BRPI0708989A2 - processo para isolamento e estabilizaÇço de aminoglicanos de baixo peso molecular a partir de restos de casca de ovo - Google Patents
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Abstract
Processo para Isolamento e Estabilização de Aminoglicanos de Baixo Peso Molecular a Partir de Restos de Casca de Ovo sendo um processo para o isolamento de um composto de fórmula I do tipo aminoglicano de baixo peso molecular a partir de uma fonte natural de restos de casca de ovo que é constituído de unidades alternadas de ácido glicurônico e N-acetil glicosamina, onde M pode ser em uma ou mais ocasiões N~ a~, C~ a~, K, M~ g~: e n é um inteiro entre 20 e 40 O referido processo compreendendo as etapas de: (a) pré-preparação dos restos de casca de ovo para extração do composto de fórmula I do tipo aminoglicano embrionário de baixo peso molecular usando um solvente orgânico polar em água, (b) extração do composto de fórmula I do tipo aminoglicano de baixo peso molecular como seu sal solúvel em água usando uma solução salina aquosa polar, (e) isolamento de um composto de fórmula I do tipo aminoglicano de baixo peso molecular purificado por formação de gel a partir da mistura salina aquosa usando um solvente orgânico polar seguido de filtração ou centrifugação, (d) estabilização do extrato de aminoglicano isolado por introdução sequencial de óleos orgânicos em um gol semiseco para formar um composto de fórmula I do tipo aminoglicano.
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "Processo paraIsolamento c Estabilização de Aminoglicanos de BaixoPeso Molecular a Partir de Restos de Casca de Ovo"
Campo da Invenção
As modalidades da invenção referem-se a um método paraisolamento c estabilização simples e eficiente deaminoglicanos de peso molecular ultra baixo a partir derestos de casca de ovo.
Fundamentos da Invenção
As modalidades da invenção referem-se a processos paraisolar, estabilizar e formular aminoglicanos de baixo pesomolecular a partir de restos de casca de ovo. O extrato deaminoglicano c útil para a preparação de cremescosméticos com propriedades umectantcs c anti-rugas paraa pele.
Nakano et al. (Poult Sei. (1991), Vol.70(12), págs. 2524-8) mostraram que a composição química das frações deglicosaminoglicano provenientes de favo de mel c barbclade galo Leghorn branco de uma crista consistem cmglicosaminoglicanos de peso molecular muito alto quetêm aplicações cm terapia de reposição de cartilagcm.Balazs et al. (US 4141973) descreveram um processo parao isolamento de ácido hialurônico puro proveniente detecido animal, com peso molecular na faixa de 1 MD a 6MD útil como reposição de líquidos sinoviais e humorvítreo.
Ileaney et al. (Biochim Biophys Acta. (1976), Vol. I 8;451(1), pp. 133-42) mostraram que a parte orgânica dacasca de ovo de galinha consiste em colágeno, proteínas epolissacarídeos que provavelmente estão presentes comoglicoproteínas e glicosaminoglicanos. Iiles aindaidentificaram os componentes orgânicos porcromatografia para produzir glicosaminoglicanos com umpeso molecular mínimo de 30.000 Daltons. Análise davelocidade de sedimentação cm um gradiente dedensidade mostrou que os polissacarídeos continhamquantidades cquimolares de glicosamina (36,3% s/p) cácido glicurônico 35,6% p/p. identificação dos produtosde degradação mostrou que o glicosaminoglicano cconstituído principalmente dc ácido hialurônico.Stahl et ai. (US6537795) descreveram um processo paraproduzir e isolar aminoglicanos de cepas cultivadas defermentação dc estreptococos. Esses aminoglicanoscaracterizam-se por seus pesos moleculares extremamentealtos acima dc 6 MD c são úteis para terapia dc reposição dc cartilagcm.
Processos relacionados para isolamento c purificação dcglicosaminoglicanos dc outras fontes naturais c tecidosanimais podem ser encontrados na Patente US Nc5824658, na Patente US N0 6660853, na Patente US N06451326. As referências discutidas nessas patentes estãoaqui incorporadas a título de referência.Sumário da Invenção
As modalidades da invenção oferecem ura novo processopara o isolamento de um composto de fórmula 1 do tipoaniirioglicano dc baixo peso molecular constituído deunidades alternadas de ácido glicurônico e N-acetilglicosamina, proveniente dc uma fonte natural atedesconhecida dc restos dc casca de ovo,
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onde M pode ser em uma ou mais ocasiões Na, Ca, K, Mg;ene um inteiro entre 20 e 40o referido processo compreendendo as etapas de:
(a) pré-preparação dos restos de casca de ovo paraextração do composto de fórmula I do tipo aminoglicanoembrionário de baixo peso molecular usando um solventeorgânico polar dissolvido em água,
(b) extração do composto de fórmula 1 do tipoaminoglicano de baixo peso molecular como seu salsolúvel em água usando uma solução salina aquosa polar,
(c) isolamento de um composto de fórmula I do tipoaminoglicano de baixo peso molecular purificado porformação de gel a partir da mistura salina aquosa usandoum solvente orgânico polar seguido de filtração ouccntri fugação,
(d) estabilização do extrato de aminoglicano isolado porintrodução seqüencial de óleos orgânicos no gel semi-seco para formar os compostos de fórmula 1 do Lipoaminoglicano.
As modalidades da invenção referem-se maisparticularmente à esta (b), onde a solução salina aquosapolar pode ser os sais de sódio, potássio, cálcio oumagnesio de citrato, glutamato, acetato, pirrolidonacarbonato, tartarato, glicinato, sulfato, sulfito, nitrato,carbonato oxalato para produzir uma solução oscompostos de fórmula I do tipo aminoglicano, que cadequada para gclificação seletiva e isolamento.
O processo descrito nesta invenção constitui um novométodo para produzir de forma seletiva e simplescompostos de fórmula 1 do tipo aminoglicano de baixopeso molecular a partir de restos de casca de ovo. Maisespecificamente o processo da invenção, comparado comos procedimentos para isolamento de aminogl icanosdescrito na técnica anterior, diferencia-se por:a) identificação de uma nova fonte até hoje ainda nãousada, restos de casca de ovo, que é difícil de descartar ecausa significativo impacto negativo ao meio ambiente,b) contém concentrações muito baixas de proteínas cnuclcotídcos nocivos,
c) não requer separações dispendiosas e ineficientes demateriais orgânicos e inorgânicos de restos de casca de OVO,
d) compreende extrações mais simples envolvendoreagentes e solventes moderados, c
c) não requer acetilação ou outro tipo de derivatização,por exemplo, usando anidrido acético e ácido sulfúricocomo descrito no documento US5679657 para obter aspropriedades desejadas de viscosidade e filamentaçãodesejadas necessárias para aplicações cosméticas.
Os compostos de fórmula I do tipo aminoglicano possuemum peso molecular extraordinariamente baixo e aindaassim são estabilizados sem derivatização paraproporcionar excelente penetração na pele para reduzir asrugas superficiais na pele c também apresentam umexcelente efeito amaciante e umectante.
Descrição Detalhada da Invenção
Os restos de casca de ovo produzidos pela indústria deprocessamento de ovos geralmente são lavados comsolventes c tratados para eliminar odores desagradáveisantes de serem usados como aterro. O carbonato de cálciodas cascas só é útil mediante procedimentos de separaçãolimpeza dispendiosos que tornam o processoeconomicamente inviável. Não há necessidade específicade pulverizar as cascas de ovo cm um raio de açãolimitado uma vez que o processo da presente invenção nãodepende da separação da membrana interna da casca dcovo como acontece no processo e equipamento complexosdescritos por MacNeil (Patente US N0 61 76376) paraobter carbonato dc cálcio puro.
Identificamos processos para isolar seletivamentecompostos orgânicos valiosos, especificamente compostosde fórmula I do tipo aminoglicano a partir de cascas deovo trituradas sem a dispendiosa separação doscomponentes orgânicos e inorgânicos.
As cascas de ovo trituradas podem ser tratadas com águaquente ou solução dc ctanol a 5% quente c filtradas pararemover os restos orgânicos aderidos da superfície dascascas. A proporção dc massa orgânica para carbonato dccálcio pode variar entre 1% e 15% p/p. Proporções maisaltas dc massa orgânica indicam a presença de massa dcovo não lavada nas cascas dc ovo trituradas que podelevar à presença dc produtos protéicos c nuclcotídcosnocivos no extrato de aminoglicano. Observa-se que aocontrário de outras fontes de aminoglicanos tais comotecido animal c caldos de fermentação conhecidas natécnica anterior, o uso de restos de casca dc ovo mostradonesta invenção c único devido à ausência de componentesprotéicos c nuclcotídicos antigcnicos significativos nomeio extraído levando a métodos mais fáceis dc extraçãode compostos de fórmula I do tipo aminoglicanopurificado. As cascas de ovo podem ser adicionalmentepre-tratadas com Iu/ ultravioleta para destruir micróbiosque possam estar presentes mesmo depois de limpe/a comlíquido.
A etapa seguinte compreende submeter a massa de cascadc ovo acima a uma extração altamente seletiva docomponente carboidrato na forma de seu sal solúvel emágua. Os processos envolvem suspender a massa dc cascadc ovo cm um volume dc 1:2 a 1:10 de uma solução salinaaquosa contendo 5% a 40% cm peso de sais de citrato,glutamato, acetato, pirrolidona carbonato, tartaralo,glicinato, sulfato, sul fito, nitrato, carbonato e oxalato dcsódio, potássio, cálcio ou magnésio ou uma combinaçãodas soluções salinas conforme necessário. Maisespecificamente os sais monovalentes de ácidos orgânicossão preferidos. A suspensão é mantida por 1 a 24 horas,mais preferivclmente por 6 a 12 horas, com agitaçãovigorosa periódica a temperaturas variando entre IO0C e35°C. A suspensão é subseqüentemente filtrada oucentrifugada para recolher a solução aquosa contendo osal apropriados dos compostos de fórmula 1 do tipoaminoglicano. A massa de casca de ovo preparada dessamaneira apresenta uma ligação muito mais solta dasmembranas à casca de ovo e pode portanto ser tratada commais facilidade usando processos conhecidos na literaturapara separar a casca de ovo contendo carbonato de cálciopuro do resíduo orgânico.
A etapa seguinte compreende precipitação cm gel docomposto de fórmula I do tipo aminoglicano na forma dcseu sal apropriado a partir da solução aquosa. O processoenvolve redu/ir a polaridade da solução aquosa c porconseguinte a solubilidadc do composto dc fórmula I doüpo aminoglicano pela adição seqüencial de qualquersolvente orgânico miscívcl cm água tal como álcoois,acetona, dimetiIformamida, M-metilpirrolidinona ou 1,4-dioxano. O solvente orgânico é adicionado aos poucoscom agitação moderada e resfriamento para manter atemperatura da reação entre 20°C c 25°C para produzirum gel branco suspendido na camada aquosa. Dcixa-sc asolução repousar por 2 a 24 horas até terminar a formaçãode gel. O gel é então filtrado ou centrifugado paraproduzir um extrato semi-seco de composto dc fórmula 1do tipo aminoglicano. E importante não deixar o extratoficar completamente seco visto que é necessária uma certaquantidade da fase aquosa durante o processo deestabilização realizado em seguida.
A etapa final compreende a estabilização do composto defórmula I do tipo aminoglicano de baixo peso molecularordenando as moléculas em um ambiente lipofílico paraprevenir a rcticulação que é característica deaminoglicanos não-acetilados e de baixo peso moleculardescrita na técnica anterior (Patente US N0 5.679.657).lista etapa do processo envolve a adição seqüencial dedois óleos. O primeiro óleo c de natureza maishidroíobica c pode ser selecionado de óleos encontradostipicamente nas nozes de plantas. Especificamente óleo deamêndoa ou óleo de jojoba c mais preferido como oprimeiro óleo. O segundo óleo é de natureza maishidrofílica e pode ser selecionado de óleos tipicamenteisolados de ervas c especiarias das partes vegetativas dasplantas. Iispecificamcnte óleo de sálvia, óleo de alecrimou óleo de lavanda c mais preferido como o segundo óleo.
A quantidade de óleos totais adicionados pode variarentre 5% e 50% do peso do aminoglicano extraído aopasso que a proporção dos dois óleos pode variar 0,1 : 1 a1 : 0.1.
O peso molecular do composto de fórmula I do tipoaminoglicano isolado dessa maneira é difícil de sermedido diretamente c portanto contei com a medida daviscosidadc intrínseca para determinar o peso molecular(Laurent ei ai., Biochimica et Biophysiea Aeia , Vo!. 42,pág. 476 (1960)). Verifiquei que as viscosidadcsintrínsecas de várias soluções contendo o composto defórmula í do tipo aminoglicano variam entre 4 cm3/gm ccmVgm c quando plotadas contra soluções de referênciade sais de ácido hialurônico (peso molecular deaproximadamente 1,2 MD) levaram à atribuição de pesomolecular ultra baixo natural c singular para o compostode fórmula I do tipo aminoglicano entre a faixa de 15.000Daltons e 28.000 Daltons. Um composto de fórmula I dotipo aminoglicano de peso molecular ultra baixoproveniente de uma fonte natural ainda não foi descrito natécnica anterior (por exemplo como resumido por Balazset al. no documento IJS4582865).
Resultados Experimentais
Exemplo 1
500 g de restos de casca de ovo pré-tratados com um teordc aproximadamente 10% de orgânicos foram adicionadosa um rccipicntc de vidro de boca larga com uma tampa dcrosca. Λ esta mistura foram adicionados 750 ml dc umasolução aquosa de citrato de sódio a 5% e o rccipicntc foi vedado e colocado sobre um agitador por 24 horas avelocidades moderadas. Depois de 24 horas toda a misturafoi transferida para um funil filtro e os restos de casca dcovo sólidos foram separados da suspensão aquosa. Ossólidos foram lavados com Ix 250 ml de solução aquosadc citrato de sódio a 5% c as camadas aquosascombinadas foram lavadas uma vez com 250 ml dc cloretode meti Ieno para remover matéria protcinácca empotencial e a camada aquosa foi então transferida para umbcquer de 2 1. O bequer foi colocado cm um banho dc água fria e foi dado início a uma lenta adição dc metanolabsoluto com agitação lenta. Depois dc completada aadição de cerca dc 200 ml dc metanol, um precipitadobranco nebuloso começou a se formar c a agitação foiinterrompida. Uma quantidade adicional igual dc metanol foi lentamente adicionada c o bcquer foi deixado repousarpor 12 horas para assegurar que a formação de gel estavacompleta. Toda a massa foi transferida para um funilfiltro para dar um gel dc cor creme do composto dcfórmula 1 do tipo aminoglicano. O precipitado foi secado até ser medido um teor dc umidade dc 5 - 7%. O pesofinal do gel do composto de fórmula 1 do tipoaminoglicano foi de 42 g.
Exemplo 2
O material em gel contendo o composto de fórmula 1 dotipo aminoglicano do Exemplo 1 foi misturado com 4 g deóleo dc jojoba a 15°C - 20°C e agitado vigorosamente por20 minutos. O gel resultante foi aquecido até 25°C cdeixado agitar suavemente por 1 hora. A esta massa foiadicionado 1 g dc óleo dc sálvia e o gel resultante foiainda agitado suavemente por 10 minutos. O gel foi entãodeixado esfriar lentamente para IO0C durante 4 horas paraobter o composto de fórmula I do tipo aminoglicano, quec estável na ausência de ar circulante à temperaturaambiente por pelo menos 3 meses.
Exemplo 3
O exemplo 1 acima foi repetido com uma solução aquosade tartarato de potássio a 10% para dar 46 g do gel decompostos de fórmula I do tipo aminoglicano.
Exemplo 4
O exemplo 1 acima foi repetido com uma solução deacetato de sódio a 20% para dar 43 g do gel de compostocie fórmula I do tipo aminoglicano.
Exemplo 5
O exemplo 1 acima foi repetido com a diferença de quectanol foi usado no lugar de metanol para formaçãocompleta de gel para dar 47 g do gel de composto defónnLila I do tipo aminoglicano.
Exemplo 6
O exemplo 1 acima foi repetido com a diferença de queacctona foi usada no lugar de metanol para formaçãocompleta de gel para dar 41 g do gel de composto defórmula I do tipo aminoglicano.
Exemplo 7
O exemplo 1 acima foi repetido com uma solução decarbonato de sódio a 10%) para dar 24 g do gel decomposto de fórmula I do tipo aminoglicano.
Exemplo 8
O exemplo 1 acima foi repetido com uma solução decarbonato de cálcio a 25% para dar 14 g do gel decomposto de fórmula I do tipo aminoglicano.
Exemplo 9
10 g do gel estabilizado acima feito segundo oprocedimento mostrado no Exemplo 2 são adicionados a50 ml de água destilada contendo 3 ml de glicerina eagitados ate formar uma suspensão uniforme. A estasuspensão foi adicionado um fundente consistindo cm 10g dc ccra emulsificante, 10 g dc cera de parafina, 4 g decera dc abelha branca e 13 g dc uma mistura dc óleosvegetais cosmcticamcnlc úteis tais como óleo dc amêndoa, lavanda, sândalo c noz c a mistura foi agitadavigorosamente para dar um creme uniforme comcaracterísticas físicas c propriedades anti-rugasexcelentes.
Com relação aos gcis isolados e estabilizados acima dccomposto dc fórmula I do tipo aminoglicano, foramrealizados os seguintes testes analíticos e de utilidade.Ausência dc sulfato dc condroitina
Sabe-se através da técnica anterior que todas as fontescomerciais dc aminoglicanos geralmente são estreitamenteassociadas a outros componentes tcciduais tais comosulfato de condroitina (Arkins & Shcchan, Structurc ofIIyaluronic Acid, Nature New Biol 235, 253, 1972 eBcttelheim & Philpott, Iilectron Microscopic Studics ofllyaluronic Acid - Protcin Gels, Biochim Biophys Acta 34,124, 1959). O extrato dc gel isolado pelos métodosdescritos acima contém menos dc 2% de sulfato decondroitina provavelmente devido à baixa associaçãopossível ao tamanho extra pequeno do composto dcfórmula 1 do tipo aminoglicano isolado nesta invenção.
Ausência dc proteínas
Como as proteínas são potencialmente antigcnicas, éessencial para formulações cosméticas isolar qualqueraminoglicano gel essencialmente livre de proteínas. Oextrato de gel do exemplo 1 foi submetido ao teste colorimctrico altamente sensível para detectar a presençade proteínas descrito por Lowry et ai. (,/. BioL Chem.,/93, 265-275, 1951). Não foram obtidos resultadospositivos indicando que a presença de proteínas fossemenor que 0,1% cm peso apenas.
Λ ausência de qualquer concentração considerável deproteínas c uma nítida diferença de outros compostos dotipo glicoaminoglicano isolados a partir de outras fontesnaturais tais como barbela de galo e caldos defermentação. Ja foi relatado (Kludas, Patente IJS N05055298) que esses aminoglicanos geralmente sãoco valentemente ligados a proteínas para formarprotcoglicanos. A remoção clinicamente relevante detodas essas proteínas, que não são componentes da peledo homem, mostrou-se difícil e não realizada facilmente.
A presença dessas proteínas em vários outros extratos deaminoglicano foi identificada como uma causa derespostas inflamatórias significativas na superfície dapele, tornando seu uso em formulações cosméticas umdesafio.
Aisscncia dc ηuclcotídeos
Kspcctroscopia no ultravioleta foi usada para mostrar aausência dc nuclcotídcos dc DNA c RNA potencialmenteantigênicos no composto de fórmula I do tipoaminoglicano extraído segundo esta invenção. Foipreparada uma solução do extrato dc aminoglicano doexemplo 1 a 1% em solução de cloreto de sódio a 10%.Ksta solução foi submetida à cspcctroscopia noultravioleta a 257 nm para medir o nível dc nuclcotídcosna solução. A ausência dc absorção a este comprimentode onda foi considerada como uma medida da ausência denuclcotídcos no extrato de aminoglicano do Kxcmplo 1.
Viscosidade
Uma pequena amostra do gel foi liofilizada para dar umsólido branco com uma estrutura semelhante a umfilamento que dissolveu lentamente em água. Uma soluçãode 1 mg do pó foi formada em 1000 ml de tampão fosfatoa um pH 7. A viscosidade foi determinada com umviscosímetro de Ostwald a uma temperatura de 25°C. Aviscosidade relativa da solução foi medida como 0,76 a0,80. Quando comparada a aminoglicanos conhecidos depeso molecular mais alto, esta medida de viscosidade levaa pesos moleculares para o composto de fórmula I do tipoaminoglicano entre 15.000 Daltons e 28.000 Daltons.
Presença de glieosamina
A presença de glieosamina no composto de fórmula I dotipo aminoglicano foi determinada pelo método de Iilson eMorgan (Biochem J, Vol. 27, (1933), pág. 1894,) emmaterial que fora hidrolisado por 6 horas com ácidoclorídrico 5 N a 100°C c evaporado ate a secura. O teorde glieosamina do composto dc fórmula I do tipoaminoglicano ficou entre 38% e 41% que coincide com ovalor calculado esperado.
Presença dc ácido urônico
A presença de ácido urônico no composto de fórmula I dotipo aminoglicano foi determinada por digestão comhialuronidasc. O composto de fórmula I do tipoaminoglicano extraído foi lavado com água destilada ehidrolisado com hialuronidasc de Streptomyces (1 mg deenzima/g de aminoglicano) em 10 ml dc tampão 10 mMCaCl2/50 mM-Tris/HCl, pH 7,6, por 48 horas a 37°C. Osinibidores dc proteinase a saber fluoreto defenilmetanossulfonil (2 mM) e N-etilmaleimida (10 mM)foram adicionados às amostras para inibir proteóliseincspecífica. A hidrólise foi interrompida por adição deuréia até uma concentração final de 6 Μ. O hidrolisadofoi centrifugado a 4000 g e o sobrenadante (produto dadigestão de hialuronidase) foi removido e comparado comácido urônico padrão por análise por IlPLC
Capacidade de formar filamentos
Está bem documentado na literatura que quanto maior acapacidade de formar filamentos mais umectantc é oefeito do aminoglicano. Muitos derivados deaminoglicanos de peso molecular alto e médio tais comoacetilação e copolimerização (US5679657) foram usadospara aumentar o índice de filamentação intrínseca deaminoglicanos isolados de fontes animais e bacterianas.
Foi inesperadamente observado que o composto defórmula I do tipo aminoglicano de peso molecular ultrabaixo isolado nesta invenção apresenta uma capacidade defilamentação consideravelmente alta c pode serresponsável por parte dos altos efeitos anti-rugasobservados. Iim uma câmara de umidade a umatemperatura de 25°C e umidade relativa de 50%, 1 cm deum bastão de vidro foi imergido em uma solução aquosade extrato de aminoglicano do exemplo 1 a 1% c ocomprimento do Tilamento obtido baixando o bequer auma velocidade de 10 cm/min foi observado. Observou-seque o comprimento do filamento do composto de fórmula1 do tipo aminoglicano desta invenção ficou entre 2,8 cmc 3,5 cm que é consideravelmente maior que os 0,8 cm a1,3 cm observados para o hialuronato de sódiocomercialmente disponível c ainda melhor que oscomprimentos observados para os aminoglicanosderivatizados.
Propriedades anti-rugas
As propriedades anti-rugas do creme produzido pelométodo descrito no exemplo 9 foram testados usando umsistema de imagem 3D para medir a profundidade dasrugas superficiais. O método descrito por S. Jaspcrs et al.("Microtopomctry Mcasurcmcnt of Iluman Skin in vivo bya ncw Digital Optical Projection System", Prcprints 5thCongress of the International Socicty for Skin Imaging5Wien 1997) foi usado para mostrar uma redução de 25 %a 38 % na profundidade das rugas após 4 semanas de usodiário.
Claims (8)
1. "Processo para Isolamento e Estabilização deAminoglicanos de Baixo Peso Molecular a Partir deRestos de Casca de Ovo" caracterizado por ser um processopara o isolamento de compostos de fórmula 1 do tipoaminoglicano de baixo peso molecular a partir de restosde casca de ovo,<formula>formula see original document page 15</formula>onde M pode ser cm uma ou mais ocasiões Na, Ca, K, Mge η c um inteiro entre 20 c 40;o referido processo compreendendo as etapas de:(a) pre-preparação dos restos de casca de ovo paraextração do composto de fórmula I do tipo aminoglicanoembrionário de baixo peso molecular usando um solventeorgânico polar cm água, onde as cascas de ovo pre-tratadas são misturadas vigorosamente com o solventeorgânico polar em água a temperaturas entre 25°C e 40°Cpor 1 hora a 4 horas, seguida de decantação dosobrenadante c as cascas de ovo são levadas paraextração;(b) extração do composto de fórmula I do tipoaminoglicano de baixo peso molecular como seu salsolúvel cm água, onde as cascas de ovo da etapa (a) sãovigorosamente agitadas com uma solução salina polaraquosa a uma temperatura de 25 °C a 40 °C por 6 a 24horas, seguida de decantação, filtração ou ccntrifugaçãopara recolher a camada aquosa contendo o composto defórmula 1 do tipo aminoglicano dissolvido;(c) isolamento do composto de fórmula I do tipoaminoglicano de baixo peso molecular purificado porformação de gel a partir da mistura salina aquosa usandoum solvente orgânico polar, onde a solução da etapa (b) csubmetida à adição seqüencial por etapas do solventeorgânico polar em uma quantidade entre 75% e 150%volume/volume do solvente orgânico polar entre IO0C e20°C em 1 hora a 2 horas e o gel formado é deixadorepousar por 4 horas a 12 horas para terminar aprecipitação, seguido de decantação, filtração ouccntri fugação para isolar o composto de fórmula I do tipoaminoglicano semi-scco contendo entre 4% c 8% deumidade;(d) estabilização do composto de fórmula 1 do tipoaminoglicano isolado da etapa (c) por introduçãoseqüencial de óleos orgânicos no gel semi-seco paraformar o composto de fórmula I do tipo aminoglicano.
2. "Processo para Isolamento c Estabilização deAm i η og li cano s de Baixo Peso Molecular a Partir deRestos de Casca de Ovo", de acordo com a reivindicação-1, caracterizado onde o solvente orgânico polar usado naetapa (a) c selecionado do grupo que consiste em umálcool, acctona, mctil etil cetona ou 1,4-dioxano.
3. "Processo para Isolamento e Estabilização deAminoglicanos de Baixo Peso Molecular a Partir deRestos de Casca de Ovo", de acordo com a reivindicação-1, caracterizado onde a referida solução salina polaraquosa usada na etapa (b) é selecionada do grupo queconsiste no sal de sódio, potássio, cálcio ou magnésio decitrato, glutamato, acetato, pirrolidona carbonato,tartarato, glicinato, sulfato, sulfito, nitrato, carbonato ouoxalato.
4. "Processo para Isolamento e Estabilização deAminoglicanos de Baixo Peso Molecular a Partir deRestos de Casca de Ovo", de acordo com a reivindicação-1, caracterizado onde o solvente orgânico polar usado naetapa (c) c um álcool inferior selecionado de metanol,etanol, propanol ou butanol, ou um éter orgânicoselecionado de éter dictílico, tetrahidrofurano, metilal ouetilal.
5. "Processo para Isolamento e Estabilização deAminoglicanos de Baixo Peso Molecular a Partir deRestos de Casca de Ovo", de acordo com a reivindicação-1, caracterizado onde os óleos orgânicos usados na etapa(d) são os óleos obtidos de fontes vegetais.
6. "Processo para Isolamento e Estabilização deAminoglicanos de Baixo Peso Molecular a Partir deRestos de Casca de Ovo", de acordo com a reivindicação-5, caracterizado onde o referido óleo orgânico éselecionado de óleo de jojoba, amêndoa, sálvia, alecrim,lavanda, sândalo ou aloc.
7. "Processo para Isolamento e Estabilização deAminoglicanos de Baixo Peso Molecular a Partir deRestos de Casca de Ovo", de acordo com a reivindicação-1, caracterizado ainda por adicionar pelo menos umcxcipicnte farmaceuticamente aceitável ao composto defórmula I do tipo aminoglicano estabilizado obtido naetapa (d) para formar um composição tendo propriedadesa η ti -rugas.
8. "Processo para Isolamento e Estabilização deAminoglicanos de Baixo Peso Molecular a Partir deRestos de Casca de Ovo" caracterizado por ser umcomposto de fórmula I do tipo aminoglicano estabilizadotendo um peso molecular variando de 15.000 Daltons a-28.000 Daltons produzido pelo processo de acordo com areivindicação 1.
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