BRPI0619386A2 - substáncias ativas para aumentar a defesa contra estresse em plantas, em relação ao estresse abiótico, e métodos para detectar as mesmas - Google Patents

Abstract

SUBSTáNCIAS ATIVAS PARA AUMENTAR A DEFESA CONTRA ESTRESSE EM PLANTAS, EM RELAçãO AO ESTRESSE ABIóTICO, E MéTODOS PARA DETECTAR AS MESMAS. A presente invenção refere-se a um processo para detectar compostos, que aumentam a tolerância de plantas em relação a fatores de estresse abióticos, que atuam sobre essa planta, tais como, por exemplo, temperatura (frio, geada ou calor), água (tal como seca, aridez ou anoxia), ou o tratamento químico (tal como deficiência ou excesso de sais minerais, metais pesados, agentes nocivos gasosos), por aumento da expressão de proteínas endógenas das planas, bem como ao uso desses compostos, para aumentar a tolerância das plantas em relação a fatores de estresse abióticos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "SUBSTÂNCIAS ATIVAS PARA AUMENTAR A DEFESA CONTRA ESTRESSE EM PLANTAS, EM RELAÇÃO AO ESTRESSE ABIÓTICO, E MÉTODOS PARA DETECTAR AS MESMAS".

A presente invenção refere-se a um processo para detectar compostos, que aumentam a tolerância de plantas em relação a fatores de estresse abióticos, que atuam sobre essas plantas, tais como, por exemplo, temperatura (tal como frio, geada ou calor), água (tal como seca, aridez ou anoxia) ou carga química (tal como deficiência ou excesso de sais minerais, metais pesados, agentes nocivos gasosos), por aumento da expressão de proteínas endógenas das plantas, bem como ao uso desses compostos para aumento da tolerância das plantas em relação a fatores de estresse abióti- cos.

É conhecido que plantas reagem a condições de estresse natu- rais, tais como, por exemplo, frio, calor, seca, ferimentos, ataque de agentes patogênicos (vírus, bactérias, fungos, insetos) etc., mas também a herbici- das, com mecanismos de defesa específicos ou não específicos [Planzenbi- ochemie, p. 393-462, Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg, Berlim, Oxford, Hans W. Heldt, 1996; Biochemistry and Molecular'Biology of Plants, p. 1102-1203, American Society of Plant Physiologists, Rockville, Maryland, eds. Buchanan, Gruíssem, Jones, 2000].

Em plantas são conhecidos numerosas proteínas e genes que codificam as mesmas, que participam das reações de defesa contra estresse abiótico (p.ex., frio, calor, seca, sal). Os mesmos pertencem, em parte, a cadeias de transdução de sinais (por exemplo, fatores de transcrição, quina- ses, fosfatases) ou causam uma resposta fisiológica da célula vegetal (por exemplo, transporte de íons, desintoxicação de espécies de oxigênio reati- vas). Aos genes de cadeia de sinais da reação de estresse abiótica perten- cem, entre outros, fatores de transcrição das classes DREB e CBF (Jaglo- Ottosen et al., 1998, Science 280: 104-106). Na reação ao stress por sal par- ticipam fosfatases do tipo ATPK e MP2C. Além disso, no estresse por sal, freqüentemente é ativada a biossíntese de osmólitos, tais como prolina ou sucrose. Participam, nesse caso, por exemplo, os transportadores de sintase de sucrose e prolina (Hasegawa et al., 2000, Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol 51: 463-499). A resistência ao estresse das plantas contra frio e se- ca utiliza, em parte, os mesmos mecanismos moleculares. É conhecida a acumulação de chamadas Late Embryogenesis Abundant Proteins (Proteí- nas LEA), às quais pertencem como classe importante as deidrinas (Ingram e Bartels, 1996, Annu Rev Plant pHysiol Plant Mol Biol 47: 277-403, Close, 1997, Physiol Plant 100: 291-296). Trata-se, nesse caso, de acompanhan- tes, que estabilizam vesículas, proteínas e estruturas de membrana em plan- tas estressadas (Bray, 1993, Plant Physiol 103: 1035-1040). Além disso, o- corre, freqüentemente, uma indução de deidrogenases de aldeído, que de- sintoxicam espécies de oxigênio reativas (ROS), formadas no estresse oxi- dativo (Kirch et al., 2005, Plant Mol Biol 57: 315-332). Fatores de Choque Térmico (HSF) e Proteínas de Choque Térmico (HSP) são ativados no es- tresse por calor e, como acompanhantes, desempenham, nesse caso, um papel semelhante como as deidrinas no estresse de frio e seca (Yu et al., 2005, Mol Cells 19: 328-333).

A maioria dos mecanismos moleculares descritos são ativados por indução da expressão de genes. Desse modo, apresenta-se a possibili- dade interessante de caracterizar respostas a estresse específicas de plan- tas, com ajuda da análise de transcrição, por exemplo, por Gene Expression Profiling (GEP) com microarranjos de DNA ou técnicas comparáveis (Ren- sink et al., 2005, Genome 48: 598-605, Cheong et al., 2002, Plant Fysiology 129: 661-677). Desse modo, podem ser detectados padrões de expressão de genes reativos a estresse, específicos, e comparar um com o outro.

É conhecido, ainda, que substâncias químicas podem aumentar a tolerância de plantas contra estresse abiótico. Essas substâncias são apli- cadas, nesse caso, por desinfecção de sementes, por pulverização de folhas ou por tratamento do solo. Desse modo, é descrito um aumento da tolerân- cia a estresse abiótico de plantas de cultura por tratamento com agentes de ativação da Systemic Acquired Resistance (SAR) ou derivados de ácido abscisínico (Schading e Wei, WO-200028055, Abrams e Gusta1 US-5201931, Churchill et al., 1998, Plant Growth Regul 25: 35-45).

Também são observados efeitos similares no uso de fungicidas, particularmente, do grupo das estrobilurinas, que, freqüentemente, também estão associados a um aumento de produtividade (Draber et al., DE-3534948, Bartlett et al, 2002, Pest Mang Sci 60: 309).

Além disso, foram descritos efeitos de reguladores de cresci- mento sobre a tolerância ao estresse de plantas de cultura (Morrison e An- drews, 1992, J Plant Growth Regul 11: 113-117, RD-259027). No estresse osmótico foi observado um efeito protetor por aplicação de osmólitos, tais como, por exemplo, betaína de glicina ou seus precursores bioquímicos, por exemplo, derivados de colina (Chen et al., 2000, Plant Cell Environ 23: 609-618, Bergmann et al., DE-4103253). Também já foi descrito o efeito de antioxidantes, tais como, por exemplo, naftóis e xantinas, para aumento da tolerância ao estresse abiótico em plantas (Bergmann et al., DD-277832, Bergmann et al., DD-277835). As causas moleculares do efeito anti-estresse dessas substân- cias, porém, ainda são substancialmente desconhecidas.

É conhecido, portanto, que as plantas dispõem de diversos me- canismos de reação endógenos, que podem causar uma defesa eficiente em relação aos mais diversos organismos nocivos e/ou contra o estresse abióti- co natural. Mas, até o presente, ainda não é conhecida nenhuma previsão de quais reações de defesa podem ser provocadas ou moduladas de modo dirigido pela aplicação de substâncias ativas.

Existe, portanto, uma necessidade de um método para a desco- berta dirigida de ativadores moleculares de mecanismos de defesa endóge- nas nas plantas em relação ao estresse abiótico (tal como, por exemplo, ca- lor, frio, seca, salinidade, bem como carga por ácidos e bases), pelos quais podem ser descobertas substâncias ativas novas, identificadas novas pro- priedades de substâncias ativas conhecidas, mas com outros efeitos, ou, então, otimizadas moléculas já conhecidas ou estruturas de orientação sobre o uso como indutores dos mecanismos de defesa endógenas das plantas em relação a fatores de estresse abiótico. Definições de Termos Utilizados a Seguir

O termo "análises de Blast" (Blast = Basic Local Alinhamento Search Tool"), tal como utilizado no presente, descreve o uso de programas de computador apropriados, para a classificação e para a descoberta de se- qüências potencialmente homólogas (Altschul et al., J. Mol. Biol. 1990, 215: 403-410), sendo que se dá uma comparação (alinhamento) entre uma se- qüência de busca (seqüência de investimento) e todas as seqüências de um ou mais bancos de dados, sob a especificação de uma coincidência deseja- da, na forma de um "critério de significância" (função de classificação) (R. Rauhut, Bioinformatik, S 38-107, Verlag WiIey-VCH Verlag GmbH, Wei- nheim, 2001).

O termo "cDNA" (complementary DNA), tal como utilizado no presente, descreve uma hélice individual de DNA, que é complementar a um RNA, e que é sintetizado in vitro por uma transcrição inversa enzimática. O cDNA pode corresponder a todo o comprimento do RNA1 ou então represen- tar apenas uma seqüência parcial do RNA que serve como matriz.

O termo "análise de agrupamento", tal como utilizado no presen- te, significa uma reunião dos dados individuais determinados por meio de um programa de computador, desenvolvido para esse fim, sendo que grupos de genes, que codificam proteínas com função semelhante, ou então genes com padrão de expressão similar são representados em combinação. Desse modo, é obtida uma minimização hierárquica do padrão de dados comple- xos, que pode ser representado na forma de um dendrograma. A análise de agrupamento possibilita a avaliação classificadora dos conjuntos de dados obtidos, que vai nitidamente além da mera acumulação de dados não rela- cionados.

Pelos termos "DNA-Chip" e "DNA-Microarranjo", que são utiliza- dos, aqui, como sinônimos, é designado um suporte, cujo material básico consiste, por exemplo, em vidro ou náilon, sendo que sobre esse material básico estão fixados fragmentos de DNA, sendo que a aplicação do DNA pode dar-se por (a) um processo fotolitográfico (o DNA é sintetizado direta- mente sobre o suporte de arranjo), (b) um processo de micromancha (oligo- nucleotídeos sintetizados externamente ou produtos de PCR são aplicados sobre o suporte e ligados de modo covalente) ou (c) por um processo de micropulverização (oligonucleotídeos sintetizados externamente ou produtos de PCR são pulverizados, sem contato, sobre o suporte, por meio de uma impressora de jato de tinta) (R. Rauhut, Bioinformatik, p. 197-199, Verlag Wiley-VCH Verlag GmbH, Weinheim, 2001). Um chip de DNA, que represen- ta as superfície de esbarro genômicas de um organismo, é designado como "chip de DNA genômico". A avaliação dos valores de medição obtidos com ajuda desse "chip de DNA" é designado como "análise de chip de DNA".

O termo "hibridização de chip de DNA", tal como utilizado no presente, significa a formação de pares de duas moléculas de ácido nucléico complementares, de uma espiral, sendo que um dos componentes de molé- cula do par de base está localizado como DNA (ácido desoxirribonucléico) sobre o chip de DNA, em uma forma de preferência ligada de modo covalen- te, enquanto o outro se apresenta em solução, na forma do RNA (ácido ribo- nucléico) ou cDNA (DNA complementar) correspondente ao mesmo. A hibri- dização dos ácidos nucléicos ligados e não ligados dá-se sobre o chip de DNA em solução de tampão aquosa, opcionalmente, sob condições adicio- nalmente desnaturadoras, tal como, por exemplo, na presente de sulfóxido dimetílico, a temperaturas de 30-60°C, de preferência, 40-50°C, de modo particularmente preferido, a 45°C, por 10-20 horas, de preferência, por 14-18 horas, de modo particularmente preferido, por 16 horas, sob movimento constante. As condições de hibridização podem ser realizadas de modo constante, por exemplo, em um forno de hibridização. Normalmente, são realizadas nesse forno de hibridização movimentos de 60 rpm (rounds per minute, revoluções por minuto).

A seqüência de ácido nucléico designada com o termo "seqüência de EST" (Expressed Sequence Tag), tal como utilizado no presente, significa uma seqüência curta, de 200-500 bases ou pares de bases.

Os termos "padrão de expressão", "padrão de indução" ou "perfil de expressão", usados como sinônimos, tais como utilizados no presente, descrevem a expressão temporalmente diferenciada e/ou específica de teci- do do mRNA vegetal, sendo que o padrão é obtido diretamente pela intensi- dade do sinal produzido de hibridização do RNA obtido da planta ou de seu cDNA correspondente, com ajuda da tecnologia de chip de DNA. Os "valores de indução" medidos resultam do cálculo direto com os sinais corresponden- tes, que são obtidos pelo uso de um chip sinônimo, sob hibridização com uma planta de controle não tratada/estressada.

O termo "estado de expressão", que é obtido pela "Gene Expression Profiling" realizado, tal como utilizado aqui, descreve toda a atividade de transcri- ção detectada de genes celulares, que é medida com ajuda de um chip de DNA.

O termo "RNA total", tal como utilizado no presente, descreve a representação possível, devida ao processo de desintegração utilizado, de diversos grupos de RNA endógenas das plantas, que podem estar presentes em uma célula das plantas, tais como, por exemplo, rRNA citoplasmático (RNA ribossomal), tRNA citoplasmático (RNA de transferência), mRNA cito- plasmático (RNA mensageiro), bem como seus precursores nucleares, CtR- NA (RNA cloroplastidário) e mtRNA (RNA mitocondrial), mas ela compreen- de, também, moléculas de RNA que podem originar-se de organismos exó- genos, tais como, por exemplo, de vírus ou bactérias e fungos parasitários.

O termo "plantas economicamente úteis", tal como utilizado no presente, designa plantas de cultura, que são usadas como plantas para a obtenção de alimentos, rações ou para fins técnicos.

O termo "fitoprotetor", tal como utilizado no presente, designa um composto químico, que não é de origem endógena da planta, e que su- prime ou reduz as propriedades fitotóxicas de um pesticida em relação a plantas economicamente úteis, sem que o efeito pesticida em relação a orga- nismos nocivos, tais como, por exemplo, ervas daninhas, bactérias, vírus e fungos, seja substancialmente reduzido.

Antídotos, que além de sua função, em si conhecida, também contribuem para aumento da tolerância em relação a fatores de estresse abióticos, são escolhidos, de preferência, do grupo definido abaixo, sendo que a escolha pode dar-se de modo diferente, dependendo do agente de estresse abiótico, sendo que pode dar-se o uso de apenas um único fitopro- tetor ou então de vários antídotos do mesmo grupo ou de grupos diferentes: a) Compostos das fórmulas (I) a (III)

<formula>formula see original document page 8</formula>

sendo que os símbolos e os índices têm os seguintes significados:

n' é um número natural de O a 5, de preferência, O a 3;

T é uma cadeia de (C1 ou C2)-alcandiila, que é não substituída ou está substituída com um ou dois radicais de (C1-C4)-alquila ou com [(C1- C3)-alcóxi]-carbonila;

W é um radical héterocíclico divalente, não substituído ou substi- tuído, do grupo os heterociclos cinco-anelares, parcialmente insaturados ou aromáticos, com 1 a 3 átomos heteroanelares do tipo N ou O, sendo que pelo menos um átomo de N e, no máximo, um átomo de O estão contidos no anel, de preferência, um radical do grupo (W1) a (W4)

<formula>formula see original document page 8</formula>

m' é O ou 1;

R17, R19, são, de modo igual ou diferente, halogênio, (C1-C4)- alquila, (C1-C4)-alcóxi, nitro ou (C1-C4)-haloalquila;

R18, R20 são iguais ou diferentes e são OR24, SR24 ou NR24R25 ou um heterociclo de 3 a 7 membros, saturado ou insaturado, com pelo me- nos um átomo de n e até 3 heteroátomos, de preferência, do grupo O e S, que através do átomo de N está ligado com o grupo carbonila em (II) ou (III), e está não substituído ou substituído por radicais do grupo (c1-c4)-alquila, (c1-c4)-alcóxi ou fenila, opcionalmente, substituída, de preferência, um radi- cal da fórmula OR24, NHR25 ou N(CH3)2, particularmente da fórmula OR24;

R24 é hidrogênio ou um radical de hidrocarboneto alifático, não substituído ou substituído, de preferência, com, no total, 1 a 18 átomos de C;

R25 é hidrogênio, (C1-C6)-alquila, (C1-C6)-alcóxi ou fenila substi- tuída ou não substituída;

Rx é H, (C1-C8)alquila, C1-C8(haloalquila), (C1-C4)alcóxi(C1-C8) alquila, ciano ou COOR26, onde R26 é hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8) ha- loalquila, (C1-C4)alcóxi-(C1-C4)alquila, (C1-C6)hidroxialquila, (C3-C12) cicloal- quila ou tri(C1-C4)alquilsilila;

R27, R28, R29 são iguais ou diferentes e são hidrogênio, (C1-C8) alquila, (C1-C8)IiaIoaIquiIa, (C3-C12)CiCloalquila ou fenila substituída ou não substituída;

R21 é (CrC4)alquila, (C1-C4)haloalquila, (C2-C4)alquenila, (C2-C4) haloalquenila, (C3-C7)cicloalquila, de preferência, diclorometila;

R22, R23 são iguais ou diferentes e são hidrogênio, (C1-C4)alquila, (C2-C4) alquenila, (C2-C4)alquinila, (CrC4)haloalquila, (C2-C4)haloalquenila, (C1-C4)alquilcarbamoil-(C1-C4)alquila, (C2-C4)alquenilcarbamoil(C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi-(CrC4)alquila, dioxolanil(C1-C4)alquila, tiazolila, furila, furilalqui- la, tienila, piperidila, fenila substituída ou não substituída, ou R22 e R23, em conjunto, formam um anel heterocíclico, substituído ou não substituído, de preferência, um anel de oxazolidina, tiazolidina, piperidina, morfolino, hexai- dropirimidina ou benzoxazina;

b) um ou mais compostos do grupo que consiste em: 1,8- anidrido de ácido naftálico, metildifenil-metoxiacetato, 1-(2-clorobenzil)-

3-(1 -metil-1 -feniletil)uréia (cumilurona),

Ο,Ο-dietil S-2-etiltioetil ditioato de fósforo (dissulfotona),

4-clorofenil-metilcarbamato (mefenato), 0,0-dietil-0-fenil tioato de fósforo (dietolato),

30 4-carbóxi-3,4-diidro-2H-1-benzopiran-4-ácido acético (CL-304415, CAS-Reg. No: 31541-57-8),

cianometoxiimino(fenil)acetonitrila (ciometrinila), 1,3-dioxolan-2-ilmetoxiimino(fenil)acetonitrila (oxabetrinila), 4'-cloro-2,2,2-trifluoroacetofenona-0-1,3-clioxolan-2-ilmetiloxima (f Iuxof enima), 4,6-dicloro-2-fenilpirimidina (fenclorim), benzil-2-cloro-4-trifluorometil-1,3-tiazol-5-carboxilato (flurazol), 2-diclorometil-2-metil-1,3-dioxolano (MG-191),

N-(4-metilfenil)-N'-(1 -metil-1 -feniletil)uréia (dimrona), ácido (2,4-diclorofenóxi) acético (2,4-D), ácido (4-clorofenóxi) acético,

(R,S)-2-(4-cloro-o-tolilóxi)ácido propiônico (mecoprop), ácido 4-(2,4-diclorofenóxi) butírico (2,4-DB), ácido (4-cloro-o-tolilóxi) acético (MCPA), ácido 4-(4-cloro-o-tolilóxi) butírico, ácido 4-(4-clorofenóxi) butírico, 3,6-dicloro-2-metóxi-ácido benzóico (dicamba), 1-(etoxicarbonil)etil 3,6-dicloro-2-metoxibenzoato (IactidicIoro) e seus sais e ésteres, de preferência, (C1-C8);

c) N-acilsulfonamidas da fórmula (IV) e seus sais

<formula>formula see original document page 10</formula>

na qual

R30 é hidrogênio, um radical de hidrocarboneto, um radical óxi de hidrocarboneto, um radical tio de hidrocarboneto ou um radical de heteroci- clila, que está de preferência, ligado através de um átomo de C, sendo que cada um dos 4 radicais citados por última está não substituído ou substituído por um ou mais radicais iguais ou diferentes do grupo halogênio, ciano, nitro, amino, hidróxi, carbóxi, formila, carbonamida, sulfonamida e radicais dr fór- mula -Za-Ra,

sendo que cada parte de hidrocarboneto apresenta, de preferên- cia, 1 a 20 átomos de C e apresenta um radical R30, que contém C, inclusive substituintes, apresenta, de preferência, 1 a 30 átomos de C;

R31 é hidrogênio ou (C1-C4)-alquila, de preferência, hidrogênio,

ou

R30 e R31, junto com o grupo da fórmula -CO-N-são o radical de um anel de 3 a 8 membros, saturado ou insaturado;

R32 são iguais ou diferentes e são halogênio, ciano, nitro, amino, hidróxi, carbóxi, formila, CONH2, SO2NH2 ou um radical da fórmula -Zb-Rb;

R33 é hidrogênio ou (C-i-C4)-alquila, de preferência, H;

R34 é igual ou diferente, halogênio, ciano, nitro, amino, hidróxi, carbóxi, CHO, CONH2, SO2NH2 ou um radical da fórmula -ZcI-Rc;

Ra é um radical de hidrocarboneto ou um radical de heterociclila, sendo que cada um dos dois radicais citados por último está não substituído ou substituído por um ou mais radicais iguais ou diferentes do grupo halogê- nio, ciano, nitro, amino, hidróxi, mono- e di[(C1-C4)-alquil]-amino, ou um radi- cal alquila, no qual vários, de preferência, 2 ou 3, grupos CH2 não adjacen- tes estão, em cada caso, substituídos por um átomo de oxigênio;

Rb,Rc são iguais ou diferentes e são um radical de hidrocarbone- to ou um radical de heterociclila, sendo que cada um dos dois radicais cita- dos por último está não substituído ou substituído por um ou mais radicais iguais ou diferentes do grupo halogênio, ciano, nitro, amino, hidróxi,fosforila, halogênio-(C1-C4)-alcóxi, mono- e di[(C1-C4)-alquil]-amino, ou um radical al- quila, no qual vários, de preferência, 2 ou 3, grupos CH2 não adjacentes es- tão, em cada caso, substituídos por um átomo de oxigênio;

Za é um grupo divalente da fórmula -O-, -S-, -CO-, -CS-, -CO-O-, -CO-S-, -O-CO-, -S-CO-, -S0-, -SO2-, -NR*-, -CO-NR*-, -NR*-CO-, -SO2- NR*- ou -NR*-S02-, sendo que a ligação indicada à direita do respectivo grupo divalente é a ligação com o radical Ra e sendo que R* nos 5 radicais citados por último significa, independentemente um do outro, em cada caso, H, (C1-C4)-alquila ou halo-(C1-C4)-alquila;

Zb, Zc, independentemente um do outro, são uma ligação direta ou um grupo divalente da fórmula -O-, -S-, -CO-, -CS-, -CO-O-, -CO-S-, -O-CO-, -S-CO-, -S0-, -SO2-, -NR*-, -SO2-NR*-, -NR*-S02-, -CO-NR*- ou -NR*-CO-, sendo que a ligação indicada à direita do respectivo grupo diva- lente é a ligação com o radical Rb ou Rc e sendo que R* nos 5 radicais cita- dos por último significa, independentemente um do outro, em cada caso, H, (C1-C4)-alquila ou halo-(CrC4)-alquila;

η é um número inteiro de 0 a 4, de preferência, 0, 1 ou 2, espe- cialmente, 0 ou 1,e

m é um número inteiro de 0 a 5, de preferência, 0, 1, 2 ou 3, es- pecialmente, 0, 1 ou 2;

d) acilsulfamoilbenzamidas da fórmula geral (V), opcionalmente, também em forma de sal

<formula>formula see original document page 12</formula>

na qual

X3 é CH ou N;

R35 é hidrogênio, heterociclila ou um radical de hidrocarboneto, sendo que os dois radicais citados por último estão opcionalmente substituí- dos por um ou mais radicais iguais ou diferentes do grupo halogênio, ciano, nitro, amino, hidróxi, carbóxi, CHO, CONH2, SO2NH2 e Za-Ra;

R36 é hidrogênio, hidroxila, (C1-C6)alquila, (C2-C6)alquenila, (C2-C6) alquinila, (C1-C6)alcóxi, (C2-C6)alquenilóxi, sendo que os cinco radicais men- cionados por último podem estar substituídos por um ou mais radicais iguais ou diferentes, escolhidos do grupo que consiste em halogênio, hidroxila, (C1-C4) alquila, (C1-C4)alcóxi e (C1-C4)alquiltio, ou

R35 e R36, junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão liga- dos, são um anel de 3 a 8 membros, saturado ou insaturado;

R37 é halogênio, ciano, nitro, amino, hidroxila, carboxila, CHO, CONH2, SO2NH2 ou Zb-Rb;

R38 é hidrogênio, (C1-C4)alquila, (C2-C4)alquenila ou (C2-C4) al- quinila; R39 é halogênio, ciano, nitro, amino, hidroxila, carboxila, fosfori- la, CHO, CONH2, SO2NH2 ou Zc-Rc;

Ra é um radical (C2-C20)alquila, cuja cadeia de carbono está in- terrompida uma vez ou mais de uma vez por átomos de oxigênio, ou é hete- rociclila ou um radical de hidrocarboneto, sendo que os dois radicais men- cionados por último estão opcionalmente substituídos por um ou mais radi- cais iguais ou diferentes, do grupo halogênio, ciano, nitro, amino, hidroxila, mono- e di[(C1-C4)alquil]amino;

Rb, Rc são um radical de (C2-C20)alquila, cuja cadeia de carbono está interrompida uma vez ou mais de uma vez por átomos de oxigênio, ou é heterociclila ou um radical de hidrocarboneto, sendo que os dois radicais mencionados por último estão opcionalmente substituídos por um ou mais radicais iguais ou diferentes, do halogênio, ciano, nitro, amino, hidróxi, fosfo- rila, (C1-C4)-haloalcóxi, mono- e di[(C1-C4)alquil]amino;

Za é uma unidade divalente do grupo O, S, CO, CS, C(O)O, C(O)S, SO, SO2, NRd, C(O)NRd ou SO2NRd;

Zb, Zc são iguais ou diferentes e são uma ligação direta ou uma unidade divalente do grupo O, S, CO, CS, C(O)O, C(O)S, SO, SO2, NRd, SO2NRd ou C(O)NRd;

Rd é hidrogênio, (C1-C4)alquila ou (C1-C4)haloalquila;

né um número inteiro de O a 4, e

m no caso de X representar CH, é um número inteiro de O a 5, e no caso de X representar N, um número inteiro de O a 4;

e) compostos do tipo das acilsulfamoilbenzamidas, por exemplo, da formula (VI) abaixo, que são conhecidos, por exemplo, do documento WO 99/16744

<formula>formula see original document page 13</formula>

por exemplo, aqueles nos quais R21 = ciclopropila e R22 = H (S3-1 = 4-ciclopropilaminocarbonil- N-(2 metoxibenzoil)benzenossulfonamida),

R21 = ciclopropila e R22 = 5-CI (S3-2),

R21 = etila e R22 = H (S3-3),

R21 = isopropila e R22 = 5-CI (S3-4) e

R21 = isopropila e R22 = H (S3-5);

f) Compostos do tipo das N-acilsulfamoilfeniluréia da fórmula (VII), alguns dos quais são conhecidos do documento EP-A-365484,

<formula>formula see original document page 14</formula>

na qual

A representa um radical do grupo

<formula>formula see original document page 14</formula>

Rα e Rβ, independentemente um do outro, representam hidrogê- nio, C1-C8-alquila, C3-C8-cicloalquila, C3-C6-alquenila, C3-C6-alquinila,

<formula>formula see original document page 14</formula>

ou substituído por CrC4-alcóxi ou

<formula>formula see original document page 14</formula>

substituído por CrC4-alcóxi, ou Rα e Rβ , em conjunto, são uma ponte de C4-C6-alquileno ou uma ponte de C4-C6-alquileno, interrompida por oxigênio, enxofre, SO, SO2, NH ou -N(C1-C4-alquila)-,

Rγ representa hidrogênio ou C1-C4-alquila,

Ra e Rb , independentemente um do outro, representam hidro- gênio, halogênio, ciano, nitro, trifluorometila, C1-C4-alquila, C1-C4-alcóxi, C1- C4-alquiltio, C1-C4-alquilsulfinila, C1-C4-alquilsulfonila, -COORj, -CONRkRm, - CORn, -SO2NRkRm, ou -0S02-C1-C4-alquila, ou Ra e Rb, em conjunto, repre- sentam uma ponte de C3-C4-alquileno, que pode estar substituída por halo- gênio ou C1-C4-alquila, ou uma ponte de C3-C4-alquenileno, que pode-estar substituída por halogênio ou C1-C4-alquila, ou uma ponte de C4- alcadienileno, que pode estar substituída por halogênio ou C1-C4-alquila, e

Rg e Rh, independentemente um do outro, representam hidrogê- nio, halogênio, C1-C4-alquila, trifluorometila, metóxi, metiltio ou -COORj, sen- do que

Rc representa hidrogênio, halogênio, C1-C4-alquila ou metóxi, Rd representa hidrogênio, halogênio, nitro, C1-C4-alquila, C1-C4- alcóxi, C1-C4-alquiltio, C1-C4-alquilsulfinila, C1-C4-alquilsulfonila, -COORj ou - CONRkRm,

Re representa hidrogênio, halogênio, C1-C4-alquila, -COORj, tri- fluorometila ou metóxi, ou Rd e Re, em conjunto, representam uma ponte de C3-C4-alquileno,

Rf representa hidrogênio, halogênio ou C1-C4-alquila,

Rx e RY, independentemente um do outro, representam hidrogê- nio, halogênio, C1-C4-alquila, C1-C4-alcóxi, C1-C4-alquiltio, -COORj, trifluoro- metila, nitro ou ciano,

Rj, Rk e Rm , independentemente um do outro, representam hi- drogênio ou C1-C4-alquila,

Rk e Rm, em conjunto, representam uma ponte C4-C6-alquileno ou uma ponte de C4-C6-alquileno, que está interrompida por oxigênio, NH ou -N(C1-C4-alquila)-, e

Rn representa C1-C4-alquila, fenila ou fenila, que está substituída por halogênio, CrC4-alquila, metóxi, nitro ou trifluorometila, de preferência,

1-[4-(N-2-metoxibenzoilsulfamoil)fenil]-3-metiluréia,

1-[4-(N-2-metoxibenzoilsulfamoil)fenil]-3,3-dimetiluréia,

1-[4-(N-4,5-dimetilbenzoilsulfamoil)fenil]-3-metiluréia,

1-[4-(N-naftoilsulfamoil)fenil]-3,3-dimetiluréia,

g) compostos do tipo das acilsulfamoilbenzamidas da fórmula (VIII), descritos no documento EP-A-1019368, opcionalmente, também na forma de sal

<formula>formula see original document page 16</formula>

na qual

R1 significa metila, metóxi ou trifluorometóxi;

R2 significa hidrogênio, cloro ou metila;

R3 significa hidrogênio, etila ou propargila;

R4 significa etila, ciclopropila, iso-propila ou propargila,

ou

R3 e R4, em conjunto, formam o grupo (CH2)4, incluindo os este- reoisômeros e incluindo os sais que são normalmente usados na agricultura.

Os compostos da fórmula (I) estão descritos, por exemplo, nos documentos EP-A-O 333 131 (ZA-89/1960), EP-A-O 269 806 (US-A- 4,891,057), EP-A-O 346 620 (AU-A-89/34951), EP-A-O 174 562, EP-A-O 346 620 (WO-A-91/08 202), WO-A-91/07 874 ou WO-A 95/07 897 (ZA 94/7120) e na literatura citada nos mesmos ou podem ser preparados de acordo com, ou em analogia a, processos descritos no presente.

Os compostos da fórmula (II) são conhecidos dos documentos EP-A-O 086 750, EP-A-O 94349 (US-A-4,902,340), EP-A-O 191736 (US-A- 4,881,966) e EP-A-O 492 366 e da literatura citada nos mesmos, ou podem ser preparados de acordo com, ou em analogia a, processos descritos no presente. Alguns compostos estão descritos, ainda, nos documentos EP-A-O 582 198 e WO 2002/34048.

Os compostos da fórmula (III) são conhecidos de um grande número de pedidos de patente, por exemplo, US-A-4,021,224 e US-A- 4,021,229.

Compostos do grupo (b) são conhecidos, ainda, dos documen- tos CN-A- 87/102 789, EP-A-365484 e do "The Pesticide Manual", The Briti- sh Crop Protection Council and the Royal Society of Chemistry, 11 th edition, Farnham 1997.

Os compostos do grupo (c) estão descritos no documento WO- A-97/45016, os do grupo (d), em WO-A-99/16744, os do grupo B (e), em EP- A-365484 e os do grupo (g), em EP-A-1019368.

Os documentos citados contêm informações detalhadas sobre processos e preparação e materiais básicos e citam compostos preferidos. Faz-se referência expressa a essas publicações, que estão incorporadas ao presente por referência.

Compostos preferidos da fórmula (I) e/ou (II), que são conheci- dos como antídotos, são aqueles nos quais os símbolos e índices têm os seguintes significados:

R24 é hidrogênio, (C1-C18)alquila, (C3-C12)cicloalquila, (C2-C8) alquenila e (C2-C18)alquinila, sendo que os grupos que contêm carbono po- dem ser substituídos por um ou mais, de preferência, até três, radicais R50;

R50 é igual ou diferente e é halogênio, hidróxila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alquiltio, (C2-C8)alqueniltio, (C2-C8JaIquiniItio, (C2-C8)alquenilóxi, (C2-C8) alquinilóxi, (C3-C7)cicloalquila, (C3-C7)cicloalcóxi, ciano, mono- e di((C1-C4) alquil)amino, carbóxi, (C1-C8)alcoxicarbonila, (C2-C8)alqueniloxicarbonila, (C1-C8)alquiltiocarbonila, (C2-C8)alquiniloxicarbonila, (C1-C8)alquilcarbonila, (C2-C8)alquenilcarbonila, (C2-C8)alquinilcarbonila, 1 -(hidroxiimino)-(Ci-C6) alquila, 1-[(C1-C4)alquilimino]-(C1-C4)alquila, 1-[(C1-C4)alcoxiimino]-(C1-C6)- alquila, (C1-C8)alquilcarbonilamino, (C2-C8)alquenilcarbonilamino, (C2-C8) alquinilcarbonilamino, aminocarbonila, (C1-C8)alquilaminocarbonila, di-(C1-C6) -alquilaminocarbonila, (C2-C6JalqueniIaminocarboniIa, (C2-C6)alquinilaminocar- bonila, (C1-C8)alcoxicarbonilamino, (C1-C8)alquilaminocarbonilamino, (C1-C6) alquilcarbonilóxi, que está não substituído ou substituído por R51, ou é (C2-C6) alquenilcarbonilóxi, (C2-C6)alquinilcarbonilóxi, (C1-C8)alquilsulfonila, fenila, fenila-(C1-C6)-alcóxi, fenila-(C1-C6)-alcoxicarbonila, fenóxi, fenóxi-(C1-C6) - alcóxi, fenóxi-(C1-C6)-alcoxicarbonila, fenilcarbonilóxi, fenilacarbonilamino, fenil-(C1-C6)-alquilcarbonilamino, sendo que os 9 radicais citados por último estão não substituídos ou mono- ou polissubstituídos no anel de fenol, de preferência, até trissubstituídos por radicais R52; SiR13, -O-SiR13, R13Si-(Ci-C8) -alcóxi, -CO-O-NR12, -O-N=CR12, -N=CR12, -O-NR12, -NR12, CH(OR1)2, -O- (CH2)m-CH(OR')2, -CR"'(OR')2, -O-(CH2)mCR"'(OR")2 ou por R"O-CHR"' CH- COR"-(C1-C6)-alcóxi,

R51 é igual ou diferente, e é halogênio, nitro, (CrC4)alcóxi e feni- la , que está não substituída ou substituída por um ou mais, de preferência, até três, radicais R52;

R52 é igual ou diferente e é halogênio, (C1-C4)alquila, (C1-C4) alcóxi, (C1-C4)haloalquila, (C1-C4)haloalcóxi ou nitro;

R' é igual ou difrente e é hidrogênio, (C1-C4)alquila, fenila não substituída ou fenila que está substituída por um ou mais, de preferência, por até três, radicais R52, ou dois radicais R', em conjunto, formam uma cadeia de (C2-C6)alcandiila;

R" é igual ou diferente e é (C1-C4)alquila, ou dois radicais R", em conjunto, formam uma cadeia de (C2-C6)alcanediila; R'" é hidrogênio ou (C1-C4)alquila; m é 0, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6.

São particularmente preferidos compostos conhecidos como antídotos, da fórmula (I) e/ou (II), nos quais os símbolos e índices têm os seguintes significados:

R24 é hidrogênio, (C1-C8)alquila ou (C3-C7)cicloalquila, sendo que os radicais acima, que contêm carbono, estão não substituídos ou estão mono- ou polissubstituídos por halogênio ou mono- ou dissubstituídos, de preferência, monossubstituídos, por radicais R50,

R50 é igual ou diferente e é hidroxila, (C1-C4)alcóxi, carbóxi, (C1-C4) alcoxicarbonila, (C2-C6)alqueniloxicarbonila, (C2-C6)alquiniloxicarbonila, 1 -(hi- droxiimino)(C1-C4)alquila, 1-[(C1-C4)alquilimino]-(C1-C4)-alquila e 1-[(C1-C4) alcoxiimino]-(C1-C4)-alquila; -SiR13, -O-N=CR12, -N=CR12, -NR12, e -O-NR12, sendo que R1 é igual ou diferente e é hidrogênio, (CrC4JaIquiIa, ou em gru- pos de dois, é uma cadeia de (C4-C5)alcandiila,

R27, R28, R29 são iguais ou diferentes e são hidrogênio, (CrC8) alquila, (C1-C6)haloalquila, (C3-C7)cicloalquila ou fenila, que está não substituída ou está substituída por um ou mais radicais do grupo halogênio, ciano, nitro, amino, mono- e di[(CrC4)alquil]amino, (C1-C4)alquila, (C1-C4) haloalquila, (C1-C4)alcóxi, (C1-C4)haloalcóxi, (C1-C4)alquiltio e (C1-C4) alquilsulfonila;

Rx é hidrogênio ou COOR26, sendo que R26 é hidrogênio, (C1-C8) alquila, (C1-C8)haloalquila, (C1-C4-alcóxi)-(C1-C4)alquila, (C1-C6)hidroxial- quila, (C3-C7)cicloalquila ou tri(C1-C4)alquilsilila,

R17, R19 são iguais ou diferentes e são halogênio, metila, etila, metóxi, etóxi, (C1 ou C2)haloalquila, de preferência, hidrogênio, halogênio ou (1i ou C2)-haloalquila.

São especialmente preferidos compostos conhecidos como an- tídotos, nos quais os símbolos e índices na fórmula (I) têm os seguintes sig- nificados:

R17 é halogênio, nitro ou (C1-C4)haloalquila; n'éO, 1,2 ou 3;

R18 é um radical da fórmula OR24,

R24 é hidrogênio, (C1-C8)alquila ou (C3-C7)CiCloalquila, sendo que os radicais acima, que contêm carbono, são não substituídos ou mono- ou polissubstituídos, de preferência, até trissubstituídos, por radicais de ha- logênio iguais ou diferentes, ou até dissubstituídos, de preferência, monos- substituídos, por radicais iguais ou diferentes do grupo hidróxi, (CrC4)alcóxi, (C1-C4)alcoxicarbonila, (C2-C6)alqueniloxicarbonila, (C2-C6) alquiniloxicarbo- nila, 1-(hidroxiimino)-(C1-C4)-alquila, 1-[(C1-C4)alquilimino]-(C1-C4)-alquila, 1- [(C1-C4)alcoxiimino]-(C1-C4)-alquila e radicais das fórmulas -SiR13, -O-N=R12, -N=CR12, -NR12 e -O-NR12, sendo que os radicais R' nas fórmulas acima são iguais ou diferentes e são hidrogênio, (C1-C4)alquila ou, em grupos de dois, são (C4 ou C5)alcandiila; R27, R28, R29 são iguais ou diferentes e são hidrogênio, (C1-C8) alquila, (C1-C6)haloalquila, (C3-C7)cicloaiquila ou fenila, que está não substi- tuída ou substituída por um ou mais dos radicais do grupo halogênio, (C1- C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, nitro, (C1-C4)haloalquila e (C1-C4)haloalcóxi, e Rx é hidrogênio ou COOR26, sendo que R26 é hidrogênio, (C1-C8) alquila, (C1-C8)haloalquila, (C1-C4)alcóxi(CrC4)alquila, (C1-C6)hidroxialquila, (C3-C7)cicloalquila ou tri-(C1-C4)-alquilsilila.

Também são especialmente preferidos compostos da fórmula (II), que são conhecidos como antídotos, são aqueles nos quais os símbolos e índices têm os seguintes significados:

R19 é halogênio ou (C1-C4)haloalquila;

n' é O, 1, 2 ou 3, sendo que (R19)n' é, de preferência, 5-CI;

R20 é um radical da fórmula OR24;

T é CH2 ou CH(COO-(C1-C3-alquila)) e

R24 é hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)haloalquila ou (C1-C4)

alcóxi-(C1-C4)-alquila, de preferência, hidrogênio ou (C1-C8)alquila. Nesse caso, são particularmente preferidos compostos da fór- mula (I), que são conhecidos como antídotos, nos quais os símbolos e índi- ces têm os seguintes significados:

W é (W1);

R17 é halogênio ou (C1-C2)haloalquila;

n' é O, 1, 2 ou 3, sendo que (R17)n' é, de preferência, 2,4-Cl2;

R18 é um radical da fórmula OR24;

R24 é hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C4)haloalquila, (C1-C4) hidroxialquila, (C3-C7)cicloalquila, (C1-C4)alcóxi-(C1-C4)-alquila ou tri-(C1-C2)- alquilsilila, de preferência, (C1-C4)alquila;

R27 é hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C4)haloalquila ou (C3-C7) cicloalquila, de preferência, hidrogênio ou (CrC4)alquila, e

Rx é COOR26, sendo que R26 é hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C4) haloalquila, (C1-C4)hidroxialquila, (C3-C7)cicloalquila, (C1-C4)alcóxi-(C1-C4)- alquila ou tri-(C1-C2)-alquilsilila, de preferência, hidrogênio ou (C1-C4)alquila.

Também são especialmente preferidos compostos da fórmula (I), que são conhecidos como antídotos, nos quais os símbolos e índices têm os seguintes significados:

W é (W2);

R17 é halogênio ou (CrC2)haloalquila;

n' é 0, 1, 2 ou 3, sendo que (R17)n' é, de preferência, 2,4-C12;

R1 é um radical da fórmula OR24;

R24 é hidrogênio, (C1-C8)alquila, (CrC4)haloalquila, (C1-C4) hi- droxialquila, (C3-C7)cicloalquila, (CrC4alcóxi)-(C1-C4)alquila ou tri-(C1-C2)- alquilsilila, de preferência, (C1-C4)alquila, e

R27 é hidrogênio, (C1-C8)alquilar (C1-C4)haloalquila, (C3-C7) ci- cloalquila ou fenila não substituída ou substituída, de preferência, hidrogênio, (C1-C4)alquila ou fenila, que está não substituída ou substituída por um ou mais radicais do grupo halogênio, (C1-C4)alquila, (CrC4)haloalquila, nitro, ciano ou (C1-C4)alcóxi.

Particularmente preferido são também os compostos conhecidos como fitoprotetores da fórmula (I), nos quais os símbolos e índices apresen- tam os seguintes significados:

W é (W3);

R17 é halogênio ou (Ci-C2) haloalquila;

n' é 0, 1, 2 ou 3, no qual (R17)n· é, preferivelmente, 2,4-Cl2;

R18 é um radical da fórmula OR24;

R24 é hidrogênio, (C1-C3)alquila, (C1-C4)haloalquila, (C1-C4) hi- droxialquila, (C3-C7)cicloalquila, (C1-C4)alcóxi-(C1-C4)-alquila ou tri-(C1-C2)- alquilsilil, preferencialmente (C1-C4)alquila, e

R2B é (C1-C8)alquila ou (C1-C4)haloalquila, preferencialmente, C1-haloalquila.

Particularmente preferido são também os compostos conhecidos como fitoprotetores da fórmula (I), nos quais os símbolos e índices apresen- tam os seguintes significados.

W é (W4)

R17 é halogênio, nitro, (C1-C4)alquila, (C1-C4alquila, (C1-C2) ha- loalquila, preferencialmente CF3 ou (C1-C4) alcóxi; η' é 0, 1, 2 ou 3;

m' é 0 ou 1;

R18 é um radical da fórmula OR24;

R24 é hidrogênio, (C1-C4)alquila, carbóxi-(C1-C4)-alquila, (C1-C4) alcoxicarbonila (C1-C4)-alquila, preferencialmente (C1-C4)alcóxi-CO-CH2-, (C1-C4)alcoxi-CO-C(CH3)H-, HO-CO-CH2- ou HO-CO-C(CH3)H-, e

R29 é hidrogênio, (C1-C4)alquila, (C1-C4)haloalquila, (C3-C7) ci- cloalquila ou fenila, que pode ser insubstituída ou substituída por um ou mais radicais do grupo de halogênio, (C1-C4)-alquila, (C1-C4)haloalquila, nitro, cia- no e (C1-C4)alcoxi.

Os seguintes grupos de compostos conhecidos como fitoprotetor são apropriados, especialmente, como substâncias ativas para o aumento da tolerância de plantas em relação a fatores de estresse abióticos:

a) compostos do tipo diclorofenilpirazolina-3-ácido carboxílico (isto é, da fórmula (I), na qual W = (W1) e (R17)n1 - 2,4-CI2), de preferência, compostos tais como etil 1-(2,4-diclorofenil)-5-(etoxicarbonil)-5-metil-2-pira- zolina-3-carboxilato (1-1, mefenpir-dietílico), mefenpir-dimetílico e mefenpir (1-0), e compostos relacionados, tais como estão descritos no documento WO-A 91/07874;

b) derivados do ácido diclorofenilpirazolcarboxílico (isto é, da fórmula (I), na qual W = (W2) e (R17)n' = 2,4-CI2), de preferência, compostos tais como etil 1-(2,4-diclorofenil)-5-metilpirazol-3-carboxilato (I-2), etil 1-(2,4-diclo- rofenil)-5-isopropilpirazol-3-carboxilato (I-3), etil 1-(2,4-diclorofenil)-5-(1,1-di- metiletil)pirazol-3-carboxilato (I-4), etil 1-(2,4-diclorofenil)-5-fenilpirazol-3-car- boxilato (I-5) e compostos relacionados, tais como estão descritos nos do- cumentos EP-A-0 333 131 e EP-A-0 269 806;

c) Compostos do tipo dos ácidos triazolcarboxílicos (isto é, da fórmula (I), na qual W = (W3) e (R17)n' = 2,4-CI2), de preferência, compostos tais como fenclorazol-etílico, isto é, etil 1-(2,4-diclorofenil)-5-triclorometil- (1H)-1,2,4-triazol-3-carboxilato (I-6), e compostos relacionados (veja EP-A-0 174 562 e EP-A-0 346 620);

d) compostos do tipo do ácido 5-benzil- ou 5-fenil-2-isoxazolin-3- carboxílico ou do ácido 5,5-difenil-2-isoxazolin-3-carboxílico, tal como isoxa- difen (1-12) (onde W = (W4), de preferência, compostos tais como etil éster de ácido 5-(2,4-diclorobenzil)-2-isoxazolin-3-carboxílico (I-7) ou etil éster de ácido 5-fenil-2-isoxazolin-3-carboxílico (I-8) e compostos relacionados, tais como estão descritos no documento WO-A-91/08202, ou etil éster de ácido 5,5-difenil-2-isoxazolin-carboxílico (I-9, isoxadifeno-etílico) ou -éster n- propílico (1-10) ou do etil éster de ácido 5-(4-fluorfenil)-5-fenil-2-isoxazolin-3- carboxílico (1-11), tais como estão descritos em WO-A-95/07897.

e) Compostos do tipo do ácido 8-quinolinoxiacético, por exem- plo, aqueles da fórmula (II), na qual (R19)n- = 5-CI, R20 = OR24 e T = CH2, de preferência, os compostos

(5-cloro-8-quinolinóxi)ácido acético-(1-metilexil)-éster (11-1, cloquintocet- mexílico),

(5-cloro-8-quinolinóxi)ácido acético-(1,3-dimetil-but-1-=il)-éster (II-2), 4-alil-óxi-butiléster de ácido (5-cloro-8-quinolinóxi)acético (II-3)

(5-cloro-8-quinolinóxi)ácido acético-1-alilóxi-éster prop-2-ílico (II-4),

etil éster de ácido (5-cloro-8-quinolinóxi) acético (II-5),

metil éster de ácido (5-cloro-8-quinolinóxi)acético (II-6),

alil éster de ácido(5-cloro-8-quinolinóxi)acético (II-Tr),

ácido 2-(2-propiliden-iminóxi)-1 -éster etílico (5-cloro-8-quinolinóxi)ácido acé- tico(ll-8),

ácido-2-oxo-éster prop-1-ílico (5-cloro-8-quinolinóxi) acético- (II-9),

(5-cloro-8-quinolinóxi)ácido acético- (11-10) e sais dos mesmos, tais como estão descritos, por exemplo, no documento W0-A-2002/34048, e compos- tos relacionados, tais como estão descritos nos documentos EP-A-O 860 750, EP-A-O 094 349 e EP-A-O 191 736 ou EP-A-O 492 366.

f) Compostos do tipo do (5-cloro-8-quinolinóxi)-ácido malônico, isto é, da fórmula (II), na qual (R19)n- = 5-CI, R20= OR24, T = -CH(COO-alquil)- de preferência, os compostos (5-cloro-8-quinolinóxi)ácido malônico -éster dietílico (11-11), éster dialílico de ácido (5-cloro-8-quinolinóxi) malônico, (5- cloro-8-quinolinóxi)ácido malônico-metil-éster etílico e compostos relaciona- dos, tais como estão descritos no documento EP-A-O 582 198. g) Compostos do tipo das dicloroacetamidas, isto é, da fórmula (III), de preferência:

N,N-dialil-2,2-dicloroacetamida (diclomid <111-1), de US-A 4,137,070, 4-dicloroacetil-3,4-diidro-3-metil-2H-1,4-benzoxazin (IV-2, benoxacor, de EP 0 149 974),

N1 ,N2-dialil-N2-dicloroacetilglicinamida (DKA-24 (III-3), de HU 2143821), 4-dicloroacetil-1 -oxa-4-aza-espiro[4,5]decano (AD-67), 2,2-dicloro-N-(1,3-dioxolan-2-ilmetil)-N-(2-propenil)acetamida (PPG-1292), 3-dicloroacetil-2,2,5-trimetiloxazolidina (R-29148, III-4), 3-dicloroacetil-2,2-dimetil-5-feniloxazolidina, 3-dicloroacetil-2,2-dimetil-5-(2-tienil)oxazolidina, 3-dicloroacetil-5-(2-furanil)-2,2-diemtiloxazolidina (furilazol (III-5), MON 13900),

1 -dicloroacetil-hexaidro-3,3,8a-trimetilpirrol[1,2-a]pirimidin-6(2H)-ona (diclo- nona, BAS 145138),

h) Compostos do grupo (b), de preferência, anidrido de ácido 1,8-naftálico (b-1), metil-difenilmetoxiacetato (b-2), cianometoxiimino(fenil)acetonitrila (ciometrinila (b-3), 1 -(2-clorobenzil)-3-(1 -metil-1 -feniletil)uréia (cumilurona) (b-4), 0,0-dietil S-2-etiltioetil ditioato de fósforo (dissulfoton) (b-5),

4-clorofenil-metilcarbamato (mefenato) (b-6), O,O-dietil-O-fenilditioato de fósforo (dietolato) (b-7), ácido 4-carbóxi-3,4-diidro-2H-1-benzopirano-4-acético (CL-304415, CAS Regno: 31541-57-8) (b-8),

1,3-dioxolan-2-ilmetoxiimino(fenil)acetonitrila (oxabetrinila) (b-9), 4'-cloro-2,2,2-trifluoracetofenona 0-1,3-dioxolan-2-ilmetiloxima (fluxofenima) (b-10),

4,6-dicloro-2-fenilpirimidina (fenclorim) (b-11), benzil-2-cloro-4-trifluormetil-1,3-tiazol-5-carboxilato (flurazol) (b-12), 2-diclorometil-2-metil-1,3-dioxolano (MG-191) (b-13),

N-(4-metilfenil)-N'-(1 -metil-1 -feniletil)uréia (dimrona) (b-14), ácido (2,4-diclorofenóxi)acético (2,4-D), ácido (4-clorofenóxi)acético, ácido (R,S)-2-(4-cloro-o-tolilóxi)propiônico (mecoprop), ácido 4-(2,4-diclorofenóxi)butírico (2,4-DB), ácido (4-cloro-o-tolilóxi)acético ácido(4-cloro-o-tolilóxi)butírico, ácido 4-(4-clorofenóxi) butírico, ácido 3,6-dicloro-2-metóxi-benzóico (dicamba), 1 -(etoxicarbonil)etil 3,6-dicloro-2-metóxibenzoato (lactidicloro), bem como seus sais e ésteres, de preferência, (C1-C8).

São preferidos, ainda, composto da fórmula (IV)1 conhecidos como antídotos, ou sais dos mesmos, nos quais

R30 é hidrogênio, (C1-C6)-alquila, (C3-C6)-cicloalquila, furanila ou tienila, sendo que cada um dos 4 radicais citados pór último estão não subs- tituídos ou substituídos por um ou mais substiuintes do grupo halogênio, (C1- C4)-alcóxi, halo-(C1-C6)-alcóxi e (C1-C4)-alquiltio e, no caso de radicais cícli- cos, também (C1-C4)-alquila e (C1-C4)-haloaiquila,

R31 é hidrogênio,

R32 é halgoênio, halogênio-(C1-C4)-alquila, halogênio-(C1-C4)- alcóxi, (C1-C4)-alquila, (C1-C4)-alcóxi, (C1-C4)-alquilsulfonila, (C1-C4)- alcoxicarbonila ou (C0-C4)-alquilcarbonila, de preferência, halogênio, (C1-C4)- haloalquila, tal como trifluormetila, (C1-C4)-alcóxi, halogênio-(C1-C4)-alcóxi, (C1-C4)-alcoxicarbonila ou (C1-C4)-alquilsulfonila, R33 hidrogênio,

R34 halogênio, (C1-C4)-alquila, halogênio-(C1-C4)-alquila, halogê- nio-(C1-C4)-alcóxi, (C3-C6)-cicloalquila, fenila, (C1-C4)-alcóxi, ciano, (C1-C4)- alquiltio, (C1-C4)-alquilsulfinila, (C1-C4)-alquilsulfonila, (C1-C4)-alcoxicarbonila ou (C1-C4)-alquilcarbonila, de preferência, halogênio, (C1-C4)-alquila, (C1-C4)- haloalquila, tal como trifluormetila, halogênio-(C1-C4)-alcóxi, (C1-C4)-alcóxi ou (C1-C4)-alquiltio,

n é O, 1 ou 2, e

m é 1 ou 2.

São particularmente preferidos compostos conhecidos como antídotos da fórmula (IV), nos quais R30 é = H3C-O-CH2lR31 = R33= H1R34 = 2-0Me (IV-1),

R30 é = H3C-O-CH2lR31 = R33= H1R34 = 2-OMe-5-CI (IV-2),

R30 é = ciclopropila, R31 = R33= H1R34 = 2-OMe (IV-3),

R30 é = ciclopropila, R31 = R33= H1R34 = 2-OMe-5-CI (IV-4),

R30 é = ciclopropila, R31 = R33 = H,R34 = 2-Me (IV-5),

R30 é = terc-butila, R31 = R33= H,R34 = 2-OMe (IV-6).

Além disso, são preferidos compostos da fórmula (V), conheci- dos como antídotos, nos quais

X3 é CH;

R35 é hidrogênio, (C1-C6)-alquila, (C3-C6)-cicloalquila, (C2-C6)- alquenila, (C1-C6)-Cicloalquenila, fenila ou heterociclila de 3 a 6 membros, com até três heteroátomos do grupo nitrogênio, oxigênio e enxofre, sendo que os seis radicais citados por último estão opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes, iguais ou diferentes, do grupo halogênio, (C1-C6)- alcóxi, (C1-C6)-haloalcóxi, (C1-C2)-alquilsulfinila, (C1-C2)-alquilsulfonila, (C3-C6) -cicloalquila, (C1-C4)-alcoxicarbonila, (C1-C4)- alquilcarbonila e fenila e, no caso de radicais cíclicos, também por (C1-C4)-alquila e (C1-C4)-haloalquila;

R36 é hidrogênio, (C1-C6)-alquila, (C2-C6)-alquenila, (C2-C6)- alquinila, sendo que os três radicais citados por último estão opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes, iguais ou diferentes, do grupo ha- logênio, hidróxi, (C1-C4)-alquila, (C1-C4)-alcóxi e (C1-C4)-alquiltio;

R37 é halogênio, (C1-C4)-haloalquila, (C1-C4)-haloalcóxi, nitro, (C1-C4)-alquila, (C1-C4)-alcóxi, (C1-C4)-alquilsulfonila, (C1-C4)-alcoxicarbonila ou (C1-C4)-alquilcarbonila;

R38 é hidrogênio;

R39 é halogênio, nitro, (C1-C4)-alquila, (C1-C4)-haloalquila, (C1-C4) -haloalcóxi, (C3-C6)-cicloalquila, fenila, (C1-C4)-alcóxi, ciano, (C1-C4)-alquiltio, (C1-C4)-alquilsulfinila, (C1-C4)-alquilsulfonila, (C1-C4)-alcoxicarbonila ou (C1-C4) -alquilcarbonila.

η é O, 1 ou 2 e

m é 1 ou 2.

Compostos da fórmula (VI), conhecidos como antídotos, são (S3-1), (S3-2), (S3-3), (S3-4) e (S3-5).

Compostos preferidos da fórmula (VII) também são 1 -[4-(N-2-metoxibenzoilsulfamoil)fenil]-3-metiluréia (VII-1), 1-[4-(N-2-metoxibenzoilsulfamoil)fenil]-3,3-dimetiluréia (VII-2), 1 -[4-(N-4,5-dimetilbenzoilsulfamoil)fenil]-3-metiluréia (VII-3) e 1 -[4-(N-naftoilsulfamoil)fenil]-3,3-dimetiluréia (VII-4).

Igualmente são preferidos compostos das fórmulas VIII-I a VIII-4

<formula>formula see original document page 27</formula>

dos quais, por sua vez, é especialmente preferido o composto VIII-3 (4- ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxibenzoil)benzenossulfonamida), para uso como agente para aumentar a tolerância em plantas em relação a fatores de estresse abióticos.

Compostos particularmente preferidos para uso como agente para aumentar a tolerância em plantas em relação a fatores de estresse abi- óticos são aqueles escolhidos do grupo de compostos conhecidos como an- tídotos, que consiste nos compostos das fórmula 1-1 (mefenpir-dietílico), I-9 (isoxadifeno-etílico), 11-1 (cloquintocet-mexílico), b-11 (fenclorim), b-14 (Di- mrona) e VIII-3 (4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxibenzoil) benzenossul- fonamida, são especialmente preferidos os compostos 1-1 e VIII-3).

Os compostos identificados/citados acima, eventualmente já conhecidos como antídotos, também podem ser usados em plantas modifi- cadas por tecnologia genética.

As plantas modificadas por tecnologia genética (também cha- madas de plantas transgênicas) As plantas transgênicas distinguem-se, em geral, por propriedades particularmente vantajosas, por exemplo, por resis- tências em relação a determinados pesticidas, sobretudo, determinados her- bicidas, resistências em relação a doenças de plantas ou causadores de do- enças de plantas, tais como determinados insetos ou microorganismos, tais como fungos, bactérias ou vírus. Outras propriedades especiais referem-se, por exemplo, ao material de colheita, no que se refere a quantidade, quali- dade, aptidão para armazenamento, composição e ingredientes especiais.

Desse modo, são conhecidas plantas transgênicas com teor de amido mais alto ou qualidade modificada do amido, ou aquelas com outra composição de ácido graxo do material de colheita.

É preferida a aplicação dos compostos identificados /citados, conhecidos como antídotos, ou sais dos mesmos em culturas transgênicas economicamente importantes de plantas de utilidade econômica e plantas ornamentais, por exemplo, de cereais, tais como trigo, cevada, centeio, aveia, painço, arroz e milho, ou também culturas de beterraba de açúcar, algodão, soja, colza, batata, tomate, ervilha e outras variedades de legumes, de modo particularmente preferido, em culturas de milho, trigo, cevada, centeio, aveia, arroz, colza, beterraba de açúcar e soja, de modo especialmente preferido, em culturas de milho, trigo, arroz, colza, beterraba de açúcar e soja.

Além disso, também plantas transgênicas podem ser tratadas com substâncias identificadas com ajuda de microarranjos de DNA, tal co- mo, também com as moléculas já conhecidas como antídotos, cuja tolerân- cia em relação a fatores de estresse abióticos já foi aumentada por medidas de tecnologia genética, de modo que é observado um efeito sinérgico da tolerância codificada endogenamente e de um aumento de tolerância, apli- cado exogenamente.

Métodos convencionais para a produção de plantas novas, que em comparação com plantas existentes até agora apresentam propriedades modificadas, consistem, por exemplo, em processos de cultivo clássicos e na produção de mutantes. Alternativamente, plantas novas, com proprieda- des modificadas, podem ser produzidas por processos de tecnologia genéti- ca (veja, por exemplo, EP-A-0221044, EP-A-0131624). Foram descritos, por exemplo, em muitos casos

- modificações de tecnologia genética de plantas de cultura, com a finalidade da modificação do amido sitnetizado nas plantas (por exemplo, WO 92/11376, WO 92/14827, WO 91/19806),

- plantas de cultura transgênicas, que são resistentes contra de- terminados herbicidas, do tipo glufosinato (comp., por exemplo, EP-Ar0242236, JEP-A-242246) ou glifosato (WO 92/00377) ou das sulfoniluréias (EP-A- 0257993, US-A-5013659),

- plantas de cultura transgênicas, por exemplo, algodão, com a capacidade de produzir toxinas de Bacillus thuringiensis (toxinas Bt), que tornam as plantas resistentes contra determinadas pragas (EP-A-0142924, EP-A-0193259),

- plantas de cultura transgênicas com composição de ácido gra- xo modificada (WO 91/13972).

São conhecidas, em princípio, numerosas técnicas biológicas moleculares, com as quais podem ser produzidas novas plantas transgêni- cas, com propriedades modificadas, veja, por exemplo, Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2a. edição, Cold Spring Har- bor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; ou Winnacker "Gene und Klone", VCH Weinheim 2a edição, 1996 ou Christou, "Trends in Plant Scien- ce" 1 (1996)423-431).

Para essas manipulações de tecnologia genética, moléculas de ácido nucléico podem ser incorporadas em plasmídios, que permitem uma mutagênese ou uma modificação de seqüência por recombinação de se- qüências de DNA. Como ajuda dos processos típicos citados acima, podem ser realizadas, por exemplo, trocas de bases, seqüências parciais podem ser removidas ou seqüências naturais ou sintéticas podem ser adicionada. Para a ligação dos fragmentos de DNA entre si podem ser inseridos adaptadores ou ligantes nos fragmentos.

A produção de células de plantas com uma atividade reduzida de um produto genético pode ser obtida, por exemplo, pela expressão de pelo menos um RNA de anti-sentido correspondente, um RNA de sentido, para obtenção de um efeito de co-supressão ou a expressão de pelo menos um ribozima construído de modo correspondente, que dissocia, especifica- mente, transcritos do produto genético citado acima.

Para esse fim, podem ser usadas, por um lado, moléculas de DNA, que compreendem toda a seqüência codificadora de um produto gené- tico, inclusive de seqüências flanqueadoras, eventualmente existentes, co- mo, também, moléculas de DNA, que só compreendem partes da seqüência 11 codificadora, sendo que essas partes precisam ter um comprimento suficien- te para provocar nas células um efeito de anti-sentido. Também é possível o uso de seqüências de DNA, que apresentam um alto grau de homologia com as seqüências codificadoras de um produto genético, mas não são totalmen- te idênticas.

Na expressão de moléculas de ácido nucléico em plantas, a pro- teína sintetizada pode estar localizada em qualquer compartimento da célula da planta. Mas, para obter a localização em um determinado compartimento, por exemplo, a região codificadora pode ser ligada com seqüências de DNA, que garantem a localização em um compartimento determinado. Essas se- qüências são conhecidas do técnico (veja, por exemplo, Braun et al., EMBO J. 11 (1992), 3219-3227; Wolter et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85 (1988), 846-850; Sonnewald et al., Plant J. 1 (1991), 95-106).

As células de plantas transgênicas podem ser regeneradas de acordo com técnicas conhecidas para plantas inteiras. No caso das plantas transgênicas, pode tratar-se, em princípio, de qualquer espécie de planta, isto é, tanto plantas monocotiledôneas como também dicotiledôneas.

Desse modo, são obteníveis plantas transgênicas, que apresen- tam propriedades modificadas por superexpressão supressão ou inibição de genes ou seqüências de genes homólogos (=naturais) ou expressão de ge- nes ou seqüências de genes heterólogos (=estranhos). De preferência, as moléculas identificadas com ajuda dos mi- croarranjos de DNA ou, então, conhecidas como antídotos, podem ser usa- das em culturas transgênicas, que são resistentes contra herbicidas do gru- po das sulfoniluréais, glufosinato-amônio ou glifosato-isopropilamônio e substâncias ativas análogas e/ou, na base da modificação por tecnologia genética, apresentam uma tolerância endógena em relação a fatores de es- tresse abióticos.

Na aplicação das substâncias ativas em culturas transgênicas, freqüentemente ocorrem, além dos efeitos a ser observados em outras cultu- ras em relação a plantas daninhas, efeitos, que são específicos para a apli- cação na respectiva cultura transgênica, por exemplo, um espectro de ervas daninhas modificado ou especialmente ampliado, que pode ser controlado, quantidades de aplicação modificadas, que podem ser usadas para a aplica- ção, de preferência, boa aptidão para combinação com os herbicidas, em relação aos quais a cultura transgênica é resistência, bem como influência sobre crescimento e produtividade das plantas de cultura transgênicas.

Portanto, também é um objeto da invenção o uso dos compos- tos identificados com microarranjos de DNA ou de compostos já conhecidos como antídotos, para aumentar a tolerância em relação a fatores d estresse abióticos em plantas de cultura transgênicas, de preferência, com o objetivo de aumentar a produtividade.

É um objeto da invenção um processo para detectar um com- posto que aumenta a tolerância em plantas em relação a fatores de estresse abióticos, sendo que o aumento da transcrição ou expressão de alguns ou vários genes endógenos nas plantas, tais como, por exemplo, genes que codificam proteínas do grupo das oxidases de citocromo, tal como da cito- cromoxidase P450, transferases de glicosila, uricases, tal como da uricase Il (E.C. 17.3.3), pepsidases, diversas proteínas de membrana, hidrolases de amido, bem como diversas proteínas de estresse gerais, é avaliada como indício da indução.

É um objeto da presente invenção, particularmente, um proces- so para detecção de compostos, que induzem a transcrição dos genes que codificam as enzimas da tolerância ao estresse endógenas das plantas, ca- racterizado pelo fato de que:

a) plantas de teste são expostas a um ou mais fatores de es- tresse abióticos,

b) plantas de controle, de resto, sob as mesmas condições co- mo as plantas de teste sob a), são adicionalmente psotas em contato com um composto a ser testado, seja na forma de material de sementes desinfe- tado, ou da pulverização, a um determinado momento do desenvolvimento, ou por absorção pelas raízes,

c) RNA é extraído das plantas de teste e das plantas de controle,

d) o RNA é marcado diretamente de modo radiativo ou não radi- 11 ativo, ou, então, o RNA é marcado de modo radiativo ou não radiativo, sob simultânea transcrição enzimática no cDNA correspondente, ou, então, o cDNA não marcado, obtido, é transcrito enzimaticamente no cRNA corres- pondente, marcado de modo radiativo ou não radiativo,

e) um microarranjo de DNA, que contém seqüências de DNA de plantas, é hibridizado com as substâncias obtidas de acordo com a etapa d),

f) são produzidos perfis de expressão dos genes, para a expres- são de diversas proteínas de estresse, de modo comparativo para as plantas testadas de acordo com a) e b),

g) dá-se uma quantificação das diferenças de expressão medi- das de acordo com f), e

h) dá-se uma sistematização final dos perfis de expressão asso- ciados de acordo com g) por análise de agrupamento.

No caso da etapa d), citada acima, a transcrição enzimática do cDBA obtido em um cRNA deve ser vista como uma etapa de processo pre- ferida, uma vez que, desse modo, pode ser obtida mais uma amplificação da amostra de hibridização. Também é preferida a marcação por meio de nu- cleotídeos não radiativos, é particularmente preferida a marcação por meio de UTP e/ou CTP biotinilado, sendo que a comprovação, subseqüentemente à reação de hibridização ocorrida, dá-se por ligação de estreptavidina- ficoeritrina como fluoróforo no cRNA biotinilado. Uma comprovação da fio- rescência de ficoeritrina específica, que serve como base para a quantifica- ção das diferenças de expressão medidas, dá-se subseqüentemente à hibri- dização, com ajuda de um scanner de laser.

Um objeto preferido da presente invenção é um processo no qual os procedimentos a)-h) citados acima são mantidos, sendo que, no ca- so do aumento pretendido [da expressão de genes] no estresse por calor, os genes para a expressão das oxidases de citocromo, tal como citocromo oxi- dase P450, transferases de glicosila, uricases, tal como da uricase Il (E.C.17.3.3), peptidases, diferentes proteínas de membrana, amidoidrolases, é comparada em plantas termicamente estressadas e não termicamente es-- tressadas, de preferência, dos genes para a expressão da "amidoidrolase de N-carbamil-L-aminoácido" (Zm.11840.1.A1_at), de "carboxipeptidase de se- rina" (Zm.18994.2.A1_a_at), de uricase Il (E.C.1.7.3.3) e de transferase de glicosila (Zm.12587.1 .S1_s_at), de modo especialmente preferido, dos ge- nes para a expressão de "amidoidrolase de N-carbamil-L-aminoácido" (Zm. 11840.1.A1 _at) e de "carboxipeptidase de serina" (Zm.18994.2.A1_a_at) (assinatura de acordo com o arranjo de genoma de milho, de Affymetrix (Affy- metrix Inc., 3380 Central Expressway, Santa Clara, CA, USA)), e sendo que a expressão de genes em relação a uma planta de controle termicamente estressada, é aumentada no tratamento, por exemplo, pelo fator 1,5 ou mais, de preferência, pelo fator 1,5 a 30, particularmente, 1,5 a 20, de modo parti- cularmente preferido, 1,5 a 10, de modo especialmente preferido, 1,5 a 5, sendo que o aumento dos perfis de expressão modificados dos genes indivi- duais pode situar-se, independentemente um do outro, nos âmbitos de valor diferentes, anteriormente citados.

Um objeto igualmente preferido da presente invenção é um pro- cesso, no qual as etapas de processo a) - h) acima citadas são mantidas, onde, no caso do aumento pretendido, no caso de estresse por seca, por exemplo, os genes para a expressão das proteínas abundantes de embrio- gênese tardia, tais como as deidrinas, da proteína de estresse universal (Zm.818.1.A1_at), hemoglobina não simbiótica (Zm.485.1.A1_at), da proteí- na endereçada como "Zm.818.2.A1_a_at" (assinatura de acordo com o ar- ranjo de genoma de milho, de Affymetrix (Affymetrix Inc., 3380 Central Ex- pressway, Santa Clara, CA, USA)) e da proteína endereçada como "Zm.18682.1.A1_s_at" (arranjo de genoma de milho, de Affymetrix (Affyme- trix Inc., 3380 Central Expressway, Santa Clara, CA, USA)) de plantas es- tressadas por seca e plantas não estressadas por seca é comparado, de preferência, os genes para a expressão da proteína de estresse universal (Zm.818.1 .A1_at), hemoglobina não simbiótica (Zm.485.1.A1_at), da proteí- na endereçada como "Zm.818.2.A1_a_at" (arranjo de genoma de milho, de Affymetrix (Affymetrix Inc., 3380 Central Expressway, Santa Clara, CA, U- SA)) e da proteína endereçada como "Zm.18682.1.A1_s_at" (arranjo de ge- noma de milho, de Affymetrix (Affymetrix Inc., 3380 Central Expressway, Santa Clara, CA, USA)), e sendo que a expressão de genes em relação a uma planta de controle estressada por seca é aumentada no tratamento, por exemplo, pelo fator 1,5 ou mais, de preferência, pelo fator 1,5 a 30, particu- larmente, 1,5 a 20, de modo particularmente preferido, 1,5 a 10, de modo especialmente preferido, 1,5 a 8, sendo que o aumento dos perfis de ex- pressão modificados dos genes individuais pode situar-se, independente- mente um do outro, nos âmbitos de valor diferentes, anteriormente citados.

É, ainda, um objeto da presente invenção o uso de determina- dos microarranjos de DNA1 que são usados na base de informações de plan- tas, de preferência, informações genéticas de plantas economicamente Ci- teis, de modo particularmente preferido, de plantas economicamente úteis, tais como, por exemplo de milho, cereais, tais como trigo, cevada, centeio, aveia, arroz e soja, de preferência, de milho, trigo, arroz e soja, de modo es- pecialmente preferido, de milho, trigo e soja, para detecção de padrões de expressão de genes modificados. Nesse caso, são observadas as as modifi- cações relativas dos padrões genéticos para genes de diversas proteínas de estresse nas plantas tratadas com os compostos a ser testados, em compa- ração com plantas de controle não tratadas, sob condições de estresse de resto idênticas.

Além disso, é um objeto da invenção o uso dos promotores dos genes indicadores descritos, em conexão com genes transmissores (por e- xemplo, GUS, GFP, Iuciferase etc.), para detectar substâncias com efeito positivo sobre a tolerância ao estresse abiótico em plantas de cultura. Nesse caso, são produzidas plantas de teste transgênicas, que contêm os construtos de gene promotor-transmissor. Substâncias ativas que aumentam a tolerância ao estresse abiótico de plantas de acordo com o mecanismo descrito, induzem a expressão do gene transmissor e podem ser identificadas com ajuda de um teste colorimétrico, fluorimétrico ou outro, apropriado para esse fim.

Objeto da invenção é, ainda, o uso dos genes indicadores des- critos para aumentar a tolerância ao estresse abiótico em plantas de cultura transgênica. Nesse caso, os genes são fusionados com um promotor apro- priado, que possui a força e especificidade desejadas e os construtos são transformados em plantas de cultura monocotiledôneas ou dicotiledôneas. As plantas transgênicas produzidas distinguem-se por uma tolerância mais alta contra estresse abiótico, por exemplo, frio, calor, seca etc. Um outro objeto da presente invenção é também o uso dos compostos que foram identificados com ajuda do microarranjo de DNA, sob observação dos perfis de expressão dos genes, e/ou compostos já conheci- dos como antídotos, que, no caso de condições de estresse abiótico, tal co- mo, por exemplo, fatores de estresse abiótico que atuam em relação a essa planta, tais como temperatura (frio, geada ou calor), água (seca ou aridez), ou a carga química (deficiência ou excesso de sais minerais, metais pesados ou agentes nocivos gasosos), agem de modo positivo, isto é, aumentando a expressão, no que se refere ao seu efeito indutivo sobre alguns ou vários genes dos mecanismos de defesa endógenos das plantas, tal como, por exem- pio, no caso de estresse por calor, sobre oxidases de citocromo, tal como a ci- tocromoxidase P450, sobre transferases de glicosila, sobre uricases, tal como a uricase Il (E.C.17.3.3), sobre peptidases, sobre diversas proteínas de membrana, sobre amidoidrolases e/ou diferentes proteínas de estresse e, por exemplo, no caso de estresse por seca, agem positivamente, isto é, au- mentando a expressão, no que se refere ao seu efeito indutivo sobre alguns ou vários genes da proteína de estresse universal, hemoglobina não simbió- tica (Zm.485.1.A1_at), da proteína endereçada como "Zm.818.2.A1_a_at" (arranjo de genoma de milho, de Affymetrix (Affymetrix Inc., 3380 Central Expressway, Santa Clara, CA, USA)) e da proteína endereçada como "Zm.18682.1.A1_s_at" (assinatura de acordo com o arranjo de genoma de milho, de Affymetrix (Affymetrix Inc., 3380 Central Expressway, Santa Clara, CA, USA)), foram identificados como substâncias ativas para aumentar a tolerância ao estresse em plantas economicamente úteis.

Também é objeto da invenção o uso de substâncias identificadas com ajuda do microarranjo de DNA, bem como, também, das moléculas já co- nhecidas como antídotos, para aumenta da tolerância em relação a fatores de estresse abióticos em diversas plantas de cultura, tais como milho, cereais, tais como trigo, cevada, centeio, aveia, arroz e soja, de preferência, milho, trigo, cevada, centeio, arroz e soja, de modo especialmente preferido, de milho, trigo e soja, de modo especialmente preferido, de milho, trigo e soja.

Também é, portanto, um objeto da presente invenção o uso de compostos, que foram identificados com ajuda do mciroarray de DNA, sob observação dos perfis de expressão dos genes, e/ou de compostos já co- nhecidos como antídotos, que contribuem diretamente ou indiretamente, tal como, por exemplo, por uma cadeia de sinais de transdução, para aumento da tolerância em relação a fatores de estresse abióticos, tais como, por e- xemplo, temperatura (frio, geada ou calor), água (seca, aridez ou anoxia), ou a carga química (deficiência ou excesso de sais minerais, metais pesados ou agentes nocivos gasosos), para aumento da produtividade, para prolonga- mento do período vegetativo, para possibilitar uma semeadura precoce, para aumento da qualidde, ou para uso no âmbito do cultivo, sob uso de linhas de cruzamento entre espécies iguais, normalmente, menos vitais.

Objeto da invenção é, portanto, também um processo para au- mento da produtividade em culturas de plantas economicamente úteis, para prolongamento do período vegetativo, para possibilitar uma semeadura pre- coce, para aumento da qualidade, ou para uso no âmbito do cultivo, sob uso de linhas de cruzamento entre espécies iguais, normalmente, menos vitais, caracterizado pelo fato de que as plantas economicamente úteis são trata- das por desinfecção das sementes, por pulverização foliar ou por aplicação no solo com um ou mais compostos, que foram identificados com ajuda do microarranjo de DNA e/ou compostos, já conhecidos como antídotos.

São preferidos, nesse caso, compostos, que em seu uso como chamados antídotos, já são conhecidos como defensivos, tais como do grupo dos compostos conhecidos como antídotos, que consistem nos compostos das fórmulas 1-1 (mefenpr-dietílico), I-9 (isoxadifeno-etílico), 11-1 (cloquintocet- mexílico), b-11 (fenclorim), b-14 (dimrona), VIII-3 (4-ciclopropilaminocarbonil- N-(2-metoxibenzoil)benzenossulfonamida), de modo especialmente prefe- rido, os compostos 1-1 e VIII-3 (4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxiben- zoil)benzenossulfonamida)).

Por aplicação individual ou combinada dos compostos citados acima, as plantas economicamente úteis podem ser protegidas eficiente- mente em relação aos efeitos de fatores de estresse abióticos, o que se tra- duz, por exemplo, também em produtividade mais alta.

É, portanto, também um objeto da presente invenção um pro- cesso para aumentar a tolerância de plantas economicamente úteis em cul- turas de plantas economicamente úteis em relação a fatores de estresse abióticos, por aplicação individual ou combinada dos compostos identifica- dos com ajuda do microarranjo de DNA, sob observação dos perfis de ex- pressão dos genes, e/ou compostos já conhecidos como antídotos.

Os exemplos abaixo descrevem a invenção em detalhe.

Exemplo 1

Comprovação do efeito de antídotos sobre plantas, que foram expostas a condições de estresse por seca específicas, por perfil de expressão de qe- nes (GEP):

Fator de estresse abiótico = estresse por seca

Sementes de milho da variedade Lorenzo foram tratadas com o composto 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxibenzoil)benzossulfonamida (= VIII-3). Para esse fim, 10 g de sementes foram incubadas, sob leve agita- ção, com 20 mg de substância ativa, dissolvidos em 2 ml de cloreto de meti- leno, até a evaporação do solvente (cerca de 30 minutos). As sementes do grupo de controle foram tratadas apenas com solvente. Subseqüentemente, as sementes tratadas foram colocadas em vasos com terra (diâmetro: 10 cm, 10 sementes por vaso) e as plantas novas de milho foram cultivadas por 10 dias em uma câmara climática, sob condições de luz, umidade e tempe- ratura definidas [luz branca, dia longo (16 h de claridade, 8 h de escuridão), 70% de umidade do ar, 24°C]. Foram usados, em cada caso, 2x10 vasos para os grupos de controle e para o teste de estresse por seca. Durante o cultivo, as plantas foram irrigadas, a cada dois dias, por 20 minutos, por bai- xo, por elevação do nível de água em uma bandeja. 10 dias depois da ger- minação das sementes, as plantas de milho foram expostas ao estresse por seca. Para esse fim, as plantas do grupo de controle 1 (sem tratamento de substância ativa) e do grupo de teste (com tratamento de substância ativa) só foram irrigadas a cada 7 dias, tal como descrito acima. Nas plantas do grupo de controle 2 (sem tratamento de substância ativa) e do grupo de teste 2 (com tratamento de substância ativa), o esquema de irrigação normal foi mantido. Depois de 3 semanas de condições de estresse por seca, o teste foi avaliado tal como se segue. As partes de plantas aéreas foram cortadas e secadas a 50°C durante a noite. No dia seguinte, a massa foliar foi determi- nada por vaso (massa seca) em [g].

Foi tirada a média dos valores de medição sobre os respectivos 10 vasos do grupo de plantas. Os valores numéricos indicados na tabela 1 são valores relativos em [%], com referência aos resultados de medição do grupo de controle 2 (sem tratamento de substância ativa, esquema de irrigação normal).

<table>table see original document page 38</column></row><table>

Tabela 1: Teste de estresse por seca com plantas de milho, sem e com tra- tamento de substância ativa S = composto VIII-3 (= 4=ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxibenzoil) ben- zenossulfonamida), T = estresse por seca A massa seca média foi igual em plantas de sementes não tra- tadas e tratadas, sem condições de estresse (grupo de controle 2, grupo de teste 2).

As plantas do grupo com tratamento com composto VIII-3(= 4=ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxibenzoil)benzenossulfonamida), mos- traram, em média, um hábito mais compacto do que as plantas do grupo de controle, mas que não se refletiu sobre a massa seca. Sob estresse por se- ca, porém, a massa foliar média (massa seca) das plantas tratadas com substância ativa foi significativamente mais alta, em relação às plantas de controle não tratadas (grupo de controle 1, grupo deJeste 1). Exemplo 2

Fator de estresse abiótico = estresse por calor

Sementes de milho da variedade Lorenzo foram tratadas, tal como no exemplo 1, com o composto 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-meto- xibenzoil)benzossulfonamida (= VIII-3) ou tratadas apenas com solvente, sem substância ativa. O cultivo das plantas novas deu-se por 10 dias em uma câmara climática, sob condições definidas, igualmente tal como descrito no exemplo 1. Para o teste de estresse por calor, foram usados 2x10 vasos com plantas de milho. O grupo de controle consistiu em planta não tratadas (solvente), o grupo de teste, em plantas tratadas com substância ativa. Para aplicação das condições de estresse de calor, os dois grupos de plantas fo- ram colocados por 2 dias em uma estufa a 45°C, luz branca, dia longo (16 h de claridade, 8 h de escuridão)e 70% de umidade do ar. Para evitar uma dessecação pela alta temperatura, as plantas foram irrigadas 1 χ por dia, por baixo, por elevação do nível de água em uma bandeja. Depois do estresse por calor, pôde ser observado que - particularmente no grupo estavam dei- tadas, achatadas sobre o solo.

O teste foi avaliado quantitativamente de acordo com os seguin- tes critérios.

Depois do tratamento com calor, as plantas tombadas foram contadas e o resultado foi avaliado por vaso:

< 20% das plantas emergidas tombadas: danificação fraca O 20-50% das plantas emergidas tombadas: danificação média > 50% das plantas emergidas tomadas: danificação forte

Subseqüentemente, todas as plantas foram cultivadas por 2 se- manas, sob condições normais. Depois, foi medido o acréscimo de compri- mento das plantas individuais e a taxa de sobrevivência das plantas por vaso foi determinada:

> 50% de taxa de sobrevivência: danificação fraca 20-50% de taxa de sobrevivência: danificação média

< 20% de taxa de sobrevivência: danificação forte

Os resultados da avaliação de teste estão resumidos na tabela 2. As plantas de controle não tratadas foram fortemente danificadas pelo 1,1 estresse por calor. Chamou a atenção, particularmente, o tombamento das mudas na maioria das plantas, bem como a pequena taxa de sobrevivência. As plantas de teste tratadas com substância ativa distinguiram-se, particu- larmente, por um melhor condição. Embora também nessas plantas a danifi- cação pelo forte estresse por calor ficasse nítido na avaliação final, a taxa de sobrevivência foi significativamente mais alta do que no grupo de controle.

<table>table see original document page 40</column></row><table>

Tabela 2: Teste de estresse por seca com plantas de milho, sem e com tra- tamento de substância ativa S = 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxibenzoil)benzossulfonamida (= VIII-3).

H = estresse por calor

Exemplo 3

Fator de estresse abiótico = estresse por frio (estufa) Sementes de milho da variedade Lorenzo foram semeadas em vasos de 10- cm em terra, com, em cada caso, 10 sementes por vaso. To- dos os grupos de teste consistiam em, em cada caso, 4 vasos. As sementes semeadas dos grupos de teste 1 e 2 foram pulverizadas na pré-emergência com 50 ou 100 [g.a.i./ha] do composto 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2- metoxibenzoil)benzossulfonamida (= VIII-3). As sementes do grupo de con- trole permaneceram sem tratamento. As plantas foram cultivadas sob condi- ções controladas na câmara climática [luz branca (dia longo: 16 h de clarida- de, 8 h de escuridão), 22% C de temperatura durante o dia, 14°C de tempe- ratura durante a noite, 60% de umidade do ar].

Depois da germinação, quando as plantas atingiram uma altura de cerca de 1 cm, 2 vasos de cada grupo foram incubados por 6 h em uma outra câmara climática, sob condições de estresse por frio, a -2°C. Subse- qüentemente, essas plantas foram novamente colocadas junto às outras, na primeira câmara climática.

Depois de mais 24 horas sob condições normais, o teste foi ava- liado. Pôde ser observado que o estresse por frio provocou cloroses nas pontas das folhas das plantas novas do grupo de controle não tratado. Esses sintomas não foram observados nas plantas tratadas com substância ativa, ou apenas de modo muito limitado.

Todas as plantas dos grupos de teste e do grupo de controle, que foram mantidas exclusivamente sob condições normais, sem estresse por frio, não apresentaram quaisquer sintoma da danificação.

Para a avaliação quantitativa do teste, foram contadas as plan- tas com manchas claras nas pontas das folhas. O número total das plantas por grupo de teste e tratamento com estresse por frio era de 20, distribuído, em cada caso, entre 2 vasos. Os resultados da avaliação do teste estão resumidos na tabela 3.

<table>table see original document page 42</column></row><table>

Tabela 3: Teste de estresse por frio (estufa) com plantas de milho, sem e com tratamento de substância ativa, com o composto VIII-3 (= 4-ciclopropila- minocarbonil-N-(2-metoxibenzoil)benzossulfonamida), na pré-emergência.

Todas as plantas foram exposta ao tratamento de estresse por frio. O núme- ro total de plantas por grupo perfez 20.

Os resultados mostram que o tratamento com tratamento de substância ativa com o composto VIII-3 (= 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2- metoxibenzoil)benzossulfonamida), pode reduzir nitidamente os sintomas de danificação causados pelo estresse por frio ou, em dosagem mais alta, im- pedir totalmente a ocorrência desses sintomas.

Exemplo 4

Fator de estresse abiótico = estresse por frio (no campo)

Sementes de milho (Dent Corn) foram tratados com 0,003 mg e 0,03 mg do composto 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxibenzoil) benze- nossulfonamida (=VIII-3) por g de semente e semeadas, em cada caso, so- bre parcelas de teste de 34 m2. Uma parcela de controle continha material de sementes não tratado. Cerca de 8 dias após a emergência das sementes, as mudas estavam no estágio de uma folha e foram expostas por 5 dias às seguintes condições de temperatura:

Máxima: Mínima: 1° dia 16,10C 7,2°C 2° dia 17,8°C 2,7°C 3° dia 16,7°C 0,6°C 4° dia 16,7°C 1,10C 5° dia 22,8°C 12,2°C

Depois desse período de frio, as parcelas de teste foram avalia- das. Nesse caso, todas as plantas foram avaliadas individualmente e as plantas com pelo menos 20% de sintomas de frio, com relação a toda a su- perfície da folha (queimaduras e/ou cloroses), foram avaliadas como danifi- cadas.

Os resultados estão resumidos na tabela 4. Na parcela de con- trole, sem tratamento de substância ativa, todas as plantas (100%) mostra- ram os sintomas de frio descritos. Nas parcelas de teste com tratamento de substância ativa, os danos por frio foram reduzidos significativamente. Nesse caso, só ainda em cerca de 12 das plantas puderam ser observados sinto- mas de dano. O efeito de proteção contra geada máximo foi obtido no âmbi- to das quantidades de tratamento de substância ativa, indicado na tabela.

<table>table see original document page 43</column></row><table>

Tabela 4: Teste de estresse por frio (no campo) com plantas de milho, sem e com tratamento de substância ativa, com o composto VIII-3 (= 4-ciclopropila- minocarbonil-N-(2-metoxibenzoil)benzossulfonamida)

15 *: Proporção das plantas com danos por frio > 20%, com relação ao número total da plantas na parcela de teste

Exemplo 5

Caracterização de genes, que são induzidos sob condições de estresse abiótico pelas substâncias de teste, por perfil de expressão de ge- nes (GEP)

Sementes de milho da variedade Lorenzo foram tratados, tal como descrito no exemplo 1, com o composto VIII-3 (= 4-ciclopropilaminocarbonil-N- (2-metoxibenzoil)benzossulfonamida) ou com solvente. As plantas foram cultivadas por 10 dias em uma câmara climática (condições: veja exemplo 1). Subseqüentemente, as plantas foram expostas às seguintes condições de estresse:

(1) estresse por calor: 6 h a 45°C

(2) estresse por seca: 7 dias sem irrigação, 24°C As plantas de controle do respectivo grupo experimental foram mantidas sob as condições normais descritas no exemplo 1 (temperatura, irrigação). Depois do tratamento de estresse, as folhas das plantas estres- sadas, bem como das plantas de controle não estressadas, foram colhidas, refrigeradas por choque em nitrogênio líquido e armazenadas até o proces- " samento a -80°C. Todos os testes foram realizados em réplicas, com, em cada caso, 2 vasos.

A produção das sondas de RNA marcadas para a hibridização de chip de DNA deu-se de acordo com os protocolos (Expression Analysis, Technical Manual) de Affymetrix (Affymetrix Inc., 3380 Central Expressway, Santa Clara, CA, USA). De cada 500 mg das folhas colhidas foi isolado, pri- meiramente, o RNA total. Cada 10 μg do RNA total foram usados para a sín- tese de cDNA de uma espiral e duas espirais. O cDNA foi amplificado com polimerase de T7 e, nesse caso, marcado, simultaneamente, com biotina UTP. Cada 20 μg desse cDNA biotinilado foram usados para a hibridização do arranjo de genoma de milho da empresa Affymetrix. Esse microarranjo de DNA contém seqüências de DNAf que representam em sua totalidade, 13339 genes. Subseqüentemente, os microarranjos de DNA foram lavados na Affymetrix Fluidics station, tingidos com estraptavidina/ficoeritrina (Mole- cular Probes, P/N S-866) e escaneados com o escaneador de laser agiletn (Agilent Gene Arranjo Scanner). Os dados de fluorescência obtidos foram analisados com o software Microarranjo Suíte 5 de Affymetrix. Depois de realizado o controle de qualidade, todas as análises de chip de DNA foram armazenados em um banco de dados. Para determinação de valores de ex- pressão relativos (fatores de indução, de repressão), os valores de expres- são absolutos dos genes das respectivas experiências de estresse foram comparados com os valores dos respectivos testes de controle (isto é, sem estresse abiótico e tratamento apenas com solvente) e, nesse caso, usados como base os critérios de significância especificados pelo software da Affy- metrix. Dos 4 valores de expressão por gene, em cada caso, obtidos desse modo, foi calculada a média por número médio. Essas médias estão indica- das como fatores de indução nas tabelas de resultados. Comparações de similaridade de perfis de expressão de diversas experiências e análises de agrupamento foram realizadas com o software "Genedata Expressionist" de Genedata (Genedata, Maulbeerstr. 46, CH-4016, Basiléia, Suíça).

Na análise dos perfis de expressão procurou-se, especialmente, por genes que pelas substâncias de teste são induzidos apenas em associa- ção com estresse abiótico, mas não pelas substâncias sozinhas ou pelo es- tresse sozinho. Alguns genes podem ser vistos como indicadores para efei- tos antiestresse adicionais das substâncias, que vão além do efeito fitoprote- tor já conhecido. Os resultados das análises são apresentados nas tabelas abaixo. O padrões de indução dos genes indicadores descritos permitem a detecção dirigida de substâncias ativas para aumento da tolerância de es- tresse abiótico em plantas de cultura.

a) Sob condições de estresse por calor, isto é, as plantas de milho testadas (com 2 mg a.i./g de sementes tratadas com 4-ciclopropila- minocarbonil-N-(2-metoxibenzoil)benzossulfonamida) foram expostas 7 dias depois da germinação por 6 horas a uma temperatura de 45°C.

Um exame dos grupos de genes induzidos deu o seguinte pa- drão, reproduzido na tabela 5

Tabela 5

<table>table see original document page 45</column></row><table> O respectivo conjunto de amostras corresponde a:

Zm.11840.1.A1_em: N-carbamil-L-aminoácido amidoidrolase putativo

Zm.4274.1 .S1_at: citocromo P450

Zm.3040.1 .S1_at: uricase Il (E.C.1.7.3.3); uricase específica de nódulo

Zm12587.1.S1.s_at: transferase de glicosila

Zm18994.2.A1_at: transferase de serina putativa

Zm.13498.1.S1_at: proteína de membrana

Condição A: estresse por calor (6 horas, 45°C)

Condição B: semente tratada com 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxi- benzoil)benzossulfonamida (VIII-3)/SEM estresse por calor

Condição C: semente tratada com 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxi- benzoil)benzossulfonamida (VIII-3) + estresse por calor (6 horas, 45°C)

Desse modo, mesmo a uma leve indução básica das atividades dos genes analisadas, foi observado um nítido aumento da expressão dos ge- nes, que, no caso dos genes aqui citados, situa-se no âmbito de 1,5 a 2,35 (expressão sob condição C/expressão sob condição A). Quando o composto VIII-3 testado foi testado sozinho, isto é, sem estresse por calor, então os níveis de expressão medidos situaram-se no âmbito do âmbito induzido por estresse por calor, ou abaixo ou levemente acima do âmbito induzido por estresse por calor.

Os padrões de indução, derivados da tabela 5, que são repre- sentados diretamente pelos valores de expressão obtidos, mostram indu- ções características por ação do composto 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2- metoxibenzoil)benzossulfonamida (=VIII-3), sendo que o efeito está mais fortemente acentuado sobre a amidoidrolase de N-carbamil-L-aminoácido putativa (Zm. 18840.1 .A1_at] e sobre a carboxipeptidase de serina putativa (Zm 18994.2. A1_at).

b) Sob condições d estresse por seca, isto é, as plantas de mi- lho testadas (2 mg a.i./g de sementes tratadas com 4-ciclopropilaminocar- bonil-N-(2-metoxibenzoil)benzossulfonamida), foram expostas 7 dias depois da germinação por 7 horas, a uma temperatura de 24°C.

Um exame dos grupos de genes induzidos deu o seguinte pa- drão, representado na tabela 6

Tabela 6

<table>table see original document page 47</column></row><table>

O respectivo conjunto de amostras corresponde a:

Zm.818.1 .A1_at proteína de estresse universal

Zm.3633.4.A1_at proteína induzida por ferimento

Zm.18273.1.S1_at semelhante à proteína reguladora

Zm.13229.1.S1_at proteína de resistência á doença do tipo NBS-LRR 02 (fragmento)

Zm. 12035.1 .A1_at similar a AT3G10120

Zm.485.1 .A1_at hemoglobina não simbiótica (HBT) (ZEAMP GLB1)

Zm.818.2.A1_at proteína expressada

Zm. 10097.1 .A1 _at proteína expressada

Zm.18682.1 .A1_at proteína desconhecida

Condição A: estresse por seca (7 dias, 24°C)

Condição B: semente tratada com 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxi- benzoil)benzossulfonamida (VIII-3)/SEM estresse por seca

Condição C: semente tratada com 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-metoxi- benzoil)benzossulfonamida (VIII-3) + estresse por seca (7 dias, 24°C)

Desse modo, mesmo a uma leve indução básica das atividades dos genes analisadas, foi observado um nítido aumento da expressão dos genes, que, no caso dos genes aqui citados, situa-se no âmbito de 1,75 a 8,0 (expressão sob condição C/expressão sob condição A). Quando o com- posto VIII-3 testado foi testado sozinho, isto é, sem estresse por seca, então os níveis de expressão medidos situaram-se no âmbito do âmbito induzido por estresse por seca, ou abaixo ou levemente acima do âmbito induzido por estresse por seca, alguns casos abaixo da expressão de plantas não estres- sadas a valores de < 1,0).

Os padrões de indução, derivados da tabela 6, que são repre- sentados diretamente pelos valores de expressão obtidos, mostram indu- ções características na presença do composto 4-ciclopropilaminocarbonil-N- (2-metoxibenzoil)benzossulfonamida, sendo que o efeito está mais fortemen- te acentuado sobre a proteína de estresse universal [Zm.818.1.A1_at] e he- moglobina não simbiótica (HBT) (ZEAMP GLB1) [Zm.485.1 .A1_at].

Claims (17)

1. Processo para detecção de um composto que aumenta a tole- rância conta fatores de estresse abióticos em plantas, sendo que é avaliado o aumento da transcrição ou expressão de alguns ou vários genes endóge- nos das plantas, como indício da indução.

2. Processo de acordo com a reivindicação 1, sendo que os ge- nes endógenos das plantas são escolhidos de genes que codificam proteí- nas do gruo das oxidases de citocromo, transferases de glicosila, uricases, peptidases, diveras proteínas de membrana, amidoidrolases, proteínas a- bundantes em embriogênese tardia, bem como diversas proteínas de es- tresse gerais.

3. Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que: a) plantas de teste são expostas a um ou mais fatores de es- tresse abióticos, b) plantas de controle, sob condições de resto iguais às das plantas de teste sob a), são adicionalmente postas em contato com um composto a ser testado, seja na forma de material de sementes tratado, seja por pulverização a um determinado momento de desenvolvimento ou por absorção pelas raízes, c) RNA é extraído das plantas de teste e das plantas de controle, d) o RNA é marcado diretamente, de modo radiativo ou não ra- diativo, ou então o RBA é marcado de modo radiativo ou não radiativo, sob simultânea transcrição enzimática no cDNA correspondente, ou então, o cDNA não marcado, obtido, é transcrito enzimaticamente em um cRNA cor- respondente, marcado de modo radiativo ou não radiativo, e) um microarranjo de DNA, que contêm seqüências de DNA das plantas, é hibridizado com as substâncias obtidas de acordo com a eta- pa d), f) são produzidos perfis de expressão dos genes para a expres- são de diversas proteínas de estresse, comparativamente para as plantas testadas de acordo com a) e b), g) dá-se uma quantificação das diferenças de expressão medi- das de acordo com f), e h) dá-se uma sistematização final dos perfis de expressão asso- ciados de acordo com g) por análise de agrupamento.

4. Processo de acordo com a reivindicação 3, sendo que, no caso do aumento pretendido da tolerância no estresse por calor, a expres- são dos genes das oxidases de citocromo, tal como da citocromoxidase P450, transferases de glicosila, uricases, petidases, diversas proteínas de membrana, amidroidrolases é comparada em plantas estressadas por calor e não estressadas por calor.

5. Processo de acordo com a reivindicação 4, sendo quea ex- pressão dos genes da amidoidrolase de N-carbamil-L-aminoácido, da carbo- xipeptidase de serina, da uricase Il (E.C.1.7.3.3) e da transferase de glicosila é comparada em plantas estressadas com calor e plantas não estressadas com calor.

6. Processo de acordo com uma das reivindicações 4 e 5, sendo que o perfil de expressão de um ou mais dos genes conhecidos está aumen- tado pelo fator 1,5 a 30, de preferência, 1,5 a 20, de modo particularmente preferido, 1,5 a 10, de modo especialmente preferido, 1,5 a 5.

7. Processo de acordo com a reivindicação 3, sendo que no ca- so do aumento pretendido da tolerância em estresse por seca a expressão das proteínas abundantes de embriogênese tardia, da proteína de estresse universal, da hemoglobina não simbiótica (Zm.485.1.A1_at), da proteína en- dereçada como "Zm.818.2.A1_a_at" (assinatura de acordo com o arranjo de genoma de milho da empresa Affymetrix) e da proteína endereçada como "Zm.18682.1.A1_s_at" (assinatura de acordo com o arranjo de genoma de milho da empresa Affymetrix) é comparada em plantas estressadas por seca e plantas não estressadas por seca.

8. Processo de acordo com a reivindicação 7, sendo que a ex- pressão dos genes da proteína de estresse universal (Zm.818.1.A1_at), da hemoglobina não simbiótica (Zm.485.1.A1_at), da proteína endereçada como "Zm.818.2.A1_a_at" (assinatura de acordo com o arranjo de genoma de milho da empresa Affymetrix) e da proteína endereçada como "Zm.18682.1 .A1_s_at" (assinatura de acordo com o arranjo de genoma de milho da empresa Affy- metrix) é comparada em plantas estressadas por seca e plantas não estres- sadas por seca.

9. Processo de acordo com uma das reivindicações 7 ou 8, sen- do que o perfil de expressão de um ou mais dos genes conhecidos está au- mentado pelo fator 1,5 a 30, de preferência, 1,5 a 20, de modo particular- mente preferido, 1,5 a 10, de modo especialmente preferido, 1,5 a 8.

10. Uso de um ou mais compostos identificados com ajuda de um processo como definido em uma das reivindicações 1 a 9, e/ou compos- tos já conhecidos como antídotos, para aumento da tolerância em relação a fatores de estresse abióticos, para aumento da produtividade, para prolon- gamento do período vegetativo, para possibilitar uma semeadura precoce, para aumento da qualidade ou para uso no âmbito do cultivo, sob uso de linhas de cruzamento entre espécies iguais, normalmente, menos vitais.

11. Uso de compostos de acordo com a reivindicação 10, que já são conhecidos em seu uso como antídotos na defesa das plantas, escolhi- dos do grupo que consiste em mefenpir-dietílico, isoxadifen-etílico, cloquin- tocet-mexílico, fenclorima, dimrona e 4-ciclopropilaminocarbonil-N-(2-meto- xibenzoil)benzossulfonamida.

12. Uso de compostos de acordo com a reivindicação 10, que já são conhecidos em seu uso como antídotos na defesa das plantas, escolhi- dos do grupo que consiste em mefenpir-dietílico e 4-ciclopropilaminocarbo- nil-N-(2-metoxibenzoil)benzossulfonamida.

13. Uso de compostos de acordo com uma das reivindicações -10 a 12, para aumento de tolerância em relação a fatores de estresse abióti- cos nas plantas de cultura milho, trigo, cevada, centeio, arroz, soja, girassol, colza e beterraba de açúcar.

14. Processo para aumento da produtividade em culturas de plantas economicamente úteis, caracterizado pelo fato de que as plantas economicamente úteis são tratadas por tratamento das sementes, por pulve- rização foliar ou por aplicação no solo com um ou mais compostos, que fo- ram identificados de acordo com um processo de acordo com uma das rei- vindicações 1 a 9, e/ou já conhecidos como antídotos na defesa de plantas.

15. Processo para prolongamento do período vegetativo em cul- turas de plantas economicamente úteis, caracterizado pelo fato de que as plantas economicamente úteis são tratadas por tratamento das sementes, por pulverização foliar ou por aplicação no solo com um ou mais compostos, que foram identificados de acordo com um processo de acordo com uma das reivindicações 1 a 9, e/ou já conhecidos como antídotos na defesa de plan- tas.

16. Processo para possibilitar uma semeadura precoce em cul- turas de plantas economicamente úteis, caracterizado pelo fato de que as plantas economicamente úteis são tratadas por tratamento das sementes, por pulverização foliar ou por aplicação no solo com um ou mais compostos, que foram identificados de acordo com um processo de acordo com uma das reivindicações 1 a 9, e/ou já conhecidos como antídotos na defesa de plan- tas.

17. Processo para aumento de qualidade em culturas de plantas economicamente úteis, caracterizado pelo fato de que as plantas economi- camente úteis são tratadas por tratamento das sementes, por pulverização foliar ou por aplicação no solo com um ou mais compostos, que foram identi- ficados de acordo com um processo de acordo com uma das reivindicações -1 a 9, e/ou já conhecidos como antídotos na defesa de plantas.