BR112020015479A2 - Anticorpos anticlaudina 18.2 e usos dos mesmos - Google Patents

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Hui Zou
Haiqun Jia
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Abstract

a presente invenção refere-se a anticorpos anti-cldn18.2 e fragmentos de ligação a antígenos dos mesmos. também são descritos ácidos nucleicos que codificam os anticorpos, composições que compreendem os anticorpos e métodos de produção dos anticorpos e uso dos anticorpos para tratamento ou prevenção de doenças como câncer e/ou doença inflamatória.

Description

U74 Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTI- CORPOS ANTICLAUDINA 18.2 E USOS DOS MESMOS". REFERÊNCIA REMISSIVA PARA PEDIDOS DE DEPÓSITO CORRE-
LATOS
[0001] Este pedido reivindica a prioridade para o pedido provisório de patente US nº 62/640.288, depositado em 8 de março de 2018; e para o pedido provisório de patente US nº 62/714.254, depositado em 3 de agosto de 2018. Cada revelação é aqui incorporada na íntegra, a título de referência.
CAMPO DA INVENÇÃO
[0002] Esta invenção refere-se a anticorpos monoclonais anticlau- dina 18.2 (CLDN18.2), ácidos nucleicos e vetores de expressão codifi- cando os anticorpos, células recombinantes contendo os vetores e com- posições compreendendo os anticorpos. Também são fornecidos mé- todos para produzir os anticorpos e métodos para usar os anticorpos para tratar doenças como câncer e doenças inflamatórias e/ou compli- cações associadas. REFERÊNCIA À LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS ENVIADA ELETRONI-
CAMENTE
[0003] Este pedido contém uma listagem de sequências, que é en- viada eletronicamente via EFS-Web como uma listagem de sequências formatada em ASCII com um nome de arquivo "689204.9W0 Sequence Listing" e uma data de criação de 26 de fevereiro de 2019 e com um tamanho de 74 kb. A listagem de sequências enviada via EFS-Web faz parte do relatório descritivo e é aqui incorporada por referência em sua totalidade.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[0004] Claudina 18.2 (CLDN18.2), também conhecida como clau- dina-18a2.1, pertence às proteínas transmembrana da família claudina (CLDN) de pelo menos 27 isoformas em seres humanos. As claudinas são os principais componentes estruturais da estreita junção entre as células epiteliais e funcionam como poros iônicos para regular a perme- abilidade paracelular dos cátions e ânions (Sahin et al., Physiol Rev. 2013; 93:525-569). A expressão de CLDN18 é normalmente limitada a tecidos pulmonares e estomacais. CLDN18 tem duas variantes de emenda. CLDN18.1 é a variante específica para o pulmão, enquanto CLDN18.2 é a variante específica para o estômago. As variantes de emenda diferem em seus resíduos de aminoácidos 69 N-terminal devido à emenda alternativa do primeiro éxon (Niimi et al., mol Cell Biol. 2001; 21:7380-7390). Estudos com camundongos com genes desativados CLDN18.2 sugerem que a CLDN18.2 desempenha um papel de impor- tância crítica na prevenção do vazamento de ácido gástrico no lúmen do estômago (Hayash et al., Gastroenterology 2012; 142:292-304).
[0005] A expressão desregulada de claudinas é detectada em mui- tos cânceres e pode contribuir para a tumorigênese e invasão do câncer (Singh et al, J Oncology 2010; 2010: 541957). A expressão de CLDN18.2 é elevada nos adenocarcinomas ductais pancreáticos (PDAC) (Tanaka et al., J Histochem Cytochem. 2011; 59:942-952), tu- mores esofágicos, cânceres pulmonares de células não pequenas (NSCLC), cânceres ovarianos (Sahin et al., Hu Cancer Biol. 2008; 14:7624-7634), adenocarcinomas do ducto biliar (Keira et al., Virchows Arch. 2015; 466:265-277) e colangiocarcinomas (Shinozaki et al., Vir- chows Arch. 2011; 459:73-80). A CLDN18.2 é um alvo ideal para bioló- gicos anticâncer orientados por precisão para tumores CLDN18.2 posi- tivos, uma vez que a CLDN18.2 não é expressada em qualquer tecido normal que não as células epiteliais gástricas diferenciadas, inatingíveis por compostos de moléculas grandes administrados por via intravenosa.
BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0006] Em um aspecto geral, a invenção refere-se a anticorpos mo- noclonais isolados ou fragmentos de ligação a antígenos que se ligam especificamente à claudina 18.2 (CLDN18.2).
[0007] São fornecidos anticorpos monoclonais isolados ou fragmen- tos de ligação a antígeno dos mesmos compreendendo uma região de- terminante de complementaridade de cadeia pesada 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (LCDR1), LCDR2 e LCDR3, com as sequências de poli- peptídeos de: (1) SEQ ID NOs: 33, 34, 35, 63, 64 e 65, respectivamente; (2) SEQ ID NOs: 21, 22, 23, 51, 52 e 53, respectivamente; (3) SEQ ID NOs: 24, 25, 26, 54, 55 e 56, respectivamente; (4) SEQ ID NOs: 27, 28, 29, 57, 58 e 59, respectivamente; (5) SEQ ID NOs: 30, 31, 32, 60, 61 e 62, respectivamente; (6) SEQ ID NOs: 36, 37, 38, 66, 67 e 68, respectivamente; (7) SEQ ID NOs: 39, 40, 41, 69, 70 e 71, respectivamente; (8) SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 72, 73 e 74, respectivamente; (9) SEQ ID NOs: 45, 46, 47, 75, 76 e 77, respectivamente; ou (10) SEQ ID NOs: 48, 49, 50, 78, 79 e 80, respectivamente; em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente à CLDN18.2, de preferência a CLDN18.2 humana.
[0008] São fornecidos anticorpos monoclonais isolados ou fragmen- tos de ligação a antígeno dos mesmos compreendendo uma região de- terminante de complementaridade de cadeia pesada 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (LCDR1), LCDR2 e LCDR3, com as sequências de poli- peptídeos de: (1) SEQ ID NOs: 93, 94, 95, 123, 124 e 125, respectivamente; (2) SEQ ID NOs: 81, 82, 83, 111, 112 e 113, respectivamente; (3) SEQ ID NOs: 84, 85, 86, 114, 115 e 116, respectivamente; (4) SEQ ID NOs: 87, 88, 89, 117, 118 e 119, respectivamente;
(5) SEQ ID NOs: 90, 91, 92, 120, 121 e 122, respectivamente; (6) SEQ ID NOs: 96, 97, 98, 126, 127 e 128, respectivamente; (7) SEQ ID NOs: 99, 100, 101, 129, 130 e 131, respectiva- mente; (8) SEQ ID NOs: 102, 103, 104, 132, 133 e 134, respectiva- mente; (9) SEQ ID NOs: 105, 106, 107, 135, 136 e 137, respectiva- mente; ou (10) SEQ ID NOs: 108, 109, 110, 138, 139 e 140, respectiva- mente; em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente à CLDN18.2, de preferência a CLDN18.2 humana.
[0009] Em determinadas modalidades, o anticorpo monoclonal iso- lado ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO: 9, 1,3, 5,7, 11, 13,15, 17 ou 19, ou uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97% à SEQ ID NO: 10, 2, 4, 6, 8, 12, 14, 16, 18 ou 20.
[0010] Em determinadas modalidades, o anticorpo monoclonal iso- lado ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende: (a) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:9 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:10; (b) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:1 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:2; (c) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:3 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:4; (d) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:5 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:6; (e) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:7 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:8; (f) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:11 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:12; (9) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:13 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:14; (h) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:15 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:16; (i) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:17 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:18; (]) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:19 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:20;
[0011] Em determinadas modalidades, o anticorpo monoclional iso- lado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à CLDN18.2 e é capaz de induzir a lise celular tumoral mediada por efetores através de citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC), fagocitose dependente de anticorpos (ADPC) e/ou citotoxicidade dependente de complemento (CDC), e/ou mediar o recrutamento de fármacos conjuga- dos, e/ou formar um anticorpo biespecífico com outro anticorpo mono- clonal ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo com o efeito de matar o câncer.
[0012] Em determinadas modalidades, o anticorpo monoclonal iso- lado ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo é quimérico.
[0013] Em determinadas modalidades, o anticorpo monoclonal iso- lado ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo é humano ou hu- manizado.
[0014] Em determinadas modalidades, o anticorpo monoclonal hu- manizado ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende: a. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:142 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:144; b. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:142 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:145; c. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:143 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:144; d. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:143 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:145; e. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:146 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:148; f. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:146 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:149; g. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:146 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:150; h. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência
7ITA4 de polipeptídeo da SEQ ID NO:147 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:148;
i. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:147 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:149;
j. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:147 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:150;
k. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:151 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:153;
|. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:152 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:153;
m. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:154 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:157;
n. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:155 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:157;
o. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:156 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:158;
p. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:159 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:163;
q. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:159 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:164;
r. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:160 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:163; s. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:160 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:164; t. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:161 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:165; ou u. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:162 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:165.
[0015] Também são fornecidos ácidos nucleicos isolados que codi- ficam os anticorpos monoclonais ou fragmentos de ligação a antígeno da invenção.
[0016] Também são fornecidos vetores que compreendem os áci- dos nucleicos isolados que codificam os anticorpos monoclonais ou fra- gmentos de ligação a antígenos da invenção.
[0017] Também são fornecidas células hospedeiras que compreen- dem os vetores compreendendo os ácidos nucleicos isolados que codi- ficam os anticorpos monoclionais ou fragmentos de ligação a antígenos da invenção.
[0018] Em determinadas modalidades, é fornecida uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo monoclonal isolado ou um fragmento de ligação a antígeno da invenção e um veículo farmaceuti- camente aceitável.
[0019] Também são fornecidos métodos para especificamente dire- cionar a CLDN18.2, mas não a CLDN18.1, em uma superfície de célula de câncer em um indivíduo que precisa do mesmo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma composição farmacêutica da inven- ção.
[0020] Também são fornecidos métodos de tratamento do câncer em um indivíduo que precisa do mesmo, compreendendo a administra- ção ao indivíduo das composições farmacêuticas da invenção. O cân- cer pode ser qualquer câncer líquido ou sólido, por exemplo, pode ser selecionado a partir de, mas não limitado a, câncer de pulmão, câncer gástrico, câncer do esôfago, câncer do ducto biliar, colangiocarcinoma, câncer do cólon, carcinoma hepatocelular, carcinoma de células renais, carcinoma urotelial da bexiga, melanoma metastático, câncer de mama, câncer de ovário, câncer cervical, câncer de cabeça e pescoço, câncer pancreático, glioma, glioblastoma e outros tumores sólidos, e linfoma não-Hodgkin (NHL), leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia linfocí- tica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), mieloma múltiplo (MM), leucemia mieloide aguda (AML) e outros tumores líquidos.
[0021] Também são fornecidos métodos para tratar uma doença in- flamatória em um indivíduo que precisa do mesmo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma composição farmacêutica da inven- ção.
[0022] Também são fornecidos métodos para produzir um anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo da invenção, compreendendo a cultura de uma célula compreendendo um ácido nu- cleico que codifica o anticorpo monoclonal ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo, em condições para produzir o anticorpo monoclo- nal ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo, e recuperando o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo da célula ou da cultura.
[0023] Também são fornecidos métodos para produção de uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo monoclonal ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo da invenção, compreen- dendo a combinação do anticorpo monoclonal ou do fragmento de liga- ção a antígeno do mesmo com um veículo farmaceuticamente aceitável para obter a composição farmacêutica.
[0024] Também são fornecidos métodos para determinar o nível de CLDN18.2 em um indivíduo. Os métodos compreendem (a) obter uma amostra do indivíduo; (b) colocar a amostra em contato com um anti- corpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo da invenção; e (c) determinar o nível de CLDN18.2 no indivíduo. Em determinadas moda- lidades, a amostra é uma amostra de tecido. A amostra de tecido pode, por exemplo, ser uma amostra de tecido de câncer. Em determinadas modalidades, a amostra é uma amostra de sangue.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0025] O sumário supracitado, bem como a descrição detalhada a seguir das modalidades preferenciais do presente pedido, serão mais bem compreendidos quando lidos em conjunto com os desenhos ane- xados. No entanto, deve-se entender que o pedido não se limita às modalidades precisas mostradas nos desenhos.
[0026] As Figs. 1A4-1D mostram a ligação dependente da dose de mAbs quiméricos purificados anti-CLDN18.2 (regiões VH e VL de mAbs de camundongo fundidas às regiões constantes da cadeia pesada de IgG1 humana e da cadeia leve capa, respectivamente) a um pool de células HEK293 transfectado de forma estável com CLDN18.2 humana de comprimento total pela análise FACS.
[0027] As Figs. 2A-2E mostram a ligação seletiva de mAbs quimé- ricos anti-CLDN18.2 para CLDN18.2 em comparação com CLDN18.1. Foram usados no experimento de pools de células HEK293 transfecta- das com CLDN18.2 humana de comprimento total e CLDN18.1, respec- tivamente. O pico cinza sombreado é representativo do grupo de trata- mento incubado apenas com o anticorpo secundário e o pico preto aberto é representativo do grupo de tratamento incubado com ambos mAb quimérico primário e o anticorpo secundário.
[0028] As Figs. 3A-3C mostram os resultados da ligação depen- dente da dose dos mAbs quiméricos anti-CLDN18.2 a uma linhagem celular estável HEK293-CLDN18.2 por análise FACS.
[0029] As Figs. 4A-4J mostram os histogramas para a ligação dos mAbs quiméricos anti-CLDN18.2 a uma linhagem celular estável HEK293-CLDN18.2. O pico cinza sombreado é representativo do grupo de tratamento incubado apenas com o anticorpo secundário e o pico preto aberto é representativo do grupo de tratamento incubado com am- bos mAb quimérico primário e o anticorpo secundário.
[0030] As Figs. 5A-5G mostram os resultados da ligação depen- dente da dose dos mAbs humanizados anti-CLDN18.2 a pools estáveis de HEK293-CLDN18.2 por análise FACS.
[0031] As Figs. 6A-GBE mostram os resultados da ligação depen- dente da dose dos mAbs humanizados anti-CLDN18.2 a uma linhagem celular estável HEK293-CLDN18.2 por análise FACS.
[0032] A Fig. 7 mostra a ligação dos mAbs humanizados anti- CLDN18.2 à linhagem celular de câncer NUGC-4 na concentração de mAb de 685 nM pela análise FACS.
[0033] As Figs. 8A-8B mostram os resultados da atividade de cito- toxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) de cinco mAbs anti-CLDN18.2 humanizados e um mAb quimérico anti-CLDN18.2.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0034] Várias publicações, artigos e patentes são citados ou descri- tos nos antecedentes e em todo o relatório descritivo; cada uma dessas referências é aqui incorporada a título de referência, em sua totalidade. A discussão de documentos, atos, materiais, dispositivos, artigos ou si- milares que foram incluídos no presente relatório descritivo tem como objetivo fornecer contexto para a invenção. Tal discussão não é uma admissão que qualquer ou todos esses assuntos fazem parte da técnica anterior com relação a quaisquer invenções reveladas ou reivindicadas.
[0035] A menos que definidos de outra forma, todos os termos téc- nicos e científicos utilizados aqui terão o mesmo significado que normal- mente entendido pelo versado na técnica a que a presente invenção pertence. Caso contrário, determinados termos usados neste docu- mento têm os significados definidos no relatório descritivo.
[0036] Deve ser observado que, Como usado aqui e nas reivindica- ções em anexo, as formas singulares “um”, “uma”, “o” e “a” incluem re- ferências no plural, a menos que o contexto determine claramente o contrário.
[0037] Exceto onde especificado em contrário, quaisquer valores numéricos, como uma concentração ou uma faixa de concentração aqui descrita, devem ser compreendidos como sendo modificados em todos os casos pelo termo "cerca de". Portanto, um valor numérico normal- mente inclui + 10% do valor recitado. Por exemplo, uma concentração de 1 mg/mL inclui 0,9 mg/mL a 1,1 mg/mL. Da mesma forma, um inter- valo de concentração de 1% a 10% (p/v) inclui 0,9% (p/v) a 11% (p/v). Como usado aqui, o uso de uma faixa numérica inclui expressamente todas as possíveis subfaixas, todos os valores numéricos individuais dentro dessa faixa, incluindo número inteiro, dentro de tais faixas e fra- ções de valores a menos que o contexto indique claramente o contrário.
[0038] Salvo indicação em contrário, o termo "pelo menos" que pre- cede uma série de elementos deve ser entendido para se referir a todos os elementos da série. Os versados na técnica reconhecerão ou serão capazes de usar com determinação não mais do que a rotina de expe- rimentação, muitos equivalentes das modalidades específicas da inven- ção descritas aqui. Tais equivalentes são destinados a ser englobados pela invenção.
[0039] Como usado aqui, os termos "compreende", "compreen- dendo", "incluí", "incluindo", "tem", "tendo", "contém" ou "contendo", ou qualquer outra variação destes, serão entendidos como implicando a inclusão de um número inteiro ou grupo de números inteiros, mas não a exclusão de qualquer outro número inteiro ou grupo de números inteiros e se destinam a ser não-exclusivos ou abertos. Por exemplo, uma com- posição, uma mistura, um processo, um método, um artigo ou um apa- relho que compreende uma lista de elementos não é necessariamente limitada apenas a esses elementos, mas pode incluir outros elementos não expressamente listados ou inerentes a tal composição, mistura, pro- cesso, método, artigo ou aparelho. Além disso, a não ser que seja indi- cado expressamente ao contrário, "ou" refere-se a um inclusivo ou, e não a um exclusivo ou. Por exemplo, uma condição A ou B é satisfeita por qualquer um dos seguintes: A é verdadeiro (ou presente) e B é falso (ou não presente), A é falso (ou não presente) e B é verdadeiro (ou pre- sente), e A e B são verdadeiros (ou presentes).
[0040] Como usado aqui, o termo conjuntivo "e/ou" entre vários ele- mentos recitados é entendido como abrangendo ambas opções indivi- duais e combinadas. Por exemplo, onde dois elementos são unidos por "e/ou", uma primeira opção se refere à aplicabilidade do primeiro ele- mento sem o segundo. Uma segunda opção se refere à aplicabilidade do segundo elemento sem o primeiro. Uma terceira opção se refere à aplicabilidade do primeiro e do segundo elementos juntos. Qualquer uma dessas opções é entendida como se enquadrando no significado e, portanto, atende ao requisito do termo "e/ou", Como usado aqui. À aplicabilidade simultânea de mais de uma das opções também é enten- dida como se enquadrando no significado e, portanto, satisfaz a exigên- cia do termo "e/ou".
[0041] Como usado aqui, o termo "consiste em" ou variações, como "consistir em" ou "consistindo em", conforme usado em toda a especifi- cação e reivindicações, indicam a inclusão de qualquer número inteiro ou grupo de números inteiros mencionados, mas nenhum número inteiro ou grupo adicional de números inteiros pode ser adicionado ao método,
estrutura ou composição especificados.
[0042] Como usado aqui, o termo "consiste essencialmente em", e variações como "consistem essencialmente de" ou "consistindo essen- cialmente de", como usado em toda a especificação e reivindicações, indicam a inclusão de qualquer número inteiro ou grupo de números in- teiros mencionados, e a inclusão opcional de qualquer número inteiro ou grupo de números inteiros, que não altere substancialmente as pro- priedades básicas ou novas do método ou composição especificados. Ver M.P.E.P. $ 2111.03.
[0043] Como usado aqui, "indivíduo" significa qualquer animal, de preferência um mamífero, com mais preferência um ser humano. O termo "mamífero", Como usado aqui, abrange qualquer mamífero. Exemplos de mamíferos incluem, mas não se limitam a, vacas, cavalos, ovelhas, porcos, gatos, cães, camundongos, ratos, coelhos, cobaias, macacos, seres humanos, etc., com mais preferência um ser humano.
[0044] As palavras "direita", "esquerda", "inferior" e "superior" desig- nam direções nos desenhos aos quais é feita referência.
[0045] Também deve ser entendido que os termos "cerca de", "aproximadamente", "geralmente", "substancialmente" e termos seme- lhantes, usados aqui quando se referem a uma dimensão ou caracterís- tica de um componente da invenção preferida, indica que a dimen- são/característica descrita não é um limite ou parâmetro rigoroso e não exclui variações menores que sejam funcionalmente iguais ou seme- lhantes, como seria entendido por um versado na técnica. No mínimo, tais referências que incluem um parâmetro numérico incluiriam varia- ções que, usando princípios matemáticos e industriais aceitos na téc- nica (por exemplo, arredondamento, medição ou outros erros sistemáti- cos, tolerâncias de fabricação, etc), não variariam o dígito menos signi- ficativo.
[0046] Os termos "idêntica" ou "identidade" percentual, no contexto de dois ou mais ácidos nucleicos ou sequências de polipeptídeos (por exemplo, anticorpos anti-CLDN18.2 e polinucleotídeos que os codifi- cam, polipeptídeos CLDN18.2 e polinucleotídeos CLDN18.2 que os co- dificam), referem-se a duas ou mais sequências ou subsequências que sejam iguais ou tenham uma percentagem especificada de resíduos de aminoácidos ou nucleotídeos iguais, quando comparadas e alinhadas para correspondência máxima, tal como medidas usando um dos se- guintes algoritmos de comparação sequencial ou por inspeção visual.
[0047] Para comparação de sequência, normalmente uma sequên- cia atua como uma sequência de referência, à qual as sequências de teste são comparadas. Ao usar um algoritmo de comparação de se- quência, as sequências de teste e de referência são inseridas em um computador, as coordenadas de subsequência são designadas, se ne- cessário, e os parâmetros do programa de algoritmo de sequência são designados. O algoritmo de comparação de sequência calcula a porcen- tagem da identidade da sequência para as sequências de teste em re- lação à sequência de referência, com base nos parâmetros do programa designado.
[0048] O alinhamento ideal de sequências para comparação pode ser realizado, por exemplo, pelo algoritmo de homologia local de Smith e Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), pelo algoritmo de alinha- mento de homologia de Needleman e Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), pela busca pelo método de similaridade de Pearson e Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988), por implementações com- putadorizadas usando esses algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA e TFASTA no Pacote de Software de Genética de Wisconsin, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI), ou por inspeção visual (ver em geral, Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, uma joint venture entre a Greene Publishing
Associates, Inc. e John Wiley e Sons, Inc., (Suplemento 1995) (Ausu- bel)).
[0049] Exemplos de algoritmos adequados para determinar a per- centagem de identidade da sequência e a similaridade da sequência são os algoritmos BLAST e BLAST 2.0, descritos em Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 e Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, respectivamente. O software para realizar análise de BLAST está disponível publicamente através do National Center for Biotechnology Information (NCBI). Esse algoritmo envolve primeiro identificar pares de sequência de pontuação alta (HSPs) identificando palavras curtas de comprimento W na sequência de consulta, que cor- respondem ou satisfazem uma pontuação de limite de valor positivo T quando alinhadas com uma palavra do mesmo comprimento em uma sequência de banco de dados. T é chamado de limite de pontuação da palavra de vizinhança (Altschul et al, supra). Essas ocorrências iniciais de palavras de vizinhança agem como sementes para iniciar pesquisas para encontrar HSPs mais longos que as contenham. As ocorrências de palavras são então estendidas em ambas as direções ao longo de cada sequência até que a pontuação de alinhamento cumulativa possa ser aumentada.
[0050] As pontuações cumulativas são calculadas usando, para se- quências de nucleotídeos, os parâmetros M (pontuação de recompensa para um par de resíduos correspondentes; sempre > 0) e N (pontuação de penalidade para resíduos com erro de correspondência; sempre < O). Para sequências de aminoácidos, uma matriz de pontuação é usada para calcular a pontuação cumulativa. A extensão das ocorrências de palavras em cada direção é interrompida quando: a pontuação de ali- nhamento cumulativa cai pela quantidade X de seu valor máximo atin- gido; a pontuação cumulativa vai para zero ou abaixo, devido ao acú- mulo de um ou mais alinhamentos de resíduos de pontuação negativa;
ou o final de qualquer sequência é atingido. Os parâmetros do algoritmo de BLAST W, T e X determinam a sensibilidade e a velocidade do ali- nhamento. O programa BLASTN (para sequências de nucleotídeos) usa como padrão um comprimento de palavra (W) de 11, uma expectativa (E) de 10, M=5, N=-44, e uma comparação de ambas as fitas. Para se- quências de aminoácidos, o programa BLASTP usa como padrão um comprimento de palavra (W) de 3, uma expectativa (E) de 10 e a matriz de pontuação BLOSUM6?2 (ver Henikoff e Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (1989)).
[0051] Além de calcular a percentagem de identidade da sequência, o algoritmo BLAST também executa uma análise estatística da seme- lhança entre duas sequências (ver, por exemplo, Karlin e Altschul, Proc. Nat'. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 (1993)). Uma medida de seme- lhança fornecida pelo algoritmo de BLAST é a menor probabilidade de soma (P(N)), que fornece uma indicação da probabilidade pela qual uma correspondência entre duas sequências de nucleotídeos ou aminoáci- dos ocorreria por acaso. Por exemplo, um ácido nucleico é considerado semelhante a uma sequência de referência se a probabilidade de soma menor numa comparação do ácido nucleico de teste com o ácido nu- cleico de referência for menor que cerca de 0,1, com mais preferência menor que cerca de 0,01 e com a máxima preferência menor que cerca de 0,001.
[0052] Uma outra indicação de que duas sequências de ácido nu- cleico ou polipeptídeos são substancialmente idênticas é que o polipep- tídeo codificado pelo primeiro ácido nucleico é imunologicamente rea- tivo cruzado com o polipeptídeo codificado pelo segundo ácido nucleico, conforme descrito abaixo. Assim, um polipeptídeo é tipicamente subs- tancialmente idêntico a um segundo polipeptídeo, por exemplo, onde os dois peptídeos diferem apenas por substituições conservadoras. Outra indicação de que duas sequências de ácido nucleico são substancial- mente idênticas é que as duas moléculas se hibridizam entre si em con- dições rigorosas. Anticorpos
[0053] Ainvenção refere-se geralmente a anticorpos anti-CLDN18.2 isolados, ácidos nucleicos e vetores de expressão codificando os anti- corpos, células recombinantes contendo os vetores e composições compreendendo os anticorpos. Métodos para produzir os anticorpos e métodos para usar os anticorpos para tratar doenças como câncer e doenças inflamatórias. Os anticorpos da invenção possuem uma ou mais propriedades funcionais desejáveis, incluindo, mas não se limi- tando a, ligação de alta afinidade a CLDN18.2, alta especificidade a CLDN18.2, a capacidade de estimular citotoxicidade dependente do complemento (CDC), fagocitose dependente de anticorpos (ADPC) e/ou citotoxicidade celular mediada dependente de anticorpos (ADCC) contra células que expressam CLDN18.2, e a capacidade de inibir o cresci- mento tumoral em indivíduos e modelos animais quando administrados isoladamente ou em combinação com outras terapias anticâncer.
[0054] Em um aspecto geral, a invenção refere-se a anticorpos mo- noclonais isolados ou fragmentos de ligação a antígenos do mesmo que se ligam à CLDN18.2.
[0055] Conforme aqui usado, o termo "anticorpo" é usado em um sentido amplo e inclui moléculas de imunoglobulina ou anticorpo, inclu- indo anticorpos e fragmentos de anticorpo humanos, humanizados, compostos e quiméricos que são monoclionais ou policlonais. Em geral, os anticorpos são proteínas ou cadeias peptídicas que apresentam es- pecificidade de ligação a um antígeno específico. As estruturas de anti- corpos são bem conhecidas. As imunoglobulinas podem ser atribuídas a cinco classes principais (IgA, IgD, IgE, IgG e IgM) dependendo da se- quência de aminoácidos de domínio constante de cadeia pesada. IgA e IgG são subclassificadas ainda como isotipos IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 e I9gG4. Assim, os anticorpos da invenção podem ser de qualquer uma das cinco classes principais ou subclasses correspondentes. De preferência, os anticorpos da invenção são IgG1, IgG2, IgG3 ou I1g9G4. As cadeias leves do anticorpo de espécies vertebradas podem ser atri- buídas a um dos dois tipos claramente distintos, capa e lambda, basea- das nas sequências de aminoácidos dos seus domínios constantes. Consequentemente, os anticorpos da invenção podem conter um domí- nio constante de cadeia leve capa ou lambda. De acordo com modali- dades específicas, os anticorpos da invenção incluem regiões constan- tes de cadeia pesada e/ou leve de anticorpos humanos ou de ratos. Além dos domínios constantes pesados e leves, os anticorpos contêm uma região de ligação a antígeno que é constituída por uma região va- riável de cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada, cada uma das quais contém três domínios (ou seja, regiões determinantes da com- plementaridade 1-3; CDR1, CDR2 e CDR3). Os domínios da região va- riável de cadeia leve são alternativamente referidos como LCDR1, LCDR?2 e LCDR3, e os domínios da região variável de cadeia pesada são alternativamente referidos como HCDR1, HCDR2 e HCDR3.
[0056] Como usado aqui, o termo "anticorpo isolado" refere-se a um anticorpo substancialmente livre de outros anticorpos com especificida- des antigênicas diferentes (por exemplo, um anticorpo isolado que se liga especificamente a CLDN18.2 está substancialmente livre de anti- corpos que não se ligam a CLDN18.2). Além disso, um anticorpo iso- lado está substancialmente livre de outros materiais celulares e/ou pro- dutos químicos.
[0057] Como usado aqui, o termo "anticorpo monoclonal” refere-se a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substan- cialmente homogêneos, ou seja, os anticorpos individuais que compre- endem a população são idênticos, exceto para possíveis mutações que ocorrem naturalmente que pode estar presente em pequenas quantida- des. Os anticorpos monoclonais da invenção podem ser feitos pelo mé- todo de hibridoma, tecnologia de exibição de fago, tecnologia de clona- gem de genes de linfócitos simples ou por métodos de DNA recombi- nante. Por exemplo, os anticorpos monoclonais podem ser produzidos por uma hibridoma que inclui uma célula B obtida de um animal não humano transgênico, como um camundongo ou rato transgênico, com um genoma compreendendo um transgene humano de cadeia pesada e um transgene de cadeia leve.
[0058] Como usado aqui, o termo "fragmento de ligação a antígeno" refere-se a um fragmento de anticorpo, como, por exemplo, um diabody, um Fab, um Fab', um F(ab')2, um fragmento Fv, um fragmento Fv esta- bilizado de dissulfeto (dsFv), um (dsFv)2, um dsFv biespecífico (dsFv- dsFv'), um diabody estabilizado por dissulfeto (diabody ds), uma molé- cula de anticorpo de cadeia única (scFv), uma molécula de domínio único (sdab), um dímero scFv (diabody bivalente), um anticorpo multi- específico formado a partir de uma parte de um anticorpo compreen- dendo uma ou mais CDRs, um anticorpo de domínio único camelizado, um nanocorpo, um anticorpo de domínio, um anticorpo de domínio biva- lente, ou qualquer outro fragmento de anticorpo que se liga a um antí- geno, mas não compreende uma estrutura completa de anticorpos. Um fragmento de ligação a antígeno é capaz de se ligar ao mesmo antígeno ao qual o anticorpo original ou um fragmento de anticorpo original se liga. De acordo com modalidades específicas, o fragmento de ligação a antígeno compreende uma região variável de cadeia leve, uma região constante de cadeia leve e um segmento Fd de cadeia pesada. De acordo com outras modalidades específicas, o fragmento de ligação a antígeno compreende Fab e F(ab').
[0059] Como usado aqui, o termo "anticorpo de cadeia única" re- fere-se a um anticorpo convencional de cadeia única no campo, que compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variá- vel de cadeia leve conectada por um peptídeo curto de cerca de 15 a cerca de 20 aminoácidos. Como usado aqui, o termo "anticorpo de do- mínio único" refere-se a um anticorpo convencional de domínio único no campo, que compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região constante de cadeia pesada ou que compreende apenas uma região variável de cadeia pesada.
[0060] Como usado aqui, o termo "anticorpo humano" refere-se a um anticorpo produzido por um ser humano ou um anticorpo tendo uma sequência de aminoácidos correspondente a um anticorpo produzido por um ser humano usando qualquer técnica conhecida no campo. Esta definição de um anticorpo humano inclui anticorpos intactos ou de com- primento completo, fragmentos dos mesmos e/ou anticorpos compreen- dendo pelo menos um polipeptídeo humano de cadeia pesada e/ou de cadeia leve.
[0061] Como usado aqui, o termo "anticorpo humanizado" refere-se a um anticorpo não humano modificado para aumentar a homologia da sequência em relação à de um anticorpo humano, de modo que as pro- priedades de ligação a antígeno do anticorpo sejam mantidas, mas a sua antigenicidade no corpo humano seja reduzida.
[0062] Como usado aqui, o termo "anticorpo quimérico" refere-se a um anticorpo em que a sequência de aminoácidos da molécula de imu- noglobulina é derivada de duas ou mais espécies. A região variável das cadeias leves e pesadas corresponde frequentemente à região variável de um anticorpo derivado de uma espécie de mamífero (por exemplo, camundongo, rato, coelho, etc) com a especificidade, afinidade e capa- cidade desejada, enquanto as regiões constantes correspondem às se- quências de um anticorpo derivado de outra espécie de mamífero (por exemplo, ser humano) para evitar a obtenção de uma resposta imune nessa espécie.
[0063] Como usado aqui, o termo "anticorpo multiespecífico" refere- se a um anticorpo que compreende uma pluralidade de sequências de domínios variáveis de imunoglobulina, em que uma primeira sequência de domínio variável de imunoglobulina da pluralidade tem especifici- dade de ligação para um primeiro epitopo e uma segunda sequência de domínio variável de imunoglobulina da pluralidade tem especificidade de ligação para um segundo epitopo. Em uma modalidade, o primeiro e o segundo epitopos estão no mesmo antígeno, por exemplo, a mesma proteína (ou subunidade de uma proteína multimérica). Em uma moda- lidade, o primeiro e o segundo epitopos se sobrepõem ou se sobrepõem substancialmente. Em uma modalidade, o primeiro e o segundo epito- pos não se sobrepõem ou não se sobrepõem substancialmente. Em uma modalidade, o primeiro e o segundo epitopos estão em antígenos diferentes, por exemplo, proteínas diferentes (ou subunidade diferentes de uma proteína multimérica). Em uma modalidade, um anticorpo mul- tiespecífico compreende um terceiro, quarto ou quinto domínio variável de imunoglobulina. Em uma modalidade, um anticorpo multiespecífico é uma molécula de anticorpo biespecífico, uma molécula de anticorpo triespecífico ou uma molécula de anticorpo tetraespecífico.
[0064] Como usado aqui, o termo "anticorpo biespecífico" refere-se a um anticorpo multiespecífico que liga não mais do que dois epitopos ou dois antígenos. Um anticorpo biespecífico é caracterizado por uma primeira sequência de domínio variável de imunoglobulina que tem es- pecificidade de ligação para um primeiro epitopo e uma segunda se- quência de domínio variável de imunoglobulina que tem especificidade de ligação para um segundo epitopo. Em uma modalidade, o primeiro e o segundo epitopos estão no mesmo antígeno, por exemplo, a mesma proteína (ou subunidade de uma proteína multimérica). Em uma moda- lidade, o primeiro e o segundo epitopos se sobrepõem ou se sobrepõem substancialmente. Em uma modalidade, o primeiro e o segundo epito- pos estão em antígenos diferentes, por exemplo, proteínas diferentes (ou subunidade diferentes de uma proteína multimérica).. Em uma mo- dalidade, um anticorpo biespecífico compreende uma sequência de do- mínio variável de cadeia pesada e uma sequência de domínio variável de cadeia leve que tem especificidade de ligação para um primeiro epi- topo e uma sequência de domínio variável de cadeia pesada e uma se- quência de domínio variável de cadeia leve que tem especificidade de ligação para um segundo epitopo. Em uma modalidade, um anticorpo biespecífico compreende um meio anticorpo, ou fragmento do mesmo, tendo especificidade de ligação para um primeiro epitopo e meio anti- corpo, ou fragmento do mesmo, tendo especificidade de ligação para um segundo epitopo. Em uma modalidade, um anticorpo biespecífico compreende um scFv, ou fragmento do mesmo, tendo especificidade de ligação para um primeiro epitopo, e um scFv, ou fragmento do mesmo, tendo especificidade de ligação para um segundo epitopo. Em uma mo- dalidade, o primeiro epitopo está localizado no CLDN18.2 e o segundo epitopo está localizado em PD-1, PD-L1, TIM-3, LAG-3, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD33, CD3, CD73, CDA47, TIP-1, apelina, DLL3, receptor de folato alfa ou outros supressores imunes associados ao tu- mor ou antígenos de superfície.
[0065] Como usado aqui, o termo "CLDN18.2" refere-se à claudina 18 variante 2, claudina-18.2 ou claudina-18a2.1, que pertence à família claudina de proteínas transmembrana. A CLDN18.2 é especificamente expressada na superfície das células epiteliais no estômago (Niimi et al., Mol Cell Biol. 2001; 21:7380-7390) e torna-se um dos principais com- ponentes estruturais da estreita junção entre as células epiteliais (Sahin et al., Physiol Rev. 2013; 93:525-569). O termo "CLDN18.2 humana" refere-se a uma CLDN18.2 originada de um ser humano. Uma sequên-
cia exemplar de aminoácidos de uma CLDN18.2 humana é represen- tada no Genbank, nº de acesso AAL15637.1 (SEQ ID NO:141).
[0066] Como usado aqui, um anticorpo que "se liga especificamente a CLDN18.2" refere-se a um anticorpo que se liga a uma CLDN18.2, de preferência uma CLDN18.2 humana, com um KD de 1x107 M ou me- nos, de preferência 1x10 M ou menos, de preferência 5x 10º M ou me- nos, 1x10º M ou menos, 5x107*º M ou menos, ou 1x10º M ou menos. O termo "KD" refere-se à constante de dissociação, que é obtida da ra- zão de Kd para Ka (isto é, Kd/Ka) e é expressada como uma concentra- ção molar (M). Os valores de KD para os anticorpos podem ser deter- minados usando métodos na técnica tendo em vista a presente revela- ção. Por exemplo, a KD de um anticorpo pode ser determinada usando a ressonância de plasmon de superfície, como por exemplo, usando um sistema de biossensor, por exemplo, um sistema Biacore&, ou usando tecnologia de interferometria de bio-camada, como um sistema Octet RED96.
[0067] Quanto menor o valor de KD de um anticorpo, maior a afini- dade que o anticorpo se liga a um antígeno alvo.
[0068] De acordo com um aspecto específico, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região determinante de complementa- ridade de cadeia pesada 1 (HCDR1), uma HCDR2, uma HCDR3, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (LCDR1), uma LCDR?2 e uma LCDR3, com as sequências de polipeptídeos de: (1) SEQ ID NOs: 33, 34, 35, 63, 64 e 65, respectivamente; (2) SEQ ID NOs: 21, 22, 23, 51, 52 e 53, respectivamente; (3) SEQ ID NOs: 24, 25, 26, 54, 55 e 56, respectivamente; (4) SEQ ID NOs: 27, 28, 29, 57, 58 e 59, respectivamente; (5) SEQ ID NOs: 30, 31, 32, 60, 61 e 62, respectivamente; (6) SEQ ID NOs: 36, 37, 38, 66, 67 e 68, respectivamente;
(7) SEQ ID NOs: 39, 40, 41, 69, 70 e 71, respectivamente; (8) SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 72, 73 e 74, respectivamente; (9) SEQ ID NOs: 45, 46, 47, 75, 76 e 77, respectivamente; ou (10) SEQ ID NOs: 48, 49, 50, 78, 79 e 80, respectivamente; em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente à CLDN18.2, de preferência a CLDN18.2 humana.
[0069] De acordo com um aspecto específico, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região determinante de complementa- ridade de cadeia pesada 1 (HCDR1), uma HCDR2, uma HCDR3, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (LCDR1), uma LCDR?2 e uma LCDR3, com as sequências de polipeptídeos de: (1) SEQ ID NOs: 93, 94, 95, 123, 124 e 125, respectivamente; (2) SEQ ID NOs: 81, 82, 83, 111, 112 e 113, respectivamente; (3) SEQ ID NOs: 84, 85, 86, 114, 115 e 116, respectivamente; (4) SEQ ID NOs: 87, 88, 89, 117, 118 e 119, respectivamente; (5) SEQ ID NOs: 90, 91, 92, 120, 121 e 122, respectivamente; (6) SEQ ID NOs: 96, 97, 98, 126, 127 e 128, respectivamente; (7) SEQ ID NOs: 99, 100, 101, 129, 130 e 131, respectiva- mente; (8) SEQ ID NOs: 102, 103, 104, 132, 133 e 134, respectiva- mente; (9) SEQ ID NOs: 105, 106, 107, 135, 136 e 137, respectiva- mente; ou (10) SEQ ID NOs: 108, 109, 110, 138, 139 e 140, respectiva- mente; em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente à CLDN18.2, de preferência a CLDN18.2 humana.
[0070] De acordo com outro aspecto específico, a invenção refere-
se a um anticorpo monoclonal isolado ou a um fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pe- sada com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 85%, de pre- ferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma das SEQ ID NOs: 9, 1,3, 5,7, 11,13, 15, 17 ou 19, ou uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais pre- ferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma das SEQ ID NOs: 10, 2, 4, 6, 8, 12, 14, 16, 18 ou 20. De acordo com uma modalidade específica, o anticorpo monoclonal isolado ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO: 9, 1,3, 5,7, 11, 13, 15, 17 ou 19, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO: 10, 2, 4, 6, 8, 12, 14, 16, 18 ou 20, respectiva- mente.
[0071] De acordo com outro aspecto específico, a invenção refere- se a um anticorpo monoclional isolado ou fragmento de ligação a antí- genos do mesmo da invenção compreendendo: a. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:9 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:10; b. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:1 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:2; c. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:3 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:4; d. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:5 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:6; e. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:7 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:8; f. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:11 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:12;
9. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:13 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:14; h. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:15 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:16; i. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:17 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:18; j. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:19 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:20;
[0072] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 21, 22, 23, 51, 52 e 53, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo monoclo- nal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência
95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:1, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de po- lipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferên- cia 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:2. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:1; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:2.
[0073] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 24, 25, 26, 54, 55 e 56, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo monoclo- nal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:3, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de po- lipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferên- cia 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:4. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:3; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:4.
[0074] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LOCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 27, 28, 29, 57,
58 e 59, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo monoclio- nal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:5, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de po- lipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferên- cia 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:6. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:5; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:6.
[0075] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 30, 31, 32, 60, 61 e 62, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo monoclio- nal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:7, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de po- lipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferên- cia 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:8. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:7; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:8.
[0076] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 33, 34, 35, 63, 64 e 65, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo monoclo- nal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:9, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de po- lipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferên- cia 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:10. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:9; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:10.
[0077] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LOCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 36, 37, 38, 66, 67 e 68, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo monoclo- nal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:11, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais prefe- rência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:12. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:11; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:12.
[0078] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 39, 40, 41, 69, 70 e 71, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo monoclio- nal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:13, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais prefe- rência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:14. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:13; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:14.
[0079] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 72, 73 e 74, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo monoclo- nal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID
NO:15, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais prefe- rência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:16. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:15; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:16.
[0080] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 45, 46, 47,75, 76 e 77, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo monoclio- nal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:17, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais prefe- rência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:18. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO: 17; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:18.
[0081] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 48, 49, 50, 78,
79 e 80, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo monoclio- nal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:19, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais prefe- rência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:20. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:19; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:20.
[0082] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LOCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 81, 82, 83, 111, 112 e 113, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo mono- clonal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:1, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de po- lipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferên- cia 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:2. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:1; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:2.
[0083] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 84, 85, 86, 114, 115 e 116, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo mono- clonal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:3, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de po- lipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferên- cia 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:4. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:3; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:4.
[0084] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 87, 88, 89, 117, 118 e 119, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo mono- clonal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:5, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de po- lipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferên- cia 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:6. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:5; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:6.
[0085] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 90, 91, 92, 120, 121 e 122, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo mono- clonal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:7, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de po- lipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferên- cia 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:8. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:7; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:8.
[0086] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 93, 94, 95, 123, 124 e 125, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo mono- clonal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID
NO:9, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de po- lipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferên- cia 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:10. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:9; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:10.
[0087] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 96, 97, 98, 126, 127 e 128, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo mono- clonal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de polipep- tídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:11, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais prefe- rência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:12. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:11; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:12.
[0088] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LOCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 99, 100, 101, 129, 130 e 131, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compre- ende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de po- lipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferên- cia 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:13, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais prefe- rência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:14. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:13; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:14.
[0089] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 102, 103, 104, 132, 133 e 134, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compre- ende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de po- lipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferên- cia 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:15, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais prefe- rência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:16. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:15; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:16.
[0090] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 105, 106, 107, 135, 136 e 137, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compre- ende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de po- lipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferên- cia 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:17, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais prefe- rência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:18. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:17; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:18.
[0091] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, com- preendendo HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3, tendo as sequências de polipeptídeo das SEQ ID NOs: 108, 109, 110, 138, 139 e 140, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento ligação a antígeno do mesmo compre- ende uma região variável de cadeia pesada com uma sequência de po- lipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais preferên- cia 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:19, e uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 85%, de preferência 90%, com mais prefe- rência 95% ou mais, como 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à SEQ ID NO:20. De preferência, o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:19; e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:20.
[0092] De acordo com outro aspecto específico, a invenção refere- se a um anticorpo monoclional isolado ou fragmento de ligação a antí- genos do mesmo da invenção, em que o anticorpo ou fragmento de li- gação a antígeno do mesmo é quimérico.
[0093] De acordo com outro aspecto específico, a invenção refere- se a um anticorpo monoclional isolado ou fragmento de ligação a antí- genos do mesmo da invenção, em que o anticorpo ou fragmento de li- gação a antígeno do mesmo é humano ou humanizado.
[0094] De acordo com outro aspecto específico, a invenção refere- se a um anticorpo monoclonal humanizado isolado ou fragmento de li- gação a antígeno do mesmo, em que o anticorpo humanizado isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende: a. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:142 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:144; b. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:142 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:145; c. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:143 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:144; d. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:143 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:145; e. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:146 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:148;
f. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:146 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:149;
9. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:146 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:150; h. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:147 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:148; i. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:147 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:149; j.: uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:147 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:150; k. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:151 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:153; |. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:152 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:153; m. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:154 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:157; n. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:155 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:157; o. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:156 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:158;
p. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:159 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:163; q. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:159 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:164; r. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:160 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:163; s. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:160 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:164; t. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:161 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:165; ou u. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:162 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:165.
[0095] Em outro aspecto geral, a invenção refere-se a um ácido nu- cleico isolado codificando um anticorpo monocional ou fragmento de li- gação a antígeno do mesmo da invenção. Será entendido por aqueles versados na técnica que a sequência de codificação de uma proteína pode ser alterada (por exemplo, substituída, excluída, inserida, etc) sem alterar a sequência de aminoácidos da proteína. Assim, será entendido por aqueles versados na técnica que as sequências de ácido nucleico codificando anticorpos monoclonais ou fragmentos de ligação a antí- geno do mesmo da invenção podem ser alteradas sem mudar as se- quências de aminoácidos das proteínas.
[0096] Em outro aspecto geral, a invenção refere-se a um vetor compreendendo um ácido nucleico isolado codificando um anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo da invenção. Qualquer vetor conhecido por aqueles versados na técnica em vista da presente revelação pode ser usado, como um plasmídeo, um cosmídeo, um vetor de fago ou um vetor viral. Em algumas modalidades, o vetor é um vetor de expressão recombinante como um plasmídeo. O vetor pode incluir qualquer elemento para estabelecer uma função convencional de um vetor de expressão, por exemplo, um promotor, elemento de ligação ao ribossomo, terminador, potencializador, marcador de seleção e ori- gem da replicação. O promotor pode ser um promotor constitutivo, indu- zível ou repressível. Vários vetores de expressão capazes de fornecer ácidos nucleicos a uma célula são conhecidos na técnica e podem ser usados aqui para a produção de um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo na célula. Técnicas de clonagem convencionais ou síntese de genes artificiais podem ser usadas para gerar um vetor de expressão recombinante de acordo com as modalidades da inven- ção.
[0097] Em outro aspecto geral, a invenção refere-se a uma célula hospedeira compreendendo um ácido nucleico isolado codificando um anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo da invenção. Qualquer célula hospedeira conhecida por aqueles versados na técnica em vista da presente revelação pode ser usada para a ex- pressão recombinante de anticorpos ou fragmentos de ligação a antí- geno do mesmo da invenção. Em algumas modalidades, as células hospedeiras são as células de E. coli TG1 ou BL21 (para expressão de, por exemplo, um anticorpo scFv ou Fab), células CHO-DG44 ou CHO- K1 ou células HEK293 (para expressão de, por exemplo, um anticorpo IgG de comprimento total). De acordo com modalidades específicas, o vetor de expressão recombinante é transformado em células hospedei- ras por métodos convencionais, como transfecção química, choque tér- mico ou eletroporação, onde é integrado de forma estável no genoma da célula hospedeira, de modo que o ácido nucleico recombinante seja efetivamente expressado.
[0098] Em outro aspecto geral, a invenção refere-se a um método para produzir um anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação a antí- geno do mesmo da invenção, compreendendo a cultura de uma célula compreendendo um ácido nucleico que codifica o anticorpo monocional ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo, em condições para produzir um anticorpo monoclonal ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo da invenção, e recuperando o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo da célula ou da cultura da célula (por exemplo, do sobrenadante). Os anticorpos expressados ou fragmentos de ligação a antígeno do mesmo podem ser colhidos a partir das células e purificados de acordo com as técnicas convencionais conhecidas na área e descritas aqui. Composições farmacêuticas
[0099] Em outro aspecto geral, a invenção refere-se a uma compo- sição farmacêutica compreendendo um anticorpo monoclonal isolado ou um fragmento de ligação a antígeno da invenção e um veículo far- maceuticamente aceitável. O termo "composição farmacêutica", tal como é usada aqui, significa um produto compreendendo um anticorpo da invenção junto com um veículo farmaceuticamente aceitável. Os an- ticorpos da invenção e as composições que os compõem também são úteis na fabricação de um medicamento para aplicações terapêuticas mencionadas aqui.
[0100] Como usado aqui, o termo "veículo" refere-se a qualquer ex- cipiente, diluente, carga, sal, tampão, estabilizador, solubilizador, óleo, lipídio, vesícula contendo lipídeos, microesfera, encapsulamento lipos- sômico ou outro material bem conhecido na técnica para uso em formu- lações farmacêuticas. Será entendido que as características do veículo,
excipiente ou diluente dependerão da via de administração de uma apli- cação específica. Como usado aqui, o termo "veículo farmaceutica- mente aceitável" refere-se a um material não tóxico que não interfere na eficácia de uma composição de acordo com a invenção ou a atividade biológica de uma composição de acordo com a invenção. De acordo com as modalidades específicas, tendo em conta a presente revelação, qualquer veículo farmaceuticamente aceitável adequado para uso numa composição farmacêutica de anticorpos pode ser usado na invenção.
[0101] A formulação de ingredientes farmaceuticamente ativos com veículos farmaceuticamente aceitáveis é conhecida na técnica, por exemplo, Remington: he Science and Practice of Pharmacy (por exem- plo, 21º edição (2005) e qualquer edição posterior). Exemplos não limi- tantes de ingredientes adicionais incluem: tampões, diluentes, solven- tes, agentes reguladores de tonicidade, conservantes, estabilizadores e agentes quelantes. Um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis podem ser usados na formulação das composições farmacêuticas da invenção.
[0102] Em uma modalidade da invenção, a composição farmacêu- tica é uma formulação líquida. Um exemplo preferido de uma formulação líquida é uma formulação aquosa, ou seja, uma formulação composta por água. A formulação líquida pode compreender uma solução, uma suspensão, uma emulsão, uma microemulsão, um gel e outros. Uma formulação aquosa geralmente compreende pelo menos 50% de água p/p, ou pelo menos 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% ou pelo menos 95% p/p de água.
[0103] Em uma modalidade, a composição farmacêutica pode ser formulada como injetável que pode ser injetada, por exemplo, por meio de um dispositivo de injeção (por exemplo, uma seringa ou uma bomba de infusão). A injeção pode ser administrada por via subcutânea, intra- muscular, intraperitoneal, intravítrea ou intravenosa, por exemplo.
[0104] Em outra modalidade, a composição farmacêutica é uma for- mulação sólida, por exemplo, uma composição secada por congela- mento ou secada por atomização, que pode ser usada como está, ou para a qual o médico ou o paciente adiciona solventes e/ou diluentes antes do uso. As formas farmacêuticas sólidas podem incluir comprimi- dos, como comprimidos prensados e/ou comprimidos revestidos e cáp- sulas (por exemplo, cápsulas duras ou de gelatina mole). A composição farmacêutica também pode estar na forma de sachês, dragas, pós, grâ- nulos, pastilhas ou pós para reconstituição, por exemplo.
[0105] As formas de dosagem podem ser de liberação imediata, caso em que podem compreender um veículo solúvel ou dispersível em água, ou podem ser de liberação atrasada, liberação sustentada ou li- beração modificada, nesse caso elas podem incluir polímeros insolúveis em água que regulam a taxa de dissolução da forma farmacêutica no trato gastrointestinal ou sob a pele.
[0106] Em outras modalidades, a composição farmacêutica pode ser aplicada intranasalmente, intrabucalmente ou sublingualmente.
[0107] O pH em uma formulação aquosa pode estar entre pH 3 e pH 10. Em uma modalidade da invenção, o pH da formulação é de cerca de 7,0 a cerca de 9,5. Em outra modalidade da invenção, o pH da for- mulação é de cerca de 3,0 a cerca de 7,0.
[0108] Em outra modalidade da invenção, a composição farmacêu- tica compreende um tampão. Exemplos não limitantes de tampões in- cluem: arginina, ácido aspártico, bicina, citrato, fosfato de hidrogênio dissódico, ácido fumárico, glicina, glicilglicina, histidina, lisina, ácido ma- leico, ácido málico, acetato de sódio, carbonato de sódio, di-hidrogeno- fosfato de sódio, fosfato de sódio, succinato, ácido tartárico, tricina e tris(hidroximetil)-aminometano e suas misturas. O tampão pode estar presente individualmente ou no agregado, nem uma concentração de cerca de 0,01 mg/ml a cerca de 50 mg/ml, por exemplo, de cerca de 0,1 mg/ml a cerca de 20 mg/ml. Composições farmacêuticas compreen- dendo cada um desses tampões específicos constituem modalidades alternativas da invenção.
[0109] Em outra modalidade da invenção, a composição farmacêu- tica compreende um conservante. Exemplos não limitantes de conser- vantes incluem: cloreto de benzetônio, ácido benzoico, álcool benzílico, bronopol, 4-hidroxibenzato de butila, clorobutanol, clorocresol, cloro-he- xidina, clorfenesina, o-cresol, m-cresol, p-cresol, etil 4-hidroxibenzoato, imidureia, metil 4-hidroxibenzoato, fenol, 2-fenoxietanol, 2-feniletanol, 4- hidroxibenzoato de propila, desidroacetato de sódio, tiomerosal, e suas misturas. O conservante pode estar presente individualmente ou no agregado, nem uma concentração de cerca de 0,01 mg/ml a cerca de 50 mg/ml, por exemplo, de cerca de 0,1 mg/ml a cerca de 20 mg/ml. Composições farmacêuticas compreendendo cada um desses conser- vantes específicos constituem modalidades alternativas da invenção.
[0110] Em outra modalidade da invenção, a composição farmacêu- tica compreende um agente isotônico. Exemplos não limitantes da mo- dalidade incluem um sal (como cloreto de sódio), um aminoácido (como glicina, histidina, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptofano e trionina), um alditol (como glicerol, 1,2-propanediol propileniglico!), 1,3- propanodiol, e 1,3-butanodiol), polietilenoglicol (por exemplo, PEG400) e suas misturas. Outro exemplo de um agente isotônico inclui um açú- car. Exemplos não limitantes de açúcares podem ser mono, di ou po- lissacarídeos, ou glucanos solúveis em água, incluindo, por exemplo, frutose, glicose, manose, sorbose, xilose, maltose, lactose, sacarose, trealose, dextrano, pululano, dextrina, ciclodextrina, alfa e beta-HPCD, amido solúvel, amido hidroxietila e carboximetilcelulose de sódio. Outro exemplo de um agente isotônico é um álcool de açúcar, no qual o termo "álcool de açúcar" é definido como um hidrocarboneto C(4-8) com pelo menos um grupo -OH. Exemplos não limitantes de alcoóis de açúcar incluem manitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xilitol e arabitol. O agente isotônico pode estar presente individualmente ou no agregado, nem uma concentração de cerca de 0,01 mg/ml a cerca de 50 mg/ml, por exemplo, de cerca de 0,1 mg/ml a cerca de 20 mg/ml. Composições farmacêuticas compreendendo cada um desses agentes isotônicos es- pecíficos constituem modalidades alternativas da invenção.
[0111] Em outra modalidade da invenção, a composição farmacêu- tica compreende um agente quelante. Exemplos não limitantes de agen- tes quelantes incluem ácido cítrico, ácido aspártico, sais de ácido etile- nodiaminetetra-acético (EDTA) e suas misturas. O agente quelante pode estar presente individualmente ou no agregado, nem uma concen- tração de cerca de 0,01 mg/ml a cerca de 50 mg/ml, por exemplo, de cerca de 0,1 mg/ml a cerca de 20 mg/ml. Composições farmacêuticas compreendendo cada um desses agentes quelantes específicos consti- tuem modalidades alternativas da invenção.
[0112] Em outra modalidade da invenção, a composição farmacêu- tica compreende um estabilizante. Exemplos não limitantes de estabili- zantes incluem um ou mais inibidores de agregação, um ou mais inibi- dores de oxidação, um ou mais tensoativos e/ou um ou mais inibidores de protease.
[0113] Em outra modalidade da invenção, a composição farmacêu- tica compreende um estabilizante, em que o referido estabilizante é car- boxi/hidroxiculose e seus derivados (como HPC, HPC-SL, HPC-L e HPMC), ciclodextrinas, 2-metiltioetanol, polietilenoglicol (como PEG 3350), álcool polivinílico (PVA), polivinil pirrolidona, sais (como cloreto de sódio), substâncias contendo enxofre, como monotioglicerol, ou ácido tioglicólico. O estabilizante pode estar presente individualmente Ou no agregado, nem uma concentração de cerca de 0,01 mg/ml a cerca de 50 mg/ml, por exemplo, de cerca de 0,1 mg/ml a cerca de 20 mg/ml.
Composições farmacêuticas compreendendo cada um desses estabili- zantes específicos constituem modalidades alternativas da invenção.
[0114] Em modalidades adicionais da invenção, a composição far- macêutica compreende um ou mais tensoativos, preferencialmente um tensoativo, pelo menos um tensoativo, ou dois tensoativos diferentes. O termo "tensoativo" refere-se a quaisquer moléculas ou íons que sejam compostos de uma parte solúvel em água (hidrofílica) e uma parte solú- vel em gordura (lipofílica). O tensoativo pode, por exemplo, ser selecio- nado no grupo que consiste em tensoativos aniônicos, tensoativos ca- tiônicos, tensoativos não iônicos e/ou tensoativos zwiteriônicos. O ten- soativo pode estar presente individualmente ou no agregado em uma concentração de cerca de 0,1 mg/ml a cerca de 20 mg/ml. Composições farmacêuticas compreendendo cada um desses tensoativos específicos constituem modalidades alternativas da invenção.
[0115] Em uma modalidade adicional da invenção, a composição farmacêutica compreende um ou mais inibidores de protease, como, por exemplo, EDTA e/ou ácido clorídrico de benzamidina (HCI). O inibidor de protease pode estar presente individualmente ou no agregado em uma concentração de cerca de 0,1 mg/ml a cerca de 20 mg/ml. Com- posições farmacêuticas compostas por cada um desses inibidores es- pecíficos de protease constituem modalidades alternativas da invenção.
[0116] Em outro aspecto geral, a invenção refere-se a um método para produção de uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo monoclonal ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo da invenção, compreendendo a combinação um anticorpo monocional ou do fragmento de ligação a antígeno do mesmo com um veículo far- maceuticamente aceitável para obter a composição farmacêutica. Métodos de uso
[0117] Em outro aspecto geral, a invenção refere-se a um método de direcionamento de CLDN18.2 em uma superfície de célula de câncer em um indivíduo para alcançar a morte de células, o método compre- ende administrar ao indivíduo um anticorpo monoclonal isolado ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo que se liga especificamente a CLDN18.2 ou uma composição farmacêutica compreendendo o anti- corpo monoclonal isolado ou o fragmento de ligação a antígeno da in- venção. A ligação do anticorpo monoclonal CLDN18.2 ou fragmento de ligação a antígeno a CLDN18.2 pode mediar a citotoxicidade depen- dente do complemento (CDC), fagocitose dependente de anticorpos (ADPC) e/ou citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) ou outros efeitos que resultam na morte da célula cancerosa alvo. O anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo pode, por exemplo, servir para recrutar fármacos conjugados e/ou pode formar um anticorpo biespecífico com outro anticorpo monoclional para mediar a morte da célula cancerosa alvo.
[0118] A atividade funcional de anticorpos e fragmentos de ligação a antígeno do mesmo que ligam a CLDN18.2 pode ser caracterizada por métodos conhecidos na técnica e como descrito aqui. Os métodos de caracterização de anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno do mesmo que se ligam a CLDN18.2 incluem, mas não se limitam a, en- saios de afinidade e especificidade, incluindo a análise Biacore, ELISA e OctetRed, e detecção da ligação de anticorpos e fragmentos de liga- ção a antígenos a CLDN18.2 em células (quer células transfectadas com CLDN18.2 quer células que naturalmente expressam CLDN18.2) por FACS. De acordo com as modalidades específicas, os métodos para caracterizar anticorpos e fragmentos de ligação a antígeno do mesmo que ligam CLDN18.2 incluem os descritos abaixo.
[0119] Em outro aspecto geral, a invenção refere-se a um método para tratar um câncer em um indivíduo que precisa do mesmo, compre- endendo administrar ao indivíduo um anticorpo monoclional isolado ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo que se liga especifica- mente a CLDN18.2 ou uma composição farmacêutica da invenção. O câncer pode, por exemplo, pode ser selecionado a partir de, mas não limitado a, câncer de pulmão, câncer gástrico, câncer do esôfago, cân- cer do ducto biliar, colangiocarcinoma, câncer do cólon, carcinoma he- patocelular, carcinoma de células renais, carcinoma urotelial da bexiga, melanoma metastático, câncer de mama, câncer de ovário, câncer cer- vical, câncer de cabeça e pescoço, câncer pancreático, glioma, glioblas- toma e outros tumores sólidos, e linfoma não-Hodgkin (NHL), leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mi- eloide crônica (CML), mieloma múltiplo (MM), leucemia mieloide aguda (AML) e outros tumores líquidos.
[0120] Em outro aspecto geral, a invenção refere-se a um método para tratar uma doença inflamatória a um indivíduo que precisa do mesmo, compreende administrar ao indivíduo um anticorpo monocional isolado ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo que se liga especificamente a CLDN18.2 ou uma composição farmacêutica da in- venção.
[0121] De acordo com as modalidades da invenção, a composição farmacêutica compreende uma quantidade terapêutica eficaz de um an- ticorpo anti-CLDN18.2 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo. Como usado aqui, o termo "quantidade terapeuticamente eficaz" refere- se a uma quantidade de um ingrediente ou componente ativo que sus- cita a resposta biológica ou medicinal desejada em um indivíduo. A quantidade terapeuticamente eficaz pode ser determinada empirica- mente e de maneira rotineira, em relação ao objetivo declarado.
[0122] Como usado aqui com referência a anticorpos anti-CLDN18.2 ou fragmentos de ligação a antígeno do mesmo, uma quantidade terapeu- ticamente eficaz significa uma quantidade do anticorpo anti-CLDN18.2 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que modula uma res- posta imune em um indivíduo que necessita do mesmo. Além disso, Como usado aqui com referência a anticorpos anti-CLDN18.2 ou frag- mentos de ligação a antígeno dos mesmos, uma quantidade terapeuti- camente eficaz significa uma quantidade do anticorpo anti-CLDN18.2 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que resulta no tratamento de uma doença, um distúrbio ou uma condição; previne ou retarda a progressão da doença, do distúrbio ou da condição; ou reduz ou alivia completamente os sintomas associados à doença, ao distúrbio ou à con- dição.
[0123] De acordo com modalidades específicas, a doença, o trans- torno ou a condição a ser tratado é o câncer, de preferência um câncer selecionado do grupo consistindo em câncer de pulmão, câncer gás- trico, câncer do esôfago, câncer do ducto biliar, colangiocarcinoma, cân- cer do cólon, carcinoma hepatocelular, carcinoma de células renais, car- cinoma urotelial da bexiga, melanoma metastático, câncer de mama, câncer de ovário, câncer cervical, câncer de cabeça e pescoço, câncer pancreático, glioma, glioblastoma e outros tumores sólidos, e linfoma não-Hodgkin (NHL), leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia linfocí- tica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), mieloma múltiplo (MM), leucemia mieloide aguda (AML) e outros tumores líquidos. De acordo com outras modalidades específicas, a doença, o distúrbio ou a condição a ser tratado é uma doença inflamatória.
[0124] De acordo com as modalidades específicas, uma quantidade terapeuticamente eficaz refere-se à quantidade de terapia que é sufici- ente para atingir um, dois, três, quatro ou mais dos seguintes efeitos: (i) reduzir ou melhorar a gravidade da doença, do distúrbio ou da condição a ser tratada ou um sintoma associado a ela; (ii) reduzir a duração da doença, do distúrbio ou da condição a ser tratada ou um sintoma asso- ciado a ela; (iii) prevenir a progressão da doença, do distúrbio ou da condição a ser tratada, ou um sintoma associado a ela; (iv) provocar a regressão da doença, do distúrbio ou da condição a tratar, ou um sin- toma associado a ela; (v) prevenir o desenvolvimento ou o aparecimento da doença, do distúrbio ou da condição a ser tratada, ou de um sintoma associado a ela; (vi) prevenir a recorrência da doença, do distúrbio ou da condição a ser tratada, ou de um sintoma associado a ela; (vii) redu- zir a hospitalização de um indivíduo que tenha a doença, o distúrbio ou a condição a ser tratada, ou um sintoma associado a ela; (viii) reduzir o tempo de internação de um indivíduo que tenha a doença, o distúrbio ou a condição a ser tratada, ou um sintoma associado a ela; (ix) aumen- tar a sobrevivência de um indivíduo com a doença, o distúrbio ou a con- dição a ser tratada, ou um sintoma associado a ela; (xi) inibir ou reduzir a doença, o distúrbio ou a condição a ser tratada, ou um sintoma asso- ciado a ela; e/ou (xii) melhorar ou acentuar o(s) efeito(s) profilático(s) ou terapêutico(s) de outra terapia.
[0125] A quantidade ou dosagem terapeuticamente eficaz pode variar de acordo com vários fatores, como a doença, o distúrbio ou a condição a ser tratada, os meios de administração, o local-alvo, o estado fisiológico do indivíduo (incluindo, por exemplo, idade, peso corporal, saúde), se o indivíduo é humano ou animal, outros medicamentos administrados e se o tratamento é profilático ou terapêutico. As dosagens de tratamento são tituladas de forma ideal para otimizar a segurança e a eficácia.
[0126] De acordo com modalidades específicas, as composições descritas aqui são formuladas para serem adequadas à via de adminis- tração pretendida para um indivíduo. Por exemplo, as composições descritas aqui podem ser formuladas para serem adequadas para ad- ministração intravenosa, subcutânea ou intramuscular.
[0127] Como usado aqui, os termos "tratar", "tratando" e "trata- mento" destinam-se a se referir a uma melhoria ou reversão de pelo menos um parâmetro físico mensurável relacionado a um câncer e/ou uma doença inflamatória, um distúrbio ou uma condição, que não é ne- cessariamente perceptível no indivíduo, mas pode ser perceptível no in- divíduo. Os termos "tratar", "tratando e "tratamento" também podem se referir a causar regressão, prevenir a progressão ou, pelo menos, retar- dar a progressão da doença, do distúrbio ou da condição. Em uma mo- dalidade particular, "tratar", "tratando" e "tratamento" referem-se a um alívio, prevenção do desenvolvimento ou início, ou redução na duração de um ou mais sintomas associados à doença, ao distúrbio ou à condi- ção, como um tumor ou mais preferencialmente um câncer. Em uma incorporação específica, "tratar", "tratando" e "tratamento" referem-se à prevenção da recorrência da doença, do distúrbio ou da condição. Em uma modalidade específica, "tratar", "tratando" e "tratamento" referem- se a um aumento na sobrevivência de um indivíduo que tem a doença, o distúrbio ou a condição. Em uma modalidade específica, "tratar", "tra- tando” e "tratamento" referem-se à eliminação da doença, do distúrbio ou da condição no indivíduo.
[0128] De acordo com as modalidades específicas, são fornecidas composições usadas no tratamento de um câncer e/ou uma doença in- flamatória, um distúrbio ou uma condição. Para terapia de câncer, as composições fornecidas podem ser usadas em combinação com outro tratamento, incluindo, mas não limitado a, uma quimioterapia, um mAb anti-CD20, um mAb anti-TIM-3, um mAb anti-LAG-3, um mAb anti- EGFR, um mAb anti-HER-2, um mAb anti-CD19, um mAb anti-CD33, um mAb anti-CD47, um mAb anti-DLL-3, um mAb anti-apelina, um mAb anti-TIP-1, um mAb anti-FOLR1, um mAb anti-CTLA-4, um mAb anti- PD-L1, um mAb anti-PD-1, outros fármacos imuno-oncológicos, um agente antiangiogênico, uma radioterapia, um conjugado anticorpo-fár- maco (ADC), uma terapia alvo ou outros fármacos anticâncer. Anticor- pos anti-CLDN18.2 podem ser usados para construir anticorpos biespe- cíficos com mAbs parceiros contra PD-1, PD-L1, LAG3, TIM-3, CTLA-4,
B4/74 EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD33, CD73, CD47, CD3, apelina, DLL-3, TIP-1, receptor de folato alfa (FOLR1) e/ou outros antígenos de super- fície tumoral para tratar cânceres/tumores que expressam tanto a CLDN18.2 quanto o antígeno tumoral específico associado.
[0129] Como usado aqui, o termo "em combinação", no contexto da administração de duas ou mais terapias a um indivíduo, refere-se ao uso de mais de uma terapia. O uso do termo "em combinação" não restringe a ordem em que as terapias são administradas a um indivíduo. Por exemplo, uma primeira terapia (por exemplo, uma composição des- crita aqui) pode ser administrada antes de (por exemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 16 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas ou 12 semanas antes), concomitantemente com, ou subsequente a (por exemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 ho- ras, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 16 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas, ou 12 semanas após) a administração de uma segunda terapia a um indivíduo.
[0130] Em outro aspecto geral, a invenção refere-se a um método de determinação de um nível de CLDN18.2 em um indivíduo. Os méto- dos compreendem (a) obter uma amostra do indivíduo; (b) colocar a amostra em contato com um anticorpo monoclonal ou fragmento de li- gação a antígeno do mesmo da invenção; e (c) determinar um nível de CLDN18.2 no indivíduo.
[0131] Como usado aqui, "amostra" refere-se a uma amostra bioló- gica isolada de um indivíduo e pode incluir, mas não se limita a, sangue total, soro, plasma, células sanguíneas, células endoteliais, biópsias de tecido (por exemplo, um tecido de câncer), fluido linfático, líquido ascite, fluido intersticial, medula óssea, fluido cérebro-espinhal, saliva, muco,
escarro, suor, urina, ou qualquer outra secreção, excreção ou outros fluidos corporais. Uma "amostra de sangue" refere-se ao sangue total ou a qualquer fração dele, incluindo células sanguíneas, soro e plasma.
[0132] Em determinadas modalidades, o nível de CLDN18.2 no in- divíduo pode ser determinado usando ensaios selecionados de, mas não limitados a, um ensaio Western blot, imuno-histoquímica (IHC) e um ensaio ELISA. Os níveis relativos de proteína podem ser determinados usando a análise Western blot e IHC, e os níveis absolutos de proteína podem ser determinados usando um ensaio ELISA. Ao determinar os níveis relativos de CLDN18.2, os níveis de CLDN18.2 podem ser deter- minados entre pelo menos duas amostras, por exemplo, entre amostras do mesmo indivíduo em diferentes pontos de tempo, entre amostras de diferentes tecidos no mesmo indivíduo e/ou entre amostras de diferen- tes indivíduos. Alternativamente, ao determinar os níveis absolutos de CLDN18.2, como por um ensaio ELISA, o nível absoluto de CLDN18.2 na amostra pode ser determinado criando um padrão para o ensaio ELISA antes de testar a amostra. Um versado na técnica entenderá quais técnicas analíticas usar para determinar o nível de CLDN18.2 em uma amostra do indivíduo usando os anticorpos ou fragmentos de liga- ção ao antígeno do mesmo da invenção.
[0133] O uso de métodos para determinar um nível de CLDN18.2 em uma amostra de um indivíduo pode levar ao diagnóstico de níveis anormais (elevados, reduzidos ou insuficientes) de CLDN18.2 em uma doença e tomar decisões terapêuticas apropriadas. Essa doença pode ser selecionada, mas não se limita a, um câncer e uma doença inflama- tória. Além disso, através do monitoramento dos níveis de CLDN18.2 em um indivíduo, o risco de desenvolver uma doença conforme indicado acima pode ser determinado com base no conhecimento do nível de CLDN18.2 em uma doença específica e/ou durante a progressão da do- ença específica.
MODALIDADES
[0134] A invenção também fornece as seguintes modalidades não limitantes.
[0135] Modalidade 1 é um anticorpo monocional isolado ou frag- mento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região de- terminante de complementaridade de cadeia pesada 1 (HCDR1), HCDR?2, HCDR3, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (LCDR1), LCDR2 e LCDR3, com as sequências de poli- peptídeos de: (1) SEQ ID NOs: 33, 34, 35, 63, 64 e 65, respectivamente; (2) SEQ ID NOs: 21, 22, 23, 51, 52 e 53, respectivamente; (3) SEQ ID NOs: 24, 25, 26, 54, 55 e 56, respectivamente; (4) SEQ ID NOs: 27, 28, 29, 57, 58 e 59, respectivamente; (5) SEQ ID NOs: 30, 31, 32, 60, 61 e 62, respectivamente; (6) SEQ ID NOs: 36, 37, 38, 66, 67 e 68, respectivamente; (7) SEQ ID NOs: 39, 40, 41, 69, 70 e 71, respectivamente; (8) SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 72, 73 e 74, respectivamente; (9) SEQ ID NOs: 45, 46, 47, 75, 76 e 77, respectivamente; ou (10) SEQ ID NOs: 48, 49, 50, 78, 79 e 80, respectivamente; em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente à claudina 18.2 (CLDN18.2), de preferência se liga especificamente à CLDN18.2 humana.
[0136] Modalidade 2 é um anticorpo monoclonal isolado ou frag- mento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região de- terminante de complementaridade de cadeia pesada 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (LCDR1), LCDR2 e LCDR3, com as sequências de poli- peptídeos de: (1) SEQ ID NOs: 93, 94, 95, 123, 124 e 125, respectivamente; (2) SEQ ID NOs: 81, 82, 83, 111, 112 e 113, respectivamente;
(3) SEQ ID NOs: 84, 85, 86, 114, 115 e 116, respectivamente; (4) SEQ ID NOs: 87, 88, 89, 117, 118 e 119, respectivamente; (5) SEQ ID NOs: 90, 91, 92, 120, 121 e 122, respectivamente; (6) SEQ ID NOs: 96, 97, 98, 126, 127 e 128, respectivamente; (7) SEQ ID NOs: 99, 100, 101, 129, 130 e 131, respectiva- mente; (8) SEQ ID NOs: 102, 103, 104, 132, 133 e 134, respectiva- mente; (9) SEQ ID NOs: 105, 106, 107, 135, 136 e 137, respectiva- mente; ou (10) SEQ ID NOs: 108, 109, 110, 138, 139 e 140, respectiva- mente; em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente à claudina 18.2 (CLDN18.2), de preferência se liga especificamente à CLDN18.2 humana.
[0137] Modalidade 3 é o anticorpo monoclonal isolado ou o frag- mento de ligação a antígeno da modalidade 1 ou 2, compreendendo uma região variável de cadeia pesada tendo uma sequência de polipep- tídeo pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO: 9, 1, 3, 5, 7, 11, 13, 15, 17 ou 19, ou uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO: 10,2,4,6,8, 12, 14,16, 18 ou 20.
[0138] Modalidade 4 é o anticorpo monoclional isolado ou o frag- mento de ligação a antígeno da modalidade 1 ou 2, compreendendo (a) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:9 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:10; (b) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:1 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:2;
(c) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:3 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:4; (d) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:5 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:6; (e) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:7 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:8; (f) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:11 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:12; (9) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:13 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:14; (h) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:15 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:16; (i) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:17 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:18; (]) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:19 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:20;
[0139] Modalidade 5 é o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno de qualquer uma das modalidades 1 a 4, em que o anticorpo monoclonal ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo é capaz de induzir a lise celular tumoral mediada pelo efetor.
[0140] Modalidade 6 é o anticorpo monoclional isolado ou o frag- mento de ligação a antígeno de qualquer uma das modalidades 1 a 5,
em que o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno é quimérico.
[0141] Modalidade 7 é o anticorpo monoclonal isolado ou o frag- mento de ligação a antígeno de qualquer uma das modalidades 1 a 6, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo é humano ou humanizado.
[0142] Modalidade 8 é o anticorpo monoclional isolado ou o frag- mento de ligação a antígeno da modalidade 7, em que o anticorpo hu- manizado isolado ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo com- preende: a. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:142 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:144; b. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:142 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:145; c. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:143 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:144; d. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:143 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:145; e. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:146 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:148; f. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:146 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:149; g. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:146 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:150;
h. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:147 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:148;
i. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:147 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:149;
j. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:147 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:150;
k. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:151 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:153;
|. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:152 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:153;
m. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:154 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:157;
n. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:155 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:157;
o. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:156 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:158;
p. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:159 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:163;
q. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:159 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:164;
r. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:160 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:163; s. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:160 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:164; t. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:161 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:165; ou u. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:162 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:165.
[0143] Modalidade 9 é o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno de qualquer uma das modalidades 1 a 8, em que o anticorpo humanizado isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é capaz de induzir a lise celular tumoral mediada por efetores através de citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC), fa- gocitose dependente de anticorpos (ADPC) e/ou citoxicidade depen- dente de complemento (CDC), e/ou mediar o recrutamento de fármacos conjugados, e/ou formar um anticorpo biespecífico com outro mAb ou fra- gmento de ligação a antígeno do mesmo com efeito de matar o câncer.
[0144] Modalidade 10 é um ácido nucleico isolado codificando o an- ticorpo monoclonal ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 9.
[0145] Modalidade 11 é um vetor compreendendo o ácido nucleico isolado da modalidade 10.
[0146] Modalidade 12 é uma célula hospedeira compreendendo o vetor da modalidade 11.
[0147] Modalidade 13 é uma composição farmacêutica compreen-
dendo o anticorpo monoclional isolado ou fragmento de ligação a antí- geno de qualquer uma das modalidades 1 a 9 e um veículo farmaceuti- camente aceitável.
[0148] Modalidade 14 é um método para direcionar a CLDN18.2 em uma superfície de célula de câncer em um indivíduo que precisa do mesmo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma compo- sição farmacêutica da modalidade 13.
[0149] Modalidade 15 é um método de tratamento do câncer em um indivíduo que precisa do mesmo, compreendendo a administração ao indivíduo da composição farmacêutica da modalidade 13.
[0150] Modalidade 16 é o método da modalidade 15, em que o cân- cer é selecionado do grupo consistindo em câncer de pulmão, câncer gástrico, câncer do esôfago, câncer do ducto biliar, colangiocarcinoma, câncer do cólon, carcinoma hepatocelular, carcinoma de células renais, carcinoma urotelial da bexiga, melanoma metastático, câncer de mama, câncer de ovário, câncer cervical, câncer de cabeça e pescoço, câncer pancreático, glioma, glioblastoma e outros tumores sólidos, e linfoma não-Hodgkin (NHL), leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia linfocí- tica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), mieloma múltiplo (MM), leucemia mieloide aguda (AML) e outros tumores líquidos.
[0151] Modalidade 17 é um método para tratar uma doença infla- matória em um indivíduo que precisa do mesmo, compreendendo a ad- ministração ao indivíduo de uma composição farmacêutica da modali- dade 13.
[0152] Modalidade 18 é um método para produzir o anticorpo mo- noclonal ou fragmento de ligação a antígeno de qualquer uma das mo- dalidades 1 a 9, compreendendo a cultura de uma célula compreen- dendo um ácido nucleico que codifica o anticorpo monoclonal ou o fra- gmento de ligação a antígeno do mesmo, em condições para produzir o anticorpo monoclonal ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo,
e recuperando o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo da célula ou da cultura.
[0153] Modalidade 19 é um método para produção de uma compo- sição farmacêutica compreendendo o anticorpo monoclonal ou um fra- gmento de ligação a antígeno do mesmo das modalidades 1 a 9, com- preendendo a combinação do anticorpo monoclonal ou do fragmento de ligação a antígeno do mesmo com um veículo farmaceuticamente acei- tável para obter a composição farmacêutica.
[0154] Modalidade 20 é um método para determinar um nível de CLDN18.2 em um indivíduo, o método compreendendo: a. obter uma amostra do indivíduo; b. colocar a amostra em contato com o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de qualquer uma das modalidades 1 a 9; e c. determinar um nível de CLDN18.2 no indivíduo.
[0155] Modalidade 21 é o método da modalidade 20, em que a amostra é uma amostra de tecido.
[0156] Modalidade 22 é o método da modalidade 21, em que a amostra de tecido é uma amostra de tecido de câncer.
[0157] Modalidade 23 é o método da modalidade 20, em que a amostra é uma amostra de sangue.
EXEMPLOS Exemplo 1: Identificação de anticorpos monoclonais anti-CLDN18.2
[0158] Os camundongos foram imunizados com células expres- sando CLDN18.2 humana exógena e a titulação plasmática foi determi- nada pela seleção de células ativadas por fluorescência (FACS). Os esplenócitos foram colhidos e fundidos com uma linhagem celular de mieloma para produzir hibridomas. Os hibridomas foram revestidos em placas de 384 poços e os sobrenadantes de poços individuais foram triados pelo FACS usando células HEK293 expressando CLDN18.2. Os clones positivos foram contra-triados contra a CLDN18.1 humana ex- pressadas em células HEK293 por FACS. Os clones positivos superio- res foram isolados e sequenciados.
[0159] As sequências de regiões variáveis de cadeia pesada e leve para anticorpos monoclonais anti-CLDN18.2 são fornecidas nas Tabe- las 1 e 2, e as regiões CDR para anticorpos monoclonais anti-CLDN18.2 são fornecidas nas Tabelas 3-6. Tabela 1: Sequências de regiões variáveis de cadeia pesada para mAbs anti-CLDN18.2 clones SEQ ID
EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYGMSWVROTPDK 2-c3 RLEWVATISGGGSYTYYLDSVKGRFTISRDIAKNTLYLOQMSSLKSE | 1
DTAMYFCAROSRGNAMDYWGQGTSVTVSS
EVOLQAASGPELVKPGASVKMSCKASGYSFTGYNMHWVKQSHG 2-P8 KSLEWIGYIDPYNGVTNYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYVQLNSLT | 3
SEDSAVYYCARWGGNYVDYWGQOGTTLKVSS
EVOQLVESGGALVKPGGSLKLSCAASGFTFSKYAMSWVRQTPEKR 3-E21 LEWVAFISNGGSYTYCLDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSE | 5
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KVOLQQASGPDLVEPGASVKISCKASGYTITDNYMHWVKQKPGOG 5-E22 — | LEWIGEIYPGSGNTYYNERFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSE
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QVOLQQASGPELVKPGASVKISCKASGYAFSDYWMNWVKQRPGK 8-G12 | GLEWIGQIYPGYGDTKYNENFKGTATLTADKSSSTAYMQLSSLTS | 13
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EVQLAQASGPELVKPGASVKMSCKASGYAFTSYVMHWVKQKPGQ 10-K2 | GLEWIGYINPYSDGTRYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTS | 17
EDSAVYYCTRIYYGNAMDYWGQGTSVTVSS
QVALAQPGADLVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWINWVKQRPGQ 15-D6 — | GLEWIGNIYPGRSSTNYNEKFKSKATLTVDTSSSTAYMOQLSSLAS | 19
DDSAVYYCSRLSRGNAMDYWGQGTSVTVSS VH: região variável de cadeia pesada
Tabela 2: Sequências de regiões variáveis de cadeia leve para mAbs anti-CLDN18.2 clones fem E To
DIVMTOSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQK 2-c3 PGQPPKLLINWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAV | 2
YYCQNDYSYPLTFGAGTKLELK
DIKMTAQSPSSMYASLGERVTITCKASQDINRYLSWFQQKPGKSPKT 2-P8 LIYRANRLVDGVPSRFSGSFSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDE | 4
FPLTFGAGTKLELK
DIVMTOSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQK 3-E21 PGQOPPKLLINWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVOAEDLSV
YYCQNDYFYPLTFGAGTKLELK
DIVMTOSPSSLTVTAGGKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQK 3-P21 PGQPPKLLINWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAV
YYCQNDYFYPLTFGAGTKLELK
DIQMNQSPSSLSASLGDTITITCHARQNINVWLSWYQQKSGNIPKLL 5-E22 — | INKASNLHTGVPSRFSGSGSGTRFTLTISSLOPEDMATYYCQQGAN | 10
YPLTFGGGTKLEIK
DIVMTOSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSLSLLNSGNQKNYLTWYQQK 6-111 PGQPPKLLIVWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSMQAEDLAV | 12
YSCQNAYSYPLTFGAGTKLELK
DIVMTOSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQK 8-G12 | PGOPPKLLINWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVOTEDLAIY | 14
YCQNAYIYPLTFGAGTKLELK
DIVMTOSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYQQK 10-J10 | PGQPPKLLINWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAV | 16
FYCONDYFYPFTFGSGTKLEIK
DIVMTOSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQK 10-K2 | PGQPPKLLINWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAV | 18
YYCOQNDYSYPFTFGSGTKLEIK
DIVMTOSPSSLTVTAGEKVTMSCRSSQSLLNSGNQKSYLTWYQAQK 15-D6 — | PGQPPKLLINWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAV | 20
YYCQNDYYYPFTFGSGTKLEIK VL: região variável de cadeia leve Tabela 3: Regiões de CDR 1-3 de cadeia pesada para mAbs anti- CLDN18.2 clones de HC CDR1 HC CDR2 NO HC CDR3 mAb GFTFSSYG ISGGGSYT |22 ARQSRGNAMDY GYSFTGYN IDPYNGVT |25 ARWGGNYVDY 3-E21 GFTFSKYA ISNGGSYT |28 ARHDKGNALDY 3-P21 GYSFTGYN INPYFGST ARGAYYGNAMDY clones de z HC CDR1 NÃO | Hc CDR2 NO HC CDR3 mAb GFIFSSFG ISSGRSTM |37 ARGGFYGNSLDY 10-K2 GYAFTSYV INPYSDGT |46 TRIYYGNAMDY
[0160] HC: cadeia pesada; CDR: região determinante de comple- mentaridade; ID: SEQ ID NO
[0161] As CDRs de HC para mAbs anti-CLDN18.2 foram determi- nadas usando o método IMGT (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212).
Tabela 4: Regiões de CDR 1-3 de cadeia leve para mAbs anti- CLDN18.2 clones de LC CDR1 NO |LCCDR2 |NO |LCCDR3 NO mAb [1596 — Josunsonasr [76 was — 70 [anormvem so |
[0162] LC: cadeia leve; CDR: região determinante de complemen- taridade; NO: SEQ ID NO
[0163] As CDRs de LC para mAbs anti-CLDN18.2 foram determina- das usando o método IMGT (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212).
Tabela 5: Regiões de CDR 1-3 de cadeia pesada para mAbs anti- CLDN18.2 clones HC CDR1 NO | Hc CDR2 HC CDR3 No [25 osmonA ju vonrnmovmNaKAS 155 ameoNADY 156 | [E omFaÇAS | AsNcosyIVoDDSVAS 55 | AmAoKNADDY ss | [PP osmonTA o NorosTAAAS [5 ARoATONANDY [5 | [5 emma 6 vssorsmvanTvKS 157 arcGFraNSIoY so | [607 | orasomAN | so avraYsoTaNENFKS | 100 | arGYYaNAVDY | 19 |
NIVPGRSSTNYNEKFIKS
[0164] HC: cadeia pesada; CDR: região determinante de comple- mentaridade; NO: SEQ ID NO
[0165] As CDRs de HC para mAbs anti-CLDN18.2 foram determi- nadas usando uma combinação de métodos IMGT (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212) e Kabat (Elvin A. Kabat et al, Se- quences of Proteins of Immunological Interest 5º ed. (1991)). Tabela 6: Regiões de CDR 1-3 de cadeia leve para mAbs anti- CLDN18.2 clones LC CDR1 NO |LCCDR2 LC CDR3 No de mAb KSSQSLLNSGNOKNYLT [111 | WASTRES QNDYSYPLT [113 KASQDINRYLS 114 |RANRLVD |115 |LQOYDEFPLT |116 3-E21 KSSQOSLLNSGNOKNYLT | 117 | WASTRES |118 | ONDYFYPLT 119 3-P21 KSSQOSLLNSGNOKNYLT | 120 | WASTRES |121 | ONDYFYPLT | 122 5-E22 HARQNINVWLS 123 |KASNLHT [124 | QQGANYPLT | 125 6-111 KSSLSLLNSGNQKNYLT | 126 | WASTRES |127 | ONAYSYPLT | 128 8-G12 KSSQSLLNSGNOKNYLT [129 | WASTRES QNAYIYPLT [131 10-10 | KSSQTLLNSGNQKNYLT |132 | WASTRES QNDYFYPFT | 134 10-K2 — | KSSOSLLNSGNOKNYLT |135 | WASTRES |/136 | QNDYSYPFT | 137 15-D6 RSSQSLLNSGNQKSYLT WASTRES QNDYYYPFT
[0166] LC: cadeia leve; CDR: região determinante de complemen- taridade; NO: SEQ ID NO
[0167] As CDRs de LC para mAbs anti-CLDN18.2 foram determina- das usando uma combinação de métodos IMGT (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212) e Kabat (Elvin A. Kabat et al, Se- quences of Proteins of Immunological Interest 5º ed. (1991)). Exemplo 2: Produção e purificação de mAbs a partir de meios de cultura de células 293E transfectadas
[0168] Para a obtenção de mAbs quiméricos recombinantes anti- CLDN18.2, os vetores de expressão contendo as regiões variáveis do camundongo (VH e VL) fundidas às regiões constantes da cadeia pe- sada de IgG1 humana e da cadeia leve capa, respectivamente, foram transfectados transientemente para células 293E. Os anticorpos recom- binantes produzidos na suspensão das células 293E foram purificados por cromatografia de afinidade de proteína A. Exemplo 3: Análise de ligação FACS de anticorpos anti-CLDN18.2 purificados
[0169] As células HEK293 estavelmente transfectadas com CLDN18.2 humana de comprimento total foram transferidas para uma placa de 96 poços. Cera de 50.000 células foram incubadas com mAbs anti-CLDN18.2 quiméricos purificados (regiões variáveis de mAbs de camundongo fundidas com as regiões constantes da cadeia pesada de IgG1 humana e da cadeia leve capa, respectivamente) em várias con- centrações por 15 minutos em gelo. Em alguns casos, foram usadas
100.000 células por poço. As células foram então centrifugadas por 5 minutos e lavadas uma vez com tampão FACS (HBSS suplementado com 0,1% BSA e 0,05% azida sódica). As células foram então incuba- das com anticorpos policlonais de IgG anti-humana de cabra conjuga- dos com FITC (Thermo Fisher, cat. nº H10301) e incubadas em gelo por mais 15 minutos. As células foram então lavadas com tampão FACS uma vez e ressuspensas no tampão FACS. As células foram então cor- ridas através do Attune NxT e os dados foram analisados pelo software
Attune NxT. Os dados de FACS são expressados como intensidade mé- dia de fluorescência (MFI).
[0170] A ligação dos mAbs anti-CLDN18.2 quiméricos a células HEK293 estavelmente transfectadas com CLDN18.2 humana de com- primento total (pool de células estáveis) foi analisada por FACS. Os re- sultados para a ligação dependente da dose são fornecidos nas Figs. 1A-1D. A ligação dos mAbs anti-CLDN18.2 quiméricos às células HEK293 estavelmente transfectadas com CLDN18.2 humana de com- primento total e CLDN18.1 (pools de células estáveis), respectivamente, foi avaliada usando 10 Nm mAbs usando FACS. Os resultados da aná- lise de ligação FACS são fornecidos nas Figs. 2A-2E. Os dados indicam que esses mAbs se ligam especificamente à CLDN18.2 e não se ligam à CLDN18.1.
[0171] Os mAbs anti-CLDN18.2 quiméricos também foram analisa- dos com uma linhagem celular estável de HEK293 expressando a CLDN18.2 humana de comprimento total (HEK293-CLDN18.2) usando FACS conforme descrito acima, exceto que a etapa de detecção final foi realizada usando F(ab')2 de cabra anti-lgG humana Fc conjugado com Alexa FluorO 488 (Invitrogen cat no: H10120). Os resultados da análise FACS da ligação dependente da dose dos mAbs anti-CLDN18.2 quimé- ricos à linhagem celular estável de HEK293-CLDN18.2 são fornecidos nas Figs. 3A-3C. O histograma para a ligação de cada mAb quimérico a 7,6 nM à linhagem celular estável de HEK293-CLDN18.2 é mostrado nas Figs. 4A-4J. Esses dados indicam que os mAbs quiméricos se ligam especificamente à linhagem celular estável de HEK293-CLDN18.2. Exemplo 4: Humanização de mAbs anti-CLDN18.2
[0172] Os mAbs anti-CLDN18.2 do camundongo 2-C3, 5-E22, 6- J11,3-E21 e 3-P21 foram humanizados para reduzir o potencial de imu- nogenicidade quando usados em pacientes humanos. As sequências
7O/T4 das regiões variáveis das cadeias pesada e leve (VH e VL) foram com- paradas com as sequências de anticorpos humanos no banco de dados do Protein Data Bank (PDB) e foram construídos modelos de homologia. As CDRs, tanto nas cadeias pesada quanto nas leves dos mAbs de ca- mundongo, foram enxertadas em estruturas humanas que têm a maior possibilidade de manter a estrutura adequada, provavelmente necessá- ria para a ligação do antígeno. As mutações reversas de resíduos hu- manos para resíduos de camundongos ou outras mutações foram pro- jetadas quando necessário. As sequências das regiões VH e VL huma- nizadas são apresentadas na Tabela 7.
[0173] As regiões de VH e VL humanizadas foram fundidas às regi- ões constantes da cadeia pesada de IgG1 humana e da cadeia leve capa, respectivamente. Construções correspondentes às sequências de mAb foram usadas para transfecção transitória em células 293E ou CHO e MAbs purificados foram analisados quanto à sua capacidade de ligação a células HEK293 estavelmente transfectadas com CLDN18.2 humana de comprimento total usando FACS. Os valores EC50 de mAbs humanizadas para ligação de CLDN18.2 usando um pool estável de HEK293-CLDN18.2 são resumidos na Tabela 8.
[0174] Os resultados para a ligação dependente da dose dos mAbs humanizados para o pool estável de HEK293-CLDN18.2 são mostrados nas Figs. 5A-5G. A detecção baseada em FITC foi usada nos experimen- tos com FACS na Tabela 8 e nas Figs SA-5C; a detecção baseada em Alexa FluorO 488 foi usada nos experimentos com FACS nas Figs. 5D-5G.
[0175] Os resultados para a ligação dependente da dose de mAbs anti-CLDN18.2 humanizados a uma linhagem celular estável de HEK293-CLDN18.2 por análise FACS são mostrados nas Figs. 6A-6E. A ligação dos mAbs anti-CLDN18.2 humanizados à linhagem celular de câncer NUGC-4 na concentração de mAb de 685 nM foi também anali-
7UTA sada por FACS. Os resultados da ligação de NUGC-4 pelos mAbs hu- manizados são mostrados na Fig. 7. A detecção baseada em Alexa Fluor& 488 foi usada nos experimentos nas Figs. 6A-GE e 7.
[0176] A citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) de mAbs foi medida usando o kit de núcleo de bioensaio repórter ADCC (Promega, cat. Nº G7010) de acordo com o protocolo fornecido pelo fa- bricante. Brevemente, cerca de 12.500 células HEK293-CLDN18.2 por poço foram misturadas com várias concentrações de anticorpos de teste no tampão de ensaio ADCC em uma microplaca de 96 poços de meia área (Corning-Costar, cat. 43696). Em seguida, cerca de 37.500 por poço de células efetoras de bioensaio ADCC foram adicionadas a um volume final de 37,5 ul. e misturadas. A placa foi incubada a 37 ºC por 6 horas sem agitação. Para medir a atividade de luciferase, foram remo- vidos 12,5 ul de mistura de ensaio de cada poço e adicionados 25 ul do reagente de ensaio de luciferase Bio-Glo. As placas foram incubadas em temperatura ambiente por 10 minutos com agitação. 30 ul por poço da mistura foram transferidos para uma placa branca (BRAND, cat. Nº 781621) para medir a luminescência em um leitor de placa multimodo EnvVision 2102. Os resultados da atividade de ADCC dos cinco mAbs humanizados e um mAb quimérico são mostrados na Fig 8A-8B. RLU, unidade de luz relativa. Tabela 7: Sequências de regiões variáveis de cadeia leve e cadeia pe- sada para mAbs anti-CLDN18.2 humanizados pm creed 1º | 2-C3-H1 | GKALEWVATISGGGSYTYYNPSLKDRFTISRDISANQLVLKVT | 142
NMDPADTATYFCARQSRGNAMDYWGQGTTVTVSS | " | QVTLRESGPALVKPTOTLTLTCTFSGFTFSSYGMSWIRQPPG e 2-C3-H2 | KALEWLATISGGGSYTYYLDSLKDRFTISRDISKNQVVLTVTN | 143
MDPADTATYFCARQSRGNAMDYWGQGTTVTVSS poco Team 66 | 2-C3-L1 | QOKPGKAPKLLINWASTRESGVPSRFSGSGSGTAFTLTISSL | 144
QPDDFATYYCOQNDYSYPLTFGGGTKVEIK
DIQMTOSPSTLSASVGDRVTITCKSSOSLLNSGNQKNYLTWY 2-C3-L2 QQAKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSL 145
QPDDFATYYCQNDYSYPLTFGGGTKVEIK
QVALVASGVEVKKPGASVKVSCKASGYTITDNYMHWVRQAP 5-E22-H1 | GOGLEWIGEIYPGSGNTYFNEKFKNRATLTADKSTTTAYMEL | 146
KSLQFDDTAVYFCARGFPYYAMDYWGQGTTVTVSS
QVALVASGAEVKKPGASVKVSCKASGYTITDNYMHWVRQAP 5-E22-H3 | GOGLEWIGEIYPGSGNTYYAEKFKNRATLTADKSISTAYMELS | 147
RLRSDDTAVYFCARGFPYYAMDYWGQGTLVTVSS
EIVMTOSPATLSLSPGERATLSCHARQNINVWLSWYQQKPG 5-E22-L1 | QOAPRLLIYKASNLHTGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA | 148
VYYCOQAGANYPLTFGGGTKVEIK
EIVLTASPATLSLSPGERATLSCHARQNINVWLSWYQQKPGQ 5-E22-L2 | APRLLIYVKASNLHTGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVY | 149
YCQQAGANYPLTFGGGTKVEIK
DIVMTOSPLSLPVTPGEPASISCHARQNINVWLSWYLQKPGQ 5-E22-L3 | SPQLLIYKASNLHTGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGV | 150
YYCOQGANYPLTFGQGTKVEIK
EVOLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSFGMHWVRQAP 6-J11-H1 | GKGLEWVAYISSGRSTMYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQM | 151
NSLTAEDTAVYYCARGGFYGNSLDYWGQGTLVTVSS
EVOLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSFGMHWVRQAP 6-J11-H2 | GKGLEWVAYISSGRSTMYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOQM | 152
NSLRSEDTAVYYCARGGFYGNSLDYWGQGTLVTVSS
DIQMTOSPSSLSASVGDRVTITCKSSLSLLNSGNQKNYLTWY 6-J11-L1 | QOKPGKAPKLLINWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSL |153
QPEDFATYSCQNAYSYPLTFGQGTKVEIK
QVALQESGPGLVRPSQTLSLTCTASGFTFSKYAMNWVRQPP 3-E21-H1 | GRGLEWVAFISNGGSYTEYNPSVKGRFTILRDNSKNQLSLRL | 154
SSVTAADTAVYYCARHDKGNALDYWGQGSLVTVSS QVALQESGPGLVRPSQTLSLTCTASGFTFSKYAMsSWVRQPP 3-E21-H2 | GRGLEWVAFISNGGSYTEYNPSVKGRFTILRDNSKNQLSLKL | 155
SSVTAADTAVYYCARHDKGNALDYWGQGSLVTVSS
EVOLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSKYAMSWVRQAP 3-E21-H3 | GKGLEWVAAISNGGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQM | 156
NSLRAEDTAVYYCARHDKGNALDYWGQGTLVTVSS
DIQMTOSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLTWY 3-E21-L1 | QQOKPGKAPKLLIYWASNLQOTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSL | 157
QPEDIATYYCQNDYFYPLTFGQGTKVEIK
DIVMTOSPDSLAVSLGERATINCKSSQOSLLNSGNQKNYLTWY 3-E21-L2 | QOKPGQPPKLLIVWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSL | 158
QAEDVAVYYCQNDYFYPLTFGQGTRLEIK
EIQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYNIHWVRQAP 3-P21-H1 | GKGLEWIGYINPYFGSTDYADSVKGRATLSVDKSKNTAYLQM | 159
NSLRAEDTAVYYCARGAYYGNAMDYWGQGTLVTVSS
EIQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYNmMkWVRQAP 3-P21-H2 | GKGLEWIGNINPYFGSTNYADSVKGRATLSVDKSKNTAYLQM | 160
NSLRAEDTAVYYCARGAYYGNAMDYWGQGTLVTVSS
EIQLVOSGAEVKKPGESLKISCKASGYSFTGYNIGWVRQMPG 3-P21-H3 | KGLEWIGIINPYFGSTRYSPSFQGOATLSVDKSISTAYLQWSS
LKASDTAMYYCARGAYYGNAMDYWGQGTLVTVSS EIQLVOSGAEVKKPGESLKISCKASGYSFTGYNmMkWVRQMP 3-P21-H4 | GKGLEWIGIINPYFGSTNYSPSFQOGQATLSVDKSISTAYLOWS | 162
SLKASDTAMYYCARGAYYGNAMDYWGQGTLVTVSS
DIQMTOSPSSLSASVGDRVTITCRSSASLLNSGNQKNYVTWY 3-P21-L1 | QOKPGKAPKLLIVWASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSL | 163
QPEDFATYYCQNDYFYPLTFGQGTKVEIK
DIQMTOSPSSLSASVGDRVTITCRSSASLLNSGNQKNYVTWY 3-P21-L2 | QOKPGKAPKLLIYWAStreSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLO | 164
PEDFATYYCQNDYFYPLTFGQGTKVEIK
DIVMTOSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNQKNYLTWY 3-P21-L3 | QQKPGQPPKLLIVWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSL | 165
QAEDVAVYYCQNDYFYPLTFGQGTKVEIK Tabela 8: Valores ECso de mAbs humanizados para ligação de CLDN18.2 usando um pool estável de HEK293-CLDN18.2 Nome ECso (nM) 2-C3-H1L2 9,1 2-C3-H2L2 | 8,0 5-E22-H1L2 258,6 5-E22-H1L3 61,0 6-J11-H1L1 11,2
[0177] 2-C3-H1L1 refere-se ao mAb com a região variável de cadeia pesada 2-C3-H1 e a região variável de cadeia leve 2-C3-L1; todos os outros mAbs humanizados na tabela e o texto adotam a mesma regra de nomenclatura.
[0178] Será entendido por aqueles versados na técnica que as mu- danças poderiam ser feitas nas modalidades descritas acima sem se afastar do amplo conceito inventivo das mesmas. Entende-se, portanto, que esta invenção não se limita às modalidades específicas reveladas, mas tem por objetivo cobrir as modificações dentro do espírito e do es- copo da presente invenção, conforme definido pela presente descrição.

Claims (1)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região determinante de com- plementaridade de cadeia pesada 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (LCDR1), LCDR?2 e LCDR3, com as sequências de polipeptídeos de: a. SEQ ID NOs: 33, 34, 35, 63, 64 e 65, respectivamente; b. SEQ ID NOs: 21, 22, 23, 51, 52 e 53, respectivamente; c. SEQ ID NOs: 24, 25, 26, 54, 55 e 56, respectivamente; d. SEQ ID NOs: 27, 28, 29, 57, 58 e 59, respectivamente; e. SEQ ID NOs: 30, 31, 32, 60, 61 e 62, respectivamente; f. SEQ ID NOs: 36, 37, 38, 66, 67 e 68, respectivamente; g. SEQ ID NOs: 39, 40, 41, 69, 70 e 71, respectivamente; h. SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 72, 73 e 74, respectivamente; i. SEQ ID NOs: 45, 46, 47, 75, 76 e 77, respectivamente; ou j. SEQ ID NOs: 48, 49, 50, 78, 79 e 80, respectivamente; caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente à claudina 18.2 (CLDN18.2), de preferência à CLDN18.2 humana.
    2. Anticorpo monoclional isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendendo uma região determinante de com- plementaridade de cadeia pesada 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (LCDR1), LCDR?2 e LCDR3, com as sequências de polipeptídeos de: a. SEQ ID NOs: 93, 94, 95, 123, 124 e 125, respectivamente; b. SEQ ID NOs: 81, 82, 83, 111, 112 e 113, respectivamente; c. SEQ ID NOs: 84, 85, 86, 114, 115 e 116, respectivamente; d. SEQ ID NOs: 87, 88, 89, 117, 118 e 119, respectivamente; e. SEQ ID NOs: 90, 91, 92, 120, 121 e 122, respectivamente; f. SEQ ID NOs: 96, 97, 98, 126, 127 e 128, respectivamente;
    g. SEQ ID NOs: 99, 100, 101, 129, 130 e 131, respectiva- mente; h. SEQ ID NOs: 102, 103, 104, 132, 133 e 134, respectiva- mente; i. SEQ ID NOs: 105, 106, 107, 135, 136 e 137, respectiva- mente; ou j. SEQ ID NOs: 108, 109, 110, 138, 139 e 140, respectiva- mente; caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente à claudina 18.2 (CLDN18.2), de preferência à CLDN18.2 humana.
    3. Anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracteri- zado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia pe- sada tendo uma sequência de polipeptídeo pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO: 9, 1, 3, 5, 7, 11, 13, 15, 17 ou 19, ou uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeo de pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO: 10, 2, 4, 6, 8, 12, 14, 16, 18 ou 20.
    4. Anticorpo monoclional isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracteri- zado pelo fato de que compreende a. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:9 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:10; b. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:1 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:2; c. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:3 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:4;
    d. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:5 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:6; e. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:7 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:8; f. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:11 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:12;
    9. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:13 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:14; h. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:15 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:16; i. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:17 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:18; j. uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:19 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:20;
    5. Anticorpo monoclional isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o anticorpo monoclonal ou o frag- mento de ligação a antígeno do mesmo é capaz de induzir a lise celular tumoral mediada pelo efetor.
    6. Anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno é quimérico.
    7. Anticorpo monoclional isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo é humano ou humanizado.
    8. Anticorpo monoclional isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o anticorpo humanizado isolado ou o fragmento de li- gação a antígeno do mesmo compreende: (a) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:142 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:144; (b) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:142 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:145; (c) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:143 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:144; (d) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:143 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:145; (e) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:146 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:148; (f) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:146 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:149; (9) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:146 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:150; (h) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:147 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:148;
    (i) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:147 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:149;
    (]) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:147 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:150;
    (k) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:151 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:153;
    (1) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:152 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:153;
    (m) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:154 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:157;
    (n) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:155 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:157;
    (0) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:156 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:158;
    (p) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:159 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:163;
    (q) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:159 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:164;
    (r) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:160 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:163; (s) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:160 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:164; (t) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:161 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:165; ou (u) uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:162 e uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de polipeptídeo da SEQ ID NO:165.
    9. Anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é capaz de induzir a lise celular tumoral mediada por efetores através de citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCCO), fagocitose dependente de anticorpos (ADPC) e/ou citoxicidade dependente de complemento (CDC), e/ou mediar o recrutamento de fár- macos conjugados, e/ou formar um anticorpo biespecífico com outro mAb ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo com efeito de matar o câncer.
    10. Ácido nucleico isolado caracterizado pelo fato de codifi- car o anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9.
    11. Vetor caracterizado pelo fato de compreender o ácido nu- cleico isolado como definido na reivindicação 10.
    12. Célula hospedeira caracterizada pelo fato de compreen- der o vetor, como definido na reivindicação 11.
    13. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de compreender o anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1a9,e um veículo farmaceuticamente aceitável.
    14. Método para direcionar a CLDN18.2 em uma superfície de célula de câncer em um indivíduo que precisa do mesmo, caracteri- zado pelo fato de compreender a administração ao indivíduo da compo- sição farmacêutica, como definida na reivindicação 13.
    15. Método para tratar o câncer em um indivíduo que precisa do mesmo, caracterizado pelo fato de compreender a administração ao indivíduo da composição farmacêutica, como definida na reivindicação
    18.
    16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado do grupo consistindo em câncer de pulmão, câncer gástrico, câncer do esôfago, câncer do duto biliar, colangiocarcinoma, câncer do cólon, carcinoma hepatocelular, carci- noma de células renais, carcinoma urotelial da bexiga, melanoma me- tastático, câncer de mama, câncer de ovário, câncer cervical, câncer de cabeça e pescoço, câncer pancreático, glioma, glioblastoma e outros tumores sólidos, e linfoma não Hodgkin (NHL), leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crô- nica (CML), mieloma múltiplo (MM), leucemia mieloide aguda (AML) e outros tumores líquidos.
    17. Método para tratar uma doença inflamatória em um indi- víduo que precisa do mesmo, caracterizado pelo fato de compreender a administração ao indivíduo da composição farmacêutica, como definida na reivindicação 13.
    18. Método para produzir o anticorpo monoclional ou frag- mento de ligação a antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de compreender a cultura de uma célula compreendendo um ácido nucleico que codifica o anticorpo monoclonal ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo, em condições para produzir o anticorpo monoclonal ou o frag- mento de ligação a antígeno do mesmo, e recuperando o anticorpo ou o fragmento de ligação a antígeno do mesmo da célula ou da cultura.
    19. Método para produzir uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação a an- tígeno como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, carac- terizado pelo fato de compreender a combinação do anticorpo monoclo- nal ou do fragmento de ligação a antígeno do mesmo com um veículo farmaceuticamente aceitável para obter a composição farmacêutica.
    20. Método para determinar um nível de CLDN18.2 em um indivíduo, caracterizado pelo fato de compreender: a. obter uma amostra do indivíduo; b. colocar a amostra em contato com um anticorpo monoclo- nal isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, como defi- nido em qualquer uma das reivindicações 1a9;e c. determinar um nível de CLDN18.2 no indivíduo.
    21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a amostra é uma amostra de tecido.
    22. Método, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que a amostra de tecido é uma amostra de tecido de câncer.
    23. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a amostra é uma amostra de sangue.
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