BRPI0618139A2 - método de geração de células t com atividade reguladora, composição compreendendo uma população das referidas células e uso das mesmas - Google Patents

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Abstract

<b>MéTODO DE GERAçãO DE CéLULAS T COM ATIVIDADE REGULADORA, COMPOSIçãO COMPREENDENDO UMA POPULAçãO DAS REFERIDAS CéLULAS E USO DAS MESMAS<d>. Muitos tipos de célula no corpo podem remover restos apoptóticos e celulares de tecidos; no entanto, o fagócito profissional, ou célula apresentando antígeno ("APO"), tem uma alta capacidade para fazer isso. O reconhecimento de células apoptóticas ("ACs") acontece através de uma série de receptores de padrão molecular associados a AO, evolucionariamente conservados, ("ACAMPRs") em APOs que reconhecem e se ligam a padrões moleculares associados à célula apoptótica correspondentes ("ACAMPs"). Esses receptores reconhecem ligantes tais como fosfotidil seri- na e lipídeos oxidados encontrados em células apoptóticas. SavilI e outros (200); e Gregory e outros (2004).

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MÉTODO DEGERAÇÃO DE CÉLULAS T COM ATIVIDADE REGULADORA, COMPO-SIÇÃO COMPREENDENDO UMA POPULAÇÃO DAS REFERIDAS CÉLU-LAS E USO DAS MESMAS".
O presente pedido refere-se a e reivindica, sob 35 USC §119(e),o benefício do Pedido de Patente Provisório U.S. N0. de Série 60/732.847depositado em 2 de novembro de 2005, que é expressamente incorporadoaqui em sua totalidade a título de referência.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Muitos tipos de célula no corpo podem remover restos apoptóti-cos e celulares de tecidos; no entanto, o fagócito profissional, ou célula a-presentando antígeno ("APC"), tem uma alta capacidade para fazer isso. Oreconhecimento de células apoptóticas ("ACs") acontece através de umasérie de receptores de padrão molecular associados a AC, evolucionaria-mente conservados, ("ACAMPRs") em APCs que reconhecem e se ligam apadrões moleculares associados à célula apoptótica correspondentes ("A-CAMPs"). Esses receptores reconhecem Iigantes tais como fosfotidil serina elipídeos oxidados encontrados em células apoptóticas. Savill e outros (2002);e Gregory e outros (2004).
Ambos in vitro e in vivo que liberação de AC por APCs in vivoregula as respostas imunes. Savill e outros (200). A modulação imune pare-ce acontecer principalmente através de uma alteração da função de APCcom várias marcas de um APC indutor de tolerância. Esses APCs tolerogê-nicos induzem tolerância através de uma variedade de mecanismos incluin-do a geração de células T reguladoras ("Tregs").
Tregs compreendem um grupo heterogêneo de linfócitos T, queinibe ativamente respostas imunes. Groux e outros (1997); Sakaguchi e ou-tros (2001); e Roncarolo e outros (2001). Há o potencial de desenvolver te-rapias Treg para uma variedade de doenças.
Um modo de gerar Tregs in vivo é através de infusão de ACS.Há evidência de ambos modelos de animal e tratamentos humanos que infu-são de AC, tal como acontece durante fotoforese extracorpórea ("ECP"), induz Tregs. Maeda e outros (2005); Lamioni e outros (2005); Aubin e outros
(2004); Mahnke e outros (2003); e Saas e outros (2002).
Outros métodos para gerar Tregs ex vivo incluem exposição decélulas T a uma variedade de substâncias incluindo: IL-10 (Roncarolo e ou-tros (2001); e Zeller e outros (1999)); TGFp (Zheng e outros (2004); Gray eoutros (1998); Honwitz e outros (1999); Ohtsuka e outros (1999a); Ohtsuka eoutros (1999b); Stohl e outros (1999); Gray e outros (2001); Honwitz (2001);Yamagiwa e outros (2001); Horwitz e outros (2002); e Zheng e outros(2002)); aMSH (Luger e outros (1999); Taylor (2005); Namba e outros(2002); Nishida e outros (1999); Nishida e outros (2004); Streilin e outros(2000); Taylor e outros (1992); Taylor e outros (1994a); Taylor e outros(1994b); Taylor e outros (1996); Taylor (1999); Taylor (2003); e Taylor e ou-tros (2003)); vitamina D3 (Willheim e outros (1999); Penna e outros (2000);Pedersen e outros (2004); May e outros (2004); Koren e outros (1989); Gre-gori e outros (2001); Cobbold e outros (2003); e Barrat e outros (2002)); de-xametasona (Pedersen e outros (2004); Barrat e outros (2002); e 0'Garra eoutros (2003)); e purificação (Earle e outros (2005); Schwarz e outros (2000);Chatenoud e outros (2001); Tang e outros (2004); e Masteller e outros(2005)).
Doenças autoimunes envolvem ativação inapropriada de célulasimunes que são reativas contra tecido próprio. Essas células imunes ativa-das promovem a produção de citocinas e auto-anticorpos envolvidos na pa-tologia das doenças. Outras doenças envolvendo células T incluem DoençaEnxerto Versus Hospedeiro (GVHD) que acontece no contexto de transplan-te. Em GVHD células T do doador rejeitam os tecidos e órgãos do receptormontando um ataque contra o corpo do receptor. Um hospedeiro de outrasdoenças envolve desregulagem do sistema imune hospedeiro. Alguns sãomelhor tratados com agentes farmacêuticos, alguns com biológicos, outroscom tratamentos tais como fotoforese extracorpórea (ECP) e ainda outrostêm opções de tratamento muito limitadas.
ECP foi mostrada ser uma terapia eficaz em certas doenças me-diadas por célula T. No caso de GVHD, fotoforese tem sido usada como umtratamento em associação com unguento de triancinolina tópico, antifúngico,antiviral, antibióticos, imunoglobulinas e metotrexato. ECP tem sido tambémusada com agentes imunossupressores tais como mofetil micofenolato, ta-crolimus, prednisona, ciclosporina, hidroxicloroquina, esteroides, FK-506 etalidomida para GVHD crônica ("cGVHD") e cGVHD refratária. Para trans-plantes de órgão sólido, ECP tem sido usada em conjunto com agentes imu-nossupressores para reduzir o número de episódios de rejeição de aloenxer-to aguda associada com aloenxertos renais e transplantes cardíacos. Porexemplo, ECP tem sido usada com OKT3 e/ou os agentes imunossupresso-res prednisona, azatioprina e ciclosporina para reverter rejeição de aloenxer-to renal aguda. ECP tem também sido usada com ciclofosfamida, irradiaçãodo corpo total fracionada e etoposídeo para transplante de medula ósseaalogeneico para leucemia mieloide aguda, leucemia linfoblástica aguda, leu-cemia mieloide crônica, Iinfoma de não-Hodgkin ou anemia aplásica severa.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Incubação ex vivo com leucócitos em um sistema alogeneicoleva à geração de células T com atividade reguladora. Isto gera células Treguladoras ("células Treg" ou "T regs") com atividade para suprimir respos-tas imunes contra o aloantígeno.
Em sistemas de ativação policlonal e específica de um antígenoum resultado específico de antígeno pode ser obtido através da adição deantígeno ou outra estimulação com células apoptóticas autólogas ("ACs").
A presente invenção compreende um método de geração de cé-lulas T com atividade reguladora (T regs) através da incubação de leucócitoscom células mononucleares de sangue periférico apoptóticas autólogas (ACs).
A presente invenção compreende composições de uma popula-ção de células T com atividade reguladora (T regs) obtidas através da incu-bação de leucócitos com células mononucleares de sangue periférico apop-tóticas autólogas (ACs).
A presente invenção compreende um método de tratamento dedistúrbio autoimune ou melhora de um ou mais de seus sintomas através daadministração a um paciente com necessidade dele de uma quantidade efi-caz de uma composição de uma população de células T com atividade regu-ladora (T regs) obtida através da incubação de leucócitos autólogos comcélulas mononucleares de sangue periférico apoptóticas autólogas (ACs).
A presente invenção compreende um método de tratamento dedoença atópica ou melhora de um ou mais sintomas dela através da admi-nistração a um paciente com necessidade dele de uma quantidade eficaz deuma composição de uma população de células T com atividade reguladora(T regs) obtida através da incubação de leucócitos autólogos com célulasmononucleares de sangue periférico apoptóticas autólogas (ACs).
A presente invenção compreende um método de administraçãoa um receptor de transplante de uma quantidade eficaz de uma composiçãode uma população de células T com atividade reguladora (T regs) obtida a-través da incubação de leucócitos autólogos com células mononucleares desangue periférico apoptóticas autólogas (ACs).
A presente invenção compreende um método de administraçãoa um paciente GVHD de uma quantidade eficaz de uma composição de umapopulação de células T com atividade reguladora (T regs) obtida através daincubação de leucócitos autólogos com células mononucleares de sangueperiférico apoptóticas autólogas (ACs).
A presente invenção compreende um método de tratamento depaciente com um distúrbio ou a predisposição para um distúrbio através doteste do paciente para determinar se o paciente tem um distúrbio e adminis-tração a um paciente com necessidade dele de uma quantidade eficaz deuma composição de uma população de células T com atividade reguladora(T regs) obtida através da incubação de leucócitos autólogos com célulasmononucleares de sangue periférico apoptóticas autólogas (ACs).BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
A figura 1 é um esquema mostrando A: Geração de Treg; B: A-pós células reguladoras T serem geradas, células Treg postas em MLR.
A figura 2 mostra que as células T Reguladoras geradas atravésde Coincubação com PBMCs tratadas com ECP inibem a proliferação deCélulas T singenéicas.
A figura 3 mostra que Células T reguladoras geradas através decoincubação com PBMCs tratadas com ECP inibem a proliferação de CélulaT melhor do que células Tr1 padrão.
A figura 4 mostra que a geração de Células T Reguladoras atra-vés de coincubação com PBMCs tratadas com ECP pode ser revertida atra-vés da adição de lnterleucina-2.
A figura 5 mostra que atividade supressora de células T regula-doras geradas através de coincubação com PBMCs tratadas com ECP édependente de contato.
DESCRIÇÃO DETALHADA
Geração Ex vivo de Tregs usando ACs
Os sistemas que acontecem in vivo para gerar Tregs são bas-tante complexos e se apoiam em uma série de tipos de célula e localizaçãomorfológica. Não obstante, a presente invenção mostra que é possível geraressas células in vivo sob as condições descritas aqui. Incubação ex vivocom leucócitos em um sistema alogeneico leva à geração de células T comatividade reguladora. Isto gera células T reguladoras ("células Treg") comatividade para suprimir respostas imunes contra aloantígeno, importante emuma ampla variedade de distúrbios incluindo, sem limitação, doenças autoi-munes, doença enxerto versus hospedeiro ("GVHD") e transplante de órgãosólido. Em sistemas de ativação policlonal específica de um antígeno e umresultado específico de antígeno pode ser obtido através da adição de antí-geno ou outra estimulação com células apoptóticas autólogas ("ACs").
Este método de produção ex vivo oferece várias vantagens so-bre os métodos induzidos por fármaco previamente descritos. Importante, osefeitos tóxicos e não-naturais possíveis dessas moléculas adicionadas sãoevitados.
Ainda, há vantagens para geração ex vivo sobre a utilização invivo de células apoptóticas incluindo, sem limitação controle maior sobre onúmero, atividade e função dessas células. Este controle terapêutico provêprotocolos de tratamento de paciente aperfeiçoados.Geração de T regs usando uma série de métodos tais como puri-ficação, ativação e adição de fatores de diferenciação tal como TGFp, aM-SH1 anti-CD46, IL-10, vitamina Ü3e dexametasona provou que essas célulaspodem ser geradas ex vivo. Células apoptóticas provéem um método mais"tipo iri vitro" para induzir essas células através da geração de APCs tolero-gênicas.
A presente invenção compreende um método de geração de cé-lulas T com atividade reguladora (T regs) através da incubação de leucócitoscom células mononucleares de sangue periférico apoptóticas autólogas (ACs).
A presente invenção compreende composições de população decélulas T com atividade reguladora (T regs) obtidas através da incubação deleucócitos com células mononucleares de sangue periférico apoptóticas au-tólogas (ACs).
A presente invenção compreende um método de tratamento dedistúrbio autoimune ou melhora de um ou mais de seus sintomas através daadministração a um paciente com necessidade dele de uma quantidade efi-caz de uma composição de uma população de células T com atividade regu-ladora (T regs) obtida através de incubação de leucócitos autólogos comcélulas mononucleares de sangue periférico apoptóticas autólogas (ACs).
Distúrbios autoimunes incluem, sem limitação, mielite transversaaguda, alopecia areata, doença de Alzheimer, esclerose amiotrófica lateral,espondilite anquilosante, síndrome antifosfolipídeo, aterosclerose, doença deAddison autoimune, anemia hemolítica autoimune, doença de Behcet, penfi-goide bolhoso, cardiomiopatia, dermatite psilose celíaca, distúrbios espino-cerebelares cerebelares, degenerações espinocerebelares (ataxia espinhal,ataxia de Friedreich, degenerações corticais cerebelares), alcoolismo crôni-co, hepatite induzida por álcool, hepatite autoimune, síndrome da disfunçãoimune da fadiga crônica (CFIDS), doença inflamatória do intestino crônica,polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica, síndrome de Churg-Strauss, penfigoide cicatricial, doença da aglutinina fria, síndrome de CRest,doença de Creutzfeldt-Jakob, doença de Crohn, atrofia de Dejerine-Thomas,demência pugilística, diabetes mellitus, doença do corpo de Lewy difusa,lúpus discoide, distúrbios dos gânglios basais, coagulação intravascular dis-seminada, síndrome de Down na meia-idade, distúrbios do movimento indu-zidos por fármaco, crioglobulinemia mista essencial, fibriomialgia-fibromio-site, doença enxerto versus hospedeiro, doença de Graves, síndrome deGuilliain-Barré, doença de Hallerrorden-Spatz, tiroidite de Hashimoto, coréiasenil coréia de Huntington, fibrose pulmonar idiopática, trombocitopenia púr-pura idiopática (ITP), nefropatia de IgA, atrofia muscular espinhal infantil oujuvenil, diabetes insulino-dependente, artrite juvenil, patologia de Kawasaki,lesões do sistema corticoespinhal, Leucemias, Iinfoma de Hodgkin, Iinfomanão-Hodgkin, líquen plano, doença de Ménière, doença do tecido conectivomista, esclerose múltipla, degenerações dos múltiplos sistemas (Mencel,Dejerine-Thomas, Shy-Drager, Machado-Joseph), miastenia grave, muscularneurogênica, doença de Parkinson, pênfigo vulgar, anemia perniciosa, poli-arterite nodosa, policondrite, síndromes poliglandulares, polimialgia reumáti-ca, polimiosite, dermatomiosite, agamaglobulinemia primária, cirrose biliarprimária, Paralisia supranuclear progressiva, psoríase, fenômeno de Ray-naud, síndrome de Reiter, febre reumática, artrite reumatoide, sarcoidose,escleroderma, demência senil do tipo corpo de Lewy, síndrome de Sjõgren,(stiff-man) síndrome da rigidez muscular, panencefalite esclerosante suba-guda, distúrbios sistêmicos (doença de Refsum, abetalipoprotemia, ataxia,telangiectasia, distúrbio de multissistema mitocondrial), lúpus eritematososistêmico (SLE), arterite Takayasu, arterite temporal/arterite da célula gigan-te, tiroidose, colite ulcerativa, uveíte, vasculite, vitiligo, granulomatose deWegener, síndrome de Wernicke-Korsakoff.
A presente invenção compreende um método de tratamento dedoença atópica ou melhora de um ou mais de seus sintomas através da ad-ministração a um paciente com necessidade dele de uma quantidade eficazde uma composição de uma população de células T com atividade regulado-ra (T regs) obtida através da incubação de leucócitos autólogos com célulasmononucleares de sangue periférico apoptóticas autólogas (ACs).
Distúrbios atópicos incluem, sem limitação, patologias inflamató-rias crônicas e patologias inflamatórias vasculares, incluindo patologias in-flamatórias crônicas tais como sarcoidose, doença do intestino inflamatóriacrônica, colite ulcerativa e patologia de Crohn e patologias inflamatórias vas-culares tais como, mas não limitado a, coagulação intravascular dissemina-da, aterosclerose e patologia de Kawasaki.
A presente invenção compreende um método de administraçãoa um receptor transplantado de uma quantidade eficaz de uma composiçãode uma população de células T com atividade reguladora (T regs) obtida a-través da incubação de leucócitos autólogos com células mononucleares desangue periférico apoptóticas autólogas (ACs).
A presente invenção compreende um método de administraçãoa um paciente GVDH de uma quantidade eficaz de uma composição de umapopulação de células T com atividade reguladora (T regs) obtida através daincubação de leucócitos autólogos com células mononucleares de sangueperiférico apoptóticas autólogas (ACs).
A presente invenção compreende um método de tratamento deum paciente com um distúrbio ou a predisposição a um distúrbio através doteste do paciente para determinar se o paciente tem um distúrbio, e adminis-tração a um paciente com necessidade de uma quantidade eficaz de umacomposição de uma população de células T com atividade reguladora (Tregs) obtida através da incubação de leucócitos autólogos com células mo-nonucleares de sangue periférico apoptóticas autólogas (ACs).
T regs podem ser administradas ao paciente de acordo com umprograma incluindo, sem limitação, dois dias, uma semana antes do trans-plante; três dias, uma semana antes da coleta para o dito transplante; doisdias por semana por duas semanas antes do transplante; e três dias porsemana por três semanas antes do transplante.
Quantidades eficazes de T regs para uso nos métodos de trata-mento da presente invenção para se obter o benefício clínico requerido emum indivíduo podem variar dependendo da fonte de células, da condição doindivíduo, da idade e peso do indivíduo e outros fatores relevantes, que sãoprontamente determináveis através de métodos bem-conhecidos. De prefe-rência, o número de T regs administrado a um paciente é cerca de 1x105 /kga cerca de 1x107/kg. Com mais preferência, o número de T reg administradoa um paciente é cerca de 1x106/kg.
O método da presente invenção compreende incubação dasACs e dos leucócitos por um tempo e sob condições suficientes para gerar Tregs. Incubação pode ser sob qualquer condição conhecida na técnica ade-quada para leucócitos e por cerca de 1 a cerca de 14 dias. De preferência,incubação é por cerca de 8 dias.
O método da presente invenção pode incluir ainda seleção deleucócitos expressando CD4 para se obter células CD4+. De preferência, ascélulas são CD4+.
O método da presente invenção inclui incubação de qualquerconcentração adequada de células ACS e CD4+. De preferência, as célulasestão em uma razão de cerca de 1:10 a cerca de 10:1 de CD4+:ACs. Commais preferência, as células estão em uma razão de 2:1 a cerca de 1:2 deCD4+:ACs.
As ACs da presente invenção são obtidas através de um trata-mento de indução de apoptose conhecido na técnica. De preferência, o tra-tamento de indução de apoptose é um procedimento ECP que emprega umcomposto fotoativável junto com luz de um comprimento de onda que ativa ocomposto fotoativável. De preferência, o composto fotoativável é um psora-Ieno e a luz é U.V.A. De preferência, o psoraleno é 8-MOP.
O método da presente invenção pode incluir a incubação comfatores adicionados que aumentam mais a geração ou funcionamento de Tregs. Fatores adequados incluem, sem limitação, hormônios, proteínas, fár-macos e anticorpos. De preferência, os fatores incluem, sem limitação, umde TGFp, aMSH, anti-CD46, IL-10, vitamina D3, dexametasona, rapamicinae IL-2. De preferência, o fator é IL-10. De preferência, a IL-10 está presenteem uma concentração de cerca de 1 ng/ml a cerca de 100 ng/ml. De prefe-rência, a IL-10 está presente em uma concentração de cerca de 20 ng/ml.
O método da presente invenção inclui adição de um antígeno àincubação para gerar Tregs que regulam a resposta imune para o antígeno.De preferência, o antígeno é um aloantígeno. Tais antígenos podem ser se-lecionados de qualquer um conhecido na técnica.
As populações de célula úteis nos métodos da invenção com-preendem "células apoptóticas", que incluem células e corpos celulares, istoé, corpos apoptóticos que exibem, ou vão exibir, um ou mais traços caracte-rizantes de apoptose. Uma célula apoptótica pode compreender qualquercélula que esteja na Fase de indução, Fase efetora ou Fase de degradação.As populações de célula nas terapias da invenção podem também compre-ender células que foram tratadas com um agente de indução de apoptoseque estão ainda viáveis. Tais células podem exibir traços caracterizantes deapoptose em algum ponto, pro exemplo, após administração ao indivíduo.De preferência, as ACs são PBMCs autólogas que foram tratadas com umindutor de apoptose. De preferência, o indutor de apoptose é ECP.
ECP induz diretamente níveis significantes de apoptose. Isto foiobservado, por exemplo, em linfócitos de pacientes com CTCL, GVDH e es-cleroderma. As células apoptóticas contribuem para o efeito clínico observa-do.
Traços caracterizantes de apoptose podem incluir, mas não es-tão limitados a, exposição na superfície de fosfatidilserina, conforme detec-tado através de métodos de detecção aceitos, padrão, tal como tingimentocom anexina; alterações na permeabilidade da membrana mitocondrial me-didas por métodos aceitos, padrão, evidência de fragmentação de DNA talcomo o aparecimento de "padrão de escada de DNA" (DNA laddering) emeletroforese de gel de agarose seguindo extração de DNA de células ou a-través de marcação in situ. Salvioli e outros (1997); Teiger e outros (1996); eGavrieli e outros (1992).
A população de célula para uso na presente invenção é induzidapara se tornar apoptótica ex vivo, isto é, extracorporeamente, e é compatívelcom aquelas do indivíduo, doador, ou receptor. Uma população de célulapode ser preparada a partir substancialmente de qualquer tipo de célula demamífero incluindo linhagens de célula cultivadas. Por exemplo, uma popu-lação de célula pode ser preparada a partir de um tipo de célula derivado dopróprio corpo do indivíduo mamífero (autólogo) ou de uma linhagem de célu-la estabelecida. Especificamente, uma população de célula pode ser prepa-rada a partir de células sangüíneas brancas compatíveis com aquelas doindivíduo mamífero, mais especificamente, da célula sangüínea branca dopróprio indivíduo e, mais especificamente, a partir dos próprios leucócitos oucélulas T do indivíduo.
Uma população de célula pode ser também preparada a partirde uma linhagem de célula estabelecida. Uma linhagem de célula que podeser útil nos métodos da presente invenção inclui, por exemplo, células Jurkat(ATCC No. TIB-152). Outras linhagens de célula apropriadas para uso deacordo com os métodos da presente invenção podem ser identificadas e/oudeterminadas por aqueles versados na técnica. A população de célula podeser preparada extracorporeamente antes da administração ao indivíduo, do-ador ou receptor. Então, em uma modalidade, uma alíquota do sangue doindivíduo, sangue do receptor ou sangue do doador pode ser retirada, porexemplo, através de venipunção, e pelo menos uma porção das suas célulasbrancas submetida extracorporeamente a condições de indução de apopto-se.
Em uma modalidade, a população de célula pode compreenderum subconjunto particular de células incluindo, mas não limitado a, leucóci-tos ou células separadas de leucócitos com base em sua expressão de CD4,isto é, células CD4+. A separação e a purificação de componentes do san-gue são bem-conhecidas daqueles versados na técnica. Na verdade, o ad-vento de terapia de componente sangüíneo deu origem a vários sistemasprojetados para a coleta de componentes do sangue específicos. Váriosdesses sistemas de coleta estão comercialmente disponíveis da, por exem-plo, Immunicon Corp. (Huntingdon Valley, Pa.), Baxter International (Deerfi-eld, III.) e Dynal Biotech (Oslo, Norway).
O sistema de separação da Immunicon separa componentes dosangue usando nanopartículas magnéticas (ferrofluidos) revestidas com an-ticorpos que conjugam, isto é, formam um complexo, aos componentes-alvoem uma amostra de sangue. A amostra de sangue é então incubada em umcampo magnético forte e o complexo-alvo migra para longe do resto da a-mostra onde ele pode ser coletado. Vide, por exemplo, Patentes U.S. N°s.6.365.362; 6.361.749; 6.228.624; 6.136.182; 6.120.856; 6.013.532;6.013.188; 5.993.665; 5.985.153; 5.876.593; 5.795.470; 5.741.714;
5.698.271; 5.660.990; 5.646.001; 5.622.83.1; 5.597.531; 5.541.072;5.512.332; 5.466.574; 5.200.084; 5.186.827; 5.108.933; e 4.795.698.
O sistema de separação DynaI1S Dynabeads® Biomagnetic sepa-ra componentes do sangue usando contas magnéticas revestidas com anti-corpos que conjugam aos componentes-alvo em uma amostra de sangue,formando um complexo Dynabeads-alvo. O complexo é então removido daamostra usando um Concentrador de Partícula Magnético (Dynal MPC®).Vários tipos diferentes de célula podem ser coletados usando este sistemade separação. As células T e subconjuntos de célula T podem ser tambémpositiva ou negativamente isolados ou depletados do sangue integral, cama-da de células brancas {buffy coat), células mononucleares gradientes ou di-gestões de tecido usando, por exemplo, CELLection® CD2 Kit (No. do Prod.116.03), Dynabeads® M-450 CD2 (No. do Prod. 111.01/02), Dynabeads®CD3 (No. do Prod. 111.13/14), Dynabeads® plus DETACHaBEAD (No. doProd. 113.03), Dynabeads® M-450 CD4 (No. do Prod. 111.05/06), CD4 Ne-gative Isolation Kit (células T auxiliaries/indutoras) (No. do Prod. 113.17),CD8 Positive Isolation Kit (No. do Prod. 113.05), Dynabeads® CD8 (No. doProd. 111.07/08), CD8 Negative Isolation Kit (No. do Prod. 113.19), T CellNegative Isolation Kit (No. do Prod. 113.11), Dynabeads® CD25 (No. doProd. 111.33/34) e Dynabeads® CD3/CD28 T Cell Expander (No. do Prod.111.31). A Baxter International desenvolveu vários sistemas de aférese combase nas propriedades de centrifugação, incluindo o separador de célula desangue CS-3000, separador Amicus e o sistema Autopheresis-C. O separa-dor CS-3000 Plus blood cell coleta ambos produtos de aférese celular eplasma. Ele compreende um separador de fluxo contínuo com um sistemacentrífugo de câmara dupla que coleta produtos de aférese. O Amicus operaem um formato ou de fluxo contínuo ou fluxo intermitente para coletar pla-quetas de doador único e plasma. O sistema Autopheresis-C é projetadopara a coleta de plasma a partir de doadores e pode coletar mais de 250 mLde plasma. Vide geralmente Patentes U.S. N°s. 6.451.203; 6.442.397;6.315.707; 6.284.142; 6.251.284; 6.033.561; 6.027.441 e 5.494.578
Na modalidade mais preferida da invenção, ECP é usada parainduzir apoptose. Isto envolve um composto fotoativável adicionado a umapopulação de célula ex vivo. O composto fotossensível pode ser administra-do a uma população de célula compreendendo células de sangue seguindosua retirada do indivíduo, receptor, ou doador, conforme for o caso, e antesde ou contemporaneamente com exposição à luz ultravioleta. O compostofotossensível pode ser administrado a uma população de célula compreen-dendo sangue integral ou uma fração dele contanto que as células do san-gue-alvo ou componentes sangüíneos recebam o composto fotossensível.Em outra modalidade, uma porção do sangue do indivíduo, sangue do re-ceptor ou o sangue do doador poderia ser primeiro processada usando mé-todos conhecidos para substancialmente remover os eritrócitos e o compos-to fotoativo poderia então ser administrado à população de célula resultantecompreendendo a fração PBMC enriquecida.
Compostos fotoativáveis para uso de acordo com a presenteinvenção incluem, mas não estão limitados a, compostos conhecidos comopsoraleno (ou furocumarinas) bem como derivados de psoraleno tais comoaqueles descritos em, por exemplo, 4.321.919; e 5.399.719. Compostos pre-feridos incluem 8-metoxipsoraleno; 4,5'8-trimetilpsoraleno; 5-metoxipsora-leno; 4-metilpsoraleno; 4,4-dimetilpsoraleno; 4-5-dimetilpsoraleno; 4'-ami-nometil-4,5',8-trimet-hilpsoraleno; 4,-hidroximetil-4,5',8-trimetilpsoraleno; 4',8-metoxipsoraleno; e um 4'-(omega-amino-2-oxa) alquil-4,5'8-trimetilpsoraleno,incluindo mas não limitado a 4,-(4-amino-2-oxa)butil-4,5\8-trimetilpsoraleno.Em uma modalidade, o composto fotossensível que pode ser usado com-preende o derivado de psoraleno, amotosaleno (S-59) (Cerus Corp., Con-cord, CA). Em outra modalidade, o composto fotossensível compreende 8-metoxipsoraleno (8 MOP).
A população de célula à qual o composto fotoativável foi adicio-nado é tratada com uma luz de um comprimento de onda que ativa o com-posto fotoativável. A etapa do tratamento que ativa o composto fotoativável éde preferência realizada usando luz ultravioleta de comprimento de ondalongo (UVA)1 por exemplo, em um comprimento de onda dentro da faixa de320 a 400 nm. A exposição à luz ultravioleta durante o tratamento de fotofe-rese é de preferência administrada por uma duração de tempo suficientepara aplicar cerca de 1-2 J/cm2 à população de célula.
Aparelho de fotoferese extracorpórea útil nos métodos de acordocom a invenção incluem aqueles fabricados pela Therakos, Inc. (Exton, Pa)sob a marca UVAR®. Uma descrição de tal aparelho é encontrada na Paten-te U.S. N0. 4.683.889. O sistema UVAR® usa um sistema de tratamento econsiste em três fases incluindo: 1) a coleta de uma fração de camada decélula branca (enriquecida em leucócito), 2) irradiação da fração de camadade célula branca coletada e 3) reinfusão das células de sangue brancas tra-tadas. A fase de coleta tem seis ciclos de retirada de sangue, centrifugaçãoe etapas de reinfusão. Durante cada ciclo, sangue integral é centrifugado eseparado em uma bacia de ferese. A partir desta separação, plasma (volumeem cada ciclo é determinado por um operador de instrumento UVAR®) e 40ml de camada de célula branca são guardados em cada ciclo de coleta. Ascélulas vermelhas e todo plasma adicional são reinfundidos ao paciente an-tes do começo do próximo ciclo de coleta. Finalmente, um total de 240 ml decamada de célula branca e 300 ml de plasma são separados e guardadospara irradiação UVA.
A irradiação do sangue enriquecido com leucócito dentro do cir-cuito de irradiação começa durante a coleta da camada de célula branca noprimeiro ciclo de coleta. O plasma e camada de célula branca coletados sãomisturados com 200 ml de solução salina normal heparinizada e 200 mg deUVADEX® (8-metoxipsoraleno solúvel em água). A mistura flui em uma ca-mada de 1,4 mm de espessura através da PHOTOCEPTOR® Photoactivati-on Chamber, que é inserida entre dois bancos de lâmpadas UVA do PHO-TOSETTE®. Lâmpadas UVA PHOTOSETTE® irradiam ambos lados destacâmara PHOTOCEPTOR® transparente para UVA, permitindo uma exposi-ção de 180 minutos à luz ultravioleta A, dando uma exposição média porlinfócito de 1-2 J/cm2. A preparação da camada de célula branca final con-tém uma estimativa de 20% a 25% do componente de PBMC total e tem umhematócrito de 2,5% a 7%. Seguindo o período de fotoativação, o volume éreinfundido em um paciente durante um período de 30 a 45 minutos. O pedi-do de patente U.S. N0. de Série 09/480.893 descreve outro sistema para usoem administração de ECP. 5.951.509; 5.985.914; 5.984.887. 4.464.166;4.428.744; 4.398.906; 4.321.919; WO 97/36634 e WO 97/36581 tambémcontêm descrição de dispositivos e métodos úteis com relação a isso.
Outro sistema que pode ser útil nos métodos da presente inven-ção é descrito no pedido de patente U.S. N0 de Série 09/556.832. Este sis-tema inclui um aparelho através do qual o volume fluido líquido coletado ouremovido de um indivíduo pode ser reduzido durante ECP. A quantidade efi-caz de energia de luz que é aplicada a uma população de célula pode serdeterminada usando métodos e sistemas descritos na 6.219.584.
Uma variedade de outros métodos para indução de apoptose emuma população de célula é bem-conhecida e pode ser adotada para uso napresente invenção. Um tal tratamento compreende submeter uma populaçãode célula à radiação ionizante (raios gama, raios x, etc) e/ou radiação ele-tromagnética não-ionizante incluindo luz ultravioleta, aquecimento, esfria-mento, privação de soro, privação de fator de crescimento, acidificação, dilu-ição, alcalinização, mudança de resistência iônica, privação de soro, irradia-ção ou uma combinação deles. Alternativamente, apoptose pode ser induzi-da submetendo uma população de célula à ultra-som.
Ainda outro método de indução de apoptose compreende a apli-cação extracorpórea de estresse oxidativo a uma população de célula. Istopode ser conseguido tratando a população de célula, em suspensão, comagentes oxidantes químicos tais como peróxido de hidrogênio, outros peró-xidos e hidroperóxidos, ozônio, permanganatos, periodatos e similar. Agen-tes oxidantes biologicamente aceitáveis podem ser usados para reduzir pro-blemas potenciais associados a resíduos e contaminantes da população decélula induzida por apoptose então formada.
Na preparação da população de célula induzida por apoptose,deve-se tomar cuidado para não aplicar níveis excessivos de estresse oxida-tivo, radiação, tratamento com fármaco, etc, porque pode haver um riscosignificante de causar necrose de pelo menos algumas das células sob tra-tamento. Necrose causa ruptura da membrana celular e a liberação dos con-teúdos celulares freqüentemente com resultados biologicamente prejudiciais,particularmente eventos inflamatórios, de modo que a presença de célulasnecróticas e seus componentes junto com a população de célula compreen-dendo células apoptóticas é melhor evitada. Níveis apropriados de tratamen-to da população de célula para induzir apoptose e o tipo de tratamento esco-Ihido para induzir apoptose são prontamente determináveis por aqueles ver-sados na técnica.
Um processo de acordo com a presente invenção envolve a cul-tura de células do indivíduo ou uma linhagem de célula de mamífero compa-tível. As células cultivadas podem então ser tratadas extracorporeamentepara induzir apoptose e criar uma população de célula nelas. O tratamentoextracorpóreo pode ser selecionado do grupo consistindo em anticorpos,agentes quimioterapêuticos, radiação, ECP, ultra-som, proteínas e agentesoxidantes. As células, suspensas no plasma do indivíduo ou outro meio desuspensão adequado, tal como solução salina ou um meio de cultura de cé-lula de mamífero equilibrado, podem então ser incubadas conforme indicadoabaixo.
Métodos para a detecção e quantificação de apoptose são úteispara determinação da presença e nível de apoptose na preparação a serincubada com leucócitos ou células T na presente invenção. Em uma moda-lidade, células sofrendo de apoptose podem ser identificadas por uma carac-terística "escada" ("Iaddering") de DNA vista em eletroforese de gel de aga-rose, resultando da clivagem de DNA em uma série de fragmentos. Em outramodalidade, a expressão de superfície de fosfatidilserina em células podeser usada para identificar e/ou quantificar uma população de célula induzidapor apoptose. Medição de mudanças em potencial de membrana mitocon-drial, refletindo mudanças na permeabilidade de membrana mitocondrial, éum outro método reconhecido de identificação de uma população de célula.Vários outros métodos de identificação de células sofrendo de apoptose e deuma população de célula, muitas usando anticorpos monoclonais contramarcadores específicos para uma população de célula, foram também des-critos na literatura científica.
A administração de T regs encontra utilidade no tratamento deartrite e outras doenças autoimunes. Elas também são úteis no tratamentoou profilaxia de pelo menos uma doença relacionada autoimune em umacélula, tecido, órgão, animal ou paciente incluindo, mas não limitado a, mieli-te transversa aguda, alopecia areata, doença de Alzheimer, esclerose amio-trófica lateral, espondilite anquilosante, síndrome antifosfolipídeo, ateroscle-rose, doença de Addison autoimune, anemia hemolítica autoimune, doençade Behcet, penfigoide bolhoso, cardiomiopatia, dermatite psilose celíaca,distúrbios espinocerebelares cerebelares, degenerações espinocerebelares(ataxia espinhal, ataxia de Friedreich, degenerações corticais cerebelares),alcoolismo crônico, hepatite induzida por álcool, hepatite autoimune, síndro-me da disfunção imune da fadiga crônica (CFIDS), doença inflamatória dointestino crônica, polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica, sín-drome de Churg-Strauss, penfigoide cicatricial, doença da aglutinina fria,síndrome de CRest, doença de Creutzfeldt-Jakob1 doença de Crohn, atrofiade Dejerine-Thomas, demência pugilística, diabetes mellitus, doença do cor-po de Lewy difusa, lúpus discoide, distúrbios dos gânglios basais, coagula-ção intravascular disseminada, síndrome de Down na meia-idade, distúrbiosdo movimento induzidos por fármaco, crioglobulinemia mista essencial, fibri-omialgia-fibromiosite, doença enxerto versus hospedeiro, doença de Graves,síndrome de Guilliain-Barré, doença de Hallerrorden-Spatz, tiroidite de Ha-shimoto, coréia senil, coréia de Huntington, fibrose pulmonar idiopática,trombocitopenia púrpura idiopática (ITP), nefropatia de IgA, atrofia muscularespinhal infantil ou juvenil, diabetes insulino-dependente, artrite juvenil, pato-logia de Kawasaki, lesões do sistema corticoespinhal, Leucemias, Iinfoma deHodgkin, Iinfoma não-Hodgkin, líquen plano, doença de Ménière, doença dotecido conectivo mista, esclerose múltipla, degenerações dos múltiplos sis-temas (Mencel, Dejerine-Thomas, Shy-Drager, Machado-Joseph), miasteniagrave, muscular neurogênica, doença de Parkinson1 pênfigo vulgar, anemiaperniciosa, poliarterite nodosa, policondrite, síndromes poliglandulares, poli-mialgia reumática, polimiosite, dermatomiosite, agamaglobulinemia primária,cirrose biliar primária, Paralisia supranuclear progressiva, psoríase, fenôme-no de Raynaud, Síndrome de Reiter, febre reumática, artrite reumatoide,sarcoidose, escleroderma, demência senil do tipo corpo de Lewy, síndromede Sjôgren, (stiff-man) síndrome da rigidez muscular, panencefalite esclero-sante subaguda, distúrbios sistêmicos (doença de Refsum, abetalipoprote-mia, ataxia, telangiectasia, distúrbio de multissistema mitocondrial), lúpuseritematoso sistêmico (SLE), arterite Takayasu, arterite temporal/arterite dacélula gigante, tiroidose, colite ulcerativa, uveíte, vasculite, vitiligo, granulo-matose de Wegener, síndrome de Wernicke-Korsakoff.
A presente invenção é também útil no tratamento de rejeição deenxerto em doença enxerto versus hospedeiro (GVDH). Rejeição de trans-plante de órgão sólido aguda acontece em 30% a 60% de pacientes apóstransplante de pulmão e a um grau menor com fígado, rim, coração, etc, de-vido ao sucesso de agentes imunossupressores. A reação imune mediadapor linfócito (célula) contra antígenos de transplante é o mecanismo principalde rejeição aguda. Uma rejeição retardada ou crônica causa destruição doenxerto em meses a anos após transplante e é caracterizada por destruiçãovascular levando à necrose do tecido transplantado. Esta rejeição não é atu-almente suprimida a nenhum grau elevado por regimes padrão e então anecessidade de tolerância imune mais sustentável é uma necessidade nãosatisfeita significante.
Deterioração de enxerto tardia acontece ocasionalmente, e estetipo crônico de rejeição freqüentemente progride insidiosamente apesar daterapia imunossupressora aumentada. A figura patológica difere daquela derejeição aguda. O endotélio arterial é principalmente envolvido, com prolife-ração extensiva que pode gradualmente ocluir o lúmen do vaso, resultandoem isquemia e fibrose do enxerto.
Imunossupressores são atualmente amplamente usados paracontrolar a reação de rejeição e são principalmente responsáveis pelo su-cesso do transplante. No entanto, esses fármacos suprimem todas as rea-ções imunológicas, deste modo tornando infecção forte a principal causa demorte em receptores de transplante.
Tratamento com imunossupressores existentes pode diferir nocaso de tipos diferentes de transplantes. Aloenxertos de fígado são menosagressivamente rejeitados do que outros aloenxertos de órgão. Por exemplo,rejeição hiperaguda de um transplante de fígado não acontece invariavel-mente em pacientes que foram pré-sensibilizados para antígenos HLA ouincompatibilidades ABO. Terapia imunossupressora típica em adulto envolveuso de ciclosporina, geralmente dada IV em 4 a 6 mg/kg/dia começando nomomento do transplante e então 8 a 14 mg/kg/dia p.o. quando alimentação étolerada. As doses são ajustadas a jusante se disfunção renal acontecer, eos níveis no sangue são usados como medições aproximadas de dosagemadequada.
Em transplante de coração, regimes imunossupressores são si-milares àqueles para transplante de rim ou fígado. No entanto, nos trans-plantes de pulmão e coração-pulmão rejeição aguda acontece em >80% dospacientes, mas pode ser tratada com sucesso. Os pacientes são tratadoscom corticosteroides, dados rapidamente IV em alta dosagem, ATG ouOKT3. ALG ou OKT3 profilático é também freqüentemente dado durante asduas primeiras semanas pós-transplante. Transplante de pâncreas é únicodentre os transplantes de órgão vascularizados: ao invés de ser usado parasalvar uma vida, ele tenta estabilizar ou prevenir as complicações de órgão-alvo devastadoras de diabetes tipo I. Devido ao fato do receptor trocar osriscos de injeção de insulina pelos riscos de imunossupressão, transplantede pâncreas foi geralmente limitado principalmente a pacientes que já preci-sam receber fármacos imunossupressores (isto é, diabetes com falência re-nal que estão recebendo um transplante de rim).
Pacientes com leucemia mieloide ou linfoblástica aguda podemse beneficiar de transplante de medula óssea (BMT). BMT pediátrico se ex-pandiu por causa de seu potencial para cura de crianças com doenças gené-ticas (por exemplo, talassemia, anemia falciforme, imunodeficiências, errosinatos do metabolismo). Outra opção para BMT é transplante autólogo (re-moção da medula óssea de um paciente quando uma remissão completa foiinduzida, seguido por tratamento ablativo do paciente com a expectativa dedestruição de qualquer tumor residual e resgate com a medula óssea dopróprio paciente). Uma vez que um autoenxerto é usado, nenhuma imunos-supressão é necessária outra que não quimioterapia de alta dose a curtoprazo usada para erradicação de tumor e ablação da medula óssea; proble-mas de pós-transplante com GVHD são mínimos.
A taxa de rejeição é <5% de transplantes para pacientes comleucemia de doadores idênticos HLA Para pacientes que sofreram trans-plante múltiplo com anemia aplástica, a taxa de rejeição foi também signifi-cantemente reduzida por causa de imunossupressão aumentada duranteindução do transplante. Não obstante, complicações podem surgir incluindorejeição pelo hospedeiro do enxerto de medula, GVHD aguda e infecções.Complicações posteriores incluem GVHD crônica, imunodeficiência prolon-gada e recorrência de doença.
Vários outros transplantes podem ser tornados mais eficazescom o tratamento da presente invenção. Exemplos incluem transplante decórnea, aloexertos de pele, aloenxertos de cartilagem, enxertos ósseos etransplante do intestino delgado.
Um hospedeiro de outros distúrbios pode ser tratado mais efi-cazmente usando os métodos da presente invenção. Por exemplo, Iinfomade célula T cutâneo é uma doença onde linfócitos T se tornam malignos eafetam a pele. Três tipos de tratamento são geralmente usados: radiação;quimioterapia; e fotoferese. Tratamento de Iinfoma de célula T cutânea de-pende do estágio da doença e da idade do paciente e saúde geral. Trata-mento padrão pode ser considerado por causa de sua eficácia em pacientesnos estudos passados ou participação em um teste clínico pode ser conside-rada. A maioria dos pacientes com Iinfoma de célula T cutânea não é curadacom terapia-padrão e alguns tratamentos-padrão podem ter mais efeitos co-laterais do que se deseja. Tratamento usando o método da presente inven-ção pode ser usado no tratamento desta doença também.Os métodos da presente invenção podem ser também usadosem cirurgia de implante, por exemplo, com cirurgia de implante geralmenterealizada em cirurgia plástica cosmética ou não-cosmética. Tais implantespodem incluir dental, enxerto de gordura, por exemplo, nas bochechas, lá-bios e nádegas, implantes faciais, incluindo aqueles no nariz, bochechas,testa, queixo e crânio, implantes nas nádegas, implantes de seio, etc. Outrosimplantes incluem, mas não estão limitados a, anel da córnea, cortical, orbi-tal, coclear, músculo (todos os músculos, incluindo peitoral, gluteal, abdomi-nal, panturrilha, soleus, bíceps, tríceps), junta aloplástica e substituição deosso, implantes de reparo ósseo (pinos, bastonetes, barras(beams), barras,molas), placas de metal espinhal, vertebral, cabelo, injeções de botox/ colá-geno/restilano/perlano, implantes no pênis, implantes de semente de prósta-ta, implantes de seio (cosmético e reconstrutor), dispositivos intrauterinos,implantes hormonais; implante de célula fetal ou tronco, marcapasso, desfi-brilador, artérias /veias/válvulas artificiais e órgãos artificiais.
Doenças autoimunes podem ser também mais eficazmente tra-tadas usando os métodos da presente invenção. Essas são doenças onde osistema imune produz autoanticorpos para um antígeno endógeno, com da-no conseqüente a tecidos. Indivíduos podem ser identificados como tendouma doença através de vários métodos, incluindo, mas não limitado a, tipifi-cação de ligação HLA, ensaios baseados em sangue ou soro ou identifica-ção de variantes genéticas, por exemplo, polimorfismos de nucleotídeo único(SNPs). Por exemplo, uma vez o indivíduo sendo determinado ter a ligaçãoHLA DR4 e ter sido diagnosticado ter artrite reumatoide, tratamento com Treg pode ser prescrito. Outros alelos de HLA, também conhecidos como ale-los de MHC, que estão associados com doenças autoimunes, incluem B27(Espondilite anquilosante); DQA1*0501 e DQB1*0201 (Doença celíaca);DRB1*03, DRB1*04, DQB1*0201, DQB1*0302 e DMA*0101 (Diabetes TipoI); e Cw6 (Psoríase). Esses alelos podem ser também usados para determi-nar se um indivíduo está sofrendo uma doença autoimune e, então, se tra-tamento com T reg pode ser eficaz.
Ensaios baseados em sangue ou soro podem ser usados paraavaliar a predisposição a uma doença. Existe, por exemplo, um ensaio quedetecta a presença de anticorpos antinucleares no soro, o que pode levar aoinício de lúpus. Ensaios basedos em soro também existem para previsão demiocardite autoimune. Ainda, ensaios baseados em soro podem ser usadospara determinar níveis de insulina (diabetes) ou enzimas do fígado ou cora-ção para outras doenças. Níveis de T3 podem ser previsíveis de tiroidite Ha-shimotos. Após um indivíduo ser determinado ter uma doença usando umensaio baseado em sangue ou soro, os métodos da presente invenção po-dem ser usados para prevenir ou retardar o início de, ou reduzir os efeitosdessas doenças. Indivíduos podem ser identificados como sendo predispos-tos à doença através da identificação de variações genéticas, incluindo, masnão limitado a, SNPs. Deste modo, em um aspecto adicional da invenção,uma determinação é primeiro feita de que um paciente tem um distúrbio au-toimune ou está predisposto a um e que o paciente é então prescrito paratratamento com T regs.
Os métodos da presente invenção são também aplicáveis aotratamento de doenças atópicas, que são doenças alérgicas onde indivíduossão muito sensíveis a alérgenos extrínsecos. Doenças atópicas incluem,mas não estão limitadas a, dermatite atópica, asma brônquica extrínseca,urticária, rinite alérgica, enterogastrite alérgica e similar. Testes de diagnósti-co padrão podem ser usados para determinar se um paciente tem um distúr-bio do tipo acima descrito.
Os exemplos que seguem são providos para ilustrar, mas nãolimitar, a invenção reivindicada. Todas as referências citadas aqui são aquiincorporadas a título de referência.
Exemplo 1
Indução apoptótica através de 8MOP/UVA
Leucócitos humanos de doador normal foram passados por Fi-coll-paque e PBMC coletada e lavada antes de pôr em aproximadamente1 07 células/ml em um frasco de cultura de tecido de T-75. A este frasco 200ng/ml de 8-MOP foram adicionados antes da irradiação UVA (~3 J/cm2). Ascélulas foram rapidamente removidas do frasco, a fim de evitar aderência, epostas na concentração apropriada de geração de T reg.Geração de Treg
Leucócitos humanos de doador normal foram passados em Fi-coll-paque e PBMC foram coletadas. Linfócitos T foram purificados dasPBMCs usando colunas separadoras de célula magneticamente ativadas ecoquetel de anticorpo de seleção negativa CD4+ (Miltenyi Biotec). As célulasT CD4 puras purificadas foram coincubadas com PBMCs tratadas com ECPem uma razão 2:1 (CD4:PBMCs) com 20 ng/ml de IL-10 por 8 dias (Figura1A). Após 8 dias, as células T CD4+ foram purificadas usando MACs e co-quetel de anticorpo de seleção positiva CD4 (Miltenyi Biotec). IL-10 não érequerida, mas, em alguns casos, induz um fenótipo mais consistente.Avaliação de Treg
A atividade supressiva de Treg foi avaliada através de uma rea-ção de linfócito mista secundária ("MLR") (Figura 1B). Células T CD4+ sin-genéicas foram postas em uma placa de 96 cavidades a 10.000 célu-las/cavidade. Células dendríticas alogenéicas foram adicionadas à cavidadea 2000 células por cavidade. As Tregs foram tituladas em uma MLR come-çando em uma razão de 1 célula Treg para 4 células T respondedoras. Aproliferação foi medida no dia 5 através de incorporação de bromodesoxiuri-dina ("BRDU") usando Roche's Cell Proliferation BRDU chemiluminescentELISA. A quimioluminescência foi medida usado TopCount (Perkin Elmer).Exemplo 2
Atividade de Treg é encontrada em geração de células T através dopresente método
Células T CD4+ foram incubadas com células de sangue perifé-rico tratadas com ECP por 8 dias na presença de 20 mg/ml de IL-10. As Tregs foram purificadas da cultura usando coquetel de anticorpo de seleçãopositiva MACs e CD4 (Miltenyi Biotec). Para avaliar sua atividade regulado-ra, as T regs foram então adicionadas a uma MLR consistindo em 10.0000células T CD4+ singenéicas e 2000 células dendríticas alogenéicas. Prolife-ração nessas culturas foi medida no dia 5 através de incorporação de BRDU.Os resultados são mostrados na figura 2.Exemplo 3
Atividade de T reg é encontrada em geração de células T através dopresente método
Células Tr1 foram geradas incubando células T CD4+ na pre-sença de 20 ng/ml de IL-10. As T regs foram geradas incubando células TCD4+ com células de sangue periférico tratadas com ECP por 8 dias na pre-sença de 20 ng/ml de IL-10. As T regs foram purificadas da cultura usandocoquetel de anticorpo de seleção positiva MACs e CD4 (Miltenyi Biotec). Pa-ra avaliar sua atividade reguladora, as Tregs foram então adicionadas a umaMLR consistindo em 10.000 células T CD4+ singenéicas e 2000 célulasdendríticas alogenéicas. Proliferação nessas culturas foi medida no dia 5através de incorporação de BRDU. Os resultados são mostrados na figura 3.Exemplo 4
O fenótipo T reg é encontrado na geração de células T com o presentemétodo
Células T CD4+ foram incubadas com células de sangue perifé-rico tratadas com ECP por 8 dias na presença de 20 ng/mL de IL-10. As Tregs foram purificadas da cultura usando coquetel de anticorpo de seleçãopositiva MACs e CD4 (Miltenyi Biotec). As T regs foram então adicionadas auma MLR consistindo em 10.000 células T CD4+ singenéicas e 2000 célulasdendríticas alogenéicas. IL-2 foi adicionada a MLR a 2 ng/mL. Proliferaçãonessas culturas foi medida no dia 5 através de incorporação de BRDU. Osresultados são mostrados na figura 4.Exemplo 5
Fenótipo T reg é encontrado em geração de células T com o presentemétodo
Tregs geradas através de coincubação com PBMCs tratadascom ECP foram avaliadas em uma MLR usando um sistema de inserção detranscavidade de 24 cavidades (Nunc Tissue Culture 0,2 μΜ Anopore Insertsystem no. 136935). Uma MLR consistindo em 500.000 células T CD4+ sin-genéicas e 100.000 células dendríticas alogenéicas foi posta em uma porçãoinferior da transcavidade. 250.000 T regs foram postas ou na inserção detranscavidade ou diretamente na cavidade inferior com as células T respon-dedoras e células dendríticas alogenéicas. No dia 5, os insertos foram remo-vidos e proliferação foi medida no dia 5 através de incorporação de BRDU.Os resultados são mostrados na figura 5.
Exemplo 6
(Aplicação In Vivo Modelo de Camundongo) (Profética)Camundongos
Camundongos C3H/HeJ (C3H; H2k), (B6XC3H)F1 (H2bXk),(B6XDBA/2)F1 (H2bXd), C57BL/6 (B6; H2b) e CBA/JCr (CBA; H2k) machosserão comprados do National Câncer Institute Research and DevelopmentCenter (Frederick, Md.)· Camundongos B10.BR (H2k) serão comprados doJackson Laboratories (Bar Harbour, ME). Os camundongos usados para ex-perimentos terão entre 6-10 semanas de vida e serão alojados em gaiolasmicroisoladoras estéreis dentro de uma instalação livre de patógeno especí-fica, recebendo comida autoclavada e água ad libitum.Meios
Solução salina tamponada com fosfato (PBS) suplementada com0,1% de albumina de soro bovino (BSA; Sigma Chemial Co., St. Louis, Mo)será usada para todas as manipulações in vitro da medula óssea e linfócitosdo doador. Imediatamente antes da injeção, as células serão lavadas e res-suspensas em PBS sozinho. Para manutenção das linhagens celulares epara ensaios in vitro, meio RPMI 1640 (Mediatech, Herndon, Va) será usado,suplementado com 10% de soro bovino fetal (FBS; GIBCO, Grand Island,N.Y.), 2 mmols/L de L-glutamina, 50 lU/mL de penicilia e 50 μg/mL de es-treptomicina.Anticorpos
Fotoferese experimental
Esplenócitos serão coletados de camundongos saudáveis filho-tes singeneicos e feitos em suspensão de célula única esfregando com aextremidade traseira de uma seringa em PBS. Essas células serão ressus-pensas e as células lavadas duas vezes com PBS antes de serem ressus-pensas a 12,5X106 células/mL de PBS. Quando da lavagem das células elasserão ressuspensas em meio gelado e semeadas em aproximadamente 106células/ml em frascos T75. Psoraleno (solução UVADEX) será adicionadopara uma concentração final de 200 ng/ml, que é uma diluição 100 vezes dasolução de estoque provida por Therakos. O frasco será posto deitado nacâmara de irradiação de UVA e dado aproximadamente 1,5 J/cm2 de luz quecorresponde a 1,5 minuto de luz inferior quando a bandeja está a 6 cm dafonte de luz. As células serão rapidamente removidas do frasco para evitaraderência e postas na concentração apropriada para injeção. Se houver a-derência, o frasco será suavemente raspado ou batido para remover a maio-ria das células.
Transplante de medula óssea
Medula óssea será coletada da tíbia e fêmures de camundongosdoadores através de lavagem com PBS contendo BSA a 0,01% (PBS/BSA).Células da medula óssea serão depletadas de células T usando um anti-Thy1,2 nAB (J1j; AMerican Type Culture Collection, Rockville, Md.) em uma dilu-ição de 1:1000 e complemento de porquinho-da-índia (Rockland Immuno-chemicals, Gilbertsville, Pa.) em uma diluição de 1:6 por 45 minutos a 37° C.Linfócitos serão isolados de baços e nós linfáticos de camundongos doado-res. Esplenócitos serão tratados com solução de Iise salina equilibrada deGey contendo 0,7% de cloreto de amônio (NH4CI) para remover células desangue vermelhas (RBCs). Após depleção de RBC, células do baço e nólinfático serão agrupadas e depletadas de células B aquecendo em uma pla-ca de Petri plástica, pré-revestida com uma diluição de 5 mg/ml de IgG anti-camundongo de cabra por 1 hora a 4°C. Esses tratamentos são esperadosresultar em populações de doador de aproximadamente 90%-95% de célulasCD3+, conforme quantificado por citometria de fluxo fluorescente. Subcon-juntos de célula T serão então isolados através de seleção negativa usandoou anti-CD8 (3,168) ou mAb anti-CD4 (RL172) e complemento. Esses trata-mentos são esperados reduzir as populações de subconjunto de célula Talvo para níveis de base, conforme determinado através de análise citomé-trica de fluxo. Camundongos receptores serão expostos à irradiação de san-gue integral de 13 Gy a partir de uma fonte 137CS a 1,43 Gy/min, aplicadaem uma dose dividida de 6,5 Gy cada, separada por 3 horas. Esses camun-dongos serão então transplantados com células da medula óssea tratadascom 2x106 anti-Thy 1.2 (ATBM; depletada de célula T) junto com o númeroindicado de células T apropriadas (células T enriquecidas com CD4 ou CD4 doadoras), intravenosamente (i.v.) através da veia da cauda. Os camundon-gos serão tratados com T regs 1 dia antes do transplante e novamente nosdias 0, 4, 8 e 12 (todos a 0,5 mg; i.p.). Para experimentos GVL, camundon-gos receptores B6 serão provocados com uma injeção de T regs no dia an-tes do transplante de ATBM e células T doadoras, com um programa similarde tratamento de T reg. Em ambos experimentos GVHD e GVL, os camun-dongos serão checados diariamente quanto à morbidez e mortalidade até otérmino. Os dados serão agrupados de 2-3 experimentos separados e tem-pos de sobrevivência de meio (MST) serão determinados como o ponto desobrevivência 50% interpolado da regressão linear durante todo o dia de pontos de dados de morte, incluindo zero. Comparação estatística para so-brevivência entre grupos experimentais será realizada através do teste denível assinalado não-paramétrico de Wilcoxon. Significância para compara-ções de peso será determinada através do teste T em pontos de tempo indi-viduais.
Citometria de Fluxo
mAbs apropriados em volumes de 25 μL serão incubados com 2-5x105 células nos poços de uma microplaca de fundo em U de 96 poços a 4oC por 30 minutos, centrifugados a 1500 rpm por 3 minutos e lavados comPBS contendo BSA a 0,1% e azida de sódio a 0,01% (tampão de lavagem). As células positivas percentuais e a intensidade de fluorescência média a-ritmética serão calculadas para cada amostra.
Análise Patológica
Biópsias da orelha de espessura integral (3x2 mm) serão amos-tradas de cada camundongo dos vários grupos de tratamento e imediata- mente fixadas em 4% de glutaraldeído da noite para o dia e então enxagua-das com tampão de cocodilato de sódio a 0,1 M (pH 7,4). Os tecidos serãopós-fixados com tetróxido de ósmio a 2% por 2 h, desidratados em etanolgraduado e embebidos em Epon 812. Seções de um mícron de espessuraserão cortadas com um ultramicrotomo Porter-Blum MT2B, tingidas com to-luidina azul e finalmente mergulhadas em 95% de etanol para análise mi-croscópica de luz. O número de células epidermais disqueratóticas/mm Iine-ar, conforme previamente determinado, será contado sob uma objetiva x100e uma lente x10 de um microscópio de luz. Mais de dez mm lineares da epi-derme serão avaliados em cada animal e cada ponto de tempo. A análiseserá realizada sob condições cegas como para os grupos de tratamento.
Modelos de animal adicionais para T regs são providos, por e-xemplo, pela 20030157073; Kohm, A. e outros (2002); Tang1 Q. e outros(2004); e Schwarz, A. e outros (2004).Referências
Aubin e outros (2004) "Ultraviolet light-induced regulatory (suppressor) T cel-Is: an approach for promoting induction of operational allograft tolerance?"
Transplantation 77(1 Suppl):S29-31
Chatenoud e outros (2001) "Suppressor T cells-they're back and criticai forregulation of autoimmunity!" Immunol Rev 182:149-163
Cobbold e outros (2003) "Regulatory T cells and dendritic cells in transplan-tation tolerance: molecular markers and mechanisms" Immunol Rev 196:109-124
Earle e outros (2005) "In vitro expanded human CD4+CD25+ regulatory Tcells suppress effector T cell proliferation" Clin Immunol 115:3-9Gavrieli e outros (1992) Identification of programmed cell death in situ viaspecific Iabeling of nuclear DNA fragmentation J Cell Biol 119:493-501Gray e outros (1998) "Generation of an inhibitory circuit involving CD8+ Tcells, IL-2, and NK cell-derived TGF-beta: contrasting effects of anti-CD2 andanti-CD3" J Immunol 160:2248-2254
Gray e outros (2001) "Transforming growth factor beta enhances the expres-sion of CD154 (CD40L) and production of tumor necrosis factor alpha byhuman T lymphocytes" Immunol Lett 78:83-88Gregori e outros (2001) "Regulatory T cells induced by 1 alpha,25-dihidroxyvitamin D3 and mycophenolate mofetil treatment mediate transplan-tation tolerance" J Immunol 167:1945-1953
Gregory e outros (2004) "The macrophage and the apoptotic cell: an innateimmune interaction viewed simplistically?" Immunol 113:1-14Groux e outros (1997) "A CD4+ T-cell subset inhibits antigen-specific T-cellresponses and prevents colitis" Nature 389:737-742
Horwitz (2001) "Peripheral blood CD4+ T cells in systemic Iupus erythemato-sus" Lupus 10:319-320
Honwitz e outros (1999) "Role of NK cells and TGF-beta in the regulation ofT-cell-dependent antibody production in health and autoimmune disease"Microbes Infect 1:1305-1311
Horwitz e outros (2002) "The potential of human regulatory T cells generatedex vivo as a treatment for Iupus and other chronic inflammatory diseases"Artritis Res 4:241-246
Koren e outros (1989) "1,25-Dihidroxyvitamin D3 acts directly on human Iym-phocytes and interferes with the cellular response to interleukin-2" Immuno-pharmacology 18:187-194
Lamioni e outros (2005) "The immunological effects of extracorporeal photo-pheresis unraveled: induction of tolerogenic dendritic cells in vitro and regula-tory T cells in vivo" Transplantation 79:846-850
Luger e outros (1999) "Role of epidermal cell-derived alpha-melanocyte sti-mulating hormone in ultraviolet Iight mediated local immunosuppression" AnnNY Acad Sci 885:209-216
Maeda e outros (2005) "Intravenous infusion of syngeneic apoptotic cells byphotopheresis induces antigen-specific regulatory T cells" J Immunol174:5968-5976
Mahnke e outros (2003) "Induction of CD4+/CD25+ regulatory T cells by tar-geting of antigens to immature dendritic cells" Blood 101:4862-2869Masteller e outros (2005) "Expansion of Functional Endogenous Antigen-Specific CD4+CD25+ Regulatory T Cells from Nonobese Diabetic Mice" JImmunol 175:3053-3059May e outros (2004) "Immunoregulation through 1,25-dihidroxyvitamin D3and its analogs" Curr Drug Targets Inflamm Allergy 3:377-393Namba e outros (2002) "Induction of regulatory T cells by the immunomodu-lating cytokines alpha-melanocyte-stimulating hormone and transforminggrowt factor-beta2" J Leukoc Biol 72:946-952Nishida e outros (1999) "Specific aqueous humor factors induce activation ofregulatory T cells" Invest Ophtalmol Vis Sci 410:2268-2274Nishida e outros (2004) "Anti-inflammatory effects of alpha-melanocyte-stimulating hormone against rat endotoxin-induced uveitis and the time courseof inflammatory agents in aqueous humor" Int Immunopharmacol 4:1059-1066O1Garra e outros (2003) "In vitro generation of IL-10-producing regulatoryCD4+ T cells is induced by immunosuppressive drugs and inhibited by T1-and T2-inducing cytokines" Immunol Lett 85:135-139Ohtsuka e outros (1999a) "Cytokine-mediated down-reguIation of B cell acti-vity in SLE: effects of interleukin-2 and transforming growth factor-beta" Lu-pus 8:95-102
Ohtsuka e outros (1999b) "The relationship between defects in Iymphocyteproduction of transforming growth factor-betal in systemic Iupus erytemato-sus and disease activity or severity" Lupus 8:90-94
Pedersen e outros (2004) "Induction of regulatory dendritic cells by dexame-tasone and 1alpha,25-Dihidroxyvitamin D(3)" Immunol Lett 91:63-69Penna e outros (2000) "1 Alpha,25-dihidroxyvitamin D3 inhibits differentiati-on, maturation, activation, and survival of dendritic cells Ieading to impairedalloreactive T cell activation" J Immunol 164:2405-2411Roncarolo e outros (2001) "Tipe 1 T regulatory cells" Immunol Rev 182:68-79Saas e outros (2002) "Cell-based terapy approaches using dying cells: fromtumour immunotherapy to transplantation tolerance induction" Expert OpinBiol Ther 2:249-263
Sakaguchi e outros (2001) "Immunologic tolerance maintained by CD25+CD4+ regulatory T cells: their common role in controlling autoimmunity, tumorimmunity, and transplantation tolerance" Immunol Rev 182:18-32Salvioli e outros (1997) FEBS Let 411:77-82Savill e outros (2002) "A blast from the past: clearance of apoptotic cells re-gulates immune responses" Nat Rev Immunol 2:965-975Schwarz e outros (2000) "Evidence for functional relevance of CTLA-4 in ul-traviolet-radiation-induced tolerance" J Immunol 165:1824-1831Stohl e outros (1999) "Impaired cytotoxic T Iymphocyte activity in systemiclupus erytematosus following in vitro polyclonal T cell stimulation: a contribu-tory role for non-T cells" Lupus 8:293-299
Streilein e outros "Neural control of ocular immune privilege" Ann N Y AcadSci 917:297-306
Tang e outros (2004) "In vitro-expanded antigen-specifie regulatory T cellssuppress autoimmune diabetes" J Exp Med 199:1455-1465
Taylor (1999) "Ocular immunosuppressive microenvironment" 73:72-89Taylor (2003) "Modulation of regulatory T cell immunity by the neuropeptidealpha-melanocyte stimulating hormone" Cell Mol Biol (Noisy-le-grand) 49:143-149
Taylor (2005) "The immunomodulating neuropeptide alpha-melanocyte-stimulating hormone (alpha-MSH) suppresses LPS-stimulated TLR4 with I-RAK-M in macrophages" J Neuroimmunol 162:43-50
Taylor e outros (1992) "Identification of alpha-melanocyte stimulating hormo-ne as a potential immunosuppressive factor in aqueous humor" Curr Eye Res11:1199-1206
Taylor e outros (1994a) "Immunoreactive vasoactive intestinal peptide contri-butes to the immunosuppressive activity of normal aqueous humor" J Immu-nol 153:1080-1086
Taylor e outros (1994b) "Alpha-melanocyte-stimulating hormone suppressesantigen-stimulated T cell production of gamma-interferon" Neuroimmunomo-dulation 1:188-194
Taylor e outros (1996) "Inhibition of antigen-stimulated effector T cells byhuman cerebrospinal fluid" Neuroimmunomodulation 3:112-118Taylor e outros (2003) "Somatostatin is an immunosuppressive factor in a-queous humor" Invest Ophtalmol Vis Sci 44:2644-2629Teiger e outros (1996) J Clin Invest 97:2891-97Willheim e outros "Regulatory effects of 1alpha,25-dihidroxyvitamin D3 on thecytokine production of human peripheral blood lymphocytes" J Clin Endocri-nol Metab 84:3739-3744
Yamagiwa (2001) "A role for TGF-beta in the generation and expansion ofCD4+CD25+ regulatory T cells from human peripheral blood" J Immunol166:7282-7289
Zeller e outros (1999) "Induction of CD4+ T cell alloantigen-specific hipores-ponsiveness by IL-10 and TGF-beta" J Immunol 163:3684-3691Zheng e outros (2002) "Generation ex vivo of TGF-beta-producing regulatoryT cells from CD4+CD25- precursors" J Immunol 169:4183-4189Zheng e outros (2004) "CD4+ and CD8+ regulatory T cells generated ex vivowith IL-2 and TGF-beta suppress a stimulatory graft-versus-host disease witha lupus-Iike syndrome" J Immunol 172:1531-1539

Claims (45)

1. Método de geração de células T com atividade reguladora (Tregs), caracterizado pelo fato de que compreende a incubação de leucócitoscom células mononucleares de sangue periférico apoptóticas autólogas(ACs).
2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que a incubação é por um tempo e sob condições suficientes paragerar T regs.
3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que compreende ainda a etapa de seleção de leucócitos expressan-do CD4 para se obter células CD4+.
4. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelofato de que a incubação é em uma razão de cerca de 1:10 a cerca de 10:1CD4+:ACs.
5. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelofato de que a incubação é em uma razão de cerca de 2:1 a cerca de 1:2 deCD4+:ACs.
6. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que as ACs são obtidas através de um tratamento de indução de a-poptose.
7. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelofato de que o tratamento de indução de apoptose é um procedimento deECP que emprega um composto fotoativável junto com luz de um compri-mento de onda que ativa o composto fotoativável.
8. Método de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelofato de que o composto fotoativável é um psoraleno e a luz é UVA.
9. Método de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelofato de que o psoraleno é 8-MOP.
10. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que a incubação compreende ainda adição de fatores que aumentammais a geração ou função de T regs.
11. Método de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pe-lo fato de que os fatores são hormônios, proteínas, fármacos ou anticorpos.
12. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pe-lo fato de que os fatores são selecionados de pelo menos um de TGFp, aM-SH, anti-CD46, IL-10, vitamina D3, dexametasona, rapamicina e IL-2.
13. Método de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pe-lo fato de que o fator é IL-10.
14. Método de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pe-lo fato de que a IL-10 está presente em uma concentração de cerca de 1ng/ml a cerca de 100 ng/ml.
15. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pe-lo fato de que a IL-10 está presente em uma concentração de cerca de 20ng/ml.
16. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que a incubação é por cerca de 1 a cerca e 14 dias.
17. Método de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pe-lo fato de que a incubação é por cerca de 8 dias.
18. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que compreende ainda a adição de um antígeno à incubação paragerar T regs que regulam resposta imune para o antígeno.
19. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pe-lo fato de que o antígeno é um aloantígeno.
20. Composição, caracterizada pelo fato de que compreendeuma população de células T com atividade reguladora (T regs) obtida atra-vés da incubação de leucócitos com células mononucleares de sangue peri-férico apoptóticas autólogas (ACs).
21. Composição de acordo com a reivindicação 20, caracteriza-da pelo fato de que a incubação é por um tempo e sob condições suficientespara gerar T regs.
22. Composição de acordo com a reivindicação 20, caracteriza-da pelo fato de que compreende ainda a etapa de seleção de leucócitos ex-pressando CD4 para se obter células CD4+.
23. Composição de acordo com a reivindicação 22, caracteriza-da pelo fato de que a incubação é em uma razão de cerca de 1:10 a cercade 10:1 CD4+:ACs.
24. Composição de acordo com a reivindicação 23, caracteriza-da pelo fato de que a incubação é em uma razão de cerca de 2:1 a cerca de1:2 CD4+:ACs.
25. Composição de acordo com a reivindicação 20, caracteriza-da pelo fato de que as ACs são obtidas através de um tratamento de indu-ção de apoptose.
26. Composição de acordo com a reivindicação 25, caracteriza-da pelo fato de que o tratamento de indução de apoptose é um procedimentode ECP que emprega um composto fotoativável junto com luz de um com-primento de onda que ativa o composto fotoativável.
27. Composição de acordo com a reivindicação 26, caracteriza-da pelo fato de que o composto fotoativável é um psoraleno e a luz é UVA.
28. Composição de acordo com a reivindicação 27, caracteriza-da pelo fato de que o psoraleno é 8-MOP.
29. Composição de acordo com a reivindicação 20, caracteriza-da pelo fato de que a incubação compreende ainda fatores de adição queaumentam mais a geração ou função das T regs.
30. Composição de acordo com a reivindicação 29, caracteriza-da pelo fato de que os fatores são hormônios, proteínas, fármacos ou anti-corpos.
31. Composição de acordo com a reivindicação 30, caracteriza-da pelo fato de que a incubação compreende ainda fatores de adição sele-cionados de pelo menos um de TGFp, aMSH, anti-CD46, IL-10, vitamina D3,dexametasona, rapamicina e IL-2.
32. Composição de acordo com a reivindicação 31, caracteriza-da pelo fato de que o fator é IL-10.
33. Composição de acordo com a reivindicação 32, caracteriza-da pelo fato de que a IL-10 está presente em uma concentração de cerca de1 ng/mL a cerca de 100 ng/mL.
34. Composição de acordo com a reivindicação 33, caracteriza-da pelo fato de que a IL-10 está presente em uma concentração de cerca de-20 ng/mL.
35. Composição de acordo com a reivindicação 20, caracteriza-da pelo fato de que a incubação é por cerca de 1 a cerca de 14 dias.
36. Composição de acordo com a reivindicação 35, caracteriza-da pelo fato de que a incubação é por cerca de 8 dias.
37. Composição de acordo com a reivindicação 20, caracteriza-da pelo fato de que compreende ainda adição de um antígeno à incubaçãopara gerar T regs que regulam a resposta imune para o antígeno.
38. Composição de acordo com a reivindicação 37, caracteriza-da pelo fato de que o antígeno é um aloantígeno.
39. Uso de uma população de células T com atividade regulado-ra (T regs) obtida através da incubação de leucócitos autólogos com célulasmononucleares de sangue periférico apoptóticas autólogas (ACs), caracteri-zado pelo fato de que é para a preparação de uma composição para o tra-tamento de distúrbio autoimune ou melhora de um ou mais sintomas dele emum paciente com necessidade da mesma.
40. Uso de uma população de células T com atividade regulado-ra (T regs) obtida através da incubação de leucócitos autólogos com célulasmononucleares de sangue periférico apoptóticas autólogas (ACs)1 caracteri-zado pelo fato de que é para a preparação de uma composição para o tra-tamento de doença atópica ou melhora de um ou mais sintomas dela em umpaciente com necessidade da mesma.
41. Uso de uma população de células T com atividade regulado-ra (T regs) obtida através da incubação de leucócitos autólogos com célulasmononucleares de sangue periférico apoptóticas autólogas (ACs), caracteri-zado pelo fato de que é para a preparação de uma composição para seradministrada a um paciente receptor de transplante.
42. Uso de uma população de células T com atividade regulado-ra (T regs) obtida através da incubação de leucócitos autólogos com célulasmononucleares de sangue periférico apoptóticas autólogas (ACs), caracteri-zado pelo fato de que é para a preparação de uma composição para seradministrada a um paciente com GVHD.
43. Uso de uma população de células T com atividade regulado-ra (T regs) obtida através da incubação de leucócitos autólogos com célulasmononucleares de sangue periférico apoptóticas autólogas (ACs)1 caracteri-zado pelo fato de que é para a preparação de uma composição para o tra-tamento de um paciente com um distúrbio ou a predisposição a um distúrbio.
44. Uso de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelofato de que o distúrbio autoimune é pelo menos um de mielite transversaaguda, alopecia areata, doença de Alzheimer1 esclerose amiotrófica lateral,espondilite anquilosante, síndrome antifosfolipídeo, aterosclerose, doença deAddison autoimune, anemia hemolítica autoimune, doença de Behcet, penfi-goide bolhoso, cardiomiopatia, dermatite-psilose celíaca, distúrbios espino-cerebelares cerebelares, degenerações espinocerebelares (ataxia espinhal,ataxia de Friedreich, degenerações corticais cerebelares), alcoolismo crôni-co, hepatite induzida por álcool, hepatite autoimune, síndrome da disfunçãoimune da fadiga crônica (CFIDS)1 doença inflamatória do intestino crônica,polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica, síndrome de Churg-Strauss, penfigoide cicatricial, doença da aglutinina fria, síndrome de CRest,doença de Creutzfeldt-Jakob, doença de Crohn, atrofia de Dejerine-Thomas,demência pugilística, diabetes mellitus, doença do corpo de Lewy difusa,lúpus discoide, distúrbios dos gânglios basais, coagulação intravascular dis-seminada, síndrome de Down na meia-idade, distúrbios do movimento indu-zidos por fármaco, crioglobulinemia mista essencial, fibriomialgia-fibromio-site, doença enxerto versus hospedeiro, doença de Graves, síndrome deGuilliain-Barré, doença de Hallerrorden-Spatz, tiroidite de Hashimoto, Coréiasenil, Coréia de Huntington, fibrose pulmonar idiopática, trombocitopeniapúrpura idiopática (ITP), nefropatia de IgA1 atrofia muscular espinhal infantilou juvenil, diabetes insulino-dependente, artrite juvenil, patologia de Kawa-saki, lesões do sistema corticoespinhal, leucemias, Iinfoma de Hodgkin, Iin-foma não-Hodgkin, líquen plano, doença de Méniére, doença do tecido co-nectivo mista, esclerose múltipla, degenerações dos múltiplos sistemas(Mencel, Dejerine-Thomas, Shy-Drager1 Machado-Joseph), miastenia grave,muscular neurogênica, doença de Parkinson1 pênfigo vulgar, anemia perni-ciosa, poliarterite nodosa, policondrite, síndromes poliglandulares, polimial-gia reumática, polimiosite, dermatomiosite, agamaglobulinemia primária, cir-rose biliar primária, paralisia supranuclear progressiva, psoríase, fenômenode Raynaud, síndrome de Reiter, febre reumática, artrite reumatoide, sarcoi-dose, escleroderma, demência senil do tipo corpo de Lewy, síndrome deSjõgren, (stiff-man) síndrome da rigidez muscular, panencefalite esclerosan-te subaguda, distúrbios sistêmicos (doença de Refsum, abetalipoprotemia,ataxia, telangiectasia, distúrbio de multissistema mitocondrial), lúpus erite-matoso sistêmico (SLE), arterite Takayasu, arterite temporal/arterite da célu-la gigante, tiroidose, colite ulcerativa, uveíte, vasculite, vitiligo, granulomato-se de Wegener, e síndrome de Wernicke-Korsakoff.
45. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 44, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de uma composiçãocomo definida em qualquer uma das reivindicações 20 a 38.
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Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2628341A1 (en) * 2005-11-02 2007-05-18 Therakos Inc. The use of apoptotic cells ex vivo to generate regulatory t cells
US9591086B2 (en) 2007-07-25 2017-03-07 Yahoo! Inc. Display of information in electronic communications
WO2009132283A2 (en) * 2008-04-24 2009-10-29 University Of Miami Method for treating autoimmune disorders
US20130252227A1 (en) * 2012-03-20 2013-09-26 Fenwal, Inc. Apparatus and Method for Providing Cryopreserved ECP-Treated Mononuclear Cells
CN105102612B (zh) 2012-12-06 2020-11-17 恩立夫克治疗有限责任公司 治疗性凋亡细胞制剂、其制备方法以及其用途
JP2022505199A (ja) * 2018-10-19 2022-01-14 リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミネソタ カルボジイミドで処理された寛容化ワクチンによる移植寛容誘導
CN110367242A (zh) * 2019-08-02 2019-10-25 陕西佰傲干细胞再生医学有限公司 凋亡小体保存液及凋亡小体的保存方法
ES2927913B2 (es) * 2021-05-07 2023-07-27 Univ Murcia Composición que comprende una combinación de las furanocumarinas psoraleno y angelicina y su uso en terapia
CN113444684B (zh) * 2021-06-08 2022-06-14 浙江大学 修复子宫内膜并提高生育力的干细胞凋亡小体的制备方法

Family Cites Families (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US562283A (en) 1896-06-16 Keyed cithern
US4428744A (en) * 1979-12-11 1984-01-31 Frederic A. Bourke, Jr. Method and system for externally treating the blood
US4321919A (en) 1979-12-11 1982-03-30 Leukocyte Research, Inc. Method and system for externally treating human blood
US4398906A (en) 1979-12-11 1983-08-16 Frederic A. Bourke, Jr. Method for externally treating the blood
US4464166A (en) * 1981-06-12 1984-08-07 Frederic A. Bourke, Jr. Method for externally treating the blood
US4683889A (en) 1983-03-29 1987-08-04 Frederic A. Bourke, Jr. Method and system for externally treating the blood
US5597531A (en) * 1985-10-04 1997-01-28 Immunivest Corporation Resuspendable coated magnetic particles and stable magnetic particle suspensions
US5512332A (en) * 1985-10-04 1996-04-30 Immunivest Corporation Process of making resuspendable coated magnetic particles
US4795698A (en) 1985-10-04 1989-01-03 Immunicon Corporation Magnetic-polymer particles
US5104526A (en) 1987-01-30 1992-04-14 Baxter International Inc. Centrifugation system having an interface detection system
US5108933A (en) * 1988-09-16 1992-04-28 Immunicon Corporation Manipulation of colloids for facilitating magnetic separations
JP2710967B2 (ja) * 1988-11-22 1998-02-10 株式会社日立製作所 集積回路装置の製造方法
US5242974A (en) * 1991-11-22 1993-09-07 Affymax Technologies N.V. Polymer reversal on solid surfaces
US5698271A (en) * 1989-08-22 1997-12-16 Immunivest Corporation Methods for the manufacture of magnetically responsive particles
US5541072A (en) * 1994-04-18 1996-07-30 Immunivest Corporation Method for magnetic separation featuring magnetic particles in a multi-phase system
US6013532A (en) * 1990-09-26 2000-01-11 Immunivest Corporation Methods for magnetic immobilization and manipulation of cells
US5200084A (en) 1990-09-26 1993-04-06 Immunicon Corporation Apparatus and methods for magnetic separation
US5622831A (en) * 1990-09-26 1997-04-22 Immunivest Corporation Methods and devices for manipulation of magnetically collected material
US5646001A (en) 1991-03-25 1997-07-08 Immunivest Corporation Affinity-binding separation and release of one or more selected subset of biological entities from a mixed population thereof
US5466574A (en) 1991-03-25 1995-11-14 Immunivest Corporation Apparatus and methods for magnetic separation featuring external magnetic means
US5795470A (en) * 1991-03-25 1998-08-18 Immunivest Corporation Magnetic separation apparatus
US5186827A (en) * 1991-03-25 1993-02-16 Immunicon Corporation Apparatus for magnetic separation featuring external magnetic means
US5242984A (en) 1991-07-29 1993-09-07 Shell Oil Company Sequentially polymerized styrene-isoprene-styrene block copolymer adhesive composition
US5384261A (en) 1991-11-22 1995-01-24 Affymax Technologies N.V. Very large scale immobilized polymer synthesis using mechanically directed flow paths
US5730883A (en) * 1991-12-23 1998-03-24 Baxter International Inc. Blood processing systems and methods using apparent hematocrit as a process control parameter
JPH08506977A (ja) * 1993-02-18 1996-07-30 バクスター インターナショナル インコーポレーテッド 抗凝固剤注入用の別の位置を含むアフェレーシスシステム
SE501070C2 (sv) * 1993-03-26 1994-11-07 Ericsson Telefon Ab L M System och förfarande för dispersionskompensering i fiberoptiska höghastighetssystem
US5399719A (en) * 1993-06-28 1995-03-21 Steritech, Inc. Compounds for the photodecontamination of pathogens in blood
US5741714A (en) * 1995-07-18 1998-04-21 Immunivest Corporation Detection of bound analyte by magnetic partitioning and masking
US6251284B1 (en) * 1995-08-09 2001-06-26 Baxter International Inc. Systems and methods which obtain a uniform targeted volume of concentrated red blood cells in diverse donor populations
US5660990A (en) 1995-08-18 1997-08-26 Immunivest Corporation Surface immobilization of magnetically collected materials
CA2250919C (en) 1996-03-29 2008-05-13 Therakos, Inc. Photopheresis treatment of leukocytes
BR9708406A (pt) 1996-03-29 2000-01-04 Therakos Inc Tratamento por fotoferese de infecções crÈnicas por hcv.
US6473623B1 (en) 1996-04-18 2002-10-29 At&T Wireless Services, Inc. Method for self-calibration of a wireless communication system
US6136182A (en) 1996-06-07 2000-10-24 Immunivest Corporation Magnetic devices and sample chambers for examination and manipulation of cells
AU3374597A (en) * 1996-06-07 1998-01-05 Immunivest Corporation Magnetic separation employing external and internal gradients
US6228624B1 (en) 1996-08-02 2001-05-08 Immunivest Corporation Method to select and transfect cell subpopulations
GB9621231D0 (en) * 1996-10-11 1996-11-27 Exxon Chemical Patents Inc Low sulfer fuels with lubricity additive
US5951509A (en) * 1996-11-22 1999-09-14 Therakos, Inc. Blood product irradiation device incorporating agitation
US6027441A (en) * 1997-07-01 2000-02-22 Baxter International Inc. Systems and methods providing a liquid-primed, single flow access chamber
IL133913A0 (en) 1997-07-10 2001-04-30 Therakos Inc Treatment of inflammatory disorders of the bowel and urinary bladder
JP3987900B2 (ja) * 1997-11-26 2007-10-10 アークレイ株式会社 糖化タンパク質の測定方法
AU760560B2 (en) * 1998-02-12 2003-05-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and reagents for the rapid and efficient isolation of circulating cancer cells
US6361749B1 (en) * 1998-08-18 2002-03-26 Immunivest Corporation Apparatus and methods for magnetic separation
WO2000062839A2 (en) * 1999-04-16 2000-10-26 Becton Dickinson And Company Pen style injector with automated substance combining feature
US20050084966A1 (en) * 1999-04-20 2005-04-21 Edelson Richard L. Methods for inducing the differentiation of blood monocytes into functional dendritic cells
US6219584B1 (en) * 1999-07-09 2001-04-17 Therakos, Inc. Method and system for determining an effective amount of light energy to delivery to fluids having targets for the light energy
US6284142B1 (en) 1999-09-03 2001-09-04 Baxter International Inc. Sensing systems and methods for differentiating between different cellular blood species during extracorporeal blood separation or processing
US6315707B1 (en) 1999-09-03 2001-11-13 Baxter International Inc. Systems and methods for seperating blood in a rotating field
US6793643B1 (en) 2000-04-21 2004-09-21 Therakos, Inc. Low extracorporeal volume treatment system
US7727523B2 (en) * 2001-08-13 2010-06-01 Yale University Method for suppressing immune system response to transplanted tissue or cells
US20030139466A1 (en) * 2001-11-29 2003-07-24 Peritt David L. Methods for pretreating a subject with extracorporeal photopheresis
WO2004090095A2 (en) * 2003-04-01 2004-10-21 University Of Southern California Generation of human regulatory t cells by bacterial toxins for the treatment of inflammatory disorders
US7651855B2 (en) * 2003-04-17 2010-01-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Regulatory T cells and their use in immunotherapy and suppression of autoimmune responses
CA2628341A1 (en) * 2005-11-02 2007-05-18 Therakos Inc. The use of apoptotic cells ex vivo to generate regulatory t cells
CA2953217A1 (en) 2014-06-05 2015-12-10 Wake Forest University Health Sciences Methods and compounds for phototherapy with chalcogenorhodamine photosensitizers

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US20210388318A1 (en) Use of apoptotic cells ex vivo to generate regulatory t cells
Kuppner et al. The glioblastoma‐derived T‐cell suppressor factor/transforming growth factor beta2 inhibits the generation of lymphokineactivated killer (LAK) cells
US5837233A (en) Method for treating tumors
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