CN113784980A - 人源化抗Claudin18.2嵌合抗原受体及其用途 - Google Patents

人源化抗Claudin18.2嵌合抗原受体及其用途 Download PDF

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Abstract

描述了特异性靶向CLDN18.2的嵌合抗原受体(CARs)、编码CLDN18.2CAR的载体、包含CLDN18.2CAR的重组宿主细胞(CAR‑T或CAR‑NK)以及使用所述CAR‑T或CAR‑NK治疗与表达CLDN18.2相关的疾病。

Description

人源化抗Claudin18.2嵌合抗原受体及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年9月6日提交的第62/896,758号美国临时申请的优先权；2019年6月11日提交的第62/859,843号美国临时申请的优先权；和2019年3月29日提交的第62/825,955号美国临时申请的优先权。每个公开内容通过引用整体并入本文。
发明领域
本发明涉及人源化抗claudin18.2(CLDN18.2)嵌合抗原受体(CARs)、编码所述CAR的核酸和表达载体、表达所述CAR的工程化T细胞(CAR-T)和表达所述CAR的工程化NK细胞(CAR-NK)。本发明还提供了制备所述CAR的方法、制备所述CAR-T/CAR-NK的方法，以及使用所述CAR-T/CAR-NK治疗与CLDN18.2表达相关的疾病，包括癌症的方法。
序列表资料以电子形式提交
本申请包含序列表，该序列表以电子形式通过EFS-Web途径以ASCII格式序列表提交，其文件名为“065799.19WO1序列表”，创建日期为2020年3月11日，大小为147kb。通过EFS-Web途径提交的序列表构成本说明书的一部分，其通过引用整体并入本文。
发明背景
抗癌药物标准治疗带来了显著的益处。近期，肿瘤免疫学药物，如抗PD-1单抗、抗PD-L1单抗和抗-CD3双特异性T细胞接合的出现提出了利用和激活患者免疫系统以对抗各种癌症的理念。然而，应答差、效率低、和/或安全问题仍然有待解决。CAR-T(嵌合抗原受体-T)细胞疗法涉及对患者自身免疫细胞，如T细胞的基因工程化，并将他们重定向至肿瘤细胞表面合适的细胞表面抗原上(Mayor等,Immunotherapy.2016；8:491-494)。该方法已在患有化学难治性恶性B细胞瘤和其他癌症的患者中取得了成功(Pettitt等，Mol Ther.2018；26:342-353)。T细胞可以被改造为特异性针对一种或多种肿瘤细胞表面靶点/抗原，以此识别和杀死肿瘤细胞。该过程包括用编码嵌合抗原受体(CAR)的DNA或其他遗传物质转导T细胞，所述CAR包含一个细胞外抗原特异性结合域，例如单克隆抗体的一个或多个单链可变片段(scFv)、铰链区和跨膜结构域、以及胞内信号域(包括一个或多个共刺激结构域和一个或多个激活结构域)(Kochenderfer等,Nat Rev Clin Oncol.2013；10:267–276)。表达CAR的免疫细胞，例如T细胞和NK细胞，能够用于治疗各种疾病，包括液体瘤和实体瘤。有效的CAR-T细胞疗法能够特异性识别和消灭靶细胞并随着时间的推移保持有生存和繁殖的能力。
Claudin 18.2(CLDN18.2)，又称claudin-18a2.1，是跨膜蛋白claudin(CLDN)家族的一员，该家族在人体内有至少27个亚型。Claudin是上皮细胞间紧密连接的主要结构组成，并作为离子孔调节阳离子和阴离子的细胞旁通透性(Sahin等,Physiol Rev.2013；93:525-569)。通常只有肺组织和胃组织表达CLDN18。CLDN18有两种剪接变体。CLDN18.1是肺特异性变体，而CLDN18.2是胃特异性变体。剪接变体的不同在于他们的N端69个氨基酸残基，这是由第一个外显子的可变剪接造成的(Niimi等,Mol Cell Biol.2001；21:7380-7390)。敲除CLDN18.2的小鼠的研究显示CLDN18.2在防止胃酸向胃腔内渗入中有重要作用(Hayash等,Gastroenterology 2012；142:292-304)。
Claudin表达失调在许多肿瘤中可以见到，并且促进了肿瘤发生和癌症的侵犯(Singh等,J Oncology 2010；2010:541957)。CLDN18.2的表达升高见于胰腺导管腺癌(PDAC)(Tanaka等,J Histochem Cytochem.2011；59:942-952)、食管肿瘤、非小细胞肺癌(NSCLS)、卵巢癌(Sahin等,Clin Cancer Res.2008；14:7624-7634)、胆管腺癌(Keira等,Virchows Arch.2015；466:265-277)、以及胆管癌(Shinozaki等,Virchows Arch.2011；459:73-80)。CLDN18.2是CAR-T细胞疗法治疗和治愈CLDN18.2阳性肿瘤的理想靶点。
发明内容
在一方面，本发明涉及一种诱导T细胞介导的肿瘤杀伤的嵌合抗原受体(CAR)构建体，其中所述CAR构建体包含至少一个特异性结合人claudin18.2(CLDN18.2)的抗原结合域、铰链区、跨膜结构域、和胞内信号域。
本发明提供了分离的多核苷酸，其包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸序列。所述CAR可包含(a)含有至少一个特异性结合claudin18.2(CLDN18.2)的抗原结合域的胞外域；(b)铰链区；(c)跨膜结构域；和(d)胞内信号域。
在某些实施方式中，所述抗原结合域包含一重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、一轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，具有以下多肽序列：
(1)分别为SEQ ID NO:21、22、23、51、52和53；
(2)分别为SEQ ID NO:24、25、26、54、55和56；
(3)分别为SEQ ID NO:27、28、29、57、58和59；
(4)分别为SEQ ID NO:30、31、32、60、61和62；
(5)分别为SEQ ID NO:33、34、35、63、64和65；
(6)分别为SEQ ID NO:36、37、38、66、67和68；
(7)分别为SEQ ID NO:39、40、41、69、70和71；
(8)分别为SEQ ID NO:42、43、44、72、73和74；
(9)分别为SEQ ID NO:45、46、47、75、76和77；或
(10)分别为SEQ ID NO:48、49、50、78、79和80；
其中其所述抗原结合域特异性结合CLDN18.2，优选人的CLDN18.2。
在某些实施方式中，所述抗原结合域包含一重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、一轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，具有以下多肽序列：
(1)分别为SEQ ID NO:81、82、83、111、112和113；
(2)分别为SEQ ID NO:84、85、86、114、115和116；
(3)分别为SEQ ID NO:87、88、89、117、118和119；
(4)分别为SEQ ID NO:90、91、92、120、121和122；
(5)分别为SEQ ID NO:93、94、95、123、124和125；
(6)分别为SEQ ID NO:96、97、98、126、127和128；
(7)分别为SEQ ID NO:99、100、101、129、130和131；
(8)分别为SEQ ID NO:102、103、104、132、133和134；
(9)分别为SEQ ID NO:105、106、107、135、136和137；或
(10)分别为SEQ ID NO:108、109、110、138、139和140；
其中其所述抗原结合域特异性结合CLDN18.2，优选人CLDN18.2。
在某些实施方式中，所述抗原结合域包含一重链可变区，该可变区具有与SEQ IDNO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、或19至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的多肽序列，或一轻链可变区，该可变区具有与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、或20至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的多肽序列。
在某些实施方式中，所述抗原结合域包含：
(1)具有SEQ ID NO：1所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：2所示多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO：3所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：4所示多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO：5所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：6所示多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO：7所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：8所示多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO：9所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：10所示多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO：11所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：12所示多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO：13所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：14所示多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO：15所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：16所示多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO：17所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：18所示多肽序列的轻链可变区；或
(10)具有SEQ ID NO：19所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：20所示多肽序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述抗原结合域是人源化的，且包含一重链可变区，该可变区具有与SEQ ID NO:142、143、146、147、151、152、154、155、156、159、160、161、162、166、167、170、171、172、175、176、177、178、179、180、186、187、191、192、或193至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的多肽序列，或一轻链可变区，该可变区具有与SEQ IDNO:144、145、148、149、150、153、157、158、163、164、165、168、169、173、174、181、182、183、184、185、188、189、190、194、195、196、或197至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的多肽序列。
在某些实施方式中，所述抗原结合域是人源化的，并包含：
(1)具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
(10)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
(11)具有SEQ ID NO：151所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
(12)具有SEQ ID NO：152所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
(13)具有SEQ ID NO：154所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
(14)具有SEQ ID NO：155所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
(15)具有SEQ ID NO：156所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：158所示多肽序列的轻链可变区；
(16)具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
(17)具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
(18)具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
(19)具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
(20)具有SEQ ID NO：161所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区；或
(21)具有SEQ ID NO：162所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述抗原结合域是特异性结合CLDN18.2的单链可变片段(scFv)，优选人CLDN18.2。
在某些实施方式中，所述抗原结合域是特异性结合CLDN18.2的人源化单链可变片段(scFv)，优选人CLDN18.2。在某些实施方式中，所述人源化单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：198-215中任意一条具有至少95％同一性的多肽序列。
在某些实施方式中，所述嵌合抗原受体(CAR)包含一个或多个抗原结合域。
在某些实施方式中，所述胞内信号域包含一个或多个共刺激结构域和一个或多个激活结构域。
本发明还提供了由本发明的分离的多核苷酸编码的嵌合抗原受体(CAR)。
本发明还提供了含有分离的多核苷酸的载体，所述分离的多核苷酸含有编码本发明的CAR的核酸。
本发明还提供了含有本发明的载体的宿主细胞。
在某些实施方式中，所述宿主细胞是T细胞，优选人T细胞。在某些实施方式中，所述宿主细胞是NK细胞，优选人NK细胞。所述T细胞或NK细胞能够，举例而言，被改造为表达本发明的CAR以治疗诸如癌症的疾病。
本发明还提供了使宿主细胞表达本发明的嵌合抗原受体(CAR)的方法。所述方法包括用包含编码本发明CAR的分离核酸的载体转导T细胞或NK细胞。
本发明还提供了生产本发明的CAR-T细胞或CAR-NK细胞的方法。所述方法包括在产生CAR-T细胞或CAR-NK细胞的条件下培养包含含有编码本发明的嵌合抗原受体(CAR)的核酸的分离的多核苷酸的T细胞或NK细胞，并回收CAR-T细胞或CAR-NK细胞。
本发明还提供了生产包含本发明的嵌合抗原受体(CAR)的RNA工程化细胞群的方法。所述方法包括使细胞与包含编码本发明的嵌合抗原受体(CAR)的核酸的分离的多核苷酸接触，其中分离的多核苷酸是体外转录的RNA或合成的RNA。
本发明还提供了治疗有需要的受试者的癌症的方法，包括给受试者施用本发明的CAR-T细胞和/或CAR-NK细胞。所述癌症可以是血液或实体的癌症，例如，其可以选自但不限于，肺癌、胃癌、食管癌、胆管癌、胆管癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、转移性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤和其他实体瘤，以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他血液肿瘤。
本发明还提供了治疗有需要的受试者的炎症性疾病的方法，包括给受试者施用本发明的CAR-T细胞和/或CAR-NK细胞。
在某些实施方式中，所述治疗有需要的受试者的肿瘤或炎症性疾病的方法进一步包括给有需要的受试者施用提高细胞表达CAR分子效率的药剂。
在某些实施方式中，所述治疗有需要的受试者的肿瘤或炎症性疾病的方法进一步包括给有需要的受试者施用改善与施用表达CAR分子的细胞相关的一种或多种副作用的药剂。
在某些实施方式中，所述治疗有需要的受试者的肿瘤或炎症性疾病的方法进一步包括给有需要的受试者施用治疗Claudin18.2相关疾病的药剂。
附图说明
下面结合附图以更好地理解前述内容以及以下关于本申请的优选实施方式的详细描述。应理解，本申请并不限于附图中所示的具体实施例。
图1A-1B展示了人源化抗-CLDN18.2单抗与分别表达人CLDN18.2和CLDN18.1全长的HEK293-CLDN18.2和HEK293-CLDN18.1的结合。实验通过FACS分析进行。
图2A-2D展示了人源化抗-CLDN18.2单抗与稳定表达人CLDN18.2全长的HEK293-CLDN18.2的结合。实验通过FACS分析进行。
图3A-3L展示了人源化scFv与稳定表达人CLDN18.2全长的HEK293-CLDN18.2的结合。实验通过FACS分析进行。
图4展示了装配有抗CLDN18.2 scFv的CAR T细胞对表达CLDN18.2的细胞(HEK293-CLDN18.2)的肿瘤细胞杀伤活性；使用表达CLDN18.1的细胞(HEK293-CLDN18.1)作为对照。
发明详述
在背景和说明书中引用或描述了各种出版物、文献和专利；这些参考文献中的每一项均通过引用整体并入本文。讨论包含在本说明书中的文件、行为、材料、装置、文章等的目的是为了提供本发明的背景。这类讨论并不承认任何或所有这些事项构成关于公开或要求保护的任何发明的现有技术的一部分。
除非另外定义，否则本说明书使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域内普通技术人员通常理解的含义相同。除此之外，本文使用的某些术语具有说明书中阐述的含义。
须注意，如本文和所附权利要求中所用，除非上下文另有明确规定，否则单数形式“一”、“一种”包括复数内容。
除非另有声明，否则本文描述的任何数值，例如浓度或浓度范围，在所有情况下都应理解为被术语“约”修饰。因此，数值通常包括所列举数目的±10％。例如，浓度为1mg/mL包括了0.9mg/mL至1.1mg/mL。类似地，浓度范围1％至10％(w/v)包括了0.9％至11％(w/v)。除非上下文另有明确规定，否则本文所使用的数值范围明确包括所有可能的子范围、该范围内的所有单个数值，包括这些范围内的整数和值的分数。
除非另有声明，否则出现在一系列元素前的术语“至少”应被理解为指改系列的所有元素。本领域技术人员将认识到或能够仅通过常规实验确定本文描述的发明的特定实施例的许多等同替代。本发明计划包含这些等同替代。
如本文所用，术语“包含”、“包含的”、“包括”、“包括的”、“具有”、“具有的”、“含有”或“含有的”或任何其他变体，应被理解为指包含所阐明的物体或物体组，但不排除任何其他物体或物体组，并且是非排他性或开放性的。例如，包含一系列元素的组合物、混合物、过程、方法、物品或设备不必仅限于这些元素，也可包含其他未明确列出的元素或此类组合物、混合物、过程、方法、物品或设备固有的元素。进一步，除非另有明确规定，否则“或”是指包含性的或，而不是排除性的或。例如，下列任意一项都满足A或B的情况：A是正确的(或存在的)且B是错误的(或不存在的)，A是正确的(或不存在的)且B是错误的(或存在的)，以及A和B都是正确的(或存在的)。
本文所使用的在多个列举元素中的连词术语“和/或”应被理解为包括单独和组合选项。例如，两个元素被“和/或”连接，第一种选项是适用第一个元素而排除第二个。第二种选项是适用第二个元素而排除第一个。第三种选项是同时适用第一和第二个元素。这些选项中的任一项均应被理解为包括在其含义中，因此满足本文使用术语“和/或”的需求。这些选项中任意多项的同时适用也均应被理解为包括在其含义中，因此满足本文使用术语“和/或”的需求。
如本文所用，说明书和权利要求中使用的术语“由……组成”或其他变体表示包括任何列举的物体或物体组，但不表示额外的物体或物体组可以添加到指定的方法、结构或组合中。
如本文所用，说明书和权利要求中使用的术语“主要由……组成”或其他变体表示包括任何列举的物体或物体组，并且可选地包括所列举的任何物体或物体组，只要它们不会实质性地改变特定方法、结构或成分的基本性质或新特性。见M.P.E.P.§2111.03。
本文所使用的“受试者”指任何动物，优选哺乳动物，最优选人。如本文所用，术语“哺乳动物”包括任何哺乳动物。哺乳动物的例子包括但不限于牛、马、羊、猪、猫、狗、小鼠、大鼠、兔、豚鼠、猴子、人等，更优选人。
词语“右”、“左”、“下”和“上”表示参考的附图中的方向。
应理解，本文所使用的用以描述优选发明的组件尺寸或特性的术语“大约”、“近似”、“大体上”、“基本上”或其他类似术语，是所描述的尺寸/特征并非严格的界限或参数并且不排除在功能上相同或相似的微小变化，正如本领域普通技术人员所理解的那样。至少，包括数值参量的此类描述将包括使用本领域中接受的数学和工业原理(例如，舍入、测量或其他系统误差、制造公差等)的变化，该变化不会改变最低有效数值。
在有两个或多个核酸或多肽序列(例如包含特异性针对CLDN18.2的抗原结合域和编码它们的多核苷酸的嵌合抗原受体(CAR)、CLDN18.2多肽和编码它们的CLDN18.2多核苷酸)的上下文中，术语“相同”或百分比“同一性”指两条或多条相同或具有一定百分比相同氨基酸残基或核苷酸的序列或子序列，当进行比较和比对以获得最大对应时，使用以下序列比较算法之一或通过目视检查测量。
进行序列比较时，通常用一条序列作为参考序列，与测试序列进行比较。使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入计算机，必要时指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。序列比较算法随后基于指定的程序参数计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。
可以进行用于比较的序列的最佳比对，例如，通过Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.2:482(1981)的局部同源性算法、通过Pearson和Lipman,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 85:2444(1988)的相似度搜索法、通过这些算法的计算机实现(威斯康星州遗传学软件包，遗传计算机组,575Science Dr.,Madison,WI中的GAP,BESTFIT,FASTA和TFASTA)，或通过目视检查(一般参见最新分子生物学实验方法汇编(Current Protocolsin Molecular Biology)，F.M.Ausubel等编辑，Greene Publishing Associates,Inc.及John Wiley&Sons,Inc.的合资企业Current Protocols出版(1995年增刊)(Ausubel))。
适用于确定百分比序列同一性和序列相似性的算法示例是BLAST和BLAST 2.0算法，分别刊载于Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215:403-410和Altschul等(1997)NucleicAcids Res.25:3389-3402.进行BLAST分析的软件可通过美国国立生物技术信息中心公开获得。该算法首先通过识别查询序列中长度为W的短片段来识别高评分序列对(HSP)，当短片段与数据库序列中相同长度的片段对齐，则这些片段匹配或符合某个正阈值分数T。T指邻域词打分阈值(Altschul等，见前)。这些最初的邻域词击中充当种子，用于启动搜索以找到包含它们的更长的HSP。然后沿着每条序列向两端延伸击中词，直到累积对齐分数可以增加。
对于核苷酸序列，累积分数使用参数M(一对匹配残基的奖励分数；总是＞0)和N(错配残基的罚分；总是＜0)计算。对于氨基酸序列，使用评分矩阵计算累积分数。击中词在个方向上的延伸在下列情况下停止：累积对齐分数从其达到的最大值下降了值X；由于一个或多个负评分残基比对的累积，累积分数降到了0或0以下；或到达了任一序列的末尾。BLAST算法的参数W、T和X决定了比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(用于核苷酸序列)的默认字长(W)为11，期望值(E)为10，M＝5，N＝-4，并比较两条链。用于氨基酸序列的BLASTP程序的默认字长(W)为3、期望值(E)为10，并使用BLOSUM62评分矩阵(参见Henikoff和Henikoff,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10915(1989))。
除了计算序列同一性百分比之外，BLAST算法还对两条序列之间的相似性进行统计分析(参见例如Karlin和Altschul,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 90:5873-5787(1993))。BLAST算法提供的一种相似性指数是最小总概率(P(N))，它提供了两条核苷酸或氨基酸序列之间偶然发生匹配的概率的指标。例如，如果测试核酸与参考核酸的比较中的最小总概率小于约0.1，更优选小于约0.01，最优选小于约0.001，则认为该核酸与参考序列相似。
两条核酸序列或多肽基本相同的进一步指征是由第一核酸编码的多肽与由第二核酸编码的多肽有免疫交叉反应，如下所述。因此，多肽通常与第二条多肽基本相同，例如，两条肽仅在保守取代上不同。两条核酸序列基本相同的另一个指征是这两个分子在严格条件下彼此杂交。
如本文所用，术语“分离的”是指一个生物组分(例如核酸、肽或蛋白)与天然存在该生物组分的有机体的其他生物组分基本分开、产生或提纯出来，例如，其他染色体和染色体外DNA和RNA，和蛋白质。“分离的”核酸、肽和蛋白包含使用常规纯化方式纯化的核酸和蛋白。“分离的”核酸、肽和蛋白可以是组合物的一部分，并且如果组合物不是该核酸、肽和蛋白质的天然存在环境，其仍然是分离的。该术语也包括在宿主细胞中重组表达制备的核酸、肽和蛋白和人工化学合成的核酸。
本文所使用的“多核苷酸”，同义称为“核酸分子”、“核苷酸”或“核酸”，均指任何聚核糖核苷酸或聚脱氧核糖核苷酸，可以是未修饰的RNA或DNA，也可以是修饰的RNA或DNA。“多核苷酸”包括但不限于单链和双链DNA、单双链区域混合的DNA、单链和双链RNA以及单双链区域混合的RNA、包含DNA和RNA的杂交分子，该杂交分子可以是单链，或更典型地是双链或单链和双链区域的混合物。此外，“多核苷酸”指包含RNA或DNA或RNA和DNA两者的三链区域。该术语多核苷酸还包括含有一个或多个修饰碱基的DNA或RNA，以及出于稳定性或其他原因修饰骨架的DNA或RNA。“修饰的”碱基包括，例如三苯甲基化碱基和稀有碱基如肌苷。DNA和RNA可以进行多种修饰；因此“多核苷酸”包括多核苷酸的化学、酶促或代谢修饰形式，如自然界中常见的形式，也包括病毒和细胞特有的DNA和RNA化学形式。“多核苷酸”也包括相对较短的核酸链，通常称为寡核苷酸。
如本文所用，术语“载体”是一种复制子，其中可以可操作地插入其他核酸片段，并致使该片段复制或表达。
如本文所用，术语“宿主细胞”是指包含本发明的核酸分子的细胞。“宿主细胞”可以是任何种类的细胞，如原代细胞、培养的细胞或来自细胞系的细胞。在一个实施方式中，“宿主细胞”是用本发明的核酸分子转染或转导了的细胞。在另一个实施方式中，“宿主细胞”是这类经转染或转导的细胞的子代或潜在子代。子代细胞可能与亲代细胞相同，也可能不同，例如，在后续世代中可能发生的突变或环境影响或核酸分子整合到宿主细胞基因组中都可能导致这种不同。
如本文所用，术语“表达”是指基因产物的生物合成。该术语包括基因转录为RNA。该术语也包括RNA翻译为一种或多种多肽，并进一步包括所有自然发生的转录后和翻译后修饰。所表达的CAR可以存在于宿主细胞的细胞质中，进入诸如细胞生长培养基的细胞外环境中或锚定在细胞膜上。
如本文所用，术语“免疫细胞”或“免疫效应细胞”指参与免疫反应的细胞，例如，参与促进免疫反应。免疫细胞的例子包括T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、肥大细胞和骨髓吞噬细胞。在特定的实施方式中，工程化免疫细胞是T细胞，并称为CAR-T细胞，因为它们被改造以表达本发明的CAR。
如本文所用，术语“工程化免疫细胞”指一种免疫细胞，或称免疫效应细胞，该免疫细胞通过向其总遗传物质中添加DNA或RNA形式的额外遗传物质以进行基因修饰。根据本文的实施方式，所述工程化免疫细胞已进行了基因修饰以使其表达本发明的CAR结构。
嵌合抗原受体(CAR)
如本文所用，术语“嵌合抗原受体”(CAR)指一种重组多肽，其包括至少一个特异性结合某一抗原或靶点的胞外域、一个跨膜结构域和一个细胞内T细胞受体-激活信号域。CAR胞外域与靶细胞表面目的抗原的结合引起CAR的聚集，并向包含CAR的细胞传递激活刺激信号。CAR重定向了免疫效应细胞的特异性，并引发了增殖、细胞因子生成、吞噬作用和/或可以以主要组织相容性(MHC)独立方式介导表达靶抗原的细胞的细胞死亡的分子产生。
在一方面，所述CAR包含一抗原结合域、一铰链区、一共刺激结构域、一激活结构域和一跨膜结构域。在一方面，所述CAR包含一抗原结合域、一铰链区、两个共刺激结构域、一激活结构域和一跨膜结构域。在一方面，所述CAR包含两个抗原结合域、一个铰链区、一个共刺激结构域、一个激活结构域和一个跨膜结构域。在一方面，所述CAR包含两个抗原结合域、一个铰链区、两个共刺激结构域、一个激活结构域和一个跨膜结构域。
如本文所用，术语“信号肽”指一段位于新合成的CAR蛋白氨基端(N端)的前导序列，该序列在翻译时或翻译后将所述新合成的蛋白引导至内质网和随后的表面表达。
如本文所用，术语“胞外抗原结合域”、“胞外域”或“胞外配体结合域”指CAR位于细胞膜外并能够与抗原、靶点或配体结合的部分。
如本文所用，术语“铰链区”是指CAR中连接CAR蛋白两个相邻域的部分，例如胞外域和跨膜结构域。
如本文所用，术语“跨膜结构域”是指CAR中延伸穿过细胞膜并将CAR锚定在细胞膜上的部分。
共刺激结构域
如本文所用，嵌合抗原受体可以包括共刺激(信号)结构域以增加效力。共刺激(信号)结构域可以源自共刺激分子。共刺激分子是有效免疫反应所需的除抗原受体或其配体之外的细胞表面分子。共刺激结构域可以源自共刺激分子，所述共刺激分子包括但不限于CD28、CD28T、O40、4-1BB/CD137、CD2、CD3(α、β、δ、ε、γ、ζ)、CD4、CD5、CD7、CD9、CD16、CD22、CD27、CD30、CD33、CD37、CD40、CD45、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、程序性死亡受体1(PD-1)、可诱导T细胞共刺激分子(ICOS)、淋巴细胞功能相关分子1(LFA-1；Cd11a和CD18)、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT(肿瘤坏死因子超家族成员14(TNFSF14)、NKG2C、Igα(CD79a)、DAP10、Fcγ受体、MHC I类分子、TNFR、整合素、信号淋巴细胞活化分子、BTLA、Toll配体受体、ICAM-1、CDS、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD8α、CD8β、IL-2Rβ、IL-2Rγ、IL-7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、ITGAE、CD103、ITGAL、CD1a、CD1b、CD1c、CD1d、ITGAM、ITGA、ITGB1、CD29、ITGB2(CD18)、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Lyl08)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、CD83配体、细胞因子受体、Nk细胞活性受体、或他们的片段或任意组合。
激活域
如本文所用，嵌合抗原受体可包含激活域。激活域可包括但不限于CD3。CD3是天然T细胞上T细胞受体的一个元件，已被证明是CAR中重要的细胞内激活元件。在一优选的实施方式中，所述CD3是CD3ζ。
铰链区
如本文所述，嵌合抗原受体可包含一铰链区。铰链区是细胞外域的一部分，有时也称为“空白”区。本发明可以使用多种铰链，包括如上所述的共刺激分子、免疫球蛋白(Ig)序列或其他合适的分子以实现期望的与靶细胞特定距离。在某些实施方式中，完整的细胞外区包括铰链区。
跨膜区
如本文所用，嵌合抗原受体(CAR)可包含一跨膜区/跨膜结构域。CAR可以被改造成包括一个融合到CAR细胞外域上的跨膜结构域。类似地，跨膜结构域也可以融合到CAR细胞内域上。在一个实施方式中，使用与CAR中的某一个域自然相关的跨膜结构域。在某些实施例中，所述跨膜结构域可以通过氨基酸替代来修饰或挑选，以避免与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域相结合，来尽量减少与受体复合物其他成员的相互作用。所述跨膜结构域可以来自天然或合成来源。如果是天然来源的，所述结构域可以来自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。本发明中使用的特定的跨膜结构域可以源自(例如包括或从其改造而来)但不限于CD28、CD28T、O40、4-1BB/CD137、CD2、CD3(α、β、δ、ε、γ、ζ)、CD4、CD5、CD7、CD9、CD16、CD22、CD27、CD30、CD33、CD37、CD40、CD45、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、程序性死亡受体1(PD-1)、可诱导T细胞共刺激分子(ICOS)、淋巴细胞功能相关分子1(LFA-1；Cd11a和CD18)、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT(肿瘤坏死因子超家族成员14(TNFSF14)、NKG2C、Igα(CD79a)、DAP10、Fcγ受体、MHC I类分子、TNFR、整合素、信号淋巴细胞活化分子、BTLA、Toll配体受体、ICAM-1、CDS、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD8α、CD8β、IL-2Rβ、IL-2Rγ、IL-7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、ITGAE、CD103、ITGAL、CD1a、CD1b、CD1c、CD1d、ITGAM、ITGA、ITGB1、CD29、ITGB2(CD18)、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Lyl08)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、CD83配体、细胞因子受体、Nk细胞活性受体、免疫球蛋白、或他们的片段或任意组合。
免疫细胞
在特定的方面，本发明提供了属于免疫细胞的细胞，所述细胞含有分离的多核苷酸或含有分离的多核苷酸的载体，所述分离的多核苷酸含有编码本发明提供的CAR的核苷酸序列。所述的包含本发明的分离的多核苷酸和/或载体的免疫细胞也可称为“工程化免疫细胞”。优选地，所述工程化免疫细胞是人源性的(在重组前是来源于人的)。
所述工程化免疫细胞可以是例如淋巴系细胞。淋巴系细胞例如，包括但不限于T细胞和自然杀伤(NK)细胞。T细胞表达T细胞受体(TCR)，大部分细胞表达<和β链，少数
Figure BDA0003288382580000101
和δ链。本发明中用作工程化免疫细胞的T细胞可以是CD4+或CD8+，并且可以包括但不限于辅助T细胞(CD4+)、细胞毒性T细胞(也称为细胞毒性T淋巴细胞(CTL)；CD8+细胞)以及记忆性T细胞,包括中枢记忆性T细胞、干细胞样记忆性T细胞和效应记忆性T细胞、自然杀伤性T细胞、黏膜相关恒定T细胞和
Figure BDA0003288382580000102
细胞。免疫细胞的其他例子包括但不限于巨噬细胞、抗原呈递细胞(APC)、或任何表达细胞介导免疫反应抑制剂的免疫细胞，例如免疫检查点抑制剂通路受体(如PD-1)。本发明可使用的免疫细胞的前体细胞包括造血干细胞和/或祖细胞。造血干细胞和/或祖细胞可以通过本领域已知技术从骨髓、脐带血、成人细胞动员后的外周血，以及类似来源中得到。所述免疫细胞经过工程改造以重组表达本发明的CAR。
免疫细胞和其前体细胞可以使用本领域已知技术分离，包括市售的技术(参见例如Rowland Jones等,淋巴细胞：实用方法(Lymphocytes:A Practical Approach),OfordUniversity Press,NY(1999))。免疫细胞或其前体细胞的来源包括但不限于外周血、脐带血、骨髓或其他造血干细胞的来源。可以使用各种技术来分筛细胞以分离或富集所需的免疫细胞。例如，可使用负向选择法去除不属于所需免疫细胞的细胞。此外，可使用正向选择法分离或富集所需的免疫细胞或其前体细胞，或可采用正负向选择组合法。如果要分离某一种特定细胞，例如一种特定T细胞，可以使用各种细胞表面标志物或标志物的组合(如CD3、CD4、CD8、CD34)来分离细胞。
对于接受本发明的治疗方法的受试者，所述免疫细胞或其前体细胞可以是自体的或非自体的。自体细胞是从要被施用重组表达CAR的工程化免疫细胞的受试者体内分离出的。可选地，所述细胞可以通过白细胞去除术获得，即从抽取的血液中选择性去除白细胞，进行重组，然后回输给供体。另一种选择也可以使用来自非受试者的非自体供体的同种异体细胞。对于非自体供体，所述细胞经过人类白细胞抗原(HLA)的分型和配型，以确定合适的相容性水平。所述自体细胞和非自体细胞均可以可选择地冷冻保存至准备使用。
之前已经描述过分离可用于重组表达本发明的CAR的免疫细胞的各种方法，并且可以使用，包括但不限于使用外周供体淋巴细胞(Sadelain等,Nat.Rev.Cancer 3:35-45(2003)；Morgan等,Science 314:126-9(2006))，使用来自肿瘤活检的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的淋巴细胞培养(Panelli等,J.Immunol.164:495-504(2000)；Panelli等,J.Immunol.164:4382-92(2000))以及使用使用人工抗原呈递细胞(AAPC)或树突状细胞在体外选择性扩增抗原特异性外周血白细胞(Dupont等,Cancer Res.65:5417-427(2005)；Papanicolaou等,Blood 102:2498-505(2003))。在使用干细胞时，所述细胞可以使用本领域公知的方法进行分离(参见例如Klug等,造血干细胞方案(Hematopoietic Stem CellProtocols),Humana Press,NJ(2002)；Freshney等,人类干细胞培养(Culture of HumanStem Cells),John Wiley&Sons(2007))。
在特定的实施方式中，制备工程化免疫细胞的方式包括转染或转导从个体中分离出的免疫效应细胞，使得该免疫效应细胞表达一种或多种本发明实施方式所述的CAR。制备用于免疫疗法的免疫细胞的方法在例如WO2014/130635、WO2013/176916和WO2013/176915中有描述，其通过引用并入本文。可用于制备工程化免疫细胞的各个步骤在例如WO2014/039523、WO2014/184741、WO2014/191128、WO2014/184744和WO2014/184143中公开，其通过引用并入本文。
在特定的实施方式中，所述免疫效应细胞，如T细胞，经过本发明的CAR基因修饰(例如，用包含编码CAR的核苷酸的病毒载体转导)并在体外激活和扩增。在多种实施方式中，T细胞可以在进行基因修饰前或修饰后激活和扩增以表达CAR，所使用的方法在例如US6352694、US6534055、US6905680、US6692964、US5858358、US6887466、US6905681、US7144575、US7067318、US7172869、US7232566、US7175843、US5883223、US6905874、US6797514、US6867041、US2006/121005中描述，其通过引用并入本文。T细胞可以在体内或体外扩增。本发明的T细胞通常可以与一种表面相接触来扩增，该表面附着有刺激CD3/TCR复合物相关信号的试剂和刺激T细胞表面共刺激分子的配体。T细胞群能够如本文所述被激活，例如但不限于通过与抗CD3抗体、或其抗原结合片段、或固定在表面上的抗CD3抗体接触，或通过与钙离子载体结合的蛋白激酶C激活剂(例如苔藓抑素)接触，或通过CAR自身活化作用。为了协同刺激T细胞表面的辅助分子，使用与辅助分子结合的配体。例如，在刺激T细胞增殖的适宜条件下将T细胞群与抗CD3抗体和抗CD28抗体接触。T细胞培养的适宜条件包括，例如合适的培养基(例如最小基本培养基或RPMI培养基1640或-vivo 5(Lonza))，该培养基含有增殖和存活所需要的要素，包括血清(例如胎牛血清或人血清)，激酶，例如IL-2、IL-7、IL-15、和/或IL-21、胰岛素、IFN-g、GM-CSF、TGF和/或技术人员所知的任何其他细胞生长添加剂。在另外的实施方式中，所述T细胞可以被饲养细胞和合适的抗体和激酶刺激和激活以增殖，使用的方法在例如US6040177、US5827642和WO2012129514中有描述，其通过引用并入本文。
抗原结合域
如本文所用，术语“抗原结合域”是指一种抗体片段例如双抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、二硫键稳定性Fv片段(dsFv)、(dsFv)2、双特异性dsFv(dsFv-dsFv')、二硫键稳定性双抗体(ds双抗体)、单链抗体分子(scFv)、单链抗体(sdab)、scFv二聚体(二价双抗体)、由包含一个或多个CDR的抗体的一部分形成的多特异性抗体、骆驼单域抗体、纳米抗体、域抗体、二价域抗体或其他任何与抗原结合但不包含完整抗体结构的抗体片段。抗原结合域能够与其亲本抗体结合相同的抗原。在特定的实施方式中，所述抗原结合域包括单链抗体分子(scFv)。
如本文所用，术语“抗体”具有广义含义，包括免疫球蛋白或抗体分子，抗体分子包括人源抗体、人源化抗体、复合抗体和嵌合抗体以及单克隆或多克隆抗体片段。抗体通常是表现出对特定抗原有结合特异性的蛋白质或肽链。抗体的结构是公知的。免疫球蛋白可以根据重链恒定区的氨基酸序列分为五种主要类型(即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)。IgA和IgG进一步细分为同种型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。相应地，本发明所述的抗体可以是这五种主要类型和对应亚型的任何一种。优选地，本发明所述的抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。脊椎动物物种的抗体轻链可以基于其恒定区的氨基酸序列分为两种明显不同的类型，称为κ和λ。相应地，本发明所述的抗体可以包括κ或λ轻链恒定区。在特定的实施方式中，本发明所述的抗体包括来自大鼠或人抗体的重链和/或轻链恒定区。除重链和轻链恒定区外，抗体还包括一段由轻链可变区和重链可变区构成的抗原结合域，每个可变区均包含三个域(即互补决定区1-3；CDR1、CDR2和CDR3)。轻链可变区的域也称为LCDR1、LCDR2和LCDR3，重链可变区的域也称为HCDR1、HCDR2和HCDR3。
如本文所用，术语“单链抗体”指本领域常规的单链抗体，所述单链抗体包含一重链可变区和一轻链可变区，其间由约5至约20个氨基酸组成的短肽连接。如本文所用，术语“单域抗体”指本领域常规的单域抗体，所述单域抗体包含一重链可变区和一重链恒定区，或仅包含一重链可变区。
如本文所用，术语“人抗体”指由人体产生的抗体或使用本领域已知的任何技术制备的具有与人体产生的抗体相对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的定义包括完整或全长的抗体、抗体片段和/或包括至少一种人重链和/或轻链多肽的抗体。
如本文所用，术语“人源化抗原结合域”指非人源但经过修饰以增加与人源性抗体序列同源性的抗原结合域，以此保留了抗原结合域的抗原结合特性，但降低了其在人体内的抗原性。
如本文所用，术语“嵌合抗原结合域”指其中免疫球蛋白分子的氨基酸序列源自两种或以上物种的抗原结合域。轻链和重链的可变区时常对应于源自哺乳动物(例如小鼠、大鼠、兔等)的抗原结合域的可变区，所述抗原结合域具有所需的特异性、亲和力和功能，而恒定区对应于源自另一种哺乳动物(例如人)的抗原结合域的序列，以避免在该物种中引发免疫反应。
如本文所用，术语“CLDN18.2”指claudin18变体2、claudin-18.2或claudin-18a2.1，其属于claudin跨膜蛋白家族。CLDN18.2在胃上皮细胞表面特异性表达(Niimi等,Mol Cell Biol.2001；21:7380-7390)并成为上皮细胞间紧密连接的主要结构组分之一(Sahin等,Physiol Rev.2013；93:525-569)。术语“人源CLDN18.2”指源自于人的CLDN18.2。人源CLDN18.2的一个氨基酸序列示例见于GenBank登记号AAL15637.1(SEQ ID NO:141)。
本文所使用的“特异性结合CLDN18.2”的抗原结合域指结合CLDN18.2的抗原结合域，优选人源CLDN18.2，KD为1×10-7M或以下，优选1×10-8M或以下，更优选5×10-9M或以下，1×10-9M或以下，5×10-10M或以下，或1×10-10M或以下。如本文所用，术语“KD”指解离常数，其由Kd与Ka的比值(即Kd/Ka)得到，并以摩尔浓度(M)表示。抗原结合域的KD值可以使用本发明所属领域的技术测定。例如，抗原结合域的KD可以使用表面等离子体共振测定，例如使用生物传感器系统如
Figure BDA0003288382580000121
系统，或使用生物膜层干涉技术如Octet RED96系统。
抗原结合域的KD值越小，抗原结合域对抗原的亲和力就越高。
在特定的方面，本发明涉及包含一抗原结合域的嵌合抗原受体(CAR)，其中抗原结合域包含一重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、一轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，具有以下多肽序列：
(1)分别为SEQ ID NO:21、22、23、51、52和53；
(2)分别为SEQ ID NO:24、25、26、54、55和56；
(3)分别为SEQ ID NO:27、28、29、57、58和59；
(4)分别为SEQ ID NO:30、31、32、60、61和62；
(5)分别为SEQ ID NO:33、34、35、63、64和65；
(6)分别为SEQ ID NO:36、37、38、66、67和68；
(7)分别为SEQ ID NO:39、40、41、69、70和71；
(8)分别为SEQ ID NO:42、43、44、72、73和74；
(9)分别为SEQ ID NO:45、46、47、75、76和77；或
(10)分别为SEQ ID NO:48、49、50、78、79和80；
其中其所述抗原结合域特异性结合CLDN18.2，优选人CLDN18.2。
在另一特定的方面，本发明涉及包含一个抗原结合域的嵌合抗原受体(CAR)，其中抗原结合域包含一重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、一轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，具有以下多肽序列：
(1)分别为SEQ ID NO:81、82、83、111、112和113；
(2)分别为SEQ ID NO:84、85、86、114、115和116；
(3)分别为SEQ ID NO:87、88、89、117、118和119；
(4)分别为SEQ ID NO:90、91、92、120、121和122；
(5)分别为SEQ ID NO:93、94、95、123、124和125；
(6)分别为SEQ ID NO:96、97、98、126、127和128；
(7)分别为SEQ ID NO:99、100、101、129、130和131；
(8)分别为SEQ ID NO:102、103、104、132、133和134；
(9)分别为SEQ ID NO:105、106、107、135、136和137；或
(10)分别为SEQ ID NO:108、109、110、138、139和140；
其中其所述抗原结合域特异性结合CLDN18.2，优选人CLDN18.2。
在另一特定的方面，本发明涉及一种抗原结合域，所述抗原结合域包含一重链可变区，该可变区具有与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、或19至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列，或一轻链可变区，该可变区具有与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、或20至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列。
在另一特定的方面，本发明涉及一种抗原结合域，所述抗原结合域包含：
(1)具有SEQ ID NO：1所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：2所示多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO：3所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：4所示多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO：5所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：6所示多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO：7所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：8所示多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO：9所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：10所示多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO：11所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：12所示多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO：13所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：14所示多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO：15所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：16所示多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO：17所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：18所示多肽序列的轻链可变区；或
(10)具有SEQ ID NO：19所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：20所示多肽序列的轻链可变区。
在另一特定的方面，所述抗原结合域是人源化的，且包含一重链可变区，该可变区具有与SEQ ID NO:142、143、146、147、151、152、154、155、156、159、160、161、162、166、167、170、171、172、175、176、177、178、179、180、186、187、191、192、或193至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列，或一轻链可变区，该可变区具有与SEQ IDNO:144、145、148、149、150、153、157、158、163、164、165、168、169、173、174、181、182、183、184、185、188、189、190、194、195、196、或197至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列。
在另一特定的方面，所述抗原结合域是人源化的，并包含：
(1)具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
(10)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
(11)具有SEQ ID NO：151所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
(12)具有SEQ ID NO：152所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
(13)具有SEQ ID NO：154所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
(14)具有SEQ ID NO：155所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
(15)具有SEQ ID NO：156所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：158所示多肽序列的轻链可变区；
(16)具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
(17)具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
(18)具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
(19)具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
(20)具有SEQ ID NO：161所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区；或
(21)具有SEQ ID NO：162所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区。
在另一特定的方面，所述抗原结合域是特异性结合CLDN18.2的单链可变片段(scFv)，优选人CLDN18.2。
在某些实施方式中，所述抗原结合域是特异性结合CLDN18.2的人源化单链可变片段(scFv)，优选人CLDN18.2。在某些实施方式中，所述人源化单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：198-215中任意一条至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列。在某些实施方式中，所述人源化单链可变片段(scFv)包含具有选自SEQ IDNO：198-215组成的组的氨基酸序列的多肽序列。
在另一特定的方面，所述嵌合抗原受体包含一个或多个抗原结合域。
在另一特定的方面，所述胞内信号域包含一个或多个共刺激结构域和一个或多个激活结构域。
在另一一般方面，本发明涉及一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸，其中所述CAR包含本发明的抗原结合域。本领域技术人员将理解，可以在不改变蛋白质氨基酸序列的情况下改变蛋白质的编码序列(例如替换、删除、插入等)。因此，本领域技术人员将理解可以在不改变蛋白质氨基酸序列的情况下改变本发明的编码抗原结合域的核酸序列。
在另一一般方面，本发明涉及一种载体，所述载体包含分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码CAR的核酸，其中所述CAR包含本发明的抗原结合域。可以使用本发明所属领域的技术人员已知的任何载体，例如质粒、黏粒、噬菌体载体或病毒载体。在某些实施方式中，所述载体是重组表达载体，例如质粒。载体可以包含构建表达载体常规功能的任何元件，例如，启动子、核糖体结合元件、终止子、增强子、选择标记和复制起始位点。所述启动子可以是组成型、诱导型或抑制型启动子。本领域已知有许多能够将核酸运送进细胞的表达载体，他们均可以在本发明中应用以在细胞中产生其抗原结合域。可使用常规克隆技术或人工基因合成来制备本发明实施例中的重组表达载体。
在另一一般方面，本发明涉及一种细胞，所述细胞用包含编码本发明CAR的分离核酸的载体转导。术语“转染”或“转导”指将外源核酸转运或引入宿主细胞的步骤。“转导的”细胞是指用外源核酸转导了的细胞。所述细胞包括原代受试细胞及其子代。在某些实施方式中，所述细胞为人源CAR-T细胞，其中所述T细胞经过工程改造以表达本发明的CAR，用以治疗诸如癌症的疾病。在某些实施方式中，所述细胞为人源CAR-NK细胞，其中所述NK细胞经过工程改造以表达本发明的CAR，用以治疗诸如癌症的疾病。
在另一一般方面，本发明涉及一种制备CAR-T细胞的方法，所述方法为用包含编码本发明CAR的分离核酸的载体转导T细胞。
在另一一般方面，本发明涉及一种制备本发明的CAR-T细胞的方法，所述方法包括在制备CAR-T细胞的条件下培养含有编码本发明嵌合抗原受体(CAR)的核酸的T细胞，并回收CAR-T细胞。
在另一一般方面，本发明涉及一种制备CAR-NK细胞的方法，所述方法为用包含编码本发明CAR的分离核酸的载体转导NK细胞。
在另一一般方面，本发明涉及一种制备本发明的CAR-NK细胞的方法，所述方法包括在制备CAR-NK细胞的条件下培养含有编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸的NK细胞，并回收CAR-NK细胞。
在另一一般方面，本发明涉及一种生产包含本发明的嵌合抗原受体(CAR)的RNA工程化细胞群的方法。所述方法包括将细胞群与包含编码本发明的嵌合抗原受体(CAR)的核酸的分离的多核苷酸接触，其中分离的多核苷酸是体外转录的RNA或合成的RNA。
药物组合物
在另一一般方面，本发明涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明的分离的多核苷酸，本发明的分离的多肽、本发明的宿主细胞和/或本发明的工程化免疫细胞和药学上可接受的载体。如本文所用，术语“药物组合物”指一种产物，所述产物包含本发明的分离的多核苷酸，本发明的分离的多肽、本发明的宿主细胞和/或本发明的工程化免疫细胞和药学上可接受的载体。本发明的多核苷酸、多肽、宿主细胞和/或工程化免疫细胞和包含他们的组合物也可以用用来制备用于本文所述的治疗应用的药物。
如本文所用，术语“载体”指任何赋形剂、稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂、油、脂质、含脂质的囊泡、微球、脂质体封装或本领域公知的用于药物制剂的其他材料。应理解，所述载体、赋形剂或稀释剂的特性取决于特定用药的给药途径。如本文所用，术语“药学上可接受的载体”指不干扰本发明的组合物的有效性或本发明的组合物的生物活性的无毒材料。在特定的实施方式中，鉴于本发明，任何适合用于多核苷酸、多肽、宿主细胞和/或工程化免疫细胞药物组合物的药学上可接受的载体均可在本发明中使用。
药物活性成分与药学上可接受的载体的制剂是本领域已知的，例如雷明顿药学技术与实践(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)(如第21版(2005)和其后任何版本)。其他成分的示例包括但不限于：缓冲剂、稀释剂、溶剂、张力调节剂、防腐剂、稳定剂和螯合剂。可以使用一种或多种药学上可接受的载体配制本发明的药物组合物。
应用方法
在另一一般方面，本发明涉及一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括给受试者施用本发明的CAR-T细胞和/或CAR-NK细胞。所述癌症可以，例如选自但不限于，肺癌、胃癌、食管癌、胆管癌、胆管癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、转移性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤和其他实体瘤，以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他血液肿瘤。
在另一一般方面，本发明涉及一种治疗有需要的受试者的炎症性疾病的方法，所述方法包括给受试者施用本发明的CAR-T细胞和/或CAR-NK细胞。
在本发明的实施方式中，所述CAR-T细胞或CAR-NK细胞包含表达的治疗有效量的本发明CAR。如本文所用，术语“治疗有效量”指在受试者体内引发所期望的生物或医学反应的活性成分或组分的量。治疗有效量可以通过经验和常规方式决定，与所规定的目的相关。
如本文中涉及CAR处，治疗有效量指在转导的T细胞或NK细胞中表达的CAR分子在有需要的受试者中调节免疫反应的量。同样地，如本文中涉及CAR处，治疗有效量指在转导的T细胞或NK细胞中表达的CAR分子在治疗疾病、障碍或病症；预防或减缓疾病、障碍或病症进程；或减轻或彻底治愈与疾病、障碍或病症的症状中取得效果的量。
如本文中涉及CAR-T细胞或CAR-NK细胞处，治疗有效量指在转导的CAR-T细胞或CAR-NK细胞中表达的CAR分子在有需要的受试者中调节免疫反应的量。同样地，如本文中涉及CAR-T细胞或CAR-NK细胞处，治疗有效量指在转导的CAR-T细胞或CAR-NK细胞中表达的CAR分子在治疗疾病、障碍或病症；预防或减缓疾病、障碍或病症的进展；或减轻或彻底治愈与疾病、障碍或病症相关的症状中取得效果的量。
在特定的实施方式中，所述待治疗的疾病、障碍或病症指癌症，优选的癌症选自但不限于以下构成的组，肺癌、胃癌、食管癌、胆管癌、胆管癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、转移性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤和其他实体瘤，以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他血液肿瘤。在另外的特定实施方式中，所述待治疗的疾病、障碍或病症指炎症性疾病。
在特定的实施方式中，治疗有效量指足够达到以下效果中一、二、三、四或更多项的治疗量：(i)减轻或改善待治疗的疾病、障碍或病症或与其相关的症状的严重程度；(ii)缩短待治疗的疾病、障碍或病症或与其相关的症状的持续时间；(iii)防止待治疗的疾病、障碍或病症或与其相关的症状进展；(iv)使待治疗的疾病、障碍或病症或与其相关的症状减退；(v)防止待治疗的疾病、障碍或病症或与其相关的症状恶化或发作；(vi)防止待治疗的疾病、障碍或病症或与其相关的症状复发；(vii)减少待治疗的疾病、障碍或病症或与其相关的症状的患者的住院率；(viii)缩短待治疗的疾病、障碍或病症或与其相关的症状的患者的住院时间；(i)延长待治疗的疾病、障碍或病症或与其相关的症状的患者的生存期；(i)抑制或减轻患者的待治疗疾病、障碍或病症或与其相关的症状；和/或(ii)加强或改善另一种疗法的预防或治疗效果。
所述治疗有效量或治疗有效剂量可以根据多种因素变动，例如待治疗的疾病、障碍或病症、给药途径、靶点部位、受试者身体状况(包括例如年龄、体重、健康程度)、受试者是人还是动物、其他用药以及疗法是预防性或治疗性的。最佳地应滴定治疗剂量以优化安全性和有效性。
在特定的实施方式中，本文所述的组合物被按照适合对受试者的预期给药途径配制。例如，本文所述的组合物可被配制为适合静脉给药、皮下给药或肌注给药。
本发明的细胞可以以本领域技术人员所知的任何便利的途径给药。例如，本发明的细胞可以以气溶胶吸入、注射、摄入、输液、植入和/或移植的方式给予患者。所述含有本发明的细胞的组合物能够经动脉、皮下、皮内、瘤内、结内、髓内、肌内、胸膜内、静脉注射或腹膜内途径给药。在某些实施方式中，所述本发明的细胞在患者淋巴细胞耗竭或未耗竭的情况下均可使用。
所述包含表达本发明CAR的本发明细胞的药物组合物可以以无菌液体制剂形式提供，通常为含细胞悬浮液的等渗水溶液，或任选为乳液、分散液等，通常缓冲至选定pH。所述组合物可包含载体，例如，水、盐水、磷酸盐缓冲盐溶液和适合维持细胞的生存和完整性，并能用于细胞组合物给药的类似物。
可以根据需要，将本发明的细胞和各种其他成分一起加入适量的合适溶剂中来制备无菌注射液。该组合物可以包括一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂例如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋葡萄糖或适合用于细胞组合物和向患者给药的类似物，制备细胞组合物的合适缓冲液是本领域公知的。使用的任何赋形剂、稀释剂或添加剂需兼顾本发明细胞的生存和完整性的维持。
本发明的细胞能够在任何机体可接受的赋形剂中应用。包含本发明的细胞的细胞群可包含纯化的细胞群。本领域技术人员可使用各种公知的技术容易地确定细胞群中的细胞。包含本发明的基因修饰的细胞的细胞群的纯度可以是约50％至约55％、约55％至约60％、约60％至约65％、约65％至约70％、约70％至约75％、约75％至约80％、约80％至约85％、约85％至约90％、约90％至约95％、或约95％至约100％。本领域技术人员能够容易地调整用药剂量，例如，纯度降低则剂量应上调。
本发明的细胞通常以基于接受细胞给药的受试者每千克体重的细胞数(细胞/kg)的剂量给药。通常细胞的剂量为约104至约1010个细胞/kg体重，例如约105至约109、约105至约108、约105至约107、或约105至约106，取决于给药的方式和部位。通常，相对于肿瘤和/或癌症局部给药，在全身给药的情况下需要使用比局部给药更高的剂量。示例性剂量范围包括但不限于1×104至1×108、2×104至1×108、3×104至1×108、4×104至1×108、5×104至6×108、7×104至1×108、8×104至1×108、9×104至1×108、1×105至1×108、1×105至9×107、1×105至8×107、1×105至7×107、1×105至6×107、1×105至5×107、1×105至4×107、1×105至4×107、1×105至3×107、1×105至2×107、1×105至1×107、1×105至9×106、1×105至8×106、1×105至7×106、1×105至6×106、1×105至5×106、1×105至4×106、1×105至4×106、1×105至3×106、1×105至2×106、1×105至1×106、2×105至9×107、2×105至8×107、2×105至7×107、2×105至6×107、2×105至5×107、2×105至4×107、2×105至4×107、2×105至3×107、2×105至2×107、2×105至1×107、2×105至9×106、2×105至8×106、2×105至7×106、2×105至6×106、2×105至5×106、2×105至4×106、2×105至4×106、2×105至3×106、2×105至2×106、2×105至1×106、3×105至3×106个细胞/kg，或类似剂量。此外，所述剂量可被调整以说明是否以单剂量给药或者是否以多剂量给药。有效剂量的精确计算可以基于每个受试者的个体因素。
如本文所用，术语“治疗”均旨在指改善或逆转与癌症和/或炎症性疾病、障碍或病症相关的至少一种可测量的身体指标，这在受试者体内不一定是可识别的，但可以是可识别的。如本文所用，术语“治疗”也可以指使疾病、障碍或病症减退、防止其进展或至少减缓其进展。在特定的实施方式中，“治疗”指减缓、防止一个或多个与疾病、障碍或病症(例如肿瘤，更优选为癌症)相关的症状恶化或发作，或减少所述症状持续时间。在特定的实施方式中，“治疗”指防止疾病、障碍或病症的复发。在特定的实施方式中，“治疗”指延长患有疾病、障碍或病症的受试者的生存期。在特定的实施方式中，“治疗”指根除患者的疾病、障碍或病症。
在特定的实施方式中，提供了用于治疗癌症和/或炎症性疾病、障碍或病症的组合物。对于癌症治疗，所述提供的组合物可以和另一种疗法联合使用，所述另一种疗法包括但不限于化学疗法、抗CD20单抗、抗TIM-3单抗、抗LAG-3单抗、抗EGFR单抗、抗HER-2单抗、抗CD19单抗、抗CD33单抗、抗CD47单抗、抗CD73单抗、抗DLL-3单抗、抗apelin单抗、抗TIP-1单抗、抗FOLR1单抗、抗CTLA-4单抗、抗PD-L1单抗、抗PD-1单抗、其他肿瘤免疫学药物、抗血管生成药物、放射疗法、抗体药物偶联物(ADC)、靶向疗法或其他抗癌药物。
在特定的实施方式中，所述治疗有需要的受试者的肿瘤和/或炎症性疾病的方法包括给受试者联合施用本发明的CAR-T细胞和/或CAR-NK细胞和提高细胞CAR分子表达效率的药剂。这类药剂包括但不限于结合CD73、CD39、PD1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3或LAG3的抗体片段，或腺苷A2a受体拮抗剂。
在特定的实施方式中，所述治疗有需要的受试者的肿瘤和/或炎症性疾病的方法包括给受试者联合施用本发明的CAR-T细胞和/或CAR-NK细胞和改善一种或多种与施用表达CAR分子的细胞有关的副作用的药剂。这类药剂包括但不限于类固醇、TNFα抑制剂或IL-6抑制剂。
在特定的实施方式中，所述治疗有需要的受试者的肿瘤和/或炎症性疾病的方法包括给受试者联合施用本发明的CAR-T细胞和/或CAR-NK细胞和治疗Claudin18.2相关疾病的药剂。这类药剂包括但不限于抗Claudin18.2单抗或双特异性抗体。
本文提到给受试者施用两种或以上疗法时所使用的术语“联合”指使用一种以上疗法。术语“联合”的使用不限制给受试者施用疗法的顺序。例如，给患者施用第一疗法(如本文所述的组合物)可以在第二疗法施用前(如第二疗法施用前5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、施用同时或施用后(如第二疗法施用后5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)。
实施方式
本发明还提供了下列非限制性实施方式。
实施方式1是一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸序列，所述CAR包含：(a)含有至少一个特异性结合
claudin18.2(CLDN18.2)的抗原结合域的胞外域；(b)铰链区；(c)跨膜结构域；和(d)胞内信号域。
实施方式2是实施方式1所述的分离的多核苷酸，其中所述抗原结合域包含一重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、一轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，具有以下多肽序列：
(1)分别为SEQ ID NO:21、22、23、51、52和53；
(2)分别为SEQ ID NO:24、25、26、54、55和56；
(3)分别为SEQ ID NO:27、28、29、57、58和59；
(4)分别为SEQ ID NO:30、31、32、60、61和62；
(5)分别为SEQ ID NO:33、34、35、63、64和65；
(6)分别为SEQ ID NO:36、37、38、66、67和68；
(7)分别为SEQ ID NO:39、40、41、69、70和71；
(8)分别为SEQ ID NO:42、43、44、72、73和74；
(9)分别为SEQ ID NO:45、46、47、75、76和77；或
(10)分别为SEQ ID NO:48、49、50、78、79和80；
其中其所述抗原结合域特异性结合CLDN18.2，优选人CLDN18.2。
实施方式3是实施方式1所述的分离的多核苷酸，其中所述抗原结合域包含一重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、一轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，具有以下多肽序列：
(1)分别为SEQ ID NO:81、82、83、111、112和113；
(2)分别为SEQ ID NO:84、85、86、114、115和116；
(3)分别为SEQ ID NO:87、88、89、117、118和119；
(4)分别为SEQ ID NO:90、91、92、120、121和122；
(5)分别为SEQ ID NO:93、94、95、123、124和125；
(6)分别为SEQ ID NO:96、97、98、126、127和128；
(7)分别为SEQ ID NO:99、100、101、129、130和131；
(8)分别为SEQ ID NO:102、103、104、132、133和134；
(9)分别为SEQ ID NO:105、106、107、135、136和137；或
(10)分别为SEQ ID NO:108、109、110、138、139和140；
其中其所述抗原结合域特异性结合CLDN18.2，优选人CLDN18.2。
实施方式4是实施方式1-3中任一项所述的分离的多核苷酸，其中所述抗原结合域包含一重链可变区，该可变区具有与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、或19至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列，或一轻链可变区，该可变区具有与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、或20至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列。
实施方式5是实施方式1-4中任一项所述的分离的多核苷酸，其中所述抗原结合域包含：
(1)具有SEQ ID NO：1所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：2所示多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO：3所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：4所示多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO：5所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：6所示多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO：7所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：8所示多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO：9所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：10所示多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO：11所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：12所示多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO：13所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：14所示多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO：15所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：16所示多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO：17所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：18所示多肽序列的轻链可变区；或
(10)具有SEQ ID NO：19所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：20所示多肽序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述抗原结合域是人源化的，且包含一重链可变区，该可变区具有与SEQ ID NO:142、143、146、147、151、152、154、155、156、159、160、161、162、166、167、170、171、172、175、176、177、178、179、180、186、187、191、192、或193至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列，或一轻链可变区，该可变区具有与SEQ IDNO:144、145、148、149、150、153、157、158、163、164、165、168、169、173、174、181、182、183、184、185、188、189、190、194、195、196、或197至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列。
实施方式7是实施方式6所述的分离的多核苷酸，其中抗原结合域是人源化的，且包含：
(1)具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
(10)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
(11)具有SEQ ID NO：151所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
(12)具有SEQ ID NO：152所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
(13)具有SEQ ID NO：154所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
(14)具有SEQ ID NO：155所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
(15)具有SEQ ID NO：156所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：158所示多肽序列的轻链可变区；
(16)具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
(17)具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
(18)具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
(19)具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
(20)具有SEQ ID NO：161所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区；或
(21)具有SEQ ID NO：162所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区。
实施方式8是实施方式1-7中任一项所述的分离的多核苷酸，其中所述抗原结合域特异性结合人CLDN18.2的单链可变片段(scFv)，优选人CLDN18.2。
实施方式9是实施方式8所述的分离的多核苷酸，其中所述单链可变片段(scFv)是人源化的，且包含与SEQ ID NO：198-215中任意一条至少95％相同的多肽序列。
实施方式10是实施方式1-9中任一项所述的分离的多核苷酸，其中所述嵌合抗原受体(CAR)包含一个或多个抗原结合域。
实施方式11是实施方式1-10中任一项所述的分离的多核苷酸，其中所述CAR的胞内信号转导域包含一个或多个共刺激结构域和一个或多个激活结构域。
实施方式12是一种嵌合抗原受体(CAR)，所述嵌合抗原受体(CAR)由实施方式1-11中任一项所述的分离的多核苷酸编码。
实施方式13是一种载体，所述载体包含实施方式1-11中任一项所述的分离的多核苷酸。
实施方式14是一种宿主细胞，所述宿主细胞包含实施方式13所述的载体。
实施方式15是如实施方式14所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是CAR-T细胞，优选人CAR-T细胞。
实施方式16是如实施方式14所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是CAR-NK细胞，优选人CAR-NK细胞。
实施方式17是一种制备表达嵌合抗原受体(CAR)的宿主细胞的方法，所述方法包括使用实施方式13所述的载体转导T细胞。
实施方式18是一种制备嵌合抗原受体(CAR)-T细胞的方法，所述方法包括在适合制备CAR-T细胞的条件下培养含有分离的多核苷酸的T细胞并回收CAR-T细胞，所述分离的多核苷酸包含编码如实施方式1-11中任一项所述的嵌合抗原受体(CAR)的核酸。
实施方式19是一种制备表达嵌合抗原受体(CAR)的宿主细胞的方法，所述方法包括使用权利要求13所述的载体转导NK细胞。
实施方式20是一种制备嵌合抗原受体(CAR)-NK细胞的方法，所述方法包括在适合制备CAR-NK细胞的条件下培养含有分离的多核苷酸的NK细胞并回收CAR-NK细胞，所述分离的多核苷酸包含编码如实施方式1-11中任一项所述的嵌合抗原受体(CAR)的核酸。
实施方式21是一种制备包含嵌合抗原受体(CAR)的细胞的方法，所述方法包括使细胞与包含编码如实施方式1-11中任一项所述的嵌合抗原受体(CAR)的核酸的分离的多核苷酸接触，其中分离的多核苷酸是体外转录的RNA或合成的RNA。
实施方式22是一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括给受试者施用如实施方式14-16中任一项所述的宿主细胞。
实施方式23是实施方式22所述的方法，其中所述癌症选自肺癌、胃癌、食管癌、胆管癌、胆管癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、转移性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤和其他实体瘤，以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他血液肿瘤。
实施方式24是一种治疗有需要的受试者的炎症性疾病的方法，所述方法包括给受试者施用实施方式14-16中任一项所述的宿主细胞。
实施方式25是实施方式22-24中任一项所述的方法，所述方法进一步包括给有需要的受试者施用提高表达CAR分子的细胞的效率的药剂。
实施方式26是实施方式22-24中任一项所述的方法，所述方法进一步包括给有需要的受试者施用改善与施用表达CAR分子的细胞相关的一种或多种副作用的药剂。
实施方式27是实施方式22-24中任一项所述的方法，所述方法进一步包括给有需要的受试者施用治疗Claudin18.2相关疾病的药剂。
实施例
实施例1：鉴定特异性结合CLDN18.2的抗原结合域
特异性结合CLDN18.2的抗原结合域是抗CLDN18.2单抗，其分离和测序如2019年3月6日申请的PCT/US19/020872所述，其通过引用整体并入本文。
特异性结合CLDN18.2的抗原结合域的轻链和重链可变区序列列于表1和表2，特异性结合CLDN18.2的抗原结合域的CDR区见表3-6。
表1特异性结合CLDN18.2的抗原结合域的重链可变区序列
Figure BDA0003288382580000221
Figure BDA0003288382580000231
VH：重链可变区
表2特异性结合CLDN18.2的抗原结合域的轻链可变区序列
Figure BDA0003288382580000232
VL：轻链可变区
表3特异性结合CLDN18.2的抗原结合域重链CDR区1-3
名称 HC CDR1 NO HC CDR2 NO HC CDR3 NO
2-C3 GFTFSSYG 21 ISGGGSYT 22 ARQSRGNAMDY 23
2-P8 GYSFTGYN 24 IDPYNGVT 25 ARWGGNYVDY 26
3-E21 GFTFSKYA 27 ISNGGSYT 28 ARHDKGNALDY 29
3-P21 GYSFTGYN 30 INPYFGST 31 ARGAYYGNAMDY 32
5-E22 GYTITDNY 33 IYPGSGNT 34 ARGFPYYAMDY 35
6-J11 GFIFSSFG 36 ISSGRSTM 37 ARGGFYGNSLDY 38
8-G12 GYAFSDYW 39 IYPGYGDT 40 ARWGYYGNAMDY 41
10-J10 GYTFTRYR 42 IDPSDSET 43 ARLNYGNCFDY 44
10-K2 GYAFTSYV 45 INPYSDGT 46 TRIYYGNAMDY 47
15-D6 GYTFTSYW 48 IYPGRSST 49 SRLSRGNAMDY 50
HC：重链；CDR：互补决定区；NO：SEQ ID NO
特异性结合CLDN18.2的抗原结合域的HC CDR使用IMGT方法确定(Lefranc,M.-P.等,Nucleic Acids Res.1999；27:209-212)。
表4特异性结合CLDN18.2的抗原结合域轻链CDR区1-3
名称 LC CDR1 NO LC CDR2 NO LC CDR3 NO
2-C3 QSLLNSGNQKNY 51 WAS 52 QNDYSYPLT 53
2-P8 QDINRY 54 RAN 55 LQYDEFPLT 56
3-E21 QSLLNSGNQKNY 57 WAS 58 QNDYFYPLT 59
3-P21 QSLLNSGNQKNY 60 WAS 61 QNDYFYPLT 62
5-E22 QNINVW 63 KAS 64 QQGQNYPLT 65
6-J11 LSLLNSGNQKNY 66 WAS 67 QNAYSYPLT 68
8-G12 QSLLNSGNQKNY 69 WAS 70 QNAYIYPLT 71
10-J10 QTLLNSGNQKNY 72 WAS 73 QNDYFYPFT 74
10-K2 QSLLNSGNQKNY 75 WAS 76 QNDYSYPFT 77
15-D6 QSLLNSGNQKSY 78 WAS 79 QNDYYYPFT 80
HC：轻链；CDR：互补决定区；NO：SEQ ID NO
特异性结合CLDN18.2的抗原结合域的LC CDR使用IMGT方法确定(Lefranc,M.-P.等,Nucleic Acids Res.1999；27:209-212)。
表5特异性结合CLDN18.2的抗原结合域重链CDR区1-3
名称 HC CDR1 NO HC CDR2 NO HC CDR3 NO
2-C3 GFTFSSYGMS 81 TISGGGSYTYYLDSVKG 82 ARQSRGNAMDY 83
2-P8 GYSFTGYNMH 84 YIDPYNGVTNYNQKFKG 85 ARWGGNYVDY 86
3-E21 GFTFSKYAMS 87 FISNGGSYTYCLDSVKG 88 ARHDKGNALDY 89
3-P21 GYSFTGYNMK 90 NINPYFGSTNYNQKFKG 91 ARGAYYGNAMDY 92
5-E22 GYTITDNYMH 93 EIYPGSGNTYYNERFKG 94 ARGFPYYAMDY 95
6-J11 GFIFSSFGMH 96 YISSGRSTMYYADTVKG 97 ARGGFYGNSLDY 98
8-G12 GYAFSDYWMN 99 QIYPGYGDTKYNENFKG 100 ARWGYYGNAMDY 101
10-J10 GYTFTRYRMN 102 NIDPSDSETHYNQKFKD 103 ARLNYGNCFDY 104
10-K2 GYAFTSYVMH 105 YINPYSDGTRYNEKFKG 106 TRIYYGNAMDY 107
15-D6 GYTFTSYWIN 108 NIYPGRSSTNYNEKFKS 109 SRLSRGNAMDY 110
HC：重链；CDR：互补决定区；NO：SEQ ID NO
特异性结合CLDN18.2的抗原结合域的HC CDR使用IMGT(Lefranc,M.-P.等,Nucleic Acids Res.1999；27:209-212)和Kabat(Elvin A.Kabat等,具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)第5版(1991))联合方法确定。
表6特异性结合CLDN18.2的抗原结合域轻链CDR区1-3
名称 LC CDR1 NO LC CDR2 NO LC CDR3 NO
2-C3 KSSQSLLNSGNQKNYLT 111 WASTRES 112 QNDYSYPLT 113
2-P8 KASQDINRYLS 114 RANRLVD 115 LQYDEFPLT 116
3-E21 KSSQSLLNSGNQKNYLT 117 WASTRES 118 QNDYFYPLT 119
3-P21 KSSQSLLNSGNQKNYLT 120 WASTRES 121 QNDYFYPLT 122
5-E22 HARQNINVWLS 123 KASNLHT 124 QQGQNYPLT 125
6-J11 KSSLSLLNSGNQKNYLT 126 WASTRES 127 QNAYSYPLT 128
8-G12 KSSQSLLNSGNQKNYLT 129 WASTRES 130 QNAYIYPLT 131
10-J10 KSSQTLLNSGNQKNYLT 132 WASTRES 133 QNDYFYPFT 134
10-K2 KSSQSLLNSGNQKNYLT 135 WASTRES 136 QNDYSYPFT 137
15-D6 RSSQSLLNSGNQKSYLT 138 WASTRES 139 QNDYYYPFT 140
HC：轻链；CDR：互补决定区；NO：SEQ ID NO
特异性结合CLDN18.2的抗原结合域的LC CDR使用IMGT(Lefranc,M.-P.等,Nucleic Acids Res.1999；27:209-212)和Kabat(Elvin A.Kabat等,具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)第5版(1991))联合方法确定。
实施例2：鼠抗CLDN18.2单抗的人源化
将鼠抗CLDN18.2单抗人源化以减轻其用于人类患者时的潜在免疫原性，如2019年3月6日提交的PCT/US19/020872所述，其通过引用整体并入本文。表7显示人源化VH和VL区序列。
表7特异性结合CLDN18.2的人源化的抗原结合域的重链可变区和轻链可变区序列
Figure BDA0003288382580000251
Figure BDA0003288382580000261
Figure BDA0003288382580000271
人源化VH和VL区分别与人IgG1重链的恒定区与κ轻链的恒定区融合。人源化单抗命名如下：2-C3-H1L1指含重链可变区2-C3-H1和轻链可变区2-C3-L1的单抗，其余所有人源化单抗命名规则同上。
测试了几种人源化单抗结合CLDN18.2和CLDN18.1的能力。测试中也应用了嵌合单抗15-D6。FACS实验中使用分别表达人CLDN18.2和CLDN18.1的稳定细胞系(HEK293-CLDN18.2和HEK293-CLDN18.1)，实验使用Alexa
Figure BDA0003288382580000272
488进行检测，如PCT/US19/020872所述。单抗浓度10μg/mL。结果如图1A-1B所示。“MFI”为“平均荧光强度(Mean FluorescenceIntensity)”。
其他的人源化单抗经过了CLDN18.2结合能力的测试，测试使用HEK293-CLDN18.2稳定细胞系和相同的FACS方案，使用碘化丙啶(PI)与二抗一起孵育以标记死细胞。结果如图2A-2D所示。
实施例3：人源化单抗向scFv转化
将人源化单抗转化为scFv，每个scFv由一个VH和一个VL组成，中间有一个(G4S)n连接肽(“n”代表G4S重复序列的数量)。VH或VL都位于融合蛋白N端以确定最有效的scFv设计。表8显示scFv设计序列。scFv命名如下：2-C3-H2(G4S)3L2指含有2-C3-H2重链可变区、(G4S)3连接肽和2-C3-L2轻链可变区的scFv；其他所有scFv命名规则同上。
表8特异性结合CLDN18.2的人源化scFv序列
Figure BDA0003288382580000281
Figure BDA0003288382580000291
测试了与(G4S)连接肽和人IgG4 Fc相融合的scFv融合蛋白(从N端到C端的顺序为scFv、G4S连接肽和Fc)结合CLDN18.2的能力。FACS实验中使用表达人CLDN18.2的稳定细胞系(HEK293-CLDN18.2)，使用基于Alexa
Figure BDA0003288382580000292
488进行检测，如PCT/US19/020872所述。碘化丙啶与二抗一起孵育以标记死细胞。结果如图3A-3L所示。
实施例4：构建包含抗CLDN18.2抗原结合域的嵌合抗原受体构建体
为了构建CAR，使用VH、VL和(G4S)n连接肽将mAb转化为scFv，并将scFv融合到源自人类CD8α的铰链和跨膜结构域(aa 114-188,Boursier JP等,J Biol Chem.1993；268(3):2013-20)的N端。CAR细胞内信号转导域的C端通过融合CD28的细胞内共刺激结构域(aa162-202,Aruffo A和Seed B,Proc Natl Acad Sci USA.1987；84(23):8573-7)和CD3ζ链的激活域(aa 52-162,Letourneur F和Klausner RD,Proc Natl Acad Sci USA.1991；88(20):8905-9)来构建。将编码CAR的DNA序列组装并克隆到表达载体(逆转录病毒、慢病毒、染色体外或整合)中，以使用标准分子生物学克隆技术生成CAR构建体。
实施例5：用肿瘤细胞杀伤试验评估CAR T细胞活性
使用Pan T分离试剂盒(Miltenyi biotech,货号：130-096-535)分离CD4+/CD8+细胞，并通过DynabeadsTM人T-激活剂CD3/CD28(ThermoFisher,货号：11131D)在含有10％FBS的AIM V培养基(ThermoFisher,货号：12055083)中激活3天，操作按照产品说明书进行。随后，活性T细胞在含有10％FBS和300IU/ml IL2(R&D systems,货号：202-IL-050)的AIM V培养基中持续培养小于一周，然后通过电穿孔瞬时转染5E22-H3(G4S)3L3CA表达质粒获得CART细胞。经过48小时的恢复期后，将CAR T细胞在测定中用作效应细胞。将靶细胞HEK293-CLDN18.2和HEK293-CLDN18.1用CFSE(ThermoFisher,货号：C34554)染色并与CAR T细胞以2.5:1的E/T(效应细胞/靶细胞)比例共培养24小时。随后，将细胞用PI(ThermoFisher,货号：P3566)和Annexin V(Biolegend,货号：640924)染色，并使用流式细胞术(Attune NxT)进行分析。仅计数CFSE阳性细胞。使用PI和/或Annexin V阳性细胞的百分比计算肿瘤细胞裂解百分比，如图4所示。
本领域技术人员能够意识到，可以在不脱离上述实施例大致发明构思的情况下对其作出更改。因此，应理解，本发明不仅限于所公开的实施方式，其旨在包含本说明书所定义的本发明的精神和范围内作出的修改。
序列表
<110> 凡恩世生物医药公司
<120> 人源化抗Claudin18.2嵌合抗原受体及其用途
<130> 065799.19WO1
<150> US62/825,955
<151> 2019-03-29
<150> US62/859,843
<151> 2019-06-11
<150> US62/896,758
<151> 2019-09-06
<160> 215
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3 重链可变区
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 2
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3 轻链可变区
<400> 2
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 3
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8 重链可变区
<400> 3
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Val Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Val Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly Gly Asn Tyr Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Lys Val Ser Ser
115
<210> 4
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8 轻链可变区
<400> 4
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Arg Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Phe Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr
65 70 75 80
Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 5
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21 重链可变区
<400> 5
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Cys Leu Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asp Lys Gly Asn Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Asn
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 6
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21 轻链可变区
<400> 6
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ser Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 7
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21 重链可变区
<400> 7
Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Tyr Phe Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21 轻链可变区
<400> 8
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Gly Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 9
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22 重链可变区
<400> 9
Lys Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Glu Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Pro Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22 轻链可变区
<400> 10
Asp Ile Gln Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Arg Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Arg Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Met Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11 重链可变区
<400> 11
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Arg Ser Thr Met Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Tyr Gly Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 12
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11 轻链可变区
<400> 12
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Leu Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Met Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Ser Cys Gln Asn
85 90 95
Ala Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 13
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12 重链可变区
<400> 13
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Tyr Gly Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 14
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12 轻链可变区
<400> 14
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Thr Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Ala Tyr Ile Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 15
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10 重链可变区
<400> 15
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Arg Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Phe Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Asn Tyr Gly Asn Cys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 16
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10 轻链可变区
<400> 16
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Thr Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Phe Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 17
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2 重链可变区
<400> 17
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Ser Asp Gly Thr Arg Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ile Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 18
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2 轻链可变区
<400> 18
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 19
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6 重链可变区
<400> 19
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Leu Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 20
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6 轻链可变区
<400> 20
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Ser Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 21
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3 HC CDR1
<400> 21
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 22
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3 HC CDR2
<400> 22
Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr
1 5
<210> 23
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3 HC CDR3
<400> 23
Ala Arg Gln Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 24
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8 HC CDR1
<400> 24
Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Asn
1 5
<210> 25
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8 HC CDR2
<400> 25
Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Val Thr
1 5
<210> 26
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8 HC CDR3
<400> 26
Ala Arg Trp Gly Gly Asn Tyr Val Asp Tyr
1 5 10
<210> 27
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21 HC CDR1
<400> 27
Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr Ala
1 5
<210> 28
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21 HC CDR2
<400> 28
Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr
1 5
<210> 29
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21 HC CDR3
<400> 29
Ala Arg His Asp Lys Gly Asn Ala Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 30
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21 HC CDR1
<400> 30
Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Asn
1 5
<210> 31
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21 HC CDR2
<400> 31
Ile Asn Pro Tyr Phe Gly Ser Thr
1 5
<210> 32
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21 HC CDR3
<400> 32
Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 33
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22 HC CDR1
<400> 33
Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Asn Tyr
1 5
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22 HC CDR2
<400> 34
Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22 HC CDR3
<400> 35
Ala Arg Gly Phe Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11 HC CDR1
<400> 36
Gly Phe Ile Phe Ser Ser Phe Gly
1 5
<210> 37
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11 HC CDR2
<400> 37
Ile Ser Ser Gly Arg Ser Thr Met
1 5
<210> 38
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11 HC CDR3
<400> 38
Ala Arg Gly Gly Phe Tyr Gly Asn Ser Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 39
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12 HC CDR1
<400> 39
Gly Tyr Ala Phe Ser Asp Tyr Trp
1 5
<210> 40
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12 HC CDR2
<400> 40
Ile Tyr Pro Gly Tyr Gly Asp Thr
1 5
<210> 41
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12 HC CDR3
<400> 41
Ala Arg Trp Gly Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 42
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10 HC CDR1
<400> 42
Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Arg
1 5
<210> 43
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10 HC CDR2
<400> 43
Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr
1 5
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10 HC CDR3
<400> 44
Ala Arg Leu Asn Tyr Gly Asn Cys Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 45
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2 HC CDR1
<400> 45
Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr Val
1 5
<210> 46
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2 HC CDR2
<400> 46
Ile Asn Pro Tyr Ser Asp Gly Thr
1 5
<210> 47
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2 HC CDR3
<400> 47
Thr Arg Ile Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 48
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6 HC CDR1
<400> 48
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 49
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6 HC CDR2
<400> 49
Ile Tyr Pro Gly Arg Ser Ser Thr
1 5
<210> 50
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6 HC CDR3
<400> 50
Ser Arg Leu Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 51
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3 LC CDR1
<400> 51
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 52
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3 LC CDR2
<400> 52
Trp Ala Ser
1
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3 LC CDR3
<400> 53
Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 54
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8 LC CDR1
<400> 54
Gln Asp Ile Asn Arg Tyr
1 5
<210> 55
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8 LC CDR2
<400> 55
Arg Ala Asn
1
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8 LC CDR3
<400> 56
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 57
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21 LC CDR1
<400> 57
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 58
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21 LC CDR2
<400> 58
Trp Ala Ser
1
<210> 59
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21 LC CDR3
<400> 59
Gln Asn Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 60
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21 LC CDR1
<400> 60
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 61
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21 LC CDR2
<400> 61
Trp Ala Ser
1
<210> 62
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21 LC CDR3
<400> 62
Gln Asn Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 63
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22 LC CDR1
<400> 63
Gln Asn Ile Asn Val Trp
1 5
<210> 64
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22 LC CDR2
<400> 64
Lys Ala Ser
1
<210> 65
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22 LC CDR3
<400> 65
Gln Gln Gly Gln Asn Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 66
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11 LC CDR1
<400> 66
Leu Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 67
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11 LC CDR2
<400> 67
Trp Ala Ser
1
<210> 68
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11 LC CDR3
<400> 68
Gln Asn Ala Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 69
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12 LC CDR1
<400> 69
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 70
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12 LC CDR2
<400> 70
Trp Ala Ser
1
<210> 71
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12 LC CDR3
<400> 71
Gln Asn Ala Tyr Ile Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 72
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10 LC CDR1
<400> 72
Gln Thr Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 73
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10 LC CDR2
<400> 73
Trp Ala Ser
1
<210> 74
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10 LC CDR3
<400> 74
Gln Asn Asp Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 75
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2 LC CDR1
<400> 75
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 76
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2 LC CDR2
<400> 76
Trp Ala Ser
1
<210> 77
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2 LC CDR3
<400> 77
Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 78
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6 LC CDR1
<400> 78
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Ser Tyr
1 5 10
<210> 79
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6 LC CDR2
<400> 79
Trp Ala Ser
1
<210> 80
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6 LC CDR3
<400> 80
Gln Asn Asp Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 81
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3 HC CDR1
<400> 81
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser
1 5 10
<210> 82
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3 HC CDR2
<400> 82
Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 83
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3 HC CDR3
<400> 83
Ala Arg Gln Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 84
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8 HC CDR1
<400> 84
Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Asn Met His
1 5 10
<210> 85
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8 HC CDR2
<400> 85
Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Val Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 86
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8 HC CDR3
<400> 86
Ala Arg Trp Gly Gly Asn Tyr Val Asp Tyr
1 5 10
<210> 87
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21 HC CDR1
<400> 87
Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 88
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21 HC CDR2
<400> 88
Phe Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Cys Leu Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 89
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21 HC CDR3
<400> 89
Ala Arg His Asp Lys Gly Asn Ala Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 90
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21 HC CDR1
<400> 90
Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Asn Met Lys
1 5 10
<210> 91
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21 HC CDR2
<400> 91
Asn Ile Asn Pro Tyr Phe Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 92
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21 HC CDR3
<400> 92
Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 93
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22 HC CDR1
<400> 93
Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Asn Tyr Met His
1 5 10
<210> 94
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22 HC CDR2
<400> 94
Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Arg Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 95
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22 HC CDR3
<400> 95
Ala Arg Gly Phe Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 96
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11 HC CDR1
<400> 96
Gly Phe Ile Phe Ser Ser Phe Gly Met His
1 5 10
<210> 97
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11 HC CDR2
<400> 97
Tyr Ile Ser Ser Gly Arg Ser Thr Met Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 98
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11 HC CDR3
<400> 98
Ala Arg Gly Gly Phe Tyr Gly Asn Ser Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 99
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12 HC CDR1
<400> 99
Gly Tyr Ala Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asn
1 5 10
<210> 100
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12 HC CDR2
<400> 100
Gln Ile Tyr Pro Gly Tyr Gly Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Asn Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 101
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12 HC CDR3
<400> 101
Ala Arg Trp Gly Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 102
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10 HC CDR1
<400> 102
Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Arg Met Asn
1 5 10
<210> 103
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10 HC CDR2
<400> 103
Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 104
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10 HC CDR3
<400> 104
Ala Arg Leu Asn Tyr Gly Asn Cys Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 105
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2 HC CDR1
<400> 105
Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr Val Met His
1 5 10
<210> 106
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2 HC CDR2
<400> 106
Tyr Ile Asn Pro Tyr Ser Asp Gly Thr Arg Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 107
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2 HC CDR3
<400> 107
Thr Arg Ile Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 108
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6 HC CDR1
<400> 108
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Asn
1 5 10
<210> 109
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6 HC CDR2
<400> 109
Asn Ile Tyr Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6 HC CDR3
<400> 110
Ser Arg Leu Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 111
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3 LC CDR1
<400> 111
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 112
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3 LC CDR2
<400> 112
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 113
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3 LC CDR3
<400> 113
Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 114
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8 LC CDR1
<400> 114
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Arg Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 115
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8 LC CDR2
<400> 115
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 116
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8 LC CDR3
<400> 116
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 117
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21 LC CDR1
<400> 117
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 118
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21 LC CDR2
<400> 118
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 119
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21 LC CDR3
<400> 119
Gln Asn Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 120
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21 LC CDR1
<400> 120
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 121
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21 LC CDR2
<400> 121
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 122
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21 LC CDR3
<400> 122
Gln Asn Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 123
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22 LC CDR1
<400> 123
His Ala Arg Gln Asn Ile Asn Val Trp Leu Ser
1 5 10
<210> 124
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22 LC CDR2
<400> 124
Lys Ala Ser Asn Leu His Thr
1 5
<210> 125
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22 LC CDR3
<400> 125
Gln Gln Gly Gln Asn Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 126
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11 LC CDR1
<400> 126
Lys Ser Ser Leu Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 127
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11 LC CDR2
<400> 127
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 128
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11 LC CDR3
<400> 128
Gln Asn Ala Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 129
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12 LC CDR1
<400> 129
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 130
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12 LC CDR2
<400> 130
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 131
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12 LC CDR3
<400> 131
Gln Asn Ala Tyr Ile Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 132
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10 LC CDR1
<400> 132
Lys Ser Ser Gln Thr Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 133
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10 LC CDR2
<400> 133
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 134
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10 LC CDR3
<400> 134
Gln Asn Asp Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 135
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2 LC CDR1
<400> 135
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 136
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2 LC CDR2
<400> 136
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 137
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2 LC CDR3
<400> 137
Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 138
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6 LC CDR1
<400> 138
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Ser Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 139
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6 LC CDR2
<400> 139
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 140
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6 LC CDR3
<400> 140
Gln Asn Asp Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 141
<211> 261
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 141
Met Ala Val Thr Ala Cys Gln Gly Leu Gly Phe Val Val Ser Leu Ile
1 5 10 15
Gly Ile Ala Gly Ile Ile Ala Ala Thr Cys Met Asp Gln Trp Ser Thr
20 25 30
Gln Asp Leu Tyr Asn Asn Pro Val Thr Ala Val Phe Asn Tyr Gln Gly
35 40 45
Leu Trp Arg Ser Cys Val Arg Glu Ser Ser Gly Phe Thr Glu Cys Arg
50 55 60
Gly Tyr Phe Thr Leu Leu Gly Leu Pro Ala Met Leu Gln Ala Val Arg
65 70 75 80
Ala Leu Met Ile Val Gly Ile Val Leu Gly Ala Ile Gly Leu Leu Val
85 90 95
Ser Ile Phe Ala Leu Lys Cys Ile Arg Ile Gly Ser Met Glu Asp Ser
100 105 110
Ala Lys Ala Asn Met Thr Leu Thr Ser Gly Ile Met Phe Ile Val Ser
115 120 125
Gly Leu Cys Ala Ile Ala Gly Val Ser Val Phe Ala Asn Met Leu Val
130 135 140
Thr Asn Phe Trp Met Ser Thr Ala Asn Met Tyr Thr Gly Met Gly Gly
145 150 155 160
Met Val Gln Thr Val Gln Thr Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ala Leu Phe
165 170 175
Val Gly Trp Val Ala Gly Gly Leu Thr Leu Ile Gly Gly Val Met Met
180 185 190
Cys Ile Ala Cys Arg Gly Leu Ala Pro Glu Glu Thr Asn Tyr Lys Ala
195 200 205
Val Ser Tyr His Ala Ser Gly His Ser Val Ala Tyr Lys Pro Gly Gly
210 215 220
Phe Lys Ala Ser Thr Gly Phe Gly Ser Asn Thr Lys Asn Lys Lys Ile
225 230 235 240
Tyr Asp Gly Gly Ala Arg Thr Glu Asp Glu Val Gln Ser Tyr Pro Ser
245 250 255
Lys His Asp Tyr Val
260
<210> 142
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3-H1 重链可变区
<400> 142
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Ala Asn Gln Leu Val
65 70 75 80
Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 143
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3-H2 重链可变区
<400> 143
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Gln Val Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 144
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3-L1 轻链可变区
<400> 144
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 145
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3-L2 轻链可变区
<400> 145
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 146
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22-H1 重链可变区
<400> 146
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 147
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22-H3 重链可变区
<400> 147
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 148
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22-L1 轻链可变区
<400> 148
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Arg Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 149
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22-L2 轻链可变区
<400> 149
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Arg Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 150
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22-L3 轻链可变区
<400> 150
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys His Ala Arg Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 151
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11-H1 重链可变区
<400> 151
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Arg Ser Thr Met Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Tyr Gly Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 152
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11-H2 重链可变区
<400> 152
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Arg Ser Thr Met Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Tyr Gly Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 153
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11-L1 轻链可变区
<400> 153
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Leu Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Ser Cys Gln Asn
85 90 95
Ala Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 154
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21-H1 重链可变区
<400> 154
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Glu Tyr Asn Pro Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Leu Arg Asp Asn Ser Lys Asn Gln Leu Ser
65 70 75 80
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asp Lys Gly Asn Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 155
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21-H2 重链可变区
<400> 155
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Glu Tyr Asn Pro Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Leu Arg Asp Asn Ser Lys Asn Gln Leu Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asp Lys Gly Asn Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 156
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21-H3 重链可变区
<400> 156
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asp Lys Gly Asn Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 157
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21-L1 轻链可变区
<400> 157
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Asn Leu Gln Thr Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21-L2 轻链可变区
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
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65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 159
Glu Ile Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Phe Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21-H2 重链可变区
<400> 160
Glu Ile Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Tyr Phe Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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<220>
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Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Tyr Phe Gly Ser Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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<220>
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1 5 10 15
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20 25 30
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1 5 10 15
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Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21-L2 轻链可变区
<400> 164
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21-L3 轻链可变区
<400> 165
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
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100 105 110
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 166
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<211> 119
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12-H2 重链可变区
<400> 167
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Trp Gly Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 113
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 8-G12-L1 轻链可变区
<400> 168
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<220>
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1 5 10 15
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65 70 75 80
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1 5 10 15
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20 25 30
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85 90 95
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100 105 110
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115
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<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 172
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2-L1 轻链可变区
<400> 173
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
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20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
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100 105 110
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-K2-L2 轻链可变区
<400> 174
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Ala Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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100 105 110
Lys
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<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6-H1 重链可变区
<400> 175
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Leu Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6-H2 重链可变区
<400> 176
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6-H3 重链可变区
<400> 177
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
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<211> 118
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 178
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<210> 179
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<220>
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<400> 179
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1 5 10 15
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100 105 110
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<220>
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<400> 180
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 181
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6-L1 轻链可变区
<400> 181
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
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Gly Asn Gln Lys Ser Tyr Met Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
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100 105 110
Lys
<210> 182
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6-L2 轻链可变区
<400> 182
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
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Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
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100 105 110
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<210> 183
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6-L3 轻链可变区
<400> 183
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
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20 25 30
Gly Asn Gln Lys Ser Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Asn His Ala Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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Asp Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
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Lys
<210> 184
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 184
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Ser Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser His Arg Tyr Thr Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 185
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6-L5 轻链可变区
<400> 185
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Ser Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser His Arg Tyr Thr Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 186
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10-H1 重链可变区
<400> 186
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Arg Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Asn Tyr Gly Asn Cys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 187
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10-H2 重链可变区
<400> 187
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Arg Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Asn Tyr Gly Asn Cys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 188
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10-L1 轻链可变区
<400> 188
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 189
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10-L2 轻链可变区
<400> 189
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 190
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 10-J10-L3 轻链可变区
<400> 190
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 191
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8-H1 重链可变区
<400> 191
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Val Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly Gly Asn Tyr Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 192
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8-H2 重链可变区
<400> 192
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Val Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly Gly Asn Tyr Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 193
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8-H3 重链可变区
<400> 193
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly Gly Asn Tyr Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 194
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8-L1 轻链可变区
<400> 194
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Arg Tyr
20 25 30
Val Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Phe Ser Gly Gln Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 195
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8-L2 轻链可变区
<400> 195
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Arg Tyr
20 25 30
Val Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Phe Ser Gly Gln Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 196
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8-L3 轻链可变区
<400> 196
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Arg Tyr
20 25 30
Val Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 197
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-P8-L4 轻链可变区
<400> 197
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Arg Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Phe Ser Gly Gln Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 198
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3-H2(G4S)3L2
<400> 198
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Gln Val Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln
145 150 155 160
Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr
180 185 190
Arg Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly
225 230 235 240
Thr Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 199
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3-H2(G4S)4L2
<400> 199
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Gln Val Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
145 150 155 160
Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
165 170 175
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
180 185 190
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
210 215 220
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu
225 230 235 240
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245 250
<210> 200
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2-C3-L2(G4S)3H2
<400> 200
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
130 135 140
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
145 150 155 160
Gly Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
165 170 175
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Leu
180 185 190
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Gln Val Val
195 200 205
Leu Thr Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
210 215 220
Ala Arg Gln Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Thr Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 201
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11-H1(G4S)3L1
<400> 201
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Arg Ser Thr Met Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Tyr Gly Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
130 135 140
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser
145 150 155 160
Leu Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr
165 170 175
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser
180 185 190
Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
195 200 205
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
210 215 220
Thr Tyr Ser Cys Gln Asn Ala Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 202
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11-H1(G4S)4L1
<400> 202
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Arg Ser Thr Met Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Tyr Gly Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr
130 135 140
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
145 150 155 160
Thr Cys Lys Ser Ser Leu Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn
165 170 175
Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
180 185 190
Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
210 215 220
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Ser Cys Gln Asn Ala Tyr Ser Tyr Pro
225 230 235 240
Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245 250
<210> 203
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6-J11-L1(G4S)3H1
<400> 203
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Leu Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Ser Cys Gln Asn
85 90 95
Ala Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
130 135 140
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Phe
145 150 155 160
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
165 170 175
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Arg Ser Thr Met Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
180 185 190
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
195 200 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala Arg Gly Gly Phe Tyr Gly Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 204
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22-H3(G4S)3L3
<400> 204
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu
130 135 140
Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys His Ala Arg Gln
145 150 155 160
Asn Ile Asn Val Trp Leu Ser Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
165 170 175
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro
180 185 190
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
195 200 205
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly
210 215 220
Gln Asn Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
225 230 235 240
<210> 205
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22-H3(G4S)4L3
<400> 205
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser
145 150 155 160
Cys His Ala Arg Gln Asn Ile Asn Val Trp Leu Ser Trp Tyr Leu Gln
165 170 175
Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Asn Leu
180 185 190
His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
195 200 205
Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr
210 215 220
Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Asn Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 206
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5-E22-L3(G4S)3H3
<400> 206
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys His Ala Arg Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln
115 120 125
Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys
130 135 140
Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Asn Tyr Met His Trp Val Arg
145 150 155 160
Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr Pro Gly
165 170 175
Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Glu Lys Phe Lys Asn Arg Ala Thr Leu
180 185 190
Thr Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu
195 200 205
Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Phe Pro Tyr
210 215 220
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
225 230 235 240
<210> 207
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21-H3(G4S)3L2
<400> 207
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asp Lys Gly Asn Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu
130 135 140
Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln
145 150 155 160
Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr
180 185 190
Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Asn Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Arg Leu Glu Ile Lys
245
<210> 208
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21-H3(G4S)4L2
<400> 208
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asp Lys Gly Asn Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn
145 150 155 160
Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr
165 170 175
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
180 185 190
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
210 215 220
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu
225 230 235 240
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
245 250
<210> 209
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-E21-L2(G4S)3H3
<400> 209
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
130 135 140
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
145 150 155 160
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
165 170 175
Ala Ala Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
180 185 190
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
195 200 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala Arg His Asp Lys Gly Asn Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 210
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21-H2(G4S)3L1
<400> 210
Glu Ile Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Tyr Phe Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
130 135 140
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser
145 150 155 160
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Val Thr Trp Tyr
165 170 175
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser
180 185 190
Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
195 200 205
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
210 215 220
Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 211
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21-H2(G4S)4L1
<400> 211
Glu Ile Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Tyr Phe Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr
130 135 140
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
145 150 155 160
Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn
165 170 175
Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
180 185 190
Ile Tyr Trp Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
210 215 220
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Asp Tyr Phe Tyr Pro
225 230 235 240
Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245 250
<210> 212
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3-P21-L1(G4S)3H2
<400> 212
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Glu Ile Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
130 135 140
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
145 150 155 160
Asn Met Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
165 170 175
Gly Asn Ile Asn Pro Tyr Phe Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
180 185 190
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
195 200 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 213
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6-H5(G4S)3L4
<400> 213
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Leu Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln
145 150 155 160
Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Ser Tyr Val Thr Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser His
180 185 190
Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Asn Asp Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 214
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6-H5(G4S)4L4
<400> 214
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Leu Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Ser Tyr
165 170 175
Val Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
180 185 190
Tyr Trp Ala Ser His Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
210 215 220
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Asp Tyr Tyr Tyr Pro Phe
225 230 235 240
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245 250
<210> 215
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 15-D6-L4(G4S)3H5
<400> 215
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Ser Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser His Arg Tyr Thr Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
130 135 140
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
145 150 155 160
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
165 170 175
Gly Tyr Ile Tyr Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
180 185 190
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
195 200 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ser Arg Leu Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Leu Val Thr Val Ser Ser
245

Claims (27)

1.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述分离的多核苷酸包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸序列，其中所述CAR包含：
(a)含有至少一个能特异性结合claudin18.2(CLDN18.2)的抗原结合域的细胞外域；
(b)铰链区；
(c)跨膜区；和
(d)细胞内信号转导域。
2.如权利要求1所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述抗原结合域包含一重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、一轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，具有以下多肽序列：
(1)分别为SEQ ID NO：21、22、23、51、52和53；
(2)分别为SEQ ID NO：24、25、26、54、55和56；
(3)分别为SEQ ID NO：27、28、29、57、58和59；
(4)分别为SEQ ID NO：30、31、32、60、61和62；
(5)分别为SEQ ID NO：33、34、35、63、64和65；
(6)分别为SEQ ID NO：36、37、38、66、67和68；
(7)分别为SEQ ID NO：39、40、41、69、70和71；
(8)分别为SEQ ID NO：42、43、44、72、73和74；
(9)分别为SEQ ID NO：45、46、47、75、76和77；或
(10)分别为SEQ ID NO：48、49、50、78、79和80；
其中其所述抗原结合域特异性结合CLDN18.2，优选人CLDN18.2。
3.如权利要求1所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述抗原结合域包含一重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、一轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，具有以下多肽序列：
(1)分别为SEQ ID NO：81、82、83、111、112和113；
(2)分别为SEQ ID NO：84、85、86、114、115和116；
(3)分别为SEQ ID NO：87、88、89、117、118和119；
(4)分别为SEQ ID NO：90、91、92、120、121和122；
(5)分别为SEQ ID NO：93、94、95、123、124和125；
(6)分别为SEQ ID NO：96、97、98、126、127和128；
(7)分别为SEQ ID NO：99、100、101、129、130和131；
(8)分别为SEQ ID NO：102、103、104、132、133和134；
(9)分别为SEQ ID NO：105、106、107、135、136和137；或
(10)分别为SEQ ID NO：108、109、110、138、139和140；
其中其所述抗原结合域特异性结合CLDN18.2，优选人CLDN18.2。
4.如权利要求1-3中任一项所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述抗原结合域包含一重链可变区，该可变区具有与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、或19至少95％相同的多肽序列，或一轻链可变区，该可变区具有与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、或20至少95％相同的多肽序列。
5.如权利要求1-4中任一项所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述抗原结合域包含：
(1)具有SEQ ID NO：1所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：2所示多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO：3所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：4所示多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO：5所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：6所示多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO：7所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：8所示多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO：9所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：10所示多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO：11所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：12所示多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO：13所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：14所示多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO：15所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：16所示多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO：17所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：18所示多肽序列的轻链可变区；
(10)具有SEQ ID NO：19所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：20所示多肽序列的轻链可变区。
6.如权利要求1-3中任一项所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述抗原结合域是人源化的，且包含一重链可变区，该可变区具有与SEQ ID NO:142、143、146、147、151、152、154、155、156、159、160、161、162、166、167、170、171、172、175、176、177、178、179、180、186、187、191、192、或193至少95％相同的多肽序列，或一轻链可变区，该可变区具有与SEQ IDNO:144、145、148、149、150、153、157、158、163、164、165、168、169、173、174、181、182、183、184、185、188、189、190、194、195、196、或197至少95％相同的多肽序列。
7.如权利要求1-3和6中任一项所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述抗原结合域是人源化的，且包含：
(1)具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
(10)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
(11)具有SEQ ID NO：151所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
(12)具有SEQ ID NO：152所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
(13)具有SEQ ID NO：154所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
(14)具有SEQ ID NO：155所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
(15)具有SEQ ID NO：156所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：158所示多肽序列的轻链可变区；
(16)具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
(17)具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
(18)具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
(19)具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
(20)具有SEQ ID NO：161所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区；或
(21)具有SEQ ID NO：162所示多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区。
8.如权利要求1-7中任一项所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述抗原结合域特异性结合CLDN18.2的单链可变片段(scFv)，优选人CLDN18.2。
9.如权利要求8所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述单链可变片段(scFv)是人源化的，且包含与SEQ ID NO：198-215中任意一条至少95％相同的多肽序列。
10.如权利要求1-9中任一项所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述嵌合抗原受体(CAR)包含一个或多个抗原结合域。
11.如权利要求1-10中任一项所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述胞内信号转导域包含一个或多个共刺激结构域和一个或多个激活结构域。
12.一种嵌合抗原受体(CAR)，其特征在于，所述嵌合抗原受体(CAR)由权利要求1-11中任一项所述的分离的多核苷酸编码。
13.一种载体，其特征在于，所述载体包含权利要求1-11中任一项所述的分离的多核苷酸。
14.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求13所述的载体。
15.如权利要求14所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是T细胞，优选人T细胞。
16.如权利要求14所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是NK细胞，优选人NK细胞。
17.一种制备表达嵌合抗原受体(CAR)的宿主细胞的方法，其特征在于，所述方法包括使用权利要求13所述的载体转导T细胞。
18.一种制备嵌合抗原受体(CAR)-T细胞的方法，其特征在于，所述方法包括在制备CAR-T细胞的条件下培养含有分离的多核苷酸的T细胞并回收CAR-T细胞，所述分离的多核苷酸包含编码如权利要求1-11中任一项所述的嵌合抗原受体(CAR)的核酸。
19.一种制备表达嵌合抗原受体(CAR)的宿主细胞的方法，其特征在于，所述方法包括使用权利要求13所述的载体转导NK细胞。
20.一种制备嵌合抗原受体(CAR)-NK细胞的方法，其特征在于，所述方法包括在制备CAR-NK细胞的条件下培养含有分离的多核苷酸的NK细胞并回收CAR-NK细胞，所述分离的多核苷酸包含编码如权利要求1-11中任一项所述的嵌合抗原受体(CAR)的核酸。
21.一种制备包含嵌合抗原受体(CAR)的细胞的方法，其特征在于，所述方法包括使细胞与包含编码如权利要求1-11中任一项所述的嵌合抗原受体(CAR)的核酸的分离的多核苷酸接触，其中分离的多核苷酸是体外转录的RNA或合成的RNA。
22.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其特征在于，所述方法包括给受试者施用如权利要求14-16中任一项所述的宿主细胞。
23.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述癌症选自肺癌、胃癌、食管癌、胆管癌、胆管癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、转移性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤和其他实体瘤，以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他血液肿瘤。
24.一种治疗有需要的受试者的炎症性疾病的方法，其特征在于，所述方法包括给受试者施用权利要求14-16任一所述的宿主细胞。
25.如权利要求22-24中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括给有需要的受试者施用提高表达CAR的细胞效率的药剂。
26.如权利要求22-24中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括给有需要的受试者施用改善与施用表达CAR分子的细胞相关的一种或多种副作用的药剂。
27.如权利要求22-24中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括给有需要的受试者施用治疗Claudin18.2相关疾病的药剂。
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