BRPI0720884A2 - Radiorrotulação por meio de fluoração de aziridinas - Google Patents

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Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "RADIORRO- TULAÇÃO POR MEIO DE FLUORAÇÃO DE AZIRIDINAS".
Campo da Invenção:
A presente invenção refere-se a novos compostos adequados para rotulação ou já rotulados com um isótopo de flúor apropriado, preferen- cialmente 18F1 métodos para preparar os referidos compostos, composições compreendendo os referidos compostos, kits compreendendo os referidos compostos ou composições e usos dos referidos compostos, composições ou kits para diagnóstico por formação de imagens, preferencialmente para tomografia de emissão de pósitron (PET).
Antecedentes da Técnica:
Estudo por imagens moleculares tem o potencial de detectar a progressão da doença ou a eficácia terapêutica mais cedo do que a maioria dos métodos convencionais nos campos da oncologia, neurologia e cardio- logia. Das várias tecnologias promissoras de estudo por imagens molecula- res que foram desenvolvidas como estudo por imagens óticas e MRI, Tomo- grafia por Emissão de Pósitrons (PET) é de particular interesse para o de- senvolvimento de fármacos devido a sua alta sensibilidade e à capacidade de proporcionar dados quantitativos e cinéticos.
Durante os últimos anos, tem aumentado a varredura in vivo u- sando PET. PET é tanto uma ferramenta médica quanto de pesquisa. É u- sada abundantemente em oncologia clínica para estudo por imagens médi- cas de tumores e pesquisa para metástases, e para diagnóstico clínico de algumas doenças cerebrais difusas tais como as que causam vários tipos de demências. Radiotraçadores consistindo em um radionuclídeo ligado de mo- do estável a uma biomolécula são usados para estudo por imagens in vivo dos distúrbios.
No projeto um traçador radiofarmacêutico eficaz para uso como um agente de diagnóstico, é imperativo que os fármacos tenham proprieda- des de direcionamento e farmacocinéticas in vivo apropriadas. Fritzberg e outros., J. Nucl. Med., 1992, 33: 394, determinam adicionalmente que quími- ca de radionuclídeos e ligações associadas salientam a necessidade de oti- mizar modificações químicas de fixação e rotulação do veículo da biomolé- cula. Portanto o tipo de radionuclídeo, o tipo de biomolécula e o método u- sado para ligar estes um ao outro pode ter um efeito crucial sobre as propri- edades dos radiotraçadores.
Os radionuclídeos usados em PET scan são tipicamente isóto- pos com meias-vidas curtas tais como 11C (-20 min), 13N (-10 min), 15O (-2 min), 68Ga (-68 min) ou 18F (-110 min). Devido a suas meias-vidas curtas, os radionuclídeos devem ser produzidos em um ciclotron o qual não está distante demais no tempo de liberação do PET scanner. Estes radionuclí- deos são incorporados em compostos biologicamente ativos ou biomolécu- Ias que têm a função de veicular o radionuclídeo dentro do corpo para o sí- tio-alvo, por exemplo, ao tumor.
Isótopos emissores de pósitrons incluem carbono, nitrogênio, e oxigênio. Estes isótopos podem substituir seus complementos não-radioativo em compostos alvo para produzir traçadores que funcionam biologicamente e são quimicamente idênticos às moléculas originais para estudo por ima- gens de PET. Por outro lado, 18F é o isótopo de rotulação mais conveniente devido a sua meia-vida relativamente longa (109,6 min) a qual permite a preparação de traçadores de diagnóstico e estudo subsequente de proces- sos bioquímicos. Além disso, sua baixa energia β+ (635 keV) também é van- tajosa.
Traçadores de PET são ou frequentemente incluem uma molé- cula de interesse biológico. Biomoléculas desenvolvidas para uso em PET têm sido pretendidas numerosamente para direcionamento específico no paciente como, por exemplo, FDG, FLT, L-DOPA, metionina e deoxitimidina. Devido a seu uso específico, as biomoléculas referidas são frequentemente designadas como "agentes de direcionamento".
Peptides são biomoléculas que desempenham um papel crucial em muitos processos fisiológicos incluindo ações como neurotransmissores, hormônios e antibióticos. Pesquisa tem mostrado sua importância em cam- pos tais como neurosciência, imunologia, farmacologia, e biologia celular. Alguns peptídeos podem agir como mensageiro químico. Ligam ao receptor sobre a superfície celular-alvo e o efeito biológico do Iigante é transmitido para o tecido-alvo. Portanto a propriedade de ligação do receptor específico do Iigante pode ser explorada rotulando o Iigante com um radionuclídeo. Te- oreticamente, a alta afinidade do Iigante pelo receptor facilita retenção do 5 Iigante radíorrotulado em tecidos expressando receptor. No entanto, ainda está sob investigação quais peptídeos podem ser rotulados de modo eficaz e sob quais condições a rotulação pode ocorrer. É de conhecimento geral que a especificidade do receptor de um peptídeo Iigante pode ser alterada duran- te reação química. Portanto deve ser determinado um construto peptídico 10 ótimo.
Tumores superexpressam vários tipos de receptores aos quais os peptídeos ligam especificamente. Boerman e outros., Seminar in Nuclear Medicine, July, 2000, 30,(3)] 195-208, proporcionam uma lista não completa de peptídeos ligando a receptores envolvidos em tumores, isto é, somatosta- 15 tina, peptídeo intestinal vasoativo (VIP), bombesina ligando a receptor de peptídeo de liberação de gastrina (GRP), gastrina, colecistocinina (CCK), e calcitonina.
A ligação do radionuclídeo á biomolécula é feita por vários mé- todos resultando na presença ou não de um Iigante entre o radionuclídeo e a 20 biomolécula. Portanto, são conhecidos vários ligantes. C.J.Smith e outros., "Radiochemicai investigations of 177Lu-DOTA-8-Aoc-BBN[7-14]NH2: an in vitro/in vivo assessment of the targeting ability of this new radiopharmaceuti- cai for PC-3 human prostate cancer cells.'' Nuci Med. Bio., 2003, 30(2): 101- 9, descrevem bombesina radiorotulada em que o Iigante é DOTA-X onde X é 25 um carbono tether. No entanto, o radiorrotulador 177Lu (meia-vida de 6,5 di- as) não corresponde à meia-vida biológica da bombesina nativa que torna a 177Lu-DOTA-X-bombesina um radiotraçador não-apropriado para estudo por imagens de tumores.
E. Garcia Garayoa e outros., "Chemical and biological characte- rization of new Re(CO)3/f9mTc](CO)3 bombesin analogues." Nuci Med. Bi- ol., 2007: 17-28, descrevem um espaçador entre o radionuclídeo [99mTc] e a bombesina em que o espaçador é -β-Ala-p-Ala- e ácido 3,6-dioxa-8-amino- * octanoico. E. Garcia Garayoa e outros, concluem que o diferente espaçador não tem um efeito significativo sobre a estabilidade ou sobre a afinidade do receptor.
Ligantes listados acima foram designados especificamente para 5 um tipo específico de radionuclídeo e determinam o tipo e condições quími- cas do método de radioligação.
Mais recentemente, peptídeos foram conjugados a queladores macrocíclicos para rotulação de 64Cu186Y, e 68Ga para aplicação de PET. No entanto, os radionuclídeos referidos interagem com o catabolismo in vivo 10 resultando em efeitos fisiológicos indesejados e fixação de quelato.
Têm sido publicados vários métodos de radiofluoração usando diferentes materiais precursores ou de partida para obter peptídeos rotula- dos com 18F. Devido ao menor tamanho dos peptídeos, tanto maiores pro- porções de alvo-para-antecedentes quanto rápido limpeza sanguíneo podem 15 ser frequentemente obtidos com peptídeos radiorrotulados. Portanto, isóto- pos de tomografia por emissão de pósitrons (PET) de vida curta são candi- datos potenciais para rotular peptídeos. Entre uma série de nuclídeos emis- sores de pósitrons, flúor-18 parece ser o melhor candidato para marcar pep- tídeos bioativos em virtude de suas características físicas e nucleares favo- 20 ráveis. A principal desvantagem de marcar peptídeos com 18F é a prepara- ção laboriosa e que consome tempo dos agentes de rotulação de 18F. Devi- do á natureza complexa dos peptídeos e vários grupos funcionais associa- dos à estrutura primária, Peptídeos rotulados com 18F não são preparados por fluoração direta. Portanto, dificuldades associadas à preparação de pep- 25 tídeos rotulados com 18F foram aliviadas com o emprego de grupos prostéti- cos conforme mostrado abaixo. Vários grupos prostéticos referidos têm sido propostos na literatura, incluindo N-succinimidil-4-[18F] fluorobenzoato, m- maleimido-N-(p-[ 18F]fluorobenzíl)-benzamida, N-(p-[18F]fluorofenil) maleimi- da, e 4-[18F]fluorofenacilbrometo. Quase todas as metodologias corrente- 30 mente usadas atualmente para a rotulação de peptídeos e proteínas com 18F utilizam ésteres ativos do synthon rotulado com flúor. X-PEPTIDEO is
:U 18
F-^JKpeptideo
= alifático, aromático ou hetero-aromático, alicíclico
ΠίΛ
= GRUPO PROSTÉTICO
RM = porção reativa
LG = Grupo de partida que pode ser substituído por F18 X = grupo funcional para reação com RM)
Okarvi e outros., ''Recent progress in fluorine-18 Iabelled peptide
radiopharmaceuticals." Eur. J. Nuci Med., July 2001, 28(7): 929-38, apre- sentam uma revisão dos recentes desenvolvimentos em peptídeos biologi- camente ativos rotulados com 18F usados em PET.
for targeting GRP receptor-expressing prostate cancer." J. Nucl. Med., 2006, 47(3): 492-501, referem-se ao método de 2 etapas detalhado acima. [Lys3]Bombesina ([Lys3]BBN) e ácido-bombesina(7-14) aminocaproico (Aca- BBN(7-14)) foram rotulados com 18F ligando o grupo Lys3 amino e o grupo 15 Aca amino, respectivamente, com N-succinimidil-4-18F-fluorobenzoato (18F- SFB) sob condição ligeiramente básica (pH 8,5). Infelizmente, o 18F-FB- [Lys3]BBN obtido é relativamente metabolicamente instável tendo por resul- tado redução da extensão do uso do 18F-FB-[Lys3]BBN para estudo por i- magens de tumores confiável.
Poethko Thorsten e outros., ,,Two-step methodology for high-
yield routine radiohalogenation of peptides: 18F-IabeIIed RGD and octreotide analogues." J. Nucl. Med., May 2004, 45(5): 892-902, referem-se a um mé- todo de 2 etapas para rotulação de RGD e análogos de octreotida. O método
' j IP
descreve as etapas de radiossíntese do aldeído rotulado com F ou cetona e a ligação quimiosseletiva do aldeído rotulado com 18F ou cetona ao peptí- deo com funcionalidade amino-óxi.
routine clinicai imaging of somatostatin receptor-expressing tumors using positron emission tomography." Clin. Cancer Res., June 2004, 1,10(11): 3593-606, aplicam o método de 2 etapas para a síntese de análogos de T-
10
Zhang Xianzhong e outros., ''18F-IabeIIed bombesin analogues
Poethko Thorsten e outros., "First 18F-IabeIIed tracer suitable for < yr(3)-octreotato carboidratado rotulado com 18F (TOCA) com farmacocinética otimizada adequada para estudo por imagens de receptor de somatostatina (sst) de rotina clínica.
O requerimento de patente internacional N0 WO 2003/080544 A1 e o requerimento de patente internacional WO N0 2004/080492 A1 referem- se a métodos de radiofluoração de peptídeos bioativos para estudo por ima- gens de diagnóstico usando o método de 2 etapas mostrado acima.
Compostos rotulados com 18F estão ganhando importância devi- do a sua disponibilidade bem como devido ao desenvolvimento de métodos 10 para marcar biomoléculas. Foi demonstrado que alguns compostos rotulados com 18F1 produzem imagens de alta qualidade. Adicionalmente, a vida mais longa de 18F permitiria tempos mais longos de estudo por imagens e permite preparação de lotes de radiotraçadores para múltiplos pacientes e liberação do traçador por outros meios, tornando a técnica mais amplamente disponí- 15 vel para investigadores clínicos. Adicionalmente, observou-se o desenvolvi- mento de câmaras de PET e é crescente a disponibilidade da instrumenta- ção em muitos centros de PET. Portanto, é cada vez mais importante de- senvolver novos traçadores rotulados com 18F.
Várias abordagens para incorporar 18F em biomoléculas mais complexas como, por exemplo, peptídeos são descritas nas seguintes refe- rências: European J. Nucl. Med. Moi Imaging, 2001, 28: 929-938; European J. Nucl. Med. Mol. Imaging, 2004, 31: 1182-1206; Bioconjugate Chem., 1991, 2: 44-49; Bioconjugate Chem., 2003, 14: 1253-1259.
Estes métodos são indiretos. Demandam no mínimo um proce- dimento de duas etapas para síntese de traçador. Portanto gastam muito tempo deste modo reduzindo a resolução da imagem de PET em conse- qüência do decaimento nuclear.
O aspecto mais crucial no sucesso do tratamento de qualquer câncer é detecção precoce. Do mesmo modo, é crucial diagnosticar ade- quadamente os tumores e metástases.
A aplicação de rotina de peptídeos rotulados por 18F para estudo por imagens de receptores in vivo quantitativo de tecidos expressando re- ceptores e quantificação do status do receptor usando PET é limitada pela falta de métodos de radiofluoração apropriados para síntese de rotina em larga escala de peptídeos rotulados com 18F. Existe uma nítida necessidade de um método de radiofluoração que possa ser conduzido rapidamente sem 5 perda de afinidade do receptor pelo peptídeo e levando a um estudo por i- magens positivas (com fundo reduzido), em que o radiotraçador é estável e apresenta propriedades de limpeza reforçadas.
São conhecidas muito poucas publicações as quais descrevem a abertura de aziridinas por 18F:
L. Tron e outros, apresentam a reação de uma porção aziridina,
ativada por acila, com 18F" a 120°C na síntese de [18F]FNECA como um a- gente de rotulação de receptor de adenosina. O produto desejado foi obtido com uma produção de 1%. O precursor carregando a aziridina permaneceu essencialmente não-reagido. (Journal of Labelled Compounds and Radio- 15 pharmaceuticals, 2000, 43: 807-815.) Descobriu-se surpreendentemente que por uma diferente ativação da aziridina, pode ser observada completa con- versão em temperaturas muito menores para o produto de anel aberto dese- jado.
W. Feindel e outros., sintetizaram [18FjBFNU e [18FjCFNU, aná- Iogos do fármaco quimioterápico BCNU, por ataque nucleofílico de 18F-TBAF a 100 ou 145°C sobre o anel aziridina de uréias 1,3-substituídas em produ- ções um tanto baixas. (Canadian Journal Chemistry, 1984, 62: 2107-2112).
Os precursores de aziridina mencionados não podem ser ligados a funcionalidades químicas como funções aminas, tióis, oxidrilas, ácido car- boxílico ou outros grupos químicos de agentes de direcionamento complexos sem transformações adicionais conforme é realizado aqui, neste requerimen- to de patente.
Além disso, as altas temperaturas usadas não são aplicáveis a moléculas bioativas sensíveis como peptídeos usados como agentes de di- recionamento aqui, neste requerimento de patente.
Mesmo publicações sobre fluorações a frio existem em uma quantidade viável e preferencialmente realizadas com: < BF3 OEt2: Synlett 2004, 12: 2218-2220.; Red. Trav. Chim. Pays-
Bas 1992, 111(2): 59-68.;
HF Piridina (Olah's Reagent): Journal of Chemical Research, Synopses 1983, 10: 246-7.; Journal of the Chemical Society, Perkin Transac- 5 tions 1: Organic and Bio-Organic Chemistry, 1983, 9: 2045-51.; Journal of Organic Chemistry, 1981, 46(24): 4938-48.; Journal of Fluorine Chemistry, 1980, 16(3): 277-83.; Journal of Fluorine Chemistry, 1980, 16(2): 183-7.; Journal of Organic Chemistry, 1980, 45(26): 5328-33.; Tetrahedron Letters, 1980, 21(3): 289-92.; Journal of Fluorine Chemistry, 1990, 49(2): 231-46.;
Tetrahedron, 1987, 43(11): 2485-92.; Tetrahedron Letters, 1978, 35: 3247- 50.; Journal of Fluorine Chemistry, 1981, 18: 93-96.; Journal of Fluorine Chemistry, 1980, 16: 277-84.; Journal of Medicinal Chemistry, 1990, 33(9): 2603-2610.; Journal of Fluorine Chemistry, 1980, 16: 538-539.;
Piridíniopolihidrogêniofluoreto: Journal of Fluorine Chemistry,
1983, 23:481;
DAST: Tetrahedron, 1999, 55(48): 13819-13830; ou LiBF4: Journal of Organic Chemistry, 1989, 54(22): 5324-30; do que com reagentes de fluoração nucleofílica preferenciais em fluorações por 18F tais como
TBAF: Carbohydrate Research, 2003, 338(24): 2825-34; Journal
of Organic Chemistry, 1989, 54(22): 5324-5330; Carbohydrate Research, 1980, 83: 142-145; Tetrahedron Asymmetry, 2004, 15(20): 3307-3322;
KHF2: Carbohydrate Research, 1992, 230: 89-106; ou KF: Journal of Organic Chemistry, 2004, 69(2): 335-338.
Preparação de 2-fluoroetilaminas, -amidas e -sulfonamidas rotu-
ladas com 18F é normalmente realizada por procedimentos de no mínimo duas etapas aplicando 18F-2-fluoretilamina ou 2-bromofluoretano. A abertura de aziridinas apropriadas pode liberar similares motivos estruturais por sín- tese de etapa única.
Peptídeos contendo aziridinas são descritos em várias publica-
ções mas a finalidade de sua síntese, seu padrão de substituição e suas a- plicações são diferentes do uso como precursor para rotulação radioativa reivindicada aqui, neste requerimento de patente.
É descrito um método para modificação de peptídeo sítio- e es- tereosseletiva usando peptídeos contendo ácido aziridina-2-carboxílico para conjugação sítio-seletiva com vários tiol nucleófilos.
Journal ofthe American Chemical Society, 2005, 127(20): 7359-
7369. Journal of the American Chemical Society, 2004, 126(40): 12712- 12713.
Foi sintetizado um Iigante com uma cadeia lateral contendo azi- ridina designado para simular arginina e ligar de modo covalente no bolso P2 10 arginina-específico da glicoproteína do complexo de histocompatibilidade principal classe I (MHC) HLA-B27 o qual alquila especificamente cisteína 67. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 1996, 93(20): 10945-10948.
Foi preparada um aziridina contendo Iisina derivado como um inibidor de LSD1 potencial baseado em considerações estruturais e em ana- logia a estratégias conhecidas para bloquear amina oxidases. Journal of the American Chemical Society, 2006, 128(14): 4536-4537.
Moléculas pequenas com peptídeos modificados com aziridinas foram reivindicadas como compostos antidepressivos para tratar pacientes sofrendo de depressão. Requerimento de Patente Internacional WO N0 99/22758 A.
Adicionalmente, são descritos compostos de aziridina por R. Rocchiccioli e outros., "Alcalóides Peptidiques - I. Approche de Ia synthèse des alcalóides peptidiques. 2. Préparation d'ansapeptides à 15, 17 et 18 chainons", Tetrahedron, 1978, 34: 2917-26, para serem intermediários na síntese dos compostos do título.
I. Funaki e outros., "Synthesis of 3-aminopyrrolidin-2-ones by an intramolecular reaction of aziridinecarboxamides", Tetrahedron, 1996, 52: 9909-24, descrevem carboxamidas de aziridina N-substituídas para produzir 4,5-dissubstituídas-3-amino-y-lactamas.
T. Wakamiya e outros., "Synthesis of threo-3-methylsysteine from treonine", Buli. Chem. Soc. Jpn., 1982, 55(12): 3878-81, descrevem a * reação de derivados de ácido carboxílico de 3-metil-2-aziridina com ácido tiobenzoico para produzir 3-metilcisteína.
K. Nakayima e outros., ''Studies on 2-aziridinecarboxílico acid. Vil. Formation of dehydroamino acid peptides via isomerization of peptides 5 containing 2-aziridinecarboxílico acid by tertiary amines", Buli. Chem. Soc. Jpn., 1982, 55(10): 323-36, descreveram derivados de de-hidro-hidantoína sendo preparados por tratamento de derivados de ácido benziloxicarbonil-2- aziridinacarboxílico com aminas terciárias.
K. Okawa e outros., "Studies of hydroxy amino acids. V. Synthe- s/s and N-acylation of 3-methyl-L-azylylglycine benzyl ester", Chem. Letters, 1975: 591-94, descrevem derivados de aziridina como intermediários em reação de β-eliminação sobre derivados de hidróxi aminoácido.
K. Nakajima e outros., ''The reaction of peptides containing β- hydroxy-a-amino acid with Mitsunobu reagents", Peptide Chemistry, 1983, 20: 19-24, descrevem derivados de ácido carboxílico de 2-aziridina.
D. Tanner e outros., "Nucleophilic ring opening of C2-symmetric aziridines. Synthetic equivalents for the β-cation of aspartic acid", Tetrahe- dron Letters, 1990, 31(13): 1903-6; descrevem ésteres 2,3-aziridina- dicarboxílicos sofrendo ataque nucleofílico para produzir produtos derivados formalmente do β-cátion de ácido aspártico.
O requerimento de patente internacional WO N0 2001/32622 A1 descreve moduladores positivos de agonistas de receptores nicotínicos compreendendo (S)-(+)-2-benzil-1-(p-tolilsulfonil)aziridina a ser fluorado com HF.
Sz. Lehel e outros., ''Synthesis of 5'-N-(2-[18 FJFIuorethyI)-
carboxamidoadenosine: A promising tracer for investigation of adenosine receptor system by PET technique”, J. Labelled Cpd. and Radiopharm., 2000, 43: 807-815, descrevem um precursor de aziridina para obter o com- posto do título.
Foi reivindicada a preparação de Iigantes de peptídeos reativos
contendo aziridinas usados para alterar a cinética de ligação reagindo com a proteína quando ligados deste modo formando complexos covalentes Iigante peptídico-proteína. Requerimento de Patente Internacional WO N0 98/14208 A.
Portanto é um objetivo da presente invenção, desenvolver uma técnica prática e moderada para flúor radiorrotulação, em particular rotulação com 18F, de biomoléculas complexas como peptídeos em somente uma ao invés de duas ou mais etapas químicas de modo a economizar tempo, cus- tos e etapas de purificação adicional de compostos radioativos e a propor- cionar métodos de radiofluoração para obter radiotraçador baseados en pep- tídeos receptor- específicos para a detecção de tumores.
Sumário da Invenção
Em um primeiro aspecto, a presente invenção proporciona novos compostos compreendendo um anel aziridina sendo apropriadamente ativa- do para fins de radiorrotulação de preferencialmente uma etapa, em que um radical de agente de direcionamento, quer diretamente ou através de um Iigante apropriado, é fixado ao anel aziridina ou a um anel de cinco membros carboxíclico ou heterocíclico o qual é fundido ao anel aziridina. Estes com- postos são precursores para radiorrotulação de única etapa, isto é, radio- halogenação, mais preferencialmente radiofluoração.
Em um segundo aspecto, a presente invenção refere-se a com- postos obteníveis por uma reação de fluoração de abertura do anel do anel aziridina, especialmente por um isótopo de flúor, e a um sal farmaceutica- mente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, um hidra- to, complexo, éster, amida, solvato e pró-fármaco dos mesmos.
Em um terceiro aspecto, a presente invenção refere-se a com- postos fluorados e a sais farmaceuticamente aceitáveis de ácidos inorgâni- cos ou orgânicos dos mesmos, hidratos, complexos, ésteres, amidas, solva- tos e pro-drógas dos mesmos.
Em um quarto aspecto, a presente invenção refere-se a um mé- todo para preparar os referidos compostos reagindo compostos de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção com uma agente de fluoração apropriado, sob condições de reação apropriadas. O método referido com- preende a etapa de reagir um composto tendo qualquer uma das Fórmulas * químicas gerais I, Il e Ill com agente de fluoração.
Em um quinto aspecto, a presente invenção refere-se a uma composição compreendendo um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, um hidrato, 5 complexo, éster, amida, solvato ou pró-fármaco dos mesmos de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção ou um composto fluorado ou um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico dos mes- mos, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato ou pró-fármaco dos mes- mos, incluindo um composto sendo preparado com o método de acordo com 10 o quarto aspecto da presente invenção e adicionalmente um veículo, diluen- te, excipiente ou adjuvante farmaceuticamente aceitáveis.
Em um sexto aspecto, a presente invenção refere-se a um kit compreendendo um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, um hidrato, complexo, éster, a- 15 mida, solvato ou pró-fármaco dos mesmos de acordo com o primeiro aspec- to da presente invenção (precursor) junto com um veículo, diluente, excipien- te ou adjuvante aceitável suprido como uma mistura com o precursor ou pa- ra a fabricação de compostos fluorados de acordo com o terceiro aspecto. Em um aspecto adicional, a presente invenção refere-se a um kit compreen-
• 20 dendo um composto fluorado ou um sal farmaceuticamente aceitável de um
ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, um hidrato, complexo, éster, a- mida, solvato ou pró-fármaco dos mesmos de acordo com o terceiro aspecto da presente invenção ou uma composição de acordo com o quinto aspecto da presente invenção, por exemplo, em forma de pó, e um recipiente con- 25 tendo um solvente apropriado para preparar uma solução fisiologicamente aceitável do composto fluorado referido ou sal, hidrato, complexo, éster, a- mida, solvato ou pró-fármaco do mesmo ou da referida composição para administração dos mesmos a um animal, incluindo um ser humano.
Em um séticmo aspecto, a presente invenção refere-se ao uso de qualquer composto fluorado ou sal, hidrato, complexo, éster, amida, sol- vato ou pró-fármaco do mesmo, conforme definido acima, ou de uma com- posição respectiva ou kit, para diagnóstico por estudo por imagens, em par- ticular tomografia por emissão de pósitrons. Adicionalmente, a presente in- venção refere-se a um composto fluorado, mais preferencialmente rotulado com isótopo 18F, para uso como medicamento, mais preferencialmente para uso como agente de estudo por imagens para diagnóstico e mais preferenci- 5 almente para uso como agente de estudo por imagens para tomografia por emissão de pósitrons. Em outra variação deste aspecto, a presente invenção também refere-se a compostos fluorados, os quais são mais preferencial- mente rotulados com isótopo 19F e os quais têm Fórmula química geral II, para uso em provas biológicas e identificação cromatográfica.
Em um oitavo aspecto, a presente invenção refere-se a um mé-
todo para estudo por imagens de doenças, compreendendo introduzir em um paciente uma quantidade detectável de um composto rotulado tendo qual- quer uma das Fórmulas químicas gerais l-F-A, l-F-B, ll-F-A, ll-F-B, Ill-F-A e Ill-F-B ou B e B-A, respectivamente.
Descrição Detalhada da Invenção:
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, o termo "alquil", sozinho ou como parte de ou- tro grupo, refere-se a um grupo alquila de cadeia reta ou de cadeia ramifica- da com 1 a 20 átomos de carbono tal como, por exemplo, metila, etila, propi- 20 Ia, isopropila, butila, isobutila, terc-butila, pentila, isopentila, neopentila, hepti- la, hexila, decila. Grupos alquila também podem ser substituídos, tal como por átomos de halogeno, grupos oxidrila, grupos Ci-C4 alcóxi ou grupos C6- C12 aril (os quais, internos, também podem ser substituídos, tal como por 1 a 3 átomos de halogeno). Mais preferencialmente alquila é C1-Ci0 alquila, Cr 25 C6 alquila ou C-I-C4 alquila.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, o termo "cicloalquila" sozinho ou como parte de outro grupo, refere-se a cadeia mono- ou bicíclica de grupo alquila com 3 a 20 átomos de carbono tais como, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclo- 30 pentila, ciclohexila ou ciclo-heptila. Mais preferencialmente cicloalquila é C3- C-io cicloalquila ou C5-Cs cicloalquila, o mais preferencialmente C6 cicloalqui- la. » Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in-
venção e nas reivindicações, o termo "heterocicloalquila", sozinho ou como parte de outro grupo, refere-se a grupos tendo 3 a 20 átomos mono- ou bi- anel de uma cicloalquila; e contendo átomos de carbono e 1, 2, 3 ou 4 hete- 5 roátomos de oxigênio, nitrogênio ou enxofre. Mais preferencialmente hetero- cicloalquila é C3-C10 heterocicloalquila, C5-C8 heterocicloalquila ou C5-Ci4 heterocicloalquila, o mais preferencialmente C6 heterocicloalquila.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, o termo "aralquila" refere-se a radicais alquil arila substituídas tais como benzila, difenilmetila, trifenilmetila, feniletila, fe- nilbutila e difeniletila.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, os termos "arilóxi" referem-se a grupos aril ten- do um oxigênio através do qual o radical é fixado a um núcleo, exemplos dos quais são fenóxi.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, os termos "alquenil" e "alquinil" são similarmen- te definidos como para alquil, mas contêm no mínimo uma ligação carbono- carbono duplas ou triplas, respectivamente. Mais preferencialmente C2-C6 alquenila e C2-C6 alquinila.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, o termo "alquila não ramificado ou ramificado inferior" terá o seguinte significado: um radical monovalente ou divalente de cadeia reta ou ramificada, substituído ou não-substituído, consistindo subs- 25 tancialmente em carbono e hidrogênio, não contendo insaturação e tendo de um a oito átomos de carbono, por exemplo, mas não limitado a metila, etila, n-propila, n-pentila, 1,1-dímetiletila (t-butila), n-heptíla e similares.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, o termo "aralquenila" refere-se a estrutura a- romática (arila) acoplada a alquenila conforme definido acima.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, os termos "alcóxi (ou alquilóxi), arilóxi, e arai- quenilóxi" referem-se a grupos alquila, arila, e aralquenila respectivamente encadeados por um átomo de oxigênio, com a porção alquila, arila, e aral- quenila sendo conforme definido acima.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, os termos "sais de ácidos inorgânicos ou orgâ- nicos", "ácido inorgânico" e "ácido orgânico" referem-se a ácidos minerais, inclusive, mas não sendo limitados a: ácidos tais como ácido carbônico, ní- trico, fosfórico, clorídrico, perclórico ou sulfúrico ou os sais ácidos dos mes- mos tais como sulfato de hidrogênio de potássio, ou a ácidos orgânicos a- propriados os quais incluem, mas não estão limitados a: ácidos tais como ácidos alifático, cicloalifático, aromático, aralifático, heterocíclico, carboxílico e sulfônico, exemplos dos quais são ácido fórmico, acético, trifluoracético, propiônico, succínico, glicólico, glucônico, láctico, málico, fumárico, pirúvico, benzoico, antranílico, mesílico, fumárico, salicílico, fenilacético, mandélico, embônico, metanossulfônico, etanossulfônico, benzenossulfônico, fantotêni- co, toluenossulfônico, trifluormetanossulfônico e sulfanílico, respectivamente.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, o termo "arila" sozinho ou como parte de outro grupo refere-se a grupos aromáticos monocíclicos ou bicíclicos contendo de 6 a 12 átomos de carbono na porção do anel, preferencialmente 6 a 10 car- bonos na porção do anel, tais como fenila, naftila ou tetra-hidronaftila.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, o termo "heteroarila" sozinho ou como parte de outro grupo, refere-se a grupos tendo 5 a 14 átomos do anel; 6, 10 ou 14 25 elétrons π (pi) partilhados em um arranjo cíclico; e contendo átomos de car- bono e 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos de oxigênio, nitrogênio ou enxofre (onde exemplos de grupos heteroarila são: grupos tienila, benzo[b]tienila, naf- to[2,3-b]tienila, tiantrenila, furila, piranila, isobenzofuranila, benzoxazolila, cromenila, xantenila, fenoxatiinila, 2/-/-pirrolila, pirrolila, imidazolila, pirazolila, 30 piridila, pirazinila, pirimidinila, piridazinila, indolizinila, isoindolila, 3/-/-indolila, indolila, indazolila, purinila, 4/-/-quinolizinila, isoquinolila, quinolila, ftalazinila, naftiridiníla, quinazolinila, cinolinila, pteridinila, 4aH-carbazolila, carbazolila, ‘ carbolinila, fenantridinila, acridinila, perimidinila, fenantrolinila, fenazinila, iso- tiazolila, fenotiazinila, isoxazolila, furazanila e fenoxazinila).
Sempre que o termo substituído é usado, significa que indica que um ou mais hidrogênios no átomo indicado na expressão usando "subs- 5 tituído" é reposto com uma seleção do grupo indicado, contanto que a valên- cia normal do átomo indicado não seja excedida, e que a substituição resulta em um composto quimicamente estável, isto é, um composto que é suficien- temente robusto para sobreviver a isolamento a um grau de pureza útil de uma mistura da reação, e formulação em uma composição farmacêutica. Os 10 grupos substituintes podem ser selecionados entre átomos de halogeno, grupos oxidrila, grupos C1-C4 alcóxi ou grupos C6-C12 arila (os quais, inter- nos, também podem ser substituídos, tal como por 1 a 3 átomos de haloge- no).
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- 15 venção e nas reivindicações, o termo "isótopo de flúor" (F) refere-se a todos os isótopos do elemento atômico flúor. Isótopo de flúor (F) é selecionado entre isótopo radioativo ou não-radioativo. O isótopo de flúor radioativo é selecionado entre 18F . O isótopo de flúor "frio" não-radioativo é selecionado entre 19F.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in-
venção e nas reivindicações, o termo "pró-fármaco" significa qualquer com- posto ligado de modo covalente, o qual libera o produto farmacêutico ativo de origem de acordo com a fórmula II.
O termo "pró-fármaco" conforme usado do início ao fim deste 25 texto significa os derivados farmacologicamente aceitáveis tais como éste- res, amidas e fosfatos, tal como o produto de biotransformação in vivo resul- tante do derivado é o produto farmacêutico ativo conforme definido nos compostos de fórmula (I). A referência de Goodman e Gilman (The Pharma- co- Iogical Basis of Therapeutics, 8 ed, McGraw-HiM, Int. Ed. 30 1992,"Biotransformation of Drugs", p 13-15) descrevendo pró-fármacos de modo geral é por este incorporada. Pró-fármacos de um composto da pre- sente invenção são preparados modificando grupos funcionais presentes no composto de tal modo que as modificações são clivadas, quer em manipula- ção de rotina ou in vivo, para o composto fonte. Pró-fármacos dos compos- tos da presente invenção incluem os compostos em que, por exemplo, um grupo hidróxi, tal como o grupo hidróxi sobre o átomo de carbono assimétri- 5 co, ou um grupo amino é ligado a qualquer grupo que, quando a pró-fármaco é administrada a um paciente, cliva para formar uma oxidrila livre ou um a- mino livre, respectivamente. Exemplos típicos de pró-fármacos são descri- tos, por exemplo, nas publicações de patente internacional N0S WO 99/33795, WO 99/33815, WO 99/33793 e WO 99/33792 todas incorporadas 10 aqui, a este requerimento de patente, por meio de referência. Pró-fármacos são caracterizadas por excelente solubilidade aquosa, aumentada biodispo- nibilidade e são prontamente metabolizadas nos inibidores ativos in vivo.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, os termos "seqüência de aminoácido" e "peptí- deo" são definidos aqui, neste requerimento de patente, como uma poliami- da obtenível por (poli)condensação de no mínimo dois aminoácidos.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, o termo "aminoácido" significa qualquer molé- cula compreendendo no mínimo um grupo amino e no mínimo um grupo carboxila, mas o qual não tem ligação peptídica dentro da molécula. Em ou- tras palavras, um aminoácido é uma molécula que tem uma funcionalidade ácido carboxílico e um nitrogênio da amina tendo no mínimo um hidrogênio livre, preferencialmente em posição-alfa para este, mas nenhuma ligação amida na estrutura da molécula. Portanto, um dipeptideo tendo um grupo amino livre no N-término e um grupo carboxila livre no C-término não deve ser considerado como um único "aminoácido" na definição acima. A ligação amida entre dois resíduos aminoácidos adjacentes a qual é obtenível a partir de uma condensação similar é definida como "ligação peptídica". Opcional- mente, os átomos de nitrogênio da estrutura pricipal de poliamida (indicada como NH acima) podem ser alquilados independentemente, por exemplo, com C-i-C6-alquil, preferencialmente CH3.
Uma ligação amida conforme usado aqui, neste requerimento de patente, significa qualquer ligação covalente tendo a estrutura -C(=0)-NH-CH ou HC-HN-(0=)C-
em que o grupo carbonil é proporcionado por uma molécula e o NH- grupo é proporcionado pela outra molécula a ser unida. As ligações amida entre dois resíduos aminoácidos adjacentes as quais são obtidas de uma policonden- sação similar são definidas como "ligações de peptídeo". Opcionalmente, os átomos de nitrogênio da estrutura pricipal de poliamida (indicada como NH acima) podem ser alquilados independentemente, por exemplo, com -CrC6- alquil, preferencialmente -CH3.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, um resíduo aminoácido é derivado do aminoá- cido correspondente formando uma ligação peptídica com outro aminoácido.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, uma seqüência de amTnoàcídoss pode com- preender resíduos aminoácidos que ocorrem naturalmente e/ou sintéticos / artificiais, resíduos aminoácidos proteinogênicos e/ou não- proteinogênicos. Os resíduos aminoácidos não- proteinogênicos podem ser adicionalmente classificados como (a) homo análogos de aminoácidos proteinogênicos, (b) β-homo análogos de resíduos aminoácidos proteinogênicos e (c) adicional- mente resíduos aminoácidos não- proteinogênicos.
Por conseguinte, os resíduos aminoácido podem ser derivados dos aminoácidos correspondentes, por exemplo, de
• aminoácidos proteinogênicos, isto é, Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, lie, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr e Vai; ou
• aminoácidos não- proteinogênicos, tais como
o homo análogos de aminoácidos proteinogênicos em que a cadeia lateral tem sido prolongada por um grupo metileno, por exemplo, homoalanina (Hal), homoarginina (Har), homocisteína (Hcy), homoglutamina (Hgl), homohistidina (Hhi), homoisoleucina (Hil), homoleucina (Hle), homoli- sina (Hly), homometionina (Hme), homofenilalanina (Hph), homoprolina (H- pr), homosserina (Hse), homotreonina (Hth), homotriptofano (Htr), homotiro- sina (Hty) e homovalina (Hva);
o β-homo análogos de aminoácidos proteinogênicos em que um grupo metileno foi inserido entre o α-carbono e o grupo carboxila 5 produzindo β-aminoácidos, por exemplo, β-homoalanina ^HaI), β- homoarginina (βΗθΓ), β-homoasparagina ^Has), β-homocisteína (βHcy), β- homoglutamina ^HgI), β-homohistidina (βΗΙιΐ), β-homoisoleucina (βΗϋ), β- homoleucina (βΗΙβ), β-homolisina ^HIy), β-homometionina (βHme), β- homofenilalanina (βΗρΙι), β-homoprolina (βΗρτ), β-homosserina (βΗεβ), β- 10 homotreonina (βΗίΙι), β-homotriptofano (βΗ^), β-homotirosina (βHty) e β- homovalina (βΗνβ);
ο aminoácidos não-proteinogênicos adicionais, por exem- plo, ácido α-aminoadípico (Aad), ácido β-aminoadípico (βAad), ácido a- aminobutírico (Abu), ácido α-aminoisobutírico (Aib), β-alanina (βΑΐ3), ácido 15 4-aminobutírico (4-Abu), ácido 5-aminovalérico (5-Ava), ácido 6-amino- hexanoico (6-Ahx), ácido 8-aminooctanoico (8-Aoc), ácido 9-aminononanoico (9-Anc), ácido 10-aminodecanoico (10-Adc), ácido 12-aminododecanoico (12-Ado), ácido α-aminossubérico (Asu), ácido azetidina-2-carboxílico (Aze), β-ciclohexilalanina (Cha), aitrulina (Cit)1 de-hidroalanina (Dha), ácido γ- 20 carboxiglutâmico (Gla), α-ciclohexilglicina (Chg), propargilglicina (Pra), ácido piroglutâmico (GIp)1 α-terc-butilglicina (TIe)1 4-benzoilfenilalanina (Bpa)1 δ- hidroxilisina (HyI)1 4-hidroxiprolina (Hyp)1 allo-isoleucina (alie), Iantionina (Lan)1 (l-naftil)alanina (1-Nal), (2-naftil)alanina (2-Nal), norleucina (NIe)1 nor- valina (Nva)1 ornitina (Orn)1 fenilglicina (Phg)1 ácido pipecólico (Pip)1 sarcosi- 25 na (Sar)1 selenocisteína (Sec)1 estatina (Sta)1 β-tienilalanina (Thi)1 ácido 1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina-3-carboxílico (Tic), alotreonina (aThr), ácido tiazolidina-4-carboxílico (Thz), ácido γ-aminobutírico (GABA), isocisteína (i- so-Cys), ácido diaminopropiônico (Dpr), ácido 2,4-diaminobutírico (Dab), áci- do 3,4-diaminobutírico (γβϋβό), bifenilalanina (Bip), fenilalanina substituído 30 em para posição com -C1-C6 alquila, -haleto, -NH2, -CO2H ou Phe(4-R) (em que R = -C1-C6 alquila, -haleto, -NH2, ou -CO2H); ácidos nucleicos de peptídeos (PNA, cf., P.E. Nielsen, Acc. Chem. Res., 32, * 624-30);
• ou seus análogos N-alquilados, tais como seus análogos N-
metilados.
Aminoácidos cíclicos podem ser proteinogênicos ou não- protei- 5 nogênicos, tais como Pro, Aze, Glp1 Hyp, Pip1 Tic e Thz.
Para exemplos e detalhes adicionais pode ser feita referência, por exemplo, a J.H. Jones, J. Peptide Sci., 2003, 9, 1-8 a qual é incorporada aqui, a este requerimento de patente, por meio de referência.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- 10 venção e nas reivindicações, os termos "aminoácido não -proteinogênico" e "resíduo aminoácido não -proteinogênico" também engloba derivados de aminoácidos proteinogênicos. Por exemplo, a cadeia lateral de um resíduo aminoácido proteinogênico pode ser derivada deste modo tornando o resí- duo aminoácido proteinogênico "não- proteinogênico". O mesmo aplica-se a 15 derivados do C-término e/ou do N-término de um resíduo aminoácido protei- nogênico terminando a seqüência de aminoácidos.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, um resíduo aminoácido proteinogênico é deri- vado de um aminoácido proteinogênico selecionado entre o grupo consistin- 20 do em Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, lie, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr e Val ou em configuração L- ou D-; o segundo centro quiral em Thr e Ile pode ter ou configuração R- ou S-. Portanto, por exemplo, qualquer modificação pós-translacional de uma seqüência de aminoácidos, tal como N-alquilação, a qual pode ocorrer naturalmente torna o resíduo a- 25 minoácido "não-proteinogênico" modificado correspondente, embora na na- tureza o referido resíduo aminoácido seja incorporado em uma proteína. Pre- ferencialmente aminoácidos modificfados são selecionados entre aminoáci- dos N-alquilados, β-aminoácidos, γ-aminoácidos, lantioninas, de-hidro ami- noácidos, e aminoácidos com porções guanidina alquiladas.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in-
venção e nas reivindicações, o termo "peptidomimético" refere-se a molécu- las as quais são relacionadas com peptídeos, mas com diferentes proprie- dades. Um peptidomimético é uma cadeia similar à proteína pequena desig- nada para simular um peptídeo. Tipicamente surgem de modificação de um peptídeo existente de modo a alterar as propriedades da molécula. Por e- xemplo, podem surgir das modificações para alterar a estabilidade ou a ati- 5 vidade biológica da molécula. Isto pode ter um papel no desenvolvimento de compostos similares a fármacos a partir dos peptídeos existentes. Estas modificações envolvem alterações do peptídeo que não ocorrerão natural- mente.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, o termo "análogos de peptídeos", sozinho refe- re-se a compostos sintéticos ou naturais os quais similarizam-se a peptídeos que ocorrem naturalmente em estrutura e/ou função.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, o termo "sal farmaceuticamente aceitável" refe- 15 re-se a sais de ácidos inorgânicos e orgânicos, tais como ácidos minerais, incluindo, mas não limitados a, ácidos tais como ácido carbônico, nitrico ou sulfúrico, ou ácidos orgânicos, incluindo, mas não limitados a, ácidos tais como ácidos alifáticos, cicloalifáticos, aromáticos, aralifáticos, heterocíclicos, carboxílicos e sulfônicos, cujos exemplos são ácido fórmico, acético, trifluo- 20 roacético, propiônico, succínico, glicólico, glucônico, láctico, málico, fumári- co, pirúvico, benzoico, antranílico, mesílico, salicílico, fenilacético, mandéli- co, embônico, metanossulfônico, etanossulfônico, benzenossulfônico, panto- tênico, toluenossulfônico e sulfanílico.
Se um centro quiral ou outra forma de um centro isomérico esti- 25 ver presente em um composto tendo Fórmulas químicas gerais A, I, II, Ill ou IV da presente invenção, conforme dado nas partes que se seguem, todas as formas de isômeros similares, incluindo enantiômeros e diastereoisôme- ros, são pretendidas para serem cobertas aqui, neste requerimento de pa- tente. Compostos contendo um centro quiral podem ser usados como uma 30 mistura racêmica ou como uma mistura enantiomericamente enriquecida, ou a mistura racêmica pode ser separada usando técnicas de conhecimento geral e um enantiômero individual talvez usado sozinho. Em casos nos quais < compostos têm ligações duplas carbono-carbono insaturadas, tanto o cis- isômero quanto trans-isômeros estão dentro do âmbito desta invenção. Em casos nos quais compostos podem existir em formas tautoméricas, tais co- mo tautômeros de cetoenol, cada forma tautomérica é contemplada como 5 sendo incluída dentro do âmbito da presente invenção quer existente em equilíbrio ou predominantemente em uma forma.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, o termo "oligonucleotídeo" terá o seguinte sig- nificado: seqüências curtas de nucleotídeos, tipicamente com vinte ou me- 10 nos bases. São exemplos, mas não estão limitadas a, moléculas nomeadas e citadas no livro: "The aptamers handbook. Functional oligonuclides e their application" por Svenn Klussmann, Wiley-VCH, 2006. Um exemplo de um oligonucleotídeo similar é TTA1 (J. Nucl. Med., 2006, April, 47(4): 668-78).
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, o termo "aptâmero" refere-se a um oligonucleo- tídeo, compreendendo a partir de 4 até 100 nucleotídeos, em que no mínimo dois nucleotídeos únicos são conectados un ao outro através de uma ligação fosfodiéster. Os aptâmeros referidos têm a capacidade de ligar especifica- mente a uma molécula-alvo (vide, por exemplo, M Famulok, G Mayer, "Ap- tamers as Tools in Molecular Biology and Immunology", em: "Combinatorial Chemistry in Biology, Current Topics in Microbiology and Immunology” (M Famulok, CH Wong, EL Winnacker, Eds.), SpringerVerIag Heidelberg, 1999, Vol. 243, 123-136). Existem muitos modos de conhecimento das pessoas versadas de como gerar aptâmeros similares que têm especificidade para uma molécula-alvo determinada. Um exemplo é dado no requerimento de patente internacional WO N0 01/09390 A, cuja descrição é aqui incorporada por meio de referência. Os aptâmeros referidos podem compreender nucleo- tídeos naturais e não-naturais substituídos ou não-substituídos. Aptâmeros podem ser sintetizados in vitro usando, por exemplo, um sintetizador auto- matizado. Aptâmeros de acordo com a presente invenção podem ser estabi- lizados contra degradação de nuclease, por exemplo, pela substituição do grupo 2'-OH versus um substituinte 2'-flúor da estrutura pricipal de ribose de pirimidina e versus substituintes 2-O-metil nos ácidos nucleicos purina. Além disso, a extremidade 3' de um aptâmero pode ser protegida contra degrada- ção por exonuclease invertendo o 3' nucleotídeo para formar um novo grupo 5'-OH, com uma ligação 3' a 3' a uma penúltima base.
5 Para os fins desta invenção, o termo "nucleotídeo" refere-se a
moléculas compreendendo uma base contendo nitrogênio, um açúcar de 5 carbonos, e um ou mais grupos de fosfato. Exemplos da base referida com- preendem, mas não estão limitados a, adenina, guanina, citosina, uracila, e timina. Também são incluídas bases não-naturais, substituídas ou não- 10 substituída. Exemplos de açúcar de 5 carbonos compreendem, mas não es- tão limitados a, D-ribose, e D-2-desoxirribose. Também são incluídos outros açúcares de 5 carbonos naturais e não-naturais, substituídos ou não- substituídos. Nucleotídeos conforme usado nesta invenção podem compre- ender de um a três fosfatos.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in-
venção e nas reivindicações, o termo "halogeno" refere-se a F, Cl, Br e I.
Se um centro quiral ou outra forma de um centro isomérico esti- ver presente em um composto, todas as formas de similares isômeros, inclu- indo enantiômeros e diastereoisômeros, são pretendidas para serem cober- tas aqui, neste requerimento de patente. Compostos contendo um centro quiral podem ser usados como uma mistura racêmica ou como uma mistura enantiomericamente enriquecida, ou a mistura racêmica pode ser separada usando técnicas de conhecimento geral e um enantiômero individual pode ser usado sozinho. Em casos nos quais compostos têm ligações duplas car- bono-carbono insaturadas, tanto o isômero cis quanto os isômeros trans es- tão dentro do âmbito desta invenção. Em casos nos quais podem existir compostos em formas tautoméricas, tais como tautômeros ceto-enol, cada forma tautomérica é contemplada como sendo incluída dentro do escopo da presente invenção quer existindo em equilíbrio ou predominantemente em uma forma.
Abreviações usadas do início ao fim da especificação são usa- das dentro dos seguintes sinificados: Ts Ns Cbz Bz 5 Bn Boc Fmoc Tr
abaixo.
tosila
nitrofenilsulfenila
carbobenzóxi
benzoila
benzila
terc-butoxicarbonila
9-fluorenilmetoxicarbonila
trifenilmetila
O objetivo da presente invenção é resolvido conforme detalhado
Em um primeiro aspecto, a presente invenção proporciona novos compostos compreendendo um anel aziridina sendo apropriadamente ativa- do para fins de rotulação, em que um radical de agente de direcionamento, quer diretamente ou através de um Iigante apropriado, é fixado ou ao anel 15 aziridina ou a um anel carbocíclico ou heterocíclico de cinco membros fundi- do o qual é fundido ao anel aziridina .
Em uma primeira alternativa preferencial de acordo com o pri- meiro aspecto da presente invenção, o referido composto pode ser represen- tado pela Fórmula química geral I:
/
r-n;
b
em que
R representa Ts, 2,4,6-tri-isopropil-fenil-sulfonila, 3,4-dimetóxi- fenil-sulfonila, fenil-sulfonila não-substituída, fenil-sulfonila sendo substituída com 1 a 5 porções R2, Ns, Cbz, Bz, Bn, Boc, Fmoc, metoxicarbonila, etoxi- carbonila, aliloxicarbonila, Trou acila;
em que R2 representa hidrogênio, CrC6 alquila substituída ou
não-substituída ou linear ou ramificada, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila ou heteroaralquila, OH, OR3, NH2, NHR3, N(R3)2, SH, SR3, halogeno, NO2, C(=0)R3, C(O)OR3, C(=0)NHR3 ou C(=0)(NR3)2,
R3 representa hidrogênio, C-I-C6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída, arila, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila ou heteroaralquila;
R1 e R4, são selecionados, de modo independente, do grupo compreendendo hidrogênio, Ci-C6 alquila Iinearou ramificada, substituída ou não-substituída, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila e heteroaralquila;
L representa um Iigante adequado para ligação com o radical do agente de direcionamento; e
B representa o radical do agente de direcionamento.
De acordo com esta primeira alternativa, a invenção adicional-
mente refere-se a sais farmaceuticamente aceitáveis de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, hidratos, complexos, êsteres, amidas, solvatos e pro-drógas dos compostos tendo Fórmula química geral I.
Em uma modalidade preferencial desta primeira alternativa, R pode ser Ts, 2,4,6-tri-isopropil-fenil-sulfonila, 3,4-dimetóxi-fenil-sulfonila, fe- nil-sulfonila não-substituída, fenil-sulfonila sendo substituída com 1 a 5 por- ções R2, ou Ns;
em que R2 representa hidrogênio, CrC6 alquila linear ou ramifi- cada, substituído ou não-substituída, OH, OR3, NH2, NHR3, N(R3)2, SH, SR3, Cl, Br, I, NO2, C(=0)R3, C(=0)0R3, C(=0)NHR3, C(=0)N(R3)2;
R3 representa hidrogênio ou C-I-C6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída.
Em uma modalidade mais preferida desta primeira alternativa, R pode ser 2,4,6-tri-isopropil-fenil-sulfonil, 3,4-dimetóxi-fenil-sulfonil, fenil- sulfonil não-substituído ou fenil-sulfonil sendo substituído com 1 a 5 porções R2;
em que R2 representa hidrogênio, CrC6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída, ou OR3, em que R3 representa C1-C6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída.
Em uma modalidade preferencial desta primeira alternativa, R1 e
R4, podem ser selecionados, de modo independente, do grupo compreen- dendo hidrogênio e C1-C6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não- < substituída.
Em uma modalidade mais preferencial desta primeira alternativa, R1 e R4 pode representar hidrogênio.
Nesta primeira alternativa preferencial de acordo com o primeiro 5 aspecto, a qual também pode ser definida usando a seguinte Fórmula quími- ca geral alternativa A, a qual é congruente com a Fórmula I:
RG-L1-B1-Y-E A
em que
RG é um grupo ou grupos de átomos ou uma porção reativa fi- 10 xada a L1 que pode formar um aduto com um isótopo de flúor, para propor- cionar uma ligação quimicamente e biologicamente estável,
L1 é um grupo de porção ou ligação á qual o grupo reativo (RG)
está fixado,
Bi é um grupo funcional ou uma cadeia contendo grupo Οποίο- ι 5 nal conectando Iigante a espaçador,
Y é uma ligação ou um espaçador,
E é uma biomolécula.
O composto tendo Fórmula química geral I acima aqui, neste
requerimento de patente, pode ser definido usando a Fórmula química geral
- 20 A acima, se RG for aziridina N-substituída:
W
I
J
em que
J é SO2, CO,
com a condição que se J for SO2, então W é fenila não- substituída ou substituída, NH2, NHR3, N(R3)2, C1-C6 alquila linear ou ramifi- 25 cada, arila, heteroarila, em que a substituição do anel fenila é de modo inde- pendente ou em combinações selecionadas entre C1-C6 alquila linear ou ra- mificada,
R3 é C1-C6 alquila ou aralquila, Adicionalmente, se J for CO, então W é fenila não-substituída ou substituída, benzilóxi, fluorenilmetila, metóxi, etóxi, ou alilóxi,
em que a substituição do anel fenil é de modo independente ou em combinações selecionadas entre C1-C6 alquila linear ou ramificada.
Com relação à Fórmula química geral A, em uma modalidade
mais preferencial, RG é selecionado entre o grupo compreendendo N- benzenossulfonilaziridinila, N-p-toluenossulfonilaziridinila, N-2,4,6-tri- isopropilsulfonilaziridinila, N-3,4-dimetóxi-fenilsulfonilaziridinila. Mais prefe- rencialmente, RG pode ser N-benzenossulfonilaziridinil, p- toluenossulfonilaziridinila ou N-2,4,6-tri-isopropilsulfonilaziridinila.
Adicionalmente com relação à Fórmula química geral A, em uma modalidade mais preferencial, Li pode ser ligação ou Ci-C6 alquila linear ou ramificada. Ainda mais preferencialmente, L1 pode ser uma ligação.
Adicionalmente, com relação à Fórmula química geral A, em 15 uma modalidade preferencial, -B1- pode ser selecionado entre o grupo com- preendendo uma ligação, -C(=0)-, -(CH2)d-C(=0)-, -SO-, -C=C-C(=0)-, -[CH2]m-D-[CH2]-C(=0)-, -[CH2]m-D-[CH2]n-S02-, -C(=0)-0-,-NR10-, -O-, -(S)p-, -C(=0)NR12-, -C(=S)NR12-, -C(=S)0-, CrC6 cicloalquila, alquenila, heterocicloalquila, arila não-substituída ou substituída ou heteroarila não- 20 substituída ou substituída, aralquila, heteroaralquila, alquilenóxi, arilenóxi, aralcóxi, -SO2NR13-, -NR13SO2-, -NR13C(=0)0-, -NR13C(=0)NR12-, -NH-NH- e -NH-O-,
em que d é um inteiro de 1 a 6,
m e n, independentemente, podem ser qualquer inteiro de 0 a 5; D representa uma ligação, -S-, -O- ou -NR9-,
em que R9 representa hidrogênio, C1-C10 alquila, arila, heteroari- la, ou aralquila,
p pode ser qualquer inteiro de a partir de 1 a 3;
R10 e R12, independentemente, representam hidrogênio, C1-C10 alquila, arila, heteroarila ou aralquila, e
R13 representa hidrogênio, C1-C6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída, arila, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila, ou heteroaralquila.
Adicionalmente, com relação à Fórmula química geral A, mais preferencialmente, -B1- é preferencialmente selecionado entre -C(=0)- e -C^C-C(=0)- e ainda mais preferencialmente -B1- é -C(=0)-.
Nesta definição alternativa, com relação ao composto tendo
Fórmula química geral I, RG corresponde à porção
o grupo L1-B1 corresponde a L (Iigante) e o grupo Y-E corresponde a B (a- gente de direcionamento), em que E é uma biomolécula.
Compostos preferenciais da presente invenção são:
1-(Tolueno-4-sulfonil)-aziridina-2-carboxílico ácido - Gly-Val-
ftAla-Phe-Gly-amida
1 -(2,4,6-T ri-isopropil-benzenossulfonil)-aziridina-2-carboxílico Gly-Val-ftAla-Phe-Gly-amida
1-(2,4,6-Tri-isopropil-benzenossulfonil)-aziridina-2-carboxílico ácido [(3-{3-[(2R,4S,5R)-4-(1-metóxi-ciclohexilóxi)-5-(1-metóxi-
ciclohexiloximetil)-tetra-hidro-furan-2-il]-5-metil-2,6-dioxo-3,6-di-hidro-2H- pirimídin-1-il}-propilcarbamoil)-metil]-amida
Em uma segunda alternativa preferida de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção, o referido composto é representado por Fór- mula química geral II:
em que
R1 e R4, são selecionados, de modo independente, entre o grupo compreendendo hidrogênio, C1-Ce alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila e heteroaralquila;
L representa um Iigante adequado para ligação com o radical do agente de direcionamento e para ativação apropriada do anel aziridina ; e
B representa o radical do agente de direcionamento.
De acordo com esta segunda alternativa, a invenção adicional- mente refere-se a sais farmaceuticamente aceitáveis de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, hidratos, complexos, ésteres, amidas, solvatos e pro-drógas dos compostos tendo Fórmula química geral II.
Em uma modalidade preferencial desta segunda alternativa R1 e R4, podem ser selecionados, de modo independente, entre o grupo compre- endendo hidrogênio e CrC6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não- substituída.
Em uma terceira alternativa preferencial de acordo com o primei- ro aspecto da presente invenção, o referido composto é representado por Fórmula química geral III:
fenil-sulfonil, fenil-sulfonil não-substituído, fenil-sulfonil sendo substituído com 1 a 5 porções R2, Ns, Cbz, Bz, Bn, Boc, Fmoc, metoxicarbonila, etoxi- carbonila, aliloxicarbonila, Tr ou acila;
em que R2 representa hidrogênio, CrC6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila, ou heteroaralquila, OH, OR3, NH2, NHR3, N(R3)2, SH, SR3, Cl, Br, I, NO2, C(=0)R3, C(=0)0R3, C(=0)NHR3 ou C(=0)N(R3)2;
em que R3 representa hidrogênio, CrC6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída, arila, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila, ou heteroaralquila;
R1 e R4, são selecionados, de modo independente, entre o grupo compreendendo hidrogênio, CrC6 alquila Iinearou ramificada, substituída ou não-substituída, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila e heteroaralquila;
R
R
,4
Ill
em que
15
R representa Ts, 2,4,6-tri-isopropil-fenil-sulfonil, 3,4-dimetóxi- » X representa N ou C substituído por um hidrogênio;
L representa um Iigante adequado para ligação com o radical do agente de direcionamento; e
B representa o radical do agente de direcionamento.
5 De acordo com esta terceira alternativa, a invenção adicional-
mente refere-se a sais farmaceuticamente aceitáveis de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, hidratos, complexos, ésteres, amidas, solvatos e pro-drógas dos compostos tendo Fórmula química geral III.
Em uma modalidade preferencial desta terceira alternativa R po- de ser Ts, 2,4,6-tri-isopropil-fenil-sulfonil, 3,4-dimetóxi-fenil-sulfonil, fenil- sulfonil não-substituído, fenil-sulfonil sendo substituído com 1 a 5 porções R2, ou Ns;
em que R2 representa hidrogênio, Ci-C6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída, OH, OR3, NH2, NHR3, N(R3)2, SH, SR3, Cl, Br, I, NO2, C(=0)R3, C(=0)0R3, C(=0)NHR3, C(=0)N(R3)2;
em que R3 representa hidrogênio, CrC6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída, ou arila;
R1 e R4, podem ser selecionados, de modo independente, entre o grupo compreendendo hidrogênio e Ci-C6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída;
X pode representar N ou C substituído por um hidrogênio;
Em uma modalidade preferida adicional R pode ser Ts, 2,4,6-tri- isopropil-fenil-sulfonila, 3,4-dimetóxi-fenil-sulfonila, fenil-sulfonila não- substituída ou fenil-sulfonila sendo substituída com 1 a 5 porções R2;
em que R2 representa hidrogênio, CrC6 alquila linear ou ramifi-
cada, substituída ou não-substituída, OR3, SR3, Cl, Br, I, C(=0)R3, C(=0)0R3, C(=0)NHR3 ou C(=0)N(R3)2, em que R3 representa hidrogênio, CrC6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída ou arila;
R1 e R4, podem ser selecionados, de modo independente, entre o grupo compreendendo hidrogênio e CrC6 alquila linear e ramificada, subs- tituída e não-substituída; e
X pode representar N. Em todas as alternativas, o Iigante -L- é preferencialmente sele- cionado entre o grupo consistindo em C1-C6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída, cicloalquila, alquenila, heterocicloalquila, arila não-substituída ou substituída, heteroarila não-substituída ou substituída, aralquila, heteroaralquila, alquilóxi, arilóxi, aralcóxi, -C(=0)-, -C(=0)0-, - C(=0)NH-, -C(=0)N-(CH2)n-C(=0)-, -C(=0)-(CH2)n-C(=0)-, -SO2-, -SO2NR3-, -NR3SO2-, -NR3C(=0)0-, -NR3C(O)NR3-, -NR3-, -NH-NH-, -NH-O-, -(CH2)n- C(O)-NR3-CH2-C(O)-, -S02-(arila não-substituída ou substituída)-(CH2)n- C(O)-,
o
em que n pode ser de 1 a 3, -A- pode representar -S- ou -NR3-; em que R3 representa hidrogênio, C1-C6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila ou heteroaralquila.
O Iigante -L- mais preferencialmente pode ser selecionado do grupo compreendendo C1-C6 alquila linear e ramificada, -(CrC6 alquila linear e ramificada, substituída e não-substituída)-C(O)-, -C(O)-, -C(O)NH-, -C(O)N-(CH2)n-C(O)- ou -C(O)-(CH2)n-C(O)- com n = 1 - 3.
Adicionalmente, em todas as alternativas, o radical do agente de direcionamento B preferencialmente pode compreender uma biomolécula selecionada do grupo compreendendo peptídeos, moléculas pequenas e oligonucleotídeos. As biomoléculas também podem ser peptidomiméticos.
Se a biomolécula for uma molécula pequena, o Iigante -L- prefe- rencialmente não é -C(O)-. Portanto, em similar caso, -L- preferencialmente pode:
ser selecionado do grupo consistindo em C1-C6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída, cicloalquila, alquenila, heteroci- cloalquila, não-substituída ou substituída arila, heteroarila não-substituída ou substituída, aralquila, heteroaralquila, alquilóxi, arilóxi, aralcóxi, -C(O)O-, -C(O)NH-, -C(O)N-(CH2)n-C(O)- e -C(O)-(CH2)n-C(O)-, -SO2-, - SO2NR3-, -NR3SO2-, -NR3C(=0)0-, -NR3C(=0)NR3-, -NR3-, -NH-NH-, -NH-O- (CH2)n-C(=0)-NR3-CH2-C(=0)-, -S02-(arila não-substituída ou substituída)- (CH2)n-C(=0)-,
o
em que n pode ser de 1 a 3,
-A- pode representar -S- ou -NR3-;
em que R3 representa hidrogênio, C1-C6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila ou heteroaralquila;
ou ainda mais preferencialmente:
ser selecionado do grupo compreendendo Ci-C6 alquila linear e ramificada, -(C1-C6 alquila linear e ramificada, substituída e não-substituída)- C(=0)-, -C(=0)NH-, -C(=0)N-(CH2)n-C(=0)- ou -C(=0)-(CH2)n-C(=0)- com n = 1- 3.
O radical do agente de direcionamento B compreende uma bio- molécula E à qual posteriormente pode ser opcionalmente encadeada uma porção reagente Y a qual serve à ligação entre a biomolécula e o resto do composto e a qual pode ser, por exemplo, -NR', -(CH2)n-NR'-, -(CH2)n-O- ou - (CH2)n-S-, em que R1 é hidrogênio ou alquila e n é um número inteiro de 1 a 6. Portanto, B é Y-E, em que Y é ligação ou um espaçador.
Em uma modalidade mais preferencial Y é selecionado de um espaçador selecionado de seqüência de aminoácidos natural ou não-natural ou grupo não-aminoácido.
Mais preferencialmente, Y pode ser uma seqüência de aminoá- cido com dois (2) a vinte (20) resíduos de aminoácido.
Mais preferencialmente, Y pode ser Arg-Ser, Arg-Ava, Lys(Me)2- β-ala, Lys(Me)2-ser, Arg-p-ala, Ser-Ser, Ser-Thr, Arg-Thr, S-alquilcisteína, ácido cisteico, tioalquilcisteína (S-S-AIkyI) ou Mais preferencialmente, Y pode ser uma porção de não- aminoácido selecionada de NH-(CH2)p-C(=0) em que p é um número inteiro de 2 a 10,
NH-(CH2-CH2-O)q-CH2-CH2 -C(=0) em que q é um número intei- ro de 0 a 5 -NH-cicloalquil-CO- em que cicloalquil é selecionado de C5-C8 cicloalquila, mais preferencialmente cicloalquila de C6 átomos, e
-NH-heterocicloalquil-(CH2)v-CO- em que heterocicloalquila é selecionado de C5-C8 heterocicloalquila contendo átomos de carbono e 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos de oxigênio, nitrogênio ou enxofre mais preferencial- mente 1 a 2 heteroátomos, ainda mais preferencialmente 1 heteroátomo e v é um número inteiro de a partir de 1 a 4, mais preferencialmente v é um nú- mero inteiro de a partir de 1 a 2.
E é uma biomolécula. A biomolécula E é preferencialmente sele- cionada do grupo compreendendo peptídeos, peptidomiméticos, moléculas pequenas e oligonucleotídeos.
Conforme usado nas partes que se seguem na descrição da in- venção e nas reivindicações, os termos "agente de direcionamento" e "bio- moléculas" se referem a compostos ou porções que orientam ou dirigem o radionuclídeo fixado aos mesmos para um sítio específico em um sistema biológico. Um agente de direcionamento ou biomolécula pode ser qualquer composto ou entidade química que liga a ou acumula em um sítio-alvo no corpo de um mamífero, isto é, o composto se localiza em uma maior exten- são no sítio-alvo do que no tecido circundante.
Moléculas pequenas eficazes para direcionar para alguns sítios em um sistema biológico podem ser usadas como a biomolécula E. Molécu- las orgânicas menores podem ser "entidades químicas pequenas". Confor- me usado neste pedido, o termo "entidade química pequena" terá o seguinte significado: Uma entidade química pequena é um composto que tem uma massa molecular de a partir de 200 até 800 ou de a partir de 150 até 700, mais preferencialmente de a partir de 200 até 700, mais preferencialmente de a partir de 250 até 700, ainda mais preferencialmente de a partir de 300 5 até 700, ainda mais preferencialmente de a partir de 350 até 700 e o mais preferencialmente de a partir de 400 até 700. Uma entidade química peque- na conforme usado aqui, pode conter adicionalmente pelo menos um anel aromático ou heteroaromático e/ou também pode ter uma amina primária e/ou secundária, um grupo tiol ou hidroxila acoplado através de L ao resto da 10 molécula nos compostos de Fórmulas químicas gerais I, Il e III. Tais porções de direcionamento são conhecidas na técnica, assim como métodos para preparar as mesmas.
Os agentes de direcionamento de molécula pequena / biomolé- culas preferencialmente podem ser selecionados dos descritos nas referên- 15 cias seguintes: P. L. Jager, Μ. A. Korte, Μ. N. Lub-de Hooge, A. van Waar- de, Κ. P. Koopmans, P. J. Perik e E. G. E. de Vries, Cancer Imaging, (2005) 5, 27-32; W. D. Heiss e K. Herholz, J. Nucl. Med., (2006) 47(2), 302-312; e T. Higuchi e M. Schwaiger, Curr. Cardioi Rep., (2006) 8(2), 131-138. Mais es- pecificamente exemplos de agentes de direcionamento de molécula peque- 20 na / biomoléculas são listados nas partes que se seguem:
Nome Abr. alvo 18F-2b-Carbometóxi- CFT DAT (transportador de 3b-(4-fluorofenil)tropano dopamina) 18F- FESP D2 (receptor de dopa¬ Fluoroetilespiperona mina 2), 5-HT2 (receptor de 5- hidroxitriptamina) 18F-Faliprida D2 (receptor de dopa¬ mina 2) 18F-Altanserina receptor de 5-HT2A 18F-ciclofóxi Receptores opióides 18F-CPFPX Receptor de adenosina A1 Batimastat MMP Nome Abr. alvo Ácidos graxos e análo¬ gos Análogos de colina (me¬ tabolismo) Flumazenil Receptores benzodia- zepínicos Racloprida receptores D2 Di-hidrotestosterona e AR análogos Tamoxifeno e análogos Desoxiglicose Timidina Rotulador de prolifera¬ ção - timidina quinase DOPA Benzazepinas antagonistas Di N-metil espiperona e Receptores de dopami- derivados da mesma na Benzamida racloprida; receptores D2 derivados de benzami- da, por exemplo, falo- prida, iodo benzamida; clozapina, quietapina Nomifensina, análogos DAT de cocaína substituídos, por exemplo, derivados de cocaína do tipo tro- pano, metil fenidato 2p-Carboximetóxi-3p-(4- CIT DAT iodofenil)tropano CIT-FE, CIT-FM DAT Altanserina, setoperona, 5-HT2A cetanserina McN5652, 403U76 deri¬ 5-HTT vado ADAM, DASP, MADAM Análogos de acetilcolina MP3A, MP4A, PMP; Receptores de acetilco¬ QNB, TKB, NMPB, lina ---... . Nome Abr. alvo Escopolamina, benztro- Receptores de acetilco- pina Iina Flumazenila receptor GABA RO-15-4513, FDG receptor GABA PK-11195 Receptor benzodiazepí- nico Análogos de xantina CPFPX, MPDX Receptor de adenosina Carfentanil, diprenorfina Receptor opióide Adicionalmente vários agentes de direcionamento de molécula
pequena / biomoléculas e os alvos dos mesmos são dados na Tabela 1 em W. D. Heiss e K. Herholz, ibid. e na Figura 1 em T. Higuchi, M. Schwaiger, ibid.
5 Biomoléculas preferenciais adicionais são açúcares, oligossaca-
rídeos, polissacarídeos, aminoácidos, ácidos nucleicos, nucleotídeos, nucle- osídeos, oligonucleotídeos, proteínas, peptídeos, peptidomiméticos, anticor- pos, aptâmeros, lipídeos, hormônios (esteróide e não-esteróide), neuro- transmissores, fármacos (sintéticos ou naturais), agonistas e antagonistas 10 receptores, dendrímeros, fulerenos, partículas de vírus e outras moléculas / biomoléculas de direcionamento (por exemplo, moléculas de direcionamento para câncer).
Adicionalmente, a biomolécula E pode ser um peptídeo. E pode ser um peptídeo compreendendo de 2 a 100 aminoácidos, mais preferenci- almente 4 a 100 aminoácidos.
Em uma modalidade preferencial adicional da presente inven- ção, a biomolécula pode ser um peptídeo o qual é selecionado do grupo compreendendo somatostatina e derivados do mesmo e peptídeos relacio- nados, peptídeos específicos de receptores de somatostatina, neuropeptídeo 20 Ye derivados do mesmo e peptídeos relacionados, neuropeptídeo Y1 e os análogos do mesmo, bombesina e derivados da mesma e peptídeos relacio- nados, gastrina, peptídeo de liberação de gastrina e os derivados dos mes- mos e peptídeos relacionados, fator de crescimento epidérmico (EGF de vá- rias origens), fator de crescimento de insulina (IGF) e IGF-1, integrinas (α3β·,, ανβ3, ανβ5, allb3), agonistas e antagonistas de LHRH, fatores de crescimento transformantes, particularmente TGF-α; angíotensina; peptídeos receptores de colecistocinina, colecistocinina (CCK) e os análogos da mesma; neuro- tensina e os análogos da mesma, hormônio de liberação de tirotropina, pep- 5 tídeo ativador de adenilato ciclase pituitária (PACAP) e os peptídeos relacio- nados do mesmo, quimocinas, substratos e inibidores para metaloproteinase da matriz da superfície celular, prolactina e os análogos da mesma, fator de necrose tumoral, interleucinas (IL-1, IL-2, IL-4 ou IL-6), interferons, peptídeo vasoativo intestinal (VIP) e os peptídeos relacionados dos mesmos. Tais 10 peptídeos compreendem de 4 a 100 aminoácidos, em que os aminoácidos são selecionados de aminoácidos naturais e não-naturais e também com- preendem aminoácidos naturais e não-naturais modificados.
Em uma modalidade mais preferencial da presente invenção, a biomolécula pode ser selecionada do grupo compreendendo bombesina e 15 análogos de bombesina, preferencialmente aqueles tendo as seqüências listadas abaixo aqui, somatostatina e análogos de somatostatina, preferenci- almente aqueles tendo as seqüências listadas abaixo aqui, neuropeptídeo Y1 e os análogos do mesmo, preferencialmente aqueles tendo as seqüências listadas abaixo aqui, peptídeo vasoativo intestinal (VIP) e os análogos do 20 mesmo.
Em uma modalidade mais preferencial da presente invenção, a biomolécula pode ser selecionada do grupo compreendendo bombesina, somatostatina, neuropeptídeo Y1, peptídeo vasoativo intestinal (VIP) e os análogos dos mesmos.
Em uma modalidade ainda mais preferencial da presente inven-
ção, a biomolécula E pode ser bombesina, somatostatina ou neuropeptídeo Y1 ou um análogo dos mesmos.
Em uma modalidade ainda mais preferencial da presente inven- ção, a biomolécula pode ser bombesina ou um análogo da mesma.
Bombesina é um peptídeo de quatorze aminoácidos que é um
análogo de peptídeo liberador de gastrina humana (GRP) que liga com alta especificidade a receptores de GRP humana presentes em tumor de prósta- ‘ ta, tumor de mama e metástase. Em uma modalidade ainda mais preferenci- al da presente invenção, a biomolécula E compreende análogos de bombe- sina tendo seqüência Ill ou IV:
AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AAg-AA7-AA8-NT1T2 (tipo A) III, com 5 Ti = T2 =H, T1 = H1T2 = OH, T1 = CH3, T2 = OH
AA1 = Gin, Asn, Phe(4-CO-NH2)
AA2 = Trp, D-Trp AA3 = Ala, Ser, Val AA4 = Vai, Ser, Thr AA5 = GIy1(N-Me)GIy
AA6 = His, His(3-Me), (N-Me)His, (N-Me)His(3-Me)
AA7 = Sta, análogos de estatina e isômeros, 4-Am,5-MeHpA, 4- Am,5-MeHxA e aminoácidos γ-substituídos
AA8 = Leu, Cpa, Cba, CpnA, Cha, t-buGly, tBuAla, Met, Nle, iso-
Bu-Gly
AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AAz-AAe-NT-(T2 (tipo B) IV, com:
T1 = T2 =H, T1 = H1T2 = OH, T1 = CH3, T2 = OH AA1 = Gin, Asn, Phe(4-CO-NH2)
AA2 = Trp, D-Trp AA3 = Ala, Ser, Val
AA4 = Vai, Ser. Thr
AA5 = pAla, β2- e β3-aminoácidos conforme mostrado a seguir
aqui,
f -HN-^Yca
-HN^^'C0' SC
em que SC representa cadeia lateral encontrada em aminoáci- dos proteinogênicos e homólogos de aminoácidos proteinogênicos,
AA6 = His, His(3-Me), (N-Me)His, (N-Me)His(3-Me)
AA7 = Phe, Tha, Nal,
AA8 = Leu, Cpa, Cba, CpnA, Cha, t-buGly, tBuAla, Met, Nle, iso-
Bu-Gly. Portanto, em uma modalidade ainda mais preferencial da pre- sente invenção a biomolécula pode ser selecionada do grupo compreenden- do análogos de bombesina tendo seqüência Ill ou IV.
Em uma modalidade mais preferencial, análogos de bombesina têm as seguintes seqüências:
Seq ID E
Seq ID 1 Gln-Trp-AIa-VaI-NMeGIy-His-Sta-Leu-NH2 Seq ID 2 Gln-Trp-AIa-VaI-GIy-His(Me)-Sta-Leu-NH2 Seq ID 3 Gln-Trp-Ala-Val-NMeGly-His(3Me)-Sta-Leu-NH2 · Seq ID 4 Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(3Me)-Sta-Leu-NH2
Seq ID 7 Gln-Trp-Ala-Val-NMeGly-His(3Me)-Sta-Cpa-NH2 Seq ID 8 Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(3Me)-4-Am,5-MeHpA-Leu- NH2
Seq ID 12 Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(3Me)-4-Am,5-MeHpA-Leu- NH2
Seq ID 17 Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-4-Am,5-MeHpA- -Leu-NH2 Seq ID 23 Gln-Trp-Ala-Val-NMeGly-His(3Me)-4-Am,5-MeHpA- Cpa-NH2
Seq ID 27 Gln-Trp-Ala-Val-NMeGly-His-FA02010-Cpa-NH2 · Seq ID 28 Gln-Trp-Ala-Val-NMeGly-His-4-Am,5-MeHpA-tbuGly-
NH2
Seq ID 30 Gln-Trp-Ala-Val-NMeGly-His(3Me)-Sta-tBuGly-NH2 Seq ID 32 Gln-Trp-Ala-Val-NMeGly-His(3Me)-4-Am,5-MeHpA- Leu-NH2
· Seq ID 33 Gln-DTrp-Ala-Val-Gly-His-4-Am,5-MeHpA-tbuG!y-
NH2
Seq ID 34 Gln-DTrp-Ala-Val-Gly-His-4-Am-5-MeHxA-Cpa-NH2 Seq ID 35 Gln-Trp-Ala-Val-NMeGly-His(3Me)-Sta-Cpa-NH2 Seq ID 36 Gln-DTrp-Ala-Val-Gly-His-Sta-tbuAla-NH2 · Seq ID 42 Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(3Me)-Sta-Cpa-NH2
Seq ID 43 Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(3Me)-Sta-tBuGly-NH2 Seq ID 46 Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(3Me)-4-Am,5-MeHpA-Leu- NH2
Seq ID 48 Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(3Me)-4-Am,5-MeHpA-Leu- NH2
Seq ID 49 Gln-Trp-Ala-Val-Gly-NMeHis-4-Am,5-MeHpA-Cpa- NH2
Seq ID 49 Gln-Trp-Ala-Val-Gly-NMeHis(3Me)-4-Am,5-MeHpA- Leu-NH2
Seq ID 50 Gln-Trp-Ala-Val-Gly-NMeHis-4-Am,5-MeHpA-Leu- NH2
Seq ID 51 Gln-Trp-AIa-VaI-NMeGIy-HIs-AHMHxA -Leu-NH2 Seq ID 52 Gln-Trp-Ala-Val-ftAla-NMeHis-Tha-Cpa-NH2 Seq ID 53 Gln-Trp-AIa-VaI^AIa-NMeHis-Phe-Cpa-NH2 Seq ID 54 Gln-Trp-AIa-VaI^AIa-NMeHis-Phe-Leu-NH2 Seq ID 55 Gln-Trp-Ala-Val-ftAla-DHis-Phe-Leu-NH2 Seq ID 56 Gln-Trp-Ala-Val-ftAla-His-fthLeu-Leu-NH2 Seq ID 57 Gln-Trp-Ala-VaI-UAIa-His-RhIIe-Leu-NH2 Seq ID 58 Gln-Trp-Ala-Val-UAIa-His-fthLeu-tbuGly-NH2 Seq ID 59 Gln-Trp-Ala-Val-UAIa-His(3Me)-Phe-Tha-NH2 Seq ID 60 Gln-Trp-Ala-Val-UAIa-His(3Me)-Phe-Nle-NH2 Seq ID 61 Gln-Trp-Ala-Val-UAIa-NMeHis-Phe-tbuGly-NH2 Seq ID 62 Gln-Trp-Ala-Val-UAIa-NMeHis-Tha-tbuGly-NH2 Seq ID 63 Gln-Trp-Ala-Val-UAIa-His(3Me)-Tha-tbuGly-NH2 Seq ID 64 Gln-Trp-Ala-Val-ftAla-His(3Me)-Phe-Cpa-NH2 Seq ID 65 Gln-Trp-AIa-NMeVaI-UAIa-His-Phe-Leu-NH2 Seq ID 66 Gln-Trp-AIa-VaI-UAIa-His-NMePhe-Leu-NH2 Seq ID 67 Gln-DTrp-AIa-VaI-UAIa-His-Phe-Leu-NH2 Seq ID 68 Gln-Trp-DAIa-VaI-UAIa-His-Phe-Leu-NH2 Seq ID 69 Gln-Trp-AIa-DVaI-UAIa-His-Phe-Leu-NH2 Seq ID 70 Gln-Trp-AIa-VaI-UAIa-His-DPhe-Leu-NH2 Seq ID 71 Gln-Trp-Ala-Val-UAIa-His-Uhlle-tbuGly-NH2 Seq ID 72 Gln-Trp-Ala-Val-NMeGly-His-4-Am,5-MeHpA-Cpa- NH2 • Seq ID 73 • Seq ID 74 • Seq ID 75 • Seq ID 77 • Seq ID 82 • Seq ID 90 Gln-Trp-Ala-Val-NMeGly-His-Sta-Cpa-NH2 Gln-Trp-Ala-Val-NMeGly-His-Sta-tbuAla-NH2 Gln-Trp-Ala-Val-NMeGly-His-4-Am,5-MeHpA-tbuAla- NH2
GIn-Trp-AIa-VaI-His(Me)-Sta-Leu-NH2 Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(3Me)-FA4-Am,5-MeHpA- Leu-NH2
Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(3Me)-4-Am,5-MeHpA-Leu-
NH2
· Seq ID 91 Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-4-Am,5-MeHpA-Leu-NH2
• Seq ID 101 Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His(3Me)-4-Am-5-MeHpA - 4-
amino-5-metil-heptanoico ácido -Leu-NH2
• Seq ID 102 Gln-Trp-Ala-Val-NMeGly-His(3Me)-4-Am-5-MeHpA -
4-amino-5-metil-heptanoico ácido -Cpa-NH2 Mais preferencialmente um análogo de bombesina é adicional-
mente rotulado com um átomo de flúor (F) em que o átomo de flúor (F) é selecionado de 18F ou 19F. Mais preferencialmente o análogo de bombesina é radiorrotulado com 18F. O análogo de bombesina é preferencialmente ra- diorrotulado usando o método de radiofluoração da presente invenção.
Os análogos de bombesina acima que ligam especificamente a
receptores de GRP humana presentes em tumor de próstata, tumor de ma- ma e metástase, podem ser parte do composto tendo Fórmula química geral I, em que formam a biomolécula, em que a biomolécula opcionalmente pode ser encadeada a uma porção reagente Z a qual serve à ligação entre a bio- 25 molécula e o resto do composto da invenção (Fórmulas I, II), por exemplo, -NR', -NR'-(CH2)n-, -O-(CH2)n- ou -S-(CH2)n-, em que R' é hidrogênio ou al- quila e n é um número inteiro de 1 a 6. Os análogos de bombesina podem ser peptídeos tendo seqüências de Seq ID 1 a Seq ID 102 e preferencial- mente podem ter uma destas. Mais preferencialmente um análogo de bom- 30 besina é adicionalmente radiorrotulado com um isótopo de flúor (F) em que F é 18F ou 19F. Mais preferencialmente o análogo de bombesina é radiorrotula- do usando o método de radiofluoração da presente invenção. < Em uma modalidade mais preferencial, análogos de somatosta-
tina têm as seguintes seqüências:
• Seq ID 104 —c[Lys-(NMe)Phe-1 Nal-D-Trp-Lys-Thr]
• Seq ID 105 —c[Dpr-Met-(NMe)Phe-Tyr-D-Trp-Lys]
Em uma modalidade mais preferencial, análogos do neuropeptí-
deo Yi têm as seguintes seqüências:
• Seq ID 106 -DCys-Leu-IIe-Thr-Arg-Cys-Arg-Tyr-NH2
• Seq ID 107 -DCvs-Leu-IIe-VaI-Arq-Cvs-Arq-Tyr-NH?
(_indica ponte de dissulfeto)
10 Em uma modalidade mais preferencial o peptídeo é tetrapeptí-
deo tendo qualquer uma das seguintes seqüências:
• valil-p-alanil-fenilalanil-glicina amida
• valil-p-alanil-histidil(TT-Me)-glicina amida
Em uma modalidade preferencial adicional o agente de 15 direcionamento B pode ser selecionado do grupo compreendendo oligonucleotídeos compreendendo de 4 a 100 nucleotídeos. Oligonucleotídeo preferencial é TTA1 (vide parte experimental).
Em uma modalidade preferencial adicional da presente inven- ção, a biomolécula E pode compreender uma combinação de quaisquer das
- 20 moléculas bioativas supracitadas adequadas para ligar a um sítio-alvo junto com uma porção reagente a qual serve à ligação entre a molécula bioativa e o resto do composto da invenção (Fórmulas I, II, III), por exemplo, -NR', -NR1-(CH2)n-, -O-(CH2)n- ou -S-(CH2)n-, em que R' é hidrogênio ou alquila e n é um número inteiro de 1 a 6.
25 De acordo com um segundo aspecto, a presente invenção se
refere a um método para preparar os novos compostos, preferencialmente os compostos tendo qualquer uma das Fórmulas químicas gerais I, Il e III, reagindo uma molécula precursora adequada com o agente de direciona- mento ou um precursor dos mesmos.
30 Um terceiro aspecto da presente invenção se refere a novos
compostos fluorados e a sais farmaceuticamente aceitáveis de ácidos inor- gânicos ou orgânicos dos mesmos, a hidratos, complexos, ésteres, amidas, 10
15
20
25
solvatos e pró-fármacos dos mesmos.
Em uma primeira alternativa deste terceiro aspecto, a presente invenção se refere a um composto obtenível por uma reação de fluoração de abertura do anel do anel aziridina de um dos novos compostos do primeiro aspecto da presente invenção, mais preferencialmente de qualquer um dos compostos tendo Fórmulas químicas gerais I, Il e III. Nesta primeira alterna- tiva, a presente invenção também se refere a sais farmaceuticamente acei- táveis, hidratos, complexos, ésteres, amidas, solvatos e pro-fármacos dos mesmos.
Em uma segunda alternativa deste terceiro aspecto, a presente invenção se refere a um composto fluorado, tendo qualquer uma das Fórmu- las químicas gerais I-F-A e l-F-B:
'B
I-F-A
I-F-B
em que R, R1, R4, L e B têm os significados conforme dados acima aqui; F é isótopo de flúor conforme definido aqui acima.
De acordo com esta segunda alternativa, a invenção adicional- mente se refere a sais farmaceuticamente aceitáveis de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, hidratos, complexos, ésteres, amidas, solvatos e pro-fármacos dos compostos tendo qualquer uma das Fórmulas químicas gerais I-F-A e l-F-B.
Nesta segunda alternativa preferencial de acordo com o segun- do aspecto, a presente invenção se refere a um rádio-produto farmacêtuico rotulado com flúor tendo Fórmula química geral B
F-L2-B2--Y-E B
em que
F é isótopo de flúor
L2 é um grupo de porção ou ligação à qual F está fixado * B2 é um grupo funcional ou cadeia contendo grupo funcional co-
nectando L2 com o espaçador Y
Y é uma ligação ou um espaçador E é uma biomolécula.
5 Em uma modalidade preferencial F é 18F ou 19F.
Mais preferencialmente, de F é 18F então o protudo radiofarma- cêutico rotulado com flúor tem Fórmula química geral B-A.
[18]F—L2-B2-Y-E B-A
Mais preferencialmente, se F for 19F então o fármaco rotulado com flúor tem Fórmula química geral B-B.
[19]F—L2-B2-Y-E B-B
em que L2 é a- (substituído)amino-etil ao qual F está fixado na posição β, J e
W são definidos como acima aqui, neste requerimento de patente:
HN-J-W
^ a β
B2 de Fórmula química geral B é idêntico a Bi de Fórmula quími- ca geral A e modalidade preferencial.
Y de Fórmula química geral B é idêntico a Y de Fórmula química geral A e modalidade preferencial.
E de Fórmula química geral B é idêntico a E de Fórmula química geral A e modalidade preferencial.
Em uma terceira alternativa deste terceiro aspecto, a presente
invenção se refere a um composto fluorado, tendo qualquer uma das Fórmu- las químicas gerais Il-F-A e I l-F-B:
R4
Il-F-A II-F-B
em que R, R11 R4, L e B têm os significados conforme dado acima aqui, nes- te requerimento de patente; F é isótopo de flúor conforme definido aqui, nes- te requerimento de patente, acima.
De acordo com esta terceira alternativa, a invenção adicional- mente se refere a sais farmaceuticamente aceitáveis de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, hidratos, complexos, ésteres, amidas, solvatos e pro-fármacos dos compostos tendo qualquer uma das Fórmulas químicas gerais Il-F-A e I l-F-B.
Em uma quarta alternativa deste terceiro aspecto, a presente invenção se refere a um composto fluorado, tendo qualquer uma das Fórmu- las químicas gerais Ill-F-A e lll-F-B:
H
R-N
IM-F-A III-F-B
em que R, R1, R4, L e B têm os significados conforme dado acima aqui, nes- te requerimento de patente; F é isótopo de flúor conforme definido aqui, nes- te requerimento de patente, acima.
De acordo com esta quarta alternativa, a invenção adicionalmen- te se refere a sais farmaceuticamente aceitáveis de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, hidratos, complexos, ésteres, amidas, solvatos e pro- fármacos dos compostos tendo qualquer uma das Fórmulas químicas gerais Ill-F-Ae lll-F-B.
Em um quinto aspecto, a presente invenção se refere a uma composição compreendendo um composto ou um sal farmaceuticamente 20 aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato ou pró-fármaco dos mesmos de acordo com o primeiro aspecto da presente invenção, por exemplo, um composto tendo qualquer uma das Fórmulas químicas gerais I, Il e III, e um composto fluora- do ou um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgâ- 25 nico dos mesmos, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato ou pró- fármaco dos mesmos de acordo com o terceiro aspecto da presente inven- * ção, por exemplo, um composto tendo qualquer uma das Fórmulas químicas gerais l-F-A, I-Fl-B1 ll-F-A, ll-F-B, Ill-F-A e lll-F-B. A composição adicional- mente compreende um veículo, diluente, excipiente ou adjuvante farmaceu- ticamente aceitável.
Em um sexto aspecto, a presente invenção se refere a um kit
compreendendo um frasco selado contendo uma quantidade predeterminada de algumas Fórmulas químicas gerais I, Il e Ill do primeiro aspecto junto com um veículo, diluente, excipiente ou adjuvante aceitável para a fabricação de compostos do terceiro aspecto.
10 Em um aspecto adicional, a presente invenção se refere a um kit
compreendendo quaisquer dos compostos fluorados conforme definido aci- ma ou uma composição compreendendo os mesmos, por exemplo, em for- ma de pó, e um recipiente contendo um solvente apropriado para preparar uma solução do composto ou composição para administração a um animal, 15 incluindo um humano.
Em um sétimo aspecto, a presente invenção se refere ao uso de qualquer composto fluorado, conforme definido acima, ou composição ou kit respectivos, para diagnóstico por estudo por imagens, em particular to- mografia por emissão de pósitrons. O uso mais preferencialmente serve ao
* 20 estudo por imagens de tumores, estudo por imagens de doenças inflamató- rias e/ou neurodegenerativas, tais como esclerose múltipla da doença de Alzheimer, ou estudo por imagens de doenças associadas com angiogêne- se, tais como crescimento de tumores sólidos, e artrite reumatóide.
Adicionalmente, a presente invenção neste aspecto dos mesmos 25 se refere a um composto fluorado rotulado com isótopo 18F, para uso como medicamento, mais preferencialmente para uso como agente de formação por imagens para diagnóstico e mais preferencialmente para uso como a- gente de formação por imagens para tomografia por emissão de pósitrons. Em outra variação deste aspecto, a presente invenção também se refere a 30 compostos fluorados, os quais são mais preferencialmente rotulados com isótopo 19F e os quais têm Fórmulas químicas gerais l-F-A, l-F-B, ll-F-A, Il-F- B, Ill-F-A e lll-F-B para uso em provas biológicas e identificação cromatográ- fica. Mais preferencialmente, a invenção se refere ao uso de composto tendo qualquer uma das Fórmulas químicas gerais I, Il e Ill para a fabricação de um composto tendo qualquer uma das Fórmulas químicas gerais l-F-A, I-F- B, ll-F-A, ll-F-B, Ill-F-A ou lll-F-B como um agente de medição.
Em um oitavo aspecto, a presente invenção além disso se refe- re a um método para formação por imagens de doenças, o método referido compreendendo introduzir em um paciente uma quantidade detectável de um composto rotulado tendo Fórmula química geral l-F-A, l-F-B, ll-F-A, Il-F-
B, Ill-F-A ou lll-F-B conforme definido acima aqui, neste requerimento de patente, ou de um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato e pró- fármaco dos mesmos e formação por imagens do paciente.
Os compostos desta invenção são úteis para a formação por imagens de uma variedade de cânceres incluindo mas não limitados a carci- noma tais como de bexiga, de mama, do cólon, renal, de fígado, pulmonar, incluindo câncer pulmonar de células pequenas, do esôfago, da vesícula biliar, de ovário, do pâncreas, de estômago, do colo uterino, da tiróide, de próstata e da pele, tumores hematopoéticos de linhagem linfóide e mielóide, tumores de origem mesenquimal, tumores dos sistemas nervosos central e periférico, outros tumores, incluindo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteossarcoma, xeroderma pigmentosum, ceratoxantoma, câncer folicular da tiróide e sarcoma de Karposi.
O mais preferencialmente, o uso não é somente para estudo por imagens de tumores, mas também para estudo por imagens de doenças in- flamatórias e/ou neurodegenerativas, tais como esclerose múltipla ou doen- ça de Alzheimer, ou estudo por imagens de doenças associadas com angio- gênese, tais como crescimento de tumores sólidos, e artrite reumatóide.
Os compostos rotulados radioativamente de acordo com as Fórmulas l-F-A, l-F-B, ll-F-A, ll-F-B, Ill-F-A e lll-F-B proporcionados pela in- venção podem ser administrados por via intravenosa em qualquer veículo farmaceuticamente aceitável, por exemplo, meio convencional tal como um meio de solução salina aquosa, ou em meio de plasma sanguíneo, como < uma composição farmacêutica para injeção intravenosa. O meio referido também pode conter materiais farmacêuticos convencional tais como, por exemplo, sais farmaceuticamente aceitáveis para ajustar a pressão osmóti- ca, tampões, conservantes e similares. Entre os meios preferenciais estão 5 salina normal e plasma. Veículos farmacêuticos aceitáveis adequados são de conhecimento da pessoa versada na arte. A este respeito pode ser feita referência por exemplo, a Remington's Practice of Pharmacy, 11th ed. e no J. of. Pharmaceutical Science & Technology, Vol. 52, No. 5, Sept-Oet., p. 238 a 311 vide tabela á página 240 a 311, ambas as publicações incluídas aqui, 10 neste requerimento de patente, por meio de referência.
A concentração do composto fluorado tendo Fórmulas químicas gerais l-F-A, l-F-B, ll-F-A, ll-F-B, Ill-F-A e lll-F-B e o veículo farmaceutica- mente aceitável, por exemplo, em um meio aquoso, varia com o campo de uso em particular. Uma quantidade suficiente está presente no veículo far- 15 maceuticamente aceitável quando é obtenível visualização satisfatória do alvo da formação por imagens (por exemplo, um tumor).
De acordo com a invenção, os compostos radiorrotulados tendo Fórmulas químicas gerais l-F-A, l-F-B, ll-F-A, ll-F-B, Ill-F-A e lll-F-B quer como uma composição neutra ou como um sal com um contraíon farmaceu- ■ 20 ticamente aceitável são administrados em uma dose injetável de unidade única. Quaisquer dos veículos comuns de conhecimento daqueles versados na arte, tais como solução salina estéril ou plasma, podem ser utilizados de- pois de radiorrotulação para preparar a solução injetável para diagnóstico por estudo por imagens de vários órgãos, tumores e similares de acordo 25 com a invenção. Geralmente, a dose unitária a ser administrada para um agente de diagnóstico tem uma radioatividade de cerca de 0,1 mCi a cerca de 100 mCi, preferencialmente 1 mCi a 20 mCi. Para um agente radioterápi- co, a radioatividade da dose unitária terapêutica é cerca de 10 mCi a 700 mCi, preferencialmente 50 mCi a 400 mCi. A solução a ser injetada em do- 30 sagem unitária é de cerca de 0,01 ml a cerca de 30 ml. Para fins de diagnós- tico depois de administração intravenosa, pode ocorrer estudo por imagens do órgão ou tumor in vivo em uma questão de uns poucos minutos. No en- tanto, ocorre estudo por imagens, caso desejado, em horas ou ainda mais tempo, depois de injetar nos pacientes. Na maioria dos casos, uma quanti- dade suficiente da dose administrada se acumulará na área a ser formada por imagens dentro de cerca de 0,1 de uma hora para permitir que se tirem 5 imagens cintigráficas. Qualquer método convencional de estudo por imagens cintigráficas para fins de diagnóstico pode ser utilizado de acordo com esta invenção.
Portanto, modalidades desta invenção incluem métodos envol- vendo a fluoração por 18F de compostos prontos para uso como agentes pa- 10 ra estudo por imagens. Os compostos submetidos a fluoração, podem já in- cluir um agente de direcionamento para fins de estudo por imagens. Modali- dades preferenciais desta invenção envolvem a formação de uma molécula precursora, a qual pode incluir um agente de direcionamento, antes de fluo- ração com 18F, sendo a última etapa no processo antes da preparação do 15 composto para administração a um animal, em particular um humano.
O uso de aziridinas descrito aqui, neste requerimento de paten- te, facilita o processo. Portanto, um agente para estudo por imagens por PET desejado é proposto iniciando a partir de uma aziridina a qual é então submetida a fluoração por 18F.
Substituintes sobre similares aziridinas incluem grupos de liga-
ção ou grupos reativos designados para adição subsequente de um agente de direcionamento. Grupos de ligação podem incluir moléculas alifáticas ou aromáticas e formam prontamente uma ligação a um agente de direciona- mento apropriadamente funcionalizado selecionado. Uma variedade de simi- 25 lares grupos é conhecida na técnica. Estes incluem ácidos carboxílicos, clo- retos de ácido carboxílico e ésteres ativos, ácidos sulfônicos, sulfonil- cloretos, aminas, hidróxidos, tióis e etc. sobre qualquer lado.
Também são contemplados aqui, neste requerimento de paten- te, grupos os quais proporcionam ligações iônicas, hidrofóbicas e outras não -convalentes entre o anel aziridina e o agente de direcionamento.
Em um quarto aspecto, a presente invenção se refere a um mé- todo para preparar os referidos compostos reagindo um dos novos compos- < tos de aziridina de acordo com o primeiro aspecto conforme definido acima com um agente fluorado apropriado.
Condições apropriadas compreendem mas não estão limitadas
a, as reações de radiofluoração as quais são realizadas, por exemplo, em 5 um vaso de reação típico (por exemplo, frasco de Wheaton) sendo de co- nhecimente daqueles versados na técnica ou em um microrreator. A reação pode ser aquecida por métodos típicos, por exemplo, usando um banho de óleo, um bloco de aquecimento ou micro-ondas.
Preferencialmente, o referido agente de fluoração pode ser K18F, H18F, KH18F2 ou um sal de tetra-alquilamônio de 18F-, o mais preferencial- mente K18F.
Pode ser usado um solvente, o qual pode ser DMF, DMSO, MeCN, DMA, DMAA1 preferencialmente DMSO. Os solventes também po- dem ser uma mistura de solventes conforme indicado acima.
As reações de radiofluoração podem ser realizadas em dimetil-
formamida com carbonato de potássio como base e "kryptofix" como éter de coroa. Mas também outros solventes podem ser usados os quais são de co- nhecimento geral dos versados. Em uma modalidade preferencial, o agente de fluoração é 4,7,13,16,21,24-Hexaoxa-1,10-diazabiciclo[8.8.8]-hexacosano 20 K18F (sal de éter de coroa Kryptofix K18F), K18F, H18F, KH18F2 ou sal de te- tra-alquilamônio de 18F. Mais preferencialmente, o agente de fluoração é K18F, H18F, ou KH18F2.
As condições possíveis mencionadas incluem, mas não estão limitadas a: dimetilsulfóxido e acetonitrila como solvente e tetraalquil amônio 25 e tetra-alquil fosfônio carbonato como base. Água e/ou álcool podem ser en- volvidos em uma reação similar como cossolvente. As reações de radiofluo- ração são conduzidas por 1 a 45 minutos. Os tempos de reação preferenci- ais são 3 a 40 minutos. Tempos de reação preferenciais adicionais são 5 a 30 min.
Esta nova condição compreende o uso de ácido inorgânico e/ou
ácido orgânico na reação de radiorrotulação com 18F. Preferencialmente são usados ácidos orgânicos na reação de radiorrotulação com 18F. Mais prefe- rencialmente são usados ácidos alifáticos, cicloalifáticos, aromáticos, aralifá- ticos, heterocíclicos carboxílicos e sulfônicos na reação de radiorrotulação com 18F. O mais preferencialmente são usados ácidos carboxílicos alifáticos, incluindo mas não limitados a ácido propiônico, ácido acético e ácido fórmi- 5 co.
O método preferencialmente pode ser realizado sob uma tempe- ratura da reação de 100°C ou menos, o mais preferencialmente 80°C ou menos.
Em um método preferencial para preparar um composto tendo qualquer uma das Fórmulas químicas gerais l-F-A, l-F-B, ll-F-A, Il-F-B1 Ill-F- A e Ill-F-B1 a etapa de radiofluoração de um composto tendo qualquer uma das Fórmulas químicas gerais I, Il e Ill é realizada em uma temperatura a 90°C ou menos, mais preferencialmente em uma temperatura em uma faixa de a partir de 10°C até 90°C, ainda mais preferencialmente em uma tempe- ratura da reação a partir de temperatura ambiente até 80°C, ainda mais pre- ferencialmente em uma temperatura em uma faixa de a partir de 10°C até 70°C, ainda mais preferencialmente em uma temperatura em uma faixa de a partir de 30°C até 60°C, ainda mais preferencialmente em uma temperatura em uma faixa de a partir de 45 até 55°C e o mais preferencialmente em uma temperatura a 50°C.
É garantido um novo método no qual o produto final é preparado em uma única etapa a partir do precursor. Somente uma única etapa de puri- ficação é realizada opcionalmente deste modo a preparação pode ser reali- zada em um tempo curto (considerando a meia-vida de 18F). Em uma prepa- 25 ração típica de grupo prostético, são empregadas muito frequentemente temperaturas de 100°C e acima. A invenção proporciona métodos para reali- zar a preparação em temperaturas (80°C ou abaixo) que preservam as pro- priedades biológicas do produto final.
Exemplo para Rotulação:
Primeiro Exemplo:
18F-fluoreto (até 40 GBq) foi secado azeotropicamente na pre- sença de Kryptofix 222 (5 mg em 1,5 ml de MeCN) e carbonato de césio (2,3 mg em 0,5 ml de água) por aquecimento sob um fluxo de nitrogênio em 110 a 120°C por 20 a 30 minutos. Durante este tempo 3 χ 1 ml de MeCN foram adicionados e evaporados. Depois da secagem, uma solução do precursor (2 mg) em 150 μΙ de DMSO foi adicionado. O vaso da reação foi selado e 5 aquecido em 50 a 70°C por 5 a 15 minutos para efetuar a rotulação. A rea- ção foi resfriada até a temperatura ambiente e diluída com água (2,7 ml). A mistura da reação bruta foi analisada usando uma HPLC analítica. O produto foi obtido por radio HPLC do preparativo para dar o peptídeo rotulado com 18F desejado.
Sem elaboração adicional, acredita-se que uma pessoa versada
na técnica, usando a descrição precedente, pode utilizar a presente inven- ção em sua total extensão. As modalidades específicas preferencias que se seguem, portanto, devem ser consideradas como meramente ilustrativas, e não-limitativas do restante da descoberta de qualquer modo que seja.
A(s) descrição(ões) inteiras de todos os requerimentos, patentes
e publicações, citados aqui, neste requerimento de patente, são incorpora- das aqui, a este requerimento de patente, por meio de referência.
Os exemplos seguintes podem ser repetidos com sucesso simi- lar substituindo os reagentes e/ou condições de operação genericamente ou especificamente descritos desta invenção por aqueles usados nos exemplos precedentes.
A partir da descrição precedente, uma pessoa versada na técni- ca pode determinar facilmente as características essenciais desta invenção e, sem se afastar do espírito e do âmbito da mesma, pode fazer várias alte- rações e modificações da invenção para adaptá-la a vários usos e condi- ções.
Método Geral para a Preparação de Compostos
A porção do radical de agente de direcionamento, preferencial- mente porção de peptídeo, da parte E-Z-Y- da molécula pode ser preparada convenientemente de acordo com técnicas estabelecidas de modo geral co- nhecidas na técnica da síntese de peptídeos, tais como síntese de peptídeos de fase sólida. São síntese de peptídeos de fase sólida-Fmoc suscetível, empregando proteção e desproteção alternadas. Estes métodos estão bem documentados na literatura de peptídeos. (Referência: "Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis" A practical approach", Editado por W.C.Chan e P.D.White, Oxford University Press 2000) (Para Abreviações vide Descri- 5 ções).
Exemplos
Exemplos da preparação / síntese de compostos precursores são mostrados abaixo e são ilustrativos para algumas das modalidades da invenção descritas aqui, neste requerimento de patente. Estes exemplos não 10 devem ser considerados como limitando o espírito ou o âmbito da invenção de qualquer modo. A porção aziridina destes precursores pode ser facilmen- te fluorada, tal como fluorada com 18F. Compostos de (19F) a frio foram pre- parados e são necessários como referências, por exemplo, para análise por HPLC de produtos rotulados.
Métodos para preparar compostos tendo Fórmulas químicas gerais I. Il e Ill
O Esquema 1 mostra um modo possível para síntese de com- postos tendo Fórmula química geral I.
Compostos tendo Fórmula química geral I podem ser sintetiza- dos iniciando com aziridinas comerciais 1 ou a partir de α-amino álcoois a- través de mesilação ou tosilação do álcool e substituição nucleofílica para a formação de aziridinas 1 (não mostrada). Dependendo do padrão de substi- tuição sobre a aziridina, pode ser necessário realizar as primeiras etapas de funcionalização apropriada com um grupo protetor inerte, tal como tritil. Se o padrão de substituição leva a uma aziridina mais estável, grupos de ativação deficientes de elétrons conforme necessário para fluoração, respectivamen- te, podem ser incluídos direto a partir do início da seqüência sintética. No procedimento mostrado aqui, a aziridina é protegida primeiro com um grupo tritila seguido por saponificação do éster metílico 2. O ácido resultante 3 po- de ser convertido para um éster ativo 4 seguido por tratamento com glicina ou ser diretamente acoplado com glicina para produzir o derivado de aziridi- na 5 com um Iigante estendido. Isto é necessário se n = 0 uma vez que azi- ridinas diretamente substituídas com uma funcionalidade carboxilato são menos estáveis do que aziridinas substituídas com amidas. Esta extensão de Iigante não é necessária se n > 0. Na etapa seguinte a proteção tritil é clivada e vários outros grupos (6), preferencialmente grupos arilsulfonila substituídas, podem ser introduzidos para ativar a aziridina para substituição 5 nucleofílica (fluoração). Saponificação para 7 leva a blocos de construção os quais podem ser adicionados a agentes de direcionamento para dar precur- sores de rotulação 8.
Esquema 1
6 7
biomolécula/ agente de direcionamento DIC ou EDCI DCM, DMF
50 - 65%
8
O Esquema 2 mostra um modo possível de síntese de compos- tos de acordo tendo Fórmula química geral II.
Compostos tendo Fórmula química geral Il podem ser sintetiza- dos iniciando com derivados de arila substituídos apropriados 13 introduzin- do um grupo clorossulfonila para 14 seguido pela adição de aziridina pura disponível comercialmente para dar a aziridina substituída 15. Saponificação 15 leva a blocos de construção 16 as quais podem ser adicionadas a agentes de direcionamento para dar precursores de rotulação 17. Esquema 2
Cl Λ Γ"ΝΗ N 0
HSO3Cl1 s'-° L·' S'.0
CH2CI8 0 Y^Vsn NaHC°3· ^QAc 0'
O X R1
13 14 15
biomolecular/ _/i
M agente de
_ O direcionamento '
base Ο'λ^, n _.. agente de ligação θ''Α^ n M
0H -'biomoIecuIar
17
16
O Esquema 3 mostra um modo possível de síntese de compos- tos tendo Fórmula química geral III.
Compostos tendo Fórmula química geral Ill podem ser sintetiza- 5 dos iniciando com a reação de um di-hidro pirrol 20 e metil 4-cloro-4- oxibutirato 21 a qual leva ao di-hidro pirrol substituído 22. As etapas seguin- tes como epoxidação (23), abertura do epóxido com azida (24), tosilação do álcool resultante (25), redução de Staudinger da azida seguida por substitui- ção do tosilato (26) são usadas para gerar a aziridina 26 desejada. Diferen- 10 tes tipos de grupos de ativação R, preferencialmente grupos arilsulfonila substituídos podem ser introduzidos para dar 27. Saponificação leva a blo- cos de construção 28 os quais podem ser adicionados a agentes de direcio- namento diretamente ou através de um éster ativo 29 para dar precursores de rotulação 30.
Esquema 3
2
R ^ 9 n mPPRA Q 9
U n morbA Mn d1 Il n
r1^ Et3N, DCM CHiCli_ NaNi. DMF ΗθΛ^Ν^^γ°
Y "■ 22 23
21 O
O
R\
TsCI1DCM ^ HjO1 Et3N 'V^ii TT ^ Et0Ac
-- Y-J O ---HN^rj 0 <" I,
N3' R1 R1 R R
25 26 27
agente de
ií - .____η λ direcionamento, Fj n H
NaOH1 THF r1Y^jN 0H DCM. DIPEa' __ R \^N N ' biomolécuU,
R' R’ d'N i7 0O r' r’
R R’ RR'
2q biomoléculaí
agente de
direcionamento, Detalhes experimentais podem ser vistos a partir da parte expe- rimental nas partes que se seguem.
A reação de fluoração levando a derivados rotulados, como e- xemplos típicos de reações de fluoração de todos os diferentes tipos de compostos de aziridina referidos é mostrada no Esquema 4.
Esquema 4
a) Tipo
J.Í.
N x0inll η
Jjiomol écula
R o
KF, K222 solvente
HN R O R
32
-biomolécula
"'nVV^n-^
H F R1 rlQ H
biomol écula
b) Tipo Il
<1.
C
CT
R1
-O
biomolécula
KF, K222, solvente
hV
.n H
R1
'biomolécula
17
c) Tipo
R1
N N
n H
30
.,biomolécula
KF, K222, solvente
34
'"Xf
HN R1
I
R
^biomolécula
35
PARTE EXPERIMENTAL Exemplo 1
Preparação de compostos tendo Fórmula química geral I e compostos mo- delo correspondentes
Preparação de acordo com o Esquema 1 com n = 0.
Preparação de éster metílico de ácido 1-tritil-aziridina-2-carboxílico 2a
o
2a
3 g (29,6 mmols) de aziridina 1a foi solvido em 50 ml de dicloro- metano, resfriado até O0C seguido pela adição de 6,17 ml (44,51 mmols) de
trietilamina e 9,93 g (35,61 mmols) de cloreto de tritila. A mistura da reação
foi agitada em temperatura ambiente por 2 h e concentrada. O resíduo foi
purificado por cromatografia de sílica-gel para dar 9,96 g (98%) de 2a.
1H-RMN (CDCI3): δ = 7,41 (m, 6H), 7,30 - 7,17 (m, 9H), 3,77 (s,
3H), 2,26 (dd, 1H), 1,89 (dd, 1H), 1,42 (dd, 1H) ppm.
Preparação de ácido 1-tritil-aziridina-2-carboxílico 3a
o
OH
3a
7,45 g (21,69 mmols) de 2a foram solvidos em 55 ml de tetra- hidrofurano, resfriados até 0C e tratados com 34,7 ml (34,71 mmols) de solu- ção de hidróxido de sódio a 1 N. A mistura da reação foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente, concentrada e o resíduo foi purifica- do por cromatografia de sílica-gel para dar 6,91 g (97%) de 3a.
1H-RMN (MeOD): δ = 7,45 (m, 6H), 7,30 - 7,17 (m, 9H), 2,16 (dd, 1H), 1,78 (dd, 1H), 1,40 (dd, 1H) ppm.
Preparação de 1-Tritil-aziridina-2-carboxílico ácido-2.5-dioxo-pirrolidin-1-il éster 4a
4a
910 mg (2,76 mmols) de 3a foram solvidos em diclorometano, 1,34 g (3,04 mmols) de BOP e 318 mg (2,76 mmols) de N- hidroxissuccinimida foram adicionados e a solução foi resfriada até 0°C. Em 20 seguida 0,76 ml (4,42 mmols) de etil di-isopropilamina foi adicionado lenta- mente e a reação foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambien- te. A mistura da reação foi diluída com diclorometano, lavada com 10% de ácido cítrico e salmoura, secada sobre sulfato de sódio e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel para dar 760 mg (64%) 25 de 4a. 1H-RMN (MeOD): δ = 7,45 (m, 6H), 7,30-7,17 (m, 9H), 2,84 (s, 4H), 2,44 (m, 1H), 2,09 (dd, 1H), 1,60 (dd, 1H)ppm.
Preparação de éster metílico de ácido (n-(tritil)-aziridina-2-carbonin-amino) acético 5a
o
o
5a
218 mg (1,74 mmol) de cloridreto de éster metílico de glicina foi
solvido em DMF e tratado com 0,36 ml (2,6 mmols) de trietil amina. Depois de 30 min em temperatura ambiente 740 mg (1,74 mmol) de 4a foi adiciona- do. A mistura da reação foi agitada por 2 h a 50°C e em seguida concentra- da. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel para dar 550 (79%) de 5a.
1H-RMN (CDCI3): δ = 7,45 (m, 6H), 7,30-7,17 (m, 9H), 4,22 (dd, 1H), 4,10 (dd, 1H), 3,81 (s, 3H), 2,05 (m, 2H), 1,50 (dd, 1H) ppm.
Preparação de éster metílico de ácido (f1-(tolueno-4-sulfonil)-aziridina-2- carbonill-amino} acético 6aa
6aa
2,3 g (5,74 mmols) de 5a foi solvido em 95 ml de clorofórmio,
resfriado até O0C e titulado com ácido trifluoro acético até completa conver- são. A mistura foi neutralizada com solução saturada de bicarbonato de só- dio e concentrada. O resíduo foi suspendido em 95 ml de acetato de etila e 95 ml de solução saturada de bicarbonato de sódio seguida por (11,49 20 mmols) de cloreto de sulfônico ácido. A mistura da reação foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. As fases foram separadas, a fase aquosa foi extraída com acetato de etila e as fases orgânicas combinadas foram secadas sobre sufato de sódio e concentradas. O resíduo foi purifica- do por cromatografia de sílica-gel para dar (21 a 47%) de 6aa.
1H-RMN (MeOD): δ = 7,83 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 3,89 (s, 2H), 3,67 (s, 3Η), 3,30 (d, 1H), 2,76 (d, 1H), 2,50 (d, 1H), 2,44 (s, 3H) ppm.
Preparação de éster metílico de ácido {f1-(2,4.6-tri-isopropil-
benzenossulfonil)-aziridina-2-carbonil1-amino) acético 6ab
o o. o
6a b
Este composto foi preparado em um modo análogo a 6aa.
1H-RMN (MeOD): δ = 7,33 (s, 2H), 4,33 (sept, 2H), 3,98 (d, 2H),
3,73 (s, 3H), 3,43 (dd, 1H), 2,98 (sept, 1H), 2,87 (d, 1H), 2,60 (d, 1H), 1,32- 1,28 (m, 18H) ppm.
Preparação de éster metílico de ácido (ri-(3.4-dimetóxi-benzenossulfonil)-
aziridina-2-carbonin-amino) acético 6ac
o
O Ji H l
' O
6ac
0X °“
Este composto foi preparado em um modo análogo a 6aa.
1H-RMN (CDCI3): δ = 7,56 (dd, 1H), 7,41 (d, 1H), 7,00 (d, 1H),
6,62 (bt, 1H), 4,03 (dd, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,92 (dd, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,28 (dd, 1H), 2,83 (d, 1H), 2,46 (d, 1H) ppm.
Preparação de ácido {[1-(tolueno-4-sulfonil)-aziridina-2-carbonil1-amino) acé- tico 7aa
7aa
(1,18 mmol) 6aa foi solvido em 15 ml de tetra-hidrofurano, resfri- ado até 0°C e tratado com 0,71 ml (1,42 mmol) de solução de hidróxido de sódio a 2 N. A mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 h e concentrada. O resíduo foi absorvido em água, cuidadosamente neutrali- zado com ácido cítrico e extraído com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas. O produto 7aa (90 a 97%) foi usado sem purifica- ção adicional.
1H-RMN (MeOD): δ = 7,83 (d, 2H), 7,44 (d, 2H), 3,86 (s, 2H), 3,30 (d, 1H), 2,76 (d, 1H), 2,51 (d, 1H), 2,44 (s, 3H) ppm.
Preparação de ácido ([1-(2.4.6-tri-isopropil-benzenossulfonil)-aziridina-2- carbonill-amino) acético 7ab
0N-Yoh H &
7ab
Este composto foi preparado em um modo análogo a 7aa.
1H-RMN (MeOD): δ = 7,27 (s, 2H), 4,27 (sept, 2H), 3,90 (d, 2H),
3,99 (dd, 1H), 2,93 (sept, 1H), 2,78 (d, 1H), 2,55 (d, 1H), 1,30-1,23 (m, 18H) ppm.
Preparação de ácido ([1-(3,4-dimetóxi-benzenossulfonil)-aziridina-2- carbonill-amino) acético 7ac
o
" .OH
N H ü
H
o o— 'a
\
Este composto foi preparado em um modo análogo a 7aa.
1H-RMN (CDCI3): δ = 7,56 (dd, 1H), 7,39 (d, 1H), 6,99 (d, 1H),
6,78 (bt, 1H), 4,09 (dd, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,94 (dd, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,32 (dd, 1H), 2,80 (d, 1H), 2,46 (d, 1H) ppm.
Preparação de 1-(tolueno-4-sulfoniP-aziridina-2-carboxílico ácido - Glv-Val- βΑΐ8-ΡΙΐ6-0Ιν-3ΐτ^3 8aaa
K
0
.NH,
Ò O ·' V O
8aaa 0,1 mmol de di- ou tetrapeptídeo ligado a resina, dilatado em DMF foi filtrado e adicionado a uma solução de 0,3 mmol de 7aa, 113,7 mg (0,3 mmol) de HBTU e 104,5 μΙ (0,6 mmol) de di-isopropil etil amina em 1,5 ml de DMF. A mistura foi agitada por 4 h, filtrada e a resina restante foi lava- da com DMF e diclorometano e secada sob vácuo. Em seguida a resina foi tratada com 1,5 ml de uma mistura contendo 85% de TFA, 5% de água, 5% de fenol e 5% de tri-isopropil silano por 2 h, filtrada seguida por precipitação do produto em 20 ml de MTBE. O precipitado foi purificado por HPLC para dar 7 a 23% de 8aaa.
HPLC-MS (ES+): m/z (%) = 672 (100).
Preparação de 1 -(2,4,6-Tri-isopropil-benzenossulfonil)-aziridina-2-carboxílico - Glv-Val^Ala-Phe-GIv-amida 8aba
0O O O o
8aba
Este composto foi preparado em um modo análogo a 8aaa inici- ando a partir de 7ab.
HPLC-MS (ES+): m/z {%) = 784 (100).
Preparação de f(3-{3-f(2R,4S,5R)-4-( 1 -metóxi-ciclohexilóxi)-5-( 1 -metóxi- ciclohexiloximetil)-tetra-hidro-furan-2-in-5-metil-2,6-dioxo-3,6-di-hidro-2H- pirimidin-1-il)-propilcarbamoiO-rnetin-amida de ácido 1-(2,4,6-tri-isopropil- benzenossulfonil)-aziridina-2-carboxílico 8abb
I I
-ò O-A θ/,Ν °
H\_JH OH
o-f^x 8abb
/
60 mg (0,15 mmol) de 7ab foram solvidos em 4 ml de diclorome- tano seguido por 46 pl (0,29 mmol) de DIC e 76,5 mg (0,15 mmol) de 3-(3- Amino-propil)-1-[(2R,4S,5R)-4-(1-metóxi-ciclohexilóxi)-5-(1-metóxi- ciclohexiloximetil)-tetra-hidro-furan-2-il]-5-metil-1 H-pirimidina-2,4-diona. A mistura da reação foi agitada durante a noite em temperatura ambiente e
concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel para dar
87 mg (65%) de 8abb.
1H-RMN (CDCI3): δ = 7,56 (s, 1H), 7,21 (s, 2H), 7,01 (t, 1H), 6,72
(t, 1H), 6,35 (t, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,28 (sept, 2H), 4,16 (m, 1H), 4,08 (dd,
1H), 3,97 (m, 2H), 3,76 (dd, 1H), 3,67 (dd, 1H), 3,57 (dd, 1H), 3,44 (dd, 1H),
3,21 (s, 3H), 3,18 (s, 3H), 3,16 (m, 2H), 2,92 (sept, 1H), 2,86 (d, 1H), 2,66 (d,
1H), 2,36 (m, 1H), 2,05 (dd, 1H), 1,91 (s, 3H), 1,82-1,76 (m, 6H), 1,54-1,37
(m, 14H), 1,30-1,26 (div. d, 18H) ppm.
Preparação de compostos modelo para testar fluoração
Preparação de benzilamida de ácido 1-tritil-aziridina-2-carboxílico 9a
o
9a
6 g (14,07 mmols) de 4a foi solvido em 300 ml de diclorometano, seguido pela adição de 1,57 ml (14,07 mmols) de benzilamina. A mistura da reação foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente e con- centrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel para dar 3,27 (55%) de 9a.
1H-RMN (CDCI3): δ = 7,43-7,20 (m, 20H), 7,12 (t, 1H), 4,76 (dd, 1H), 4,35 (dd, 1H), 2,09 (dd, 1H), 2,02 (d, 1H), 1,52 (d, 1H) ppm.
Preparação de benzilamida de ácido 1-(tolueno-4-sulfonil)aziridina-2- carboxílico 10aa
10aa
220 mg (0,53 mmol) de 9a foi solvido em clorofórmio, resfriado até 0°C e titulado com ácido trifluoro acético até completa conversão. Solu- ção saturada de bicarbonato de sódio foi adicionado até ser atingido pH 6 a
7 e a solução foi concentrada. O resíduo foi absorvido em 15 ml de acetato de etila, tratado com 15 ml de solução saturada de bicarbonato de sódio se- guida por (1,05 mmol) cloreto de ácido sulfônico. A mistura da reação foi agi- tada de um dia para o outro em temperatura ambiente. A fase orgânica foi separada, secada sobre sufato de sódio e concentrada. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia de sílica-gel para dar (43 a 65%) de 10aa.
1H-RMN (CDCI3): δ = 7,81 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 7,29 - 7,26 (m, 4H), 7,10 (dd, 2H), 6,41 (bt, 1H), 4,36 (dd, 1H), 3,30 (dd, 1H), 2,93 (d, 1H), 2,47 (s, 3H), 2,41 (d, 1H) ppm.
Preparação de benzil amida de ácido 1-(2.4,6-tri-isopropil-benzenossulfonil)- aziridina-2-carboxílico 10ab
10ab
Este composto foi preparado em um modo análogo a 10aa.
1H-RMN (CDCI3): δ = 7,35-7,27 (m, 4H), 7,17 (s, 2H), 7,15 (m, 1H), 6,32 (t, 1H), 4,37 (dd, 1H), 4,35 (dd, 1H), 4,20 (sept, 2H), 3,42 (dd, 1H),
2,91 (sept, 1H), 2,87 (d, 1H), 2,38 (d, 1H), 1,26 (d, 6H), 1,19 (2d, 12H) ppm. Preparação de benzil amida de ácido 1-(3,4-dimetóxi-benzenossulfonil)- aziridina-2-carboxílico 10ac
M
Ox O IOac
Este composto foi preparado em um modo análogo a 10aa. 1H-RMN (CDCI3): δ = 7,51 (dd, 1H), 7,34 - 7,26 (m, 5H), 7,11- 7,08 (m, 1H), 6,97 (d, 1H), 6,41 (bt, 1H), 4,39 (dd, 1H), 4,33 (dd, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 3,29 (dd, 1H), 2,83 (d, 1H), 2,42 (d, 1H) ppm.
Fluoração de compostos modelo
Preparação de N-Benzil-3-fluoro-2-(tolueno-4-sulfonilamino)-propionamida 11aa 0,079 mmol de 10aa foi solvido em DMSO seguido pela adição de 32,75 mg (0,087 mmol) de Kryptofix 222 e 5,05 mg (0,87 mmol) de KF. A mistura da reação foi agitada em 50° a 80°C por 1 hora, absorvida em aceta- to de etila e extraída com solução saturada de cloreto de amônio. As fases aquosas combinadas foram extraídas duas vezes com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por croma- tografia de sílica-gel para dar (23 a 71%) de 11aa.
1H-RMN (CDCI3): δ = 7,76 (d, 2H), 7,38 - 7,26 (m, 5H), 7,19 (d, 2H), 6,72 (bt, 1H), 5,41 (d, 1H), 4,84 (ddd, 1H), 4,45 (dd, 1H), 4,40 (dd, 1H),
4,20 (ddd, 1H), 3,95 (m, 1H), 2,44 (s, 3H) ppm.
Preparação_de_N-Benzil-3-fluoro-2-(2.4,6-tri-isopropil-
benzenossulfonilamino)-propionamida 11ab
o
Este composto foi preparado em um modo análogo a 11aa. 1H-RMN (CDCI3): δ = 7,35 - 7,16 (m, 7H), 6,84 (bt, 1H), 5,40 (d, 1H), 4,90 (ddd, 1H), 4,51 (dd, 1H), 4,40 (dd, 1H), 4,25 (ddd, 1H), 4,06 (m, 1H), 4,02 (sept, 2H), 2,91 (sept, 1H), 1,19 (m, 18H) ppm.
Preparação de N-Benzil-2-(3.4-dimetóxi-benzenossulfonilamino)-3-fluoro- propionamida 11ac Este composto foi preparado em um modo análogo a 11aa. 1H-RMN (CDCI3): δ = 7,48 (dd, 1H), 7,34 - 7,26 (m, 5H), 7,18 (d, 1H), 6,92 (d, 1H), 6,71 (bt, 1H), 5,43 (d, 1H), 4,84 (ddd, 1H), 4,45 (dd, 1H), 4,41 (dd, 1H), 4,26 (ddd, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,93 (m, 1H), 3,90 (s, 3H) ppm.
Fluoração
Preparação de 3-Fluoro-2-(2.4,6-tri-isopropil-benzenossulfonilamino)- propion- Glv-Val^Ala-Phe-Gly-amida 32aba
NH2
O ” \ A O
32aba
4 mg (5,1 μΜ) de aziridina 8aba foram tratados com uma mistura de 1,2 mg (20,4 μΜ) de KF e 7,7 mg (20,4 μΜ) de Kryptofix em 0,5 ml de
DMSO por 15 min a 50°C. Em seguida a mistura da reação foi analisada por HPLC-MS que mostrou uma conversão de 10% para o produto desejado 32aba.
HPLC-MS (ES+): m/z (%) = 804,14 (100).
Preparação de 3-Fluoro-N-r(3-(3-f(2R.4S,5R)-4-(1-metóxi-ciclohexilóxi)-5-(1- metóxi-ciclohexiloximeti0-tetra-hidro-furan-2-in-5-metil-2.6-dioxo-3.6-di-hidro- 2H-pirimidin-1-il)-propilcarbamoil)-metil1-2-(tolueno-4-sulfonilamino)- propionamida 32abb
Il
-ο °"Λ^Ον/ν^°
h \__y H
O H
O ~T^\ 32abb
/
mg (0,033 mmol) de 8abb foram solvidos em 1,5 ml de DM- SO seguidos por 13,6 mg (0,036 mmol) de Kryptofix K222 e 2,1 mg (0,036 mml) de KF. A mistura da reação foi agitada em 50°C por 30 min até comple- ta conversão da matéria-prima. A mistura foi então diluída com acetato de etila, lavada com solução aquosa saturada de cloreto de amônio, salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada. O resíduo foi purifica- do por cromatografia de sílica-gel para dar 5 mg (16%) de 32abb.
1H-RMN (CDCI3): δ = 7,62 (s, 1H), 7,52 (dd, 1H), 7,30 (t, 1H),
7,18 (s, 2H), 6,84 (d, 1H), 6,34 (dd, 1H), 4,89 (ddd, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,42 (ddd, 1H), 4,32 (dd, 1H), 4,19-4,15 (m, 2H), 4,11 (sept, 2H), 4,01 - 3,97 (m, 2H), 3,71 - 3,66 (m, 2H), 3,57 (dd, 1H), 3,30 (m, 1H), 3,21 (s, 3H), 3,18 (s, 3H), 3,02 (m, 1H), 2,91 (sept, 1H), 2,40 (ddd, 1H), 2,07 - 2,03 (m, 2H), 1,88 (s, 3H), 1,86 - 1,83 (m, 2H), 1,80 - 1,72 (m, 4H), 1,60 - 1,45 (m, 16H), 1,27 -
1,24 (div. d, 18H) ppm.
Exemplo 2
Preparação de compostos tendo Fórmula química geral Il e compostos mo- delo correspondentes Preparação de acordo com o Esguema 2 com n = 1.
Preparação de éster metílico de ácido (2-clorosulfonil-3,5-dimetóxi-fenil)- acético 14a
14a
0,4 ml (6 mmol) de ácido clorossulfônico foram solvidos em 4 ml de diclorometano a -10°C seguido pela lenta adição de 600 mg (2,85 mmols) 20 de éster metílico de ácido (3,5-dimetóxi-2-metil-fenil)-acético 13a solvido em 2 ml de diclorometano. A mistura da reação foi agitada por 1 h em tempera- tura ambiente, diluída com 50 ml de éster etílico de ácido acético e lavada com 10 ml de solução saturada de bicarbonato de sódio. As fases foram se- paradas e a fase aquosa foi extraída com éster etílico de ácido acético. As 25 fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas para dar 451 mg (51%) de 14a bru- to o qual foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.
1H-RMN (CDCI3): δ = 6,54 (d, 1H), 6,37 (d, 1H), 4,03 (s, 5H), 3,89 (s, 3H), 3,72 (s, 3H). Preparação de éster metílico de ácido r2-(aziridina-1-sulfoniQ-3,5-dimetóxi- fenill-acético 15a
V7
N
O=S=O
/O 15a
0,22 ml (4,2 mmols) de aziridina foram solvidos a OcC em uma mistura de 3,5 ml de solução saturada de bicarbonato de sódio e 7 ml de 5 acetato de etila seguido pela adição de 432 mg (1,4 mmol) de éster metílico de ácido (2-clorosulfonil-3,5-dimetóxi-fenil)-acético 14a. A mistura da reação foi então agitada em temperatura ambiente por 1 h. As fases foram separa- das e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre sulfato de sódio, 10 filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica- gel para dar 307 mg (70%) de 15a.
1H-RMN (CDCI3): δ = 6,52 (d, 1H), 6,38 (d, 1H), 4,05 (s, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,86 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 2,44 (s, 4H) ppm.
Exemplo 3
Preparação de compostos tendo Fórmula química geral Ill e compostos mo- delo correspondentes
Preparação de acordo com o Esquema 3 com n = 1 .
Preparação de éster metílico de ácido 4-(2.5-di-hidro-pirrol-1-il)-4-oxo- butírico 22a
o
22a
1 g (22,14 mmols) de 2,5-di-hidro pirrol 20 foi solvido em 60 ml
de diclorometano e resfriado até 0o seguido pela lenta adição de 3,3 ml (26,57 mmols) de 4-cloro-4-oxobutirato de metila 21a e 4,6 ml (33,21 mmols) de trietilamina. A mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 h e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel para dar 2,42 g (60%) de 22a.
1H-RMN (CDCI3): δ = 5,86 (m, 1H), 5,80 (m, 1H), 4,28 - 4,21 (m, 4Η), 3,69 (s, 3Η), 2,70 (m, 2Η), 2,57 (m, 2Η) ppm.
Preparação de éster metílico de ácido 4-(6-oxa-3-aza-bicicloí3,1,01hex-3-il)- 4-oxo-butírico 23a
o
23a
2,24 g (12,23 mmols) de 22a foi solvido em 70 ml de diclorome- 5 tano seguido pela adição de 4,9 g (22,01 mmols, 77%) de mCPBA. A mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente por 4 dias, diluída com ace- tato de etila, lavada com bicarbonato e salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia so- bre sílica para dar 1,34 g (55%) de 23a.
1H-RMN (CDCI3): δ = 4,01 (d, 1H), 3,86 (d, 1H), 3,82 (dd, 1H),
3,78 (dd, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,62 (d, 1H), 3,44 (d, 1H), 2,82-2,52 (m, 4H) ppm. Preparação de éster metílico de ácido 4-((3S,4S)-3-azido-4-hidróxi-pirrolidin- 1-il)-4-oxo-butírico 24a
o
7,6 g (38,15 mmols) de epóxido 23a foi solvido em 250 ml de 15 DMF e tratado com 3,47 g (53,41 mmols) de azida de sódio. A mistura da reação foi agitada em 100°C por 5 h, resfriada, diluída com diclorometano, lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e con- centrada para dar 4,6 g (50%) de 24a bruto o qual foi usado sem purificação adicional.
1H-RMN (CDCI3, mistura de diastereômeros): δ = 4,26 (m, 1H),
4,03 (m, 1H), 3,88 - 3,44 (m, 4H), 3,67 (s, 3H), 2,70 - 2,51 (m, 4H) ppm. Preparação de éster metílico de ácido 4-[(3S,4S)-3-azido-4-(tolueno-4- sulfonilóxi)-pirrolidin-1 -iH-4-oxo-butírico 25a
o
3,91 g (16,14 mmols) de 24a foi solvido em diclorometano, res- friado até 0°C seguido pela adição de 5,6 ml (40,35 mmols) de trietilamína, 590 mg (4,84 mmols) de DMAP e 5,39 g (28,25 mmols) de cloreto de tosila. A mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro, concentrada, absorvida em acetato de etila, lavada com solução satu- rada de cloreto de amônio e salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada 5 e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel para dar 4,07 g (64%) de 25a.
Preparação de éster metílico de ácido 4-(3,6-diaza-biciclo[3,1.01hex-3-il)-4- oxo-butírico 26a
trila seguido por 564 mg (2,14 mmols) de trifenil fosfina. A mistura da reação 15 foi agitada em temperatura ambiente por 2,5 h seguida pela adição de 0,9 ml (49 mmols) de água. Depois de agitar em temperatura ambiente de um dia para o outro 0,8 ml (5,77 mmols) de trietil amina foram adicionados e a mis- tura foi agitada outras 5 horas em temperatura ambiente e em seguida con- centrada. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre NH2-sílica gel pa- 20 ra dar 263 mg (64%) de 26a.
Preparação de éster metílico de ácido 4-oxo-4-f6-(2,4.6-tri-isopropil- benzenossulfonil)-3,6-diaza-bicicloí3,1.01hex-3-in-butírico 27a
1H-RMN (CDCI3, mistura de diastereômeros): δ = 7,82 (d, 2H),
7,79 (d, 2H), 7,41 (d, 2H), 7,38 (d, 2H), 4,83 (m, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,33 (m, 1H), 4,13 (m, 1H), 3,83 - 3,79 (m, 2H), 3,68 (s, 6H), 3,70 - 3,53 (m, 6H), 2,66
(m, 4H), 2,56 - 2,46 (m, 4H), 2,48 (s, 3H), 2,47 (s, 3H) ppm.
o
820 mg (2,07 mois) de 25a foram solvidos em 32 ml de acetoni-
1H-RMN (CDCI3): δ = 3,91 (d, 1H), 3,74 (d, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,55 (d, 1H), 3,42 (d, 1H), 2,80 - 2,72 (bm, 2H), 2,65 (dd, 2H), 2,51 (dd, 2H) ppm.
o
27a
250 mg (1,26 mmol) de 26a foi solvido em 24 ml de acetato de etila e 24 ml de solução saturada de bicarbonato de sódio seguida por 764 mg (2,52 mmols) de 2,4,6-tri-isopropil cloreto de fenilsulfonila. A mistura da reação foi agitada durante a noite seguida por separação de fases e extra- ção da fase aquosa com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas 5 foram lavadas com salmoura, secadas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica para dar 265 mg (45%) de 27a.
1H-RMN (CDCI3): δ = 7,18 (s, 2H), 4,28 (sept, 2H), 3,94 (d, 1H),
3,79 (d, 1H), 3,70 (dd, 1H), 3,67 (s, 3H), 3,62 (dd, 1H), 3,58 (dd, 1H), 3,42 (dd, 1H), 2,91 (sept, 1H), 2,72 - 2,40 (m, 4H), 1,27- 1,24 (m, 18H)ppm.
Preparação de ácido 4-oxo-4-f6-(2,4,6-tri-isopropil-benzenossulfonil)-3,6- diaza-bicicloí3.1.01hex-3-il1-butírico 28a
30 mg (0,065 mmol) de 27a foram solvidos em 1 ml de THF, res- friado até 0°C e tratado com 0,045 ml de NaOH a 2 N. A mistura da reação 15 foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas, concentrada, diluída com água e o pH foi ajustado a 4 com 10% de ácido cítrico aquoso. A solução aquosa foi extraída várias vezes com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre sufato de sódio e concentrada para dar 28 mg (96%) de 28a o qual foi usado sem purificação 20 adicional.
1H-RMN (CDCI3): δ = 7,18 (s, 2H), 4,27 (sept, 2H), 3,95 (d, 1H),
3,79 (d, 1H), 3,70 (dd, 1H), 3,62 (dd, 1H), 3,58 (dd, 1H), 3,45 (dd, 1H), 2,91 (sept, 1H), 2,70-2,45 (m, 4H), 1,27 - 1,24 (m, 18H) ppm.
Preparação de éster 2,5-dioxo-pirrolidin-1-ílico de ácido 4-oxo-4-[6-(2,4,6-tri- isopropil-benzenossulfonil)-3,6-diaza-bicicloí3.1 .OIhex-3-ill-butírico 29a 180 mg (0,4 mmol) de 28a foram solvidos em 3,6 ml de dicloro- metano seguido pela adição de 265 mg (0,6 mmol) de BOP e 50,6 mg (0,44 mmol) de N-hidroxissuccinimida. A mistura da reação foi resfriada até 0°C seguida pela adição de 0,12 ml (0,72 mmol) de di-isopropil etil amina. A mis- 5 tura foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro, diluída com diclorometano, lavada com 10% de ácido cítrico, solução aquosa satu- rada de bicarbonato e salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel para dar 85 mg (39%) de 29a.
1H-RMN (CDCI3): δ = 7,17 (s, 2H), 4,27 (sept, 2H), 3,97 (d, 1H),
3,77 (d, 1H), 3,70 (dd, 1H), 3,62 - 3,58 (m, 2H), 3,42 (dd, 1H), 2,99 - 2,87 (m, 3H), 2,83 (s, 4H), 2,58 (m, 2H), 1,28 - 1,22 (div. d, 18H) ppm.
Preparação de N-Benzil-4-oxo-4-f6-(2.4,6-tri-isopropil-benzenossulfonil)-3,6- diaza-biciclor3.1.01hex-3-in-butiramida 30aa
30aa
A: 96 mg (0,18 mmol) de 29a foram solvidos em 2 ml de DMF
seguido pela adição de 0,019 ml (0,18 mmol) de benzil amina. A mistura da reação foi agitada durante a noite em temperatura ambiente e concentrada.
O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel para dar 31 mg (30%) de 30aa.
B: 78 mg (0,17 mmol) de 28a foram solvidos em 4 ml de diclo-
rometano seguido pela adição de 84,2 mg (0,19 mmol) de BOP e 18,9 μΙ (0,17 mmol) de benzil amina. A mistura foi resfriado até 0°C e 0,044 ml (0,26 mmol) de di-isopropil etil amina foi adicionado. A mistura da reação foi agita- da durante a noite em temperatura ambiente, diluída com diclorometano,
lavada com lavada com 10% de ácido cítrico, solução aquosa saturada de bicarbonato e salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentra- da. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel para dar 68 mg (73%) de 30aa. 1H-RMN (CDCI3): δ = 7,33 - 7,23 (m, 5Η), 7,17 (s, 2Η), 6,31 (bt,
1 Η), 4,39 (d, 2Η), 4,27 (sept, 2Η), 3,90 (d, 1H), 3,77 (d, 1H), 3,67 (dd, 1H),
3,63 - 3,57 (m, 2H), 3,36 (dd, 1H), 2,91 (sept, 1H), 2,61 - 2,43 (m, 4H), 1,28 -
1,21 (div. d, 18H) ppm.
Preparação de 4-Oxo-4-r6-(2.4,6-tri-isopropil-benzenossulfonil)-3,6-diaza- biciclor3.1,01hex-3-il1-butírico ácido^Ala-Phe-amida 30ab
"r^rrV·
o
NH,
30a b
mg (0,067 mmol) de 28a foram solvidos em 1 ml de dicloro- metano e 0,2 ml de DMF seguido pela adição de 10,42 μΙ (0,067 mmol) de DIC e 18,7 mg (0,067 mmol) de dipeptídeo. A mistura da reação foi agitada durante a noite em temperatura ambiente e concentrada. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia de sílica-gel para dar 21 mg (48%) de 30ab.
MS (ES+): m/z (%) = 654 (100).
Preparação de 3-(3-Amino-propil)-1-f(2R.4S.5R)-4-(1-metóxi-ciclohexilóxi)-5- (1 -metóxi-ciclohexiloximetil)-tetra-hidro-furan-2-in-5-metil-1 H-pirimidina-2,4- diona de ácido 4-oxo-4-r6-(2,4,6-tri-isopropil-benzenossulfonil)-3,6-diaza- biciclor3,1,Olhex-3-iH-butírico 30ac
o 30ac
50 mg (0,11 mmol) de 28a foram solvidos em 1,5 ml de dicloro- metano seguido pela adição de 26,1 μΙ (0,17 mmol) de DIC. Depois de 30 min 58,1 mg (0,11 mmol) de 3-(3-Amino-propil)-1-[(2R,4S,5R)-4-(1-metóxi- ciclohexilóxi)-5-(1-metóxi-ciclohexiloximetil)-tetra-hidro-furan-2-i!]-5-metil-1H- pirimidina-2,4-diona solvida em 1 ml de diclorometano foram adicionados. A mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro, concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel para dar 61 mg (57%) de 30ac.
1H-RMN (MeOD): δ = 7,68 (s, 1H), 7,30 (s, 2H), 6,32 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,37 (sept, 2H), 4,19 (dd, 1H), 3,98 (t, 2H), 3,89 (d, 1H), 3,85 - 3,68 (m, 5H), 3,64 (dd, 2H), 3,43 (d, 1H), 3,24 (s, 6H), 3,20 (t, 2H), 2,97 (sept, 1H), 2,59 - 2,23 (m, 6H), 1,95 (s, 3H), 1,84 - 1,44 (m, 23H), 1,30 - 1,24 (div. d, 18H) ppm.
Fluoração
Preparação_de_N-Benzil-4-í3-fluoro-4-(2,4,6-tri-isopropil-
benzenossulfonilamino)-pirrolidin-1 -ill-4-oxo-butiramida 35aa
o
r
35aa
12 mg (0,022 mmol) de 30aa foram solvidos em 0,7 ml de DMSO seguido pela adição de 1,42 mg (0,024 mmol) de KF e 9,21 mg (0,024 mmol) de Kryptofix K222. A mistura da reação foi agitada em 50°C por 1 hora, diluí-
da com solução aquosa saturada de cloreto de amônio e extraída com ace- tato de etila. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia de sílica-gel para dar 6 mg (48%) de 35aa.
MS (ESI+): m/z (%) = 560 (100), 257(18).
Preparação de N-[((S)-1 -Carbamoil-2-fenil-etilcarbamoil)-metil1-4-f(3S,4S)-3- fluoro-4-(2.4.6-tri-isopropil-benzeno-sulfonilamino)-pirrolidin-1-il1-4-oxo- butiramida 35ab
35a b
17 mg (0,026 mmol) de 30ab foram solvidos em 0,8 ml de DM- SO seguido pela adição de 1,66 mg (0,029 mmol) de KF e 10,77 mg (0,029 mmol) de Kryptofix K222. A mistura da reação foi agitada em 50°C por 3 ho- ras, diluída com solução aquosa saturada de cloreto de amônio e extraída com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas. O resí- 5 duo foi purificado por cromatografia de sílica-gel para dar 7,8 mg (44,5 %) de 35ab.
MS (ESI+): m/z (%) = 674 (100), 658 (57).
Preparação de 3-(3-Amino-propiO-1-r(2R,4S,5R)-4-(1-metóxi-ciclohexilóxi)-5- (1 -metóxi-ciclohexiloximeti0-tetra-hidro-furan-2-in-5-metil-1 H-pirimidina-2,4- diona 4-í3-fluoro-4-(2.4.6-tri-isopropil-benzenossulfonilamino)-pirrolidin-1-in- 4-oxo-butiramida 35ac
20 mg (0,021 mmol) de 30ac foram solvidos em 0,7 ml de DMSO seguido pela adição de 1,34 mg (0,023 mmol) de KF e 8,66 mg (0,023 mmol) de Kryptofix K222. A mistura da reação foi agitada em 50°C por 3 horas, dilu- 15 ida com solução aquosa saturada de cloreto de amônio e extraída com ace- tato de etila. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia de sílica-gel para dar 5,6 mg (27 %) de 35ac.
MS (ESI+): m/z (%) = 977 (10), 832 (47), 135 (100).
Radioquimica
Método Geral de Radiorrotulação
1. Compostos modelo e derivados de timidina
18F-FIuoreto foi secado azeotropicamente na presença de Kryp- tofix 222 (5 mg em 1 ml de MeCN) e carbonato de potássio (1 mg em 0,5 ml de água) ou carbonato de césio (2,5 mg em 0,5 ml de água) por aquecimen- to sob nitrogênio em 100 a 120°C por 20 a 30 minutos. Durante este tempo 2 a 3 x 1 ml de MeCN foram adicionados e evaporados sob vácuo com um fluxo de nitrogênio para dar o complexo de Kryptofix 222 / K2CO3 ou comple- xo de Kryptofix 222 / Cs2CO3 (até 9,9 GBq). Depois da secagem, uma solu- ção do precursor (150 a 200 μΙ de 6,8 a 30 mM em DMSO) foi adicionada. O vaso da reação foi selado e aquecido na faixa de 50 a 90°C por 15 a 30 mi- nutos para efetuar a rotulação. A mistura da reação bruta foi analisada por HPLC analítica. O pico de produto foi então confirmado por coinjecção da mistura da reação com o padrão a frio [F-19].
2. Peptídeo contendo Histidina natural
18F-fluoreto foi secado azeotropicamente na presença de Krypto- fix 222 (5 mg em 1 ml de MeCN) e carbonato de césio (2,5 mg em 0,5 ml de água) por aquecimento sob nitrogênio em 70 a 90°C por 15 a 30 minutos. Durante este tempo 2 a 3 * 1 ml de MeCN foram adicionados e evaporados sob vácuo com um fluxo de nitrogênio. Depois da secagem, uma solução do precursor (150 a 200 μΙ de 7 a 9 mM em DMSO) foi adicionada. O vaso da reação foi selado e aquecido a 50 a 90°C por 15 minutos para efetuar a rotu- lação. A mistura da reação bruta foi analisada por HPLC analítica. O pico de produto foi então confirmado por coinjecção da mistura da reação com o pa- drão a frio [F-19].
Pontos adicionais:
i) Os solventes podem ser DMF1 DMSO, MeCN, DMA, DMAA, e etc., preferencialmente DMSO. Os solventes também podem ser uma mistu- ra de solventes conforme indicado acima.
ii) A faixa de temperatura pode ser temperatura ambiente a 160°C, mas preferencialmente na faixa de 50 a 90°C.
Exemplo A. Radiossíntese de 3-[18F1Flúor-A/-benzil-2-(4-metilfenilsulfonami- do)-propanamida 11aa-18F
[18FjFIuoreto foi elutriado do cartucho QMA Light (Waters) para dentro de um Reativial (10 ml) com uma solução de Kryptofix 222 (5 mg), carbonato de potássio (1 mg) em água (500 μΙ) e MeCN (1 ml). O solvente foi removido por aquecimento a 1100C sob vácuo por 10 min com um fluxo de nitrogênio. MeCN anídrico (1 ml) foi adicionado e evaporado como anteri- ormente. Esta etapa foi repetida de novo para dar o complexo de Kryptofix 222 / K2CO3 seco (2.34 GBq). Uma solução de A/-benzil-1-tosilaziridina-2- 5 carboxamida 10aa (2 mg) em DMSO anídrico (200 μΙ) foi adicionada. Depois de aquecer a 70°C por 15 min, a reação foi resfriada até a temperatura am- biente e diluída com MeCN (1 ml). A mistura da reação bruta foi analisada usando uma HPLC analítica (Column Nucleosil C18, 250x4 mm, 5 μΑ, 1 ml/min, solvente A: H2O1 solvente B: MeCN1 gradiente 10 a 40% de B em 15 10 minutos), o rendimento da incorporação foi de 95%. O produto rotulado com F-18 foi confirmado por coinjecção com o padrão a frio F-19 sobre a mesma coluna.
Exemplo B. Radiossíntese de 3-r18F1Fluoro-/V-benzil-2-(2,4.6-tri- isopropilfenilsulfon-amido) -propanamida 11ab-18F [18F]Fluoreto foi elutriado do cartucho QMA Light (Waters) para
dentro de um Reativial (10 ml) com uma solução de Kryptofix 222 (5 mg), carbonato de potássio (1 mg) em água (500 μΙ) e MeCN (1 ml). O solvente foi removido por aquecimento a 110°C sob vácuo por 10 min com um fluxo de nitrogênio. MeCN anídrico (1 ml) foi adicionado e evaporado como anteri- 20 ormente. Esta etapa foi repetida de novo para dar o complexo de Kryptofix 222 / K2CO3 seco (5.9 GBq). Uma solução de A/-benzil-1 -(2,4,6-tri- isopropilfenilsulfonil)-aziridina-2-carboxamida 10ab (2 mg) em DMSO anídri- co (200 μΙ) foi adicionada. Depois de aquecer a 60°C por 15 min, a reação foi resfriada até a temperatura ambiente e diluída com MeCN (1 ml). A mistu- 25 ra da reação bruta foi analisada usando uma HPLC analítica (Column Nucle- osil C18, 250x4 mm, 5 μΛ, 1 ml/min, solvente A: H2O, solvente B: MeCN1 gradiente 40 a 95% de B em 20 minutos), o rendimento da incorporação foi de 97%. O produto rotulado com F-18 foi confirmado por coinjecção com o padrão a frio F-19 sobre a mesma coluna.
Exemplo C. Radiossíntese de 3-f18F1Fluoro-A/-benzil-2-(3,4- dimetoxifenilsulfon-amido)-propanamida 11 ac-18F
[18FJFIuoreto foi elutriado do cartucho QMA Light (Waters) para dentro de um Reativial (10 ml) com uma solução de Kryptofix 222 (5 mg), carbonato de potássio (1 mg) em água (500 μΙ) e MeCN (1 ml). O solvente foi removido por aquecimento a 100°C sob vácuo por 10 min com um fluxo de nitrogênio. MeCN anídrico (1 ml) foi adicionado e evaporado como anteri- 5 ormente. Esta etapa foi repetida de novo para dar o complexo de Kryptofix 222 / K2CO3 seco (9,9 GBq). Uma solução de /\/-benzil-1-(3,4- dimetoxifenilsulfonil)-aziridina-2-carboxamida 10ac (2 mg) em DMSO anídri- co (200 μΙ) foi adicionada. Depois de aquecer a 70°C por 15 min, a reação foi resfriada até a temperatura ambiente e diluída com MeCN (1 ml). A mistu- 10 ra da reação bruta foi analisada usando uma HPLC analítica (Column Nucle- osil C18, 250x4 mm, 5 μΑ, 1 ml/min, solvente A: H2O, solvente B: MeCN, gradiente 10 a 60% de B em 15 minutos), o rendimento da incorporação foi de 97%. O produto rotulado com F-18 foi confirmado por coinjecção com o padrão a frio F-19 sobre a mesma coluna.
Exemplo D. Radiossíntese de N-Benzil-4-[3-r18F1fluoro-4-(2,4.6-tri-isopropil- benzeno-sulfonilamino)-pirrolidín-1 -ilM-oxo-butiramida 35aa-18F
[18FjFIuoreto (5 GBq) foi elutriado do cartucho QMA Light (Wa- ters) para dentro de um Reativial (10 ml) com uma solução de Kryptofix 222 (5 mg), carbonato de potássio (1 mg) em água (500 μΙ) e MeCN (1 ml). O 20 solvente foi removido por aquecimento a 110°C sob vácuo por 10 minutos com um fluxo de nitrogênio. MeCN anídrico (1 ml) foi adicionado e evapora- do como anteriormente. Esta etapa foi repetida de novo para dar o complexo de Kryptofix 222 / K2CO3 seco. Uma solução a 0,0185 M de N-Benzil-4-οχο- 4-[6-(2,4,6-tri-isopropil-benzenossulfonil)-3,6-diaza-biciclo[3.1.0]hex-3-il]- 25 butiramida 30aa (2 mg, 3,7 μιηοΙ) em DMSO anídrico (200 μΙ) foi adicionada. Depois de aquecer a 90°C por 15 min, a reação foi resfriada até a tempera- tura ambiente e diluída com MeCN (1 ml). A mistura da reação bruta foi ana- lisada usando uma HPLC analítica (Column Lichrosorb RP18, 250x4 mm, 5 μΑ, 1 ml/min, solvente A: H2O, solvente B: MeCN, gradiente 40 a 95% de B 30 em 30 minutos), o rendimento da incorporação foi de 96%. O produto rotula- do com F-18 foi confirmado por coinjecção com o padrão a frio F-19 sobre a mesma coluna. Exemplo E. Radiossíntese de 3-Fluoro-2-(2.4.6-tri-isopropil- benzenossulfonilamino)-propion- Gly-Val^Ala-Phe-GIv-amida 32aba-18F
[18FJFIuoreto (1,78 GBq) foi elutriado do cartucho QMA Light (Waters) para dentro de um Reativial (10 ml) com uma solução de Kryptofix 5 222 (5 mg), carbonato de potássio (1 mg) em água (500 μΙ) e MeCN (1 ml). O solvente foi removido por aquecimento a 1100C sob vácuo por 10 minutos com um fluxo de nitrogênio. MeCN anídrico (1 ml) foi adicionado e evapora- do como anteriormente. Esta etapa foi repetida de novo para dar o complexo de Kryptofix 222 / K2CO3 seco. Uma solução a 0,0127 M de 1-(2,4,6-Tri- 10 isopropil-benzenossulfonil)-aziridina-2-carboxílica-Gly-Val^Ala-Phe-Gly-
amida 8aba (2 mg) em DMSO anídrico (200 μΙ) foi adicionada. Depois de aquecer a 60°C por 15 min, a reação foi resfriada até a temperatura ambien- te e diluída com MeCN (1 ml). A mistura da reação bruta foi analisada usan- do uma HPLC analítica (Column Lichrosorb RP18, 250^4 mm, 5 μΛ, 1 15 ml/min, solvente A: H2O, solvente B: MeCN, gradiente 15 a 95% de B em 20 minutos), o rendimento da incorporação foi de 49%. O produto rotulado com F-18 foi confirmado por coinjecção com o padrão a frio F-19 sobre a mesma coluna.
Exemplo F. Radiossíntese de 3-Fluoro-N-[(3-(3-í(2R.4S,5R)-4-(1-metóxi- ciclohexilóxO-5-(1-metóxi-ciclohexiloximetiO-tetra-hidro-furan-2-il1-5-metil-2,6- dioxo-3,6-di-hidro-2H-pirimidin-1-il)-propílcarbamoin-metil1-2-(tolueno-4- sulfonilamino)-propionamida 32abb-18F
[18FJFIuoreto (4,9 GBq) foi elutriado do cartucho QMA Light (Wa- ters) para dentro de um Reativial (5 ml) com uma solução de Kryptofix 222 25 (5,5 mg), carbonato de césio (2,5 mg) em água (500 μΙ) e MeCN (1 ml). O solvente foi removido por aquecimento a 110°C sob vácuo por 10 minutos com um fluxo de nitrogênio. MeCN anídrico (1 ml) foi adicionado e evapora- do como anteriormente. Esta etapa foi repetida de novo para dar o complexo de Kryptofix 222 / Cs2CO3 seco. Uma solução a 0,011 M de [(3-{3- 30 [(2R,4S,5R)-4-(1-Metóxi-ciclohexilóxi)-5-(1-metóxi-ciclohexiloximetil)-tetra- hidro-furan-2-il]-5-metil-2,6-dioxo-3,6-di-hidro-2H-pirimidin-1-il}- propilcarbamoil)-metil]-amida de ácido 1 -(2,4,6-tri-isopropil- benzenossulfonil)-aziridina-2-carboxílico 8abb (2 mg) em DMSO anídrico (200 μΙ) foi adicionada. Depois de aquecer a 90°C por 20 min, a reação foi resfriada até a temperatura ambiente e diluída com MeCN (1 ml). A mistura da reação bruta foi analisada usando uma HPLC analítica (Column Lichros- 5 pherelOO RP18e, 5 pm, 1 ml/min, solvente A: H2O1 solvente B: MeCN1 gra- diente 5 a 95% em 10 minutos + iso95% 10 minutos), o rendimento da incor- poração foi de 87%.
O produto rotulado com F-18 foi purificado através de cartucho de Sílica (Macherey-NageI) e enxaguado com outro 1 ml de MeCN. Foi reali- 10 zada etapa de desproteção adicionando solução de HCI a 1 M (0,5 ml) ao composto purificado e reação em temperatura ambiente por 5 minutos. Outra injecção foi feita usando HPLC analítica, seguida por coinjecção com o pa- drão a frio F-19 de modo a confirmar o produto rotulado com F-18 final to- talmente desprotegido: 87% radioquimicamente puro.
Exemplo G. Radiossíntese de 3-(3-Amino-propil)-1-[(2R,4S.5R)-4-(1-metóxi- ciclohexilóxi)-5-( 1 -metóxi-ciclohexiloximetilVtetra-hidro-furan-2-ill-5-metil-1 H- pirimidina-2.4-diona 4-f3-fluoro-4-(,2.4.6-tri-isopropil-benzenossulfonilamino)- pirrolidin-1 -ilM-oxo-butiramida 35ac-18F
[18FjFIuoreto (6,94 GBq) foi elutriado do cartucho QMA Light (Waters) para dentro de um Reativial (5 ml) com uma solução de Kryptofix 222 (5 mg), carbonato de potássio (1 mg) em água (500 μΙ) e MeCN (1 ml). O solvente foi removido por aquecimento a 110°C sob vácuo por 10 minutos com um fluxo de nitrogênio. MeCN anídrico (1 ml) foi adicionado e evapora- do como anteriormente. Esta etapa foi repetida de novo para dar o complexo de Kryptofix 222 / K2CO3 seco. Uma solução a 0,0104 M de 3-(3-Amino- propil)-1-[(2R,4S,5R)-4-(1-metóxi-ciclohexilóxi)-5-(1-metóxi-ciclohexilóxi- metil)-tetra-hidro-furan-2-il]-5-metil-1H-pirimidina-2,4-diona de ácido 4-oxo-4- [6-(2,4,6-tri-isopropil-benzenossulfonil)-3,6-diaza-biciclo[3.1.0]hex-3-il]- butírico 30ac (2 mg) em DMSO anídrico (200 μΙ) foi adicionada. Depois de aquecer a 90°C por 15 min, a reação foi resfriada até a temperatura ambien- te e diluída com MeCN (1 ml). A mistura da reação bruta foi analisada usan- do uma HPLC analítica (Column LichrosphereIOO RP18e, 5 pm, 1 ml/min, solvente A: H2O1 solvente B: MeCN, gradiente 5 a 95% em 10 minutos + i- so95% 10 minutos), o rendimento da incorporação foi de 83%.
de Silica (Macherey-NageI) e enxaguado com outro 1 ml de MeCN. Foi reali- 5 zada etapa de desproteção adicionando solução de HCI a 1 M (0,5 ml) ao composto purificado e reação em temperatura ambiente por 5 minutos. Outra injecção foi feita usando HPLC analítica, seguida por coinjecção com o pa- drão a frio F-19 de modo a confirmar o produto rotulado com F-18 final to- talmente desprotegido: 100% radioquimicamente puro.
Para o cromatograma por HPLC da mistura da reação com coin-
jecção do padrão a frio consultar a Figura 1.
Estabilidade hidrolítica das β-fluoro aminas
seguida 5 alíquotas de 70 μΙ da solução de Plasma foram incubadas por pe- ríodos de tempo diferentes.
O produto rotulado com F-18 foi purificado através de cartucho
o
O β-fluoro aminoácido derivado 11ab-18F é bastante estável sob condições neutras e básicas (Figura 2).
Estabilidade plasmática das β-fluoro aminas
675 μΙ de EtOH foram adicionados ao frasco de reação e em
o
O=S=O
11ac-18F
11ac-18F é estável em solução com Plasma Humano (Figura 3).
35aa-18F
20
35aa-18F é estável em solução com Plasma Humano (Figura 4). Afinidade de ligação in vitro Foram avaliadas afinidade de ligação in vitro e especificidade de análogos de Bombesin para o receptor de bombesina 2 humano (GRPR) através de uma prova de ligação de receptor competitivo usando 125l-[Tyr4]- Bombesin (Perkin Elmer; atividade específica 81,4 TBq/mmol) como radioli- 5 gante GRPR-específico. A prova foi realizada com base na tecnologia da prova de proximidade de cintilação (SPA) (J.W.Carpenter e outros., Meth. MoL Biol., 2002; 790:31-49) usando membranas celulares contendo GRPR (Perkin Elmer) e contas de PVT revestidas com aglutinina de germe de trigo (WGA) (Amersham Bioscience).
Em resumo, membranas contendo GRPR e contas WGA-PVT
foram misturadas em tampão de teste (50 mM de Tris/HCI pH 7,2, 5 mM de MgCI2, 1 mM de EGTA, inibidor de protease Complete (Roche Diagnostics GmbH) e 0,3% de PEI) para dar concentrações finais de aproximadamente 100 pg/ml de proteína e 40 mg/ml de contas PVT-SPA. O Iigante 125l-[Tyr4]- 15 Bombesin foi diluído até 0,5 nM em tampão de teste. Os compostos de teste foram dissolvidos em DMSO para dar soluções de matéria-prima a 1 mM. Depois disso, foram diluídos em tampão de teste até 8 pM a 1,5 μΜ.
A prova foi então realizada como se segue: Primeiro, 10 μΙ de solução de composto a ser testada para ligação foram colocados em lâminas de 384 cavidades brancas (Optiplate-384, Perkin-Elmer). Em seguida, 20 μΙ de mistura de contas GRPR/WGA-PVT e 20 μΙ da solução de Iigante foram adicionados. Depois de 90 minutos de incubação em temperatura ambiente, outros 50 μΙ de tampão de teste foram adicionados, a lâmina selada e centri- fugada por 10 min a 520 x g em temperatura ambiente. Os sinais foram me- didos em um TopCount (Perkin Elmer) por 1 min de tempo de integração por cavidade. A IC50 foi calculada por regressão não linear usando o programa de análise de dados GraFit (Erithacus Software Ltd.). Além disso, a Ki foi calculada com base na IC50 para composto de teste bem como a Kp e a con- centração do lígante 125l-[Tyr4]-Bombesin. Foram feitos experimentos com amostras quádruplas.
Síntese de H-Y-E: Síntese de peptídeo de fase sólida (SPPS) envolve a adição por etapas de resíduos aminoácido a uma cadeia de peptí- deo crescente que é ligada a um suporte insolúvel ou matriz, tal como polies- tireno. O resíduo C-terminal do peptídeo é primeiro ancorado a um suporte disponível comercialmente (por exemplo, resina de amida de Rink) com seu grupo amino protegido com um agente N-protetor, grupo fluorenilmetoxicar-
5 bonil (FMOC). O grupo de proteção amino é removido com agente de des- proteção adequado tal como piperidina para FMOC e o resíduo aminoácido seguinte (em forma N-protegida) é adicionado com alguns agentes de liga- ção tais como diciclohexilcarbodiimida (DCC), di-isopropil- ciclohexilcarbodiimida (DCCI), hidroxibenzotriazol (HOBt). Na formação de 10 uma ligação peptídica, os reagentes são lavados do suporte. Depois de adi- ção do resíduo final de (Y), o peptídeo é fixado ao suporte sólido é o pronto para a ligação de RG--Lr-Bi-OH. LISTAGEM DE SEQÜÊNCIAS
<110> Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft
<120> Radiomarcação através de fluoração de aziridinas
<130> 53434AWO
<14 0> PCT/EP2007/007 968
<14 1> 2007-09-07
<160> 103
<170> PatentIn versão 3.1
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Análogo de bombesina ARTIFICIAL
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5) .. (5)
<223> METILAÇÃO, MeGly <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7) . . (7)
<22 3> STA
<4 00> 1
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu
i 5
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Análogo de bombesina ARTIFFICIAL <220> 10
15
20
25
30
<221> MOD RES <222> (6) . . (6) <223> METILAÇÃO SOBRE HIST <220> <221> MISC FEATURE <222> (7) . . (7) <223> STAtine <4 00> 2 Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu 1 5 <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220> <223> Análogo de bombesina <220> <221> MOD RES <222> (5) . . (5) <223> METILAÇÃO, MeGly <220> <221> MISC FEATURE <222> (7) . . (7) <223> estatina <220> <221> MOD RES <222> (6) . . (6) <223> METILAÇÃO histidina <400> 3 Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu 1 5 <210> 4 <211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Análogo de bombesina artificial <220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> METILAÇÃO HISTIDINA <22 0>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7) . . (7)
<223> estatina
<400> 4 Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu 1 5
<210> 5
<400> 5
000
<210> 6
<400> 6
000
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Análogo de bombesina artificial <220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> METILAÇÃO, MeGly * <220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> METILAÇÃO HISTIDINA
5 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7) . . (7)
<223> estatina <220>
10 <221> MISC_FEATURE
<222> (8) . . (8)
<223> (S)-4-carboxamidofenilalanina (Cpa)
<4 00> 7
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
1 5
<210> 8
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial - 20 <22 0>
<223> Análogo de bombesina artificial <220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
25 <223> METILAÇÃO HISTIDINA <220>
<221> MIS C_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> ácido 4-amino-5-metil-heptanóico
30 <4 00> 8
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu
1 5 10
15
20
25
30
<210> 9 <400> 9 000 <210> 10 <400> 10 000 <210> 11 <4 00> 11 000 <210> 12 <211> 8 <212> PRT <213> Seqüência artificial <22 0> <223> Análogo de bombesina <22 0> <221> MOD RES <222> (6)..(6) <22 3> METILAÇÃO HISTIDINA <220> <221> MISC FEATURE <222> (7) . . (7) <223> ácido 4-amino-5-meti. <400> 12 Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu 1 5 <210> 13 <4 00> 13 000 <210> 14 <400> 14 000 10
15
20
25
30
<210> 15 <4 00> 15 000 <210> 16 <4 00> 16 000 <210> 17 <211> 8 <212> PRT <213> Seqüência artifi <220> <223> Análogo de bombe <220> <221> MISC FEATURE <222> (7)..(7) <223> ácido 4-amino-5-i <4 00> 17 Gln Trp Ala Val Gly His Xaa 1 5 <210> 18 <4 00> 18 000 <210> 19 <4 00> 19 000 <210> 20 <400> 20 000 <210> 21 <4 00> 21 000 <210> 22 <4 00> 22 000 <210> 23 <211> 8 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220> <223> Análogo de bombesina ARTIFICIAL <220> <221> MOD RES <222> (5)..(5) <223> METILAÇÃO, MeGly <220> <221> MOD RES <222> (6)..(6) <223> METILAÇÃO HISTIDINA <220> <221> MISC FEATURE <222> (7) . . (7) <223> ácido 4-amino-5-metil-heptanóico <220> <221> MISC FEATURE <222> (8)..(8) <22 3> (S)-4-carboxamidofenilalanina (Cpa <4 00> 23 Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa 1 5 <210> 24 <4 00> 24 000 <2 10> 25 <400> 25 000
<210> 26
<4 00> 26
000
<210> 27
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificiai <220>
<223> Análogo de bombesina artificial <220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> METILAÇÃO, MeGly
<22 0>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> ácido R-4-amino-5-metil-hexanóico (FA02010) <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> (S)-4-carboxamidofenilalanina (Cpa)
<400> 27
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
í 5
<210> 28
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Análogo de bombesina artificial <220> 10
15
20
25
30
<221> MOD RES <222> (5) . . (5) <223> METILAÇÃO, MeGly <220> <221> MISC FEATURE <222> (7) . . (7) <223> ácido 4-amino-5-meti^ <220> <221> MOD RES <222> (8)..(8) <223> tbutil glicina <4 00> 28 Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Gly 1 5 <210> 29 <400> 29 000 <210> 30 <211> 8 <212> PRT <213> Seqüência artificial <223> Análogo de bombesina <220> <221> MOD RES <222> (5) . . (5) <223> METILAÇÃO, MeGly <220> <221> MOD RES <222> (6) . . (6) <223> METILAÇÃO HISTIDINA <220> <221> MISC FEATURE 10
15
20
25
30
<222> (7)..(7) <223> estatina <22 0> <221> MOD RES <222> (8) . . (8) <223> tbutil glicina <400> 30 Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Gly 1 5 <210> 31 <400> 31 000 <210> 32 <211> 8 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220> <223> análogo de bombesina <220> <221> MOD_RES <222> (5) . . (5) <22 3> METILAÇÃO, MeGly <22 0> <221> MOD RES <222 > (6) . . (6) <22 3> METILAÇÃO histidina <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> ácido 4-amino-5-meti. <400> 32 Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu I 5
<210> 33
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<22 3> D-Trp <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> ácido 4-amino-5-metil-heptanóico <220>
<221> MISC_FEATCJRE
<222> (8)..(8)
<223> tbutil glicina
<4 00> 33
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Gly
1 5
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <22 0>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> D-Trp <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> ácido 4-amino-5-metil-hexanóico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8) . . (8)
<223> (S)-4-carboxamidofenilalanina (Cpa)
<4 00> 34 Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
1 5
<210> 35
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <22 0>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MOD_RES
<222> (5) . . (5)
<223> METILAÇÃO, MeGly <220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> METILAÇÃO histidina <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7) . . (7)
<223> estatina
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8) . . (8) <223> (S)-4-carboxamidofenilalanina (Cpa)
<4 00> 35
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
I 5
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> D-Trp
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7) .. (7)
<223> estatina <220>
<221> MISC_FEATDRE
<222> (8) . . (8)
<223> tbu Alanina
<4 00> 36
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Ala
i 5
<210> 37
<4 00> 37 000
<210> 38
< 4 00> 38
000
<210> 39 10
15
20
25
30
<4 00> 39 000 <210> 40 <4 00> 40 000 <210> 41 <4 00> 41 000 <210> 42 <211> 8 <212> PRT <213> Seqüência artificial <22 0> <223> análogo de bombesina a <220> <221> MOD RES <222> (6) . . (6) <223> METILAÇÃO histidina <22 0> <221> MISC FEATURE <222> (7) . . (7) <223> estatina <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) . . (8) <223> (S)-4-carboxamidofenil, <4 00> 42 Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa 1 5 <210> 43 <211> 8 <212 > PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> METILAÇÃO histidina <22 0>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7) . . (7)
<223> estatina <220>
<221> MIS C_FEATURE
<222> (8) . . (8)
<223> tbu glicina
<400> 43
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Gly
1 5
<210> 44
<400> 44
000
<210> 45
<4 00> 45
000
<210> 46
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MOD RES * <222> (6)..(6)
<223> METILAÇÃO histidina <220>
<221> MISC_FEATURE
5 <222> (7) . . (7)
<223> ácido 4-amino-5-metil-heptanóico
<4 00> 46
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu
1 5
10 <210> 47
<400> 47
000
<210> 48
<211> 8
15 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
■ 20 <221> M0D_RES
<222> (6)..(6)
<223> METILAÇÃO histidina <220>
<221> MISC_FEATURE
25 <222> (7) . . (7)
<223> ácido 4-amino-5-metil-heptanóico
<400> 48
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu
1 5
30 <210> 49
<211> 8
<212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> METILAÇÃO histidina <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7) . . (7)
<223> ácido 4-amino-5-metil-heptanóico <220>
<221> MIS C_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> (S)-4-carboxamidofenilalanina (Cpa)
<4 00> 49
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
1 5
<210> 50
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial
<220>
<221> M0D_RES
<222> (6)..(6)
<223> METILAÇÃO histidina <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7) . . (7)
<223> ácido 4-amino-5-metil-heptanóico <4 00> 50
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu I 5
<210> 51
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MOD_RES
<222> (5) . . (5)
<223> METILAÇÃO, MeGly <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7) .. (7)
<223> ácido (3R,4S)-4-amino-3-hidroxi-5-metil-hexanóico
<400> 51
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu
1 5
<210> 52
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5) . . (5)
<223> beta-alanina <220>
<22 1> MOD RES <222> (6)..(6)
<223> METILAÇÃO histidina <22 0>
<221> MISC^FEATURE
<222> (7) . . (7)
<223> treo-á-hidroxiaspartato (THA)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8) . . (8)
<223> {S)-4-carboxamidofenilalanina (Cpa)
<4 00> 52
Gln Trp Ala Val Ala His Xaa Xaa 1 5
<210> 53
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5) . . (5)
<223> beta-alanina <220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> METILAÇÃO histidina <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8) . . (8)
<223> (S)-4-carboxamidofenilalanina (Cpa)
<4 00> 53 Gln Trp Ala Val Ala His Phe Xaa
<210> 54 <211> 8 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220> <223> análogo de bombesina <220> <221> MISC FEATURE <222> (5) . . (5) <223> beta-alanina <220> <221> MOD_RES <222> (6) . . (6) <223> METILAÇÃO histidina <4 00> 54 Gln Trp Ala Val Ala His Phe Leu 1 5 <210> 55 <211> 8 <212> PRT <213> Seqüência artificial <22 0> <223> análogo de bombesina <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5) . . (5) <223> ■ bate-alanina <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6). .(6) <223> D-Histidina
<4 00> 55
Gln Trp Ala Val Ala His Phe Leu 1 5
<210> 56
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> beta-alanina
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> beta-homoleucina
<4 00> 56 Gln Trp Ala Val Ala His Leu Leu 1 5
<210> 57
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MIS C_FEAT U RE
<222> (5) . . (5)
<223> beta-alanina <220> 10
15
20
25
30
<221>
<222>
<223>
<4 00> Gln Trp 1
<210> <211> <212> <213> <220> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <400> Gln Trp 1
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
MISC_FEATURE (7). .(7)
beta-homoisoleucina
57
Ala Val Ala His He Leu 5
58 8
PRT
Seqüência artificial
análogo de bombesina artificial
MISC_FEATURE (5) . . (5) beta-alanina
MISC_FEATURE
(7) . . (7)
beta-homoleucina
MIS C_FEAT URE
(8) . . (8) tbu-glicina
58
Ala Val Ala His Leu Gly 5
59 8
PRT
Seqüência artificial <223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5) . . (5)
<223> beta-alanina <220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> METILAÇÃO histidina <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8) . . (8)
<223> treo-á-hidroxiaspartato (THA)
<4 00> 59 Gln Trp Ala Val Ala His Phe Xaa 1 5
<210> 60
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5) . . (5)
<223> beta-alanina <220>
<2 21> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> METILAÇÃO histidina <220>
<221> MISC FEATURE 10
15
20
25
30
<222>
<223>
<4 00> Gln Trp 1
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<4 00> Gln Trp 1
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
(8) . . (8)
norleucina (Nle)
60
Ala Val Ala His Phe Xaa 5
61
8
PRT
Seqüência artificial
análogo de bombesina artificial
MIS C_FEATURE
(5).. (5) beta-alanina
MOD_RES
(6)..(6)
METILAÇÃO histidina
MISC_FEATURE (8).. (8) tbuGlicina 61
Ala Val Ala His Phe Gly 5
62
8
PRT '
Seqüência artificial
análogo de bombesina artificial <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> beta-alanina
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> METILAÇÃO histidina <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7) . . (7)
<223> treo-á-hidroxiaspartato (THA) <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8) . . (8)
<223> tbuglicina
<4 00> 62
Gln Trp Ala Val Ala His Xaa Gly 1 5
<210> 63
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> beta-alanina
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6) <223> METILAÇÃO histidina <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7) . . (7)
<223> treo-á-hidroxiaspartato (THA)
<22 0>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8) .. (8)
<223> tbuglicina
<400> 63
Gln Trp Ala Val Ala His Xaa Gly 1 5
<210> 64
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <22 0>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> beta alanina <220>
<221> M0D_RES
<222> (6) . . (6)
<223> METILAÇÃO histidina <220>
<221> MIS C_FEAT URE
<222> (8) . . (8)
<223> (S)-4-carboxamidofenilalanina (Cpa)
<4 00> 64
Gln Trp Ala Val Ala His Phe Xaa I 5
<210> 65
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MOD__RES
<222> (4) . . (4)
<22 3> METILAÇÃO, Me-Val <22 0>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> beta-alanina
<4 00> 65
Gln Trp Ala Val Ala His Phe Leu 1 5
<210> 66
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial
<2 2 0>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> beta-alanina <220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> METILAÇÃO fenilalanina 10
15
20
25
30
<4 00> Gln Trp I
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
<4 00> Gln Trp 1
<210>
<211>
<212>
<213> <220> <223> <220> <221> <222> <223> <22 0> <221>
66
Ala Val Ala His Phe Leu 5
67
8
PRT
Seqüência artificial
análogo de bombesina artificial
MISC_FEATURE
(2) . . (2)
D-Trp
MIS C_FEAT URE
(5) . . (5) beta alanina 67
Ala Val Ala His Phe Leu 5
PRT
Seqüência artificial
análogo de bombesina artificial
MIS C_FEATURE
(3) . . (3)
D-ala
MISC FEATURE <222> (5) .. (5)
<223> beta-alanina
<4 00> 68
Gln Trp Ala Val Ala His Phe Leu
1 5
<210> 69
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <22 0>
<223> análogo de bombesina artificial <22 0>
<221> MIS C_FEAT URE
<222> (4)..(4)
<223> D-valina <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> beta-alanina
<400> 69
Gln Trp Ala Val Ala His Phe Leu 1 5
<210> 70
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MIS C_FEATURE
<222> (5) . . (5)
<223> beta-alanina <22 0> <221> MISC_FEATURE <222> (7) . . (7) <223> D-Phe <4 00> 70 Gln Trp Ala Val Ala His Phe Leu 1 5 <210> 71 <211> 8 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220> <223> análogo de bombesina <220> <221> MISC FEATURE <222> (5) . . (5) <223> beta-alanina <220> <221> MISC FEATURE <222> (7) . . (7) <223> beta-homoisoleucina <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) . . (8) <223> tbuGly <400> 71 Gln Trp Ala Val Ala His Iie Gly 1 5 <210> 72 <211> 8 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <22 0>
<221> MOD__RES
<222> (5)..(5)
<223> METILAÇÃO, MeGly <22 0>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> ácido 4-amino-5-metil-heptanóico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> (S)-4-carboxamidofenilalanina (Cpa)
<4 00> 72
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa 1 5
<210> 73
<211> 8
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> METILAÇÃO, MeGly <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7) . . (7)
<223> estatina <220> 10
15
20
25
30
<221> MISC_FEATURE
<222> (8) . . (8)
<223> (S)-4-carboxamidofenilalanina (Cpa)
<400> 73
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa
1 5 <210> 74 <211> 8 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220> <223> análogo de bombesina <220> <221> MOD RES <222> (5) . . (5) <223> METILAÇÃO, MeGly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) . . (7) <223> estatina <220> <221> MISC FEATURE <222> (8) . . (8) <223> tbuAla <400> 74 Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Ala 1 5 <210> 75 <211> 8 <212> PRT <213> . Seqüência artificial <220> <223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> METILAÇÃO, MeGly <220>
<221> MIS C_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> ácido 4-amino-5-metil-heptanóico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8) . . (8)
<223> tbuAla
<400> 75 Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Ala 1 5
<210> 76
<400> 76
000
<210> 77
<211> 7
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> METILAÇÃO histidina
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7) 10
15
20
25
30
<223> estatina <400> 77 Gln Trp Ala Val His Xaa Leu 1 5 <210> 78 <400> 78 000 <210> 79 <4 00> 79 000 <210> 80 <400> 80 000 <210> 81 <400> 81 000 <210> 82 <211> 8 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220> <22 3> análogo de bombesina <220> <221> M0D_RES <222> (6) . . (6) <223> METILAÇÃO histidina <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) . . (7) <223> ácido 4-amino-5-meti. <400> 82 Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu 10
15
20
25
30
I
<210> <4 00> 000 <210> <400> 000 <210> <4 00> 000 <210> <4 00> 000 <210> <400> 000 <210> <400> 000 <210> <400> 000 <210> <211> <212> <213> <22 0> <223> <220> <221> <222> <2 2 3>
83
83
84 8 4
85
85
86 86
87
87
89
90
PRT
Seqüência artificial
análogo de bombesina artificial
M0D_RES
(5) . . (5)
METILAÇÃO, MeGly 15
20
25
30
<220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <4 00>
MOD_RES
(6) . . (6)
METILAÇÃO histidina
MISC_FEATURE (7) . . (7)
ácido 4-amino-5-metil-heptanóico
90
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu
1
<210> <211> <212> <213> <220> <223> <220> <221> <222> <223> <4 00>
91
8
PRT
Seqüência artificial
análogo de bombesina artificial
MISC_FEATURE (7) . . (7)
ácido 4-amino-5-metil-heptanóico
91
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu
1
<210> <400> 000 <210> <4 0 0> 000 <210> <4 00>
92
92
93 93
94 10
15
20
25
30
000 <210> 95 <4 00> 95 000 <210> 96 <4 00> 96 000 <210> 97 <400> 97 000 <210> 98 <4 00> 98 000 <210> 99 <4 00> 99 000 <210> 100 <400> 100 000 <210> 101 <211> 9 <212> PRT <213> Seqüência artifii <220> <223> análogo de bombe <220> <221> MOD RES <222> (6)..(6) <223> METILAÇÃO histid. <22 0> <221> MISC FEATURE <222> (7)..(7) 10
15
20
25
30
<223> <220> <221> <222> <223> <400> Gln Trp 1
<210> <211> <212> <213> <220> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <22 0> <221> <222> <223> <22 0> <221> <222> <223> <22 0> <221>
ácido 4-amino-5-metil-heptanóico
MISC_FEATURE (8).. (8)
ácido 4-amino-5-metil-heptanóico 101
Ala Val Gly His Xaa Xaa Leu 5
102
9
PRT
Seqüência artificial análogo de bombesina artificial
MISC_FEATURE
(5) . . (5) metil Glicina
MISC_FEATURE
(6) . . (6)
metil histidina
MISC_FEATURE
(7) . . (7)
ácido 4-amino-5-metil-heptanóico
MISC_FEATURE
(8)..(8)
ácido 4-amino-5-metil-heptanóico MISC FEATURE <222> (9)..(9)
<223> {S)-4-carboxamidofeniIaIanina (Cpa)
<4 00> 102
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 103 <<211> 8 <212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> análogo de bombesina artificial <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> metil histidina <22 0>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> ácido 4-amino-5-metil-heptanóico
<4 00> 103
Gln Trp Ala Val Gly His Xaa Leu
1 5

Claims (35)

1. Composto compreendendo um anel aziridina sendo apropria- damente ativado para fins de rotulação, em que um radical de agente de di- recionamento, quer diretamente ou através de um Iigante apropriado, é fixa- do ou ao anel aziridina ou a um anel carbocíclico ou heterocíclico de cinco membros o qual é fundido ao anel aziridina .
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, tendo Fórmula química geral I <formula>formula see original document page 123</formula> em que R representa Ts, 2,4,6-tri-isopropil-feníl-sulfonila, 3,4-dimetóxi- fenil-sulfonila, fenil-sulfonila não-substituída, fenil-sulfonila sendo substituída com 1 a 5 porções R2, Ns, Cbz, Bz, Bn, Boc, Fmoc, metoxicarbonila, etoxi- carbonila, aliloxicarbonila, Tr ou acila; em que R2 representa hidrogênio, CrC6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila ou heteroaralquila, OH, OR31 NH2, NHR3, N(R3)2, SH, SR3, halogeno, NO2, C(=0)R3, C(=0)0R3, C(=0)NHR3 ou C(=0)(NR3)2, em que R3 representa hidrogênio, CrC6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída, arila, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila ou heteroaralquila; R1 e R4, são selecionados, de modo independente, do grupo compreendendo hidrogênio, CrC6 alquila linear e ramificada, substituída e não-substituída, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila e heteroaralquila; L representa um Iigante adequado para ligação com o radical do agente de direcionamento, B representa o radical do agente de direcionamento, e um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato e pró- fármaco dos mesmos.
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que R é Ts, 2,4,6-tri-isopropil-fenil-sulfonila, 3,4-dimetóxi-fenil- sulfonila, fenil-sulfonila não-substituída, fenil-sulfonila sendo substituída com 1 a 5 porções R21 ou Ns; em que R2 representa hidrogênio, Ci-C6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída, OH, OR3, NH2, NHR3, N(R3)2, SH, SR3, Cl, Br, I, NO2, C(=0)R3, C(=0)0R3, C(=0)NHR3, C(=0)N(R3)2; em que R3 representa hidrogênio ou CrC6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída, e R1 e R4, são selecionados, de modo independente, entre o grupo compreendendo hidrogênio e Ci-C6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída.
4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 e 3, em que R é 2,4,6-tri-isopropil-fenil-sulfonila, 3,4-dimetóxi-fenil-sulfonila, fenil-sulfonila não-substituída ou fenil-sulfonila sendo substituído com 1 a 5 porções R2; em que R2 representa hidrogênio, CrC6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída ou OR3, em que R3 representa Ci-C6 alquila Iinearou ramificada, substituída ou não-substituída, e R1 e R4 representam hidrogênio.
5. Composto de acordo com a reivindicação 1, tendo Fórmula química geral Il em que R1 e R41 são selecionados, de modo independente, entre o grupo compreendendo hidrogênio, CrC6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila e heteroaralquila; L representa um Iigante adequado para ligação com o radical do agente de direcionamento e para ativação apropriada do anel aziridina; B representa o radical do agente de direcionamento e um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato e pró- fármaco dos mesmos.
6. O composto de acordo com a reivindicação 5, em que R1 e R4, são selecionados, de modo independente, do grupo compreendendo hidrogênio e Ο-ι-Οβ alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída.
7. Composto de acordo com a reivindicação 1, tendo Fórmula química geral III: <formula>formula see original document page 125</formula> em que R representa Ts1 2,4,6-tri-isopropil-fenil-sulfonila, 3,4-dimetóxi- fenil-sulfonila, fenil-sulfonila não-substituída, fenil-sulfonila sendo substituída com 1 a 5 porções R2, Ns, Cbz, Bz1 Bn, Boc, Fmoc, metoxicarbonila, etoxi- carbonila, aliloxicarbonila, Trou acila; em que R2 representa hidrogênio, Ci-C6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila, ou heteroaralquila, OH, OR3, NH2, NHR3, N(R3)2, SH, SR3, Cl, Br, I, NO2, C(=0)R3, C(=0)0R3, C(=0)NHR3 ou C(=0)N(R3)2; em que R3 representa hidrogênio, Ci-C6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída, arila, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila, ou heteroaralquila; R1 e R4, são selecionados, de modo independente, entre o grupo compreendendo hidrogênio, CrC6 alquila Iinearou ramificada, substituída ou não-substituída, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila e heteroaralquila; X representa N ou C substituída por hidrogênio; L representa um Iigante adequado para ligação com o radical do agente de direcionamento; B representa o radical do agente de direcionamento, e um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato e pró-fármaco dos mesmos.
8. Composto de acordo com a reivindicação 7, em que R é Ts, 2,4,6-tri-isopropil-fenil-sulfonila, 3,4-dimetóxi-fenil- sulfonila, fenil-sulfonila não-substituída, fenil-sulfonila sendo substituído com 1 a 5 porções R2, ou Ns; em que R2 representa hidrogênio, CrC6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída, OH, OR3, NH2, NHR3, N(R3)2, SH, SR3, Cl, Br, I, NO2, C(=0)R3, C(=0)0R3, C(=0)NHR3, C(O)N(R3)2; em que R3 representa hidrogênio, CrC6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não- substituída, ou arila; R1 e R4, são selecionados, de modo independente, do grupo compreendendo hidrogênio e CrC6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída; X representa N ou C substituído por hidrogênio.
9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 e 8, em que R é Ts, 2,4,6-tri-isopropil-fenil-sulfonila, 3,4-dimetóxi-fenil- sulfonila, fenil-sulfonila não-substituída ou fenil-sulfonila sendo substituída com 1 a 5 porções R2; em que R2 representa hidrogênio, Ci-C6 alquila linear ou ramifi- cada, substituída ou não-substituída, OR3, SR3, Cl, Br, I, C(=0)R3, C(=0)0R3, C(=0)NHR3 ou C(=0)N(R3)2, em que R3 representa hidrogênio, Ci-C6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída ou arila; R1 e R4, são selecionados, de modo independente, entre o grupo compreendendo hidrogênio e CrC6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída; e X representa N.
10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, compreendendo ácido 1-(Tolueno-4-sulfonil)-aziridina-2-carboxílico - Gly-Val- ftAla-Phe-Gly-amida 1-(2,4,6-Tri-isopropil-benzenossulfonil)-aziridina-2-carboxílico Gly-Val-ftAla-Phe-Gly-amida ácido 1 -(2,4,6-T ri-isopropil-benzenossulfonil)-aziridina-2- carboxílico [(3-{3-[(2R,4S,5R)-4-(1-metóxi-ciclohexilóxi)-5-(1-metóxi- ciclohexiloximetil)-tetra-hidro-furan-2-il]-5-metil-2,6-dioxo-3,6-di-hidro-2H- pirimidin-1 -il}-propilcarbamoil)-metil]-amida
11.0 composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, em que o Iigante -L- é selecionado do grupo compreendendo C1-C6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída, cicloalquila, al- quenila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, arila substituída, heteroarila substituída, aralquila, heteroaralquila, alquilenóxi, arilóxi, aralcóxi, -C(=0)-, -C(=0)0-, -C(=0)NH-, -C(=0)N-(CH2)n-C(=0)- e -C(=0)-(CH2)n-C(=0)-, - SO2-, -SO2NR3-, -NR3SO2-, -NR3C(=0)0-, -NR3C(=0)NR3-, -NR3-, -NH-NH-, -NH-0-, -(CH2)n-C(=0)-NR3-CH2-C(=0)-, -S02-(arila não-substituída ou subs- tituída)-(CH2)n-C(=0)-o <formula>formula see original document page 127</formula> em que n é de 1 a 3, -A- representa -S- ou -NR3-, em que R3 representa hi- drogênio, CrC6 alquila linear ou ramificada, substituída ou não-substituída, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, aralquila ou heteroaralquila.
12. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, em que -L- é selecionado do grupo compreendendo CrC6 alquileno line- ar e ramificado, -(substituído e não-substituído, linear e ramificado Ci-C6 al- quileno)-C(=0)-, -C(=0)-, -C(=0)NH-, -C(=0)N-(CH2)n-C(=0)- e -C(=0)- (CH2)n-C(=0) com n = 1 - 3.
13. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, em que o radical do agente de direcionamento B compreende biomolé- culas selecionadas entre o grupo compreendendo peptídeos, peptidomiméti- cos, moléculas pequenas e oligonucleotídeos.
14. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, em que o agente de direcionamento B compreende biomoléculas sele- cionadas entre o grupo compreendendo peptídeos compreendendo de 2 a 100 aminoácidos.
15. Método para preparar um composto como definido em qual- quer uma das reivindicações 1 a 14 reagindo uma molécula precursora ade- quada com o agente de direcionamento ou um precursor do mesmo.
16. Composto fluorado obtenível por uma reação de fluoração de abertura de anel do anel aziridina de um composto como definido em qual- quer uma das reivindicações 1 a 14, e um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, um hidrato, complexo, és- ter, amida, solvato e pró-fármaco dos mesmos.
17. Composto fluorado, tendo qualquer uma das Fórmulas quí- micas gerais i-F-A e l-F-B: <formula>formula see original document page 128</formula> em que R, R1, R4, L e B têm os significados como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 14 e F é isótopo de flúor, e um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato e pró- fármaco dos mesmos.
18. Composto fluorado, tendo qualquer uma das Fórmulas quí- micas gerais Il-F-A e ll-F-B: <formula>formula see original document page 129</formula> em que R, R11 R41 L e B têm os significados como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 14 e F é isótopo de flúor, e um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato e pró- fármaco dos mesmos.
19. Composto fluorado, tendo qualquer uma das Fórmulas quí- micas gerais Ill-F-A e lll-F-B: <formula>formula see original document page 129</formula> em que R, R1, R4, L e B têm os significados como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 14 e F é isótopo de flúor, e um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico dos mesmos, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato e pró-fármaco dos mesmos.
20. Composto fluorado de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 16 a 19, em que o isótopo de flúor é isótopo radioativo ou não- radioativo, mais preferencialmente 18F ou 19F.
21. Composto fluorado de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 16 a 20, em que o radioativo isótopo de flúor é 18F.
22. Método para preparar um composto fluorado como definido em qualquer uma das reivindicações 16 a 22 reagindo um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 14 com um agente de fluo- ração apropriado sob condições de reação apropriadas.
23. Método de acordo com a reivindicação 22, em que o referido agente de fluoração é K18F, H18F1 KH18F2 ou um sal de tetra-alquilamônio de 18F.
24. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 e 23, em que o referido agente de fluoração é K18F.
25. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 24, em que a temperatura da reação é ajustada até 100°C ou menos.
26. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 25, em que a temperatura da reação é ajustada até 80°C ou menos.
27. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 10 a 26, em que se usa um solvente o qual é selecionado do grupo compreen- dendo DMF1 DMSO, MeCN, DMA, DMAA e uma mistura dos mesmos.
28. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 27, em que se usa um solvente o qual é DMSO.
29. Composição compreendendo um composto ou um sal far- maceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico do mesmo, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato ou pró-fármaco dos mesmos como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 14 ou um composto fluorado ou um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico do mesmo, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato ou pró- fármaco dos mesmos como definido em qualquer uma das reivindicações 16 a 21, e um veículo, diluente, excipiente ou adjuvante farmaceuticamente a- ceitável.
30. Kit compreendendo um frasco contendo uma quantidade predeterminada de um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico do mesmo, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato ou pró-fármaco dos mesmos como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 14 e um veículo, diluente, excipiente ou adjuvante farmaceuticamente aceitável para a fabricação de um composto como defi- nido em qualquer uma das reivindicações 16 a 21.
31. Kit compreendendo qualquer um do composto fluorado ou um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico do mesmo, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato ou pró-fármaco dos < mesmos como definido em qualquer uma das reivindicações 16 a 21 ou uma composição como definido na reivindicação 30 compreendendo os mesmos, por exemplo, em forma de pó, e um recipiente contendo um solvente apro- priado para preparar uma solução do referido composto fluorado ou compo- sição para administração do mesmo a um animal, incluindo um humano.
32. Uso de um composto fluorado ou de um sal farmaceutica- mente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico do mesmo, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato ou pró-fármaco dos mesmos como definido em qualquer uma das reivindicações 16 a 21 ou de uma composição como definido na reivindicação 30 ou de um kit como definido em qualquer uma das reivindicações 31 e 32 do mesmo para a fabricação de um medicamen- to.
33. Uso de um composto fluorado ou de um sal farmaceutica- mente aceitável de um ácido inorgânico ou orgânico do mesmo, um hidrato, complexo, éster, amida, solvato ou pró-fármaco dos mesmos como definido em qualquer uma das reivindicações 16 a 21 ou de uma composição como definido na reivindicação 29 ou de um kit como definido em qualquer uma das reivindicações 30 e 31 dos mesmos para a fabricação de um agente de estudo por imagens para diagnóstico.
34. Uso de acordo com a reivindicação 33 em que o agente de estudo por imagens para diagnjóstico é para tomografia por emissão de pó- sitrons.
35. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 33 e 34 para estudo por imagens de tumores, estudo por imagens de doenças infla- matórias e/ou neurodegenerativas, tais como esclerose múltipla da doença de Alzheimer, ou estudo por imagens de doenças associadas com angiogê- nese, tais como crescimento de tumores sólidos, e artrite reumatóide.
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