BRPI0619386B1 - Uso de compostos ativos e processo para aumentar produtividade em plantas de cultura pelo aumento da tolerância ao estresse abiótico - Google Patents

Uso de compostos ativos e processo para aumentar produtividade em plantas de cultura pelo aumento da tolerância ao estresse abiótico Download PDF

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Abstract

SUBSTÂNCIAS ATIVAS PARA AUMENTAR A DEFESA CONTRA ESTRESSE EM PLANTAS, EM RELAÇÃO AO ESTRESSE ABIÓTICO, E MÉTODOS PARA DETECTAR AS MESMAS. A presente invenção refere-se a um processo para detectar compostos, que aumentam a tolerância de plantas em relação a fatores de estresse abióticos, que atuam sobre essa planta, tais como, por exemplo, temperatura (frio, geada ou calor), água (tal como seca, aridez ou anoxia), ou o tratamento químico (tal como deficiência ou excesso de sais minerais, metais pesados, agentes nocivos gasosos), por aumento da expressão de proteínas endógenas das planas, bem como ao uso desses compostos, para aumentar a tolerância das plantas em relação a fatores de estresse abióticos.

Description

A presente invenção refere-se a um processo para detectar compostos, que aumentam a tolerância de plantas em relação a fatores de estresse abióticos, que atuam sobre essas plantas, tais como, por exemplo, temperatura (tal como frio, geada ou calor), água (tal como seca, aridez ou anoxia) ou carga química (tal como deficiência ou excesso de sais minerais, metais pesados, agentes nocivos gasosos), por aumento da expressão de proteínas endógenas das plantas, bem como ao uso desses compostos para aumento da tolerância das plantas em relação a fatores de estresse abióti- cos.
É conhecido que plantas reagem a condições de estresse naturais, tais como, por exemplo, frio, calor, seca, ferimentos, ataque de agentes patogênicos (vírus, bactérias, fungos, insetos) etc., mas também a herbicidas, com mecanismos de defesa específicos ou não específicos [Planzenbi- ochemie, p. 393-462, Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg, Berlim, Oxford, Hans W. Heldt, 1996; Biochemistry and Molecular Biology of Plants, p. 1102-1203, American Society of Plant Physiologists, Rockville, Maryland, eds. Buchanan, Gruíssem, Jones, 2000].
Em plantas são conhecidos numerosas proteínas e genes que co-dificam as mesmas, que participam das reações de defesa contra estresse abi- ótico (p.ex., frio, calor, seca, sal). Os mesmos pertencem, em parte, a cadeias de transdução de sinais (por exemplo, fatores de transcrição, quinases, fosfata- ses) ou causam uma resposta fisiológica da célula vegetal (por exemplo, transporte de íons, desintoxicação de espécies de oxigênio reativas).
Aos genes de cadeia de sinais da reação de estresse abiótica pertencem, entre outros, fatores de transcrição das classes DREB e CBF (Jaglo-Ottosen et al., 1998, Science 280: 104-106). Na reação ao stress por sal participam fosfatases do tipo ATPK e MP2C. Além disso, no estresse por sal, freqüentemente é ativada a biossíntese de osmólitos, tais como prolina ou sucrose. Participam, nesse caso, por exemplo, os transportadores de sintase de sucrose e prolina (Hasegawa et al., 2000, Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol 51: 463-499). A resistência ao estresse das plantas contra frio e seca utiliza, em parte, os mesmos mecanismos moleculares. E conhecida a acumulação de chamadas Late Embryogenesis Abundant Proteins (Proteínas LEA), às quais pertencem como classe importante as deidrinas (Ingram e Bartels, 1996, Annu Rev Plant pHysiol Plant Mol Biol 47: 277-403, Close, 1997, Physiol Plant 100: 291-296). Trata-se, nesse caso, de acompanhantes, que estabilizam vesículas, proteínas e estruturas de membrana em plantas estressadas (Bray, 1993, Plant Physiol 103: 1035-1040). Além disso, o- corre, frequentemente, uma indução de deidrogenases de aldeído, que desintoxicam espécies de oxigênio reativas (ROS), formadas no estresse oxi- dativo (Kirch et al., 2005, Plant Mol Biol 57: 315-332). Fatores de Choque Térmico (HSF) e Proteínas de Choque Térmico (HSP) são ativados no estresse por calor e, como acompanhantes, desempenham, nesse caso, um papel semelhante como as deidrinas no estresse de frio e seca (Yu et al., 2005, Mol Cells 19: 328-333).
A maioria dos mecanismos moleculares descritos são ativados por indução da expressão de genes. Desse modo, apresenta-se a possibilidade interessante de caracterizar respostas a estresse específicas de plantas, com ajuda da análise de transcrição, por exemplo, por Gene Expression Profiling (GEP) com microarranjos de DNA ou técnicas comparáveis (Ren- sink et al., 2005, Genome 48: 598-605, Cheong et al., 2002, Plant Fysiology 129: 661-677). Desse modo, podem ser detectados padrões de expressão de genes reativos a estresse, específicos, e comparar um com o outro.
É conhecido, ainda, que substâncias químicas podem aumentar a tolerância de plantas contra estresse abiótico. Essas substâncias são aplicadas, nesse caso, por desinfecção de sementes, por pulverização de folhas ou por tratamento do solo. Desse modo, é descrito um aumento da tolerância a estresse abiótico de plantas de cultura por tratamento com agentes de ativação da Systemic Acquired Resistance (SAR) ou derivados de ácido abscisínico (Schading e Wei, WO-200028055, Abrams e Gusta, US-5201931, Churchill et a!., 1998, Plant Growth Regul 25: 35-45).
Também são observados efeitos similares no uso de fungicidas, particularmente, do grupo das estrobilurinas, πuej freqijentementθ, também estão associados a um aumento de produtividade (Draber et ai., DE-3534948, Bartlett et al, 2002, Pest Mang Sei 60: 309).
Além disso, foram descritos efeitos de reguladores de crescimento sobre a tolerância ao estresse de plantas de cultura (Morrison e Andrews, 1992, J Plant Growth Regul 11: 113-117, RD-259027). No estresse osmótico foi observado um efeito protetor por aplicação de osmólitos, tais como, por exemplo, betaína de glicina ou seus precursores bioquímicos, por exemplo, derivados de colina (Chen et al., 2000, Plant Cell Environ 23: 609-618, Bergmann et al., DE-4103253). Também já foi descrito o efeito de antioxidantes, tais como, por exemplo, naftóis e xantinas, para aumento da tolerância ao estresse abiótico em plantas (Bergmann et al., DD-277832, Bergmann et al., DD-277835). As causas moleculares do efeito anti-estresse dessas substâncias, porém, ainda são substancialmente desconhecidas.
É conhecido, portanto, que as plantas dispõem de diversos me-canismos de reação endógenos, que podem causar uma defesa eficiente em relação aos mais diversos organismos nocivos e/ou contra o estresse abiótico natural. Mas, até o presente, ainda não é conhecida nenhuma previsão de quais reações de defesa podem ser provocadas ou moduladas de modo dirigido pela aplicação de substâncias ativas.
Existe, portanto, uma necessidade de um método para a descoberta dirigida de ativadores moleculares de mecanismos de defesa endógenas nas plantas em relação ao estresse abiótico (tal como, por exemplo, calor, frio, seca, salinidade, bem como carga por ácidos e bases), pelos quais podem ser descobertas substâncias ativas novas, identificadas novas propriedades de substâncias ativas conhecidas, mas com outros efeitos, ou, então, otimizadas moléculas já conhecidas ou estruturas de orientação sobre o uso como indutores dos mecanismos de defesa endógenas das plantas em relação a fatores de estresse abiótico.
Definições de Termos Utilizados a Seguir
O termo "análises de Blast" (Blast = Basic Local Alinhamento Search Tool"), tal como utilizado no presente, descreve o uso de programas de computador apropriados, para a classificação e para a descoberta de se- qüências potencialmente homólogas (Altschul et al., J. Mol. Biol. 1990. 215: 403-410), sendo que se dá uma comparação (alinhamento) entre uma se- qüência de busca (seqüência de investimento) e todas as sequências de um ou mais bancos de dados, sob a especificação de uma coincidência desejada, na forma de um "critério de significância" (função de classificação) (R. Rauhut, Bioinformatik, S 38-107, Verlag Wiley-VCH Verlag GmbH, Weinheim, 2001).
O termo "cDNA" (complementary DNA), tal como utilizado no presente, descreve uma hélice individual de DNA, que é complementar a um RNA, e que é sintetizado in vitro por uma transcrição inversa enzimática. O cDNA pode corresponder a todo o comprimento do RNA, ou então representar apenas uma seqüência parcial do RNA que serve como matriz.
O termo "análise de agrupamento", tal como utilizado no presente, significa uma reunião dos dados individuais determinados por meio de um programa de computador, desenvolvido para esse fim, sendo que grupos de genes, que codificam proteínas com função semelhante, ou então genes com padrão de expressão similar são representados em combinação. Desse modo, é obtida uma minimização hierárquica do padrão de dados complexos, que pode ser representado na forma de um dendrograma. A análise de agrupamento possibilita a avaliação classificadora dos conjuntos de dados obtidos, que vai nitidamente além da mera acumulação de dados não relacionados.
Pelos termos "DNA-Chip" e "DNA-Microarranjo", que são utilizados, aqui, como sinônimos, é designado um suporte, cujo material básico consiste, por exemplo, em vidro ou náilon, sendo que sobre esse material básico estão fixados fragmentos de DNA, sendo que a aplicação do DNA pode dar-se por (a) um processo foto litográfico (o DNA é sintetizado diretamente sobre o suporte de arranjo), (b) um processo de micromancha (oligo- nucleotídeos sintetizados externamente ou produtos de PCR são aplicados sobre o suporte e ligados de modo covalente) ou (c) por um processo de micropulverização (oligonucleotídeos sintetizados externamente ou produtos de PCR são pulverizados, sem contato, sobre o suporte, por meio de uma impressora de jato de tinta) (R, Rauhut, Bioinformatik, p. 197-199. Verlag Wiley-VCH Verlag GmbH, Weinheim, 2001). Um chip de DNA, que representa as superfície de esbarro genômicas de um organismo, é designado como "chip de DNA genômico". A avaliação dos valores de medição obtidos com ajuda desse "chip de DNA" é designado como "análise de chip de DNA".
O termo "hibridização de chip de DNA", tai como utilizado no presente, significa a formação de pares de duas moléculas de ácido nucléico complementares, de uma espiral, sendo que um dos componentes de molécula do par de base está localizado como DNA (ácido desoxirribonucléico) sobre o chip de DNA, em uma forma de preferência ligada de modo covalente, enquanto o outro se apresenta em solução, na forma do RNA (ácido ribo- nucléico) ou cDNA (DNA complementar) correspondente ao mesmo. A hibridização dos ácidos nucléicos ligados e não ligados dá-se sobre o chip de DNA em solução de tampão aquosa, opcionalmente, sob condições adicionalmente desnaturadoras, tal como, por exemplo, na presente de sulfóxido dimetílico, a temperaturas de 30-60°C, de preferência, 40-50°C, de modo particularmente preferido, a 45°C, por 10-20 horas, de preferência, por 14-18 horas, de modo particularmente preferido, por 16 horas, sob movimento constante. As condições de hibridização podem ser realizadas de modo constante, por exempio, em um forno de hibridização. Normalmente, são realizadas nesse forno de hibridização movimentos de 60 rpm (rounds per minute, revoluções por minuto).
A sequência de ácido nucléico designada com o termo "sequência de EST" (Expressed Sequence Tag), tal como utilizado no presente, significa uma sequência curta, de 200-500 bases ou pares de bases.
Os termos "padrão de expressão", "padrão de indução" ou "perfil de expressão", usados como sinônimos, tais como utilizados no presente, descrevem a expressão temporalmente diferenciada e/ou específica de teci- do do mRNA vegetal, sendo que o padrão é obtido diretamente pela intensi dade do sinal produzido de hibridização do RNA obtido da planta ou de seu de indução!i medidos resultam do cálculo direto com os sinais corresponden- 5 tes, que são obtidos pelo uso de um chip sinônimo, sob hibridização com uma planta de controle não tratada/estressada.
O termo ‘'estado de expressão", que é obtido pela "Gene Expression Profiling" realizado, tal como utilizado aqui, descreve toda a atividade de transcrição detectada de genes celulares, que é medida com ajuda de um chip de 10 DNA.
O termo "RNA total", tal como utilizado no presente, descreve a ’ representação possível, devida ao processo de desintegração utilizado, de diversos grupos de RNA endógenas das plantas, que podem estar presentes em uma célula das plantas, tais como, por exemplo, rRNA citoplasmático 15 (RNA ribossomal), tRNA citoplasmático (RNA de transferência), mRNA citoplasmático (RNA mensageiro), bem como seus precursores nucleares, ctR- NA (RNA cloroplastidário) e mtRNA (RNA mitocondrial), mas ela compreende, também, moléculas de RNA que podem originar-se de organismos exógenos, tais como, por exemplo, de vírus ou bactérias e fungos parasitários.
O termo "plantas economicamente úteis", tal como utilizado no presente, designa plantas de cultura, que são usadas como plantas para a obtenção de alimentos, rações ou paia fins técnicos.
O termo "fitoprotetor", tal como utilizado no presente, designa um composto químico, que não é de origem endógena da planta, e que su- 25 prime ou reduz as propriedades fitotóxicas de um pesticida em relação a plantas economicamente úteis, sem que o efeito pesticida em relação a organismos nocivos, tais como, por exemplo, ervas daninhas, bactérias, vírus e fungos, seja substancialmente reduzido.
Antídotos, que além de sua função, em si conhecida, também 30 contribuem para aumento da tolerância em relação a fatores de estresse abióticos, são escolhidos, de preferência, do grupo definido abaixo, sendo que a escolha pode dar-se de modo diferente, dependendo do agente de estresse abiótico, sendo que pode dar-se o uso de apenas um único fitopro- tetor ou então de vários antídotos do mesmo grupo ou de grupos diferentes: a) Compostos das fórmulas (!) a (!!!)
Figure img0001
sendo que os símbolos e os índices têm os seguintes significados: n’ é um número natural de 0 a 5, de preferência, 0 a 3; T é uma cadeia de (Cí OU C2)-alcandiila, que é não substituída ou está substituída com um ou dois radicais de (CrC4)-alquila ou com [(CiC3)-alcóxi]-carbonila; W é um radical heterocíclico divalente, não substituído ou substi tuído, do grupo os heterociclos cinco-anelares, parcialmente insaturados ou aromáticos, com 1 a 3 átomos heteroanelares do tipo N ou O, sendo que pelo menos um átomo de N e, no máximo, um átomo de O estão contidos no anel, de preferência, um radical do grupo (W1) a (W4)
Figure img0002
m’ é 0 ou 1; R17, R19, são, de modo igual ou diferente, halogênio, (C1-C4)- alquila, (Ci-C4)-alcóxi, nitro ou (Ci-C4)-haloalquila;
R18, R20 são iguais ou diferentes e são OR24, SR24 ou NR24R25 ou um heterociclo de 3 a 7 membros, saturado ou insaturado, com pelo menos um átomo de n e até 3 heteroátomos, de preferência, do grupo O e S, que através do átomo de N está ligado com o grupo carbonila em (II) ou (III), e está não substituído ou substituído por radicais do grupo (ci-c4)-alquila, (c1-c4)-alcóxi ou fenila, opcionalmente, substituída, de preferência, um radical da fórmula OR24, NHR25 ou N(CH3)2, particularmente da fórmula OR24:
R24 c hidrogênio ou um radical de hídrocarboneto alifatíco, nao substituído ou substituído, de preferência, com, no total, 1 a 18 átomos de C; 5 R25 é hidrogênio, (Ci-C6)-alquila, (Ci-C6)-alcóxi ou fenila substi tuída ou não substituída; Rx é H, (CrC8)alquila, Ci-C8(haloalquila), (CrC4)alcóxi(Ci-C8) alquila, ciano ou COOR26, onde R26 é hidrogênio, (Ci-C8)alquila, (Ci-C8) ha- loalquila, (CrC4)alcóxi-(Ci-C4)alquila, (CrCejhidroxialquila, (C3-C12) cicloal- 10 quila ou tri(Ci-C4)alquilsilila;
R27, R28, R29 são iguais ou diferentes e são hidrogênio, (Ci-C8) ' alquila, (Ci-C8)haloalquila, (C3-Ci2)cicloalquila ou fenila substituída ou não substituída;
R21 é (CrC4)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (C2-C4)alquenila, (C2-C4) 15 haloalquenila, (C3-C7)cicloalquila, de preferência, diclorometila;
R22, R23 são iguais ou diferentes e são hidrogênio, (Ci-C4)alquila, (C2-C4) alquenila, (C2-C4)alquinila, (Ci-C4)haloalquila, (C2-C4)haloalquenila, (C1-C4)alquilcarbamoil-(Ci-C4)alquila, (C2-C4)alquenilcarbamoil(Ci-C4)alquila, (Ci-C4)alcóxi-(CrC4)alquila, dioxolanil(Ci-C4)alquila, tiazolila, furila, furilalqui- 20 la, tienila, piperidila, fenila substituída ou não substituída, ou R22 e R23, em conjunto, formam um anel heterocíclico, substituído ou não substituído, de preferência, um ahêl de oxazolidína, tíazolidina, píperidina, morfolíno, hexai- dropirimidina ou benzoxazina; b) um ou mais compostos do grupo que consiste em: 25 1,8- anidrido de ácido naftálico, metildifenil-metoxiacetato, 1-(2-clorobenzil)- 3-(1 -metil-1 -feniletil)uréia (cumilurona), O,O-dietil S-2-etiltioetil ditioato de fósforo (dissulfotona), 4-clorofenil-metilcarbamato (mefenato), O,O-dietil-O-fenil tioato de fósforo (dietolato), 30 4-carbóxi-3,4-diidro-2H-1-benzopiran-4-ácido acético (CL-304415, CAS-Reg. No: 31541-57-8), cianometoxiimino(fenil)acetonitrila (ciometrinila), 1,3-dioxolan-2-ilmetoxiimino(fenil)acetonÍtrila (oxabetrinila), 4'-cloro-2,2,2-trifluoroacetofenona-0-1,3-dioxolan-2-ilmetiloxima (fluxofenima), 4,6-d!c!oro-2-fen!!p!rimidina (fenclorim), benzii-2-cioro-4-trifiuoromθtii-1,3-tiazoi-5-carboxiiato (fiurazoi), 2-diclorometil-2-metil-1 ,3-dioxolano (MG-191). N-(4-metilfenil)-N’-(1 -metil-1 -feniletil)uréia (dimrona), ácido (2,4-diclorofenóxi) acético (2,4-D), ácido (4-clorofenóxi) acético, (R,S)-2-(4-cloro-o-tolilóxi)ácido propiônico (mecoprop), ácido 4-(2,4-diclorofenóxi) butírico (2,4-DB), ácido (4-cloro-o-tolilóxi) acético (MCPA), ácido 4-(4-cloro-o-tolilóxi) butírico, ácido 4-(4-clorofenóxi) butírico, 3,6-dicloro-2-metóxi-ácido benzóico (dicamba), 1 -(etoxicarbonil)etil 3,6-dicloro-2-metoxibenzoato (lactidicloro) e seus sais e ésteres, de preferência, (Ci-C8); c) N-acilsulfonamidas da fórmula (IV) e seus sais
Figure img0003
na qual
R30 é hidrogênio, um radical de hidrocarboneto, um radical óxi de hidrocarboneto, um radical tio de hidrocarboneto ou um radical de heteroci- clila, que está de preferência, ligado através de um átomo de C, sendo que cada um dos 4 radicais citados por última está não substituído ou substituído por um ou mais radicais iguais ou diferentes do grupo halogênio, ciano, nitro, amino, hidróxi, carbóxi, formila, carbonamida, sulfonamida e radicais dr fórmula -Za-Ra, sendo que cada parte de hidrocarboneto apresenta, de preferência, 1 a 20 átomos de C e apresenta um radical R30, que contém C, inclusive substituintes, apresenta, de preferência, 1 a 30 átomos de C; R31 é hidrogênio ou (Ci-C4)-alquila, de preferência, hidrogênio, ou R30 e R31, junto com o grupo da fórmula -CO-N-são o radical de um anel de 3 a 8 membros, saturado ou insaturado;
R32 são iguais ou diferentes e são halogênio, ciano, nitro, amino, hidróxi, carbóxi, formila, CONH2, SO2NH2 ou um radical da fórmula -Zb-Rb; RdJ é hidrogênio ou (Ci-C4)-alquila, de preferência, H;
R34 é igual ou diferente, halogênio, ciano, nitro, amino, hidróxi, carbóxi, CHO, CONH2, SO2NH2 ou um radical da fórmula -Zc-Rc;
Ra é um radical de hidrocarboneto ou um radical de heterociclila, sendo que cada um dos dois radicais citados por último está não substituído ou substituído por um ou mais radicais iguais ou diferentes do grupo halogênio, ciano, nitro, amino, hidróxi, mono- e di[(Ci-C4)-alquil]-amino, ou um radical alquila, no qual vários, de preferência, 2 ou 3, grupos CH2 não adjacentes estão, em cada caso, substituídos por um átomo de oxigênio;
Rb,Rc são iguais ou diferentes e são um radical de hidrocarboneto ou um radical de heterociclila, sendo que cada um dos dois radicais citados por último está não substituído ou substituído por um ou mais radicais iguais ou diferentes do grupo halogênio, ciano, nitro, amino, hidróxi,fosforila, halogênio-(Ci-C4)-alcóxi, mono- e di[(Ci-C4)-alquil]-amino, ou um radical alquila, no qual vários, de preferência, 2 ou 3, grupos CH2 não adjacentes estão, em cada caso, substituídos por um átomo de oxigênio;
Za é um grupo divalente da fórmula -O-, -S-, -CO-, -CS-, -CO-O-, -CO-S-, -O-CO-, -S-CO-, -SO-, -SO2-, -NR*-, -CO-NR*-, -NR*-CO-, -SO2- NR*- ou -NR*-SO2-, sendo que a ligação indicada à direita do respectivo grupo divalente é a ligação com o radical Ra e sendo que R* nos 5 radicais citados por último significa, independentemente um do outro, em cada caso, H, (Ci-C4)-alquila ou halo-(Ci-C4)-alquila;
Zb, Zc, independentemente um do outro, são uma ligação direta ou um grupo divalente da fórmula -O-, -S-, -CO-, -CS-, -CO-O-, -CO-S-, -O-CO-, -S-CO-, -SO-, -SO2-, -NR*-, -SO2-NR*-, -NR*-SO2-, -CO-NR*- ou -NFT-CO-, sendo que a ligação indicada à direita do respectivo grupo divalente é a ligação com o radical Rb ou Rc e sendo que R* nos 5 radicais cita- n é um número inteiro de 0 a 4. de preferência, 0, 1 ou 2, espe-cialmente, 0 ou 1, e m é um número inteiro de 0 a 5, de preferência, 0, 1,2 ou 3, es- pecialmente, 0, 1 ou 2; d) acilsulfamoilbenzamidas da fórmula geral (V), opcionalmente, também em forma de sal
Figure img0004
na qual R35 é hidrogênio, heterociclila ou um radical de hidrocarboneto, sendo que os dois radicais citados por último estão opcionalmente substituídos por um ou mais radicais iguais ou diferentes do grupo halogênio, ciano, nitro, amino, hidróxi, carbóxi, CHO, CONH2, SO2NH2e Za-Ra;
R36 é hidrogênio, hidróxila, (CrCβialquila, (Cs-Cgjalquenila, (Co-Cs) alquinila, (Ci-C6)alcóxi, (C2-C6)alquenilóxi, sendo que os cinco radicais men- i nr> o z4 rx o r>z"\r ■ ■Itimr'i Acini' <*>■ ikir'+iti ■ ■ m rui imioíro lUWVO pui UILIIIIU (JUUCItl COICII OUUOUIUIUWQ |JVI Ui i I MU I I IC1IO IQUIUCIIO lyUQIO ou diferentes, escolhidos do grupo que consiste em halogênio, hidroxila, (C1-C4) alquila, (Ci-C4)alcóxi e (Ci-C4)alquiltio, ou
R35 e R36, junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, são um anel de 3 a 8 membros, saturado ou insaturado;
R3' é halogênio, ciano, nitro, amino, hidroxila, carboxila, CHO, CONH2, SO2NH2 ou Zb-Rb; R38 é hidrogênio, (Ci-C4)alquila, (C2-C4)alquenila ou (C2-C4) al quinila;
R39 é halogênio, ciano, nitro, amino, hidroxila, carboxila, fosfori- la, CHO, CONH2, SO2NH2 ou Zc-Rc; Ra é um radical (C2-C2o)alquila: cuia cadeia de carbono está in-terrompida uma vez ou mais do uma vez por átomos de oxigênio, ou é hete- rociclila ou um radical de hidrocarboneto, sendo que os dois radicais men-cionados por último estão opcionalmente substituídos por um ou mais radi-cais iguais ou diferentes, do grupo halogênio, ciano, nitro, amino, hidroxila, mono- e di[(Ci-C4)alquil]amino;
Rb, Rc são um radical de (C2-C2o)alquila, cuja cadeia de carbono está interrompida uma vez ou mais de uma vez por átomos de oxigênio, ou é heterociclila ou um radical de hidrocarboneto, sendo que os dois radicais mencionados por último estão opcionalmente substituídos por um ou mais radicais iguais ou diferentes, do halogênio, ciano, nitro, amino, hidróxi, fosfo- rila, (Ci-C4)-haloalcóxi, mono- e di[(Ci-C4)alquil]amino;
Za é uma unidade divalente do grupo O, S, CO, CS, C(O)O, C(O)S, SO, SO2, NRd, C(O)NRd ou SO2NRd; Zb, Zc são iguais ou diferentes e são uma ligação direta ou uma unidade divalente do grupo O, S, CO, CS, C(O)O, C(O)S, SO, SO2, NRd, SO2NRd ou C(O)NRd;
Rd é hidrogênio, (CrC^alquila ou (Ci-C4)haloalquila; n é um número inteiro de 0 a 4, e m no caso de X representar CH, é um número inteiro de 0 a 5, e no caso de X representar N, um número inteiro de 0 a 4; e) compostos do tipo das aciisuifamoilbenzamidas, por exemplo, da formula (VI) abaixo, que são conhecidos, por exemplo, do documento WO 99/16744
Figure img0005
por exemplo, aqueles nos quais R21 = ciclopropila e R22 = H (S3-1 = 4-ciclopropilaminocarbonil- N-(2 metoxibenzoil)benzenossulfonamida), R21 = ciclopropila e R22 = 5-C! (S3-2), H21 = etila e R22 = H (S3-3), 5 R21 = isopropila e R22 = 5-CI (S3-4) e R21 - isopropila e R22 = H (S3-5); f) Compostos do tipo das N-acilsulfamoilfeniluréia da fórmula (VII), alguns dos quais são conhecidos do documento EP-A-365484,
Figure img0006
na qual A representa um radical do grupo
Figure img0007
Ra e Rp, independentemente um do outro, representam hidrogé nio, C-i-Cs-alquila, Cs-Cs-cicloalquila, C3-C6-alquenila, C3-C6-alquinila,
Figure img0008
R" e R1' , em conjunto, são uma ponte de C4-C6-alquileno ou uma ponte de C4-C6-alquileno, interrompida por oxigénio, enxofre, SO, S02. NH ou -N(Ci-C4-a!qui!a)-, RY representa hidrogénio ou Ci-C4-alquila, Ra e Rb , independentemente um do outro, representam hidro-gênio, halogênio, ciano, nitro, trifluorometila, Ci-C4-alquila, Ci-C4-alcóxi, Ci- C4-alquiltio, Ci-C4-alquilsulfinila, Ci-C4-alquÍlsulfonila, -COORj, -CONRkRm, - CORn, -SO2NRkRm, ou -OSO2-CrC4-alquila, ou Ra e Rb, em conjunto, repre-sentam uma ponte de C3-C4-alquileno, que pode estar substituída por halo-gênio ou Ci-C4-alquila, ou uma ponte de C3-C4-alquenileno, que pode estar substituída por halogênio ou Ci-C4-alquila, ou uma ponte de C4- alcadienileno, que pode estar substituída por halogênio ou Ci-C4-alquila, e R9 e Rh, independentemente um do outro, representam hidrogê-nio, halogênio, Ci-C4-alquila, trifluorometila, metóxi, metiltio ou -COORj, sen-do que Rc representa hidrogênio, halogênio, Ci-C4-alquila ou metóxi, Rd representa hidrogênio, halogênio, nitro, Ci-C4-alquila, Ci-C4- alcóxi, Ci-C4-alquiltio, Ci-C4-alquilsulfinila, C-i-C4-alquilsulfonila, -COORj ou - CONRkRm, Re representa hidrogênio, halogênio, CrC4-alquila, -COOR*, tri-fluorometila ou metóxi, ou Rd e Re, em conjunto, representam uma ponte de C3-C4-alqujfeno, Rf representa hidrogênio, halogênio ou Ci-C4-alquíla, Rx e RY, independentemente um do outro, representam hidrogê-nio, halogênio, Ci-C4-alquila, Ci-C4-alcóxi, Ci-C4-alquiltio, -COORj, trifluoro-metila, nitro ou ciano, Rj, Rk e Rm , independentemente um do outro, representam hi-drogênio ou Ci-C4-alquila, Rk e Rm, em conjunto, representam uma ponte C4-C6-alquileno ou uma ponte de C4-Ce-alquileno, que está interrompida por oxigênio, NH ou -N(Ci-C4-alquila)-, e Rn representa Ci-C4-alquila, fenila ou fenila, que está substituída por halogênio, Ci-C4-alquila, metóxi, nitro ou trifluorometila, de preferência, 1-[4-(N-2-metoxibenzoilsulfamoil)fenil]-3-metiluréia, 1 -Tzl-^M-O_motr\vihan-7/^ilei ilfomniHfanillQ Q_Himptili jrpjo 1-í4-(N-4;5-dimetiibenzo!lsulfamoil)fenilj-3-metiluréia, l-U-ÍN-naftoilsulfamoihfenilj-S^-dimetiluréia, g) compostos do tipo das acilsulfamoilbenzamidas da fórmula (VIII), descritos no documento EP-A-1019368, opcionalmente, também na forma de sal
Figure img0009
na qual
R1 significa metila, metóxi ou trifluorometóxi; R2 significa hidrogênio, cloro ou metila; R3 significa hidrogênio, etila ou propargila; R4 significa etila, ciclopropila, iso-propila ou propargila, ou R3 e R4, em conjunto, formam o grupo (CH2)4, incluindo os este- reoisômeros e incluindo os sais que são normalmente usados na agricultura.
Os compostos da fórmula (I) estão descritos, por exemplo, nos documentos EP-A-0 333 131 (ZA-89/1960), EP-A-0 269 806 (US-A- 4,891,057), EP-A-0 346 620 (AU-A-89/34951), EP-A-0 174 562, EP-A-0 346 620 (WO-A-91/08 202), WO-A-91/07 874 ou WO-A 95/07 897 (ZA 94/7120) e na literatura citada nos mesmos ou podem ser preparados de acordo com, ou em analogia a, processos descritos no presente.
Os compostos da fórmula (II) são conhecidos dos documentos EP-A-0 086 750, EP-A-0 94349 (US-A-4,902,340), EP-A-0 191736 (US-A- 4,881,966) e EP-A-0 492 366 e da literatura citada nos mesmos, ou podem ser preparados de acordo com, ou em analogia a, processos descritos no presente. Alguns compostos estão descritos, ainda, nos documentos EP-A-0 582 198 e WO 2002/34048.
Os compostos da fórmula (III) são conhecidos de urn grande número de pedidos de patente, nor exemplo, US-A-4,021,224 e US-A- 4,021,229.
Compostos do grupo (b) são conhecidos, ainda, dos documentos CN-A- 87/102 789, EP-A-365484 e do "The Pesticide Manual", The British Crop Protection Council and the Royal Society of Chemistry, 11th edition, Farnham 1997.
Os compostos do grupo (c) estão descritos no documento WO- A-97/45016, os do grupo (d), em WO-A-99/16744, os do grupo B (e), em EP- A-365484 e os do grupo (g), em EP-A-1019368.
Os documentos citados contêm informações detalhadas sobre processos e preparação e materiais básicos e citam compostos preferidos. Faz-se referência expressa a essas publicações, que estão incorporadas ao presente por referência.
Compostos preferidos da fórmula (I) e/ou (II), que são conhecidos como antídotos, são aqueles nos quais os símbolos e índices têm os seguintes significados:
R24 é hidrogênio, (CrCi8)alquila, (C3-Ci2)cicloalquila, (C2-C8) alquenila e (C2-Ci8)alquinila, sendo que os grupos que contêm carbono podem ser substituídos por um ou mais, de preferência, até três, radicais R50;
R50 é igual ou diferente e é halogênio, hidróxila, (Ci-C8)alcóxi, (Ci-C8)alquiltio, (C2-C8)alqueniltio, (C2-C8)alquiniltio, (C2-C8)alquenilóxi, (C2-C8) aíquiniióxi, (C3-C7)cicioaiquiia, (C3-C7)cicloalcóxi, ciano, mono- e di((C-i-C4) alquil)amino, carbóxi, (Ci-C8)alcoxicarbonila, (C2-C8)alqueniloxicarbonila, (Ci-C8)alquiltiocarbonila, (C2-C8)alquiniloxicarbonila, (Ci-C8)alquilcarbonila, (C2-C8)alquenilcarbonila, (C2-C8)alquinilcarbonila, 1-(hidroxiimino)-(Ci-C6) alquila, 1-[(Ci-C4)alquilimino]-(Ci-C4)alquila, 1-[(Ci-C4)alcoxiiminoHCi-C6)- alquila, (Ci-C8)alquilcarbonilamino, (C2-C8)alquenilcarbonilamino, (C2-C8) alquinilcarbonilamino, aminocarbonila, (Ci-C8)alquilaminocarbonila, di-(Ci-C8) -alquilaminocarbonila, (C2-C6)alquenilaminocarbonila, (C2-C6)alquinilaminocar- bonila, (Ci-C8)alcoxicarbonilamino, (CrC8)alquilaminocarbonilamino, (CrC6) alquilcarbonilóxi, que está não substituído ou substituído por R51, ou é (Ca-Cθ) alquenilcarbonilóxi, (C2-C6)alquinilcarbonilóxi, (Ci-C8)alquilsulfonila; fenila, fenila-(Ci-C6)~alcóxi, fenila-(Ci-C6)-alcoxicarbon!!a, fenóxi, fenóxi-(Ci-C6) - alcóxi, fenóxi-ÍCrCô) alcoxicarboniía, feniicarboniióxi, fenilacarbonilamino, fenil-(Ci-C6)-alquilcarbonilamino, sendo que os 9 radicais citados por último estão não substituídos ou mono- ou polissubstituídos no anel de fenol, de preferência, até trissubstituídos por radicais R52; SiR'3, -O-SiR'3( R'3SÍ-(CI-CR) -alcóxi, -CO-O-NR’2, -O-N=CR'2, -N=CR'2I -O-NR'2, -NR1;,, CH(OR')2, -O- (CH2)m-CH(OR')2, -CR'^OR'^, -O-(CH2)mCR,,,(OR',)2 ou por R“O-CHR‘“ CH- COR“-(Ci-C6)-alcóxi,
R51 é igual ou diferente, e é halogênio, nitro, (Ci-C4)alcóxi e fenila , que está não substituída ou substituída por um ou mais, de preferência, até três, radicais R52;
R52 é igual ou diferente e é halogênio, (Ci-C4)alquila, (Ci-C4) alcóxi, (Ci-C4)haloalquila, (Ci-C4)haloalcóxi ou nitro; R’ é igual ou difrente e é hidrogênio, (Ci-C4)alquila, fenila não substituída ou fenila que está substituída por um ou mais, de preferência, por até três, radicais R52, ou dois radicais R’, em conjunto, formam uma cadeia de (C2-C6)alcandiila; R” é igual ou diferente e é (Ci-C4)alquila, ou dois radicais R“, em conjunto, formam uma cadeia de (C2-Ce)alcanediila; R’” é hidrogênio ou (Ci-C4)alquHa; m é 0, 1,2, 3, 4, 5 ou 6.
São particularmente preferidos compostos conhecidos como antídotos, da fórmula (I) e/ou (II), nos quais os símbolos e índices têm os seguintes significados:
R24 é hidrogênio, (Ci-C8)alquila ou (C3-C7)cicloalquila, sendo que os radicais acima, que contêm carbono, estão não substituídos ou estão mono- ou polissubstituídos por halogênio ou mono- ou dissubstituídos, de preferência, monossubstituídos, por radicais R50,
R50 é igual ou diferente e é hidroxila, (Ci-C4)alcóxi, carbóxi, (C1-C4) alcoxicarbonila, (C2-C6)alqueniloxicarbonila, (C2-C6)alquiniloxicarbonila, 1-(hi- droxiimino)(Ci-C4)alquila, 1-[(Ci-C4)alquilimino]-(Ci-C4)-alquila e 1-[(CrC4) alcoxiimino]-(Ci-C4)-alquila; -SiR'3i -O-N=CR'2i -N=CR'2, -NR'2, θ -O-NR'2i sendo que R1 Θ iyual ou diferente e é hidrogênio, (Ci-C4)alquila, ou βrπ gru- pos de dois, é uma cadeia de (C4-Cõ)alcandiila, 5 R27, R28, R29 são iguais ou diferentes e são hidrogênio, (Ci-C8) alquila, (Ci-C6)haloalquila, (C3'C7)cicloalquila ou fenila, que está não substituída ou está substituída por um ou mais radicais do grupo halogênio, ciano, nitro, amino, mono- e di[(Ci-C4)alquil]amino, (Ci-C4)alquila, (Ci-C4) haloalquila, (Ci-C4)alcóxi, (Ci-C4)haloalcóxi, (Ci-C4)alquiltio e (CrC4) alquilsulfonila; 10 Rx é hidrogênio ou COOR26, sendo que R26 é hidrogênio, (CrC8) alquila, (Ci-C8)haloalquila, (Ci-C4-alcóxi)-(Ci-C4)alquila, (Ci-C6)hidroxial- ‘ quila, (C3-C7)cicloalquila ou tri(Ci -C4)aiquiisilila,
R17, R19 são iguais ou diferentes e são halogênio, metila, etila, metóxi, etóxi, (Ci ou C2)haloalquila, de preferência, hidrogênio, halogênio ou 15 (Ci ou C2)-haloalquila.
São especialmente preferidos compostos conhecidos como antídotos, nos quais os símbolos e índices na fórmula (I) têm os seguintes significados:
R17 é halogênio, nitro ou (Ci-C4)haloalquila; 20 n’ é 0, 1,2 ou 3; R18 é um radical da fórmula OR24, R24 é hidrogênio, (Ci-C8)alquila ou (C3-C7)cicloalquila, sendo que os radicais acima, que contêm carbono, são não substituídos ou mono- ou polissubstituídos, de preferência, até trissubstituídos, por radicais de ha- 25 logênio iguais ou diferentes, ou até dissubstituídos, de preferência, monos- substituídos, por radicais iguais ou diferentes do grupo hidróxi, (Ci-C4)alcóxi, (Ci-C4)alcoxicarbonila, (C2-C6)alqueniloxicarbonila, (C2-C6) alquiniloxicarbo- nila, 1-(hidroxiimino)-(Ci-C4)-alquila, 1-[(Ci-C4)alquilimino]-(Ci-C4)-alquila, 1- [(CrC4)alcoxiimino]-(Ci-C4)-alquila e radicais das fórmulas -SiR'3, -O-N=R'2, 30 -N-CR'2, -NR'2 e -O-NR'2, sendo que os radicais R’ nas fórmulas acima são iguais ou diferentes e são hidrogênio, (Ci-C4)alquila ou, em grupos de dois, são (C4 ou C5)alcandiila;
R27, R28, R29 são iguais ou diferentes e são hidrogênio, (CrC8) alquila, (Ci-C6)haloalquila, (C3-C7)cicloalquila ou fenila, que está não substituída ou substituída por um ou mais dos radicals do grupo halogênio, (Cr C^aiquila, (CrC4)alcóxi, nitro, (Ci-C4)ha!oa!qui!a e (CrC4)haloalcóxÈ, e Rx é hidrogênio ou COOR26, sendo que R26 é hidrogênio, (Ci-C8) alquila, (Ci-C8)haloalquila, (Ci-C4)alcóxi(Ci-C4)alquila, (Ci-C6)hidroxialquila, (C3-C7)cicloalquila ou tri-(Ci-C4)-alquilsilila. Também são especialmente preferidos compostos da fórmula (II), que são conhecidos como antídotos, são aqueles nos quais os símbolos e índices têm os seguintes significados:
R19 é halogênio ou (Ci-C4)haioalquila; n’ é 0, 1,2 ou 3, sendo que (R19)n' é, de preferência, 5-CI; R20 é um radical da fórmula OR24; T é CH2 ou CH(COO-(Ci-C3-alquila)) e
R24 é hidrogênio, (CrC8)alquila, (CrC8)haloalquila ou (CrC4) alcóxi-(Ci-C4)-alquila, de preferência, hidrogênio ou (Ci-C8)alquila. Nesse caso, são particularmente preferidos compostos da fórmula (I), que são conhecidos como antídotos, nos quais os símbolos e índices têm os seguintes significados: Wé(W1);
R17 é halogênio ou (Ci-C2)haloalquila; n* é 0, 1, 2 õu 3, sendo que (R17)n' é, de preferência, 2,4-CI2; R18 é um radical da fórmula OR24;
R24 é hidrogênio, (CrC8)alquila, (C-i-C4)haloalquila, (CrC4) hidroxialquila, (C3-C?)cicloalquila, (Ci-C4)alcóxi-(Ci-C4)-alquila ou tri-(Ci-C2)- alquilsilila, de preferência, (Ci-C4)alquila;
R27 é hidrogênio, (Ci-C8)alquila, (Ci-C4)haloalquila ou (C3-C7) cicloalquila, de preferência, hidrogênio ou (Ci-C4)alquila, e Rx é COOR26, sendo que R26 é hidrogênio, (Ci-C8)alquila, (CrC4) haloalquila, (Ci-C4)hidroxialquila, (C3-C7)cicloalquila, (Ci-C4)alcóxi-(Ci-C4)- alquila ou tri-(Ci-C2)-alquilsilila, de preferência, hidrogênio ou (CrC4)alquila. Também são especialmente preferidos compostos da fórmula (I), que são conhecidos como antídotos, nos quais os símbolos e índices têm os seguintes significados: W é (W2):
R17é halogênio ou (Ci-C2)haioaiquiia: n’é 0, 1,2 ou 3, sendo que (R17)n' é, de preferência, 2,4-CI2; R1 é um radical da fórmula OR24:
R24 é hidrogênio, (Ci-C8)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (C1-C4) hi- droxialquila, (C3-C7)cicloalquila, (Ci-C4alcóxi)-(Ci-C4)alquila ou tri-(Ci-C2)- alquilsilila, de preferência, (Ci-C4)alquila, e
R27 é hidrogênio, (Ci-C8)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (C3-C7) ci- cloalquila ou fenila não substituída ou substituída, de preferência, hidrogênio, (Ci-C4)alquila ou fenila, que está não substituída ou substituída por um ou mais radicais do grupo halogênio, (Ci-C4)alquila, (Ci-C4)haloalquila, nitro, ciano ou (CrC4)alcóxi. Particularmente preferido são também os compostos conhecidos como fitoprotetores da fórmula (I), nos quais os símbolos e índices apresentam os seguintes significados: W é (W3);
R17 é halogênio ou (CrC2) haloalquila; n' é 0,1, 2 ou 3, no qual (R17)^ é, preferivelmente, 2,4-CI2; R18 é um radical da fórmula OR24;
R24 é hidrogênio, (Ci-C3)alquHa, (Ci-C4)haloalquila, (C1-C4) hi- droxialquila, (C3-C7)cicloalquila, (C-i-C4)alcóxi-(Ci-C4)-alquila ou tri-(Ci-C2)- alquiisilil, preferenciaimente (Ci-C4)alquila, e
R28 θ (Ci-C8)alquila ou (Ci-C4)haloalquila, preferencialmente, Ci-haloalquila. Particularmente preferido são também os compostos conhecidos como fitoprotetores da fórmula (I), nos quais os símbolos e índices apresentam os seguintes significados. W é (W4)
R17 é halogênio, nitro, (Ci-C4)alquila, (Ci-C4)alquila, (Ci-C2) ha-loalquila, preferencialmente CF3 ou (CrC4) alcóxi; n' é 0, 1,2 ou 3; m’ é 0 ou 1; Q á I im ÍÁ^v,,.U rM~>24. • 11 o ui 11 lUMivcii Ma iMintuiα on ,
H24 é hidrogênio, (C-i-C4)alquila, carbóxi-(CrC4) alquila, (C1-C4) alcoxicarbonila (C1-C4)-alquila, preferencialmente (C1-C4)alcóxi-CO-CH2=■, (Ci-C4)alcóxi-CO-C(CH3)H-, HO-CO-CH2- ou HO-CO-C(CH3)H-, e
R29 é hidrogênio, (Ci-C4)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (C3-C7) ci- cloalquila ou fenila, que pode ser insubstituida ou substituída por um ou mais radicais do grupo de halogênio, (Ci-C4)-alquila, (Ci-C4)haloalquila, nitro, cia- no e (Ci-C4)alcóxi.
Os seguintes grupos de compostos conhecidos como fitoprotetor são apropriados, especialmente, como substâncias ativas para o aumento da tolerância de plantas em relação a fatores de estresse abióticos: a) compostos do tipo diclorofenilpirazolina-3-ácido carboxílico (isto é, da fórmula (I), na qual W = (W1) e (R17)n‘ = 2,4-CI2), de preferência, compostos tais como etil 1-(2,4-diclorofenil)-5-(etoxicarbonil)-5-metil-2-pira- zolina-3-carboxilato (1-1, mefenpir-dietílico), mefenpir-dimetílico e mefenpir (l-O), e compostos relacionados, tais como estão descritos no documento WO-A 91/07874; b) derivados do ácido diclorofenilpirazolcarboxílico (isto é, da fórmula (I), na qual W = (W2) e (R17)n' = 2,4-CI2), de preferência, compostos tais como etil 1-(2,4-diclorofeníl)-5-metÍlpÍrazoI-3-carboxilato (I-2), etil 1 -(2,4-diclo- rofenil)-5-isopropilpirazol-3-carboxilato (I-3), etil 1-(2,4-diclorofenil)-5-(1,1-di- metiletil)pirazol-3-carboxilato (I-4), etil 1-(2,4-diclorofenil)-5-fenilpirazol-3-car- boxilato (I-5) e compostos relacionados, tais como estão descritos nos documentos EP-A-0 333 131 e EP-A-0 269 806; c) Compostos do tipo dos ácidos triazolcarboxílicos (isto é, da fórmula (I), na qual W = (W3) e (R17)n’ = 2,4-CI2), de preferência, compostos tais como fenclorazol-etílico, isto é, etil 1-(2,4-diclorofenil)-5-triclorometil- (1H)-1,2,4-triazol-3-carboxilato (I-6), e compostos relacionados (veja EP-A-0 174 562 e EP-A-0 346 620); d) compostos do tipo do ácido 5-benzil- ou 5-fenil-2-isoxazolin-3- carboxílico ou do ácido 5,5-difenil-2-isoxazolin-3-carboxílico, tal como isoxa- difen (1-12) (onde W = (W4), de preferência, compostos tais como etil éster de ácido 5-(2,4-dic!orobenz!!)-2-!soxazolin-3 carboxílico (I-7) ou etil éster de ácido õ-fenil-2-isoxazoiin-3-carboxíiico (I-8) e compostos relacionados, tais como estão descritos no documento WO-A-91/08202, ou etil éster de ácido 5,5-difenil-2-isoxazolin-carboxílico (1-9, isoxadifeno-etílico) ou -éster n- propílico (1-10) ou do etil éster de ácido 5-(4-fluorfenil)-5-fenil-2-isoxazolin-3- carboxílico (1-11), tais como estão descritos em WO-A-95/07897. e) Compostos do tipo do ácido 8-quinolinoxiacético, por exemplo, aqueles da fórmula (II), na qual (R19)n’ = 5-CI, R20 - OR24 e T = CH2, de preferência, os compostos (5-cloro-8-quinolinóxi)ácido acético-(1-metilexil)-éster (11-1, cloquintocet- mexílico), (5-cloro-8-quinolinóxi)ácido acético-(1,3-dimetil-but-1 -=il)-éster (II-2), 4-alil-óxi-butiléster de ácido (5-cloro-8-quinolinóxi)acético (I I-3) (5-cloro-8-quinolinóxi)ácÍdo acético-1-alilóxi-éster prop-2-ílico (II-4), etil éster de ácido (5-cloro-8-quinolinóxi) acético (II-5), metil éster de ácido (5-cloro-8-quinolinóxi)acético (H-6), alil éster de ácido(5-cloro-8-quinolinóxi)acético (II-7), ácido 2-(2-propiliden-iminóxi)-1 -éster etílico (5-cloro-8-quinolinóxi)ácido acé- tico(ll-8), ácido-2-oxo-éster prop-1-ílico (5-ctoro-8-quinolinóxi) acético- (II-9), (5-cloro-8-quinolinóxi)ácido acético- (11-10) e sais dos mesmos, tais como estão descritos, por exemplo, no documento WO-A-2002/34048, e compostos relacionados, tais como estão descritos nos documentos EP-A-0 860 750, EP-A-0 094 349 e EP-A-0 191 736 ou EP-A-0 492 366. f) Compostos do tipo do (5-cloro-8-quinolinóxi)-ácido malônico, isto é, da fórmula (II), na qual (R19)rf = 5-CI, R20= OR24, T = -CH(COO-alquil)- , de preferência, os compostos (5-cloro-8-quinolinóxi)ácido malônico -éster dietílico (11-11), éster dialílico de ácido (5-cloro-8-quinolinóxi) malônico, (5- cloro-8-quinolinóxi)ácido malônico-metil-éster etílico e compostos relacionados, tais como estão descritos no documento EP-A-0 582 198. g) Compostos do tipo das dicloroacetamidas, isto é, da formula (III), de preferência: M MHiolilO rm i<d o /^iz-'lrxrm i/~l /HI "1 \ rJrt I IQ A A d Q7 C\~7C\ IH,tn UIUIII VIVIVI IJUVljlUI I IIUU X*’’ 1 ) 1 *'J /"A T, IU I , V> I , 4-dicloroacetiÍ-3,4-diidro-3-metil-2H-1,4-benzoxazin dV-2, benoxacor, de EP 0 149 974), N1 ,N2-dialil-N2-dicloroacetilglicinamida (DKA-24 (HI-3), de HU 2143821), 4-dicloroacetil-1 -oxa-4-aza-espiro[4,5]decano (AD-67), 2,2-dicloro-N-(1,3-dioxolan-2-ilmetil)-N-(2-propenil)acetamida (PPG-1292), 3-dicloroacetil-2,2,5-trimetiloxazolidina (R-29148, HI-4), 3-dicloroacetil-2,2-dimetil-5-feniloxazolidina, 3-dicloroacetil-2,2-dimetil-5-(2-tienil)oxazolidina, 3-dicloroacetil-5-(2-furanil)-2,2-diemtiloxazolidina (furilazol (HI-5), MON 13900), 1 -dicloroacetil-hexaidro-3,3,8a-trimetilpirrol[1,2-a]pirimidin-6(2H)-ona (diclo- nona, BAS 145138), h) Compostos do grupo (b), de preferência, anidrido de ácido 1,8-naftálico (b-1), metil-difenilmetoxiacetato (b-2), cianometoxiimino(fenil)acetonitrila (ciometrinila (b-3), 1 -(2-clorobenzil)-3-(1 -metil-1 -feniletiljuréia (cumilurona) (b-4), 0,0-dietil S-2-etiltioetil ditioato de fósforo (dissulfoton) (b-5), 4-clorofenil-metilcarbamato (mefenato) (b-6), O.O-dietil-O-fenifditioaro de fósforo (dietotato) (b-7), ácido 4-carbóxi-3,4-diidro-2H-1-benzopirano-4-acético (CL-304415, CAS Regno: 31541-57-8) (b-8), 1,3-dioxolan-2-ilmetoxiimino(fenil)acetonitrila (oxabetrinila) (b-9), 4’-cloro-2,2,2-trifluoracetofenona O-1,3-dioxolan-2-ilmetiloxima (fluxofenima) (b-10), 4,6-dicloro-2-fenilpirimidina (fenclorim) (b-11), benzil-2-cloro-4-trifluormetil-1,3-tiazol-5-carboxilato (flurazol) (b-12), 2-diclorometil-2-metil-1,3-dioxolano (MG-191) (b-13), N-(4-metilfenil)-N’-( 1 -metil-1 -feniletil)uréia (dimrona) (b-14), ácido (2,4-diclorofenóxi)acético (2,4-D), ácido (4-clorofenóxi)acético, ácido (R,S)-2-(4-cloro-o-tolilóxi)propiônico (mecoprop), ácido 4-(2,4-diclorofenóxi)butírico (2:4-DB). t A I I J I X J I \ *** A n X k □•'X. Cl^fUU /a^OLIUU ónirln/A-^lnm-rí-tr^lilAvi^Ki i+íri^n r viwiv w ^VHIWAI^MU <i i i w , ácido 4-(4-c!orofenóxi) butírico, ácido 3,6-dicloro-2-metóxi-benzóico (dicamba), 1 -(etoxicarbonil)etil 3,6-dicloro-2-metóxibenzoato (lactidicloro), bem como seus sais e ésteres, de preferência, (Ci-Ce). São preferidos, ainda, composto da fórmula (IV), conhecidos como antídotos, ou. sais dos mesmos, nos quais
R30 é hidrogênio, (Ci-Cθ)-alquila, (C3-C6)-cicloalquila, furanila ou tienila, sendo que cada um dos 4 radicais citados pór último estão não subs-tituídos ou substituídos por um ou mais substiuintes do grupo halogênio, (C-r C4)-alcóxi, halo-(Ci-C6)-alcóxi e (Ci-C4)-alquiltio e, no caso de radicais cíclicos, também (Ci-C4)-alquila e (Ci-C4)-haloalquila, R31 é hidrogênio,
R32 é halgoênio, halogênio-(Ci-C4)-alquila, halogênio-(Ci-C4)- alcóxi, (Ci-C4)-alquila, (CrC4)-alcóxi, (Ci-C4)-alquilsulfonila, (CrC4)- alcoxicarbonila ou (Ci-C4)-alquilcarbonila, de preferência, halogênio, (C-i-C4)- haloalquila, tal como trifluormetila, (CrC4)-alcóxi, halogênio-(Ci-C4)-alcóxi, (Ci-C4)-alcoxicarbonila ou (Ci-C4)-alquilsulfonila, R33 hidrogênio,
R34 halogênio, (Ci-C4)-alquila, halogênio-(Ci-C4)-alquila, halogê- nio-(Ci-C4)-alcóxi, (Cs-Cθbcicloalquila, fenila, (CrC4)-alcóxi, ciano, (Ci-C4)- alquiltio, (Ci-C4)-alquilsulfinila, (Ci-C4)-alquilsulfonila, (Ci-C4)-alcoxicarbonila ou (CrC4)-alquilcarbonila, de preferência, halogênio, (Ci-C4)-alquila, (Ci-C4)- haloalquila, tal como trifluormetila, halogênio-(C-i-C4)-alcóxi, (Ci-C4)-alcóxi ou (Ci-C4)-alquiltio, n é 0, 1 ou 2, e m é 1 ou 2. São particularmente preferidos compostos conhecidos como antídotos da fórmula (IV), nos quais
R30 é = H3C-O-CH2,R31 = R33= H,R34 = 2-OMe (IV-1), R30 é = H3C-O-CH2,R31 = R33= H,R34 = 2-OMe-5-CI (IV-2), r->30 A «;„II„ r>31 r>33 u r»34 r» /i\/ n\ li c — u-ii^iupujpiiα, n — n — I i,n — ZL-OIVIC (i voj, R30 ó - rirlnnrnnila R31 - R33— kl R34 - R30 é = ciclopropila, R.31 = R33- H,R34 = 2-Me (IV-5), R30 é = terc-butila, R31 = R33= H,R34 = 2-OMe (IV-6). Além disso, são preferidos compostos da fórmula (V), conhecidos como antídotos, nos quais X3 é CH;
R30 é hidrogênio, (Ci-C6)-alquila, (C3-C6)-cicloalquila, (C2-C6)- alquenila, (Cs-CθJ-cicloalquenila, fenila ou heterociclila de 3 a 6 membros, com até três heteroátomos do grupo nitrogênio, oxigênio e enxofre, sendo que os seis radicais citados por último estão opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes, iguais ou diferentes, do grupo halogênio, (Ci-Cθ)- alcóxi, (Ci-Ce)-haloalc0xi, (Ci-C2)-alquilsulfinila, (Ci.C2)-alquilsulfonila, (C3-Ce) -cicloalquila, (Ci-C4)-alcoxicarbonila, (CrC4)- alquilcarbonila e fenila e, no caso de radicais cíclicos, também por (Ci-C4)-alquila e (Ci-C4)-haloalquila;
R36 é hidrogênio, (Ci-C6)-alquila, (C2-C6)-alquenila, (C2-C6)- alquinila, sendo que os três radicais citados por último estão opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes, iguais ou diferentes, do grupo halogênio, hidróxi, (Ci-C4)-alquila, (Ci-C4)-alcóxi e (Ci-C4)-alquiltio;
R37 é halogênio, (Ci-C4)-haíoafquíía, (Ci-C4)-haloaícóxí, nitro, (Ci-C4)-alquila, (Ci-C4)-alcóxi, (Ci-C4)-alquilsulfonila, (Ci-C4)-alcoxicarbonila ou (Ci-C4)-alquilcarbonila; R38 é hidrogênio;
R39 é halogênio, nitro, (CrC4)-alquila, (Ci-C4)-haloalquila, (Ci-C4) -haloalcóxi, (C3-C6)-cicloalquila, fenila, (Ci-C4)-alcóxi, ciano, (Ci-C4)-alquiltio, (Ci-C4)-alquilsulfinila, (Ci-C4)-alquilsulfonila, (Ci-C4)-alcoxicarbonila ou (Ci-C4) -alquilcarbonila. n é 0,1 ou 2 e m é 1 ou 2.
Compostos da fórmula (VI), conhecidos como antídotos, são (S3-1), (S3-2), (S3-3), (S3-4) e (S3-5). Compostos preferidos da fórmula (VII) também são 1-[4-(N-2-metoxibcnzoilsulfamoi!)fcn;l] 3 mctilurcia (VII-1), 1-[4-(N-2-metoxibenzoi!sulfamoil)fenil]-3,3-dimetíluréia (VII-2), 5 1-[4-(N-4,5-dimetilbenzoilsulfamoil)fenil]-3-metiluréia (VII-3) e 1 -[4-(N-naftoHsulfamoil)feni!]-3,3-dimetiluréia (VII-4). Igualmente são preferidos compostos das fórmulas VIII-1 a VIII-4
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dos quais, por sua vez, é especialmente preferido o composto Vlll-3 (4- ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxibenzoil)benzenossulfonamida), para uso 10 como agente para aumentar a tolerância em plantas em relação a fatores de estresse abióticos.
Compostos particularmente preferidos para uso como agente para aumentar a tolerância em plantas em relação a fatores de estresse abióticos são aqueles escolhidos do grupo de compostos conhecidos como an- 15 tídotos, que consiste nos compostos das fórmula 1-1 (mefenpir-dietílico), I-9 (isoxadifeno-etílico), 11-1 (cloquintocet-mexílico), b-11 (fenclorim), b-14 (Di- mrona) e Vlll-3 (4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxibenzoil) benzenossul- fonamida, são especialmente preferidos os compostos 1-1 e Vlll-3).
Os compostos identificados/citados acima, eventualmente já 27 conhecidos como antídotos, também podem ser usados em plantas modificadas por tecnologia genética.
As plantas modificAdas por tecnologia genética (também chamadas de plantas transgênicas) As piantas transgênicas distinguem-se, em geral, por propriedades particularmente vantajosas, por exemplo, por resistências em relação a determinados pesticidas, sobretudo, determinados herbicidas, resistências em relação a doenças de plantas ou causadores de doenças de plantas, tais como determinados insetos ou microorganismos, tais como fungos, bactérias ou vírus. Outras propriedades especiais referem-se, por exemplo, ao material de colheita, no que se refere a quantidade, qualidade, aptidão para armazenamento, composição e ingredientes especiais. Desse modo, são conhecidas plantas transgênicas com teor de amido mais alto ou qualidade modificada do amido, ou aquelas com outra composição de ácido graxo do material de colheita.
É preferida a aplicação dos compostos identificados /citados, conhecidos como antídotos, ou sais dos mesmos em culturas transgênicas economicamente importantes de plantas de utilidade econômica e plantas ornamentais, por exemplo, de cereais, tais como trigo, cevada, centeio, aveia, painço, arroz e milho, ou também culturas de beterraba de açúcar, algodão, soja, colza, batata, tomate, ervilha e outras variedades de legumes, de modo particularmente preferido, em culturas de milho, trigo, cevada, centeio, aveia, arroz, colza, beterraba de açúcar e soja, de modo especialmente preferido, em culturas de milho, trigo, arroz, colza, beterraba de açúcar e soja.
Além disso, também plantas transgênicas podem ser tratadas com substâncias identificadas com ajuda de microarranjos de DNA, tal como, também com as moléculas já conhecidas como antídotos, cuja tolerância em relação a fatores de estresse abióticos já foi aumentada por medidas de tecnologia genética, de modo que é observado um efeito sinérgico da tolerância codificada endogenamente e de um aumento de tolerância, aplicado exogenamente.
Métodos convencionais para a produção de plantas novas, que em comparação com plantas existentes até agora apresentam propriedades 28 modificadas, consistem, por exemplo, em processos de cultivo clássicos e na produção de mutantes. Alternativamente, plantas novas, com propriedades modificadas, podem sor produzidas por processos de tecnologia genética (veja, por exemplo, EP-A-0221044, EP-A-0131624). Foram descritos, por exemplo, em muitos casos - modificações de tecnologia genética de plantas de cultura, com a finalidade da modificação do amido sitnetizado nas plantas (por exemplo, WO 92/11376, WO 92/14827, WO 91/19806), - plantas de cultura transgênicas, que são resistentes contra determinados herbicidas, do tipo glufosinate (comp., por exemplo, EP-A-0242236, JEP-A-242246) ou glifosato (WO 92/00377) ou das sulfoniluréias (EP-A- 0257993, US-A-5013659), - plantas de cultura transgênicas, por exemplo, algodão, com a capacidade de produzir toxinas de Bacillus thuringiensis (toxinas Bt), que tornam as plantas resistentes contra determinadas pragas (EP-A-0142924, EP-A-0193259), - plantas de cultura transgênicas com composição de ácido graxo modificada (WO 91/13972).
São conhecidas, em princípio, numerosas técnicas biológicas moleculares, com as quais podem ser produzidas novas plantas transgênicas, com propriedades modificadas, veja, por exemplo, Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2a. edição, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; ou Winnacker "Gene und Klone", VCH Weinheim 2a edição, 1996 ou Christou, "Trends in Plant Science" 1 (1996)423-431).
Para essas manipulações de tecnologia genética, moléculas de ácido nucléico podem ser incorporadas em plasmídios, que permitem uma mutagênese ou uma modificação de sequência por recombinação de sequências de DNA. Como ajuda dos processos típicos citados acima, podem ser realizadas, por exemplo, trocas de bases, seqüências parciais podem ser removidas ou seqüências naturais ou sintéticas podem ser adicionada. Para a ligação dos fragmentos de DNA entre si podem ser inseridos adaptadores ou ligantes nos fragmentos.
A produção de células de plantas com uma atividade reduzida de um produto genético pode ser obtida, por exemplo, pela expressão de pelo menos urn RNA de anti-sentido correspondente, um RNA de sentido, para obtenção de um efeito de co-supressão ou a expressão de pelo menos um ribozima construído de modo correspondente, que dissocia, especificamente, transcritos do produto genético citado acima.
Para esse fim, podem ser usadas, por um lado, moléculas de DNA, que compreendem toda a seqüência codificadora de um produto genético, inclusive de seqüências flanqueadoras, eventualmente existentes, como, também, moléculas de DNA, que só compreendem partes da seqüência codificadora, sendo que essas partes precisam ter um comprimento suficiente para provocar nas células um efeito de anti-sentido. Também é possível o uso de seqüências de DNA, que apresentam um alto grau de homologia com as seqüências codificadoras de um produto genético, mas não são totalmente idênticas.
Na expressão de moléculas de ácido nucléico em plantas, a proteína sintetizada pode estar localizada em qualquer compartimento da célula da planta. Mas, para obter a localização em um determinado compartimento, por exemplo, a região codificadora pode ser ligada com seqüências de DNA, que garantem a localização em um compartimento determinado. Essas se- qüênctas são conhecidas do técnico (veja, por exemplo, Braun et al., EMBO J. 11 (1992), 3219-3227; Wolter et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85 (1988), 846-850; Sonnewald etal., Plant J. 1 (1991), 95-106).
As células de plantas transgênicas podem ser regeneradas de acordo com técnicas conhecidas para plantas inteiras. No caso das plantas transgênicas, pode tratar-se, em princípio, de qualquer espécie de planta, isto é, tanto plantas monocotiledôneas como também dicotiledôneas.
Desse modo, são obteníveis plantas transgênicas, que apresentam propriedades modificadas por superexpressão supressão ou inibição de genes ou seqüências de genes homólogos (=naturais) ou expressão de genes ou seqüências de genes heterólogos (=estranhos).
De preferência, as moléculas identificadas com ajuda dos mi- croarranjos de DNA ou, então, conhecidas como antídotos, podem ser usadas cm culturas transcênicas cue são resistente® horhiríHac Hn nm- po das sulfoniluréais, glufosinato-amónio ou giifosato-isopropiiamônio e substâncias ativas análogas e/ou, na base da modificação por tecnologia genética, apresentam uma tolerância endógena em relação a fatores de estresse abióticos.
Na aplicação das substâncias ativas em culturas transgênicas, freqüentemente ocorrem, além dos efeitos a ser observados em outras culturas em relação a plantas daninhas, efeitos, que são específicos para a aplicação na respectiva cultura transgênica, por exemplo, um espectro de ervas daninhas modificado ou especialmente ampliado, que pode ser controlado, quantidades de aplicação modificadas, que podem ser usadas para a aplicação, de preferência, boa aptidão para combinação com os herbicidas, em relação aos quais a cultura transgênica é resistência, bem como influência sobre crescimento e produtividade das plantas de cultura transgênicas.
Portanto, também é um objeto da invenção o uso dos compostos identificados com microarranjos de DNA ou de compostos já conhecidos como antídotos, para aumentar a tolerância em relação a fatores d estresse abióticos em plantas de cultura transgênicas, de preferência, com o objetivo de aumentar a produtividade.
É um objeto da invenção um processo para detectar um composto que aumenta a tolerância em plantas em relação a fatores de estresse abióticos, sendo que o aumento da transcrição ou expressão de alguns ou vários genes endógenos nas plantas, tais como, por exemplo, genes que codificam proteínas do grupo das oxidases de citocromo, tal como da cito- cromoxidase P450, transferases de glicosila, uricases, tal como da uricase II (E.C. 17.3.3), pepsidases, diversas proteínas de membrana, hidrolases de amido, bem como diversas proteínas de estresse gerais, é avaliada como indício da indução.
É um objeto da presente invenção, particularmente, um processo para detecção de compostos, que induzem a transcrição dos genes que codificam as enzimas da tolerância ao estresse endógenas das plantas, caracterizado pelo fato de que: plantas de teste são expostas a um ou mais fatores de estresse abióticos, b) plantas de controle, de resto, sob as mesmas condições como as plantas de teste sob a), são adicionalmente psotas em contato com um composto a ser testado, seja na forma de material de sementes desinfetado, ou da pulverização, a um determinado momento do desenvolvimento, ou por absorção pelas raízes, c) RNA é extraído das plantas de teste e das plantas de controle, d) o RNA é marcado diretamente de modo radiativo ou não radiativo, ou, então, o RNA é marcado de modo radiativo ou não radiativo, sob simultânea transcrição enzimática no cDNA correspondente, ou, então, o cDNA não marcado, obtido, é transcrito enzimaticamente no cRNA correspondente, marcado de modo radiativo ou não radiativo, e) um microarranjo de DNA, que contém seqüências de DNA de plantas, é hibridizado com as substâncias obtidas de acordo com a etapa d), f) são produzidos perfis de expressão dos genes, para a expressão de diversas proteínas de estresse, de modo comparativo para as plantas testadas de acordo com a) e b), g) dá-se uma quantificação das diferenças de expressão medidas de acordo com f), e h) dá-se uma sistematização final dos perfis de expressão associados de acordo com g) por análise de agrupamento.
No caso da etapa d), citada acima, a transcrição enzimática do cDBA obtido em um cRNA deve ser vista como uma etapa de processo preferida, uma vez que, desse modo, pode ser obtida mais uma amplificação da amostra de hibridização. Também é preferida a marcação por meio de nucleotídeos não radiativos, é particularmente preferida a marcação por meio de UTP e/ou CTP biotinilado, sendo que a comprovação, subseqüentemente à reação de hibridização ocorrida, dá-se por ligação de estreptavidina- ficoeritrina como fluoróforo no cRNA biotinilado. Uma comprovação da fio- rescência de ficoeritrina específica, que serve como base para a quantificação das diferenças de expressão medidas, dá-se subseqüentemente à hibri- ríi-yoõoi» irlo ria i irri erknnnnr rlô looõr UlZ-UyUV) OV1 I I UÁJOkJM. UIM UUUMIIVI ViU lUVV».
Um objeto preferido da presente invenção é um processo no qual os procedimentos a)-h) citados acima são mantidos, sendo que, no caso do aumento pretendido [da expressão de genes] no estresse por calor, os genes para a expressão das oxidases de citocromo, tal como citocromo oxidase P450, transferases de glicosila, uricases, tal como da uricase II (E.C.17.3.3), peptidases, diferentes proteínas de membrana, amidoidrolases, é comparada em plantas termicamente estressadas e não termicamente estressadas, de preferência, dos genes para a expressão da "amidoidrolase de N-carbamil-L-aminoácido" (Zm.11840.1 .A1_at), de "carboxipeptidase de se- rina 11 (Zm.18994.2.A1_a_at), de uricase II (E.C.1.7.3.3) e de transferase de glicosila (Zm.12587.1.S1_s_at), de modo especialmente preferido, dos genes para a expressão de "amidoidrolase de N-carbamil-L-aminoácido" (Zm.11840.1 .A1_at) e de "carboxipeptidase de serina" (Zm.18994.2.A1_a_at) (assinatura de acordo com o arranjo de genoma de milho, de Affymetrix (Affy- metrix Inc., 3380 Central Expressway, Santa Clara, CA, USA)), e sendo que a expressão de genes em relação a uma planta de controle termicamente estressada, é aumentada no tratamento, por exemplo, pelo fator 1,5 ou mais, de preferência, pelo fator 1,5 a 30, particularmente, 1,5 a 20, de modo particularmente preferido, T,5 a 10, de modo especialmente preferido, 1,5 a 5, sendo que o aumento dos perfis de expressão modificados dos genes individuais pode situar-se, independentemente um do outro, nos âmbitos de valor diferentes, anteriormente citados.
Um objeto igualmente preferido da presente invenção é um processo, no qual as etapas de processo a) - h) acima citadas são mantidas, onde, no caso do aumento pretendido, no caso de estresse por seca, por exemplo, os genes para a expressão das proteínas abundantes de embrio- gênese tardia, tais como as deidrinas, da proteína de estresse universal (Zm.818.1 .A1_at), hemoglobina não simbiótica (Zm.485.1 .A1_at), da proteína endereçada como "Zm.818.2.A1_a_at" (assinatura de acordo com o ar- ranjo de genoma de milho, de Affymetrix (Affymetrix Inc., 3380 Central Expressway, Santa Clara, CA, USA)) e da proteína endereçada como "Zm.18682.1.A1_s_at" (arranjo do genoma do milho, do Affymetrix (Asymetrix Inc., 3380 Central Expressway, Santa Clara, CA, USA)) de plantas estressadas por seca e plantas não estressadas por seca é comparado, de preferência, os genes para a expressão da proteína de estresse universal (Zm.818.1.A1_at), hemoglobina não simbiótica (Zm.485.1.A1__at), da proteína endereçada como "Zm.818.2.A1_a_at“ (arranjo de genoma de milho, de Affymetrix (Affymetrix Inc., 3380 Central Expressway, Santa Clara, CA, U- SA)) e da proteína endereçada como "Zm.18682.1 .A1„s_at" (arranjo de genoma de milho, de Affymetrix (Affymetrix Inc., 3380 Central Expressway, Santa Clara, CA, USA)), e sendo que a expressão de genes em relação a uma planta de controle estressada por seca é aumentada no tratamento, por exemplo, pelo fator 1,5 ou mais, de preferência, pelo fator 1,5 a 30, particularmente, 1,5 a 20, de modo particularmente preferido, 1,5 a 10, de modo especialmente preferido, 1,5 a 8, sendo que o aumento dos perfis de expressão modificados dos genes individuais pode situar-se, independentemente um do outro, nos âmbitos de valor diferentes, anteriormente citados.
É, ainda, um objeto da presente invenção o uso de determinados microarranjos de DNA, que são usados na base de informações de plantas, de preferência, informações genéticas de plantas economicamente ú- teis, de modo particularmente preferido, de plantas economicamente úteis, tais como, por exemplo de milho, cereais, tais como trigo, cevada, centeio, aveia, arroz e soja, de preferência, de milho, trigo, arroz e soja, de modo especialmente preferido, de milho, trigo e soja, para detecção de padrões de expressão de genes modificados. Nesse caso, são observadas as as modificações relativas dos padrões genéticos para genes de diversas proteínas de estresse nas plantas tratadas com os compostos a ser testados, em comparação com plantas de controle não tratadas, sob condições de estresse de resto idênticas.
Além disso, é um objeto da invenção o uso dos promotores dos genes indicadores descritos, em conexão com genes transmissores (por e- xemplo, GUS, GFP, luciferase etc.), para detectar substâncias com efeito positivo sobre a tolerância ao estresse abiótico em plantas de cultura. Nesse de gene promotor-transmissor substâncias ativas que aumentam a tolerância ao estresse abiótico de plantas de acordo com o mecanismo descrito, induzem a expressão do gene transmissor e podem ser identificadas com ajuda de um teste colorimétrico, fluorimétrico ou outro, apropriado para esse fim.
Objeto da invenção é, ainda, o uso dos genes indicadores descritos para aumentar a tolerância ao estresse abiótico em plantas de cultura transgênica. Nesse caso, os genes são fusionados com um promotor apropriado, que possui a força e especificidade desejadas e os construtos são transformados em plantas de cultura monocotiledôneas ou dicotiledôneas. As plantas transgênicas produzidas distinguem-se por uma tolerância mais alta contra estresse abiótico, por exemplo, frio, calor, seca etc.
Um outro objeto da presente invenção é também o uso dos compostos que foram identificados com ajuda do microarranjo de DNA, sob observação dos perfis de expressão dos genes, e/ou compostos já conhecidos como antídotos, que, no caso de condições de estresse abiótico, tal como, por exemplo, fatores de estresse abiótico que atuam em relação a essa planta, tais como temperatura (frio, geada ou calor), água (seca ou aridez), ou a carga química (deficiência ou excesso de sais minerais, metais pesados ou agentes nocivos gasosos), agem de modo positivo, isto é, aumentando a expressão, no que se refere ao seu efeito indutivo sobre alguns ou vários genes dos mecanismos de defesa endógenos das plantas, tal como, por exemplo, no caso de estresse por calor, sobre oxidases de citocromo, tal como a ci- tocromoxidase P450, sobre transferases de glicosila, sobre uricases, tal como a uricase II (E.C.17.3.3), sobre peptidases, sobre diversas proteínas de membrana, sobre amidoidrolases e/ou diferentes proteínas de estresse e, por exemplo, no caso de estresse por seca, agem positivamente, isto é, au-mentando a expressão, no que se refere ao seu efeito indutivo sobre alguns ou vários genes da proteína de estresse universal, hemoglobina não simbiótica (Zm.485.1.A1_at), da proteína endereçada como "Zm,818.2,A1_a..at" (arranjo de genoma de milho, de Affymetrix (Affymetrix Inc,, 3380 Central Expressway, Santa Clara, CA, USA)) e da proteína endereçada como "Zm. 18682.1 .Al s at" (assinatura de acordo com o arranjo de genoma de miiho. de Affymetrix (Affymetrix inc., 3380 Centrai Expressway, Santa Clara, CA, USA)), foram identificados como substâncias ativas para aumentar a tolerância ao estresse em plantas economicamente úteis.
Também é objeto da invenção o uso de substâncias identificadas com ajuda do microarranjo de DNA, bem como, também, das moléculas já conhecidas como antídotos, para aumenta da tolerância em relação a fatores de estresse abióticos em diversas plantas de cultura, tais como milho, cereais, tais como trigo, cevada, centeio, aveia, arroz e soja, de preferência, milho, trigo, cevada, centeio, arroz e soja, de modo especialmente preferido, de milho, trigo e soja, de modo especialmente preferido, de milho, trigo e soja.
Também é, portanto, um objeto da presente invenção o uso de compostos, que foram identificados com ajuda do mciroarray de DNA, sob observação dos perfis de expressão dos genes, e/ou de compostos já conhecidos como antídotos, que contribuem diretamente ou indiretamente, tal como, por exemplo, por uma cadeia de sinais de transdução, para aumento da tolerância em relação a fatores de estresse abióticos, tais como, por e- xemplo, temperatura (frio, geada ou calor), água (seca, aridez ou anoxia), ou a carga química (deficiência ou excesso de sais minerais, metais pesados ou agentes nocivos gasosos), para aumento da produtividade, para prolongamento do período vegetative, para possibilitar uma semeadura precoce, para aumento da qualidde, ou para uso no âmbito do cultivo, sob uso de linhas de cruzamento entre espécies iguais, normalmente, menos vitais.
Objeto da invenção é, portanto, também um processo para aumento da produtividade em culturas de plantas economicamente úteis, para prolongamento do período vegetative, para possibilitar uma semeadura precoce, para aumento da qualidade, ou para uso no âmbito do cultivo, sob uso de linhas de cruzamento entre espécies iguais, normalmente, menos vitais, caracterizado pelo fato de que as plantas economicamente úteis são tratadas por desinfecção das sementes, por pulverização foliar ou por aplicação no solo com um ou mais compostos, que foram identificados com ajuda do microarranjo de DNA e/ou compostos, já conhecidos como antídotos.
São preferidos, nesse caso, compostos, que em seu uso como chamados antídotos, já são conhecidos como defensivos, tais como do grupo dos compostos conhecidos como antídotos, que consistem nos compostos das fórmulas 1-1 (mefenpr-dietílico), I-9 (isoxadifeno-etílico), 11-1 (cloquintocet- mexílico), b-11 (fenclorim), b-14 (dimrona), VIII-3 (4-ciclopropilaminocarbonil- N-(2-metoxibenzoil)benzenossulfonamida), de modo especialmente preferido, os compostos 1-1 e VIII-3 (4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxiben- zoil)benzenossulfonamida)).
Por aplicação individual ou combinada dos compostos citados acima, as plantas economicamente úteis podem ser protegidas eficientemente em relação aos efeitos de fatores de estresse abióticos, o que se traduz, por exemplo, também em produtividade mais alta. É, portanto, também um objeto da presente invenção um processo para aumentar a tolerância de plantas economicamente úteis em culturas de plantas economicamente úteis em relação a fatores de estresse abióticos, por aplicação individual ou combinada dos compostos identificados com ajuda do microarranjo de DNA, sob observação dos perfis de expressão dos genes, e/ou compostos já conhecidos como antídotos. Os exemplos abaixo descrevem a invenção em detalhe.
Exemplo 1
Comprovação do efeito de antídotos sobre plantas, que foram expostas a condições de estresse por seca específicas, por perfil de expressão de genes (GEP):
Fator de estresse abiótico = estresse por seca
Sementes de milho da variedade Lorenzo foram tratadas com o composto 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxibenzoÍI)benzossulfonamida (= VIII-3). Para esse fim, 10 g de sementes foram incubadas, sob leve agitação, com 20 mg de substância ativa, dissolvidos em 2 ml de cloreto de meti- leno, até a evaporação do solvente (cerca de 30 minutos). As sementes do grupo de controle foram tratadas apenas com solvente. Subseqüentemente, as sementes tratadas foram colocadas em vasos com terra (diâmetro: 10 cm, 10 sementes por vaso) e as plantas novas de milho foram cultivadas por 10 dias em uma câmara climática; soh condições de hjz, umidade e temperatura definidas [luz branca, dia longo (16 h de claridade, 8 h de escuridão), 70% de umidade do ar, 24°C]. Foram usados, em cada caso, 2x10 vasos para os grupos de controle e para o teste de estresse por seca. Durante o cultivo, as plantas foram irrigadas, a cada dois dias, por 20 minutos, por baixo, por elevação do nível de água em uma bandeja. 10 dias depois da germinação das sementes, as plantas de milho foram expostas ao estresse por seca. Para esse fim, as plantas do grupo de controle 1 (sem tratamento de substância ativa) e do grupo de teste (com tratamento de substância ativa) só foram irrigadas a cada 7 dias, tal como descrito acima. Nas plantas do grupo de controle 2 (sem tratamento de substância ativa) e do grupo de teste 2 (com tratamento de substância ativa), o esquema de irrigação normal foi mantido. Depois de 3 semanas de condições de estresse por seca, o teste foi avaliado tal como se segue. As partes de plantas aéreas foram cortadas e secadas a 50°C durante a noite. No dia seguinte, a massa foliar foi determinada por vaso (massa seca) em [g].
Foi tirada a média dos valores de medição sobre os respectivos 10 vasos do grupo de plantas. Os valores numéricos indicados na tabela 1 são valores relativos em [%], com referência aos resultados de medição do grupo de controle 2 (sem tratamento de substância ativa, esquema de irrigação normal).
Figure img0011
Tabela 1: Teste de estresse por seca com plantas de milho, sem e com tratamento de substância ativa S = composto Vlll-3 (= 4=ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxibenzoil) ben- zenossulfonamida), T = estresse por seca
A massa seca média foi igual em plantas de sementes não tratadas e tratadas, sem condições de estresse (grupo de controle 2, grupo de teste 2).
As plantas do grupo com tratamento com composto viii~3(= 4=ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxibenzoil)benzenossulfonamida), mostraram, em média, um hábito mais compacto do que as plantas do grupo de controle, mas que não se refletiu sobre a massa seca. Sob estresse por seca, porém, a massa foliar média (massa seca) das plantas tratadas com substância ativa foi significativamente mais alta, em relação às plantas de controle não tratadas (grupo de controle 1, grupo de teste 1).
Exemplo 2
Fator de estresse abiótico = estresse por calor Sementes de milho da variedade Lorenzo foram tratadas, tal como no exemplo 1, com o composto 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-meto- xibenzoil)benzossulfonamida (- Vlll-3) ou tratadas apenas com solvente, sem substância ativa. O cultivo das plantas novas deu-se por 10 dias em uma câmara climática, sob condições definidas, igualmente tal como descrito no exemplo 1. Para o teste de estresse por calor, foram usados 2x10 vasos com plantas de milho. O grupo de controle consistiu em planta não tratadas (solvente), o grupo de teste, em plantas tratadas com substância ativa. Para aplicação das condições de estresse de calor, os dois grupos de plantas fo-ram colocados por 2 dias em uma estufa a 45°C, luz branca, dta longo (16 ti de claridade, 8 h de escuridão)e 70% de umidade do ar. Para evitar uma dessecação pela alta temperatura, as plantas foram irrigadas 1 x por dia, por baixo, por elevação do nível de água em uma bandeja. Depois do estresse por calor, pôde ser observado que - particularmente no grupo estavam deitadas, achatadas sobre o solo. O teste foi avaliado quantitativamente de acordo com os seguintes critérios.
Depois do tratamento com calor, as plantas tombadas foram contadas e o resultado foi avaliado por vaso: < 20% das plantas emergidas tombadas: danificação fraca O 20-50% das plantas emergidas tombadas: danificação média • > 50% das plantas emergidas tomadas: danificação forte • Subseqüentemente, todas as plantas foram cultivadas por 2 semanas, sob condições normais. Depois, foi medido o acréscimo de compri- 5 mento das plantas individuais e a taxa de sobrevivência das plantas por vaso foi determinada: < 50% de taxa de sobrevivência: danificação fraca 20-50% de taxa de sobrevivência: danificação média < 20% de taxa de sobrevivência: danificação forte 10 Os resultados da avaliação de teste estão resumidos na tabela 2. As plantas de controle não tratadas foram fortemente danificadas pelo estresse por calor. Chamou a atenção, particularmente, o tombamento das mudas na maioria das plantas, bem como a pequena taxa de sobrevivência. As plantas de teste tratadas com substância ativa distinguiram-se, particu- 15 larmente, por um melhor condição. Embora também nessas plantas a danificação pelo forte estresse por calor ficasse nítido na avaliação final, a taxa de sobrevivência foi significativamente mais alta do que no grupo de controle.
Figure img0012
Tabela 2: Teste de estresse por seca com plantas de milho, sem e com tratamento de substância ativa S - 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxibenzoil)benzossulfonamida (- VIII-3). H = ARtrARRP nnr nalnr
Exemplo 3
Fator de estresse abiótico = estresse por frio (estufa) Sementes de milho da variedade Lorenzo foram semeadas em vasos de 10- cm em terra, com, em cada caso, 10 sementes por vaso. Todos os grupos de teste consistiam em, em cada caso, 4 vasos. As sementes semeadas dos grupos de teste 1 e 2 foram pulverizadas na pré-emergência com 50 ou 100 [g.a.i./ha] do composto 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2- metoxibenzoil)benzossulfonamida (= VIII-3). As sementes do grupo de controle permaneceram sem tratamento. As plantas foram cultivadas sob condições controladas na câmara climática [luz branca (dia longo: 16 h de claridade, 8 h de escuridão), 22% C de temperatura durante o dia, 14°C de temperatura durante a noite, 60% de umidade do ar].
Depois da germinação, quando as plantas atingiram uma altura de cerca de 1 cm, 2 vasos de cada grupo foram incubados por 6 h em uma outra câmara climática, sob condições de estresse por frio, a -2°C. Subse- qüentemente, essas plantas foram novamente colocadas junto às outras, na primeira câmara climática.
Depois de mais 24 horas sob condições normais, o teste foi avaliado. Pôde ser observado que o estresse por frio provocou cloroses nas pontas das folhas das plantas novas do grupo de controle não tratado. Esses sintomas não foram observados nas plantas tratadas com substância ativa, ou apenas de modo muito limitado.
Todas as plantas dos grupos de teste e do grupo de controle, que foram mantidas exclusivamente sob condições normais, sem estresse por frio, não apresentaram quaisquer sintoma da danificação.
Para a avaliação quantitativa do teste, foram contadas as plantas com manchas claras nas pontas das folhas. O número total das plantas por grupo de teste e tratamento com estresse por frio era de 20, distribuído, em cada caso, entre 2 vasos.
Os resultados da avaliação do teste estão resumidos na tabela 3.
Figure img0013
Tabela 3: Teste de estresse por frio (estufa) com plantas de milho, sem e com tratamento de substância ativa, com o composto VIII-3 (= 4-ciclopropila- minocarbonil-N-(2-metoxibenzoil)benzossulfonamida), na pré-emergência, õ Todas as plantas foram exposta ao tratamento de estresse por frio. O número total de plantas por grupo perfez 20.
Os resultados mostram que o tratamento com tratamento de substância ativa com o composto VIII-3 (= 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2- metoxibenzoil)benzossulfonamida), pode reduzir nitidamente os sintomas de 10 danificação causados pelo estresse por frio ou, em dosagem mais alta, impedir totalmente a ocorrência desses sintomas.
Exemplo 4
Fator de estresse abiótico = estresse por frio (no campo) Sementes de milho (Dent Corn) foram tratados com 0,003 mg e 15 0,03 mg do composto 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxibenzoil) benze- nossulfonamida (=VIII-3) por g de semente e semeadas, em cada caso, sobre parcelas de teste de 34 m2. Uma parcela de controle continha material de sementes não tratado. Cerca de 8 dias após a emergência das sementes, as mudas estavam no estágio de uma folha e foram expostas por 5 dias às 20 seguintes condições de temperatura:
Figure img0014
Depois desse período de frio, as parcelas de teste foram avalia- das. Nesse caso, todas as plantas foram avaliadas individualmente e as plantas com pelo menos 20% de sintomas de frio, com relação a toda a superfície da folha (queimaduras e/ou cloroses), foram avaliadas como danificadas.
Os resultados estão resumidos na tabela 4. Na parcela de con trole, sem tratamento de substância ativa, todas as plantas (100%) mostraram os sintomas de frio descritos. Nas parcelas de teste com tratamento de substância ativa, os danos por frio foram reduzidos significativamente. Nesse caso, só ainda em cerca de 12 das plantas puderam ser observados sinto- 10 mas de dano. O efeito de proteção contra geada máximo foi obtido no âmbito das quantidades de tratamento de substância ativa, indicado na tabela.
Figure img0015
Tabela 4: Teste de estresse por frio (no campo) com plantas de milho, sem e com tratamento de substância ativa, com o composto Vlll-3 (= 4-ciclopropila- minocarbonil-N-(2-metoxibenzoil)benzossulfonamida) 15 *: Proporção das plantas com danos por frio > 20%, com relação ao número total da plantas na parcela de teste
Exemplo 5
Caracterização de genes, que são induzidos sob condições de estresse abiótico pelas substâncias de teste, por perfil de expressão de ge- 20 nes (GEP)
Sementes de milho da variedade Lorenzo foram tratados, tal como descrito no exemplo 1, com o composto Vlll-3 (= 4-ciclopropilaminocarbonil-N- (2-metoxibenzoil)benzossulfonamida) ou com solvente. As plantas foram cultivadas por 10 dias em uma câmara climática (condições: veja exemplo 1). Subseqüentemente. as plantas foram expostas às seguintes condições de estresse: (1) estresse por calor: 6 h a 45°C (2) estresse por seca: 7 dias sem irrigação, 24°C
As plantas de controle do respectivo grupo experimental foram mantidas sob as condições normais descritas no exemplo 1 (temperatura, irrigação). Depois do tratamento de estresse, as folhas das plantas estressadas, bem como das plantas de controle não estressadas, foram colhidas, refrigeradas por choque em nitrogênio líquido e armazenadas até o processamento a -80°C. Todos os testes foram realizados em réplicas, com, em cada caso, 2 vasos.
A produção das sondas de RNA marcadas para a hibridização de chip de DNA deu-se de acordo com os protocolos (Expression Analysis, Technical Manual) de Affymetrix (Affymetrix Inc., 3380 Central Expressway, Santa Clara, CA, USA). De cada 500 mg das folhas colhidas foi isolado, primeiramente, o RNA total. Cada 10 μg do RNA total foram usados para a síntese de cDNA de uma espiral e duas espirais. O cDNA foi amplificado com polimerase de T7 e, nesse caso, marcado, simultaneamente, com biotina UTP. Cada 20 μg desse cDNA biotinilado foram usados para a hibridização do arranjo de genoma de milho da empresa Affymetrix. Esse microarranjo de DNA contém seqüências de DNA, que representam em sua totalidade, 13339 genes. Subseqüentemente, os microarranjos de DNA foram lavados na Affymetrix Fluidics station, tingidos com estraptavidina/ficoeritrina (Molecular Probes, P/N S-866) e escaneados com o escaneador de laser agiletn (Agilent Gene Arranjo Scanner). Os dados de fluorescência obtidos foram analisados com o software Microarranjo Suíte 5 de Affymetrix. Depois de realizado o controle de qualidade, todas as análises de chip de DNA foram armazenados em um banco de dados. Para determinação de valores de ex-pressão relativos (fatores de indução, de repressão), os valores de expressão absolutos dos genes das respectivas experiências de estresse foram comparados com os valores dos respectivos testes de controle (isto é, sem estresse abiótico e tratamento apenas com solvente) e, nesse caso, usados como base os critérios de sionificância esoecifinados neln software da Affv- metrix. Dos 4 valores de expressão por gene, em cada caso, obtidos desse 5 modo, foi calculada a média por número médio. Essas médias estão indicadas como fatores de indução nas tabelas de resultados. Comparações de similaridade de perfis de expressão de diversas experiências e análises de agrupamento foram realizadas com o software "Genedata Expressionist" de Genedata (Genedata, Maulbeerstr. 46, CH-4016, Basiléia, Suíça).
Na análise dos perfis de expressão procurou-se, especialmente, por genes que pelas substâncias de teste são induzidos apenas em associa- ção com estresse abiótico, mas não pelas substâncias sozinhas ou pelo estresse sozinho. Alguns genes podem ser vistos como indicadores para efeitos antiestresse adicionais das substâncias, que vão além do efeito fitoprote- 15 tor já conhecido. Os resultados das análises são apresentados nas tabelas abaixo. O padrões de indução dos genes indicadores descritos permitem a detecção dirigida de substâncias ativas para aumento da tolerância de estresse abiótico em plantas de cultura. a) Sob condições de estresse por calor, isto é, as plantas de 20 milho testadas (com 2 mg a.i./g de sementes tratadas com 4-ciclopropila- minocarbonil-N-(2-metoxibenzoil)benzossulfonamida) foram expostas 7 dias oepois oa qerm maçao por o noras a urna lemperarura oe
Um exame dos grupos de genes induzidos deu o seguinte padrão, reproduzido na tabela 5
Figure img0016
O respectivo conjunto de amostras corresponde a: Zm.11840.1.A1_em: N-carbamil-L-aminoácido amidoidrolase putativo Zm.4274.1 .Sl_at: citocromo P450 Zm.3040.1.31. at: uncase II (E.C.1.7.3.3); uricase específica de nóduio Zm12587.1 ,S1 .s_at: transferase de glicosila Zm18994.2.A1_at: transferase de serina putativa Zm.13498.1.S1_at: proteína de membrana Condição A: estresse por calor (6 horas, 45°C)
Condição B: semente tratada com 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxi- benzoil)benzossulfonamida (VHI-3)/SEM estresse por calor
Condição C: semente tratada com 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxi- benzoil)benzossulfonamida (Vlll-3) + estresse por calor (6 horas, 45°C)
Desse modo, mesmo a uma leve indução básica das atividades dos genes analisadas, foi observado um nítido aumento da expressão dos genes, que, no caso dos genes aqui citados, situa-se no âmbito de 1,5 a 2,35 (expressão sob condição C/expressão sob condição A). Quando o composto Vlll-3 testado foi testado sozinho, isto é, sem estresse por calor, então os níveis de expressão medidos situaram-se no âmbito do âmbito induzido por estresse por calor, ou abaixo ou levemente acima do âmbito induzido por estresse por calor.
Os padrões de indução, derivados da tabela 5, que são representados diretamente pelos valores de expressão obtidos, mostram induções características por ação do composto 4-ciclopropifaminocarbonil-N-(2- metoxibenzoii)benzossuifonamida (=VÍII-3), sendo que o efeito está mais fortemente acentuado sobre a amidoidrolase de N-carbamil-L-aminoácido putativa (Zm.18840.1 .A1_at] e sobre a carboxipeptidase de serina putativa (Zm18994.2. A1_at). b) Sob condições d estresse por seca, isto é, as plantas de milho testadas (2 mg a.i./g de sementes tratadas com 4-ciclopropilaminocar- bonil-N-(2-metoxibenzoil)benzossulfonamida), foram expostas 7 dias depois da germinação por 7 horas, a uma temperatura de 24°C.
Um exame dos grupos de genes induzidos deu o seguinte pa- drão, representado na tabela 6
Figure img0017
O respectivo conjunto de amostras corresponde a: proteína de estresse universal proteína induzida por ferimento semelhante à proteína reguladora proteína de resistência á doença do tipo NBS-LRR 02 (fragmento) similar a AT3G10120 hemoglobina não simbiótica (HBT) (ZEAMP GLB1) proteína expressada proteína expressada proteína desconhecida
Condição A: estresse por seca (7 dias, 24°C) Condição B: semente tratada com 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxi- benzoil)benzossulfonamida (VIII-3)/SEM estresse por seca Condição C: semente tratada com 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxi- benzoil)benzossulfonamida (VIII-3) + estresse por seca (7 dias, 24°C)
Desse modo, mesmo a uma ieve indução básica das atividades dos genes analisadas, foi observado um nítido aumento da expressão dos genes, que, no caso dos genes aqui citados, situa-se no âmbito de 1,75 a 8,0 (expressão sob condição C/expressão sob condição A). Quando o composto VIII-3 testado foi testado sozinho, isto é, sem estresse por seca, então os níveis de expressão medidos situaram-se no âmbito do âmbito induzido por estresse por seca, ou abaixo ou levemente acima do âmbito induzido por pctroççp nnr cora alminc racnc ahaivn da pYnrpeeân HP nlantac nãn aetroQ- I , —o f“- | ■ ~ sadas a vaiores de < 1,0k ' f
Os padrões de indução, derivados da tabela 6, que são representados diretamente pelos valores de expressão obtidos, mostram induções características na presença do composto 4-ciclopropilaminocarbonil-N- (2-metoxibenzoil)benzossulfonamida, sendo que o efeito está mais fortemente acentuado sobre a proteína de estresse universal [Zm.818.1 .A1_at] e he- moglobína não simbiótica (HBT) (ZEAMP GLB1) [Zm.485.1 ,Al_at],

Claims (5)

1. Uso de compostos, cujo uso já é conhecido como antídotos em proteção de culturas, selecionados do grupo consistindo em mefenpir- dietílico, isoxadifen-etílico e 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metóxi- benzoil)benzossulfonamida, caracterizado pelo fato de que é para aumento da produtividade em plantas de cultura pelo aumento da tolerância ao estresse por aridez e/ou calor.
2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os compostos são selecionados do grupo que consiste em mefenpir- dietílico e 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metóxi- benzoil)benzossulfonamida.
3. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que é para aumento da produtividade pelo aumento da tolerância ao estresse por aridez e/ou calor nas plantas de cultura de milho, trigo, cevada, centeio, aveia, arroz, soja, girassol, colza e beterraba.
4. Processo para aumentar produtividade em plantas de cultura, que são expostas ao estresse por aridez e/ou calor, caracterizado pelo fato de que compreende tratar as plantas economicamente úteis por tratamento das sementes, por pulverização foliar ou por aplicação no solo, com um ou mais compostos selecionados do grupo consistindo em mefenpir-dietílico, isoxadifen-etílico e 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metóxi- benzoil)benzossulfonamida.
5. Processo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que os compostos são selecionados do grupo que consiste em mefenpir-dietílico e 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metóxi- benzoil)benzossulfonamida.
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