BRPI0511466B1

BRPI0511466B1 - Agonistas peptídicos do receptor de vasopressina, composição farmacêutica compreendendo os referidos agonistas e uso destes

Info

Publication number: BRPI0511466B1
Application number: BRPI0511466-7A
Authority: BR
Inventors: Wisniewski Kazimierz; Schteingart Claudio; Laporte Regent; Felix Galyean Robert; J-M Riviere Pierre
Original assignee: Ferring B.V.
Priority date: 2004-08-11
Filing date: 2005-08-03
Publication date: 2018-01-23
Also published as: CA2567797C; BRPI0511466A; TW200612976A; JP2008509221A; AU2005274070A1; RU2007101238A; HK1100280A1; PT1776133E; US8148319B2; US8778881B2; IL178690A; NZ550707A; DK1776133T3; NO20071314L; PL1776133T3; TWI364291B; JO2937B1; EP1776133B1; IL178690A0; AR050914A1

Abstract

agonistas peptídicos do receptor de vasopressina. a presente invenção refere-se a novos compostos, a composições farmacêuticas que os compreendem, ao uso dos ditos compostos para a fabricação de um medicamento para o tratamento de, entre outros, estados de choque, assim como a um método para o tratamento dos ditos estados, em que os ditos compostos são administrados. os compostos são representados pela fórmula geral (i), conforme adicionalmente definida no relatório.

Description

(54) Título: AGONISTAS PEPTÍDICOS DO RECEPTOR DE VASOPRESSINA, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO OS REFERIDOS AGONISTAS E USO DESTES (51) lnt.CI.: A61K 38/00 (30) Prioridade Unionista: 11/08/2004 EP 04 019029.0,11/08/2004 US 60/600,377 (73) Titular(es): FERRING B.V.

(72) Inventor(es): KAZIMIERZ WISNIEWSKI; CLÁUDIO SCHTEINGART; REGENT LAPORTE; ROBERT FELIX GALYEAN; PIERRE J-M RIVIERE

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para AGONISTAS PEPTÍDICOS DO RECEPTOR DE VASOPRESSINA, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO OS REFERIDOS AGONISTAS E USO DESTES.

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a novos compostos, a composições farmacêuticas que os compreendem, ao uso dos ditos compostos para a fabricação de um medicamento para o tratamento, entre outros, de estados de choque, assim como a um método para o tratamento dos ditos esta10 dos, em que os ditos compostos são administrados.

Antecedentes

Agonistas peptídicos do receptor de vasopressina V1a, como terlipressina, receberam recentemente (veja, por exemplo, O’Brian et al., Lancet 359 (9313): 1209-10, 4 de junho de 2002) uma maior atenção para uso clínico no tratamento de doenças e estados de cuidados críticos, incluindo choque de origem hipovolêmica (por exemplo, hemorrágico) ou vasodilatadora (por exemplo, séptica), sangramento de varizes esofageanas (SVE), síndrome hepato-renal (SHR), ressuscitação cardiopulmonar e hipotensão induzida por anestesia. Também demonstraram ter uso clínico no tratamento de hipotensão ortostática, disfunção circulatória induzida por paracentese, perda de sangue intra-operatória e perda de sangue associada ao debridamento de queimaduras e epistaxe, e para o tratamento de várias doenças oculares por aumento da lacrimação/formação de lágrimas.

No tratamento de estados de cuidados críticos, é altamente de25 sejável controlar a pressão sanguínea arterial, e o medicamento usado é tipicamente administrado por via intravenosa. A infusão intravenosa contínua de medicamento a taxas crescentes ou decrescentes é um meio prático de proporcionar o grau de controle desejado. Atingir as chamadas concentrações plasmáticas de estado constante depende da meia-vida de elimina30 ção do medicamento infundido. Geralmente, reconhece-se que a concentração plasmática de estado constante é atingida após um período de tempo equivalente a três vezes a meia-vida de eliminação do medicamento. Para Segue-se na folha 1a

Petição 870170066263, de 06/09/2017, pág. 7/16

1a

Petição 870170066263, de 06/09/2017, pág. 8/16 ·· ··· ·· ·«·· · • * · * · · · • · · ···· « ·· ♦ · · · · • · · · · · ··· ·· ·· ««· • · ·· « · • · · · · · • · · · • * · · • · · · cia em uma hora ou menos. Agonistas de V1a com uma meia-vida de eliminação maior que 1 hora, portanto, não são normalmente considerados úteis para tratamento de cuidados críticos.

Uma desvantagem da terlipressina em muitas situações de cui5 dados críticos é sua longa duração de ação, o que torna difícil titular seus efeitos quando o estado patológico se altera. A eficácia da terlipressina no receptor de V1a humano (hV1a) também precisa ser melhorada, por exemplo, para permitir menores dosagens em geral.

Da mesma forma, o composto conhecido como F180 (cf. exem10 pio 3 da patente norte-americana n° 5.459.236) tem uma duração de ação inconvenientemente longa para ser considerado para o tratamento da maioria dos estados de cuidados críticos.

A atividade não específica do agonista de receptor é a principal desvantagem dos outros compostos existentes, por exemplo, [Phe2,Orn8]OT (cf. exemplo 1f da patente norte-americana n° 3.352.843) e argininavasopressina (AVP). A atividade em receptores relacionados, como receptores de V1 b, B2 e oxitocina (OT), pode gerar potencialmente efeitos colaterais indesejáveis e preocupações de segurança. Como um exemplo, a ativação do receptor de V2 pode induzir antidiurese (cf. desmopressina), liberação de fatores de coagulação/trombólise e induzir vasodilação/hipotensão com taquicardia reflexa. Este último efeito colateral também pode ser induzido pela atividade do agonista de receptor de OT.

É um objetivo da presente invenção apresentar compostos que sejam particufarmente úteis no tratamento de estados de cuidados críticos.

Descrição da Invenção

A presente invenção refere-se a compostos representados pela fórmula genérica (I) (SEQ ID NO: 53):

em que:

• · ··♦ ·· ·♦·· · · · • · * · • *· ·· ··· • · • « ·*· .

·· ···· • · · • · ··· • · · • · · * • · ·· ίο

Ar é um grupo arila selecionado em sistemas de anéis carbocíclicos aromáticos, sistemas de anéis heteroaromáticos de cinco ou seis elementos e sistemas de anéis heteroaromáticos bicíclicos;

m é selecionado em 1,2 e 3; n é selecionado em 0,1,2, 3 e 4; p é selecionado em 2, 3 e 4;

Ri, R2 e R₃ são independentemente selecionados em H, OH, alquila, O-alquila e OC(O)-alquila;

alquila é selecionada em Ci_₆ alquila de cadeia linear e C4-8 de cadeia ramificada e tem, opcionalmente, pelo menos um substituinte hidroxila; e, quando n = 0, R1 e R₂ opcionalmente formam juntos uma estrutura de anel contendo nitrogênio compreendendo de 2 a 5 átomos de carbono; contanto que, quando Ar é fenila (o aminoácido n° 2 é Phe), m = 2, n = 0 e R1 = R₂ = H (o aminoácido n° 4 é Gin), R3 não é H, quando p é 3 ou 4; e seus solvatos e sais farmaceuticamente aceitáveis.

O aminoácido n° 8 é Orn, quando R₃ = H e p = 3, e Lys, quando R₃ = Hep = 4.

Para fins da presente invenção, usa-se a seguinte terminologia.

Sistemas de anéis carbocíclicos aromáticos incluem fenila e naftila.

Um sistema de anel heteroaromático de cinco elementos é um sistema de anel aromático monocíclico com cinco átomos de carbono, em que 1,2 ou 3 átomos do anel são independentemente selecionados em N, O e S. Sistemas de anéis preferidos são selecionados no grupo que consiste em tienila, furila, pirrolila, imidazolila, tiazolila, oxazolila, pirazolila, isotiazolila, isoxazolila e tetrazolila.

Um sistema de anel heteroaromático de seis elementos é um sistema de anel aromático monocíclico com seis átomos de anel, em que 1, 2 ou 3 átomos do anel são independentemente selecionados em N, O e S. É, de preferência, selecionado em um grupo que consiste em piridila, pirazinila, pirimidinila, triazinila e pirídazinila.

Um sistema de anel heteroaromático bicíclico é um sistema de • ·

·· ···· * ♦ · * · ··· • · · • · · • ···· • · ♦♦· · ·· ·· • « ··· ·«· * ·« · • · · · ·· ·· anel com dois anéis heteroaromáticos de cinco ou seis elementos, ou uma fenila e um anel heteroaromático de cinco ou seis elementos, ou uma fenila e um anel heterocíclico, ou um anel heteroaromático de cinco ou seis elementos e um anel heterociclila; conectados por uma fusão de anel, o dito sistema de anel heteroaromático bicíclico compreendendo de 8 a 12 átomos de anel, em que 1, 2 ou 3 dos átomos do anel são independentemente selecionados em N, O e S. É, de preferência, selecionado no grupo que consiste em indol, quinolina, tetraidroquinolina, isoquinolina, tetraidroisoquinolina, 1,4benzodioxano, cumarina, benzofurano, 1,2-benzisoxazol, benzotiofeno, benzoxazol, benzotiazol, benzimidazol, benzotriazol, pirolizidina e quinolizidina.

Uma fração heterociclila ou heterocíclica é um sistema de anel saturado ou parcialmente saturado com 3 a 7 átomos de anel, em que 1, 2 ou 3 átomos do anel são independentemente selecionados em N, O e S. Frações heterociclila são selecionadas, de preferência, em um grupo que consiste em aziridina, oxtrano, tiirano, azetidina, oxetano, tietano, pirrolidina, pirrolina, imidazolidina, pirazolidina, dioxolano, tetraidrofuranila, piperidina, piperazina, morfolina, tetraidropiranila, 1,4-dioxanila, homopiperidinila, homopiperazinila e óxido de hexametileno.

Deve-se mencionar que, por exemplo, grupos isopropila e 2-nbutila também estão englobados pela expressão C1-6 alquila de cadeia linear, pois a dita expressão não se relaciona ao sítio de ligação da cadeia linear em questão.

Ci-e designa de um a seis átomos de carbono, incluindo qualquer número entre esses, e essa nomenclatura é usada de maneira análoga aqui.

Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis compreendem sais de adição ácidos, por exemplo, um sal formado por reação com ácidos hidroalogenados, como ácido clorídrico, e ácidos minerais, como ácido sulfúrico, ácido fosfórico e ácido nítrico, assim como ácidos sulfônicos ou carboxílico alifáticos, alicíclicos, aromáticos ou heterocíclicos, como ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido succínico, ácido glicólico, ácido lático, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido maléico, ácido hidroximaléico, ácido pirúbico, ácido p-hidroxibenzóico, ácido embôni444

4

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4*44 4 4

4 4

44

4

444 444 • 4 4

4 4 >4 «4 co, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfôníco, ácido hidroxietanossulfônico, ácido halobenzenossulfônico, ácido toluenossulfônico e ácido naftalenossulfônico.

Ar é, de preferência, selecionado em fenila, 2- ou 3-tienila, 2- ou 3-furila, 2-, 3- ou 4-piridila e 2-, 4- ou 5-tiazolila. É particularmente preferível que Ri seja H.

Em modalidades preferidas, p é 2 ou 3.

É preferível selecionar R₂ em H, OH, CH₃, CH₂CH₃, CH(CH₃)₂, CH(CH₂OH)₂, CH(OH)CH₃ (ambos enantiômeros), OCH₃ e OCH₂CH₂OH.

Além disso, é preferível selecionar R₃ em H, metila, etila, npropila, i-propila e i-amila.

Na modalidade mais preferida, o dito composto com a fórmula (I) é selecionado no grupo que consiste em (SEQ ID NOs: 1-7, respectivamente, em ordem de aparecimento):

H-Cys-Phe-lle-Hgn-Asn-Cys-PrO-Orn(i-Pr)-Gly-NH2 I I	(1)
H-Cys-Phe-lle-Asn((CH₂)3OH)-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2 I I	(2)
H-Cys-Phe-lle-Asn-Asn-Cys-Pro-Dbu-Gly-NH2 I I	(3)
H-Cys-Phe-lle-Asn(CH2CH₃)-Asn-Cys-Pro-Dbu-Gly-NH₂ I I	(4)
H-Cys-Phe-lle-Gln-Asn-Cys-Pro-Om(i-Pr)-Gly-NH₂ I I	(5)e
H-Cys-Phe-lle-Gln-Asn-Cys-Pro-Om(CH₂CH₃)-Gly-NH2 I I	(6)
H-Cys-Phe-lle-Asn(CH₃)₂-Asn-Cys-Pro-Orn-GIy-NH₂	(7)

O número entre parênteses designa o composto conforme citado a seguir.

Além disso, a presente invenção refere-se a um composto conforme acima exposto para uso como uma substância farmacêutica.

Portanto, a presente invenção também refere-se a uma composição farmacêutica compreendendo um composto conforme acima exposto como ingrediente ativo em associação com um adjuvante, diluente ou veícu6

Io farmaceuticamente aceitável.

A composição farmacêutica pode ser adaptada para administração oral, intravenosa, tópica, intraperitoneal, nasal, bucal, sublingual ou subcutânea ou para administração através do trato respiratório, por exemplo, na forma de um aerossol ou um pó fino em suspensão no ar. A composição pode, portanto, estar na forma de, por exemplo, comprimidos, cápsulas, pós, micropartículas, grânulos, xaropes, suspensões, soluções, emplastros transdérmicos ou supositórios.

Deve-se notar que a composição de acordo com a presente invenção pode incluir opcionalmente dois ou mais dos compostos acima apresentados.

A presente composição farmacêuica pode opcionalmente compreender, por exemplo, pelo menos um aditivo adicional selecionado em um agente desintegrante, aglutinante, lubrificante, agente de sabor, conservante, corante ou qualquer mistura desses. Exemplos desses e de outros aditivos são encontrados em Handbook of Pharmaceutical Excipients, Ed. A. H. Kibbe, 3^a Ed., American Pharmaceutical Association, EUA, e Pharmaceutical Press, RU, 2000.

A presente composição farmacêutica é, mais preferivelmente, adaptada para administração parenteral. Pode compreender uma preparação aquosa estéril dos compostos da invenção, de preferência isotônica com o sangue o receptor. Essa preparação aquosa pode ser formulada de acordo com métodos conhecidos, usando-se agentes dispersantes ou umectantes e agentes de suspensão adequados. A formulação aquosa injetável Remestyp® (terlipressina) é exemplificativa de uma formulação farmacêutica adequada. A preparação também pode ser uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente, por exemplo, como uma solução em 1,3-butano diol. Água, solução de Ringer e solução isotônica de cloreto de sódio são exemplos de diluentes aceitáveis. Óleos fixos estéreis podem ser empregados como um solvente ou meio de suspensão. Óleos fixos suaves, incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos, e ácidos graxos, como ácido oléico, também podem ser usados.

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Além disso, a presente invenção refere-se ao uso de um composto conforme acima exposto para a fabricação de um medicamento para o tratamento de choque de origem hipovolêmica ou vasodilatadora, SVBE, SHR, ressuscitação cardtopulmonar, hipotensão induzida por anestesia, hipotensão ortostática, disfunção circulatória induzida por paracentese, perda de sangue intraoperatória ou perda de sangue associada a debridamente de queimaduras e epistaxe, e para o tratamento de várias doenças oculares por aumento da lacrimação/formação de lágrimas.

Em outra modalidade, a invenção refere-se a um métodopara o tratamento de choque de origem hipovolêmica ou vasodilatadora, SVBE, SHR, ressuscitação cardiopulmonar, hipotensão induzida por anestesia, hipotensão ortostática, disfunção circulatória induzida por paracentese, perda de sangue intraoperatória ou perda de sangue associada a debridamente de queimaduras e epistaxe, e para o tratamento de várias doenças oculares por aumento da lacrimação/formação de lágrimas, em que o dito método compreende a administração a um paciente animal, incluindo um ser humano, de uma quantidade terapeuticmente eficaz de um composto conforme acima exposto.

A dosagem típica dos compostos de acordo com a presente invenção varia dentro de uma ampla faixa e dependerá de vários fatores, como as necessidades individuais de cada paciente e a via de administração. A dosagem administrada por infusão em geral está dentro da faixa de 0,01 200 pg/kg de peso corporal por hora. Um médico versado na técnica será capaz de otimizar a dosagem para a situação em questão.

As abreviações usadas são:

Abu ácido 2-aminobutírico

Boc terc-butoxicarobnila

BOP hexafluorofosfato de benzotriazol-1-ilóxi trisdimetilaminofosfônio

Dbu ácido 2,4-diaminobutírico

DCC N,N’-dicicloexilcarbodiimida

DCHA dicicloexilamina • · ·· • · ·»* ««* « · · • · · »· » a · *···

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ló

DCM diclorometano

DIAD diazodicarboxilato de diisopropila

DIC N,N’-diisopropilcarbodiimida

DIEA N.N-diisopropil-N-etilamina

DMF Ν,Ν-dimetilformamida

Fm 9-fluorenilmetila

Fmoc 9-fluorenilmetoxicarbonila

Hgn homoglutamina

Hmp ácido 2-hidróxi-3-mercaptopropiônico

HOBt 1 -hidroxibenzotriazol

HPLC cromatografia líquida de alto desempenho i iso

Mmt 4-metoxitritila

Mob p-metoxibenzila

MS espectrometria de massa

Om ornitina

Ph fenila

Pr propila

PyBOP hexafluorofosfato de benzotriazol-1-ilóxi trispirrolidinafosfônio o-NBS-CI cloreto de 2-nitrobenzenossulfonila

OT oxitocina

Rt tempo de retenção

TFA ácido trifluoroacético

TES triisopropilsilano

TMOF trimetilortoformato

TPP trifenilfosfina

Trt tritila

VT vasotocina, [lle³]vasopressina

A menos que especificado de outra forma, foram usados Laminoácidos, e se segue a terminologia convencional de aminoácidos.

Parte Experimental (síntese) ·> ·· • · ··· ··· • · · · • · • ··· «

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Os derivados de aminoácidos e resinas foram adquiridos em fornecedores comerciais (Novabiochem, Bachem Peptide International e PepTech Corporation). Fmoc-Hgn-OH foi sintetizado de acordo com a literatura (Wisniewski, K., Kolodziejczyk, A. S. Org. Prep. Proced. Int. 1997, 29, 338341). Outras substâncias químicas e solventes foram fornecidos pela SigmaAldrich, Fisher Scíentific e VWR.

Os presentes compostos foram sintetizados por métodos padronizados em química de peptídios em fase sólida, utilizando tanto metodologia Fmoc, quanto Boc. A menos que indicado de outra forma, todas as reações foram realizadas à temperatura ambiente. Além das referências citadas acima, a seguinte literatura de referência padrão proporciona diretrizes adicionais quanto ao ambiente experimental geral, assim como disponibilidade de materiais de partida e reagentes requeridos:

Kates, S. A., Albericio, F., Eds., Solid Phase Synthesis. A Practicai Guide, Marcei Dekker, Nova Iorque, Basiléia, 2000;

Stewart, J. M., Young, J. D. Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Company, 1984;

Bisello, et ak, J. Biol. Chem. 1998, 273, 22498-22505; e

Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 1963, 85, 2149-2154.

A pureza do peptídio sintetizado pode ser determinada por HPLC em fase reversa analítica. A integridade estrutural dos peptídios pode ser confirmada usando-se análise de aminoácidos e espectrometria de massa por eletropulverízação.

Os peptídios sintetizados por metodologia Fmoc foram clivados com uma solução de TFA/TIS/H₂O a 96/2/2 (V/v/v), e a divagem na metodologia Boc foi realizada com uma solução de HF a 90%/anisol a 10% (v/v). A formação de pontes dissulfeto (anel) foi conseguida pela oxidação de peptídios lineares dissolvidos em TFA a 10% (aq.) com iodo. Os peptídios foram purificados por HPLC preparatória em tampões fosfato de trietilamônio (aq.). Os compostos foram finalmente convertidos em sais acetato usando-se metodologia HPLC convencional. As frações com uma pureza acima de 97% foram reunidas e liofilizadas.

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1Ύ

Síntese de peptídios com cadeia lateral alquilada na posição n°

8:

Os peptídios foram montados com metodologia Fmoc. O resíduo diaminoácido na posição n° 8 foi introduzido com um grupo protetor ácido lábil (isto é, removível com uma solução contendo 1 - 2% de TFA), como metóxi-tritila (Mmt; veja Barlos, K. et al., em Peptides 1992, Schneider, C. H., Eberle, A. N., Eds., ESCOM Science Publishers B. V., 1993, pp. 283-284). O peptídio ligado à resina foi tratado com uma solução de DCM/TIS/TFA a 93/5/2 (v/v/v) para a remoção do grupo Mmt. A alquilação redutora com acetona/NaBH(OAc)3 forneceu o N-isopropil peptídio.

Para evitar Ν,Ν-dialquilação indesejável na alquila redutora do procedimento acima, que pode ocorrer quando se usam alquil aldeídos de cadeia linear, desenvolveu-se uma alternativa, em que, depois da remoção de Mmt, o grupo amino foi primeiro derivatizado com cloreto de 2nitrobenzenossulfonila (o-NBS-CI; veja Fukuyama, T.; Jow, C.-Κ.; Cheung, M. Tetrahedron Lett. 1995, 36, 6373-6374). A sulfonamida resultante foi, então, alquilada com um álcool apropriado sob condições de reação de Mitsunobu convencionais, tipicamente utilizando TPP/DIAD em 1,2-dimetoxietano (Mitsunobu, O. Synthesis 1981, 1-28). O grupo o-NBS-CI foi subsequentemente removido com tiofenolato de potássio a 5% em DMF, após o que o peptídio foi clivado da resina.

Síntese de peptídios com cadeia lateral N-alquilada na posição n° 4:

Os peptídios foram montados com metodologia Boc. O resíduo na posição n° 4 foi introduzido na seqüência como Boc-Asp(OFm)-OH. Depois de completada a montagem do peptídio, a proteção de cadeia lateral foi removida com piperidina a 30% em DMF. O grupo carboxílico livre resultante foi convertido na amida desejada por acoplamento com uma amina apropriada mediada por PyBOP ou BOP/DIEA. O grupo Boc N-terminal foi, então, removido, seguido por divagem com HF, ciclização e purificação por HPLC.

A Tabela 1 relaciona os compostos preparados pelo procedimento acima. Ri é H para todos os compostos, exceto o n° 7, em que é CH₃. Um asterisco *'* marca as modalidades mais preferidas.

Tabela 1. Compostos preparados com a fórmula (I)

Substituinte	SEQID NO Designada
Ar	m	n	Rz	P	Rs
Ph	2	0	H	2	H	8
Ph	3	0	H	3	H	9
Ph	2	0	och₃	3	H	10
Ph	3	0	H	2	H	11
4-pyridyi	2	0	H	2	H	12
4-tiazolila	2	0	H	2	H	13
2-tienila	2	0	H	2	H	14
3-tienila	2	0	H	2	H	15
Ph	2	0	OH	3	H	16
2-piridila	2	0	H	2	H	17
3-piridila	2	0	H	2	H	18
Ph	2	0	ch₃	3	H	19
Ph	2	1	ch₃	3	H	20
Ph	2	1	CH(CH₃)2	3	H	21
Ph	3	0	H	3	CH(CH₃)2	1*
Ph	3	0	H	2	CH(CH₃)2	22
Ph	1	2	OH	3	H	23
Ph	1	0	OH	3	H	24
2-fúrila	2	0	H	3	H	25
Ph	1	3	OH	3	H	2*
2-furila	2	0	H	2	H	26
Ph	1	0	CH(CH₂OH)2	3	H	27
Ph	1	1	CH(OH)CH₃	3	H	28
Ph	1	2	OCH₂CH₂OH	3	H	29
Ph	1	0	H	3	H	30
Ph	1	0	H	2	H	3*
Ph	1	0	CH₃	2	H	31
Ph	1	1	ch₃	2	H	4*

Ar	Substituinte	Ra	SEQID NO Designada
m	n	R2	P
2-fúrila	2	0	H	3	H	32
2- tienila	1	0	H	3	H	33
Ph	2	0	H	3	CH(CH₃)2	5*
2-tienila	2	0	H	3	CH(CH₃)2	34
3-tienila	1	0	H	3	H	35
2-tienila	1	0	H	2	H	36
3-tienila	1	0	H	2	H	37
2-furila	1	0	H	3	H	38
Ph	2	0	H	3	CH₃	39
Ph	2	0	H	3	ch₂ch₂ch₃	40
Ph	1	0	H	3	CH(CH₃)2	41
2-fúrila	1	0	H	3	CH(CH₃)₂	42
2-tienila	1	0	H	3	CHÍCHsfc	43
2-furila	1	0	H	2	H	44
Ph	2	0	H	3	CH₂CH₃	6*
Ph	2	0	H	3	(CH₂)2CH(CH3)2	45 -
Ph	1	0	H	3	ch₃	46
Ph	1	0	H	3	ch₂ ch₃	47
Ph	1	0	ch₃	3	H	7*
Ph	1	1	CH₃	3	H	48
Ph	1	0	ch₃	3	H	49
Ph	1	0	H	3	ch₂ch₂ch₃	50

Os27 exemplos detalhados a seguir são apresentados para melhor ilustrar a síntese:

Composto 1, [Phe², Hgn⁴, Orn(iPr)⁸]VT:

Os derivados aminoácidos usados foram Boc-Cys(Trt)-Oh, 5 Fmoc-Phe-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Hgn-Oh, Fmoc-Asn(Trt)-OH, FmocCys(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Orn(Mmt)-OH e Fmoc-Gly-OH. FmocHgn-OH foi sintetizado conforme mencionado acima. A HPLC analítica foi realizada em um Cromatógrafo Líquido Waters 600 usando uma coluna Vy13

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JO dac C18, 5 μ 4,6 x 250 mm, a uma taxa de fluxo de 2 mL/min. A HPLC preparatória foi realizada em um Cromatógrafo Líquido Waters 2000 usando um cartucho Prepak 47 x 300 mm, a uma taxa de fluxo de 100 mL/min. A análise final do composto foi realizada em um Cromatógrafo Líquido 1100 Agilent usando uma coluna Vydac C18, 5 μ 2,1 x 250 mm, a uma taxa de fluxo de 0,3 mL/min. Os espectros de massa foram registrados em um espectrôemtro Finnigan MAT.

A resina de peptídio completamente protegida foi sintetizada em um Sintetizador de Peptídios Applied Biosystems 9050, partindo-se de 2 g (0,5 mmol) de resina Tentagel-S-RAM (Peptides International). Foram realizados acoplamentos únicos mediados por DIC/HOBt com um excesso de 4 vezes de derivados de aminoácidos. O grupo Fmoc foi removido com ptperidina a 20% em DMF. Com o término da síntese automatizada, a resina foi transferida para um recipiente de síntese manual e foi tratada com solução de DCM/TIS/TFA a 93/5/2 (v/v/v) (30 mL) durante 2x1,5 hora para remoção do grupo Mmt. A resina foi completamente lavada com DCM e foi subseqüentemente posta em suspensão em 15 mL de 1,2-dicloroetano/TMOF a 1:1 (v/v). 0,2 mL de acetona foi, então, adicionado, seguidos por 0,6 g de NaBH(OAc)3. A suspensão foi agitada durante uma noite, e a resina foi lavada com metanol, DMF e DCM e secada a vácuo. A resina foi, então, tratada com 30 mL da solução de TFA/TIS/H₂O a 96/2/2 (v/v/v) durante 1,5 horas e filtrada. O filtrado foi evaporado, e o peptídio linear bruto foi precipitado com éter dietílico. O precipitado foi imediatamente dissolvido em 500 mL de TFA a 10% (aq.), e o peptídio foi oxidado por adição de l₂ a 0,1 M em metanol a uma solução agitada magneticamente até que uma cor amarela persistisse. O excesso de iodo foi reduzido com ácido ascórbico. A mistura de reação foi, então, resfriada com gelo triturado, e o pH foi ajustado a cerca de 5 por adição de amônia concentrada (aq.). A mistura foi carregada em uma coluna de HPLC e purificada usando-se tampão fosfato de trietilamônio com pH 5,2. O composto foi eluído com um gradiente de acetonitrila. As frações com uma pureza acima de 97% foram reunidas, e a solução resultante foi diluída com 2 volumes de água. A solução foi recarregada na coluna, que foi, então, lavada com 2 L de acetato de amônio a 0,1 M (aq.) e equilibrada com ácido « · ·«

♦ ··· ··· ··· • ⁴ · ! ·· ··

AL

acético a 2% (aq.). O composto foi eluído comum gradiente rápido (3%/min) de acetonitrila. As frações contendo o produto desejado foram reunidas e liofilizadas. Foram obtidos 168 mg (-30% de rendimento) de pó amorfo branco. HPLC: Rt = 8,5 min, gradiente: 20 -► 40% de B durante 20 min, t =

40°C, solvente A: TFA a 0,01% (aq.), solvente B: CH₃CN a 70%, TFA a

0,01% (aq.); Pureza: 98,8%; MS (M+H*): esperado 1.048,5, observado 1.048,5.

Composto 4; [Phe², Asn(Et)⁴, Dbu®]VT:

Os derivados de aminoácidos usados foram Boc-Cys(Mob)-OH,

Boc-Phe-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OFm)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Pro-OH, Boc-Dbu(benziloxicarbonil)-OH sal DCHA e Boc-Gly-OH, todos adquiridos na Novabiochem e Bachem. As operações de HPLC e MS foram realizadas como na síntese de composto 1.

A resina de peptídio completamente protegida foi manualmente sintetizada partindo-se de 0,6 g (0,4 mmoles) de resina de 4metilbenzidrilamina (Novabiochem). Foram empregadados acoplamentos únicos mediados por DCC, PyBOP ou DIC/HOBt com um excesso de 2,5 vezes de derivados de aminoácidos. O grupo Boc foi removido com TFA a 50% em DCM contendo 1 % de m-cresol. Como término da síntese, o éster

9-fluorenilmetílico foi removido do grupo β-carboxílico do ácido aspártico por tratamento com piperidina a 30% em DMF durante 2 x 30 min. A resina foi lavada com solução de HOBt a 1 M em DMF durante 30 min e, então, duas vezes com apenas DMF. O grupo carboxílico livre foi amidado por tratamento durante uma nonite com 2 mmoles de etilamina/PyBOP/DlEA em DMF. A . resina acabada foi lavada com metanol, DMF e DCM e secada a vácuo. O peptídio foi clivádo da resina usando-se 30 mL de HF anidro contendo 3 mL de anisol a 0°C durante 90 minutos. O HF foi evaporado, e o peptídio linear bruto foi lavado com éter dietílico. O peptídio foi imediatamente dissolvido em 200 mL de acetonitrila a 25%/TFA a 10% (aq.) e oxidado conforme des30 crito acima. A mistura resultante foi carregada diretamente em uma coluna de HPLC e purificada usando-se tampão fosfato de trietilamônio a pH 2,3. As etapas de purificação subseqüentes foram idênticas às do procedimento para o composto 1. Foram obtidos 41 g (-10% de rendimento) de pó amorfo

J-Jbranco. HPLC: Rt = 10,0 min, gradiente: 20 _► 40% de B durante 20 min, t = 40°C, solvente A: TFA a 0,01% (aq.), solvente B: CH₃CN a 70%, TFA a 0,01% (aq.); Pureza: 100%; MS (M+H⁺): esperado 992,5, observado 992,2.

Os outros compostos foram preparados por variação análoga desses procedimentos sintéticos.

Parte Experimental (testes biológicos)

Ensaios de receptor in vitro:

A atividade agonista de compostos sobre o receptor de hV1a foi determinada em um ensaio repórter transcripcional por transfecção transitória de um DNA de expressão de receptor de hV1a em células HEK-293 em conjunto com um DNA repórter contendo elementos promotores sensíveis a cálcio intracelular que regulam a expressão da luciferase de vaga-lume. Veja Boss, V., Talpade, D. J., Murphy, T. J. J. Biol. Chem. 1996, 3 de maio; 271(18), 10429-10432, para diretrizes adicionais para este ensaio. As células foram expostas a diluições seriadas de compostos diluídos 10 vezes por ose durante 5 horas, seguido por lise das células, determinação da atividade de luciferase e determinação das eficácias dos compostos e valores de EC50 mediante regressão não linear. Arginina-vasopressina (AVP) foi usada como um controle interno em cada experimento, e os compostos foram testados em pelo menos três experimentos independentes. Para determinar a seletividade, os compostos foram testados em ensaios repórteres transcripcionais à base de luciferase que expressavam 0 receptor de oxitocina (hOT) humano. Também foram conduzidos ensaios para outros receptores (hV2, hV1b, V1a de rato e V2 de rato).

Para fins de comparação adicional, foram usados outros compostos de referência [Phe2, Orn8]OT, terlipressina e F180.

A estrutura do [Phe2, Orn8]OT é (SEQ ID NO: 51):

H-Cys-Phe-lle-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2

I_I

A estrutura de F180 é (SEQ ID NO: 52):

Hmp-Phe-lle-Hgn-Asn-Cys-Pro-Dbu(Abu)-Gly-NH₂

Os resultados dos ensaios in vitro são apresentados na tabela 2 ·· ··

···	··· ♦· *··· • · · · „	• ·	« ♦
• * « ··	• · ··· * • · · 1 • · · · *
	··· ·· ··		• *

• · ···.:*·, ··*·· ϊί • · ·· ' • ·· ♦· abaixo. O valor de ECgo dado é a média geométrica expressão em nanomoles/L (nM). Os valores de seletividade são dados como razões de EC₅₀.

Testes farmacológicos in vivo:

Os compostos foram testados in vivo quanto à duração de ação relacionada a uma dose padrão de AVP. Os testes de pressão sangüínea foram realizados em ratos machos Sprague-Dawley anestesiados (pesando 270 - 300 g) com a veia jugular e a artéria carótida cateterizadas. A artéria carótida cateterizada foi usada para monitorizar continuamente a pressão sangüínea, e a veia jugular foi usada para administração dos compostos tes10 tados. Os ratos receberam injeções intravenosas de dibenamina antes da dosagem para aumentar sua sensibilidade a agonistas do receptor de V1a (cf. Dekanski, J., Br. J. Pharmacol. 1952, 7, 567-572). O procedimento de dosagem consistiu em uma injeção intravenosa de salina fisiológica seguida por duas injeções consecutivas de uma dose padrão de AVP (0,1 nmol/kg, «

ED₇o), e três a cinco doses crescentes de um dado composto selecionado para fornecer pelo menos uma resposta comparável à da dose padrão de AVP. Os intervalos de dosagem foram estabelecidos como o tempo para que a pressão sangüínea diminuísse até uma linha basal estável.

A determinação da duração de ação se baseou na taxa de deca20 imento do aumento transitório da pressão sangüínea arterial diastólica. Especificamente, para um decaimento exponencial da concentração plasmática, pode-se mostrar que, se a resposta é medida além da fase de distribuição, a taxa de decaimento próxima a EC₅₀ é linear e inversamente proporcional à meia-vida de eliminação (Rowland, M. e Tozer, T. em Clinicai

Pharmacokinetics, Concepts, and Applications, 3^a ed., Lippincott Williams & Wilkins, Filadélfia, 1995).

Para medir a taxa de decaimento de resposta para um dado composto, selecionou-se uma dose que desse uma amplitude de resposta tão similar quanto possível à amplitude de resposta à segunda injeção da dose padrão de AVP. Para normalizar a variação interindividual na sensibilidade a V1a, a duração de ação foi expressa como a razão da taxa de decaimento para essa resposta a AVP de referência para a taxa de decaimento para a dose eqüieficiente de composto para cada rato testado. Os resultados ·* «« ♦· · ··« ·· ··♦· • · ♦ • · ·· · • · · • · · · ·« ·· • ··· ··· ··:·: ::/ a · · ·

-Η obtidos para os compostos testados são apresentados na tabela 2. Tabela 2. Resultados dos testes biológicos

Composto testado	EC₅₀ do recetor de hV1a	Duração in vivo com relação a AVP	Seletividade OT/hV1a
8	0,50		11
9	0,68	1,5	+
10	1,15	2,3	11
11	2,96	1,9	+
12	24,96		+
13	18,77	-	+
14	0,54		75
15	0,61	2,2	43
16	11,88		+
17	30,29		+
18	29,85	-	+
19	5,99	1,6	+
20	39,28		+
21	20,66	-	+
1*	2,02	1,7	+
22	18,13		+
23	7,97		+
24	4,09		+
25	1,40	2,0	23
2*	1,18	1,7	+
26	2,24	2,0	28
27	16,21		+
28	5,17		+
29	4,77	-	+
30	1,45	1,7	+
3*	1,47	1,7	+
31	3,91	-	+
4*	2,36	1,8	+
32	2,64	2,1	35 \|

* ·

··· * Φ	«« · • « ·	···· ♦	• *	• *
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4··	• * * ··· ··	• • · • ·	• • • *·	♦ ·

• · t • · ♦ · • ·

Composto testado	EC₅o do recetor dehVIa	Duração in vivo com relação a AVP	Seletividade OT/hV1a
33	14,61	-	+
5*	0,25	1,9	117
34	0,73	2,0	72
35	7,30	-	+
36	11,54	-	+
37	7,45	-	+
38	10,11	-	+
39	0,21	1,9	178
40	0,27	- 2,0	88
41	0,98	2,6	53
42	6,25	-	+
43	13,71	-	+
44	14,48	-	+
6*	0,29	1,9	86
45	1,65	-	18
46	2,41	2,1	+
47	0,99	1,6	+
7*	2,84	-	+
48	5,70	-	+
49	3,58	-	+
50	1,52	2,4	43
[Phe2, Om8]OT	0,15	1,9	60
teríipressína	82,08	9,1	+
AVP	0,21	0,9	108
F180	0,56	3,8	+

- = não testado + = agonista seletivo de receptor de hV1a; razão de hOT/hVIa de EC50 não determinada devido à eficácia de agonista muito baixa (< 30% em comparação com AVP) no receptor de hOT

Todas as referências relacionadas devem ser consideradas como parte integrante do presente pedido.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (I) (SEQ ID NO: 53):

RlN(CH₂)_nR₂ '’Υγ’γγ

CH

Ar (CH,) _/nhr₃

-NH, (I) em que:

5 Ar é um grupo arila selecionado em sistemas de anéis carbocíclicos aromáticos, sistemas de anéis heteroaromáticos de cinco ou seis elementos e sistemas de anéis heteroaromáticos bicíclicos; m é selecionado em 1, 2 e 3; n é selecionado em 0, 1, 2, 3 e 4; p é selecionado em 2, 3 e 4; R-i, R2 e R3 são independentemente selecionados em H, OH, alquila, O-alquila e

10 OC(O)-alquila; alquila é selecionada em C1-6 alquila de cadeia linear e C4-8 de cadeia ramificada e tem, opcionalmente, pelo menos um substituinte hidroxila; e, quando n = 0, R1 e R2 opcionalmente formam juntos uma estrutura de anel contendo nitrogênio compreendendo de 2 a 5 átomos de carbono; contanto que, quando Ar é fenila, m = 2, n = 0, R1 = R2 = H, e p é 3 ou 4, R₃

15 não é H; e seus solvatos e sais farmaceuticamente aceitáveis.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Ar é selecionado em fenila, 2- ou 3-tienila, 2- ou 3-furila, 2-, 3ou 4-piridila e 2-, 4- ou 5-tiazolila.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracteriza20 do pelo fato de que R1 é H.
4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1

- 3, caracterizado pelo fato de que p é 2 ou 3.
5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1

- 4, caracterizado pelo fato de que R2 é selecionado em H, OH, CH₃, 25 CH₂CH₃, CH(CH₃)₂, CH(CH₂OH)₂, CH(OH)CH₃, OCH₃ e OCH₂CH₂OH.
6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1

- 5, caracterizado pelo fato de que R₃ é selecionado em H, metila, etila, nPctiçào 870170066263, dc 06/09/2017, pág. 9/16 propila, i-propila e i-amila.
7. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado em um grupo que consiste em (SEQ ID NOs: 1 - 7, respectivamente, em ordem de apare5 cimento):

H-Cys-Phe-lle-Hgn-Asn-Cys-Pro-Orn(i-Pr)-Gly-NH2 I_I

H-Cys-Phe-lle-Asn((CH2)3OH)-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2 I_I

H-Cys-Phe-lle-Asn-Asn-Cys-Pro-Dbu-Gly-Nhfe I_I

H-Cys-Phe-lle-Asn(CH₂CH3)-Asn-Cys-Pro-Dbu-Gly-NH2 I_I

10 H-Cys-Phe-lle-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn(i-Pr)-Gly-NH2 e

I_I

H-Cys-Phe-lle-Gln-Asn-Cys-Pro-Orn(CH₂CH3)-Gly-NH2.

I_I
8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula estrutural:

H-Cys-Phe-lle-Asn(CH3)2-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2.

I_I

15
9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1

- 8, caracterizado pelo fato de que é para uso como uma substância farmacêutica.
10. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto como definido em qualquer uma das reivindica20 ções 1 - 8, como ingrediente ativo, em associação com um adjuvante, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
11. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 - 8, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de choque de origem hipovolêmica ou

25 vasodilatadora, sangramento de varizes esofageanas, síndrome hepatorenal, ressuscitação cardiopulmonar, hipotensão induzida por anestesia, hipotensão ortostática, disfunção circulatória induzida por paracentese, perda de sangue intra-operatória ou perda de sangue associada ao debridamento

Petição 870170066263, de 06/09/2017, pág. 10/16 de queimaduras e epistaxe, e para o tratamento de várias doenças oculares por aumento da lacrimação/formação de lágrimas.

Petição 870170066263, de 06/09/2017, pág. 11/16