BR112021009877A2 - agonistas glp-1r e usos dos mesmos - Google Patents

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Abstract

AGONISTAS GLP-1R E USOS DOS MESMOS. A presente invenção refere-se a compostos de Fórmula (I) e composições farmacêuticas dos mesmos, para uso, por exemplo, no tratamento de diabetes mellitus tipo 2, pré-diabetes, obesidade, doença do fígado gordo não alcoólica, esteato-hepatite não alcoólica e doença cardiovascular.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "AGONISTAS GLP-1R E USOS DOS MESMOS".
REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDO RELACIONADO
[001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade do Pedido de Patente Internacional Número PCT/CN2018/117047, depositado em 22 de novembro de 2018. Todo o conteúdo do pedido acima mencionado é incorporado neste documento por referência.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] Diabetes é um grande problema de saúde pública devido à sua prevalência crescente e aos riscos para a saúde associados. A doença é caracterizada por altos níveis de glicose no sangue resultantes de defeitos em produção de insulina, ação de insulina ou ambos. Duas formas principais de diabetes são reconhecidas, Tipo 1 e Tipo 2. Diabetes tipo 1 (T1D) se desenvolve quando o sistema imune do corpo destrói células beta pancreáticas, as únicas células no corpo que produzem o hormônio insulina que regula a glicose no sangue. Para sobreviver, as pessoas com diabetes Tipo 1 devem receber insulina por injeção ou uma bomba. Diabetes mellitus Tipo 2 (geralmente referida como T2DM) geralmente começa com resistência à insulina ou quando há produção insuficiente de insulina para manter um nível de glicose aceitável.
[003] Atualmente, várias abordagens farmacológicas estão disponíveis para tratar hiperglicemia e, subsequentemente, T2DM (Hampp et al., Use of Antidiabetic Drugs in the U.S., 2003-2012, Diabetes Care 37:1367-1374, 2014). Elas podem ser agrupadas em seis classes principais, cada uma agindo por meio de um mecanismo primário diferente.
[004] Secretogogos de insulina, incluindo sulfonil-ureias (por exemplo, glipizida, glimepirida, gliburida), meglitinidas (por exemplo,
nateglidina, repaglinida), inibidores da dipeptidil peptidase IV (DPP-IV) (por exemplo, sitagliptina, vildagliptina, alogliptina, dutogliptina, saxagliptina) e agonistas do receptor de peptídeo tipo glucagon 1 (GLP-1R) (por exemplo, liraglutida, albiglutida, exenatida, lixisenatida, dulaglutida, semaglutida), que intensificam secreção de insulina agindo nas células beta pancreáticas. Sulfonil-ureias e meglitinidas têm eficácia e tolerabilidade limitadas, causam ganho de peso e frequentemente induzem hipoglicemia. Os inibidores de DPP-IV têm eficácia limitada. Agonistas de GLP-1R comercializados são peptídeos administrados por injeção subcutânea. Liraglutida também é adicionalmente aprovada para o tratamento de obesidade.
[005] Acredita-se que biguanidas (por exemplo, metformina) ajam principalmente diminuindo produção hepática de glicose. Biguanidas costumam causar distúrbios gastrointestinais e acidose láctica, limitando ainda mais seu uso.
[006] Inibidores de alfa-glicosidase (por exemplo, acarbose) diminuem absorção intestinal de glicose. Esses agentes costumam causar distúrbios gastrointestinais.
[007] Tiazolidinedionas (por exemplo, pioglitazona, rosiglitazona) agem em um receptor específico (receptor gama ativado por proliferador de peroxissoma) no fígado, nos músculos e tecidos adiposos. Elas regulam metabolismo lipídico, intensificando subsequentemente a resposta desses tecidos às ações de insulina. Uso frequente dessas drogas pode levar a ganho de peso e pode induzir edema e anemia.
[008] Insulina é usada em casos mais severos, seja isoladamente ou em combinação com os agentes acima, e o uso frequente também pode levar a ganho de peso e acarreta um risco de hipoglicemia.
[009] Inibidores de cotransportador de transportador ligado a sódio-glicose 2 (SGLT2) (por exemplo, dapagliflozina, empagliflozina,
canagliflozina, ertugliflozina) inibem reabsorção de glicose nos rins e, desse modo, abaixam níveis de glicose no sangue. Essa classe emergente de drogas pode estar associada a cetoacidose e infecções no trato urinário.
[0010] No entanto, com a exceção de agonistas de GLP-1R e inibidores de SGLT2, as drogas têm eficácia limitada e não abordam os problemas mais importantes, o declínio da função de células β e a obesidade associada.
[0011] Obesidade é uma doença crônica que é altamente prevalente na sociedade moderna e associada a numerosos problemas médicos, incluindo hipertensão, hipercolesterolemia e doença cardíaca coronariana. Além disso, está altamente correlacionada com T2DM e resistência à insulina, a última geralmente é acompanhada por hiperinsulinemia ou hiperglicemia, ou ambas. Além disso, T2DM está associada a um risco duas a quatro vezes mais elevado de doença arterial coronariana. Atualmente, o único tratamento que elimina obesidade com alta eficácia é cirurgia bariátrica, mas esse tratamento é caro e arriscado. Intervenção farmacológica é geralmente menos eficaz e associada a efeitos colaterais.
[0012] Existe, portanto, uma necessidade de intervenção farmacológica mais eficaz com menos efeitos colaterais e administração conveniente.
[0013] Embora T2DM seja mais comumente associada à hiperglicemia e resistência à insulina, outras doenças associadas a T2DM incluem resistência à insulina hepática, tolerância à glicose impedida, neuropatia diabética, nefropatia diabética, retinopatia diabética, obesidade, dislipidemia, hipertensão, hiperinsulinemia e doença hepática do fígado gordo não alcoólica (NAFLD).
[0014] NAFLD é a manifestação hepática de síndrome metabólica e é um espectro de condições hepáticas abrangendo esteatose, esteato-hepatite não alcoólica (NASH), fibrose, cirrose e, em última instância, carcinoma hepatocelular. NAFLD e NASH são consideradas as doenças do fígado gordo primárias, pois elas representam a maior proporção de indivíduos com lipídios hepáticos elevados. A severidade de NAFLD/NASH é baseada na presença de lipídio, infiltrado de células inflamatórias, balonismo de hepatócitos e grau de fibrose. Embora nem todos os indivíduos com esteatose progridam para NASH, uma parte substancial o faz.
[0015] GLP-1 é um hormônio incretina de 30 aminoácidos de comprimento secretado pelas células L no intestino em resposta à ingestão de alimentos. Foi demonstrado que GLP-1 estimula secreção de insulina de maneira fisiológica e dependente de glicose, diminui secreção de glucagon, inibe esvaziamento gástrico, diminui apetite e estimula proliferação de células beta. Em experimentos não clínicos, GLP-1 promove competência contínua de células beta, estimulando transcrição de genes importantes para secreção de insulina dependente de glicose e promovendo neogênese de células beta (Meier et al., Biodrugs. 17(2): 93-102, 2013).
[0016] Em um indivíduo saudável, GLP-1 desempenha um papel importante na regulação do nível de glicose no sangue pós-prandial, estimulando secreção de insulina dependente de glicose pelo pâncreas, resultando em elevada absorção de glicose na periferia. GLP-1 também suprime secreção de glucagon, levando à saída de glicose hepática reduzida. Além disso, GLP-1 retarda esvaziamento gástrico e desacelera motilidade do intestino delgado retardando absorção de alimentos. Em pessoas com T2DM, a subida pós-prandial normal em GLP-1 está ausente ou reduzida (Vilsboll et al., Diabetes. 50:609-613, 2001).
[0017] Hoist (Physiol. Rev. 87:1409, 2007) e Meier (Nat. Rev.
Endocrinol. 8:728, 2012) descrevem que agonistas do receptor de GLP-1, tal como GLP-1, liraglutida e exendina-4, têm 3 atividades farmacológicas principais para melhorar controle glicêmico em pacientes com T2DM, reduzindo a glicose em jejum e pós-prandial (FPG e PPG): (i) secreção de insulina dependente de glicose aumentada (primeira e segunda fases melhoradas), (ii) atividade supressora de glucagon sob condições hiperglicêmicas, (iii) retardo da taxa de esvaziamento gástrico resultando em absorção retardada de glicose derivada de refeição.
[0018] Permanece uma necessidade de uma prevenção e/ou um tratamento de fácil administração para doenças cardiometabólicas e doenças associadas.
SUMARIO DA INVENÇÃO
[0019] Em uma primeira modalidade, a invenção fornece um composto representado pela fórmula estrutural (I): (I), ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: indica uma ligação simples ou uma ligação dupla; X1, X2, X3, X4 e X5 são, cada um, independentemente selecionados de N e CH; em que não mais que três de X1, X2, X3, X4 e X5 são N e em que o anel A não contém 3 átomos de anel de nitrogênio em 3 posições contíguas; W é selecionado de O, S, CR5R6 e NR5';
Y1, Y3, Y4 e Y5 são, cada um, independentemente selecionados de N, NH, CH e CH2; Y2 e Y6 são, cada um, independentemente selecionados de N, C ou CH; em que não há mais que 3 átomos de anel de nitrogênio no anel B e em que o anel B não contém 3 átomos de anel de nitrogênio em 3 posições contíguas; Z1 e Z2 são cada um independentemente selecionados de N, C e CH; em que pelo menos um de Z1 e Z2 é N; Z3 e Z4 são cada um independentemente selecionados de uma ligação, CH, CH2, CH=CH, CH2CH2, CH2CH e CHCH2; em que o anel C contém não mais que duas ligações duplas;
desde que quando o anel B é , então, (1) W não é O e/ou (2)
o anel C não é e/ou (3) o anel C não é em que Z1 é N e/ou (4) o anel A não é fenil; em que: T2, T3 e T4 são cada um selecionados independentemente de N, NR4, O, S, C, e CR4; T6, T7 e T8 são, cada um, independentemente selecionados de N e CR4; em que não mais que 4 de T2, T3, T4, T6, T7 e T8 são selecionados de N, O e S; EE é –COOH ou um substituto do grupo carboxílico, opcionalmente, o substituto do grupo carboxílico é:
; Ra é seleccionado de hidrogênio, deutério, halogênio, -CN, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', arila de 6-10 membros, heteroarila de 5-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada e heterociclila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada, em que o C1-C6 alquila ou C1-C6 alcóxi representado por Ra é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, e C3-C6 cicloalquila saturada ou parcialmente saturada; e em que a arila, heteroarila, cicloalquila saturada ou parcialmente saturada, ou heterociclila saturada ou parcialmente saturada representada por Ra ou no grupo representado por Ra é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, C1-C3 alquil (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3), e C1-C3 alcóxi (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3), e NR5'R6'; Rb é selecionado de hidrogênio, deutério, halogênio, -CN, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', arila de 6-10 membros, heteroarila de 5-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada e heterociclila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada, em que o C1-C6 alquila ou C1-C6 alcóxi representado por Rb é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, e C3-C6 cicloalquila saturada ou parcialmente saturada; e em que a arila, heteroarila, cicloalquila saturada ou parcialmente saturada, ou heterociclila saturada ou parcialmente saturada representada por Rb ou no grupo representado por Rb é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, C1-C3 alquil (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3) e C1-C3 alcóxi (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3), e NR5'R6'; Rc é seleccionado de hidrogênio, deutério, de halogênio, - CN, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', arila de 6-10 membros, heteroarila de 5-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada e heterociclila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada, em que o C1-C6 alquila ou C1-C6 alcóxi representado por Rc é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH e cicloalquil C3-C6 saturado ou parcialmente saturada; e em que a arila, heteroarila, cicloalquila saturada ou parcialmente saturada, ou heterociclila saturada ou parcialmente saturada representada por Rc ou no grupo representado por Rc é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN e NR5'R6'; Rd é seleccionado de hidrogênio, deutério, de halogênio, -CN, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', arila de 6-10 membros, heteroarila de 5-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada e heterociclila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada, em que o C1-C6 alquila ou C1-C6 alcóxi representado por Rd é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN e C3-C6 cicloalquila saturada ou parcialmente saturada; e em que a arila, heteroarila,
cicloalquila saturada ou parcialmente saturada, ou heterociclila saturada ou parcialmente saturada representada por Rd ou no grupo representado por Rd é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN e NR5'R6'; cada R1 é independentemente selecionado de halogênio, -CN, OH, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alquenila, C1-C6 alquinila, NR5'R6', arila de 6-10 membros, heteroarila de 5-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada e heterociclila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada, em que o C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alquenila ou C1-C6 alquinil representado por R1 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3 e C3-C6 cicloalquila saturada ou parcialmente saturada (opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3); e em que a arila, heteroarila, cicloalquila saturada ou parcialmente saturada, ou heterociclila saturada ou parcialmente saturada representada por R1 ou no grupo representado por R1 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, C1-C3 alquil (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3), e C1-C3 alcóxi (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3) e NR5'R6'; cada R2 é independentemente selecionado de halogênio, -CN, OH, oxo, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', arila de 6-10 membros, heteroarila de 5-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada e heterociclila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada, em que o C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi representado por R2 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3 e C3-C6 cicloalquila saturada ou parcialmente saturada
(opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3); e em que a arila, heteroarila, cicloalquila saturada ou parcialmente saturada, ou heterociclila saturada ou parcialmente saturada representada por R2 ou no grupo representado por R2 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, C1-C3 alquil (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3), e C1-C3 alcóxi (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3) e NR5'R6'; cada R3 é independentemente selecionado de halogênio, -CN, OH, oxo, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', arila de 6-10 membros, heteroarila de 5-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada e heterociclila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada, em que o C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi representado por R3 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3 e C3-C6 cicloalquila saturada ou parcialmente saturada (opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3); e em que a arila, heteroarila, cicloalquila saturada ou parcialmente saturada, ou heterociclila saturada ou parcialmente saturada representada por R3 ou no grupo representado por R3 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, C1-C3 alquil (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3), e C1-C3 alcóxi (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3) e NR5'R6'; cada R4 é H, deutério, halogênio, OH, -CN, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, ou NR5'R6', em que o C1-C6 alquila e C1-C6 alcóxi representado por R4 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3 e C3-C6 cicloalquila saturada ou parcialmente saturada (opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3); R5 e R6 são cada um independentemente selecionados de hidrogênio, deutério, halogênio, -CN, OH, oxo, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', arila de 6-10 membros, heteroarila de 5-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada e heterociclila de 3-8 membros saturada ou parcialmente saturada, em que o C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alquenila ou C1-C6 alquinil representado por R5 ou R6 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3 e C3-C6 cicloalquila saturada ou parcialmente saturada (opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3); e em que o arila, heteroarila, cicloalquila saturada ou parcialmente saturada, ou heterociclila saturada ou parcialmente saturada representada por R5 ou R6 ou no grupo representado por R5 ou R6 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, C1-C3 alquil (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3), e C1-C3 alcóxi (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3) e NR5'R6'; R5' e R6' são cada um independentemente selecionados de hidrogênio, deutério e C1-C6 alquil; em que opcionalmente dois R1; dois R2; dois R3; dois R4; R1 e R2; R2 e R3; Ra e R1; Ra e R2; R1 e qualquer de R5, R5' (no grupo representado por W) ou R6; Ra e qualquer de R5, R5' (no grupo representado por W) ou R6; R2 e qualquer um de R5, R5' (no grupo representado por W) ou R6; R5 e R6; qualquer de dois grupos selecionados de Rc, Rd, Re e Rf; ou R4 e qualquer um de Rc, Rd, Re e Rf; tomados juntos com seu respectivo carbono interveniente ou heteroátomo(s) formam fenila, heteroarila de 5-6 membros, cicloalquila de 4-8 membros saturada ou parcialmente saturada ou heterociclila de 4-8 membros saturada ou parcialmente saturada, cada um dos quais é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, -CN, -OH, CF3, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, -NH2, -NHC1-C6 alquila, –N(C1-C6 alquil)2, oxo, e C3-C6 cicloalquila saturada ou parcialmente saturada, em que o C1-C6 alquila e C1-C6 alcóxi são opcionalmente substituídos por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3 e C3-C6 cicloalquila saturada ou parcialmente saturada, em que o cicloalquil é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3; m é um inteiro selecionado de 0, 1, 2, 3 e 4, n é um inteiro selecionado de 0, 1, 2, 3, 4 e 5, e o é um inteiro selecionado de 0, 1, 2, 3, 4 e 5.
[0020] Em uma segunda modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira modalidade, em que o composto é representado pela fórmula estrutural (II-A): (II-A), ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Rd é H, F, CH3 ou CF3, em que o restante das variáveis são conforme definido na primeira modalidade.
[0021] Em uma terceira modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira ou segunda modalidades, em que o composto é representado pela fórmula estrutural (III-A):
(III-A), ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que T2 é N e T4 é N ou CR4, em que R4 é H, halogênio, OH, CN, C1-C3 alquila, C1-C3 haloalquilo ou C1-C3 alcóxi; ou T2 é C, e T4 é NR4, em que R4 é H, C1-C 3 alquila, C1-C3 haloalquila, em que o restante das variáveis são como definido na primeira e na segunda modalidades.
[0022] Em uma quarta modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda ou terceira modalidades, em que o composto é representado pela fórmula estrutural (IV-A): (IV-A), ou um sal, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que T4 é N ou CH; e Ra H, CH3 ou CF3; ou Ra, R1 e X5, tomados juntos com seus respectivos carbonos intervenientes, formam cicloalquenila de 5-7 membros ou mono-heterociclil parcialmente saturada de 5-7 membros, em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda ou terceira modalidades.
[0023] Em uma quinta modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira ou quarta modalidades, em que Rb é
, em que Rb é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados de oxo, CN, F, Cl, C1-C3 alquila e C1-C3 alcóxi, em que o C1-C3 alquila ou C1-C3 alcóxi no grupo representado por Rb é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados de F, OH e OCH3, em que o restante das variáveis é como definido na primeira, segunda, terceira ou quarta modalidades.
[0024] Em uma sexta modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira ou quarta modalidades, em que Rb é ou , em que Rb é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados de halogênio, OH, NR5'R6', C1-C3 alquila e C1-C3 alcóxi, em que o C1-C3 alquila ou C1-C3 alcóxi no grupo representado por Rb é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados de F, OH, e OCH3, em que o restante das variáveis é como definido na primeira, segunda, terceira ou quarta modalidades.
[0025] Em uma sétima modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a quarta modalidade, em que é ou , em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda, terceira ou quarta modalidades.
[0026] Em uma oitava modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta ou sétima modalidades, em que é ou , em que R3 é halogênio, CN, OH, oxo, C1-C4 alquila, C1-C4 haloalquila, C1-C4 alcóxi, ou NR5'R6'; e o é um inteiro selecionado de 0, 1, 2 e 3, em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta ou sétima modalidade.
[0027] Em uma nona modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima ou oitava modalidade, em que é ou , em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima ou oitava modalidade.
[0028] Em uma décima modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta,
ou sexta, sétima, oitava ou nona modalidade, em que é , cada um dos quais é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados de halogênio, CN e oxo; ou dois grupos R3 tomados juntos com o anel C, formam (C5-C8)heterocicleno em ponte ou (C5-C8)cicloalquileno em ponte, em que o restante das variáveis é como definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava ou nona modalidade.
[0029] Em uma décima primeira modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava ou nona modalidade, em que é ou , em que R3 é halogênio, CN, oxo, CH3, CF3, CH2CH3 ou CH2CF3; e o é 0 ou 1, em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava ou nona modalidade.
[0030] Em uma décima segunda modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima ou décima primeira modalidade, em que é: , em que cada R2 é independentemente selecionado de halogênio, -CN, OH, oxo, C1-C2 alquila, C1-C2 haloalquila e C1-C2 alcóxi; e n é um inteiro selecionado de 0, 1, 2 e 3, em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima ou décima primeira modalidade.
[0031] Em uma décima terceira modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira ou décima segunda modalidade, em que é
, em que R2 é halogênio, -CN, OH, oxo, C1-C2 alquila, C1-C2 haloalquila ou C1-C2 alcóxi, n é 0 ou 1, e não mais do que dois de R2 são fixados ao anel B, em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira ou décima segunda modalidade.
[0032] Em uma décima quarta modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a décima segunda modalidade, em que dois grupos R2 juntos com o anel B formam uma estrutura bicíclica: , cada um dos quais é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, C1-C2 alquila, C1-C2 haloalquila, C1-C2 alcóxi, -NH2, -NHC1-C2 alquila, e –N(C1-C2 alquil)2,
em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira ou décima segunda modalidade.
[0033] Em uma décima quinta modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a décima quarta modalidade, em que dois grupos R2 juntamente com o anel B formam uma estrutura bicíclica: , cada um dos quais é opcionalmente substituído por halogênio, em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira ou décima segunda modalidades.
[0034] Em uma décima sexta modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a décima segunda modalidade, em que W e o anel B formam uma estrutura bicíclica: , cada um dos quais é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, -NH2, -NHC1-C2 alquila e –N(C1-C2 alquil)2, em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira ou décima segunda modalidade.
[0035] Em uma décima sétima modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta ou décima sexta modalidade, em que o anel A é , cada R1 é independentemente selecionado de halogênio, OH, CN, CF3, C1-C2 alquila, C1-C2 haloalquila, C1-C2 alcóxi, -NH2, -NHC1-C2 alquila, -N(C1- C2 alquila)2 e C2-C4 alquinila, opcionalmente substituído por ciclopropano; e m é um inteiro selecionado de 0, 1, 2 e 3, em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta ou décima sexta modalidade.
[0036] Em uma décima oitava modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sexta ou décima sétima modalidade, em que o anel A é ,emé0 ou 1, e R1 é halogênio, CN, CH3, CF3, OH ou C2-C4 alquinoil opcionalmente substituído por ciclopropano; preferencialmente o anel A é ,
em que o restante das variáveis é definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sexta ou décima sétima modalidade.
[0037] Em uma décima nona modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta ou décima sexta modalidade, em que o anel A é , cada R1 é independentemente selecionado de halogênio, OH, CN, CF3, C1-C2 alquila, C1-C2 haloalquila, C1-C2 alcóxi, -NH2, -NHC1-C2 alquila, -N(C1-C2 alquila)2 e C2-C4 alquinila, opcionalmente substituído por ciclopropano; e m é um inteiro selecionado de 0, 1 e 2, em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta ou décima sexta modalidades.
[0038] Em uma vigésima modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a décima nona modalidade, em que o anel A é
, cada um dos quais é opcionalmente substituído por halogênio, OH, CN, C≡CH, CH3 ou CF3, m é 0 ou 1, em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sexta ou décima nona modalidade.
[0039] Em uma vigésima primeira modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com qualquer uma da primeira até a décima quinta e da décima sétima até a vigésima modalidades, em que W é O, NH ou CH2, em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona ou vigésima modalidade.
[0040] Em uma vigésima segunda modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com qualquer uma da primeira até a vigésima modalidades, em que R1 é selecionado de halogênio, CN, CH3, CF3 e C≡CH, em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima ou vigésima primeira modalidades.
[0041] Em uma vigésima terceira modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira modalidade, em que o composto é representado pela fórmula estrutural (I'):
(I'), ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que indica uma ligação simples ou uma ligação dupla; X1, X2, X3, X4 e X5 são, cada um, independentemente selecionados de N e CH não mais que três de X1, X2, X3, X4 e X5 são N e o anel A não contém 3 átomos de anel de nitrogênio em 3 posições contíguas; W é selecionado de O, CR5'R6' e NR5'; Y1, Y3, Y4 e Y5 são, cada um, independentemente selecionados de N, NH, CH e CH2; Y2 e Y6 são, cada um, independentemente selecionados de N, C ou CH; em que não há mais que 3 átomos de anel de nitrogênio no anel B e em que o anel B não contém 3 átomos de anel de nitrogênio em 3 posições contíguas;
é , , ,
, , ;
desde que quando o anel B é , então, (1) W não é O, e/ou (2)
o anel C não é , e/ou (3) o anel C não é em que Z1 é N e/ou (4) o anel A não é fenil; T6, T7 e T8 são, cada um independentemente selecionados de N e CR4; e não mais que 2 de T6, T7 e T8 são selecionados de N; EE é –COOH,
, ou ; Ra é selecionado de hidrogênio, halogênio, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', em que C1-C6 alquila ou C1-C6 alcóxi representado por Ra é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN e OH; Rb é heteroarila de 5-6 membros ou heterociclila de 4-7 membros saturada ou parcialmente saturada, em que o heteroarila ou heterociclila saturada ou parcialmente saturada representada por Rb é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, C1-C3 alquila, C1-C3 haloalquila, C1-C3 hidroxialquila, C1-C3 alcóxi e C1-C3 haloalcóxi; Rc é hidrogênio, C1-C6 alquila, ou C1-C6 haloalquil; cada R1 é independentemente halogênio, -CN, OH, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, C2-C6 alquenila, C2-C 6 alquinila, NR5'R6', fenila, heteroarila de 5-6 membros, cicloalquila de 4-6 membros saturada ou parcialmente saturada e heterociclila de 3-7 membros saturada ou parcialmente saturada, em que o C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, C2-C6 alquenila, ou C2-C6 alquinil representado por R1 é, opcionalmente, substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, CN, OH, e C3-C6; e em que a arila, heteroarila, cicloalquila saturada ou parcialmente saturada, ou heterociclila saturada ou parcialmente saturada representada por R1 ou no grupo representado por R1 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, C1-C3 alquila, C1-C3 haloalquila, C1-C3 hidroxialquila, C1-C3 alcóxi, C1-C3 haloalcóxi, C1-C3 hidroxialcóxi e NR5'R6'; cada R2 é independentemente selecionado de halogênio, oxo, C1-C6 alquila, C1-C6 haloalquila, C1-C6 alcóxi, C1-C6 haloalcóxi e NR5'R6'; cada R3 é independentemente halogênio, -CN, oxo, C1-C6 alquila, C1-C6 haloalquila, C1-C6 alcóxi, ou C1-C6 haloalcóxi; e/ou dois R3 tomados juntos com o Anel C, formam heterociclila de 6-10 membros em ponte opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, C1-C6 alquila, C1-C6 haloalquila, C1- C6 alcóxi, ou C1-C6 haloalcóxi; cada R4 é independentemente H, halogênio, ou C1-C6 alquil opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio; R5' e R6' são cada um independentemente hidrogênio ou C1- C6 alquil; em que opcionalmente dois R1; dois R2; dois R3; Ra e R1; Ra e R2; R1 e R5'; R2 e R5'; tomados juntos com seu respectivo carbono interveniente ou heteroátomo(s) formam fenila, heteroarila de 5-6 membros, cicloalquila de 4-6 membros saturada ou parcialmente saturada ou heterociclila de 4-7 membros saturada ou parcialmente saturada, cada um dos quais é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, -CN, -OH, C1-C6 alquila, C1-C6 haloalquila, C1-C6 alcóxi, C1-C6 haloalcóxi, e NR5'R6'; m é 0, 1, 2, 3 ou 4; n é 0, 1, 2, 3 ou 4; e o é 0, 1, 2, 3 ou 4, em que o restante das variáveis é conforme definido na primeira modalidade.
[0042] Em uma vigésima quarta modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira, vigésima segunda ou vigésima terceira (por exemplo, vigésima terceira) modalidade, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que é , , ou , em que R3 é independentemente halogênio, C1-C4 alquila ou C1-C4 haloalquil; e o é 0, 1 ou 2.
[0043] Em uma vigésima quinta modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira, vigésima segunda, vigésima terceira ou vigésima quarta (por exemplo, vigésima terceira ou vigésima quarta) modalidade, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que é , , ou , em que R4 é H ou halogênio, de preferência, H ou F.
[0044] Em uma vigésima sexta modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira, vigésima segunda, vigésima terceira, vigésima quarta ou vigésima quinta (por exemplo, vigésima terceira, vigésima quarta ou vigésima quinta) modalidade, ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, em que EE é –COOH, -C(O)NHOH, -C(O)NHSO2CH3, -C(O)NHSO2CF3, , ou .
[0045] Em uma vigésima sétima modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira, vigésima segunda, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta ou vigésima sexta (por exemplo, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta ou vigésima sexta) modalidades, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Rb é , , ou ; cada um dos quais é opcionalmente substituído por um ou mais grupos seleccionados de C1-C3 alquil; e Rc é H ou C1-C3 alquila.
[0046] Em uma vigésima oitava modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira, vigésima segunda, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta ou vigésima sétima (por exemplo, vigésima terceira, vigésima quarta ou vigésima quinta, vigésima sexta, ou vigésima sétima) modalidade, ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, em que é .
[0047] Em uma vigésima nona modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira, vigésima segunda, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima ou vigésima oitava (por exemplo, vigésima terceira, vigésima quarta ou vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima ou vigésima oitava) modalidade, ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, em que é ou .
[0048] Em uma trigésima modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda,
décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira, vigésima segunda, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima, vigésima oitava, ou vigésima nona (por exemplo, vigésima terceira, vigésima quarta ou vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima, vigésima oitava ou vigésima nona) modalidade, ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, em que W é O, NH ou CH2 e Ra é H.
[0049] Em uma trigésima primeira modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira, vigésima segunda, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima, vigésima oitava, vigésima nona, ou trigésima (por exemplo, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima, vigésima oitava, vigésima nona ou trigésima) modalidade, ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, em que é , , , , , ou , , em que R2 é halogênio; n é 0, 1, ou 2.
[0050] Em uma trigésima segunda modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira,
vigésima segunda, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima, vigésima oitava, vigésima nona, trigésima, ou trigésima primeira (por exemplo, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima, vigésima oitava, vigésima nona, trigésima, ou trigésima primeira) modalidade, ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, em que é , ou ; R2 é F; e n é 0, 1, ou 2.
[0051] Em uma trigésima terceira modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira, vigésima segunda, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima, vigésima oitava, vigésima nona, trigésima, trigésima primeira, ou trigésima segunda (por exemplo, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima, vigésima oitava, vigésima nona, trigésima, trigésima primeira, ou trigésima segunda) modalidade, ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, em que anel A é , , , ou , cada R1 é independentemente selecionado de halogênio, CN, C1-C4 alquila, C1-C4 haloalquila, C1-C4 alcóxi, C1-C4 haloalcóxi, C2-C4 alquinil opcionalmente substituído por ciclopropila, heteroarila de 5-6 membros
(em que o heteroátomo do anel é nitrogênio), opcionalmente substituído por C1-C4 alquil; e/ou dois R1 tomados juntos com e seus respectivos átomos de carbono intervenientes formam heterociclila de 4-7 membros (em que o heteroátomo do anel é nitrogênio e/ou oxigênio) opcionalmente substituído por C1-C4 alquil; e m é 0, 1, 2 ou 3.
[0052] Em uma trigésima quarta modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira, vigésima segunda, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima, vigésima oitava, vigésima nona, trigésima, trigésima primeira, trigésima segunda, ou trigésima terceira (por exemplo, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima, vigésima oitava, vigésima nona, trigésima, trigésima primeira, trigésima segunda, ou trigésima terceira) modalidade, ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, em que W é O.
[0053] Em uma trigésima quinta modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira, vigésima segunda, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima, vigésima oitava, vigésima nona, trigésima, trigésima primeira, trigésima segunda, trigésima terceira, ou trigésima quarta (por exemplo, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima, vigésima oitava,
vigésima nona, trigésima, trigésima primeira, trigésima segunda, trigésima terceira, ou trigésima quarta) modalidade, ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, em que anel A é , cada R1 é independentemente selecionado de halogênio, CN, C1-C4 alquila, C1-C4 haloalquila, C1-C4 alcóxi, imidazolila, triazolila, piridila e C2-C4alquinil opcionalmente substitupido por ciclopropil; e m é 0, 1, ou 2.
[0054] Em uma trigésima sexta modalidade, a invenção fornece um composto de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira, vigésima segunda, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima, vigésima oitava, vigésima nona, trigésima, trigésima primeira, trigésima segunda, trigésima terceira, trigésima quarta, ou trigésima quinta (por exemplo, vigésima terceira, vigésima quarta, vigésima quinta, vigésima sexta, vigésima sétima, vigésima oitava, vigésima nona, trigésima, trigésima primeira, trigésima segunda, trigésima terceira, trigésima quarta, ou trigésima quinta) modalidade, ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, em que R1 é selecionado de halogênio e CN.
[0055] Em uma trigésima sétima modalidade, o composto, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo é selecionado dos compostos divulgados nos exemplos e na Tabela 1.
[0056] Em uma modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo o composto de acordo com qualquer uma da primeira até a trigésima sétima modalidades e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[0057] Em outro aspecto, a invenção fornece um método para tratar doenças cardiometabólicas e associadas compreendendo administrar a um indivíduo em necessidade de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer um do composto de acordo com qualquer uma da primeira até a vigésima segunda modalidades, em que a doença é T1D, T2DM, pré-diabetes, T1D idiopática (Tipo 1b), LADA (diabetes autoimune latente em adultos), EOD (T2DM de início precoce), YOAD (diabetes atípico de início na juventude), MODY (diabetes de início na maturidade do jovem), diabetes relacionada à desnutrição, diabetes gestacional, hiperglicemia, resistência à insulina, resistência à insulina hepática, tolerância à glicose prejudicada, neuropatia diabética, nefropatia diabética, doença renal, retinopatia diabética, disfunção de adipócito, deposição adiposa visceral, apneia do sono, obesidade (incluindo obesidade hipotalâmica e obesidade monogênica) e comorbidades relacionadas (por exemplo, osteoartrite e incontinência urinária), distúrbios alimentares (incluindo síndrome da compulsão alimentar periódica, bulimia nervosa e obesidade sindrômica, tal como síndromes de Prader-Willi e Bardet-Biedl), ganho de peso de uso de outros agentes (por exemplo, de uso de esteroides e antipsicóticos), desejo excessivo de açúcar, dislipidemia (incluindo hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, colesterol total aumentado, colesterol LDL alto e colesterol HDL baixo), desejo excessivo de açúcar, dislipidemia, hiperinsulinemia, NAFLD (incluindo doenças relacionadas, tal como esteatose, NASH, fibrose, cirrose e carcinoma hepatocelular), NASH, fibrose, cirrose, carcinoma hepatocelular, doença cardiovascular, aterosclerose (incluindo doença da artéria coronária), doença da artéria coronária, doença vascular periférica, hipertensão, disfunção endotelial, complacência vascular prejudicada, insuficiência cardíaca congestiva, infarto do miocárdio (por exemplo, necrose e apoptose), acidente vascular cerebral, acidente vascular cerebral hemorrágico, acidente vascular cerebral isquêmico, lesão no cérebro traumática, hipertensão pulmonar, restenose após angioplastia, claudicação intermitente, lipidemia pós-prandial, acidose metabólica, cetose, artrite, osteoporose, Doença de Parkinson, hipertrofia ventricular esquerda, doença arterial periférica, degeneração macular, catarata, glomeruloesclerose, insuficiência renal crônica, síndrome metabólica, síndrome X, síndrome pré-menstrual, angina pectoris, trombose, aterosclerose, ataques isquêmicos transientes, restenose vascular, metabolismo da glicose prejudicado, condições de glicose plasmática em jejum prejudicada, hiperuricemia, gota, disfunção erétila, distúrbios de pele e tecido conjuntivo, psoríase, ulcerações nos pés, colite ulcerativa, lipoproteinemia hiper apo B, doença de Alzheimer, esquizofrenia, cognição prejudicada, doença inflamatória do intestino, síndrome do intestino curto, doença de Crohn, colite, síndrome do intestino irritável, prevenção ou tratamento da Síndrome dos Ovários Policísticos e tratamento de dependência (por exemplo, álcool e/ou abuso de drogas).
[0058] Em um aspecto adicional, a invenção inclui uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de acordo com qualquer uma da primeira até a vigésima segunda modalidades na fabricação de um medicamento para tratar um indivíduo em necessidade do mesmo com doenças cardiometabólicas e associadas, em que a doença é T1D, T2DM, pré-diabetes, T1D idiopática (Tipo 1b), LADA (diabetes autoimune latente em adultos), EOD (T2DM de início precoce), YOAD (diabetes atípico de início na juventude), MODY (diabetes de início na maturidade do jovem), diabetes relacionada à desnutrição, diabetes gestacional, hiperglicemia, resistência à insulina,
resistência à insulina hepática, tolerância à glicose prejudicada, neuropatia diabética, nefropatia diabética, doença renal, retinopatia diabética, disfunção de adipócito, deposição adiposa visceral, apneia do sono, obesidade (incluindo obesidade hipotalâmica e obesidade monogênica) e comorbidades relacionadas (por exemplo, osteoartrite e incontinência urinária), distúrbios alimentares (incluindo síndrome da compulsão alimentar periódica, bulimia nervosa e obesidade sindrômica, tal como síndromes de Prader-Willi e Bardet-Biedl), ganho de peso de uso de outros agentes (por exemplo, de uso de esteroides e antipsicóticos), desejo excessivo de açúcar, dislipidemia (incluindo hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, colesterol total aumentado, colesterol LDL alto e colesterol HDL baixo), desejo excessivo de açúcar, dislipidemia, hiperinsulinemia, NAFLD (incluindo doenças relacionadas, tal como esteatose, NASH, fibrose, cirrose e carcinoma hepatocelular), NASH, fibrose, cirrose, carcinoma hepatocelular, doença cardiovascular, aterosclerose (incluindo doença da artéria coronária), doença da artéria coronária, doença vascular periférica, hipertensão, disfunção endotelial, complacência vascular prejudicada, insuficiência cardíaca congestiva, infarto do miocárdio (por exemplo, necrose e apoptose), acidente vascular cerebral, acidente vascular cerebral hemorrágico, acidente vascular cerebral isquêmico, lesão no cérebro traumática, hipertensão pulmonar, restenose após angioplastia, claudicação intermitente, lipidemia pós-prandial, acidose metabólica, cetose, artrite, osteoporose, Doença de Parkinson, hipertrofia ventricular esquerda, doença arterial periférica, degeneração macular, catarata, glomeruloesclerose, insuficiência renal crônica, síndrome metabólica, síndrome X, síndrome pré-menstrual, angina pectoris, trombose, aterosclerose, ataques isquêmicos transientes, restenose vascular, metabolismo da glicose prejudicado, condições de glicose plasmática em jejum prejudicada, hiperuricemia,
gota, disfunção erétil, distúrbios de pele e tecido conjuntivo, psoríase, ulcerações nos pés, colite ulcerativa, lipoproteinemia hiper apo B, doença de Alzheimer, esquizofrenia, cognição prejudicada, doença inflamatória do intestino, síndrome do intestino curto, doença de Crohn, colite, síndrome do intestino irritável, prevenção ou tratamento da Síndrome dos Ovários Policísticos e tratamento de dependência (por exemplo, álcool e/ou abuso de drogas).
[0059] Deve ser entendido que qualquer modalidade da invenção, incluindo aquelas descritas apenas nos Exemplos ou nas reivindicações, ou apenas em uma seção do relatório descritivo, pode ser combinada com uma ou mais modalidades adicionais da invenção, na medida em que tais combinações são não sejam expressamente renunciadas ou sejam impróprias.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0060] Figuras 1A e 1B mostram curvas dose-resposta para o ensaio de recrutamento de GLP-1R/β-Arrestina usando certos compostos da invenção e GLP-1 (7-37) como controle. O eixo vertical representa efeitos relativos dos compostos de teste normalizados para percentagem de efeito pelo ligando natural GLP-1 (7-37). Figura 1A compara Compostos 1, 10, 11, 19 e 35 com GLP-1 (7-37). Os dois painéis da Figura 1B comparam Compostos 225, 237 e 239 (painel esquerdo) e 236 e 238 (painel direito) com GLP-1 (7-37).
[0061] Figuras 2A e 2B mostram curvas dose-resposta para o ensaio de internalização de GLP-1R/β-Arrestina usando certos compostos da invenção e GLP-1 (7-37) como controle. O eixo vertical representa efeitos relativos dos compostos de teste normalizados para percentagem de efeito pelo ligando natural GLP-1 (7-37). Os dois painéis da Figura 2A comparam Compostos 19 e 28 (painel esquerdo) e Compostos 9, 33 e 35 (painel direito), respectivamente, com GLP-1 (7-37). Os três painéis na Figura 2B comparam Compostos 221, 222 e
225 (painel esquerdo), 224 e 239 (painel do meio) e 236 (painel direito), respectivamente, com GLP-1 (7-37).
[0062] Figuras 3 e 4 mostram respostas ao longo do tempo de interação de GLP-1R e β-arrestina2 conforme medido pelo NanoBit Assay, na presença de diferentes concentrações indicadas (diluições seriadas de 4 vezes) de peptídeo GLP-1 (7-37) (agonista natural de GLP-1R), bem como dois compostos representativos do presente pedido (isto é, Compostos 19 e 35). As curvas pretas são para Composto 35. É aparente que os compostos da invenção se comportaram de maneira diferente do agonista de peptídeo natural GLP-1.
[0063] Figuras 5A-5C mostram respostas ao longo do tempo de NanoBit assay para GLP-1 (7-37) e Composto 19, 10 ou 35, respectivamente, em diferentes concentrações de composto.
[0064] Figura 6 mostra curvas dose-resposta de interação de GLP- 1R e β-arrestina2 conforme medido pelo NanoBit Assay, na presença de pontos no tempo diferentes indicados (isto é, 0, 15, 30, 60, 120, 210 e 300 segundos) de peptídeo GLP-1 (agonista natural de GLP-1R), bem como três compostos representativos do presente pedido (isto é, Compostos 10, 19 e 35). Arbitrariamente, t = 6 min. (300s) foi escolhido para determinação de EC50 dose resposta. Alternativamente, análise/relatório de dados pode ser feito para obter valores de EC50 quando compostos atingem sinais máximos em cerca de 450-500 segundos (~ 8 min.).
[0065] Figuras 7A-7B mostram curvas dose-resposta para NanoBit assay de GLP-1R/β-Arrestina usando certos compostos da invenção e GLP-1 (7-37) como controle. O eixo vertical representa efeitos relativos dos compostos de teste normalizados para percentagem de efeito pelo ligando natural GLP-1 (7-37). Os dois painéis na Figura 7A comparam Compostos 19 e 35 com GLP-1 (7-37) em leituras de 3 min. e 5 min.,
respectivamente. Os dois painéis na Figura 7B comparam Composto 10 com GLP-1 (7-37) em leituras de 3 minutos e 5 minutos, respectivamente.
[0066] Figuras 8A-8F mostram propriedades farmacocinéticas (PK) favoráveis dos compostos em questão, em comparação com um composto de controle ("Composto 418") na forma de perfis concentração plasmática média substancialmente constante - tempo para Compostos 19 (Dose 1) (Figura 8A), 28 (Dose 1) (Figura 8B), 29 (Dose 2) (Figura 8C), 225 (Dose 2) (Figura 8D), Compostos 19 (Dose 2) (Figura 8E) e Compostos 418 (Dose 2) (Figura 8F), respectivamente.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
1. Visão Geral
[0067] Em um aspecto, a invenção fornece um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima (por exemplo, Fórmulas I, II-A, III-A e IV-A).
[0068] Em outro aspecto, a invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima (por exemplo, Fórmulas I, II-A, III-A e IV-A), ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, conforme definido em qualquer uma das modalidades aqui descritas, em uma mistura com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[0069] Em outro aspecto, a invenção fornece um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima (por exemplo, Fórmulas I, II-A, III-A e IV-A), ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, conforme definido em qualquer uma das modalidades aqui descritas, para uso como um medicamento.
[0070] Em outro aspecto, a invenção fornece um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima (por exemplo, Fórmulas I, II-A, III-A e IV-A), ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, conforme definido em qualquer uma das modalidades aqui descritas, para uso na prevenção e/ou no tratamento de doenças cardiometabólicas e associadas aqui discutidas, incluindo T2DM, pré-diabetes, NASH e doenças cardiovasculares.
[0071] Em outro aspecto, a invenção fornece um método para tratar uma doença para a qual um agonista de GLP-1R é indicado, em um indivíduo em necessidade de tal prevenção e/ou tratamento compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima (por exemplo, Fórmulas I, II-A, III-A e IV-A), ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme definido em qualquer uma das modalidades descritas aqui.
[0072] Em outro aspecto, a invenção fornece um uso de um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima (por exemplo, Fórmulas I, II-A, III-A e IV-A), ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, conforme definido em qualquer uma das modalidades aqui descritas, para a fabricação de um medicamento para tratar uma doença ou condição para a qual um agonista do GLP-1R é indicado.
[0073] Em outro aspecto, a invenção fornece um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima (por exemplo, Fórmulas I, II-A, III-A e IV-A), ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, conforme definido em qualquer uma das modalidades aqui descritas, para uso no tratamento de uma doença ou condição para a qual um agonista de GLP-1R é indicado.
[0074] Em outro aspecto, a invenção fornece uma composição farmacêutica para o tratamento de uma doença ou condição para a qual um agonista do GLP-1R é indicado compreendendo um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima (por exemplo, Fórmulas I, II-A, III-A e IV-A), ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, conforme definido em qualquer uma das modalidades aqui descritas.
[0075] Cada Exemplo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser reivindicado individualmente ou agrupado juntos em qualquer combinação com qualquer número de cada uma das modalidades aqui descritas.
[0076] A invenção também fornece uma composição farmacêutica compreendendo um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima (por exemplo, Fórmulas I, II-A, III-A e IV-A), ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, conforme definido em qualquer uma das modalidades aqui descritas, para uso no tratamento e/ou na prevenção de doenças cardiometabólicas e associadas aqui discutidas, incluindo T2DM, pré- diabetes, NASH e doenças cardiovasculares.
[0077] Em outro aspecto, a invenção fornece um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima (por exemplo, Fórmulas I, II-A, III-A e IV-A), ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme definido em qualquer uma das modalidades aqui descritas, para uso no tratamento e/ou tratamento para doenças cardiometabólicas e associadas, incluindo diabetes (T1D e/ou T2DM, incluindo pré-diabetes), T1D idiopática (Tipo 1b), diabetes autoimune latente em adultos (LADA), T2DM de início precoce (EOD), diabetes atípico de início na juventude (YOAD), diabetes do jovem de início na maturidade (MODY), diabetes relacionado à desnutrição, diabetes gestacional, hiperglicemia,
resistência à insulina, resistência à insulina hepática, tolerância à glicose impedida, neuropatia diabética, nefropatia diabética, doença renal (por exemplo, distúrbio renal agudo, disfunção tubular, mudanças pró-inflamatórias nos túbulos proximais), retinopatia diabética, disfunção de adipócito, deposição adiposa visceral, apneia do sono, obesidade (incluindo obesidade hipotalâmica e obesidade monogênica) e comorbidades relacionadas (por exemplo, osteoartrite e incontinência urinária), distúrbios alimentares (incluindo síndrome da compulsão alimentar periódica, bulimia nervosa e obesidade sindrômica, tal como síndromes de Prader-Willi e Bardet-Biedl), ganho de peso de uso de outros agentes (por exemplo, de uso de esteroides e antipsicóticos), desejo excessivo de açúcar, dislipidemia (incluindo hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, colesterol total elevado, colesterol LDL alto e colesterol HDL baixo), hiperinsulinemia, NAFLD (incluindo doenças relacionadas, como esteatose, NASH, fibrose, cirrose e carcinoma hepatocelular), doença cardiovascular, aterosclerose (incluindo doença arterial coronariana), compalcência vascular impedida, insuficiência cardíaca congestiva, infarto do miocárdio (por exemplo, necrose e apoptose), acidente vascular cerebral, acidente vascular cerebral hemorrágico, acidente vascular cerebral isquêmico, lesão cerebral traumática, hipertensão pulmonar, restenose após angioplastia, claudicação intermitente, lipemia pós-prandial, acidose metabólica, cetose, artrite, osteoporose, Doença de Parkinson, hipertrofia ventricular esquerda, doença arterial periférica, degeneração macular, catarata, glomeruloesclerose, insuficiência renal crônica, síndrome metabólica, síndrome X, pré-menstrual síndrome, angina pectoris, trombose, aterosclerose, ataques isquêmicos transientes, restenose vascular, metabolismo da glicose prejudicado, condições de glicose plasmática em jejum prejudicadas, hiperuricemia, gota, disfunção erétila, doenças da pele e do tecido conjuntivo,
psoríase, úlceras nos pés, colite ulcerativa, hiper apo B lipoproteinemia, doença de Alzheimer, esquizofrenia, cognição prejudicada, doença inflamatória do intestino, síndrome do intestino curto, doença de Crohn, colite, síndrome do intestino irritável, prevenção ou tratamento da Síndrome do Ovário Policístico e tratamento da dependência (por exemplo, abuso de álcool e/ou drogas).
[0078] Em certas modalidades, a doença ou o distúrbio é obesidade, distúrbios alimentares, ganho de peso do uso de outros agentes, desejo excessivo de açúcar e dislipidemia.
[0079] Em certas modalidades, a doença ou o distúrbio é obesidade.
[0080] Em certas modalidades, a doença ou o distúrbio é pré- diabetes.
[0081] Em certas modalidades, a doença ou o distúrbio é T2DM.
[0082] Em certas modalidades, a doença ou o distúrbio é NASH.
[0083] Em certas modalidades, a doença ou o distúrbio é NAFLD.
[0084] Em certas modalidades, a doença ou o distúrbio é uma doença cardiovescular, tal como hipertensão.
[0085] Em outro aspecto, a invenção fornece um método para intensificar ou estimular sinalização de cAMP mediada por GLP-1R com recrutamento reduzido de β-arrestina/arrestina-2 compreendendo administrar um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima (por exemplop, Fórmulas I, II -A, III-A e IV-A), ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme definido em qualquer uma das modalidades aqui descritas. Isto é parcialmente baseado na descoberta surpreendente de que os compostos da invenção, embora sendo agonistas completos de sinalização de cAMP mediada porGLP-1R, são agonistas parciais de recrutamento de β-arrestina para GLP-1R ativado, em comparação com o ligando de GLP-1R natural GLP-1, em que o recrutamento máximo de β-arrestina para GLP-1R ativado pelos compostos da invenção é inferior a recrutamento máximo de β-arrestina por GLP-1. Esses agonistas parciais e/ou desviados de GLP-1R para sinalização de cAMP podem fornecer uma atividade de sinalização de cAMP mais sustentada para melhor eficácia e efeitos colaterais reduzidos.
[0086] Assim, o método da invenção pode ser vantajosamente usado para o tratamento de qualquer das doenças ou condições aqui descritas, tal como diabetes tipo II (T2D) e doenças relacionadas.
[0087] Em certas modalidades, o tratamento elicita um benefício glicêmico sem aumento concomitante, ou pelo menos aumento reduzido, em um efeito colateral GI, tal como náusea, vômito ou diarreia. Em certas modalidades, o tratamento tem maior tolerabilidade em comparação com um tratamento de controle que tem recrutamento normal ou intensificado de β-arrestina (tal como recrutamento de β- arrestina por GLP-1).
2. Definições
[0088] O termo "alquila", como aqui utilizado, significa um grupo de hidrocarboneto monovalente de cadeia linear ou ramificada de fórmula -CnH(2n+1). Exemplos não limitativos incluem metila, etila, propila, butila, 2-metil-propila, 1,1-dimetiletila, pentila e hexila.
[0089] O termo "alquileno", como aqui utilizado, significa um grupo de hidrocarboneto de cadeia bivalente linear ou ramificada de fórmula - CnH2n-. Exemplos não limitativos incluem etileno e propileno.
[0090] O termo "cicloalquila", conforme usado neste documento, significa um grupo de hidrocarboneto cíclico contendo pelo menos três átomos de carbono (por exemplo, C3, C4, C5, C6, C7, C8 ou C3-8 ou C3-6). O cicloalquil pode ser (totalmente) saturado ou parcialmente saturada (isto é, não aromático, por exemplo, cicloalquenila ou cicloalquil) e pode conter uma ou mais ligações duplas carbono-carbono.
[0091] Uma cicloalquila totalmente saturada tem a fórmula CnH(2n−1). Exemplos não limitativos incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila e ciclo-hexila.
[0092] O termo "halogênio", tal como aqui utilizado, se refere a fluoreto, cloreto, brometo ou iodeto.
[0093] O termo "heterocicloalquila" ou "heterociclila", tal como aqui utilizado, se refere a um grupo cicloalquila de 3-12 membros (totalmente saturado ou parcialmente saturada, por exemplo, heterocicloalquenil), tal como aqueles definidos acima, nos quais um ou mais (por exemplo, um a quatro) dos átomos de carbono de anel foram substituídos por um grupo selecionado de -O-, -S- ou -N-, em que o nitrogênio pode fornecer um ponto de fixação ou pode ser substituído conforme fornecido em cada modalidade. Onde o nitrogênio fornece um ponto de fixação, um desenho estrutural de um heterocicloalquil teria um hidrogênio no referido nitrogênio.
[0094] Geralmente, o cicloalquila ou o heterocicloalquil/heterociclil pode ser não substituído ou substituído por um ou mais substituintes conforme a valência permitir, em que os substituintes podem ser selecionados independentemente de uma série de grupos, tal como oxo, -CN, halogênio, alquila e alcoxila, opcionalmente, a substituição de alquil pode ser adicionalmente substituída.
[0095] O termo "heteroarila", como aqui utilizado, se refere a um hidrocarboneto aromático monocíclico ou multicíclico no qual pelo menos um dos átomos de carbono de anel (tipicamente 1 a 4, mais tipicamente 1 ou 2) foi substituído por um heteroátomo independentemente selecionado de oxigênio, nitrogênio e enxofre. Como tal, "heteroarila de 5-14 membros" inclui sistemas de anéis monocíclicos, bicíclicos ou tricíclicos. De preferência, o heteroaril é baseado em um C5-8 aril com um ou mais de seus átomos de carbono de anel substituídos pelo heteroátomo. Um grupo heteroaril pode ser fixado através de um átomo de carbono de anel ou, onde a valência permitir, através de um átomo de nitrogênio de anel. Geralmente, o heteroaril pode ser não substituído ou substituído por um ou mais substituintes conforme a valência permitir com os substituintes sendo independentemente selecionados de halogênio, OH, alquila, alcoxila e amino (por exemplo, NH2, NHalquila, N(alquil)2), opcionalmente, a alquila pode ser ainda substituída.
[0096] Certas abreviaturas usadas aqui incluem: Temperatura ambiente: RT; Metanol: MeOH.; Etanol: EtOH; Isopropanol: iPrOH; Acetato de etila: EtOAc; Tetra-hidrofurano: THF; Tolueno: PhCH3; Carbonato de césio: Cs2CO3; Lítio bis(trimetilsilil)amida: LiHMDS; T- butóxido de sódio: NaOtBu; T-butóxido de potássio: KotBu; Di- isopropilamida de lítio: LDA; Trietilamina: Et3N; N,N-di-isopropiletil amina: DIPEA; Carbonato de potássio: K2CO3; Dimetil formamida: DMF; Dimetil acetamida: DMAc; Dimetil sulfóxido: DMSO; N-Metil-2- pirrolidinona: NMP; Hidreto de sódio: NaH; Ácido trifluoroacético: TFA; Anidrido trifluoroacético: TFAA; Anidrido acético: Ac2O; Diclorometano: DCM; 1,2-Dicloroetano: DCE; Ácido clorídrico: HCl; 1,8- Diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno: DBU; Complexo borano-dimetilsulfeto: BH3-DMS; Complexo borano-tetra-hidrofurano: BH3-THF; Hidreto de lítio alumínio: LAH; Ácido acético: AcOH; Acetonitrila: MeCN; Ácido p- toluenossulfônico: pTSA; Dibenzilidina acetona: DBA; 2,2'- Bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftaleno: BINAP; 1,1′-Ferrocenodi-il- bis(difenilfosfina): dppf; 1,3-Bis (difenilfosfino)propano: DPPP; Ácido 3- cloroperbenzoico: m-CPBA; Terc-Butil metil éter: MTBE; Metanossulfonil: Ms; N-Metilpirrolidinona: NMP; Cromatografia de camada fina: TLC; Cromatografia de fluido supercrítico: SFC; 4- (Dimetilamino)piridina: DMAP; Tert-Butiloxicarbonil: Boc; 1- [Bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridínio 3-óxido hexafluorofosfato: HATU; Éter de petróleo: PE; 2-(1H-Benzotriazol-1-
il)-1,1,3,3-tetrametilurônio hexafluorofosfato: HBTU; e 2-amino-2- (hidroximetil)propano-1,3-diol: tris; tris (dibenzilidenoacetona)dipaládio: Pd2(dba)3
[0097] Os espectros de ressonância magnética nuclear 1H (RMN) estavam em todos os casos consistentes com as estruturas propostas. Deslocamentos químicos característicos (δ) são dados em partes por milhão em relação ao sinal de próton residual no solvente deuterado (CHCl3 a 7,27 ppm; CD2HOD a 3,31 ppm; MeCN a 1,94 ppm; DMSO a 2,50 ppm) e são relatados usando abreviações convencionais para designação de picos principais: por exemplo, s, singleto; d, dupleto; t, tripleto; q, quarteto; m, multipleto; br, amplo. Espectros de RMN 1H foram obtidos com intensidades de campo de 400 ou 600 MHz se não declarado.
[0098] Como usado aqui, uma linha ondulada denota um ponto de fixação de um substituinte a outro grupo. Sais Farmaceuticamente Aceitáveis
[0099] Sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima incluem adição de ácido e sais de base.
[00100] Sais de adição de ácido adequados são formados de ácidos que formam sais não tóxicos. Exemplos incluem o acetato, adipato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato/carbonato, bissulfato/sulfato, borato, cansilato, citrato, ciclamato, edisilato, esilato, formato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorofosfato, hibenzato, cloridrato/cloreto, bromidrato/brometo, iodidrato/iodeto, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/hidrogenofosfato/di-hidrogenofosfato, sacarato, estearato, succinato, tanato, tartarato, tosilato, trifluoroacetato, ácido 1,5-nafatalenodissulfônico e sais de xinafoato.
[00101] Sais de base adequados são formados de bases que formam sais não tóxicos. Exemplos incluem o alumínio, arginina, benzatina, cálcio, colina, dietilamina, bis(2-hidroxietil)amina (diolamina), glicina, lisina, magnésio, meglumina, 2-aminoetanol (olamina), potássio, sódio, 2-Amino-2-(hidroximetil) propano-1,3-diol (tris ou trometamina) e sais de zinco.
[00102] Também podem ser formados hemissais de ácidos e bases, por exemplo, sais de hemissulfato e hemicálcio. Para uma revisão sobre sais adequados, ver Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use por Stahl e Wermuth (Wiley-VCH, 2002). Incorporado aqui por referência.
[00103] Sais farmaceuticamente aceitáveis de compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima podem ser preparados por um ou mais de três métodos: (i) reagir o composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima com o ácido ou a base desejada; (ii) remover um grupo de proteção lábila de ácido ou base de um precursor adequado do composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima ou por abertura de anel de um precursor cíclico adequado, por exemplo, uma lactona ou lactama, usando o ácido ou a base desejada; ou (iii) converter um sal do composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima em outro por reação com um ácido ou uma base apropriada ou por meio de uma coluna de troca iônica adequada.
[00104] Todas as três reações são tipicamente realizadas em solução. O sal resultante pode precipitar e ser coletado por filtração ou pode ser recuperado por evaporação do solvente. O grau de ionização no sal resultante pode variar de completamente ionizado a quase não ionizado.
[00105] Os compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima, e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem existir em formas não solvatadas e solvatadas. Solvatos e Hidratos
[00106] termo "solvato" é usado neste documento para descrever um complexo molecular compreendendo o composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e uma ou mais moléculas de solvente farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, etanol.
[00107] O termo "hidrato" é empregado quando o referido solvente é água.
[00108] Um sistema de classificação atualmente aceito para hidratos orgânicos é um que define sítio isolado, canal ou hidratos coordenados de íons metálicos - ver Polymorphism in Pharmaceutical Solids por K.R. Morris (Ed. H.G. Brittain, Marcel Dekker, 1995). Hidratos de sítios isolados são aqueles nos quais as moléculas de água são isoladas de contato direto umas com as outras por moléculas orgânicas intervenientes. Em hidratos de canal, as moléculas de água ficam em canais de rede, onde elas estão próximas a outras moléculas de água. Em hidratos coordenados de íons metálicos, as moléculas de água estão ligadas ao íon de metal.
[00109] Quando o solvente ou a água estão fortemente ligados, o complexo pode ter uma estequiometria bem definida, independente de umidade. Quando, no entanto, o solvente ou a água é fracamente ligado, como em solvatos de canal e compostos higroscópicos, o teor de água/solvente pode ser dependente de umidade e de condições de secagem. Nesses casos, não estequiometria será a norma. Estereoisômeros e Outras Variações
[00110] Os compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima podem exibir um ou mais tipos de isomerismo (por exemplo, isomerismo óptico, geométrico ou tautomérico). Os compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima também podem ser marcados isotopicamente. Tal variação é implícita para os compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima definidas, pois eles são por referência às suas características estruturais e, portanto, dentro do escopo da invenção.
[00111] Compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima contendo um ou mais átomos de carbono assimétricos podem existir como dois ou mais estereoisômeros. Quando um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima contém um grupo alquenila ou alquenileno, isômeros geométricos cis/trans (ou Z/E) são possíveis. Onde os isômeros estruturais são interconvertíveis via uma barreira de baixa energia, pode ocorrer isomerismo tautomérico ("tautomerismo"). Isso pode assumir a forma de tautomerismo de próton em compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima contendo, por exemplo, um grupo imino, ceto ou oxima, ou o chamado tautomerismo de valência em compostos que contêm uma fração aromática. Segue-se que um único composto pode exibir mais de um tipo de isomeria.
[00112] Compostos tendo um ou mais centros quirais podem existir em várias formas estereoisoméricas. Estereoisômeros são compostos que diferem apenas em seu arranjo espacial. Estereoisômeros incluem todas as formas diastereoméricas, enantioméricas e epiméricas, bem como racematos e misturas dos mesmos. O termo "isômero geométrico" se refere a compostos tendo pelo menos uma ligação dupla, em que a(s) ligação(ões) dupla(s) pode(m) existir em formas cis (também referido como syn ou entgegen (E)) ou trans (também referido como anti ou zusammen (Z)), bem como misturas dos mesmos. Quando um composto divulgado é nomeado ou representado pela estrutura sem indicar estereoquímica, entende-se que o nome ou a estrutura abrange um ou mais dos estereoisômeros possíveis, ou isômeros geométricos, ou uma mistura dos estereoisômeros abrangidos ou isômeros geométricos.
[00113] Quando um isômero geométrico é representado por nome ou estrutura, será entendido que o isômero nomeado ou representado existe em um grau maior que outro isômero, isto é, que a pureza isomérica geométrica do isômero geométrico nomeado ou representado é superior a 50%, tal como pelo menos 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ou 99,9% puro em peso. A pureza isomérica geométrica é determinada dividindo o peso do isômero geométrico nomeado ou representado na mistura pelo peso total de todos os isômeros geoméricos na mistura.
[00114] Mistura racêmica significa 50% de um enantiômero e 50% de seu enantiômero correspondente. Quando um composto com um centro quiral é nomeado ou representado sem indicar a estereoquímica do centro quiral, entende-se que o nome ou a estrutura abrange ambas as formas enantioméricas possíveis (por exemplo, ambas enantiomericamente puras, enantiomericamente enriquecidas ou racêmicas) do composto. Quando um composto com dois ou mais centros quirais é nomeado ou representado sem indicar a estereoquímica dos centros quirais, entende-se que o nome ou a estrutura abrange todas as formas diasterioméricas possíveis (por exemplo, diastereomericamente puras, diastereomericamente enriquecidas e misturas equimolares de um ou mais diastereômeros (por exemplo, misturas racêmicas) do composto.
[00115] Misturas enantioméricas e diastereoméricas podem ser resolvidas em seus enantiômeros ou estereoisômeros componentes por métodos bem conhecidos, tal como cromatografia de gás de fase quiral, cromatografia de líquido de alto desempenho de fase quiral, cristalização do composto como um complexo de sal quiral ou cristalização do composto em um solvente quiral. Enantiômeros e diastereômeros também podem ser obtidos de intermediários diastereomericamente ou enantiomericamente puros, reagentes e catalisadores por métodos sintéticos assimétricos bem conhecidos.
[00116] Quando um composto é designado por um nome ou uma estrutura que indica um único enantiômero, a menos que indicado de outro modo, o composto é pelo menos 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ou 99,9% opticamente puro (também referido como "enantiomericamente puro"). Pureza óptica é o peso na mistura do enantiômero nomeado ou representado dividido pelo peso total na mistura de ambos os enantiômeros.
[00117] Quando a estereoquímica de um composto divulgado é nomeada ou representada pela estrutura, e a estrutura nomeada ou representada abrange mais de um estereoisômero (por exemplo, como em um par diastereomérico), será entendido que um dos estereoisômeros abrangidos ou qualquer mistura dos estereoisômeros englobados estão incluídos. Será ainda entendido que a pureza estereoisomérica dos estereoisômeros nomeados ou representados é de pelo menos 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ou 99,9% em peso. A pureza estereoisomérica, neste caso, é determinada dividindo o peso total na mistura dos estereoisômeros abrangidos pelo nome ou pela estrutura pelo peso total na mistura de todos os estereoisômeros.
[00118] Os sais farmaceuticamente aceitáveis de compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima também podem conter um contraíon que é opticamente ativo (por exemplo, d-lactato ou l-lisina) ou racêmico (por exemplo, dl-tartarato ou dl-arginina).
[00119] Isômeros cis/trans podem ser separados por técnicas convencionais bem conhecidas dos versados na técnica, por exemplo, cromatografia e cristalização fracionada.
[00120] Técnicas convencionais para a preparação/o isolamento de enantiômeros individuais incluem síntese quiral de um precursor opticamente puro adequado ou resolução do racemato (ou o racemato de um sal ou derivado) usando, por exemplo, cromatografia de líquido de alta pressão quiral (HPLC). Alternativamente, o racemato (ou um precursor racêmico) pode ser reagido com um composto opticamente ativo adequado, por exemplo, um álcool, ou, no caso onde o composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima contém uma fração acídica ou básica, um base ou um ácido, tal como 1-feniletilamina ou ácido tartárico. A mistura diastereomérica resultante pode ser separada por cromatografia e/ou cristalização fracionada e um ou ambos os diastereoisômeros convertidos para o(s) enantiômero(s) puro(s) correspondente(s) por meios bem conhecidos por um especialista. Compostos quirais de qualquer uma das fórmulas descritas acima (e precursores quirais dos mesmos) podem ser obtidos em forma enantiomericamente enriquecida usando cromatografia, tipicamente HPLC, em uma resina assimétrica com uma fase móvel consistindo em um hidrocarboneto, tipicamente heptano ou hexano, contendo de 0 a 50% em volume de isopropanol, tipicamente de 2% a 20%, e de 0 a 5% em volume de uma alquilamina, tipicamente 0,1% de dietilamina. A concentração do eluato proporciona a mistura enriquecida. Cromatografia quiral usando fluidos sub e supercríticos pode ser empregada. Métodos para cromatografia quiral úteis em algumas modalidades da presente invenção são conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Smith, Roger M., Loughborough University, Loughborough, UK; Chromatographic Science Series (1998), 75 (Supercritical Fluid Chromatography with Packed Columns), pp. 223-249 e referências citadas no mesmo). Colunas podem ser obtidas de Chiral Technologies, Inc, West Chester, Pa., EUA, uma subsidiária de Daicel® Chemical Industries, Ltd., Tóquio, Japão.
[00121] Deve ser enfatizado que os compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima foram desenhados aqui em uma única forma tautomérica, todas as formas tautoméricas possíveis estão incluídas dentro do escopo da invenção.
[00122] A presente invenção também inclui todos os compostos marcados isotopicamente farmaceuticamente aceitáveis de qualquer uma das fórmulas descritas acima, em que um ou mais átomos são substituídos por átomos tendo o mesmo número atômico, mas uma massa atômica ou um número de massa diferente da massa atômica ou número de massa que predomina na natureza.
[00123] Exemplos de isótopos adequados para inclusão nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, tal como 2H e 3 11 13 14 36 H, carbono, tal como C, C e C, cloro, tal como Cl, flúor, tal 18 123 125 13 15 como F, iodo, tal como I e I, nitrogênio, tal como N e N, 15 17 18 32 oxigênio, tal como O, Oe O, fósforo, tal como P e enxofre, tal como 35S.
[00124] Certos compostos marcados isotopicamente de qualquer uma das fórmulas descritas acima, por exemplo, aqueles incorporando um isótopo radioativo, são úteis em estudos de distribuição de droga e/ou tecido de substrato. Os isótopos radioativos trítio, isto é, 3H, e 14 carbono-14, isto é, C, são particularmente úteis para esse propósito em vista de sua facilidade de incorporação e pronto meio de detecção.
[00125] Substituição por isótopos mais pesados, tal como deutério, isto é, 2H, pode proporcionar certas vantagens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, por exemplo, meia-vida in vivo elevada ou requisitos de dosagem reduzida.
[00126] Substituição por isótopos emissores de pósitrons, tal como 11 18 15 13 C, F, O e N, pode ser útila em estudos de Topografia de Emissão de Pósitrons (PET) para examinar ocupância do receptor de substrato.
[00127] Compostos marcados isotopicamente de qualquer uma das fórmulas descritas acima podem geralmente ser preparados por técnicas convencionais conhecidas pelos versados na técnica ou por processos análogos àqueles descritos nos Exemplos e nas Preparações em anexo usando um reagente marcado isotopicamente apropriado no lugar do reagente não marcado previamente empregado.
[00128] Solvatos farmaceuticamente aceiteis de acordo com a invenção incluem aqueles em que o solvente de cristalização pode ser isotopicamente substituído, por exemplo, D2O, d6-acetona, d6-DMSO. Pró-drogas
[00129] Uma forma de realizar a invenção é administrar um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima na forma de uma pró-droga. Assim, certos derivados de um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima, que podem ter pouca ou nenhuma atividade farmacológica, podem, quando administrados no ou sobre o corpo, ser convertidos em um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima tendo a atividade desejada, por exemplo, por clivagem hidrolítica, particularmente clivagem hidrolítica, promovida por uma enzima esterase ou peptidase. Esses derivados são referidos como "pró-drogas". Mais informações sobre o uso de pró-drogas podem ser encontradas em Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, ACS Symposium Series (T. Higuchi e W. Stella) e Bioreversible Carriers in Drug Design, Pergamon Press, 1987 (Ed. E.B. Roche, American Pharmaceutical Association). Também pode ser feita referência a Nature Reviews/Drug Discovery, 7: 355, 2008, e Current Opinion in Drug Discovery and Development, 10: 550, 2007.
[00130] Pró-drogas de acordo com a invenção podem, por exemplo, ser produzidas substituindo funcionalidades apropriadas presentes nos compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima por certas frações conhecidas pelos versados na técnica como "pró-frações"
conforme descrito, por exemplo, em Design of Prodrugs de H. Bundgaard (Elsevier, 1985) e Y.M. Choi-Sledeski e C.G. Wermuth, Designing Prodrugs and Bioprecursors in Practice of Medicinal Chemistry, (Quarta Edição), Capítulo 28, 657-696 (Elsevier, 2015).
[00131] Assim, uma pró-droga de acordo com a invenção é (a) um derivado de éster ou amida de um ácido carboxílico num composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima; (b) um éster, carbonato, carbamato, fosfato ou derivado de éter de um grupo hidroxila em um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima; (c) uma amida, imina, carbamato ou derivado de amina de um grupo amino em uma forma composta de qualquer uma das fórmulas descritas acima; (d) um derivado de oxima ou imina de um grupo carbonila em um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima; ou (e) um grupo metila, álcool primário ou aldeído que pode ser oxidado metabolicamente a um ácido carboxílico em um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima.
[00132] Alguns exemplos específicos de pró-drogas de acordo com a invenção incluem: (i) onde o composto de qualquer uma das fórmulas des- critas acima contém uma funcionalidade de ácido carboxílico (-COOH), um éster do mesmo, tal como um composto em que hidrogênio da funcionalidade de ácido carboxílico do composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima é substituído por C1-C8 alquil (por exemplo, etil) ou (C1-C8 alquil)C(=O)OCH2- (por exemplo, tBuC(=O)OCH2-); (ii) onde o composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima contém uma funcionalidade álcool (-OH), um éster da mesma, tal como um composto em que o hidrogênio da funcionalidade álcool do composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima é substituído por -CO(C1-C8 alquil) (por exemplo, metilcarbonil) ou o álcool é esterifícado com um aminoácido;
(iii) onde o composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima contém uma funcionalidade álcool (-OH), um éter da mesma, tal como um composto em que o hidrogênio da funcionalidade álcool do composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima é substituído por (C1-C8 alquil)C(=O)OCH2 - ou -CH2OP(=O)(OH)2; (iv) onde o composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima contém uma funcionalidade álcool (-OH), um fosfato da mesma, tal como um composto em que o hidrogênio da funcionalidade álcool do composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima é substituído por -P(=O)(OH)2 ou -P(=O)(ONa)2 ou -P(=O)(O−)2Ca2+; (v) onde o composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima contém uma funcionalidade amino primária ou secundária (-NH2 ou -NHR onde R≠H), uma amida da mesma, por exemplo, um composto em que, conforme o caso possa ser, um ou ambos os hidrogênios da funcionalidade amino do composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima é/são substituídos por (C1- C10)alcanoila, -COCH2NH2 ou o grupo amino é derivatizado com um aminoácido; (vi) onde o composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima contém uma funcionalidade amino primária ou secundária (-NH2 ou -NHR onde R≠H), uma amina da mesma, por exemplo, um composto em que, conforme o caso possa ser, um ou ambos os hidrogênios da funcionalidade amino do composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima é/são substituídos por -CH2OP(=O)(OH)2; (vii) em que o grupo ácido carboxílico dentro de composto de qualquer uma das fórmulas acima descritas é substituído por um grupo metila, um grupo -CH2OH ou um grupo aldeído.
[00133] Certos compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima podem eles próprios agir como pró-drogas de outros compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima. Também é possível que dois compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima sejam unidos na forma de uma pró-droga. Em certas circunstâncias, uma pró-droga de um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima pode ser criado ligando internamente dois grupos funcionais em um composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima, por exemplo, formando uma lactona.
[00134] Referências a compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima incluem os próprios compostos e as pró-drogas dos mesmos. A invenção inclui tais compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima, bem como sais farmaceuticamente aceitáveis de tais compostos e solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos e sais.
3. Administração e Dosagem
[00135] Tipicamente, um composto da invenção é administrado em uma quantidade eficaz para tratar uma condição como aqui descrito. Os compostos da invenção podem ser administrados como composto per se, ou alternativamente, como um sal farmaceuticamente aceitável. Para fins de administração e dosagem, o composto per se ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo serão simplesmente referidos como os compostos da invenção.
[00136] Os compostos da invenção são administrados por qualquer rota adequada na forma de uma composição farmacêutica adaptada a essa rota e em uma dose eficaz para o tratamento pretendido. Os compostos da invenção podem ser administrados oralmente, retalmente, vaginalmente, parenteralmente ou topicamente.
[00137] Os compostos da invenção podem ser administrados oralmente. Administração oral pode envolver engolir, de modo que o composto entre no trato gastrointestinal, ou administração bucal ou sublingual pode ser empregada pela qual o composto entra na corrente sanguínea diretamente da boca.
[00138] Em outra modalidade, os compostos da invenção também podem ser administrados diretamente na corrente sanguínea, no músculo ou em um órgão interno. Meios adequados para administração parenteral incluem intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intrauretral, intraesternal, intracraniana, intramuscular e subcutânea. Dispositivos adequados para administração parenteral incluem injetores de agulha (incluindo microagulha), injetores sem agulha e técnicas de infusão.
[00139] Em outra modalidade, os compostos da invenção também podem ser administrados topicamente na pele ou mucosa, isto é, dermicamente ou transdermicamente. Em outra modalidade, os compostos da invenção também podem ser administrados intranasalmente ou por inalação. Em outra modalidade, os compostos da invenção podem ser administrados retalmente ou vaginalmente. Em outra modalidade, os compostos da invenção também podem ser administrados diretamente no olho ou ouvido.
[00140] O regime de dosagem para os compostos da invenção e/ou composições contendo os referidos compostos é baseado em uma variedade de fatores, incluindo o tipo, a idade, o peso, o sexo e a condição médica do paciente; a severidade da condição; a rota de administração; e a atividade do composto particular empregado. Assim, o regime de dosagem pode variar amplamente. Em uma modalidade, a dose diária total de um composto da invenção é tipicamente de cerca de 0,001 a cerca de 100 mg/kg (isto é, mg de composto da invenção por kg de peso corporal) para o tratamento das condições indicadas aqui discutidas. Em outra modalidade, a dose diária total do composto da invenção é de cerca de 0,01 a cerca de 30 mg/kg, e em outra modalidade, de cerca de 0,03 a cerca de 10 mg/kg e em ainda outra modalidade, de cerca de 0,1 a cerca de 3 mg/kg. Não é incomum que a administração dos compostos da invenção seja repetida uma pluralidade de vezes ao dia (tipicamente não mais que 4 vezes). Doses múltiplas por dia tipicamente podem ser usadas para aumentar a dose diária total, se desejado. Em certas modalidades, o paciente é um humano, tal como um humano com uma das indicações de doença ou distúrbios tratáveis descritos em outro lugar neste documento.
[00141] Para administração oral, as composições podem ser fornecidas na forma de comprimidos contendo 0,1, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0, 25,0, 30,0 50,0, 75,0, 100, 125, 150, 175, 200, 250 e 500 miligramas do ingrediente ativo para ajuste sintomático da dosagem ao paciente. Um medicamento contém tipicamente de cerca de 0,01 mg a cerca de 500 mg do ingrediente ativo, ou em outra modalidade, de cerca de 1 mg a cerca de 100 mg de ingrediente ativo. Intravenosamente, doses podem variar de cerca de 0,01 a cerca de 10 mg/kg/minuto durante uma infusão de taxa constante.
[00142] Indivíduos ou pacientes adequados de acordo com a invenção incluem indivíduos mamíferos, incluindo mamíferos humanos ou não humanos, tal como primatas, roedores (camundongos, ratos, hamsters, coelhos, etc.). Em uma modalidade, humanos são indivíduos adequados. Indivíduos humanos podem ser de qualquer gênero e em qualquer estágio de desenvolvimento. Em certas modalidades, o humano é uma criança com menos de 18 anos de idade, 15 anos de idade ou cerca de 14 anos de idade, 12 anos de idade, 10 anos de idade ou menos de 5 anos de idade.
4. Composições Farmacêuticas
[00143] Em outra modalidade, a invenção compreende composições farmacêuticas. Essas composições farmacêuticas compreendem um composto da invenção apresentado com um transportador farmaceuticamente aceitável. Outras substâncias farmacologicamente ativas também podem estar presentes.
[00144] Como aqui utilizado, "transportador farmaceuticamente aceitável" inclui todos e quaisquer solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos e de retardamento de absorção e semelhantes que são fisiologicamente compatíveis. Exemplos de transportadores farmaceuticamente aceitáveis incluem um ou mais de água, salina, salina tamponada com fosfato, dextrose, glicerol, etanol e semelhantes, bem como combinações dos mesmos, e podem incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, cloreto de sódio ou poliálcoois, tal como manitol ou sorbitol na composição. Substâncias farmaceuticamente aceitáveis, tal como agentes umectantes ou pequenas quantidades de substâncias auxiliares, tal como agentes umectantes ou emulsificantes, conservantes ou tampões, que intensificam a vida útila ou a eficácia do anticorpo ou da porção de anticorpo.
[00145] As composições desta invenção podem estar em uma variedade de formas. Essas incluem, por exemplo, formas de dosagem líquidas, semissólidas e sólidas, tal como soluções líquidas (por exemplo, soluções injetáveis e infusíveis), dispersões ou suspensões, comprimidos, pílulas, pós, lipossomas e supositórios. A forma depende do modo de administração pretendido e da aplicação terapêutica.
[00146] Composições típicas estão na forma de soluções injetáveis ou infusíveis, tal como composições semelhantes àquelas usadas para imunização passiva de humanos com anticorpos em geral. Um modo de administração é parenteral (por exemplo, intravenoso, subcutâneo, intraperitoneal, intramuscular). Em outra modalidade, o anticorpo é administrado por infusão intravenosa ou injeção. Em ainda outra modalidade, o anticorpo é administrado por injeção intramuscular ou subcutânea.
[00147] Administração oral de uma forma de dose sólida pode ser, por exemplo, apresentada em unidades discretas, tal como cápsulas duras ou moles, pílulas, hóstias, lozangos, ou comprimidos, cada uma contendo uma quantidade predeterminada de pelo menos um composto da invenção. Em outra modalidade, a administração oral pode estar em uma forma de pó ou grânulo. Em outra modalidade, a forma de dose oral é sublingual, tal como, por exemplo, um lozango. Nessas formas de dosagem sólidas, os compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima são ordinariamente combinados com um ou mais adjuvantes. Tais cápsulas ou comprimidos podem conter uma formulação de liberação controlada. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, as formas de dosagem também podem compreender agentes tamponantes ou podem ser preparadas com revestimentos entéricos.
[00148] Em outra modalidade, administração oral pode estar em uma forma de dose líquida. Formas de dosagem líquidas para administração oral incluem, por exemplo, emulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis contendo diluentes inertes comumente usados na técnica (por exemplo, água). Essas composições também podem compreender adjuvantes, tal como agentes umectantes, emulsionantes, suspensores, aromatizantes (por exemplo, adoçantes) e/ou agentes perfumantes.
[00149] Em outra modalidade, a invenção compreende uma forma de dose parenteral.
[00150] "Administração parenteral" inclui, por exemplo, injeções subcutâneas, injeções intravenosas, intraperitonealmente, injeções intramusculares, injeções intraesternais e infusão. Preparações injetáveis (isto é, suspensões aquosas ou oleaginosas injetáveis estéreis) podem ser formuladas de acordo com a técnica conhecida usando dispersan- tes, agentes umectantes e/ou agentes de suspensão adequados.
[00151] Em outra modalidade, a invenção compreende uma forma de dose tópica.
[00152] "Administração tópica" inclui, por exemplo, administração transdérmica, tal como via emplastros transdérmicos ou dispositivos de iontoforese, administração intraocular ou administração intranasal ou por inalação. Composições para administração tópica também incluem, por exemplo, géis tópicos, sprays, unguentos e cremes. Uma formulação tópica pode incluir um composto o qual intensifica absorção ou penetração do ingrediente ativo através da pele ou de outras áreas afetadas. Quando os compostos dessa invenção são administrados por um dispositivo transdérmico, a administração será realizada usando um emplastro de qualquer do tipo de reservatório e membrana porosa ou de uma variedade de matrizes sólida.s Formulações típicas para essa finalidade incluem géis, hidrogéis, loções, soluções, cremes, unguentos, pós para polvilhar, curativos, espumas, filmes, emplastros de pele, wafers, implantes, esponjas, fibras, bandagens e microemulsões. Lipossomas também podem ser usados. Transportadores típicos incluem álcool, água, óleo mineral, vaselina líquida, vaselina branca, glicerina, polietileno glicol e propileno glicol. Podem ser incorporados intensificadores de penetração - ver, por exemplo, Finnin e Morgan, J. Pharm. Sci., 88:955-958, 1999.
[00153] Formulações adequadas para administração tópica ao olho incluem, por exemplo, colírios em que o composto desta invenção é dissolvido ou suspenso em um transportador adequado. Uma formula- ção típica adequada para administração ocular ou aural pode estar na forma de gotas de uma suspensão micronizada ou solução em salina isotônica, ajustada em pH, estéril. Outras formulações adequadas para administração ocular e aural incluem unguentos, implantes biodegra- dáveis (isto é, esponjas de gel absorvíveis, colágeno) e não biodegra- dáveis (isto é, silicone), wafers, lentes e sistemas particulados ou vesiculares, tal como niossomas ou lipossomas. Um polímero, tal como ácido poliacrílico reticulado, álcool polivinílico, ácido hialurônico, um polímero celulósico, por exemplo, hidroxipropilmetilcelulose, hidroxietilcelulose ou metilcelulose, ou um polímero de heteropolissa- carídeo, por exemplo, goma de gelana, pode ser incorporado junto com um conservante, tal como cloreto de benzalcônio. Essas formulações também podem ser distribuídas por iontoforese.
[00154] Para administração intranasal ou administração por inalação, os compostos da invenção são convenientemente distribuídos na forma de uma solução ou suspensão de um recipiente de spray de bomba que é espremido ou bombeado pelo paciente ou como uma apresentação de spray de aerossol de um recipiente pressurizado ou um nebulizador, com o uso de um propelente adequado. Formulações adequadas para administração intranasal são tipicamente administradas na forma de um pó seco (seja sozinho, como uma mistura, por exemplo, em uma mistura seca com lactose, ou como uma partícula de componente misto, por exemplo, misturada com fosfolipídeos, tal como fosfatidilcolina) de um inalador de pó seco ou como um spray aerossol de um recipiente pressurizado, bomba, spray, atomizador (de preferência um atomizador usando eletro- hidrodinâmica para produzir uma névoa fina) ou nebulizador, com ou sem o uso de um propelente adequado, tal como 1,1,1,2- tetrafluoroetano ou 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano. Para uso intranasal, o pó pode compreender um agente bioadesivo, por exemplo, quitosana ou ciclodextrina.
[00155] Em outra modalidade, a invenção compreende uma forma de dose retal. Essa forma de dose retal pode estar na forma de, por exemplo, um supositório. Manteiga de cacau é uma base de supositório tradicional, mas várias alternativas podem ser usadas conforme apropriado.
[00156] Outros materiais transportadores e modos de administração conhecidos na técnica farmacêutica também podem ser usados. Composições farmacêuticas da invenção podem ser preparadas por qualquer das técnicas bem conhecidas de farmácia, tal como formulação eficaz e procedimentos de administração.
[00157] As considerações acima em relação a formulações e procedimentos de administração eficazes são bem conhecidas na técnica e são descritas em livros texto padrão. Formulação de drogas é discutida, por exemplo, em Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1975; Liberman et al., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; e Kibbe et al., Eds., Handbook of Pharmaceutical Excipients (3a Ed.), American Pharmaceutical Association, Washington, 1999.
5. Coadministração
[00158] Os compostos da invenção podem ser usados sozinhos ou em combinação com outros agentes terapêuticos. A invenção fornece qualquer dos usos, métodos ou composições conforme definido neste documento, em que o composto de qualquer modalidade de qualquer uma das fórmulas descritas acima neste documento, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou solvato farmaceuticamente aceitável do referido composto ou sal, é usado em combinação com um ou mais outros agentes terapêuticos aqui discutidos.
[00159] A administração de dois ou mais compostos "em combinação" significa que todos os compostos são administrados perto o suficiente no tempo que cada um pode gerar um efeito biológico no mesmo período de tempo. A presença de um agente pode alterar os efeitos biológicos do(s) outro(s) composto(s). Os dois ou mais compostos podem ser administrados simultaneamente, concorrentemente ou sequencialmente. Adicionalmente, a administração simultânea pode ser realizada misturando os compostos antes da administração ou administrando os compostos no mesmo ponto no tempo, mas como formas de dose separadas no mesmo sítio ou em diferentes sítios de administração.
[00160] As frases "administração simultânea", "coadministração", "administração simultânea" e "administrado simultaneamente" significam que os compostos são administrados em combinação.
[00161] Em outra modalidade, a invenção fornece métodos de tratamento que incluem administrar compostos da presente invenção em combinação com um ou mais outros agentes farmacêuticos, em que os um ou mais outros agentes farmacêuticos podem ser selecionados dos agentes aqui discutidos.
[00162] Em uma modalidade, os compostos desta invenção são administrados com um agente antidiabético incluindo, mas não se limitando a, uma biguanida (por exemplo, metformina), uma sulfonilureia (por exemplo, tolbutamida, glibenclamida, gliclazida, clorpropamida, tolazamida, aceto-hexamida, glicopiramida, glimepirida ou glipizida), uma tiazolidinodiona (por exemplo, pioglitazona, rosiglitazona ou lobeglitazona), uma glitazar (por exemplo, saroglitazar, aleglitazar, muraglitazar ou tesaglitazar), meglitinida (por exemplo, nateglinida, repaglinida), um inibidor da dipeptidil peptidase 4 (DPP-4) (por exemplo, sitagliptina, vildagliptina, saxagliptina, linagliptina, gemigliptina, anagliptina, teneligliptina, alogliptina, trelagliptina, dutogliptina ou omarigliptina), uma glitazona (por exemplo, pioglitazona, rosiglitazona, balaglitazona, rivoglitazona ou lobeglitazona), um inibidor do transportador ligado a sódio-glicose 2 (SGLT2) (por exemplo, empagliflozina, canagliflozina, dapagliflozina, ipragliflozina, Ipragliflozina, tofogliflozina, sergliflozina etabonato, remogliflozina etabonato ou ertugliflozina), um inibidor da SGLTL1, um agonista de GPR40 (agonista de FFAR1/FFA1, por exemplo fasiglifam), peptídeo insulinotrópico dependente de glicose (GIP) e análogos dos mesmos, um inibidor da alfa glucosidase (por exemplo, voglibose, acarbose, ou miglitol), ou uma insulina ou um análogo da insulina, incluindo os sais farmaceuticamente aceitáveis dos agentes especificamente nomeados e os solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos referidos agentes e sais.
[00163] Em outra modalidade, os compostos desta invenção são administrados com um agente antiobesidade incluindo, mas não se limitando a, peptídeo YY ou um análogo do mesmo, um agonista do receptor de neuropeptídeo Y tipo 2 (NPYR2), um antagonista de NPYR1 ou NPYR5, um antagonista do receptor de canabinoide tipo 1 (CB1R), um inibidor da lipase (por exemplo, orlistat), um peptídeo proislet humano (HIP), um agonista do receptor da melanocortina 4 (por exemplo, setmelanotida), um antagonista do receptor do hormônio de concentração de melanina 1, um agonista do receptor farnesoide X (FXR) (por exemplo, ácido obeticólico), zonisamida, fentermina (sozinha ou em combinação com topiramato), um inibidor de recaptação de norepinefrina/dopamina (por exemplo, buproprion), um antagonista do receptor de opioide (por exemplo, naltrexona), uma combinação de inibidor de recaptação de norepinefrina/dopamina e antagonista do receptor de opioide (por exemplo, uma combinação de bupropiona e naltrexona), um análogo de GDF-15, sibutramina, um agonista de colecistoquinina, amilina e análogos da mesma (por exemplo, pranlintida), leptina e análogos da mesma (por exemplo, metroleptina), um agente serotonérgico (por exemplo, lorcaserina), um inibidor da metionina aminopeptidase 2 (MetAP2) (por exemplo, beloranibe ou ZGN-1061), fendimetrazina, dietilpropiona, benzfetamina, um inibidor de SGLT2 (por exemplo, empagliflozina, canagliflozina, dapagliflozina, ipragliflozina, Ipragliflozina, tofogliflozina, sergliflozina etabonato, remogliflozina etabonato ou ertugliflozina), um inibidor da SGLTL1, um inibidor duplo da SGLT2/SGLT1, um modulador do receptor de fator de crescimento de fibroblastos (FGFR), um ativador da proteína cinase ativado por AMP (AMPK), biotina, um modulador do receptor de MASK, ou um agonista do receptor de glucagon (sozinho ou em combinação com outro agonista de GLP-1R, por exemplo, liraglutida, exenatida, dulaglutida, albiglutida, lixisenatida ou semaglutida), incluindo os sais farmaceuticamente aceitáveis dos agentes especificamente nomeados e os solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos referidos agentes e sais.
[00164] Em outra modalidade, os compostos desta invenção são administrados com um agente para tratar NASH incluindo, mas não se limitando a, PF-05221304, um agonista de FXR (por exemplo, ácido obeticolico), um agonista PPAR α/δ (por exemplo, elafibranor), um conjugado de ácido graxo-ácido biliar sintético (por exemplo, arancol), um inibidor da caspase (por exemplo, enricasan), um anticorpo monoclonal anti-lisil oxidase homólogo 2 (LOXL2) (por exemplo, sintuzumabe), um inibidor de galectina 3 (por exemplo, GR-MD- 02), um inibidor da MAPK5 (por exemplo, GS-4997), um antagonista duplo do receptor de quimiocina 2 (CCR2) e CCR5 (por exemplo, cenicriviroc), um agonista do fator de crescimento de fibroblastos 21 (FGF21) (por exemplo, BMS-986036), um antagonista do receptor de leucotrieno D4 (LTD4) (por exemplo, tipelucaste), um análogo da niacina (por exemplo, ARI 3037MO), um inibidor de ASBT (por exemplo, volixibat), um inibidor da acetil-CoA carboxilase (ACC) (por exemplo, NDI 010976), um inibidor da ceto-hexocinase (KHK), um inibidor da diacilgliceril aciltransferase 2 (DGAT2), um antagonista do receptor CB1, um anticorpo anti-CB1R ou um inibidor da cinase reguladora de sinal de apoptose 1 (ASK1), incluindo os sais farmaceuticamente aceitáveis dos agentes especificamente nomeados e os solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos referidos agentes e sais.
[00165] Esses agentes e compostos da invenção podem ser combinados com veículos farmaceuticamente aceitáveis, tal como salina, solução de Ringer, solução de dextrose e semelhantes. O regime de dosagem particular, isto é, dose, temporização e repetição, dependerá do indivíduo particular e do histórico médico desse indivíduo.
[00166] Transportadores, excipientes ou estabilizadores aceitáveis são não tóxicos para os destinatários nas dosagens e concentrações empregadas e podem compreender tampões, tal como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; sais, tal como cloreto de sódio; antioxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (tal como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio; fenol, álcool butílico ou benzílico; alquil parabenos, tal como metila ou propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); proteínas, tal como albumina sérica, gelatina ou Igs; polímeros hidrofílicos, tal como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tal como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes, tal como EDTA; açúcares, tal como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contraíon formadores de sal, tal como sódio; complexos de metal (por exemplo, complexos de Zn-proteína); e/ou surfactantes não iônicos, tal como TWEEN™, PLURONICS™ ou polietileno glicol (PEG). Lipossomas contendo estes agentes e/ou compostos da invenção são preparados por métodos conhecidos na técnica, tal como descritos nas Patentes US 4.485.045 e 4.544.545. Lipossomas com tempo de circulação intensificado são divulgados na Patente US 5.013.556. Lipossomas particularmente úteis podem ser gerados pelo método de evaporação de fase reversa com uma composição lipídica compreendendo fosfatidilcolina, colesterol e fosfatidiletanolamina derivatizada com PEG (PEG-PE). Lipossomas são extrusados através de filtros de tamanho de poro definido para produzir lipossomas com o diâmetro desejado.
[00167] Esses agentes e/ou os compostos da invenção também podem ser aprisionados em microcápsulas preparadas, por exemplo, por técnicas de coacervação ou por polimerização interfacial, por exemplo, hidroximetilcelulose ou microcápsulas de gelatina e microcápsulas de poli-(metilmetacrilato), respectivamente, em sistemas de distribuição de droga coloidal (por exemplo, lipossomas, microesferas de albumina, microemulsões, nanopartículas e nanocápsulas) ou em macroemulsões. Tais técnicas são divulgadas em Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20a Ed., Mack Publishing (2000).
[00168] Podem ser utilizadas preparações de liberação sustentada. Exemplos adequados de preparações de liberação sustentada incluem matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos contendo o composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima, cujas matrizes estão na forma de artigos moldados, por exemplo, filmes ou microcápsulas. Exemplos de matrizes de liberação sustentada incluem poliésteres, hidrogéis (por exemplo, poli(2-hidroxietil-metacrilato) ou 'poli(álcool vinílico)), polilactidas (Patente US 3.773.919), copolímeros de ácido L-glutâmico e 7 etil-L-glutamato, acetato de etileno-vinil não degradável, copolímeros degradáveis de ácido lático-ácido glicólico, tal como aqueles usados em LUPRON DEPOT™ (microesferas injetáveis compostas de copolímero de ácido lático-ácido glicólico e acetato de leuprolida), acetato de sacarose isobutirato e ácido -D-(-)-3- hidroxibutírico.
[00169] As formulações a serem utilizadas para administração intravenosa devem ser estéreis. Isso é facilmente realizado, por exemplo, por filtração através de membranas de filtração estéreis. Compostos da invenção são geralmente colocados em um recipiente tendo um orifício de acesso estéril, por exemplo, um saco ou frasco de solução intravenosa tendo uma rolha perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica.
[00170] Emulsões adequadas podem ser preparadas usando emulsões de gordura comercialmente disponíveis, tal como Intralipid™, Liposyn™, Infonutrol™, Lipofundin™ e Lipiphysan™. O ingrediente ativo pode ser ou dissolvido em uma composição de emulsão pré-misturada ou, alternativamente, ele pode ser dissolvido em um óleo (por exemplo, óleo de soja, óleo de cártamo, óleo de semente de algodão, óleo de gergelim, óleo de milho ou óleo de amêndoa) e uma emulsão formada mediante mistura com um fosfolipídio (por exemplo, fosfolipídios de ovo, fosfolipídios de soja ou lecitina de soja) e água. Será apreciado que outros ingredientes podem ser adicionados, por exemplo, glicerol ou glicose, para ajustar a tonicidade da emulsão. Emulsões adequadas conterão tipicamente até 20% de óleo, por exemplo, entre 5 e 20%. A emulsão de gordura pode compreender gotículas de gordura entre 0,1 e 1,0 μm, particularmente 0,1 e 0,5 μm, e ter um pH na faixa de 5,5 a 8,0.
[00171] As composições de emulsão podem ser aquelas preparadas misturando um composto da invenção com Intralipid™ ou os componentes do mesmo (óleo de soja, fosfolipídios de ovo, glicerol e água).
[00172] Composições para inalação ou insuflação incluem soluções e suspensões em solventes aquosos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis, ou misturas dos mesmos e pós. As composições líquidas ou sólidas podem conter excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados conforme estabelecido acima. Em algumas modalidades, as composições são administradas pela rota respiratória oral ou nasal para efeito local ou sistêmico. Composições em solventes farmaceuticamente aceitáveis preferencialmente estéreis podem ser nebulizadas pelo uso de gases. Soluções nebulizadas podem ser respiradas diretamente do dispositivo de nebulização ou o dispositivo de nebulização pode ser fixado a uma máscara facial, tenda ou máquina de respiração de pressão positiva intermitente. Composições em solução, suspensão ou pó podem ser administradas, de preferência oralmente ou nasalmente, de dispositivos que administram a formulação de uma maneira apropriada.
6. Kits
[00173] Outro aspecto da invenção fornece kits compreendendo o composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima ou composições farmacêuticas compreendendo o composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima da invenção. Um kit pode incluir, além do composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima, da invenção ou composição farmacêutica das mesmas, agentes de diagnóstico ou terapêuticos. Um kit também pode incluir instruções para uso em um método diagnóstico ou terapêutico. Em algumas modalidades, o kit inclui o composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima, ou uma composição farmacêutica das mesmas e um agente de diagnóstico. Em outras modalidades, o kit inclui o composto de qualquer uma das fórmulas descritas acima, ou uma composição farmacêutica das mesmas.
[00174] Em ainda outra modalidade, a invenção compreende kits que são adequados para uso na realização dos métodos de tratamento aqui descritos. Em uma modalidade, o kit contém uma primeira forma de dosagem compreendendo um ou mais dos compostos da invenção em quantidades suficientes para realizar os métodos da invenção. Em outra modalidade, o kit compreende um ou mais compostos da invenção em quantidades suficientes para realizar os métodos da invenção e um recipiente para a dosagem e um recipiente para a dosagem.
7. Preparação
[00175] Os compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima podem ser preparados pelos métodos gerais e específicos descritos abaixo, usando o conhecimento geral comum de um especialista na técnica de química orgânica sintética. Esse conhecimento geral comum pode ser encontrado em livros de referência padrão, tal como Comprehensive Organic Chemistry, Ed. Barton and Ollis, Elsevier; Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations, Larock, John Wiley and Sons; e Compendium of Organic Synthetic Methods, Vol. I-XII (publicado por Wiley-Interscience). Os materiais de partida usados aqui estão disponíveis comercialmente ou podem ser preparados por métodos de rotina conhecidos na técnica.
[00176] Na preparação dos compostos de qualquer uma das fórmulas descritas acima, é notado que alguns dos métodos de preparação aqui descritos podem exigir proteção de funcionalidade remota (por exemplo, amina primária, amina secundária, carboxila em qualquer uma das fórmulas descritas acima precursores). A necessidade de tal proteção variará dependendo da natureza da funcionalidade remota e das condições dos métodos de preparação. A necessidade de tal proteção é prontamente determinada por um especialista na técnica. O uso de tais métodos de proteção/desproteção também está dentro da habilidade na técnica. Para uma descrição geral dos grupos de proteção e seu uso, ver Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.
[00177] Por exemplo, certos compostos contêm aminas primárias ou funcionalidades de ácido carboxílico que podem interferir com reações em outros sítios da molécula se deixados desprotegidos. Consequentemente, tais funcionalidades podem ser protegidas por um grupo de proteção apropriado que pode ser removido em uma etapa subsequente. Grupos de proteção adequados para proteção de amina e ácido carboxílico incluem aqueles grupos de proteção comumente usados na síntese de peptídeos (tal como N-t-butoxicarbonil (Boc), benziloxicarbonil (Cbz) e 9-fluorenilmetilenoxicarbonil (Fmoc) para aminas e ésteres de alquil inferior ou benzil para ácidos carboxílicos) que geralmente não são quimicamente reativos nas condições de reação descritas e podem tipicamente ser removidos sem alterar quimicamente outra funcionalidade em qualquer uma das fórmulas descritas acima dos compostos.
[00178] Os Esquemas descritos abaixo se destinam a fornecer uma descrição geral da metodologia empregada na preparação dos compostos da presente invenção. Alguns dos compostos da presente invenção podem conter centros quirais simples ou múltiplos com a designação estereoquímica (R) ou (S). Será evidente para um especialista na técnica que todas as transformações sintéticas podem ser conduzidas de uma maneira semelhante, sejam os materiais enantioenriquecidos ou racêmicos. Além disso, a resolução para o material opticamente ativo desejado pode ocorrer em qualquer ponto desejado na sequência usando métodos bem conhecidos, tal como aqui descrito e na literatura de química.
[00179] Compostos de amina preparados via métodos aqui descritos podem ser alquilados com um 2-bromoacetato protegido na presença de uma base adequada, tal como K2CO3, Et3N, NaH ou LiHMDS em um solvente polar aprótico, tal como, mas não limitado a DMF, DMAc, DMSO ou NMP para distribuir compostos. Hidrólise de éster padrão pode ser realizada para fornecer ácidos. Se Pg2 for t- butila, métodos de desproteção acídica convencionais, tal como
TFA/DCM, HCl/1,4-dioxano, HCl/EtOAc ou outras condições adequadas podem ser utilizados para distribuir ácidos.
EXEMPLOS
[00180] A ativação de um receptor acoplado à proteína G (GPCR) GLP-1R por seu ligando natural GLP-1 causa recrutamento de múltiplas proteínas intracelulares, cada uma das quais pode ativar vias de sinalização distintas, mais proeminentemente a ativação de proteínas G a jusante (que podem ser medidas por produção de cAMP), o recrutamento de β-arrestina e/ou a subsequente internalização do complexo GPCR (isto é, GLP-1R) - β-Arrestina. Ao contrário do ligando natural GLP-1, certos agonistas de GLP-1R são chamados de "agonistas desviados", em que eles estimulam preferencialmente subconjuntos dentre as vias de sinalização naturais, tal como a via de ativação de proteína G/produção de cAMP, em comparação com o recrutamento de β-Arrestina /ou a subsequente internalização do complexo GPCR (isto é, GLP-1R) - β-Arrestina. Os ensaios abaixo fornecem meios para medir as várias vias de sinalização a jusante mediante ativação pelos compostos em questão. Exemplo Biológico 1: Ensaio de GLP-1R/β-Arrestina e Ensaio de Internalização para Demonstrar Ativação da Interação de GLP- 1R/β-Arrestina Mediada por composto de Molécula Pequena
[00181] GLP1 desempenha um papel fisiológico importante na manutenção da homeostase da glicose no sangue. GLP-1R é conhecido por ser expresso em células beta pancreáticas. GLP-1 medeia seus efeitos via uma via acoplada a Gαs. GLP-1R ativado estimula a via da adenilil ciclase e, assim, aumenta a concentração intracelular de cAMP, o que resulta em elevada síntese de insulina e liberação de insulina. Consequentemente, o GLP-1R foi sugerido como um alvo potencial para o tratamento de diabetes.
[00182] A ativação de GLP-1R após ligação de agonista/ligando também leva a recrutamento de β-arrestina para o receptor de GLP-1, o que bloqueia sinalização de GLP-1R, por exemplo, ocluindo o sítio de ligação em GLP-1R para proteína G heterotrimérica para prevenir sua ativação (dessensibilização) e ligando o GLP-1R a elementos da maquinaria de internalização, tal como clatrina e adaptador de clatrina AP2, o que promove internalização de receptor via poços revestidos e subsequente transporte para endossomos de compartimentos internos. Posteriormente, o receptor poderia ser ou direcionado para compartimentos de degradação (lisossomas) ou reciclado de volta para a membrana plasmática, onde ele pode sinalizar novamente. Acredita-se que a resistência da interação arrestina-receptor desempenhe um papel nesta escolha: complexos mais apertados tendem a aumentar a probabilidade de degradação do receptor (Classe B), ao passo que complexos mais transientes favorecem reciclagem (Classe A), embora esta "regra" esteja longe de ser absoluta.
[00183] A atividade de agonista de GLP-1R em relação a recrutamento de β-arrestina pode ser determinada com um ensaio funcional baseado em célula usando o kit de Ensaio GPCR de β- Arrestina PathHunter eXpress GLP1R CHO-K1 (DiscoverX Cat#93- 0300E2CP0M).
[00184] A tecnologia de ensaio GPCR de β-Arrestina PathHunter utiliza uma enzima β-galactosidase (β-gal) que é dividida em dois fragmentos, o menor Doador de Enzima (ED) e o maior Aceitador de Enzima (EA). Esses fragmentos podem ser fundidos a duas proteínas que podem interagir entre si, tal como EA-β-Arrestina e ED-GLP-1R. As fusões podem ser expressas de forma estável em uma linhagem de células de teste, tal como as células de β-Arrestina PathHunter CHO- K1 GLP1R descritas abaixo.
[00185] Independentemente, essas fusões de fragmentos não têm atividade β-gal; no entanto, em solução ou em uma célula viva, elas podem ser reunidas e complementar para formar uma enzima β-gal ativa devido à interação entre as proteínas fundidas, assim gerando um sinal quimioluminescente na presença de um substrato β-gal adequado.
[00186] Nesse experimento, células de β-Arrestina PathHunter CHO-K1 GLP1R do kit de ensaio foram plaqueadas a uma densidade de 1.000 ou 2.000 células/20 μl/poço em placas de 384 poços de fundo branco/transparente (Greiner Cat#781098). Células congeladas foram rapidamente descongeladas e 10 mL de meio de plaqueamento de célula (fornecido pelo kit) foram adicionados às células descongeladas. Células foram armazenadas em um incubador a 37C abaixo de 5% de CO2 e mantido por aproximadamente 48 horas até prontas para executar o ensaio.
[00187] Compostos de referência e teste foram dissolvidos em DMSO 100%. Concentração de 5× de um agonista foi preparada em DMEM sem soro (Thermo Cat#11965). 5 μL desta solução foram adicionados a 20 μL de meio de célula em placa de ensaio para uma concentração no topo final de 10 μM. As placas foram, então, incubadas a 37C abaixo de 5% de CO2 por 90 minutos.
[00188] Após 90 minutos. de incubação, reagentes de detecção foram preparados combinando uma parte de Galacton Star Substrate com 5 partes de Emerald IITM Solution e 19 partes de PathHunter Cell Assay Buffer, respectivamente. 12,5 μL de reagente de detecção foram adicionados a cada poço. As placas foram, então, incubadas em temperatura ambiente no escuro por 60 minutos. As placas foram, então, lidas em Envision por 0,1 s/poço.
[00189] Determinações de EC50 foram feitas de curvas dose- resposta de agonista analisadas com um programa de adequação de curva usando uma equação de dose resposta logística de 4 parâmetros.
[00190] O efeito de um composto de molécula pequena, tal como um da presente invenção, na ativação da interação GLP-1R/β- Arrestina ou no recrutamento de β-arrestina, pode ser demonstrado e medido usando o ensaio e reagentes comerciais descritos abaixo. Preparativos Reagentes e Consumíveis: Reagente Fornecedor Nº de Catálogo Kit de Ensaio GPCR de β-Arrestina Discover X 93-0300E2CP0M PathHunter eXpress GLP1R CHO-K1 Placas de fundo Greiner 781098 branco/transparente de 384 poços Instrumentos: Instrumento Fornecedor Código Interno EnVision PerkinElmer HD-4HYSG2330 Meios e Soluções
[00191] Preparar a Solução de Trabalho de detecção combinando 1 parte de Galacton Star® Substrate com 5 partes de Emerald IITM Solution e 19 partes de PathHunter Cell Assay Buffer, respectivamente.
[00192] Uma vez preparada, a solução de trabalho é estável por pelo menos 24 horas em temperatura ambiente, sem impacto no desempenho do ensaio. Reagentes suficientes são fornecidos em cada kit para realizar o número indicado de ensaios. Procedimentos
1. Plaqueamento de Células
[00193] Células foram plaqueadas a uma densidade de 1.000 ou
2.000 células/20 µL/poço. Células congeladas foram rapidamente descongeladas e adicionadas a 10 mL de meio de plaqueamento de células. Células foram armazenadas em um incubador de 37C sob 5% de CO2 e deixadas por aproximadamente 48 horas até prontas para executar o ensaio.
2. Preparação de Composto 1) Composto agonista de referência GLP1 (7-37): dissolvido com DMSO para fazer soluções de estoque 1 mM, aliquotadas e armazenadas a -80C. 2) Compostos de teste (tal como os compostos da invenção) vieram solubilizados em DMSO 100%. Preparar concentração 10× de um agonista em DMEM livre de soro e adicionar todas as soluções na placa de composto. 2,5 µL desta solução foram adicionados a 20 µL de meio de célulaem placa de ensaio para uma concentração de topo final de 10 M. Placas foram incubadas a 37C sob 5% CO2 por 30 minutos. Um adicional de 2,5 µL de Tampão foi adicionado à placa inteira para modo agonista e incubado a 37C por outros 90 min.
3. Reagentes de Detecção
[00194] Após 90 minutos de incubação, reagentes de detecção foram preparados conforme descrito. 12,5 µL foram adicionados a todos os poços. As placas foram, então, incubadas em temperatura ambiente por 60 minutos. As placas foram, então, lidas em Envision por 0,1 s/poço.
4. Processamento de Dados do Ensaio de β-Arrestina
[00195] Análise de dados: GraphPad Prism 6 foi usado para estabelecimento de curva de progressão. EC50s ou IC50s foram determinados por equação dose resposta logística de 4 parâmetros.
[00196] As curvas dose-resposta de recrutamento de β-arrestina para compostos selecionados da invenção, em comparação com GLP-
1 (7-37) como um controle, foram mostradas nas Figuras 1A e 1B. Os compostos testados incluem Compostos 1, 10, 11, 19 e 35 na Figura 1A e Compostos 225 e 236-239 na Figura 1B.
[00197] Usando este sistema de ensaio, o recrutamento de β- arrestina também foi medido para compostos selecionados da invenção, e os resultados são compilados na tabela abaixo. Recrutamento de β-arrestina Conforme Medido por Ensaio baseado em PathHunter CHO-K1 Composto Nº Bmax (POC)* Composto Nº Bmax (POC)* 1 2,80 (n=1) 35 19,9 ± 4,44 (n=4) 10 4,48 (n=1) 221 35,6 ± 5,38 (n=2) 11 7,16 (n=1) 222 31,1 ± 4,67 (n=2) 12 9,66 (n=1) 224 33,4 ± 3,78 (n=2) 18 26,2 ± 1,55 (n=2) 225 32,5 ± 3,55 (n=3) 19 26,0 ± 2,78 (n=2) 236 40,3 ± 4,10 (n=3) 21 19,0 ± 0,982 (n=2) 237 37,9 ± 4,66 (n=3) 22 10,9 ± 0,0317 (n=2) 238 55,8 ± 14,1 (n=3) 23 18,2 ± 1,51 (n=2) 239 25,6 ± 5,31 (n=2) 28 28,5 ± 6,36 (n=3) 242 22,5 ± 4,32 (n=2) 29 36,6 ± 7,77 (n=3) 245 38,0 ± 6,42 (n=2) 34 20,2 ± 1,89 (n=2) * Este valor representa Bmáx mediado onde aplicável (POC ou Porcentagem de Controle).
[00198] Notem que nestes compostos testados da invenção, com poucas exceções, o efeito relativo máximo parcial Bmax (na concentra- ção mais alta testada nos ensaios) para os compostos testados geralmente cai dentro de cerca de 10% a cerca de 40% do Bmax para o ligando natural GLP-1 (7-37). Ver valores de Bmax na tabela acima.
[00199] Um ensaio semelhante também pode ser usado para avaliar a extensão de atenuação de sinal devido à internalização de GLP-1R (o Ensaio de Internalização de β-Arrestina). Nesse ensaio, células de Internalização de GLP1R ativadas foram engenheiradas para coexpressar um GLP1R não marcado, β-arrestina marcada com Aceitador de Enzima (EA) e uma marca ProLink™ (PK) localizada nos endossomos. A ativação do GLP1R induz recrutamento de β-arrestina, o que leva à internalização do complexo Receptor/Arrestina-EA em endossomos marcados com PK. Isso força complementação dos dois fragmentos de enzima β-galactosidase (EA e PK) para formar uma enzima funcional que hidrolisa o substrato para gerar um sinal quimioluminescente. Essas células foram modificadas para evitar propagação e expansão de longo prazo usando um composto proprietário que não tem nenhum efeito aparente em desempenho de ensaio.
[00200] Especificamente, células U2OS engenheiradas PathHunter do kit de ensaio (Cat# 93-0724E3CP0L) foram plaqueadas a uma densidade de 2.000 células/20μL/poço em placas de fundo branco/transparente de 384 poços (Greiner Cat# 781098). Células congeladas foram rapidamente descongeladas e 10 mL de meio de plaqueamento de célula (fornecido pelo kit) foram adicionados às células descongeladas. Células foram armazenadas em um incubador de 37C e mantidas por aproximadamente 48 horas até prontas para o ensaio.
[00201] Compostos de referência e teste foram dissolvidos em DMSO 100%. Concentração de 5× de um agonista foi preparada em DMEM sem soro (Thermo Cat#11965). 5 μL desta solução foram adicionados a 20 μL de meio de célula em placa de ensaio para uma concentração no topo final de 10 μM. Placas foram incubadas a 37C por 180 minutos.
[00202] Após 180 minutos de incubação, reagentes de detecção foram preparados combinando uma parte de Galacton Star Substrate com 5 partes de Emerald IITM Solution e 19 partes de PathHunter Cell Assay Buffer, respectivamente. 12,5 μL de reagente de detecção foram adicionados a cada poço. As placas foram, então, incubadas à temperatura ambiente por 60 minutos. As placas foram, então, lidas em Envision por 0,1 s/poço.
[00203] Determinações de EC50 foram feitas de curvas dose- resposta de agonista analisadas com um programa de adequação de curva usando uma equação de dose resposta logística de 4 parâmetros.
[00204] Curvas dose resposta de internalização de GLP-1R para compostos selecionados da invenção, em comparação com GLP-1 (7- 37) como um controle, foram mostradas nas Figuras 2A-2B. Os compostos testados incluem os Compostos 19 e 28 (painel esquerdo) e Compostos 9, 33 e 35 (painel direito) na Figura 2A, e Compostos 221, 222 e 225 (painel esquerdo), 224 e 239 (painel do meio) e 236 (painel direito) na Figura 2B.
[00205] Usando esse sistema de ensaio, internalização de GLP1R mediada por β-Arrestina também foi medida para outros compostos selecionados da invenção e os resultados são compilados na tabela abaixo.
[00206] Internalização de GLP1R Mediada por β-arrestina Como Medida por Ensaio PathHunter
Composto Nº Bmax (POC)* Composto N.º Bmax (POC)* 9 27,03 (n=1) 47 22,8 (n=1) 18 21,3 ± 3,47 (n=3) 105 24,2 (n=1) 19 20,1 (n=1) 221 30,0 ± 6,40 (n=2) 21 6,64 ± 1,55 (n=2) 222 31,4 ± 2,62 (n=2) 22 7,40 ± 6,97 (n=2) 224 22,5 ± 1,41 (n=2) 23 8,92 ± 3,70 (n=2) 225 24,0 ± 6,70 (n=2) 28 17,6 ± 6,62 (n=3) 236 30,0 (n=1) 29 25,9 ± 1,24 (n=3) 237 17,7 ± 1,20 (n=2) 34 8,88 ± 3,19 (n=2) 238 52,8 ± 1,14 (n=2) 35 14,3 ± 9,21 (n=3) 239 14,1 ± 1,57 (n=2) 45 19,1 (n=1) 242 15,4 (n=1) 46 27,4 (n=1) 245 27,7 (n=1) *Este valor representa Bmáx mediado onde aplicável (POC ou Porcentagem de Controle).
[00207] Novamente, notem que em cada caso, com poucas exceções, o efeito relativo máximo parcial Bmax (na concentração mais alta testada nos ensaios) para os compostos testados geralmente cai dentro de cerca de 10% a cerca de 35% do Bmax para o ligando natural GLP-1 (7-37). Exemplo Biológico 2: Ensaio de Interação NanoBit GLP1R/β- arrestina para Demonstrar Ativação de Interação de GLP1R e β- Arrestina Mediada por Compostos de Moléculas Pequenas
[00208] A interação mediada por GLP-1R com β-Arrestina por atividade agonista é determinada com um ensaio funcional baseado em célula, utilizando uma Tecnologia Binária NanoLuc® (NanoBiT) (Promega N2015) desenhada para detectar interação de GLP-1R e β- Arrestina em uma célula viva. O método é um sistema de duas subunidades baseado em NanoLuc® luciferase que pode ser usada para detecção intracelular de proteína: interações de proteína (PPIs). As duas subunidades são conhecidas como Large BiT (LgBiT; 17,6 kDa) e Small BiT (SmBiT; 11 aminoácidos). Essas duas subunidades são fundidas a duas proteínas de interesse, respectivamente. Quando ambas são expressas, a PPI traz as subunidades para íntima proximidade para formar uma enzima funcional que gera um sinal brilhante luminescente.
[00209] Mais especificamente, a sequência de codificação de GLP- 1R humano (NCBI Reference Sequence NM_002062) e a sequência de codificação de β-Arrestina2 (NCBI Reference Sequence NM_004313.3) foram subclonadas para vetores de expressão transientes fornecidos no kit NanoBiT, de modo que GLP-1R-LgBiT e as fusões SmBiT-β-Arrestin2 fossem geradas. Um total de 8 combinações foi selecionado usando transfecção baseada em HEK293T com ativação pelo ligando natural GLP-17-37. A combinação mostrou que a janela de ensaio mais alta (GLP-1R-LgBiT e SmBiT-β- Arrestin2) foi selecionada para testar os compostos da invenção.
[00210] O ensaio NanoBit foi realizado conforme descrito resumidamente aqui: células HEK293T (7,5 k células/poço) foram semeadas em placa de cultura de 96 poços (Corning Cat#3917) em DMEM (Thermo Cat#11965) com 10% de FBS (Biosera Cat#FB - 10581) que foi inativado por calor e glicose 25 mM. Após 48 horas, células foram transfectadas com os construtos GLP-1R-LgBiT e SmBiT-β-Arrestin2 usando Lipofectamine2000 (Thermo Cat#11668019) seguindo o protocolo de ensaio do fabricante. Resumidamente, plasmídeos codificando as fusões GLP-1R-LgBiT e SmBiT-β-Arrestin2 e o reagente de transfecção foram diluídos com Opti-MEM (Thermo Cat#31985-070). Em seguida, cerca de 50 ng de GLP-1R-LgBiT e 50 ng de construtos de plasmídeo SmBiT-β-Arrestin2 foram misturados e a mistura de plasmídeos resultante foi adicionada ao reagente de transfecção diluído. A razão de plasmídeo (μg): Lipofectamine2000 (μl) foi de 1:10. As misturas foram, então, adicionadas às células após incubação de 5 minutos à temperatura ambiente. Cerca de 48 horas após transfecção, o meio foi substituído por 65 μL/poço Opti-MEM fresco.
[00211] Nano-Glo® Live Cell Substrate foi, então, diluído com Nano- Glo® LCS Dilution Buffer na razão de 1:24. Cerca de 25 μL de Nano- Glo® Live Cell Reagent foram adicionados a cada poço. Concentrações variáveis de cada composto em questão a ser testado (em DMSO) foram diluídas em Opti-MEM com BSA 0,1% (Sigma Cat#A7409) para fazer estoques 10x. Cerca de 10 μL de estoques de compostos foram adicionados a cada poço usando pipeta. Luminescência foi medida imediatamente por EnVision para 40, 60 ou 120 repetições, com 0,25 segundo por poço.
[00212] Determinações de EC50 foram feitas de curvas dose- resposta de agonista analisadas com um programa de adequação de curva usando uma equação de dose resposta logística de 4 parâmetros.
[00213] O efeito de um composto de molécula pequena, tal como um da presente invenção, na ativação da interação GLP-1R/β- Arrestina, ou recrutamento de β-Arrestina, pode ser demonstrado e medido usando os reagentes de ensaio e comerciais aqui descritos ou equivalentes dos mesmos. Os reagentes e protocolos experimentais detalhados usados neste exemplo são descritos mais detalhadamente abaixo.
Preparativos Reagentes e Consumíveis: Reagente Fornecedor Nº de Catálogo Proteína NanoBiT®:Proteína Promega N2015 Sistema de Interação Meio de Soro Reduzido Opti-MEM™ I Thermo 31985-070 Fisher Reagente de Transfecção Lipofectamine™ Thermo 11668019 2000 Fisher GLP-1-(7-36)-amida humana MCE HY-P0054A Placas de 96 poços, brancas Corning 3917 DMEM Thermo 11.965 Fisher Soro Fetal Bovino Biosera FB-10581/500 DMSO Sigma D2650 Instrumentos: Instrumento Fornecedor Código Interno EnVision PerkinElmer HD-4HYSG2330 Preparação do Reagente de Célula Viva Nano-Glo®:
1. Equilibrar Nano-Glo® LCS Dilution Buffer à temperatura ambiente se usando pela primeira vez.
2. Remover o Nano-Glo® Live Cell Substrate do armazenamento e da mistura.
3. Preparar a quantidade desejada de Nano-Glo® Live Cell Reagent reconstituído combinando 1 volume de Nano-Glo® Live Cell Substrate com 24 volumes de Nano-Glo® LCS Dilution Buffer (uma diluição de 25 vezes), criando um estoque de 4x para misturar com meio de cultura de célula. Procedimentos Preparação de composto: GLP-1 (7-36) é dissolvido em DMSO 100% e a concentração de estoque é de 1 mM. Um layout de placa típico para GLP-1 é mostrado abaixo. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A B GLP-1 HPE 1,00E-05 2,50E-06 6,25E-07 1,56E-07 3,91E-08 9,77E-09 2,44E-09 6,10E-10 ZPE
C D E F G
H HPE: 10μM GLP-1 (7-36) ZPE: 0,1% DMSO
[00214] Para compostos de teste, diluir estoque 1 mM até 100 μM usando Opti-MEM contendo 1% BSA, a concentração superior final é de 10 μM, diluição de 1/4 log (4 vezes), 8 pontos de diluição, amostras duplicadas para cada diluição. O layout é semelhante ao GLP-1 acima (não mostrado). Procedimento de Ensaio: Cultura de Células e Transfecção:
1. Semear 7,5k células/poço de células 293T em placa de cultura de 96 poços (Corning #3917) no DMEM com FBS 10% (inativado por calor e glicose 25mM).
2. Após 48 horas, realizar transfecção de acordo com o protocolo de Lipofectamine2000.
3. 50 ng Lg-Bit e 50 ng Sm-Bit/poço, a razão de plasmídeo (μg): Lipofectamine2000 (μL) é de 1:10.
4. 48 horas depois da transfecção, o meio foi substituído por 65 μL de Opti-MEM/poço fresco. Ativação e Medição de Luminescência:
5. Preparar Nano-Glo® Live Cell Reagent, Nano-Glo® Live Cell Substrate diluído com Nano-Glo® LCS Dilution Buffer na razão de 1:24.
6. Adicionar 25 μL de Nano-Glo® Live Cell Reagent a cada poço.
7. Adicionar 10 μL de soluções de DMSO a 10% ou 10x GLP-1 ou compostos de teste a cada poço.
8. Medir imediatamente luminescência para 40, 60 ou 120 repetições, com 0,25 segundo/poço.
[00215] Conforme mostrado nas Figuras 3 e 4, os Compostos 19 e 35 testados se comportaram claramente de forma diferente do agonista natural GLP-1 (7-37).
[00216] Figuras 5A-5C mostram respostas ao longo do tempo de NanoBit assay para GLP-1 (7-37) e Composto 19, 10 ou 35, respectivamente, em diferentes concentrações de composto.
[00217] Valores de EC50 também foram medidos com base em curvas dose resposta. Como mostrado na Figura 6, o ponto no tempo t = 6 minutos arbitrariamente foi escolhido para determinação de EC50 de dose resposta, para os Compostos 10, 19 e 35. Os resultados foram mostrados na Figura 6.
[00218] Ver também Figuras 7A-7B mostrando curvas de dose- resposta em leituras de 3 minutos (180 segundos) e 5 minutos (300 segundos) para o ensaio GLP-1R/β-Arrestin NanoBit, usando Compostos 19 e 35 (Figura 7A) e Composto 10 (Figura 7B), com GLP- 1 (7-37) como controle. Em cada uma dessas figuras, os efeitos relativos máximos para os compostos testados Bmax, para as concentrações mais altas testadas, são geralmente não mais que 40% (geralmente cerca de 20-40%) do GLP-1 (7-37).
[00219] Como uma alternativa, a análise/o relatório de dados para obter valores de EC50 também pode ser feito quando compostos atingem sinais máximos - tal como em 450-500 s (~ 8 min.). Exemplo Biológico 3: Ensaio de GLP1R cAMP para Demonstrar Ativação de GLP-1R Mediada por Compostos de Moléculas Pequenas HEK293/GLP-1R/CRE/Luc, Clone 4 – Ensaio cAMP
[00220] Atividade agonista mediada por GLP-1R foi determinada com um ensaio funcional baseado em célula utilizando um kit de detecção de cAMP HTRF (Homogeneous Time-Resolved Fluorescence) (cAMP Dynamic 2 Assay Kit; CisBio cat#62AM4PEC) que mede níveis de cAMP na célula. O método é um imunoensaio competitivo entre cAMP nativo produzido pelas células e cAMP exógeno marcado com o corante d2. A ligação do traçador é visualizada por um mAb anti-cAMP marcado com Cryptate. O sinal específico (isto é, transferência de energia) é inversamente proporcional à concentração de cAMP em qualquer amostra padrão ou experimental.
[00221] A sequência de codificação de GLP-1R humano (NCBI Reference Sequence NM_002062) foi subclonada no vetor pcDNA3.1+/Hygro (Invitrogen) e transfectada para a linha de célula parenteral HEK293/CRE/Luc. Uma linhagem de célula expressando o receptor de forma estável foi isolada. Análises de ligação de saturação 125 (procedimento de ensaio de filtração) usando I-GLP-17-36 (Perkin Elmer) mostram que membranas plasmáticas derivadas desta linhagem de célula expressam uma alta densidade de GLP-1R (Kd: <1 nM, Bmax: >800 fmol/mg de proteína).
[00222] Concentrações variáveis de cada composto a ser testado (em DMSO) foram diluídas em DMSO para obter solução de trabalho de composto 200× primeiro e, em seguida, 50 nl de compostos foram adicionados a uma placa de ensaio de 384 poços branca (Greiner 784075) com ECHO. A concentração final de DMSO foi de 0,5%. A faixa de concentração do composto pode ser ajustada a qualquer momento.
[00223] Células foram removidas de criopreservação, ressuspensas em 5 mL de Salina Tamponada com Fosfato de Dulbecco (DPBS- Sigma Cat #D8537) e centrifugadas a 900 g por 5 minutos a 22°C. O pélete de célula foi, então, ressuspenso em 1 mL de tampão de ensaio [DPBS com 500μM IBMX (Sigma # I5879) e 0,1% de BSA (Sigma # A1933). IBMX e BSA foram adicionados recentemente no dia do ensaio]. Uma amostra de 10 μL da suspensão de células foi contada em um Invitrogen Countess II para determinar viabilidade de célula e contagem de célula por mL. A suspensão de célula remanescente foi, então, ajustada com tampão de ensaio para distribuir 1.000 células viáveis por poço usando um dispensador de reagente Matrix Combi Multidrop. Suspensões de células de 10 μL foram adicionadas a cada poço da placa de ensaio que já contém o composto. A placa foi vedada e incubada a 37°C com 5% de CO2 por 30 minutos.
[00224] Após a incubação de 30 minutos, 5 μL de cAMP marcado cpm d2 e 5 μL de anticorpo anti-cAMP (ambos diluídos 1:20 em tampão de lise de célula; conforme descrito no protocolo de ensaio do fabricante) foram adicionados a cada poço da placa de ensaio. As placas foram, então, incubadas à temperatura ambiente e após 60 minutos, mudanças no sinal de HTRF foram lidas com um leitor de placa multimarcador Envision usando excitação de 330 nm e emissões de 615 e 665 nm. Dados brutos foram convertidos em nM cAMP por interpolação de uma curva padrão de cAMP (conforme descrito no protocolo de ensaio do fabricante) e o efeito percentual foi determinado em relação a uma concentração de saturação do agonista completo GLP-17-37 (10 nM) incluído em cada placa. Determinações de EC50 foram feitas de curvas dose-resposta de agonista analisadas com um programa de adequação de curva usando uma equação dose resposta logística de 4 parâmetros.
[00225] Este ensaio demonstra que os compostos da invenção ativam a sinalização de GLP-1R através da via de cAMP, comportando-se assim como agonistas de GLP-1R. Os reagentes/kits comerciais representativos que podem ser (foram) usados em tais ensaios são descritos abaixo. Preparativos Reagentes e Consumíveis: Reagente Fornecedor Nº de Catálogo Linhagem de célula HDB HEK/GLP1R/CRE/Luc DMEM Gibco 12.100 Exendina (9-39) MCE HY-P0264 GLP-1-(7-37) humana-amida MCE HY-P0055 Placas de 384 poços, brancas Greiner 784075 cAMP dinâmico 2 Cisbio 62AM4PEC Soro Bovino Fetal Biosera FB-10581/500 IBMX Sigma I5879 BSA Sigma A1933-5G DPBS Sigma D8537 Instrumentos: Instrumento Fornecedor Código Interno EnVision PerkinElmer HD-4HYSG2330
Meios e Soluções: 1) Tampão de Ensaio DPBS com IBMX 500 μM e 0,1% BSA. IBMX e BSA foram adicionados recentemente no dia do ensaio. 2) Preparação de Solução de Trabalho cAMP-d2 a) O liofilizado foi reconstituído com uma quantidade apropriada de água destilada de acordo com as instruções do fabricante para fazer estoque de trabalho que pode ser aliquotado e congelado (-20°C). b) A solução estoque de trabalho foi diluída 1:20 no conjugado e tampão de lise antes do uso. 3) Preparação de Solução de Trabalho de Anticorpo Anti- cAMP-criptato c) O liofilizado foi reconstituído com a quantidade apro- priada de água destilada de acordo com instruções do fabricante para fazer estoque de trabalho que pode ser aliquotado e congelado (-20°C). d) A solução estoque de trabalho foi diluída 1:20 no conjugado e tampão de lise antes do uso. Procedimentos Procedimentos para Preparação de Suspensão de Célula
1. Células congeladas foram descongeladas muito brevemente em um banho de água a 37°C em condições estéreis até um pouco antes do gelo derreter completamente (por cerca de 1 minuto) com uma agitação contínua. Foi tomado cuidado porque uma incubação mais longa poderia resultar em morte de célula.
2. DMSO foi removido do meio transferindo cuidadosamente células descongeladas para um tubo estéril 15/50 mL, enchendo um tubo com 10-50 mL de meio completo pré-aquecido até 37°C e permitindo que as células repousassem 5 min. antes de centrifugar a 900 rpm por 5 minutos para coleta de células.
3. As células foram ressuspensas com tampão de ensaio.
4. Para ensaio GLP1-R estável, a densidade de célula otimizada é de 1.000 células/poço. Foi tomado cuidado porque a otimização de densidade de célula era crucial e precisava ser otimizada em diferentes laboratórios. O nível de cAMP produzido pelas células deve cair dentro da faixa linear da curva padrão. Procedimentos para Preparação de Composto 1) Composto agonista de referência GLP1 (7-37) foi dissolvido com DMSO para fazer uma solução de estoque 1 mM que foi, então, dividida em alíquotas e armazenada a -80C. 2) Composto antagonista de referência Exendina (9-39) foi dissolvido com DMSO para fazer uma solução estoque 2 mM que foi, então, dividida em alíquotas e armazenada a -80C. 3) Compostos de teste foram dissolvidos com DMSO para fazer soluções de estoque, divididas em alíquotas e armazenadas a -80C. Diluições em série de soluções de composto foram feitas usando DMSO para obter uma solução de trabalho de composto 200× primeiro e, em seguida, 50 nL da solução de trabalho para placa de 384 poços com ECHO. A concentração final de DMSO é de 0,5%. A faixa de concentração do composto pode ser ajustada a qualquer momento. 4) IBMX: solução de estoque 500 mM dissolvida em DMSO, aliquotada e armazenada a -20°C. Procedimentos para Ensaio de Agonista 1) Preparação de composto: placas de adição de composto foram preparadas antes do ensaio. Soluções de trabalho de composto 200× foram preparadas de acordo com os procedimentos descritos acima. 2) Preparação de célula: suspensões de célula foram preparadas de acordo com os procedimentos descritos acima antes de executar o ensaio. 3) Adição de composto: 50 nL/poço de soluções de trabalho de composto 200× foram adicionados a uma placa de ensaio branca 384 de baixo volume com Echo. 4) Adição de células: suspensões de células de 10 μL foram adicionadas a cada poço da placa de ensaio que já continha a solução de trabalho de composto.
A placa foi vedada e incubada a 37°C com 5% de CO2 por 30 minutos. 5) 5 μL de uma solução de trabalho cAMP-d2 foram adicionados a cada poço da placa de ensaio. 6) 5 μL de uma solução de trabalho de anticorpo anti- cAMP-criptato foram adicionados a cada poço da placa de ensaio.
A placa foi coberta com uma tampa.
Incubar em temperatura ambiente por uma hora. 7) A fluorescência foi lida a 665 e 615 nm com um leitor de placa EnVision com TRF LASER usando os ajustes especificados e os dados foram salvos.
Procedimentos para Ensaio de Bloqueio de Antagonista 1) Preparação de composto: preparar placas de adição de composto antes do ensaio.
Preparar concentração de 200× de soluções de trabalho de composto de acordo com procedimentos descritos acima. 2) Preparação de célula: suspensões de células são preparadas de acordo com procedimentos descritos acima antes de executar o ensaio. 3) Adição de composto: adicionar 50 nL/poço de concentração de trabalho de composto 200X à placa de ensaio branca 384 de baixo volume. 4) Adição de célula: Adicionar 5 μL de suspensões de células 2X a cada poço da placa de ensaio que já contém o composto.
5) Adição de Antagonista de Exendina (9-39): Adicionar 5 μL de 2x Exendina (9-39) a cada poço da placa de ensaio que já contém composto e células.
A concentração final de Exendina (9-39) é IC80. Vedar a placa e incubar a 37°C com 5% de CO2 por 30 minutos. 6) Adicionar 5μL de solução de trabalho cAMP-d2 a cada poço da placa de ensaio. 7) Adicionar 5μL de solução de trabalho anticorpo anti- cAMP-criptato a cada poço da placa de ensaio.
Cobrir a placa com tampa.
Incubar em temperatura ambiente por 1-4 horas. 8) Ler a fluorescência em 665 e 615 nm com leitor de placa EnVision com TRF LASER usando ajustes especificados e salvar dados.
Ajuste de EnVision para Medições de cAMP HTRF Filtros e espelhos necessários  Excitação: TRF LASER  Emissão#1: 665 nm (CWL 665 nm BW 7,5 nm)  Emissão#2: 615 nm (CWL 615 nm BW 8,5 nm)  Espelho dicróico: DELFIA/LANCE Dual Enh D400/D630 Ajustes necessários:  Retardo: 50 s  Tempo de janela: 300 s (também chamado de "tempo de integração")  Número de janelas de sequência: 1  Ciclo: Padrão 2.000 s (também chamados de "tempo entre flashes")  Tempo entre flashes: 2.000 s  número de flashes: 20  número de flashes para 2º detector: 10  altura de medição(mm): 6,5
 Altura Z: Deve ser otimizado (usar o Wizard de otimização, otimizar em um poço com FRET máximo)  Excitação e Emissões são feitas na parte superior do poço Processamento de Dados de Ensaio cAMP
[00226] Análise de dados: software GraphPad Prism 5 ou IDBS XLfit é usado para estabelecimento da curva de progressão. EC50s ou IC50s foram determinados pela equação de dose resposta logística de 4 parâmetros. Layout de Placa Representativo
[00227] Usando o ensaio substancialmente como descrito acima, a curva dose-resposta para cada composto testado abaixo foi obtida e seus respectivos valores EC50 foram calculados e tabulados. Aqui, o valor EC50 para cada composto é definido como a concentração de composto que rendeu 50% do nível máximo de cAMP alcançado com o mesmo composto.
[00228] Dois tipos diferentes de células foram usados para este ensaio. Em um ensaio, cada composto foi testado em células HEK293T. Os resultados são mostrados abaixo na Tabela 1. Em outro ensaio, os compostos selecionados foram também testados em células CHO que foram transfectadas de forma estável para expressar GLP-1R humano. Os resultados são mostrados abaixo na Tabela 2.
Tabela 1. Valores EC50 de Composto em Células HEK293T
EC50 EC50
A = ≤ 0,015 M A = ≤ 0,015 M
Composto # B = ≤ 0,15 M Composto # B = ≤ 0,15 M
C = ≤ 1 μM C = ≤ 1 μM
D = > 1 μM D = > 1 μM
Composto 1 A Composto 138 C
Composto 2 D Composto 139 B
Composto 3 D Composto 140 B
Composto 4 D Composto 141 A
Composto 5 D Composto 142 B
Composto 6 D Composto 143 A
Composto 7 D Composto 144 A
Composto 8 D Composto 145 A
Composto 9 A Composto 146 A
Composto 10 B Composto 147 C
Composto 11 A Composto 148 A
Composto 12 A Composto 149 A
Composto 13 B Composto 150 C
Composto 14 D Composto 151 A
Composto 15 B Composto 152 A
Composto 16 B Composto 153 A
Composto 17 D Composto 154 A
Composto 18 A Composto 155 A
Composto 19 A Composto 156 B
Composto 20 C Composto 157 A
Composto 21 A Composto 158 B
Composto 22 B Composto 159 B
Composto 23 A Composto 160 B
Composto 24 B Composto 161 B
Composto 25 B Composto 162 B
Composto 26 D Composto 163 A
Composto 27 D Composto 164 B
Composto 28 A Composto 165 C
Composto 29 A Composto 166 B
Composto 30 B Composto 167 B
Composto 31 C Composto 168 A
Composto 32 C Composto 169 A
Composto 33 A Composto 170 A
Composto 34 A Composto 171 A
Composto 35 A Composto 172 A
Composto 36 C Composto 173 C
Composto 37 D Composto 174 A
Composto 38 C Composto 175 A
Composto 39 B Composto 176 A
Composto 40 C Composto 177 A
Composto 41 A Composto 178 A
Composto 42 A Composto 179 A
Composto 43 A Composto 180 A
Composto 44 A Composto 181 A
Composto 45 A Composto 182 A
Composto 46 A Composto 183 B
Composto 47 A Composto 184 A
Composto 48 B Composto 185 A
Composto 49 D Composto 186 B
Composto 50 D Composto 187 A
Composto 51 D Composto 188 B
Composto 52 D Composto 189 B
Composto 53 D Composto 190 B
Composto 54 D Composto 191 B
Composto 55 A Composto 192 B
Composto 56 D Composto 193 B
Composto 57 C Composto 194 B
Composto 58 D Composto 195 A
Composto 59 D Composto 196 B
Composto 60 C Composto 197 C
Composto 61 C Composto 198 C
Composto 62 B Composto 199 B
Composto 63 C Composto 200 A
Composto 64 B Composto 201 A
Composto 66 D Composto 202 B
Composto 67 B Composto 203 B
Composto 68 A Composto 204 A
Composto 69 C Composto 205 B
Composto 70 A Composto 206 A
Composto 71 D Composto 208 B
Composto 72 A Composto 208 B
Composto 73 B Composto 209 A
Composto 103 B Composto 210 A
Composto 104 C Composto 211 A
Composto 105 A Composto 212 A
Composto 106 A Composto 213 A
Composto 107 A Composto 214 B
Composto 108 A Composto 215 B
Composto 109 C Composto 216 A
Composto 110 A Composto 217 A
Composto 111 A Composto 218 B
Composto 112 C Composto 219 C
Composto 113 B Composto 220 A
Composto 114 A Composto 221 A
Composto 115 A Composto 222 A
Composto 116 A Composto 223 A
Composto 117 A Composto 224 A
Composto 118 A Composto 225 A
Composto 119 A Composto 226 A
Composto 120 A Composto 227 A
Composto 121 B Composto 228 A
Composto 122 B Composto 229 A
Composto 123 A Composto 230 B
Composto 124 C Composto 231 B
Composto 125 B Composto 232 B
Composto 126 A Composto 233 B
Composto 127 B Composto 234 B
Composto 128 B Composto 235 C
Composto 129 A Composto 236 A
Composto 130 C Composto 237 A
Composto 131 A Composto 238 A
Composto 132 C Composto 239 A
Composto 133 A Composto 240 B
Composto 134 A Composto 241 B
Composto 135 B Composto 242 A
Composto 136 A Composto 243 B
Composto 137 C Composto 244 A
Composto 245 A
Tabela 2. Valores de EC50 do composto em células CHO Expressando Estavelmente Células CHO GLP-1R EC50 estável CHO cAMP EC50 estável CHO cAMP A = ≤ 0,015 M A = ≤ 0,015 M Composto # B = ≤ 0,15 M Composto # B = ≤ 0,15 M C = ≤ 1 μM C = ≤ 1 μM D = > 1 μM D = > 1 μM Composto 18 B Composto 222 A Composto 19 A Composto 224 B Composto 21 C Composto 225 A Composto 22 C Composto 227 B Composto 23 C Composto 228 B Composto 28 B Composto 236 B Composto 29 B Composto 237 B Composto 34 B Composto 238 B Composto 35 B Composto 239 B Composto 221 A Composto 245 A
[00229] Os dados mostram que, semelhante a GLP-1(7-37), muitos compostos testados têm valores de EC50 nanomolares ou subnanomolares (<10 nM) no ensaio de cAMP. Isto, acoplado ao fato de que muitos compostos testados também têm valores Bmax atingindo substancialmente o mesmo nível daquele para GLP-1 (7-37), sugere que muitos dos compostos testados da invenção são agonistas completos da sinalização de GLP-1R levando à produção de cAMP.
[00230] Em contraste, como mostrado nos Exemplos 1 e 2 acima, os compostos da invenção geralmente têm Bmax se aproximando de cerca de 20-40% daquele de GLP-1 (7-37) no ensaio de recrutamento de β-arrestina e ensaio de internalização de GLP-1R e os perfis de decurso de tempo NanoBit são diferentes entre os compostos da invenção e aqueles de GLP-1(7-37).
Exemplo Biológico 4: Estudos de Farmacocinética Oral de Macaco (PK)
[00231] Este exemplo demonstra que os compostos da invenção possuem propriedades farmacocinéticas superiores (por exemplo, propriedade de PK oral), de modo que na dose oral única testada, as concentrações plasmáticas dos compostos de teste diminuíram muito gradualmente ao longo de 24 horas. Artigos de Teste
[00232] Os seguintes compostos exemplares da invenção foram testados neste estudo: Composto 19, Composto 28, Composto 29, Composto 225 e Composto 418 como o composto de controle: Composto 19 Composto 418 Composto 28
Composto 29 Composto 225 Preparação de Formulação de Dose
[00233] Quantidades precisas dos compostos de teste, isto é, Composto 19, Composto 28, Composto 29, Composto 225 ou Composto 418 (Composto de Controle) foram pesadas em um almofariz e trituradas até nenhum grânulo óbvio ser deixado. Volumes apropriados de veículos (por exemplo, 2% Tween 80 (v:v) e 0,5% MC (p:v) em salina ou 0,5% MC (p:v) em água foram, então, adicionados ao almofariz contendo os compostos moídos e a mistura foi, então, moída com um pilão até que uma pasta homogênea fosse formada. Volumes adicionais apropriados de veículos foram adicionados ao almofariz contendo cada composto e a mistura foi moída adicionalmente com o pilão até que uma suspensão homogênea fosse obtida.
[00234] A suspensão foi, então, transferida para uma garrafa de vidro. O almofariz e o pilão foram enxaguados com o veículo até nenhum composto ser deixado no almofariz ou no pilão.
[00235] resto do veículo foi adicionado para perfazer o volume de dosagem final de cerca de 1 mg/mL ou 2 mg/mL (isto é, volume de dosagem final de cerca de 5 mL/kg) e a suspensão homogênea foi continuamente agitada antes e durante a dosagem.
Animais de Teste
[00236] Macacos machos Cynomolgus não naïve (n = 3/artigo de teste; fornecido por Hainan Jingang Biotech Co., Ltd., Nayang Xintan, Cidade de Fucheng, Distrito de Qiongshan, Cidade de Haikou, Província de Hainan, China); ou macacos Macaca fascicularis machos não naïve, obesos e diabéticos (n = 3/artigo de teste, Fonte: Kunming Biomed International Colony) foram usados em estudos pré-clínicos in vivo. Todos os macacos machos Cynomolgus não naïve tinham aproximadamente 3 a 5 anos de idade, pesavam cerca de 2,5-5 kg e estavam dentro de ± 20% do peso corporal médio. Todos os macacos Macaca fascicularis machos não naïve, obesos e diabéticos tinham aproximadamente 12 a 20 anos de idade e pesavam cerca de > 8-12 kg. Desenho de Estudo Designação de Grupo e Plano de Dose Oral Dose (mg/kg) Número de animais Gênero Volume de dose (mL/kg) Dose 1 3 M 5 Dose 2 3 M 5
[00237] Todos os animais jejuaram durante a noite antes da dosagem e a comida foi fornecida aproximadamente 4 horas pós-dose (com livre acesso a água o tempo todo). Coleta de Amostra
[00238] Animais foram contidos em pontos n tempo designados para amostragem de sangue. Aproximadamente 500 µL de amostras de sangue foram coletados via veia cefálica ou safena para tubos de EDTA-K2. Amostras de sangue foram colocadas em gelo úmido antes da centrifugação. Intervalos de Coleta
[00239] Para administração oral (PO) de qualquer Dose 1 ou Dose 2: amostras de sangue foram coletadas na pré-dose e aos 15 minutos,
30 minutos, uma hora, duas horas, 4 horas, (6 horas para compostos 19 e 28 com macacos cynomolgus apenas), 8 horas, 12 horas e 24 horas pós-dose (isto é, 9 ou 10 pontos no tempo totais para cada composto em cada dose). Procedimento de Amostra
[00240] As amostras de sangue foram centrifugadas a aproximadamente 2.000-4.000 rpm por cerca de 10-15 minutos a 2- 8°C e cada porção de plasma resultante foi, então, transferida para um tubo individual. Condições de Armazenamento de Amostra
[00241] Todas as amostras de plasma foram armazenadas em freezer a -70°C até análise (amostras de transferência foram armazenadas em gelo seco). As amostras restantes foram armazenadas em freezer a -20°C e podem ser armazenadas por no máximo 1-2 anos após emissão dos relatórios finais. Análise Bioanalítica
[00242] Métodos LC-MS/MS foram desenvolvidos e a bioanálise para os artigos de teste em plasma de macaco foram realizados de acordo com os métodos LC-MS/MS desenvolvidos. Preparação de Amostra
[00243] Amostras de plasma não diluídas: uma alíquota de 20-50 µL de amostra de plasma foi misturada com 200 µL de ACN ou MeOH contendo um dos padrões internos (IS, por exemplo, Diclofenaco ou Terfenadina). A mistura foi, então, agitada com vórtex por cerca de 1-5 min. e centrifugada a cerca de 4.000-5.800 rpm por cerca de 10-15 min. Uma alíquota de 1 µL de sobrenadante foi usada para análise LC- MS/MS.
[00244] Amostras de plasma com diluição de 10 vezes: Uma alíquota de 2 µL de amostra de plasma foi primeiro misturada com 18 µL de plasma em branco, então, 200 µL de ACN contendo 100 ng/mL
IS (por exemplo, Diclofenaco) foram adicionados à mistura. A mistura foi, então, agitada com vórtex por cerca de 10 min. e foi centrifugada a cerca de 5.800 rpm por cerca de 10 min. Uma alíquota de 1 µL de sobrenadante foi usada para análise LC-MS/MS. Método LC/MS MS
[00245] Condições de MS: íon positivo, ESI, detecção de MRM com íons pai e filha, padrão interno Diclofenaco.
[00246] ID de Composto: Compostos 19, 28, 29, 225 ou 418 (controle) Condições de HPLC Método 1: Fase Móvel A: H2O-0,025% de FA-1mM NH4OAc Fase móvel B: MeOH-0,025% FA-1 mM NH4OAC Tempo (min.) Fase Móvel B (%) 0,20 10 0,50 65 1,00 90 1,50 90 1,51 10 2,00 parada Coluna: Xbridge BEH C18 (2,1 × 50 mm, 2,5 µm) Taxa de fluxo: 0,60 mL/min. Temperatura da coluna: 60°C Tempo de retenção: aproximadamente entre 1,0 a 1,4 min. para o(s) analito(s) Diclofenaco: aproximadamente em torno de 1,4 min.
Método 2: Fase Móvel A: 0,05% FA-5 mM NH4OAC Fase Móvel B: 1% FA-Acetonitrila Tempo (min.) Fase Móvel B (%) 0,40 15 1,20 95 1,60 95 1,61 15 2,50 15 Coluna: coluna Kinetex 2,6 µ C18 100A (30 mm * 3,0 mm) Taxa de fluxo: 0,70 mL/min. Temperatura da coluna: temperatura ambiente Tempo de retenção: aproximadamente 1,7 min. para o(s) analito(s) Terfenadina: aproximadamente 1,2 min. Parâmetros Farmacocinéticos (PK)
[00247] Parâmetros farmacocinéticos, incluindo área sob a curva (AUC0-t), concentração plasmática máxima (Cmax), tempo para atingir concentração plasmática máxima (Tmax), biodisponibilidade oral (F%), etc., foram calculados usando software Phoenix (Versão 6.4) e modelo sem compartimento.
[00248] Os resultados dos estudos farmacocinéticos são apresentados na Tabela 3 e nas Figuras 8A-8F.
[00249] Como é evidente na Figura 8F, o composto comparador/de controle (Composto 418), embora tendo perfila de PK razoável após dosagem com a mesma dose oral usada em alguns compostos da invenção (isto é, Dose 2), tem uma queda relativamente abrupta de cerca de 10 vezes na concentração no plasma durante um período de cerca de 24 horas pós dosagem oral.
[00250] Em contraste, conforme ilustrado nas Figuras 8A-8E, as concentrações plasmáticas dos Compostos administrados por PO 19,
28, 29 e 225 no mesmo nível de dose (isto é, Dose 2) foram surpreendentemente sustentadas em um nível mais constante ao longo de todo o curso de cerca de 24 horas após dosagem oral, com redução relativamente mínima na concentração plasmática. Dados semelhantes também foram obtidos (dados não mostrados) ou são esperados para outros compostos da invenção. Coletivamente, esses dados sugerem que os compostos da invenção têm uma biodisponibilidade prolongada ou sustentada, pelo menos ao longo de cerca de 1 dia (24 horas) após a administração de uma dose oral única.
[00251] De fato, dados preliminares (não mostrados aqui) indicaram que certos compostos da invenção, quando administrados a macacos Macaca fascicularis machos obesos e diabéticos em doses selecionadas semelhantes às usadas aqui, pareceram ser eficazes nos macacos em termos de aumento da secreção de insulina, reduzindo nível de glicose no sangue, etc. Tabela 3. Perfis PK de Macaco in vivo Composto N.º Dose oral Cmax Tmax AUC0-24h F% (Unidade (Unidade (h) (Unidades arbitrária) arbitrária) arbitrárias) Composto 19 Dose 1 125 2,7 1130 10,8 Composto 28 Dose 1 3910 3,3 24900 56,1 Composto 29 Dose 2 3.380 1,2 21.800 41,0 Composto 225 Dose 2 184 4,0 1500 9,93 Composto 19a Dose 2 413 8,8 2470 15,5 Composto 418b Dose 2 232 1,7 774 8,17 a. Macacos Macaca fascicularis machos não naïve velhos, obesos e diabéticos b. Composto 418 é o composto de controle.
Exemplo Biológico 5: Dados Comparativos
[00252] Os seguintes oito pares de compostos foram avaliados para comparar seus valores EC50 do ensaio de cAMP (ver Exemplo Biológico 3 acima) em células HEK293T e CHO. Os resultados na Tabela 4 mostram que geralmente compostos tendo um anel C não saturado (com referência à Fórmula (I)) tem valores EC50 que são superiores (isot é, mais baixas) às suas contrapartes correspondentes tendo um anel C saturado. Como valores EC50 são indicativos da concentração de droga que produz estimulação/resposta de cAMP meio máxima, valores EC50 mais baixos indicam que é necessária uma concentração de droga mais baixa para atingir a estimulação/resposta de cAMP meio máxima. Tabela 4. Valores Comparativos de EC50 em células HEK293T e células CHO Estruturas de Composto e Comparadoras EC50 de células EC50 de células HEK293T (M) CHO (M) 5,44E-04 ± 1,53E-02 ± 2,30E-04 0,464E-02 (n=3) (n=6) (Composto A ou Composto 418) 2,19E-04 ± 0,225E-02 ± 0,898E-04 0,0590E-02 (n=16) (n=6) (Composto 19)
5,65E-03 ± 463E-03 ± 0,386E-03 93,1E-03 (n=2) (n=5) (Composto B)
0,517E-03 ± 6,05E-03 ± 0,337E-03 2,64E-03 (n=2) (n=5)
(Composto 222)
1,98E-03 ± 9,58E-02 ± 1,30E-03 1,49E-02 (n=2) (n=5) (Composto C)
1,80E-03 ± 7,37E-02 ± 1,18E-03 1,47E-02 (n=6) (n=5) (Composto 35)
1,05E-02 ± 0,289 ± 0,439E-02 0,0530 (n=2) (n=5) (Composto D)
0,294E-02 ± 0,136 ± 0,0798E-02 0,0326 (n=2) (n=5) (Composto 34)
1,59E-02 ± 0,924 ± 0,768E-02 0,230 (n=2) (n=4) (Composto E)
0,985E-02 ± 0,260 ± 0,866E-02 0,0380 (n=2) (n=5) (Composto 23)
4,12E-04 ± 7,65E-03 (n=1) 3,73E-04 (n=2)
(Composto F)
3,28E-03 (n=1) 3,93E-04 ± 0,698E-04 (n=2)
(Composto 221)
8,58E-03 ± 0,105 ± 1,10E-03 0,0327 (n=2) (n=3) (Composto G)
3,94E-03 ± 0,0426 ± 0,971E-03 0,0115 (n=13) (n=8) (Composto 28)
3,00E-04 ± 3,50E-03 ± 0,327E-04 0,700E-03 (n=2) (n=3) (Composto H) 1,68E-04 ± 3,86E-03 ± 0,488E-04 1,27E-03 (n=4) (n=6) (Composto 225) Exemplo 6 Síntese de Composto Ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilamino)piridin-2-il)pipera- zin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-ácido benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 1) Composto 1 t-BuONa, tolueno 100ºC, 12 h Composto 1 Etapa 1
[00253] À solução de 2, 6-dicloropiridina (10,0 g, 67,6 mmols) em DMSO (100 mL) foi adicionado terc-butil piperazina-1-carboxilato (15,1 g, 81,1 mmols). A mistura foi agitada a 110°C durante a noite. A mistura foi diluída com água, extraída com EA (30 mLx3), lavada com salmoura saturada, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto em bruto foi recristalizado de éter de petróleo (200 mL) para dar terc-butil 4-(6-cloropiridin-2-il) piperazina-1-carboxilato (9,5 g, rendimento de 48%) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 298,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,78 min. Etapa 2
[00254] À solução de (4-cloro-2-fluorofenil)metanamina (176 mg, 1,1 mmol) em tolueno (8 mL) foi adicionado terc-butil 4-(6-cloropiridin- 2-il)piperazina-1-carboxilato (297 mg, 1 mmol), Pd2(dba)3 (46 mg, 0,05 mmol), BINAP (62 mg, 0,1 mmol) e t-BuONa (288 mg, 3 mmols) sob atmosfera de N2. A mistura de reação foi agitada a 90°C por 12 horas. 50 mL de água gelada foram adicionados para extinguir a reação. A solução foi extraída com EA (50 mLx3), lavada com salmoura e seca sobre Na2SO4. Após evaporação do solvente, o produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna (PE/EA = 2/1) para dar terc-butil 4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilamino) piridin-2-il) piperazina-1-carboxilato (320 mg, 76%) como um óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 420,8; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,75 min. Etapa 3
[00255] À solução de 4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilamino) piridin-2-il) piperazina-1-carboxilato de terc-butila (320 mg, 0,8 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (10 mL) a 0°C. A mistura de reação foi agitada a 0°C por duas horas 10 mL de água gelada foram adicionados para extinguir a reação. Aq. NaHCO3 foi adicionado para ajustar o pH para 9, então, a solução foi extraída com EA (40 mLx3), lavada com salmoura e seca sobre Na2SO4. Após evaporação de solvente, o produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna (PE/EA = 2/1) para dar N-(4-cloro-2-fluorobenzil)-6-(piperazin-1-il) piridin-2-amina (120 mg, 43%) como um óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 321,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,72 min.
Etapa 4
[00256] À solução de N-(4-cloro-2-fluorobenzil)-6-(piperazin-1- il)piridin-2-amina (120 mg, 0,4 mmol) em DMF (6 mL) foi adicionado (S)-terc-butil 2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxilato (100 mg, 0,3 mmol, a síntese é divulgada no pedido internacional WO/2018/109607, que é aqui incorporado por referência); Os valores da rotação óptica, [α]25,0°C 589 nm = -25,02 (c = 0,1, MeOH)) e K2CO3 (415 mg, 1,1 mmol). A mistura de reação foi agitada a 60°C por 12 horas 60 mL de água gelada foram adicionados para extinguir a reação. A solução foi extraída com EA (30 mLx3), lavada com salmoura e seca sobre Na2SO4. Após evaporação de solvente, o produto bruto foi purificado com cromatografia de coluna (PE/EA = 2/1) para dar (S)-terc-butil-2-((4- (6-(4-cloro-2-fluorobenzilamino) piridin-2-il) piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxilato (140 mg, 60%) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 620,7; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,77 min. Etapa 5
[00257] À solução de (S)-terc-butil-2-((4-(6-(4-cloro-2- fluorobenzilamino)piridin-2-il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)- 1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (120 mg, 0,1 mmol) em DCM (6 mL) foi adicionado TFA (3 mL) a 0°C. A mistura de reação foi agitada a 0°C por 6 horas. Após evaporação de solvente, o produto bruto foi purificado com HPLC para dar ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2- fluorobenzilamino) piridin-2-il) piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)- 1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (60 mg, 73%) como um sólido + amarelo. LCMS: [M+H] = 566,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,48 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,27 (d, J = 0,8 Hz, 1 H), 7,82-7,80 (m, 1 H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,38-7,34 (m, 2 H), 7,23-7,15 (m, 2 H), 6,83 (t, J = 6,4 Hz, 1 H), 5,90-5,82 (m, 2 H), 5,11-5,08 (m, 1 H), 4,79
(dd, J = 7,2, 15,2 Hz, 1 H), 4,64 (dd, J = 2,4, 15,2 Hz, 1 H), 4,51-4,46 (m, 1 H), 4,41-4,35 (m, 3 H), 3,97-3,75 (m, 2 H), 2,71-2,67 (m, 1 H), 2,48-2,40 (m, 8H). Ácido (S)-2-((4-(6-((4-cloro-2-fluorobenzil)(metil)amino)piridin-2- il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 2) Composto 2
[00258] Preparado de maneira análoga ao Composto 1 LCMS: [M+H]+ = 579; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,70 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,30 (s, 1 H), 7,99-7,97 (m, 1 H), 7,66 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,35-7,32 (m, 1 H), 7,17-7,08 (m, 3 H), 6,01 (dd, J = 8,0, 26,4 Hz, 1 H), 5,27 (dd, J = 4,8, 7,2 Hz, 1 H), 4,91-4,89 (m, 1 H), 4,88-4,86 (m, 1 H), 4,79 (s, 2 H), 4,73 (dd, J = 2,4, 15,2 Hz, 1 H), 4,65- 4,63 (m, 1 H), 4,49-4,46 (m, 1 H), 4,04-3,89 (m, 2 H), 3,46-3,44 (m, 4 H), 3,04 (s, 3 H), 2,82-2,77 (m, 1 H), 2,59-2,53 (m, 5H). Ácido (S)-2-((4-(8-(4-cloro-2-fluorobenzil)-5,6,7,8-tetra-hidro-1,8- naftiridin-2il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (Composto 3) Composto 3
[00259] Preparado de maneira análoga ao Composto 5 LCMS: [M+H]+ = 605,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,45 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,29 – 8,25 (brs, 1 H), 7,80 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1 H), 7,64 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,37 (dd, J = 10,1, 1,7 Hz, 1 H), 7,26 – 7,19 (m, 2 H), 7,01 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 5,90 (d, J = 8,0 Hz, 1
H), 5,12 – 5,04 (m, 1 H), 4,77 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1 H), 4,71 (s, 2 H), 4,66 – 4,59 (m, 1 H), 4,52 – 4,44 (m, 1 H), 4,40 – 4,32 (m, 1 H), 3,93 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,75 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,28 – 3,20 (brs, 4 H), 2,72 – 2,64 (m, 1 H), 2,59 (t, J = 6,0 Hz, 2 H), 2,49 – 2,31 (m, 7H), 1,89 – 1,80 (m, 2 H). Ácido (S)-2-((4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzil)-3,4-di-hidro-2H-pirido [3,2-b][1,4]oxazin-6-il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 4) Composto 4
[00260] Preparado de maneira análoga ao Composto 5 LCMS: [M+H]+ = 607,6; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mmol) = 1,63 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,29 – 8,25 (brs, 1 H), 7,80 (dd, J = 8,4, 1,3 Hz, 1 H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,40 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1 H), 7,32 (t, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,23 (dd, J = 8,3, 1,9 Hz, 1 H), 6,85 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 5,90 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 5,13 – 5,05 (m, 1 H), 4,78 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1 H), 4,71 (s, 2 H), 4,63 (dd, J = 12,8 Hz, 1 H), 4,51 – 4,45 (m, 1 H), 4,40 – 4,34 (m, 1 H), 4,12 – 4,07 (m, 2 H), 3,95 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,76 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,25 – 3,15 (brs, 6H), 2,72 – 2,64 (m, 1 H), 2,57 – 2,52 (m, 1 H), 2,50 – 2,33 (m, 4 H).
Ácido 2-((4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzil)-3,4-di-hidro-2h-pirido [3,2- b][1,4]oxazin-6-il)piperazin-1-il)metil)-1-((1-metil-1h-imidazol-2- il)metil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 5) Composto 5 Dioxano Composto 5 Etapa 1
[00261] A uma solução de 6-bromo-3,4-di-hidro-2h-pirido[3,2-b][1,4] oxazina (0,5 g, 2,3 mmols) em DMF (10 mL) foram adicionados 1- (bromometil)-4-cloro-2-fluorobenzeno (0,6 g, 2,5 mmols) e Cs2CO3 (2,3 g, 6,9 mmols). A mistura foi agitada a 25°C por 16 horas. A solução foi diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etila (20 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mLx3), secos sobre Na2SO4 e concentrados para dar produto em bruto, que foi purificado por coluna de cromatografia sílica gel (eluindo com PE: EA = 10: 1) para dar 6-bromo-4-(4-cloro-2-fluorobenzil)-3,4-di-hidro-2h- pirido[3,2-b][1,4]oxazina (0,72 g, 72,7% de rendimento) como sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 356,8; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,91 min.
Etapa 2
[00262] A uma solução de 6-bromo-4-(4-cloro-2-fluorobenzil)-3,4-di- hidro-2h-pirido[3,2-b][1,4]oxazina (200 mg, 0,56 mmol) em 1,4-Dioxano (5 mL) foram adicionados terc-butil piperazina-1-carboxilato (135 mg, 0,73 mmol), JohnPhos (16 mg, 0,06 mmol), Pd2(dba)3 (26 mg) e Cs2CO3 (292 mg, 0,90 mmol, 1,6 eq). A mistura foi agitada a 100°C por 16 horas sob nitrogênio. A reação foi resfriada até RT, então, diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL × 3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL × 3), secos sobre Na2SO4 e concentrados em vácuo para dar o produto bruto. O produto em bruto foi purificado por coluna de cromatografia em gel de sílica (eluindo com PE:EA = 5:1) para dar o 4-(4-(4-cloro-2- fluorobenzil)-3,4-di-hidro-2h-pirido[3,2-b][1,4]oxazin-6-il)piperazina-1- carboxilato de terc-butila (0,1 g, 0,22 mmol, 37,9% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 462,7; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,13 min. Etapa 3
[00263] Uma solução de 4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzil)-3,4-di-hidro- 2h-pirido[3,2-b][1,4]oxazin-6-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (0,1 g, 0,22 mmol, 1,0 eq) em TFA (1 mL) e DCM (5 mL) foi agitada a 25°C por duas horas. A mistura foi diluída com solução de NaHCO3 aq. saturada até o pH ser ajustado até 7 e extraída com DCM (50 mL × 3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL × 3), secos sobre Na2SO4 e concentrados em vácuo para dar 4-(4-cloro-2- fluorobenzil)-6-(piperazin-1-il)-3,4-di-hidro-2h-pirido[3,2-b][1,4] oxazina (65 mg, rendimento de 70%) como sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 362,8; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,45 min. Etapa 4
[00264] Uma mistura de 4-(4-cloro-2-fluorobenzil)-6-(piperazin-1-il)- 3,4-di-hidro-2h-pirido[3,2-b][1,4]oxazina (40 mg, 0,1 mmol), terc-butil 2-
(clorometil)-1-((1-metil-1h-imidazol-2-il)metil)-1h-benzo[d]imidazol-6- carboxilato (32 mg, 0,13 mmol, a síntese é divulgada no pedido internacional WO/2018/109607) e K2CO3 (132,6 mg, 0,96 mmol) em DMF (5 mL) foi aquecida até 60°C, agitada por 3 horas sob atmosfera de N2. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A mistura foi extraída com EA (10 mL × 2), a camada orgânica foi seca em Na2SO4, o filtrado foi concentrado para dar o produto bruto, que foi purificado por biotage flash (eluindo com EA:PE = 1:10) para dar o produto desejado terc-butil 2-((4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzil)-3,4-di-hidro-2h- pirido[3,2-b][1,4]oxazin-6-il)piperazin-1-il)metil)-1-((1-metil-1h-imidazol- 2-il)metil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (23 mg, 0,03 mmol, rendimento de 30%) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 687,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,85 min. Etapa 5
[00265] Uma solução de 2-((4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzil)-3,4-di- hidro-2h-pirido[3,2-b][1,4]oxazin-6-il)piperazin-1-il)metil)-1-((1-metil-1h- imidazol-2-il)metil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxilato de terc-butila (23 mg, 0,03 mmol) em DCE (3 mL) e TFA (1 mL) foi agitada por uma hora. LCMS mostrou que a reação foi concluída. O solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi purificado por Prep-HPLC para dar o produto desejado (6 mg, rendimento de 35%). LCMS: [M+H]+ = 631,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,31 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,20 – 8,17 (brs, 1 H), 8,04 (dd, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,84 – 7,80 (m, 1 H), 7,30 – 7,25 (m, 2 H), 7,19 – 7,12 (m, 2 H), 7,03 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 6,95 – 6,90 (m, 1 H), 6,01 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 5,93 (s, 2 H), 4,75 (s, 2 H), 4,30 (s, 2 H), 4,14 – 4,20 (m, 2 H), 3,93 (s, 3 H), 3,53 – 3,46 (m, 2 H), 3,29 – 3,20 (brs, 4 H), 2,94 – 2,86 (m, 4 H).
Ácido (S)-2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-6-oxo-1,6-di-hidropiri- dazin-3-il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imi- dazol-6-carboxílico (Composto 6) Composto 6 1,4- 120ºC, 14h DMF, 80ºC, 8 h dioxano, Etapa 4 100ºC, 14 h rt, 2 h 3h 3h Composto 6 Etapa 1
[00266] A uma solução de ácido 2-(4-cloro-2-fluorofenil) acético (1,8 g, 9,6 mmols) em THF (20 mL) foi adicionado LAH (19 mL, 19,1 mmols). A mistura foi agitada à RT por 3 h. A reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL x 3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL)×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados em vácuo para dar produto bruto 2-(4- cloro-2-fluorofenil)etanol (1,5 g, 89% de rendimento) como um óleo amarelo. LCMS: [M-18+H]+ = 157,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,61 min. Etapa 2
[00267] A uma solução de 2-(4-cloro-2-fluorofenil) etanol (1,5 g, 8,6 mmols) em DCM (30 mL) foram adicionados anidrido metanossulfônico (2,2 g, 12,9 mmols) e TEA (3,6 mL, 25,8 mmols). A mistura foi agitada à RT por 8 horas. A reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados em vácuo para dar produto bruto que foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (PE:EA = 10:1) para dar 4-cloro- 2-fluorofenetil metanossulfonato (1,2 g, 55% de rendimento) como óleo amarelo. LCMS: [M+Na]+ = 275,0, Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,79 min. Etapa 3
[00268] A uma solução de 3,6-dicloropiridazina (1,0 g, 6,7 mmols) em 1,4-dioxano (20 mL) foram adicionados benzil piperazina-1- carboxilato (1,6 g, 7,4 mmols) e DIPEA (3,6 mL, 20,1 mmols). A mistura foi agitada a 100°C por 16 horas. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (50 mLx3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mLx3), secos sobre Na2SO4 e concentrados em vácuo para dar o produto desejado benzil 4-(6-cloropiridazin-3-il)piperazina-1-carboxilato (1,2 g, 55% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 332,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,61 min. Etapa 4
[00269] A uma solução de 4-(6-cloropiridazin-3-il) piperazina-1- carboxilato de benzila (1,0 g, 3,0 mmols) em HOAc (75 mL) foi adicionado NaOAc (0,25 g, 3,05 mmols). A mistura foi agitada a 120°C por 16 horas. A reação foi concentrada em vácuo, diluída com
NaHCO3 (1 N, 30 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL×3), Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados em vácuo para dar benzil 4-(6-oxo-1,6- di-hidropiridazin-3-il)piperazina-1-carboxilato (900 mg, 95% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 314,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,46 min. Etapa 5
[00270] A uma solução de 4-cloro-2-fluorofenetil metanossulfonato (80 mg, 0,32 mmol) em DMF (10 mL) foi adicionado benzil 4-(6-oxo-1, 6-di-hidropiridazin-3-il)piperazina-1-carboxilato (100 mg, 0,32 mmol) e K2CO3 (132 mg, 1,0 mmol). A mistura foi agitada a 80°C por 3 horas. A reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados em vácuo para dar produto bruto que foi purificado por Prep-TLC (DCM:MeOH = 10:1) para dar benzil 4-(1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-6-oxo-1, 6-di-hidropiridazin-3-il) piperazina- 1-carboxilato (100 mg, 67% de rendimento) como um óleo marrom. LCMS: [M+H]+ = 471,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,89 min. Etapa 6
[00271] A uma solução de 4-(1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-6-oxo-1,6-di- hidropiridazin-3-il)piperazina-1-carboxilato de benzila (400 mg, 0,9 mmol, 1,0 eq) em AcOH (10 mL), foi adicionado HBr/AcOH (33%) (3 mL, 12,37 mmols). A mistura foi agitada à RT por uma hora. A reação foi diluída com NaHCO3 (100 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados em vácuo para dar produto em bruto, que foi purificado por Prep-HPLC (NH4HCO3) para dar 2-(4- cloro-2-fluorofenetil)-6-(piperazin-1-il)piridazin-3(2H)-ona (60 mg, rendimento de 21%) como um sólido marrom. LCMS: [M+H]+ = 336,7; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,41 min.
Etapa 7
[00272] A uma solução de 2-(4-cloro-2-fluorofenetil)-6-(piperazin-1- il)piridazin-3(2H)-ona (60 mg, 0,18 mmol, 1,0 eq) em 1,4-dioxano (10 mL) foi adicionado (S)-terc-butil 2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h- benzo[d]imidazol-6-carboxilato (60 mg, 0,179 mmol;) e DIPEA (69 mg, 0,54 mmol). A mistura foi agitada a 80°C por 3 horas. A reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL×3), os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados em vácuo para dar o produto em bruto que foi purificado por Prep-TLC (DCM:MeOH = 10:1) para dar (S)-terc-butil 2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-6-oxo-1,6-di-hidropirida- zin-3-il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6- carboxilato (80 mg, 70% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 637,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,76 min. Etapa 8
[00273] A uma solução de 2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-6-oxo- 1,6-di-hidropiridazin-3-il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h- benzo[d]imidazol-6-carboxilato de (S)-terc –butila (80 mg, 0,13 mmol) em DCM (8 mL) foi adicionado TFA (1 mL). A mistura foi agitada à RT por 3 h. A reação foi concentrada em vácuo para dar produto em bruto, que foi purificado por Prep-HPLC para dar ácido (S)-2-((4-(1-(4-cloro- 2-fluorofenetil)-6-oxo-1,6-di-hidropiridazin-3-il)piperazin-1-il) metil)-1- (oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (22,8 mg, rendimento de 32%) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 581,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,35 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,37-8,36 (brs, 1 H), 8,00 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,70 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,42 (d, J = 10,0 Hz, 1 H), 7,11 (ddt, J = 10,1, 8,1, 5,1 Hz, 3 H), 6,84 (d, J = 9,9 Hz, 1 H), 5,27 (td, J = 7,2, 4,9 Hz, 1 H), 4,88 (d, J = 7,1 Hz, 1 H), 4,74 (dd, J = 15,4, 2,5 Hz, 1 H), 4,66 (dd, J = 13,8, 7,9 Hz, 1 H), 4,48 (dt, J = 9,1, 5,9 Hz, 1 H), 4,29 (t, J
= 6,6 Hz, 2 H), 4,06 (d, J = 13,7 Hz, 1 H), 3,95 (d, J = 13,7 Hz, 1 H), 3,20 (t, J = 4,7 Hz, 4 H), 3,11 (t, J = 6,5 Hz, 2 H), 2,88 – 2,77 (m, 1 H), 2,67 – 2,48 (m, 5H). Ácido (S)-2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-6-oxo-1,6-di-hidropiri- dazin-3-il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetano-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imi- dazol-6-carboxílico (Composto 7) Composto 7
[00274] Preparado de maneira análoga ao Composto 6 LCMS: [M+H]+ = 567,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,28 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,23-8,22 (brs, 1 H), 7,87 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1 H), 7,57 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,38 (d, J = 10,0 Hz, 1 H), 7,18 (t, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,08 (ddd, J = 10,2, 9,1, 1,8 Hz, 2 H), 6,80 (d, J = 10,0 Hz, 1 H), 5,21 – 5,11 (m, 3 H), 4,77 – 4,73 (m, 1 H), 4,61 (dd, J = 15,4, 2,6 Hz, 1 H), 4,55 – 4,47 (m, 1 H), 4,35 (dt, J = 9,1, 5,9 Hz, 1 H), 3,93 (d, J = 13,7 Hz, 1 H), 3,82 (d, J = 13,7 Hz, 1 H), 3,22-3,21 (brs, 4 H), 2,69 (dt, J = 14,1, 8,2 Hz, 1 H), 2,57 – 2,47 (m, 4 H), 2,44 – 2,36 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetano-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 8) Composto 8 dioxano, 100ºC Composto 8 Etapa 1
[00275] A uma solução de 2,3-dicloropiridina (5,0 g, 34 mmols) em MeOH (50 mL) foi adicionado NaOMe (54 mL, 1 N em MeOH). A mistura resultante foi refluxada por 5 horas. LCMS mostrou a reação concluída. A mistura foi derramadas em água gelada e foi ajustada para pH 5~6 por HCl (1 N em água), extraída com EA (50 mL×3). As camadas orgânicas combinadas foram coletadas e concentradas para dar o produto desejado 3-cloro-2-metoxipiridina (4 g, rendimento 81%) como um óleo amarelo, que foi usado na próxima etapa sem purificação adicional. Etapa 2
[00276] Uma mistura de 3-cloro-2-metoxipiridina (500 mg, 3,49 mmols), terc- butil piperazina-1-carboxilato (845 mg, 4,53 mmols), Johnphos (208 mg, 0,69 mmol), Pd2(dba)3 (320 mg) e Cs2CO3 (3,45 g, 10,47 mmols) em dioxano (20 mL) foi agitada a 100°C por 16 horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A mistura foi diluída com EA (50 mL), filtrada através de uma almofada de celite, o filtrado foi concentrado para dar o produto em bruto que foi purificado por biotage flash (EA/PE = 1/30) para dar o produto desejado terc-butil 4-(2- metoxipiridin-3-il)piperazina-1-carboxilato (1 g, rendimento 96%). LCMS: [M+H]+ = 294,0; Tempo de retenção = 1,62 min.
Etapa 3
[00277] Uma solução de 4-(2-metoxipiridin-3-il) piperazina-1- carboxilato de terc-butila (1 g, 3,41 mmols) em HBr (40% em AcOH, 10 mL) foi submetida a refluxo durante a noite. Depois de resfriado até a RT, o sólido foi coletado. O sólido foi dissolvido em DCM (15 mL), então, Et3N (3,1 mL, 4 eq) e di-terc-butil dicarbonato (2,43 g, 2 eq) foram adicionados em sequência e a mistura resultante foi agitada à RT por duas horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A solução foi concentrada e purificada por cromatografia de coluna de sílica gel (EA/PE = 1/4) para dar o produto desejado terc-butil 4-(2- hidroxipiridin-3-il)piperazina-1-carboxilato (600 mg, rendimento 63,5%) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 280,0; Tempo de retenção = 1,27 min. Etapa 4
[00278] A uma solução de 4-(2-hidroxipiridin-3-il) piperazina-1- carboxilato de terc-butila (400 mg, 1,43 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionado NaH (68 mg, 60% em óleo, 1,2 eq) e a mistura resultante foi agitada à RT por uma hora. Então, 4-cloro-2-fluorofenetil metanossulfonato (722 mg) foi adicionado de uma só vez. A solução de reação foi agitada em RT durante a noite. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A mistura de reação foi filtrada e purificada por prep-HPLC para dar o produto desejado terc-butil 4-(1-(4-cloro-2- fluorofenetil)-2-oxo-1, 2-di-hidropiridin-3-il)piperazina-1-carboxilato (17 mg, rendimento 2,7%) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 435,9; Tempo de retenção= 1,75 min. Etapa 5
[00279] A uma solução de 4-(1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-2-oxo-1, 2- di-hidropiridin-3-il) piperazina-1-carboxilato de terc-butila (17 mg, 0,039 mmol) em DCM (1,5 mL) foi adicionado TFA (0,5 mL). A mistura foi agitada à RT por uma hora. LCMS mostrou que a reação foi concluída.
A solução foi derramada em sat.NaHCO3 e extraída com DCM (20 mL×3), as camadas orgânicas combinadas foram secas por Na2SO4, filtradas e concentradas in vacuo para dar o produto desejado 1-(4- cloro-2-fluorofenetil)-3-(piperazin-1-il)piridin-2(1H)-ona (12 mg, rendimento 92,3%) como óleo marrom. LCMS: [M+H]+ = 336,0; Tempo de retenção = 1,31 min. Etapa 6
[00280] Uma mistura de 1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-3-(piperazin-1- il)piridin-2(1H)-ona (12 mg, 0,035 mmol), terc-butil (S)-2-(clorometil)-1- (oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (15 mg, 0,041 mmol) e K2CO3 (27 mg, 0,020 mmol) em CH3CN (3 mL) foi aquecida até 60°C e agitada por duas horas sob N2. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A solução foi derramada em água e extraída com DCM (20 mL×3), as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para dar o produto desejado (S)- terc-butil 2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxilato (20 mg, rendimento 90%) que foi usado na próxima etapa diretamente sem purificação adicional. LCMS: [M+H]+ = 636,0; Tempo de retenção= 1,79 min. Etapa 7
[00281] A uma solução de 2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxilato de (S)-terc-butila(20 mg, 0,03 mmol) em DCM (1,5 mL) foi adicionado TFA (0,5 mL). A mistura foi agitada à RT por duas horas. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A solução foi derramada em NaHCO3 aq. saturada e extraída com DCM (20 mL×3), as camadas orgânicas combinadas foram secas por Na2SO4, filtradas e concentradas. O produto em bruto foi purificado por prep-HPLC para dar o produto desejado ácido (S)-2-((4-(1-(4-cloro-2-
fluorofenetil)-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)piperazin-1-il)metil)-1- (oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (3,3 mg, rendimento 18%) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 579,8; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,21 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,25-8,29 (brs, 1 H), 7,80 (dd, J = 7,4, 1,4 Hz, 1 H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,35 (dd, J = 7,2, 1,6 Hz, 1 H), 7,26 (t, = 8,4 Hz, 1 H), 7,20 (dd, J = 6,4, 1,4 Hz, 1 H), 7,10 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 6,65 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 6,06 (t, J = 8,0 Hz, 1 h), 5,08-5,10 (m, 1 H), 4,62-4,78 (m, 2 H), 4,36-4,49 (m, 2 H), 4,06-4,10 (m, 2 H), 3,98 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,80 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 2,95-3,00 (m, 6H), 2,57-2,67 (m, 4 H), 2,39-2,44 (m, 2 H). Ácido (S)-2-((4-(2-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)pirimidin-4- il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 9) Composto 9 Etapa 1
[00282] Uma solução de 2,4-dicloropirimidina (1 g, 6,76 mmols), terc-butil piperazina-1-carboxilato (1,38 g, 7,43 mmols) e TEA (1,02 g, 10,14 mmols) em DMF (10 mL) foi agitada em banho de gelo por uma hora. Então, a reação foi agitada à rt por 18 horas. A mistura foi diluída com água (40 mL), extraída com EA (80 mL x 3). A camada orgânica foi combinada e seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna flash em sílica gel (PE:EA/0%-26%) para dar terc-butil 4-(2-cloropirimidin-4-il) piperazina- 1-carboxilato (1,98 g, 98%) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 299,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,70 min. Etapa 2
[00283] A uma solução de 4-(2-cloropirimidin-4-il) piperazina-1- carboxilato de terc-butila (1 g, 3,36 mmols), (4-cloro-2- fluorofenil)metanol (662 g, 3,69 mmols) em Tolueno (30 mL) foi adicionado Cs2CO3 (2,18 g, 6,71 mmols), BINAP (230 mg, 0,336 mmol) e Pa2(dba)3 (172 mg, 0,168 mmol) sob N2 a 120°C por 18 horas. A mistura foi filtrada e concentrada, purificada por cromatografia flash em sílica gel (PE: EA/0% ~28%) para dar terc-butil 4-(2-(4-cloro-2- fluorobenzilóxi) pirimidin-4-il) piperazina-1-carboxilato (910 mg, 80%) como um sólido marrom claro. LCMS: [M+H]+ = 423,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,50 min. Etapa 3
[00284] Uma solução de 4-(2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) pirimidin-4- il) piperazina-1-carboxilato de terc-butila (905 mg, 2,14 mmols) em HCl/dioxano (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas. A reação foi filtrada para dar sal de ácido de 2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)- 4-(piperazin-1-il) pirimidina clorídrico (745 mg, 97% de rendimento) como um sólido esbranquiçado. LCMS: [M+H]+ = 323,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,55 min. Etapa 4
[00285] A uma solução de sal de ácido 2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)- 4-(piperazin-1-il) pirimidina clorídrico (37 mg, 0,107 mmol), (S)-terc- butil 2-(clorometil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-benzo[d]imidazol-5- carboxilato (30 mg, 0,0893 mmol) e K2CO3 (19 mg, 0,134 mmol) em
DMF (3 mL) foi agitada a 60°C por duas horas. A mistura foi diluída com água (5 mL) e extraída com EA (30 mLx3), a camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada, purificada por prep-TLC (PE:EA/1:5) para dar (S)-terc-butil 2-((4-(2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) pirimidin-4-il) piperazin-1-il) metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-benzo[d]imi- dazol-5-carboxilato (43 mg, 81%) como um óleo incolor. LCMS: [M+H]+ = 623,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,04 minutos. Etapa 5
[00286] A uma solução de 2-((4-(2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) pirimi- din-4-il) piperazin-1-il) metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-benzo[d]imidazol- 5-carboxilato de (S)-terc-butila (47 mg, 0,08 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (0,8 mL) à rt. A mistura foi agitada a por uma hora. A reação foi evaporada, dissolvida em ACN (4 mL), ajustada para pH = 7~8 com NaHCO3 aquoso sat. A reação foi evaporada, dissolvida em THF (1 mL), purificada por prpe-HPLC (NH4HCO3) para dar ácido (S)- 2-((4-(2-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)pirimidin-4-il)piperazin-1-il)metil)-1- (oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (15,6 mg, 36%) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 567,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,37 min. 1 H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,21-8,20 (brs, 2 H), 8,06 (d, J = 6,4 Hz, 2 H), 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,47 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,11 (dd, J = 8,4 Hz, 2 H), 6,18 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 5,37 (s, 2 H), 5,23-5,22 (brs, 1 H), 4,72-4,70 (m, 1 H), 4,66-4,60 (m, 1 H), 4,38-4,34 (m, 1 H), 4,12 (d, J = 9,2 Hz, 2 H), 3,66 (s, 4 H), 2,77-2,70 (m, 1 H), 2,61 (s, 4 H), 2,49-2,40 (m,2 H).
Ácido (S)-2-((4-(2-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)pirimidin-4-il) piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 10) Composto 10
[00287] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 558,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,26 min. 1 H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,21-8,20 (brs, 2 H), 8,07 (t, J = 9,6 Hz, 2 H), 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,68 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,44 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7,35 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 6,19 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 5,45 (s, 2 H), 5,25-5,23 (m, 1 H), 4,69-4,68 (brs, 2 H), 4,66-4,60 (m, 1 H), 4,39-4,34 (m, 1 H), 4,10 (dd, J = 13,2 11,2 Hz, 2 H), 3,64 (s, 4 H), 2,77-2,72 (m, 1 H), 2,57 (s, 4 H), 2,49-2,40 (m, 2 H). Ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)pirazin-2-il)piperazin- 1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 11) Composto 11
[00288] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M +H]+ = 566,9; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,90 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,28 (s, 1 H), 7,87 – 7,76 (m, 2 H), 7,65 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,59 – 7,43 (m, 3 H), 7,31 (dd, J = 8,3, 1,7 Hz, 1 H), 5,34 (s, 2 H), 5,10 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 4,80 (dd, J = 15,3, 7,2 Hz, 1 H), 4,66 (d, J = 12,7 Hz, 1 H), 4,49 (dd, J = 13,6, 7,7 Hz, 1 H),
4,38 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1 H), 3,99 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,82 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,54-3,53 (brs, 4 H), 2,74 – 2,61 (m, 1 H), 2,61 – 2,53 (m, 4 H), 2,50 - 2,42 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((4-(6-(4-ciano-2-fluorobenzilóxi)pirazin-2-il)piperazin- 1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 12) Composto 12
[00289] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 558,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,18 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,28 (s, 1 H), 7,90 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 7,85 – 7,78 (m, 2 H), 7,73 - 7,71 (m, 2 H), 7,65 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,55 (s, 1 H), 5,43 (s, 2 H), 5,14 – 5,03 (m, 1 H), 4,80 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1 H), 4,65 (d, J = 12,7 Hz, 1 H), 4,49 (dd, J = 13,5, 7,8 Hz, 1 H), 4,38 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1 H), 3,98 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,81 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,51-3,50 (brs, 4 H), 2,78 – 2,63 (m, 1 H), 2,59 – 2,51 (m, 4 H), 2,44 – 2,35 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-1h-pirrolo[2,3-b]piridin-6- il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 13) Composto 13
Etapa 1
[00290] A uma solução de (4-cloro-2-fluorofenil) metanol (3,0 g, 18,69 mmols) em DCM (40 mL) foi adicionado PBr3 (1,2 mL, 13,1 mmols) a 0°C. A mistura foi agitada à RT por 1,5 h. TLC mostra que a reação foi concluída. A reação foi extinta por água (20 mL) a 0°C, extraída com DCM (50 mLx3). Os orgânicos combinados foram lavados com NaHCO3 saturado e salmoura (20 mLx3), secos sobre Na2SO4 e concentrados em vácuo para dar o produto desejado (3,0 g, 73% de rendimento) como óleo amarelo. Etapa 2
[00291] A uma solução de 1-(bromometil)-4-cloro-2-fluorobenzeno (1,0 g, 5,08 mmols) em DMF (80 mL) foi adicionado Cs2CO3 (5,0 g, 15,3 mmols) e 6-bromo-1h-pirrolo[2,3-b]piridina (1,4 g, 6,1 mmols). A mistura foi agitada a 65°C durante a noite. TLC mostrou que a reação estava completa. A reação foi extinta por água (30 mL), extraída com acetato de etila (50 mLx3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (30 mLx3), secos sobre Na2SO4 e concentrados em vácuo para dar produto bruto que foi purificado por coluna de sílica gel (PE: EA = 20: 1) para obter o produto desejado (1,0 g, 59% de rendimento) como sólido amarelo. Etapa 3
[00292] A uma solução de 6-bromo-1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-1h- pirrolo[2,3-b]piridina (1 g, 2,94 mmols, 1,0 eq) em tolueno (50 mL) foi adicionado terc-butil piperazina-1-carboxilato (657 mg, 3,53 mmols),
Cs2CO3 (2,9 g, 8,9 mmols), Pd2(dba)3 (269 mg, 0,29 mmol) e Johnphos (175 mg, 0,59 mmol). A mistura foi agitada a 100°C durante a noite. A mistura de reação foi processada adicionando NH4Cl aq. saturado e extraída com acetato de etila (100 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados em vácuo para dar produto bruto que foi purificado por coluna de sílica gel (PE:EA = 20:1) para obter o produto desejado (100 mg, rendimento de 8%) como sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 444,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,33 minutos. Etapa 4
[00293] A solução de 4-(1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-1h-pirrolo[2,3- b]piridin-6-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butila (100 mg, 0,23 mmol) em HCl/dioxano (4 N, 10 mL) foi agitada a 25°C por 0,5 h. A mistura foi concentrada para obter o produto desejado (60 mg, 80% de rendimento) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 344,7; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,49 min. Etapa 5
[00294] A uma solução de 1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-6-(piperazin-1- il)-1h-pirrolo[2,3-b]piridina (34 mg, 0,01 mmol, 1,1 eq) em 1,4-dioxano (3 mL) foi adicionado DIPEA (1 mL, 1 mmol) e terc-butil (S)-2- (clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (30 mg, 0,09 mmol), A mistura foi agitada a 80°C durante a noite. A reação foi purificada por Prep-TLC (PE:EA = 1:1, Rf = 0,25) e, em seguida, purificada por Prep-HPLC para obter o produto desejado (20 mg, 30% de rendimento) como sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 645,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,00 min. Etapa 6
[00295] Uma solução de (S)-2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-1h- pirrolo[2,3-b]piridin-6-il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h- benzo[d]imidazol-6-carboxilato de terc-butila (20 mg, 0,03 mmol) em
TFA (1 mL) e DCE (6 mL) foi agitada à RT por duas horas. A mistura foi neutralizada até pH ~ 7 por amônia aquosa (0,1 mL) e purificada por Prep-HPLC para obter o produto desejado (14,1 mg, 79,9% de rendimento) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 589,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,56 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,27 (s, 1 H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1 H), 7,73 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 7,65 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,43 (dd, J = 10,0, 1,7 Hz, 1 H), 7,24 – 7,16 (m, 3 H), 6,66 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 6,30 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 5,33 (s, 2 H), 5,10 (dt, J = 7,3, 5,0 Hz, 1 H), 4,81 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1 H), 4,66 (dd, J = 15,2, 2,5 Hz, 1 H), 4,49 (dd, J = 13,5, 7,9 Hz, 1 H), 4,38 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1 H), 3,99 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,81 (d, J = 13,4 Hz, 1 H), 3,48-3,47 (brs, 4 H), 2,77 – 2,65 (m, 1 H), 2,63 – 2,52 (m, 4 H), 2,50 - 2,43 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-1h-indol-6-il)piperazin-1- il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 14) Composto 14
[00296] Preparado de maneira análoga ao Composto 13 LCMS: [M+H]+ = 588,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,34 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,26 (s, 1 H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1 H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,45 (dd, J = 10,1, 2,0 Hz, 1 H), 7,38 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 7,26 – 7,18 (m, 2 H), 6,97 (dd, J = 21,0, 12,8 Hz, 2 H), 6,79 (dd, J = 8,7, 2,0 Hz, 1 H), 6,35 (d, J = 3,1 Hz, 1 H), 5,39 (s, 2 H), 5,15 – 5,05 (m, 1 H), 4,80 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1 H), 4,70 – 4,61 (m, 1 H), 4,48 (dd, J = 13,3, 8,1 Hz, 1 H), 4,38 (dt, J = 9,2, 6,0 Hz, 1 H), 4,00 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,82 (d, J = 13,4 Hz, 1 H), 3,08-3,07 (brs, 5H), 2,75 – 2,54 (m, 5H).
Ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-1,4- diazepan-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 15) Composto 15
[00297] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 579,8; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,41 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,76 (s, 1 H), 8,22-8,25 (brs, 1 H), 7,79 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,63 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,40-7,45 (m, 1 H), 7,25 (dd, J = 6,4, 1,6 Hz, 1 H), 6,16 (d, J = 8 Hz, 1 H), 6,01 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 5,25 (s, 2 H), 4,30-4,97 (m, 5H), 3,85-4,05 (m, 2 H), 3,53-3,72 (m, 4 H), 2,55-2,80 (m, 5H), 2,23-2,35 (m, 1 H), 1,65-1,79 (m, 2 H). Ácido 2-((5-(6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)piridin-2-il)-2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il) metil)-1-(((S)-oxetan-2-il)metil)-1h- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 16) Composto 16
[00298] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 578,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,36 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,32 – 8,24 (brs, 1 H), 7,99 (dd, J = 8,5, 1,3 Hz, 1 H), 7,71 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,44 (t, J = 7,9 Hz, 2 H), 7,17 – 7,09 (m, 2 H), 6,10 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 6,05 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 5,42 (d, J = 13,0 Hz, 1 H), 5,28 (d, J = 13,0 Hz, 1 H), 5,22 – 5,15 (m, 1 H), 4,78 – 4,62 (m, 3 H), 4,58 – 4,51 (m, 1 H), 4,51 – 4,37 (m, 2 H), 4,32 – 4,25 (m, 1 H), 4,10 (s, 1 H), 3,65 (d, J = 10,6 Hz, 1 H), 3,52 (dd, J = 10,6, 1,8 Hz, 1 H), 3,19 (dd, J = 10,4, 1,6 Hz, 1 H), 2,99 (d, J = 10,2
Hz, 1 H), 2,78 – 2,64 (m, 1 H), 2,49 – 2,36 (m, 1 H), 2,19 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 2,07 (d, J = 10,5 Hz, 1 H). Ácido 2-((5-(6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)piridin-2-il)-2,5- diazabiciclo[2.2.2]octan-2-il)metil)-1-(((S)-oxetan-2-il)metil)-1h- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 17) Composto 17
[00299] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 591,6; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,74 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,36 – 8,33 (brs, 1 H), 8,05 – 8,00 (m, 1 H), 7,77 (dd, J = 8,5, 2,9 Hz,1 H), 7,53 – 7,43 (m, 2 H), 7,21 – 7,14 (m, 2 H), 6,13 (dd, J = 12,4, 5,2 Hz, 2 H), 5,40 – 5,31 (m, 2 H),5,25 – 5,16 (m, 1 H), 4,86 – 4,61 (m, 5H), 4,61 – 4,52 (m, 1 H), 4,40 – 4,31 (m, 1 H), 3,98 (d, J = 11,9Hz, 1 H), 3,80 – 3,68 (brs, 2 H), 3,59 – 3,39 (m, 3 H), 2,81 – 2,70 (m, 1 H), 2,54 – 2,45 (m, 1 H), 2,05 –1,93 (m, 3 H). Ácido (S)-2-((4-(2-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)pirimidin-4- il)piperidin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 18) Composto 18
NaHCO3, dioxano Cs2CO3, Tolueno 90ºC, 2 h 120ºC, o/n dioxano:H2O/5:1 DIPEA, dioxano 60ºC, 1,5 h Composto 18 Etapa 1
[00300] A uma solução de 2, 4-dicloropirimidina (5 g, 34,01 mmols, 1,0 eq) e terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-5,6-di- hidropiridina-1(2 H)-carboxilato (11,56 g, 37,4 mmols, 1,1 eq) em dioxano (60 mL) e água (12 mL) foi adicionado NaHCO3 (4,29 g, 51,0 mmol, 1,5 eq) e Pd(dppf)Cl2 (497 mg, 3,4 mmols, 0,04 eq). A mistura foi agitada sob N2 a 90°C por duas horas. A mistura foi filtrada e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (PE:EA = 10:1) para dar terc-butil 4-(2-cloropirimidin-4-il)-5, 6- di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (7 g, 70%) como óleo amarelo claro. LCMS: [M+H]+ = 296,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,83 min. Etapa 2
[00301] A uma mistura de 4-(2-cloropirimidin-4-il)-5, 6-di- hidropiridina-1(2 H)-carboxilato de terc-butila (4,0 g, 13,56 mmols), (4- cloro-2-fluorofenil)metanol (2,6 g, 16,27 mmols), BINAP (844 mg, 1,36 mmol) e Cs2CO3 (8,81 g, 27,12 mmols) em tolueno (80 mL) foi adicionado Pa2(dba)3 (622 mg, 0,68 mmol), a reação foi agitada a 120°C por 18 h. A mistura foi filtrada e concentrada, purificada por cromatografia flash em sílica gel (PE:EA = 0% ~ 25%) para dar terc- butil 4-(2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)pirimidin-4-il)-5, 6-di-hidropiridina-1
(2H)-carboxilato (2,7 g, 47%) como óleo amarelado pálido. LCMS: [M+H]+ = 420,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,22 minutos. Etapa 3
[00302] A uma solução de 4-(2-((4-cloro-2-fluorobenzil) óxi)pirimidin-4-il)-5,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato de terc-butila (200 mg, 0,477 mmol, 1,0 eq) em MeOH (8 mL) foi adicionado PtO2 (20 mg), a reação foi agitada à RT por 1,5 h. A mistura foi filtrada e concentrada, purificada por Prep-HPLC para dar terc-butil 4-(2-(4- cloro-2-fluorobenzilóxi) pirimidin-4-il) piperidina-1-carboxilato (100 mg, 50%) como óleo incolor. LCMS: [M+H]+ = 422,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,15 minutos. Etapa 4
[00303] A uma solução de 4-(2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) pirimidin- 4-il) piperidina-1-carboxilato de terc-butila (90 mg, 0,021 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado p-TsOH (203 mg, 1,07 mmol), a reação foi agitada à RT por 15 minutos. A mistura foi concentrada para dar sal de ácido 2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-4-(piperidin-4-il) pirimidina 4- metilbenzenossulfônico (96 mg, em bruto) como sólido amarelo. O produto em bruto foi usado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional. LCMS: [M+H]+ = 321,8; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,42 min. Etapa 5
[00304] A uma solução de sal de ácido 2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)- 4-(piperidin-4-il) pirimidina 4-metilbenzenossulfônico (96 mg, 0,16 mmol), (S)-metil 2-(clorometil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H- benzo[d]imidazol-5-carboxilato (40 mg, 0,14 mmol) e DIPEA (53 mg, 0,41 mmol) em dioxano (12 mL) foi agitada a 60°C por 1,5 h. A mistura foi evaporada, diluída com EA (60 mL), lavada com água (20 mL×2), seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto em bruto foi purificado por Prep-HPLC para dar (S)-metil 2-((4-(2-(4-cloro-2- fluorobenzilóxi) pirimidin-4-il) piperidin-1-il) metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)- 3H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato (20 mg, 26%) como sólido branco pálido. LCMS: [M+H]+ = 580,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,96 min. Etapa 6
[00305] A uma solução de 2-((4-(2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) pirimidin-4-il) piperidin-1-il) metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H- benzo[d]imidazol-5-carboxilato de (S)-metila (20 mg, 0,0345 mmol) em THF (2 mL), MeOH (2 mL) e H2O (1 mL) foi adicionado LiOH.H2O (8 mg, 0,17 mmol). A reação foi agitada à RT por duas horas. A mistura foi evaporada, diluída com água (0,5 mL), ajustada até pH = 6 com HCl (1 N) aq., a solução foi concentrada e purificada por Prep-HPLC para dar ácido (S)-2-((4-(2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) pirimidin-4-il) piperidin- 1-il) metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico (9,3 mg, 47%) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 566,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,48 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,51 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 8,25-8,24 (brs, 2 H), 7,81 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,63-7,55 (m, 2 H), 7,51 (dd, J = 1,6, 1,6 Hz, 1 H), 7,33 (dd, J = 1,6, 8,4 Hz, 1 H), 7,10 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 5,39 (s, 2 H), 5,09 (dd, J = 5,2, 1,6 Hz 1 H), 4,82 (dd, J = 6,8, 6,8 Hz 1 H), 4,67-4,63 (m, 1 H), 4,50 (dd, J = 7,2, 7,2 Hz 1 H), 4,39 (dd, J = 6, 5,6 Hz, 1 H), 3,96 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 3,80 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,00 (d, J = 10,8 Hz, 1 H), 2,87 (d, J = 11,2 Hz, 1 H), 2,72-2,61 (m, 2 H), 2,44 (dd, J = 8,4, 1,2 Hz, 1 H), 2,26-2,14 (m, 2 H), 1,85-1,76 (m, 2 H), 1,72-1,64 (m, 2 H).
Ácido (S)-2-((4-(6-(4-ciano-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetano-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imida- zol-6-carboxílico (Composto 19) Composto 19 NaHCO3, dioxano 90ºC, 2 h dioxano:H2O/5:1 DIPEA, Dioxano 90ºC, 1h Composto 19 Etapa 1
[00306] A uma suspensão agitada de t-BuOK (31,3 g, 279,7 mmols) em THF (500 mL) foi adicionado 3-fluoro-4-(hidroximetil)benzonitrila (28,1 g, 186,5 mmols) em porções entre 10-15°C. A mistura foi agitada a 15°C por 45 minutos e 2,6-dicloropiridina (23,0 g, 155,4 mmols) foi adicionada em várias porções à mistura de reação a 15°C e a mistura foi agitada a 15°C por 18 horas. A mistura foi derramada em NH4Cl aq. (1.000 mL). EtOAc (1000 mL) foi adicionado e a mistura foi agitada por 15 min. A mistura foi filtrada através de uma almofada de Celite. A camada orgânica foi separada e a camada aq. extraída com EtOAc (2x 600 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (500 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (PE/EtOAc = 10/1) para obter 4-((6-cloropiridin- 2-ilóxi)metil)-3-fluorobenzonitrila (26,0 g, rendimento de 64%) como sólido amarelo claro. 1 H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,67 – 7,63 (t, J =7,6 Hz, 1H), 7,59 – 7,55 (t, J =7,6 Hz, 1H), 7,49 – 7,46 (dd, J1 =8,0 Hz, J2 =1,2 Hz, 1H), 7,40 – 7,37 (dd, J1 =9,2 Hz, J2 =1,2 Hz,1H), 6,97 – 6,95 (d, J =7,6 Hz, 1H), 6,75 – 6,73 (d, J =8,4 Hz, 1H), 5,48 (s, 2H). Etapa 1a
[00307] Uma mistura de 4-[(6-cloro-2-piridil)oximetil]-3-fluoro- benzonitrila (1 g, 3,81 mmols), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-3,6-di-hidro-2H-piridina-1-carboxilato (1,29 g, 4,19 mmols), Pd(dppf)Cl2 (278,3 mg, 0,38 mmol) e NaHCO3 (479,69 mg, 5,71 mmols) em dioxano (20 mL) e H2O (4 g, 222,22 mmols) foi agitada por duas horas a 90°C sob N2 até a reação estar completa, conforme indicado por LCMS. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos/EtOAc = 0~11%) para dar o produto desejado terc-butil 4-[6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil)metóxi]-2-piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridina-1- carboxilato (1,5 g, 3,63 mmols, 95,4% de rendimento) como um líquido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 410,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,22 minutos. Etapa 2
[00308] A uma solução de 4-[6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil)metóxi]-2- piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridina-1-carboxilato de terc-butila (1,5 g, 3,66 mmols) em DCM (20 mL) foi adicionado lentamente TFA (7,40 g, 64,90 mmol, 5 mL). A reação foi agitada a 28°C por duas horas. Após conclusão da reação, conforme determinado por LCMS, a mistura de reação foi concentrada in vacuo para proporcionar sal TFA 3-fluoro-4- [[6-(1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)-2-piridil]oximetil]benzonitrila (1,8 g,
3,94 mmols) como um líquido amarelado pálido. O produto em bruto foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. LCMS: [M+H]+ = 310,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,42 min. Etapa 3
[00309] Uma mistura de 3-fluoro-4-[[6-(1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)- 2-piridil]oximetil]benzonitrila (340 mg, 0,80 mmol), terc-butil 2- (clorometil)-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5-carboxilato (225 mg, 670 mmols) e DIPEA (216,42 mg, 1,67 mmol) em dioxano (10 mL) foi agitada por uma hora a 90°C, até a reação estar completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi concentrada in vacuo, purificada por cromatografia de sílica gel (Hexanos/EtOAc = 20:1) para dar o produto desejado terc-butil 2-[[4-[6-[(4-ciano-2-fluoro- fenil)metóxi]-2-piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]-3-[[(2S)-oxetan- 2-il]metil]benzimidazol-5-carboxilato (366 mg, 0,31 mmol) como sólido marrom pálido. LCMS: [M+H]+ = 610,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,87 min. Etapa 4
[00310] A uma solução de 2-[[4-[6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil)metóxi]-2- piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzi- midazol-5-carboxilato de terc-butila (180 mg, 0,30 mmol) em DCM (6 mL) foi adicionado lentamente TFA (2,96 g, 25,96 mmols, 2 mL) em DCM (2 mL) a 28°C e agitada por uma hora. Após conclusão da reação conforme como julgado por LCMS, a mistura de reação foi concentrada in vacuo, o produto em bruto foi purificado por Prep-HPLC (NH4HCO3 10 mM) para proporcionar ácido (S)-2-((4-(6-(4-ciano-2- fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-5,6-di-hidropiridin-1(2 H)-il)metil)-1-(oxetan- 2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (54 mg, 33% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 554,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,42 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,73-12,72 (brs, 1 H), 8,27-8,26 (brs,
1 H), 7,90 (d, J = 10,3 Hz, 1 H), 7,81 (dd, J = 8,5, 1,5 Hz, 1 H), 7,69 (dt, J = 13,2, 8,0 Hz, 4 H), 7,10 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 6,85 – 6,61 (m, 2 H), 5,49 (s, 2 H), 5,15 – 5,02 (m, 1 H), 4,80 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1 H), 4,71 – 4,60 (m, 1 H), 4,40 (ddt, J = 11,9, 8,9, 6,0 Hz, 2 H), 4,07 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,91 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,28 – 3,17 (m, 2 H), 2,73 (d, J = 2,5 Hz, 2 H), 2,70 – 2,60 (m, 1 H), 2,43-2,42 (m, 2 H), 2,44 – 2,34 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-6-oxo-1,6-di- hidropiridazin-3-il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 20) Composto 20
[00311] Preparado de maneira análoga ao Composto 26 LCMS: [M+H]+ = 578,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,34 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,35 (d, J = 0,8 Hz, 1 H), 8,00 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1 H), 7,74 (dd, J = 23,2, 9,2 Hz, 2 H), 7,10 (ddt, J = 10,1, 8,1, 5,0 Hz, 3 H), 6,90 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 6,41-6,40 (brs, 1 H), 5,23 (tt, J = 7,2, 3,6 Hz, 1 H), 4,90 – 4,81 (m, 1 H), 4,72 (dd, J = 15,4, 2,5 Hz, 1 H), 4,64 (dd, J = 13,9, 7,9 Hz, 1 H), 4,52 – 4,45 (m, 1 H), 4,42 (t, J = 6,6 Hz, 2 H), 4,17 (d, J = 13,8 Hz, 1 H), 4,06 (d, J = 13,7 Hz, 1 H), 3,29-3,28 (brs, 2 H), 3,14 (t, J = 6,5 Hz, 2 H), 2,86 – 2,71 (m, 3 H), 2,56 – 2,47 (m, 1 H), 2,36-2,35 (brs, 2 H).
Ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)pirazin-2-il)piperidin-1- il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 21) Composto 21
[00312] Preparado de maneira análoga ao Composto 18 LCMS: [M+H]+ = 566,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,45 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,28 (s, 1 H), 8,18 (d, J = 3,4 Hz, 2 H), 7,80 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1 H), 7,67 – 7,54 (m, 2 H), 7,49 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1 H), 7,32 (dd, J = 8,2, 1,7 Hz, 1 H), 5,41 (s, 2 H), 5,13 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 4,81 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1 H), 4,67 (dd, J = 15,1, 2,5 Hz, 1 H), 4,51 – 4,31 (m, 2 H), 3,97 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,79 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,02 (d, J = 11,0 Hz, 1 H), 2,87 (d, J = 11,3 Hz, 1 H), 2,74 – 2,68 (m, 2 H), 2,46 – 2,38 (m, 1 H), 2,33 – 2,11 (m, 2 H), 1,81 – 1,72 (m, 4 H). Ácido (S)-2-((4-(6-(4-ciano-2-fluorobenzilóxi)pirazin-2-il)piperidin- 1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 22) Composto 22
[00313] Preparado de maneira análoga ao Composto 18 LCMS: [M+H]+ = 557,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,35 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,28 (d, J = 0,9 Hz, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 8,19 (s, 1 H), 7,92 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 7,80 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1 H),
7,78 – 7,70 (m, 2 H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 5,51 (s, 2 H), 5,16 – 5,04 (m, 1 H), 4,81 (dd, J = 15,1, 7,2 Hz, 1 H), 4,67 (dd, J = 15,1, 2,5 Hz, 1 H), 4,49 (dd, J = 13,6, 7,8 Hz, 1 H), 4,39 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1 H), 3,96 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,79 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,00 (d, J = 11,0 Hz, 1 H), 2,86 (d, J = 11,0 Hz, 1 H), 2,79 – 2,63 (m, 2 H), 2,48 – 2,37 (m, 1 H), 2,25 – 2,16 (m, 2 H), 1,83 – 1,60 (m, 4 H). Ácido (S)-2-((4-(6-(4-ciano-2-fluorobenzilóxi)pirazin-2-il)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetano-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imi- dazol-6-carboxílico (Composto 23) Composto 23
[00314] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 555,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,35 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,39 (s, 1 H), 8,29 – 8,18 (m, 2 H), 7,91 (dd, J = 10,0, 1,1 Hz, 1 H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1 H), 7,78 – 7,69 (m, 2 H), 7,65 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,83 (s, 1 H), 5,53 (s, 2 H), 5,10 – 4,98 (m, 1 H), 4,79 (dd, J = 15,2, 7,2 Hz, 1 H), 4,64 (dd, J = 15,2, 2,7 Hz, 1 H), 4,46 (dd, J = 13,6, 7,7 Hz, 1 H), 4,36 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1 H), 4,08 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,93 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,28 – 3,25 (m, 2 H), 2,78 – 2,75 (m, 2 H), 2,68 – 2,63 (m, 1 H), 2,53 – 2,51 (m, 2 H), 2,42 – 2,39 (m, 1 H).
Ácido (S)-2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-6-il) piperidin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 24) Composto 24
[00315] Preparado de maneira análoga ao Composto 26 LCMS: [M+H]+ = 588,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,41 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,29 – 8,25 (brs, 1 H), 7,88 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,80 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1 H), 7,63 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,49 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 7,45 (dd, J = 9,9, 1,9 Hz, 1 H), 7,22 (dd, J = 8,3, 1,8 Hz, 1 H), 7,15 (t, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,02 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 6,45 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 5,48 (s, 2 H), 5,16 – 5,08 (m, 1 H), 4,81 (dd, J = 15,1, 7,4 Hz, 1 H), 4,67 (dd, J = 12,6 Hz, 1 H), 4,52 – 4,35 (m, 2 H), 3,97 (d, J = 13,4 Hz, 1 H), 3,78 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,02 (d, J = 11,6 Hz, 1 H), 2,86 (d, J = 10,9 Hz, 1 H), 2,78 – 2,67 (m, 2 H), 2,47 – 2,41 (m, 1 H), 2,34 – 2,17 (m, 2 H), 1,88 – 1,73 (m, 4 H). Ácido (S)-2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-1h-pirrolo[2,3-b]piridin-6- il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo [d]imidazol-6-carboxílico (Composto 25) Composto 25
[00316] Preparado de maneira análoga ao Composto 26 LCMS: [M+H]+ = 586,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,39 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,34 (d, J = 0,8 Hz, 1 H), 8,01-7,99 (m, 1 H), 7,87 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,70 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,37-7,32 (m,
2 H), 7,22-7,07 (m, 3 H), 6,62 (brs, 1 H), 6,47 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 5,51 (brs, 2 H), 5,27-5,24 (m, 1 H), 4,88 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,73 (dd, J = 4,8, 15,2 Hz, 1 H), 4,63-4,60 (m, 1 H), 4,50-4,45 (m, 1 H), 4,15 (dd, J = 13,6, 49,2 Hz, 2 H), 3,36-3,33 (m, 2 H), 2,94-2,91 (m, 2 H), 2,82-2,74 (m, 3 H), 2,54-2,47 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-1h-indol-6-il)piperidin-1- il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 26) Composto 26 Etapa 1
[00317] A uma solução de 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan- 2-il)-5,6-di-hidropiridina-1(2 H)-carboxilato de terc-butila (618,4 mg, 2 mmols) em dioxano (30 mL)/H2O (5 ml) foi adicionado 6-bromo-1H- indol (392 mg, 2 mmols), Pd(dppf)Cl2 (100 mg, 10%) e K2CO3 (0,83 g, 6 mmols). A mistura de reação foi purgada com N2 por três vezes, aquecida até 80°C por duas horas. A mistura foi resfriada até RT, extinta com H2O (10 mL), extraída por EtOAc (30 mLx3). Os orgânicos combinados foram secos sobre Na2SO4, concentrados para dar terc- butil 4-(1 h-indol-6-il)-5,6-di-hidropiridina-1(2 H)-carboxilato (730 mg, rendimento de 100%) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 243,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,97 min.
Etapa 2
[00318] A uma mistura de 1-(bromometil)-4-cloro-2-fluorobenzeno (0,55 g, 2,45 mmols) em DMF (20 mL) foi adicionado terc-butil 4-(1h- indol-6-il)-5,6-di-hidropiridina-1(2 H)-carboxilato (0,73 g, 2,45 mmols) e Cs2CO3 (2,4 g, 7,34 mmols). A mistura de reação foi agitada à RT por duas horas. A mistura foi resfriada até RT, extinta com H2O (10 mL), extraída por EtOAc (30 mLx3). A camada orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4, concentrada e purificada por cromatografia de coluna de sílica gel (PE: EA = 30: 1) para dar terc-butil 4-(1-(4-cloro-2- fluorobenzil)-1h-indol-6-il)-5,6-di-hidropiridina-1(2 H)-carboxilato (730 mg, rendimento de 68%) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 441,0; pureza = 62,0% (254 nm); Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,45 minutos. Etapa 3
[00319] A uma mistura de 4-(1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-1h-indol-6-il)- 5, 6-di-hidropiridina-1 (2 H)-carboxilato de terc-butila (200 mg, 0,45 mmol) em EtOH (20 mL) foi adicionado PtO2 (20 mg, 10%). A mistura de reação foi purgada com H2 por três vezes e agitada à RT durante a noite. A mistura foi filtrada e evaporada até secura para dar terc-butil 4-(1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-1h-indol-6-il) piperidina-1-carboxilato (200 mg, 100% de rendimento) como óleo amarelo. LCMS: [M-55]+ = 387,0; Tempo de retenção (10 mM NH4HCO3) = 2,42 min. Etapa 4
[00320] A uma mistura de 4-(1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-1h-indol-6-il) piperidina-1-carboxilato de terc-butila (200 mg, 0,45 mmol, 1,0 eq) em DCE (15 mL) foi adicionado TFA (3 mL, excesso). A mistura de reação foi agitada à RT por uma hora. A mistura foi evaporada até secura para dar 1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-6-(piperidin-4-il)-1h-indol (150 mg, 97% de rendimento) como sólido amarelo claro. LCMS: [M+H]+ = 343,0; pureza = 64,3% (254 nm); Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,01 minutos.
Etapa 5
[00321] A uma mistura de 2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h- benzo[d]imidazol-6-carboxilato de (S)-terc-butila (80 mg, 0,24 mmol) em Dioxano (20 mL) foi adicionado 1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-6- (piperidin-4-il)-1H-indol (110 mg, 0,32 mmol), DIPEA (125 mg, 0,97 mmol) e NaI (10 mg, 0,067 mmol). A mistura de reação foi aquecida até 80°C por duas horas. A mistura foi evaporada até secura, o resíduo foi purificado por Prep-HPLC para gerar (S)-terc-butil 2-((4-(1- (4-cloro-2-fluorobenzil)-1h-indol-6-il)piperidin-1-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (11 mg, rendimento de 9%) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 643,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,44 min. Etapa 6
[00322] A uma mistura de 2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-1h-indol- 6-il)piperidin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6- carboxilato de (S)-terc-butila (11 mg, 0,017 mmol) em DCE (15 mL) foi adicionado TFA (3 mL). A mistura de reação foi agitada à RT por uma hora. A mistura foi evaporada até secura. O resíduo foi dissolvido em DMF e purificado por Prep-HPLC para gerar ácido (S)-2-((4-(1-(4- cloro-2-fluorobenzil)-1h-indol-6-il)piperidin-1-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (1,8 mg, 18% de rendimento) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 587,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,60 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,26 (s, 1 H), 7,81 – 7,78 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,64 – 7,61 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,48 – 7,44 (m, 2 H), 7,37 – 7,36 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 7,32 (s, 1 H), 7,23 – 7,20 (t, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,02– 6,97 (t, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,95 – 6,92 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 6,43 – 6,42 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 5,45 (s, 2 H), 5,10 – 5,09 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 4,80 – 4,78 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 4,69 (s, 1 H), 4,51 – 4,49 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 4,39 – 4,37 (t, J = 2,8 Hz, 1 H), 3,97 – 3,93 (d, J = 13,6 Hz, 1
H), 3,80 – 3,76 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,02 – 2,85 (m, 6H), 2,68 – 2,67 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 2,22 – 1,64 (m, 4 H). Ácido (S)-2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorobenzil)-1h-indol-6-il)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imida- zol-6-carboxílico (Composto 27) Composto 27
[00323] Preparado de maneira análoga ao Composto 26 LCMS: [M+H]+ = 585,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,60 min. 1 H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,00 – 7,97 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,74 (s, 2 H), 7,64 – 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,18 – 7,13 (m, 3 H), 7,03 – 7,02 (d, J = 5,6 Hz, 2 H), 6,77 – 6,73 (t, J = 8,4 Hz, 1 H), 6,57 – 6,56 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 6,09 (s, 1 H), 5,38 – 5,30 (m, 4 H), 5,16 – 5,13 (d, J = 10,8 Hz, 1 H), 4,61 – 4,56 (m, 1 H), 4,35 (s, 1 H), 2,70 – 2,68 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 2,27 – 2,23 (t, J = 8,0 Hz, 2 H), 2,05 – 2,02 (t, J = 6,0 Hz, 4 H), 1,69– 1,60 (m, 4 H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)fenil)-3,6-di-hidropi- ridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 28) Composto 28
1,4-dioxano, 90ºC, 8 h 1,4-dioxano, 100ºC, 8 h HCL 4M, 1,4-dioxano DIPEA, 1,4-dioxano, 90ºC, 3 h Composto 28 Etapa 1
[00324] A uma solução de 3-bromofenol (1,0 g, 5,8 mmols) em 1,4- dioxano (50 mL) foi adicionado 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano- 2-il)-3,6-di-hidropiridina-1 (2H)-carboxilato de terc-butila (1,9 g, 6,4 mmols), e Cs2CO3 (3,8 g, 11,6 mmols) e Pd(dppf)Cl2 (416 mg, 0,58 mmol)) A mistura foi agitada sob nitrogênio a 90°C por 8 horas. A mistura foi filtrada através de Celite para dar uma solução, diluída com água (150 mL) e extraída com acetato de etila (150 mL x3), a combinação orgânica foi lavada com salmoura (150 mLx3), seca e concentrada in vacuo para dar produto em bruto. O produto em bruto foi purificado por Pre-TLC (PE:EA = 2:1) para dar terc-butil 4-(3- hidroxifenil)-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (1,51 g, rendimento de 94%) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 221; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,81 min. Etapa 2
[00325] A uma solução de 4-(3-hidroxifenil)-3,6-di-hidropiridina- 1(2H)-carboxilato de terc-butila (275 mg, 1,0 mmol) em 1,4-dioxano (10mL) foi adicionado 1-(bromometil)-4-cloro-2-fluorobenzeno (223 mg, 1,0 mmol) e Pd2(dba)3 (91,5 mg, 0,1 mmol) e BINAP (62,2 mg,0,1 mmol). A mistura foi agitada sob nitrogênio a 100°C por 8 horas. A reação foi resfriada até rt e a reação foi diluída com água (150 mL),
extraída com acetato de etila (150 mLx3). A combinação orgânica foi lavada com salmoura (150 mLx3), seca e concentrada in vacuo para dar produto em bruto. Em seguida, o produto em bruto foi purificado por Pre-TLC (PE:EA = 3:1) para dar terc-butil 4-(3-((4-cloro-2- fluorobenzil)óxi)fenil)-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (241 mg, 57,8% de rendimento) como um óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 363; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,04 minutos. Etapa 3
[00326] A uma solução de 4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)fenil)-3,6- di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato de terc-butila (322 mg, 0,77 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado HCl/1,4dioxano (1,2 mL). A mistura foi agitada à rt por duas horas. A reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (50 mLx3). A combinação orgânica foi lavada com salmoura (50 mLx3), seca e concentrada in vacuo para dar produto em bruto, que foi purificado por Pre-TLC (PE: EA = 5:1) para dar 4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)fenil)-1,2,3,6-tetra-hidropiridina (198 mg)como um óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 318; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,61 min. Etapa 4
[00327] A uma solução de 4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)fenil)- 1,2,3,6-tetra-hidropiridina (90 mg, 0,28 mmol) em 1,4-dioxano (10 mL) foi adicionado terc-butil (S)-2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imi- dazol-6-carboxilato (85 mg, 0,28 mmol) e adicionado DIPEA (0,3 mL, 1,4 mol). A mistura foi agitada a 90°C por 3 horas. A reação foi diluída com água (100 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL)×3), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 mL×3), secas e concentradas in vacuo para dar produto em bruto, que foi purificado por pre-TLC para dar terc-butil (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2- fluorobenzil)óxi)fenil)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (80 mg, 46% de rendimento) como um sólido amarelo.
LCMS: [M+H]+ = 618; Tempo de retenção (10mM NH4HCO3) = 2,36 minutos. Etapa 5
[00328] A uma solução de (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi) fenil)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d] imidazol-6-carboxilato de terc-butila (80 mg, 0,13 mmol) em DCM (12 mL) foi adicionado TFA (2 mL, 26,93 mmols). A mistura foi agitada à rt por 3 horas. A reação foi concentrada in vacuo para dar produto em bruto, que foi purificado por Pre-HPLC (NH4HCO3) para dar ácido (S)- 2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)fenil)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)- il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (18,5 mg, rendimento de 25%) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 562,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,40 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,21-8,20 (brs, 1 H), 7,97 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1 H), 7,62 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,54 (t, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,25 (ddd, J = 6,3, 5,6, 2,0 Hz, 3 H), 7,11 – 7,02 (m, 2 H), 6,89 (dd, J = 7,3, 1,9 Hz, 1 H), 6,13-6,12 (brs, 1 H), 5,28 (dd, J = 9,4, 5,0 Hz, 1 H), 5,13 (s, 2 H), 4,92 (d, J = 7,1 Hz, 1 H), 4,77 – 4,71 (m, 1 H), 4,63 (dd, J = 13,4, 8,2 Hz, 1 H), 4,53 – 4,46 (m, 1 H), 4,14 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 4,03 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,25 (d, J = 2,4 Hz, 2 H), 2,80 (ddd, J = 22,5, 12,9, 7,2 Hz, 3 H), 2,62 – 2,48 (m, 3 H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-4-fluorofenil)-3,6-di- hidropiridin-1(2H)-il) metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (Composto 29) Composto 29
[00329] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 580,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,59 min.
H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,26-8,25 (brs, 1 H), 7,82 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 7,69 – 7,58 (m, 2 H), 7,52 (dd, J = 9,9, 2,0 Hz, 1 H), 7,38 – 7,30 (m, 2 H), 7,17 (dd, J = 11,2, 8,6 Hz, 1 H), 7,02-7,01 (brs, 1 H), 6,16-6,15 (brs, 1 H), 5,24 (s, 2 H), 5,06 (d, J = 4,4 Hz, 1 H), 4,79 (dd, J = 14,8, 6,9 Hz, 1 H), 4,65 (d, J = 12,4 Hz, 1 H), 4,47 (dd, J = 13,2, 7,9 Hz, 1 H), 4,39 – 4,29 (m, 1 H), 4,06 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,91 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,19-3,18 (brs, 2 H), 2,75-2,74 (brs, 2 H), 2,66 (d, J = 11,8 Hz, 1 H), 2,48 – 2,45 (m, 2 H), 2,41 (d, J = 8,4 Hz, 1 H). Ácido (S)-2-((4-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 30) Composto 30
[00330] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 563,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,29 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,33 (d, J = 6,2 Hz, 2 H), 8,00 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,70 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,55 (t, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,29 (t, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,15 (d, J = 2,2 Hz, 1 H), 6,96 (dd, J = 5,8, 2,3 Hz, 1 H), 6,59-6,58 (brs, 1 H), 5,25 (s, 3 H), 4,96 (m, 1 H), 4,74 (d, J = 12,7 Hz, 1 H), 4,64 (d, J = 5,9 Hz, 1 H), 4,48 (dd, J = 15,0, 5,9 Hz, 1 H), 4,19 (d, J = 13,9 Hz, 1 H), 4,06 (d, J = 13,7 Hz, 1 H), 3,31 – 3,28 (m, 2 H), 2,88- 2,87 (brs, 2 H), 2,78 (m, 1 H), 2,67-2,66 (brs, 2 H), 2,53 (m, 1 H).
Ácido (S)-2-((2'-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3,6-di-hidro-[4,4'- bipiridin]-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 31) Composto 31
[00331] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 563,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,54 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,25 (d, J = 1,0 Hz, 1 H), 8,09 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1 H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,56 (t, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,47 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1 H), 7,31 (dd, J = 8,2, 1,7 Hz, 1 H), 7,11 (dd, J = 5,5, 1,5 Hz, 1 H), 6,86 – 6,81 (brs, 1 H), 6,51 – 6,45 (m, 1 H), 5,37 (s, 2 H), 5,05 (dt, J = 6,8, 4,4 Hz, 1 H), 4,77 (dd, J = 15,3, 7,2 Hz, 1 H), 4,63 (dd, J = 15,2, 2,8 Hz, 1 H), 4,50 – 4,42 (m, 1 H), 4,38 – 4,32 (m, 1 H), 4,05 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,91 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,23 – 3,17 (m, 2 H), 2,78 – 2,70 (m, 2 H), 2,69 – 2,62 (m, 1 H), 2,46 – 2,41 (m, 3 H). Ácido (S)-2-((5-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[3,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 32) Composto 32
[00332] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 563,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,26 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,30 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 8,25 (dd, J = 8,9, 1,9 Hz, 2 H), 7,81 (dd, J =8,4, 1,5 Hz, 1 H), 7,68 – 7,59 (m, 2 H),
7,53 – 7,48 (m, 2 H), 7,35 (dd, J = 8,2, 1,8 Hz, 1 H), 6,35 – 6,27(brs, 1 H), 5,24 (s, 2 H), 5,10 – 5,03 (m, 1 H), 4,80 (dd, J = 15,3, 7,2 Hz, 1 H), 4,65 (dd, J = 15,2, 2,7 Hz,1 H), 4,51 – 4,43 (m, 1 H), 4,39 – 4,32 (m, 1 H),4,07 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,92 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,23 – 3,15 (m, 2 H), 2,80 – 2,71 (m, 2 H), 2,70 – 2,63 (m, 1 H), 2,47 – 2,30 (m, 3 H). Ácido (S)-2-((4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)pirimidin-2-il)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetano-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imida- zol-6-carboxílico (Composto 33) Composto 33 KOH, 18-Coroa-6 Dioxano/H2C=5/1 Tolueno, rt, 1 h 90ºC, durante a noite Dioxano 80ºc, 2 h Composto 33 Etapa 1
[00333] A uma solução de 2,4-dicloropirimidina (1,0 g, 6,8 mmols) em tolueno (20 mL) foram adicionados (4-cloro-2-fluorofenil)metanol (1,2 g, 7,48 mmols), KOH (419 mg, 7,48 mols) e 18-coroa-6 (90 mg, 0,34 mmol) e a solução resultante foi agitada à rt por uma hora. A mistura de reação foi diluída com EtOAc (100 mL), lavada com água (50 mL×3), seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada e purificada por cromatografia de coluna flash em sílica gel (PE:EA = 0%~28%) para dar 2-cloro-4-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) pirimidina (3,6 g, 95%) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 272,8; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,01 min.
Etapa 2
[00334] A uma mistura de 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)-5,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato de terc-butila (3,17 g, 10,25 mmols) em dioxano (100 mL) e H2O (20 mL) foi adicionado 2-cloro-4- (4-cloro-2-fluorobenzilóxi)pirimidina (2,8 g, 10,25 mmols) e Pd(dppf)Cl2 (500 mg, 1,03 mmol) e K2CO3 (4,24 g, 30,76 mmols). A mistura de reação foi aquecida até 90°C durante a noite. A mistura foi evaporada até secura, extraída por EtOAc/H2O, a camada orgânica foi evaporada e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel (PE/EA = 50/1) para dar o produto em bruto, em seguida, purificado por prep-HPLC para dar terc-butil 4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) pirimidin-2-il)-5,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (364 mg, 8,5% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 420,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,31 minutos. Etapa 3
[00335] A uma mistura de 4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)pirimidin-2- il)-5,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato de terc-butila (200 mg, 0,476 mmol) em 1,2-dicloroetano (15 mL) foi adicionado TFA (3 mL). A mistura de reação foi agitada à RT por uma hora. A mistura foi evaporada até secura para dar 4-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-2-(1,2,3,6- tetra-hidropiridin-4-il)pirimidina (270 mg, 100% de rendimento) como um sólido amarelo claro. LCMS: [M+H]+ = 320,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,74 min. Etapa 4
[00336] A uma mistura de (2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxilato de (S)-terc-butila (140 mg, 0,41 mmol) em dioxano (20 mL) foi adicionado 4-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-2- (1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)pirimidina (180 mg, 0,41 mmol) e DIPEA (215 mg, 1,66 mmol) e NaI (10 mg). A mistura de reação foi aquecida até 80°C por duas horas. A mistura foi evaporada até secura, o resíduo foi extraído por EtOAc/H2O após remoção de solvente para dar (S)-terc-butil 2-((4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)pirimidin-2-il)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxilato (86 mg, rendimento de 58%) como um sólido amarelo claro. LCMS: [M+H]+ = 620,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,28 minutos. Etapa 5
[00337] A uma mistura de 2-((4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) pirimidin-2-il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxilato de (S)-terc-butila (86 mg, 0,134 mmol) em 1,2-dicloroetano (15 mL) foi adicionado TFA (3 mL). A mistura de reação foi agitada à rt por uma hora. A mistura foi evaporada até secura. O resíduo foi dissolvido em DMF e purificado por prep-HPLC para gerar ácido (S)-2-((4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)pirimidin-2-il)- 5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (28 mg, 36% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 564,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,48 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,51 – 8,49 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 8,26 – 8,25 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 7,83 – 7,80 (dd, J1 = 8,4 Hz, J2 = 1,6 Hz, 1 H), 7,66 – 7,64 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,60 – 7,56 (t, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,50 – 7,47 (dd, J1 = 10,0 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1 H), 7,33 – 7,30 (dd, J1 = 8,4 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1 H), 7,17 (s, 1 H), 6,82 – 6,80 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 5,48 (s, 2 H), 5,08 – 5,05 (dd, J1 = 7,2 Hz, J2 = 2,4 Hz, 1 H), 4,83 – 4,77 (dd, J1 = 15,2 Hz, J2 = 7,2 Hz, 1 H), 4,67 – 4,62 (dd, J1 = 15,2 Hz, J2 = 2,8 Hz, 1 H), 4,48 – 4,44 (m, 1 H), 4,39 – 4,33 (m, 1 H), 4,11 – 4,07 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,95 – 3,91 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,30 – 3,26 (m, 2 H), 2,76 – 2,72 (d, J = 7,6 Hz, 2 H), 2,67 – 2,63 (m, 1 H), 2,59 (s, 2 H), 2,44 – 2,37 (m, 2 H).
Ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)pirazin-2-il)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imida- zol-6-carboxílico (Composto 34) Composto 34
[00338] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 564,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,51 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,37 (s, 1 H), 8,25 (s, 1 H), 8,21 (s, 1 H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1 H), 7,67 – 7,56 (m, 2 H), 7,50 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1 H), 7,32 (dd, J = 8,2, 1,6 Hz, 1 H), 6,86-6,85 (brs, 1 H), 5,44 (s, 2 H), 5,06 (dd, J = 14,2, 7,0 Hz, 1 H), 4,79 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1 H), 4,69 – 4,60 (m, 1 H), 4,47 (dd, J = 13,7, 7,5 Hz, 1 H), 4,36 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1 H), 4,08 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,93 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,29 – 3,21 (m, 2 H), 2,79 – 2,75 (m, 2 H), 2,68 – 2,64 (m, 1 H), 2,56-2,55 (brs, 2 H), 2,45 – 2,30 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((4-(2-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)pirimidin-4-il)-3,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 35) Composto 35
[00339] Preparado de maneira análoga ao Composto 18 LCMS: [M+H]+ = 564,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,46 min. 1 H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,46 (d, J = 5,2 Hz 1 H), 8,15-8,14 (brs, 1 H), 8,02 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,81 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,48 (dd, J = 4,4 8 Hz, 1 H), 7,13 (m, 1 H), 6,89 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 6,92-6,91 (brs, 1 H),
5,46 (s, 2 H), 5,19-5,17 (m, 1 H), 4,81-4,74 (m, 1 H), 4,72-4,65 (m, 1 H), 4,64 (dd, J = 8,8 8 Hz, 1 H), 4,39-4,36 (m, 1 H), 4,35-4,13 (m, 2 H), 3,46-3,19 (m, 2 H), 3,01-2,84 (m, 1 H), 2,74-2,66 (m, 3 H), 2,48-2,40 (m, 2 H). Ácido (S)-2-((4-(1-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)isoquinolin-3-il) piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 36) Composto 36
[00340] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 616,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,69 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,29 (s, 1 H), 7,94 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,82 (dd, J = 8,5, 1,5 Hz, 1 H), 7,69 – 7,63 (m, 2 H), 7,62 – 7,57 (m, 1 H), 7,54 – 7,48 (m, 2 H), 7,32 (dd, J = 8,2, 1,8 Hz, 1 H), 7,20 (m, 1 H), 6,52 (s, 1 H), 5,55 (s, 2 H), 5,17 – 5,08 (m, 1 H), 4,82 (m, 1 H), 4,67 (m, 1 H), 4,49 (m, 1 H), 4,39 (m, 1 H), 4,01 (m, 1 H), 3,83 (m, 1 H), 3,49 (m, 4 H), 2,76 – 2,68 (m, 1 H), 2,60 (m, 4 H), 2,47 – 2,40 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((4-(4-(3-clorofenetil)-3,4-di-hidro-2h-pirido[3,2- b][1,4]oxazin-6-il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 37) Composto 37
[00341] Preparado de maneira análoga ao Composto 26 LCMS: [M+H]+ = 600,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,55 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,31-8,30 (brs, 1 H), 7,99 (dd, J = 8,5, 1,4
Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,28-7,27 (brs, 1 H), 7,26 – 7,21 (m, 1 H), 7,18 – 7,15 (m, 2 H), 6,86 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,65 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,53-6,52 (brs, 1 H), 5,27 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 4,87 (d, J = 9,7 Hz, 1 H), 4,74 (dd, J = 15,4, 2,6 Hz, 1 H), 4,63 (dd, J = 13,9, 7,8 Hz, 3 H), 4,48 (dt, J = 9,2, 6,0 Hz, 1 H), 4,19 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 4,14 – 4,09 (m, 2 H), 4,07 (d, J = 13,7 Hz, 1 H), 3,88 – 3,78 (m, 2 H), 3,45 – 3,38 (m, 2 H), 2,95 (d, J = 7,4 Hz, 2 H), 2,88 (d, J = 5,5 Hz, 2 H), 2,83 – 2,76 (m, 1 H), 2,67-2,66 (brs, 2 H), 2,56 – 2,49 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzil)-3-oxo-3,4-di-hidro-2h- pirido[3,2-b][1,4]oxazin-6-il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1- (oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico （ Composto 38） Composto 38
[00342] Preparado de maneira análoga ao Composto 26 LCMS: [M+H] + = 618,2, tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,44 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,25 (s, 1 H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1 H), 7,65 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,47 – 7,35 (m, 2 H), 7,30 – 7,12 (m, 3 H), 6,48 (s, 1 H), 5,24 (s, 2 H), 5,08 – 4,98 (m, 1 H), 4,87 (s, 2 H), 4,77 (dd, J = 15,4, 7,3 Hz, 1 H), 4,62 (d, J = 12,6 Hz, 1 H), 4,45 (dd, J = 13,7, 7,7 Hz, 1 H), 4,35 (dt, J = 9,0, 6,0 Hz, 1 H), 4,04 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,88 (d, J = 13,4 Hz, 1 H), 3,16 (d, J = 6,6 Hz, 2 H), 2,70 (dd, J = 13,3, 8,5 Hz, 2 H), 2,64 – 2,57 (m, 1 H), 2,40 (s, 3 H).
Ácido (S)-2-((6-(6-cloro-3,4-di-hidroisoquinolin-2(1 H)-il)-3',6'-di- hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 39) Composto 39 HCl/1,4dioxano DIPEA, 1,4dioxano Composto 39 Etapa 1
[00343] A uma solução de 6-cloro-1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina (500 mg, 30 mmols, 1,0 eq) em DMSO (30 mL) foi adicionada 2,6- dicloropiridina (480 mg, 33 mmols), a mistura foi agitada a 120°C por 8 horas. A reação foi resfriada até rt e concentrada in vacuo para dar o produto em bruto, o produto em bruto foi purificado por prep-TLC (PE:EA = 5:1) para dar 6-cloro-2-(6-cloropiridin-2-il)-1,2,3,4-tetra- hidroisoquinolina (620 mg, 73% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 279; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,23 min. Etapa 2
[00344] A uma solução de 6-cloro-2-(6-cloropiridin-2-il)-1,2,3,4-tetra- hidroisoquinolina (310 mg, 1,11 mmol) em 1,4-dioxano (30 mL) foi adicionado terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,6- di-hidropiridina-1 (2H)-carboxilato (413 mg, 1,11 mmol) e Pd(dppf)Cl2 (79 mg, 0,111 mmol) e Cs2CO3 (1,08 g, 3,33 mmols). A mistura foi agitada sob nitrogênio a 90°C por 8 h. A reação foi diluída com água (100 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL ×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (100 mL×3), secos e concentrados in vacuo para dar produto em bruto. Ele foi purificado por filtração com PE para dar terc-butil 6-(6-cloro-3,4-di-hidroisoquinolin- 2(1H)-il)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridina]-1'(2'H)-carboxilato (157 mg, 54% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 426; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,58 min. Etapa 3
[00345] A uma solução de 6-(6-cloro-3,4-di-hidroisoquinolin-2(1H)- il)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridina]-1'(2'H)-carboxilato de terc-butila (157 mg, 0,37 mmol) em DCM (16 mL) e adicionado HCl/1,4dioxano (2 mL), a reação foi agitada à rt por duas horas. A reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etil (50 mL x3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mLx3), secos e concentrados in vacuo para dar produto em bruto que foi purificado por prep-TLC (PE:EA = 5:1) para dar 6-cloro-2-(1',2',3',6'-tetra-hidro-[2,4'- bipiridin]-6-il)-1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina (65 mg, 54% de rendimento) como um óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 326; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,46 min. Etapa 4
[00346] A uma solução de 6-cloro-2-(1',2',3',6'-tetra-hidro-[2,4'- bipiridin]-6-il)-1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina (65 mg, 0,2 mmol) em 1,4- dioxano (10 mL) foi adicionado terc-butil-(S)-2-(clorometil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (66 mg, 0,2 mmol) e DIPEA adicionado (0,1 mL, 1 mol). A mistura foi agitada a 90°C por 3 horas. A reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila
(50 mL×3). O orgânico combinado foi lavado com salmoura (50 mL×3), seco e concentrado in vacuo para dar produto em bruto que foi purificado por prep-TLC (PE:PA = 3:1) para dar terc-butil (R)-2-((6-(6- cloro-3,4-di-hidroisoquinolin-2(1H)-il)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (45 mg, 47% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 626; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,13 minutos. Etapa 5
[00347] A uma solução de (S)-2-((6-(6-cloro-3,4-di-hidroisoquinolin- 2(1H)-il)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)- 1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato de terc-butila (45 mg, 0,072 mmol) em DCM (8 mL) foi adicionado TFA (2 mL, 26,93 mmols). A mistura foi agitada à rt por 3 horas. A reação foi concentrada in vacuo para dar produto em bruto, que foi purificado por HPLC preparativa para dar ácido (S)-2-((6-(6-cloro-3,4-di-hidroisoquinolin-2(1H)-il)-3',6'-di-hidro- [2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (5,4 mg, 13% de rendimento) como sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 570,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,59 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,35-8,34 (brs, 1 H), 8,00 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,71 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 7,53 (t, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,21 (t, J = 6,9 Hz, 3 H), 6,81 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,72 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,67-6,66 (brs, 1 H), 5,26-5,25 (m, 1 H), 4,89-4,88 (brs, 1 H), 4,74 (d, J = 17,9 Hz, 1 H), 4,69 (s, 2 H), 4,64 (d, J = 5,9 Hz, 1 H), 4,48 (d, J = 9,3 Hz, 1 H), 4,21 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 4,09 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,88 (t, J = 6,0 Hz, 2 H), 3,31 – 3,25 (m, 2 H), 2,97 – 2,88 (m, 4 H), 2,78-2,77 (brs, 1 H), 2,71-2,70 (brs, 2 H), 2,53-2,52 (brs, 1 H).
Ácido (S)-2-((4-(3-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-2-fluorofenil)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imida- zol-6-carboxílico (Composto 40) Composto 40
[00348] Preparado de maneira análoga a 28 LCMS: [M+H]+ = 580,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,41 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,25 (s, 1 H), 7,81 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,68 – 7,55 (m, 2 H), 7,51 (dd, J = 10,0, 1,8 Hz, 1 H), 7,35 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,17 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,08 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,91 (t, J = 6,7 Hz, 1 H), 5,94-5,93 (brs, 1 H), 5,18 (s, 2 H), 5,07 (d, J = 4,7 Hz, 1 H), 4,78 (dd, J = 14,9, 7,2 Hz, 1 H), 4,65 (d, J = 13,9 Hz, 1 H), 4,47 (dd, J = 14,0, 7,4 Hz, 1 H), 4,36 (dd, J = 14,7, 5,8 Hz, 1 H), 4,06 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,90 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,24 – 3,08 (m, 2 H), 2,74 – 2,62 (m, 3 H), 2,46 - 2,38 (m, 3 H). Ácido (S)-2-((4-(3-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-4,5-difluorofenil)-5,6- di-hidropiridin-1(2H)-il) metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imi- dazol-6-carboxílico (Composto 41) Composto 41
[00349] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 598,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,64 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,24 (s, 1 H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1 H), 7,62 (dd, J = 14,9, 8,2 Hz, 2 H), 7,53 (dd, J = 10,0, 1,9 Hz, 1
H), 7,36 (dd, J = 8,2, 1,7 Hz, 1 H), 7,19 (d, J = 6,8 Hz, 1 H), 7,10 (dd, J = 11,8, 6,7 Hz, 1 H), 6,26 (s, 1 H), 5,29 (s, 2 H), 5,11 – 5,00 (m, 1 H), 4,79 (dd, J = 15,2, 7,2 Hz, 1 H), 4,64 (d, J = 12,7 Hz, 1 H), 4,47 (dd, J = 13,6, 7,7 Hz, 1 H), 4,36 (dt, J = 9,0, 6,0 Hz, 1 H), 4,06 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,91 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,25 – 3,10 (m, 2 H), 2,79 – 2,58 (m, 3 H), 2,47 – 2,31 (m, 3 H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-5-fluorofenil)-3,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imida- zol-6-carboxílico (Composto 42) Composto 42
[00350] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 580,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,41 min. 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,32 (s, 1 H), 7,99 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,53 (t, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,29 - 7,24 (m, 2 H), 6,89 (s, 1 H), 6,81 (d, J = 10,1 Hz, 1 H), 6,69 (d, J = 10,5 Hz, 1 H), 6,19 (s, 1 H), 5,28 - 5,21 (m, 1 H), 5,13-5,12 (brs, 2 H), 4,88 (d, J = 7,1 Hz, 1 H), 4,73 (dd, J = 15,3, 2,5 Hz, 1 H), 4,64 (dd, J = 13,9, 7,8 Hz, 1 H), 4,47 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1 H), 4,16 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 4,05 (d, J = 13,7 Hz, 1 H), 3,22 (dd, J = 31,9, 14,1 Hz, 2 H), 2,90 - 2,81 (m, 2 H), 2,81 - 2,72 (m, 1 H), 2,46- 2,60 (m, 3 H).
Ácido (S)-2-((4-(5-((4-cloro-2-fluorobenzil) óxi)-2-fluorofenil)-3,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imida- zol-6-carboxílico (Composto 43) Composto 43
[00351] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 580,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,61 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,26-8,25 (brs, 1 H), 7,82 (dd, J = 1,6 6,8 Hz, 1 H), 7,66 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,60 (dd, J = 8 8,4 Hz, 1 H), 7,51 (dd, J = 2 8 Hz, 1 H), 7,34 (dd, J = 1,6 6,4 Hz, 1 H), 7,13 (dd, J = 9,2 1,6 Hz, 1 H), 6,97-6,91 (m, 2 H), 5,99-5,98 (brs, 1 H), 5,10 (s, 2 H), 5,08 (dd, J = 2 4,8 Hz, 1 H), 4,82 (dd, J = 7,2 8 Hz, 1 H), 4,67 (dd, J = 2,4 12,8 Hz, 1 H), 4,48 (dd, J = 5,6 8 Hz, 1 H), 4,38-4,35 (m, 1 H), 4,07 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 3,92 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,19 (dd, J = 2 3,6 Hz, 2 H), 2,75-2,723 (m, 2 H), 2,69 -2,65 (m, 1 H), 2,44-2,38 (m, 3 H). Ácido (S)-2-((6-((4-clorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 44) Composto 44
[00352] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M +H]+ = 545,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,55 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,28 – 8,25 (brs, 1 H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1 H), 7,71 – 7,64 (m, 2 H), 7,47 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,42
(d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,07 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 6,73 (d, J = 8,1 Hz, 2 H), 5,36 (s, 2 H), 5,10 – 5,03 (m, 1 H), 4,80 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1 H), 4,65 (dd, J = 15,2, 2,5 Hz, 1 H), 4,50 – 4,43 (m, 1 H), 4,40 – 4,33 (m, 1 H), 4,07 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,91 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,33 – 3,26 (m, 1 H), 3,26 – 3,12 (m, 2 H), 2,78 – 2,69 (m, 2 H), 2,69 – 2,61 (m, 1 H), 2,49 – 2,31 (m, 2 H). Ácido (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((4-(6-((6-(trifluorometil)piridin-3-il) metóxi)piridin-2-il)-5,6-di-hidropiridina-1(2H)-il)metil)-1h-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (Composto 45) Composto 45
[00353] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 580,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,48 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,86 (s, 1 H), 8,26 (s, 1 H), 8,14 – 8,12 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,92 – 7,89 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,83 – 7,80 (dd, J1 = 8,4 Hz, J2 = 1,6 Hz, 1 H), 7,72 – 7,64 (m, 2 H), 7,10 – 7,08 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 6,79 – 6,77 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,73 (s, 1 H), 5,53 (s, 2 H), 5,07– 5,04 (q, 1 H), 4,82 – 4,76 (m, 1 H), 4,66 – 4,62 (t, J =2,0 Hz, 1 H), 4,48 – 4,43 (m, 1 H), 4,38 – 4,32 (m, 1 H), 4,08 – 4,05 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 3,93 – 3,89 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 3,28 – 3,21 (t, J = 18,4 Hz, 4 H), 2,74 (s, 2 H), 2,67 – 2,62 (m, 1 H), 2,41 – 2,36 (m, 1 H).
Ácido (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((6-((4-(trifluorometil)benzil)óxi)- 3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il) metil)-1h-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 46) Composto 46
[00354] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 579,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,60 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,28 – 8,24 (brs, 1 H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1 H), 7,69 (dt, J = 14,1,8,2 Hz, 6H), 7,08 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 6,77 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 6,75 – 6,70 (brs, 1 H), 5,48 (s, 2 H), 5,10– 5,02 (m, 1 H), 4,80 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1 H), 4,68 – 4,58 (m, 1 H), 4,49 – 4,43 (m, 1 H), 4,39 – 4,33(m, 1 H), 4,07 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,91 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 3,25 – 3,16 (m, 2 H), 2,77 – 2,68 (m, 2 H),2,68 – 2,60 (m, 1 H), 2,48 – 2,31 (m, 3 H). Ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-N-(metilsulfonil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h- benzo[d]imidazol-6-carboxamida (Composto 47) Composto 47 Composto 47 Etapa 1
[00355] DCC (88 mg, 0,426 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado a uma solução de ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2- il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imi- dazol-6-carboxílico (80 mg, 0,142 mmol), DMAP (52 mg, 0,426 mmol) e metanossulfonamida (41 mg, 0,426 mmol) em DCM (7 mL). A mistura foi agitada a 20°C por 8 horas.
A reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com DCM (50 mL)×3), O orgânico combinado foi lavado com salmoura (25 mL×3), seco e concentrado in vacuo para dar produto em bruto que foi purificado por prep-HPLC (NH4HCO3) para dar (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-N-(metilsulfonil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxamida (27,3 mg, rendimento de 30%) como um sólido branco.
LCMS: [M+H]+ = 640,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,61 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,06-12,05 (brs, 1 H), 8,25-8,24 (brs, 1 H), 7,83 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1 H), 7,73 – 7,61 (m, 2 H), 7,56 (t, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,48 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1 H), 7,30 (dd, J = 8,2, 1,8 Hz, 1 H), 7,09 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 6,74 (t, J = 6,0 Hz, 2 H), 5,40 (s, 2 H), 5,18 – 5,04 (m, 1 H), 4,79 (dd, J = 15,1, 7,4 Hz, 1 H), 4,63 (dd, J = 15,1, 3,0 Hz, 1 H), 4,48 (dd, J = 13,7, 7,6 Hz, 1 H), 4,39 (dt, J = 9,0, 6,0 Hz, 1 H), 4,13 (d, J = 13,7 Hz, 1 H), 3,95 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,28 (d, J = 9,7 Hz, 2 H), 3,23 (s, 3 H), 2,79-2,78 (brs, 2 H), 2,69 (dd, J = 12,6, 4,8 Hz, 1 H), 2,54-2,53 (brs, 2 H), 2,44 – 2,38 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((4-(7-((4-cloro-2-fluorobenzil) óxi)-1h-pirrolo[2,3- c]piridin-5-il)-3,6-di-hidropiridin-1(2 H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)- 1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 48)
Composto 48
NaH, TDA, Tolueno r.t. 16 h K3PO4, Tolueno, H2O 80ºC 5 h HCl/1,4- dioxano DIPEA, dioxano 80ºC, 5 h Composto 48 Etapa 1
[00356] À solução de (4-cloro-2-fluorofenil) metanol (1,2 g, 7,47 mmols) em tolueno (15 mL) foi adicionado NaH (350 mg, 8,75 mmols) a 0°C. Em seguida, uma solução de 2,6-dibromo-3-nitropiridina (2,0 g, 7,09 mmols) em tolueno (15 mL) foi adicionada à mistura acima seguida por TDA (200 mg, 0,7 mmol) a 0°C. A mistura de reação foi deixada aquecer até RT. A mistura de reação foi agitada à RT por 16 h, extinta com água (20 mL) e extraída com EA (50 mL×2). A fase orgânica foi lavada por NH4Cl sat. O solvente foi evaporado para dar um resíduo que foi purificado por cromatografia (PE:EA = 10:1) para dar o produto desejado (1,6 g, 62% de rendimento) como sólido amarelo pálido. LCMS: [M+Na]+ = 382,9; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,02 minutos. Etapa 2
[00357] À solução de 6-bromo-2-((4-cloro-2-fluorobenzil) óxi)-3- nitropiridina (1,0 g, 2,77 mmols) em THF foi adicionado brometo de vinilmagnésio (1 N em THF, 8,5 mL, 8,30 mmols)) a -70°C. A mistura de reação foi agitada a -70°C por 3 horas. A reação foi extinta com NH4Cl aq. (50 mL) e extraída com EA (50 mL×3). A fase orgânica combinada foi lavada por NH4Cl sat. A fase orgânica foi seca por Na2SO4, evaporada e o resíduo foi purificado por cromatografia flash
(PE:EA = 10:1) para dar o produto desejado (300 mg, 31% de rendimento) como sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 354,6; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,17 minutos. Etapa 3
[00358] A mistura de 5-bromo-7-((4-cloro-2-fluorobenzil) óxi)-1h- pirrolo[2,3-c]piridina (100 mg, 0,32 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (120 mg, 0,39 mmol), Pd(OAc)2 (4 mg, 0,06 mmol), K3PO4 (220 mg, 1,04 mmol), triciclo-hexil fosfano (9 mg, 0,03 mmol), tolueno (3 mL) e água (0,3 mL) foi agitada a 80°C por 5 horas. A mistura de reação foi resfriada até RT, filtrada e o filtrado foi evaporado. O produto em bruto foi purificado por cromatografia (PE:EA = 10:1) para dar o produto esperado (50 mg, 39% de rendimento) como sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 457,7; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,25 minutos. Etapa 4
[00359] A solução de 4-(7-((4-cloro-2-fluorobenzil) óxi)-1h-pirrolo [2,3-c]piridin-5-il)-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato de de terc-butila (50 mg, 0,11 mmol) em HCl/Dioxano (4 N, 5 mL) foi agitado à RT por 30 minutos. LCMS mostrou que a reação foi concluída. O solvente foi evaporado para dar o produto esperado (40 mg, 59% de rendimento) como sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 357,7; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,52 min. Etapa 5
[00360] A solução de 7-((4-cloro-2-fluorobenzil) óxi)-5-(1,2,3,6-tetra- hidropiridin-4-il)-1h-pirrolo[2,3-c]piridina (40 mg, 0,11 mmol), terc-butil (S)-2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (40 mg, 0,12 mmol) e DIPEA (150 mg, 1,16 mmol) em dioxano (5 mL) foi agitada a 80°C por 5 horas. O solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (PE:EA = 1:1) para dar o produto esperado
(10 mg, 13% de rendimento) como sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 657,8; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,92 min. Etapa 6
[00361] À solução de (S)-2-((4-(7-((4-cloro-2-fluorobenzil) óxi)-1h- pirrolo[2,3-c]piridin-5-il)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxilato de terc-butila (10 mg, 0,11 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1 mL). A mistura de reação foi agitada à RT por 5,5 horas. DCM e excesso de TFA foram evaporados e foi obtida uma solução amarelo pálido em DMF. A solução de DMF foi purificada por prep-HPLC para dar o produto esperado (1,3 mg, rendimento de 14%) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 602,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,48 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,78 – 11,71 (brs, 1 H), 8,27 – 8,21 (brs, 1 H), 7,82 (dd, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,70 (t, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,63 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,52 – 7,47 (m, 1 H), 7,39 (t, J = 2,7 Hz, 1 H), 7,33 (dd, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,21 – 7,19 (m, 1 H), 6,69 – 6,65 (m, 1 H), 6,47 – 6,41 (m, 1 H), 5,59 (s, 2 H), 5,12 – 5,04 (m, 1 H), 4,84 – 4,76 (m, 1 H), 4,66 (d, J = 15,2 Hz, 1 H), 4,50 – 4,43 (m, 1 H), 4,41 – 4,33 (m, 1 H), 4,07 (d, J = 13,1 Hz, 1 H), 3,91 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,25 – 3,21 (m, 2 H), 2,78 – 2,71 (m, 2 H), 2,69 – 2,64 (m, 1 H), 2,58 – 2,53 (m, 2 H), 2,46 – 2,41 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)piperazin-1- il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-indol-6-carboxílico (Composto 49) Composto 49
ACN, Tolueno, 25°C, 16 h Composto 49 Etapa 1
[00362] A uma solução de piperazina-1-carboxilato de terc-butila (5,0 g, 26,8 mmols, 1,0 eq) em ACN (30 mL) foi adicionado K2CO3 (7,42 g, 53,6 mmols, 2,0 eq), a mistura foi resfriada até 0°C, então, 3- bromoprop-1-ina (3,2 mL, 37,52 mmols, 1,4 eq) em tolueno (0,8 mL) foi adicionado gota a gota durante 10 minuros. à reação agitada a 0°C. A mistura foi agitada a 25°C por 16 horas. A mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado, o produto em bruto foi purificado por coluna de cromatografia em sílica gel (eluindo com 0% de acetato de etil a 50% de acetato de etila em petróleo) para dar terc-butil 4-(prop-2- inil)piperazina-1-carboxilato (1,9 g, 8,5 mmol, 32% de rendimento) como óleo marrom. LCMS: [M+H]+ = 225,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,43 min. Etapa 2
[00363] A uma solução de 3-amino-4-iodobenzoato de metila (2,0 g, 7,2 mmols) em Piridina (30 mL) foi adicionado cloreto de 4-
metilbenzeno-1-sulfonil (2,1 g, 10,8 mmols). A mistura foi agitada a 25°C por 16 horas. Em seguida, a mistura de reação foi acidificada com HCl aq. (2 N, 30 mL), extraída com acetato de etila (100 mLx3) e lavada com salmoura (200 mL). Os orgânicos combinados foram secos sobre Na2SO4 e concentrados in vacuo para dar produto em bruto, o produto em bruto foi purificado por coluna de cromatografia em sílica gel (eluindo com 0% de acetato de etila a 50% de acetato de etila em petróleo) para dar metil 4-iodo-3-(4- metilfenilsulfonamido)benzoato (1,64 g, 3,8 mmols, rendimento de 78%) como sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 453,5; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,94 min. Etapa 3
[00364] A uma solução de 4-iodo-3-(4-metilfenilsulfonamido) benzoato de metila (1,0 g, 2,3 mmols) em DMF (10 mL) foi adicionado terc-butil 4-(prop-2-inil)piperazina-1-carboxilato (0,78 g, 3,5 mmols), trietilamina (1,0 mL, 6,9 mmols), CuI (35 mg, 0,2 mmol, 0,08 eq) e PdCl2(PPh3)2 (81 mg, 0,1 mmol). A mistura foi agitada a 80°C por 10 horas. A reação foi resfriada até RT, diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados in vacuo para dar o produto em bruto, o produto em bruto foi purificado por coluna de cromatografia de sílica gel (eluindo com 0% de metanol a 50% de metanol em diclorometano) para dar metil 2-((4-(tert-butoxicarbonil) piperazin-1-il)metil)-1-tosil-1h-indol-6- carboxilato (0,89 g, 1,69 mmol, 74% de rendimento) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 527,7; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,69 min. Etapa 4
[00365] A uma solução de 2-((4-(terc-butoxicarbonil) piperazin-1- il)metil)-1-tosil-1h-indol-6-carboxilato de metila (890 mg, 1,7 mmol) em metanol (10 mL) foi adicionado metóxido de sódio (666 mg, 12,2 mmols), a mistura foi agitada e refluxada a 75°C por 6 horas. A reação foi resfriada até RT, diluída com água (50 mL) e extraída com DCM (50 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados in vacuo para dar metil 2- ((4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)metil)-1h-indol-6-carboxilato (500 mg, 65% de rendimento) como óleo marrom. LCMS: [M+H]+ = 373,8; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,46 min. Etapa 5
[00366] A uma solução de 2-((4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1- il)metil)-1h-indol-6-carboxilato de metila (500 mg, 1,34 mmol) em TFA (1mL) e DCM (5 mL)), a mistura foi agitada a 25°C por uma hora. A mistura foi diluída com NaHCO3 aq. saturado até o pH ser ajustado até 7 e extraída com DCM (50 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados in vacuo para dar metil 2-(piperazin-1-ilmetil)-1h-indol-6- carboxilato (0,31 g, 70% de rendimento) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 273,9; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,06 min. Etapa 6
[00367] A uma solução de 2-(piperazin-1-ilmetil)-1h-indol-6- carboxilato de metila (310 mg, 1,13 mmol) em 1,4-dioxano (5mL) foi adicionado 2-cloro-6-(4- cloro-2-fluorobenzilóxi) piridina (370 mg, 2,26 mmol), JohnPhos (70 mg, 0,23 mmol), Pd2(dba)3 (110 mg, 0,11 mmol) e Cs2CO3 (590 mg, 1,81 mmol). A mistura foi agitada a 100°C por 16 horas. A reação foi resfriada à RT, em seguida, diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados in vacuo para dar produto em bruto. O produto em bruto foi purificado por coluna de cromatografia em sílica gel (eluindo com 0% de acetato de etila a 20% de acetato de etila em petróleo) para dar metil 2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2- il)piperazin-1-il)metil)-1h-indol-6-carboxilato (54 mg, rendimento de 9,4%) como um óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 509,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,35 minutos. Etapa 7
[00368] Uma solução de 2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2- il)piperazin-1-il)metil)-1h-indol-6-carboxilato de metila (54 mg, 0,11 mmol) em DMF (5 mL) foi resfriada até 0°C, em seguida, NaH (5,2 mg, 0,22 mmol) foi adicionado, a reação foi agitada a 25°C por uma hora. Em seguida, (S)-oxetan-2-ilmetil metanossulfonato (44 mg, 0,35 mmol) foi adicionado a uma reação agitada. A mistura foi deixada aquecer até 55°C e agitada por 10 horas. Em seguida, o produto em bruto foi purificado por Prep-HPLC seguida por SFC para dar ácido (S)-2-((4-(6- (4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1h-indol-6-carboxílico (2,3 mg, 4% de rendimento) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 565,0; Tempo de retenção (10 mM NH4HCO3) = 1,71 min. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,14 – 8,05 (brs, 1 H), 7,63 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,53 – 7,42 (m, 4 H), 7,29 (dd, J = 8,3, 1,8 Hz, 1 H), 6,44 (s, 1 H), 6,32 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 6,08 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 5,30 (s, 2 H), 5,09 – 5,00 (m, 1 H), 4,68 (dd, J = 15,2, 6,9 Hz, 1 H), 4,57 – 4,44 (m, 2 H), 4,39 – 4,33 (m, 1 H), 3,83 (d, J = 13,7 Hz, 1 H), 3,65 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,46 – 3,43 (m, 4 H), 2,70 – 2,61 (m, 1 H), 2,48 – 2,42 (m, 5H). Ácido 2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)piperazin-1- il)metil)-1-metil-1h-indol-6-carboxílico (Composto 50) Composto 50
[00369] Preparado de maneira análoga ao Composto 49 LCMS: [M+H]+ = 509,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,71 min.
H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,06 – 8,00 (brs, 1 H), 7,63 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,51 – 7,43 (m, 4 H), 7,31 – 7,27 (m, 1 H), 6,42 (s, 1 H), 6,32 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 6,08 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 5,30 (s, 2 H), 3,84 (s, 3 H), 3,70 (s, 2 H), 3,46 – 3,41 (m, 4 H), 2,49 – 2,46 (m, 4 H). Ácido (S)-2-((4-(3-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-2-oxopiridin-1(2 H)-il)- 5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (Composto 51) Composto 51 Etapa 1
[00370] À solução de 3-hidroxipiridin-2 (1 H)-ona (433 mg, 3,9 mmol) em MeOH (15 mL) foi adicionado NaOH (1 N, 3,9 mL) a 0°C. Uma solução de 1-(bromometil)-4-cloro-2-fluorobenzeno (669 mg, 3,0 mmols) em MeOH (5 mL) foi adicionada gota a gota a esta mistura. A mistura de reação foi agitada à RT por 6 horas. Água gelada (80 mL) foi adicionada para extinguir a reação. A solução foi extraída com EA (30 mLx3), lavada com salmoura e seca em Na2SO4 e evaporada para dar o produto em bruto (700 mg, rendimento de 92%), que foi usado na próxima etapa sem purificação adicional. LCMS: [M+H]+ = 253,8; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,47 min. Etapa 2
[00371] À solução de 3-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) piridin-2(1 H)-ona (800 mg, 3,16 mmol) em DMF (10 mL) e DCM (10 mL) foi adicionado terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-5,6-di- hidropiridina-1(2 H)-carboxilato (1,95 g, 6,32 mmols), Cu(OAc)2 (862 mg, 4,74 mmols), TEA (957 mg, 9,48 mmols) e peneiras de 4Å. A mistura de reação foi agitada à RT por 36 h. 50 mL de água gelada foram adicionados para extinguir a reação. A solução foi extraída com EA, lavada com salmoura e seca em Na2SO4, concentrada e o produto em bruto foi purificado com cromatografia de coluna (PE:EA = 2:1) para dar 4-(3-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-2-oxopiridin-1(2H)-il)-5,6-di- hidropiridina-1(2 H)-carboxilato de terc-butila (275 mg, 20% de rendimento) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 435,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,68 min. Etapa 3
[00372] À solução de 4-(3-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-2-oxopiridin- 1(2 H)-il)-5,6-di-hidropiridina-1(2 H)-carboxilato de terc-butila (60 mg, 0,14 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionado TFA (2 mL) a 0°C. A mistura de reação foi agitada a 0°C por duas horas. Após evaporação de solvente, o produto em bruto foi dissolvido em dioxano (4 mL), então, (S)-terc-butil 2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h- benzo[d]imidazol-6-carboxilato (50 mg, 0,15 mmol) e DIEA (90 mg, 0,7 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada a 90°C por 6 horas. Água gelada (60 mL) foi adicionada para extinguir a reação. A solução foi extraída com EA (30 mLx3), lavada com salmoura e seca em Na2SO4, concentrada e o produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna (PE:EA = 1:1) para dar (S)-terc-butil 2-((4-(3- (4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-2-oxopiridin-1(2H)-il)-5,6-di-hidropiridin-1(2 H)-il) metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (30 mg, rendimento de 34%) como sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 635,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,77 min.
Etapa 4
[00373] À solução de (2-((4-(3-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-2- oxopiridin-1(2H)-il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxilato de S)-terc-butila (30 mg, 0,05 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionado TFA (2 mL) a 0°C. A mistura de reação foi agitada a 0°C por 6 horas. Após evaporação do solvente, o produto em bruto foi purificado com HPLC para dar ácido (S)-2-((4-(3- (4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-2-oxopiridin-1(2H)-il)-5,6-di-hidropiridin-1(2 H)-il) metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (3,2 mg, rendimento de 11%) como sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 578,6; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,48 min. Ácido (S)-2-((4-(3-(4-cloro-2-fluorofenetil)-2-oxo-2,3-di-hidro-1h- benzo[d]imidazol-1-il) piperidin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 52) Composto 52 trifosgeno THF, piridina DIPEA, Dioxano Composto 52
Etapa 1
[00374] A uma mistura de 1-fluoro-2-nitrobenzeno (1,76 g, 12,5 mmols) em DMSO (15 mL) foi adicionado benzil 4-aminopiperidina-1- carboxilato (2 g, 8,5 mmol) e K2CO3 (1,32 g, 9,6 mmols). A mistura de reação foi aquecida até 100°C durante a noite. A mistura foi derramada em água gelada, extraída por EtOAc (50 mLx3), combinada com a camada orgânica, lavada por salmoura, seca sobre Na2SO4, após a remoção do solvente, o resíduo foi purificado por coluna flash para dar benzil 4-(2-nitrofenilamino)piperidina-1-carboxilato (3 g, 98% de rendimento) como um óleo amarelo. Etapa 2
[00375] A uma mistura de 4-(2-nitrofenilamino)piperidina-1- carboxilato de benzila (0,7 g, 2 mmols, 1,0 eq) em EtOH (20 mL) e H2O (10 mL) foi adicionado Fe (1,12 g, 20 mmols, 10 eq) e NH4Cl (1,07 g, 20 mmols). A mistura de reação foi aquecida até 80°C por 15 minutos, depois resfriada até RT e agitada durante a noite. A mistura foi diluída com EtOAc (50 mL), filtrada por celite, extraída por EtOAc (50 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre Na2SO4, filtrados e concentrados para dar benzil 4-(2- aminofenilamino)piperidina-1-carboxilato (0,7 g, 100% de rendimento) como óleo marrom escuro. Etapa 3
[00376] A uma mistura de 4-(2-aminofenilamino)piperidina-1- carboxilato de benzila (0,7 g, 2,15 mmols) em DMF (10 mL) foi adicionado 4-cloro-2-fluorofenetil metanossulfonato (0,82 g, 3,23 mmols), K2CO3 (1,19 g, 8,6 mmols) e NaI (30 mg, 0,2 mmol). A mistura de reação foi aquecida até 100°C durante a noite. A mistura foi resfriada e tratada com água (20 mL), extraída com EtOAc (30 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre Na2SO4, após remoção de solvente, o resíduo foi purificado por coluna de cromatografia de sílica gel (PE:EA = 20:1) para dar benzil 4-(2-(4- cloro-2-fluorofenetilamino)fenilamino)piperidina-1-carboxilato (0,2 g, 20% de rendimento) como óleo marrom escuro. Etapa 4
[00377] A uma mistura de 4-(2-(4-cloro-2-fluorofenetilamino)fenil- amino)piperidina-1-carboxilato de benzila (0,2 g, 0,42 mmol) em THF (5 mL) foi adicionada Piridina (0,33 g, 4,15 mmols) e trifosgênio (0,12 g, 0,415 mmol). A mistura de reação foi aquecida até 50°C durante a noite. A mistura foi resfriada e tratada com água (20 mL), extraída com EtOAc (30 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre Na2SO4, após remoção de solvente, o resíduo foi purificado por Prep-TLC (PE:EA = 20:1) para dar benzil 4-(3-(4- cloro-2-fluorofenetil)-2-oxo-2,3-di-hidro-1h-benzo[d]imidazol-1-il) piperi- dina-1-carboxilato (0,1 g, 48% de rendimento) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 508,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,13 minutos. Etapa 5
[00378] A uma mistura de 4-(3-(4-cloro-2-fluorofenetil)-2-oxo-2,3-di- hidro-1h-benzo[d]imidazol-1-il)piperidina-1-carboxilato de benzila (200 mg, 0,4 mmol) em HOAc (1 mL) foi adicionado HBr/HOAc (40%, 3 mL). A mistura de reação foi agitada à RT por uma hora. A mistura foi diluída com H2O e ajustada para pH = 7 por NaHCO3 aq. saturada, extraída por EtOAc (30 mL×3), Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre Na2SO4, após remoção de solvente, para dar 1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-3-(piperidin-4-il)-1h- benzo[d]imidazol-2(3 H)-ona (140 mg, rendimento de 95%) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 373,5; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,25 min. Etapa 6
[00379] A uma mistura de 2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-
benzo[d]imidazol-6-carboxilato de (S)-terc-butila (105 mg, 0,312 mmol) em dioxano (20 mL) foi adicionado 1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-3- (piperidin-4-il)-1h-benzo[d]imidazol-2(3 H)-ona (140 mg, 0,37 mmol), DIPEA (161 mg, 1,25 mmol) e NaI (10 mg, 0,1 eq). A mistura de reação foi aquecida até 80°C por duas horas. A mistura foi extinta com H2O, extraída por EtOAc (30 mLx3), Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre Na2SO4, após remoção de solvente, o resíduo foi purificado por Prep-HPLC para dar (S)-terc-butil 2-((4-(3-(4-cloro-2-fluorofenetil)-2-oxo-2,3-di-hidro-1h-benzo[d]imida- zol-1-il) piperidin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6- carboxilato (45 mg, rendimento de 22%) como sólido branco. LCMS: + [M+H] = 674,1; pureza = 100% (254 nm); Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,21 minutos. Etapa 7
[00380] A uma mistura de 2-((4-(3-(4-cloro-2-fluorofenetil)-2-oxo- 2,3-di-hidro-1h-benzo[d]imidazol-1-il)piperidin-1-il) metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxilato de (S)-terc-butila (45 mg, 66,7 mmols) em DCE (8 mL) foi adicionado TFA (1 mL, excesso). A mistura de reação foi agitada à RT por uma hora. A mistura foi evaporada até secura. O resíduo foi dissolvido em DMF e purificado por Prep-HPLC para dar ácido (S)-2-((4-(3-(4-cloro-2-fluorofenetil)-2- oxo-2,3-di-hidro-1h-benzo[d]imidazol-1-il)piperidin-1-il)metil)-1-(oxetan- 2-ilmetil)-1h-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (22,4 mg, rendimento de 55%) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 618,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,54 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,28 (s, 1 H), 7,81 – 7,78 (dd, J1 = 8,4 Hz, J2 = 1,6 Hz, 1 H), 7,64 – 7,62 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,30 – 7,27 (dd, J1 = 10,0 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1 H), 7,25 – 7,18 (m, 2 H), 7,15 – 7,12 (dd, J1 = 8,4 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1 H), 7,09 – 7,07 (m, 1 H), 7,04– 6,98 (m, 2 H), 5,14 – 5,10 (m, 1 H), 4,84 – 4,79 (m, 1 H), 4,70 – 4,66 (m, 1
H), 4,55 – 4,50 (m, 1 H), 4,43 – 4,38 (m, 1 H), 4,17 – 4,12 (m, 1 H), 4,05 – 4,01 (t, J = 6,8 Hz, 2 H), 3,99 – 3,94 (m, 1 H), 3,84 – 3,80 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 3,03 – 2,89 (m, 5H), 2,80 – 2,73 (m, 1 H), 2,36 – 2,21 (m, 5H), 1,64 – 1,58 (m, 2 H). Ácido (S)-2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-2-oxo-1,4-di-hidroquina- zolin-3(2H)-il)piperidin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (Composto 53) Composto 53 Etapa 1
[00381] A uma solução de ácido 2-(4-cloro-2-fluorofenil) acético (500 mg, 2,65 mmols) em THF (4 mL) foi adicionado LiAlH4 (152 mg, 4 mmols) a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C por uma hora. LCMS mostrou que a reação funcionou bem. A mistura foi extinta com água a 0°C, extraída com EA (50 mLx3), concentrada para dar o produto em bruto (400 mg, 86,5% de rendimento) como óleo amarelo. LCMS: [M- 18+H]+ = 157,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,47 min. Etapa 2
[00382] A uma solução de 2-(4-cloro-2-fluorofenil) etanol (400 mg,
2,29 mmols) em THF (5 mL) foi adicionado periodiane de Dess-Martin (974 mg, 3 mmols). A mistura foi agitada à RT por 3 horas. LCMS mostrou que a reação funcionou bem. A mistura foi filtrada e concentrada para dar o produto em bruto (250 mg, 63% de rendimento) como óleo amarelo. Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,19 minutos. Etapa 3
[00383] A uma solução de 4-aminopiperidina-1-carboxilato de benzila (1,2 g, 5,12 mmols) em MeCN (30 mL) foi adicionado 1- (bromometil)-2-nitrobenzeno (1 g, 5,12 mmols) e K2CO3 (1,93 g, 15,3 mmols). A mistura foi agitada a 80°C por 4 horas. LCMS mostrou que a reação funcionou bem. A mistura foi filtrada e concentrada, purificada por coluna de sílica gel (PE:EA = 10:1) para obter o produto desejado (1,5 g, 87% de rendimento) como óleo branco. LCMS: [M+H] + = 370,2; Pureza = 96,5% (254 nm); Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,68 min. Etapa 4
[00384] A uma solução de 4-(2-nitrobenzilamino)piperidina-1- carboxilato de benzila (1,5 g, 4,06 mmols) em DCM (20 mL) foi adicionado di-terc-butil dicarbonato (1,75 g, 8,12 mmols) e K2CO3 (1,66 g, 12,18 mmols). A mistura foi agitada à RT por 16 h. LCMS mostrou que funcionou bem. A mistura foi filtrada e concentrada, purificada por coluna de sílica gel (PE:EA = 1:1) para dar o produto desejado (1,7 g, 89% de rendimento) como óleo branco. LCMS: [M-100+H]+ = 370,1; Pureza 93% (254 nm); Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,88 min. Etapa 5
[00385] A uma solução de 4-(terc-butoxicarbonil(2-nitrobenzil) amino)piperidina-1-carboxilato de benzila (1,7 g, 3,62 mmols) em AcOH (16 mL) e H2O (2 mL) foi adicionado Zn (460 mg, 7,24 mmols).
A mistura foi agitada a 60℃ por 16 horas. LCMS mostrou que a reação funcionou bem. A mistura foi filtrada e concentrada, purificada por coluna de sílica gel PE:EA = 2:1 para obter o produto (1,45 g, 91% de + rendimento) como óleo branco. LCMS: [M+H] = 440,3; Pureza = 98% (254 nm); Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,77 min. Etapa 6
[00386] A uma solução de 4-((2-aminobenzil) (terc-butoxicarbonil) amino)piperidina-1-carboxilato de benzila (250 mg, 0,57 mmol) em MeOH (5 mL) foi adicionado 2-(4-cloro-2-fluorofenil)acetaldeído (638 mg, 3,7 mmols). A mistura foi agitada à RT por duas horas. Em seguida, NaBH3CN (91 mg, 1,4 mmol) foi adicionado. A mistura foi continuada em agitação por 3 horas. LCMS mostrou que a reação funcionou bem. A mistura foi extinta com água, extraída com EA ((30 mLx3), os orgânicos combinados foram lavados por salmoura, secos sobre Na2SO4, filtrados e concentrados para dar o material em bruto, que foi purificado por Prep-HPLC para dar o produto (100 mg) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 596,2; Pureza = 100% (254 nm); Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,62 minutos. Etapa 7
[00387] A um frasco de fundo redondo de 50 mL com benzil 4-(terc- butoxicarbonil(2-(4-cloro-2-fluorofenetilamino)benzil)amino)piperidina- 1-carboxilato (200 mg, 0,33 mmol) foi adicionado HCl/dioxano (4 N, 5 mL). A mistura foi agitada à RT por duas horas. LCMS mostrou que a reação funcionou bem. A mistura foi concentrada para dar o produto em bruto (150 mg, 90% de rendimento). LCMS: [M+H]+ = 496,3; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,05 minutos. Etapa 8
[00388] A uma solução de 4-(2-(4-cloro-2-fluorofenetilamino) benzilamino)piperidina-1-carboxilato de benzila (150 mg, 0,30 mmol) em THF (4 mL) foi adicionado trifosgênio (177 mg, 0,60 mmol) e TEA
(2 mL). A mistura foi agitada à RT por duas horas. LCMS mostrou que a reação funcionou bem. A mistura foi concentrada para dar o produto em bruto (140 mg, rendimento de 88%) como sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 522,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,23 minutos. Etapa 9
[00389] A uma solução de 4-(1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-2-oxo-1,2-di- hidroquinazolin-3(4 H)-il)piperidina-1-carboxilato de benzila (140 mg, 0,27 mmol) em THF (4 mL) foi adicionado HBr (1 mL) e AcOH (3 mL). A mistura foi agitada à RT por 3 horas. LCMS mostrou que a reação funcionou bem. A mistura foi concentrada para dar o produto em bruto (90 mg, rendimento de 88%) como sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 388,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,47 min. Etapa 10
[00390] A uma solução de 1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-3-(piperidin-4- il)-3,4-di-hidroquinazolin-2(1H)-ona (90 mg, 0,23 mmol) em 1,4- dioxano (5 mL) foi adicionado (S)-terc-butil 2-(clorometil)-3-(oxetan-2- ilmetil)-3H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato (84 mg, 0,25 mmol) e DIPEA (262 mg, 0,69 mmol). A mistura foi agitada a 90°C por 30 minutos. LCMS mostrou que a reação funcionou bem. A mistura foi concentrada para dar o material em bruto. O material em bruto foi purificado por Prep-HPLC para dar o produto desejado (20 mg, 13% de rendimento) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 388,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,96 min. Etapa 11
[00391] A uma solução de 2-((4-(1-(4-cloro-2-fluorofenetil)-2-oxo- 1,2-di-hidroquinazolin-3(4H)-yi)piperidin-1-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)- 3H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de (S)-terc-butila (20 mg, 0,03 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionado TFA (0,3 mL). A mistura foi agitada à RT por duas horas. LCMS mostrou que a reação funcionou bem. A mistura foi concentrada para dar o material em bruto. O material em bruto foi purificado por Prep-HPLC para dar o produto desejado (4,5 mg, rendimento de 25%) como sólido branco. LCMS: [M+H] + = 631,2; pureza = 95,9% (254 nm); Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,54 min. Ácido (S)-2-((4-(7-(4-cloro-2-fluorofenil)-1-oxo-3,4-di-hidroisoqui- nolin-2(1H)-il)piperidin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (Composto 54) Composto 54 1,4-dioxano, água 90ºC, 5 h dioxano, 100ºC, 5 h DIPEA, Dioxano, 80ºC, 5 h Composto 54 Etapa 1
[00392] À solução de 7-bromo-3,4-di-hidroisoquinolin-1(2 H)-ona (436 mg, 2,50 mmols) e ácido (4-cloro-2-fluorofenil)borônico (678 mg, 3,00 mmols) em 1,4-dioxano (15 mL) foram adicionados Pd(dppf)Cl2 (183 mg, 0,25 mmol), Cs2CO3 (1,83 g, 5,62 mmols) e água (3 ml) à RT. A mistura de reação foi agitada a 80°C por 5 horas. Então, a mistura de reação foi resfriada até RT, filtrada e o filtrado foi evaporado. O produto em bruto foi purificado por cromatografia (PE:EA = 3:2) para dar o produto desejado (350 mg, 51% de rendimento) como sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 275,8; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,77 min.
Etapa 2
[00393] À solução de 7-(4-cloro-2-fluorofenil)-3,4-di-hidroisoquinolin- 1(2H)-ona (100 mg, 0,36 mmol) e terc-butil 4-(((trifluorometil)sulfonil) óxi)-3,6-di-hidropiridina-1(2 H)-carboxilato (180 mg, 0,54 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL) foram adicionados Pd(OAc)2 (8 mg, 0,04 mmol), Cs2CO3 (150 mg, 0,46 mmol) e XantPhos (25 mg, 0,04 mmol) à RT. A mistura de reação foi agitada a 80°C por 5 h e foi resfriada até RT. A mistura reação foi filtrada e o filtrado foi evaporado. O produto em bruto foi purificado por cromatografia (PE:EA = 3:2) para dar o produto esperado (50 mg, rendimento de 31%) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+Na]+ = 478,6; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,19 min. Etapa 3
[00394] À solução de 4-(7-(4-cloro-2-fluorofenil)-1-oxo-3,4-di-hidro- isoquinolin-2(1H)-il)-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato de terc-butila (80 mg, 0,18 mmol) em EA (5 mL) foi adicionado PtO2 (5 mg, 0,02 mmol). A mistura de reação foi agitada à RT sob atmosfera de hidrogênio por 10 horas. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia (PE:EA = 3:2) para dar o produto esperado (50 mg, rendimento de 10%) como sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 458,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,06 min. Etapa 4
[00395] À solução de 4-(7-(4-cloro-2-fluorofenil)-1-oxo-3,4-di-hidro isoquinolin-2(1 H)-il)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (50 mg, 0,07 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado TFA (1,0 mL). A mistura de reação foi agitada à RT por 30 minutos. O LCMS da mistura mostrou que a reação foi concluída. A mistura foi evaporada para dar o produto esperado (25 mg, rendimento de 100%) como sólido amarelo pálido e o produto foi usado na próxima etapa sem purificação adicional. LCMS: [M+H]+ = 359,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,45 min.
Etapa 5
[00396] À solução de 7-(4-cloro-2-fluorofenil)-2-(piperidin-4-il)-3,4- di-hidroisoquinolin-1(2 H)-ona (25 mg, 0,07 mmol) em dioxano (5 mL) foram adicionados terc-butil (S)-2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h- benzo[d]imidazol-6-carboxilato (25 mg, 0,07 mmol) e DIPEA (150 mg, 1,16 mmol) à RT. A mistura de reação foi agitada a 80°C por 5 h. O solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por prep-HPLC para dar o produto esperado (10 mg, rendimento de 22%) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 658,9; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,95 min. Etapa 6
[00397] À solução de (S)-2-((4-(7-(4-cloro-2-fluorofenil)-1-oxo-3,4-di- hidro isoquinolin-2(1H)-il)piperidina-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1h- benzo[d]imidazol-6-carboxilato de terc-butila (10 mg, 0,11 mmol) em DCM (4 mL), foi adicionado TFA (1 mL). A mistura de reação foi agitada à RT por 5,5 horas. A mistura foi concentrada e purificada por Prep-HPLC para dar o produto esperado (5,7 mg, 14% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 603,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,52 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,27 (s, 1 H), 8,00 (s, 1 H), 7,80 (m, 1 H), 7,69 – 7,62 (m, 2 H), 7,62 – 7,55 (m, 2 H), 7,45 – 7,39 (m, 2 H), 5,09 (m, 1 H), 4,81 (m, 1 H), 4,66 (m, 1 H), 4,57 – 4,44 (m, 2 H), 4,39 (m, 1 H), 3,95 (m, 1 H), 3,80 (m, 1 H), 3,75 (m, 1 H), 3,49 (m, 2 H), 3,08 (m, 1 H), 3,02 (m, 1 H), 2,96 (m, 2 H), 2,88 (m, 1 H), 2,81 – 2,65 (m, 2 H), 2,44 (m, 2 H), 2,26 (m, 2 H).
Ácido (S)-2-((4-(6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)piridin-2-il)-3- oxopiperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 55) Composto 55 Dioxano, 90ºC DIPEA, Dioxano, 90ºC, 3 h Composto 55 Etapa 1
[00398] A uma solução de 3-oxopiperazina-1-carboxilato de terc- butila (200 mg, 1,01 mmol) em 1,4-Dioxano (5 mL) foi adicionado 2- cloro-6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridina (182 mg, 0,67 mmol), JohnPhos (40 mg, 0,13 mmol), Pd2(dba)3 (31 mg, 0,03 mmol) e Cs2CO3 (349 mg, 1,07 mmol). A mistura foi agitada a 90°C por 12 horas. A reação foi resfriada à RT, diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mLx3), secos sobre Na2SO4 e concentrados in vacuo para dar produto em bruto, o qual foi purificado por coluna de cromatografia em sílica gel (PE/EA = 4/1) para dar terc- butil 4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-3-oxopiperazina-1- carboxilato (70 mg, 16% de rendimento) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 462,7; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,22 min. Etapa 2
[00399] À solução de 4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-3- oxopiperazina-1-carboxilato de terc-butila (70 mg, 0,16 mmol) em DCM
(5 mL) foi adicionado TFA (1 mL), a mistura foi agitada a 25°C por uma hora. A mistura foi diluída com NaHCO3 aq. saturado até o pH ser ajustado para 7, extraída com DCM (50 mL×3). O orgânico combinado foi lavado com salmoura (20 mL×3), seco sobre Na2SO4 e concentrado in vacuo para dar 1-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)piperazin-2- ona (40 mg, 0,12 mmol) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 335,7; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,40 min. Etapa 3
[00400] A uma solução de 1-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2- il)piperazin-2-ona (40 mg, 0,12 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL) foi adicionado (S)-terc-butil 2-(clorometil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H- benzo[d]imidazol-5-carboxilato (40 mg, 0,12 mmol) e DIPEA (46 mg, 0,36 mmol). A mistura foi agitada a 90°C por 3 horas. A reação foi resfriada até RT, diluída com água (50 mL) e extraída com DCM (50 mL×3). O orgânico combinado foi lavado com salmoura (50 mL×3), seco sobre Na2SO4 e concentrado in vacuo para dar o produto em bruto que foi purificado por coluna de cromatografia de sílica gel (PE/EA = 3/1) para dar (S)-terc-butil 2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) piridin-2-il)-3-oxopiperazin-1-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-benzo[d] imidazol-5-carboxilato (35 mg, 0,06 mmol, 46,1% de rendimento) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 635,7; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,91 min. Etapa 4
[00401] A uma solução de 2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin- 2-il)-3-oxopiperazin-1-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-benzo[d]imidazol- 5-carboxilato de (S)-terc-butila (35 mg, 0,06 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado TFA (1 mL). A mistura foi agitada a 25°C por 4 horas. Em seguida, a mistura foi diluída com água (50 mL), extraída com DCM (50 mL×3). A camada orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4 e concentrada in vacuo para dar produto em bruto que foi purificado por prep-HPLC para dar ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) piridin-2-il)-3-oxopiperazin-1-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-benzo[d] imidazol-5-carboxílico (11,9 mg, rendimento de 37,2%) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 580,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,43 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,29 – 8,25 (d, J = 0,9 Hz, 1 H), 7,82 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1 H), 7,75 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,67 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,58 – 7,53 (m, 2 H), 7,48 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1 H), 7,31 (dd, J = 8,2, 1,8 Hz, 1 H), 6,69 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 5,35 (s, 2 H), 5,10 – 5,04 (m, 1 H), 4,80 (dd, J = 15,3, 7,3 Hz, 1 H), 4,65 (dd, J = 15,2, 2,5 Hz, 1 H), 4,47 (dd, J = 13,6, 7,7 Hz, 1 H), 4,36 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1 H), 4,08 (d, J = 13,7 Hz, 1 H), 3,95 (d, J = 13,7 Hz, 1 H), 3,86 (t, J = 5,5 Hz, 2 H), 3,42 (d, J = 16,5 Hz, 2 H), 2,93 (t, J = 5,3 Hz, 2 H), 2,71 – 2,64 (m, 1 H), 2,45 – 2,35 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((4-(6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)piridin-2-il)-3-oxo-1,4- diazepan-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 56 Composto 56
[00402] Preparado de maneira análoga ao Composto 55 LCMS: [M+H]+ = 594,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,47 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,23 (s, 1 H), 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,74 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,62 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,56 (t, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,50 (dd, J = 10,0, 1,9 Hz, 1 H), 7,32 (dd, J = 13,6, 4,8 Hz, 2 H), 6,69 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 5,37 (s, 2 H), 5,02 (d, J = 4,8 Hz, 1 H), 4,74 (dd, J = 15,2, 7,2 Hz, 1 H), 4,58 (d, J = 12,8 Hz, 1 H), 4,44 (dd, J = 13,8, 7,4 Hz, 1 H), 4,35 (dd, J = 14,9, 6,0 Hz, 1 H), 4,15 (d, J = 13,9
Hz, 1 H), 4,04 (d, J = 13,9 Hz, 3 H), 3,77 (d, J = 7,4 Hz, 2 H), 2,90 (s, 2 H), 2,68 – 2,56 (m, 1 H), 2,40 – 2,32 (m, 1 H), 1,85 (s, 2 H). Ácido ((S)-2-((4-(6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)piridin-2-il)-5-oxo- 1,4-diazepan-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 57) Composto 57
[00403] Preparado de maneira análoga ao Composto 55 LCMS: [M+H]+ = 594,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,40 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,29 – 8,25 (brs, 1 H), 7,80 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1 H), 7,72 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,50 – 7,43 (m, 2 H), 7,38 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,29 (dd, J = 8,2, 1,8 Hz, 1 H), 6,65 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 5,32 – 5,23 (m, 2 H), 5,09 – 5,02 (m, 1 H), 4,77 (dd, J = 15,3, 7,4 Hz, 1 H), 4,61 (dd, J = 15,2, 2,4 Hz, 1 H), 4,49 – 4,43 (m, 1 H), 4,39 – 4,32 (m, 1 H), 4,18 – 4,08 (m, 2 H), 4,04 (d, J = 13,8 Hz, 1 H), 3,90 (d, J = 13,7 Hz, 1 H), 2,85 – 2,81 (m, 2 H), 2,80 – 2,71 (m, 4 H), 2,70 – 2,64 (m, 1 H), 2,41 – 2,32 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((4-(4-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3H-imidazo[4,5- c]piridin-6-il)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)- 1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 58) Composto 58
Etapa 1
[00404] À mistura de 4,6-dicloro-3H-imidazo[4,5-c]piridina (500 mg, 2,67 mmols) e NaOH (642 mg, 8,02 mmols) em DMF (10 mL) foi adicionado (4-cloro-2-fluorofenil)metanol (1,3 g, 16,04 mmols) e a mistura foi agitada a 150°C por 8 horas. A mistura foi diluída com água e TFA foi adicionado para ajustar o PH a 7, extraído com DCM (20 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados in vacuo para dar o produto em bruto que foi purificado por coluna de sílica gel (PE:EA = 1:5) para obter o produto desejado (400 mg, rendimento de 40%). LCMS: [M+H]+ = 312,0, 314,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,58 min. Etapa 2
[00405] A mistura de 6-cloro-4-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3H- imidazo[4,5-c]piridina (200 mg, 0,64 mmol) e terc-butil 4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (238 mg, 0,72 mmol), Bis (tri-terc-butilfosfina)paládio(0) (33 mg, 0,064 mmol) e t-BuONa (185 mg, 1,92 mmol) em DMF (4 mL) e H2O (1 mL) foi agitada a 120°C por 3 horas sob micro-ondas. A mistura foi concentrada para produzir um resíduo que foi purificado por prep- HPLC para obter o produto desejado (60 mg, rendimento de 20%). LCMS: [M+H]+ = 459,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,90 min.
Etapa 3
[00406] A solução de 4-(4-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3H- imidazo[4,5-c]piridin-6-il)-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato de terc- butila (60 mg, 0,13 mmol) em HCl/dioxano (4 N, 1 mL) foi agitado a 25°C por 0,5 h. A reação foi concentrada para produzir um resíduo (45 mg, em bruto), que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. LCMS: [M+H]+ = 358,9; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,28 min. Etapa 4
[00407] A uma solução de 4-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-6-(1,2,3,6- tetra-hidropiridin-4-il)-3H-imidazo[4,5-c]piridina (45 mg, 0,125 mmol, 1,0 eq) em DMF (3 mL) foi adicionado terc-butil (S)-2-(clorometil)-1- (oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (40 mg, 0,119 mmol, 0,950 eq) e DIPEA (161 mg, 1,25 mmol, 10 eq). A mistura de reação foi purificada por TLC (PE: EA = 1:1, Rf = 0,25) para obter o produto desejado (40 mg, 0, 06 mmol, rendimento de 40%). LCMS: [M+H]+ = 659,7; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,77 min. Etapa 5
[00408] Uma solução de (S)-2-((4-(4-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)- 3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1- (oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato de terc-butila (40 mg, 0,06 mmol) em TFA (1 mL) e DCM (4 mL) foi agitado a 20°C por duas horas. A mistura foi neutralizada até PH = 7 por solução de amônia aq. (0,1 mL) e purificada por prep-HPLC para obter o produto desejado ácido (S)-2-((4-(4-((4-cloro-2-fluorobenzil) óxi)-3H- imidazo[4,5-c]piridin-6-il)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (10,6 mg, rendimento de 29%) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 603,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,24 min.
H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,34 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,00 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,61 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 6,24 (s, 1H), 5,60 – 5,58 (brs, 2H), 5,34 – 5,18 (m, 1H), 4,88 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,74 (dd, J = 15,4, 2,5 Hz, 1H), 4,70 – 4,56 (m, 2H), 4,47 (dt, J = 9,2, 5,9 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 4,06 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,27 (d, J = 21,8 Hz, 2H), 2,88 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 2,79 (dt, J = 22,0, 7,9 Hz, 1H), 2,60 – 2,58 (brs, 2H), 2,51 (dd, J = 19,2, 8,3 Hz, 1H). Ácido (S)-2-((4-(5-(4-cloro-2-fluorobenzil)-2,3,4,5-tetra- hidropirido[3,2-b][1,4]oxazepin-7-il)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)- il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 59) Composto 59 1,4-dioxano Dioxano/H2O DIPEA, Dioxano, 90ºC Composto 59 Etapa 1
[00409] A uma solução de 3-bromopropan-1-ol (1,5 g, 10,8 mmols), 6-bromo-2-nitropiridin-3-ol (2,6 g, 11,9 mmols) e PPh3 (4,3 g, 16,2 mmols) em THF (50 mL) foi adicionado DIAD (3,3 g, 16,2 mmols) a 0°C. A mistura foi agitada a 25°C por 24 horas. Água (80 mL) foi adicionada e extraída com acetato de etila (75 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (70 mLx3), seca sobre Na2SO4 e foi concentrada in vacuo para dar produto em bruto. O produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica gel (PE/EA = 8/1) para dar 6-bromo-3-(3-bromopropóxi)-2- nitropiridina (2,95 g, 80,4% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 340,9; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,85 min. Etapa 2
[00410] A uma solução de 6-bromo-3-(3-bromopropóxi)-2- nitropiridina (2,5 g, 7,35 mmols) em AcOH (80 mL) foi adicionado Fe (3,29 g, 58,8 mmols). A mistura foi agitada a 70°C por duas horas. A solução de reação foi concentrada in vacuo para dar produto em bruto. Água (100 mL) foi adicionada e extraída com acetato de etila (70 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (100 mL×2), seca sobre Na2SO4 e foi concentrada in vacuo para dar produto em bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel (PE/EA = 4/1) para 6-bromo-3-(3- bromopropóxi)piridin-2-amina (1,2 g, 52,6% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 310,9; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,75 min. Etapa 3
[00411] A uma solução de 6-bromo-3-(3-bromopropóxi) piridin-2- amina (0,4 g, 1,29 mmol) em THF (50 mL) foi adicionado NaH (0,103 g, 2,58 mmols) a 0°C. A mistura foi aquecida a 100°C e agitada por 24 horas. Água (60 mL) foi adicionada e extraída com acetato de etila (40 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (50 mL×2), seca sobre Na2SO4 e foi concentrada in vacuo para dar produto em bruto. O produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel (PE/EA = 5/1) para dar 7-bromo-2,3,4,5-tetra- hidropirido [3,2-b][1,4] oxazepina (160 mg, rendimento de 53%) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 229,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,17 minutos. Etapa 4
[00412] 7-bromo-2,3,4,5-tetra-hidropirido[3,2-b][1,4]oxazepina (110 mg, 0,48 mmol) foi dissolvido em THF (6 mL) e foi resfriado até -50°C. LiHMDS (0,48 mL, 0,96 mmol) foi adicionado gota a gota à mistura de reação e a mistura foi agitada por 20 minutos. Uma solução de 1- (bromometil)-4-cloro-2-fluorobenzeno (160 mg, 0,72 mmol) em THF (1 mL) foi adicionada à mistura de reação a -50°C. A mistura foi aquecida até 25°C e agitada por 3 horas. Água (25 mL) foi adicionada e extraída com acetato de etila (20 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (30 mL×2), seca sobre Na2SO4 e foi concentrada in vacuo para dar produto em bruto. O produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica gel (PE/EA = 5/1) para dar 7- bromo-5-(4-cloro-2-fluorobenzil)-2,3,4,5-tetra-hidropirido [3,2-b][1,4] oxazepina (72 mg, 40% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 370,9; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,33 minutos. Etapa 5
[00413] A uma solução de 7-bromo-5-(4-cloro-2-fluorobenzil)- 2,3,4,5-tetra-hidropirido[3,2-b][1,4]oxazepina (70 mg, 0,19 mmol), terc- butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,6-di-hidropiridina- 1(2H)-carboxilato (87 mg, 0,28 mmol), Cs2CO3 (122 mg, 0,38 mmol) em dioxano (5 mL) e H2O (1,3 mL) foi adicionado Pd(dppf)Cl2 (14 mg, 0,019 mmol, 0,1 eq) a 25°C. A mistura de reação foi agitada por 3 h a 90°C sob N2. Água (15 mL) foi adicionada e extraída com acetato de etila (20 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (30 mL×2), seca sobre Na2SO4 e foi concentrada in vacuo para dar produto em bruto. O produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel (PE/EA = 1/1) para dar terc-butil
4-(5-(4-cloro-2-fluorobenzil)-2,3,4,5-tetra-hidropirido[3,2-b][1,4]oxaze- pin-7-il)-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (61 mg, 56% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 474,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 4,10 minutos. Etapa 6
[00414] 4-(5-(4-cloro-2-fluorobenzil)-2,3,4,5-tetra-hidropirido[3,2-b] [1,4]oxazepin-7-il)-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato de terc-butila (45 mg, 0,095 mmol) foi dissolvido em DCM (3 mL). À mistura de reação foi adicionado HCl/dioxano (1 mL, 4 N) e foi agitada a 25°C por duas horas. A mistura foi diluída com DCM (10 mL) e DIPEA (1 mL) foi adicionado à mistura de reação acima. A solução foi concentrada para dar o produto desejado 5-(4-cloro-2-fluorobenzil)-7-(1,2,3,6-tetra- hidropiridin-4-il)-2,3,4,5-tetra-hidropirido [3,2-b][1,4]oxazepina (40 mg, em bruto), que foi usado diretamente na próxima etapa. LCMS: [M+H]+ = 374,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,65 min. Etapa 7
[00415] Uma mistura de 5-(4-cloro-2-fluorobenzil)-7-(1,2,3,6-tetra- hidropiridin-4-il)-2,3,4,5-tetra-hidropirido [3,2-b][1,4] oxazepina (35 mg, 0,094 mmol), terc-butil (S)-2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxilato (38 mg, 0,113 mmol), DIPEA (121 mg, 0,94 mmol) em DMF (3 mL) foi agitada a 60°C por 3 horas. MeOH (1 mL) foi adicionado à solução de reação. A solução foi purificada por prep-HPLC para dar terc-butil (S)-2-((4-(5-(4-cloro-2-fluorobenzil)- 2,3,4,5-tetra-hidropirido[3,2-b][1,4]oxazepin-7-il)-3,6-di-hidropiridin- 1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (12 mg, rendimento de 19%) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 674,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,48 minutos. Etapa 8
[00416] (S)-2-((4-(5-(4-cloro-2-fluorobenzil)-2,3,4,5-tetra-hidropirido [3,2-b][1,4]oxazepin-7-il)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-
ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato de terc-butila (12 mg, 0,018 mmol, 1,0 eq) foi dissolvido em TFA (0,5 mL) e DCE (4 mL). A mistura de reação foi agitada a 25°C por 8 horas.
A solução de reação foi concentrada in vacuo para dar produto em bruto.
O produto em bruto foi purificado por prep-HPLC para dar ácido (S)-2-((4-(5-(4-cloro-2- fluorobenzil)-2,3,4,5-tetra-hidropirido[3,2-b][1,4]oxazepin-7-il)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (2,1 mg, rendimento de 19%) como um sólido amarelo.
LCMS: [M+H]+ = 618,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,44 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,24 (s, 1H), 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,39 (dd, J = 10,1, 2,0 Hz, 1H), 7,33 (t, J = 8,3 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,38 (s, 1H), 5,03 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 4,76 (d, J = 14,3 Hz, 3H), 4,62 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 4,47 – 4,32 (m, 1H), 4,15 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,94 (dd, J = 65,8, 13,5 Hz, 1H), 3,51 (s, 2H), 3,13 (s, 2H), 2,66 (d, J = 9,8 Hz, 4H), 2,35 (d, J = 11,4 Hz, 4H), 1,99 – 1,91 (m, 3H). Ácido 2-((6-((6-cloro-1,2,3,4-tetra-hidronaftalen-1-il)óxi)-3',6'-di- hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(((S)-oxetan-2-il)metil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 60)
Composto 60
NaBH4, Metanol rt, durante a noite DIPEA, dioxano, dioxano/H2O, 80ºC, 5 h 80ºC, durante a noite 1) LiOH, THF/Metanol 100ºC, durante a noite Composto 60 Etapa 1
[00417] À solução de 6-cloro-3,4-di-hidronaftalen-1(2H)-ona (500 mg, 2,768 mmols) em metanol (5 mL) foi adicionado NaBH4 (126 mg, 3,330 mmols) a 0°C. A mistura da reação foi agitada em RT durante a noite. Metanol foi evaporado e foi obtido um sólido branco. NH4Cl sat. (50 mL) e EA (100 mL) foram adicionados e a fase aquosa foi extraída por EA (50 mL×2). A fase orgânica combinada foi seca por Na2SO4. O solvente foi evaporado para dar o produto em bruto 6-cloro-1,2,3,4- tetra-hidronaftalen-1-ol (520 mg, rendimento 100%) como um líquido amarelo pálido. O produto bruto foi usado para a próxima etapa sem purificação adicional. LCMS: [M+Na]+ = 183,7; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,73min. Etapa 2
[00418] À solução de 2,6-dibromopiridina (1 g, 4,221 mmols) em dioxano (25 mL) e H2O (5 mL) foram adicionados terc-butil 4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-5,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (1,56 g, 5,045 mmols), Pd(PPh4)3 (500 mg, 0,422 mmol) e K2CO3 (1,46 g, 10,552 mmols) sob N2. A mistura de reação foi agitada a 80°C por 5 horas. A mistura de reação foi resfriada até RT e EA (100 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi filtrada e a mistura foi extraída com EA (50 mL×2). A fase orgânica combinada foi lavada por NaCl. A fase orgânica foi seca por Na2SO4. O produto em bruto foi purificado por cromatografia (PE/EA = 10/1) para dar o composto desejado terc-butil
6-bromo-5',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridina]-1'(2'H)-carboxilato (530 mg, rendimento 37%) como um líquido amarelo pálido. LCMS: [M+Na]+ = 361,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,15 minutos. Etapa 3
[00419] À solução de 6-bromo-5',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridina]-1'(2'H)- carboxilato de terc-butila (150 mg, 0,442 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado TFA (1 mL). A mistura de reação foi agitada à RT por 30 minutos. DCM foi evaporado para dar o produto em bruto 6-bromo- 1',2',3',6'-tetra-hidro-2,4'-bipiridina (90 mg, rendimento 85%) como um líquido amarelo pálido. O produto bruto foi usado para a próxima etapa sem purificação adicional. LCMS: [M+H]+ = 239,7; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,13 min. Etapa 4
[00420] À solução de 6-bromo-1',2',3',6'-tetra-hidro-2,4'-bipiridina (90 mg, 0,376 mmol) em dioxano (5 mL) foram adicionados (S)-metil 2- (clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (100 mg, 0,339 mmol; Os valores da rotação óptica, [α]25,1°C589 nm = -30,06 (c = 0,1, MeOH)) e DIPEA (700 mg, 5,416 mmols) à RT. A mistura de reação foi agitada a 80°C durante a noite. O solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por prep-HPLC para dar o produto esperado (150 mg, rendimento de 80%) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 499,7; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,49 min. Etapa 5
[00421] À solução de 2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo [d]imidazol-6-carboxilato de (S)-metila (10 mg, 0,020 mmol), 6-cloro- 1,2,3,4-tetra-hidronaftalen-1-ol (5 mg, 0,027 mmol) em tolueno (5 mL) foram adicionados Pd2(dba)3 (2 mg, 0,002 mmol), BINAP (2 mg, 0,003 mmol) e t-BuONa (5 mg, 0,052 mmol) sob N2. A mistura de reação foi aquecida até 100°C. A mistura de reação foi agitada a 100°C durante a noite. O solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por prep- HPLC para dar o produto esperado metil 2-((6-((6-cloro-1,2,3,4-tetra- hidronaftalen-1-il)óxi)-5',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-((S)- oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (7.5 mg, rendimento 63%) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 599,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mm) = 2,05 minutos. Etapa 6
[00422] À solução de 2-((6-((6-cloro-1,2,3,4-tetra-hidronaftalen-1-il) óxi)-5',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridina]-1'(2'H)-il)metil)-1-((S)-oxetan-2- ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato de metila (7,5 mg, 0,013 mmol) em THF (0,5 ml) foi adicionado metanol (0,5 mL), H2O (0,5 mL) e LiOH (7,5 mg, 0,407 mmol). A mistura de reação foi agitada à RT por duas horas. Os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por prep-HPLC para dar o produto esperado ácido 2-((6-((6-cloro- 1,2,3,4-tetra-hidronaftalen-1-il)óxi)-5',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)- il)metil)-1-((S)-oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (1,3 mg, rendimento 19%) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 585,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mm) = 1,49 min. Ácido 2-((4-(6-(7-clorocroman-4-ilamino)piridin-2-il)-5,6-di-hidropi- ridin-1(2H)-il)metil)-1-((S)-oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 61) Composto 61 dioxano, água DIPEA, dioxano, 90ºC, durante a noite 90ºC, durante a noite
HCl, metanol 1) Isopropóxido de titânio(IV) 100ºC, durante a noite 2) NaBH4, THF Composto 61 Etapa 1
[00423] À solução de 2,6-dibromopiridina (2,37 g, 10 mmols) em dioxano (60 mL) e água (12 mL) foi adicionado terc-butil 4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-5,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (3,70 g, 12 mmols), Pd(dppf)Cl2 (146 mg, 0,2 mmol) e Na2CO3 (2,12 g, 20 mmols) sob N2. A mistura de reação foi agitada a 90°C por 12 horas. 80 mL de água gelada foram adicionados para extinguir a reação. A solução foi extraída com EA (80 mLx3), lavada com salmoura e seca em Na2SO4. Após evaporação de solvente, o bruto foi purificado com cromatografia de coluna (PE/EA = 5/1) para dar terc-butil 4-(6- bromopiridin-2-il)-5,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (1,8 g, 53%) como um óleo amarelo. LCMS (M-55)+ = 283,0; Tempo de retenção (NH4HCO3) = 1,84 min. Etapa 2
[00424] À solução de 4-(6-bromopiridin-2-il)-5,6-di-hidropiridina- 1(2H)-carboxilato de terc-butila (1,69 g, 5 mmols) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (10 mL)) a 0°C. A mistura de reação foi agitada a 0°C por uma hora. Após evaporação de solvente, o produto bruto foi usado na passagem seguinte sem purificação adicional. LCMS: [M+H]+ = 322; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,59 min. Etapa 3
[00425] À solução de 2-bromo-6-(1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4- il)piridina (238 mg, 1 mmol) em dioxano (10 mL) foi adicionado (S)- terc-butil 2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-
carboxilato (370 mg, 1,1 mmol) e DIEA (388 mg, 3,0 mmols). A mistura de reação foi agitada a 90°C por 6 horas. 60 mL de água gelada foram adicionados para extinguir a reação. A solução foi extraída com EA (40 mLx3), lavada com salmoura e seca em Na2SO4. Após evaporação de solvente, o bruto foi purificado por cromatografia de coluna (PE/EA = 1/1) para dar (S)-terc-butil 2-((4-(6-bromopiridin-2-il)-5,6-di-hidropiridin- 1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (323 mg, 60%) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 539,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,72 min. Etapa 4
[00426] À solução de 7-clorocroman-4-ona (546 mg, 3 mmols) em DCM (10 mL) foi adicionado 2-metilpropano-2-sulfinamida (472 mg, 3,9 mmols) e Tetraisopropanolato de titânio (3,3 g, 12 mmols). A mistura foi aquecida a 70°C durante a noite. A mistura de reação foi resfriada até 0°C e boro-hidreto de sódio (228 mg, 6 mmols) foi adicionado. A mistura foi agitada à RT por duas horas. Solução de NH4Cl foi adicionada para extinguir a reação. A solução foi extraída com EA (50 mL×3), lavada com salmoura e seca em Na2SO4. Após evaporação de solvente, o produto bruto foi purificado com cromatografia de coluna (PE/EA = 2/1) para dar N-(7-clorocroman-4-il)-2-metilpropano-2- sulfinamida (400 mg, 46%) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 288; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,77 min. Etapa 5
[00427] À solução de N-(7-clorocroman-4-il)-2-metilpropano-2- sulfinamida (400 mg, 1,39 mmol) em metanol (5 mL) foi adicionado HCl em dioxano (5 mL, 4 N) a 0°C. A mistura de reação foi agitada a 0°C por uma hora. Após evaporação de solvente, o produto bruto foi usado na passagem seguinte sem purificação adicional. LCMS: [M– NH2]+ = 167,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,13 min.
Etapa 6
[00428] À solução de 7-clorocroman-4-amina (30 mg, 0,16 mmol) em tolueno (5 mL) foi adicionado (S)-terc-butil 2-((4-(6-bromopiridin-2- il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d] imidazol-6-carboxilato (45 mg, 0,08 mmol), Pd2(dba)3 (18 mg, 0,02 mmol), BINAP (25 mg, 0,04 mmol) e t-BuONa (46 mg, 0,48 mmol) sob N2. A mistura de reação foi agitada a 100°C por 12 horas. 20 mL de água gelada foram adicionados para extinguir a reação. A solução foi extraída com EA (40 mLx3), lavada com salmoura e seca em Na2SO4. Após evaporação de solvente, o bruto foi purificado com HPLC para dar terc-butil 2-((4-(6-(7-clorocroman-4-ilamino)piridin-2-il)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il) metil)-1-((S)-oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imida- zol-6-carboxilato (30 mg, 29%) como um óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 642,3; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,85 min. Etapa 7
[00429] À solução de 2-((4-(6-(7-clorocroman-4-ilamino)piridin-2-il)- 5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-((S)-oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]i midazol-6-carboxilato de terc-butila (30 mg, 0,05 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionado TFA (2 mL) a 0°C. A mistura de reação foi agitada a 0°C por duas horas. Após evaporação de solvente, o bruto foi purificado com HPLC para dar ácido 2-((4-(6-(7-clorocroman-4-ilamino)piridin-2- il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-((S)-oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (6 mg, 21%) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 586,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,48 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,31 (s, 1H), 7,99 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,39-7,35 (m, 1H), 7,25 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,85-6,82 (m, 1H), 6,79 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,65-6,64 (brs, 1H), 6,40 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,28-5,24 (m, 2 H), 4,90- 4,86 (m, 2H), 4,72 (d, J = 15,2 Hz, 1H), 4,65-4,60 (m, 1H), 4,50-4,45 (m, 1H), 4,28-4,25 (m, 2H), 4,20-4,04 (m, 2H), 3,32-3,29 (m, 2H), 2,87-
2,84 (m, 2H), 2,80-2,73 (m, 1H), 2,66 (bs, 2H), 2,56-2,47 (m, 1H), 2,14 (dd, J = 5,2 Hz, 10,4 Hz, 2H). (S)-3-(2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-5,6-di-hidropi- ridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)- 1,2,4-oxadiazol-5(4H)-ona (Composto 62) Composto 62 Dioxano 100ºC DIPEA, Dioxano, 80ºC, durante a noite Composto 62 Etapa 1
[00430] Uma solução de 3-fluoro-4-nitrobenzonitrila (3,0 g, 18,1 mmols), (S)-oxetan-2-ilmetanamina (1,6 g, 18,4 mmols) e TEA (7,5 ml, 54,3 mmols, 3 eq) em DMF (50 mL) foi agitada a 60°C por 3 horas. A reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (50 mLx3). O orgânico combinado foi lavado com salmoura (50 mLx3), seco sobre Na2SO4, filtrado e concentrado in vacuo para dar o produto em bruto, que foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (PE:EA = 3:1) para dar (S)-4-nitro-3-(oxetan-2-ilmetilamino)benzonitrila (2,0 g, 47,6% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 234,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,59 min. Etapa 2
[00431] A uma mistura de (S)-4-nitro-3-(oxetan-2-ilmetilamino) benzonitrila (470 mg, 2 mmols) em EtOH (15 mL) foi adicionado NH2OH (0,238 mL, 4 mmols). A mistura de reação foi aquecida até 90°C por 18 horas. A mistura foi evaporada até secura para dar (S,Z)-
N'-hidróxi-4-nitro-3-(oxetan-2-ilmetilamino)benzimidamida (450 mg, rendimento de 84%) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 267,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,28 min. Etapa 3
[00432] A uma mistura de (S,Z)-N'-hidróxi-4-nitro-3-(oxetan-2- ilmetilamino)benzimidamida (250 mg, 0,939 mmol, 1,0 eq) em dioxano (50 mL) foi adicionado DBU (157,2 mg, 1,033 mmol) seguido por CDI (182,7 mg, 1,13 mmol). A mistura de reação foi aquecida até 100°C por 18 horas. A mistura foi evaporada até secura e purificada por prep- HPLC para dar (S)-3-(4-nitro-3-(oxetan-2-ilmetilamino)fenil)-1,2,4- oxadiazol-5(4H)-ona bruto (260 mg, 95% de rendimento) como sólido amarelo claro. LCMS: [M+H]+ = 292,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,18 min. Etapa 4
[00433] A uma mistura de (S)-3-(4-nitro-3-(oxetan-2- ilmetilamino)fenil)-1,2,4-oxadiazol-5(4H)-ona (150 mg, 0,513 mmol, 1,0 eq) em THF (15 mL) foi adicionado Pd/C (15 mg, 10%, p/p). A mistura de reação foi agitada à RT sob hidrogênio por 18 horas. A mistura foi filtrada por celite e evaporada até secura para dar (S)-3-(4-amino-3- (oxetan-2-ilmetilamino)fenil)-1,2,4-oxadiazol-5 (4H)-ona (120 mg, 89% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 263,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 0,35 min. Etapa 5
[00434] A uma solução de (S)-3-(4-amino-3-(oxetan-2-ilmetilamino) fenil)-1,2,4-oxadiazol-5(4H)-ona (120 mg, 0,457 mmol) em MeCN (20 mL) foi adicionado 2-cloro-1,1,1-trimetoxietano (112 mg, 0,723 mmol) e p-TSA (12 mg, 1 mmol). A mistura de reação foi agitada a 60°C durante a noite. A mistura foi evaporada até secura para dar (S)-3-(2- (clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)-1,2,4-oxadia-
zol-5(4H)-ona (150 mg, 100% de rendimento) como um sólido branco, que foi usado na próxima etapa sem purificação adicional. LCMS: [M+H]+ = 321,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 0,35 min. Etapa 6
[00435] A uma solução de 2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-6-(1,2,3,6- tetra-hidropiridin-4-il)piridina (150 mg, 0,47 mmol) em dioxano (20 mL) foi adicionada (S)-3-(2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d] imidazol-6-il)-1,2,4-oxadiazol-5(4H)-ona (150 mg, 0,47 mmol), DIPEA (523 mg, 4,05 mmols) e NaI (15 mg, 0,1 eq). A mistura de reação foi aquecida até 80°C por duas horas. A mistura foi evaporada até secura, o resíduo foi extraído por EtOAc/H2O (1:1), concentrada e o resíduo foi dissolvido em DMF e purificado por prep-HPLC para dar (S)-3-(2-((4- (6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)- il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)-1,2,4-oxadiazol- 5(4H)-ona (16 mg, 5,7% de rendimento) como um sólido marrom claro. LCMS: [M+H]+ = 603,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,65 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,12 (s, 1H), 7,76 – 7,74 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,71 – 7,67 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,65 – 7,63 (dd, J1 = 8,4 Hz, J2 = 1,2 Hz, 1H), 7,58 – 7,53 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,49 – 7,46 (dd, J1 = 10,0 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1H), 7,32 – 7,29 (dd, J1 = 8,0 Hz, J2 = 1,6 Hz, 1H), 7,10 – 7,08 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,75 – 6,72 (t, J = 3,2 Hz, 2H), 5,39 (s, 2H), 5,10– 5,08 (m, 1H), 4,80 – 4,74 (m, 1H), 4,65 – 4,60 (dd, J1 = 14,8 Hz, J2 = 2,8 Hz, 1H), 4,50 – 4,38 (m, 2H), 4,10 – 4,06 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,95 – 3,91 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,26 – 3,23 (m, 3H), 2,75 (s, 2H), 2,71 – 2,64 (m, 1H), 2,46 – 2,39 (m, 2H).
Ácido (S)-2-((4-(3-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-2,4-difluorofenil)-5,6- di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetano-2-ilmetil)-1H-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (Composto 63) Composto 63
[00436] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 598,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,63 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,25 (s, 1H), 7,81 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,58 – 7,45 (m, 2H), 7,32 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 5,93 (brs, 1H), 5,17 (s, 2H), 5,07 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,79 (dd, J = 15,2, 6,9 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 4,48 (dd, J = 13,9, 7,5 Hz, 1H), 4,36 (dd, J = 14,7, 6,0 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,22 – 3,16(m, 2H), 2,80 – 2,61 (m, 3H), 2,46 – 2,40 (m, 3H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-4-metilfenil)-3,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imida- zol-6-carboxílico (Composto 64) Composto 64
[00437] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 576,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,65 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,17 (s, 1H), 7,80 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,63 – 7,48 (m, 3H), 7,35 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 6,93 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,15 (s, 1H), 5,18 (s, 2H), 5,06 (d, J = 7,2 Hz,
1H), 4,76 (dd, J = 15,2, 7,1 Hz, 1H), 4,63 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 4,47 (dd, J = 13,6, 7,7 Hz, 1H), 4,36 (dt, J = 12,2, 6,0 Hz, 1H), 4,04 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,15 (d, J = 24,0 Hz, 4H), 2,71 (d, J = 26,0 Hz, 2H), 2,42 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 2,13 (s, 3H). Ácido (S)-2-((4-(6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)piridin-2-il)-4- cianopiperidin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 66) Composto 66 Pd2(dba)3, Dioxano, 100ºC, 18 h DIPEA, Dioxano, 90ºC, 3 h Composto 66 Etapa 1
[00438] Uma solução de 4-cianopiperidina-1-carboxilato de terc- butila (1,0 g, 4,76 mmols) em THF (10 mL) foi resfriada até -30°C sob nitrogênio, então, LDA (2,5 mL, 2 N) foi adicionado lentamente, a reação foi agitada a -30°C por 0,5 h. Em seguida, 2,6-dibromopiridina (1,13 g, 4,76 mmols) foi adicionada à reação agitada. A mistura foi agitada a 25°C e agitada por 3 horas. A mistura foi diluída com HCl (1N) até pH 7, extraída com DCM (50 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados in vacuo para dar terc-butil 4-(6-bromopiridin- 2-il)-4-cianopiperidina-1-carboxilato (1,0 g, 2,73 mmols, rendimento de 57,5%) como sólido marrom. LCMS: [M-100]+ = 266,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,91 min.
Etapa 2
[00439] A uma solução de 4-(6-bromopiridin-2-il)-4-cianopiperidina- 1-carboxilato de terc-butila (500 mg, 1,37 mmol) em 1,4-Dioxano (10 mL) foi adicionado (4-cloro- 2-fluorofenil)metanol (264 mg, 1,64 mmol), BINAP (85 mg, 0,14 mmol), Pd2(dba)3 (63 mg, 0,07 mmol) e Cs2CO3 (1,33 g, 4,11 mmols). A mistura foi agitada a 100°C por 16 horas. A reação foi resfriada até RT, diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mLx3), secos sobre Na2SO4 e concentrados in vacuo para dar produto em bruto, que foi purificado por coluna de cromatografia em sílica gel (PE/EA = 2/1) para dar terc-butil 4-(6-(4- cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-4-cianopiperidina-1-carboxilato (239 mg, 0,54 mmol, 30,7% de rendimento) como sólido branco. LCMS [M- 55]+ = 389,9; Tempo de retenção (10 mM NH4HCO3) = 1,97 min. Etapa 3
[00440] A uma solução de 4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) piridin-2- il)-4-cianopiperidina-1-carboxilato de terc-butila (239 mg, 0,54 mmol) DCM (5 mL) foi adicionado TFA (1 mL), a mistura foi agitada a 25°C por uma hora. A mistura foi diluída com NaHCO 3 até pH 7, extraída com DCM (50 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados in vacuo para dar 4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)piperidina-4- carbonitrila (150 mg, 0,43 mmol, 81% de rendimento) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 346,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,60 min. Etapa 4
[00441] A uma solução de 4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2- il)piperidina-4-carbonitrila (40 mg, 0,12 mmoll) em 1,4-dioxano (5 mL) foi adicionado (S)-terc-butil 2-(clorometil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H- benzo[d]imidazol-5-carboxilato (39 mg, 0,12 mmol) e DIPEA (45 mg,
0,36 mmol), a mistura foi agitada a 90°C por 3 horas. A reação foi resfriada até RT, então, diluída com água (50 mL) e extraída com DCM (50 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados in vacuo para dar o produto em bruto, que foi purificado por coluna de cromatografia em sílica gel (PE/EA = 3/1) para dar (S)-terc-butil 2-((4-(6-(4-cloro-2- fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-4-cianopiperidin-1-il)metil)-3-(oxetan-2- ilmetil)-3H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato (40 mg, 0,06 mmol, 32,9% de rendimento) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 646,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,97 min. Etapa 5
[00442] A uma solução de 2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin- 2-il)-4-cianopiperidin-1-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-benzo[d]imida- zol-5-carboxilato de (S)-terc-butila (40 mg, 0,06 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado TFA (1 mL), a mistura foi agitada a 25°C por 4 horas. Em seguida, a mistura foi diluída com água (50 mL), extraída com DCM (50 mL×3). A camada orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4 e concentrada in vacuo para dar produto em bruto, que foi purificado por HPLC preparativa para dar ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2- fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-4-cianopiperidin-1-il)metil)-3-(oxetan-2-ilme- til)-3H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico (13,5 mg, rendimento de 37%) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 590,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,55 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO): δ 8,27 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 7,84 – 7,78 (m, 2H), 7,65 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,60 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,47 (dd, J = 10,0, 1,9 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 8,2, 1,8 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,41 (s, 2H), 5,12 – 5,05 (m, 1H), 4,78 (dd, J = 15,3, 7,1 Hz, 1H), 4,65 (dd, J = 15,2, 2,5 Hz, 1H), 4,49 – 4,42 (m, 1H), 4,36 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 4,02 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,87
(d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,09 – 3,03 (m, 1H), 2,98 – 2,91 (m, 1H), 2,73 – 2,65 (m, 1H), 2,49 – 2,37 (m, 3H), 2,19 – 2,06 (m, 4H). Ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-4- fluoropiperidin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 67) Composto 67 Pd2(dba)3, Tolueno, 100ºC, 18 h 1,4-dioxano, DIPEA, 80ºC, 3 h Composto 67 Etapa 1
[00443] A uma solução de 2,6-dibromopiridina (1,18 g, 5 mmols) em THF anidro (20 mL) foi adicionado iPr-MgCl LiCl (3,85 mL, 5 mmols) sob N2. A mistura foi agitada à RT por duas horas. Em seguida, terc-butil 4- oxopiperidina-1-carboxilato (1,0 g, 5 mmols) foi adicionado à mistura. A mistura de reação foi agitada à RT por 18 horas. A mistura foi extinta com 20 mL de NH4Cl saturado, extraída por EtOAc (20 mLx3), seca sobre Na2SO4, após remoção de solvente, o resíduo foi purificado por prep-HPLC para dar terc-butil 4-(6-bromopiridin-2-il)-4-hidroxipiperidina-1- carboxilato (280 mg, rendimento de 16%) como um óleo amarelo claro. LCMS: [M-55]+ = 301,0; Tempo de retenção (10 mM NH4HCO3) = 1,84 min. Etapa 2
[00444] Uma mistura de 4-(6-bromopiridin-2-il)-4-hidroxipiperidina-1- carboxilato de terc-butila (120 mg, 0,336 mmol) em DCM (20 mL) foi resfriada até -78°C sob N2, então, DAST (0,25 mL, 1,86 mmol) foi adicionado à mistura. A mistura de reação foi agitada à RT por 4 h. A mistura foi extinta por água gelada e extraída por EtOAc (20 mL×3), seca sobre Na2SO4, após remoção de solvente para dar terc-butil 4-(6- bromopiridin-2-il)-4-fluoropiperidina-1-carboxilato (118 mg, 97% de rendimento) como um óleo amarelo claro. LCMS: [M-55]+ = 303,0; Tempo de retenção (10 mM NH4HCO3) = 2,08 minutos. Etapa 3
[00445] A uma suspensão agitada de 4-(6-bromopiridin-2-il)-4- fluoropiperidina-1-carboxilato de terc-butila (118 mg, 0,328 mmol) e (4- cloro-2-fluorofenil)metanol (58 mg, 0,361 mmol) em tolueno (20 mL) foi adicionado Cs2CO3 (214 mg, 0,67 mmol), BINAP (20 mg, 0,0328 mmol) e Pd2(dba)3 (30 mg, 0,0328 mmol) sob N2 a 15°C. A mistura de reação foi desgaseificada e reenchida com N2 três vezes. A mistura resultante foi aquecida até 120°C sob N2 por 18 horas. A mistura foi resfriada até RT, extraída por EtOAc (30 mL×2) e as camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (PE/EA = 100/1) para dar produto em bruto terc-butil 4-(6-(4-cloro- 2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-4-fluoropiperidina-1-carboxilato (200 mg, 100% de rendimento bruto) como um óleo amarelo claro. LCMS: [M-55]+ = 383,0; Tempo de retenção (10 mM NH4HCO3) = 2,47 minutos. Etapa 4
[00446] A uma mistura de 4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) piridin-2- il)-4-fluoropiperidina-1-carboxilato de terc-butila(200 mg, 0,456 mmoll) em DCE (15 mL) foi adicionado TFA (3 mL). A mistura de reação foi agitada à RT por uma hora. A mistura foi evaporada até secura para dar 2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-6-(4-fluoropiperidin-4-il) piridina (190 mg, 100% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 339,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,82 min.
Etapa 5
[00447] A uma mistura de 2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxilato de (S)-terc-butila (60 mg, 0,18 mmol) em dioxano (20 mL) foi adicionado 2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-6-(4- fluoropiperidin-4-il)piridina (60 mg, 0,177 mmol), DIPEA (91,5 mg, 0,71 mmol) e NaI (12 mg, 0,1 eq). A mistura de reação foi aquecida até 80°C por duas horas. A mistura foi evaporada até secura, o resíduo foi extinto com água e extraída por EtOAc (20 mL x 3), após remoção do solvente para gerar (S)-terc-butil 2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) piridin-2-il)-4-fluoropiperidin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d] imidazol-6-carboxilato (100 mg, 88% de rendimento de bruto) como um óleo amarelo claro. LCMS: [M+H]+ = 639,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,43 min. Etapa 6
[00448] A uma mistura de 2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin- 2-il)-4-fluoropiperidin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imida- zol-6-carboxilato de (S)-terc-butila (100 mg, 0,16 mmol) em DCE (15 mL) foi adicionado TFA (3 mL). A mistura de reação foi agitada à RT por uma hora. A mistura foi evaporada até secura. O resíduo foi dissolvido em DMF e purificado por prep-HPLC para dar (S)-2-((4-(6- (4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-4-fluoropiperidin-1-il)metil)-1- (oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (19,4 mg, rendimento de 21%) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 583,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,59 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,28 – 8,27 (d, J = 0,4 Hz, 1H), 7,82 – 7,76 (m, 2H), 7,65 – 7,62 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,58 – 7,54 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,48 – 7,45 (dd, J1 = 10,0 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1H), 7,31 – 7,28 (dd, J1 = 8,4 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1H), 7,16 – 7,14 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 6,84 – 6,81 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,39 (s, 2H), 5,15– 5,12 (m, 1H), 4,84 – 4,78
(m, 1H), 4,71 – 4,66 (m, 1H), 4,48 – 4,35 (m, 2H), 4,02 – 3,98 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,85 – 3,82 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 2,91 – 2,88 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 2,77 – 2,68 (m, 2H), 2,46 – 2,39 (m, 3H), 2,28 – 2,12 (m, 2H), 1,86 – 1,76 (m, 2H). Ácido (S)-2-((6-((4-etinil-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 68) Composto 68 Composto 68 Etapa 1
[00449] A uma solução de (4-bromo-2-fluorofenil)metanol (500 mg, 2,44 mmols) em dioxano (6 mL), CuI (23 mg, 0,12 mmol) e DIPEA (630 mg, 4,88 mmols) foi adicionado Pd(PPh3)2Cl2 (86 mg, 0,12 mmol). Finalmente, etiniltrimetilsilano (287 mg, 2,93 mmols) foi adicionado à mistura de reação e agitado por 12 horas a 90°C sob N2. Água (30 mL) foi adicionada à solução de reação e extraída com acetato de etila (25 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (30 mL×2), seca sobre Na2SO4 e concentrada in vacuo para dar o produto em bruto. O produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (PE/EA = 5/1) para dar (2-fluoro-4-
((trimetilsilil)etinil)fenil)metanol (0,2 g, rendimento de 37%) como um sólido amarelo. Etapa 2
[00450] A uma solução de (S)-2-((6-bromo-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxilato de metila (30 mg, 0,060 mmol) em tolueno (4,0 mL), BINAP (9,4 mg, 0,015 mmol), t-BuONa (11 mg, 0,11 mmol) foi adicionado Pd2(dba)3 (5,7 mg, 0,006 mmol). (2-fluoro-4-((trimetilsilil)etinil)fenil) metanol (20 mg, 0,09 mmol) foi adicionado à mistura de reação e foi agitado por 12 horas a 90°C sob N2. Água (10 mL) foi adicionada à solução de reação e extraída com acetato de etila (15 mLx3). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (20 mL×2), seca sobre Na2SO4 e concentrada in vacuo para dar o produto em bruto. O produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (PE/EA = 1/5) para dar metil (S)-2-((6-((2-fluoro-4-((trimetilsilil) etinil)benzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (10 mg, rendimento de 26%) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 639,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,53 min. Etapa 3
[00451] A uma solução de (S)-2-((6-((2-fluoro-4-((trimetilsilil) etinil) benzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridina]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato de metila (10 mg, 0,016 mmol) em MeOH (0,5 mL), THF (0,5 mL) e H2O (0,5 mL) foi adicionado LiOH.H2O (3,8 mg, 0,16 mmol). A mistura de reação foi agitada a 25°C por 12 horas, ajustada para pH 7-8 com AcOH, purificada por prep- HPLC para dar ácido (S)-2-((6-((4-etinil-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di- hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (2,2 mg, rendimento de 25%) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 553,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,57 min. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26 (s, 1H), 7,81 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,73 – 7,63 (m, 2H), 7,52 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 5,42 (s, 2H), 5,06 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,80 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 13,0 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 13,6, 7,8 Hz, 1H), 4,41 – 4,31 (m, 2H), 4,07 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,31 – 3,12 (m, 3H), 2,74 (s, 2H), 2,64 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 2,40 (dd, J = 25,8, 17,3 Hz, 2H). Ácido 2-((6-((7-clorocroman-4-il)óxi)-5',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1-((S)-oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 69) Composto 69
[00452] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 587,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,74 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,34 (s, 1H), 8,01-7,98 (m, 1H), 7,70 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,66-7,62 (m,1H), 7,32 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,87-6,85 (m, 2H), 6,80-6,78 (brs, 1H), 6,62 (d, J =8,0 Hz, 1H), 6,35-6,33 (m, 1H), 5,29-5,24 (m, 1H), 4,92-4,88 (m, 2H), 4,77-4,72 (m, 1H), 4,65-4,61 (m,1H), 4,51-4,45 (m, 1H), 4,33-4,30 (m, 2H), 4,22- 4,06 (m, 2H), 3,39-3,33 (m, 2H), 2,91-2,88 (m, 2H), 2,81-2,72 (m, 3H), 2,57-2,48 (m, 1H), 2,29-2,25 (m, 2H).
Ácido 2-((6-(1-(4-cloro-2-fluorofenil)etóxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(((S)-oxetan-2-il)metil)-1H-benzo[d]imi- dazol-6-carboxílico (Composto 70) Composto 70
[00453] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 577,0; pureza = 100% (254 nm); Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,63 min. 1H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,35 – 8,29 (brs, 1H), 8,00 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,4 Hz, 1H),7,60 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,42 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,18 – 7,10 (m, 2H), 7,01 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,69 (d,J = 8,2 Hz, 1H), 6,40 – 6,30 (m, 1H), 5,27 – 5,20 (m, 1H), 4,83 – 4,86 (m, 1H), 4,73 – 4,63 (m, 3H),4,50 – 4,41 (m, 1H), 4,16 (dd, J = 13,8, 3,3 Hz, 1H), 4,04 (dd, J = 13,7, 6,6 Hz, 1H), 3,27 – 3,21 (m,2H), 2,84 – 2,71 (m, 3H), 2,64 – 2,44 (m, 3H), 1,61 (d, J = 6,6 Hz, 3H). (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-5,6-di-hidropiri- din-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carbonitrila (Composto 71) Composto 71
[00454] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 544,0; pureza = 100% (254 nm); Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,17 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,16-8,15 (brs, 1H), 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,66 – 7,58 (m, 2H), 7,50 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,29 – 7,16 (m, 2H), 7,07 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,77 – 6,66 (m, 2H), 5,44 (s, 2H), 5,23 (dt, J = 7,2, 5,2 Hz, 1H), 4,92 – 4,83 (m, 1H), 4,71 (dd, J = 15,3, 2,3 Hz, 1H),
4,64 (dd, J = 13,9, 7,9 Hz, 1H), 4,49 (dt, J = 9,2, 6,0 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 4,03 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 3,27 (dt, J = 17,4, 8,7 Hz, 2H), 2,88 – 2,81 (m, 2H), 2,81 – 2,71 (m, 1H), 2,64-2,63 (brs, 2H), 2,51 (dq, J = 11,5, 7,3 Hz, 1H). Ácido 2-((6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxazol-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxili (Composto 72) Composto 72
[00455] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 574,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,63 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,17-8,16 (brs, 1H), 7,97-7,96 (brs, 1H), 7,83-7,82 (brs, 1H), 7,67-7,66 (brs, 2H), 7,52 (d, J = 25,1 Hz, 2H), 7,32-7,31 (brs, 1H), 7,06 (d, J = 15,4 Hz, 2H), 6,68 (d, J = 22,8 Hz, 2H), 5,90 (s, 2H), 5,39 (s, 2H), 3,99 (s, 2H), 3,19-3,18 (brs, 2H), 2,66- 2,65 (brs, 2H), 2,36-2,35 (brs, 2H). Ácido (S)-2-((6-(benzilóxi)-5',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)- il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 73) Composto 73
[00456] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 511,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,52 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,36-8,34 (brs, 1H), 8,03 (dd, J = 1,2, 8
Hz, 1H), 7,77 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,66 (t, J= 7,6 Hz, 1H),7,28-7,45 (m, 5H), 7,11 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,73-6,76 (m, 2H), 5,41 (s, 2H), 5,22-5,25 (m, 1H),4,82-4,88 (m, 1H), 4,43-4,73 (m, 5H), 3,67-3,80 (m, 2H), 3,21- 3,32 (m, 2H), 2,51-2,83 (m, 4H). Ácido (S)-2-((4-(7-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-1H-pirazolo[3,4- c]piridin-5-il)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)- 1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 103) Composto 103 Dioxano, 50ºC, 2,5 h Intermediário A Intermediário A Dioxano/H2O, 80ºC Composto 103 Etapa 1
[00457] À solução de (S)-2-(clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxilato de metila (200 mg, 0,68 mmol, 1,0 eq) em 1,4-dioxano (10 mL) foi adicionado 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-1,2,3,6-tetra-hidropiridina (200 mg, 0,68 mmol, 1,0 eq) e DIPEA (298 mg, 2,38 mmols, 3,5 eq) e, em seguida, a mistura foi agitada a 50°C por 2,5 h. A reação foi extinta por água (15 mL), extraída com DCM (30 mLx3). A combinação orgânica foi lavada com salmoura (10 mLx3), seca e concentrada in vacuo para dar produto em bruto (metil (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxa- borolan-2-il)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxilato, 280 mg) como um sólido amarelo, que foi usado na próxima etapa sem purificação adicional. LCMS: [M+H]+ = 468,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,66 min. Etapa 2
[00458] A uma solução de 5,7-dicloro-1H-pirazolo[3,4-c] piridina (200 mg, 1,07 mmol, 1,0 eq) em (4-cloro-2-fluorofenil)metanol (5 mL) foi adicionado NaOH (256 mg, 6,42 mmols, 6 eq). A mistura foi agitada a 150°C por 8 horas. A reação foi purificada por pre-HPLC para produzir o produto (5-cloro-7-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-1H- pirazol[3,4-c]piridina, 80 mg, 0,25 mmol). LCMS: [M+H]+ = 311,8; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,73 min. Etapa 3
[00459] A solução de 5-cloro-7-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-1H- pirazolo[3,4-c]piridina (50 mg, 0,1 mmol, 1,0 eq) e metil (S)-1-(oxetan-2- ilmetil)-2-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,6-di-hidropiridin- 1(2H)-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (56 mg, 0,12 mmol), Pd(dppf)Cl2 (15 mg, 0,01 mmol) e K2CO3 (69 mg, 0,5 mmol) em 1,4- dioxano (4 mL) e H2O (1 mL) foi agitada a 80°C por 16 horas. A reação foi purificada por pre-HPLC para produzir o produto (metil (S)-2-((4-(7- ((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-1H-pirazolo[3,4-c]piridin-5-il)-3,6-di-hidro- piridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo-[d]imidazol-6-carbo- xilato, 30 mg, 0,05 mmol). LCMS: [M+H]+ = 617,3; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,54 min. Etapa 4
[00460] Uma solução de (S)-2-((4-(7-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-1H- pirazolo[3,4-c]piridin-5-il)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato de metila (30 mg, 0,05 mmol), LiOH.H2O (20 mg, 0,2 mmol), ácido di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-
(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico, 1,3 mg, 0,002 mmol). LCMS: [M+H]+ = 603,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,31 min. 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,21 (s, 1H), 7,94-7,85 (m, 2H), 7,58 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,18-7,09 (m, 2H), 6,70 (s, 1H), 5,56 (brs, 2H), 5,19-5,11 (m, 1H), 4,82 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 4,63 (dd, J = 15,4, 2,5 Hz, 1H), 4,52 (dd, J = 13,9, 7,9 Hz, 2H), 4,36 (dt, J = 9,2, 6,0 Hz, 1H), 4,08 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 3,97 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 3,24 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 2,80 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,66 (dt, J = 14,4, 8,1 Hz, 1H), 2,58 (brs, 2H), 2,46-2,35 (m, 1H). Ácido 2-((6-((6-cloro-1,2,3,4-tetra-hidronaftalen-1-il)amino)-3',6'-di- hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(((S)-oxetan-2-il)metil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 104) Composto 104
[00461] Preparado de maneira análoga ao Composto 61 LCMS: [M+H]+ = 584,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,62 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,33-8,32 (brs, 1H), 7,99 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,42 – 7,25 (m, 2H), 7,14 – 7,04 (m, 2H), 6,68 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,61-6,60 (brs, 1H), 6,40 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,26 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 4,88 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 4,73 (d, J = 13,0 Hz, 1H), 4,66 – 4,58 (m, 1H), 4,48 (dt, J = 8,9, 5,9 Hz, 1H), 4,20 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 14,0 Hz, 1H), 3,32 – 3,29 (m, 2H), 2,88-2,87 (brs, 2H), 2,78 (t, J = 17,9 Hz, 3H), 2,65-2,64 (brs, 2H), 2,57 – 2,48 (m, 1H), 2,05 – 1,77 (m, 4H).
(S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-5,6-di-hidropiri- din-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-6-(1H-tetrazol-5-il)-1H-benzo [d]imidazol (Composto 105) Composto 105
[00462] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 587,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,64 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,35 (d, J = 15,7 Hz, 1H), 7,87 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,56 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,48 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1H), 7,30 (dd, J = 8,2, 1,8 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,79 – 6,70 (m, 2H), 5,40 (s, 2H), 5,18 – 5,07 (m, 1H), 4,81 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1H), 4,67 (dd, J = 15,2, 2,9 Hz, 1H), 4,48 (dd, J = 14,3, 7,1 Hz, 1H), 4,41 (dt, J = 9,0, 6,0 Hz, 1H), 4,10 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,95 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,27 (d, J = 9,5 Hz, 2H), 2,78-2,77 (brs, 2H), 2,71 – 2,63 (m, 1H), 2,53-2,52 (brs, 2H), 2,48 – 2,41 (m, 1H). Ácido (S)-2-((4-(6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)piridin-2-il)-2- oxopiperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 106) Composto 106
Cs2/Co3, Tolueno 120ºC, 18 h Etapa 1 Etapa 2 Etapa 3 Etapa 4 Composto 106 Etapa 1
[00463] Uma solução de 3-oxopiperazina-1-carboxilato de terc- butila (50 mg, 0,25 mmol) em THF (5 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de NaH (50 mg, 1,25 mmol) em THF (10 mL) em banho de gelo por 30 minutos, então, uma solução de (S)-metil 2-(clorometil)- 3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato (73 mg, 0,25 mmol) em THF (5 mL) foi adicionada gota a gota em banho de gelo por 30 minutos e, em seguida, a reação foi aquecida até rt, agitada à temperatura à rt por duas horas. A mistura foi diluída com água em banho de gelo e extraída com EA (2x10 mL), a camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada com funila de Buchner e concentrada, purificada por Pré-TLC (PE:EA = 1:3) para dar (S)-metil 2-((4-(terc-butoxicarbonil)-2- oxopiperazin-1-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-benzo[d]imidazol-5- carboxilato (73 mg, 42%) como um sólido branco pálido. LCMS: [M+H]+ = 459,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,55 min. Etapa 2
[00464] Uma solução de 2-((4-(terc-butoxicarbonil)-2-oxopiperazin- 1-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de (S)-metila (73 mg, 0,16 mmol) em DCM (12 mL) foi adicionado gota a gota TFA (3 mL) em banho de gelo. Em seguida, a reação foi agitada a 28°C por 4 horas. A mistura foi concentrada para dar (S)-metil 3- (oxetan-2-ilmetil)-2-((2-oxopiperazin-1-il)metil)-3H-benzo[d]imidazol-5- carboxilato (87 mg, 116%, sal de TF) como um óleo amarelado pálido. O produto bruto foi usado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional. LCMS: [M+H]+ = 359,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,02 min.
Etapa 3
[00465] Uma solução de 3-(oxetan-2-ilmetil)-2-((2-oxopiperazin-1- il)metil)-3H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de (S)-metila (87 mg, 0,16 mmol, sal de TF), 2-cloro-6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) piridina (48 mg, 0,18 mmol), BINAP (10 mg, 0,016 mmol6), Pa2(dba)3 (8 mg, 0,008 mmol)) e Cs2 CO3 (103 mg, 0,32 mmol) em tolueno (20 mL) foi agitada a 120°C por 18 h. A mistura foi filtrada com funila de Buchner e concentrada, purificada por Pre-HPLC (NH4HCO3) para dar (S)-metil 2- ((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) piridin-2-il)-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3- (oxetan-2-ilmetil)-3H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato (30 mg, 31%) como um sólido amarelado pálido. LCMS: [M+H]+ = 593,9; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,76 min. Etapa 4
[00466] A uma solução de 2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi) piridin- 2-il)-2-oxopiperazin-1-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-benzo[d]imidazol- 5-carboxilato de (S)-metila (30 mg, 0,05 mmol) e LiOH.H2O (17 mg, 0,40 mmol) em THF: MeOH: H2O (1:1:1, 3 mL) foi agitada à rt por duas horas. A mistura foi evaporada, pH ajustado = 6 com HCl 1 N aquoso, extraída com EA (3x10 mL), seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto bruto foi dissolvido em THF (3 mL), purificado por Pre-HPLC (NH4HCO3) para dar ácido (S)-2-((4-(6-((4-cloro-2- fluorobenzil)óxi)piridin-2-il)-2-oxopiperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (5,4 mg, 28%) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 580,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,51 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,23 (brs, 1H), 7,82 (dd, J = 1,6, 6,8 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,55 (dd, J = 8, 9,2 Hz, 1H), 7,47 (dd, J = 2,4, 7,6 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 2,4, 6 Hz, 1H), 6,38 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,15 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,33 (s, 2H), 5,08 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 5,01
(qd, J = 2, 4,8 Hz, 1H), 4,90 (d, J = 16 Hz, 1H), 4,77 (dd, J = 7,6, 8,4 Hz, 1H), 4,60 (dd, J = 2,4, 12,8 Hz, 1H), 4,47-4,42 (m, 1H), 4,35-4,30 (m, 1H), 4,13 (s, 2H), 3,81 (q, J = 5,2 Hz, 2H), 3,95 (q, J = 5,2 Hz, 2H), 2,68-2,66 (m, 1H), 2,37-2,28 (m, 1H). Ácido (S)-2-((6-((2-fluoro-4-(prop-1-in-1-il)benzil)óxi)-3',6'-di-hidro- [2,4'-bipiridina]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (Composto 107) Composto 107
[00467] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 567,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,63 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,34 (s, 1H), 8,00 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,66 – 7,60 (m, 1H), 7,42 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,17 – 7,04 (m, 3H), 6,73 (s, 1H), 6,69 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,44 (s, 2H), 5,26 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 4,77 – 4,70 (m, 1H), 4,67 – 4,60 (m, 1H), 4,52 – 4,44 (m, 2H), 4,19 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,29 – 3,23 (m, 2H), 2,88 (s, 3H), 2,76 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 2,66 (s, 2H), 2,56 – 2,45 (m, 2H), 2,04 (d, J = 8,9 Hz, 3H), 1,33 (d, J = 18,2 Hz, 1H). Ácido (S)-2-((6-((4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di- hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 108) Composto 108
Dioxano, 70ºC, 16 h Composto 108 Etapa 1
[00468] A uma solução de (4-bromo-2-fluorofenil)metanol (1,03 g, 5,0 mmols) em 1,4-dioxna e (30 mL), etinilciclopropano (396 mg, 6,0 mmols), Pd(PPh3)Cl2 (180 mg, 0,25 mmol), CuI (50 mg, 0,25 mmol) e DIPEA (1,94 g, 15 mmols) foram adicionados sob N2, a reação foi agitada a 70°C por 16 horas. A mistura foi diluída com água e extraída com EA (30 mL x 2), a camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada com funila de Buchner e concentrada. O resíduo foi purificado por prep-HPLC para dar (4-(ciclopropiletinil)-2-fluorofenil) metanol (770 mg, 80% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 173,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,71 min. Etapa 2
[00469] À solução de 2,6-dibromopiridina (1 g, 4,22 mmols, 1,0 eq) em 1,4-dioxano (25 mL) e H2O (5 mL), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (1,56 g, 5,06 mmols), Pd(PPh3)4 (500 mg, 0,42 mmol) e K2CO3 (1,46 g, 10,5 mmols) foram adicionados sob N2. A mistura de reação foi agitada a 80°C por 5 horas. A mistura de reação foi resfriada até 30°C e EA (100 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi filtrada e a mistura foi extraída com EA (50 mL x 2). A fase orgânica combinada foi lavada por NaCl sat. A fase orgânica foi seca por Na2SO4. O produto em bruto foi purificado por cromatografia (PE:EA = 10:1) para dar terc-butil 6- bromo-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridina]-1'(2'H)-carboxilato (530 mg, 37% de rendimento) como um óleo amarelo pálido. LCMS: [M+Na]+ = 361,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,15 minutos. Etapa 3
[00470] À solução de 6-bromo-5',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridina]-1'(2'H)- carboxilato de terc-butila (750 mg, 2,21 mmols) em DCM (8 mL) foi adicionado TFA (3 mL). A mistura de reação foi agitada a 30°C por duas horas. DCM foi evaporado para dar 6-bromo-1',2',3',6'-tetra-hidro- 2,4'-bipiridina (450 mg, 85% de rendimento) como um óleo amarelo pálido, que foi usado na próxima etapa sem qualquer purificação. LCMS: [M+H]+ = 240,9; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,11 min. Etapa
[00471] À solução de 6-bromo-1',2',3',6'-tetra-hidro-2,4'-bipiridina (450 mg, 1,88 mmol, 1,0 eq) em 1,4-dioxano (5 mL), metil (S)-2- (clorometil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (500 mg, 1,69 mmol) e DIPEA (3,5 g, 27,1 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada a 80°C durante a noite. O solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por prep-HPLC para dar metil (S)- 2-((6-bromo-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato (240 mg, rendimento de 26%) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 497,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,48 min. Etapa 5
[00472] À solução de (S)-2-((6-bromo-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilato de metila (30 mg, 0,06 mmol), (4-(ciclopropiletinil)-2-fluorofenil) metanol (15 mg, 0,08 mmol) em tolueno (5 mL), Pd2(dba)3 (6 mg, 0,01 mmol), BINNP (6 mg, 0,01 mmol) e t-BuONa (15 mg, 0,16 mmol) foram adicionados sob N2. A mistura de reação foi aquecida até 100°C. A mistura de reação foi agitada a 100°C durante a noite. O solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por prep-HPLC para dar metil (S)- 2-((6-((4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzil) óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxilato (8 mg, rendimento de 22%) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 607,0, Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,30 minutos. Etapa 6
[00473] À solução de ácido (S)-2-((6-((4-(ciclopropiletinil)-2- fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan- 2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (8 mg, 0,01 mmol) em THF (0,5 mL)、Metanol (0,5 mL) e H2O (0,5 mL), LiOH (8 mg, 0,33 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a 30°C por 72 horas. Os solventes foram evaporados. O resíduo foi purificado por prep- HPLC para dar ácido (S)-2-((6-((4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzil)óxi)- 3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridina]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (5,5 mg, rendimento de 70%) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 593,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,685 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26 (s, 1H), 7,82 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,70 – 7,65 (m, 2H), 7,46 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,25 – 7,18 (m, 2H), 7,08 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,75 – 6,72 (m, 2H), 5,39 (s, 2H), 5,06 (m, 1H), 4,84 – 4,78 (m, 1H), 4,68 – 4,63 (m, 1H), 4,50 – 4,44 (m, 1H), 4,39 – 4,34 (m, 1H), 3,99 (dd, J = 63,5, 13,4 Hz, 2H), 3,27 – 3,18 (m, 4H), 2,76 -2,72 (m, 2H), 2,68-2,64 (m, 1H), 2,44 – 2,36 (m, 1H), 1,59 – 1,49 (m, 1H), 0,97 – 0,82 (m, 2H), 0,75 – 0,72 (m, 2H).
Ácido (S)-2-((6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-4-fenil-3',6'-di-hidro- [2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imi- dazol-6-carboxílico (Composto 109) Composto 109
[00474] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 639,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,77 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,23 (brs, 1H), 7,97 (dd, J = 1,2, 7,6 Hz, 1H), 7,20 – 7,71 (m, 10H),6,82 – 6,93 (m, 2H), 5,50 (s, 2H), 5,22 – 5,30 (m, 1H), 4,47 – 4,88 (m, 4H),4,40 – 4,19 (m, 2H),3,20 – 3,32 (m, 2H), 2,71 – 2,88 (m, 5H), 2,48 – 2,60 (m, 1H). (S)-2-((4- Ácido (S)-2-((6-((4-clorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-7-metil-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 110) Composto 110 dioxano, DIPEA, 90ºC, 3 h
Composto 110 Etapa 1
[00475] Em um frasco de fundo redondo de 25 mL, 1-bromo-3- fluoro-2-metilbenzeno (2 g, 10,58 mmols, 1 eq) e ácido sulfúrico concentrado (7 mL) foram resfriados até -5-0°C antes de adicionar ácido nítrico concentrado (1,03 g, 10,58 mmols, 65%) gota a gota ao longo de 10 min. A reação foi agitada por 2 à RT. A reação foi derramada em gelo, extraída com EA (2x100 mL), lavada com NH4HCO3 Sat. aq. (1×30 mL) e salmoura (1×30 mL), seca em Na2SO4 e filtrada com funila de Buchner e concentrada. Os sólidos em bruto foram purificados por Pre-TLC (PE:EA = 30:1) para dar 1-bromo-3- fluoro-2-metil-4-nitrobenzeno (1,67 g, 64% de rendimento) como um sólido amarelado pálido. Etapa 2
[00476] A uma solução de 1-bromo-3-fluoro-2-metil-4-nitro-benzeno (1,3 g, 5,56 mmols) e 3-bromo-1-fluoro-2-metil-4-nitro-benzeno (1,30 g, 5,56 mmols) em EtOH:DMSO = 4:3 (60 mL) foi adicionado Pd(PPh3)2Cl2 (195 mg, 0,278 mmol) e N,N-dietiletanamina (1,12 g, 11,11 mmols, 1,55 mL). A mistura foi resfriada até 30°C, filtrada com funila de Buchner através de Celite e concentrada sob pressão reduzida, purificada por Pre-TLC (PE:EA/2:1) para dar etil 3-fluoro-2-metil-4-nitro-benzoato (140 mg, 0,616 mmol, 100% de pureza) como um líquido amarelado pálido. LCMS: [M+H]+ = 228,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,61 min. Etapa 3
[00477] Uma mistura de 3-fluoro-2-metil-4-nitro-benzoato (140 mg, 0,616 mmol), etil 3-fluoro-2-metil-6-nitro-benzoato de etila (140 mg, 0,616 mmol) e TEA (125 mg, 1,23 mmol) em dioxano (5 mL) foi agitada por uma hora a 90°C, até que a reação estivesse completa como indicado por LCMS, a mistura de reação foi concentrada in vacuo, purificada por Pre-TLC (Hexanos/EtOAc = 2:1) para dar o produto desejado etil 2-metil-4-nitro-3-[[(2S)-oxetan-2-il] metilamino] benzoato (18 mg, 61 mmols, 9,9% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 295,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,83 min. Etapa 4
[00478] Uma mistura de 2-metil-4-nitro-3-[[(2S)-oxetan-2-il] metilamino] benzoato de etila (34 mg, 116 mmols) e Pd/C (10 mg, 0,082 mmol) em EtOH (6 mL) foi agitada a 26°C por 4 horas sob H2, até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, para dar o produto desejado etil 4-amino-2-metil-3-[[(2S)-oxetan-2-il] metilamino] benzoato (21 mg, 0,044 mmol, 38,4% de rendimento, 55,9% de pureza) como um líquido amarelo pálido. O produto bruto foi usado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional. LCMS: [M+H]+ = 265,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,28 min. Etapa 5
[00479] Uma mistura de 4-amino-2-metil-3-[[(2S)-oxetan-2-il] metilamino] benzoato de etila (21 mg, 0,079 mmol), 2-cloro-1,1,1- trimetóxi-etano (15 mg, 0,095 mmol) e pTSA.H2O (7,6 mg, 0,040 mmol) em MeCN (5 mL) foi agitada por uma hora a 60°C, até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi concentrada in vacuo, purificada por Pre-HPLC (NH4HCO3 10 mM) para dar o produto desejado etil 2-(clorometil)-4-metil-3-[[(2S)-oxetan-2- il]metil]benzimidazol-5-carboxilato (24 mg, 0,074 mmol, 93,6% de rendimento) como um sólido branco pálido. LCMS: [M+H]+ = 323,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,64 min.
Etapa 6
[00480] Uma mistura de 2-(clorometil)-4-metil-3-[[(2S)-oxetan-2- il]metil]benzimidazol-5-carboxilato de etila (24 mg, 0,074 mmol), 2-[(4- clorofenil) metóxi]-6-(1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il) piridina (15 mg, 0,031 mmol, HC) e DIPEA (6 mg, 0,050 mmol) em dioxano (3 mL) foi agitada por 3 h a 90°C, até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi concentrada in vacuo, purificada por cromatografia de sílica gel (Hexanos/EtOAc = 20:1) para dar o produto desejado etil 2-[[4-[6-[(4-clorofenil) metóxi]-2-piridil]-3, 6- di-hidro-2H-piridin-1-il] metil]-4-metil-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzi- midazol-5-carboxilato (23 mg, 0,027 mmol, 69,3% de pureza) como um líquido amarelado pálido. O produto bruto foi usado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional. LCMS: [M+H]+ = 587,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,38 min. Etapa 7
[00481] Uma mistura de 2-[[4-[6-[(4-clorofenil) metóxi]-2-piridil]-3, 6- di-hidro-2H-piridin-1-il] metil]-4-metil-3-[[(2S)-oxetan-2-il] metil] benzimidazol-5-carboxilato de etila (23 mg, 0,039 mmol) em H2O (1,0 mL), MeOH (1,0 mL) e THF (1,0 mL) foi agitada por 18 h a 28°C, até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi concentrada, adicionada água (1 mL), pH ajustado = 6 com ácido acético, extraída com EA (2 × 20 mL), seca em Na2SO4, filtrada com funila de Buchner e concentrada in vacuo, purificada por Pre-HPLC (NH4HCO3 10 mM) para dar o produto desejado ácido (S)-2-((6-((4-clorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-7-metil-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (5 mg, 0,010 mmol, 24,7% de rendimento, 100% de pureza) como um sólido branco pálido. LCMS: [M+H]+ = 559,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,64 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,70 (t, J = 8, 7,6 Hz, 1H), 7,56 (d, J =
8,4 Hz, 1H), 7,47-7,40 (m, 5H), 7,08 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,74-6,72 (m, 2H), 5,36 (s, 2H), 5,08-5,02 (m, 2H), 4,83 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 4,51 (dd, J = 8, 5,6 Hz, 1H), 4,37-4,31 (m, 1H), 4,10 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,23-3,15 (m, 2H), 2,80 (s, 3H), 2,74-2,66 (m, 3H), 2,54-2,51 (m, 2H), 2,40-2,32 (m, 1H). Ácido (S)-2-((4-(6-(4-clorobenzilóxi)piridin-2-il)-5,6-di-hidropiridin- 1(2H)-il)metil)-5-metil-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 111) Composto 111
[00482] Preparado de maneira análoga ao Composto 110 LCMS: [M+H]+ = 559,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,58 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,07-8,06 (brs, 1H), 7,68 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 10,5 Hz, 4H), 7,36 – 7,31 (m, 1H), 7,07 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 5,39 – 5,30 (m, 2H), 5,04-5,03 (brs, 1H), 4,72 (dd, J = 14,8, 6,3 Hz, 1H), 4,59 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 4,46 – 4,41 (m, 1H), 4,33 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,03 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,39 (dd, J = 13,4, 6,7 Hz, 2H), 3,20 (s, 3H), 2,72-2,71 (brs, 2H), 2,59-2,58 (brs, 3H), 2,37-2,36 (brs, 1H).
Ácido 2-((6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(1-(oxazol-2-il)etil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 112) Composto 112
[00483] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 588,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,62 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,03 (s, 1H), 7,76 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 7,66 (dd, J = 16,9, 9,2 Hz, 2H), 7,54 (dd, J = 14,9, 8,2 Hz, 2H), 7,47 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1H), 7,34 – 7,22 (m, 2H), 7,07 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,79 – 6,66 (m, 2H), 6,44 (q, J = 6,9 Hz, 1H), 5,39 (s, 2H), 4,09 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,95 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,24 (d, J = 16,3 Hz, 2H), 2,76 – 2,59 (m, 2H), 2,47 (s, 2H), 1,93 (d, J = 7,0 Hz, 3H). Ácido (S)-2-((6-(4-cloro-2-fluorofenetil)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 113) Composto 113
Dioxano, Etapa 1
[00484] Uma mistura de 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2- dioxaborolano (354 mg, 2,30 mmolss), 2-cloro-6-iodo-piridina (500 mg, 2,09 mmols), Na2CO3 (332 mg, 3,13 mmos) e dicloropaládio trifenilfosfano (146 mg, 209 mmols) em 1,2-dimetoxietano (2,5 mL) e H2O (0,5 mL) foi agitada por 5 horas a 80°C em um frasco de fundo redondo sob N2. E mediante conclusão da reação, conforme avaliado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi purificado por coluna de cromatografia de sílica gel (PE:EA = 50:1) para se obter o produto bruto 2-cloro-6-vinil-piridina (400 mg, em bruto). LCMS: [M+H]+ = 140,3; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,83 min. Etapa 2
[00485] Uma mistura de 2-cloro-6-vinil-piridina (400 mg, 2,87 mmols), 4-cloro-2-fluoro-1-iodo-benzeno (588 mg, 2,29 mmols), Et3N (580 mg, 5,73 mmols), Pd(OAc)2 (64 mg, 0,287 mmol) e PPh3 (90 mg, 0,344 mmol) em ACN (5 mL) foi agitada por 7 horas a 80°C sob N2, até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc, e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por HPLC prep para dar o produto desejado 2-cloro-6-[(E)- 2-(4-cloro-2-fluoro-fenil)vinil]piridina (180 mg, 18,0% de rendimento) como um sólido amarelo pálido.
LCMS: [M+H]+ = 268,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,40 minutos. Etapa 3
[00486] Uma mistura de 2-cloro-6-[(E)-2-(4-cloro-2-fluoro- fenil)vinil]piridina (105 mg, 392 mmols) e PtO2 (9 mg, 39 mmols) em EA (10 mL) foi agitada por 3 horas à rt em um RBF sob H2 até que a reação estivesse concluída como indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por prep-HPLC para dar o produto desejado 2-cloro-6-[2-(4-cloro-2-fluoro- fenil)etil]piridina (35 mg, 33,1% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 270,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,017 min.; pureza = 100% (214 nm). Etapa 4
[00487] Uma mistura de 2-cloro-6-[2-(4-cloro-2-fluoro- fenil)etil]piridina (25 mg, 0,093 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,6-di-hidro-2H-piridina-1-carboxilato (57 mg, 0,185 mmol), Pd(dppf)Cl2 (7 mg, 0,009 mmol) e Cs2CO3 (90 mg, 0,278 mmol) em dioxano (4 mL) e H2O (0,8 mL) foi agitada por 15 horas a 95°C sob N2 até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc, e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos:EtOAc = 3:1) para dar o produto desejado terc-butil 4-[6-[2-(4-cloro-2-fluoro- fenil)etil]-2-piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridina-1-carboxilato (20 mg, 0,047 mmol, 51,8% de rendimento) como um sólido amarelo pálido. + LCMS: [M+H] = 417,3; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,99 min.; pureza = 98,4% (254 nm). Etapa 5
[00488] A uma solução de 4-[6-[2-(4-cloro-2-fluoro-fenil)etil]-2-
piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridina-1-carboxilato de terc-butila (20 mg, 0,048 mmol) em DCM (2 mL), foi adicionado TFA (0,4 mL). A mistura de reação foi agitada à rt por uma hora, até que a reação estivesse completa conforme indicado por TLC. O solvente foi evaporado para dar o produto bruto 2-[2-(4-cloro-2-fluoro-fenil) etil]-6-(1,2,3,6-tetra- hidropiridin-4-il)piridina (15 mg, bruto). + LCMS: [M+H] = 317,3; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,57 min.; pureza = 94,0% (254 nm). Etapa 6
[00489] Uma mistura de 2-[2-(4-cloro-2-fluoro-fenil)etil]-6-(1,2,3,6- tetra-hidropiridin-4-il)piridina (15 mg, 0,047 mmol), terc-butil 2- (clorometil)-3-[[2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5-carboxilato (15,95 mg, 0,047 mmol) e DIPEA (371 mg, 2,87 mmols, 0,5 mL) em dioxano (3,5 mL) foi agitada por 10 horas a 90°C sob N2, até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS. O solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel (Hexanos:EtOAc = 1:2) para dar o produto desejado terc-butil 2-[[4-[6- [2-(4-cloro-2-fluoro-fenil)etil]-2-piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]- 3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5-carboxilato (10 mg, 0,016 mmol, rendimento de 34,2%) como um sólido amarelo pálido. LCMS: + [M+H] = 617,0; Tempo de retenção (10 mM NH4HCO3) = 2,33 min; Pureza = 88,6% (254 nm). Etapa 7
[00490] A uma solução de 2-[[4-[6-[2-(4-cloro-2-fluoro-fenil)etil]-2- piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzi- midazol-5-carboxilato de terc-butila (10 mg, 0,016 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado lentamente TFA (740 mg, 6,49 mmols, 0,5 mL) à rt e agitado por 5 horas sob N2. Após conclusão da reação conforme avaliado por LCMS, TFA e DCM foram evaporados. O resíduo foi purificado por prep-HPLC para proporcionar ácido 2-[[4-[6-[2-(4-cloro-
2-fluoro-fenil)etil]-2-piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridina-1-il]metil]-3-[[(2S)- oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5-carboxílico (3,7 mg, 0,007 mmol, 40,7% de rendimento) como um líquido incolor. LCMS: [M+H]+ = 561,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,58 min.; 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,22 (s, 1H), 7,84 – 7,79 (m, 1H), 7,66 – 7,59 (m, 2H), 7,36 – 7,25 (m, 3H), 7,17 (dd, J = 8,3, 2,0 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,68 – 6,63 (m, 1H), 5,11 – 5,03 (m, 1H), 4,84 – 4,76 (m, 1H), 4,70 – 4,62 (m, 1H), 4,51 – 4,44 (m, 1H), 4,41 – 4,33 (m, 1H), 3,99 (dd, J = 62,1, 13,5 Hz, 2H), 3,25 – 3,20 (m, 4H), 3,03 – 2,98 (m, 4H), 2,78 – 2,72 (m, 2H), 2,71 – 2,62 (m, 1H), 2,45 – 2,38 (m, 1H). Ácido (S)-2-((6-((2,4-diclorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 114) Composto 114
[00491] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 579,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,50 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,32 – 8,29 (brs, 1H), 7,99 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1H), 7,69 – 7,63(m, 2H), 7,54 – 7,48 (m, 2H), 7,33 (dd, J = 8,3, 2,1 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 7,4 Hz, 1H),6,76 – 6,71(m, 2H), 5,49 (s, 2H), 5,28 – 5,24 (m, 1H), 4,91 – 4,86 (m, 1H), 4,76 – 4,67 (m, 1H), 4,65 – 4,61(m, 1H), 4,48 (dt, J = 9,1, 5,9 Hz, 1H), 4,17 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,31 –3,26 (m, 2H), 2,88 – 2,83 (m, 2H), 2,80 – 2,74 (m, 1H), 2,66 – 2,60 (m, 2H), 2,57 – 2,49 (m, 1H).
Ácido (S)-2-((6-((3,4-diclorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 115) Composto 115
[00492] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 579,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,50 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,26 – 8,23 (brs, 1H), 7,98 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1H), 7,67 – 7,61 (m, 3H), 7,49 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,37 (dd, J = 8,3, 1,9 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,74 – 6,70 (m, 2H), 5,39 (s, 2H), 5,29 – 5,23 (m, 1H), 4,92 – 4,86 (m, 1H), 4,76 – 4,69 (m, 1H), 4,60 – 4,59 (m, 1H), 4,47 (dt, J = 9,1, 6,0 Hz, 1H), 4,16 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 4,04 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,31 – 3,23 (m, 2H), 2,87 – 2,81 (m, 2H), 2,80 – 2,72 (m, 1H), 2,66 – 2,60 (m, 2H), 2,57 – 2,48 (m, 1H). Ácido (S)-2-((6-((5-cloropiridin-2-il)metóxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 116) Composto 116
[00493] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 546,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,30 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,51 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,35 – 8,31 (brs, 1H), 7,99 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz,1H), 7,84 (dd, J = 8,4, 2,4 Hz, 1H), 7,72 –
7,62 (m, 2H), 7,51 (d, J = 8,4Hz,1H), 7,07 (d, J = 7,5 Hz,1H), 6,78 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,68 – 6,63 (brs, 1H), 5,48 (s, 2H), 5,26 – 5,22 (m, 1H), 4,86 – 4,84 (m,1H), 4,72 (dd, J = 15,3, 2,4 Hz, 1H), 4,66 – 4,60 (m, 1H), 4,47 (dt, J = 9,2, 6,0 Hz, 1H), 4,17 (d, J =13,8 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 13,8 Hz,1H), 3,31 – 3,26 (m, 2H), 2,87 – 2,82 (m, 2H), 2,79 – 2,72 (m, 1H),2,61 – 2,56 (m, 2H), 2,54 – 2,46 (m, 1H). Ácido (S)-2-((6-((5-metoxipiridin-2-il)metóxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 117) Composto 117
[00494] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 542,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,40 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8.25 (dd, J = 8,25 (dd, J = 2,8, 0,7 Hz, 1H), 8,24 – 8,21 (brs, 1H), 7,80 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1H), 7,71 – 7,66 (m, 1H), 7,62 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,42 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,38 (dd, J = 8,6, 2,8 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,76 – 6,71 (m, 2H), 5,36 (s, 2H), 5,09 – 5,02 (m, 1H), 4,78 (dd, J = 15,2, 7,2 Hz, 1H), 4,64 (dd, J = 15,2, 2,7 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 13,6, 7,7 Hz, 1H), 4,36 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 4,06 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,24 – 3,18 (m, 2H), 2,73 (s, 2H), 2,65 (dd, J = 11,9, 5,2 Hz, 1H), 2,48 – 2,30 (m, 3H).
Ácido (S)-2-((6-((4-metoxibenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 118) Composto 118
[00495] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 540,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,45 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,31 (brs, 1H), 7,99 (dd, J = 1,2, 6,8 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 8,4 Hz,1H), 7,59 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,34 – 7,37 (m, 2H), 7,02 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,88 – 6,90 (m, 2H),6,72 – 6,78 (m, 1H), 6,63 (d, J = 8,0 Hz,1H), 5,31 (s, 2H), 5,23 – 5,26 (m, 1H), 4,88 (t, J = 7,2 Hz,1H), 4,72 (dd, J = 2,8 Hz, 12,4 Hz, H), 4,59 – 4,65 (m, 1H), 4,44 – 4,49 (m, 1H), 4,04 – 4,19 (m,2H), 3,78 (s, 2H), 3,21 – 3,32 (m, 2H), 2,48 – 2,28 (m, 6H). Ácido (S)-2-((6-((6-metoxipiridin-3-il)metóxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 119) Composto 119
[00496] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 542,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,43 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,27 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,24 – 8,21 (brs, 1H), 7,83 – 7,78 (m, 2H), 7,69 – 7,60 (m, 2H), 7,07 (d, J = 7,4 Hz, 1H),
6,82 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,80 – 6,76 (brs, 1H), 6,69 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,32 (s, 2H), 5,10 – 5,03 (m, 1H), 4,79 (dd, J = 15,2, 7,2 Hz, 1H), 4,65 (dd, J = 15,1, 2,7 Hz, 1H), 4,50 – 4,44 (m, 1H), 4,36 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,27 – 3,22 (m, 2H), 2,80 – 2,72 (m, 2H), 2,70 – 2,64 (m, 1H), 2,57 – 2,52 (m, 2H), 2,44 – 2,37 (m, 1H). Ácido (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((6-((4-(trifluorometóxi)benzil)óxi)- 3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 120) Composto 120
[00497] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 595,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,48 min. Ácido (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((6-((6-(trifluorometóxi)piridin-3- il)metóxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 121) Composto 121
[00498] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 596,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,47 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,47 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,10 (dd, J = 8,4, 2,4 Hz, 1H), 7,82 (dd, J = 8,4, 1,3 Hz, 1H), 7,68 (dd, J = 16,2, 8,2 Hz, 2H), 7,30 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 7,5 Hz, 1H),
6,74 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 5,43 (brs, 2H), 5,07 (qd, J = 7,2, 2,8 Hz, 1H), 4,80 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1H), 4,65 (dd, J = 15,1, 2,5 Hz, 1H), 4,47 (dd, J = 13,6, 7,7 Hz, 1H), 4,36 (dt, J = 8,9, 5,9 Hz, 1H), 4,08 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,21 (dd, J = 24,1, 6,4 Hz, 4H), 2,80-2,71 (m, 2H), 2,65 (m, J = 16,2, 8,7, 5,6 Hz, 1H), 2,40 (m, J = 15,9, 11,1, 7,1 Hz, 1H). Ácido (S)-2-((4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzilamino)-5-fluoropirimidin- 2-il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 122) Composto 122
[00499] Preparado de maneira análoga ao Composto 61 LCMS: [M+H]+ = 581,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,41 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,26 – 8,25 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 8,22 – 8,19 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 8,14 – 8,13 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,82 – 7,79 (dd, J1 = 8,4 Hz, J2 = 1,6 Hz, 1H), 7,65 – 7,63 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,41 – 7,37 (m, 2H), 7,24 – 7,22 (dd, J1 = 8,0 Hz, J2 = 1,6 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 5,05 – 5,01 (m, 1H), 4,81– 4,75 (m, 1H), 4,65 – 4,59 (m, 3H), 4,48 – 4,42 (m, 1H), 4,38 – 4,33 (m, 1H), 4,06 – 4,03 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,89 – 3,86 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,24 – 3,12 (m, 2H), 2,66 – 2,61 (m, 3H), 2,46 (s, 2H), 2,42 – 2,36 (m, 1H).
Ácido (S)-2-((4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-5-fluoropirimidin-2-il)- 5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (Composto 123) Composto 123
[00500] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 582,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,53 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,59 – 8,58 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,82 – 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,66 – 7,60 (m, 2H), 7,53 – 7,50 (dd, J1 = 10,0 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1H), 7,35 – 7,33 (dd, J1 = 8,4 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1H), 7,08 (s, 1H), 5,57 (s, 2H), 5,09 – 5,03 (m, 1H), 4,82– 4,77 (m, 1H), 4,67 – 4,62 (dd, J1 = 15,2 Hz, J2 = 2,4 Hz, 1H), 4,49 – 4,43 (m, 1H), 4,39 – 4,33 (m, 1H), 4,10 – 4,06 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,94 – 3,91 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,29 – 3,26 (m, 2H), 2,76 – 2,73 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,67 – 2,63 (m, 1H), 2,57(s, 2H), 2,41 – 2,37 (m, 1H). Ácido (S)-2-((4-(4-((4-cloro-2-fluorobenzil)amino)pirimidin-2-il)-5,6- di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (Composto 124) Composto 124
[00501] Preparado de maneira análoga ao Composto 61 LCMS: [M+H]+ = 563,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,37 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,23 (s, 1H), 7,88 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz,
2H), 7,59 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,27 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,11 – 6,99 (m, 2H), 6,86 (s, 1H), 6,29 (d, J =6,1 Hz, 1H), 5,13 (dt, J = 7,0, 4,9 Hz, 1H), 4,79 – 4,70 (m, 3H), 4,64 – 4,47 (m, 4H), 4,36 (dt, J = 9,1, 5,9 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 3,94 (d, J = 13,7 Hz,1H),3,33 – 3,30 (m, 1H), 2,76 – 2,58 (m, 3H), 2,53 (brs, 2H), 2,47 – 2,33 (m, 1H). Ácido (S)-2-((4-(2-((4-cloro-2-fluorobenzil)amino)pirimidin-4-il)-3,6- di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 125) Composto 125
[00502] Preparado de maneira análoga ao Composto 61 LCMS: [M+H]+ = 562,9; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,24 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,27-8,18 (m, 2H), 7,81 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,35 (t, J = 8,2 Hz, 2H), 7,22 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,84-6,69 (m, 2H), 5,05 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,78 (dd, J = 15,2, 7,2 Hz, 1H), 4,63 (d, J = 14,9 Hz, 1H), 4,47 (dd, J = 20,0, 6,6 Hz, 3H), 4,41-4,30 (m, 1H), 4,05 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,17 (brs, 2H), 2,77-2,59 (m, 3H), 2,46-2,33 (m, 3H). Ácido (S)-2-((4-(2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-5-fluoropirimidin-4-il)- 5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 126) Composto 126
[00503] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 582,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,52 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,26 (s, 1H), 8,04 – 8,02 (t, J = 4,4 Hz, 1H), 7,71 – 7,69 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,39 – 7,35 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,11 – 7,02 (m, 3H), 6,86 (s, 1H), 5,35 (s, 2H), 5,35 – 5,26 (m, 1H), 5,11– 5,10 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,73 – 4,64 (m, 1H), 4,56 – 4,49 (m, 1H), 4,29 – 4,24 (d, J = 18,8 Hz, 1H), 2,69 – 2,56 (m, 2H), 2,38 – 2,29 (m, 1H), 2,18 – 2,14 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 1,96 – 1,91 (t, J = 9,2 Hz, 3H), 1,62 – 1,53 (m, 1H), 0,87 – 0,72 (m, 2H). Ácido (S)-2-((4-(5-((4-cloro-2-fluorobenzil)amino)-2-fluorofenil)-3,6- di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 127) Composto 127
[00504] Preparado de maneira análoga ao Composto 61 LCMS: [M+H]+ = 579,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,56 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,25 (s, 1H), 7,81 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,44 – 7,34 (m, 2H), 7,25 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,87 (dd, J = 11,0, 8,8 Hz, 1H), 6,46 (dd, J = 28,8, 6,4 Hz, 2H), 6,13 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 5,86 (s, 1H), 5,07 (s, 1H), 4,78 (dd, J = 15,1, 7,0 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 4,51 – 4,42 (m, 1H), 4,41 – 4,32 (m, 1H), 4,25 (d, J = 6,3 Hz, 2H), 4,04 (d, J = 13,3 Hz, 1H), 3,88 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,14 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 2,69 (d, J = 11,2 Hz, 3H), 2,37 (s, 3H).
Ácido (S)-2-((2'-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-5'-fluoro-3,6-di-hidro- [4,4'-bipiridin]-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 128) Composto 128
[00505] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 581,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,40 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,26 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 8,12 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,82 (dd, J = 1,6, 6,8 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,58 (t, J = 8,4, 8 Hz, 1H), 7,49 (dd, J = 2, 7,6 Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 1,6, 6,4 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 6,29 (brs, 1H), 5,33 (s, 2 H), 5,09 (qd, J = 2,8, 4,8 Hz, 1H), 4,81 (dd, J = 7,2, 8,4 Hz, 1H), 4,66 (dd, J = 2,4, 12,8 Hz, 1H), 4,49 (q, J = 6,4, 7,2 Hz, 1H), 4,38-4,32 (m, 1H), 4,07 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,23-3,20 (m, 2H), 2,76-2,71 (m, 2H), 2,69-2,64 (m, 1H), 2,45 (brs, 2H), 2,42-2,37 (m, 1H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)amino)-4-fluorofenil)-3,6- di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 129) Composto 129
[00506] Preparado de maneira análoga ao Composto 61 LCMS: [M+H]+ = 578,9; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,39 min. 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,37 (s, 1H), 8,03 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz,
1H), 7,73 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,43 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,21 (dd, J = 10,1, 9,1, 1,9 Hz, 2H), 6,95 (dd, J = 11,6, 8,3 Hz, 1H), 6,69 (dd, J = 16,1, 7,5, 2,0 Hz, 2H), 5,94 (s, 1H), 5,32-5,22 (m, 1H), 4,99 (brs, 2H), 4,94-4,85 (m, 1H), 4,74 (dd, J = 15,4, 2,5 Hz, 1H), 4,66 (dd, J = 13,9, 7,9 Hz, 1H), 4,54-4,48 (m, 2H), 4,19 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 3,22 (d, J = 28,7 Hz, 2H), 2,87 (brs, 2H), 2,78 (dd, J = 14,2, 9,8, 5,8 Hz, 1H), 2,61-2,53 (m, 1H), 2,50 (brs, 2H). Ácido (S)-2-((2'-((4-cloro-2-fluorobenzil)amino)-3,6-di-hidro-[4,4'- bipiridin]-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 130) Composto 130
[00507] Preparado de maneira análoga ao Composto 61 LCMS: [M+H]+ = 562,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,27 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,26 (brs, 1H), 7,87 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,39-7,32 (m, 2H), 7,23 (dd, J = 2, 6,4 Hz, 1H), 7,06 (t, J = 6, 5,6 Hz, 1H), 6,61 (t, J = 4, 1,2 Hz, 1H), 6,51 (brs, 1H), 6,29 (brs, 1H), 5,07-5,03 (m, 1H), 4,81 (dd, J = 7, 2,8 Hz, 1H), 4,66 (dd, J = 1,6, 13,2 Hz, 1H), 4,49-4,43 (m, 3H), 4,38-4,32 (m, 1H), 4,06 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,25-3,12 (m, 2H), 2,73-2,67 (m, 2H), 2,66 (dd, J = 6,4, 4,8 Hz, 1H), 2,43-2,38 (m, 3H).
Ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-3,5-difluoropiridin-2- il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 131) Composto 131
[00508] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 599,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,42 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,30 (s, 1H),7,96-7,98 (m, 1H), 7,67 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,45-7,50 (m, 2H), 7,18-7,23 (m, 2H), 6,52 (brs, 1H), 5,45 (s, 2H), 5,21-5,27 (m, 1H), 4,85-4,89 (m, 1H), 4,70 (dd, J = 2,4Hz, 15,6 Hz, 1H), 4,61 (dd, J = 8,0Hz, 14,0 Hz, 1H), 4,43-4,48 (m, 1H), 4,01-4,16 (m, 2H), 3,23-3,29 (m, 2H), 2,71-2,84 (m, 3H), 2,66 (brs, 2H), 2,48-2,55 (m, 1H). Ácido (S)-2-((4-(5-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-2,4-difluorofenil)-3,6- di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imi- dazol-6-carboxílico (Composto 132) Composto 132
Etapa 1
[00509] Uma mistura de 1,5-dibromo-2,4-difluoro-benzeno (300 mg, 1,10 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,6- di-hidro-2H-piridina-1-carboxilato (409 mg, 1,32 mmol), trifenilfosfano de paládio (128 mg, 0,110 mmol) e carbonato de potássio (381 mg, 2,76 mmols) em 1,4-Dioxano (15 mL) e Água (3 mL) foi agitada por 5 horas a 90°C sob N2, até que a reação fosse concluída como indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos:EtOAc = 10:1) para dar terc-butil 4-(5-bromo-2,4-difluoro-fenil)-3,6-di-hidro-2H- piridina-1 -carboxilato (180 mg, 48% de pureza) como um sólido amarelo pálido. Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,39 minutos. Etapa 2
[00510] Uma mistura de 4-(5-bromo-2,4-difluoro-fenil)-3,6-di-hidro- 2H-piridina-1-carboxilato de terc-butila (180 mg, 0,481 mmol), (4-cloro- 2-fluoro-fenil)metanol (77 mg, 0,481 mmol), 3,4,7,8-tetrametil-1,10- fenantrolina (11 mg, 0,048 mmol), iodocobre (4 mg, 0,024 mmol) e carbonato de dicésio (235 mg, 0,721 mmol) em Tolueno (5 mL) foi agitada por 16 horas a 110°C sob N2, até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por prep-HPLC para dar o produto desejado terc-butil 4-[5-[(4-cloro-2-fluoro- fenil)metóxi]-2,4-difluoro-fenil]-3,6-di-hidro-2H-piridina-1-carboxilato (15 mg, 6,3% de rendimento, 91% de pureza) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H-56]+ = 398,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,10 minutos. Etapa 3
[00511] Uma mistura de 4-[5-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]-2,4- difluoro-fenil]-3,6-di-hidro-2H-piridina-1-carboxilato de terc-butila (16 mg, 33 mmols) e ácido 2,2,2-trifluoroacético (740 mg, 6,49 mmols, 0,5 mL) em DCM (3 mL) foi agitada por duas horas a 30°C em um RBF, até que a reação fosse concluída como indicado por LCMS, os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo para dar o produto desejado 4-[5-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]-2,4-difluoro-fenil]- 1,2,3,6-tetra-hidropiridina (8 mg, rendimento de 68,4%) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 354,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,59 min. Etapa 4
[00512] Uma mistura de 4-[5-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]-2,4- difluoro-fenil]-1,2,3,6-tetra-hidropiridina (10 mg, 28 mmols), terc-butil 2- (clorometil)-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5-carboxilato (14 mg, 42 mmols) e N-etil-N-isopropil-propan-2-amina (9 mg, 71 mmols) em 1,4-dioxano (2 mL) foi agitada por 16 horas a 80°C em um RBF sob N2, até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de
Celite com EtOAc, e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por prep-HPLC para dar o produto desejado terc- butil 2-[[4-[5-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]-2,4-difluoro-fenil]-3,6-di- hidro-2H-piridin-1-il]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5- carboxilato (3 mg, rendimento de 16,2%) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 654,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,46 minutos. Etapa 5
[00513] Uma mistura de 2-[[4-[5-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]-2,4- difluoro-fenil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2- il]metil]benzimidazol-5-carboxilato de terc-butila (3 mg, 5 mmols) e ácido 2,2,2-trifluoroacético (3 mg, 26 mmols) em DCM (2 mL) foi agitada por duas horas a 30°C em um RBF, até que a reação estivesse completa como indicado por LCMS e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por prep-HPLC para dar o produto desejado ácido 2-[[4-[5-[(4-cloro-2-fluoro- fenil)metóxi]-2,4-difluoro-fenil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]-3-[[(2S)- oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5-carboxílico (0,1 mg, 71% de pureza, 3% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 598,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,62 min. Ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilamino)-3,5-difluoropiridin- 2-il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 133) Composto 133
[00514] Preparado de maneira análoga ao Composto 61 LCMS: [M+H]+ = 598,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,37 min.
H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,31 (s, 1H),7,98 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,67 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,33-7,37 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,21-7,26 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 7,10-7,16 (m, 2 H), 6,38 (brs, 1H), 5,22-5,27 (m, 1H), 4,85- 4,90 (m, 1H), 4,60-4,73 (m, 4 H), 4,45-4,50 (m, 1H), 4,00-4,16 (m, 2H), 3,19-3,25 (m, 2H), 2,73-2,81 (m, 3H), 2,48-2,54 (m, 3 H). Ácido (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((6-((3-(trifluorometil)benzil)óxi)- 3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 134) Composto 134
[00515] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 579,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,48 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 7,85-7,78 (m, 2H), 7,75 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,68 (dd, J = 14,6, 8,0 Hz, 3H), 7,60 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,79-6,70 (m, 2H), 5,46 (s, 2H), 5,06 (qd, J = 7,3, 2,8 Hz, 1H), 4,80 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 15,2, 2,6 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 13,7, 7,7 Hz, 1H), 4,36 (m, J = 9,0, 6,0 Hz, 1H), 4,06 (t, J = 10,3 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,25- 3,13 (m, 2H), 2,79-2,71 (m, 2H), 2,65 (m, J = 16,2, 8,6, 5,5 Hz, 1H), 2,50-2,45 (m, 2H), 2,39 (m, J = 15,9, 11,2, 7,1 Hz, 1H). Ácido (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((6-((2-(trifluorometil)benzil)óxi)- 3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 135) Composto 135
[00516] Preparado de maneira análoga ao Composto 19
LCMS: [M+H]+ = 579,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,47 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 7,83-7,75 (m, 2H), 7,74-7,63 (m, 4H), 7,54 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 7,08 (t, J = 9,4 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,69 (s, 1H), 5,55 (s, 2H), 5,05 (qd, J = 7,3, 2,8 Hz, 1H), 4,79 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1H), 4,64 (dd, J = 15,2, 2,6 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 13,6, 7,7 Hz, 1H), 4,35 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 4,05 (t, J = 11,3 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,24-3,12 (m, 2H), 2,72 (m, J = 9,4, 4,7 Hz, 2H), 2,64 (m, J = 14,8, 8,0, 4,9 Hz, 1H), 2,48 (brs, 2H), 2,39 (m, J = 15,9, 11,2, 7,1 Hz, 1H). Ácido (S)-2-((6-((2-clorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1ácido-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 136) Composto 136
[00517] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 545,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,70 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,27 – 8,19 (brs, 1H), 7,81 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,70 (t, J = 7,9 Hz, 1H),7,67 – 7,62 (m, 1H), 7,58 - 7,54 (m, 1H), 7,51 – 7,47 (m, 1H), 7,38 – 7,33 (m, 2H), 7,09 (d, J = 8,1 Hz,1H), 6,78 – 6,72 (m, 2H), 5,45 (s, 2H), 5,10 – 5,03 (m, 1H), 4,84 – 4,73 (m, 1H), 4,68 – 4,60 (m, 1H),4,50 – 4,41 (m, 1H), 4,39 – 4,28 (m, 1H), 4,06 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 3,25 –3,20 (m, 2H), 2,77 – 2,70 (m, 2H), 2,68 – 2,66 (m, 1H), 2,42 – 2,36 (m, 2H), 2,34 – 2,31 (m, 1H).
Ácido (S)-2-((6-((3-clorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1' (2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 137) Composto 137
[00518] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 545,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,70 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,214 – 8,19 (brs, 1H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1H), 7,71 – 7,66 (m,1H), 7,61 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,53 – 7,49 (brs, 1H), 7,41 – 7,34 (m, 3H), 7,08 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,77– 6,70 (m, 2H), 5,37 (s, 2H), 5,10 – 5,01 (m, 1H), 4,78 (dd, J = 15,2, 7,2 Hz, 1H), 4,63 (dd, J = 15,1,2,7 Hz, 1H), 4,51 – 4,43 (m, 1H), 4,39 – 4,32 (m, 1H), 4,06 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 13,5 Hz,1H), 3,26 – 3,20 (m, 2H), 2,78 – 2,69 (m, 2H), 2,68 – 2,61 (m, 1H), 2,49 – 2,34 (m, 3H). Ácido (S)-2-((6-((2,6-diclorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 138) Composto 138
[00519] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 579,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,60 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,28 – 8,23 (brs, 1H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1H), 7,72 – 7,63 (m,2H), 7,58 – 7,53 (m, 2H), 7,49 – 7,43 (m, 1H), 7,11 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,86 – 6,79 (brs, 1H), 6,71 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,52 (s, 2H), 5,11 – 5,03 (m, 1H), 4,81 (dd, J = 15,2, 7,2 Hz, 1H),
4,66 (dd, J = 15,2,2,6 Hz, 1H), 4,51 – 4,44 (m, 1H), 4,37 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 4,08 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,93 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,29 – 3,23 (m, 2H), 2,82 – 2,72 (m, 2H), 2,70 – 2,63 (m, 1H), 2,61 – 2,53 (m, 2H), 2,44 – 2,38 (m, 1H). Ácido (S)-2-((6-((3,5-diclorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 139) Composto 139
[00520] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 579,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,66 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26 – 8,15 (brs, 1H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1H), 7,69 (t, J = 7,8 Hz,1H), 7,63 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,56 – 7,45 (m, 3H), 7,08 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 8,2 Hz, 1H),6,74 – 6,67 (brs, 1H), 5,37 (s, 2H), 5,10 – 5,02 (m, 1H), 4,79 (dd, J = 15,3, 7,2 Hz, 1H), 4,64 (dd, J =15,1, 2,4 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 13,7, 7,6 Hz, 1H), 4,36 (dt, J = 8,9, 5,9 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 13,5 Hz,1H), 3,91 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,26 – 3,18 (m, 2H), 2,78 – 2,69 (m, 2H), 2,68 – 2,61 (m, 1H), 2,50 – 2,45 (m, 2H), 2,44 – 2,36 (m, 1H). Ácido (S)-2-((6-((5-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 140) Composto 140
[00521] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 563,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,59 min.
H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,26 (s, 1H), 7,97 – 7,95 (m, 1H), 7,74 – 7,72 (m, 1H), 7,65 – 7,61 (m, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,26 – 7,20 (m, 1H), 7,14 – 7,09 (m, 1H), 7,06 – 7,02 (m, 1H), 6,77 – 6,72 (m, 1H) 6,68 (s, 1H), 5,37 (s, 2H), 5,14 – 5,07 (m, 1H), 4,89 – 4,85 (m, 2H), 4,72 – 4,63 (m, 1H), 4,60 – 4,51 (m, 2H), 4,34 – 4,30 (m, 1H), 4,16 (s, 2H), 3,71 (s, 2H), 2,93 (s, 2H), 2,75 – 2,65 (m, 1H), 2,45 – 2,34 (m, 1H) Ácido (S)-2-((6-((2,4-difluorobenzil)óxi)-5',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 141) Composto 141
[00522] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 547,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,56 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,25 (brs, 1H), 7,82 (dd, J = 1,2, 7,2 Hz, 1H), 7,70-7,64 (m, 2H), 7,62 (dd, J = 8,4, 7,2 Hz, 1H), 7,31-7,25 (m, 1H), 7,12-7,07 (m, 2H), 6,76 (brs, 1H), 6,72 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,38 (s, 2H), 5,07 (dd, J = 4,8, 2,4 Hz, 1H), 4,83 (dd, J = 7,2, 8 Hz, 1H), 4,67 (dd, J = 2, 12,4 Hz, 1H), 4,49 (dd, J = 7,2, 6,4 Hz, 1H), 4,38-4,33 (m, 1H), 4,09 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,93 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,25-3,18 (m, 2H), 2,75-2,70 (m, 2H), 2,68-2,63 (m, 1H), 2,51-2,50 (m, 2H), 2,44- 2,37 (m, 1H).
Ácido (S)-2-((6-((3,5-difluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 142) Composto 142
[00523] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 547,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,63 min. 1 HRMN (400 MHz, DMSO) δ 8,24 (s, 1H), 7,82 – 7,80(m, 1H), 7,72 – 7,68 (m, 1H), 7,65 – 7,64 (m, 1H), 7,18 – 7,16 (m, 3H), 7,10 – 7,08 (m, 1H), 6,79 – 6,77 (m, 1H), 6,72 (s, 1H), 5,39 (s, 2H), 5,06 – 5,05 (m, 1H), 4,82 – 4,76 (m, 1H), 4,66 – 4,62 (m, 1H), 4,49 – 4,43 (m, 1H), 4,38 – 4,33 (m, 1H), 4,08 – 4,05 (m, 1H), 3,93 – 3,89 (m, 1H), 3,24 – 3,18 (m, 4H), 2,79 – 2,70 (m, 2H), 2,67 – 2,61 (m, 1H), 2,43 – 2,39 (m, 1H). Ácido (S)-2-((6-((3-cloro-5-(trifluorometil)benzil)óxi)-3',6'-di-hidro- [2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 143) Composto 143
[00524] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 613,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,70 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,24 (s, 1H), 7,86 – 7,78(m, 4H), 7,74 – 7,61 (m, 2H), 7,09 (d, J=7,4 Hz, 1H), 6,79 (d, J=8,2 Hz, 1H), 6,72 (s, 1H), 5,45 (s, 2H), 5,06 (m, 1H), 4,79 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,46 (m,
1H), 4,36 (m, 1H), 4,11 – 3,88 (m, 2H), 3,23 (m, 4H), 2,73 (m, 2H), 2,64 (m, 1H), 2,40 (m, 1H). Ácido (S)-2-((6-((2-cloro-4-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 144) Composto 144
[00525] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 563,3; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,68 min. 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,37 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,00 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,67 – 7,62 (m, 1H), 7,59 – 7,54 (m, 1H), 7,29 – 7,24 (m, 1H), 7,11 – 7,05 (m, 2H), 6,75 – 6,70 (m, 1H), 5,48 (s, 2H), 5,28 – 5,21 (m, 1H), 4,88 – 4,84 (m, 1H), 4,75 – 4,70 (m, 1H), 4,66 – 4,59 (m, 1H), 4,50 – 4,45 (m, 1H), 4,12 (dd, J = 13,6 Hz, 2H), 3,31 – 3,25 (m, 2H), 2,91-2,85 (m, 2H), 2,82 – 2,72 (m, 1H), 2,68 – 2,63 (m, 2H), 2,55 – 2,46 (m, 1H). Ácido (S)-2-((6-((3,4-difluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 145) Composto 145
[00526] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 546,9; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,36 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26 (s, 1H), 7,83 – 7,80 (m, 1H), 7,71 – 7,64 (m, 2H), 7,56 – 7,49 (m, 1H), 7,47 – 7,37 (m, 1H), 7,32 – 7,29 (m, 1H), 7,08 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,75 – 6,73 (m, 2H), 5,35 (s, 2H), 5,07 –
5,03 (m, 1H), 4,82 – 4,77 (m, 1H), 4,67 – 4,63 (m, 1H), 4,49 -4,46 (m, 1H), 4,38 – 4,33 (m, 1H), 4,12 – 3,99 (m, 1H), 3,93 – 3,89 (m, 1H), 3,25 – 3,20 (m, 4H), 2,77 – 2,72 (m, 2H), 2,67 – 2,63 (m, 1H), 2,44 – 2,38 (m, 1H). Ácido (S)-2-((6-((4-metilbenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1' (2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 146) Composto 146
[00527] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 525,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,57 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,06 – 8,03 (brs, 1H), 7,78 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,66 (t, J = 7,8 Hz, 1H),7,42 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,05 (d, J = 7,5 Hz, 1H),6,78 – 6,74 (brs, 1H), 6,69 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,31 (s, 2H), 5,09 – 5,03 (m, 1H), 4,71 (dd, J = 15,2, 7,2Hz, 1H), 4,61 – 4,55 (m, 1H), 4,47 (dd, J = 13,5, 7,9 Hz, 1H), 4,36 (dt, J = 11,9, 6,0 Hz, 1H), 4,03 (d, J= 13,2 Hz, 1H), 3,88 (d, J = 13,3Hz, 1H), 3,25 – 3,13 (m, 3H), 2,76 – 2,70 (m, 2H), 2,67 – 2,63 (m,1H), 2,4 6 – 2,36 (d, J = 8,m, 2H), 2,28 (s, 3H). Ácido (S)-2-((6-((4-(terc-butil)benzil)óxi)-5',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 147) Composto 147
[00528] Preparado de maneira análoga ao Composto 19
LCMS: [M+H]+ = 567,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,70 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,25 - 8,21 (brs, 1H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1H), 7,69 – 7,61 (m,2H), 7,38 – 7,34 (brs, 4H), 7,06 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,78 – 6,74 (brs, 1H), 6,69 (d, J = 8,1 Hz, 1H),5,32 (s, 2H), 5,10 – 5,04 (m, 1H), 4,83 – 475 (m, 1H), 4,68 – 4,60 (m, 1H), 4,48 – 4,43 (m, 1H), 4,38 – 4,33 (m, 1H), 4,07 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,26 – 3,20 (m, 2H), 2,79 – 2,70(m, 2H), 2,69 – 2,63 (m, J = 16,4, 1H), 2,50 – 2,44 (m, 2H), 2,44 - 2,36 (m, 1H), 1,26 (s, 9H). Ácido (S)-2-((6-((4-isopropilbenzil)óxi)-5',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 148) Composto 148
[00529] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 553,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,56 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,23 – 8,18 (brs, 1H), 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,69 – 7,64 (m, 1H),7,59 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,22 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,06 (d, J = 7,5 Hz, 1H),6,79 – 6,73 (brs, 1H), 6,69 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,32 (s, 2H), 5,10 – 5,03 (m, 1H), 4,78 (dd, J = 15,1, 7,3Hz, 1H), 4,63 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 4,47 (dd, J = 13,7, 7,5 Hz, 1H), 4,39 – 4,34 (m, 1H), 4,06 (d, J =13,4 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,26 – 3,22 (m, 2H), 2,90 – 2,83 (m, 1H), 2,78 – 2,70 (m, 2H),2,69 – 2,64 (m, 1H), 2,55 – 2,52 (m, 1H), 2,44 – 2,37 (m, 2H), 1,18 (d, J = 6,9 Hz, 6H).
Ácido (S)-2-((6-((3-fluoro-5-(trifluorometil) piridin-2-il)metóxi)-3',6'- di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 149) Composto 149
[00530] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 598,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,51 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,83 – 8,79 (brs, 1H), 8,35 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 8,28 – 8,24 (brs, 1H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1H), 7,68 (dd, J = 16,3, 8,3 Hz, 2H), 7,07 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,63 – 6,57 (brs, 1H), 5,58 (s, 2H), 5,08 – 5,00 (m, 1H), 4,79 (dd, J = 15,3, 7,4 Hz, 1H), 4,68 – 4,60 (m, 1H), 4,46 (dd, J = 13,6, 7,8 Hz, 1H), 4,35 (dt, J = 9,1, 5,9 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,22 – 3,08 (m, 2H), 2,74 – 2,64 (m, 3H), 2,44 – 2,34 (m, 3H). Ácido (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((6-((4-(trifluorometil)piridin-3- il)metóxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 150) Composto 150
[00531] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 580,0, Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,43 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,97 – 8,95 (brs, 1H), 8,82 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,26 – 8,23 (brs, 1H), 7,83 – 7,77 (m, 2H), 7,71 (t, J = 7,8 Hz, 1H),
7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,73 – 6,68 (brs, 1H), 5,58 (s, 2H), 5,09 – 5,02 (m, 1H), 4,79 (dd, J = 15,3, 7,3 Hz, 1H), 4,68 – 4,61 (m, 1H), 4,46 (dd, J = 13,6, 7,7 Hz, 1H), 4,36 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 4,06 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,25 – 3,16 (m, 2H), 2,77 – 2,71 (m, 2H), 2,68 – 2,63 (m, 1H), 2,48 – 2,32 (m, 3H). Ácido (S)-2-((6-((2,3-di-hidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)metóxi)-3',6'- di-hidro-[2,4'-bipiridina]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 151) Composto 151
[00532] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 569,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,46 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,25 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1H), 7,66 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,05 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 6,90 (dd, J = 8,2, 2,0 Hz, 1H), 6,85 – 6,79 (m, 1H), 6,76 (s, 1H), 6,68 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 10,7 Hz, 2H), 5,07 (dt, J = 7,0, 4,6 Hz, 1H), 4,80 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1H), 4,65 (dd, J = 15,1, 2,6 Hz, 1H), 4,47 (dd, J = 13,6, 7,7 Hz, 1H), 4,36 (dt, J = 8,8, 5,9 Hz, 1H), 4,28 – 4,16 (m, 4H), 4,07 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,24 (d, J = 10,2 Hz, 2H), 2,73 (d, J = 17,8 Hz, 2H), 2,70 – 2,61 (m, 1H), 2,52 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 2,45 – 2,37 (m, 1H).
Ácido (S)-2-((6-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ilmetóxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 152) Composto 152
[00533] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 555,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,34 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1H), 7,70-7,62 (m, 2H), 7,06 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,94 (dd, J = 7,9, 1,6 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,76 (s, 1H), 6,69 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,00 (s, 2H), 5,25 (s, 2H), 5,07 (qd, J = 7,3, 2,8 Hz, 1H), 4,81 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1H), 4,66 (dd, J = 15,2, 2,6 Hz, 1H), 4,47 (dt, J = 14,2, 7,1 Hz, 1H), 4,36 (dt, J = 8,9, 5,9 Hz, 1H), 4,12-3,99 (m, 1H), 3,92 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,24 (d, J = 9,6 Hz, 2H), 2,79-2,60 (m, 3H), 2,53 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 2,39 (dd, J = 21,7, 13,3, 7,5 Hz, 1H). Ácido (S)-2-((6-((2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)metóxi)-3',6'- di-hidro-[2,4'-bipiridina]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 153) Composto 153
[00534] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 591,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,62 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,25 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,72 – 7,62 (m,
2H), 7,51 (s, 1H), 7,39 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,80 – 6,68 (m, 2H), 5,36 (s, 2H), 5,06 (s, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,65 (d, J = 15,2 Hz, 1H), 4,45 (s, 1H), 4,36 (s, 1H), 4,07 (d, J = 14,6 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 3,24 (s, 2H), 2,75 (s, 2H), 2,60 (d, J = 54,7 Hz, 2H), 2,40 (s, 2H). Ácido (S)-2-((6-((4-(1H-imidazol-1-il)benzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 154) Composto 154
[00535] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 577,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,57 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,29 – 8,22 (brs, 1H), 8,17 – 8,07 (brs, 1H), 7,80 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,76 – 7,72 (brs, 1H), 7,71 – 7,63 (m, 3H), 7,61 – 7,56 (m, 2H), 7,52 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,14 – 7,02 (m, 2H), 6,80 – 6,76 (brs, 1H), 6,74 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,41 (s, 2H), 5,10 – 5,02 (m, 1H), 4,75 (dd, J = 15,2, 7,1 Hz, 1H), 4,61 (dd, J = 15,1, 2,8 Hz, 1H), 4,49 – 4,42 (m, 1H), 4,35 (dt, J = 8,9, 5,9 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,26 – 3,21 (m, 2H), 2,78 – 2,70 (m, 2H), 2,68 – 2,62 (m, 1H), 2,57 – 2,52 (m, 2H), 2,44 – 2,37 (m, 1H).
Ácido (S)-2-((6-((2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 155) Composto 155
[00536] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 529,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,47 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,25 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1H), 7,72-7,62 (m, 2H), 7,53 (td, J = 7,6, 1,6 Hz, 1H), 7,43- 7,34 (m, 1H), 7,26-7,17 (m, 2H), 7,08 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,78-6,69 (m, 2H), 5,42 (s, 2H), 5,10-5,03 (m, 1H), 4,80 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1H), 4,65 (dd, J = 15,1, 2,6 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 13,6, 7,7 Hz, 1H), 4,36 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,24 (dd, J = 27,8, 17,7 Hz, 4H), 2,75 (brs, 2H), 2,69-2,61 (m, 1H), 2,39 (m, J = 21,3, 8,7 Hz, 1H). Ácido (S)-2-((6-((3-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 156) Composto 156
[00537] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 529,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,54 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,32-8,31 (brs, 1H), 7,98 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,74 – 7,55 (m, 2H), 7,34 (dd, J = 13,8, 7,9 Hz, 1H), 7,20 (dd, J =
27,8, 8,8 Hz, 2H), 7,08 – 6,93 (m, 2H), 6,70 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 5,40 (s, 2H), 5,24 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,85-4,84 (brs, 1H), 4,72 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 4,62 (dd, J = 14,3, 7,2 Hz, 1H), 4,46 (dt, J = 11,7, 5,9 Hz, 1H), 4,17 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 3,29 – 3,20 (m, 2H), 2,85 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 2,74 (dd, J = 17,0, 8,5 Hz, 1H), 2,64-2,63 (brs, 2H), 2,51 (dd, J = 17,6, 8,5 Hz, 1H). Ácido (S)-2-((6-((4-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 157) Composto 157
[00538] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 529,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,54 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,23 – 8,19 (brs, 1H), 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,67 (t, J = 7,8 Hz, 1H),7,61 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,49 (dd, J = 8,6, 5,7 Hz, 2H), 7,18 (t, J = 8,9 Hz, 2H), 7,07 (d, J = 7,5 Hz, 1H),6,77 – 6,73 (brs, 1H), 6,71 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,35 (s, 2H), 5,10 – 5,03 (m, 1H), 4,78 (dd, J = 15,4, 7,1Hz, 1H), 4,67 - 4,61 (m, 1H), 4,46 (dd, J = 13,8, 7,6 Hz, 1H), 4,36 (dt, J = 11,8, 5,9 Hz, 1H), 4,06 (d, J =13,4 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,26 – 3,16 (m, 3H), 2,78 – 2,70 (m, 2H), 2,69 – 2,63 (m, 1H),2,45 – 2,35 (m, 2H).
Ácido (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((6-(piridin-3-ilmetóxi)-5',6'-di- hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 158) Composto 158
[00539] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 512,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,32 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,67 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 8, 51-8, 49 (m, 1H), 8,253(brs, 1H), 7,86-7,79 (m, 2H), 7,70-7,63 (m, 2H), 7,40-7,37 (m, 1H), 7,08 (d, J = 4 Hz1H), 6,73 (d, J = 8 Hz, 2H), 5,41 (s, 2H), 5,07- 5,05 (m, 1H), 4,82-4,76 (m, 1H), 4,64(dd, J = 2,4, 2,4 Hz,1H), 4,45 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 4,38-4,34 (m, 1H), 4,07 (d, J = 13,6Hz, 1H), 3,91 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,24-3,21 (m, 2H), 2,73 (d, J = 5,6 Hz, 2H),2,67-2,63 (m, 1H), 2,43-2,37 (m, 3H). Ácido (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((6-(piridin-2-ilmetóxi)-5',6'-di- hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 159) Composto 159
[00540] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 512,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,33 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,56-8,52(m, 1H), 8,26-8,22(brs, 1H), 7,82 – 7,76(m, 2H), 7,70 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 8 Hz, 1H),7,31-7,28 (m, 1H), 7,08 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,79 (d, J
= 8,4 Hz, 1H), 6,67 (brs, 1H),5,43 (s, 2H), 5,06-5,04 (m, 1H), 4,81-4,75 (m, 1H), 4,53 (dd, J = 2,4, 2,4 Hz, 1H),4,46-4,43 (m, 1H), 4,36-4,34 (m, 1H), 4,05 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 13,6 Hz,1H), 3,22-3,18 (m, 2H), 2,72 – 2,68 (m, 2H), 2,67 – 2,62 (m, 1H), 2,46 (s,2H), 2,43 –2,38 (m, 1H). Ácido (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((6-(piridin-4-ilmetóxi)-5',6'-di- hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 160) Composto 160
[00541] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 512,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,32 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,53 (dd, J = 1,6, 1,6 Hz, 2H), 8, 22 (brs, 1H), 7.80 (dd, J = 1,2, 1,2 Hz, 1H), 7,70 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,40 (d, J =2,4 Hz, 2H), 7,08 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,68 (brs, 1H), 5,42 (s,2H), 5,06-5,03 (m, 1H), 4,80-4,74 (m, 1H), 4,62 (dd, J = 2,8, 2,8 Hz,1H), 4,48-4,42(m, 1H), 4,37-4,32 (m, 1H), 4,05 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 13,6 Hz, 1H),3,27-3,18 (m, 2H), 2,71 (d, J = 6 Hz, 2H), 2,67-2,61 (m, 1H), 2,47 (d, J = 4,4 Hz, 2H),2,38-2,36 (m, 1H). Ácido (S)-2-((6-((2-metilpiridin-3-il)metóxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 161) Composto 161
[00542] Preparado de maneira análoga ao Composto 19
LCMS: [M+H]+ = 526,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,34 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,35 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 8,00 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,78 – 7,58 (m, 2H), 7,27 (dd, J = 7,6, 5,1 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,79 – 6,65 (m, 2H), 5,47 (s, 2H), 5,25 (dd, J = 12,0, 6,9 Hz, 1H), 4,88 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,74 (dd, J = 15,3, 2,4 Hz, 1H), 4,64 (dd, J = 13,9, 7,8 Hz, 1H), 4,48 (dt, J = 9,0, 6,0 Hz, 1H), 4,20 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 4,08 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 3,32 – 3,30 (m, 2H), 2,88 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,82 – 2,71 (m, 1H), 2,66-2,65 (brs, 2H), 2,60 (s, 3H), 2,51 (dd, J = 19,2, 8,2 Hz, 1H). Ácido (S)-2-((6-((2-cloropiridin-4-il)metóxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 162) Composto 162
[00543] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 546,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,43 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,37 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,26 – 8,23 (brs, 1H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1H), 7,72 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,56 – 7,53 (brs, 1H), 7,43 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,70 – 6,65 (brs, 1H), 5,43 (s, 2H), 5,09 – 5,01 (m, 1H), 4,79 (dd, J = 15,2, 7,4 Hz, 1H), 4,64 (dd, J = 15,1, 2,6 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 13,8, 7,6 Hz, 1H), 4,35 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 4,06 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,24 – 3,15 (m, 2H), 2,77 – 2,68 (m, 2H), 2,67 – 2,62 (m, 1H), 2,46 – 2,42 (m, 2H), 2,40 – 2,34 (m, 1H).
Ácido (S)-2-((6-((2-cloropiridin-3-il)metóxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 163) Composto 163
[00544] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 545,8; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,23 min. 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,34 (s, 1H), 8,32-8,28 (m, 1H), 8,02 – 7,98 (m, 1H),7,97 - 7,94 (m, 1H), 7,72-7,64 (m, 2H), 7,39 (dd, J = 7,6, 4,8 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,72 – 6,67 (m, 1H), 5,52 (s, 2H), 5,28 – 5,20 (m, 1H), 4,88 – 4,85 (m, 1H), 4,77 – 4,69 (m, 1H), 4,61 – 4,59 (m, 1H), 4,51 – 4,42 (m, 1H), 4,11 (dd, J = 13,7 Hz, 2H), 3,31 – 3,25 (m, 2H), 2,89 - 2,82 (m, 2H), 2,80 – 2,70 (m, 1H), 2,64 – 2,56 (m, 2H), 2,54 – 2,45 (m, 1H) Ácido (S)-2-((6-((5-cloropirimidin-2-il)metóxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 164) Composto 164
[00545] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 547,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,31 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,89 (s, 2H), 8,23 (s, 1H), 7,81 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,72 – 7,65 (m, 1H), 7,63 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,48 (s, 1H), 5,51 (s, 2H), 5,08 – 4,99
(m, 1H), 4,76 (dd, J = 15,4, 7,3 Hz, 1H), 4,65 – 4,57 (m, 1H), 4,45 (dd, J = 13,6, 7,7 Hz, 1H), 4,34 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 4,03 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,88 (t, J = 13,2 Hz, 1H), 3,18 – 3,08 (m, 2H), 2,72 – 2,55 (m, 3H), 2,39 (dd, J = 17,9, 9,3 Hz, 1H), 2,30 (s, 2H). Ácido (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((6-(pirazin-2-ilmetóxi)-3',6'-di- hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 165) Composto 165
[00546] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 513,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,30 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,74 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 8,64 – 8,60 (m, 1H), 8,57 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,26 – 8,22 (brs, 1H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1H), 7,71 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,68 – 6,64 (brs, 1H), 5,50 (s, 2H), 5,09 – 5,02 (m, 1H), 4,78 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1H), 4,63 (dd, J = 15,2, 2,7 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 13,7, 7,7 Hz, 1H), 4,35 (dt, J = 9,0, 6,0 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,23 – 3,13 (m, 2H), 2,75 – 2,68 (m, 2H), 2,67 – 2,62 (m, 1H), 2,46 – 2,42 (m, 2H), 2,39 – 2,32 (m, 1H).
Ácido (S)-2-((6-((4-etóxi-3-metoxibenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 166) Composto 166
[00547] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 585,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,46 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,23 – 8,18 (brs, 1H), 7,83 – 7,78 (m, 1H), 7,69 – 7,58 (m, 2H), 7,06 (dd, J = 8,0, 4,6 Hz, 2H), 6,96 (dd, J = 8,2, 1,7 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,81 – 6,77 (brs, 1H), 6,69 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,27 (s, 2H), 5,10 – 5,03 (m, 1H), 4,78 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1H), 4,64 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 4,47 (dd, J = 13,6, 7,6 Hz, 1H), 4,36 (dt, J = 8,7, 5,9 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 4,01 – 3,89 (m, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,26 – 3,21 (m, 2H), 2,79 – 2,71 (m, 2H), 2,69 – 2,63 (m, 1H), 2,58 – 2,52 (m, 2H), 2,45 – 2,38 (m, 1H), 1,30 (t, J = 7,0 Hz, 3H). Ácido (S)-2-((4-(4-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-1,3,5-triazin-2- il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 167) Composto 167
[00548] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 568,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,43 min.
H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,39 – 8,37 (brs, 1H), 8,27 – 8,22 (brs, 1H), 7,82 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,63 – 7,54 (m, 2H), 7,50 (dd, J = 10,0, 1,9 Hz, 1H), 7,33 (dd, J = 8,3, 1,8 Hz, 1H), 5,38 (s, 2H), 5,13 – 5,07 (m, 1H), 4,78 (dd, J = 15,2, 7,1 Hz, 1H), 4,64 (d, J = 12,9 Hz, 1H), 4,49 (dd, J = 14,0, 7,5 Hz, 1H), 4,37 (dt, J = 8,7, 5,8 Hz, 1H), 3,97 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,84 – 3,74 (m, 5H), 2,71 – 2,69 (m, 1H), 2,59 – 2,52 (m, 3H), 2,47 – 2,32 (m, 2H). Ácido (S)-2-((4-(6-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-2,5- dioxopiperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 168) Composto 168
[00549] Preparado de maneira análoga ao Composto 55 LCMS: [M+H]+ = 594,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,48 min. 1 H RMN (400 MHz, CDCL3) δ 8,12 (s, 1H), 8,05 – 8,03 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,87 – 7,85 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,68 – 7,62 (m, 2H), 7,43 – 7,39 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,17 – 7,13 (m, 2H), 6,67 – 6,65 (dd, J1 = 7,2 Hz, J2 = 0,8 Hz, 1H), 5,37 (s, 2H), 5,21 (s, 2H), 5,14 – 5,11 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 4,81 – 4,76 (m, 3H), 4,66 – 4,50 (m, 4H), 4,43 – 4,41 (m, 1H), 2,83 – 2,78 (t, J = 9,6 Hz, 1H), 2,51 – 2,46 (t, J = 8,4 Hz, 1H).
Ácido (S)-2-((6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-imidazo[4,5-b] piridina-5-carboxílico (Composto 169) Composto 169
[00550] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 565,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,80 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,13 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,68 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,55 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,47 (dd, J = 10,0, 1,8 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,81-6,68 (m, 2H), 5,39 (s, 2H), 5,21-5,07 (m, 1H), 4,83 (dd, J = 14,6, 6,5 Hz, 1H), 4,70 (dd, J = 14,7, 3,9 Hz, 1H), 4,47 (dd, J = 14,5, 7,0 Hz, 1H), 4,35 (dd, J = 14,8, 6,1 Hz, 1H), 4,08 (dd, J = 37,5, 13,6 Hz, 2H), 3,27 (s, 2H), 2,75 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 2,72-2,61 (m, 1H), 2,53 (s, 2H), 2,43 (s, 1H). Ácido (S)-2-((6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-imidazo[4,5-c] piridina-6-carboxílico (Composto 170) Composto 170
Composto 170 Etapa 1
[00551] Dipotássio oxido-(oxido(dioxo)cromo)óxi-dioxo-cromo (1,92 g, 6,52 mmols) foi adicionado a uma mistura de 2,4-dicloro-6-metil-3- nitro-piridina (1,0 g, 4,83 mmols) em H2SO4 (3 mL) e agitada por 24 horas a 30°C. Em seguida, a reação foi adicionada a gelo e agitada por 20 minutos e filtrada, lavada com água (10 ml), seca para dar ácido 4,6-dicloro-5-nitro-piridina-2-carboxílico (1,0 g, 4,14 mmols, 83,0% de rendimento) como um sólido branco que foi usado na próxima etapa sem purificação adicional. LCMS: [M+H]+ = 237,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,75 min. Etapa 2
[00552] Ácido 4,6-dicloro-5-nitro-piridina-2-carboxílico (900 mg, 3,72 mmols) foi dissolvido em Metanol/THF (10 mL/10 mL) e foi adicionado N,N-dietiletanamina (3,77 g, 37,22 mmols, 5,19 mL) e metilcarbonocloridato (2,11 g, 22,33 mmols) sob condições de frio de gelo e a mistura resultante foi agitada por 10 min. Após conclusão da reação, foi adicionada água e a mistura resultante foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa saturada de cloreto de amônio, seca sobre sulfato de sódio e concentrada in vacuo. O resíduo obtido foi purificado usando cromatografia de coluna (EA:PE = gradiente de 0-70%) para obter metil 4,6-dicloro-5-nitro-piridina-2-carboxilato (900 mg, 3,51 mmols,
94,4% de rendimento). LCMS: [M+H]+ = 250,9; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,95 min. Etapa 3
[00553] Uma mistura de [(2S)-oxetan-2-il]metanamina (347 mg, 1,20 mmol), metil 4,6-dicloro-5-nitro-piridina-2-carboxilato (300 mg, 1,20 mmol) e N,N-dietiletanamina (363 mg, 3,59 mmols) em DMF (5 mL) foi agitada por dus horas a 15°C, até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS. Água (30 mL) foi adicionada à mistura e extraída com EtOAc (3x40 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura (20 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada in vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de sílica gel (éter de petróleo/acetato de etila = 1:1) para gerar metil 6- cloro-5-nitro-4-[[(2S)-oxetan-2-il]metilamino]piridina-2-carboxilato (145 mg, 0,336 mmol, 28,2% de rendimento, 70% de pureza). LCMS: [M+H]+ = 302,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,76 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 7,89 (dd, J = 11,9, 6,2 Hz, 1H), 7,68 (s, 1H), 4,89 (t, J = 11,5 Hz, 1H), 4,53-4,24 (m, 2H), 3,88 (d, J = 7,6 Hz, 3H), 3,56 (dd, J = 15,5, 10,7 Hz, 2H), 2,63 (dt, J = 14,7, 8,0 Hz, 1H), 2,45 (dd, J = 10,9, 6,9Hz, 1H). Etapa 4
[00554] Uma mistura de 6-cloro-5-nitro-4-[[(2S)-oxetan-2- il]metilamino]piridina-2-carboxilato de metila (130 mg, 302 mmols) e paládio (64,20 mg, 603 mmols) em (CF3)2CHOH (10 mL) foi agitada por 16 horas a 15°C sob H2. A mistura de reação foi filtrada e concentrada para dar o produto desejado metil 5-amino-4-[[(2S)- oxetan-2-il]metilamino]piridina-2-carboxilato (100 mg, 0,295 mmoll). LCMS: [M+H]+ = 238,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,42 min. Etapa 5
[00555] A uma solução de 5-amino-4-[[(2S)-oxetan-2-
il]metilamino]piridina-2-carboxilato de metila (100 mg, 0,295 mmol) em THF anidro (20 mL) foi adicionada uma solução de (2-cloroacetil) 2- cloroacetato (76 mg, 442 mmols) em THF anidro (2 mL) em porções. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente por duas horas e, então, aquecida a 60°C por 24 horas. LCMS mostrou que o SM foi mantido. Uma solução de (2-cloroacetil) 2-cloroacetato (76 mg, 0,443 mmol) em THF anidro (2 mL) foi adicionada à mistura de reação e agitada por 24 horas a 80°C. Então, a mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e o solvente foi evaporado metade sob pressão reduzida. A solução resultante foi diluída com EtOAc (30 mL) e tratada com NaHCO3 aq. (10 mL). A mistura bifásica foi agitada à temperatura ambiente por 30 min. A camada orgânica foi separada e a camada aq. foi extraída com EtOAc (30 mL×2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter metil 2-(clorometil)-1- [[(2S)-oxetan-2-il]metil]imidazo [4,5-c]piridina-6-carboxilato (80 mg, 0,189 mmol, rendimento de 64,2%). LCMS: [M+H]+ = 296,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,48 min. Etapa 6
[00556] A uma solução agitada de 2-(clorometil)-1-[[(2S)-oxetan-2- il]metil]imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxilato de metila (80 mg, 0,189 mmol) e 2-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]-6-(1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4- il)piridina (60 mg, 0,189 mmol) em DMF (3 mL) foi adicionado N,N- dietiletanamina (57 mg, 0,568 mmol). A mistura de reação foi agitada a 60°C por uma hora e mediante conclusão da reação, conforme avaliado por LCMS. A mistura foi diluída com EtOAc (20 mL). As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x20 mL). A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (15 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada in vacuo para produzir metil 2-[[4-[6-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]-2-piridil]-3,6-di-
hidro-2H-piridin-1-il]metil]-1-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]imidazo[4,5-c]piri- dina-6-carboxilato (100 mg, 0,107 mmol, 56,6% de rendimento, 62% de pureza) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 578,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,17 min. Etapa 7
[00557] A uma solução agitada de 2-[[4-[6-[(4-cloro-2-fluoro- fenil)metóxi]-2-piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]-1-[[(2S)-oxetan- 2-il]metil]imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxilato de metila (100 mg, 0,107 mmol) em THF (1 mL), Metanol (1 mL), Água (1 mL) a 60°C foi adicionado hidróxido de lítio mono-hidratado (17 mg, 0,405 mmol). A mistura de reação foi agitada a 60°C por uma hora e mediante conclusão da reação, conforme avaliado por LCMS, a mistura foi acidificada com AcOH até pH~6 e purificada por prep-HPLC para proporcionar ácido 2-[[4-[6-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]-2-piridil]-3,6- di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]-1-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]imidazo[4,5- c]piridina-6-carboxílico (10 mg, 0,018 mmol, rendimento de 17,0%) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 564,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,81 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,89 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,69 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,59-7,40 (m, 2H), 7,36-7,26 (m, 1H), 7,09 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 5,40 (s, 2H), 5,06 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 4,88- 4,59 (m, 2H), 4,52-4,28 (m, 2H), 4,03 (dd, J = 51,9, 13,6 Hz, 2H), 3,24 (s, 2H), 2,75 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 2,65 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 2,39 (dd, J = 21,4, 12,7 Hz, 2H).
Ácido (S)-2-((6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-7-fluoro-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 171) Composto 171 Composto 171 Etapa 1
[00558] Uma mistura de N,N-dietiletanamina (1,02 g, 10,08 mmols, 1,41 mL), [(2S)-oxetan-2-il]metanamina (293 mg, 3,36 mmols) e 1- bromo-2,3-difluoro-4-nitro-benzeno (800 mg, 3,36 mmols) em MeCN (8 mL) foi agitada a 35°C por 16 horas. LCMS indicou que a reação estava completa. Foi adicionada sílica gel (2,0 g) à mistura de reação e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O pó seco foi purificado através de coluna cromatográfica. 3-bromo-2-fluoro-6-nitro- N-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]anilina (650 mg, 2,02 mmols, 60,2% de rendimento, 95% de pureza) foi obtido como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 305; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,02 min. Etapa 2
[00559] Uma mistura de 3-bromo-2-fluoro-6-nitro-N-[[(2S)-oxetan-2- il]metil]anilina (200 mg, 0,655 mmol), [1,1'-Bis(difenilfosfino) ferroceno]dicloropaládio (II) (48 mg, 0,066 mmol), N,N-dietiletanamina (166 mg, 1,64 mmol) e etanol (302 mg, 6,56 mmols) em DMSO (2 mL) foi trocada por monóxido de carbono três vezes e agitada sob atmosfera de monóxido de carbono a 80°C por 16 horas. LCMS indicou 40% de produto, 60% SM. A mistura de reação foi diluída com água (6 mL) e extraída com acetato de etila (10 mL×3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de sílica gel. Metil 2-fluoro-4-nitro-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metilamino]benzoato (52 mg, 0,157 mmol, 23,9% de rendimento, 90% de pureza) foi obtido como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 299; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,07 min. Etapa 3
[00560] Uma mistura de 2-fluoro-4-nitro-3-[[(2S)-oxetan-2- il]metilamino] benzoato de etila (60 mg, 0,191 mmol), Ferro (56 mg, 1,01 mmol), cloreto de amônio (16 mg, 0,302 mmol) em Etanol (1 mL) e Água (0,1 mL) foi agitada a 50°C por duas horas. LCMS indicou que a reação estava completa. Foi adicionada sílica gel (2 g) à mistura de reação e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O pó seco foi purificado por cromatografia de coluna (eluente: éter de petróleo: acetato de etila = 2:1). Etil 4-amino-2-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2-il] metilamino] benzoato (50 mg, 0,177 mmol, 95% de pureza) foi obtido como um sólido amarelo claro. LCMS: [M+H]+ = 269; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,78 min. Etapa 4
[00561] Uma solução de 4-amino-2-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2- il]metilamino] benzoato de etila (50 mg, 0,177 mmol), (2-cloroacetil) 2- cloroacetato (36 mg, 0,212 mmol) em THF (1 mL) foi agitada a 80°C por 48 horas. LCMS indicou que a reação estava completa. Solução de bicarbonato de sódio (2 mL) foi adicionada a este sistema e, então, agitada por 15 minutos. Foi adicionada sílica gel (2 g). O solvente foi removido sob pressão reduzida e o pó seco foi purificado por meio de coluna cromatográfica (eluente: éter de petróleo/acetato de etila = 2:1).
Etil 2-(clorometil)-4-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5- carboxilato (45 mg, 0,110 mmol, 62,2% de rendimento, 80% de pureza) foi obtido como goma marrom. LCMS: [M+H]+ = 327; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,98 min. Etapa 5
[00562] Uma solução de 2-(clorometil)-4-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2- il]metil]benzimidazol-5-carboxilato de etila (45 mg, 0,110 mmol), 2-[(4- cloro -2-fluoro-fenil) metóxi]-6-(1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)piridina (35 mg, 0,110 mmol), N,N-dietiletanamina (33 mg, 0,330 mmol) em DMF (1 mL) foi agitada a 60°C por 3 horas. LCMS indicou que a reação estava completa. A mistura de reação foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com salmoura (15 mL) e extraída com acetato de etila (15 mL×3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (15 mL×3), secas sobre sulfato de sódio e evaporadas até secura. Etil 2-[[4-[6-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]-2-piridil]-3,6-di- hidro-2H-piridin-1-il]metil]-4-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimi- dazol-5-carboxilato (76 mg, 0,087 mmol, 79,3% de rendimento, 70% de pureza) foi obtido como óleo marrom. LCMS: [M+H]+ = 609; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,47 min. Etapa 6
[00563] Uma solução de 2-[[4-[6-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]-2- piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]-4-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2-il] metil]benzimidazol-5-carboxilato de etila (76 mg, 0,087 mmol) em foi adicionada uma solução de hidróxido de lítio hidratada (15 mg, 357 mmol) em banho de gelo. A mistura de reação foi agitada a 25°C por duas horas. LCMS indicou que a reação estava completa. A mistura de reação foi acidificada com solução de ácido acético até pH=5 e purificada por meio de prep-HPLC para fornecer o produto desejado ácido (S)-2-((6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-7-fluoro-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-
carboxílico (17 mg, 0,029 mmol, 33,2% de rendimento, 99% de pureza) foi obtido como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 581; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,88 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 7,68-7,59 (m, 2H), 7,50 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,26-7,15 (m, 2H), 7,07 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,75 (s, 1H), 6,69 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,44 (s, 2H), 5,34-5,19 (m, 1H), 5,05 (dd, J = 15,3, 7,2 Hz, 1H), 4,81 (dd, J = 15,3, 2,6 Hz, 1H), 4,65 (dd, J = 13,9, 7,7 Hz, 1H), 4,47 (dt, J = 9,0, 6,0 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 2,93-2,76 (m, 3H), 2,68 (d, J = 16,6 Hz, 2H), 2,54 (dd, J = 16,0, 11,4, 7,2 Hz, 1H). Ácido (S)-2-((6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-5-fluoro-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 172) Composto 172 THF/MeOH/água, 25C, 2 h Composto 172 Etapa 1
[00564] Uma mistura de ácido 2,5-difluoro-4-nitro-benzoico (1 g,
4,92 mmols), ácido sulfúrico (161 mg, 1,64 mmol, 0,1 mL) em MeOH (10 mL) foi agitada a 65°C durante a noite. LCMS monitorou os resultados, a mistura resultante foi resfriada à rt e concentrada in vacuo, em seguida, o resíduo foi dissolvido em acetato de etila e lavado com solução saturada de bicarbonato de sódio e água salgada saturada de cada vez, seco sobre sulfato de sódio anidro e concentrado in vacuo para proporcionar metil 2,5-difluoro-4-nitro-benzoato (910 mg, 4,19 mmols, 85,1% de rendimento) como um sólido amarelo. Etapa 2
[00565] Uma mistura de 2,5-difluoro-4-nitro-benzoato de metila (481 mg, 2,22 mmols), [(2S)-oxetan-2-il]metanamina (213 mg, 2,44 mmols) em DMF (3 mL) foi agitada a 25°C durante a noite, LCMS monitorou os resultados, a mistura resultante foi vertida em água e extraída com acetato de etila (3×20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2×30 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro, concentradas e purificadas por cromatografia de sílica gel (eluindo com acetato de etila/éter de petróleo, v/v, 4/1) para obter metil 2-fluoro- 4-nitro-5-[[(2S)-oxetan-2-il]metilamino]benzoato (185 mg, 651 mmols, rendimento de 29,32%) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 285,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,72 min. Etapa 3
[00566] Uma mistura de 2-fluoro-4-nitro-5-[[(2S)-oxetan-2- il]metilamino]benzoato de metila (185 mg, 0,651 mmol) e Paládio (69 mg, 0,065 mmol) em Hexafluoroisopropanol (10 mL) foi lavada com atmosfera de hidrogênio e agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura resultante foi filtrada através de celite. O filtrado foi concentrado in vacuo para obter metil 4-amino-2-fluoro-5-[[(2S)- oxetan-2-il]metilamino]benzoato (159 mg, 0,625 mmol, 96,1% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 255,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,61 min.
Etapa 4
[00567] Uma mistura de 4-amino-2-fluoro-5-[[(2S)-oxetan-2- il]metilamino]benzoato de metila (159 mg, 0,625 mmol), 2-cloro-1,1,1- trimetóxi-etano (145 mg, 0,938 mmol) e ácido 4- metilbenzenossulfônico hidratado (12 mg, 0,062 mmol) em MeCN (2 mL) foi agitada a 60°C por uma hora. A mistura resultante foi concentrada e purificada por cromatografia de sílica gel (eluindo com éter de petróleo/acetato de etila, v/v, 1/4) para obter metil 2- (clorometil)-6-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5- carboxilato (82 mg, 0,262 mmol, 41,9% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 313,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,73 min. Etapa 5
[00568] Uma mistura de 2-(clorometil)-6-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2- il]metil]benzimidazol-5-carboxilato de metila (82 mg, 0,262 mmol), 2- [(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]-6-(1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)piridina (84 mg, 0,262 mmol), N,N-dietiletanamina (80 mg, 0,787 mmol) em DMF (2 mL) foi agitada a 60°C por duas horas. A mistura resultante foi derramada em água e extraída com acetato de etila (3x10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2×20 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro, concentradas para obter metil 2-[[4-[6-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]-2-piridil]-3,6-di-hidro-2H- piridin-1-il]metil]-6-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5- carboxilato (150 mg, 0,201 mmol, rendimento de 76,9%) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 595,3; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,79 min. Etapa 6
[00569] Uma solução de 2-[[4-[6-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]-2- piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]-6-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2-il] metil]benzimidazol-5-carboxilato de metila (82 mg, 0,113 mmol), LiOH
(5 mg, 0,226 mmol) em THF (1 mL), Metanol (1 mL) e água (1 mL) foi agitada a 25°C por duas horas.
LCMS indicou reação completa.
Após remoção de solvente parcial, a mistura foi neutralizada com ácido acético até pH = 5 e o produto bruto foi purificado por Prep-HPLC (Coluna:Xtimate C18 21,2 × 250 mm, 10 µm; Fase móvel: A:água (NH4HCO3 10 mM & 0,025% NH3.H2O), B: ACN; Gradiente: 34% de B por 1 min., depois 49% de B em 7 minutos, parada em 15min.; Taxa de Fluxo (mL/min.): 30,00; Comprimento de Onda Detectivo (nm): 214 nm e 254 nm) para dar ácido 2-[[4-[6-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]-2- piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]-6-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2- il]metil]benzimidazol-5-carboxílico (7 mg, 0,013 mmol, 11,9% de rendimento, 100% de pureza) como um sólido branco.
LCMS: [M+H]+ = 581,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,71 min. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,98 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 8,26 (dd, J = 8,2, 2,1 Hz, 1H), 7,90-7,71 (m, 1H), 7,57 (t, J = 7,9 Hz, 2H), 7,48 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,27 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,16 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 5,51 (s, 1H), 5,43 (s, 2H), 5,00 (s, 1H), 4,62 (dd, J = 15,5, 7,4 Hz, 1H), 4,54-4,39 (m, 2H), 4,34 (dt, J = 8,8, 6,0 Hz, 1H), 3,73 (dd, J = 25,8, 15,9 Hz, 3H), 2,68 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 2,39 (dd, J = 22,8, 14,1 Hz, 2H), 2,1 (br s, 2H).
(S)-2-((6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-N-((trifluorometil) sulfonil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxamida (Composto 173) Composto 173
[00570] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 693,9; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,84 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,16-8,15 (brs, 1H), 7,84 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1H), 7,68 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,61 – 7,45 (m, 3H), 7,30 (dd, J = 8,2, 1,7 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,78 – 6,68 (m, 2H), 6,09-6,08 (brs, 1H), 5,40 (s, 2H), 5,07 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 4,75 (dd, J = 15,2, 7,0 Hz, 1H), 4,67 – 4,57 (m, 1H), 4,46 (dd, J = 13,8, 7,6 Hz, 1H), 4,35 (dt, J = 9,1, 6,0 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,25-3,24 (brs, 2H), 2,73 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 2,67-2,66 (brs, 1H), 2,49 – 2,46 (m, 2H), 2,40 (d, J = 10,6 Hz, 1H). (S)-2-((6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-5',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]- 1'(2'H)-il)metil)-N-hidróxi-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxamida (Composto 174) Composto 174
[00571] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 578,7; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,60 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,99 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,71 – 7,53 (m, 5H), 7,30 (d, J = 6,3 Hz, 1H),7,09 (dd, J = 7,4 Hz, 1H), 6,77 - 6,71 (m,
2H), 5,40 (s, 2H), 5,13 - 5,04 (m, 1H), 4,86 - 4,67 (m, 1H), 4,66– 4,54 (m, 1H), 4,50 – 4,38 (m, 2H), 4,07 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,26 – 3,17 (m,2H), 2,79 – 2,65 (m, 3H), 2,46 – 2,32 (m, 3H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)fenil)-3,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 175) Composto 175
[00572] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 553,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,51 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,27 (s, 1H), 7,92 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 7,82 – 7,74 (m, 3H),7,68 (s, 1H), 7,26 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,08 (s, 2H), 6,95 – 6,92 (m, 1H), 6,19 (s, 1H), 5,25 (s,2H), 5,05 (s, 1H), 4,80 (dd, J = 14,9, 6,7 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 14,3 Hz, 1H), 4,47(d, J = 5,8Hz, 1H), 4,35 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 4,10 – 3,85 (m, 2H), 3,17 (s, 2H), 2,79 – 2,64 (m, 3H), 2,44– 2,23 (m, 3H). Ácido (S)-2-((4-(4-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)pirimidin-2-il)-3,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 176) Composto 176
[00573] Preparado de maneira análoga ao Composto 33 LCMS: [M+H]+ = 555,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,22 min.
H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,52 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,92 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,75 – 7,71 (m, 2H), 7,65 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 6,86 (d, J = 5,7 Hz, 1H),5,57 (s, 2H), 5,10- 5,04 (brs, 1H), 4,80 (dd, J = 15,3, 7,3 Hz, 1H), 4,64 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 4,49 –4,43 (m, 1H), 4,39 – 4,34 (m,1H), 4,08 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,29 – 3,22 (m,2H), 2,78 – 2,69 (m, 2H), 2,69 – 2,62 (m, J = 6,4 Hz, 1H), 2,56 (s, 2H), 2,43 – 2,38 (m, 1H). Ácido (S)-2-((4-(2-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)pirimidin-4-il)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 177) Composto 177
[00574] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 555,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,35 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,54 (d, J=5,2 Hz, 1H), 8, 24 (s, 1H), 7,91 (d, J = 9,6Hz, 1H), 7,81 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,74-7,70 (m, 2H), 7,63 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,28 (d,J = 5,2 Hz, 1H), 7,00 (s, 1H), 5,51 (s, 2H), 5,06-5,03 (m, 1H), 4,80-4,74 (m, 1H),4,65-4,61 (m, 1H), 4,46-4,43 (m, 1H), 4,37-4,34 (m,1H), 4,07 (d, J=13,6 Hz,1H),3,92 (d, J=13,2 Hz,1H), 3,27 (d, J=8,4 Hz,2H), 2,74-2,64 (m, 3H), 2,43-2,32 (m,3H).
Ácido (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)fenil)piperazin-1- il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 178) Composto 178
[00575] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 565,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,57 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,25-8,24 (brs, 1H), 7,80 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1H), 7,66 – 7,53 (m, 2H), 7,49 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1H), 7,33 (dd, J = 8,3, 1,8 Hz, 1H), 7,11 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 6,54 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,48 – 6,38 (m, 1H), 5,09 (d, J = 8,4 Hz, 3H), 4,78 (dd, J = 15,1, 7,1 Hz, 1H), 4,68 – 4,58 (m, 1H), 4,48 (dd, J = 13,5, 7,8 Hz, 1H), 4,37 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 3,98 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,13-3,12 (brs, 4H), 2,74 – 2,66 (m, 1H), 2,59 (td, J = 11,4, 6,2 Hz, 4H), 2,45 – 2,39 (m, 1H). Ácido (S)-2-((4-(2-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-5-fluoropirimidin-4-il) piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- arboxílico (Composto 179) Composto 179
[00576] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 585,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,47 min. 1 H RMN (400 MHz, CDCL3) δ 8,06 (s, 1H), 7,94 – 7,85 (m, 2H), 7,76 –
7,74 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,44 – 7,40 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,12 – 7,07 (m, 2H), 5,32 (s, 2H), 5,19 – 5,18 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,86 – 4,78 (t, J = 15,2 Hz, 2H), 4,63 – 4,58 (m, 1H), 4,39 – 4,30 (m, 3H), 4,01 (s, 4H), 3,06 – 2,70 (m, 5H), 2,43 – 2,39 (t, J = 8,4 Hz, 1H). Ácido (S)-2-((4-(4-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-5-fluoropirimidin-2-il) piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 180) Composto 180
[00577] Preparado de maneira análoga ao Composto 33 LCMS: [M+H]+ = 585,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,54 min. 1 H RMN (400 MHz, CDCL3) δ 8,24 (s, 1H), 8,09 – 8,06 (dd, J1 = 8,4 Hz, J2 = 1,2 Hz, 1H), 8,01 – 8,00 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,86 – 7,84 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,44 – 7,40 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,18 – 7,15 (dd, J1 = 8,0 Hz, J2 = 1,6 Hz, 1H), 7,14 – 7,11 (dd, J1 = 9,6 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1H), 5,43 (s, 2H), 5,28 – 5,25 (m, 1H), 4,79 – 4,72 (m, 2H), 4,69 – 4,63 (m, 1H), 4,45 – 4,40 (m, 1H), 4,11 (s, 2H), 3,78 (s, 4H), 2,80 – 2,69 (m, 5H), 2,51 – 2,46 (m, 1H). Ácido (S)-2-((4-(4-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)pirimidin-2- il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 181) Composto 181
[00578] Preparado de maneira análoga ao Composto 33
LCMS: [M+H]+ = 567,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,53 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,23 (s, 1H), 8,10 (d, J=5,6 Hz, 1H), 7,80 (dd, J =1,2,1,2 Hz, 1H), 7,61-7,53 (m, 2H), 7,47 (dd, J = 2 Hz, J = 2 Hz, 1H), 7,31 (dd, J = 1,6 Hz, J =1,6 Hz, 1H), 6,10 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,36 (s, 2H), 5,11-5,09 (m, 1H), 4,81-4,76(m,1H),4,67-4,62 (m, 1H), 4,49- 4,46 (m, 1H), 4,40-4,36 (m, 1H), 3,96 (d, J=13,6Hz,1H), 3,80 (d, J=13,2 Hz,1H), 3,71 (s, 4H), 2,73-2,67 (m, 1H), 2,47-2,40 (m, 2H). Ácido 2-((6-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1Ácido-((1-etil-1H-imidazol-5-il)metil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 182) Composto 182 (mistura de 3 e 3A) Composto 182 Etapa 1
[00579] Uma mistura de sulfato de dietila (3,21 g, 20,81 mmols, 2,72 mL), 1H-imidazol-5-carbaldeído (2,0 g, 20,81 mmols) e carbonato de potássio (3,45 g, 24,98 mmols, 1,51 mL) em DMF (20 mL) foi agitada por 16 horas a 10°C em um RBF sob N2, até que a reação estivesse completa como indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (DCM/MeOH = 20:1) para dar o produto desejado 3-etilimidazol-4-carbaldeído (1,2 g, 9,67 mmols, 46,4% de rendimento) como um óleo amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 125; Tempo de retenção (10mM NH4HCO3) = 0,90 min. Etapa 2
[00580] Uma mistura de tetraisopropoxititânio (703 mg, 2,48 mmols), 2-metilpropano-2-sulfinamida (300 mg, 2,48 mmols) e 3- etilimidazol-4-carbaldeído (307 mg, 2,48 mmols) em THF (20 mL) foi agitada por 16 horas a 10°C em um frasco de fundo redondo (RBF) sob N2 até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos:EtOAc = 20:1) para dar o produto desejado (NE)-N-[(3-etilimidazol-4- il)metileno]-2-metil-propano-2-sulfinamida (100 mg, 0,440 mmol, 17,8% de rendimento, 100% de pureza) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 228; Tempo de retenção (10mM NH4HCO3) = 1,15 min. Etapa 3
[00581] Uma mistura de (NE)-N-[(3-etilimidazol-4-il)metileno]-2- metil-propano-2-sulfinamida (2,0 g, 8,80 mmols), boro-hidreto de sódio (333 mg, 8,80 mmols) em MeOH (20 mL) foi agitada por 16 horas a 10°C em um RBF sob N2, até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos:EtOAc = 20:1) para dar o produto desejado N-[(3-
etilimidazol-4-il)metil]-2-metil-propano-2-sulfinamida (0,9 g, 3,92 mmols, 44,6% de rendimento, 100% de pureza) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 230; Tempo de retenção (10 mM NH4HCO3) = 1,20 min. Etapa 4
[00582] Uma mistura de N-[(3-etilimidazol-4-il)metil]-2-metil- propano-2-sulfinamida (101 mg, 0,440 mmol), ácido clorídrico (16 mg, 0,440 mmol) em Metanol (20 mL) foi agitada por uma hora a 10°C sob N2, até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo para dar o produto desejado (3-etilimidazol-4-il)metanamina (20 mg, 0,160 mmol, 36,3% de rendimento) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 126; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 0,70 min. Etapa 5
[00583] Uma mistura de 3-fluoro-4-nitro-benzoato de terc-butila (100 mg, 0,415 mmol), (3-etilimidazol-4-il)metanamina (52 mg, 0,415 mmol) e N,N-dietiletanamina (126 mg, 1,24 mmol) em DMF (2 mL) foi agitada por 12 horas a 25°C em um RBF sob N2 até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos/EtOAc = 2:1) para dar o produto desejado como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 347,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,61 min. Etapa 6
[00584] Uma mistura de 3-[(3-etilimidazol-4-il)metilamino]-4-nitro- benzoato de terc-butila (500 mg, 1,44 mmol) e Pa/C (154 mg) em Etanol (10 mL) foi agitada por 12 horas a 25°C sob N2 até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos:EtOAc = 20:1) para dar o produto desejado terc-butil 4-amino-3-[(3-etilimidazol-4-il)metilamino]benzoato (430 mg, 1,36 mmol, 94,2% de rendimento) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 347,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,60 min. Etapa 7
[00585] Uma mistura de 2-cloro-1,1,1-trimetóxi-etano (5,6 mg, 0,036 mmol), terc-butil 4-amino-3-[(3-etilimidazol-4-il)metilamino]benzoato (12 mg, 0,036 mmol), em CH3CN (10 mL) foi agitada por uma hora a 60°C em um RBF sob H2 até que a reação estivesse concluída como indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos:EtOAc = 2:1) para dar o produto desejado terc-butil 2- (clorometil)-3-[(3-etilimidazol-4-il)metil]benzimidazol-5-carboxilato (10 mg, 0,021 mmol, 58,5% de rendimento, 80% de pureza) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 375; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,48 min. Etapa 8
[00586] Uma mistura de 2-(clorometil)-3-[(3-etilimidazol-4-il)metil] benzimidazol-5-carboxilato de terc-butila (120 mg, 0,320 mmol), 3- fluoro-4-[[6-(1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)-2-piridil]oximetil]benzonitrila (99 mg, 0,320 mmol) e N,N-dietiletanamina (32 mg, 0,320 mmol) em DMF (5 mL) foi agitada por duas horas a 60°C em um RBF sob N2 até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos:EtOAc = 1:1) para dar o produto desejado terc-butil 2-[[4-[6-[(4-ciano-2-fluoro- fenil)metóxi]-2-piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]-3-[(3-etilimidazol- 4-il)metil]benzimidazol-5-carboxilato (60 mg, 0,093 mmol, 28,9% de rendimento) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 648; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,67 min. Etapa 9
[00587] Uma mistura de 2-[[4-[6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil)metóxi]-2- piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]-3-[(3-etilimidazol-4-il)metil]ben- zimidazol-5-carboxilato de terc-butila (50 mg, 0,077 mmol) e ácido 2,2,2-trifluoroacético (9 mg, 0,077 mmol) em DCM (5 mL) foi agitada por duas horas a 30°C em um RBF sob N2 até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi concentrada in vacuo, purificada por HPLC preparativa para dar o produto desejado 2-[[4-[6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil)metóxi]-2-piridil]-3,6- di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]-3-[(3-etilimidazol-4-il)metil]benzimidazol-5- carboxílico (20 mg, 0,033 mmol, 43,1% de rendimento) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 592; Tempo de retenção (0,01% NH4HCO3) = 1,31 min. 1 H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,68 (s, 1H), 8,05 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 7,61 (dd, J = 14,8, 7,2 Hz, 2H), 7,51 – 7,41 (m, 1H), 7,38 (dd, J = 9,3, 1,2 Hz, 1H), 7,09 (s, 1H), 6,99 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,80 – 6,67 (m, 2H), 5,60 (s, 2H), 5,53 (s, 2H), 4,11 (s, 2H), 3,78 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 3,33 (s, 2H), 2,93 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 2,66 (s, 2H), 1,23 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
Ácido 2-((6-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-((1-etil-1H-imidazol-4-il)metil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 183) Composto 183
[00588] Preparado de maneira análoga ao Composto 182 LCMS: [M+H]+ = 592; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,29 min. 1 H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,05 (s, 2H), 7,71 (d, J = 77,3 Hz, 4H), 7,41 (d, J = 38,1 Hz, 2H), 6,97 (s, 2H), 6,69 (d, J = 16,3 Hz, 2H), 5,69 (s, 2H), 5,53 (s, 2H), 3,96 (d, J = 61,0 Hz, 4H), 3,33 (s, 2H), 2,85 (s, 2H), 2,52 (s, 2H), 1,24 (d, J = 23,4 Hz, 3H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-4-fluorofenil) piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 184) Composto 184
[00589] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 584,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,58 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,28 (s, 1H), 7,85 – 7,79 (m, 1,4 Hz, 1H), 7,69 – 7,64 (m, 1H), 7,63 – 7,56 (m, 1H), 7,54 – 7,48 (dd, J = 10,0, 1,8 Hz, 1H), 7,38 – 7,33 (m, 1H), 7,09 – 7,00 (m, 1H), 6,88 – 6,82 (dd, J = 7,5, 2,7 Hz, 1H), 6,50 – 6,44 (m, 1H), 5,22 – 5,16 (s, 2H), 5,15 – 5,06 (m, 1H), 4,84 – 4,76 (m, 1H), 4,70 – 4,62 (m, 1H), 4,53 – 4,45 (m, 1H),
4,42 – 4,34 (m, 1H), 4,05 – 3,78 (dd, J = 70,5, 13,5 Hz, 2H), 3,14 – 3,04 (m, 4H), 2,75 – 2,56 (m, 5H), 2,48 – 2,38 (m, 1H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-5-fluorofenil) piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 185) Composto 185
[00590] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 583,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,37 min. 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,33 (s, 1H), 7,99 – 7,95 (m, 1H), 7,68 – 7,66 (m, 1H), 7,53 – 7,49 (m, 1H), 7,25 – 7,21 (m, 2H), 6,37 – 6,32 (m, 2H), 6,25 – 6,20 (m, 1H), 5,33 – 5,25 (m, 1H), 5,08 (s, 2H), 4,76 – 4,72 (m, 1H), 4,68 – 4,61 (m, 1H), 4,51 – 4,43 (m, 1H), 4,01 (dd, J = 13,8 Hz, 2H),3,26 – 3,15 (m, 5H), 2,85 – 2,76 (m, 1H), 2,73 – 2,26 (m, 4H), 2,57 – 2,48 (m, 1H). Ácido (S)-2-((4-(5-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-2- fluorofenil)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 186) Composto 186
[00591] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 583,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,47 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,27 (d, J = 0,8 Hz, 1 H), 7,81 (dd, J =
1,2Hz, 8,4 Hz, 1 H), 7,65 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,58 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,49 (dd, J = 1,6 Hz, 9,6 Hz, 1 H), 7,33 (dd, J = 1,6 Hz, 8,4 Hz, 1 H), 7,02-7,08 (m, 1 H), 6,58-6,62 (m, 2 H),5,08-5,11 (m, 3 H), 4,79 (dd, J = 7,2Hz, 15,2 Hz, 1 H), 4,63-4,68 (m, 1 H), 4,47-4,52 (m, 1 H), 4,36-4,41 (m, 1 H), 3,99 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 3,83 (d, J = 13,6 Hz, 1 H), 3,01 (m, 4 H), 2,59-2,720 (m, 5 H), 2,38-2,47 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((4-(3-(4-cloro-2-fluorobenzilóxi)-4,5-difluorofenil)pipe- razin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 187) Composto 187
[00592] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 601,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,59 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,27 (s, 1 H), 7,81 (dd, J = 1,2Hz, 8,4 Hz, 1 H), 7,58-7,65 (m, 2 H), 7,50-7,53 (m, 1 H), 7,35-7,38 (m, 1 H),7,66- 7,67 (m, 1 H), 6,52-6,57 (m, 1 H), 5,22 (s, 2 H), 5,07-5,12 (m, 1 H), 4,76-4,82 (m, 1 H),4,65 (dd, J = 2,8Hz, 15,2 Hz, 1 H), 4,46-4,52 (m, 1 H), 4,36-4,41 (m, 1 H), 3,80-4,01 (m, 2 H), 3,13-3,16 (m, 4 H), 2,56- 2,72 (m, 5 H), 2,40-2,47 (m, 1 H) Ácido (S)-2-((4-(5-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-2,4-difluorofenil) piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico) (Composto 188) Composto 188
[00593] Preparado de maneira análoga ao Composto 9
LCMS: [M+H]+ = 601,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,59 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,34 (s, 1H), 7,99 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,52 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,27 (dd, J = 7,0, 4,7 Hz, 2H), 7,00 – 6,94 (m, 1H), 6,82 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 5,29 (dd, J = 9,6, 4,6 Hz, 1H), 5,16 (s, 2H), 4,92 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 4,75 (dd, J = 15,3, 2,6 Hz, 1H), 4,66 (dd, J = 13,8, 7,9 Hz, 1H), 4,49 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 4,08 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,97 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,06 (s, 4H), 2,86 – 2,80 (m, 1H), 2,72 (d, J = 4,6 Hz, 4H), 2,57 – 2,52 (m, 1H) Ácido (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((4-(3-((4-(trifluorometil)benzil) óxi)fenil)piperazin-1-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 189) Composto 189
[00594] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 581,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,59 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,27 (s, 1H), 7,84 – 7,80 (m, 1H), 7,78 – 7,74 (m, 2H), 7,70 – 7,62 (m, 3H), 7,15 – 7,08 (m, 1H), 6,58 – 6,52 (m, 2H), 6,47 – 6,42 (m, 1H), 5,19 (s, 2H), 5,14 – 5,08 (m, 1H), 4,83 – 4,75 (m, 1H), 4,68 – 4,62 (m, 1H), 4,52 – 4,45 (m, 1H), 4,41 – 4,35 (m, 1H), 4,01 – 3,79 (dd, J = 70,7, 13,5 Hz, 2H), 3,16 – 3,11 (m, 4H), 2,73 – 2,67 (m, 1H), 2,66 – 2,55 (m, 4H), 2,46 – 2,40 (m, 1H).
Ácido (S)-2-((4-(3-((4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzil)óxi)fenil) piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 190) Composto 190
[00595] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 595,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,65 min. 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,34 (s, 1H), 7,99 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,43 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,18-7,06 (m, 3H), 6,63-6,56 (m, 2H), 6,50 (dd, J = 8,1, 1,9 Hz, 1H), 5,28 (dt, J = 7,0, 4,6 Hz, 1H), 5,08 (brs, 2H), 4,87-4,83 (m, 1H), 4,74 (dd, J = 15,3, 2,5 Hz, 1H), 4,69-4,63 (m, 1H), 4,48 (m, J = 9,1, 5,9 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,96 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,20 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 2,81 (m, J = 16,1, 12,8, 8,2 Hz, 1H), 2,74-2,66 (m, 4H), 2,59-2,48 (m, 1H), 1,53-1,43 (m, 1H), 0,94-0,88 (m, 2H), 0,79-0,72 (m, 2H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)fenil)piperidin-1- il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 191) Composto 191
[00596] Preparado de maneira análoga ao Composto 239 LCMS: [M+H]+ = 577,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,33 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,17 (s, 1H), 7,93-7,90 (d, J=10,0Hz, 1H), 7,79-7,75 (m, 3H),7,55-7,53 (d, J=8,0Hz, 1H), 7,24-7,20 (m, 1H), 6,91-6,84 (m, 3H), 5,21 (s, 2H), 5,01 (m, 1H),4,76-4,36 (m, 4H), 3,94-
3,76 (m, 2H), 2,38-2,4 (m, 2H), 2,44 (m, 1H), 2,21-2,15 (m, 2H), 1,74- 1,56 (m,4H), 0,86-0,83 (m, 2H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzil)óxi)fenil) piperidin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 192) Composto 192
[00597] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 594,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,71 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26 (s, 1H), 7,80 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,49 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,28 – 7,19 (m, 3H), 6,89 – 6,82 (m, 3H), 5,10 (s, 3H), 4,81 (dd, J = 15,1, 7,1 Hz, 1H), 4,66 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 4,50 (dd, J = 13,5, 7,7 Hz, 1H), 4,38 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 3,95 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,79 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,00 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 2,87 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 2,71 (dd, J = 15,3, 9,4 Hz, 1H), 2,45 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 2,25 – 2,16 (m, 2H), 1,77 – 1,54 (m, 6H), 0,89 (dd, J = 15,1, 9,4, 5,7 Hz, 2H), 0,78 – 0,73 (m, 2H). Ácido (S)-2-((4-(3-(4-ciano-2-fluorobenzilóxi)fenil)piperazin-1- il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 193) Composto 193
[00598] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 556,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,44 min. 1 H RMN (400 MHz, CDCL3) δ 8,23 (s, 1H), 8,08 – 8,06 (t, J = 8,8 Hz,
1H), 7,85 – 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,69 – 7,65 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,48 – 7,45 (dd, J1 = 8,0 Hz, J2 = 0,8 Hz, 1H), 7,38 – 7,35 (dd, J1 = 9,6 Hz, J2 = 1,6 Hz, 1H), 7,18 – 7,14 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,58 – 6,55 (dd, J1 = 8,0 Hz, J2 = 1,6 Hz, 1H), 6,52 – 6,51 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 6,45 – 6,42 (dd, J1 = 8,4 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1H), 5,25 – 5,21 (m, 1H), 5,14 (s, 2H), 4,77 – 4,60 (m, 3H), 4,42 – 4,37 (m, 1H), 4,11 – 4,04 (m, 2H), 3,20 (s, 4H), 2,77 – 2,69 (t, J = 14,0 Hz, 5H), 2,48 – 2,43 (m, 1H). Ácido (S)-2-((4-(2-((4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzil)óxi)pirimidin- 4-il)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 194) Composto 194
[00599] Preparado de maneira análoga ao Composto 33 LCMS: [M+H]+ = 597,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,51 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,24 (s, 1H), 8,01 (d, J=6 Hz, 1H), 7,80 (dd, J = 1,6 Hz, J = 8,4 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,43 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,24-7,18 (m,2H), 6,49 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 5,29 (s, 1H), 5,10-5,08 (m, 1H), 4,80-4,75 (m, 1H), 4,64(dd, J = 2,4 Hz, J = 15,2 Hz, 1H), 4,51-4,45 (m, 1H), 4,39-4,34 (m, 1H), 3,95 (d, J =13,2 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,58 (s, 4H), 2,73-2,66 (m, 1H), 2,55-2,50 (m,2H), 2,49-2,39 (m, 2H), 1,57-1,51 (m, 1H), 0,92-0,87 (m, 2H), 0,76- 0,72 (m, 2H).
Ácido (S)-2-((4-(3-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-4-fluorofenil)pipe- razin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 195) Composto 195
[00600] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 574,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,47 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,27 (s, 1H), 7,93 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 7,85-7,74 (m, 3H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,06 (dd, J = 11,1, 9,0 Hz, 1H), 6,85 (dd, J = 7,5, 2,6 Hz, 1H), 6,47 (dt, J = 8,9, 3,2 Hz, 1H), 5,29 (brs, 2H), 5,10 (dd, J = 9,6, 4,8 Hz, 1H), 4,79 (dd, J = 15,3, 7,2 Hz, 1H), 4,65 (dd, J = 15,2, 2,6 Hz, 1H), 4,48 (dd, J = 13,7, 7,7 Hz, 1H), 4,38 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 3,99 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,82 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,09 (brs, 4H), 2,70 (m, J = 11,8, 5,8 Hz, 1H), 2,60 (m, J = 11,4, 5,3 Hz, 4H), 2,41 (m, J = 19,1, 8,2 Hz, 1H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzil)óxi)-4- fluorofenil)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 196) Composto 196
[00601] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 613,4; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,63 min. 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,23 (s, 1H), 7,97 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,44 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 6,98 (dd, J = 11,0, 9,0 Hz, 1H), 6,74 (dd,
J = 7,3, 2,7 Hz, 1H), 6,58-6,51 (m, 1H), 5,29 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,16 (brs, 2H), 4,87 (s, 1H), 4,73 (dd, J = 15,2, 2,7 Hz, 1H), 4,68-4,64 (m, 1H), 4,48 (dt, J = 9,3, 6,0 Hz, 1H), 4,06 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,96 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,13 (d, J = 4,5 Hz, 4H), 2,83-2,78 (m, 1H), 2,71 (brs, 4H), 2,56 (dd, J = 18,2, 9,3 Hz, 1H), 1,52-1,43 (m, 1H), 0,91 (m, J = 6,7, 4,0 Hz, 2H), 0,80-0,72 (m, 2H). Ácido (S)-2-((4-(5-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-2-fluorofenil)piperazin- 1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 197) Composto 197
[00602] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 574,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,48 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,21-8,20 (brs, 1H), 7,95 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,73 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 10,6 Hz, 3H), 6,95 (dd, J = 12,3, 8,9 Hz, 1H), 6,66 (dd, J = 7,2, 2,6 Hz, 1H), 6,57 (dd, J = 8,8, 3,0 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 5,17 (s, 2H), 4,85-4,84 (brs, 1H), 4,72 (dd, J = 15,2, 2,4 Hz, 1H), 4,63 (dd, J = 13,9, 7,6 Hz, 1H), 4,46 (dt, J = 8,9, 5,9 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,96 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,10-3,09 (brs, 4H), 2,82 – 2,77 (m, 1H), 2,72 (d, J = 21,8 Hz, 4H), 2,57 – 2,47 (m, 1H).
Ácido (S)-2-((4-(5-((4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzil)óxi)-2- fluorofenil)piperazin-1-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (Composto 198) Composto 198
[00603] Preparado de maneira análoga ao Composto 9 LCMS: [M+H]+ = 613,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,69 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,28-8,27 (brs, 1H), 7,80 (dd, J = 8,5, 1,5 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,48 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,28 – 7,16 (m, 2H), 7,04 (dd, J = 12,5, 8,6 Hz, 1H), 6,64 – 6,51 (m, 2H), 5,13 – 5,00 (m, 3H), 4,79 (dd, J = 15,2, 7,2 Hz, 1H), 4,68 – 4,59 (m, 1H), 4,51 – 4,43 (m, 1H), 4,38 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 3,99 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,82 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,00-2,99 (brs, 4H), 2,76 – 2,54 (m, 5H), 2,43 – 2,37 (m, 1H), 1,56 (dd, J = 9,3, 4,1 Hz, 1H), 0,89 (dd, J = 12,8, 8,3, 4,6 Hz, 2H), 0,77 – 0,70 (m, 2H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzil)óxi)fenil)-3,6- di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetano-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imi- dazol-6-carboxílico (Composto 199) Composto 199
[00604] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 592,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,47 min. 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,31 (s, 1H), 8,01 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,45 – 7,42 (m, 1H), 7,26 – 7,22 (m, 1H), 7,17
– 7,15 (m, 1H), 7,11 – 7,08 (m, 1H), 7,06 – 7,03 (m, 2H), 6,90 – 6,87 (m, 1H), 6,12 (s, 1H), 5,27 – 5,23 (m, 1H), 5,12 (s, 2H), 4,76 – 4,73 (m, 1H), 4,66 – 4,60 (m, 1H), 4,50 – 4,44 (m, 1H), 4,12 (dd, J = 13,6 Hz, 2H), 3,32 – 3,25 (m, 3H), 2,87-2,84 (m, 2H), 2,78 – 2,75 (m, 1H), 2,55 – 2,53 (m, 2H), 2,51 – 2,47 (m, 1H), 1,50 – 1,44 (m, 1H), 0,93 – 0,88 (m, 2H), 0,78 – 0,74 (m, 2H). Áido (S)-2-((4-(4-((4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzil)óxi)pirimidin- 2-il)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo [d]imidazol-6-carboxílico (Composto 200) Composto 200
[00605] Preparado de maneira análoga ao Composto 33 LCMS: [M+H]+ = 594,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,40 min. 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,42 – 8,40 (m, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,01 – 7,99 (m, 1H), 7,71 – 7,69 (m, 1H), 7,44 – 7,40 (m, 1H), 7,20 – 7,17 (m, 1H), 7,15 – 7,08 (m, 2H), 6,73 – 6,70 (m, 1H), 5,51 (s, 2H), 5,27 – 5,23 (m, 1H), 4,87 – 4,85 (m, 1H), 4,76 – 4,73 (m, 1H), 4,66 – 4,60 (m, 1H), 4,50 – 4,45 (m, 1H), 4,12 (dd, J = 13,6 Hz, 2H), 3,41 – 3,34 (m, 2H), 2,87-2,83 (m, 2H), 2,84 – 2,81 (m, 1H), 2,75 – 2,69 (m, 2H), 2,54 – 2,50 (m, 1H), 1,49 – 1,44 (m, 1H), 0,93 – 0,88 (m, 2H), 0,77 – 0,75 (m, 2H).
Ácido (S)-2-((4-(2-((4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzil)óxi)pirimidin- 4-il)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo [d]imidazol-6-carboxílico (Composto 201) Composto 201
[00606] Preparado de maneira análoga ao Composto 18 LCMS: [M+H]+ = 594,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,36 min. 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,48 – 8,46 (m, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,00 – 7,98 (m, 1H), 7,69 – 7,67 (m, 1H), 7,47 – 7,43 (m, 1H), 7,22 – 7,19 (m, 1H), 7,16 – 7,08 (m, 2H), 7,05 – 7,02 (m, 1H), 5,49 (s, 2H), 5,26 – 5,23 (m, 1H), 4,87 – 4,85 (m, 1H), 4,74 – 4,70 (m, 1H), 4,65 – 4,60 (m, 1H), 4,49 – 4,44 (m, 1H), 4,12 (dd, J = 13,6 Hz, 2H), 3,40 – 3,35 (m, 2H), 2,87-2,84 (m, 2H), 2,78 – 2,75 (m, 1H), 2,67 – 2,63 (m, 2H), 2,54 – 2,49 (m, 1H), 1,48 – 1,44 (m, 1H), 0,93 – 0,88 (m, 2H), 0,78 – 0,73 (m, 2H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzil)óxi)-4- fluorofenil)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)- 1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 202) Composto 202
[00607] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 610,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,69 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,19 (s, 1H), 7,90 – 7,70 (m, 1H), 7,68 – 7,55 (m, 1H), 7,50 – 7,40 (m, 1H), 7,33 – 7,21 (m, 3H), 7,19 – 7,10 (m, 1H), 7,08- 7,00 (m, 1H), 6,19 – 6,12 (m, 1H), 5,24 (s, 2H), 5,12 – 5,05
(m, 1H), 4,81 – 4,74 (m, 1H), 4,65 – 4,60 (m, 1H), 4,50 – 4,45 (m, 1H), 4,39 – 4,33 (m, 1H), 4,06 – 3,88 (dd, J = 58,7, 13,4 Hz, 2H), 3,20 – 3,15 (m, 2H), 2,79 – 2,61 (m, 4H), 2,38 – 2,30 (m, 2H), 1,59 – 1,50 (m, 1H), 0,95 – 0,89 (m, 2H), 0,79 – 0,71 (m, 2H). Ácido (S)-2-((4-(3-(4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzilóxi)-4,5- difluorofenil)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)- 1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 203) Composto 203
[00608] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 628,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,57 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26(s, 1 H), 7,80-7,83 (m, 1 H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,51 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,23-7,29 (m, 2 H), 7,17 (d, J = 6,8 Hz, 1 H), 7,07-7,12 (m, 1 H), 6,25 (s, 1 H), 5,28 (s, 2 H), 5,04- 5,10 (m, 1H), 4,71-4,82 (m, 1 H), 4,63-4,67 (m, 1 H), 4,45-4,50 (m, 1 H), 4,34-4,39 (m, 1 H), 3,90-4,08 (m, 2 H), 3,13-3,20 (m, 2 H), 2,65- 2,75 (m, 3 H), 2,37-2,46 (m, 3 H), 1,53-1,58 (m, 1 H), 0,88-0,93 (m, 2 H), 0,74-0,77 (m, 2 H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-4-fluorofenil)-3,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imida- zol-6-carboxílico (Composto 204) Composto 204
[00609] Preparado de maneira análoga ao Composto 28
LCMS: [M+H]+ = 571,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,50 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26 (s, 1H), 7,95 – 7,93 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 7,86 – 7,74 (m, 3H), 7,66 – 7,64 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,35 – 7,33 (m, 1H), 7,23 – 7,15 (m, 1H), 7,05 – 7,04 (m, 1H), 6,19 – 6,16 (m, 1H), 5,36 (s, 2H), 5,08 – 5,06 (m, 1H), 4,85 – 4,75 (m, 1H), 4,67 – 4,64 (m, 1H), 4,50 – 4,43 (m, 1H), 4,37 – 4,35 (m, 1H), 4,08 – 3,89 (dd, J = 59,2, 13,3 Hz, 2H), 3,19 – 3,13 (m, 4H), 2,76 – 2,72 (m, 2H), 2,70 - 2,62 (m, 2H). Ácido (S)-2-((4-(3-(4-ciano-2-fluorobenzilóxi)-4,5-difluorofenil)-5,6- di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetano-2-ilmetil)-1H-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (Composto 205) Composto 205
[00610] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 589,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,44 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,34 (s, 1 H), 7,99 (dd, J = 1,2Hz, 8,4 Hz, 1 H), 7,78(t, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,63-7,71 (m, 3 H), 7,06-7,08 (m, 1 H), 6,97-7,02 (m, 1 H),6,16 (s, 1 H), 5,35 (s, 2 H), 5,24-5,26 (m, 1 H), 4,71- 4,75 (m, 1 H), 4,61-4,67 (m, 2 H), 4,46-4,48 (m, 1 H), 4,03-4,18 (m, 2 H), 3,15-3,26(m, 2 H), 2,76-2,87 (m, 3 H), 2,49-2,54 (m, 3 H).
Ácido (S)-2-((4-(5-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-2-fluorofenil)-3,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imida- zol-6-carboxílico (Composto 206) Composto 206
[00611] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 571,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,41 min. Ácido (S)-2-((4-(4-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-5-fluoropirimidin-2- il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo [d]imidazol-6-carboxílico (Composto 207) Composto 207
[00612] Preparado de maneira análoga ao Composto 33 LCMS: [M+H]+ = 573,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,24 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,61 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,24 (brs, 1H), 7,92-7,95 (m, 1H), 7,73-7,82(m, 3H), 7,63 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,05 (brs, 1H), 5,65 (s, 2H), 5,04-5,06 (m, 1H), 4,75-4,81 (m, 1H),4,61-4,65 (m, 1H), 4,34-4,47 (m, 2H), 4,07 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,25-3,28(m, 2H), 2,62-2,72 (m, 3H), 2,50-2,52 (m, 2H), 2,39- 2,41 (m, 1H).
Ácido (S)-2-((4-(5-((4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzil)óxi)-2- fluorofenil)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)- 1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 208) Composto 208
[00613] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 569,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,59 min. 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,31 (s, 1H), 8,00 – 7,97 (m, 1H), 7,69 – 7,67 (m, 1H), 7,64 – 7,62 (m, 1H), 7,31 – 7,29 (m, 1H), 7,15 – 7,10 (m, 1H), 6,67 (s, 1H), 6,55 – 6,52 (m, 1H), 5,54 (s, 2H), 5,28 – 5,22 (m, 1H), 4,88 – 4,86 (m, 1H), 4,74 – 4,70 (m, 1H), 4,66 – 4,60 (m, 1H), 4,50 – 4,45 (m, 1H), 4,12 (dd, J = 13,6 Hz, 2H), 3,28 – 3,22 (m, 2H), 2,84-2,79 (m, 2H), 2,77 – 2,73 (m, 1H), 2,56 – 2,48 (m, 3H). Ácido (S)-2-((4-(4-((4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzil)óxi)-5- fluoropirimidin-2-il)-3,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 209) Composto 209
[00614] Preparado de maneira análoga ao Composto 33 LCMS: [M+H]+ = 612,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,65 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,58 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,81 (d, J = 8,9 Hz, 1H),7,65 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,52 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,25 (dd, J = 18,2, 9,5 Hz, 2H), 7,08 (s, 1H),5,56 (s, 2H), 5,06 (s, 1H), 4,78 (s, 1H), 4,65 (d, J = 14,9 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 7,0 Hz, 1H),4,36 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,08 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 13,4
Hz, 1H), 3,30 – 3,14 (m,3H), 2,70 (d, J = 23,6 Hz, 3H), 2,56 (s, 2H), 1,55 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 0,92 – 0,87 (m, 2H),0,74 (dd, J = 4,9, 2,6 Hz, 2H). Ácido (S)-2-((4-(2-(4-ciano-2-fluorobenzilóxi)-5-fluoropirimidin-4-il)- 5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (Composto 210) Composto 210
[00615] Preparado de maneira análoga ao Composto 18 LCMS: [M+H]+ = 573,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,39 min. 1 H RMN (400 MHz, CDCL3) δ 8,30 – 8,29 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,84 – 7,83 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,67 – 7,64 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,46 – 7,44 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,38 – 7,35 (dd, J1 = 9,2 Hz, J2 = 0,8 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 5,50 (s, 2H), 5,22 – 5,21 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 4,78 – 4,60 (m, 3H), 4,42 – 4,36 (m, 1H), 4,16 (s, 2H), 3,37 (s, 2H), 2,86 – 2,83 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,75 – 2,67 (m, 3H), 2,46 – 2,44 (d, J = 8,4 Hz, 1H). Ácido (S)-2-((4-(2-(4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzilóxi)-5- fluoropirimidin-4-il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2- ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 211) Composto 211
[00616] Preparado de maneira análoga ao Composto 18 LCMS: [M+H]+ = 612,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,40 min. 1 H RMN (400 MHz, CDCL3) δ 8,29 – 8,28 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 8,21 (s,
1H), 8,06 – 8,04 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,83 – 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,39 – 7,36 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,12 – 7,10 (dd, J1 = 8,0 Hz, J2 = 1,2 Hz, 1H), 7,06 – 7,04 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 5,41 (s, 2H), 5,21 – 5,20 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,75 – 4,73 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,67 – 4,61 (m, 2H), 4,40 – 4,38 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,15 (s, 2H), 3,36 (s, 2H), 2,85 – 2,83 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 2,69 (s, 3H), 2,43 (s, 1H), 1,44 – 1,40 (m, 1H), 0,89 – 0,85 (m, 2H), 0,81 – 0,77 (m, 2H). Ácido (S)-2-((6-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-3,5-difluoro-3',6'-di- hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo [d]imidazol-6-carboxílico (Composto 212) Composto 212
[00617] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 590,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,45 min. Ácido (S)-2-((4-(6-(4-(ciclopropiletinil)-2-fluorobenzilóxi)-3,5- difluoropiridin-2-il)-5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-3-(oxetan-2- ilmetil)-3H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico (Composto 213) Composto 213
[00618] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 629,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,65 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,34 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,98 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,49 (t, J = 9,8 Hz, 1H), 7,39 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,10 (dd, J = 22,5, 9,3 Hz, 2H), 6,52 (s, 1H), 5,46 (s, 2H), 5,24 (dd, J = 12,1, 6,8 Hz, 1H), 4,85 (s, 1H), 4,77 – 4,68 (m, 1H), 4,62 (dd, J = 14,0, 7,6 Hz, 1H), 4,46 (dt, J = 9,1, 6,0 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 2,86 (s, 2H), 2,75 (dd, J = 15,9,
9,7 Hz, 1H), 2,67 (s, 2H), 2,56 – 2,45 (m, 1H), 1,46 (dd, J = 13,1, 8,4, 5,0 Hz, 1H), 0,89 (dt, J = 6,4, 4,0 Hz, 2H), 0,78 – 0,69 (m, 2H). Ácido (S)-2-((4-(4-((2,4-difluorobenzil)óxi)pirimidin-2-il)-3,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetano-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imida- zol-6-carboxílico (Composto 214) Composto 214
[00619] Preparado de maneira análoga ao Composto 33 LCMS: [M+H]+ = 548,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,44 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,50 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H), 7,82 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1H), 7,69 – 7,60 (m, 2H), 7,35 – 7,28 (m, 1H), 7,21 – 7,09 (m, 2H), 6,81 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 5,47 (s, 2H), 5,06 (dt, J = 7,4, 4,9 Hz, 1H), 4,81 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1H), 4,71 – 4,63 (m, 1H), 4,47 (dd, J = 14,3, 7,1 Hz, 1H), 4,37 (dt, J = 9,0, 6,0 Hz, 1H), 4,10 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,94 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,33 – 3,20 (m, 3H), 2,80 – 2,57 (m, 5H), 2,40 (dd, J = 13,4, 6,4 Hz, 1H). Ácido (S)-2-((4-(2-((2,4-difluorobenzil)óxi)pirimidin-4-il)-3,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetano-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imida- zol-6-carboxílico (Composto 215) Composto 215
[00620] Preparado de maneira análoga ao Composto 18 LCMS: [M+H]+ = 548,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,40 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,49 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,00 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,60 (dd, J = 15,1, 8,6 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 7,08 – 6,96 (m, 3H), 5,50 (s, 2H),
5,29 – 5,22 (m, 1H), 4,91 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 4,86 (s, 2H), 4,73 (dd, J = 15,3, 2,5 Hz, 1H), 4,64 (dd, J = 13,9, 7,9 Hz, 1H), 4,47 (dt, J = 9,1, 5,9 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,36 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 2,87 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 2,81 – 2,74 (m, 1H), 2,66 (s, 2H), 2,51 (dd, J = 13,8, 6,6 Hz, 1H). Ácido (S)-2-((4-(6-(2,4-difluorobenzilóxi)-3,5-difluoropiridin-2-il)- 5,6-di-hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d] imidazol-6-carboxílico (Composto 216) Composto 216
[00621] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 583,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,45 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,24 (d, J = 0,8 Hz, 1 H), 7,94 (t, J =10,0 Hz, 1 H), 7,81(dd, J = 1,6 Hz, 8,4 Hz, 1 H), 7,58-7,64 (m, 2 H), 7,28- 7,33 (m, 1 H), 7,10-7,14 (m, 1 H), 6,51 (brs, 1 H), 5,43 (s, 2 H), 5,04- 5,10 (m, 1 H), 4,77-4,83 (m, 1 H), 4,65 (dd, J = 2,8 Hz, 15,2 Hz, 1 H), 4,44-4,50 (m, 1 H), 4,34-4,39 (m, 1 H), 3,90-4,09 (m, 2 H), 3,18-3,30 (m, 2 H), 2,63-2,78 (m, 3 H), 2,58 (brs, 2 H), 2,38-2,45 (m, 1 H). Ácido (S)-2-((6-((4-ciano-2-fluorobenzil)amino)-3,5-difluoro-3',6'-di- hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo [d]imidazol-6-carboxílico (Composto 217) Composto 217
[00622] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 589,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,46 min.
H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,25 (s, 1H), 7,83 – 7,78 (m, 1H), 7,66 – 7,58 (m, 3H), 7,53 – 7,47 (m, 1H), 7,41 – 7,36 (m, 1H), 6,29 (s, 1H), 5,10 – 5,01 (m, 1H), 4,82 – 4,74 (m, 1H), 4,67 – 4,57 (m, 3H), 4,49 – 4,42 (m, 1H), 4,39 – 4,33 (m, 1H), 4,06 – 3,84 (dd, J = 64,4, 13,5 Hz, 2H), 3,18 – 3,11 (m, 2H), 2,71 – 2,59 (m, 4H), 2,35 – 2,31 (m, 3H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-5-fluorofenil)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imida- zol-6-carboxílico (Composto 218) Composto 218
[00623] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 567,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,63 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26 (s, 1H), 7,93 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 7,84 – 7,74 (m, 3H), 7,65(d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,89 (dd, J = 23,4, 12,3 Hz, 3H), 6,28 (s, 1H), 5,27 (s, 2H), 5,06 (d, J = 4,7 Hz,1H), 4,79 (dd, J = 15,2, 7,4 Hz, 1H), 4,71 – 4,58 (m, 1H), 4,47 (dd, J = 13,6, 7,5 Hz, 1H), 4,35 (dt, J = 9,0, 6,0 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,25 – 3,08 (m, 2H),2,82 – 2,58 (m, 3H), 2,40 (dd, J = 29,1, 20,5 Hz, 4H). Ácido (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((4-(2-((6-(trifluorometil)piridin-3- il)metóxi)pirimidin-4-il)-5,6-di-hidropiridina-1(2H)-il)metil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 219) Composto 219
[00624] Preparado de maneira análoga ao Composto 18
LCMS: [M+H]+ = 567,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,63 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,87 (s, 1H), 8,56 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,16 (d, J = 7,7Hz, 1H), 7,93 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,81 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,28 (d,J = 5,3 Hz, 1H), 7,02 (s, 1H), 5,55 (s, 2H), 5,05 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 4,78 (dd, J = 15,2, 7,3 Hz, 1H),4,63 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 13,8, 7,7 Hz, 1H), 4,35 (dt, J = 12,0, 6,0 Hz, 1H), 4,08 (d, J= 13,7 Hz, 1H), 3,93 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,29 (s, 4H), 2,75 (s, 2H), 2,66 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 2,45 – 2,31 (m, 2H). Ácido (S)-2-((3,5-difluoro-6-((6-(trifluorometil)piridin-3-il)metóxi)- 5',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 220) Composto 220
[00625] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 616,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,42 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,86 (s, 1 H), 8,25 (d, J = 0,8 Hz, 1 H), 8,14-8,16 (m, 1 H), 7,93-8,00(m, 2 H), 7,80-7,83 (m, 1 H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 6,50 (brs, 1 H), 5,58 (s, 2 H), 5,04-5,10 (m, 1 H),4,76-4,82 (m, 1 H), 4,64 (dd, J = 2,4 Hz, 15,2 Hz, 1 H), 4,44-4,48 (m, 1 H), 4,33- 4,39 (m, 1 H),3,90-4,08 (m, 2 H), 3,22-3,24 (m, 2 H), 2,64-2,75 (m, 3 H), 2,54 (brs, 2 H), 2,36-2,44 (m, 1 H).
Ácido (S)-2-((6-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol- 6-carboxílico (Composto 221) Composto 221
[00626] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 564,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,60 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26 (s, 1H), 7,84 – 7,80 (m, 1H), 7,72 – 7,63 (m, 2H), 7,59 – 7,53 (m, 1H), 7,50 – 7,46 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1H), 7,33 – 7,28 (m, 1H), 7,11 – 7,07 (m, 1H), 6,78 – 6,71 (m, 2H), 5,40 (s, 2H), 5,11 – 5,03 (m, 1H), 4,85 – 4,76 (m, 1H), 4,69 – 4,62 (m, 1H), 4,51 – 4,43 (m, 1H), 4,40 – 4,33 (m, 1H), 4,11 – 3,88 (dd, J = 62,7, 13,5 Hz, 2H), 3,27 – 3,18 (m, 3H), 2,80 – 2,71 (m, 2H), 2,70 – 2,60 (m, 1H), 2,45 – 2,32 (m, 2H). Ácido (S)-2-((6-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-5-fluoro-3',6'-di-hidro- [2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imi- dazol-6-carboxílico (Composto 222) Composto 222
[00627] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 572,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,30 min. 1 H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,33 (s, 1H), 7,99 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1H), 7,71 (dd, J = 14,8, 7,9Hz, 2H), 7,61 (dd, J = 15,5, 4,7 Hz, 2H), 7,47 (dd, J = 10,0, 8,2 Hz, 1H), 7,09 (dd, J = 8,2, 2,7 Hz, 1H),6,63 (s,
1H), 5,62 (s, 2H), 5,25 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 4,87 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,72 (dd, J = 15,3, 2,6 Hz,1H), 4,63 (dd, J = 13,9, 7,8 Hz, 1H), 4,47 (dt, J = 9,1, 6,0 Hz, 1H), 4,16 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 4,05 (d, J= 13,7 Hz, 1H), 3,27 (t, J = 10,6 Hz, 2H), 2,79 (dd, J = 22,2, 12,7, 6,8 Hz, 3H), 2,67 – 2,48 (m, 3H). Ácido (S)-2-((6-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-3-fluoro-3',6'-di-hidro- [2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imi- dazol-6-carboxílico (Composto 223) Composto 223
[00628] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 572,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,31 min. 1 H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,34 (s, 1H), 8,00-7,98 (m, 1H), 7,70-7,61 (m, 2H), 7,58-7,48 (m,3H), 6,78-6,75 (m, 1H), 6,75 (s, 1H), 5,50 (s, 2H), 5,26 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 4,72 (dd, J = 27,6, 14,6 Hz,1H), 4,54 (dd, J = 15,1, 12,6, 5,5 Hz, 2H), 4,11 (dd, J = 49,6, 13,7 Hz, 2H), 2,90 – 2,71 (m, 3H), 2,70– 2,45 (m, 3H), 1,52 (d, J = 17,0 Hz, 2H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)fenil)-3,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-imidazo[4,5-b] piridina-5-carboxílico (Composto 224) Composto 224
[00629] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 563,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,59 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,12 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 8,2
Hz, 1H), 7,59 (t, J = 8,2 Hz, 1H),7,49 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1H), 7,33 (dd, J = 8,2, 1,8 Hz, 1H), 7,25 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 7,5 Hz,2H), 6,98 – 6,83 (m, 1H), 6,19-6,18 (brs, 1H), 5,20 – 5,09 (m, 3H), 4,83 (dd, J = 14,6, 6,5 Hz, 1H), 4,70(dd, J = 14,6, 4,1 Hz, 1H), 4,47 (dd, J = 13,7, 7,6 Hz, 1H), 4,36 (dt, J = 8,9, 6,1 Hz, 1H), 4,11 (d, J = 13,6Hz, 1H), 4,02 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,22-3,21 (brs, 2H), 2,76 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,67 (dt, J = 22,7, 8,2 Hz,1H), 2,49 – 2,45 (m, 3H). Ácido (S)-2-((6-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-3',6'-di-hidro-[2,4'- bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-imidazo[4,5-b] piridina-5-carboxílico (Composto 225) Composto 225 Composto 225
[00630] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 555; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,59 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,08 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,90(d, J = 10,3 Hz, 1H), 7,70 (dd, J = 9,6, 6,1 Hz, 3H), 7,10 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,78 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 6,72 (s, 1H), 5,49 (s, 2H), 5,25 – 5,00 (m, 1H), 4,82 (dd, J = 14,7, 6,5Hz, 1H), 4,74 – 4,62 (m, 1H), 4,47 (dd, J = 13,8, 7,6 Hz, 1H), 4,35 (dt, J = 12,0, 6,1Hz, 1H), 4,11 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 4,01 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,26 (s, 3H), 2,74 (d, J =5,4 Hz, 2H), 2,65 (d, J = 8,4 Hz, 1H).
Ácido (S)-2-((1-(6-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)piridin-2-il)piperidin- 4-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 226) Composto 226
[00631] Preparado de maneira análoga ao Composto 228. LCMS: [M+H]+ = 556,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,53 min. 1 H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,22 (brs, 1H), 8,10 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,99 (brs, 1H), 7,60 (t, J = 7,4Hz, 1H), 7,42 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 7,36- 7,27 (m, 1H), 6,25 (s, 1H), 6,16 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,43 (s, 2H),5,22 (s, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,40 (s, 1H), 4,20 (d, J = 11,8 Hz, 2H), 3,17 (m, 2H), 2,88 (m, 4H), 2,48 (m,4H), 1,86 (m, 3H). Ácido (S)-2-((1-(6-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)piridin-2-il)piperidin- 4-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-imidazo[4,5-b]piridina-5- carboxílico (Composto 227) Composto 227
[00632] Preparado de maneira análoga ao Composto 228. LCMS: [M+H]+ = 557,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,51 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,15 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,63 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,54 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,43 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,28 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,10 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,44 (s, 2H), 5,24 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,76 (dd, J = 15,1, 6,8 Hz, 1H), 4,63 (dd, J = 21,8, 14,5, 5,1 Hz, 2H), 4,41 (dt, J = 12,2, 6,1 Hz, 1H), 4,24 (d, J =
13,0 Hz, 2H), 3,13 – 3,00 (m, 2H), 2,78 (dd, J = 23,9, 10,6 Hz, 3H), 2,57 – 2,45 (m, 1H), 2,33-2,32 (brs, 1H), 1,77 (d, J = 12,6 Hz, 2H), 1,29 (t, J = 12,0 Hz, 2H). Ácido (S)-2-((1-(6-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)piridin-2-il)piperidin- 4-il)metil)-7-fluoro-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 228) Composto 228 Composto 228 Etapa 1
[00633] A uma suspensão de 4-(2-etóxi-2-oxo-etil)piperidina-1- carboxilato de terc-butila (500 mg, 1,84 mmol) em metanol (3 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (147 mg, 3,69 mmols) e água (1 mL) à rt. A mistura foi agitada por uma hora. Após conclusão da reação conforme avaliado por LCMS, a mistura de reação foi extinta com água gelada (10 mL) e extraída com EtOAc (3×10 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura (20 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada in vacuo para proporcionar ácido 2-(1-terc-butoxicarbonil- 4-piperidil) acético (440 mg, em bruto) como um óleo incolor. LCMS: [M-56+H]+ = 188,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,68 min. Etapa 2
[00634] A uma suspensão de ácido 2-(1-terc-butoxicarbonil-4-
piperidil)acético (272 mg, 1,12 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado etil 4-amino-2-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2-il] metilamino]benzoato (200 mg, 0,745 mmol), 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6trioxatrifosfinano 2,4,6-trióxido (18,98 g, 59,64 mmols) e N-etil-N-isopropil-propan-2-amina (289 mg, 2,24 mmols). A mistura foi agitada à rt por 16 horas. A mistura foi concentrada para dar o material em bruto. O material em bruto foi purificado por cromatografia flash (SiO2, hexano/acetato de etila 2:1) para gerar terc-butil 4-[2-[4-etoxicarbonil-3-fluoro-2-[[(2S)-oxetan-2- il]metilamino]anilino]-2-oxo-etil]piperidina-1-carboxilato (150 mg, 0,176 mmol, 23,6% de rendimento, 57,8% de pureza) como um óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 494,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,95 min. Etapa 3
[00635] A uma suspensão de 4-[2-[4-etoxicarbonil-3-fluoro-2-[[(2S)- oxetan-2-il]metilamino]anilino]-2-oxo-etil]piperidina-1-carboxilato de terc-butila (150 mg, 0,304 mmol) em tolueno (1 mL) foi adicionado ácido acético (2 mg, 40 mmols). A mistura foi agitada a 110°C por duas horas. Após conclusão da reação conforme avaliado por LCMS, a mistura de reação foi extinta com água gelada (10 mL) e extraída com EtOAc (3×10 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura (10 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada in vacuo para obter etil 2-[(1-terc-butoxicarbonil-4-piperidil)metil]-4-fluoro-3-[[(2S)- oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5-carboxilato (100 mg, 0,207 mmol, 68,2% de rendimento, 98,5% de pureza) como um óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 476,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,91 min. Etapa 4
[00636] A uma suspensão de 2-[(1-terc-butoxicarbonil-4-piperidil) metil]-4-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5-carboxilato de etila (100 mg, 0,210 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado ácido 2,2,2- trifluoroacético (23 mg, 210 mmols). A mistura foi agitada à rt por duas horas. Após conclusão da reação conforme avaliado por LCMS, a mistura de reação foi extinta com água gelada (10 mL) e extraída com EtOAc (3 10 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura (20 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada in vacuo para obter etil 4-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]-2-(4-piperidilmetil)benzimidazol- 5-carboxilato (55 mg, 0,123 mmol, 58,5% de rendimento) como um óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 376,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,44 min. Etapa 5
[00637] A uma suspensão de 4-[(6-bromo-2-piridil)oximetil]-3-fluoro- benzonitrila (54 mg, 176 mmols) e etil 4-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2- il]metil]-2-(4-piperidilmetil)benzimidazol-5-carboxilato (55 mg, 146 mmols) em tolueno (4 mL) foi adicionado (1E, 4E)-1,5-difenilpenta-1,4- dien-3-ona; paládio (27 mg, 0,029 mmol), benzil-[1-[2-[benzil(fenil) fosfanil]-1-naftil]-2-naftil]-fenil-fosfano (19 mg, 0,029 mmol) e carbonato de césio (143 mg, 0,439 mmol). A mistura foi agitada a 110°C por 3 horas sob N2. Após conclusão da reação conforme avaliado por LCMS, a mistura de reação foi extinta com água gelada (10 mL) e extraída com EtOAc (3×10 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura (20 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada in vácuo. O produto em bruto foi purificado por prep-HPLC para obter etil 2-[[1-[6- [(4-ciano-2-fluoro-fenil)metóxi]-2-piridil]-4-piperidil]metil]-4-fluoro-3- [[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5-carboxilato (40 mg, 0,041 mmol, 28,3% de rendimento, 62,3% de pureza) como um sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 602,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 2,13 minutos. Etapa 6
[00638] A uma suspensão de 2-[[1-[6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil) metóxi]-2-piridil]-4-piperidil]metil]-4-fluoro-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]ben- zimidazol-5-carboxilato de etila (40 mg, 0,066 mmol) em THF (1 mL)
foi adicionado hidróxido de sódio (13 mg, 0,332 mmol) em água (1 mL). A mistura foi agitada à r.t por 4 horas. Após conclusão da reação conforme avaliado por LCMS, a mistura de reação foi extinta com água gelada (10 mL) e extraída com EtOAc (3×10 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura (20 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada in vácuo. O produto em bruto foi purificado por prep- HPLC para gerar ácido (S)-2-((1-(6-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)piridin- 2-il)piperidin-4-il)metil)-7-fluoro-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imida- zol-6-carboxílico (7 mg, 0,012 mmol, 18,1% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 574,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,53 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 7,91 – 7,85 (m, 1H), 7,74 – 7,57 (m, 3H), 7,51 – 7,32 (m, 2H), 6,34 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,08 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,40 (s, 2H), 5,00 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,68 (dd, J = 15,5, 7,4 Hz, 1H), 4,58 – 4,42 (m, 2H), 4,34 (dt, J = 8,9, 6,0 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 12,9 Hz, 2H), 2,96 – 2,85 (m, 2H), 2,82 –2,68 (m, 3H), 2,43 – 2,33 (m, 1H), 2,26 (s, 1H), 1,76 (d, J = 12,1 Hz, 2H), 1,20 (dd, J = 22,7, 10,3 Hz, 2H). Ácido (S)-2-((1-(6-((2,4-difluorobenzil)óxi)piridin-2-il)piperidin-4- il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-imidazo[4,5-b]piridina-5-carboxílico (Composto 229) Composto 229
[00639] Preparado de maneira análoga ao Composto 228. LCMS: [M+H]+ = 550,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,66 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,17 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,51 (dd, J = 15,2, 8,7 Hz, 1H), 7,43 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,02 – 6,87 (m, 2H), 6,30 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,07 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,34 (s,
2H), 5,27 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 4,79 (dd, J = 15,3, 6,7 Hz, 1H), 4,70 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,33 (d, J = 13,1 Hz, 2H), 3,14 – 3,02 (m, 2H), 2,83 (dd, J = 27,1, 15,2 Hz, 3H), 2,53-2,52 (brs, 1H), 2,37-2,36 (brs, 1H), 1,83 (d, J = 11,8 Hz, 2H), 1,40 (dd, J = 21,2, 11,7 Hz, 2H). Ácido (S)-2-((1-(6-((5-cloropiridin-2-il)metóxi)piridin-2-il)piperidin- 4-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-imidazo[4,5-b]piridina-5- carboxílico (Composto 230) Composto 230
[00640] Preparado de maneira análoga ao Composto 228. LCMS: [M+H]+ = 549,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,45 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,56 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,06 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,91 – 7,88 (dd, J = 8,4, 2,5 Hz, 1H), 7,47 – 7,41(dd, J = 15,9, 8,1 Hz, 2H), 6,31 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,10 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,33 (s, 2H), 5,11 – 5,05 (m, 1H), 4,66 – 4,60 (m, 1H), 4,53 – 4,22 (m, 2H), 4,33 – 4,28 (m, 1H), 4,14 (d, J = 13,0 Hz, 2H), 2,99 – 2,91 (m, 2H), 2,77 – 2,65 (m, 3H), 2,45 – 2,40 (m, 1H), 2,33 – 2,26 (m, 1H), 1,73 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 1,21 – 1,12 (m, 2H). Ácido (S)-2-((1-(6-((5-cianopiridin-2-il)metóxi)piridin-2-il)piperidin- 4-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-imidazo[4,5-b]piridina-5- carboxílico (Composto 231) Composto 231
[00641] Preparado de maneira análoga ao Composto 228.
LCMS: [M+H]+ = 540,3; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,70 min. 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,92 – 8,90 (m, 1H), 8,24 – 8,15 (m, 3H), 7,67 – 7,64 (m, 1H), 7,54 – 7,50 (m, 1H), 6,36 (d, J = 8,0Hz, 1H), 6,24 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,52 (s, 2H), 5,32 – 5,30 (m, 1H), 4,86 – 4,82 (m, 1H), 4,75 – 4,65 (m, 2H), 4,51 – 4,47 (m, 1H), 4,23 – 4,20 (m, 2H), 3,12 – 3,10 (m, 2H), 2,88 – 2,77 (m, 3H), 2,60 - 2,56 (m, 1H), 2,38 – 2,36 (m, 1H), 1,81 – 1,78 (m, 2H), 1,31 – 1,29 (m, 2H). Ácido (S)-2-((1-(6-((5-cloropiridin-2-il)metóxi)piridin-2-il)piperidin- 4-il)metil)-7-fluoro-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 232) Composto 232
[00642] Preparado de maneira análoga ao Composto 228. LCMS: [M+H]+ = 566,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,53 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,56 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,90 (dd, J = 8,4, 2,5 Hz, 1H), 7,62 (dd, J = 8,4, 6,8 Hz, 1H), 7,43 (dd, J = 15,2, 8,2 Hz, 3H), 6,32 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,99 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,67 (dd, J = 15,5, 7,4 Hz, 1H), 4,58 – 4,40 (m, 2H), 4,33 (dt, J = 9,0, 6,0 Hz, 1H), 4,12 (d, J = 13,4 Hz, 2H), 2,96 – 2,78 (m, 2H), 2,80 – 2,62 (m, 3H), 2,39 (dd, J = 17,7, 9,1 Hz, 1H), 2,23 (s, 1H), 1,71 (d, J = 11,9 Hz, 2H), 1,29 – 1,05 (m, 2H).
Ácido (S)-2-((1-(6-((5-cianopiridin-2-il)metóxi)piridin-2-il)piperidin- 4-il)metil)-7-fluoro-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 233) Composto 233
[00643] Preparado de maneira análoga ao Composto 228. LCMS: [M+H]+ = 557,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,39 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,97 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 8,27 (dd, J = 8,2, 2,1 Hz, 1H), 7,69 – 7,51 (m, 2H), 7,50 – 7,33 (m, 2H), 6,32 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,13 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 5,41 (s, 2H), 4,99 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 4,66 (dd, J = 15,3, 7,3 Hz, 1H), 4,47 (dd, J = 14,3, 10,0 Hz, 2H), 4,33 (dt, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 4,06 (d, J = 13,2 Hz, 2H), 2,94 – 2,77 (m, 2H), 2,70 (t, J = 11,0 Hz, 3H), 2,40 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 2,21 (s, 1H), 1,69 (d, J = 11,8 Hz, 2H), 1,11 (d, J = 12,5 Hz, 2H). Ácido (S)-2-((4-(6-(4-ciano-2-fluorobenzilóxi)piridin-2-il)-3- oxopiperazin-1-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-imidazo[4,5- b]piridina-5-carboxílico (Composto 234) Composto 234 DIEA, NaI, 1,4-dioxano Composto 234
Etapa 1
[00644] Uma mistura de 3-oxopiperazina-1-carboxilato de terc-butila (0,5 g, 2,50 mmols), 4-[(6-bromo-2-piridil)oximetil]-3-fluoro-benzonitrila (767 mg, 2,50 mmols), (1E, 4E)-1,5-difenilpenta-1,4-dien-3-ona paládio (229 mg, 0,249 mmol), benzil-[1-[2-[benzil(fenil)fosfanil]-1-naftil]-2- naftil]-fenil-fosfano (325 mg, 0,499 mmol), carbonato de césio (2,44 g, 7,49 mmols) em Tolueno (30 mL) foi agitada por uma hora a 100°C sob N2 até que a reação estivesse completa como indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc, e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos:EtOAc = 4:1) para dar o produto desejado terc-butil 4-[6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil)metóxi]-2- piridil]-3-oxo-piperazina-1-carboxilato (1,5 g, em bruto) como sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 427,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,95 min. Etapa 2
[00645] A uma mistura de 4-[6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil)metóxi]-2- piridil]-3-oxo-piperazina-1-carboxilato de terc-butila (400 mg, 0,938 mmol) em diclorometano (10 mL) foi adicionado ácido 2,2,2- trifluoroacético (7,40 g, 64,90 mmols, 5 mL) agitada por 0,5 h à rt em um RBF sob N2 até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi concentrada in vacuo para dar o produto desejado 3-fluoro-4-[[6-(2-oxopiperazin-1-il)-2- piridil]oximetil]benzonitrila (300 mg, em bruto) como sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 327,1; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,31 min. Etapa 3
[00646] Uma mistura de 3-fluoro-4-[[6-(2-oxopiperazin-1-il)-2-piridil] oximetil]benzonitrila (300 mg, 0,919 mmol), terc-butil 2-(clorometil)-3- [[(2S)-oxetan-2-il]metil]imidazo[4,5-b]piridina-5-carboxilato (311 mg,
0,919 mmol), N-etil-N-isopropil-propan-2-amina (475 mg, 3,68 mmol), iodossódio (14 mg, 0,092 mmol) em dioxano (20 mL) foi agitada por duas horas a 80°C em um RBF sob N2 até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi concentrada in vacuo, purificada por Prep-HPLC para dar o produto desejado terc-butil 2-[[4-[6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil)metóxi]-2-piridil]-3- oxo-piperazin-1-il]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]imidazo[4,5-b]piridina- 5-carboxilato (210 mg, 0,334 mmol, 36,4% de rendimento) como sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 628,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,85 min. Etapa 4
[00647] A uma mistura de 2-[[4-[6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil)metóxi]-2- piridil]-3-oxo-piperazin-1-il]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]imidazo[4,5- b]piridina-5-carboxilato de terc-butila (114 mg, 0,182 mmol) em diclorometano (10 mL) foi adicionado ácido 2,2,2-trifluoroacético (7,40 g, 65 mmols, 5 mL) foi agitada por 0,5 h à rt em um RBF sob N2 até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi concentrada in vacuo, purificada por Prep-HPLC para dar o produto desejado ácido 2-[[4-[6-[(4-ciano-2-fluoro- fenil)metóxi]-2-piridil]-3-oxo-piperazin-1-il]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2- il]metil]imidazo[4,5-b]piridina-5-carboxílico (33 mg, 0,057 mmol, 31,3% de rendimento) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 572,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,36 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-D6) δ 8,12 – 8,10 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,99 – 7,97 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,90 – 7,88 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 7,78 – 7,70 (m, 3H), 7,59 – 7,57 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,74 – 6,72 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,45 (s, 2H), 5,16 – 5,13 (m, 1H), 4,83 – 4,78 (m, 1H), 4,69 – 4,65 (m, 1H), 4,49 – 4,44 (m, 1H), 4,38 – 4,33 (m, 1H), 4,15 – 4,03 (m, 2H), 3,85 – 3,82 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,50 – 3,40 (m, 2H), 2,95 – 2,92 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,70 – 2,65 (m, 1H), 2,47 – 2,44 (m, 1H).
Ácido (S)-2-((6-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-3',3'-dimetil-3',6'-di- hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 235) Composto 235 dioxano, H2O dioxano 90ºC, 2 h 90ºC, 2 h Composto 235 Etapa 1
[00648] Uma mistura de lítio bis (trimetilsilil) amida (1 M, 14,25 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de terc-butil 3,3-dimetil-4- oxo-piperidina-1-carboxilato (3 g, 13,20 mmols) em THF (30 mL), mantendo a temperatura de reação abaixo de -60°C. Após a adição estar completa, a mistura de reação foi agitada a -65°C por 1,5 h e, em seguida, uma solução de 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometil-sulfonil) metanossulfonamida (5,09 g, 14,25 mmols) em 5 mL de tetra- hidrofurano foi adicionada gota a gota ao longo de 10 minutos. A reação de mistura mostrou-se marrom escuro. A solução foi deixada aquecer até 0°C e r.t. e foi agitada durante a noite. A mistura de reação foi extinta com NH4Cl aquoso Sat., extraída com EA (3x60 mL), lavada com salmoura (1x50 mL), seca e concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi submetido a cromatografia de alumina neutra, eluindo com hexanos:acetato de etila (5:1) para dar o produto desejado terc-butil 3, 3-dimetil-4-(trifluorometilsulfonilóxi)-2,6-di- hidropiridina-1-carboxilato (2,55 g, 7,10 mmols, 53,8% de rendimento) como um óleo amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 304,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,26 minutos. Etapa 2
[00649] Uma mistura de 3, 3-dimetil-4-(trifluorometilsulfonilóxi)-2,6- di-hidropiridina-1-carboxilato de terc-butila (500 mg, 1,39 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,3,2- dioxaborolano (530 mg, 2,09 mmols), Pd(dppf)2Cl2 (101 mg, 0,139 mmol) e KOAc (273 mg, 2,78 mmols) em dioxano (9 mL) foi agitada por duas horas a 90°C em um RBF sob N2 até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi usada diretamente na próxima etapa sem purificação adicional. Etapa 3
[00650] Uma mistura de 3, 3-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-2, 6-di-hidropiridina-1-carboxilato de terc-butila (70 mg, 0,208 mmol), 4-[(6-bromo-2-piridil) oximetil]-3-fluoro-benzonitrila (70 mg, 0,228 mmol), Cs2CO3 (6 mg, 0,090 mmol) e Pd(dppf)2Cl2 (15 mg, 0,021 mmol) em dioxano (6 mL) foi agitada por duas horas a 90°C sob argônio até que a reação estivesse completa como indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos:EtOAc = 10:1) para dar o produto desejado terc-butil 4-[6-[(4-ciano-2-fluoro- fenil)metóxi]-2-piridil]-3,3-dimetil-2,6-di-hidropiridina-1-carboxilato (20 mg, 0,046 mmol, 22% de rendimento) como um óleo marrom. LCMS: [M+H]+ = 438,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,37 min.
Etapa 4
[00651] A uma mistura de 4-[6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil) metóxi]-2- piridil]-3,3-dimetil-2,6-di-hidropiridina-1-carboxilato de terc-butila (20 mg, 0,046 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado gota a gota TFA (1,48 g, 12,98 mmols, 1 mL) à rt e agitado por uma hora à rt em um RBF até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos: EtOAc = 20:1) para dar o produto desejado 4-[[6-(3,3-dimetil-2,6-di-hidro-1H-piridin-4- il)-2-piridil]oximetil]-3-fluoro-benzonitrila (16 mg, 0,036 mmol, 77,7% de rendimento, TF) como um óleo amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 338,3; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,40 min. Etapa 5
[00652] Uma mistura de 4-[[6-(3, 3-dimetil-2, 6-di-hidro-1H-piridin-4- il)-2-piridil] oximetil]-3-fluoro-benzonitrila (16 mg, 0,035 mmol, TF), terc- butil 2-(clorometil)-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5-carboxilato (12 mg, 0,035 mmol) e DIPEA (23 mg, 0,177 mmol) em dioxano (3 mL) foi agitada por uma hora a 90°C até que a reação estivesse completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc, e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos:EtOAc = 20:1) para dar o produto desejado terc-butil 2- [[4-[6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil) metóxi]-2-piridil]-3,3-dimetil-2,6-di- hidropiridin-1-il]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2-il] metil] benzimidazol-5- carboxilato (7 mg, 0,011 mmol, 29,9% de rendimento, 96,6 % de pureza) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 638,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,92 min.
Etapa 6
[00653] A uma mistura de 2-[[4-[6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil) metóxi]-2- piridil]-3, 3-dimetil-2, 6-di-hidropiridin-1-il] metil]-3-[[(2S)-oxetan-2-il] metil] benzimidazol-5-carboxilato de terc-butila (7 mg, 0,011 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado gota a gota TFA (1,18 g, 10,38 mmols), 0,8 mL) à rt e foi agitado por uma hora à rt até que a reação estivesse completa como indicado por LCMS, a mistura de reação foi concentrada in vacuo, purificada por prep-HPLC (10 mM NH4HCO3) para dar o produto desejado ácido (S)-2-((6-((4-ciano-2- fluorobenzilóxi)-3',3'-dimetil-3',6'-di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)- 1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (1,5 mg, 0,003 mmol, 23,2% de rendimento, 98,9% de pureza) como um sólido branco pálido. LCMS: [M+H]+ = 582,3; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,37 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,26 (br s, 1H), 7,89 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,71-7,63 (m, 3H), 7,60 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 8 Hz, 1H), 5,93-5,91 (m, 1H), 5,48 (s, 2H), 5,07-5,04 (m, 1H), 4,89-4,86 (m, 1H), 4,72-4,69 (m, 1H), 4,49-4,45 (m, 1H), 4,40-4,36 (m, 1H), 4,07 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,10-3,02 (m, 2H), 2,69-2,65 (m, 1H), 2,35-2,32 (m, 1H), 2,02-1,95 (m, 2H), 1,06 (s, 3H), 0,99 (s, 3H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-4-fluorofenil)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-imidazo[4,5- b]piridina-5-carboxílico (Composto 236) Composto 236
[00654] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 581,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,57 min.
H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,08 (d, J=8 Hz, 1H), 7,96 (d, J=8 Hz, 1H), 7,59 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,49 (dd, J = 2, 10 Hz, 1H), 7,36-7,31 (m, 2H), 7,19-7,14 (m, 1H), 7,03-6,99 (m, 1H), 6,17 (s, 1H), 5,23 (s, 2H), 5,15-5,13 (m, 1H), 4,84- 4,79 (m, 1H), 4,72-4,68 (m, 1H), 4,48-4,44 (m, 1H), 4,36-4,33 (m, 1H), 4,12-43,99 (m, 2H), 3,22-3,16 (m, 3H), 2,77-2,74 (m, 2H), 2,67-2,66 (m, 1H), 2,49-2,43 (m, 2H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)fenil)-3,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-7-fluoro-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 237) Composto 237
[00655] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 580,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,62 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 7,61 (dt, J = 16,2, 8,3 Hz, 2H), 7,50 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1H), 7,44 (d,J = 8,5 Hz, 1H), 7,34 (dd, J = 8,3, 1,8 Hz, 1H), 7,26 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 6,93 –6,89 (m, 1H), 6,19 (s, 1H), 5,14 (s, 2H), 5,07 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,87 (dd, J = 15,2, 7,4 Hz, 1H), 4,72– 4,64 (m, 1H), 4,48 (dd, J = 14,6, 6,6 Hz, 1H), 4,37 (dt, J = 8,9, 6,0 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 13,5 Hz, 1H),3,91 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,24 - 3,10 (m,3H), 2,78 -2,68 (m, 3H), 2,45 – 2,68 (m,2H).
Ácido (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)-4-fluorofenil)-3,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-7-fluoro-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 238) Composto 238
[00656] Preparado de maneira análoga ao Composto 28 LCMS: [M+H]+ = 599,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,53 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 7,61 (dt, J = 11,6, 7,6 Hz, 2H), 7,51 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1H), 7,45 (d,J = 8,5 Hz, 1H), 7,37 – 7,31 (m, 2H), 7,17 (dd, J = 11,2, 8,5 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,17 (s,1H), 5,24 (s, 2H), 5,08 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,87 (dd, J = 15,0, 7,4 Hz, 1H), 4,69 (d, J = 12,5 Hz, 1H),4,49 (dd, J = 14,2, 7,2 Hz, 1H), 4,37 (dt, J = 12,0, 6,0 Hz, 1H), 4,06 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,92 (d, J =13,5 Hz, 1H), 3,21 (s, 3H), 2,72 (dd, J = 18,0, 6,3 Hz, 3H), 2,38 (d, J = 36,7 Hz, 2H). Ácido (S)-2-((4-(3-((4-cloro-2-fluorobenzil)óxi)fenil)piperidin-1- il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 239) Composto 239
HCl in dioxano dioxano, 90ºC, 16h Etapa 1
[00657] Uma mistura de 4-[3-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]fenil]-3,6- di-hidro-2H-piridina-1-carboxilato de terc-butila (160 mg, 0,383 mmol) em acetato de etila (2,5 mL) e, em seguida, PtO2 (16 mg) foi adicionado à mistura foi agitada à rt por duas horas sob proteção de H2. LC-MS mostrou que o material de partida foi consumido e o produto desejado foi detectado. Em seguida, a mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi dissolvido com EtOAc e extraído com água, lavado com salmoura, depois seco e evaporado para dar o produto terc-butil 4-[3-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]fenil]piperidina-1- carboxilato (155 mg, 0,369 mmol, 96,4% de rendimento). LCMS: [M+H]+ = 366,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,51 minutos. Etapa 2
[00658] Uma mistura de 4-[3-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]fenil] piperidina-1-carboxilato de terc-butila (220 mg, 0,524 mmol) em Cloro (20 mL), dioxano (10 mL) foi agitada à rt por uma hora sob proteção de N2. LC-MS mostrou que o material de partida foi consumido e o produto desejado foi detectado. Em seguida, o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar 4-[3-[(4-cloro-2-fluoro- fenil)metóxi]fenil]piperidina (167 mg, 0,433 mmol, 82,7% de rendimento). LCMS: [M+H]+ = 320,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,78 min. Etapa 3
[00659] Uma mistura de 4-[3-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]
fenil]piperidina (167 mg, 0,522 mmol), metil 2-(clorometil)-3-[[(2S)- oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5-carboxilato (154 mg, 0,522 mmol), N- etil-N-isopropil-propan-2-amina (675 mg, 5,22 mmols), iodossódio (8 mg, 0,052 mmol) em dioxano (10 mL) foi agitada a 90°C por 16 horas sob proteção de N2. LC-MS mostrou que o material de partida foi consumido e o produto desejado foi detectado. Em seguida, o resíduo foi dissolvido com EtOAc e lavado com NH4Cl e salmoura aq. saturada, seco e evaporado para dar metil 2-[[4-[3-[(4-cloro-2-fluoro- fenil)metóxi]fenil]-1-piperidil]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]ben- zimidazol-5-carboxilato (200 mg, 0,301 mmol, 57,6% de rendimento). LCMS: [M+H]+ = 578,1; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,88 min. Etapa 4
[00660] Uma mistura de 2-[[4-[3-[(4-cloro-2-fluoro-fenil)metóxi]fenil]- 1-piperidil]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5-carboxilato de metila (383 mg, 0,576 mmol), hidróxido de lítio hidratado (121 mg, 2,88 mmols) em metanol (1 mL), THF (1 mL), Água (1 mL) foi agitada à rt por uma hora sob proteção N2. LC-MS mostrou que o material de partida foi consumido e o produto desejado foi detectado. Em seguida, o resíduo foi purificado por perp-HPLC para dar ácido 2-[[4-[3-[(4-cloro- 2-fluoro-fenil)metóxi]fenil]-1-piperidil]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil] benzimidazol-5-carboxílico (50 mg, 0,089 mmol, 15,5% de rendimento). LCMS: [M+H]+ = 564,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,63 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26 (d, J=0,8Hz, 1H), 7,79(dd, J=8,4,6,8Hz, 1H), 7,64-7,56 (m,2H), 7,49 (dd,J=10,8 Hz,1H), 7,33 (dd,J=8,6,4Hz,1H), 7,21 (t,J=8 Hz, 1H), 6,88-6,82 (m, 3H), 5,10- 5,08(m, 3H), 4,83-4,78(m,1H), 4,65(dd, J = 15,6,12,4 Hz,1H), 4,52-4,47 (m, 1H), 4,40-4,35(m, 1H), 3,94 (d, J=13,6 Hz, 1H), 3,78 (d,J=13,6 Hz, 1H), 3,00 (d, J=10,4 Hz, 1H), 2,86 (d, J=5,2 Hz, 1H), 2,73-2,67 (m,1H), 2,49-2,40 (m, 2H), 2,25-2,13 (m,2H), 1,77-1,57 (m,4H).
Ácido (S)-2-((6'-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-3,6-di-hidro-2H-[1,2'- bipiridin]-4-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 240) Composto 240 Tolueno, 125ºC, 16h Tolueno, 90ºC, 16h Composto 240 Etapa 1
[00661] A uma solução de piperidin-4-ona (2 g, 20,18 mmols), 2- bromo-6-fluoro-piridina (3,55 g, 20,18 mmols) em DMSO (20 mL) foi adicionado K2CO3 (6,97 g, 50,44 mmols) sob N2, a mistura foi agitada a 120°C por 16 horas. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (20 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados para dar o produto em bruto, que foi purificado por coluna de cromatografia em sílica gel (eluindo com PE:EA = 10:1) para dar 1-(6-bromo-2-piridil)piperidin-4-ona (1,5 g, rendimento de 26,1%) como sólido amarelo. LCMS: [M+H]+ = 255,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,62 min.
Etapa 2
[00662] A uma solução de 1-(6-bromo-2-piridil)piperidin-4-ona (1,5 g, 5,88 mmols) em tolueno (20 mL) foi adicionado ácido 2-cianoacético (500 mg, 5,88 mmols). A mistura foi agitada a 125°C por 16 horas sob N2. A solução foi diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etila (20 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados para dar produto em bruto, que foi purificado por coluna de cromatografia em sílica gel (eluindo com PE:EA = 10:1) para dar 2-[1-(6-bromo-2-piridil)- 3,6-di-hidro-2H-piridin-4-il]acetonitrila (0,8 g, 36,8% de rendimento) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 278,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,76 min. Etapa 3
[00663] Uma mistura de 2-[1-(6-bromo-2-piridil)-3,6-di-hidro-2H- piridin-4-il]acetonitrila (800 mg, 2,88 mmols) em HCl (10 mL) foi agitada a 100°C por duas horas sob N2. LCMS mostrou que a reação estava concluída, a mistura foi resfriada até 25°C, a mistura foi diluída com NaHCO3 aq. saturado até o pH ser ajustado para 5 e extraída com DCM (50 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados para dar produto em bruto, que foi purificado por coluna de cromatografia em sílica gel (eluindo com PE:EA = 8:1) para dar ácido 2-[1-(6-bromo-2- piridil)-3,6-di-hidro-2H-piridin-4-il]acético (230 mg, rendimento de 26,9%) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 297,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,64 min. Etapa 4
[00664] À solução de ácido 2-[1-(6-bromo-2-piridil)-3,6-di-hidro-2H- piridin-4-il]acético (229 mg, 0,771 mmol, 1,0 eq) em DCM (10 mL) foi adicionado terc-butil 4-amino-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metilamino]benzoato (215 mg, 0,771 mmol, a síntese é divulgada no pedido internacional
WO/2018/109607, que é incorporado aqui por referência), HATU (589 mg, 1,54 mmol) e DIPEA (299 mg, 2,31 mmols) a 0°C, a mistura de reação foi agitada a 25°C por duas horas. A solução foi diluída com solução saturada de cloreto de amônio (20 mL) e extraída com DCM (20 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados para dar o produto em bruto, que foi purificado por coluna de cromatografia em sílica gel (eluindo com PE:EA = 2:1) para dar terc-butil 4-[[2-[1-(6-bromo-2- piridil)-3,6-di-hidro-2H-piridin-4-il]acetil]amino]-3-[[(2S)-oxetan-2-il] metilamino]benzoato (220 mg, 46,5% de rendimento) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 557,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 2,16 minutos. Etapa 5
[00665] Uma mistura de 4-[[2-[1-(6-bromo-2-piridil)-3,6-di-hidro-2H- piridin-4-il]acetil]amino]-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metilamino]benzoato de terc-butila (220 mg, 0,395 mmol) em ácido acético (10 mL) sob N2 foi agitada a 60°C por uma hora. LCMS mostrou que a reação foi concluída. A mistura foi resfriada até 25°C, diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etila (20 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados para dar terc-butil 2-[[1-(6-bromo-2-piridil)-3,6-di-hidro- 2H-piridin-4-il]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5- carboxilato (200 mg, 93,9% de rendimento) como óleo amarelo. LCMS: [M+H]+ = 539,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,67 min. Etapa 6
[00666] Uma mistura de 2-[[1-(6-bromo-2-piridil)-3,6-di-hidro-2H- piridin-4-il]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5-carboxilato de terc-butila (80 mg, 148 mmols), 3-fluoro-4-(hidroximetil)benzonitrila (27 mg, 0,178 mmol), Pd2(dba)3 (14 mg, 15 mmols), JohnPhos (9 mg, 0,030 mmol, 0,2 eq) e Cs2CO3 (77 mg, 0,237 mmol) em dioxano
(6 mL) foi agitada a 90°C por 16 horas sob N2, LCMS mostrou que a reação foi concluída, a mistura foi resfriada até 25°C, a mistura foi diluída com acetato de etila (20 mL), filtrada através de uma almofada de celite, o filtrado foi concentrado para dar o produto em bruto, que foi purificado por Prep-HPLC para dar o produto desejado terc-butil 2-[[1- [6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil)metóxi]-2-piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-4- il]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzimidazol-5-carboxilato (110 mg, em bruto) como sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 610,2; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,75 min. Etapa 7
[00667] A uma solução de 2-[[1-[6-[(4-ciano-2-fluoro-fenil)metóxi]-2- piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-4-il]metil]-3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]benzi- midazol-5-carboxilato de terc-butila (110 mg, 0,180 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado TFA (1 mL), a mistura foi agitada a 90°C por uma hora. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (20 mL×3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL×3), secos sobre Na2SO4 e concentrados para dar produto em bruto, que foi purificado por HPLC Prep para dar o produto desejado ácido (S)-2-((6'-((4-ciano-2-fluorobenzil)óxi)-3,6-di- hidro-2H-[1,2'-bipiridin]-4-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (5,6 mg, 5,6% de rendimento) como sólido branco. LCMS: [M+H]+ = 554,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,56 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,22 – 8,20 (brs, 1H), 7,91 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,80 (dd, J = 8,5, 1,5 Hz, 1H), 7,73 – 7,70 (m, 1H), 7,69 – 7,64 (m, 2H), 7,50 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,65 – 6,59 (m, 1H), 6,44 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,12 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,45 (s, 2H), 5,04 – 4,97 (m, 1H), 4,69 (dd, J = 15,5, 6,8 Hz, 1H), 4,60 – 4,53 (m, 1H), 4,48 – 4,42 (m, 1H), 4,30 (dt, J = 9,1, 6,0 Hz, 1H), 3,68 – 3,58 (m, 4H), 3,31 – 3,29 (m, 2H), 3,17 – 3,08 (m, 2H), 2,70 – 2,65 (m, 1H), 2,35 – 2,31 (m, 1H).
Ácido (S)-2-((6-((1-metil-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metóxi)-3 ',6'-di- hidro-[2,4'-bipiridina]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 241) Composto 241
[00668] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 566,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,32 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,28 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,82 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,68 (s, 3H), 7,62 (d,J = 8,2 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,73 (d, J = 8,1 Hz,1H), 5,49 (s, 2H), 5,07 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,84 – 4,77 (m, 1H), 4,66 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 4,49 – 4,43(m, 1H), 4,36 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 4,20 - 3,95 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 2,75 – 2,65 (m, 2H), 2,63 – 2,55 (m, 2H), 2,46 – 2,30 (m, 4H). Ácido (S)-1-(oxetan-2-ilmetil)-2-((6-((4-(piridin-3-il)benzil)óxi)-3,6'- di-hidro-[2,4'-bipiridin]-1'(2'H)-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6- carboxílico (Composto 242) Composto 241
[00669] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 598,2; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,39 min. 1 H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,95 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 8,64 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 8,43 (d, J = 8,1 Hz,1H), 8,34 (s, 1H), 8,04 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1H), 7,83 – 7,71 (m, 5H), 7,65 – 7,59 (m, 2H), 7,17 (d, J =14,4 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 6,77 (s, 1H), 5,50 (s, 2H), 5,22 – 5,17 (m, 1H),
4,94 (s, 2H),4,76 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 4,69 – 4,59 (m, 2H), 4,44 - 4,33 (m, 1H), 4,22 (s, 2H), 3,79 (d, J = 4,8 Hz,2H), 3,02 (s, 2H), 2,85 – 2,70 (m, 1H), 2,52 – 2,39 (m, 1H). Ácido (S)-2-((6-((4-(2H-1,2,3-triazol-2-il)benzil)óxi)-3',6'-di-hidro- [2,4'-bipiridina]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H- benzo[d]imidazol-6-carboxílico (Composto 243) Composto 243 dioxano, H2O 100ºC, 1 h Composto 243 Etapa 1
[00670] Uma mistura de N1,N2-dimetilciclo-hexano-1,2-diamina (163 mg, 1,14 mmol), metil 4-iodobenzoato (3,0 g, 11,45 mmols), 2H- triazol (1,19 g, 17,17 mmols), iodocobre (218 mg, 1,14 mmol), carbonato de césio (5,60 g, 17,17 mmols) em DMF (30 mL) foi agitada por 16 horas a 120°C sob N2, até que a reação estivesse completa conforme indicado por TLC, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados em vácuo e purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos:EtOAc = 10:1) para dar o produto desejado metil 4-(triazol-2- il)benzoato (720 mg, 3,54 mmols, 31,0% de rendimento) e produto secundário metil 4-(triazol-1-il)benzoato (430 mg, 2,12 mmols, 18,5% de rendimento) como sólido amarelo pálido. Etapa 2
[00671] Uma mistura de 4-(triazol-2-il)benzoato de metila (200 mg, 0,984 mmol), hidreto de lítio alumínio (37 mg, 0,984 mmol) em THF (10 mL) foi agitada por duas horas a 30°C sob N2, até a reação estar completa conforme indicado por TLC, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo e purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos:EtOAc = 10:1) para dar o produto desejado [4-(triazol-2-il)fenil]metanol (150 mg, 0,856 mmol, 87,0% de rendimento) como sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 176; Tempo de retenção (0,01% NH4HCO3) = 1,15 min. Etapa 3
[00672] Uma mistura de 2-bromo-6-fluoro-piridina (151 mg, 0,856 mmol), [4-(triazol-2-il)fenil]metanol (150 mg, 0,856 mmol) e hidreto de sódio (20 mg, 0,856 mmol) em THF (10 mL) foi agitada por 2 a 30°C em um RBF sob N2, até a reação estar completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados em vácuo, purificados por cromatografia de sílica gel (Hexanos:EtOAc = 20:1) para dar o produto desejado 2-bromo-6-[[4-(triazol-2-il)fenil] metóxi]piridina (170 mg, 0,513 mmol, rendimento de 60,0%) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 176,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,40 min. Etapa 4
[00673] Uma mistura de 3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]-2-[[4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil] benzimidazol-5-carboxilato de metila (148 mg, 0,317 mmol), 2-bromo- 6-[[4-(triazol-2-il)fenil]metóxi]piridina (105 mg, 0,317 mmol) e carbonato de sódio (101 mg, 0,951 mmol) em água (4 mL) e dioxano (15 mL) foi agitada por duas horas a 100°C sob N2 até a reação estar completa como indicado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite com EtOAc e os orgânicos combinados foram concentrados in vacuo, purificados por cromatografia de sílica gel (DCM:MeOH = 20:1) para dar o produto desejado metil 3-[[(2S)- oxetan-2-il]metil]-2-[[4-[6-[[4-(triazol-2-il)fenil]metóxi]-2-piridil]-3,6-di- hidro-2H-piridin-1-il]metil]benzimidazol-5-carboxilato (160 mg, 0,270 mmol, 85,3% de rendimento) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 592,0; Tempo de retenção (0,01% NH4HCO3) = 1,77 min. Etapa 5
[00674] Uma mistura de 3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]-2-[[4-[6-[[4- (triazol-2-il)fenil]metóxi]-2-piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]benzi- midazol-5-carboxilato de metila (160 mg, 0,270 mmol), hidróxido de lítio hidratado (11 mg, 0,270 mmol) em Metanol (1 mL) e Água (1 mL) foi agitada por duas horas a 20°C em um RBF sob N2 até a reação estar completa conforme indicado por LCMS, a mistura de reação foi ajustada para pH=2 com Hcl aq. purificada por HPLC Prep para dar o produto desejado ácido 3-[[(2S)-oxetan-2-il]metil]-2-[[4-[6-[[4-(triazol-2- il)fenil]metóxi]-2-piridil]-3,6-di-hidro-2H-piridin-1-il]metil]benzimidazol-5- carboxílico (68 mg, 0,118 mmol, rendimento de 43,5%) como um sólido amarelo pálido. LCMS: [M+H]+ = 578,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,54 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,25 (s, 1H), 8,11 (s, 2H), 8,01 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,74 – 7,57 (m, 4H), 7,08 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 5,44 (s, 2H), 5,06 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 4,71 (dd, J = 51,6, 10,1 Hz, 3H), 4,40 (dd, J = 42,7, 7,6 Hz, 3H), 3,99 (dd, J = 60,9, 13,5 Hz, 4H), 3,25 (s, 7H), 2,75 (s, 2H), 2,70 – 2,58 (m, 2H), 2,40 (d, J = 7,8 Hz, 2H).
Ácido (S)-2-((6-((4-(1H-1,2,3-triazol-1-il)benzil)óxi)-3',6'-di-hidro- [2,4'-bipiridina]-1'(2'H)-il)metil)-1-(oxetan-2-ilmetil)-1H-benzo[d]imi- dazol-6-carboxílico (Composto 244) Composto 244
[00675] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 578,0; Tempo de retenção (0,01% TFA) = 1,29 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,81 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,01 – 7,86 (m, 4H), 7,81 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,73 – 7,58 (m, 5H), 7,08 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 5,46 (s, 2H), 5,06 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 4,79 (dd, J = 15,1, 7,4 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 4,45 (s, 2H), 4,05 (s, 1H), 3,94 (s, 1H), 2,71 (d, J = 32,8 Hz, 4H), 2,40 (d, J = 8,5 Hz, 3H). Ácido (S)-2-((4-(6-(4-(1H-imidazol-1-il)benzilóxi)piridin-2-il)-5,6-di- hidropiridin-1(2H)-il)metil)-3-(oxetan-2-ilmetil)-3H-imidazo[4,5-b] piridina-5-carboxílico (Composto 245) Composto 245
[00676] Preparado de maneira análoga ao Composto 19 LCMS: [M+H]+ = 579,0; Tempo de retenção (NH4HCO3 10 mM) = 1,40 min. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26 – 8,23 (brs, 1H), 8,12 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,75 – 7,73 (m, 1H), 7,71 – 7,63 (m, 3H),
7,60 – 7,56 (m, 2H), 7,11 – 7,07 (m, 2H), 6,80 – 6,76 (m, 1H), 6,74 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,42 (s, 2H), 5,16 – 5,10 (m, 1H), 4,83 (dd, J = 14,7, 6,6 Hz, 1H), 4,70 (dd, J = 14,6, 4,0 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 14,1, 7,1 Hz, 1H), 4,35 (dt, J = 8,9, 6,0 Hz, 1H), 4,13 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 4,03 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,30 – 3,25 (m, 4H), 2,79 – 2,73 (m, 2H), 2,69 – 2,62 (m, 1H), 2,57 – 2,54 (m, 1H).

Claims (40)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto representado pela fórmula estrutural (I): (I), ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: indica uma ligação simples ou uma ligação dupla; X1, X2, X3, X4 e X5 são, cada um, independentemente selecionados de N e CH; em que não mais que três de X1, X2, X3, X4 e X5 são N e em que o anel A não contém 3 átomos de anel de nitrogênio em 3 posições contíguas; W é selecionado de O, S, CR5R6 e NR5'; Y1, Y3, Y4 e Y5 são, cada um, independentemente selecionados de N, NH, CH e CH2; Y2 e Y6 são, cada um, independentemente selecionados de N, C ou CH; em que não há mais que 3 átomos de anel de nitrogênio no anel B e em que o anel B não contém 3 átomos de anel de nitrogênio em 3 posições contíguas; Z1 e Z2 são cada um independentemente selecionados de N, C e CH; em que pelo menos um de Z1 e Z2 é N; Z3 e Z4 são cada um independentemente selecionados de uma ligação, CH, CH2, CH=CH, CH2CH2, CH2CH e CHCH2; em que o anel C contém não mais que duas ligações duplas; desde que quando o anel B é , então, (1) W não é
O, e/ou (2) o anel C não é , e/ou (3) o anel C não é em que Z1 é N e/ou (4) o anel A não é fenil; em que: T2, T3 e T4 são cada um selecionados independentemente de N, NR4, O, S, C, e CR4; T6, T7 e T8 são, cada um, independentemente selecionados de N e CR4; em que não mais que 4 de T2, T3, T4, T6, T7 e T8 são selecionados de N, O e S; EE é –COOH ou um substituto do grupo carboxílico, opcionalmente, o substituto do grupo carboxílico é:
ou
; Ra é seleccionado de hidrogênio, deutério, halogênio, -CN, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', aril de 6-10 membros, heteroaril de 5-8 membros, cicloalquil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado e heterociclil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado, em que o C1-C6 alquila ou C1-C6 alcóxi representado por Ra é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, e C3-C6 cicloalquil saturado ou parcialmente saturado; e em que o arila, heteroarila, cicloalquil saturado ou parcialmente saturado, ou heterociclil saturado ou parcialmente saturado representado por Ra ou no grupo representado por Ra é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, C1-C3 alquil (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3), e C1-C3 alcóxi (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3), e NR5'R6'; Rb é selecionado de hidrogênio, deutério, halogênio, -CN, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', aril de 6-10 membros, heteroaril de 5-8 membros, cicloalquil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado e heterociclil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado, em que o C1-C6 alquila ou C1-C6 alcóxi representado por Rb é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, e C3-C6 cicloalquil saturado ou parcialmente saturado; e em que o arila, heteroarila, cicloalquil saturado ou parcialmente saturado, ou heterociclil saturado ou parcialmente saturado representado por Rb ou no grupo representado por Rb é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, C1-C3 alquil (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3) e C1-C3 alcóxi (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3), e NR5'R6'; Rc é seleccionado de hidrogênio, deutério, de halogênio, -CN, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', aril de 6-10 membros, heteroaril de 5-8 membros, cicloalquil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado e heterociclil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado, em que o C1-C6 alquila ou C1-C6 alcóxi representado por Rc é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH e cicloalquil C3-C6 saturado ou parcialmente saturado; e em que o arila, heteroarila, cicloalquil saturado ou parcialmente saturado, ou heterociclil saturado ou parcialmente saturado representado por Rc ou no grupo representado por Rc é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN e NR5'R6'; Rd é seleccionado de hidrogênio, deutério, de halogênio, -CN, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', aril de 6-10 membros, heteroaril de 5-8 membros, cicloalquil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado e heterociclil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado, em que o C1-C6 alquila ou C1-C6 alcóxi representado por Rd é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN e C3-C6 cicloalquil saturado ou parcialmente saturado; e em que o arila, heteroarila, cicloalquil saturado ou parcialmente saturado, ou heterociclil saturado ou parcialmente saturado representado por Rd ou no grupo representado por Rd é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN e NR5'R6'; cada R1 é independentemente selecionado de halogênio, -CN, OH, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alquenila, C1-C6 alquinila, NR5'R6', aril de 6-10 membros, heteroaril de 5-8 membros, cicloalquil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado e heterociclil de 3- 8 membros saturado ou parcialmente saturado, em que o C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alquenila ou C1-C6 alquinil representado por R1 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3 e C3-C6 cicloalquil saturado ou parcialmente saturado (opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3); e em que o arila, heteroarila, cicloalquil saturado ou parcialmente saturado, ou heterociclil saturado ou parcialmente saturado representado por R1 ou no grupo representado por R1 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, C1-C3 alquil (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3), e C1-C3 alcóxi (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3) e NR5'R6'; cada R2 é independentemente selecionado de halogênio, -CN, OH, oxo, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', aril de 6-10 membros, heteroaril de 5-8 membros, cicloalquil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado e heterociclil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado, em que o C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi representado por R2 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3 e C3-C6 cicloalquil saturado ou parcialmente saturado (opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3); e em que o arila, heteroarila, cicloalquil saturado ou parcialmente saturado, ou heterociclil saturado ou parcialmente saturado representado por R2 ou no grupo representado por R2 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, C1-C3 alquil (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3), e C1-C3 alcóxi (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3) e NR5'R6'; cada R3 é independentemente selecionado de halogênio, -CN, OH, oxo, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', aril de 6-10 membros, heteroaril de 5-8 membros, cicloalquil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado e heterociclil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado, em que o C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi representado por R3 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3 e C3-C6 cicloalquil saturado ou parcialmente saturado
(opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3); e em que o arila, heteroarila, cicloalquil saturado ou parcialmente saturado, ou heterociclil saturado ou parcialmente saturado representado por R3 ou no grupo representado por R3 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, C1-C3 alquil (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3), e C1-C3 alcóxi (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3) e NR5'R6'; cada R4 é H, deutério, halogênio, OH, -CN, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, ou NR5'R6', em que o C1-C6 alquila e C1-C6 alcóxi representado por R4 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3 e C3-C6 cicloalquil saturado ou parcialmente saturado (opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3); R5 e R6 são cada um independentemente selecionados de hidrogênio, deutério, halogênio, -CN, OH, oxo, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', aril de 6-10 membros, heteroaril de 5-8 membros, cicloalquil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado e heterociclil de 3-8 membros saturado ou parcialmente saturado, em que o C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alquenila ou C1-C6 alquinil representado por R5 ou R6 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3 e C3-C6 cicloalquil saturado ou parcialmente saturado (opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3); e em que o arila, heteroarila, cicloalquil saturado ou parcialmente saturado, ou heterociclil saturado ou parcialmente saturado representado por R5 ou R6 ou no grupo representado por R5 ou R6 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, C1- C3 alquil (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3), e C1-C3 alcóxi (opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos selecionados de F, OH e OCH3) e NR5'R6'; R5' e R6' são cada um independentemente selecionados de hidrogênio, deutério e C1-C6 alquil; em que opcionalmente dois R1; dois R2; dois R3; dois R4; R1 e R2; R2 e R3; Ra e R1; Ra e R2; R1 e qualquer de R5, R5' (no grupo representado por W) ou R6; Ra e qualquer de R5, R5' (no grupo representado por W) ou R6; R2 e qualquer um de R5, R5' (no grupo representado por W) ou R6; R5 e R6; qualquer de dois grupos selecionados de Rc, Rd, Re e Rf; ou R4 e qualquer um de Rc, Rd, Re e Rf; tomados juntos com seu respectivo carbono interveniente ou heteroátomo(s) formam fenila, heteroaril de 5-6 membros, cicloalquil de 4-8 membros saturado ou parcialmente saturado ou heterociclil de 4- 8 membros saturado ou parcialmente saturado, cada um dos quais é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, -CN, -OH, CF3, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, -NH2, -NHC1-C6 alquila, –N(C1-C6 alquila)2, oxo, e C3-C6 cicloalquil saturado ou parcialmente saturado, em que o C1-C6 alquila e C1-C6 alcóxi são opcionalmente substituídos por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3 e C3-C6 cicloalquil saturado ou parcialmente saturado, em que o cicloalquil é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, OH, OCH3, OCH2CH3; m é um inteiro selecionado de 0, 1, 2, 3 e 4, n é um inteiro selecionado de 0, 1, 2, 3, 4 e 5, e o é um inteiro selecionado de 0, 1, 2, 3, 4 e 5.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é representado pela fórmula estrutural (II-A):
(II-A), ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Rd é H, F, CH3 ou CF3.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o composto é representado pela fórmula estrutural (III-A): (III-A), ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuti- camente aceitável do mesmo, em que T2 é N e T4 é N ou CR4, em que R4 é H, halogênio, OH, CN, C1-C3 alquila, C1-C3 haloalquilo ou C1-C3 alcóxi; ou T2 é C, e T4 é NR4, em que R4 é H, C1-C 3 alquila, C1-C3 haloalquila.
4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o composto é representado pela fórmula estrutural (IV-A):
(IV-A), ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que T4 é N ou CH; e Ra é H, CH3 ou CF3; ou Ra, R1 e X5, tomados juntos com seus respectivos carbonos intervenientes formam cicloalquenil de 5-7 membros ou mono-heterociclil parcialmente saturado de 5-7 membros.
5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que Rb é , em que Rb é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados de oxo, CN, F, Cl, C1-C3 alquila e C1-C3 alcóxi, em que o C1-C3 alquila ou C1-C3 alcóxi no grupo representado por Rb é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados de F, OH e OCH3.
6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que Rb é ou , em que Rb é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados de halogênio, OH, NR5'R6', C1-C3 alquila e C1-C3 alcóxi, em que o C1-C3 alquila ou C1-C3 alcóxi no grupo representado por Rb é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos seleccionados de F, OH, e OCH3.
7. Composto, de acordo com a reivindicação 4, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é ou .
8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é , em que
R3 é halogênio, CN, OH, oxo, C1-C4 alquila, C1-C4 haloalquila, C1-C4 alcóxi, ou NNR5'R6'; e o é um inteiro selecionado de 0, 1, 2 e 3.
9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é .
10. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é , cada um dos quais é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados de halogênio, CN e oxo; ou dois grupos R3 tomados juntos com o anel C formam (C5-C8)heterocicleno em ponte ou (C5-C8) cicloalquileno em ponte.
11. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é
, em que R3 é halogêneo, CN, oxo, CH3, CF3, CH2CH3 ou CH2CF3 ; e o é 0 ou 1.
12. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é , em que cada R2 é independentemente selecionado de halogêneo, -CN, OH, oxo, C1-C2 alquila, C1-C2 haloalquila e C1-C2 alcóxi; e n é um inteiro selecionado de 0, 1, 2 e 3.
13. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é
, em que R2 é halogênio, -CN, OH, oxo, C1-C2 alquila, C1-C2 haloalquila ou C1-C2 alcóxi, n é 0 ou 1, e não mais que dois de R2 são fixados ao anel B.
14. Composto, de acordo com a reivindicação 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, caracterizado pelo fato de que dois grupos R2 juntos com o anel B formam uma estrutura bicíclica:
, cada um dos quais é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, C1-C2 alquila, C1-C2 haloalquila, C1-C2 alcóxi, -NH2, -NHC1-C2 alquila e –N(C1-C2 alquila)2.
15. Composto, de acordo com a reivindicação 14, ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, caracterizado pelo fato de que dois grupos R2 juntos com o anel B formam uma estrutura bicíclica: , cada um dos quais é opcionalmente substituído por halogênio.
16. Composto, de acordo com a reivindicação 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, solvato, ou hidrato do mesmo, caracterizado pelo fato de que W e anel B formam uma estrutura bicíclica:
, cada um dos quais é opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, CF3, -NH2, -NHC1-C2 alquila e –N(C1-C2 alquila)2.
17. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o anel A é , cada R1 é independentemente selecionado de halogênio, OH, CN, CF3, C1-C2 alquila, C1-C2 haloalquila, C1-C2 alcóxi, -NH2, -NHC1-C2 alquila, -N(C1-C2 alquila)2 e C2-C4 alquinila, opcionalmente substituído por ciclopropano; e m é um inteiro selecionado de 0, 1, 2 e 3.
18. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o anel A é , e m é 0 ou 1, e R1 é halogênio, CN, CH3, CF3, OH ou C2-C4 alquinil opcionalmente substituído por ciclopropano;
preferencialmente o anel A é .
19. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o anel A é , cada R1 é independentemente selecionado de halogênio, OH, CN, CF3, C1-C2 alquila, C1-C2 haloalquila, C1-C2 alcóxi, -NH2, -NHC1-C2 alquila, –N(C1-C2 alquila)2 e C2-C4alquinil opcionalmente substituído por ciclopropano; e m é um inteiro selecionado de 0, 1 e 2.
20. Composto, de acordo com a reivindicação 19, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o anel A é , cada um dos quais é opcionalmente substituído por halogênio, OH, CN, C≡CH, CH3 ou CF3, m é 0 ou 1.
21. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15 e 17 a 20, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que W é O, NH ou CH2.
22. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R1 é selecionado de halogênio, CN, CH3, CF3 e C≡CH.
23. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é representado pela fórmula estrutural (I'): (I'), ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que indica uma ligação simples ou uma ligação dupla; X1, X2, X3, X4 e X5 são, cada um, independentemente selecionados de N e CH não mais que três de X1, X2, X3, X4 e X5 são N e o anel A não contém 3 átomos de anel de nitrogênio em 3 posições contíguas; W é selecionado de O, CR5'R6' e NR5'; Y1, Y3, Y4 e Y5 são, cada um, independentemente selecionados de N, NH, CH e CH2; Y2 e Y6 são, cada um, independentemente selecionados de N, C ou CH; em que não há mais que 3 átomos de anel de nitrogênio no anel B e em que o anel B não contém 3 átomos de anel de nitrogênio em 3 posições contíguas;
é , ,
, , , ;
desde que quando o anel B é , então, (1) W não é
O, e/ou (2) o anel C não é , e/ou (3) o anel C não é em que Z1 é N e/ou (4) o anel A não é fenil; T6, T7 e T8 são, cada um independentemente selecionados de N e CR4; e não mais que 2 de T6, T7 e T8 são selecionados de N; EE é –COOH,
ou ; Ra é selecionado de hidrogênio, halogênio, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, NR5'R6', em que C1-C6 alquila ou C1-C6 alcóxi representado por Ra é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN e OH; Rb é heteroaril de 5-6 membros ou heterociclil de 4-7 membros saturado ou parcialmente saturado, em que o heteroarila ou heterociclil saturado ou parcialmente saturado representado por Rb é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, C1-C3 alquila, C1-C3 haloalquila, C1-C3 hidroxialquila, C1-C3 alcóxi e C1-C3 haloalcóxi; Rc é hidrogênio, C1-C6 alquila, ou C1-C6 haloalquil; cada R1 é independentemente halogênio, -CN, OH, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, C2-C6 alquenila, C2-C 6 alquinila, NR5'R6', fenila, heteroaril de 5-6 membros, cicloalquil de 4-6 membros saturado ou parcialmente saturado e heterociclil de 3-7 membros saturado ou parcialmente saturado, em que o C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, C2-C6 alquenila, ou C2-C6 alquinil representado por R1 é, opcionalmente, substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, CN, OH, e C3-C6; e em que o arila, heteroarila, cicloalquil saturado ou parcialmente saturado, ou heterociclil saturado ou parcialmente saturado representado por R1 ou no grupo representado por R1 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, oxo, CN, OH, C1-C3 alquila, C1-C3 haloalquila, C1-C3 hidroxialquila, C1-C3 alcóxi, C1-C3 haloalcóxi, C1-C3 hidroxialcóxi e NR5'R6'; cada R2 é independentemente selecionado de halogênio, oxo, C1-C6 alquila, C1-C6 haloalquila, C1-C6 alcóxi, C1-C6 haloalcóxi e NR5'R6'; cada R3 é independentemente halogênio, -CN, oxo, C1-C6 alquila, C1-C6 haloalquila, C1-C6 alcóxi, ou C1-C6 haloalcóxi; e/ou dois R3 tomados juntos com o Anel C, formam heterociclil de 6-10 membros em ponte opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, C1-C6 alquila, C1-C6 haloalquila, C1- C6 alcóxi, ou C1-C6 haloalcóxi; cada R4 é independentemente H, halogênio, ou C1-C6 alquil opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio; R5' e R6' são cada um independentemente hidrogênio ou C1- C6 alquil; em que opcionalmente dois R1; dois R2; dois R3; Ra e R1; Ra e R2; R1 e R5'; R2 e R5'; tomados juntos com seu respectivo carbono interveniente ou heteroátomo(s) formam fenila, heteroaril de 5-6 membros, cicloalquil de 4-6 membros saturado ou parcialmente saturado ou heterociclil de 4-7 membros saturado ou parcialmente saturado, cada um dos quais é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de halogênio, -CN, -OH, C1-C6 alquila, C1-C6 haloalquila, C1-C6 alcóxi, C1-C6 haloalcóxi, e NR5'R6'; m é 0, 1, 2, 3 ou 4; n é 0, 1, 2, 3 ou 4; e o é 0, 1, 2, 3 ou 4.
24. Composto, de acordo com a reivindicação 23, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é , ou , em que R3 é independentemente halogênio, C1-C4 alquila ou C1-C4 haloalquil; e o é 0, 1 ou 2.
25. Composto, de acordo com a reivindicação 23 ou 24, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é , ou , em que R4 é H ou halogênio, de preferência, H ou F.
26. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 25, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que EE é –COOH, -C(O)NHOH, -C(O)NHSO2CH3, -C(O)NHSO2CF3, ou .
27. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 26, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que Rb é , , ou ; cada um dos quais é opcionalmente substituído por um ou mais grupos seleccionados de C1-C3 alquil; e Rc é H ou C1-C3 alquila.
28. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 27, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é .
29. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 28, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é ou .
30. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 29, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que W é O, NH ou CH2 e Ra é H.
31. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 30, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é , , , , , ou , , em que R2 é halogênio; n é 0, 1 ou 2.
32. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 31, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é ou ; R2 é F; e n é 0, 1 ou 2.
33. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 32, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que anel A é , , , ou , cada R1 é independentemente selecionado de halogênio, CN, C1-C4 alquila, C1-C4 haloalquila, C1-C4 alcóxi, C1-C4 haloalcóxi, C2- C4 alquinil opcionalmente substituído por ciclopropila, heteroaril de 5-6 membros (em que o heteroátomo do anel é nitrogênio), opcionalmente substituído por C1-C4 alquil; e/ou dois R1 tomados juntos com e seus respectivos átomos de carbono intervenientes formam heterociclil de 4-7 membros (em que o heteroátomo do anel é nitrogênio e/ou oxigênio) opcionalmente substituído por C1-C4 alquil; e m é 0, 1, 2 ou 3.
34. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 33, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que W é O.
35. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 34, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o anel A é , cada R1 é independentemente selecionado de halogênio, CN, C1-C4 alquila, C1-C4 haloalquila, C1-C4 alcóxi, imidazolila, triazolila, piridila e C2-C4 alquinil opcionalmente substituído por ciclopropil; e m é 0, 1 ou 2.
36. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 35, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R1 é selecionado de halogênio e CN.
37. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal,
estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o composto é um composto listado na Tabela 1.
38. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 37, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
39. Método para tratar doenças cardiometabólicas e associadas, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um sujeito em necessidade de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 37, ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição farmacêutica como definida na reivindicação 38, em que a doença é T1D, T2DM, pré-diabetes, T1D idiopática, LADA, EOD, YOAD, MODY, diabetes relacionado à desnutrição, diabetes gestacional, hiperglicemia, resistência à insulina, resistência à insulina hepática, tolerância à glicose impedida, neuropatia diabética, nefropatia diabética, doença renal, retinopatia diabética, disfunção de adipócito, deposição adiposa visceral, apneia do sono, obesidade, distúrbios alimentares, ganho de peso do uso de outros agentes, desejo excessivo de açúcar, dislipidemia, hiperinsulinemia, NAFLD, NASH, fibrose, cirrose, carcinoma hepatocelular, doença cardiovascular, aterosclerose, doença arterial coronariana, doença vascular periférica, hipertensão, disfunção endotelial, complacência vascular prejudicada, insuficiência cardíaca congestiva, infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, acidente vascular cerebral hemorrágico, acidente vascular cerebral isquêmico, lesão cerebral traumática, hipertensão pulmonar, restenose após angioplastia, claudicação intermitente,
lipemia pós-prandial, acidose metabólica, cetose, artrite, osteoporose, Doença de Parkinson, hipertrofia ventricular esquerda, doença arterial periférica, degeneração macular, catarata, glomeruloesclerose, insuficiência renal crônica, síndrome metabólica, síndrome X, síndrome pré-menstrual, angina de peito, trombose, aterosclerose, ataques isquêmicos transientes, restenose vascular, metabolismo de glicose prejudicado, condições de glicose plasmática em jejum prejudicadas, hiperuricemia, gota, disfunção erétil, distúrbios de pele e tecido conjuntivo, psoríase, ulcerações nos pés, colite ulcerativa, lipoproteinemia hiper apo B, Doença de Alzheimer, esquizofrenia, cognição prejudicada, doença inflamatória do intestino, síndrome do intestino curto, doença de Crohn, colite, síndrome do intestino irritável, prevenção ou tratamento da Síndrome dos Ovários Policísticos e tratamento de dependência.
40. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 37 ou um sal, estereoisômero, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou da composição farmacêutica como definida na reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamenteo para tratar um sujeito em necessidade do mesmo com doença cardiometabólica ou associada, em que a doença é T1D, T2DM, pré-diabetes, T1D idiopática, LADA, EOD, YOAD, MODY, diabetes relacionado à desnutrição, diabetes gestacional, hiperglicemia, resistência à insulina, resistência à insulina hepática, tolerância à glicose impedida, neuropatia diabética, nefropatia diabética, doença renal, retinopatia diabética, disfunção de adipócito, deposição adiposa visceral, apneia do sono, obesidade, distúrbios alimentares, ganho de peso do uso de outros agentes, desejo excessivo de açúcar, dislipidemia, hiperinsulinemia, NAFLD, NASH, fibrose, cirrose, carcinoma hepatocelular, doença cardiovascular,
aterosclerose, doença arterial coronariana, doença vascular periférica, hipertensão, disfunção endotelial, complacência vascular prejudicada, insuficiência cardíaca congestiva, infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, acidente vascular cerebral hemorrágico, acidente vascular cerebral isquêmico, lesão cerebral traumática, hipertensão pulmonar, restenose após angioplastia, claudicação intermitente, lipemia pós-prandial, acidose metabólica, cetose, artrite, osteoporose, Doença de Parkinson, hipertrofia ventricular esquerda, doença arterial periférica, degeneração macular, catarata, glomeruloesclerose, insuficiência renal crônica, síndrome metabólica, síndrome X, síndrome pré-menstrual, angina de peito, trombose, aterosclerose, ataques isquêmicos transientes, restenose vascular, metabolismo de glicose prejudicado, condições de glicose plasmática em jejum prejudicadas, hiperuricemia, gota, disfunção erétil, distúrbios de pele e tecido conjuntivo, psoríase, ulcerações nos pés, colite ulcerativa, lipoproteinemia hiper apo B, Doença de Alzheimer, esquizofrenia, cognição prejudicada, doença inflamatória do intestino, síndrome do intestino curto, doença de Crohn, colite, síndrome do intestino irritável, prevenção ou tratamento da Síndrome dos Ovários Policísticos e tratamento de dependência.
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