BR112021016673A2

BR112021016673A2 - Receptores de antígeno chiméricos anticlaudina 18.2 humanizados e seus usos

Info

Publication number: BR112021016673A2
Application number: BR112021016673-4A
Authority: BR
Inventors: Minghan Wang; Hui Zou; Haiqun Jia
Original assignee: Phanes Therapeutics, Inc.
Priority date: 2019-03-29
Filing date: 2020-03-24
Publication date: 2021-10-13
Also published as: KR20210144792A; CA3132201A1; WO2020205331A1; EP3947468A1; CN113784980B; JP2022527173A; SG11202109052YA; US20220184126A1; AU2020253792A1; MX2021011887A; IL286696A; CN113784980A

Abstract

receptores de antígeno chiméricos anticlaudina 18.2 humanizados e seus usos. a presente invenção refere-se a receptores de antígenos quiméricos (cars) específicos para cldn18.2, vetores que codificam o car para cldn18.2, células hospedeiras recombinantes compreendendo o car para cldn18.2 (car-ts ou car-nks) e métodos de uso de car-ts ou car-nks para tratar uma doença associada à expressão de cldn18.2.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “RECEP- TORES DE ANTÍGENO CHIMÉRICOS ANTICLAUDINA 18.2 HUMA- NIZADOS E SEUS USOS”.

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[001] O presente pedido reivindica prioridade para o Pedido Provi- sório U.S. Nº 62/896.758, depositado em 6 de setembro de 2019; Pe- dido Provisório U.S. Nº 62/859.843, depositado em 11 de junho de 2019; e Pedido Provisório U.S. Nº 62/825.955 depositado em 29 de março de

2019. Cada descrição é aqui incorporada a título de referência em sua totalidade.

CAMPO DA INVENÇÃO

[002] A presente invenção refere-se a receptores de antígenos qui- méricos (CARs) anticlaudina 18.2 (CLDN18.2) humanizados, ácidos nu- cleicos e vetores de expressão que codificam os CARs, células T enge- nheiradas para expressar os CARs (CAR-T) e células NK engenheira- das para expressar os CARs (CAR-NK). Métodos de fabricação dos CARs, métodos de fabricação dos CAR-Ts/CAR-NKs e métodos de uso de CAR-Ts/CAR-NKs para tratar uma doença associada com a expres- são de CLDN18.2, incluindo câncer, também são providos.

REFERÊNCIA À LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS APRESENTADA ELETRONICAMENTE

[003] O presente pedido contém uma listagem de sequência, que é apresentada eletronicamente por meio da EFS-Web como uma lista- gem de sequência formatada em ASCII com um nome de arquivo “065799.19WO1 Sequence Listing” e uma data de criação de 11 de março de 2020 e que possui um tamanho de 147 kb. A listagem de se- quências apresentada por meio da EFS-Web faz parte do pedido e é incorporada aqui a título referência em sua totalidade.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[004] Os medicamentos anticâncer de padrão de tratamento ofe- recem benefícios significativos.

Recentemente, a disponibilidade de fár- macos imuno-oncológicos, tais como mAbs anti-PD-1, mAbs anti-PD-L1 e engajadores de células T biespecíficas anti-CD3, melhorou o conceito de alavancar e ativar o sistema imunológico dos pacientes para comba- ter vários tipos de câncer.

No entanto, a falta de resposta, eficácia insu- ficiente e/ou problemas de segurança ainda precisam ser resolvidos.

As terapias com células CAR-T (receptor de antígeno quimérico T) envol- vem a engenharia genética das próprias células imunológicas de um paciente, tais como células T, e redirecionamento delas para um antí- geno de superfície celular adequado em células cancerosas (Mayor e outros, Immunotherapy 2016; 8:491-494). Essa abordagem demonstrou sucesso em pacientes que sofrem de malignidades de células B qui- miorrefratárias e outros tipos de câncer (Pettitt e outros, Mol Ther. 2018; 26:342-353). As células T podem ser engenheiradas para possuir espe- cificidade por um ou mais alvos/antígenos da superfície da célula can- cerosa para reconhecer e matar a célula cancerosa.

O processo inclui a transdução de células T com DNA ou outro material genético que codi- fica o receptor de antígeno quimérico (CAR), que compreende um do- mínio de ligação específico do antígeno extracelular, tal como um ou mais fragmentos variáveis de cadeia única (scFv) de um anticorpo mo- noclonal, uma região de dobradiça e transmembrana e um domínio de sinalização intracelular (incluindo um ou mais domínios coestimuladores e um ou mais domínios de ativação) (Kochenderfer e outros, Nat Rev Clin Oncol. 2013; 10:267-276). As células imunes que expressam CAR, tais como células T e células NK, podem ser usadas para tratar várias doenças, incluindo tumores líquidos e sólidos.

As terapias bem-sucedi- das com células CAR-T podem reconhecer e destruir especificamente células-alvo e manter a capacidade de persistir e proliferar ao longo do tempo.

[005] A Claudina 18.2 (CLDN18.2), também conhecida como clau- dina-18a2.1, é um membro da família claudina de proteínas de trans- membrana (CLDN) de pelo menos 27 isoformas em humanos. As clau- dinas são os componentes estruturais principais de junção firme entre células epiteliais e funcionam como poros de íon para regular a perme- abilidade paracelular de cátions e ânions (Shain e outros, Physiol. Rev. 2013; 93:525-569). A expressão de CLDN18 é normalmente limitada a tecidos pulmonares e estomacais. A CLDN18 tem duas variantes de união. A CLDN18.1 é a variante específica do pulmão, enquanto a CLDN18.2 é a variante específica do estômago. As variantes de união diferem em seus 69 resíduos de aminoácidos N-terminais devido à união alternativa do primeiro exon (Niimi e outros, Mol. Cell Biol., 2001; 21:7380-7390). Estudos com camundongos com inativação de CLDN18.2 sugerem que CLDN18.2 desempenha um papel crítico em prevenção de vazamento de ácido gástrico para o lúmen do estômago (Hayash e outros, Gastroenteroloy 2012; 142:292-304).

[006] Expressão desregulada de claudinas é detectada em muitos cânceres e pode contribuir para tumorigênese e invasividade de câncer (Singh e outros, J. Oncology 2010;2010;541957). A expressão de CLDN18.2 é elevada em adenocarcinomas ductais do pâncreas (PDAC) (Tanaka e outros, J. Histochem. Cytochem. 2011; 59:942-952), tumores esofageais, cânceres de pulmão de não pequenas células (NSCLC), cânceres ovarianos (Sahin e outros, Clin. Cancer Res. 2008; 14:7624- 7634), adenocarcinomas do duto da bile (Keira e outros, Virchows Arch. 2015; 466:265-277) e colangiocarcinoma (Shinozaki e outros, Virchows Arch. 2011; 459:73-80). CLDN18.2 é um alvo ideal para terapias com células CAR-T para tratar e curar cânceres positivos para CLDN18.2

BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[007] Em um aspecto geral, a invenção refere-se a um construto de receptor de antígenos quimérico (CAR) que induz a morte do câncer mediada por células T, em que o construto de CAR compreende pelo menos um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente à claudina 18.2 (CLDN18,2), uma região de dobradiça, uma região transmembrana e um domínio de sinalização intracelular.

[008] São providos polinucleotídeos isolados que compreendem uma sequência de ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR). O CAR pode compreender (a) um domínio extracelu- lar que compreende pelo menos um domínio de ligação ao antígeno que liga especificamente à claudina 18.2 (CLDN18.2); (b) uma região de do- bradiça; (c) uma região transmembrana; e (d) um domínio de sinalização intracelular.

[009] Em certas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno compreende uma região 1 determinante de complementaridade da ca- deia pesada (HCDR1), HCDR2, HCDR3, uma região 1 determinante de complementaridade da cadeia leve (LCDR1), LCDR2 e LCDR3, que possuem as sequências polipeptídicas de: (1) SEQ ID NOs: 21, 22, 23, 51, 52 e 53, respectivamente; (2) SEQ ID NOs: 24, 25, 26, 54, 55 e 56, respectivamente; (3) SEQ ID NOs: 27, 28, 29, 57, 58 e 59, respectivamente; (4) SEQ ID NOs: 30, 31, 32, 60, 61 e 62, respectivamente; (5) SEQ ID NOs: 33, 34, 35, 63, 64 e 65, respectivamente; (6) SEQ ID NOs: 36, 37, 38, 66, 67 e 68, respectivamente; (7) SEQ ID NOs: 39, 40, 41, 69, 70 e 71, respectivamente; (8) SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 72, 73 e 74, respectivamente; (9) SEQ ID NOs: 45, 46, 47, 75, 76 e 77, respectivamente; ou (10) SEQ ID NOs: 48, 49, 50, 78, 79 e 80, respectivamente; em que o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente à CLDN18.2, preferivelmente CLDN18.2 humana.

[0010] Em certas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno compreende uma região 1 determinante de complementaridade da ca- deia pesada (HCDR1), HCDR2, HCDR3, uma região 1 determinante de complementaridade da cadeia leve (LCDR1), LCDR2 e LCDR3, que possuem as sequências polipeptídicas de: (1) SEQ ID NOs: 81, 82, 83, 111, 112 e 113, respectivamente; (2) SEQ ID NOs: 84, 85, 86, 114, 115 e 116, respectivamente; (3) SEQ ID NOs: 87, 88, 89, 117, 118 e 119, respectivamente; (4) SEQ ID NOs: 90, 91, 92, 120, 121 e 122, respectivamente; (5) SEQ ID NOs: 93, 94, 95, 123, 124 e 125, respectivamente; (6) SEQ ID NOs: 96, 97, 98, 126, 127 e 128, respectivamente; (7) SEQ ID NOs: 99, 100, 101, 129, 130 e 131, respectiva- mente; (8) SEQ ID NOs: 102, 103, 104, 132, 133 e 134, respectiva- mente; (9) SEQ ID NOs: 105, 106, 107, 135, 136 e 137, respectiva- mente; ou (10) SEQ ID NOs: 108, 109, 110, 138, 139 e 140, respectiva- mente; em que o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente à CLDN18.2, preferivelmente CLDN18.2 humana.

[0011] Em certas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno compreende uma região variável da cadeia pesada com uma sequência de polipeptídeos pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO: 1 , 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 ou 19, ou uma região variável de cadeia leve com uma sequência de polipeptídeos pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 ou 20.

[0012] Em certas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno compreende:

(1) uma região variável da cadeia pesada que possui a se- quência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 1 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 2; (2) uma região variável da cadeia pesada que possui a se- quência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 3 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 4; (3) uma região variável da cadeia pesada que possui a se- quência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 5 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 6; (4) uma região variável da cadeia pesada que possui a se- quência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 7 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 8; (5) uma região variável da cadeia pesada que possui a se- quência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 9 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 10; (6) uma região variável da cadeia pesada que possui a se- quência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 11, e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 12; (7) uma região variável da cadeia pesada que possui a se- quência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 13 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 14; (8) uma região variável da cadeia pesada que possui a se- quência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 15 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 16; (9) uma região variável da cadeia pesada que possui a se- quência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 17 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 18; (10) uma região variável da cadeia pesada que possui a se- quência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 19 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 20;

[0013] Em certas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno é humanizado e compreende uma região variável da cadeia pesada com uma sequência de polipeptídeos pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO: 142, 143, 146, 147, 151, 152, 154, 155, 156, 159, 160, 161, 162, 166, 167, 170, 171, 172, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 186, 187, 191, 192 ou 193 ou uma região variável da cadeia leve que possui uma se- quência de polipeptídeos pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo me- nos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO: 144, 145, 148, 149, 150, 153, 157, 158, 163, 164, 165, 168, 169, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 185, 188, 189, 190, 194, 195, 196 ou 197.

[0014] Em certas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno é humanizado e compreende: (1) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:142 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:144; (2) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:142 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:145; (3) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:143 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:144; (4) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:143 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:145; (5) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:146 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:148; (6) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:146 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:149; (7) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:146 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:150; (8) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:147 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:148; (9) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:147 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:149; (10) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:147 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:150; (11) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:151 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:153; (12) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:152 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:153; (13) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:154 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:157; (14) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:155 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:157; (15) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:156 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:158; (16) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:159 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:163; (17) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:159 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:164; (18) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:160 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:163; (19) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:160 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:164; (20) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:161 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:165; ou (21) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:162 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:165.

[0015] Em certas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno é um fragmento variável de cadeia única (scFv) que se se liga especifica- mente à CLDN18.2, preferivelmente CLDN18.2 humana. Em certas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno é um frag- mento variável de cadeia única humanizado (scFv) que se liga especifi- camente à CLDN18.2, de preferência CLDN18.2 humana. Em certas modalidades, o fragmento variável de cadeia única (scFv) humanizado compreende uma sequência de polipeptídeos pelo menos 95% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 198-215.

[0016] Em certas modalidades, o receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende um ou mais domínios de ligação ao antígeno.

[0017] Em certas modalidades, o domínio de sinalização intracelular compreende um ou mais domínios coestimuladores e um ou mais do- mínios de ativação.

[0018] Também são providos receptores de antígenos quiméricos (CARs) codificados pelos polinucleotídeos isolados da invenção.

[0019] Também são providos vetores que compreendem os polinu- cleotídeos isolados que compreendem ácidos nucleicos que codificam os CARs da invenção.

[0020] Também são fornecidas células hospedeiras que compreen- dem os vetores da invenção.

[0021] Em certas modalidades, a célula hospedeira é uma célula T, preferivelmente uma célula T humana. Em certas modalidades, a célula hospedeira é uma célula NK, preferivelmente uma célula NK humana. A célula T ou célula NK pode, por exemplo, ser engenheirada para expres- sar o CAR da invenção para tratar doenças tal como o câncer.

[0022] Também são providos métodos de produção de uma célula hospedeira que expressa um receptor de antígeno quimérico (CAR) da invenção. Os métodos compreendem transdução de uma célula T ou uma célula NK com um vetor que compreende os ácidos nucleicos iso- lados que codificam os CARs da invenção.

[0023] Também são providos métodos de produção de uma célula CAR-T ou célula CAR-NK da invenção. Os métodos compreendem cul- tivar células T ou células NK que compreendem o polinucleotídeo iso- lado que compreende um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR) da invenção sob condições para produzir a célula CAR-T ou célula CAR-NK e recuperar a célula CAR-T ou célula CAR-NK.

[0024] Também são providos métodos para gerar uma população de células com RNA engenheirado, que compreendem um receptor de antígeno quimérico (CAR) da invenção. Os métodos compreendem con- tato de uma célula com o polinucleotídeo isolado que compreende um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR) da invenção, em que o polinucleotídeo isolado é um RNA transcrito in vitro ou RNA sintético.

[0025] Também são providos métodos de tratamento de câncer em um indivíduo em necessidade do mesmo, compreendendo a adminis- tração ao indivíduo das células CAR-T e/ou células CAR-NK da inven- ção. O câncer pode ser qualquer câncer líquido ou sólido, por exemplo, ele pode ser selecionado de, mas não limitado a, um câncer de pulmão, um câncer gástrico, um câncer esofageal, um câncer do duto da bile, um colangiocarcinoma, um câncer de cólon, um carcinoma hepatocelu- lar, um carcinoma de células renais, um carcinoma urotelial da bexiga, um melanoma metastático, um câncer de mama, um câncer de ovário, um câncer cervical, um câncer de cabeça e pescoço, um câncer de pân- creas, um glioma, um glioblastoma e outros tumores sólidos e um lin- foma não Hodgkin (NHL), uma leucemia linfocítica aguda (ALL), uma leucemia linfocítica crônica (CLL), uma leucemia mieloide crônica (CML), um mieloma múltiplo (MM), uma leucemia mieloide aguda (AML) e outros tumores líquidos.

[0026] Também são providos métodos de tratamento de indivíduo em necessidade do mesmouma doença inflamatória em um indivíduo em necessidade do mesmo, compreendendo administração ao indiví- duo das células CAR-T e/ou células CAR-NK da invenção.

[0027] Em certas modalidades, os métodos de tratamento de cân- cer ou doença inflamatória em um indivíduo em necessidade do mesmo compreendem ainda administração ao indivíduo em necessidade do mesmo de um agente que aumenta a eficácia de uma célula que ex- pressa uma molécula de CAR.

[0028] Em certas modalidades, os métodos de tratamento de cân- cer ou doença inflamatória em um indivíduo em necessidade do mesmo compreendem ainda administração ao indivíduo em necessidade do mesmo de um agente que melhora um ou mais efeitos colaterais asso- ciados à administração de uma célula que expressa uma molécula de CAR.

[0029] Em certas modalidades, os métodos de tratamento de cân- cer ou doença inflamatória em um indivíduo em necessidade do mesmo compreendem ainda administração ao indivíduo em necessidade do mesmo de um agente que trata a doença associada com Claudina 18.2.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0030] O sumário anterior, assim como a descrição detalhada que segue de modalidades preferidas do presente pedido, será compreen- dido melhor quando lido em conjunto com os desenhos em anexo. Deve ser entendido, no entanto, que o pedido não está limitado às modalida- des precisas mostradas nos desenhos.

[0031] As FIGs. 1A-1B mostram a ligação de mAbs anti-CLDN182.2 humanizados a HEK293-CLDN18.2 e HEK293-CLDN18.1, que expres- sam as CLDN18.2 e CLDN18.1 humanas de comprimento integral, res- pectivamente. O experimento foi realizado por análise FACS.

[0032] As FIGs. 2A-2D mostram a ligação de mAbs anti-CLDN18.2 humanizados a células HEK293-CLDN18.2 expressando estavelmente CLDN18.2 humana de comprimento integral. O experimento foi reali- zado por análise FACS.

[0033] As FIGs. 3A-3L mostram a ligação de scFvs humanizados a células HEK293-CLDN18.2 que expressam estavelmente CLDN18.2 humana de comprimento integral. O experimento foi realizado por aná- lise FACS.

[0034] A FIG. 4 mostra a atividade de morte de células tumorais das células CAR T montadas com um scFv anti-CLDN18.2 contra células expressando CLDN18.2 (HEK293-CLDN18.2); células expressando CLDN18.1 (HEK293-CLDN18.1) foram usadas como um controle.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0035] Várias publicações, artigos e patentes são citados ou descri- tos nos antecedentes e ao longo do pedido; cada uma dessas referên- cias está aqui incorporada a título de referência em sua totalidade. A discussão de documentos, atos, materiais, dispositivos, artigos ou se- melhantes que tenham incluídos no presente pedido tem o propósito de fornecer contexto para a invenção. Tal discussão não é uma admissão de que qualquer um ou todos esses assuntos façam parte da técnica anterior com relação a quaisquer invenções descritas ou reivindicadas.

[0036] A menos que definido de outra forma, todos os termos técni- cos e científicos usados no presente relatório têm o mesmo significado como comumente entendido por aquele versado na técnica à qual a pre- sente invenção pertence. Pelo contrário, certos termos usados no pre- sente relatório têm os significados mostrados no pedido.

[0037] Deve ser observado que, conforme usado aqui e nas reivin- dicações anexas, as formas no singular “um”/uma” e “o/a” incluem refe- rência no plural, a menos que o contexto dite claramente o contrário.

[0038] Salvo indicação em contrário, quaisquer valores numéricos, tal como uma concentração ou uma faixa de concentração aqui descrita, devem ser entendidos como sendo modificados em todos os casos pela expressão “cerca de”. Assim, um valor numérico normalmente inclui ± 10% do valor citado. Por exemplo, uma concentração de 1 mg/mL inclui 0,9 mg/mL a 1,1 mg/mL. Da mesma forma, uma faixa de concentração de 1% a 10% (p/v) inclui 0,9% (p/v) a 11% (p/v). Conforme usado aqui, o uso de uma faixa numérica inclui expressamente todas as subfaixas possíveis, todos os valores numéricos individuais dentro dessa faixa,

incluindo inteiros dentro de tais faixas e frações dos valores, a menos que o contexto indique claramente o contrário.

[0039] A menos que indicado de outra forma, a expressão “pelo me- nos” precedendo uma série de elementos deve ser entendida como se referindo a cada elemento da série. Aqueles versados na técnica reco- nhecerão ou serão capazes de verificar usando não mais do que expe- rimentação de rotina, muitos equivalentes das modalidades específicas da invenção aqui descrita. Esses equivalentes são pretendidos ser abrangidos pela invenção.

[0040] Tal como aqui utilizado, as expressões “compreende”, “com- preendendo”, “inclui”, “incluindo”, “tem”, “tendo”, “contém” ou “contendo” ou qualquer outra variação das mesmas, serão entendidas como impli- cando a inclusão de um número inteiro declarado ou grupo de números inteiros, mas não a exclusão de qualquer outro número inteiro ou grupo de números inteiros e se destinam a ser não exclusivos ou abertos. Por exemplo, uma composição, uma mistura, um processo, um método, um artigo ou um aparelho que compreenda uma lista de elementos não está necessariamente limitado a apenas esses elementos, mas pode incluir outros elementos não expressamente listados ou inerentes a tal compo- sição, mistura, processo, método, artigo ou aparelho. Além disso, a me- nos que expressamente declarado em contrário, “ou” se refere a um in- clusivo ou e não a um ou exclusivo. Por exemplo, uma condição A ou B é satisfeita por qualquer um dos seguintes: A é verdadeiro (ou presente) e B é falso (ou não presente), A é falso (ou não presente) e B é verda- deiro (ou presente) e ambos A e B são verdadeiros (ou presentes).

[0041] Como usada aqui, a expressão conjuntiva “e/ou” entre vários elementos citados é entendida como abrangendo ambas as opções in- dividuais e combinadas. Por exemplo, onde dois elementos são unidos por “e/ou”, uma primeira opção se refere à aplicabilidade do primeiro elemento sem o segundo. Uma segunda opção se refere à aplicabili- dade do segundo elemento sem o primeiro. Uma terceira opção se re- fere à aplicabilidade dos primeiro e segundo elementos juntos. Qualquer uma dessas opções é entendida como estando dentro do significado e, portanto, satisfazem o requisito da expressão “e/ou” conforme usado no presente relatório. A aplicabilidade simultânea de mais de uma das op- ções também é entendida como abrangida pelo significado e, portanto, satisfaz o requisito da expressão “e/ou.

[0042] Como usada aqui, a expressão “consiste em” ou variações tal como “consistem em” ou “consistindo em”, conforme usado ao longo do pedido e reivindicações, indica a inclusão de qualquer número inteiro ou grupo de números inteiros citado, mas nenhum número inteiro ou grupo de inteiros adicional pode ser adicionado ao método, estrutura ou composição especificada.

[0043] Como usada aqui, a expressão “consiste essencialmente em” ou variações tal como “consistem essencialmente em” ou “consis- tindo essencialmente em”, conforme usado ao longo do pedido e das reivindicações, indica a inclusão de qualquer número inteiro ou grupo de números inteiros citado e a inclusão opcional de qualquer número inteiro ou grupo de números inteiros citado que não altere materialmente as propriedades básicas ou novas do método, estrutura ou composição especificado. Vide M.P.E.P. § 2111.03.

[0044] Como usado aqui, “indivíduo” significa qualquer animal, pre- ferivelmente um mamífero, mais preferivelmente um humano. A expres- são “mamífero”, como usada aqui, abrange qualquer mamífero. Exem- plos de mamíferos incluem, mas não estão limitados, a vacas, cavalos, ovelhas, porcos, gatos, cães, camundongos, ratos, coelhos, porqui- nhos-da-índia, macacos, humanos, etc., mais preferivelmente um hu- mano.

[0045] As palavras “direita”, “esquerda”, “inferior” e “superior” desig- nam direções nos desenhos aos quais é feita referência.

[0046] Também deve ser entendido que as expressões “cerca de”, “aproximadamente”, “geralmente”, “substancialmente” e expressões se- melhantes usadas aqui, quando se referem a uma dimensão ou carac- terística de um componente da invenção preferida, indicam que a di- mensão/característica descrita não é um limite ou parâmetro estrito e não exclui pequenas variações que são funcionalmente iguais ou seme- lhantes, como será entendido por aquele versado na técnica. No mí- nimo, tais referências que incluem um parâmetro numérico incluiriam variações que, usando princípios matemáticos e industriais aceitos na técnica (por exemplo, arredondamento, medição ou outros erros siste- máticos, tolerâncias de fabricação, etc.), não variariam o dígito menos significativo.

[0047] As expressões “idêntico” e percentual de “identidade”, no contexto de dois ou mais ácidos nucleicos ou sequências de polipeptí- deos (por exemplo, receptores de antígenos quiméricos (CARs) que compreendem domínios de ligação ao antígeno específicos para CLDN18.2 e polinucleotídeos que os codificam, polipeptídeos de CLDN18.2 e polinucleotídeos de CLDN18.2 que os codificam), se refe- rem a duas ou mais sequências ou subsequências que são iguais ou possuem um percentual especificado de resíduos de aminoácidos ou nucleotídeos que são os mesmos, quando comparados e alinhados para correspondência máxima, conforme medido usando um dos seguintes algoritmos de comparação de sequência ou por inspeção visual.

[0048] Para comparação de sequência, normalmente uma sequên- cia atua como uma sequência de referência, com a qual as sequências de teste são comparadas. Ao usar um algoritmo de comparação de se- quência, as sequências de teste e de referência são inseridas em um computador, as coordenadas da subsequência são designadas, se ne- cessário, e os parâmetros do programa do algoritmo da sequência são designados. O algoritmo de comparação de sequência então calcula o percentual de identidade de sequência para a(s) sequência(s) de teste em relação à sequência de referência, com base nos parâmetros desig- nados do programa.

[0049] O alinhamento ótimo de sequências para comparação pode ser conduzido, por exemplo, pelo algoritmo de homologia local de Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), pelo algoritmo de alinha- mento de homologia de Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), pelo método de pesquisa de similaridade de Pearson & Lipman, Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988), por implementações com- putadorizadas desses algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA e TFASTA no Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI), ou por inspeção visual (vide geralmente, Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel e outros, eds., Cur- rent Protocols, uma joint venture entre Greene Publishing Associates, Inc. e John Wiley & Sons, Inc., Suplemento de 1995 (Ausubel)).

[0050] Exemplos de algoritmos que são adequados para determinar o percentual de identidade de sequência e similaridade de sequência são os algoritmos BLAST e BLAST 2.0, que são descritos em Altschul e outros (1990), J. Mol. Biol. 215:403-410 e Altschul e outros (1997), Nu- cleic Acids Res.; 25:3389- 3402, respectivamente. O programa para re- alizar as análises BLAST está publicamente disponível através do Nati- onal Center for Biotechnology Information. Esse algoritmo envolve pri- meiro a identificação de pares de sequência de pontuação alta (HSPs), pela identificação de palavras curtas de comprimento W na sequência de consulta, que combinam ou satisfazem alguma pontuação limite de valor positivo T quando alinhadas com uma palavra do mesmo compri-

mento em uma sequência de banco de dados. T é conhecido como li- miar da pontuação de palavra da vizinhança (Altschul e outros, supra). Esses acertos de palavras de vizinhança iniciais atuam como sementes para iniciar pesquisas para encontrar HSPs mais longos que os conte- nham. Os acertos de palavras são então estendidos em ambas as dire- ções ao longo de cada sequência, na medida em que a pontuação de alinhamento cumulativa possa ser aumentada.

[0051] Pontuações cumulativas são calculadas usando, para se- quências de nucleotídeos, os parâmetros M (pontuação de recompensa para um par de resíduos correspondentes; sempre > 0) e N (pontuação de penalidade para resíduos incompatíveis; sempre < 0). Para sequên- cias de aminoácidos, uma matriz de pontuação é usada para calcular a pontuação cumulativa. A extensão dos acertos da palavra em cada di- reção é interrompida quando: a pontuação de alinhamento cumulativo cai pela quantidade X de seu valor máximo alcançado; a pontuação cu- mulativa vai para zero ou menos, devido ao acúmulo de um ou mais alinhamentos de resíduos com pontuação negativa; ou o final de qual- quer sequência é alcançado. Os parâmetros do algoritmo BLAST W, T e X determinam a sensibilidade e velocidade do alinhamento. O pro- grama BLASTN (para sequências de nucleotídeos) usa como padrões um comprimento de palavra (W) de 11, uma expectativa (E) de 10, M = 5, N = - 4 e uma comparação de ambas as fitas. Para sequências de aminoácidos, o programa BLASTP usa como padrões um comprimento de palavra (W) de 3, uma expectativa (E) de 10 e a matriz de pontuação BLOSUM62 (vide Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA; 89: 10915 (1989).

[0052] Além de calcular o percentual de identidade de sequência, o algoritmo BLAST também realiza uma análise estatística da similaridade entre duas sequências (vide, por exemplo, Karlin & Altschul, Proc. Nat'l.

Acad. Sci. USA; 90:5873-5787 (1993)). Uma medida de similaridade for- necida pelo algoritmo BLAST é a menor probabilidade de soma (P(N)), que fornece uma indicação da probabilidade de uma correspondência entre duas sequências de nucleotídeos ou aminoácidos ocorrer por acaso. Por exemplo, um ácido nucleico é considerado semelhante a uma sequência de referência se a menor probabilidade de soma em uma comparação do ácido nucleico de teste com o ácido nucleico de referência for inferior a cerca de 0,1, mais preferivelmente inferior a cerca de 0,01 e o mais preferivelmente inferior a cerca de 0,001.

[0053] Uma indicação adicional de que duas sequências de ácido nucleico ou polipeptídeos são substancialmente idênticas é que o poli- peptídeo codificado pelo primeiro ácido nucleico é imunologicamente re- ativo de forma cruzada com o polipeptídeo codificado pelo segundo ácido nucleico, como descrito abaixo. Assim, um polipeptídeo é tipica- mente substancialmente idêntico a um segundo polipeptídeo, por exem- plo, onde os dois peptídeos diferem apenas por substituições conserva- tivas. Outra indicação de que duas sequências de ácido nucleico são substancialmente idênticas é que as duas moléculas hibridizam uma com a outra sob condições rigorosas.

[0054] Conforme usada aqui, a expressão “isolado” significa que um componente biológico (tal como um ácido nucleico, peptídeo ou prote- ína) foi substancialmente separado, produzido separadamente ou puri- ficado a partir de outros componentes biológicos do organismo em que o componente ocorre naturalmente, ou seja, outros DNA e RNA cromos- sômicos e extracromossômicos e proteínas. Ácidos nucleicos, peptí- deos e proteínas que tenham sido “isolados”, portanto, incluem ácidos nucleicos e proteínas purificados por métodos de purificação padroniza- dos. Ácidos nucleicos, peptídeos e proteínas “isolados” podem fazer parte de uma composição e ainda ser isolados se a composição não fizer parte do ambiente nativo do ácido nucleico, peptídeo ou proteína.

A expressão também abrange ácidos nucleicos, peptídeos e proteínas preparados por expressão recombinante em uma célula hospedeira, as- sim como ácidos nucleicos sintetizados quimicamente.

[0055] Como usada aqui, a expressão “polinucleotídeo”, sinonima- mente referida como “molécula de ácido nucleico”, “nucleotídeos” ou “ácidos nucleicos”, se refere a qualquer polirribonucleotídeo ou polide- soxirribonucleotídeo, que pode ser RNA ou DNA não modificado ou RNA ou DNA modificado. “Polinucleotídeos” incluem, sem limitação, DNA de fita simples e dupla, DNA que é uma mistura de regiões de fita simples e dupla, RNA de fita simples e dupla e RNA que é uma mistura de regiões de fita simples e dupla, moléculas híbridas que compreen- dem DNA e RNA que podem ser de fita simples ou, mais tipicamente, de fita dupla ou uma mistura de regiões de fita simples e dupla. Além disso, “polinucleotídeo” se refere a regiões de fita tripla que compreen- dem RNA ou DNA ou ambos RNA e DNA. A expressão polinucleotídeo também inclui DNAs ou RNAs que contêm uma ou mais bases modifi- cadas e DNAs ou RNAs com estruturas principais modificados para es- tabilidade ou por outras razões. Bases “modificadas” incluem, por exem- plo, bases tritiladas e bases incomuns tal como inosina. Uma variedade de modificações pode ser feita no DNA e no RNA; assim, “polinucleotí- deo” abrange formas quimicamente, enzimaticamente ou metabolica- mente modificadas de polinucleotídeos como tipicamente encontrados na natureza, assim como formas químicas de DNA e RNA característi- cas de vírus e células. “Polinucleotídeo” também abrange cadeias de ácido nucleico relativamente curtas, muitas vezes referidas como oligo- nucleotídeos.

[0056] Como usada aqui, a expressão “vetor” é um replicon no qual outro segmento de ácido nucleico pode ser inserido operativamente de modo a provocar a replicação ou expressão do segmento.

[0057] Como usada aqui, a expressão “célula hospedeira” se refere a uma célula que compreende uma molécula de ácido nucleico da in- venção. A “célula hospedeira” pode ser qualquer tipo de célula, por exemplo, uma célula primária, uma célula em cultura ou uma célula de uma linhagem celular. Em uma modalidade, uma “célula hospedeira” é uma célula transfectada ou transduzida com uma molécula de ácido nu- cleico da invenção. Em outra modalidade, uma “célula hospedeira” é uma progênie ou progênie potencial de tal célula transfectada ou trans- duzida. A progênie de uma célula pode ou não ser idêntica à célula pa- rental, por exemplo, devido a mutações ou influências ambientais que podem ocorrer em gerações sucessivas ou integração da molécula de ácido nucleico no genoma da célula hospedeira.

[0058] A “expressão”, como usada aqui, se refere à biossíntese de um produto de gene. A expressão abrange a transcrição de um gene em RNA. A expressão também abrange tradução de RNA em um ou mais polipeptídeos, e abrange ainda todas as modificações pós-trans- cripcionais e pós-traducionais de ocorrência natural. O CAR expresso pode estar dentro do citoplasma de uma célula hospedeira, no meio ex- tracelular tal como o meio de crescimento de uma cultura de células ou ancorado à membrana celular.

[0059] Como usada aqui, a expressão “célula imune” ou “célula imune efetora” se refere a uma célula que está envolvida em uma res- posta imune, por exemplo, na promoção de uma resposta imune efetora. Exemplos de células imunes incluem células T, células B, células as- sassinas naturais (NK), mastócitos e fagócitos derivados de mieloides. De acordo com modalidades particulares, as células imunes engenhei- radas são células T e são referidas como células CAR-T porque são engenheiradas para expressar CARs da invenção.

[0060] Como usada aqui, a expressão “célula imune engenheirada” se refere a uma célula imune, também referida como uma célula imune efetora, que foi geneticamente modificada pela adição de material ge- nético extra na forma de DNA ou RNA ao material genético total da cé- lula. De acordo com as presentes modalidades, as células imunes en- genheiradas foram geneticamente modificadas para expressar um construto de CAR de acordo com a invenção. Receptor de Antígeno Quimérico (CAR)

[0061] Como usada aqui, a expressão “receptor de antígeno quimé- rico” (CAR) se refere a um polipeptídeo recombinante que compreende pelo menos um domínio extracelular que se liga especificamente a um antígeno ou um alvo, um domínio transmembrana e um domínio de si- nalização que ativa receptor de célula T intracelular. O envolvimento do domínio extracelular do CAR com o antígeno-alvo na superfície de uma célula-alvo resulta no agrupamento de CAR e libera um estímulo de ati- vação para a célula que contém o CAR. CARs redirecionam a especifi- cidade das células efetoras imunes e desencadeiam a proliferação, pro- dução de citocinas, fagocitose e/ou produção de moléculas que podem mediar morte celular da célula que expressa antígeno-alvo de uma ma- neira independente da histocompatibilidade principal (MHC).

[0062] Em um aspecto, o CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno, uma região de dobradiça, um domínio coestimulador, um domínio de ativação e uma região transmembrana. Em um aspecto, o CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno, uma região de dobradiça, dois domínios coestimuladores, um domínio de ativação e uma região transmembrana. Em um aspecto, CAR compreende dois do- mínios de ligação ao antígeno, uma região de dobradiça, um domínio coestimulador, um domínio de ativação e uma região transmembrana. Em um aspecto, o CAR compreende dois domínios de ligação ao antí- geno, uma região de dobradiça, dois domínios coestimuladores, um do- mínio de ativação e uma região transmembrana.

[0063] Como usada aqui, a expressão “peptídeo de sinal” se refere a uma sequência líder na terminação amino (N-terminal) de uma prote- ína CAR nascente, que direciona cotraducionalmente ou pós-traducio- nalmente a proteína nascente para o retículo endoplasmático e subse- quente expressão na superfície.

[0064] Como usada aqui, a expressão “domínio de ligação extrace- lular ao antígeno”, “domínio extracelular” ou “domínio de ligação ao li- gante extracelular” se refere à parte de um CAR que está localizada fora da membrana celular e é capaz de se ligar a um antígeno, alvo ou li- gante.

[0065] Como usada aqui, a expressão “região de dobradiça” se re- fere à parte de um CAR que conecta dois domínios adjacentes da pro- teína CAR, por exemplo, o domínio extracelular e o domínio transmem- brana.

[0066] Como usada aqui, a expressão “domínio transmembrana” se refere à porção de um CAR que se estende através da membrana celu- lar e ancora o CAR à membrana celular. Domínios Coestimuladores

[0067] Como usado aqui, receptores de antígenos quiméricos po- dem incorporar domínios coestimuladores (sinalização) para aumentar sua potência. Um domínio coestimulador (sinalização) pode ser deri- vado de uma molécula coestimuladora. As moléculas coestimuladoras são moléculas da superfície celular diferentes dos receptores de antíge- nos ou seus ligantes que são necessários para uma resposta imune efi- ciente. Os domínios coestimuladores podem ser derivados de molécu- las coestimuladoras, que podem incluir, mas não estão limitadas a, CD28, CD28T, OX40, 4-1BB/CD137, CD2, CD3 (alfa, beta, delta, épsi- lon, gama, zeta), CD4, CD5, CD7, CD9, CD16, CD22, CD27, CD30, CD33, CD37, CD40, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, morte programada-1 (PD-1), coestimulador induzível de células T (ICOS ), antígeno-1 associado à função linfocitária (LFA-1; CD11a e

CD18), CD247, CD276 (B7-H3), LIGHT (membro 14 da superfamília do fator de necrose do tumor; TNFSF14), NKG2C, Ig alfa (CD79a), DAP10, receptor Fc gama, molécula MHC classe I, TNFR, integrina, molécula de ativação de sinalização linfocítica, BTLA, receptor do ligante de Toll, ICAM-1, CDS, GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD8 alfa, CD8 beta, IL-2R beta, IL-2R gama, IL-7R alfa, ITGA4, VLA1, CD49a, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, ITGAE, CD103, ITGAL, CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, ITGAM, ITGAX, ITGB1, CD29, ITGB2 (CD18), ITGB7, NKG2D, TNFR2, TRANCE / RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a, li- gante de CD83, receptor de citocina, receptores de ativação de células NK ou fragmentos ou qualquer combinação dos mesmos. Domínios de ativação

[0068] Como usado aqui, os receptores de antígenos quiméricos podem compreender domínios de ativação. Os domínios de ativação podem incluir, mas não estão limitados a CD3. CD3 é um elemento do receptor de células T nas células T nativas e foi mostrado ser um impor- tante elemento ativador intracelular em CARs. Em uma modalidade pre- ferida, o CD3 é CD3 zeta. Região da dobradiça

[0069] Como descrito aqui, o receptor de antígeno quimérico pode compreender uma região de dobradiça. Esta é uma porção do domínio extracelular, às vezes referida como uma região “espaçadora”. Uma va- riedade de dobradiças pode ser empregada de acordo com a invenção, incluindo moléculas coestimuladoras, como discutido acima, sequên- cias de imunoglobulina (Ig) ou outras moléculas adequadas para atingir a distância especial desejada da célula-alvo. Em algumas modalidades, toda a região extracelular compreende uma região de dobradiça. Região transmembrana

[0070] Como usado aqui, receptores de antígenos quiméricos (CARs) podem compreender uma região/domínio transmembrana. O CAR pode ser projetado para compreender um domínio transmembrana que é fundido ao domínio extracelular do CAR. Ele pode ser fundido de forma semelhante ao domínio intracelular do CAR. Em uma modalidade, o domínio transmembrana que está naturalmente associado com um dos domínios em um CAR é usado. Em alguns casos, o domínio trans- membrana pode ser selecionado ou modificado por substituição de ami- noácidos para evitar a ligação de tais domínios aos domínios transmem- brana das mesmas ou diferentes proteínas da superfície da membrana para minimizar as interações com outros membros do complexo recep- tor. O domínio transmembrana pode ser derivado de uma fonte natural ou sintética. Quando a fonte é natural, o domínio pode ser derivado de qualquer proteína ligada à membrana ou transmembrana. As regiões transmembrana de uso particular nesta invenção podem ser derivadas de (isto é, compreendem ou são engenheiradas a partir de), mas não estão limitadas a, CD28, CD28T, OX40, 4-1BB/CD137, CD2, CD3 (alfa, beta, delta, épsilon, gama, zeta), CD4, CD5, CD7, CD9, CD16, CD22, CD27, CD30, CD33, CD37, CD40, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, morte programada-1 (PD-1), coestimulador induzível de células T (ICOS), antígeno-1 associado à função linfocitária (LFA-1; CD11a e CD18), CD247, CD276 (B7-H3), LIGHT (membro da superfa- mília 14 do fator de necrose do tumor; TNFSF14), NKG2C, Ig alfa (CD79a), DAP10, receptor Fc gama, molécula MHC classe I, TNFR, in- tegrina, molécula de ativação linfocítica de sinalização, BTLA, receptor do ligante de Toll, ICAM-1, CDS, GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46,

CD19, CD8 alfa, CD8 beta, IL-2R beta, IL-2R gama, IL-7R alfa, ITGA4, VLA1, CD49a, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, ITGAE, CD103, ITGAL, CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, ITGAM, ITGAX, ITGB1, CD29, ITGB2 (CD18), ITGB7, NKG2D, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEA- CAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD 160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Lyl08), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP- 76, PAG/Cbp, CD19a, ligante de CD83, receptor de citocina, ativando receptores de células NK, uma proteína de imunoglobulina ou fragmen- tos ou qualquer combinação dos mesmos. Células Imunes

[0071] De acordo com aspectos particulares, a invenção provê cé- lulas que são células imunes que compreendem os polinucleotídeos iso- lados ou vetores que compreendem os polinucleotídeos isolados que compreendem a sequência de nucleotídeos que codifica o CAR. As cé- lulas imunes que compreendem os polinucleotídeos e/ou vetores isola- dos da invenção podem ser referidas como “células imunes engenhei- radas”. Preferivelmente, as células imunes engenheiradas são deriva- das de um humano (são de origem humana antes de serem tornadas recombinantes).

[0072] As células imunes engenheiradas podem, por exemplo, ser células da linhagem linfoide. Exemplos não limitantes de células da li- nhagem linfoide podem incluir células T e células Assassinas Naturais (NK). As células T expressam o receptor de células T (TCR), com a mai- oria das células expressando cadeias α e β e uma população menor que expressa as cadeias γ e δ. As células T úteis como células imunes en- genheiradas da invenção podem ser CD4+ ou CD8+ e podem incluir, mas não estão limitadas a, células T auxiliares (CD4+), células T citotó- xicas (também referidas como linfócitos T citotóxicos, CTL; células

CD8+) e células T de memória, incluindo células T de memória central, células T de memória semelhantes a célula-tronco e células T efetoras de memória, células T assassinas naturais, células T invariantes asso- ciadas à mucosa e células T γδ. Outras células imunes exemplares in- cluem, mas não estão limitadas, a macrófagos, células que apresentam antígeno (APCs) ou qualquer célula imune que expressa um inibidor de uma resposta imune mediada por célula, por exemplo, um receptor da via do inibidor de ponto de checagem imunológico (por exemplo, PD-1). Células precursoras de células imunes que podem ser utilizadas de acordo com a invenção, incluem, células-tronco hematopoiéticas e/ou células progenitoras. As células-tronco hematopoiéticas e/ou progenito- ras podem ser derivadas de medula óssea, sangue do cordão umbilical, sangue periférico adulto após mobilização de citocinas, e semelhantes, por métodos conhecidos na técnica. As células imunes são engenheira- das para expressar de forma recombinante os CARs da invenção.

[0073] As células imunes e suas células precursoras podem ser iso- ladas por métodos conhecidos na técnica, incluindo métodos disponí- veis comercialmente (vide, por exemplo, Rowland Jones e outros, Lym- phocytes: A Practical Approach, Oxford University Press, NY 1999). Fontes de células imunes ou seus precursores incluem, mas não estão limitadas, a sangue periférico, sangue do cordão umbilical, medula ós- sea ou outras fontes de células hematopoiéticas. Várias técnicas podem ser empregadas para separar as células para isolar ou enriquecer as células imunes desejadas. Por exemplo, métodos de seleção negativa podem ser usados para remover células que não são as células imunes desejadas. Além disso, métodos de seleção positiva podem ser usados para isolar ou enriquecer as células imunes desejadas ou suas precur- soras ou uma combinação de métodos de seleção positiva e negativa pode ser empregada. Se um tipo particular de célula deve ser isolado, por exemplo, uma célula T particular, vários marcadores de superfície celular ou combinações de marcadores (por exemplo, CD3, CD4, CD8, CD34) podem ser usados para separar as células.

[0074] As células imunes ou suas células precursoras podem ser autólogas ou não autólogas para o indivíduo ao qual são administradas nos métodos de tratamento da invenção. As células autólogas são iso- ladas do indivíduo no qual as células imunes engenheiradas que ex- pressam o CAR de forma recombinante devem ser administradas. Op- cionalmente, as células podem ser obtidas por leucaferese, em que os leucócitos são removidos seletivamente do sangue retirado, tornados recombinantes e, em seguida, transfundidos novamente para o doador. Alternativamente, células alogeneicas de um doador não autólogo que não é o indivíduo podem ser usadas. No caso de um doador não autó- logo, as células são tipificadas e correlacionadas para antígeno leucoci- tário humano (HLA) para determinar o nível apropriado de compatibili- dade. Para células autólogas e não autólogas, as células podem ser opcionalmente criopreservadas até que estejam prontas para uso.

[0075] Vários métodos para isolar células imunes que podem ser usados para expressão recombinante dos CARs da invenção foram des- critos anteriormente e podem ser usados incluindo, mas não se limi- tando ao, uso de linfócitos de doadores periféricos (Sadelain e outros, Nat. Rev. Cancer 3:35-45 (2003); Morgan e outros, Science 314:126-9 (2006)), usando culturas de linfócitos derivadas de linfócitos infiltrantes de tumor (TILs) em biópsias de tumor (Panelli e outros, J. Immunol. 164:495-504 (2000); Panelli e outros, J. Immunol. 164:4382-92 (2000)) e usando leucócitos de sangue periférico específicos para antígenos ex- pandidos seletivamente in vitro empregando células que apresentam antígenos artificiais (AAPCs) ou células dendríticas (Dupont e outros, Cancer Res. 65:5417-427 (2005); Papanicolaou e outros, Blood 102:2498-505 (2003)). No caso de usar células-tronco, as células po- dem ser isoladas por métodos bem conhecidos na técnica (vide, por exemplo, Klug e outros, Hematopoietic Stem Cell Protocols, Humana Press, NJ (2002); Freshney e outros, Culture of Human Stem Cells, John Wiley & Sons 2007).

[0076] De acordo com modalidades particulares, o método de pro- dução de células imunes engenheiradas compreende transfecção ou transdução de células imunes efetoras isoladas de um indivíduo, de modo que as células imunes efetoras expressam um ou mais CAR(s) de acordo com modalidades da invenção. Métodos de preparação de células imunes para imunoterapia são descritos, por exemplo, nos WO2014/130635, WO2013/176916 e WO2013/176915, que são aqui in- corporados a título de referência. As etapas individuais que podem ser usadas para a preparação de células imunes engenheiradas estão des- critas, por exemplo, nos WO2014/039523, WO2014/184741, WO2014/191128, WO2014/184744 e WO2014/184143, que são aqui in- corporados por referência.

[0077] Em uma modalidade particular, as células imunes efetoras, tais como células T, são geneticamente modificadas com CARs da in- venção (por exemplo, transduzidas com um vetor viral que compreende um ácido nucleico que codifica um CAR) e, em seguida, são ativadas e expandidas in vitro. Em várias modalidades, células T podem ser ativa- das e expandidas antes ou depois da modificação genética para expres- sar um CAR, usando métodos conforme descrito, por exemplo, nas US6352694, US6534055, US6905680, US6692964, US5858358, US6887466, US6905681, US7144575, US7067318, US7172869, US7232566, US7175843, US5883223, US6905874, US6797514, US6867041, US2006/121005, que estão aqui incorporados a título de referência. As células T podem ser expandidas in vitro ou in vivo. Geral- mente, as células T da invenção podem ser expandidas por contato com uma superfície que possui ligada a ela um agente que estimula um sinal associado ao complexo CD3/TCR e um ligante que estimula uma molé- cula coestimuladora na superfície das células T. Como exemplos não limitantes, as populações de células T podem ser estimuladas como aqui descrito, tal como por contato com um anticorpo anti-CD3, ou frag- mento de ligação ao antígeno do mesmo, ou um anticorpo anti-CD3 imo- bilizado em uma superfície, ou por contato com um ativador da proteína cinase C (por exemplo, briostatina) em conjunto com um ionóforo de cálcio ou pela ativação do próprio CAR. Para coestimulação de uma molécula acessória na superfície das células T, um ligante que se ligue à molécula acessória é usado. Por exemplo, uma população de células T pode ser contatada com um anticorpo anti-CD3 e um anticorpo anti- CD28, sob condições apropriadas para estimular a proliferação das cé- lulas T. As condições apropriadas para a cultura de células T incluem, por exemplo, um meio apropriado (por exemplo, Meio Mínimo Essencial ou meio RPMI 1640 ou X-vivo 5 (Lonza)) que pode conter fatores ne- cessários para proliferação e viabilidade, incluindo soro (por exemplo, soro fetal bovino ou soro humano), citocinas, tais como IL-2, IL-7, IL-15 e/ou IL-21, insulina, IFN-g, GM-CSF, TGFβ e/ou quaisquer outros aditi- vos para o crescimento de células conhecidos por aqueles versados na técnica. Em outras modalidades, as células T podem ser ativadas e es- timuladas para proliferar com células alimentadoras e anticorpos e cito- cinas apropriados usando métodos tais como aqueles descritos nas US6040177, US5827642 e WO2012129514, que são incorporados a tí- tulo de referência. Domínios de ligação ao Antígeno

[0078] Como usada aqui, a expressão “domínio de ligação ao antí- geno” se refere a um fragmento de anticorpo tal como, por exemplo, um diacorpo, um Fab, um Fab', um F(ab')2, um fragmento Fv, um fragmento Fv estabilizado por dissulfeto (dsFv), um (dsFv)2, um dsFv biespecífico (dsFv-dsFv'), um diacorpo estabilizado por dissulfeto (diacorpo ds), uma molécula de anticorpo de cadeia única (scFv), um anticorpo de domínio único (sdAb), um dímero de scFv (diacorpo bivalente), um anticorpo multiespecífico formado a partir de uma porção de um anticorpo que compreende uma ou mais CDRs, um anticorpo de domínio único came- lizado, um nanocorpo, um anticorpo de domínio, um anticorpo de domí- nio bivalente ou qualquer outro fragmento de anticorpo que se ligue a um antígeno, mas não compreenda uma estrutura de anticorpo com- pleta. Um domínio de ligação de antígeno é capaz de se ligar ao mesmo antígeno ao qual o anticorpo parental se liga. De acordo com modalida- des particulares, o domínio de ligação ao antígeno compreende uma molécula de anticorpo de cadeia única (scFv).

[0079] Como usada aqui, a expressão “anticorpo” é usada em um sentido amplo e inclui moléculas de imunoglobulina ou de anticorpo in- cluindo anticorpos humanos, humanizados, compósitos e quiméricos e fragmentos de anticorpos que são monoclonais ou policlonais. Em geral, anticorpos são proteínas ou cadeias de peptídeos que exibem especifi- cidade de ligação para um antígeno específico. Estruturas de anticorpo são bem conhecidas. As imunoglobulinas podem ser classificadas em cinco classes principais (isto é, IgA, IgD, IgE, IgG e IgM), dependendo da sequência de aminoácidos do domínio constante da cadeia pesada. IgA e IgG são ainda subclassificadas como os isotipos IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4.Consequentemente, os anticorpos da invenção po- dem ser de qualquer uma das cinco classes principais ou subclasses correspondentes. Preferivelmente, os anticorpos da invenção são IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4. As cadeias leves de anticorpos de espécies de ver- tebrados podem ser classificadas em um de dois tipos claramente dis- tintos, a saber kappa e lambda, com base nas sequências de aminoáci- dos de seus domínios constantes. Consequentemente, os anticorpos da invenção podem conter um domínio constante de cadeia leve kappa ou lambda. De acordo com modalidades particulares, os anticorpos da in- venção incluem regiões constantes de cadeia pesada e/ou leve de anti- corpos de rato ou humano. Além dos domínios constantes pesados e leves, os anticorpos contêm uma região de ligação ao antígeno que é composta por uma região variável da cadeia leve e uma região variável da cadeia pesada, cada uma das quais contendo três domínios (isto é, regiões determinantes de complementaridade 1-3; CDR1, CDR2 e CDR3). Os domínios da região variável da cadeia leve são alternativa- mente referidos como LCDR1, LCDR2 e LCDR3, e os domínios da re- gião variável da cadeia pesada são alternativamente referidos como HCDR1, HCDR2 e HCDR3.

[0080] Como usada aqui, a expressão “anticorpo de cadeia única” se refere a um anticorpo convencional de cadeia única na técnica, que compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variá- vel de cadeia leve conectadas por um peptídeo curto com cerca de 5 a cerca de 20 aminoácidos. Como usada aqui, a expressão “anticorpo de domínio único” se refere a um anticorpo de domínio único convencional na técnica, que compreende uma região variável da cadeia pesada e uma região constante da cadeia pesada ou que compreende apenas uma região variável da cadeia pesada.

[0081] Como usada aqui, a expressão “anticorpo humano” se refere a um anticorpo produzido por um humano ou um anticorpo que possui uma sequência de aminoácidos que corresponde a um anticorpo produ- zido por um humano feito usando qualquer técnica conhecida. Esta de- finição de um anticorpo humano inclui anticorpos intactos ou de compri- mento integral, seus fragmentos e/ou anticorpos que compreendem pelo menos um polipeptídeo de cadeia pesada e/ou leve humano.

[0082] Como usada aqui, a expressão “domínio de ligação ao antígeno huma- nizado” se refere a um domínio de ligação ao antígeno não humano que é modificado para aumentar a homologia de sequência com aquela de um anticorpo humano, de modo que as propriedades de ligação ao an- tígeno do domínio de ligação ao antígeno são retidas, mas sua antige- nicidade no corpo humano é reduzida.

[0083] Como usada aqui, a expressão “domínio de ligação ao antí- geno quimérico” se refere a um domínio de ligação ao antígeno em que a sequência de aminoácidos da molécula de imunoglobulina é derivada de duas ou mais espécies. A região variável de ambas as cadeias leve e pesada muitas vezes corresponde à região variável de um domínio de ligação ao antígeno derivado de uma espécie de mamífero (por exem- plo, camundongo, rato, coelho, etc.) que possui especificidade, afini- dade e capacidade desejadas, enquanto as regiões constantes corres- pondem às sequências de um domínio de ligação ao antígeno derivado de outra espécie de mamífero (por exemplo, humano) para evitar de- sencadeamento de uma resposta imune nessa espécie.

[0084] Como usada aqui, a expressão “CLDN18.2” se refere à vari- ante 2 de claudina 18, claudina-18.2 ou claudina-18a2.1, que pertence à família claudina de proteínas de transmembrana. CLDN18.2 é especi- ficamente expressa na superfície de células epiteliais no estômago (Ni- imi e outros, Mol. Cell Biol. 2001; 21:7380-7390) e se torna um dos prin- cipiais componentes estruturais da junção firme entre as células epiteli- ais (Sahin e outros, Physiol. Rev. 2013; 93:525-569). O termo “CLDN18.2 humana” se refere à CLDN18.2 originada de um humano. Uma sequência de aminoácido exemplar de uma CLDN18.2 humana é representada no Acesso GenBank No. AAL15637.1 (SEQ ID NO: 141).

[0085] Como usado aqui, um domínio de ligação de antígeno que “se se liga especificamente à CLDN18.2” se refere a um domínio de li- gação de antígeno que se liga a uma CLDN18.2, de preferência uma CLDN18.2 humana, com uma KD de 1 x 10-7 M ou menos, preferivel- mente 1 x 10-8 M ou menos, mais preferivelmente 5 x 10-9 M ou menos,

1 x 10-9 M ou menos, 5 x 10-10 M ou menos ou 1 x 10-10 M ou menos. A expressão “KD” se refere à constante de dissociação, que é obtida a partir da razão de Kd para Ka (isto é, Kd/Ka) e é expressa como uma concentração molar (M). Os valores de KD para domínios de ligação ao antígeno podem ser determinados usando métodos na técnica em vista da presente descrição. Por exemplo, a KD de um domínio de ligação ao antígeno pode ser determinada usando ressonância de plasma de su- perfície, tal como usando um sistema biossensor, por exemplo, um sis- tema Biacore®, ou usando a tecnologia de interferometria de biocamada, como um sistema Octet RED96.

[0086] Quanto menor o valor da KD de um domínio de ligação de antígeno, maior a afinidade com a qual o domínio de ligação de antígeno se liga a um antígeno-alvo.

[0087] De acordo com um aspecto particular, a invenção se refere a receptores de antígenos quiméricos (CAR)s que compreendem um domínio de ligação ao antígeno, em que o domínio de ligação ao antí- geno compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (LCDR1), LCDR2 e LCDR3, que possuem as sequências de polipeptídeos de: (1) SEQ ID NOs: 21, 22, 23, 51, 52 e 53, respectivamente; (2) SEQ ID NOs: 24, 25, 26, 54, 55 e 56, respectivamente; (3) SEQ ID NOs: 27, 28, 29, 57, 58 e 59, respectivamente; (4) SEQ ID NOs: 30, 31, 32, 60, 61 e 62, respectivamente; (5) SEQ ID NOs: 33, 34, 35, 63, 64 e 65, respectivamente; (6) SEQ ID NOs: 36, 37, 38, 66, 67 e 68, respectivamente; (7) SEQ ID NOs: 39, 40, 41, 69, 70 e 71, respectivamente; (8) SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 72, 73 e 74, respectivamente; (9) SEQ ID NOs: 45, 46, 47, 75, 76 e 77, respectivamente; ou (10) SEQ ID NOs: 48, 49, 50, 78, 79 e 80, respectivamente;

em que o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente à CLDN18.2, de preferência CLDN18.2 humana.

[0088] De acordo com outro aspecto particular, a invenção se refere a receptores de antígenos quiméricos (CARs) que compreendem um domínio de ligação ao antígeno, em que o domínio de ligação ao antí- geno compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (LCDR1), LCDR2 e LCDR3, que possuem as sequências de polipeptídeos de: (1) SEQ ID NOs: 81, 82, 83, 111, 112 e 113, respectivamente; (2) SEQ ID NOs: 84, 85, 86, 114, 115 e 116, respectivamente; (3) SEQ ID NOs: 87, 88, 89, 117, 118 e 119, respectivamente; (4) SEQ ID NOs: 90, 91, 92, 120, 121 e 122, respectivamente; (5) SEQ ID NOs: 93, 94, 95, 123, 124 e 125, respectivamente; (6) SEQ ID NOs: 96, 97, 98, 126, 127 e 128, respectivamente; (7) SEQ ID NOs: 99, 100, 101, 129, 130 e 131, respectiva- mente; (8) SEQ ID NOs: 102, 103, 104, 132, 133 e 134, respectiva- mente; (9) SEQ ID NOs: 105, 106, 107, 135, 136 e 137, respectiva- mente; ou (10) SEQ ID NOs: 108, 109, 110, 138, 139 e 140, respectiva- mente; em que o domínio de ligação ao antígeno liga especificamente à CLDN18.2, de preferência CLDN18.2 humana.

[0089] De acordo com outro aspecto particular, a invenção se refere a um domínio de ligação ao antígeno compreendendo uma região vari- ável da cadeia pesada com uma sequência de polipeptídeos pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo me- nos 99% idêntica à SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 ou 19 ou uma região variável de cadeia leve que possui uma sequência de poli- peptídeos pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 ou 20.

[0090] De acordo com outro aspecto particular, a invenção se refere a um domínio de ligação ao antígeno, que compreende: (1) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 1 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 2 (2) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 3 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 4 (3) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 5 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 6 (4) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 7 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 8; (5) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 9 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 10; (6) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 11, e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 12; (7) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 13 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 14; (8) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 15 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 16;

(9) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 17 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 18; (10) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 19 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 20.

[0091] De acordo com outro aspecto particular, o domínio de ligação ao antígeno é humanizado e compreende uma região variável da cadeia pesada com uma sequência de polipeptídeos pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO: 142, 143, 146, 147, 151, 152, 154, 155, 156, 159, 160, 161, 162, 166, 167, 170, 171, 172, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 186, 187, 191, 192 ou 193 ou uma região variável de cadeia leve que possui uma sequência de polipeptídeos pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO: 144, 145, 148, 149, 150, 153, 157, 158, 163, 164, 165, 168, 169, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 185, 188, 189, 190, 194, 195, 196 ou

197.

[0092] De acordo com outro aspecto particular, o domínio de ligação ao antí- geno é humanizado e compreende: (1) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:142 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:144; (2) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:142 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:145; (3) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:143 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:144;

(4) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:143 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:145; (5) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:146 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:148; (6) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:146 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:149; (7) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:146 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:150; (8) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:147 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:148; (9) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:147 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:149; (10) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:147 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:150; (11) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:151 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:153; (12) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:152 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:153; (13) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:154 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:157;

(14) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:155 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:157; (15) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:156 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:158; (16) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:159 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:163; (17) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:159 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:164; (18) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:160 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:163; (19) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:160 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:164; (20) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:161 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:165; ou (21) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:162 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:165.

[0093] De acordo com outro aspecto particular, o domínio de ligação ao antígeno é um fragmento variável de cadeia única (scFv) que se liga especificamente à CLDN18.2, de preferência CLDN18.2 humana.

[0094] Em certas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno é um fragmento variável de cadeia única humanizado (scFv) que se se liga especificamente à CLDN18.2, de preferência CLDN18.2 humana.

Em certas modalidades, o fragmento variável de cadeia única (scFv) humanizado compreende uma sequência de polipeptídeos pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo me- nos 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 198-215. Em certas modalidades, o fragmento variável de cadeia única (scFv) humanizado compreende uma sequência de polipeptídeos que possui uma sequên- cia de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 198-215.

[0095] De acordo com outro aspecto particular, o receptor de antí- geno quimérico compreende um ou mais domínios de ligação ao antí- geno.

[0096] De acordo com outro aspecto particular, o domínio de sinali- zação intracelular compreende um ou mais domínios coestimuladores e um ou mais domínios de ativação.

[0097] Em outro aspecto geral, a invenção se refere a um polinucle- otídeo isolado que compreende um ácido nucleico que codifica um re- ceptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno do mesmo da invenção. Será compre- endido por aqueles versados na técnica que a sequência codificadora de uma proteína pode ser alterada (por exemplo, substituída, deletada, inserida, etc.) sem alterar a sequência de aminoácidos da proteína. Con- sequentemente, será entendido por aqueles versados na técnica que as sequências de ácido nucleico que codificam seus domínios de ligação ao antígeno da invenção podem ser alteradas sem alterar as sequências de aminoácidos das proteínas.

[0098] Em outro aspecto geral, a invenção se refere a um vetor que compreende o polinucleotídeo isolado que compreende o ácido nucleico que codifica o CAR, em que o CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno do mesmo da invenção. Qualquer vetor conhecido por aqueles versados na técnica tendo em vista a presente descrição pode ser usado, tal como um plasmídeo, um cosmídeo, um vetor de fago ou um vetor viral. Em algumas modalidades, o vetor é um vetor de expres- são recombinante, tal como um plasmídeo. O vetor pode incluir qualquer elemento para estabelecer uma função convencional de um vetor de expressão, por exemplo, um promotor, elemento de ligação ao ribos- soma, terminador, intensificador, marcador de seleção e origem de re- plicação. O promotor pode ser um promotor constitutivo, induzível ou reprimível. Vários vetores de expressão capazes de distribuir ácidos nu- cleicos a uma célula são conhecidos na técnica e podem ser usados aqui para a produção de um domínio de ligação ao antígeno do mesmo na célula. Técnicas convencionais de clonagem ou síntese de genes artificiais podem ser usadas para gerar um vetor de expressão recom- binante de acordo com modalidades da invenção.

[0099] Em outro aspecto geral, a invenção se refere a uma célula transduzida com o vetor que compreende os ácidos nucleicos isolados que codificam os CARs da invenção. A expressão “transduzido” ou “transdução” se refere a um processo pelo qual o ácido nucleico exó- geno é transferido ou introduzido na célula hospedeira. Uma célula “transduzida” é aquela que foi transduzida com ácido nucleico exógeno. A célula inclui a célula principal e sua progênie. Em certas modalidades, a célula é uma célula CAR-T humana, em que a célula T é engenheirada para expressar o CAR da invenção para tratar doenças como o câncer. Em certas modalidades, a célula é uma célula CAR-NK humana, em que a célula NK engenheirada para expressar o CAR da invenção é usada para tratar doenças como o câncer.

[00100] Em outro aspecto geral, a invenção se refere a um método de produção de uma célula CAR-T pela transdução de uma célula T com um vetor que compreende os ácidos nucleicos isolados que codificam os CARs da invenção.

[00101] Em outro aspecto geral, a invenção se refere a um método de produção da célula CAR-T do mesmo da invenção, compreendendo cultura de células T que compreende um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR) da invenção sob condições para produzir a célula CAR-T e recuperar a célula CAR-T.

[00102] Em outro aspecto geral, a invenção se refere a um método de produção de uma célula CAR-NK por meio da transdução de uma célula NK com um vetor que compreende os ácidos nucleicos isolados que codificam os CARs da invenção.

[00103] Em outro aspecto geral, a invenção se refere a um método de produção de uma célula CAR-NK da invenção, que compreende cul- tura de células NK que compreendem os ácidos nucleicos que codificam seu receptor de antígeno quimérico (CAR) sob condições para produzir a célula CAR-NK e recuperar a célula CAR-NK.

[00104] Em outro aspecto geral, a invenção se refere a um método para gerar uma população de células com RNA engenheirado que com- preende um receptor de antígeno quimérico (CAR) da invenção. Os mé- todos compreendem contato de uma população de células com polinu- cleotídeos isolados que compreendem um ácido nucleico que codifica um CAR da invenção, em que os polinucleotídeos isolados são RNA transcrito in vitro ou RNA sintético. Composições Farmacêuticas

[00105] Em outro aspecto geral, a invenção se refere a uma compo- sição farmacêutica que compreende um polinucleotídeo isolado da in- venção, um polipeptídeo isolado da invenção, uma célula hospedeira da invenção e/ou uma célula imune engenheirada da invenção e um veí- culo farmaceuticamente aceitável. A expressão “composição farmacêu- tica”, como usada aqui, significa um produto que compreende um poli- nucleotídeo isolado da invenção, um polipeptídeo isolado da invenção, uma célula hospedeira da invenção e/ou uma célula imune engenhei-

rada da invenção juntamente com um veículo farmaceuticamente acei- tável. Polinucleotídeos, polipeptídeos, células hospedeiras e/ou células imunes engenheiradas da invenção e composições que as compreen- dem também são úteis na fabricação de um medicamento para aplica- ções terapêuticas aqui mencionadas.

[00106] Como usada aqui, a expressão “veículo” se refere a qualquer excipiente, diluente, carga, sal, tampão, estabilizador, solubilizante, óleo, lipídio, vesícula contendo lipídio, microesfera, encapsulação lipos- somal ou outro material bem conhecido na técnica para uso em formu- lações farmacêuticas. Será entendido que as características do veículo, excipiente ou diluente dependerão da via de administração para uma aplicação particular. Como usada aqui, a expressão “veículo farmaceu- ticamente aceitável” se refere a um material não tóxico que não interfere com a eficácia de uma composição de acordo com a invenção ou a ati- vidade biológica de uma composição de acordo com a invenção. De acordo com modalidades particulares, em vista da presente invenção, qualquer veículo farmaceuticamente aceitável adequado para uso em um polinucleotídeo, polipeptídeo, célula hospedeira e/ou composição farmacêutica de célula imune engenheirada pode ser usado na inven- ção.

[00107] A formulação de ingredientes farmaceuticamente ativos com veículos farmaceuticamente aceitáveis é conhecida na técnica, por exemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (por exem- plo, 21ª edição (2005) e quaisquer edições posteriores). Exemplos não limitantes de ingredientes adicionais incluem: tampões, diluentes, sol- ventes, agentes reguladores de tonicidade, conservantes, estabilizado- res e agentes quelantes. Um ou mais veículos farmaceuticamente acei- táveis podem ser usados na formulação das composições farmacêuti- cas da invenção. Métodos de Uso

[00108] Em outro aspecto geral, a invenção se refere a um método de tratamento de um câncer em um indivíduo em necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao indivíduo das células CAR- T e/ou células CAR-NK da invenção. O câncer pode, por exemplo, ser selecionado, mas não limitado a, um câncer de pulmão, um câncer gás- trico, um câncer esofageal, um câncer do duto da bile, um colangiocar- cinoma, um câncer de cólon, um carcinoma hepatocelular, um carci- noma de células renais, um carcinoma urotelial de bexiga, um mela- noma metastático, um câncer de mama, um câncer de ovário, um cân- cer cervical, um câncer de cabeça e pescoço, um câncer pancreático, um glioma, um glioblastoma, e outros tumores sólidos e um linfoma não Hodgkin (NHL), uma leucemia linfocítica aguda (LLA), uma leucemia lin- focítica crônica (CLL), uma leucemia mielógena crônica (CML), um mi- eloma múltiplo (MM), uma leucemia mieloide aguda (AML) e outros tu- mores líquidos.

[00109] Em outro aspecto geral, a invenção se refere a um método de tratamento de uma doença inflamatória em um indivíduo em neces- sidade do mesmo, compreendendo a administração ao indivíduo das células CAR-T e/ou CAR-NK da invenção.

[00110] indivíduo em necessidade do mesmoDe acordo com as mo- dalidades da invenção, a célula CAR-T ou a célula CAR-NK compre- ende uma quantidade terapeuticamente eficaz dos CARs expressos da invenção. Como usada aqui, a expressão “quantidade terapeuticamente eficaz” se refere a uma quantidade de um ingrediente ativo ou compo- nente que provoque a resposta biológica ou medicinal desejada em um indivíduo. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode ser determi- nada empiricamente e de forma rotineira, em relação ao propósito de- clarado.

[00111] Como usada aqui com referência a CARs, uma quantidade terapeuticamente eficaz significa uma quantidade da molécula de CAR expressa na célula T ou célula NK transduzida que modula uma res- posta imune em um indivíduo em necessidade do mesmo. Além disso, como usada aqui com referência a CARs, uma quantidade terapeutica- mente eficaz significa uma quantidade da molécula de CAR expressa na célula T ou célula NK transduzida que resulta no tratamento de uma doença, distúrbio ou condição; previne ou retarda a progressão da do- ença, distúrbio ou condição; ou reduz ou alivia completamente sintomas associados à doença, distúrbio ou condição.

[00112] Como usada aqui com referência à célula CAR-T ou célula CAR-NK, uma quantidade terapeuticamente eficaz significa uma quan- tidade de células CAR-T ou células CAR-NK que modula uma resposta imune em um indivíduo em necessidade do mesmo. Além disso, como usada aqui com referência à célula CAR-T ou célula CAR-NK, uma quantidade terapeuticamente eficaz significa uma quantidade de células CAR-T ou células CAR-NK que resulta no tratamento de uma doença, distúrbio ou condição; previne ou retarda a progressão da doença, dis- túrbio ou condição; ou reduz ou alivia completamente os sintomas as- sociados à doença, distúrbio ou condição.

[00113] indivíduo em necessidade do mesmoDe acordo com modali- dades particulares, a doença, distúrbio ou condição a ser tratado é cân- cer, de preferência um câncer selecionado do grupo que consiste em um câncer de pulmão, um câncer gástrico, um câncer esofageal, um câncer do duto da bile, um colangiocarcinoma, um câncer de cólon, um carcinoma hepatocelular, um carcinoma de células renais, um carci- noma urotelial da bexiga, um melanoma metastático, um câncer de mama, um câncer de ovário, um câncer cervical, um câncer de cabeça e pescoço, um câncer pancreático, um glioma, um glioblastoma e outros tumores sólidos e um linfoma não Hodgkin (NHL), uma leucemia linfocí- tica aguda (LLA), uma leucemia linfocítica crônica (CLL), uma leucemia mielógena crônica (CML), um mieloma múltiplo (MM), uma leucemia mi- eloide aguda (AML) e outros tumores líquidos. De acordo com modali- dades particulares, a doença, distúrbio ou condição a ser tratado é uma doença inflamatória.

[00114] De acordo com modalidades particulares, uma quantidade terapeuticamente eficaz se refere à quantidade de terapia que é sufici- ente para atingir um, dois, três, quatro ou mais dos seguintes efeitos: (i) reduzir ou melhorar a gravidade da doença, distúrbio ou condição a ser tratado ou um sintoma associado a ele; (ii) reduzir a duração da doença, distúrbio ou condição a ser tratado ou um sintoma associado a ele; (iii) prevenir a progressão da doença, distúrbio ou condição a ser tratado ou um sintoma associado ao mesmo; (iv) causar regressão da doença, dis- túrbio ou condição a ser tratado ou um sintoma associado a ele; (v) pre- venir o desenvolvimento ou início da doença, distúrbio ou condição a ser tratado ou um sintoma associado ao mesmo; (vi) prevenir a recor- rência da doença, distúrbio ou condição a ser tratado ou um sintoma associado ao mesmo; (vii) reduzir hospitalização de um indivíduo com a doença, distúrbio ou condição a ser tratado ou um sintoma associado a ele; (viii) reduzir o tempo de hospitalização de um indivíduo com a do- ença, distúrbio ou condição a ser tratado ou um sintoma associado a ele; (ix) aumentar a sobrevivência de um indivíduo com a doença, dis- túrbio ou condição a ser tratado ou um sintoma associado ao mesmo; (xi) inibir ou reduzir a doença, distúrbio ou condição a ser tratado ou um sintoma associado a ele em um indivíduo; e/ou (xii) aumentar ou melho- rar o(s) efeito(s) profilático(s) ou terapêutico(s) de outra terapia.

[00115] A quantidade ou dosagem terapeuticamente eficaz pode va- riar de acordo com vários fatores, tais como a doença, distúrbio ou con- dição a ser tratado, o meio de administração, o local alvo, o estado fisi- ológico do indivíduo (incluindo, por exemplo, idade, peso corporal, sa- úde), se o indivíduo é um humano ou um animal, outros medicamentos administrados e se o tratamento é profilático ou terapêutico. As dosa- gens de tratamento são tituladas de maneira ideal para otimizar a segu- rança e a eficácia.

[00116] De acordo com modalidades particulares, as composições aqui descritas são formuladas para serem adequadas para a via de ad- ministração pretendida a um indivíduo. Por exemplo, as composições aqui descritas podem ser formuladas para serem adequadas para ad- ministração intravenosa, subcutânea ou intramuscular.

[00117] As células da invenção podem ser administradas de qual- quer maneira conveniente conhecida por aqueles versados na técnica. Por exemplo, as células da invenção podem ser administradas ao indi- víduo por inalação de aerossol, injeção, ingestão, transfusão, implante e/ou transplante. As composições que compreendem as células da in- venção podem ser administradas por via transarterial, subcutânea, in- tradérmica, intratumoral, intranodal, intramedular, intramuscular, intra- pleural, por injeção intravenosa (i.v.) ou intraperitoneal. Em certas mo- dalidades, as células da invenção podem ser administradas com ou sem linfodepleção do indivíduo.

[00118] As composições farmacêuticas que compreendem as células da invenção que expressam CARs da invenção podem ser fornecidas em preparações líquidas estéreis, tipicamente soluções aquosas isotô- nicas com suspensões de células ou, opcionalmente, como emulsões, dispersões ou semelhantes, que são tipicamente tamponadas até um pH selecionado. As composições podem compreender veículos, por exemplo, água, solução salina, solução salina tamponada com fosfato e semelhantes, adequados para a integridade e viabilidade das células e para a administração de uma composição celular.

[00119] Soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas pela in- corporação das células da invenção em uma quantidade adequada do solvente apropriado com vários outros ingredientes, conforme desejado.

Essas composições podem incluir um veículo, diluente ou excipiente far- maceuticamente aceitáveis, tais como água estéril, solução salina fisio- lógica, glicose, dextrose ou semelhantes, que são adequados para uso com uma composição celular e para administração a um indivíduo, tal como um humano. Os tampões adequados para fornecer uma compo- sição celular são bem conhecidos na técnica. Qualquer veículo, diluente ou aditivo usado é compatível com a preservação da integridade e via- bilidade das células da invenção.

[00120] As células da invenção podem ser administradas em qual- quer veículo fisiologicamente aceitável. Uma população de células que compreende células da invenção pode compreender uma população de células purificadas. Aqueles versados na técnica podem determinar prontamente as células em uma população de células usando vários métodos bem conhecidos. As faixas de pureza em populações de célu- las que compreendem células geneticamente modificadas da invenção podem ser de cerca de 50% a cerca de 55%, de cerca de 55% a cerca de 60%, de cerca de 60% a cerca de 65%, de cerca de 65% a cerca de 70 %, de cerca de 70% a cerca de 75%, de cerca de 75% a cerca de 80%, de cerca de 80% a cerca de 85%, de cerca de 85% a cerca de 90%, de cerca de 90% a cerca de 95%, ou de cerca de 95% a cerca de 100%. As dosagens podem ser facilmente ajustadas por aqueles versa- dos na técnica, por exemplo, uma diminuição na pureza pode exigir um aumento na dosagem.

[00121] As células da invenção são geralmente administradas como uma dose baseada em células por quilograma (células/kg) de peso cor- poral do indivíduo ao qual as células serão administradas. Geralmente, as doses de células estão na faixa de cerca de 104 a cerca de 1010 cé- lulas/kg de peso corporal, por exemplo, cerca de 105 a cerca de 109, cerca de 105 a cerca de 108, cerca de 105 a cerca de 107, ou cerca de

105 a cerca de 106, dependendo do modo e localização de administra- ção. Em geral, no caso de administração sistêmica, uma dose mais ele- vada é usada do que na administração regional, onde as células imunes da invenção são administradas na região de um tumor e/ou câncer. As faixas de dose exemplares incluem, mas não estão limitadas a 1 x 104 a 1 x 108, 2 x 104 a 1 x 108, 3 x 104 a 1 x 108, 4 x 104 a 1 x 108, 5 x 104 a 6 x 108, 7 x 104 a 1 x 108, 8 x 104 a 1 x 108, 9 x 104 a 1 x 108, 1 x 105 a 1 x 108, 1 x 105 a 9 x 107, 1 x 105 a 8 x 107, 1 x 105 a 7 x 107, 1 x 105 a 6 x 107, 1 x 105 a 5 x 107, 1 x 105 a 4 x 107, 1 x 105 a 4 x 107, 1 x 105 a 3 x 107, 1 x 105 a 2 x 107, 1 x 105 a 1 x 107, 1 x 105 a 9 x 106, 1 x 105 a 8 x 106, 1 x 105 a 7 x 106, 1 x 105 a 6 x 106, 1 x 105 a 5 x 106, 1 x 105 a 4 x 106, 1 x 105 a 4 x 106, 1 x 105 a 3 x 106, 1 x 105 a 2 x 106, 1 x 105 a 1 x 106, 2 x 105 a 9 x 107, 2 x 105 a 8 x 107, 2 x 105 a 7 x 107, 2 x 105 a 6 x 107, 2 x 105 a 5 x 107, 2 x 105 a 4 x 107, 2 x 105 a 4 x 107, 2 x 105 a 3 x 107, 2 x 105 a 2 x 107, 2 x 105 a 1 x 107, 2 x 105 a 9 x 106, 2 x 105 a 8 x 106, 2 x 105 a 7 x 106, 2 x 105 a 6 x 106, 2 x 105 a 5 x 106, 2 x 105 a 4 x 106, 2 x 105 a 4 x 106, 2 x 105 a 3 x 106, 2 x 105 a 2 x 106, 2 x 105 a 1 x 106, 3 x 105 a 3 x 106 células/kg e semelhantes. Além disso, a dose pode ser ajustada para levar em consideração se uma única dose está sendo administrada ou se múltiplas doses estão sendo administradas. A determinação precisa do que seria considerada uma dose eficaz pode ser baseada em fatores individuais para cada indivíduo .

[00122] Como usadas aqui, as expressões “tratar”, “tratando” e “tra- tamento” se destinam todas a se referir a uma melhoria ou reversão de pelo menos um parâmetro físico mensurável relacionado a um câncer e/ou uma doença inflamatória, distúrbio ou condição, que não é neces- sariamente discernível no indivíduo , mas pode ser discernível no su- jeito. As expressões “tratar”, “tratando” e “tratamento” também podem se referir a causar regressão, prevenir a progressão ou, pelo menos, desacelerar a progressão da doença, distúrbio ou condição. Em uma modalidade particular, “tratar”, “tratando” e “tratamento” se referem a um alívio, prevenção do desenvolvimento ou início ou redução na duração de um ou mais sintomas associados à doença, distúrbio ou condição, tal como um tumor ou mais preferivelmente um câncer. Em uma moda- lidade particular, “tratar”, “tratando” e “tratamento” se referem à preven- ção da recorrência da doença, distúrbio ou condição. Em uma modali- dade particular, “tratar”, “tratando” e “tratamento” se referem a um au- mento na sobrevivência de um indivíduo que possui uma doença, dis- túrbio ou condição. Em uma modalidade particular, “tratar”, “tratando” e “tratamento” se referem à eliminação da doença, distúrbio ou condição no indivíduo.

[00123] De acordo com modalidades particulares, são fornecidas composições usadas no tratamento de um câncer e/ou uma doença, distúrbio ou condição inflamatória. Para terapia do câncer, as composi- ções fornecidas podem ser usadas em combinação com outro trata- mento incluindo, mas não se limitando a, uma quimioterapia, um mAb anti-CD20, um mAb anti-TIM-3, um mAb anti-LAG-3, um mAb anti- EGFR, um mAb anti-HER-2, um mAb anti-CD19, um mAb anti- CLDN18.2, um mAb anti-CD47, um mAb anti-CD73, um mAb anti-DLL- 3, um mAb antiapelina, um mAb anti-TIP-1, um mAb anti-FOLR1, um mAb anti-CTLA-4, um mAb anti-PD-L1, um mAb anti-PD-1, outros fár- macos imuno-oncológicos, um agente antiangiogênico, uma terapia com radiação, um conjugado anticorpo-fármaco (ADC), uma terapia di- recionada ou outros fármacos anticâncer.

[00124] De acordo com modalidades particulares, os métodos de tra- tamento do câncer e/ou doença inflamatória em um indivíduo em neces- sidade do mesmo compreendem administração ao indivíduo das células CAR-T e/ou células CAR-NK da invenção em combinação com um agente que aumenta a eficácia de uma célula que expressa uma molé- cula de CAR. Tais agentes incluem, mas não se limitam a, um fragmento de anticorpo que se liga a CD73, CD39, PD1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3 ou LAG3, ou um antagonista do receptor de adenosina A2a.

[00125] De acordo com modalidades particulares, os métodos de tra- tamento de câncer e/ou doença inflamatória em um indivíduo em neces- sidade do mesmo compreendem administração ao indivíduo das células CAR-T e/ou células CAR-NK da invenção em combinação com um agente que melhora um ou mais efeitos colaterais associados com ad- ministração de uma célula que expressa uma molécula de CAR. Esses agentes incluem, mas não se limitam a, um esteroide, um inibidor de TNFα ou um inibidor de IL-6.

[00126] De acordo com modalidades particulares, os métodos de tra- tamento de câncer e/ou doença inflamatória em um indivíduo em neces- sidade do mesmo compreendem administração ao indivíduo das células CAR-T e/ou células CAR-NK da invenção em combinação com um agente que trata a doença associada à Claudina 18.2. Esses agentes incluem, mas não se limitam a, um anticorpo monoclonal anticlaudina

18.2 ou anticorpo biespecífico.

[00127] Como usada aqui, a expressão “em combinação”, no con- texto da administração de duas ou mais terapias a um indivíduo, se re- fere ao uso de mais de uma terapia. O uso da expressão “em combina- ção” não restringe a ordem em que as terapias são administradas a um indivíduo. Por exemplo, uma primeira terapia (por exemplo, uma com- posição aqui descrita) pode ser administrada antes da (por exemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 16 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas ou 12 semanas antes), concomitantemente à ou subsequente à (por exemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 16 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 se- manas, 6 semanas, 8 semanas ou 12 semanas após) a administração de um segunda terapia a um indivíduo.

MODALIDADES

[00128] A invenção também provê as seguintes modalidades não li- mitantes.

[00129] A modalidade 1 é um polinucleotídeo isolado que compre- ende uma sequência de ácido nucleico que codifica um receptor de an- tígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende: (a) um domínio extracelular que compreende pelo menos um domínio de ligação ao an- tígeno que liga se especificamente à claudina 18.2 (CLDN18.2); (b) uma região de dobradiça; (c) uma região transmembrana; e (d) um domínio de sinalização intracelular.

[00130] A modalidade 2 é o polinucleotídeo isolado da modalidade 1, em que o domínio de ligação ao antígeno compreende uma região de- terminante de complementaridade de cadeia pesada 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (LCDR1), LCDR2 e LCDR3, o polipeptídeo possuindo as sequências de: (1) SEQ ID NOs: 21, 22, 23, 51, 52 e 53, respectivamente; (2) SEQ ID NOs: 24, 25, 26, 54, 55 e 56, respectivamente; (3) SEQ ID NOs: 27, 28, 29, 57, 58 e 59, respectivamente; (4) SEQ ID NOs: 30, 31, 32, 60, 61 e 62, respectivamente; (5) SEQ ID NOs: 33, 34, 35, 63, 64 e 65, respectivamente; (6) SEQ ID NOs: 36, 37, 38, 66, 67 e 68, respectivamente; (7) SEQ ID NOs: 39, 40, 41, 69, 70 e 71, respectivamente; (8) SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 72, 73 e 74, respectivamente; (9) SEQ ID NOs: 45, 46, 47, 75, 76 e 77, respectivamente; ou (10) SEQ ID NOs: 48, 49, 50, 78, 79 e 80, respectivamente; em que o domínio de ligação ao antígeno se se liga especificamente à

CLDN18.2, de preferência CLDN18.2 humana

[00131] A modalidade 3 é o polinucleotídeo isolado da modalidade 1, em que o domínio de ligação ao antígeno compreende uma região de- terminante de complementaridade de cadeia pesada 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (LCDR1), LCDR2 e LCDR3, o polipeptídeo possuindo as sequências de: (1) SEQ ID NOs: 81, 82, 83, 111, 112 e 113, respectivamente; (2) SEQ ID NOs: 84, 85, 86, 114, 115 e 116, respectivamente; (3) SEQ ID NOs: 87, 88, 89, 117, 118 e 119, respectivamente; (4) SEQ ID NOs: 90, 91, 92, 120, 121 e 122, respectivamente; (5) SEQ ID NOs: 93, 94, 95, 123, 124 e 125, respectivamente; (6) SEQ ID NOs: 96, 97, 98, 126, 127 e 128, respectivamente; (7) SEQ ID NOs: 99, 100, 101, 129, 130 e 131, respectiva- mente; (8) SEQ ID NOs: 102, 103, 104, 132, 133 e 134, respectiva- mente; (9) SEQ ID NOs: 105, 106, 107, 135, 136 e 137, respectiva- mente; ou (10) SEQ ID NOs: 108, 109, 110, 138, 139 e 140, respectiva- mente; em que o domínio de ligação ao antígeno liga especificamente à CLDN18.2, de preferência CLDN18.2 humana.

[00132] A modalidade 4 é o polinucleotídeo isolado de qualquer uma das modalidades 1 a 3, em que o domínio de ligação ao antígeno com- preende uma região variável da cadeia pesada com uma sequência de polipeptídeos pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 ou 19 ou uma região variável de cadeia leve que possui uma sequência de polipeptídeos pelo menos 95% , pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 ou 20.

[00133] A modalidade 5 é o polinucleotídeo isolado de qualquer uma das modalidades 1 a 4, em que o domínio de ligação ao antígeno com- preende: (1) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 1 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 2; (2) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 3 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 4; (3) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 5 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 6; (4) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 7 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 8; (5) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 9 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 10; (6) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 11, e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 12; (7) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 13 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 14; (8) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 15 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 16; (9) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 17 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 18; (10) uma região variável da cadeia pesada com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 19 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 20.

[00134] A modalidade 6 é o polinucleotídeo isolado de qualquer uma das modalidades 1 a 3, em que o domínio de ligação ao antígeno é hu- manizado e compreende uma região variável da cadeia pesada com uma sequência de polipeptídeos pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica a qual- quer uma das SEQ ID NOs: 142, 143, 146, 147, 151, 152, 154, 155, 156, 159, 160, 161, 162, 166, 167, 170, 171, 172, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 186, 187, 191, 192 ou 193 ou uma região variável da cadeia leve com uma sequência de polipeptídeos pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 144, 145, 148, 149, 150, 153, 157, 158, 163, 164, 165, 168, 169, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 185, 188, 189, 190, 194, 195, 196 ou 197.

[00135] A modalidade 7 é o polinucleotídeo isolado da modalidade 6, em que o domínio de ligação ao antígeno é humanizado e compreende; (1) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:142 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:144; (2) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:142 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:145; (3) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:143 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:144;

(4) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:143 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:145; (5) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:146 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:148; (6) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:146 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:149; (7) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:146 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:150; (8) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:147 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:148; (9) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:147 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:149; (10) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:147 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:150; (11) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:151 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:153; (12) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:152 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:153; (13) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:154 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:157;

(14) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:155 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:157; (15) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:156 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:158; (16) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:159 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:163; (17) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:159 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:164; (18) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:160 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:163; (19) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:160 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:164; (20) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:161 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:165; ou (21) uma região variável de cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:162 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:165.

[00136] A modalidade 8 é o polinucleotídeo isolado de qualquer uma das modalidades 1 a 7, em que o domínio de ligação ao antígeno é um fragmento variável de cadeia única (scFv) que se liga especificamente à CLDN18.2, de preferência CLDN18.2 humana.

[00137] A modalidade 9 é o polinucleotídeo isolado da modalidade 8, em que o fragmento variável de cadeia única (scFv) é humanizado e compreende uma sequência de polipeptídeo pelo menos 95% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOs: 198-215. A modalidade 10 é o polinucleotídeo isolado de qualquer uma das mo- dalidades 1 a 9, em que o receptor de antígeno quimérico (CAR) com- preende um ou mais domínios de ligação ao antígeno.

[00138] A modalidade 11 é o polinucleotídeo isolado de qualquer uma das modalidades 1 a 10, em que o domínio de sinalização intrace- lular do CAR compreende um ou mais domínios coestimuladores e um ou mais domínios de ativação.

[00139] A modalidade 12 é um receptor de antígeno quimérico (CAR) codificado pelo polinucleotídeo isolado de qualquer uma das modalida- des 1 a 11.

[00140] A modalidade 13 é um vetor que compreende o polinucleotí- deo isolado de qualquer uma das modalidades 1 a 11.

[00141] A modalidade 14 é uma célula hospedeira que compreende o vetor da modalidade 13.

[00142] A modalidade 15 é a célula hospedeira da modalidade 14, em que a célula é uma célula CAR-T, de preferência uma célula CAR-T humana.

[00143] A modalidade 16 é uma célula hospedeira da modalidade 14, em que a célula é uma célula CAR-NK, preferivelmente uma célula CAR-NK humana.

[00144] A modalidade 17 é um método para produção de uma célula hospedeira que expressa um receptor de antígeno quimérico (CAR), o método compreendendo transdução de uma célula T com o vetor da modalidade 13.

[00145] A modalidade 18 é um método de produção de um receptor de antígeno quimérico (CAR)-célula T, o método compreendendo culti- var as células T que compreendem o polinucleotídeo isolado que com-

preende um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimé- rico (CAR) de qualquer uma das modalidades 1 a 11 sob condições para produzir a célula CAR-T e recuperar a célula CAR-T.

[00146] A modalidade 19 é um método de produção de uma célula hospedeira que expressa um receptor de antígeno quimérico (CAR), o método compreendendo a transdução de uma célula NK com o vetor da modalidade 13.

[00147] A modalidade 20 é um método de produção de um receptor de antígeno quimérico (CAR)-célula NK, o método compreendendo cul- tura de células NK que compreendem o polinucleotídeo isolado que compreende um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR) de qualquer uma das modalidades 1 a 11 sob condi- ções para produzir a célula CAR-NK e recuperar a célula CAR-NK.

[00148] A modalidade 21 é um método para gerar uma célula que compreende um receptor de antígeno quimérico (CAR), o método com- preendendo contato de uma célula com o polinucleotídeo isolado que compreende um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR) de qualquer uma das modalidades 1 a 11, em que o polinucleotídeo isolado é um RNA transcrito in vitro ou RNA sintético.

[00149] A modalidade 22 é um método de tratamento de câncer em um indivíduo em necessidade do mesmo, o método compreendendo a administração ao indivíduo da célula hospedeira de qualquer uma das modalidades 14 a 16.

[00150] A modalidade 23 é o método da modalidade 22, em que o câncer é selecionado de um câncer de pulmão, um câncer gástrico, um câncer esofageal, um câncer do duto da bile, um colangiocarcinoma, um câncer de cólon, um carcinoma hepatocelular, um carcinoma de célula renal, um carcinoma urotelial da bexiga, um melanoma metastático, um câncer de mama, um câncer de ovário, um câncer cervical, um câncer de cabeça e pescoço, um câncer pancreático, um glioma, um glioblas- toma e outros tumores sólidos, e um linfoma não Hodgkin (NHL), uma leucemia linfocítica aguda (ALL), uma leucemia linfocítica crônica (CLL), uma leucemia mielógena crônica (CML), um mieloma múltiplo (MM), uma leucemia mieloide aguda (AML) e outros tumores líquidos.

[00151] A modalidade 24 é um método de tratamento de uma doença inflamatória em um indivíduo em necessidade do mesmo, o método compreendendo administrar ao indivíduo a célula hospedeira de qual- quer uma das modalidades 14 a 16.

[00152] A modalidade 25 é o método de qualquer uma das modali- dades 22 a 24, compreendendo ainda administrar ao indivíduo em ne- cessidade do mesmo um agente que aumenta a eficácia de uma célula que expressa uma molécula de CAR.

[00153] A modalidade 26 é o método de qualquer uma das modali- dades 22 a 24, compreendendo ainda administrar ao indivíduo em ne- cessidade do mesmo um agente que melhora um ou mais efeitos cola- terais associados à administração de uma célula que expressa uma mo- lécula de CAR.

[00154] A modalidade 27 é o método de qualquer uma das modali- dades 22 a 24, compreendendo ainda administrar ao indivíduo em ne- cessidade do mesmo um agente que trata a doença associada à Clau- dina 18.2.

EXEMPLOS Exemplo 1: Identificação de domínios de ligação ao antígeno que se ligam especificamente à CLDN18.2

[00155] Os domínios de ligação ao antígeno que se ligam especifica- mente à CLDN18.2 são mAbs anti-CLDN18.2 isolados e sequenciados conforme descrito no PCT No. PCT/US219/020872, depositado em 6 de março de 2019, que é incorporado aqui a título de referência em sua totalidade.

[00156] Sequências de regiões variáveis de cadeias pesada e leve para os domínios de ligação a antígeno que se ligam especificamente à CLDN18.2 são fornecidas nas Tabelas 1 e 2 e as regiões das CDR dos domínios de ligação ao antígeno que se ligam especificamente à CLDN18.2 são fornecidas nas Tabelas 3-6. Tabela 1: Sequências de regiões variáveis da cadeia pesada para os domínios de ligação ao antígeno que se ligam especificamente à CLDN18.2 Nome VH SEQ ID NO: EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYGMSWVRQTPDKRLEWVATISGGGSYTYYL- 2-C3 1

DSVKGRFTISRDIAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYFCARQSRGNAMDYWGQGTSVTVSS EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYSFTGYNMHWVKQSHGKSLEWIGYIDPYNGVTNYN- 2-P8 3

QKFKGKATLTVDKSSSTAYVQLNSLTSEDSAVYYCARWGGNYVDYWGQGTTLKVSS EVQLVESGGALVKPGGSLKLSCAASGFTFSKYAMSWVRQTPEKRLEWVAFISNGGSYTYCL- 3-E21 5

DSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTALYYCARHDKGNALDYWGQGNSVTVSS EIQLQQSGAELVKPGASVKISCKASGYSFTGYNMKWVKQSHGKSLEWIGNINPYFGSTNYN- 3-P21 7

QKFKGKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARGAYYGNAMDYWGQGTSVTVSS KVQLQQSGPDLVEPGASVKISCKASGYTITDNYMHWVKQKPGQGLEWI- 5-E22 9

GEIYPGSGNTYYNERFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARGFPYYAMDYWGPGTSVTVSS DVQLVESGGGLVQPGGSRKLSCAASGFIFSSFGMHWVRQAPEKGLEWVAYISSGRS- 6-J11 11

TMYYADTVKGRFTISRDNPKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARGGFYGNSLDYWGQGTSVTVSS QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYAFSDYWMNWVKQRPGKGLEWIGQIYPGYGDT- 8-G12 13

KYNENFKGTATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARWGYYGNAMDYWGQGTSVTVSS QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTRYRMNWVKQRPGQGLEWIGNIDPSDSETHYN- 10-J10 15

QKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVFYCARLNYGNCFDYWGQGTTLTVSS EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYAFTSYVMHWVKQKPGQGLEWIGYINPYSDG- 10-K2 17

TRYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCTRIYYGNAMDYWGQGTSVTVSS QVQLQQPGADLVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWINWVKQRPGQGLE- 15-D6 19

WIGNIYPGRSSTNYNEKFKSKATLTVDTSSSTAYMQLSSLASDDSAVYYCSRLSRGNAMDYWGQGTSVTVSS VH: região variável de cadeia pesada Tabela 2: Sequências das regiões variáveis da cadeia leve para os do- mínios de ligação ao antígeno que se ligam especificamente à CLDN18.2

SEQ ID Nome VL NO: DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 2-C3 2

GVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPLTFGAGTKLELK DIKMTQSPSSMYASLGERVTITCKASQDINRYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPS- 2-P8 4

RFSGSFSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELK DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 3-E21 6

GVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLSVYYCQNDYFYPLTFGAGTKLELK DIVMTQSPSSLTVTAGGKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 3-P21 8

GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYFYPLTFGAGTKLELK DIQMNQSPSSLSASLGDTITITCHARQNINVWLSWYQQKSGNIPKLLIYKASNLHTGVPS- 5-E22 10

RFSGSGSGTRFTLTISSLQPEDMATYYCQQGQNYPLTFGGGTKLEIK DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSLSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 6-J11 12

GVPDRFTGSGSGTDFTLTISSMQAEDLAVYSCQNAYSYPLTFGAGTKLELK DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 8-G12 14

GVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQTEDLAIYYCQNAYIYPLTFGAGTKLELK DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 10-J10 16

GVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVFYCQNDYFYPFTFGSGTKLEIK

DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 10-K2 18

GVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPFTFGSGTKLEIK DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCRSSQSLLNSGNQKSYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 15-D6 20

GVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYYYPFTFGSGTKLEIK Região variável da cadeia leve Tabela 3: Regiões 1 a 3 de cadeia pesada para os domínios de ligação a antígeno que se ligam especificamente à CLDN18.2 Nome HC CDR1 NO HC CDR2 NO HC CDR3 NO 2-C3 GFTFSSYG 21 ISGGGSYT 22 ARQSRGNAMDY 23 2-P8 GYSFTGYN 24 IDPYNGVT 25 ARWGGNYVDY 26 3-E21 GFTFSKYA 27 ISNGGSYT 28 ARHDKGNALDY 29 3-P21 GYSFTGYN 30 INPYFGST 31 ARGAYYGNAMDY 32 5-E22 GYTITDNY 33 IYPGSGNT 34 ARGFPYYAMDY 35 6-J11 GFIFSSFG 36 ISSGRSTM 37 ARGGFYGNSLDY 38 8-G12 GYAFSDYW 39 IYPGYGDT 40 ARWGYYGNAMDY 41 10-J10 GYTFTRYR 42 IDPSDSET 43 ARLNYGNCFDY 44 10-K2 GYAFTSYV 45 INPYSDGT 46 TRIYYGNAMDY 47 15-D6 GYTFTSYW 48 IYPGRSST 49 SRLSRGNAMDY 50 HC: cadeia pesada; CDR: região determinante de complementaridade; NO: SEQ ID NO As CDRs de HC para os domínios de ligação ao antígeno que se ligam especificamente à CLDN18.2 foram determinadas utilizando o método IMGT (Lefranc, M.P. e outros, Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212). Tabela 4: Regiões das CDR 1 a 3 de cadeia leve para os domínios de ligação a antígeno que se ligam especificamente à CLDN18.2 Nome LC CDR1 NO LC CDR2 NO LC CDR3 NO 2-C3 QSLLNSGNQKNY 51 WAS 52 QNDYSYPLT 53 2-P8 QDINRY 54 RAN 55 LQYDEFPLT 56 3-E21 QSLLNSGNQKNY 57 WAS 58 QNDYFYPLT 59 3-P21 QSLLNSGNQKNY 60 WAS 61 QNDYFYPLT 62 5-E22 QNINVW 63 KAS 64 QQGQNYPLT 65 6-J11 LSLLNSGNQKNY 66 WAS 67 QNAYSYPLT 68 8-G12 QSLLNSGNQKNY 69 WAS 70 QNAYIYPLT 71 10-J10 QTLLNSGNQKNY 72 WAS 73 QNDYFYPFT 74 10-K2 QSLLNSGNQKNY 75 WAS 76 QNDYSYPFT 77 15-D6 QSLLNSGNQKSY 78 WAS 79 QNDYYYPFT 80 LC: cadeia leve; CDR: região determinante de complementaridade; NO:

SEQ ID NO As CDRs de LC para os domínios de ligação ao antígeno que se ligam especificamente à CLDN18.2 foram determinadas utilizando o método IMGT (Lefranc, M.P. e outros, Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212).

Tabela 5: Regiões 1 a 3 das CDR da cadeia pesada para os domínios de ligação ao antígeno que se ligam especificamente a DLL3 Nome HC CDR1 NO HC CDR2 NO HC CDR3 NO 2-C3 GFTFSSYGMS 81 TISGGGSYTYYLDSVKG 82 ARQSRGNAMDY 83 2-P8 GYSFTGYNMH 84 YIDPYNGVTNYNQKFKG 85 ARWGGNYVDY 86 3-E21 GFTFSKYAMS 87 FISNGGSYTYCLDSVKG 88 ARHDKGNALDY 89 3-P21 GYSFTGYNMK 90 NINPYFGSTNYNQKFKG 91 ARGAYYGNAMDY 92 5-E22 GYTITDNYMH 93 EIYPGSGNTYYNERFKG 94 ARGFPYYAMDY 95 6-J11 GFIFSSFGMH 96 YISSGRSTMYYADTVKG 97 ARGGFYGNSLDY 98 8-G12 GYAFSDYWMN 99 QIYPGYGDTKYNENFKG 100 ARWGYYGNAMDY 101 10-J10 GYTFTRYRMN 102 NIDPSDSETHYNQKFKD 103 ARLNYGNCFDY 104 10-K2 GYAFTSYVMH 105 YINPYSDGTRYNEKFKG 106 TRIYYGNAMDY 107 15-D6 GYTFTSYWIN 108 NIYPGRSSTNYNEKFKS 109 SRLSRGNAMDY 110 HC: cadeia pesada; CDR: região determinante de complementaridade; NO: SEQ ID NO As CDRs de HC para os domínios de ligação ao antígeno que se ligam especificamente à CLDN18.2 foram determinadas utilizando uma com- binação de IMGT (Lefranc, M.P. e outros, Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212) e Kabat (Elvin A. Kabat e outros, Sequences of Proteins of Immunological Interest 5ª ed. 1991). Tabela 6: Regiões 1 a 3 das CDR da cadeia leve para os domínios de ligação ao antígeno que se ligam especificamente à CLDN18.2 Nome LC CDR1 NO LC CDR2 NO LC CDR3 NO 2-C3 KSSQSLLNSGNQKNYLT 111 WASTRES 112 QNDYSYPLT 113 2-P8 KASQDINRYLS 114 RANRLVD 115 LQYDEFPLT 116 3-E21 KSSQSLLNSGNQKNYLT 117 WASTRES 118 QNDYFYPLT 119 3-P21 KSSQSLLNSGNQKNYLT 120 WASTRES 121 QNDYFYPLT 122 5-E22 HARQNINVWLS 123 KASNLHT 124 QQGQNYPLT 125 6-J11 KSSLSLLNSGNQKNYLT 126 WASTRES 127 QNAYSYPLT 128 8-G12 KSSQSLLNSGNQKNYLT 129 WASTRES 130 QNAYIYPLT 131 10-J10 KSSQTLLNSGNQKNYLT 132 WASTRES 133 QNDYFYPFT 134 10-K2 KSSQSLLNSGNQKNYLT 135 WASTRES 136 QNDYSYPFT 137 15-D6 RSSQSLLNSGNQKSYLT 138 WASTRES 139 QNDYYYPFT 140 LC: cadeia leve; CDR: região determinante de complementaridade; NO:

SEQ ID NO As CDRs de LC para os domínios de ligação ao antígeno que se ligam especificamente à CLDN18.2 foram determinadas utilizando uma com- binação de IMGT (Lefranc, M.P. e outros, Nucleic Acid Res. 1999; 27:209-212) e Kabat (Elvin A. Kabat e outros, Sequences of Proteins of

Immunological Interest 5ª ed. 1991). Exemplo 2: Humanização de mAbs anti-CLDN18.2 de camundongo

[00157] Os mAbs anti-CLDN18.2 de camundongo foram humaniza- dos para reduzir o potencial de imunogenicidade quando usados em pa- cientes humanos, conforme descrito no PCT/US19/020872, depositado em 6 de março de 2019, que é aqui incorporado a título de referência em sua totalidade. As sequências das regiões VH e VL humanizadas são mostradas na Tabela 7. Tabela 7: Sequências da regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve de domínios de ligação a antígeno humanizados que se ligam es- pecificamente à CLDN18.2

SEQ ID VH/VL SEQUÊNCIA NO: QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTASGFTFSSYGMSWVRQPPGKALEWVATISGGGSYTYYN- 2-C3-H1 142

PSLKDRFTISRDISANQLVLKVTNMDPADTATYFCARQSRGNAMDYWGQGTTVTVSS QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFTFSSYGMSWIRQPPGKALEWLATISGGGSYTYYL- 2-C3-H2 143

DSLKDRFTISRDISKNQVVLTVTNMDPADTATYFCARQSRGNAMDYWGQGTTVTVSS DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRES- 2-C3-L1 144

GVPSRFSGSGSGTAFTLTISSLQPDDFATYYCQNDYSYPLTFGGGTKVEIK DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRES- 2-C3-L2 145

GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQNDYSYPLTFGGGTKVEIK QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTITDNYMHWVRQAPGQGLEWI- 5-E22-H1 146

GEIYPGSGNTYFNEKFKNRATLTADKSTTTAYMELKSLQFDDTAVYFCARGFPYYAMDYWGQGTTVTVSS QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTITDNYMHWVRQAPGQGLEWI- 5-E22-H3 147

GEIYPGSGNTYYAEKFKNRATLTADKSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCARGFPYYAMDYWGQGTLVTVSS EIVMTQSPATLSLSPGERATLSCHARQNINVWLSWYQQKPGQAPRLLIYKASNLHTGVPAR- 5-E22-L1 148

FSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGQNYPLTFGGGTKVEIK EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCHARQNINVWLSWYQQKPGQAPRLLIYKASNLHTGIPAR- 5-E22-L2 149

FSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGQNYPLTFGGGTKVEIK DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCHARQNINVWLSWYLQKPGQSPQLLIYKASNLHTGVP- 5-E22-L3 150

DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQGQNYPLTFGQGTKVEIK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGRS- 6-J11-H1 151

TMYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLTAEDTAVYYCARGGFYGNSLDYWGQGTLVTVSS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGRS- 6-J11-H2 152

TMYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRSEDTAVYYCARGGFYGNSLDYWGQGTLVTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSLSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRES- 6-J11-L1 153

GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYSCQNAYSYPLTFGQGTKVEIK QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTASGFTFSKYAMNWVRQPPGRGLEWVAFISNGGSYTEYN- 3-E21-H1 154

PSVKGRFTILRDNSKNQLSLRLSSVTAADTAVYYCARHDKGNALDYWGQGSLVTVSS QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTASGFTFSKYAMSWVRQPPGRGLEWVAFISNGGSYTEYN- 3-E21-H2 155

PSVKGRFTILRDNSKNQLSLKLSSVTAADTAVYYCARHDKGNALDYWGQGSLVTVSS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSKYAMSWVRQAPGKGLEWVAAIS- 3-E21-H3 156

NGGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHDKGNALDYWGQGTLVTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGKAPKLLIYWASN- 3-E21-L1 157

LQTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQNDYFYPLTFGQGTKVEIK DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 3-E21-L2 158

GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPLTFGQGTRLEIK EIQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYNIHWVRQAPGKGLEWIGYINPYF- 3-P21-H1 159

GSTDYADSVKGRATLSVDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAYYGNAMDYWGQGTLVTVSS EIQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYNMKWVRQAPGKGLEWIGNINPYF- 3-P21-H2 160

GSTNYADSVKGRATLSVDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAYYGNAMDYWGQGTLVTVSS

EIQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYSFTGYNIGWVRQMPGKGLEWIGIINPYF- 3-P21-H3 161

GSTRYSPSFQGQATLSVDKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGAYYGNAMDYWGQGTLVTVSS EIQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYSFTGYNMKWVRQMPGKGLEWIGIINPYF- 3-P21-H4 162

GSTNYSPSFQGQATLSVDKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGAYYGNAMDYWGQGTLVTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLLNSGNQKNYVTWYQQKPGKAPKLLIYWASFLYS- 3-P21-L1 163

GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNDYFYPLTFGQGTKVEIK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLLNSGNQKNYVTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRES- 3-P21-L2 164

GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNDYFYPLTFGQGTKVEIK DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 3-P21-L3 165

GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPLTFGQGTKVEIK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYAFSDYWMNWVRQAPGKGLEWIGQIYPGYGDTKHN- 8-G12-H1 166

QRFMDRATLSADKSTSTAYMQMNSLRAEDTAVYFCARWGYYGNAMDYWGQGTLVTVSS QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSDYWMNWVRQAPGQGLEWIGQIYPGYGDT- 8-G12-H2 167

KYAQKFQGRATLTADKSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCARWGYYGNAMDYWGQGTLVTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRES- 8-G12-L1 168

GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNAYIYPLTFGQGTKVEIK DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 8-G12-L2 169

GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNAYIYPLTFGGGTKVEIK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYAFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYSDGTRHN- 10-K2-H1 170

QRFMDRATLSSDKSTSTAYMQMNSLRAEDTAVYYCTRIYYGNAMDYWGQGTLVTVSS QVQLVQSGAEVRKPGASVTVSCKASGYAFTSYVMHWVRQAPGQGLEWIGYINPYSDG- 10-K2-H2 171

TRFAQKFKGRATLTSDKSTSTAFMELSSLRSDDTAIYYCTRIYYGNAMDYWGQGTLVTVSS QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYVMHWVRQAPGQGLEWIGYINPYSDG- 10-K2-H3 172

TRFAQKFKGRVTLTSDKSTSTAYMELSSLRSDDTAVYYCTRIYYGNAMDYWGQGTLVTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRES- 10-K2-L1 173

GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNDYSYPFTFGQGTKVEIK DIVMTQSPLSLPVTPGEAASISCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTRES- 10-K2-L2 174

GVPHRFSGSGSGTEFTLKISRVEAEDVGVYYCQNDYSYPFTFGQGTKVEIK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWINWVRQAPGKGLEWIGDIYPGRSSTNYN- 15-D6-H1 175

QNFKDRATLSVDTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRLSRGNAMDYWGQGTLVTVSS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWINWVRQAPGKGLEWIGDIYPGRSSTNYN- 15-D6-H2 176

QNFKGRATLSVDTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRLSRGNAMDYWGQGTLVTVSS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWINWVRQAPGKGLEWIGNIYPGRSSTNYN- 15-D6-H3 177

QNFKGRATLSVDTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRLSRGNAMDYWGQGTLVTVSS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWIHWVRQAPGKGLE- 15-D6-H4 178

WIGYIYPGRSSTNYNEKFKGRATLSVDTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRLSRGNAMDYWGQGTLVTVSS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWINWVRQAPGKGLE- 15-D6-H5 179

WIGYIYPGRSSTNYNEKFKGRATLSVDTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRLSRGNAMDYWGQGTLVTVSS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWINWVRQAPGKGLE- 15-D6-H6 180

WIGNIYPGRSSTNYNEKFKGRATLSVDTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRLSRGNAMDYWGQGTLVTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLLNSGNQKSYMTWYQQKPGKAPKLLIYWASNHAS- 15-D6-L1 181

GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNDYYYPFTFGQGTKVEIK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLLNSGNQKSYMTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRES- 15-D6-L2 182

GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNDYYYPFTFGQGTKVEIK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLLNSGNQKSYLTWYQQKPGKAPKLLIYWASNHAS- 15-D6-L3 183

GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNDYYYPFTFGQGTKVEIK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLLNSGNQKSYVTWYQQKPGKAPKLLIYWA- 15-D6-L4 184

SHRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNDYYYPFTFGQGTKVEIK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLLNSGNQKSYVTWYQQKPGKAPKLLIYWA- 15-D6-L5 185

SHRYTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQNDYYYPFTFGQGTKVEIK QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTRYRISWVRQAPGQGLEWIGGIDPSDSET- 10-J10-H1 186

NYAQKFQGRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLNYGNCFDYWGQGTLVTVSS QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTRYRISWVRQAPGQGLEWIGGIDPSDSET- 10-J10-H2 187

NYAQKFQGRATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLNYGNCFDYWGQGTLVTVSS DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 10-J10-L1 188

GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPFTFGQGTRLEIK DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQTLLNSGNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 10-J10-L2 189

GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPFTFGQGTKVEIK DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 10-J10-L3 190

GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPFTFGQGTKVEIK QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYSFTGYNLHWVRQAPGQGLEWIGWIDPYNGVT- 2-P8-H1 191

QYNEKFKGRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARWGGNYVDYWGQGTTVTVSS QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYNLHWVRQAPGQGLEWIGWIDPYNGVT- 2-P8-H2 192

QYNEKFKGRVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARWGGNYVDYWGQGTTVTVSS

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYSFTGYNINWVRQAPGQGLEWIGWIDPYNGVT- 2-P8-H3 193

KYNEKFKGRATLTVDKSTNTAYMELSSLRSEDTAFYYCARWGGNYVDYWGQGTLVTVSS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINRYVSWFQQKPGKAPKTLIYRANYRYSGVPS- 2-P8-L1 194

RFSGSFSGQDYTLTISSLQPEDFATYYCLQYDEFPLTFGQGTKVEIK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINRYVSWFQQKPGKAPKTLIYRANYRYSGVPS- 2-P8-L2 195

RFSGSFSGQDYTLTISSLQPEDFATYYCLQYDEFPLTFGQGTKVEIK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINRYVSWFQQKPGKAPKSLIYRANYRYSGVPS- 2-P8-L3 196

RFSGSGSGQDYTLTISSLQPEDFATYYCLQYDEFPLTFGQGTKVEIK DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQDINRYLSWFQQKPGKAPKTLIYRANNLASGVPS- 2-P8-L4 197

RFSGSFSGQEYTLTISSLQPDDFATYYCLQYDEFPLTFGQGTKVEIK

[00158] As regiões VH e VL humanizadas foram fundidas às regiões constantes da cadeia pesada de IgG1 humana e cadeia leve kappa, res- pectivamente. Os mAbs humanizados foram nomeados da seguinte forma: 2-C3-H1L1 se refere ao mAb com a região variável da cadeia pesada de 2-C3-H1 e a região variável da cadeia leve de 2-C3-L11; to- dos os outros mAbs humanizados adotam a mesma regra de nomencla- tura.

[00159] Vários mAbs humanizados foram testados quanto à sua ha- bilidade em se ligar à CLDN18.2 e CLDN18.1. mAb 15-D6 quimérico foi também usado no ensaio. Linhagens de células estáveis (HEK293- CLDN18.2 e HEK293-CLDN18.1) expressando CLDN18.2 e CLDN18.2 humanas, respectivamente, foram usadas em experimentos FACS com detecção baseada em Alexa Fluor® 488 como descrito no PCT/US19/020872. Os mAbs foram testados a 10 μg/mL. Os resultados são mostrados nas FIGs. 1A-1B. “MFI” é “Intensidade de Fluorescência Média”.

[00160] mAbs humanizados adicionais foram testados quanto à sua capacidade de se ligar à CLDN18.2 usando a linhagem de célula estável HEK293-CLDN18.2 e o mesmo protocolo FACS, com a modificação que iodeto de propídio (PI) foi incubado junto com o anticorpo secundário para marcar células mortas. Os resultados são mostrados nas FIGs. 2A- 2D. Exemplo 3: Conversão de mAbs humanizados em scFvs

[00161] Os mAbs humanizados foram convertidos em scFvs, cada um dos quais consistindo em uma VH e uma VL com um ligante (G4S)n entre elas (onde “n” representa o número de repetições de G4S). A re- gião VH ou VL foi colocada na N-terminal da proteína de fusão para identificar os modelos de scFv mais eficazes. As sequências dos scFvs modelados são mostradas na Tabela 8. Os scFvs foram nomeados da seguinte forma: 2-C3-H2(G4S)3L2 se refere ao scFv com região variável de cadeia pesada de 2-C3-H2, o ligante (G4S)3, e região variável de ca- deia leve de 2-C3-L2; todos os outros scFvs adotam a mesma regra de nomenclatura. Tabela 8: Sequências de scFvs humanizados que se ligam especifica- mente à CLDN8.12

SEQ Nome SEQUÊNCIA ID NO: QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFTFSSYGMSWIRQPPGKALEWLATISGGGSYTYYL-

DSLKDRFTISRDISKNQVVLTVTNMDPADTATYFCARQSRGNAMDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQ 2-C3-H2(G4S)3L2 198 MTQSPSTLSASVGDRVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGV-

PSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQNDYSYPLTFGGGTKVEIK QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFTFSSYGMSWIRQPPGKALEWLATISGGGSYTYYL-

DSLKDRFTISRDISKNQVVLTVTNMDPADTATYFCARQSRGNAMDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGG 2-C3-H2(G4S)4L2 199 GGSDIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGKAPKLLIYWAS-

TRESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQNDYSYPLTFGGGTKVEIK DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRES-

GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQNDYSYPLTFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVTLRESGP 2-C3-L2(G4S)3H2 200 ALVKPTQTLTLTCTFSGFTFSSYGMSWIRQPPGKALEWLATISGGGSYTYYLDSLKDRFTIS-

RDISKNQVVLTVTNMDPADTATYFCARQSRGNAMDYWGQGTTVTVSS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGRS-

TMYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLTAEDTAVYYCARGGFYGNSLDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSG 6-J11-H1(G4S)3L1 201 GGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSLSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGKAPKLLIYWAS-

TRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYSCQNAYSYPLTFGQGTKVEIK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGRS-

TMYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLTAEDTAVYYCARGGFYGNSLDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSG 6-J11-H1(G4S)4L1 202 GGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSLSLLNSGNQKNYLTWYQQK-

PGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYSCQNAYSYPLTFGQGTKVEIK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSLSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRES-

GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYSCQNAYSYPLTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGG 6-J11-L1(G4S)3H1 203 GLVQPGGSLRLSCAASGFIFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGRSTMYYADSVKGRFTIS-

RDNSKNTLYLQMNSLTAEDTAVYYCARGGFYGNSLDYWGQGTLVTVSS QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTITDNYMHWVRQAPGQGLEWI- 5-E22- GEIYPGSGNTYYAEKFKNRATLTADKSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCARGFPYYAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSG 204 H3(G4S)3L3 GGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCHARQNINVWLSWYLQKPGQSPQLLIYKASN-

LHTGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQGQNYPLTFGQGTKVEIK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTITDNYMHWVRQAPGQGLEWI- 5-E22- GEIYPGSGNTYYAEKFKNRATLTADKSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCARGFPYYAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSG 205 H3(G4S)4L3 GGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCHARQNINVWLSWYLQK-

PGQSPQLLIYKASNLHTGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQGQNYPLTFGQGTKVEIK

DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCHARQNINVWLSWYLQKPGQSPQLLIYKASNLHTGVP- 5-E22- DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQGQNYPLTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEV 206 L3(G4S)3H3 KKPGASVKVSCKASGYTITDNYMHWVRQAPGQGLEWIGEIYPGSGNTYYAEKFKNRATLTAD-

KSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCARGFPYYAMDYWGQGTLVTVSS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSKYAMSWVRQAPGKGLEWVAAIS- 3-E21- NGGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHDKGNALDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGG 207 H3(G4S)3L2 GSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQK-

PGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPLTFGQGTRLEIK EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSKYAMSWVRQAPGKGLEWVAAIS- 3-E21- NGGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHDKGNALDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGG 208 H3(G4S)4L2 GSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQK-

PGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPLTFGQGTRLEIK DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRES- 3-E21- GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPLTFGQGTRLEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGG 209 L2(G4S)3H3 GLVQPGGSLRLSCAASGFTFSKYAMSWVRQAPGKGLEWVAAISNGGSYTYYADSVKGRFTIS-

RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHDKGNALDYWGQGTLVTVSS EIQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYNMKWVRQAPGKGLEWIGNINPYF- 3-P21- GSTNYADSVKGRATLSVDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAYYGNAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGS 210 H2(G4S)3L1 GGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLLNSGNQKNYVTWYQQKPGKAPKLLIYWA-

SFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNDYFYPLTFGQGTKVEIK EIQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYNMKWVRQAPGKGLEWIGNINPYF- 3-P21- GSTNYADSVKGRATLSVDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAYYGNAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGS 211 H2(G4S)4L1 GGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLLNSGNQKNYVTWYQQK-

PGKAPKLLIYWASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNDYFYPLTFGQGTKVEIK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLLNSGNQKNYVTWYQQKPGKAPKLLIYWASFLYS- 3-P21- GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNDYFYPLTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEIQLVESGGG 212 L1(G4S)3H2 LVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYNMKWVRQAPGKGLEWIGNINPYFGSTNYADSVKGRATLSV-

DKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAYYGNAMDYWGQGTLVTVSS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWINWVRQAPGKGLE- 15-D6- WIGYIYPGRSSTNYNEKFKGRATLSVDTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRLSRGNAMDYWGQGTLVTVSSGGG 213 H5(G4S)3L4 GSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLLNSGNQKSYVTWYQQK-

PGKAPKLLIYWASHRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNDYYYPFTFGQGTKVEIK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWINWVRQAPGKGLE- 15-D6- WIGYIYPGRSSTNYNEKFKGRATLSVDTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRLSRGNAMDYWGQGTLVTVSSGGG 214 H5(G4S)4L4 GSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLLNSGNQKSYVTWYQQK-

PGKAPKLLIYWASHRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNDYYYPFTFGQGTKVEIK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLLNSGNQKSYVTWYQQKPGKAPKLLIYWA- 15-D6- SHRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNDYYYPFTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQL 215 L4(G4S)3H5 VESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWINWVRQAPGKGLEWIGYIYPGRSSTNYNEKF-

KGRATLSVDTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRLSRGNAMDYWGQGTLVTVSS

[00162] Proteínas de fusão de scFvs fundidos a um ligante (G4S) e Fc de IgG4 humana (com a ordem de scFv, ligante G4S e Fc a partir da N-terminal para a terminação C) foram testadas quanto à sua capaci- dade de se ligar à CLDN18.2. Uma linhagem de célula estável (HEK293- CLDN18.2) expressando CLDN8.12 humana foi usada em experimen- tos FACS com detecção baseada em Alexa Fluor® 488 como descrito no PCT/US19/020872. Iodeto de propídio foi incubado junto com o anti- corpo secundário para marcar células mortas. Os resultados de ligação são mostrados nas FIGs. 3A-3L. Exemplo 4: Construção de construtos de receptor de antígeno qui- mérico que compreendem domínios de ligação ao antígeno anti- CLDN18.2

[00163] Para construir um CAR, os mAbs foram convertidos em scFv usando VH, VL e um ligante (G4S)n e o scFv foi fundido à N-terminal dos domínios da dobradiça e transmembrana derivados de CD8α humano (aa 114-188, Boursier, J.P. e outros, J. Biol. Chem.1993; 268(3): 2013- 20). O domínio de sinalização intracelular C-terminal do CAR foi cons- truído pela fusão do domínio coestimulador intracelular de CD28 (aa 162-202, Aruffo, A. e Seed, B., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987; 84 (23): 8573-7) seguido pelo domínio de ativação da cadeia zeta de CD3 (aa 52-162, Letourneur, F. e Klausner, R.D., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991; 88 (20): 8905-9). A sequência de DNA que codifica o CAR foi montada e clonada em um vetor de expressão (retroviral, lentiviral, ex- tracromossômico ou integrado) para gerar o construto CAR usando téc- nicas de clonagem de biologia molecular padrão. Exemplo 5: Ensaio de morte de células de tumor para avaliar a ati- vidade de células CAR T

[00164] As células T CD4+/CD8+ foram isoladas usando o kit de iso- lamento Pan T (Miltenyi biotech, Cat #:130-096-535) e ativadas por 3 dias por Dynabeads™ Human T-Activator CD3/CD28 (ThermoFisher, Cat #: 1113 ID) em meio AIM V (ThermoFisher, Cat #: 12055083) con- tendo FBS 10% de acordo com as instruções do fabricante. Em seguida, as células T ativas foram cultivadas continuamente por menos de uma semana em meio AIM V contendo FBS 10% e 300 IU/ml de IL2 (R&D systems, Cat #: 202-IL-050) e transitoriamente transfectadas com o plasmídeo de expressão 13P9-H1(G4S)3L2 CAR por eletroporação para obter as células T CAR. As células T ativas também foram falsamente transfectadas e usadas como um controle negativo. Após um período de recuperação de 48 horas, as células T CAR e as células T ativas foram usadas no ensaio como as células efetoras. As células-alvo HEK293-CLDN18.2 e HEK293-CLDN18.1 foram tingidas com CFSE (ThermoFisher, Cat #: C34554) e cocultivadas com as células CAR T por 24 horas na proporção E/T (efetor/alvo) de 2,5:1. Em seguida, as células foram tingida com PI (ThermoFisher, Cat #: P3566) e Anexina V (Biolegend, Cat #: 640924) e analisadas por citometria de fluxo (Attune NxT). Apenas as células positivas para CFSE foram contadas. Os per- centuais de lise de células tumorais foram calculados como o percentual de células positivas para PI e/ou Anexina V e são mostrados na FIG 4.

[00165] Será compreendido por aqueles versados na técnica que mudanças podem ser feitas nas modalidades descritas acima sem se afastar do amplo conceito inventivo das mesmas. Portanto, é entendido que esta invenção não está limitada às modalidades particulares descri- tas, mas se destina a cobrir as modificações dentro do espírito e escopo da presente invenção, conforme definido pela presente descrição.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Polinucleotídeo isolado, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende: (a) um domínio extracelular que compreende pelo menos um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente à claudina

18.2 (CLDN18.2); (b) uma região de dobradiça; (c) uma região transmembrana; e (d) um domínio de sinalização intracelular.

2. Polinucleotídeo isolado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação ao antígeno com- preende uma região determinante de complementaridade de cadeia pe- sada 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, uma região determinante de com- plementaridade de cadeia leve 1 (LCDR1), LCDR2 e LCDR3, que pos- suem as sequências de polipeptídeos de: (11) SEQ ID NOs: 21, 22, 23, 51, 52 e 53, respectivamente, ou SEQ ID NOs: 81, 82, 83, 111, 112 e 113, respectivamente; (12) SEQ ID NOs: 24, 25, 26, 54, 55 e 56, respectivamente, ou SEQ ID NOs: 84, 85, 86, 114, 115 e 116, respectivamente; (13) SEQ ID NOs: 27, 28, 29, 57, 58 e 59, respectivamente, ou SEQ ID NOs: 87, 88, 89, 117, 118 e 119, respectivamente; (14) SEQ ID NOs: 30, 31, 32, 60, 61 e 62, respectivamente, ou SEQ ID NOs: 90, 91, 92, 120, 121 e 122, respectivamente; (15) SEQ ID NOs: 33, 34, 35, 63, 64 e 65, respectivamente, ou SEQ ID NOs: 93, 94, 95, 123, 124 e 125, respectivamente; (16) SEQ ID NOs: 36, 37, 38, 66, 67 e 68, respectivamente, ou SEQ ID NOs: 96, 97, 98, 126, 127 e 128, respectivamente; (17) SEQ ID NOs: 39, 40, 41, 69, 70 e 71, respectivamente ou SEQ ID NOs: 99, 100, 101, 129, 130 e 131, respectivamente;

(18) SEQ ID NOs: 42, 43, 44, 72, 73 e 74, respectivamente, ou SEQ ID NOs: 102, 103, 104, 132, 133 e 134, respectivamente; (19) SEQ ID NOs: 45, 46, 47, 75, 76 e 77, respectivamente, ou SEQ ID NOs: 105, 106, 107, 135, 136 e 137, respectivamente; ou (20) SEQ ID NOs: 48, 49, 50, 78, 79 e 80, respectivamente, ou SEQ ID NOs: 108, 109, 110, 138, 139 e 140, respectivamente; em que o seu domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente à CLDN18.2, preferivelmente CLDN18.2 humana.

3. Polinucleotídeo isolado de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação ao antígeno compreende uma região variável da cadeia pesada com uma sequência de polipeptídeos pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 142, 143, 146, 147, 151, 152, 154, 155, 156, 159, 160, 161, 162, 166, 167, 170, 171, 172, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 186, 187, 191, 192, ou 193 ou uma região variável de cadeia leve que possui uma sequência de polipeptídeos pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 144, 145, 148, 149, 150, 153, 157, 158, 163, 164, 165, 168, 169, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 185, 188, 189, 190, 194, 195, 196 ou 197.

4. Polinucleotídeo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação ao antígeno compreende: (1) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 1 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 2; (2) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 3 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 4; (3) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 5 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 6; (4) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 7 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 8; (5) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 9 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 10; (6) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 11, e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 12; (7) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 13 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 14; (8) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 15 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 16; (9) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 17 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 18; (10) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO: 19 e uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO: 20; (11) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:142 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:144; (12) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:142 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:145; (13) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:143 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:144; (14) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:143 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:145; (15) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:146 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:148; (16) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:146 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:149; (17) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:146 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:150; (18) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:147 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:148; (19) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:147 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:149; (20) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:147 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:150; (21) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:151 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:153; (22) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:152 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:153; (23) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:154 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:157; (24) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:155 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:157; (25) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:156 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:158; (26) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:159 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:163; (27) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:159 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:164; (28) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:160 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:163; (29) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:160 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:164; (30) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:161 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:165; ou (31) uma região variável da cadeia pesada que possui a sequên- cia de polipeptídeos da SEQ ID NO:162 uma região variável da cadeia leve que possui a sequência de polipeptídeos da SEQ ID NO:165.

5. Polinucleotídeo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação ao antígeno é um fragmento variável de cadeia única (scFv) que se liga especificamente à CLDN18.2, de preferência CLDN18.2 humana, opci-

onalmente em que o fragmento variável de cadeia única (scFv) é huma- nizado.

6. Polinucleotídeo isolado de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o fragmento variável de cadeia única (scFv) compreende uma sequência de polipeptídeo pelo menos 95% idêntica a qualquer uma de SEQ ID NOs: 198-215.

7. Polinucleotídeo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o receptor de antí- geno quimérico (CAR) compreende um ou mais domínios de ligação ao antígeno e/ou em que o domínio de sinalização intracelular compreende um ou mais domínios coestimuladores e um ou mais domínios de ativa- ção.

8. Receptor de antígeno quimérico (CAR), caracterizado pelo fato de que é codificado pelo polinucleotídeo isolado como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7.

9. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende o poli- nucleotídeo isolado como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7.

10. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que com- preende o vetor como definido na reivindicação 9, opcionalmente em que a célula hospedeira é uma célula T ou célula NK, preferivelmente uma célula T humana ou célula NK humana.

11. Método de produção de uma célula hospedeira que ex- pressa um receptor de antígeno quimérico (CAR), caracterizado pelo fato de que compreende transdução de uma célula T ou célula NK com o vetor como definido na reivindicação 9.

12. Método de produção de um receptor de antígeno quimé- rico (CAR)-célula T ou receptor de antígeno quimérico (CAR)-célula NK, caracterizado pelo fato de que compreende cultura das células T ou cé- lulas NK que compreendem o polinucleotídeo isolado que compreende um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR) como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7 sob condições para produzir a célula CAR-T ou célula CAR-NK e recuperar a célula CAR-T ou célula CAR-NK.

13. Método para gerar uma célula compreendendo um re- ceptor de antígeno quimérico (CAR), caracterizado pelo fato de que compreende contato de uma célula com o polinucleotídeo isolado que compreende um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR) como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, em que o polinucleotídeo isolado é um RNA transcrito in vitro ou RNA sintético.

14. Método de tratamento de câncer ou doença inflamatória em um indivíduo em necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo a célula hospedeira como definida na reivindicação 10, opcionalmente, em que o câncer é seleci- onado de um câncer de pulmão, um câncer gástrico, um câncer esofa- geal, um câncer do duto da bile, um colangiocarcinoma, um câncer de cólon, um carcinoma hepatocelular, um carcinoma de células renais, um carcinoma urotelial da bexiga, um melanoma metastático, um câncer de mama, um câncer de ovário, um câncer cervical, um câncer de cabeça e pescoço, um câncer pancreático, um glioma, um glioblastoma e outros tumores sólidos e um linfoma não Hodgkin (NHL), uma leucemia linfocí- tica aguda (LLA), uma leucemia linfocítica crônica (CLL), uma leucemia mielógena crônica (CML), um mieloma múltiplo (MM), uma leucemia mi- eloide aguda (AML) e outros tumores líquidos.

15. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que compreende ainda administrar ao indivíduo em neces- sidade do mesmo um agente que aumenta a eficácia de uma célula que expressa um CAR, um agente que melhora um ou mais efeitos colate-

rais associados à administração de uma célula que expressa uma mo- lécula de CAR ou um agente que trada a doença associada com Clau- dina 18.2.