BR112021006578A2 - inibidor de aurora a quinase para uso no tratamento de neuroblastoma - Google Patents

Abstract

INIBIDOR DE AURORA A QUINASE PARA USO NO TRATAMENTO DE NEUROBLASTOMA. A presente invenção fornece um inibidor de Aurora A quinase, Fórmula (I) ilustrada abaixo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento do neuroblastoma.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "INIBIDOR

DE AURORA A QUINASE PARA USO NO TRATAMENTO DE NEUROBLASTOMA".

[001] A presente invenção refere-se ao uso de um inibidor de Aurora A quinase e seus sais, para o tratamento de neuroblastoma.

[002] O neuroblastoma é um dos tumores sólidos mais comuns em crianças e mais do que 650 casos de neuroblastoma são diagnosticados a cada ano na América do Norte. O neuroblastoma pode ser subdividido em dois subconjuntos definidos de pacientes, geralmente chamados de baixo risco e alto risco. O neuroblastoma de baixo risco é geralmente encontrado em crianças menores de 18 meses de idade, com carga limitada da doença, resultando em um prognóstico favorável. No entanto, o neuroblastoma de alto risco geralmente ocorre em crianças com mais de 18 meses, frequentemente metastático no tecido ósseo, resultando em mau prognóstico. Embora os avanços nas estratégias de tratamento multimodal tenham levado a melhores resultados para pacientes com neuroblastoma, as taxas de sobrevida para os pacientes da categoria de alto risco permanecem baixas, com menos de 50% de sobrevida cinco anos após o diagnóstico.

[003] O neuroblastoma de alto risco está associado com o gene MYCN, que codifica a proteína proto-oncogene N-myc (N-MYC). Embora não completamente compreendido, N-MYC e Aurora A Quinase parecem interagir e a expressão e amplificação de Aurora A quinase são consideradas estabilizar N-MYC e/ou retardar sua degradação, o que por sua vez causaria um aumento nos níveis de N-MYC. Michaelis, M, et al, "Aurora Kinases as Targets in Drug- Resistant Neuroblastoma Cells", PLOS One, 2014, 9(9) e108758.

[004] Os inibidores da Aurora A quinase são conhecidos na técnica (veja, por exemplo, Publicação do Pedido de Patente PCT, WO2016/ 077191, que divulga o composto de Fórmula I (veja abaixo). O uso de certos inibidores da Aurora quinase, incluindo um inibidor seletivo de Aurora A, alisertib e um inibidor de pan Aurora, tozasertib, têm sido associados a níveis inaceitavelmente elevados de neutropenia e outros efeitos tóxicos.

[005] Existe a necessidade de novas abordagens e medicamentos para tratar o neuroblastoma, em particular, o neuroblastoma de alto risco. Além disso, existe uma necessidade de fornecer métodos de inibição de Aurora quinases, em particular Aurora A quinase e diminuir a expressão e/ou atividade de N-MYC. A presente invenção aborda essas necessidades e fornece um método de tratamento do neuroblastoma.

[006] Em uma forma, a presente invenção fornece um método para o tratamento de neuroblastoma em um paciente com necessidade de tratamento. Preferivelmente, a presente invenção fornece um método para o tratamento de neuroblastoma de alto risco em um paciente com necessidade de tratamento. O método compreende a administração ao paciente de uma quantidade eficaz de um composto que é o ácido (2R, 4R) -1- [(3- cloro-2-flúor-fenil)metil] -4-[[3-flúor-6-[(5-metil-1H-pirazol-3- il)amino]-2-piridil]metil]-2-metil-piperidina-4-carboxílico, ilustrado abaixo como Fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto de Fórmula I. Em uma modalidade, o composto de Fórmula I é fornecido como um ácido livre. Em outra modalidade, o composto de Fórmula I é fornecido como um sal de adição de base. Em uma modalidade preferida, o composto de Fórmula I é fornecido como um sal de 2- metilpropan-2-amônio (também conhecido como um sal de erbumina ou um sal terc-butilamina) que é o ácido ((2R, 4R) -1-[(3-cloro-2-flúor- fenil)metil]-4-[[3-flúor-6-[(5-metil-1H-pirazol-3-il) amino]-2-piridil]metil]-2- metil-piperidina-4-carboxílico : 2-metil-2-propanamina (1:1)). Em outra modalidade, o composto de Fórmula I é fornecido como um sal de amônia de ((2R,4R) -1- [(3-cloro-2-flúor-fenil) metil] -4- [[3-flúor-6-[ (5-

metil-1H-pirazol-3-il)amino]-2-piridil]metil]-2-metil-piperidina-4- carboxílico : sal de amina (1: 1)).

Fórmula I

[007] Em outra forma, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende o composto de Fórmula I, ou seu sal farmaceuticamente aceitável e um ou mais de um: transportador, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis para uso no tratamento do neuroblastoma, preferivelmente para o tratamento de neuroblastoma de alto risco. Em uma modalidade, a composição compreende um composto de Fórmula I, que é um ácido livre. Em outra modalidade, a composição compreende um composto de Fórmula I como um sal de adição de base, de preferência, um sal de 2- metilpropan-2-amônia ou um sal de amônia, mais preferencialmente um sal de metilpropan-2-amônia.

[008] A presente invenção fornece o composto de Fórmula I ou seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento do neuroblastoma. A presente invenção também fornece o uso do composto de Fórmula I, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, para a fabricação de um medicamento para o tratamento de neuroblastoma. Em uma modalidade, o composto é fornecido como um ácido livre. Em outra modalidade, o composto de Fórmula I é fornecido como um sal de adição de base. Em uma modalidade preferida, o composto de Fórmula I é fornecido como um sal de 2-metilpropan-2-amônia. Em ainda outra modalidade, o composto de Fórmula I é fornecido como um sal de amônia.

[009] O composto de Fórmula I ou seu sal farmaceuticamente aceitável, pode ser usado em combinação com o tratamento padronizado para pacientes em necessidade de tratamento para neuroblastoma. O tratamento padronizado pode incluir um ou mais dos seguintes: cirurgia ou excisão de todo ou parte do tumor, terapia com radiação, transplante de células-tronco, administração de agentes quimioterápicos, agente de diferenciação e imunoterapia.

[0010] Exemplos de agentes quimioterápicos adicionais que podem ser combinados ou administrados com o composto de Fórmula I, ou seu sal farmaceuticamente aceitável incluem: alquiladores (ciclofosfamida, temozolomida e cloridrato de melfalan), agentes de platina (carboplatina, cisplatina e oxaliplatina), antraciclinas (cloridrato de doxorrubicina), inibidores da topoisomerase I (irinotecan e topotecan) e alcalóides de vinca (sulfato de vincristina). Os agentes de diferenciação incluem isotretinoína (ácido 13-cis-retinóico) e os agentes imunoterapêuticos incluem anticorpos monoclonais, tais como os anticorpos monoclonais GD2 (dinutuximab). O composto de Fórmula I ou seu seu sal farmaceuticamente aceitável e um ou mais agentes quimioterapêuticos adicionais, agentes de diferenciação e/ou agentes imunoterapêuticos podem ser administrados simultaneamente, separadamente ou sequencialmente para tratar neuroblastoma.

[0011] A expressão "sal farmaceuticamente aceitável", como usada aqui, se refere aos sais do composto de Fórmula I. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis e métodos para a sua preparação podem ser encontrados em Stahl. P, et al, "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use", 2nd Revised Edition, Wiley-VCH, (2011) e Berge, S., M., et al, "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Sciences, 1977, 66(1), 1-19; Gould, PL, "Salt selection for basic drug", International Journal of Pharmaceutics, 1986, 33: 201-217; e Bastin, RJ,

et al. "Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities", Organic Process Research and Development, 2000, 4(5) 427-435.

[0012] O composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser formulado para administração como parte de uma composição farmacêutica. As composições farmacêuticas preferidas podem ser formuladas como um comprimido ou cápsula para administração oral, uma solução para administração oral ou uma solução injetável. O comprimido, cápsula ou solução pode incluir o composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em uma quantidade eficaz para o tratamento de neuroblastoma em um paciente com necessidade de tratamento. Mais preferivelmente, tais composições são para administração oral. Como tal, as composições farmacêuticas que compreendem o composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, podem estar em combinação com um ou mais aditivos farmaceuticamente aceitáveis. A expressão "aditivo (s) farmaceuticamente aceitável (aceitáveis)", como usada aqui para as composições farmacêuticas, se refere a um ou mais de: veículos, diluentes e excipientes que são compatíveis com os outros aditivos da composição ou formulação e não prejudiciais ao paciente. Exemplos de composições farmacêuticas e processos para a sua preparação podem ser encontrados em "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", Loyd, V., et al. Eds., 22nd Ed., Mack Publishing Co., (2012). Exemplos não limitantes de veículos, diluentes e excipientes farmaceuticamente aceitáveis incluem os seguintes: soro fisiológico, água, amido, açúcares, manitol e derivados de sílica; agentes de ligação, tais como carboximetilcelulose, alginatos, gelatina e polivinilpirrolidona; caulim e bentonita; e polietil glicóis.

[0013] "Quantidade eficaz" significa a quantidade do composto de Fórmula I ou seu sal farmaceuticamente aceitável; ou composição farmacêutica que contém o composto de Fórmula I, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, que irá desencadear a resposta biológica ou médica ou efeito terapêutico desejado em um tecido, sistema, animal, mamífero ou humano que está sendo procurado pelo pesquisador, veterinário, médico ou outro clínico. Em certas modalidades, a quantidade eficaz se refere à quantidade do composto de Fórmula I ou seu sal farmaceuticamente aceitável, que quando administrada seja eficaz para retardar, parar ou reverter a progressão do neuroblastoma; ou retardar ou interromper o crescimento ou proliferação de células de neuroblastoma em um paciente.

[0014] A quantidade eficaz do composto de Fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, realmente administrada que irá provocar a resposta biológica ou médica ou o efeito terapêutico desejado em um tecido, sistema ou paciente será determinada por um médico sob circunstâncias relevantes, incluindo a condição a ser tratada, a via de administração escolhida, o composto efetivo administrado da presente invenção, a idade, o peso e a resposta do paciente individual e a gravidade dos sintomas do paciente. As dosagens por dia normalmente estão na faixa de cerca de 0,1 a cerca de 100 mg. Em alguns casos, os níveis de dosagem abaixo do limite inferior desta faixa podem ser mais do que adequados, enquanto em outros casos, doses ainda maiores podem ser empregadas. As dosagens preferidas estão na faixa de 1 a 80 mg; mais preferivelmente entre 1 e 50 mg; ainda mais preferivelmente entre 1 e 30 mg; ainda mais preferivelmente entre 1 a 25 mg. As dosagens podem ser administradas uma, duas, três vezes ou mais por dia. Em uma modalidade, o composto da presente invenção pode ser administrado em uma dosagem de 15 mg ou 25 mg por dose administrada por via oral duas vezes por dia (BID).

[0015] Como usada aqui, a expressão "paciente" se refere a um mamífero humano ou não humano. Mais particularmente, a expressão "paciente" se refere a um humano.

[0016] A expressão "tratando" (ou "tratar" ou "tratamento") se refere ao processo que envolve a desaceleração, interrupção, parada, controle, redução ou reversão da progressão ou gravidade de um sintoma, distúrbio, condição ou doença, tal como neuroblastoma

[0017] Como usadas aqui, as seguintes expressões têm os significados indicados: "ATCC" refere-se à American Type Culture Collection; "BID" se refere a uma dosagem duas vezes ao dia; "DMEM" se refere-se ao meio de Eagle modificado por Dulbecco; "DNA" se refere ao ácido desoxirribonucleico; "EMEM" se refere ao Meio Mínimo e Essencial de Eagle; "F12" se refere ao meio F12 de Ham; "FBS" se refere a Soro Fetal Bovino; "HBSS" se refere à Solução Salina Balanceada de Hank; "HSRRB" se refere ao Health Science Research Resources Bank; "JCRB" se refere à Japanese Collection of Research Bioresources; "MEM" se refere ao Meio Mínimo Essencial; "NBL" se refere a neuroblastoma; "NEAA" se refere a aminoácidos não essenciais; "PBS" se refere a solução salina tamponada com fosfato; "RPMI" se refere ao Roswell Park Memorial Institute; e "SCID" se refere a camundongos imunodeficientes combinados graves.

[0018] O composto de Fórmula I e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, incluindo os sais de 2-metilpropan-2-amônia e de amônia, podem ser preparados de acordo com os métodos sintéticos descritos em US 9.637.474. Ensaios Biológicos Ensaios Antiproliferação em Monocamada

[0019] Uma medida da potência de um inibidor de Aurora A é sua capacidade de inibir a proliferação de células cancerosas em cultura devido à interrupção do ciclo celular e catástrofe mitótica. A atividade antiproliferativa do inibidor de Aurora A em linhagens de células NBL pode ser indicativa de resposta clínica aos inibidores de Aurora A. As linhagens de células tumorais NBL são recuperadas de estoques congelados e cultivadas por 1 a 2 passagens em frascos de cultura celular. As linhagens de células tumorais NBL incluem: CHP-212, GOTO, IMR-32, NB16, NH-6, SH-SY5Y, SK-N-AS, SK-N-DZ, SK-NF 1, SK-N-MC, SK-N-SH e TGW detalhadas na Tabela 1. Tabela 1 Linhagem Catálogo Fornecedor Lote No Histologia Meio completo Celular No. DMEM:F12(1: CHP-212 ATCC CRL-2273 58063161 neuroblastoma 1)+10% FBS EMEM + 10% IMR32 ATCC CCL-127 59587034 neuroblastoma

FBS DMEM + 0,1 mM SK-N-AS ATCC CRL-2137 58078525 neuroblastoma NEAA + 10%

FBS neuroblastoma com alfa-MEM + NH-6 JCRB JCRB0832 06262000 opsomioclonus, 10% FBS ataxia troncal DMEM + 0,1 cérebro, SK-N-DZ ATCC CRL-2149 3903996 mM NEAA + neuroblastoma 10% FBS DMEM + 0.1 cérebro, SK-N-FI ATCC CRL-2142 58078707 mM NEAA + neuroblastoma 10% FBS cérebro, EMEM + 10% SK-N-SH ATCC HTB-11 59257297 neuroepitelioma FBS RPMI1640:ME GOTO HSRRB JCRB0612 neuroblastoma M(1:1) + 10%

FBS RPMI1640 + NB16 RIKEN RCB0478 neuroblastoma 15% FBS MEM:F12(1:1) SH-SY5Y ATCC CRL-2266 neuroblastoma + 10% FBS MEM + 10% TGW HSRRB JCRB0618 neuroblastoma

FBS DMEM + 0,1 KELLY Sigma 92110411 neuroblastoma mM NEAA + 10% FBS

[0020] A atividade antiproliferativa de um inibidor de Aurora A pode ser medida pelo ensaio CellTiter Glo®. Antes do tratamento com o composto de Fórmula I, as células são plaqueadas em meio de crescimento completo em placas de microtitulação de fundo transparente de parede branca com uma densidade ótima predeterminada para cada linha celular. Dezesseis horas após o plaqueamento, o composto de Fórmula I é adicionado. Depois de duas duplicações das células após a adição do composto, os reagentes CellTiter-Glo® são preparados de acordo com os protocolos do fabricante e adicionados a cada poço. As placas são incubadas em temperatura ambiente durante 10 minutos e depois lidas com um leitor de placas de luminescência de acordo com o protocolo do fabricante para Ensaio Luminescente de Viabilidade Celular CellTiter-Glo®, Catálogo Promega # G7571.

[0021] A atividade antiproliferativa de um inibidor de Aurora A também pode ser medida pela contagem das células após o tratamento. Para este ensaio, as linhagens celulares NBL SK-N-DZ, SK-N-F1 e KELLY são semeadas em meio de crescimento completo em placas de microtitulação de fundo transparente de parede preta a 5.000 células por poço. Dezesseis horas após o plaqueamento, o composto de Fórmula I é adicionado durante 72 horas. As células são então fixadas em formaldeído 3,7% (Sigma # F-1268,) permeabilizadas com Triton X- 100 0,1% (Roche # 92522020) em PBS por 10 minutos, em seguida, o DNA é corado com Hoechst 33342 (Mol. Probes # H-21492) diluído 1:5000 em PBS. As placas coradas são rastreadas com uma plataforma de rastreamento Celllnsight NXT® (Thermo Fischer) usando a bioaplicação de ativação do alvo para quantificar os núcleos por campo, uma medida de células por poço. Para ambos os ensaios, os valores absolutos de EC50 são relatados a partir de curvas de diluição seriada de 10 pontos de Fórmula I.

[0022] Conforme ilustrado na Tabela 2, as linhagens de células NBL pediátricas são altamente sensíveis ao tratamento in vitro com o composto de Fórmula I. Isso indica que o composto de Fórmula I pode ser eficaz para inibir o crescimento celular de uma variedade de linhagens de células de neuroblastoma. Tabela 2 Nome da Replicações Replicações Média Tipo de Linhagem Experimentais Experimentais (ABS† Ensaio Celular Biológicas Técnicas IC50) CHP-212 CTG* 6 0,085 GOTO CTG 4 20,000 IMR-32 CTG 4 0,016 NB16 CTG 4 0,035 NH-6 CTG 4 0,031 SH-SY5Y CTG 4 0,047 SK-N-AS CTG 4 0,823 SK-N-DZ CTG 4 0,044 SK-N-DZ Imagem‡ 4 0,135 SK-N-FI CTG 4 0,098 SK-N-FI Imagem 4 0,290 SK-N-MC CTG 4 0,873 SK-N-SH CTG 4 0,078 TGW CTG 4 0,154 KELLY Imagem 4 0,396 *CTG refere-se ao Ensaio Luminescente de Viabilidade Celular CellTiter-Glo® realizado por HDBiosciences; † ABS significa média absoluta; ‡ Imagem = ensaio antiproliferação medido pelas contagens de células (coloração nuclear) Eficácia do Agente Isolado em Modelos de Xenoenxerto de Tumor de Neuroblastoma

[0023] A eficácia do composto de Fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser avaliada em modelos de neuroblastoma em camundongos in vivo. O composto de Fórmula I como o sal de 2-metil-2-propanamina (34,5 mg/kg) pode ser administrado oralmente a camundongos nus ou CB-17 SCID com xenoenxertos derivados de células (CDX) usando um esquema de dosagem de 28 dias BID. O volume do tumor e o peso corporal podem ser medidos duas vezes por semana.

[0024] O protocolo a seguir pode ser usado para medir as reduções no volume do tumor em resposta a um ingrediente farmacêutico ativo. As células cancerosas NBL humanas são expandidas em cultura, coletadas em ciclos e injetadas em 5 x 106 células em 200 µL de uma solução 1:1 de HBSS e Matrigel® por via subcutânea no flanco traseiro direito de camundongos fêmeas (20-24 g, Charles River Laboratories). São utilizadas as seguintes combinações de linhagem celular/ cepa de camundongo: SH-SY5Y (ATCC, # CRL-2226) em camundongos nus atímicos, KELLY (Sigma- # 92110411) em camundongos CB-17 SCID e IMR-32 (ATCC, #CCL -127) em camundongos CB-17 SCID.

[0025] O composto de Fórmula I é formulado como o sal de 2-metil- 2-propanamina em 20% de 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina em tampão de fosfato 25 mM, pH 2 e administrado por via oral a 34,5 mg/kg BID por 28 dias. O peso corporal e o volume do tumor são medidos duas vezes por semana.

[0026] Foi verificado que o composto de Fórmula I como o sal de 2- metil-2-propanamina tem % de valores de regressão conforme fornecido na Tabela 3. Tabela 3 Avaliação do Composto de Fórmula I como o Sal de 2-Metil-2- Propanamina em Modelos de Xenoenxerto de Neuroblastoma % de % de Regressão Tipo de Alteração de Modelo N (-) no Fim do valor p Xenoenxerto Peso Tratamento Corporal KELLY CDX* 5 -59,4 <0,001 -5,3 SH-SY5Y CDX 5 -78,8 <0,001 -1,1 IMR-32 CDX 4 -94,3 <0,001 4,7

CDX refere-se ao Tipo de Xenoenxerto Derivado de Célula. N refere-se a # de replicações

[0027] Estes resultados indicam que o composto de Fórmula I como o sal de 2-metil-2-propanamina demonstra atividade antitumoral significativa em modelos de xenoenxerto de NBL humano. O composto de Fórmula I como o sal de 2-metil-2-propanamina é eficaz como um agente único em 100% (3/3) dos modelos de camundongos NBL pediátricos testados in vivo, com resultados que variam de doença estável a resposta completa.

Claims (9)

REIVINDICAÇÕES

1. Uso de uma quantidade eficaz de um composto que é o ácido (2R, 4R)-1-[(3-cloro-2-flúor-fenil)metil] -4- [[3-flúor-6-[(5-metil-1H- pirazol-3-il) amino] -2-piridil] metil] -2-metil-piperidina-4- carboxílico, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é para fabricação de um medicamento para tratamento de neuroblastoma em um paciente em necessidade de tal tratamento.

2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é o ácido (2R, 4R)-1-[(3-cloro-2-flúor-fenil)metil] -4- [[3-flúor-6-[(5-metil-1H-pirazol-3-il) amino] -2-piridil] metil] -2-metil- piperidina-4-carboxílico.

3. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é o ácido (2R, 4R)-1-[(3-cloro-2-flúor-fenil)metil] -4- [[3-flúor-6-[(5-metil-1H-pirazol-3-il) amino] -2-piridil] metil] -2-metil- piperidina-4-carboxílico: sal de 2-metilpropan-2-amina (1:1).

4. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é o ácido (2R, 4R)-1-[(3-cloro-2-flúor-fenil)metil] -4- [[3-flúor-6-[(5-metil-1H-pirazol-3-il) amino] -2-piridil] metil] -2-metil- piperidina-4-carboxílico: sal de amina (1:1).

5. Composição farmacêutica para tratamento de neuroblastoma, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, e um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis.

6. Uso de uma quantidade eficaz de uma composição farmacêutica, como definida na reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que é para fabricação de um medicamento para tratamento de neuroblastoma em um paciente em necessidade de tal tratamento.

7. Combinação para tratamento de neuroblastoma, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou de uma composição farmacêutica, como definida na reivindicação 5, com tratamento padronizado para pacientes selecionado dentre um ou mais dos seguintes: cirurgia ou excisão de todo ou parte do tumor, terapia com radiação, transplante de células-tronco, administração de agentes quimioterápicos, agente de diferenciação e imunoterapia.

8. Composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é para fabricação de um medicamento para tratamento de neuroblastoma.

9. Invenção, caracterizada por quaisquer de suas concretizações ou categorias de reivindicação englobadas pela matéria inicialmente revelada no pedido de patente ou em seus exemplos aqui apresentados.