BRPI0714707B1 - dispositivo e método para crescimento de células vivas ou vírus que não estão em suspensão - Google Patents

dispositivo e método para crescimento de células vivas ou vírus que não estão em suspensão Download PDF

Info

Publication number
BRPI0714707B1
BRPI0714707B1 BRPI0714707A BRPI0714707A BRPI0714707B1 BR PI0714707 B1 BRPI0714707 B1 BR PI0714707B1 BR PI0714707 A BRPI0714707 A BR PI0714707A BR PI0714707 A BRPI0714707 A BR PI0714707A BR PI0714707 B1 BRPI0714707 B1 BR PI0714707B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
cells
growth chamber
region
pipe
viruses
Prior art date
Application number
BRPI0714707A
Other languages
English (en)
Inventor
De Crecy Eudes
Original Assignee
De Crecy Eudes
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by De Crecy Eudes filed Critical De Crecy Eudes
Publication of BRPI0714707A2 publication Critical patent/BRPI0714707A2/pt
Publication of BRPI0714707B1 publication Critical patent/BRPI0714707B1/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/02—Form or structure of the vessel
    • C12M23/06—Tubular
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/007—Flexible bags or containers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0669—Bone marrow stromal cells; Whole bone marrow
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/02—Apparatus for enzymology or microbiology with agitation means; with heat exchange means
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/24—Apparatus for enzymology or microbiology tube or bottle type
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/34—Measuring or testing with condition measuring or sensing means, e.g. colony counters
    • C12M1/3446—Photometry, spectroscopy, laser technology
    • C12M1/3453—Opacity, turbidity or light transmission measure; Nephelometry
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/34—Internal compartments or partitions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
    • C12M3/02—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus with means providing suspensions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
    • C12M3/06—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus with filtration, ultrafiltration, inverse osmosis or dialysis means
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/26—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of pH
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
    • C12M41/36—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/40—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of pressure
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/04—Plant cells or tissues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
    • C12N5/0605—Cells from extra-embryonic tissues, e.g. placenta, amnion, yolk sac, Wharton's jelly
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
    • C12N5/0606—Pluripotent embryonic cells, e.g. embryonic stem cells [ES]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0618—Cells of the nervous system
    • C12N5/0622—Glial cells, e.g. astrocytes, oligodendrocytes; Schwann cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/22—Transparent or translucent parts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/24—Gas permeable parts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/26—Constructional details, e.g. recesses, hinges flexible

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Cultivation Receptacles Or Flower-Pots, Or Pots For Seedlings (AREA)

Abstract

aparelho de cultura contínua com recipiente móvel que permite a seleção de variantes de células reparadoras e produção de uma cultura de forma contínua. o presente pedido de patente de invenção se refere a um método e dispositivo para crescimento de células vegetais, animais e células-tronco em uma forma contínua.

Description

“DISPOSITIVO E MÉTODO PARA CRESCIMENTO DE CÉLULAS VIVAS OU VÍRUS QUE NÃO ESTÃO EM SUSPENSÃO”.
CAMPO DA INVENÇÃO
[1] A invenção descrita provê um método e um dispositivo que permite a seleção de células vivas, com propriedades aumentadas das taxas de reprodução e metabolismo específico, em um meio líquido ou semisólido. Para o processo de seleção (evolução adaptativa), organismos geneticamente variantes (mutantes) surgem em uma população e competem com outras variantes da mesma origem. Aqueles com a taxa de reprodução mais rápida aumentam em proporção relativa ao longo do tempo, levando a uma população (e organismos individuais) com taxa reprodutiva aumentada. Este processo pode melhorar o desempenho dos organismos usados em processos industriais ou finalidades acadêmicas. A presente invenção utiliza um aparelho de cultura contínua para alcançar a produção viável de células vivas (por exemplo, Procariontes, Archaea, Vírus, Eu cario ntes, fungos, algas, levedura, células vegetais, células animais ou células-tronco). A presente invenção pode ser usada para produzir um ingrediente ativo ou biológico que é produzido pelas células vivas. O ingrediente ativo ou biológico pode vir a ser utilizado como um agente de diagnóstico, de prevenção ou terapêutico.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[2] A seleção para o aumento da taxa reprodutiva (adequação), requer o crescimento sustentado, que se consegue através da diluição regular de uma cultura em crescimento. No estado da arte, isso foi consumado de três formas: cultura sólida, diluição em série e cultura contínua, que difere geralmente no grau de diluição.
[3] A cultura sólida envolve a transferência repetitiva de um pequeno volume de culturas crescidas ou células de uma placa de Petrí para um recipiente com meio de crescimento fresco, A cultura em série envolve a transferência repetitiva de um pequeno volume de cultura crescida para um recipiente muito maior contendo meio de crescimento fresco. Quando as células cultivadas cresceram para a saturação no novo recipiente, o processo é repetido. Este método foi usado para atingir as demonstrações mais duradouras de cultura prolongada na literatura (Lenski & Travisano: Dynamics of adaptation and diversification: a 10,000-generation experiment with bacterial populations. 1994. Proc Natl Acad Sei USA. 15:6808-14), em experimentos que demonstraram claramente melhoria consistente na taxa reprodutiva por anos. Este processo é normalmente feito manualmente, com investimento de trabalho considerável, e está sujeito à contaminação através da exposição ao ambiente externo. A cultura em série é também ineficaz, conforme descrito no parágrafo seguinte.
[4] A taxa de seleção, ou a taxa de melhoria na taxa de reprodução, é dependente do tamanho da população (Fisher: The Genetical Theory of Natural Selection. 1930. Oxford University Press, London, UK). Além disso, em uma situação com transferência em série onde o tamanho da população oscila rapidamente, a seleção é proporcional à média harmônica (N) da população (Wright: Size of population and breeding strueture in relation to evolution. 1938. Science 87: 430-431), e, portanto, pode ser aproximada pela menor população durante o ciclo.
[5] O tamanho da população pode ser mantido, e a seleção então feita mais eficiente, por cultura contínua. A cultura contínua, enquanto distinta da diluição em série, envolve volume relativo menor tal que uma pequena parte de uma cultura em crescimento é regularmente substituída por um volume igual do meio de crescimento fresco. Este processo maximiza o tamanho da população eficaz pelo aumento do seu tamanho mínimo durante a diluição cíclica. Dispositivos que permitem a cultura contínua são denominados “quimiostatos” se as diluições ocorrem em intervalos de tempo específicos, e “turbidostatos” se a diluição ocorre automaticamente quando a cultura cresce a uma densidade específica.
[6] Por razões de simplicidade, ambos os tipos de dispositivos a seguir serão agrupados sob o termo "quimiostatos". Os quimiostatos foram inventados simultaneamente por dois grupos em 1950 (Novick & Szilard: Description of the chemostat, 1950. Science 112: 715-716) e (Monod: La technique de Ia culture continue - Théorie et applícatíons. 1950. Ann. Inst. Pasteur 79:390-410). Os quimiostatos foram usados para demonstrar curtos períodos de rápida melhoria na taxa reprodutiva (Dykhuizen DE. Chemostats used for studying natural seíectíon and adaptive evolution. 1993. Methods Enzymol. 224:613-31).
[7] Quimiostatos tradicionais são incapazes de suportar longos períodos de seleção para aumento da taxa de reprodução, devido à inesperada seleção de variantes resistentes à diluição (estática). Estas variantes são capazes de resistir à diluição, aderindo-se à superfície do quimiostato, e ao fazê-lo, supera indivíduos menos pegajosos, incluindo aqueles que têm maiores taxas de reprodução, eliminando, assim, a finalidade desejada do dispositivo (Chao & RamsdelI; The effects of wall populations on coexlstence of bactéria in the liquid phase of chemostat cultures,. 1985. J. Gen. Microbiol. 131: 1229-36).
[8] Um método e dispositivo quimiostástíco (O motor genético, do inglês "the Genetic Engine”) foram inventados para evitar a resistência à diluição na cultura contínua (patente US 6,686,194-61 depositada pelo PASTEUR INSTITUT [FR] & MUTZEL RUPERT [DE]). Este método usa a transferência de fluido controlada por válvula para deslocar periodicamente a cultura crescente entre dois quimiostatos, permitindo cada um ser esterilizado e lavado entre os períodos de crescimento ativo da cultura. Os ciclos de esterilização regular evitam a seleção de variantes resistentes ã diluição pela sua destruição. Este método e dispositivo atingem o objetivo, mas requerem manipulações complexas independentes de vários fluidos num ambiente estéril (vedado), incluindo um (NaOH) que é simultaneamente muito cáustico e potencialmente muito reativo, danificando rapidamente as válvulas, e apresentando problemas de contenção e tratamento de resíduos, O dispositivo quimiostático é também limitado na medida em que nenhuma provisão é feita para fornecer um apoio para as células crescerem. Dispositivos tais como Motor Genético e outra tecnologia conhecida não permitem a cultura contínua das células, que não crescem em suspensão e/ou crescem como células coesas.
[9] Existem alguns tipos de células que são difíceis de cultivar em grande quantidade devido às condições que as células necessitam para sobreviver ou crescer. Acredita-se que estas células poderiam crescer em condições fornecidas por uma estratégia de cultura contínua. Isto é particularmente o caso para eucariontes (por exemplo, algas, leveduras, fungos, células vegetais, células animais, e células-tronco).
[10] Por exemplo, células-tronco embrionárias humanas crescem tipicamente pelo isolamento e transferência de uma massa de célula-tronco em uma placa laboratorial de cultura de plástico que contém um caldo nutritivo conhecido como meio de cultura. As células se dividem e se espalham na superfície da placa. A superfície interna da placa de cultura é tipicamente coberta com células embrionárias de pele de rato que foram tratadas, assim elas não se dividirão. Esta camada de revestimento das células é chamada de camada nutriente. A razão para se ter a camada nutriente no fundo da placa de cultura é para dar às células-tronco embrionárias humanas uma superfície viscosa a qual elas podem se ligar. Além disso, as células nutrientes liberam nutrientes no meio de cultura. Recentemente, os cientistas começaram a projetar formas de crescimento de células-tronco embrionárias sem as células nutrientes de rato. Isto é um avanço científico significativo por evitar o risco que vírus ou outras macromoléculas nas células de ratos possam ser transmitidos às células humanas.
[11] Ao longo de vários dias, as células do interior da massa celular se proliferam e começam a se aglomerar na placa de cultura. Quando isto ocorre, elas são removidas delicadamente e plaqueadas em várias placas de cultura fresca. O processo de replaqueamento das células é repetido muitas vezes e por muitos meses, e é chamado de subcultura. Cada ciclo de subcultura das células é referido como uma passagem. Após seis meses ou mais, as células originais da massa celular produzem milhões de células-tronco embrionárias.
[12] As células-tronco embrionárias que proliferaram na cultura celular por seis ou mais meses sem diferenciação, são pluripotentes, e parecem geneticamente normais são referidas como uma linhagem de célula-tronco embrionária.
[13] Quando as linhagens celulares são estabelecidas, ou mesmo antes dessa etapa, suas porções podem ser congeladas e enviadas para outros laboratórios para mais cultura e experimentação. No entanto, a cultura contínua concede a vantagem de suprimir um máximo de manipulações que estressam as células vivas e criam uma fonte potencial de contaminação. Quando uma cultura é iniciada, as condições de cultura contínua permitem ao versado na técnica tirar proveito de uma produção contínua de células. Uma vez que as células-troco estão sendo produzidas, a produção de células-tronco podería prosseguir sem interrupção para produzir substancialmente mais células-tronco do que os métodos que normalmente são usados hoje, RESUMO DA INVENÇÃO
[14] Ê, portanto, um objeto da presente invenção proporcionar um método melhorado (e completa mente independente) e um dispositivo para a cultura contínua de células {incluindo procariontes, bactéria, Archaea, eucariontes e vírus) sem interferência das variantes resistentes à diluição. Como outros quimiostatos, o dispositivo fornece um meio para a diluição regular de uma cultura de crescimento com meio de crescimento fresco, meios para troca gasosa entre a cultura e o ambiente externo, esterilidade, e operação automática como também um quimiostato ou um turbidostato.
[15] Adicionalmente, é um objeto da presente invenção fornecer um método distinto e melhorado e um dispositivo para cultura contínua de células que não crescem em suspensão e ou que crescem como células coesas tais como eucariontes (por exemplo, células de plantas, algas, fungos, leveduras, células animais ou células-tronco) e determinados procariontes (por exemplo, estreptomicetos)e possivelmente certos Archaea e vírus. As células-tronco que podem ser cultivadas com a presente invenção incluem, mas não são limitadas às células-tronco embrionárias, células-tronco fetais, células-tronco do cordão umbilical, células-tronco derivadas da placenta, e células-tronco adultas. As células-tronco adultas que podem ser cultivadas com a presente invenção incluem, mas não estão limitadas às células-tronco hematopoiéticas, células-tronco da medula óssea, células estromais, astrócitos e oligodendrócitos (por exemplo, Protocolo de células-tronco hematopoiéticas por C. Klug e C. Jordan, Humana Press, Totowa, New Jersey, 2002, incorporados aqui por referência).
[16] A presente invenção é projetada para atingir estes objetivos sem qualquer transferência de fluido, incluindo as funções de esterilização ou lavagem. Isto representa uma vantagem específica da presente invenção em relação ao estado da arte, na medida que evita os perigos e as dificuldades associadas com a esterilização e lavagem, incluindo a contenção e as complexas transferências de fluido que envolvem solventes cáusticos, contaminação, e os distúrbios de crescimento devido à transferência de cultura de um recipiente para outro.
[17] A cultura contínua é alcançada dentro de uma tubulação flexível estéril preenchida com o meio de crescimento. O meio e a superfície de câmara são estáticos um em relação ao outro, e ambos são substituídos regularmente e simultaneamente por movimentos peristálticos da tubulação através de “portas”, ou pontos no qual o tubo é subdividido esterilmente por grampos que impedem as células cultivadas de se deslocarem entre as regiões do tubo. Portas UV podem ser também (opcionalmente) adicionadas a jusante ou a montante do recipiente de cultura para segurança adicional.
[18] O presente método e dispositivo são também uma melhoria em relação estado da arte, na medida em que continuamente, em vez de periodicamente, seleciona diante da aderência das variantes resistentes à diluição para as superfícies quimiostáticas, como substituição das superfícies afetadas ocorrem em paralelo com o processo de diluição. Além disso, para as células que crescem em suspensão e as células que crescem como células coesas, a tubulação oferece um apoio contínuo para crescimento com a vantagem de não perturbar as células pela transferência de células de um recipiente para outro, [19] O tubo é subdividido numa forma transíente tal que há regiões que contém cultura saturada (totalmente crescidas), regiões que contém meio fresco, e uma região entre essas duas, onde uma ou mais câmaras referidas como crescimento ou câmara de cultura estão presentes para formar uma região de câmara de crescimento em que a cultura crescida é misturada com o meio fresco para realizar a diluição, As portas são periodicamente liberadas de um ponto do tubo e substituídas por outro ponto, tal que a cultura crescida junto com sua superfície associada à câmara de crescimento e as células estáticas ligadas, são removidas pelo isolamento da câmara de crescimento e substituídas tanto pelo meio fresco como pela superfície de câmara fresca, BREVE DESCRICÃO DOS DESENHOS
[20] Sem ser exaustivo e limitante, uma possível configuração geral incluirá vários componentes como descritos a seguir. Na seqüência da presente invenção está exemplarmente explicada com base em uma modalidade preferida, referindo-se, assim, aos desenhos em que: [21] A Figura 1 apresenta uma vista geral de uma possível configuração do dispositivo em que: (1) representa a tubulação flexível contendo as diferentes regiões do dispositivo que são: meio fresco a montante (7), câmara de crescimento (10), câmara de amostragem (11) e região disposta de cultura cultivada (15) (2) representa a caixa termostaticamente controlada que permite a regulação da temperatura de acordo com as condições determinadas pelo usuário, e na qual pode ser localizada: a) a dita câmara de crescimento (10), b) a dita câmara de amostragem (11), c) a porta a montante (3) que define o início da dita câmara de crescimento (10), d) a porta a jusante (4) que define o final da dita câmara de crescimento (10) e o início da dita câmara de amostragem (11), e) a segunda porta a jusante (5) que define o final da dita câmara de amostragem (11), f) o turbidímetro (6) que permite ao usuário ou ao sistema de controle automatizado monitorar a densidade óptica do crescimento da cultura e operar um sistema de controle de retorno (13), que permite o movimento controlado da tubulação (1) com base da densidade da cultura (função de turbidostato), g) um ou vários agitadores (9).
[22] Deve-se notar que os elementos do dispositivo listados em a-g podem ser também localizados fora de, ou na ausência de, uma caixa termostaticamente controlada. (7) representa o meio fresco na tubulação flexível não usado, (8) representa um barril carregado com a tubulação preenchida de meio fresco, para dispensar o dito meio fresco e a tubulação durante as operações. (12) representa a porta opcional de radiação ultra-violeta, (13) representa o sistema de controle que pode consistir de um computador conectado aos meios de comunicação para monitoramento diferente ou interfaces de operação, como turbidímetros de densidade óptica, medição de temperatura e dispositivos de regulagem, agitadores e motores de inclinação, etc., que permitem a automação e o controle das operações, (14) representa o barril de disposição opcional no qual subiu a tubulação contendo a cultura cultivada disposta na tubulação preenchida, (15) representa a cultura cultivada disposta localizada à jusante da dita câmara de amostragem.
[23] A Figura 2 apresenta suas posições possíveis do dispositivo, exemplificando o fato que a dita caixa termostaticamente controlada (2) e outras peças do dito dispositivo associado com a dita câmara de cultura podem ser inclinadas a vários graus para finalidades de agitação, circulação de gás e finalidades de remoção, e para garantir a remoção de células granuladas (agregadas) que possam escapar da diluição instalando-se no fundo. O dispositivo podería também ficar na mesma posição (por exemplo, na posição plana ou com um ângulo) no caso de as células não necessitarem de agitação para crescimento.
[24] As Figuras de 3 a 9 representam a dita tubulação flexível (1) no lugar da dita caixa termostaticamente controlada (2) e introduzida por portas (3), (4) e (5) pela qual a dita tubulação estará durante todas as etapas do processo e pela qual a dita tubulação se deslocará de acordo com seus movimentos peristálticos, [25] A figura 3 simboliza a condição TO do dispositivo na qual todas as regiões da dita tubulação flexível são preenchidas com meio fresco antes da injeção das células pretendidas para a cultura contínua.
[26] A Figura 4 simboliza a condição T1 do dito tubo flexível apenas após a injeção da linhagem celular.
[27] A figura 5 simboliza a condição T2 do dispositivo que é um período de crescimento durante o qual a cultura cresce na região definida como câmara de crescimento (10) limitada pelas ditas portas (3) e (4).
[28] A Figura 6 simboliza a condição T3 do dispositivo, apenas após o primeiro movimento perístáltico da tubulação e o meio associado, que determina o início do segundo ciclo de crescimento, introduzindo a tubulação e o meio fresco pelo movimento da porta 3 simultâneo com a transferência do volume equivalente da tubulação, meio, e da cultura crescida fora da região da câmara de crescimento (10) e dentro da região da câmara de amostragem (11) pelo movimento da porta 4, Ê fundamental reconhecer que a tubulação, o meio que está dentro da tubulação, e qualquer cultura que tenha crescido naquele meio, se desloquem todos juntos. A transferência de fluido ocorre apenas na medida em que o meio fresco e o cultivo crescido se misturam por agitação dentro da região da câmara de crescimento.
[29] A Figura 7 simboliza a condição T4 do dispositivo que é o segundo ciclo de crescimento; durante este ciclo as células que permanecem na câmara de crescimento após o movimento peristãltico da tubulação já podem crescer usando nutrientes fornecidos no meio fresco que é misturado com o restante da cultura durante esta etapa.
[30] A Figura 8 simboliza a condição T5 do dispositivo, logo após o segundo movimento peristãltico da tubulação e o meio contido, que determina o início do terceiro ciclo de crescimento, introduzindo a tubulação e o meio fresco pelo movimento da porta 3 simultâneo com uma transferência de volume equivalente da tubulação, meio, e cultura crescida fora da região da câmara de crescimento (10) e dentro da região da câmara de amostragem (11) pelo movimento da porta 4.
[31] A Figura 9 simboliza a condição T6 do dispositivo que é o terceiro ciclo de crescimento; esta etapa é equivalente à condição T4 e indica a natureza repetitiva das outras operações. As amostras das células selecionadas podem ser removidas a qualquer tempo da região da câmara de amostragem (11) usando uma seringa ou outro dispositivo de recuperação.
[32] A Figura 10 apresenta um perfil possível dos dentes que determinam uma porta na configuração que consiste de dois dentes empilhados apertando a tubulação flexível. As portas também poderíam ser determinadas por um único dente pressionando contra um cinto móvel, presilhas removíveis, ou outros mecanismos que impeçam a circulação das células através da porta e que podem ser removidos e colocados alternada mente em posições variável ao longo da tubulação.
DESCRICÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[33] A operação básica do dispositivo é retratada nas figuras 3 a 9, [34] Uma configuração potencial para o presente dispositivo é apresentada na figura 1, como aparece após ter sido carregado com um tubo fresco de meio estéril (apresentado dividido em regiões A-H pelas ditas portas (3), (4) e (5)).
[35] A inoculação do dispositivo com a célula escolhida poderia ser alcançada pela introdução da célula na câmara de crescimento (fig. 3), por injeção (figura 4, região B). A cultura seria, então, deixada crescer até a densidade desejada e a cultura contínua começaria (fig. 5).
[36] A cultura contínua procedería pelos deslocamentos repetitivos das regiões de entrada da tubulação. Isso envolve deslocamentos simultâneos das portas, da tubulação, do meio, e de qualquer cultura dentro da tubulação. A tubulação sempre se deslocará na mesma direção; a tubulação não usada contendo o meio fresco (e a seguir dita ser “a montante” da câmara de crescimento (7)) se deslocará na câmara de crescimento e se misturará com a cultura remanescente, fornecendo o substrato para o crescimento adicional das células nele contidas. Antes da introdução na região da câmara de crescimento, este meio e sua tubulação associada serão mantidos numa condição estéril pela separação da câmara de crescimento pelas portas a montante (3). A tubulação usada contendo a cultura crescida será deslocada simultaneamente “a jusante” e separada da câmara de crescimento pelas portas a jusante (4).
[37] Quando uma ou mais câmaras de crescimento estão presentes, as câmaras de crescimento podem ser usadas para a mesma ou diferente finalidade. Por exemplo, as células vivas poderiam crescer numa primeira câmara de crescimento e uma segunda câmara de crescimento com as mesmas ou diferentes condições. Em uma modalidade, uma primeira câmara de crescimento pode ser usada para crescer as células sob condições diferentes. Por exemplo, as células podem ser tratadas para induzir a expressão de um produto desejado. Os componentes ou aditivos do próprio meio de cultura podem ser adicionados antes ou após a cultura começar. Por exemplo, todos os componentes ou aditivos poderíam ser inclusos no meio antes do início da cultura, ou os componentes podem ser injetados em uma ou mais câmaras de crescimento após a cultura ter sido iniciada.
[38] A configuração da porta não é um ponto específico do presente pedido de patente. Por exemplo, numa dada configuração, as portas podem ser projetadas por uma cadeia de múltiplos dentes simultaneamente deslocados ou numa outra configuração separada em distintas cadeias sincronizadas conforme retratado na figura 1. As portas podem consistir de um sistema feito de dois dentes que apertam a tubulação numa forma empilhada como descrito na figura 10, evitando a contaminação entre as regiões G e H da tubulação através da pressão da interface entre os dentes. Numa outra configuração, as entradas estéreis podem ser obtidas pressionando um os dentes contra um lado da tubulação e através disso pressionando a tubulação com força contra um chassi ao longo de uma tubulação que é deslizada durante seu movimento peristáltico, conforme esboçado na figura 3 a 9, marcas 3, 4 e 5. Ainda em uma outra configuração, um mecanismo onde as presilhas giradas em torno de um eixo fixo em relação ao dispositivo é usado para mover a tubulação.
[39] A dita caixa termostaticamente controlada (2) é obtida por meios já conhecidos tais como um termômetro acoplado com um dispositivo de aquecimento e resfriamento.
[40] A aeração (troca gasosa), quando requerida para o crescimento da célula cultivada ou pela projeção do experimento, é atingida diretamente e sem assistência mecânica pelo uso da tubulação permeável a gás. Por exemplo, e sem ser limitante, a tubulação flexível permeável a gás pode ser feita de silicone. A aeração poderia ser alcançada pela troca com a atmosfera ambiente ou pela troca com uma atmosfera artificialmente definida (líquida ou gasosa) que comunica a câmara de crescimento ou o quimiostato inteiro. Quando um experimento necessita de anaerobiose a tubulação flexível pode ser impermeável a gás. Por exemplo, e sem ser limitante, a tubulação flexível permeável a gás pode ser feita de silicone revestido ou tratado.
[41] Para condições de evolução de anaerobiose, as regiões da tubulação podem ser confinadas numa área de atmosfera específica e controlada para controlar as dinâmicas trocas gasosas. Isso pode ser alcançado ou fazendo a dita caixa termostaticamente controlada hermética e depois injetando gás neutro ou colocando o dispositivo completo numa atmosfera controlada ambiente.
[42] A seleção de mostrador das variantes estáticas é atingida pela substituição da superfície da câmara de crescimento junto com o meio de crescimento.
[43] O dispositivo é projetado ainda para ser operável em uma variedade de orientações em relação à gravidade, ou seja, para ser inclinado como apresentado pela figura 2, ao longo de uma faixa de até 360°.
[44] As variantes resistentes à diluição podem evitar a diluição aderindo uma à outra, em vez da parede da câmara se as células agregadas podem cair a montante e, assim, evitam a remoção da câmara. Assim, é desejável que a tubulação em geral seja inclinada para baixo, tal que as células agregadas caiam através da região que será removida da câmara de crescimento durante um ciclo de deslocamento do tubo. Esta configuração envolve a inclinação do dispositivo de modo que as portas a jusante estejam abaixo da porta a montante quanto à gravidade.
[45] A câmara de crescimento pode ser despressurizada ou superpressurizada de acordo com as condições escolhidas pelo experimentador. Diferentes formas de ajuste de pressão podem ser usadas, por exemplo, aplicando vácuo ou ar pressurizado ao meio fresco e a tubulação através da extremidade a montante e através da câmara de crescimento; uma outra forma de despressurização ou superpressurização de tubulação pode ser feita apertando e fechando a tubulação a montante da ou dentro da câmara de crescimento.
[46] Quando o meio está contido na tubulação permeável a gás, podem se formar bolhas de ar dentro do meio. Essas subirão ao topo de uma região fechada da tubulação e se tornarão presas lá até que o movimento da região (e as portas que a definem) libere a região na câmara de crescimento, a câmara de amostragem ou o ponto final do quimiostato (figura 6, regiões D-C, B ou A, respectivamente). Se o dispositivo é inclinado à jusante tais bolhas se acumularão na câmara de crescimento ou câmara de amostragem e deslocarão a cultura. O dispositivo é projetado para inclinar periodicamente para cima por um ciclo do movimento do tubo, permitindo a remoção do gás acumulado das ditas câmaras.
[47] Os movimentos de inclinação do dispositivo, e/ou agitação da câmara de crescimento por um dispositivo externo (9) podem ser usados para reduzir a agregação das células dentro da câmara de crescimento. Alternativamente, uma ou várias barras de agitação podem ser inclusas na tubulação preenchida com o meio fresco perante a esterilização e magneticamente agitada durante as operações de cultura. No caso das células que não necessitam de agitação para crescer, a máquina poderia ficar na mesma posição.
[48] O comprimento proporcional das regiões do meio fresco definido pelas portas a montante quando comparado com o comprimento da câmara de cultura definirão o grau de diluição alcançada durante um ciclo.
[49] A freqüência de diluição pode ser determinada por cronometragem (por exemplo, função quimiostato). Por exemplo, as células-tronco podem ser colhidas num tempo limitado de modo que as células-tronco sejam coletadas antes de começar a diferenciação das células. Alternativamente, a freqüência de diluição pode ser determinada com uma regulação de retorno segundo a qual a densidade da cultura na câmara de crescimento é medida por um turbidímetro (figura 1 - marca 6) e o ciclo de diluição ocorre quando a turbidez atinge um valor mínimo (função turbidostato). A tubulação pode ser transparente ou translúcida para medição da turbidez.
[50] A câmara de amostragem permite a retirada da cultura crescida para analisar o resultado de um experimento, células coletadas com melhoria na taxa de crescimento para cultura adicional, estocagem, ou implementação funcional, ou outras finalidades tais como contagem de população, checagem da composição química do meio, ou testagem de pH da cultura crescida, ou produção de células em quantidade (por exemplo, eucariontes tais como células-tronco, procariontes, Archeae e vírus). Para alcançar o monitoramento permanente do pH dentro da câmara de crescimento, a tubulação pode incluir por construção uma linha indicadora de pH embutida/incrustada na parede da tubulação.
[51] Qualquer forma de material líquido ou semisólido pode ser usada como um meio de crescimento no presente dispositivo. A capacidade de utilizar substratos de crescimento semisólidos é um avanço notável sobre o estado da arte. O meio de crescimento, que definirá os processos metabólicos melhorados pelo processo selecionado, pode ser escolhido e definido pelo usuário.
[52] Se necessário esse dispositivo pode conter múltiplas câmaras de crescimento, tais que as portas a jusante de uma câmara de crescimento se tornem as portas a montante de uma outra. Isso poderia, por exemplo, permitir uma célula crescer sozinha na primeira câmara, e atuar como uma fonte de nutriente para uma segunda célula (ou vírus) na segunda câmara.
[53] A invenção pode ser usada para produzir uma preparação, tal como uma preparação biológica para um fármaco, uma vacina, ou uma antitoxina, que é sintetizada das células de crescimento pela invenção ou seus produtos. O processo biológico pode ser usado como um agente de diagnostico, preventivo ou terapêutico. Por exemplo, a presente invenção pode ser usada para produzir as proteínas terapêuticas tais como insulina.
[54] Em uma modalidade preferida, o dispositivo e/ou método pode ser submetido a ciclos para coletar de forma contínua as células-tronco no seu estado indiferenciado. Além disso, as condições de cultura podem ser modificadas para inibir a diferenciação das células-tronco. Por exemplo, os inibidores diferenciados da célula-tronco (por exemplo, inibidores da aldeído- desidrogenase, inibidores da fosfoinositida 3-quinase, inibidor do receptor TGF quinase, inibidor do receptor TGF-B quinase, etc.) podem ser adicionados ao meio de cultura. Alternativamente, as condições de processo tais como a quantidade de oxigênio liberado para o meio de cultura pode ser aumentada ou diminuída para melhorar o crescimento de determinadas células-tronco e/ou moderar ou melhorar a diferenciação das células-tronco.
[55] Como algumas células necessitam de um substrato para crescer, um apoio físico ou estrutura pode ser adicionado à câmara de recipiente de cultura. Em uma modalidade preferida, um apoio contínuo podería ser adicionado dentro da tubulação como um leito de fibra contínua, constituído por uma fina fibra contínua como estrutura apoio, pode ser adicionada à câmara de recipiente de cultura que poderia deixar as células crescerem em 3 dimensões. Por exemplo, o apoio poderia ser um leito de fibra, que fornece apoio para o crescimento das células tais como células-tronco, células vegetais e outros tipos de células que preferem tal estrutura de apoio, ou não podem crescer em suspensão ou crescem como células coesas, e em algumas condições específicas ou troca de condições, para processar a seleção natural para mutações alvejadas.
[56] Em uma modalidade preferida, um material fibroso conforme descrito em Huang et al., Continuous Production of butanol by Clostridium acetobutylicum immobilized in a fibrous bed reactor, Appl Biochem Biotechnol. 2004 Spring; 113-116:887-98, aqui incorporado por referência. A estrutura e o tamanho da tubulação podem ser também variados para evitar a necessidade de incorporação de uma estrutura de apoio na câmara de cultura do recipiente móvel. Em uma modalidade preferida, a tubulação com um diâmetro menor é usada de modo que as células possam aderir em uma forma mais natural, ou a tubulação é usada como um apoio natural sem a necessidade de adesão para algumas células coesas.
[57] Esse dispositivo e método permitem que pesquisadores e desenvolvedores de produto desenvolvam qualquer linhagem de células vivas cultiváveis em suspensão ou qualquer linhagem de células vivas cultiváveis que não estejam em suspensão que cresçam na parede da tubulação ou em um apoio que podería ser um leito de fibra na tubulação através do crescimento prolongado (cultura contínua); a célula resultante melhorada possa constituir uma nova linhagem ou espécie. Essas novas células podem ser identificadas pelas mutações adquiridas durante o período de cultura, e essas mutações podem permitir as novas células serem distinguídas das características genotípicas dos seus ancestrais. Este dispositivo e método permitem o pesquisador selecionar novas linhagens de qualquer célula viva pela segregação dos indivíduos com taxas melhoradas de reprodução através do processo de seleção natural. A invenção também fornece um método melhorado e completamente distinto e dispositivo para cultura contínua de células tais como Eucariontes, (por exemplo, leveduras, fungos, células vegetais, algas, células animais ou células-tronco), Procariontes, Archaea e Vírus.
[58] Em uma modalidade adicional, um emissor pode ser usado para submeter as células, permanente mente ou temporariamente, a pelo menos uma das ondas de rádio, ondas de luz, raios-X, ondas sonoras, um campo eletromagnético, um campo radioativo, meio radioativo ou suas combinações. As publicações a seguir são incorporadas por referência: Biofízika. 2005 Jul-Aug, 50(4):689-92; Bioelectromagnetics. 2005 Sep, 26(6):431-9; Chem Commun (Camb). 2005 Jan 14, (2): 174-6; Biophvs J. 2005 Feb, 88(2): 1496-9; Bioelectromagnetics. 1981, 2(3):285-9: Sb Lek. 1998, 99(4):455-64; Antimicrob Agents Chemother. 2004 Dec, 48(12):4662-4; J Food Prot. 2003 Sep, 66(9):1712-5; Astrobiology. 2006 Apr, 6(2):332-47; Life Sei Space Res. 1970, 8:33-8; Adv Space Res. 1995 Mar, 15(3):211-4; Radiat Res. 2006 May, 165(5):532-7; Mutagenesis. 2004 Sep, 19(5):349-54; Câncer Sei. 2006 Jun, 97(6):535-9; Appl Environ Microbiol. 2006 May, 72(5):3608-14; e Pol J Microbiol, 2005, 54 Suppl:7-11.
[59] Em uma outra modalidade, a região da câmara de crescimento do dispositivo poderia ser submetida, permanentemente ou temporariamente, a submissão das células a uma força gravitacional diferente. Por exemplo, as células podem crescer em um ambiente de microgravidade. As seguintes publicações são incorporadas por referência: J Gravit Physiol. 2004 Mar; 11(1 ):75-80; Immunol Rev. 2005 Dec;208:267-80; e J Graysiol. 2004 Jul;11(2):P181-3.
[60] Modificações e variações da presente invenção em relação ao aparelho e método serão óbvias para aqueles versados na técnica de que precede uma descrição detalhada da invenção. Tais modificações e variações serão intencionadas a entrar no escopo das reivindicações anexas.
REIVINDICAÇÕES

Claims (51)

1. Dispositivo para crescimento de células vivas ou vírus que não estão em suspensão em uma forma contínua caracterizado pelo fato de compreender; uma tubulação flexível {1) contendo um meio de cultura e uma superfície em que as células vivas ou vírus podem crescer, em que a tubulação (1) é transparente ou translúcida para medição da turbidez e a superfície é um apoio contínuo inserido dentro da tubulação; um sistema de portas (3, 4, 5) obtido a partir de presilhas, que dividem a tubulação (1) em: i) uma região a montante contendo o meio de cultura não usado (7) e uma superfície não usada na qual as ditas células ou vírus podem crescer; ii) uma região a jusante contendo o meio de cultura gasto (15); e íii) uma região de câmara de crescimento (10) para o crescimento das ditas células ou vírus dispostos entre as regiões a montante e a jusante; onde as portas (3, 4, 5) são construídas e dispostas para abrir e fechar de forma a fixar e definir a região de câmara de crescimento (10) da tubulação (1) entre as regiões a montante e a jusante da tubulação (1), e para redefinir ciclicamente a região de câmara de crescimento (10) da tubulação (1) de modo que uma primeira porção (B) da região de câmara de crescimento (10) previa mente definida se torne uma porção da região a jusante (15) da tubulação (1), e uma porção (D) da região a montante previamente definida da tubulação (1) se torne uma porção da região da câmara de crescimento (10) da tubulação (1) e proveja a superfície para o crescimento adicional das células e vírus; e um turbidímetro (6) ou outro aparelho disposto para medir a densidade óptica das células vivas ou vírus no meio de cultura, em que a tubulação (1), o meio, a cultura dentro da tubulação (1) são movíveis através de um movimento simultâneo dos sistema de portas (3, 4, 5) para redefinir ciclicamente a região da câmara de crescimento (10) do tubo (1), e em que as ditas células ou vírus não crescem em suspensão.
2. Dispositivo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de o turbidímetro (6) ou o outro aparelho ser disposto para medir a densidade óptica das células vivas ou vírus no meio de cultura ser disposto para operar como parte do sistema de controle de retorno que controla a abertura e fechamento das presilhas.
3. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações 1-2, caracterizado pelo fato de as portas compreenderem uma cadeia cíclica de dentes dispostos para apertar a tubulação (1) para definir a região a montante, a região a jusante, e a região da câmara de crescimento (10).
4. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações 1-3, caracterizado pelo fato de as portas (3, 4, 5) serem estruturadas e dispostas de modo que cada uma das portas não se mova em relação à tubulação (1) quando a dita presilha estiver na posição fechada.
5. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações 1-4, caracterizado pelo fato de a superfície ser a superfície interna da tubulação (1).
6. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações 1-4, caracterizado pelo fato de a superfície ser um apoio contínuo inserido no interior da tubulação (1).
7. Dispositivo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de a superfície ser uma fibra contínua.
8. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações de 1-7, caracterizado pelo fato de a tubulação (1) ser permeável a gás.
9. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações de 1-7, caracterizado pelo fato de a tubulação (1) ser impermeável a gás.
10. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações de 1-9, caracterizado pelo fato de a tubulação (1) compreender silicone ou qualquer material flexível.
11. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações de 1-10, caracterizado pelo fato de o dispositivo compreender ainda um regulador de pressão construído para alterar uma pressão da região da câmara de crescimento (10) da tubulação (1) em relação à pressão ambiente.
12. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações de 1-11, caracterizado pelo fato de a tubulação (1) compreender um indicador de pH.
13. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações de 1-12, caracterizado pelo fato de compreender ainda um regulador de temperatura construído para permitir o controle de uma temperatura da região da câmara de crescimento (10) da tubulação (1).
14. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações de 1-13, caracterizado pelo fato de compreender ainda um agitador (9) construído para permitir a agitação da região da câmara de crescimento (10) da tubulação (1)·
15. Dispositivo de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de o agitador (9) compreender ao menos uma barra de agitação incluída na tubulação.
16. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações de 1-15, caracterizado pelo fato de compreender ainda um emissor construído para submeter a região da câmara de crescimento à pelo menos uma das ondas de rádio, ondas de luz, raios-X, ondas sonoras, um campo eletromagnético, e um campo radioativo.
17. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações de 1-16, caracterizado pelo fato de compreender ainda um mecanismo de inclinação para inclinar a tubulação da câmara de crescimento (1) ou para baixo para remover vírus ou células agregadas, ou para cima para remover ar, dessa forma submetendo a região da câmara de crescimento (10) a uma variedade de orientações em relação à gravidade.
18. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações de 1-17, caracterizado pelo fato de a turbidez ser medida dentro da tubulação (1).
19. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações de 1-18, caracterizado pelo fato de as ditas portas serem definidas através de uma ou mais cadeias de múltiplos dentes deslocados simultaneamente.
20. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações de 1-19, caracterizado pelo fato de as ditas portas compreenderem um sistema feito de dois dentes que apertam a tubulação (1) numa forma empilhada, evitando a contaminação entre as regiões (G, H) da tubulação (1) pela precisão da interface entre os dentes.
21. Dispositivo de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de compreender ainda um indicador de pH na composição ou linha da tubulação (1) para permitir a medição de pH do meio.
22. Dispositivo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de o dito dispositivo permitir a cultura contínua de eucariontes, procariontes, Archaea, ou vírus.
23. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações de 1-22, caracterizado pelo fato de o dito dispositivo permitir a cultura contínua de eucariontes, procariontes, Archaea, vírus, e onde as células ou vírus crescem como células coesas.
24. Dispositivo de acordo com uma das reivindicações de 1-23, caracterizado pelo fato de a região da câmara de crescimento (10) compreender uma ou mais câmaras de crescimento contendo o meio de cultura.
25. Método para crescimento de células ou vírus que não estão em suspensão em uma forma contínua, caracterizado pelo fato de compreender: a) fornecimento de um dispositivo, conforme definido na reivindicação 1, compreendendo uma tubulação (1) flexível, transparente ou translúcida contendo meio de cultura, e uma superfície na qual as células vivas ou vírus podem crescer na dita tubulação (1), a superfície sendo uma fibra contínua inserida dentro da tubulação, e um sistema de portas (3, 4, 5), obtido a partir de presilhas, cada uma das portas sendo capaz de posições abertas e fechadas, as portas sendo posicionadas de modo a serem capazes de dividir a tubulação (1) em: i) uma região a montante contendo meio de cultura não usado (7) e uma superfície não usada na qual as ditas células ou vírus podem crescer; ii) uma região a jusante contendo meio de cultura gasto (15); e iii) uma região de câmara de crescimento (10) para crescer as ditas células ou vírus dispostos entre as regiões a montante e a jusante; b) medição da turbidez do meio de cultura com um turbidímetro (6) ou outro aparelho que mede a turbidez; c) fechamento de umas das portas selecionadas na tubulação (1) para definir a região da câmara de crescimento (10) da tubulação (1) entre as regiões a montante e a jusante da tubulação (1), e introdução de células viáveis ou vírus na região da câmara de crescimento (10); d) monitoramento da turbidez do meio de cultura crescido e quando uma medida da turbidez correspondente a um crescimento desejado da cultura for obtida ao fechar e abrir uma das portas selecionadas para redefinir a região da câmara de crescimento (10) da tubulação (1) de modo que uma primeira porção (B) da região da câmara de crescimento (10) previamente definida se torne uma porção da região a jusante (15) da tubulação (1), e uma porção (D) da região a montante previamente definida da tubulação (1) se torne uma porção da região da câmara de crescimento (10) da tubulação (1)e proveja a superfície para crescimento adicional das células ou vírus; e e) repetir a etapa d) até que uma quantidade desejada de células ou vírus tenha crescido, em que a tubulação (1), o meio, a cultura dentro da tubulação (1) se movem através de um movimento simultâneo do sistema de portas (3, 4, 5) para redefinir ciclicamente a região da câmara de crescimento (10) da tubulação (1), e em que as células ou vírus não crescem em suspensão.
26. Método de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de o turbidímetro (6) ser disposto para operar como parte de um sistema de controle de retorno que controla a abertura e fechamento das portas.
27. Método de acordo com uma das reivindicações 25-26, caracterizado pelo fato de as portas compreenderem uma cadeia cíclica de dentes dispostos para apertarem a tubulação (1) para definir a região a montante, a região a jusante (15), e a região da câmara de crescimento (10).
28. Método de acordo com uma das reivindicações 23-25, caracterizado pelo fato de compreender ainda o isolamento de algumas células vivas ou vírus do dito meio de cultura da região a jusante.
29. Método de acordo com uma das reivindicações 25-28, caracterizado pelo fato de compreender ainda o isolamento das ditas células vivas da região a jusante.
30. Método de acordo com uma das reivindicações de 25-29, caracterizado pelo fato de as células vivas serem selecionadas a partir de um grupo que consiste de algas, fungos, células de leveduras, células animais, células vegetais e células-tronco.
31. Método de acordo com uma das reivindicações 25-29, caracterizado pelo fato de as células vivas serem células-tronco.
32. Método de acordo com uma das reivindicações 25-29, caracterizado pelo fato de as células vivas serem selecionadas do grupo consistindo em células-tronco hematopoiéticas, células-tronco da medula óssea, células estromais, astrócitos, oligodendrócitos, células-tronco embrionárias, células-tronco fetais, células-tronco do cordão umbilical, células-tronco derivadas da placenta, e células-tronco adultas.
33. Método de acordo com uma das reivindicações de 25-32, caracterizado pelo fato de a superfície na qual as células ou vírus crescem ser a superfície interna da tubulação (1).
34. Método de acordo com uma das reivindicações de 25-32, caracterizado pelo fato de a superfície na qual as células crescem ser uma fibra contínua.
35. Método de acordo com uma das reivindicações de 25-34, caracterizado pelo fato de a turbidez ser medida dentro da tubulação (1).
36. Método de acordo com uma das reivindicações de 25-35, caracterizado pelo fato de compreender ainda o crescimento de um ou mais tipos de células na região da câmara de crescimento (10).
37. Método de acordo com uma das reivindicações de 25-36, caracterizado pelo fato de a tubulação (1) ser permeável a gás.
38. Método de acordo com uma das reivindicações de 25-37, caracterizado pelo fato de a tubulação (1) ser impermeável a gás.
39. Método de acordo com uma das reivindicações de 25-38, caracterizado pelo fato de compreender ainda a regulação da pressão na porção da câmara de crescimento da tubulação (1) em relação à pressão ambiente.
40. Método de acordo com uma das reivindicações de 25-39, caracterizado pelo fato de compreender ainda a medição de um pH do meio de cultura na região da câmara de crescimento (10).
41. Método de acordo com uma das reivindicações de 25-40, caracterizado pelo fato de compreender ainda a regulação da temperatura da região da câmara de crescimento (10) com um regulador de temperatura construído para controlar a temperatura da região da câmara de crescimento (10) da tubulação (1).
42. Método de acordo com uma das reivindicações de 25-41, caracterizado pelo fato de compreender ainda a agitação do meio de cultura na região da câmara de crescimento (10) com um agitador (9).
43. Método de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de o agitador (9) compreender pelo menos uma barra de agitação.
44. Método de acordo com uma das reivindicações de 25-43, caracterizado pelo fato de compreender ainda a submissão da região da camada de cultura de crescimento a pelo menos uma dentre ondas de rádio, ondas de luz, raios-X, ondas sonoras, um campo eletromagnético, e campo radioativo.
45. Método de acordo com uma das reivindicações de 25-44, caracterizado pelo fato de compreender ainda a submissão da região da câmara de crescimento (10) a uma variedade de orientações em relação à gravidade.
46. Método de acordo com uma das reivindicações 25-45, caracterizado pelo fato de as células ou vírus crescerem como células coesas.
47. Método de acordo com uma das reivindicações 25-46, caracterizado pelo fato de compreender ainda o crescimento das células vivas ou vírus em uma ou mais câmaras de crescimento que estão presentes na região da câmara de crescimento (10).
48. Método de acordo com uma das reivindicações 25-47, caracterizado pelo fato de compreender ainda o crescimento das células vivas ou vírus numa primeira câmara de crescimento e numa segunda câmara de crescimento com a mesma ou diferente condição.
49. Método de acordo com uma das reivindicações 25-48, caracterizado pelo fato de a etapa d) permitir a diluição ao prover uma quantidade de meio fresco da região a montante dentro da câmara de crescimento, enquanto uma quantidade igual de cultura é isolada e removida da câmara de crescimento para a região a jusante (15), através de outra extremidade da dita câmara de crescimento.
50. Método de acordo com uma das reivindicações 25-48, caracterizado pelo fato de a etapa d) compreender ainda o deslocamento da tubulação (1) entre cada ciclo de crescimento de modo que a região da câmara de crescimento seja renovada junto com a introdução do meio de cultura não usado (7), prevenindo, assim, uma possível proliferação de uma população resistente à diluição enquanto evita contaminação possível da câmara de crescimento isolada.
51. Método de acordo com uma das reivindicações 25-50, caracterizado pelo fato de compreender ainda o crescimento das células sob condições que favoreçam a seleção natural das células vivas ou vírus de modo que as células vivas ou vírus exibam uma taxa de reprodução aumentada e/ou propriedades metabólicas específicas.
BRPI0714707A 2006-07-28 2007-07-30 dispositivo e método para crescimento de células vivas ou vírus que não estão em suspensão BRPI0714707B1 (pt)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US83382106P 2006-07-28 2006-07-28
US60/833,821 2006-07-28
US11/508,286 US20070037276A1 (en) 2004-02-23 2006-08-23 Continuous culture apparatus with mobile vessel, allowing selection of fitter cell variants and producing a culture in a continuous manner
US11/508,286 2006-08-23
PCT/US2007/016960 WO2008013967A2 (en) 2006-07-28 2007-07-30 Continuous culture apparatus with mobile vessel and producing a culture in a continuous manner

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BRPI0714707A2 BRPI0714707A2 (pt) 2013-05-14
BRPI0714707B1 true BRPI0714707B1 (pt) 2017-01-31

Family

ID=38738923

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BRPI0714707A BRPI0714707B1 (pt) 2006-07-28 2007-07-30 dispositivo e método para crescimento de células vivas ou vírus que não estão em suspensão

Country Status (14)

Country Link
US (3) US20070037276A1 (pt)
EP (1) EP2049653B1 (pt)
JP (3) JP2009544323A (pt)
KR (1) KR101507621B1 (pt)
CN (1) CN103725611A (pt)
AU (1) AU2007277105B2 (pt)
BR (1) BRPI0714707B1 (pt)
CA (1) CA2658126C (pt)
IL (1) IL196620A (pt)
MX (1) MX2009000913A (pt)
NO (1) NO344489B1 (pt)
NZ (1) NZ597527A (pt)
RU (1) RU2009107209A (pt)
WO (1) WO2008013967A2 (pt)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090209031A1 (en) * 2006-01-26 2009-08-20 Tyco Healthcare Group Lp Medical device package
KR101489014B1 (ko) * 2007-04-27 2015-02-02 도요세이칸 그룹 홀딩스 가부시키가이샤 세포배양장치, 세포배양시스템 및 세포배양방법
JP5023795B2 (ja) 2007-04-27 2012-09-12 東洋製罐株式会社 細胞培養方法、細胞培養システム、及び培地調整装置
FR2927906B1 (fr) * 2008-02-21 2010-04-02 Eco Solution Procede et dispositif de culture cellulaire en mode continu ouvert.
FR2937455B1 (fr) * 2008-10-20 2010-12-03 Gen Biscuit Methode in vitro modelisant la consistance generee in vivo par un aliment au cours de sa digestion
EP2424982A4 (en) * 2009-04-29 2013-01-09 Crecy Eudes De ADAPTATION OF MICROORGANISMS FOR AGRICULTURAL PRODUCTS
EP2467023A2 (en) * 2009-08-17 2012-06-27 Eudes De Crecy Biocontrol microorganisms
JP5633919B2 (ja) * 2009-11-24 2014-12-03 株式会社 バイオミメティクスシンパシーズ 幹細胞の培養装置及び培養方法
WO2011153364A1 (en) 2010-06-02 2011-12-08 Eudes De Crecy Evolving microorganisms on complex hydrocarbons
KR101292265B1 (ko) 2011-04-15 2013-08-01 메디칸(주) 세포 배양 및 탈리 장치 및 방법
DK2841573T3 (en) * 2012-04-23 2018-01-22 Chr Hansen As Ampicillin-resistant texturizing lactic acid bacterial strains
JP6051730B2 (ja) 2012-09-24 2016-12-27 東洋製罐グループホールディングス株式会社 気泡除去方法、及び気泡除去装置
JP6147619B2 (ja) * 2013-09-09 2017-06-14 株式会社日立製作所 細胞培養装置及び細胞培養方法
CN107109338A (zh) * 2014-12-25 2017-08-29 奥林巴斯株式会社 细胞培养装置和细胞培养袋
KR102427457B1 (ko) 2015-03-24 2022-08-01 메디칸(주) 연속 세포 배양 증식장치 및 방법
JP7026990B2 (ja) * 2016-07-05 2022-03-01 グローバル・ライフ・サイエンシズ・ソリューションズ・ユーエスエー・エルエルシー 調節容積式の細胞培養のための装置および方法
KR101901672B1 (ko) 2017-01-25 2018-10-25 주식회사 디오스템스 줄기세포 배양기 및 배양 방법, 줄기세포 연속 배양, 추출 및 분리 시스템 및 방법
CN110462019A (zh) * 2017-04-07 2019-11-15 奥林巴斯株式会社 培养基更换装置和培养系统
KR20210109264A (ko) 2020-02-27 2021-09-06 메디칸(주) 세포를 배양하는 장치 및 방법
US20240209306A1 (en) * 2021-12-21 2024-06-27 Pow Genetic Solutions, Inc. Methods and Systems for Optimizing Culture Conditions in a Culture Process

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH552063A (de) * 1971-04-29 1974-07-31 Bieri Otto Verfahren und vorrichtung zur anzuechtung lyophilisierter anaerober bakterien auf sterilen naehrmedien zu aktiven kulturen.
US4734372A (en) * 1983-02-04 1988-03-29 Brown University Research Foundation Cell culturing methods and apparatus
SU1252334A1 (ru) * 1983-09-21 1986-08-23 Институт Биохимии И Физиологии Микроорганизмов Ан Ссср Установка дл твердофазной ферментации
US4703010A (en) * 1986-05-02 1987-10-27 The Board Of Regents For The University Of Oklahoma Electrolytic bioreactor assembly and method
EP0258795B1 (en) * 1986-08-27 1993-11-03 Kawasumi Laboratories, Inc. A method for cultivating cells and an instrument therefor
US5786215A (en) * 1987-05-20 1998-07-28 Baxter International Inc. Method for culturing animal cells
US5399493A (en) * 1989-06-15 1995-03-21 The Regents Of The University Of Michigan Methods and compositions for the optimization of human hematopoietic progenitor cell cultures
JPH0330665A (ja) * 1989-06-28 1991-02-08 Mitsubishi Heavy Ind Ltd 自動植え継ぎ装置
JPH0622753A (ja) * 1992-07-08 1994-02-01 Hitachi Ltd 細胞培養方法及びその装置
NL9201907A (nl) 1992-11-02 1994-06-01 Tno Peristaltisch mengende reactor en peristaltische kleppenpomp.
JPH06237754A (ja) * 1992-12-25 1994-08-30 Mitsui Toatsu Chem Inc 細胞分離装置及びそれを用いる細胞の分離方法並びに細胞培養装置及びそれを用いる細胞の培養方法
JP3412364B2 (ja) * 1995-10-04 2003-06-03 富士レビオ株式会社 細胞培養装置及び細胞培養方法
EP0976821B1 (en) * 1997-04-18 2009-02-18 Centro Nacional De Investigaciones Cientificas Equipment, kit and method for microbiological diagnosis
DE19856136C2 (de) * 1998-12-04 2002-10-24 Pasteur Institut Verfahren und Vorrichtung zur Selektion beschleunigter Proliferation lebender Zellen in Suspension
JP2000287672A (ja) * 1999-04-06 2000-10-17 Canon Inc チューブ状培養槽による微生物の連続培養方法及び装置
JP4434416B2 (ja) 2000-03-23 2010-03-17 エイブル株式会社 高圧培養装置及びこれを用いた深水生物の育成方法
JP2002112763A (ja) * 2000-10-10 2002-04-16 Nipro Corp 細胞培養容器
US6403369B1 (en) * 2001-01-19 2002-06-11 Gary W. Wood Cell culture vessel
US7033823B2 (en) * 2002-01-31 2006-04-25 Cesco Bioengineering, Inc. Cell-cultivating device
US7498171B2 (en) * 2002-04-12 2009-03-03 Anthrogenesis Corporation Modulation of stem and progenitor cell differentiation, assays, and uses thereof
JP2004208663A (ja) 2003-01-09 2004-07-29 Ochiyanomizu Jiyoshi Univ 細胞培養システム
DK1740693T3 (da) * 2004-02-23 2012-08-27 Crecy Eudes Francois Marie De Kontinuerligt kulturapparat med bevægelig beholder tilladende udvælgelse af filter-cellevarianter
JP2005253305A (ja) * 2004-03-09 2005-09-22 Masataka Murahara ３次元細胞培養素子の製作方法
WO2005095577A1 (ja) * 2004-03-31 2005-10-13 Japan Tissue Engineering Co., Ltd. 培養容器、軟骨細胞培養方法および軟骨細胞評価方法

Also Published As

Publication number Publication date
JP2013135692A (ja) 2013-07-11
US20070037276A1 (en) 2007-02-15
KR101507621B1 (ko) 2015-03-31
AU2007277105B2 (en) 2011-03-31
CN103725611A (zh) 2014-04-16
NZ597527A (en) 2013-08-30
JP6154439B2 (ja) 2017-06-28
NO20090953L (no) 2009-04-28
IL196620A (en) 2013-10-31
US9428734B2 (en) 2016-08-30
CA2658126C (en) 2016-05-03
EP2049653B1 (en) 2017-06-21
US20150056644A1 (en) 2015-02-26
US20120184009A1 (en) 2012-07-19
AU2007277105A1 (en) 2008-01-31
RU2009107209A (ru) 2010-09-10
WO2008013967A3 (en) 2008-03-20
WO2008013967A8 (en) 2008-06-05
CA2658126A1 (en) 2008-01-31
IL196620A0 (en) 2009-11-18
NO344489B1 (no) 2020-01-13
BRPI0714707A2 (pt) 2013-05-14
KR20090050060A (ko) 2009-05-19
JP2015213515A (ja) 2015-12-03
WO2008013967A2 (en) 2008-01-31
MX2009000913A (es) 2009-03-03
EP2049653A2 (en) 2009-04-22
JP2009544323A (ja) 2009-12-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BRPI0714707B1 (pt) dispositivo e método para crescimento de células vivas ou vírus que não estão em suspensão
RU2373273C2 (ru) Устройство для непрерывной культуры с мобильным сосудом, позволяющим выполнять отбор наиболее подходящих вариантов клеток
JP2007522825A5 (pt)
ZA200900434B (en) Continuous culture apparatus with mobile vessel and producing a culture in a continuous manner
AU2011203125B2 (en) Continuous culture Apparatus With Mobile Vessel and Producing a Culture in a Continuous Manner
Rad et al. Development of Bioreactor System for Generating Three-Dimensional (3D) Tissue Engineering

Legal Events

Date Code Title Description
B07A Application suspended after technical examination (opinion) [chapter 7.1 patent gazette]
B07A Application suspended after technical examination (opinion) [chapter 7.1 patent gazette]
B06A Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette]
B09A Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette]
B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]
B21F Lapse acc. art. 78, item iv - on non-payment of the annual fees in time

Free format text: REFERENTE A 14A ANUIDADE.

B24J Lapse because of non-payment of annual fees (definitively: art 78 iv lpi, resolution 113/2013 art. 12)

Free format text: EM VIRTUDE DA EXTINCAO PUBLICADA NA RPI 2630 DE 01-06-2021 E CONSIDERANDO AUSENCIA DE MANIFESTACAO DENTRO DOS PRAZOS LEGAIS, INFORMO QUE CABE SER MANTIDA A EXTINCAO DA PATENTE E SEUS CERTIFICADOS, CONFORME O DISPOSTO NO ARTIGO 12, DA RESOLUCAO 113/2013.