BRPI0715929A2 - derivados de ligustilida para o tratamento de desordens do sistema nervoso central - Google Patents

Abstract

DERIVADOS DE LIGUSTILIDA PARA O TRATAMENTO DE DESORDENS DO SISTEMA NERVOSO CENTRAL. A invenção atual refere-se a compostos de fórmula geral onde R1 é hidrogênio ou hdroxi; R2 é butílico ou butirílico se R1 é hidroxi, mas R2 é butílico se R1 é hidrogênio; ou R1 e R2 tomados juntos são1 propilidene ou 1 butilidene substituído opcionalmente por hy-droxy, por - dimetilacriloyloxy); a linha pontilhada é uma ligação beta,alfametílico, ou 3 (opcional;X são resíduo alifático opcionalmente substituído de C4- selecionado do grupo X1, X2, X3, X4 e X5 constituindo; onde X e X2, X3 ou X5 se a linha pontilhada da fórmula (i) é ausente; e X são X1, X4 ou X5 se a linha pontilhada significa uma ligação na fórmula (i) acima; R3 e R4 são independente de se de hidrogênio ou de hidroxi; R5 é hidroxi ou butirílico, para o uso no tratamento das desordens conectou à neurotransmissão danificada, assim como às composições dietéticase farmacêuticas que contêm tais compostos, e aos seus usos.

Description

DERIVADOS DE LIGUSTILIDA PARA O TRATAMENTO DE DESORDENS DO

SISTEMA NERVOSO CENTRAL

A presente invengao refere-se aos compostos organicos da formula geral 工， como def inidos abaixo, para uso no tratamento de disturbios relacionados a neurotransmissao deficiente, alem de composi?oes dieteticas e farmaceuticas que contem esses compostos, e aos seus usos.

Sabe-se que a neurotransmissao deficiente, por exemplo, niveis baixos de neurotransmissores, esta relacionada a doengas mentais como, por exemplo, depressao e distiirbios de ansiedade generalizada (GAD) , e suscetibilidade aumentada ao estresse.

Compostos que aumentam os niveis de neurotransmissores no cerebro e, dessa forma, aumentam sua transmissao, exibem, portanto, propriedades ant idepre s s ivas, alem de efeitos beneficos em varios outros distiirbios mentais ("Neurotransmitters, drugs and brain function" R.A. Webster (ed.), John Wiley & Sons, Nova York, 2001, p. 187-211, 289- 452, 477-498). Os principais neurotransmissores sao 2O serotonina, dopamina, noradrenalina (= norepinefrina), acetiIcolinaw glutamato, acido gama-amino-butirico, alem de neuropeptideos.〇 aumento da neurotransmissao e obtido por aumento da concentragao do neurotransmissor na f enda sinaptica, tornando-o, desse modo, disponivel para neurotransmissao aumentada ou prolongada por meio da inibigao da recaptagao na extremidade nervosa pre- sinaptica, ou por prevengao do catabolismo do neurotransmissor por inibigao de enzimas de degradagao como, por exemplo, monoaminooxidases AeB. Os compostos antidepressivos triciclicos (TCAs) como, por exemplo, imipramina, amitriptiIina e clomipramine, inibem a recapta?ao de serotonina e noradrenalina. Elas sao consideradas amplamente entre os antidepressivos mais eficazes disponiveis, mas possuem diversas desvantagens, pois interagem com varios receptores cerebrais, por exemplo, com receptores colinergicos. E, principalmente, os TCAs nao sao seguros quando consumidos em doses excessivas· apresentando frequentemente cardiotoxicidade aguda.

Outra classe de farmacos antidepressivos e formada pelos denominados SSRIs (inibidores seletivos da recaptagao de serotonina), que incluem fluoxetina, paroxetina, sertralina, citalopram, fluvoxamina, que bloqueiam ο transportador de serotonina (SERT), um transportador de neurotransmissor dependente de cloreto de sodio de alta afinidade que termina a neurotransmissao serotonergica por captagao de serotonina. Eles se mostraram tao eficazes no tratamento de depressao e ansiedade, e sao normalmente mais bem tolerados do que os TCAs. Essas medicagSes sao tipicamente iniciadas em dosagens baixas, e podem ser aumentadas ate que alcancem um nivel terapeutico. Um efeito colateral comum e nausea. Outros efeitos colaterais possiveis incluem diminuigao do apetite, boca seca, suores, infecqao, constipaqao, bocejos, tremor, sonolencia e disfungao sexual. Alem disso, compostos que evitam ο catabolismo de

neurotransmissores de forma mais ampla por inibigao das monoaminooxidases (MAOs) AeB exibem efeitos antidepressivos· As MAOs catalisam a oxidagao dos neurotransmissores que contem grupo amino como, por 3O exemplo, serotonina, noradrenalina e dopamina. Alem disso, os moduladores da neurotransmissao exercem efeitos pleiotropicos sobre fungoes mentais e cognitivas. Essas fun?oes diferem nitidamente dos efeitos relatados para constituintes de alimentos/plantas com fungao antioxidante que exercem um efeito neuroprotetor por meio da redugao do estresse oxidativo.

Alem disso, os pacientes frequentemente sofrem como uma comorbidade a depressao, ou pela propria sindrome de ansiedade generalizada (GAD). GAD e uma condi?ao de ansiedade altamente prevalente e uma doenga cronica no atendimento medico primario (aproximadamente 10% dos pacientes) (Wittchen, e cols, 2005. European

Neuropsychopharm. 15: 357-376). Os pacientes se apresentam ao medico do atendimento primario com varios sintomas fisicos. O GAD e caracterizado por tensao cronica, preocupagao ansiosa e tensao (>6 meses) , que sao incapacitantes e incontrolaveis, e acompanhadas por uma sindrome de hipervigilancia caracterlstica (que inclui inquietagao, tensao muscular e problemas relacionados ao sono) . Se nao tratado, 〇 GAD apresenta uma evolugao cronica, flutuante, e tende a se tornar mais grave com a idade. Os pacientes com GAD sofrem de depressao subsindromica e contribuem para os maiores custos globais diretos e indiretos de assistencia medica de todos os distiirbios de ansiedade e depress ivos. Apesar da alt a incidencia do GAD, poucos pacientes sao diagnosticados, recebem medicagao ou recebem encaminhamento psiquiatrico e, portanto, sao necessarias ferramentas diagnosticas simples que auxiliem no reconhecimento e monitoramento dos 3 0 pacientes. Independentemente do diagnostico especifico, os medicos necessitam de tratamentos eficazes dos sintomas do GAD. SSRIs como, por exemplo, paroxetina, sao eficazes para 〇 tratamento do GAD [Stocchi e cols· 2003 J. Clin. Psych., 63(3) ： 250-258] . Alem disso, revisoes sistematicas e RCTs controlados por placebo (Testes Clinicos Randomizados) indicam que alguns SSRIs (escitalopram, paroxetina e sertralina), os SNRI (工nibidores Seletivos da Recaptagao de Norepinefrina) venlafaxina, alguns benzodiazepinicos (alprazolam e diazepam), ο inibidor triciclico imipramina, e ο agonista parcial de 5-HTlA buspirona sao eficazes no tratamento agudo. Em geral, ο efeito do tratamento e frequentemente moderado, e os sintomas reaparecem quando ο periodo de tratamento e suspenso. Portanto, um tratamento continuo de longo prazo ou a prevenqao com compostos que possuam menos efeitos colaterais que os SSRIs e possam ser tornados por periodos de tempo mais longos poderiam ser favoraveis em relagao ao tratamento farmacologico.

Ha necessidade de compostos para 〇 tratamento ou a prevenqao de doengas mentais e/ou disttirbios que nao apresentem efeitos colaterais negativos dos antidepressivos conhecidos. Muitos pacientes estao interessados em terapias alternativas que pudessem minimizar os efeitos colaterais associados as doses elevadas de farmacos e gerassem beneficios clinicos aditivos. A depressao grave e uma 2 5 doenga duradoura e recorrente, que e normalmente pouco diagnosticada. Alem disso, muitos pacientes sofrem de depressao Ieve ou de gravidade media. Dessa forma, ha um interesse crescente no desenvolvimento de compostos, bem como de composigoes farmaceuticas e/ou dieteticas que

3 0 possam ser usadas para ο tratamento de doengas/disturbios mentais ou para evitar ο desenvolvimento de doengas/distiarbios mentais como, por exemplo, depressao e distimia em pessoas em risco, e para estabilizar ο humor.

Sabe-se que ο humor instavel esta relacionado a neurotransmissao deficiente, ou seja, reduzida, e que is so tambem causa uma suscetibilidade aumentada ao estresse.

Dessa forma, ο humor e influenciado pela biossintese de neurotransmissores, processamento de neurotransmissores , armazenamento de neurotransmissores, liberagao de neurotransmissores, recaptaqao de neurotransmissores e ligagao de receptores de neurotransmissores, especialmente quando a serotonina e ο neurotransmissor.〇 humor instavel pode se manifestar em animais, incluindo seres humanos, como tensao, tristeza, infelicidade/descontentamento, irritabi lidade e disforia, e/ou como um disturbio do comportamento, das emogoes e dos processos do pensamento.

Dessa forma, ha tambem necessidade de compostos para harmonizar ou normalizar ο humor e obter equilibrio emocional para conviver com ο estresse da vida diaria e manter ο desempenho fisico e psicologico.

Os distiarbios do humor e ο estresse ocupacional tambem levam a disturbios do sono consecutivos (insonia), demora do inicio do sono e baixa qualidade do sono, disttirbios em ritmo circadiano (denominado biorritmo). Essas condigoes sao f requentemente cronicas e podem per si stir por um longo tempo. Alem disso, a alteraq:ao do ritmo circadiano induzida por voos de longa distancia (jet-lag) bem como por mudangas de turnos de trabalho pode causar sintomas e sofrimento similares. Portanto, ο tratamento com suplementaqao

3O dietetica para aliviar* e evitar os sintomas associados aos distiirbios do sono, bem como para manter ο ritmo circadiano normal (ao qual um animal ou ser humano esta acostumado) e/ou para aliviar e evitar os sintomas associados a um ritmo circadiano alterado, por exemplo, deficit da fungao cognitiva e mem0ria, fadiga mental e cronica, abatimento, comprovadamente melhora a qualidade de vida global e beneficia a energia vital de uma pessoa que necessita.

DESCRigAO DA INVENgAO Surpreendentemente, verificou-se que os compostos da formula geral I, como definidos abaixo, sao inibidores eficazes da recaptagao de serotonina e noradrenalina, e inibidores das monoaminooxidases AeB. Dessa forma, eles possuem propriedades similares aos dos farmacos antidepressivos comercializados atualmente como, por exemplo· SSRIs (inibidores seletivos da recaptagao de serotonina), SNRIs (inibidores seletivos da recaptagao de noradrenalina) e aminas triciclicas.

A presente invengao refere-se especialmente ao uso dos compostos da formula geral 工 como agentes de estabilizagao do humor e agentes para alivio do estresse, para ο bem- estar mental, bem como para ajudar a reduzir ο risco de mudangas do humor, para ajudar a manter um humor positivo e para apoiar um bom estado cognitivo, para normalizar ο padrao do sono (tambem denominado arquitetura do sono), encurtar ο tempo ate ο inicio do sono, em geral para ajudar a promover e manter uma boa qualidade do sono, alem de composi?oes (dieteticas) e alimentos/ragoes/bebidas fortif icados que os contem, e seus usos. Esses compostos (especialmente ligustilida, 3n-butilftalida, senkyunolide A, B, C, cnidilide) sao usados, pref erivelmente, para normalizar e manter ο ritmo circadiano (biorritmo) em seres humanos, para alivio e/ou prevengao dos sintomas associados a um ritmo circadiano alterado (biorritmo) em seres humanos.

Adicionalmente, os compostos desta invengao tem usos

veterinarios, incluindo： prevengao do estresse em animais de criagao no manejo de rebanho de produgao em massa e/ou durante ο transporte ate ο abatedouro； prevengao da perda de qualidade da carne dos animais de criagao durante ο transporte ate ο abatedouro； para a prevengao da remoqSo compulsiva da ρlumagem e canibalismo entre aves de criaqao; e para a redu?ao do estresse em animais de estimagao.

De acordo com a presente invengao, essa demanda e atendida com compostos conhecidos da formula geral If

15

O

(I)

em que：

R1 e hidrogenio ou hidroxi；

desde que R2 seja butil ou butiril caso R1 se j a hidroxi, e R2 seja butil caso R1 seja hidrogenio； ou

R1 e R2, considerados em conjunto, sao 1-propilideno ou 1-butilideno opcionalmente substituido por hidroxi, metil ou 3 -(a,β-dimetilacriloiloxi);

a linha pontilhada e uma ligagao opcional；

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X e um residuo C4 alifatico opcionalmente substituido X1 X2 X3 X4 X5

em que：

X e X2, X3 ou X5 7 caso a linha pontilhada na formula (I) esteja ausente； e

X e XI, X4 ou X5, caso a linha pontilhada signifique uma ligagao na formula (I) acima；

R3 e R4 sao, independentemente um do outro, hidrogenio ou hidroxi； e R5 e hidroxi ou butiril.

Dessa forma, em um compos to de formula (I) acima, Xl pode ser substituido por um (caso um de R3 e R4 seja hidroxi) ou dois grupos hidroxi (caso R3 e R4 sejam, ambos, hidroxi).

Os compostos da formula geral I, como descritos acima,

atuam como inibidores da recaptagao de serotonina, prolongando, dessa forma, ο tempo em que a serotonina esta disponivel para a neurotransmissao. Isso leva a um efeito de equilibrio do humor e de alivio do estresse. Os compostos usados para a presente invengao sao

selecionados do grupo de derivados da ftalida, que se referem as lactonas substituidas de acido 2-hidroxi-metil- benzoico de acordo com a Regra da 工UPAC C-473. Essa classe de compostos se baseia em 1(3H)-isobenzofuranona C8H602.

Os compostos preferidos usados para a finalidade da presente invengao sao selecionados do grupo que consiste em (E) -senkyunolide E； senkyunolide C； senkyunolide B； 3 - butil-4,5,6,7-tetrahidro-3,6,7-triidroxi-l(3H)- isobenzofuranona； 3-butil-l(3H)-isobenzofuranona； 3 -

butilftalida； 3-butilidenoftalida； 3-propilidenoftalida ； chuangxinol； ligustilidiol； senkyunolide F； 3-hidrfiixi- senJcyunolide A； angeloil-senkyunolide F； senkyunolide M； 3 - hidroxi- 8 -oxo-senkyunolide A； ligustilida； 6 , 7-diidro- (6S,7R)-diidroxiligustilida； 3a,4-diidro-3- (3-

Ιϋ me t iIbut i1i deno)-1(3H)-i sobenzofuranona； sedanolide e cnidilide f alem de misturas destes. As modalidades preferidas estao listadas na Tabela 1.

Tabela 1: Lista de compostos preferidos usados de acordo com a presente invenqiao

Estrutura Nome 八 J/ 0H O (E)-Senkyunolide E r Senkyunolide C O ^Jfr Senkyunolide B W OH O Γ 3-Butil-4,5,6,7- xyrH tetrahidro-3 ,6,7- triidroxi-1(3H)- OH O isobenzofuranona 3-Butil-I(3H)-isobenzofuranona τ飞 OH 0 3-n-Butilftalida OCo Λ O 3-Butilidenoftalida Of 0 3-Propilidenoftalida o< \ O OH ^-Γ^ I .- Chuangxinol V飞 0 Ligustilidiol Ho^r^i OH 0 Γ Senkyunolide F ^ JrxOH LX/0 0 r 3-Hidroxi-senkyunolide A Cv 0 Γ AngeIoil-senkyunolide F Γ^ΝτΛ Uo UCo ρ Senkyunoli de M 3 -Hidroxi-8 -οχο-senkyunolide A Vr Γ ιΠο 0 Ligustilida of V Λ O 广 6,7-Diidro-(6S,7R)- diidroxiligustilida OH O ν 3a,4-Diidro-3-(3- Hrr met iIbut i1ideno)-1(3H)- of isobenzofuranona V O Sedanolide O H兰 Criidilide CRo H O

Os compostos mais preferivelmente usados sao selecionados do grupo que consiste em ligustilida, 3 - butilftalida, 3 -butilidenoftalida, 3-propilidenoftalida, Sedanolidei senkyunolide A, senkyunolide B e senkyunolide C, alem de misturas destes. Dessa forma, em um aspecto, a invengao esta relacionada a um composto da formula geral 工 com as definigdes de X e R1-R5 apresentadas acima, preferivelmente a um composto selecionado do grupo que consiste em (E)- senkyunolide E； senkyunolide C； senkyunolide B ； 3-butil- 4,5,6,7- tetrahidro-3,6,7-triidroxi-l(3H)-isobenzofuranona； 3-butil-1 (3H)-isobenzofuranona； 3-butilftalida； 3 -

butilidenof talida； 3-propilidenof talida,. chuangxinol ； ligustilidiol / senkyunolide F； 3 - hidroyii- senkyunolide A； angeloil- senkyunolide F； senkyunolide M； 3 -hiciroxi- 8 -oxo- senkyunolide A； ligustilida； 6,7-diidro-(6S,7R)_

diidroxiligustilida； 3a,4-diidro-3-(3-metilbutilideno)-

1(3H)-isobenzofuranona； sedanolide； e cnidilide f alem de uma mistura destes. Mais preferivelmente, ο composto e selecionado do

grupo que consiste em ligustilida, 3-butilftalida, 3 - butilidenoftalida, 3-propilideno—ftalida, sedanolide f senkyunolide A, senkyunolide B e senkyunolide Ct alem de uma mistura destes, para uso no tratamento de um disttirbio relacionado a neurotransmissao deficiente ou reduzida, ou para uso na fabricagao de composigoes uteis para ο tratamento de um disttirbio re lacionado a neurotransmissao deficiente.

Dessa forma, em um aspecto, a invengao esta relacionada ao uso de um composto da formula geral 工 como def inido acima, pref erivelmente ο uso de um composto listado na Tabela 1, mais pref erivelmente ao uso de ligustilida, 3-butilftalida, 3-butilidenoftalida, 3- propilidenoftalida, sedanolide, senkyunolide A,

senkyunolide B e senkyunolide C, alem de misturas destes, como agente de estabilizaqao do humor e/ou como agente para alivio do estresse em animais, incluindo seres humanos.

Os animais sao especialmente seres humanos, animais de estimagao ou animais de companhia (preferivelmente gatos e cachorros), animais de criagao (preferivelmente aves de criagao, gado, carneiro, cabra e suinos) e animais para a industria de peles como, por exemplo, as martas, raposas e lebres, bem como animais usados para aqiiicultura como · por exemplo, peixes com salmao e truta, alem de crustaceos como, por exemplo, camarao.

Em uma modalidade preferida da presente invengao, os compostos desta invengao sao usados para a prevengao do estresse em animais de estimagao e em animais de criagao, no manejο de rebanho de produgao em massa, durante ο transporte ate ο abatedouro e/ou para a prevengao de perdas na. produgao de leite ou ovos e da per da de qua lidade da carne dos referidos animais de criagao durante ο transporte ate ο abatedouro.

Em outra modalidade preferida da presente invengao, os compostos desta invengao sao usados para a prevengao da remogao compulsiva da ρlumagem e canibalismo entre aves de criagao e/ou para a prevengao de perdas da qualidade da carne e da produgao de ovos acompanhada por ela em geral.

Em uma modalidade preferida adicional da presente ϊηνβηςδο, os compostos desta invengao sao usados para manter ο ritmo circadiano em seres humanos, para ο alivio e/ou a prevengao dos sintomas associados a um ritmo circadiano alterado em seres humanos. Dessa forma, ο humor e estabilizado e um equilibrio emocional e alcangado para

conviver com ο estresse da vida diaria e para manter ο desempenho fisico e psicologico. Alem disso, os sintomas associados a um ritmo circadiano alterado como, por exemplo, deficit da fungao cognitiva e memoria e fadiga mental e cronica, sao aliviados e/ou evitados, de forma que a qualidade de vida global e melhorada e as pessoas que recebam a administragao desses compostos se beneficiam da manutenqao da energia vital. Alem disso, a desregulagao do ritmo circadiano induzida por voos de longa duragao (jet- lag) , por mudangas do turno de trabalho e os sintomas a elas associados sao aliviados e/ou evitados.

Dessa forma, ο humor instavel, que pode se manifestar como tensao, tristeza, inf elicidade/descontentamento e irritabilidade, disforia e/ou como um disturbio do comportamento, das emogoes e d〇s processos do pensamento, e evitado por administragao dos compostos da formula geral 工 como definidos acima a animais, incluindo seres humanos.

Em outro aspecto, a invengao esta relacionada ao uso de um composto da formula geral 工 como definido acima para ο tratamento de um disttirbio relacionado a neurotransmissao def iciente ou reduzida ou para a f abricagao de uma composlgao para ο tratamento de um distiirbio relacionado a neurotransmissao deficiente, particularmente para a fabricagao de um ant idepress ivo, um redutor do comportamento obsessivo-compulsivo, um relaxante, um agente para melhora do sono e/ou a agente para tratamento de insonia, bem como para uso como agente de estabilizagao do humor, como agente para melhora do humor/vitalidade, como agente para alivio do estresse, como agente para melhora da condigao e/ou como redutor da tensao, tristeza, infelicidade/descontentamento, irritabilidade e disforia. Ainda em outro aspecto, a invengao esta relacionada a composigoes, particularmente as composigoes dieteticas que contem pelo menos um composto da formula geral 工 como definido acima, alem de composigoes farmaceuticas que contem pelo menos um composto da formula geral 工 como definido acima e um veiculo farmaceutico convencional para uso no tratamento de distiirbios relacionados a neurotransmissao deficiente.

Alem disso, a invengao esta relacionada a um metodo para ο tratamento de um distiarbio relacionado a neurotransmissao deficiente em animais, incluindo seres humanos, ο referido metodo compreendendo： (a) a preparagao de uma composigao que compreende um composto de formula 工， e (b) a admini stragao de uma dose ef icaz da ref erida composigao aos animais que necessitam dela, incluindo seres humanos·

Alem disso, a invenqao esta relacionada a um metodo para equilibrio do humor e/ou alivio do estresse em animais, incluindo seres humanos, ο referido metodo compreendendo a administragao de uma dose ef icaz de um composto da f6rmula geral 工 como definido acima e aos animais que necessitam dela, incluindo seres humanos.

Animais, no contexto da presente invengao, incluem seres humanos e englobam mamiferos, peixes e passaros. "Animais" preferidos sao seres humanos, animais de estimaqao ou animais de companhia, animais de criagao, animais para a industria de peles e em aquicultura · "Animais" mais preferidos sao seres humanos· animais de estimagao e animais de criagao.

Exemplos para animais de estimagao sao cachorros, gatos, passaros, peixes de aquario, porquinhos-da-India, coelhos (lebre norte-americana) , lebres e furoes.

Exemplos de animais de criagao sao peixes (como, por exemplo, salmao e truta) , aqiiicultura animais (como, por exemplo, camaroes) , porcos, cavalos, ruminantes (gado, carneiros e cabras) e aves de criagao (como, por exemplo, gansos, galinhas, frangos, galinhas poedeiras, codornas, patos, perus).

Exemplos de animais para a indtistria de peles sao martas, raposas e lebres.

Em uma modalidade preferida da presente invengao, um composto da formula geral I como definido acima e administrado para a prevenqao do estresse em animais de criagao, no manejο de rebanho de produ^ao em massa, durante 〇 transporte ate ο abatedouro e/para a prevengao da perda de qualidade da carne dos referidos animais de criagao durante ο transporte ate ο abatedouro. Os referidos animais de criagao sao especialmente aves de criagao (como, por exemplo, gansos, frangos, galinhas poedeiras, codornas, patos, galinhas, perus), gado, carneiros, cabras e suinos.

Em outra modalidade preferida da presente invengao, ο composto da formula geral 工 como definido acima e administrado aos animais de estimaqao para a redugao do estresse, tensao e agressividade e comportamento compulsivo sob condigoes estressantes como, por exemplo, separagao, mudanga ou perda do dono, durante separagao de ferias e manejo nos denominados "hoteis de animais", manejo em abrigos de animais, e outras condigoes de manejo e criagao densos.

Em outra modalidade preferida da presente invengao, ο composto da formula geral 工 como definido acima e administrado as aves de criagao (como, por exemplo, gansos, frangos, galinhas poedeiras, codornas, patos, galinhas, perus) para a prevengao da remogao compulsiva da plumagem e canibalismo, que resultam, por exemplo, em perdas da qualidade da carne e da produgao de ovos.

Em uma modalidade preferida adicional da presente invengao, ο composto da formula geral 工 como definido e administrado a seres humanos para manuten?ao do ritmo circadiano em seres humanos, para alivio e/ou prevengao dos sintomas associados a um ritmo circadiano alterado em seres humanos.

〇 termo "composto da formula geral I" tambem engloba qualquer material ou extrato de uma planta que contenha um composto desse tipo coberto pela formula geral I, pref erivelmente em uma quant idade de pelo menos 50% do peso, mais preferivelmente em uma quantidade de 70 a 90% do peso, principalmente em uma quantidade de pelo menos 90% do peso, com base no peso total do material ou extrato de planta. Os termos "material de uma planta" e "material de planta" usados no contexto da presente invenqao significam qualquer parte de uma planta.

Os compostos de acordo com formula 工 como definidos acima e que sao usados de acordo com a presente invengao podem ser isolados por metodos conhecidos na tecnica [veja, por exemplo, Beck J.e cols. 1995 Natural Products 58(7)： 1.047-1.055] de varias plantas como, por exemplo, Angelica, glauca, Angelica acutiloba, Angelica sinensis f Angelicae dahuricae, Apium graveolens f Ligusticum acutilobumf Ligusticum officinale, Ligusticum sinense, Ligusticum wallichii f Ligusticum chuanxiong, Cnidium officinale, Rhizoma chuanxiong, Pleurospermum hooker!, Trachyspermum roxburghianumf Meum athawanticum, Loiuatium torreyi · Scutellaria baicalensis, Opopanax Chironiumf Cenolophium denudatum, Coriandrum sativuum e Silaum silaus. Portanto, qualquer material, extrato ou resina oleosa dessas plantas ou qualquer outro material ou extrato de planta que contenha um composto especlfico coberto pela formula I, especialmente em uma quantidade de pelo menos 50% do peso, preferivelmente em uma quantidade de 70 a 90% do peso, mais preferive lmente em uma quant idade de pelo menos 90% do peso, com base no peso total do material ou extrato de planta, tambem e englobado pela expressao "composto da formula 1〃 . Os compostos aqui utilizados tambem podem ter origem sintetica. Dessa forma, "composto da formula I" significa um composto da formula 工 tanto "natural" (isolado) quanto "sintetico" (fabricado) . Nesse caso, tanto os isomeros cis (Z) quanto trans (E) estao incluidos.

3-n-Butilftalida, senkyunolides A, BeCe sedanolide podem ser obtidos por destilagao e fracionamentο do extrato de semente de Apium graveolens, ou por extragao de liquido supercrltico de CO2 e, se desejado, seguido por uma destilaqao. A extragao/destilagao de liquido supercrltico e um metodo preferido para a extragao de Ligusticum. Alem do s compostos de formula 工 puros, sao

especialmente preferidos materials de planta e extratos de planta que contem pelo menos 50% do peso, mais preferivelmente de 70 a 90% do peso, principalmente pelo menos 90% do peso, desses compostos, com base no peso total do material/extrato de planta. Extratos de plantas inteiras ou partes destas, por exemplo, de folhas, raízes ou semente, são disponíveis comercialmente ou podem ser obtidos de acordo com métodos bem conhecidos na técnica com a utilização de solventes como metanol, etanol, acetato de etil, éter dietílico, n-hexano, cloreto de metileno ou, preferivelmente, com líquidos supercríticos como dióxido de carbono (puro ou em mistura com outros solventes como, por exemplo, alcoóis) ou oxido de di-nitrogênio. A partir dos extratos, podem ser obtidos compostos únicos ou misturas mais ou menos puras por destilação e fracionamento, preferivelmente sob pressão reduzida. Alternativamente, compostos de fórmula I puros podem ser sintetizados por métodos bem conhecidos na técnica e misturados juntos em quaisquer quantidades desejadas.

Em uma modalidade preferida da presente invenção, os compostos da fórmula geral I são administrados em forma de um destilado de Ligusticuml ou como uma mistura com destilado de Ligusticum como um componente, que contém as seguintes cinco ftalidas: 3-n-butilftalida, 3-n-butilidenoftalida, senkyunolide A, sedanolide e Z-ligustilida.

De preferência, esse destilado/mistura contém pelo menos 40% do peso, pref erivelmente pelo menos 55%, mais preferivelmente pelo menos 65%, principalmente pelo menos 85% do peso dessas 5 ftalidas em conjunto, com base no peso total do destilado/mistura. No destilado/mistura,

Preferivelmente, a quantidade de Z-ligustilida está: - em uma quantidade na faixa de pelo menos 3 0 a 6 0% do

peso;

- mais preferivelmente pelo menos 40% do peso,

- ainda mais preferivelmente pelo menos 50% do peso; Preferivelmente, a quantidade de senkyunolide A está:

- em uma quantidade na faixa de 10-4 0% do peso;

- preferivelmente pelo menos 10% do peso,

- mais preferivelmente pelo menos 20% do peso, e

- ainda mais preferivelmente pelo menos 30 % do peso; Preferivelmente, a quantidade de sedanolide está:

- em uma faixa de cerca de 0,1 a 8 % do peso,

- preferivelmente pelo menos 0,5% % do peso,

- mais preferivelmente pelo menos 1,0% do peso,

- ainda mais preferivelmente pelo menos 3% do peso, e Preferivelmente, a quantidade de 3-n-butilftalida é:

- em uma faixa de cerca de 0,1 a pelo menos 5 % do

peso,

- preferivelmente pelo menos 0,5% do peso,

- mais preferivelmente pelo menos 2% do peso,

2 0 - ainda mais preferivelmente pelo menos 3% do peso,

Todas as quantidades com base no peso total do destilado/mistura.

As composições dietéticas de acordo com a presente invenção podem ainda conter hidrocolóides protetores, aglutinantes, agentes formadores de película,

agentes/materiais de encapsulação, materiais de formação de parede/casca, compostos de matriz, revestimentos, emulsificantes, agentes tensoativos, agentes solubilizantes (óleos, gorduras, ceras, lecitinas etc.), adsorventes, veículos, enchimentos, co-compostos, agentes dispersantes, agentes umidificantes, auxiliares do processamento (solventes), agentes de fluxo, agentes de mascaramento do sabor, agentes de ponderação, agentes de gelificação, agentes de formação de gel, antioxidantes e antimicrobianos.

0 termo "composições dietéticas" compreende qualquer tipo de nutrição como, por exemplo, alimentos/rações (fortificados) e bebidas, incluindo também nutrição clinica, e também suplementos dietéticos. Além de um veiculo farmaceuticamente aceitável e de

pelo menos um composto da fórmula geral I com as definições de X, R1-R5 e aquelas preferidas apresentadas acima, as composições farmacêuticas de acordo com a presente invenção podem ainda conter aditivos farmacêuticos convencionais e adjuvantes, excipientes ou diluentes que incluem, sem limitação, água, gelatina de qualquer origem, gomas vegetais, sulfonato de lignina, talco, açúcares, amido, goma arábica, óleos vegetais, polialquileno glicóis, agentes flavorizantes, conservantes, estabilizantes, agentes emulsificantes, tampões, lubrificantes, corantes, agentes umidificantes, enchimentos, e semelhantes. O material de transporte (veiculo) pode ser um material de transporte inerte orgânico ou inorgânico para administração oral/parenteral/inj etável. As composições dietéticas e farmacêuticas de acordo

com a presente invenção podem estar em qualquer forma galênica que seja adequada à administração ao corpo animal, incluindo o corpo humano, especialmente em qualquer forma que seja convencional para a administração oral, por exemplo, em forma sólida como (aditivos/suplementos para) alimentos ou rações, pré-misturas de alimentos ou rações, alimentos ou rações fortificadas, comprimidos, pílulas, grânulos, drágeas, cápsulas, e formulações efervescentes como pós e comprimidos, ou em forma líquida como soluções, emulsões ou suspensões como, por exemplo, bebidas, pastas e suspensões oleosas. As pastas podem ser preenchidas em cápsulas de invólucro rígido ou macio. Exemplos para outras formas de aplicação são formas de administração transdérmica, parenteral ou injetável. As composições dietéticas e farmacêuticas podem estar na forma de formulações de liberação controlada (retardada).

Exemplos de alimentos são produtos laticínios como, por exemplo, iogurtes.

Exemplos para alimentos fortificados são barras de cereal, itens de confeitaria como, por exemplo, bolos e biscoitos.

Bebidas englobam bebidas alcoólicas e não alcoólicas, além de preparações líquidas a serem adicionadas à água de beber e em alimentos líquidos. Bebidas não alcoólicas são, 2 0 por exemplo, refrigerantes, bebidas energéticas, sucos de frutas, limonadas, bebidas aquosas (ou seja, bebidas baseadas em água com um baixo teor de calorias) , chás e bebidas baseadas em leite. Alimentos líquidos são, por exemplo, sopas e produtos laticínios (por exemplo, bebidas com muesli - cereais com nozes e frutas secas típicos da Suíça).

O composto da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e as preferências apresentadas acima pode ser usado para a fabricação de medicamentos para o tratamento de um distúrbio relacionado à neurotransmissão deficiente ou reduzida.

No contexto desta invenção, "tratamento" também engloba o co-tratamento, bem como a prevenção. "Prevenção" pode ser a prevenção da primeira ocorrência (prevenção primária) ou a prevenção de uma recorrência (prevenção secundária).

Dessa forma, a presente invenção também se dirige a um método para a prevenção de um distúrbio relacionado à neurotransmissão deficiente em animais, incluindo seres humanos, o referido método compreendendo a administração de uma dose eficaz de um composto da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e as preferências apresentadas acima aos animais que necessitam dela, incluindo seres humanos. A esse respeito, uma dose eficaz de um composto da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e as preferências apresentadas acima pode especialmente ser usada para a manutenção do bem-estar mental, para manutenção de uma função cognitiva equilibrada, para ajudar a reduzir o risco de mudanças do humor, para ajudar a reter

2 0 um humor positivo e para apoiar um bom estado cognitivo,

para normalizar o padrão do sono (também denominado arquitetura do sono), para encurtar o tempo até o início do sono, em geral para ajudar a promover e manter uma boa qualidade do sono, para normalizar o ritmo circadiano (biorritmo) de uma pessoa, o que significa restaurar o biorritmo de uma pessoa ao seu biorritmo usual, saudável.

No contexto desta invenção, o termo "distúrbio" também engloba doenças.

Composições farmacêuticas e dietéticas para o

3 0 tratamento de distúrbios relacionados à neurotransmissão deficiente englobam seu uso como antidepressivos, agentes para melhora do humor/vitalidade, agentes para alívio do estresse, agentes para melhora da condição, redutores da ansiedade e redutores do comportamento obsessivo- compulsivo, relaxantes, agentes para melhora do sono e/ou agentes para tratamento de insônia, normalizadores do ritmo circadiano (biorritmo). Eles todos podem melhorar, aumentar e apoiar a neurotransmissão fisiológica, especialmente no sistema nervoso central e, portanto, podem aliviar o mal funcionamento mental.

Antidepressivos são medicamentos para o tratamento de distúrbios mentais, comportamentais e emocionais/afetivos, neuróticos, neurodegenerativos, relacionados à alimentação e ao estresse como, por exemplo, depressão unipolar, depressão bipolar, depressão aguda, depressão crônica, depressão subcrônica, distimia, depressão pós-parto, disforia/síndrome pré-menstrual (PMS), sintomas depressivos do climatério, agressão, distúrbios de déficit de atenção (ADS), distúrbios de ansiedade social, distúrbios afetivos sazonais, ansiedade (distúrbios) como, por exemplo, distúrbio de ansiedade generalizada (GAD), síndrome de fibromialgia, fadiga crônica, distúrbios do sono (insônia), distúrbios de estresse pós-traumático, distúrbios do pânico, distúrbios obsessivos compulsivos, síndrome da perna inquieta, nervosismo, enxaqueca/dores de cabeça primárias e dor em geral, vômito, bulimia, anorexia nervosa, distúrbio da alimentação compulsiva, distúrbios gastrointestinais, síndrome do esgotamento profissional, irritabilidade e cansaço.

Os antidepressivos também podem ser usados para (a fabricação de composições para) a prevenção primária e secundária e/ou para o tratamento de déficit neurocognitivo. Além disso, eles também são eficazes no tratamento de sintomas depressivos ou de outros sintomas relacionados à neurotransmissão alterada que ocorre como comorbidade em doenças crônicas como, por exemplo, doenças cardiovasculares, acidentes vasculares cerebrais, câncer, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, e outras.

0 composto da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e as preferências apresentadas acima, além dos (misturas de) materiais de planta e extratos de planta que os contêm (essencialmente) (especialmente em uma quantidade de pelo menos 30% do peso, pref erivelmente em uma quantidade de pelo menos 50% do peso, mais preferivelmente em uma quantidade de 70 a 90% do peso, principalmente em uma quantidade de pelo menos 90% do peso, com base no peso total do material ou extrato de planta) e composições dietéticas/farmacêuticas que os contêm são, dessa forma, adequados para o tratamento de animais, incluindo seres 2 0 humanos.

Especialmente animais de companhia (animais de estimação) e animais de criação podem estar em condições que necessitem de neurotransmissão aumentada ou aprimorada. Essas condições ocorrem, por exemplo, após captura ou

2 5 transporte ou com permanência em um abrigo, quando os

animais desenvolvem distúrbios análogos e estão em sofrimento ou agressivos, ou exibem comportamento estereotípico, ou ansiedade e comportamento obsessivo- compulsivo.

3 0 Dessa forma, os compostos da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e as preferências apresentadas acima podem ser usados, em geral, como antidepressivos para animais, incluindo seres humanos, preferivelmente para seres humanos, animais de companhia (animais de estimação) e animais de criação.

Em uma modalidade adicional da presente invenção, os compostos da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e as preferências apresentadas acima encontram utilização como agentes para melhora do humor em geral, bem como para a fabricação de composições para essa utilização (materiais/extratos de plantas; composições

dietéticas/farmacêuticas) . "Agente para melhora do humor" ou "agente para reforço do bom estado emocional" ou "agente para aumento da vitalidade" significa que o humor de uma pessoa tratada com ele é melhorado, que a auto-estima é aumentada e/ou que pensamentos negativos e/ou tensão negativa são/é reduzido(s). Também significa que as emoções são equilibradas e/ou que o bem estar e a vitalidade geral, especialmente a mental, são melhorados ou mantidos, bem

2 0 como o risco de mudanças do humor é (ajudado para ser)

reduzido e o humor positivo é (ajudado para ser) mantido.

Os compostos da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e as preferências apresentadas acima também podem ser usados, em geral, como um agente redutor da ansiedade e/ou agente redutor do comportamento obsessivo- compulsivo para animais, incluindo seres humanos, preferivelmente para seres humanos, animais de estimação e animais de criação.

O termo "agente redutor da ansiedade" significa que a

3 0 tensão crônica e a preocupação ansiosa e a tensão são aliviadas e reduzidas. A sindrome de hipervigilância, incluindo inquietação, tensão muscular e problemas relacionados ao sono, são aliviados. Fobias sociais e outras fobias são resolvidas. Em geral, o ambiente social é vivenciado de forma menos ameaçadora. A pessoa fica emocionalmente relaxada, apresenta conforto e tem prazer em desfrutar da companhia e do contato com outras pessoas.

O termo "relaxante" ou "agente para melhora do sono" ou "agente para tratamento de insônia" significa a melhora do inicio do sono (encurtando o tempo até o início do sono, reduzindo o tempo até o sono) e o auxílio para que uma pessoa durma facilmente, normalize os padrões do sono ou mantenha um sono contínuo ao longo da noite. Significa também corrigir o ritmo circadiano associado a distúrbios do sono em conseqüência de jet-Iag ou mudanças de turnos de trabalho, e evitar e abolir os sintomas associados à insônia, ou seja, déficit da função cognitiva e memória, fadiga mental e crônica, abatimento, e melhorar a qualidade de vida global e a energia vital.

Além disso, os compostos da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e as preferências apresentadas acima, bem como as composições que compreendem uma dose eficaz deles, são úteis para o tratamento, a prevenção e o alívio de sintomas relacionados ao estresse, para o tratamento, a prevenção e o alívio dos sintomas relacionados à carga de trabalho excessiva, à exaustão e/ou esgotamento, para o aumento da resistência ou tolerância ao estresse e/ou para favorecer e facilitar o relaxamento em indivíduos saudáveis normais, ou seja, essas composições possuem um efeito como "agente para alívio do estresse". Além disso, os compostos da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e as preferências apresentadas acima, bem como as composições que compreendem uma dose eficaz deles, são úteis para o tratamento, a prevenção e o alivio de ansiedade e comportamento obsessivo-compulsivo em seres humanos e animais.

Uma modalidade adicional da presente invenção está relacionada ao uso de compostos da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e as preferências apresentadas acima e ao uso de composições que os contêm (materiais/extratos de plantas; composições

dietéticas/farmacêuticas) como "agente para melhora da condição", ou seja, como um meio para reduzir a irritabilidade e cansaço, para reduzir ou evitar ou aliviar a fadiga física e mental, e para aumentar a energia em termos mais gerais, especialmente para aumentar a produção de energia cerebral, em indivíduos saudáveis normais ou doentes. Além disso, para a melhora da função cognitiva em geral, e especialmente para a manutenção ou melhora da

2 0 atenção e da concentração, da memória e da capacidade para

se lembrar, da habilidade de aprendizado, do processamento da linguagem, da solução de problemas e do funcionamento intelectual; para melhora da memória de curto prazo; para aumento da agilidade e precisão mentais, da capacidade de concentração; para aumento da vigilância mental; para reduzir a fadiga mental; para apoiar um bom estado cognitivo, para manter uma função cognitiva equilibrada, para a regulação da fome e da saciedade, bem como para a regulação da atividade motora.

3 0 A presente invenção refere-se não apenas aos compostos da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e às preferências apresentadas acima e suas composições (ou seja, (mistura(s) de) extratos de planta que as contêm (essencialmente); composições dietéticas/farmacêuticas que as contêm) para uso como medicamentos, especialmente para o tratamento de distúrbios relacionados à neurotransmissão deficiente, mas também aos métodos para o tratamento dos próprios distúrbios, como já mencionado acima.

Em uma modalidade especialmente preferida desse método, são tratados animais de estimação ou animais de criação cujos distúrbios estão associados com abrigo, captura ou transporte, e que podem surgir na forma de ansiedade ou comportamento obsessivo-compulsivo.

Para seres humanos, uma dosagem diária adequada de um composto da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e as preferências apresentadas acima, para as finalidades da presente invenção, pode estar na faixa de 0,001 mg por kg de peso corporal a cerca de 20 mg por kg de peso corporal por dia. Mais preferida é uma dosagem diária de cerca de 0,01 a cerca de 10 mg por kg de peso corporal, e especialmente preferida é uma dosagem diária de cerca de 0,05 a 5,0 mg por kg de peso corporal. A quantidade de um material de planta ou de um extrato de planta que contém esse composto da fórmula geral I pode ser calculada de 2 5 acordo.

Em preparações de unidade de dosagem sólida para seres humanos, o composto da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e as preferências apresentadas acima está presente adequadamente em uma quantidade de cerca de 0,1 mg a cerca de 1.000 mg, preferivelmente de cerca de 1 mg a cerca de 5 00 mg por unidade de dosagem.

Em composições dietéticas, especialmente em alimentos e bebidas para seres humanos, o composto da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e as preferências apresentadas acima está presente adequadamente em uma quantidade de cerca de 0,0001 (1 mg/kg) a cerca de 5% do peso (50 g/kg), preferivelmente de cerca de 0,001% (10 mg/kg)a cerca de 1% do peso (10 g/kg), mais preferivelmente de cerca de 0,01 (100 mg/kg) a cerca de 0,5% do peso (5

g/kg), com base no peso total do alimento ou da bebida.

Em alimentos e bebidas, em uma modalidade preferida da invenção, a quantidade do composto da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 é de 10 a 30 mg por porção, ou seja, 12 0 mg por kg de alimento ou bebida.

Para animais, excluindo seres humanos, uma dosagem

diária adequada do composto da fórmula geral I com as definições de X, R1 e R2 e as preferências apresentadas acima para as finalidades da presente invenção pode estar na faixa de 0,001 mg por kg de peso corporal a cerca de

1.000 mg por kg de peso corporal por dia. Mais preferida é uma dosagem diária de cerca de 0,1 mg a cerca de 500 mg por kg de peso corporal, e especialmente preferida é uma dosagem diária de cerca de 1 mg a 100 mg por kg de peso corporal.

Para animais de companhia (animais de estimação) , as

mesmas dosagens diárias apresentadas para seres humanos são adequadas.

A invenção é ainda ilustrada pelos exemplos seguintes.

Exemplos

A 3-n-butilftalida usada nos experimentos descritos abaixo foi obtida de Advanced Synthesis, PO Box 437920, San Ysidro, CA 92173. As senkyunolides e cnidilide foram obtidas de AnalytiCon Discovery GmbH, Hermannswerder Haus 17, 14473 Potsdam, Alemanha, e a ligustilida foi sintetizada por químicos do "DSM Nutritional Products Ltd.", Kaiseraugst, Suíça. Todos os compostos eram > 95% puros.

Exemplo 1: Inibição da captação de serotonina e deslocamento de citalopram marcado por compostos da fórmula I.

Células HEK-2 93 que expressam de forma estável o transportador de recaptação de serotonina humana (hSERT) foram obtidas de R. Blakely, Vanderbilt University, EUA. As células cresceram rotineiramente em meio de Eagles modificado por Dulbecco, adquirido de Bioconcept, Allschwil, Suíça, contendo soro fetal de bezerro 10%, penicilina, estreptomicina, L-glutamina e o antibiótico G418, e passaram por triptinização. Um dia antes do ensaio, as células foram semeadas no meio mencionado acima. Imediatamente antes do ensaio, o meio foi substituído por tampão de bicarbonato de Ringer de Krebs, adquirido de Sigma Chemicals Ltd., suplementado com 35 μΜ de pargilina, CaCl2 2,2 mM, ácido ascórbico 1 mM e Ν-2-ácido hidróxi- etil-piperazina-N1-2-etanossulfônico 5 mM (tampão

denominado "Hepes"). A recaptação de serotonina nas células foi determinada por adição de serotonina marcada radioativamente (3H) (Amersham Biosciences GE Healthcare, Slough, GB) até uma concentração de 20 nM, e incubação por minutos em temperatura ambiente. Após remoção do 3 0 marcador não incorporado por lavagem suave três vezes com o tampão acima, a serotonina incorporada foi quantificada por contagem de cintilação líquida.

0 efeito dos compostos de fórmula I sobre a captação de serotonina foi determinado por sua inclusão no ensaio em uma faixa de concentrações entre 0,03 e 100 μΜ por 10 minutos, antes e durante a adição de (3H) serotonina / citalopram. A captação de serotonina por meio do transportador foi inibida por ligustilida, 3-butilftalida, senkyunolide A, senkyunolide C, senkyunolide B e cnidilide, respectivamente, de uma forma dose-dependente, com valores de IC50 mostrados na Tabela 2.

Tabela 2: Inibição da captação de serotonina em células HEK-293 transfectadas por compostos de fórmula I.

Substância IC50 para a captação de serotonina tritiada. Ligustilida 20,4 +/- 5,8 μΜ (η = 4) 3-n-butilftalida 35,2 +/- 6,7 μΜ (η = 3) Senkyunolide A 32,5 +/- 9,1 μΜ (η = 2) Senkyunolide C 31,4 +/- 10,9 μΜ (η = 2) Senkyunolide B 75, 0 +/- 11,0 μΜ (η = 2) Cnidilide 40,5 +/- 15,0 μΜ (η = 3) Extrato de aipo 99,2 +/- 5,81 pg/ml (η = 2) Extrato de aipo selvagem 29,9 +/- 8,3 pg/ml (η = 2)

Como os experimentos foram realizados duas vezes ou mais (η) , é mostrado o valor médio +/- o erro padrão na média (EPM).

Exemplo 2: Inibição de monoamina oxidase por compostos da

fórmula I

As aminas orgânicas p-tiramina ou benzilamina foram usadas como substratos para as enzimas monoamina oxidase A (MAO-A) e B (MAO-B) , respectivamente. O H2O2 produzido por essa reação foi quantificado por reação com ácido vanílico, catalisada por peroxidase de raiz-forte (HRP).

As reações foram realizadas em placas de

microtitulação de poliestireno. As enzimas MAO (concentração final de 2 U/ml) foram misturadas com p- tiramina (Sigma, concentração final de 0,5 mM) ou benzilamina (Sigma, concentração final de 0,5 mM) , como apropriado, e a solução cromogênica (contendo ácido vanílico (Fluka), 4-aminoantipirina (Fluka) e peroxidase de raiz-forte (Sigma), concentrações finais de 0,25 mM, 0,125 mM e 1 U/ml, respectivamente) em tampão de fosfato de potássio 0,2 M, pH 7,6. As reações foram acompanhadas em uma leitora de absorbância de placas de microtitulação Spectramax M5 (Molceular Devices Corporation). Foram feitas leituras de absorbância a 4 95 nm a cada 15 segundos por 4 0 minutos, e as velocidades de reação inicial calculadas por regressão linear usando SOFTmaxPro (Molecular Devices Corporation).

0 efeito de ligustilida, 3-butilftalida, senkyunolide C e cnidilide sobre as enzimas monoamina oxidase foi determinado por sua inclusão no ensaio em uma faixa de concentrações entre 0,03 e 100 μΜ por 10 minutos, antes e durante a incubação com substrato. Para determinar o efeito dos compostos sobre a porção catalisada por HRP da reação, a enzima MAO foi substituída por H2O2 (Molecular Probes, concentração final de 0,2 mM) . As reações contendo MAO-A e MAO-B foram, ambas, inibidas por diterpenos tricíclicos e 3 0 seus derivados de acordo com a fórmula I, de uma forma dose-dependente, enquanto a reação de controle não foi afetada. Os valores de IC50 medidos para a inibição da atividade de monoamina oxidase por ligustilida, 3- butilftalida, senkyunolide C e cnidilide, respectivamente, são mostrados na Tabela 3.

Tabela 3: Inibição de MAO-A e MAO-B por compostos da fórmula I

Substância IC50 [μΜ] para inibição de MAO-A IC50 [μΜ] para inibição de MAO-B Ligustilida 15,7 +/- 0,2 EPM η = 2 24,9 +/- 3,7 EPM η = 2 3-n- butilftalida 8,1 +/- 1,2 EPM η = 2 56,1 +/- 10,2 EPM η = 2 Senkyunolide C 2,72 +/- 0,16 EPM η = 2 2,14 +/- 0,24 EPM η = 2 Cnidilide > 100 μΜ η = 2 108,8 +/- 17,7 EPM η = 2

Exemplo 3: Efeito de compostos da fórmula I no teste de observação primária (Irwin) no camundongo

0 método, que detecta a primeira dose tóxica, a faixa

de doses ativas e os efeitos principais de uma substância de teste sobre o comportamento e função fisiológica segue aquele descrito por Irwin 1968 Psychopharmaco, 13: 222-257.

Os camundongos receberam a administração da substância de teste (3-n-butilftalida, ligustilida) e foram observados em comparação simultânea com um grupo de controle que recebeu veículo (condições não cegas). Três grupos tratados foram comparados com o mesmo controle em qualquer momento. Todos os animais dentro de um grupo de tratamento foram observados simultaneamente. Modificações comportamentais, sintomas fisiológicos e de neurotoxicidade, diâmetro pupilar e temperatura retal foram registrados de acordo com uma grade de observação padronizada derivada da de Irwin, supra. A grade contém os seguintes itens: letalidade*, convulsões*, tremor*, Straub*, sedação, excitação, marcha anormal* (rolar, na ponta dos dedos), saltos*, descoordenação motora*, contorções*, pilo ereção*, estereotipias* (fungar, mastigar, movimentos de cabeça), torções da cabeça *, arranhar-se*, respiração*, agressividade*, medo,

reatividade ao toque, tônus muscular, perda de reflexo de posicionamento, ptose, exoftalmo, perda da preensão, acinesia, catalepsia, perda de tração, perda de reflexo do corneano, analgesia, defecação, salivação, lacrimação, diâmetro pupilar (Unidade = 1/45 mm) e temperatura retal.

Foram feitas observações em 15, 30, 60, 120 e 180 minutos após a administração da substância de teste e também 24 horas mais tarde. Os sintomas marcados com (*) foram observados continuamente de 0 a 15 minutos após a

2 0 administração. Cinco camundongos foram estudados por grupo.

3-Butilftalida (98,5% de pureza) foi solubilizada em DMSO 3%, Tween 80 3% em solução salina (0,9% p/v de NaCl) e injetada em camundongos por via intraperitoneal.

Resultados 3-n-butilftalida

A 100 mg/kg de peso corporal, 3-n-butilftalida mostrou ligeiros efeitos sedativos (em 5/5 camundongos após 15 e 30 minutos e 2/5 em 60 minutos) e reduziu o tônus muscular (em 5/5 camundongos após 15 e 3 0 minutos, e 3/5 camundongos

3 0 após 6 0 minutos). A 200 mg/kg de peso corporal, ela mostrou efeitos sedativos moderados em 5/5 camundongos após 60 e 12 0 minutos), reduziu o medo e reduziu o tônus muscular após 6 0 minutos.

A 3 00 mg/kg de peso corporal, ela mostrou sedação

acentuada em 4/4 camundongos após 15 minutos e 3 0 minutos, sedação moderada em 4/4 camundongos em 6 0 minutos e 12 0 minutos, e ligeira sedação em 4/4 camundongos em 18 0 minutos.

3-Butilftalida a 300 mg/kg também reduziu o medo e o

tônus muscular em 12 0 minutos.

No geral, 3-butilftalida mostrou um efeito sedativo, redutor do medo e relaxante muscular dose-dependente.

Ligustilida (98,9% de pureza) a 30 mg/kg induziu ligeira sedação em 3 camundongos em 30 minutos.

A 100 mg/kg, ela induziu ligeira sedação em todos os 5 camundongos de 15 a 3 0 minutos, e em 3 camundongos em 6 0 minutos; ela diminuiu o tônus muscular em 2 camundongos em 3 0 minutos.

A 200 mg/kg, a sedação foi de ligeira a moderada em

todos os 5 camundongos de 15 a 12 0 minutos, e ligeira em 2 camundongos em 18 0 minutos; ela diminuiu o tônus muscular em todos os 5 camundongos em 15 minutos, em 4 camundongos de 3 0 a 6 0 minutos, em 2 camundongos em 12 0 minutos e em 1 camundongo em 180 minutos. A 300 mg/kg, a sedação foi moderada em todos os 5 camundongos de 15 a 6 0 minutos, e ligeira de 120 a 180 minutos; ela diminuiu o tônus muscular em todos os 5 camundongos de 15 a 3 0 minutos, em 4 camundongos de 6 0 a 12 0 minutos e em 3 camundongos em 18 0 3 0 minutos. No geral, 3-n-butilftalida e ligustilida mostraram um efeito sedativo e relaxante muscular dose-dependente. Exemplo 4: Teste de natação de Porsolt com 3-n-butilftalida

e ligustilida

O "Teste de Desespero Comportamental" ou o "Teste de

Natação Forçada de Porsolt" é um modelo animal validado para depressão (veja T. Nagatsu 2004 Neuro Toxicology, 25: 11-20, e Porsolt e cols.1977, Arch. mt. Pharmacodyn., 229: 327-336). Ele responde ao aumento da transmissão de vários neurotransmissores, incluindo serotonina, dopamina e noradrenalina.

0 teste, que detecta atividade antidepressiva, foi realizado como descrito por Porsolt e cols. supra. Os camundongos que são forçados a nadar em uma situação da qual não podem escapar rapidamente se tornam imóveis. Os antidepressivos diminuem a duração da imobilidade.

Os camundongos foram colocados individualmente em um cilindro (Altura = 24 cm, Diâmetro = 13 cm) contendo 10 cm de água (22°C), do qual não podiam escapar. Os camundongos 2 0 foram colocados na água por 6 minutos, e a duração da imobilidade durante os últimos 4 minutos foi medida.

Dez camundongos foram estudados por cada um dos quatro grupos. 0 teste foi realizado de forma cega, ou seja, a pessoa que realizava o experimento era diferente da que

2 5 injetava os camundongos e, dessa forma, não sabia a qual

dos quatro grupos cada camundongo pertencia.

3-n-butilftalida (98,5% de pureza) foi avaliada em 3 doses cada: a 10, 30 e 80 mg/kg de peso corporal, administrados por via intraperitoneal 3 0 minutos antes do

3 0 teste, e comparada com um grupo de controle. A 3-n- butilftalida assim administrada era dissolvida em uma solução salina contendo 3% do peso de DMSO e 3% do peso de Tween® 80 (denominado "veículo"). No grupo de controle, o veículo consistiu em solução salina contendo 3% do peso de DMSO e 3% do peso de Tween® 8 0 e foi administrado por via intraperitoneal.

Os resultados são mostrados na Tabela 4.

Tabela 4: Redução do "tempo de imobilidade" com 3-n- butilftalida.

Grupo Concentração de 3- n-butilftalida [mg/kg de peso corporal] Duração da imobilidade [segundos] + erro padrão da média Grupo 1 0 (grupo de controle) 157,4 ± 13,2 Grupo 2 10 132,4 ±9,3 Grupo 3 30 128,0 ± 15,3 Grupo 4 80 129,0 ± 15,4

3-n-butilftalida entre 10 e 80 mg/kg mostrou uma

tendência para reduzir o tempo de imobilidade em aproximadamente 18%.

Tabela 5: Redução do "tempo de imobilidade" com ligustilida

Grupo Concentração de ligustilida [mg/kg de peso corporal] Duração da imobilidade [segundos] + erro padrão da média Grupo 1 0 (grupo de controle) 158,7 ± 10,1 Grupo 2 10 128,9 ± 15, 1 Grupo 3 30 164,2 ± 15,5 Grupo 4 80 147,1,0 ± 12,1

Ligustilida a 10 mg/kg mostrou uma tendência para reduzir o tempo de imobilidade em aproximadamente 18%, mas não nas doses maiores.

Exemplo 5: Teste do labirinto em cruz elevado com 3-n- butilftalida

O método (Elevated Pluz Maze Test) , que detecta a

atividade ansiolitica, segue aquele descrito por Handley e cols., 1984 (Naunyn-Schm Arch Pharm 387: 1-5. Os roedores evitam espaços abertos (os braços abertos de um labirinto em cruz elevado) . Os ansiolíticos aumentam a atividade exploratória nos braços abertos. 0 labirinto consiste em 4 braços de comprimentos e larguras iguais (14 χ 5 cm) dispostos na forma de um sinal de "mais" ( + ) . Dois braços opostos estão circundados por paredes de 12 cm de altura (braços fechados). Os 2 outros braços não possuem paredes (braços abertos) . O labirinto é elevado 56 cm acima do chão. Um camundongo é colocado no centro do labirinto em cruz, e deixa-se que explore por 5 minutos. O número de entradas nos braços abertos e fechados e o tempo gasto nos braços abertos são registrados. Foram estudados 10 2 0 camundongos por grupo. 0 teste foi realizado de forma cega.

3-n-Butilftalida foi testadas nas doses de 10, 30 e 80 mg/kg de peso corporal.

Os resultados são mostrados na Tabela 6. Tabela 6:

TRATAMENTO (mg/kg) v.o. -24 h, 5 h e 1 h antes do teste BRAÇO ABERTO Número de entradas BRAÇO ABERTO Tempo gasto (s) Média ± s . e. m % de mudança Média ± s . e. m % de mudança Veículo 2,4 ± 0,5 - 18 , 2 ± 4,9 3-n-Butilftalida (10) 3,5 ± 0,7 +46% 24, 3 ± 4,6 + 34% 3-n-Butilftalida (30) 3,1 ± 0,5 +29% 23, 0 ± 3,8 +26% 3-n-Butilftalida (80) 3,0 ± 0,8 +25% 26,4 ± 5,3 +45%

3-n-Butilftalida mostrou uma tendência para aumentar moderadamente o número de entradas e o tempo gasto no braço aberto. Ela não teve efeito sobre as entradas no braço fechado. Dessa forma, 3-n-butilftalida possui uma atividade ansiolítica moderada.

Exemplo 6: Teste de esconder esferas como teste para comportamento semelhante à ansiedade ou obsessivo- compulsivo

Um extrato de óleo de semente de aipo rico em ftalidas foi testado no teste de esconder esferas (Marble Burying Test) . Um extrato bruto de óleo de semente de aipo (Apium graveolens) obtido por extração de líquido supercrítico de CO2 da semente foi adquirido de "Guanzhou Honsea Sunshine Bio Science & Technology", Guangzhou, 510620, República da China. Esse extrato (66,15 g) foi destilado por cerca de 2 horas em um Kugelrohr de aproximadamente 3 0 cm em uma temperatura de 125°C, sob uma pressão de 0,02 mbar. O destilado continha 18,12% de butilftalida, 0,87% de butilidenoftalida, 35,37% de senkyunolide, 20,99% de sedanolide, 2,23% de ácido graxo C16 e 3,14% de ácido oléico, com base no peso total do extrato óleo de semente de aipo.

O comportamento de "ocultação defensiva" foi demonstrado por ratos que enterram objetos nocivos como, por exemplo, tubos de água de beber preenchidos com um líquido com sabor desagradável (Wilkie e cols., 1979 J. Exp. Anal. Behav. 31: 299-306) ou agulhas de choque (Pinei e cols. 1978, J. Comp. and Physiol. Psych. 92: 708-712.

O comportamento de esconder esferas por camundongos é

relatado como sendo sensível a uma gama de tranqüilizantes leves (por exemplo, diazepam) e pesados (por exemplo, haloperidol) (Broeldcamp e cols.,1986 Eur. J. Pharmacol. 126: 223-229), bem como em SSRIs (por exemplo, fluvoxamina, fluoxetina, citalopram), antidepressivos tricíclicos (por exemplo, imipramina, desipramina) e inibidores seletivos da captação de noradrenalina (por exemplo, reboxetina), em doses que não induzem sedação. O modelo pode refletir comportamento semelhante a ansiedade ou obsessivo- compulsivo (veja De Boer e cols., 2003 Eur J Pharmacol. 463: 145-161.

0 teste de esconder esferas foi realizado em gaiolas do Tipo II (16 χ 22 cm) que foram preenchidas com material normal para forração de gaiolas para roedores, até uma 2 0 profundidade de 4 cm, e o forro foi achatado manualmente suavemente para assegurar uma superfície igual. Foram colocadas doze bolas de gude, em uma configuração 3x4, espaçadas igualmente, na superfície do forro.

No início do teste, os camundongos foram colocados individualmente nas gaiolas de teste e deixou-se que as explorassem por 3 0 minutos. Ao final do teste, os camundongos foram removidos das gaiolas e o número de bolinhas de gude que foram enterradas (ou seja, pelo menos 2/3 cobertas com forro) foi contado. São preparados gaiolas e forros frescos antes do teste de animais subseqüente. O extrato de óleo de semente de aipo foi avaliado após a administração oral subcrônica a 50, 100, 200, 300 mg/kg, com fluoxetina a 10 mg/kg como substância de referência e óleo de milho como veículo. A fluoxetina do extrato óleo de semente de aipo e o veículo foram administrados por engorda oral 24, -5, -Ih antes do teste.

Após cada dose, os camundongos retornavam às suas gaiolas de origem até a dose seguinte ou o início do teste.

Resultados:

Tabela 7: Efeitos do extrato óleo de semente de aipo (Apium graveolens) e fluoxetina no teste de esconder esferas em c amundongo s

TESTE DE ESCONDER TRATAMENTO (mg/kg) v.o., -24, -5, -1 h ESFERAS % ESFERAS ENTERRADAS Apium graveolens (50) -16% Apium graveolens (100) -4% Apium graveolens (200) -45% Apium graveolens (300) -37% Fluoxetina (10) -78%

O extrato de óleo de aipo mostrou uma tendência para diminuir o número de bolas de gude cobertas, comparado com o controle de veículo. O efeito foi de quase metade em relação àquele do inibidor seletivo da recaptação de serotonina, fluoxetina.

Exemplo 7: Inibição da captação de dopamina por compostos da fórmula I.

As ações de vários neurotransmissores, incluindo a dopamina, são reguladas por meio de sua captação e depuração rápidas das junções sinápticas por proteínas de transporte da membrana plasmática. 0 transportador de dopamina nos neurônios dopaminérgicos centrais é responsável pela recuperação de até 90% do transmissor liberado. Os transportadores de monoamina são alvos de alta afinidade para diversos agentes psicoativos como, por exemplo, cocaína, anfetamina e antidepressivos. Esses agentes, ao bloquearem os transportadores e, conseqüentemente, evitarem a captação neuronal, elevam os níveis das concentrações extracelulares de neurotransmissor tanto no sistema nervoso central quanto no sistema nervoso periférico, contribuindo para os seus efeitos comportamentais e autonômicos.

Células CHO-Ki/hDAT que expressam o transportador de dopamina humana (hDAT) foram plaqueadas antes do ensaio. As células (2 χ 105/ml) foram incubadas com o composto da fórmula I (3-n-butilftalida) e/ou veículo em tampão Tris- HEPES modificado pH 7,1 a 25°C por 20 minutos, antes da adição de [3H] Dopamina 50 nM por 10 minutos. O sinal específico foi determinado na presença de nomifensina 10 μΜ. As células foram então solubilizadas com tampão de Iise de SDS 1%. A redução da captação de [3HjDopamina por 50 por cento ou mais (> 50%) em relação aos controles de veículo indica atividade inibidora significativa. Os compostos foram testados a 10, 1, 0,1, 0,01 e 0,001 μΜ. Essas mesmas concentrações foram concomitantemente aplicadas a um grupo separado de células não tratadas e avaliadas quanto à possível citotoxicidade induzida pelo composto somente se fosse observada uma inibição significativa da captação.

Composto

IC

50 * Nomifensina 11 nM 3-n- Butilftalida 22,0 μΜ

* Indica agente de referência padronizado usado. Referências:

Giros, 1992 Mol. Pharmacol. 42: 383-390, 1992. Pristupa, e cols. 1994. Mol. Pharmacol. 45: 125-135.

Exemplo 8: Inibição da captação de norepinefrina por compostos da fórmula I.

As ações de vários neurotransmissores, incluindo norepinef rina, são reguladas por meio de sua captação e depuração rápidas das junções sinápticas por proteínas de transporte da membrana plasmática. O transportador de norepinefrina nos neurônios adrenérgicos centrais é responsável pela recuperação de até 90% do transmissor liberado. Os transportadores de monoamina são alvos de alta afinidade para diversos agentes psicoativos como, por exemplo, cocaína, anfetamina e antidepressivos. Esses agentes, ao bloquearem os transportadores e, conseqüentemente, evitarem a captação neuronal, elevam os níveis das concentrações extracelulares de neurotransmissor tanto no sistema nervoso central quanto no sistema nervoso periférico, contribuindo para os seus efeitos comportamentais e autonômicos.

Células de rim de cachorro MDCK que expressavam de forma estável o transportador recombinante de norepinefrina humana são plaqueadas um dia antes do ensaio. As células (2 χ 105/ml) foram pré-incubadas com o composto da fórmula I (3-n-butilftalida) e/ou veículo em tampão Tri-HEPES modificado pH 7,1 a 25°C por 20 minutos, e depois foi adicionada [3H] Norepinef rina 25 nM por incubação de 10 minutos. As células no poço foram então enxaguadas duas vezes, solubilizadas com tampão de Iise de SDS 1% e o lisado foi contado para determinar a captação de [3H] Norepinefrina. 0 sinal específico foi determinado na presença de desipramina 10 μΜ. A redução da captação de [3H] Norepinefrina em 50 por cento ou mais (> 50%) em relação aos controles de veículo indica atividade inibidora significativa. Os compostos foram testados a 10, 1, 0,1, 0,01 e 0,001 μΜ. Essas mesmas concentrações foram concomitantemente aplicadas a um grupo separado de células não tratadas e avaliadas quanto à possível citotoxicidade induzida pelo composto somente se fosse observada uma inibição significativa da captação. Dados de referência:

Composto IC50 * Desipramina 1, 9 nM 3-n-Butilftalida 23,7 μΜ

* Indica agente de referência padronizado usado. - 0 experimento foi realizado duas vezes. Referência:

Gallie cols. 1995. J. Exp. Biol. 198: 2.197-2.212. 2 0 Exemplo 9: Preparação de uma cápsula de gelatina macia

Pode ser preparada uma cápsula de gelatina macia (500 mg) que compreende os seguintes ingredientes:

Ingrediente Quantidade por cápsula Extrato de óleo de semente de aipo 5 00 mg Lecitina 50 mg Óleo de soja

0 mg

Podem ser administradas duas cápsulas por dia por 3 meses a um adulto humano para o tratamento de distimia crônica leve.

Exemplo 10: Preparação de uma cápsula de gelatina macia

Pode ser preparada uma cápsula de gelatina macia (600

mg) que compreende os seguintes ingredientes:

Ingrediente Quantidade por cápsula Extrato de óleo de semente de aipo 2 00 mg Óleo de prímula da noite 3 00 mg Vitamina B6 100 mg

Uma cápsula por dia preferivelmente na segunda metade do ciclo menstrual pode ser tomada por 14 dias para o tratamento de síndrome pré-menstrual e distúrbio disfórico pré-menstrual.

Exemplo 11: Preparação de iam comprimido

Pode ser preparado um comprimido de 4 00 mg que compreende os seguintes ingredientes:

Ingrediente Quantidade por cápsula 3-n-Butilftalida 100 mg Extrato padronizado de flor de maracujá 150 mg Estrato de chá verde, por exemplo, TEAVIGO® de DSM Nutritional Products, Kaiseraugst, Suíça 150 mg Para o bem-estar geral, energizante e alívio do

estresse, um comprimido pode ser tomado duas vezes ao dia por 3 meses.

Exemplo 12: Preparação de um refrigerante de sabor instantâneo

Ingrediente Quantidade [g] 3-N-butilftalida 0,9 Sacarose, pó fino 922 , 7 Ácido ascórbico, pó fino 2, 0 Pó anidro de ácido cítrico 55, 0 Sabor de limão 8 , 0 Pó anidro de citrato trissódico 6, 0 Fosfato tricálcico 5,0 β-Caroteno 1% CWS de DNP AG, Kaiseraugst, Suíça 0,4 Quantidade total 1 . 000

Todos os ingredientes são misturados e peneirados através de uma peneira de 500 μπι. 0 pó resultante é colocado em um recipiente apropriado e misturado em um misturador por turbilhonamento por pelo menos 20 minutos. Para a preparação da bebida, 125 g do pó misturado obtido são recolhidos e preenchidos com água até um litro de bebida.

0 refrigerante pronto para beber contém aproximadamente 3 0 mg de 3-n-butilftalida por porção (250 ml) .

Como reforço e para o bem-estar geral, podem ser bebidas 2 porções por dia (240 ml) .

Exemplo 13: Preparação de uma barra de cereal fortificada não cozida

Ingrediente Quantidade [g] 3-N-butilftalida 0, 95 Açúcar 114,55 Água 54 , 0 Sal 1,5 Xarope de glicose 130, 0 Xarope de açúcar invertido 95, 0 Xarope de sorbitol 35, 0 Gordura de semente de palmeira 60, 0 Gordura para cozimento 40, 0 Lecitina 1,5 Azeite de dendê endurecido 2,5 Maçãs secas e cortadas 63, 0 Flocos de milho (com f lakes) 100, 0 Flocos de arroz (rice crispies) 120, 0 Flocos de trigo (wheat crispies) 90, 0 Avelãs torradas 40, 0 Leite em pó desnatado 45, 0 Flavorizante de maçã 74863-33 2 , 0 Ácido cítrico 5,0 Quantidade total 1. 000

A 3-n-Butilftalida é pré-misturada com leite em pó desnatado e colocada em uma batedeira planetária. Os flocos de milho e de arroz são adicionados, e o total é misturado gentilmente. A seguir, as maçãs secas e cortadas são adicionadas. Em uma primeira panela de cozimento, açúcar, água e sal são misturados nas quantidades apresentadas acima (solução 1). Em uma segunda panela de cozimento, glicose, xarope invertido e de sorbitol são misturados nas quantidades apresentadas acima (solução 2) . Uma mistura gordura de cozimento, gordura de semente de palmeira, lecitina e emulsificante é a fase de gordura. A Solução 1 é aquecida até IlO0C. A Solução 2 é aquecida até 113°C e depois resfriada em um banho-maria gelado. A seguir, as soluções 1 e 2 são combinadas. A fase de gordura é derretida a 750C em um banho-maria. A fase de gordura é adicionada à mistura combinada das soluções 1 e 2. 0 flavorizante de maçã e o ácido citrico são adicionados à mistura líquida de açúcar-gordura. A massa líquida é adicionada aos ingredientes secos e bem misturada na batedeira planetária. A massa é colocada em uma placa de mármore e enrolada na espessura desejada. A massa é resfriada até a temperatura ambiente e cortada em pedaços. A barra de cereal não cozida contém aproximadamente 2 5 mg de extrato de orégano por porção (30 g) . Para o bem-estar geral e efeito energizante, 1-2 barras de cereal podem ser comidas por dia.

Exemplo 14: Ração seca para cachorros que compreende 3-n- butilftalida ou ligustilida para alívio do estresse e revitalização do cachorro

Dieta comercial basal para cachorros (por exemplo, Mera Dog "Brocken" , MERA-Tiernahrung GmbH, Marienstra|3e 80- 84, D-47625 Kevelaer-Wetten, Alemanha) é pulverizada com uma solução de 3-n-butilftalida ou ligustilida em uma quantidade suficiente para administrar a um indivíduo uma dose diária de 50 mg de 3-n-butilftalida ou ligustilida por kg de peso corporal. A composição do alimento é seca para conter matéria seca de cerca de 90% por peso. Para um cachorro médio de 10 kg de peso corporal que consume aproximadamente 200 g de ração seca por dia, a ração para cachorro contém aproximadamente 2.500 mg de 3-n- butilftalida ou ligustilida por kg de ração. Para cachorros mais pesados, a mistura de ração é preparada de acordo.

Exemplo 15: Ração úmida para gatos que compreende 3-n- butilftalida ou ligustilida

Dieta comercial basal para gatos (por exemplo, Happy Cat "Adult", Tierfeinnahrung, Südliche Hauptstra|3e 38, D- 86517 Wehringen, Alemanha) é misturada com uma solução de 3-n-butilftalida ou ligustilida em uma quantidade suficiente para administrar a um indivíduo uma dose diária de 100 mg de 3-n-butilftalida ou ligustilida por kg de peso corporal. Para um gato médio de 5 kg de peso corporal que 2 0 consume aproximadamente 4 00 g de ração úmida por dia, a ração para gatos contém 1.250 mg/kg.

Exemplo 16: Biscoitos para cachorros contendo 3-n- butilftalida ou ligustilida

Biscoitos para cachorros (dog treats) comerciais (por

2 5 exemplo, Mera Dog "Biscuit" para cachorros fornecidos por

Mera Tiernahrung GmbH, Marienstrasse 80-84, 47625 Kevelaer- Wetten, Alemanha) são pulverizados com uma solução de 3-n- butilftalida ou ligustilida em uma quantidade suficiente para administrar aos biscoitos 5-50 mg de 3-n-butilftalida

3 0 ou ligustilida por g de biscoito. A composição do alimento é seca para conter matéria seca de cerca de 90% por peso. Exemplo 17: Biscoitos para gatos contendo 3-n-butilftalida ou ligustilida

Biscoitos para gatos (cat treats) comerciais (por exemplo, Whiskas Dentabits para gatos fornecido por Whiskas, Masterfoods GmbH, Eitzer Str. 215, 27283 Verden/Aller, Alemanha) são pulverizados com uma solução de 3-n-butilftalida ou ligustilida em uma quantidade suficiente para administrar aos biscoitos 5-50 mg de 3-n- butilftalida ou ligustilida por g de biscoito. A composição do alimento é seca para conter matéria seca de cerca de 90% por peso.

Claims (25)

1. Composto caracterizado por ter a fórmula geral I <formula>formula see original document page 54</formula> em que: R1 é hidrogênio ou hidróxi-; R2 é butil ou butiril se R1 for hidróxi, mas R2 é butil se R1 for hidrogênio; ou R1 e R2, considerados em conjunto, são 1-propilideno ou 1-butilideno opcionalmente substituído por hidróxi, metil ou 3 -(a,p-dimetilacriloiloxi) ; a linha pontilhada é uma ligação opcional; X é um resíduo C4 alifático opcionalmente substituído selecionado do grupo que consiste em XI, X2, X3, X4 e X5; <formula>formula see original document page 54</formula> em que: X é X2, X3 ou X5, caso a linha pontilhada na fórmula (I) esteja ausente; e X é XI, X4 ou X5, caso a linha pontilhada signifique uma ligação na fórmula (I) acima; R3 e R4 são, independentemente um do outro, hidrogênio ou hidróxi; e R5 é hidróxi ou butiril, para uso no tratamento de um distúrbio relacionado à neurotransmissão deficiente ou para uso na preparação de composições úteis para o tratamento de um distúrbio relacionado à neurotransmissão deficiente ou reduzida.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado do grupo que consiste em (E) -senkyunolide E; senkyunolide C; senkyunolide B; 3-butil-4,5,6,7-tetrahidro-3,6,7-triidroxi- 1(3H)-isobenzofuranona ; 3-butil-l(3H)-isobenzofuranona; 3- butilftalida; 3-butilidenoftalida; 3-propilidenoftalida; chuangxinol; ligustilidiol; senkyunolide F; 3-hidróxi- senkyunolide A; angeloil-senkyunolide F; senkyunolide M; 3- hidróxi-8-oxo-senkyunolide A; ligustilida; 6,7-diidro- (6S, 7R)-diidroxiligustilida; 3a,4-diidro-3- (3- metilbutilideno)-1(3H)-isobenzofuranona; sedanolide; e cnidilide, e misturas destes.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado do grupo que consiste em ligustilida, 3-butilftalida, 3- butilidenoftalida, 3-propilidenoftalida, sedanolide, senkyunolide A, senkyunolide B e senkyunolide C e misturas destes.

4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que o composto é usado como antidepressivo, agente para melhora do humor/vitalidade, agente para alivio do estresse, agente para melhora da condição, redutor da ansiedade, redutor do comportamento obsessivo-compulsivo, relaxante, agente para melhora do sono e/ou agente para tratamento de insônia.

5. Composição farmacêutica dietética caracterizada por conter um composto de qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 3 para o tratamento de um distúrbio relacionado à neurotransmissão deficiente ou reduzida.

6. Composição dietética, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada por estar em forma de alimento em forma sólida ou líquida, por exemplo, sopas ou produtos laticínios, em forma de alimento fortificado, por exemplo, barras de cereal e itens de confeitaria, por exemplo, bolos e biscoitos, em forma de suplementos dietéticos, por exemplo, comprimidos, pílulas, grânulos, drágeas, cápsulas, e formulações efervescentes, em forma de bebidas não alcoólicas, por exemplo, refrigerantes, bebidas energéticas, sucos de frutas, limonadas, chás e bebidas baseadas em leite.

7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada por compreender veículos, excipientes ou diluentes convencionais fisiologicamente aceitáveis.

8. Uso de um composto da fórmula geral I da reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para o tratamento de um distúrbio relacionado à neurotransmissão deficiente ou para a fabricação de composições úteis para o tratamento de um distúrbio relacionado à neurotransmissão deficiente.

9. Uso de um composto, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de ser como antidepressivo, agente para melhora do humor/vitalidade, agente para alívio do estresse, agente para melhora da condição, redutor da ansiedade, redutor do comportamento obsessivo-compulsivo, relaxante, agente para melhora do sono e/ou agente para tratamento de insônia.

10. Uso de uma composição dietética ou farmacêutica da reivindicação 5, caracterizado pelo fato de ser como antidepressivo, agente para melhora do humor/vitalidade, agente para alívio do estresse, agente para melhora da condição, redutor da ansiedade, redutor do comportamento obsessivo-compulsivo, relaxante, agente para melhora do sono e/ou agente para tratamento de insônia.

11. Método para o tratamento de um distúrbio relacionado à neurotransmissão deficiente em animais, incluindo seres humanos, o referido método caracterizado por compreender: (a) a preparação de uma composição de qualquer uma das reivindicações 5, 6 ou 7 e (b) a administração de uma dose eficaz da referida composição aos animais que necessitam dela, incluindo seres humanos.

12. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o animal é um ser humano, um animal de estimação ou um animal de criação.

13. Uso de um composto da reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de uma composição para inibir a recaptação de serotonina, noradrenalina ou dopamina por transportadores de monoamina em neurônios pré-sinápticos.

14. Uso, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o composto da fórmula geral I é selecionado do grupo que consiste em (E) -senkyunolide E; senkyunolide C; senkyunolide B; 3-butil-4,5,6,7 - tetrahidro-3,6,7-triidroxi-l(3Η)-isobenzofuranona; 3-butil- 1(3H)-isobenzofuranona; 3-butilftalida; 3- butilidenoftalida; 3-propilidenoftalida; chuangxinol; ligustilidiol; senkyunolide F; 3-hidróxi-senkyunolide A; angeloil-senkyunolide F; senkyunolide M; 3-hidróxi-8-oxo- senkyunolide A; ligustilida; 6,7- diidro-(6S,7R)- diidroxiligustilida; 3a,4-diidro-3-(3-metilbutilideno)- 1(3H)-isobenzofuranona; sedanolide; e cnidilide, e misturas destes.

15. Uso, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o composto da fórmula geral I é selecionado do grupo que consiste em ligustilida, 3- butilftalida, 3-butilidenoftalida, 3-propilidenoftalida, sedanolide, senkyunolide A, senkyunolide B e senkyunolide C, e misturas destes.

16. Uso de um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13, 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que os animais são animais de companhia.

17. Uso de um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13, 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que os animais são animais de criação.

18. Uso, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que os animais de criação são aves de criação.

19. Uso, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que os animais de criação são selecionados do grupo que consiste em: gado, carneiros, cabras e suínos.

20. Uso de um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13, 14 ou 15, caracterizado por ser redutor da tensão, tristeza, infelicidade, descontentamento, irritabilidade ou disforia.

21. Uso de ura composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 17, 18 ou 19, caracterizado pelo fato de que composto é usado para a prevenção do estresse em animais de criação no manejo de rebanho de produção em massa, durante o transporte até o abatedouro e/ou para a prevenção da perda de qualidade da carne dos referidos animais de criação durante o transporte até o abatedouro.

22. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o composto da fórmula geral é usado para prevenção da perda na produção de ovos, da remoção compulsiva da plumagem e do canibalismo e de perdas da qualidade da carne com o estresse do transporte.

23. Uso de um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13, 14 ou 15, caracterizado por ser usado para normalizar e manter o ritmo circadiano em seres humanos, ou para alívio ou prevenção dos sintomas associados a um ritmo circadiano alterado em seres humanos.

24. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13, 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que os animais são para a indústria de peles.

25. Uso, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o uso é selecionado do grupo que consiste em: redução de estresse, redução de tensão, redução de agressividade, redução de comportamento compulsivo, redução de estresse em função de separação, mudança ou perda do dono, redução de estresse durante separação de férias e redução de estresse em "hotéis de animais", redução de estresse em abrigos de animais e redução de estresse em condições de manejo e criação densos.