン後、チャンバー上部に加え、
下部に、ランダム運動能の測定においてはＰＢＳを、走
化性の測定においては２　Ｘ　Ｉ　ａ＝ＭのＮ−ホルミ
ル−メチオニル−ロインルーフェニルアラニンを加え、
３７℃で１〜３時間イノキュベーンヨンした。ついで、
フィルターを固定し、ヘマトキシリン染色後、フィルタ
ーの底部まで遊走した好中球数を顕微鏡下で計数した。

対照として、マンネンタケ菌糸体培養物を加えずに同様
に試験を行った。対照の計数値を（００％とした場合の
、マンネンタケ菌糸体培養物添加時の相対的割合を第１
表に示す。

第１表に示すごとく、マンネンタケ菌糸体培養物は好中
球のランダム運動能、走化性を兵に増強する。

（２）好中球の運動能に対する作用（■）好中球の走化
性が低下している若年性歯周疾患患者の末梢血から好中
球を分離し、（１）と同様に好中球の走化性に対するマ
ンネンタケ菌糸体培養物（培養液の濃縮乾固粉末）の作
用を試験した。対照として、マンネンタケ菌糸体培養物
を添加せずに健常人の末梢血好中球および該患者の末梢
血好中球を用いて同様に試験し、対照の健常人好中球の
計数を１００％とした場合の、各々の相対的割合を算出
した。その結果、対照の患者の好中球の走化性は６Ｉ±
４％、マンネンタケ菌糸体培養物１０μ９／ＩＱを加え
た患者の好中球の走化性は８１±９％であった。

この結果から明らかなごとく、マンネンタケ菌糸体培養
物は患者の走化性の低下した好中球の機能を高め、健常
人のレベルに回復させる作用を有する。

（３）好中球の賞金能に対する作用 ヒト末梢血から好中球を分離し、２．５Ｘ　ｌ　Ｏ’個
／ｌ（ｌの好中球懸濁液を調製した。この懸濁液９００
μＱにマンネンタケ菌糸体培養物（培養液の濃縮乾固粉
末）０．０１−１００μ９／ＩＩＱ加え、３７℃で１５
分間インキユベーノヨンした。フルオレセインイソチオ
シアネート標識オプソニン処理した黄色ブドウ状球菌（
ｒＦＯ１３０７２）懸濁液（！×１０＠個／１１２）　
ｌ　Ｏｏ　μ（！を加え、３７℃テ１５分間インキユベ
ーンヨンした。ついで、蛍光顕微鏡下で、１００個の好
中球に取り込まれた菌体散を計数した。対照として、マ
ンネンタケ菌糸体培養物を加えずに同様に試験を行った
。対照の計数値を１００％とした場合の、マンネンタケ
菌糸体培養物添加時の相対的割合を第２表に示す。

第２表 第２表に示すごとく、マンネンタケ菌糸体培養物は好中
球のａ良能を約２倍も高める。

（４）緑膿菌感染に対するｉｎ　ｖｉｖｏ試験ｆｃＲマ
ウス（体重２０〜２５ｇ、１群雌雄５匹づつ、計ｌＯ匹
）にマンネンタケ菌糸体培養物（培養液の濃縮乾固粉末
）水溶液（培養物１　所／　ｋｇ）を、１日１回、３日
間連続して腹腔内投与し、最終投与後、緑膿菌（Ｐ−１
株、医科研）２．５Ｘ１０’個を腹腔内に接種し、２４
時間後の生存率を測定した。対照として、マンネンタケ
菌糸体培養物水溶液の代わりに同量の飲料水を投与して
同様に生存率を測定した。その結果、対照群の生存率は
０％であったが、マンネンタケ菌糸体培養物投与群の生
存率は２０％であり、マンネンタケ菌糸体培養物は明ら
かに緑膿菌感染に対する抵抗性を高めた。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）グルコース０．２〜１０Ｗ／Ｖ％および小麦胚芽
   ０．２〜２Ｗ／Ｖ％を含有する液体培地中でマンネンタ
   ケ菌糸体を培養して得られたマンネンタケ菌糸体培養物
   を有効成分としてなることを特徴とする食細胞機能賦活
   剤。