BR112020007814A2

BR112020007814A2 - processos para reduzir e/ou prevenir um aumento nos níveis de ácido lático em um sistema de fermentação de biocombustível e para produção de um produto de fermentação a partir de um material contendo amido, e, uso de um polipeptídeo, ou uma composição enzimática

Info

Publication number: BR112020007814A2
Application number: BR112020007814-0A
Authority: BR
Inventors: Armindo Ribeiro Gaspar; Victor Gabriel Guadalupe Medina; Xin Li; Kelly Cristina Leite Mulder; Angela Shows
Original assignee: Novozymes A/S
Priority date: 2017-10-23
Filing date: 2018-10-19
Publication date: 2020-10-20
Also published as: MX2020003981A; US20240035051A1; US11795481B2; CA3075907A1; US20220267811A1; WO2019083831A1; US11326187B2; CN111183228A; US20210189436A1; EP3701037A1

Abstract

A presente invenção se destina a um processo para reduzir e/ou prevenir um aumento nos níveis de ácido lático em um processo de produção de produtos de fermentação, tal como, especialmente, a produção de etanol, em que uma monoxigenase lítica de polissacarídeo (LPMO), ou uma composição enzimática compreendendo LPMO, é adicionada antes ou durante a sacarificação e/ou fermentação, ou antes ou durante a propagação, de modo a reduzir e/ou prevenir um aumento nos níveis de ácido lático.

Description

WO 2012/044915 ou pedido PCT copendente PCT/US11/054185 (ou pedido provisório dos E.U.A.* 61/388,997), tal como uma com as seguintes substituições: FIO0D, S283G, N456E, F512Y.

[00262] Em outra modalidade, a beta-glucosidase é derivada a partir de uma estirpe do gênero Penicillium, tal como uma estirpe de Penicillium brasilianum divulgada no documento WO 2007/019442, ou uma estirpe do gênero Trichoderma, tal como uma estirpe de Trichoderma reesei.

[00263] Em uma modalidade, a beta-glucosidase é uma Dbeta- glucosidase de Aspergillus fumigatus ou homólogo da mesma selecionado a partir do grupo consistindo em: (1) uma beta-glucosidase compreendendo o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 107; (11) uma beta-glucosidase compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, por exemplo, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade de sequências com o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 107 neste documento; (111) uma beta-glucosidase codificada por um polinucleotídeo compreendendo uma sequência de nucleotídeos tendo pelo menos 70%, por exemplo, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade com a sequência codificante do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 5 no documento WO 2013/148993; e (iv) uma beta-glucosidase codificada por um polinucleotídeo que hibrida sob condições de pelo menos elevada estringência, por exemplo, condições de muito elevada estringência, com a sequência codificante do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 5 no documento WO 2013/148993 ou o complemento de comprimento total do mesmo.

[00264] Em uma modalidade, a beta-glucosidase é uma variante compreendendo uma substituição em uma ou mais (várias) posições correspondendo às posições 100, 283, 456 e 512 do polipeptídeo maduro de

SEQ ID NO: 107 neste documento, em que a variante tem atividade de beta- glucosidase.

[00265] Em uma modalidade, a beta-glucosidase progenitora da variante é (a) um polipeptídeo compreendendo o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 107 neste documento; (b) um polipeptídeo tendo pelo menos 80% de identidade de sequências com o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 107 neste documento; (c) um polipeptídeo codificado por um polinucleotídeo que hibrida sob condições de elevada ou muito elevada estringência com (1) a sequência codificante do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 5 no documento WO 2013/148993, (ii) a sequência de cDNA contida na sequência codificante do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 5 no documento WO 2013/148993 ou (iii) a fita complementar de comprimento total de (i) ou (ii); (d) um polipeptídeo codificado por um polinucleotídeo tendo pelo menos 80 % de identidade com a sequência codificante do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 5 no documento WO 2013/148993 ou a sequência de cDNA do mesmo; ou (e) um fragmento do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 107 neste documento, que tem atividade beta-glucosidase.

[00266] Em uma modalidade, a variante de beta-glucosidase tem pelo menos 80%, por exemplo, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, mas menos do que 100%, de identidade de sequências com a sequência de aminoácidos da beta- glucosidase progenitora.

[00267] Em uma modalidade, a variante tem pelo menos 80%, por exemplo, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo

103 / 147 menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, mas menos do que 100%, de identidade de sequências com o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 107 neste documento.

[00268] Em uma modalidade, a beta-glucosidase é a partir de uma estirpe de Aspergillus, tal como uma estirpe de Aspergillus fumigatus, tal como uma beta-glucosidase de Aspergillus fumigatus (SEQ ID NO: 107 neste documento), que compreende uma ou mais substituições selecionadas a partir do grupo consistindo em L89M, G91L, FIO0OD, I140V, I186V, S283G, N456E e F512Y; tal como uma variante da mesma com as seguintes substituições: - FIOOD + S283G + N456E + F512Y; - L89M + G91L + I186V + I140V; - 1186V + L89M + G91L + I140V + FIOOD + S283G + N456E + F512Y.

[00269] Em uma modalidade, o número de substituições é entre 1 e 4, tal como 1,2, 3 ou 4 substituições.

[00270] Em uma modalidade, a variante compreende uma substituição em uma posição correspondendo à posição 100, uma substituição em uma posição correspondendo à posição 283, uma substituição em uma posição correspondendo à posição 456 e/ou uma substituição em uma posição correspondendo à posição 512.

[00271] Em uma modalidade preferida, a variante de beta-glucosidase compreende as seguintes substituições: Phel00Asp, Ser283Gly, Asn456Glu, Phe512Tyr na SEQ ID NO: 107 neste documento.

[00272] Em uma modalidade preferida, a beta-glucosidase tem um valor de carga de ED50 Relativo de menos do que 1,00, preferencialmente menos do que 0,80, tal como preferencialmente menos do que 0,60, tal como entre 0,1-0,9, tal como entre 0,2-0,8, tal como 0,30-0,70.

104 / 147 Polipeptídeo GH61 tendo atividade intensificadora

[00273] A composição celulolítica usada de acordo com a invenção pode em uma modalidade compreender um ou mais polipeptídeos GH61 tendo atividade intensificadora celulolítici Em uma modalidade, a composição enzimática compreende um polipeptídeo GH61 tendo atividade intensificadora celulolítica, tal como um derivado a partir do gênero Thermoascus, tal como uma estirpe de Thermoascus aurantiacus, tal como aquele descrito no documento WO 2005/074656 como SEQ ID NO: 2; ou um derivado a partir do gênero Thielavia, tal como uma estirpe de Thielavia terrestris, tal como aquela descrita no documento WO 2005/074647 como SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8; ou um derivado a partir de uma estirpe de Aspergillus, tal como uma estirpe de Aspergillus fumigatus, tal como aquela descrito no documento WO 2010/138754 como SEQ ID NO: 2; ou um derivado a partir de uma estirpe derivada a partir de Penicillium, tal como uma estirpe de Penicillium emersonii, tal como aquela divulgada no documento WO 2011/041397 como SEQ ID NO: 108 neste documento.

[00274] Em uma modalidade, o polipeptídeo GH61 de Penicillium sp. tendo atividade intensificadora celulolítica ou um homólogo do mesmo é selecionado a partir do grupo consistindo em: (1) um polipeptídeo GH61 tendo atividade intensificadora celulolítica compreendendo o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 108 neste documento; (11) um polipeptídeo GH61 tendo atividade intensificadora celulolítica compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, por exemplo, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade com o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 108 neste documento; (ii) um polipeptídeo GH61 tendo atividade intensificadora celulolítica codificado por um polinucleotídeo compreendendo uma sequência

105/ 147 de nucleotídeos tendo pelo menos 70%, por exemplo, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade com a sequência codificante do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 7 no documento WO 2013/148993; e (iv) um polipeptídeo GH61 tendo atividade intensificadora celulolítica codificado por um polinucleotídeo que hibrida sob condições de pelo menos elevada estringência, por exemplo, condições de muito elevada estringência, com a sequência codificante do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 7 no documento WO 2013/148993 ou o complemento de comprimento total do mesmo. Celobioidrolase I

[00275] A composição celulolítica usada de acordo com a invenção pode em uma modalidade compreender uma ou mais CBH 1 (celobioidrolase D. Em uma modalidade, a composição celulolítica compreende uma celobioidrolase T (CBHD), tal como uma derivada a partir de uma estirpe do gênero Aspergillus, tal como uma estirpe de Aspergillus fumigatus, tal como a CBHI Cel7A divulgada na SEQ ID NO: 6 no documento WO 2011/057140 ou SEQ ID NO: 109 neste documento, ou uma estirpe do gênero Trichoderma, tal como uma estirpe de Trichoderma reesei.

[00276] Em uma modalidade, a celobioidrolase I de Aspergillus Jumigatus ou um homólogo do mesmo é selecionado a partir do grupo consistindo em: (1) uma celobioidrolase I compreendendo o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 109 neste documento; (11) uma celobioidrolase I compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, por exemplo, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade com o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 109 neste documento; (Hi) uma celobioidrolase I codificada por um polinucleotídeo

106 / 147 compreendendo uma sequência de nucleotídeos tendo pelo menos 70%, por exemplo, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade com a sequência codificante do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1 no documento WO 2013/148993; e (iv) uma celobioidrolase I codificada por um polinucleotídeo que hibrida sob condições de pelo menos elevada estringência, por exemplo, condições de muito elevada estringência, com a sequência codificante do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1 no documento WO 2013/148993 ou o complemento de comprimento total do mesmo. Celobioidrolase II

[00277] A composição celulolítica usada de acordo com a invenção pode em uma modalidade compreender uma ou mais CBHII (celobioidrolase ID. Em uma modalidade, a celobioidrolase II (CBHII), tal como uma derivada a partir de uma estirpe do gênero de Aspergillus, tal como uma estirpe de Aspergillus fumigatus, tal como aquela na SEQ ID NO: 110 neste documento ou uma estirpe do gênero Trichoderma, tal como Trichoderma reesei, ou uma estirpe do gênero Thielavia, tal como uma estirpe de Thielavia terrestris, tal como celobioidrolase II CEL6A de Thielavia terrestris.

[00278] Em uma modalidade, a celobioidrolase II de Aspergillus Jumigatus ou um homólogo da mesma é selecionada a partir do grupo consistindo em: (1) uma celobioidrolase II compreendendo o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 110 neste documento; (11) uma celobioidrolase II compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 70%, por exemplo, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade de sequências com o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 110 neste documento; (1ii) uma celobioidrolase II codificada por um polinucleotídeo compreendendo uma sequência de nucleotídeos tendo pelo menos 70%, por

107 /147 exemplo, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade com a sequência codificante do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 3 no documento WO 2013/148993; e (iv) uma celobioidrolase II codificada por um polinucleotídeo que hibrida sob condições de pelo menos elevada estringência, por exemplo, condições de muito elevada estringência, com a sequência codificante do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 3 no documento WO 2013/148993 ou o complemento de comprimento total do mesmo. Composições Celulolíticas

[00279] Conforme mencionado acima, a composição celulolítica pode compreender um número de polipeptídeos diferentes, tais como enzimas.

[00280] Em uma modalidade, a composição celulolítica compreende uma composição celulolítia de Trichoderma reesei, compreendendo adicionalmente o polipeptídeo GH61A de Thermoascus aurantiacus tendo atividade intensificadora celulolítica (WO 2005/074656) e proteína de fusão de beta-glucosidase de Aspergillus oryzae (WO 2008/057637).

[00281] Em outra modalidade, a composição celulolítica compreende uma composição celulolítica de Trichoderma reesei, compreendendo adicionalmente um polipeptídeo GH61A de Thermoascus aurantiacus tendo atividade intensificadora celulolítica (SEQ ID NO: 2 no documento WO 2005/074656) e beta-glucosidase de Aspergillus fumigatus (SEQ ID NO: 2 de WO 2005/047499).

[00282] Em outra modalidade, a composição celulolítica compreende uma composição celulolítica de Trichoderma reesei, compreendendo adicionalmente o polipeptídeo GH61A de Penicillium emersonii tendo atividade intensificadora celulolítica divulgado no documento WO 2011/041397, beta-glucosidase de Aspergillus fumigatus (SEQ ID NO: 2 do documento WO 2005/047499) ou uma variante do mesmo com as seguintes substituições: FIO00D, S283G, N456E, F512Y.

108 / 147

[00283] A composição enzimática da presente invenção pode estar em qualquer forma adequada para uso, tal como, por exemplo, um caldo de fermentação em bruto com ou sem células removidas, um lisado celular com ou sem detritos celulares, uma composição enzimática semipurificada ou purificada ou uma célula hospedeira, por exemplo, célula hospedeira de Trichoderma, tal como uma fonte das enzimas.

[00284] A composição enzimática pode ser um pó ou granulado seco, um granulado sem formação de poeira, um líquido, um líquido estabilizado, ou uma enzima protegida estabilizada. As composições enzimáticas líquidas podem, por exemplo, ser estabilizadas por adição de estabilizantes tais como um açúcar, um álcool de açúcar ou outro poliol e/ou ácido láctico ou outro ácido orgânico de acordo com processos estabelecidos.

[00285] Em uma modalidade preferida, a composição celulolítica compreendendo uma beta-glucosidase tem um valor de carga de EDSO0 Relativo de menos do que 1,00, preferencialmente menos do que 0,80, tal como preferencialmente menos do que 0,60, tal como entre 0,1-0,9, tal como entre 0,2-0,8, tal como 0,30-0,70.

[00286] Em uma modalidade, a composição enzimática celulolítica é doseada (isto é, durante o passo de sacarificação no passo ii) e/ou fermentação no passo iii) ou SSF) de 0,0001-3 mg de EP/g de DS, preferencialmente 0,0005-2 mg de EP/g de DS, preferencialmente 0,001-1 mg/g de DS, mais preferido de 0,005-0,5 mg de EP/g de DS, ainda mais preferido 0,01-0,1 mg de EP/g de DS. Protease Presente e/ou Adicionada Durante a Liquefação

[00287] Em uma modalidade da invenção, uma protease opcional, tal como uma protease termoestável, pode estar presente e/ou ser adicionada em liquefação em conjunto com uma alfa-amilase, tal como uma alfa-amilase termoestável, e uma hemicelulase, preferencialmente xilanase, tendo um ponto de fusão (DSC) acima de 80 ºC e, opcionalmente, uma endoglucanase,

109 / 147 uma enzima geradora de fontes de carboidratos, em particular uma glucoamilase, opcionalmente uma pululanase e/ou opcionalmente uma fitase.

[00288] As proteases são classificadas com base no seu mecanismo catalítico nos seguintes grupos: Serina proteases (S), Cisteína proteases (C), Proteases aspárticas (A), Metaloproteases (M) e Proteases desconhecidas, ou ainda não classificadas (U), ver Handbook of Proteolytic Enzymes, A.J. Barrett, N.D. Rawlings, J.F. Woessner (eds), Academic Press (1998), em particular a parte da introdução geral.

[00289] Em uma modalidade preferida, a protease termoestável usada de acordo com a invenção é uma “metaloprotease” definida como uma protease pertencendo a EC 3.4.24 (metaloendopeptidases); preferencialmente EC 3.4.24.39 (metaloproteinases ácidas).

[00290] De modo a se determinar se uma determinada protease é uma metaloprotease ou não, é feita referência ao “Handbook of Proteolytic Enzymes” acima e aos princípios indicados no mesmo. Tal determinação pode ser levada a cabo para todos os tipos de proteases, sejam proteases de ocorrência natural ou de tipo selvagem; ou proteases geneticamente manipuladas ou sintéticas.

[00291] A atividade de protease pode ser medida usando qualquer ensaio adequado, no qual um substrato é empregue, que inclua ligações de peptídeos relevantes para a especificidade da protease em questão. O pH do ensaio e a temperatura do ensaio devem ser, do mesmo modo, adaptados para a protease em questão. Exemplos de valores de pH do ensaio são pH 6,7,8, 9, 10 ou 11. Exemplos de temperaturas do ensaio são 30, 35, 37, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 ou 80 ºC.

[00292] Exemplos de substratos de proteases são a caseína, tal como a Caseína Reticulada com Azurina (AZCL-caseína). Dois ensaios de protease são descritos em baixo na seção “Materiais & Métodos” do documento WO 2017/112540 (incorporado neste documento por referência), dos quais o denominado “Ensaio de AZCL-Caseína” é o ensaio preferido.

[00293] Em uma modalidade, a protease termoestável tem pelo menos 20%, tal como pelo menos 30%, tal como pelo menos 40%, tal como pelo menos 50%, tal como pelo menos 60%, tal como pelo menos 70%, tal como pelo menos 80%, tal como pelo menos 90%, tal como pelo menos 95%, tal como pelo menos 100%, da atividade de protease da variante JTP196 (Exemplo 2 a partir do documento WO 2017/112540) ou Protease Pfu (SEQ ID NO: 111 neste documento) determinada pelo ensaio de AZCL-caseína descrito na seção “Materiais & Métodos” no documento WO 2017/112540.

[00294] Não existem quaisquer limitações quanto à origem da protease termoestável usada em um processo ou composição da invenção desde que ela cumpra com as propriedades de termoestabilidade definidas a baixo.

[00295] Em uma modalidade, a protease é de origem fúngica.

[00296] Em uma modalidade preferida, a protease termoestável é uma variante de uma metaloprotease conforme definida acima. Em uma modalidade, a protease termoestável usada em um processo ou composição da invenção é de origem fúngica, tal como uma metaloprotease fúngica, tal como uma metaloprotease fúngica derivada a partir de uma estirpe do gênero Thermoascus, preferencialmente uma estirpe de Thermoascus aurantiacus, especialmente Thermoascus aurantiacus CGMCC N.º 0670 (classificada como EC 3.4.24.39).

[00297] Em uma modalidade, a protease termoestável é uma variante da parte madura da metaloprotease mostrada na SEQ ID NO: 2 divulgada no documento WO 2003/048353 ou da parte madura de SEQ ID NO: 1 no documento WO 2010/008841 e mostrada como SEQ ID NO: 112 neste documento adicionalmente com mutações selecionadas a partir da lista abaixo: - SS*+D79L+S87P+A112P+D142L; - D79L+S87P+A112P+T124V+DI142L;

- SS*+N26R+D79L+S87P+A112P+D142L; - N26R+T46R+D79L+S87P+A112P+D142L; - TA6R+D79L+S87P+T116V+DI142L,; - D79L+P81R+S87P+A112P+D142L; - A2TK+D79L+S87P+A112P+T124V+DI142L,; - D79L+Y82F+S87P+A112P+T124V+DI142L; - D79L+Y82F+S87P+A112P+T124V+DI142L; - D79L+S87P+A112P+T124V+A126V+DI142L; - D79L+S87P+A112P+D142L; - D791L+Y82F+S87P+A112P+D142L; - S38T+D79L+S87P+A112P+A126V+DI142L; - D79L+Y82F+S87P+A112P+A126V+D142L; - A27TK+D79L+S87P+A112P+A126V+D142L; - D791L+S87P+N98C+A112P+G135C+D142L; - D791L+S87P+A112P+D142L+T141C+MI161C; - S36P+D79L+S87P+A112P+D142L; - A3TP+D79L+S87P+A112P+D142L; - S49P+D79L+S87P+A112P+D142L; - SSOP+D79L+S87P+A112P+D142L; - D79L+S87P+DI04P+A112P+D142L,; - D791L+Y82F+S87G+A112P+D142L; - STOV+D79L+Y82F+S87G+Y97W+A112P+D142L; - D79L+Y82F+S87G+Y97W+DI104P+A112P+D142L; - STOV+D79L+Y82F+S87G+A112P+D142L; - D791L+Y82F+S87G+D104P+A112P+DI142L; - D79L+Y82F+S87G+A112P+A126V+DI142L; - Y82F+S87G+S70V+D79L+DI104P+A112P+D142L; - Y82F+S87G+D79L+D104P+A112P+A126V+D142L;

A2TK+D79L+Y82F+S87G+D104P+A112P+A126V+D142L; - A27TK+Y82F+S87G+DI1I04P+A112P+A126V+D142L,; - A27TK+D79L+Y82F+ DIO4P+A112P+A126V+D142L; - A27TK+Y82F+DIO4P+A112P+A126V+D142L; - A27TK+D79L+S87P+A112P+D142L; - D79L+S87P+D142L.

[00298] Em uma modalidade preferida, a protease termoestável é uma variante da metaloprotease divulgada como a parte madura de SEQ ID NO: 2 divulgada no documento WO 2003/048353 ou a parte madura de SEQ ID NO: 1 no documento WO 2010/008841 ou SEQ ID NO: 112 neste documento com as seguintes mutações: D79L+S87P+A112P+D142L; D79L+S87P+D142L; ou A2TK+ D79L+ Y82F+S87G+DI1I04P+A112P+A126V+DI142L.

[00299] Em uma modalidade, a variante de protease tem pelo menos 75% de identidade, preferencialmente pelo menos 80%, mais preferencialmente pelo menos 85%, mais preferencialmente pelo menos 90%, mais preferencialmente pelo menos 91%, mais preferencialmente pelo menos 92%, ainda mais preferencialmente pelo menos 93%, o mais preferencialmente pelo menos 94% e, ainda o mais preferencialmente, pelo menos 95%, tal como mesmo pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, mas menos do que 100%, de identidade com a parte madura do polipeptídeo de SEQ ID NO: 2 divulgada no documento WO 2003/048353 ou a parte madura de SEQ ID NO: 1 no documento WO 2010/008841 ou SEQ ID NO: 112 neste documento.

[00300] A protease termoestável pode ser também derivada a partir de qualquer bactéria desde que a protease tenha as propriedades de termoestabilidade definidas de acordo com a invenção.

[00301] Em uma modalidade, a protease termoestável é derivada a partir de uma estirpe da bactéria Pyrococcus, tal como uma estirpe de Pyrococcus furiosus (protease pfu).

[00302] Em uma modalidade, a protease é uma mostrada como SEQ ID NO: 1 na patente dos E.U.A. No 6,358,726-B1 (Takara Shuzo Company) e SEQ ID NO: 111 neste documento.

[00303] Em uma modalidade, a protease termoestável é uma divulgada na SEQ ID NO: 111 neste documento ou uma protease tendo pelo menos 80% de identidade, tal como pelo menos 85%, tal como pelo menos 90%, tal como pelo menos 95%, tal como pelo menos 96%, tal como pelo menos 97%, tal como pelo menos 98%, tal como pelo menos 99% de identidade com SEQ ID NO: 1 na patente dos E.U.A. no. 6,358,726-B1 ou SEQ ID NO: 111 neste documento. A protease de Pyrococcus furiosus pode ser adquirida a partir da Takara Bio, Japão.

[00304] A protease de Pyrococcus furiosus é uma protease termoestável de acordo com a invenção. Foi descoberto que o produto comercial protease de Pyrococcus furiosus (Pfu S) (ver Exemplo 5) tinha uma termoestabilidade de 110% (80 ºC/70 ºC) e 103% (90 ºC/70 ºC) a pH 4,5 determinada conforme descrito no Exemplo 2 do documento WO 2017/112540.

[00305] Em uma modalidade, uma protease termoestável tem um valor de termoestabilidade de mais do que 20% determinada como Atividade Relativa a 80 ºC/70 ºC determinada conforme descrito no Exemplo 2.

[00306] Em uma modalidade, a protease tem uma termoestabilidade de mais do que 30%, mais do que 40%, mais do que 50%, mais do que 60%, mais do que 70%, mais do que 80%, mais do que 90%, mais do que 100%, tal como mais do que 105%, tal como mais do que 110%, tal como mais do que 115%, tal como mais do que 120% determinada como Atividade Relativa a 80 ºC/TOC.

[00307] Em uma modalidade, a protease tem uma termoestabilidade de entre 20 e 50%, tal como entre 20 e 40%, tal como 20 e 30% determinada como Atividade Relativa a 80 ºC/70 ºC.

[00308] Em uma modalidade, a protease tem uma termoestabilidade entre 50 e 115%, tal como entre 50 e 70%, tal como entre 50 e 60%, tal como entre 100 e 120%, tal como entre 105 e 115% determinada como Atividade Relativa a 80 ºC/70 ºC.

[00309] Em uma modalidade, a protease tem um valor de termoestabilidade de mais do que 10% determinada como Atividade Relativa a 85 ºC/70 ºC determinada conforme descrito no Exemplo 2 do documento WO 2017/112540.

[00310] Em uma modalidade, a protease tem uma termoestabilidade de mais do que 10%, tal como mais do que 12%, mais do que 14%, mais do que 16%, mais do que 18%, mais do que 20%, mais do que 30%, mais do que 40%, mais do que 50%, mais do que 60%, mais do que 70%, mais do que 80%, mais do que 90%, mais do que 100%, mais do que 110% determinada como Atividade Relativa a 85 ºC/70 ºC.

[00311] Em uma modalidade, a protease tem uma termoestabilidade de entre 10 e 50%, tal como entre 10 e 30%, tal como entre 10 e 25% determinada como Atividade Relativa a 85 ºC/70 ºC.

[00312] Em uma modalidade, a protease tem mais do que 20%, mais do que 30%, mais do que 40%, mais do que 50%, mais do que 60%, mais do que 70%, mais do que 80%, mais do que 90% determinada como Atividade Relativa a 80 ºC; e/ou

[00313] Em uma modalidade, a protease tem mais do que 20%, mais do que 30%, mais do que 40%, mais do que 50%, mais do que 60%, mais do que 70%, mais do que 80%, mais do que 90% determinada como Atividade Relativa a 84 ºC.

[00314] A determinação da “Atividade Relativa” e “Atividade

Restante” é feita conforme descrito no Exemplo 2 do documento WO 2017/112540.

[00315] Em uma modalidade, a protease pode ter uma termoestabilidade para acima de 90, tal como acima de 100 a 85 ºC conforme determinada usando o teste de Zeína-BCA conforme divulgado no Exemplo 3 do documento WO 2017/112540.

[00316] Em uma modalidade, a protease tem uma termoestabilidade acima de 60%, tal como acima de 90%, tal como acima de 100%, tal como acima de 110% a 85 ºC conforme determinada usando o ensaio de Zeína- BCA.

[00317] Em uma modalidade, a protease tem uma termoestabilidade entre 60-120, tal como entre 70-120%, tal como entre 80-120%, tal como entre 90-120%, tal como entre 100-120%, tal como 110-120% a 85 ºC conforme determinada usando o ensaio de Zeína-BCA.

[00318] Em uma modalidade, a protease termoestável tem pelo menos 20%, tal como pelo menos 30%, tal como pelo menos 40%, tal como pelo menos 50%, tal como pelo menos 60%, tal como pelo menos 70%, tal como pelo menos 80%, tal como pelo menos 90%, tal como pelo menos 95%, tal como pelo menos 100% da atividade da variante de protease JTP196 ou Protease Pfu determinada pelo ensaio de AZCL-caseína descrito na seção “Materiais & Métodos” do documento WO 2017/112540. V. Aspectos Adicionais da Invenção

[00319] Em um aspecto adicional da invenção, essa se destina ao uso de um polipeptídeo LPMO ou composição enzimática compreendendo pelo menos um polipeptídeo LPMO de modo a reduzir e/ou eliminar a contaminação bacteriana em um sistema de fermentação de biocombustível.

[00320] Em um aspecto adicional da invenção, essa se destina ao uso de um polipeptídeo LPMO ou composição enzimática compreendendo pelo menos um polipeptídeco LPMO de modo a reduzir e/ou eliminar a contaminação bacteriana durante a propagação da levedura.

[00321] Em um aspecto adicional da invenção, essa se destina ao uso de um polipeptídeo LPMO ou composição enzimática compreendendo pelo menos um polipeptídeco LPMO de modo a reduzir e/ou eliminar a contaminação bacteriana em um meio de fermentação.

[00322] Em um aspecto adicional da invenção, essa se destina ao uso de um polipeptídeo LPMO ou composição enzimática compreendendo pelo menos um polipeptídeo LPMO de modo a reduzir os níveis de ácido lático em um sistema de fermentação de biocombustível.

[00323] Em um aspecto adicional da invenção, essa se destina ao uso de um polipeptídeo LPMO ou composição enzimática compreendendo pelo menos um polipeptídeo LPMO de modo a reduzir os níveis de ácido lático em um meio de fermentação.

[00324] Em um aspecto adicional da invenção, essa se destina ao uso de um polipeptídeo LPMO ou composição enzimática compreendendo pelo menos um polipeptídeo LPMO de modo a reduzir os níveis de ácido lático durante a propagação da levedura.

[00325] Os peritos na técnica apreciarão que os aspectos e modalidades descritas na presente secção são aplicáveis a qualquer LPMO, por exemplo, os LPMOSs descritos na secção III no presente documento.

[00326] Em uma modalidade, o polipeptídeo LPMO é selecionado a partir do grupo consistindo em Atividade Auxiliar 9 (AA9), Atividade Auxiliar 10 (AAIO), Atividade Auxiliar 11 (AAILI), Atividade Auxiliar 13 (AA1I3), e combinações das mesmas.

[00327] O polipeptídeo LPMO pode ser um polipeptídeo LPMO fúngico, bacteriano ou arqueobacteriano. Em uma modalidade, o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AAS9 fúngico. Em uma modalidade, o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AAS9 bacteriano. Em uma modalidade, o LPMO é um polipeptídeo AAS9 arqueobacteriano.

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[00328] Em uma modalidade, o polipeptídeco LPMO é um AA9 selecionado da partir do grupo consistindo em: 1) o AA9 Ta mostrado na SEQ ID NO: 1 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iv) o AA9 Pe mostrado na SEQ ID NO: 2 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iii) o AA9 Tt mostrado na SEQ ID NO: 3 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iv) o AA9 Af mostrado na SEQ ID NO: 4 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; v) o AA9 Tc mostrado na SEQ ID NO: 5 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; e vi) o AA9 VL mostrado na SEQ ID NO: 6 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este.

[00329] Em uma modalidade, o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AAIO fúngico. Em uma modalidade, o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AAIO bacteriano. Em uma modalidade, o LPMO é um polipeptídeo AA10 arqueobacteriano.

[00330] Em uma modalidade, o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AAI1 fúngico. Em uma modalidade, o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AAI] bacteriano. Em uma modalidade, o LPMO é um polipeptídeo AA11 arqueobacteriano.

[00331] Em uma modalidade, o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AA1I3 fúngico. Em uma modalidade, o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AAI3 bacteriano. Em uma modalidade, o LPMO é um polipeptídeo AA13 arqueobacteriano.

[00332] Em uma modalidade, o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AAI3 selecionado a partir do grupo consistindo: 1) no polipeptídeo AA13 de Aspergillus terreus de SEQ ID NO: 119 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; ii) o polipeptídeo AA13 de Aspergillus lentulus de SEQ ID NO: 120 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iii) o polipeptídeo de Aspergillus nidulans de SEQ ID NO: 123 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos

95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iv) o polipeptídeo de Penicillium polonicum de SEQ ID NO: 124 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; v) o polipeptídeo de Penicillium oxalicum de SEQ ID NO: 125 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; e iv) O polipeptídeo de Mycothermus thermophiles de SEQ ID NO: 127 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este.

[00333] A invenção é adicionalmente resumida pelos seguintes parágrafos:

1. Processo para reduzir e/ou prevenir um aumento nos níveis de ácido lático em um sistema de fermentação de biocombustível, o processo compreendendo a introdução de um polipeptídeo LPMO ou uma composição enzimática compreendendo um polipeptídeo monoxigenase lítica de polissacarídeo (LPMO) a um sistema de fermentação de biocombustível, em que o sistema de fermentação compreende um ou mais vasos, tubos e/ou componentes de fermentação, e em que o polipeptídeo LPMO ou composição enzimática compreendendo o polipeptídeo LPMO é adicionado a uma concentração suficiente para reduzir e/ou prevenir um aumento nos níveis de ácido lático no sistema de fermentação de biocombustível.

[00334] 2. Processo para reduzir e/ou eliminar a contaminação

120/ 147 bacteriana em um sistema de fermentação de biocombustível, o processo compreendendo a introdução de um polipeptídeo LPMO ou uma composição enzimática compreendendo uma monoxigenase lítica de polissacarídeo (LPMO) a um sistema de fermentação de biocombustível, em que o sistema de fermentação compreende um ou mais vasos, tubos e/ou componentes de fermentação, e em que o polipeptídeo LPMO ou composição enzimática compreendendo o polipeptídeo LPMO é adicionado a uma concentração suficiente para inibir o crescimento da contaminação bacteriana no sistema de fermentação de biocombustível.

[00335] 3. Processo do parágrafo 2, em que as células bacterianas são células bacterianas gram-positivas ou células bacterianas gram-negativas.

[00336] 4. Processo de qualquer um dos parágrafos 1 a 3, em que as células bacterianas são células de Lactobacillus.

[00337] 5. Processo de qualquer um dos parágrafos 1 a 4, em que pelo menos um dos vasos de fermentação é um tanque de fermentação e o polipeptídeo LPMO, ou a composição enzimática, é introduzido(a) no tanque de fermentação.

[00338] 6. Processo de qualquer um dos parágrafos 1 a 5, em que pelo menos um dos vasos de fermentação é um tanque de fermentação e o polipeptídeo LPMO, ou a composição enzimática, é introduzido(a) no tanque de fermentação.

[00339] 7. Processo de qualquer um dos parágrafos 1 a 6, em que pelo menos um dos vasos de fermentação é um tanque de propagação de levedura e o polipeptídeo LPMO, ou a composição enzimática, é introduzido(a) no tanque de propagação de levedura.

[00340] 8. Processo de qualquer um dos parágrafos | a 7, em que o biocombustível é etanol.

[00341] 9. Processo de qualquer um dos parágrafos 1 a 8, em que o polipeptídeo LPMO é selecionado a partir do grupo consistindo em um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 9 (AA9), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 10 (AAIO), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 11 (AAI1), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 13 (AA1l3), e combinações das mesmas.

[00342] 10. Processo de qualquer um dos parágrafos 1 a 9, em que o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AAS9 selecionado a partir do grupo consistindo em: i) o polipeptídeo AA9 de Thermoascus aurantiacus de SEQ ID NO: 1 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; à) o polipeptídeo AA9 de Penicillium emersonii de SEQ ID NO: 2 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iii) o polipeptídeo AA9 de Thielavia terrestris de SEQ ID NO: 3 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iv) o polipeptídeo AA9 de Aspergillus fumigatus de SEQ ID NO: 4 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; v) o polipeptídeo AA9 de Thermoascus crustaceus de SEQ ID NO: 5 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; e vi) o polipeptídeo de Penicillium emersonii de SEQ ID NO: 6 expresso em antecedentes de Trichoderma reesei, ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências de com este.

[00343] 11. Processo de qualquer um dos parágrafos 1 a 10, em que o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AA13 selecionado a partir do grupo consistindo em: i) o polipeptídeo AA13 de Aspergillus terreus de SEQ ID NO: 119 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; à) o polipeptídeo AAI3 de Aspergillus lentulus de SEQ ID NO: 120 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iii) o polipeptídeo de Aspergillus nidulans de SEQ ID NO: 123 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iv) o polipeptídeo de Penicillium polonicum de SEQ ID NO: 124 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos

90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

v) o polipeptídeo de Penicillium oxalicum de SEQ ID NO: 125 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

vi) o polipeptídeo de Mycothermus thermophiles de SEQ ID NO: 127 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

v) o polipeptídeo XZ1982 de Acremonium sp. de SEQ ID NO: 128 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

vi) o polipeptídeo de Aspergillus insuetus de SEQ ID NO: 130 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

vii) o polipeptídeo de Cladosporium gossypiicola de SEQ ID NO: 131 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

vii) o polipeptídeo de Fusarium sp-75363 de SEQ ID NO: 132 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo

124 / 147 menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

1x) o polipeptídeo de Myrothecium sp. de SEQ ID NO: 133 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

x) o polipeptídeo de Paraphoma sp. de SEQ ID NO: 134 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xi) o polipeptídeo de Penicillium antarcticum de SEQ ID NO: 135 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xii) o polipeptídeo de Penicillium concentricum de SEQ ID NO: 136 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

Xiii) o polipeptídeo de Penicillium roseopurpureum de SEQ ID NO: 139 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xiv) o polipeptídeo de Penicillium sclerotiorum de SEQ ID

NO: 141 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xv) o polipeptídeo de Penicillium sp-52627 de SEQ ID NO: 142 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xvi) o polipeptídeo de Penicillium sp-72443 de SEQ ID NO: 144 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xvii) o polipeptídeo de Penicillium steckii de SEQ ID NO: 145 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

Xviii) o polipeptídeo de Penicillium vulpinum de SEQ ID NO: 147 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xix) o polipeptídeo de Pestalotiopsis sp-711627 de SEQ ID NO: 148 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

126 / 147 xx) o polipeptídeo de Setophaeosphaeria sp. NNOS1506 de SEQ ID NO: 149 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; Xxi) o polipeptídeo de Talaromyces sayulitensis de SEQ ID NO: 150 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; xxii) o polipeptídeo de Trichocladium asperum de SEQ ID NO: 151 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este.

[00344] 12. Processo para produção de um produto de fermentação a partir de um material contendo amido, o processo compreendendo: a) liquefação de material contendo amido na presença de uma alfa-amilase para formar um mosto liquefeito; b) sacarificação do mosto liquefeito usando uma enzima geradora de fontes de carboidratos para produzir um açúcar fermentável; c) fermentação do açúcar usando um organismo fermentador sob condições adequadas para produzir o produto de fermentação, em que pelo menos um polipeptídeco LPMO ou uma composição enzimática compreendendo um polipeptídeo LPMO é adicionada antes ou durante o passo de sacarificação b) e/ou o passo de fermentação c).

[00345] 13. O processo do parágrafo 12, em que os passo b) e c) são levados a cabo simultaneamente.

[00346] 14. O processo do parágrafo 12 ou 13, em que uma pasta

127 /147 semifluida do material contendo amido é aquecida até acima da temperatura de gelatinização.

[00347] 15. Processo de qualquer um dos parágrafos 12 a 14, em que o pelo menos um polipeptídeo LPMO ou composição enzimática é adicionado durante a liquefação.

[00348] 16. Processo de qualquer um dos parágrafos 12 a 15, em que o pelo menos um polipeptídeo LPMO ou composição enzimática é adicionado antes ou durante a sacarificação.

[00349] 17. Processo de qualquer um dos parágrafos 12 a 16, em que o pelo menos um polipeptídeo LPMO ou composição enzimática é adicionado antes ou durante a fermentação.

[00350] 18. Processo de qualquer um dos parágrafos 12 a 17, em que o organismo de fermentação é levedura e o pelo menos um polipeptídeo LPMO ou composição enzimática é adicionado antes ou durante a propagação da levedura.

[00351] 19. Processo de qualquer um dos parágrafos 12 a 18, em que o produto de fermentação é um álcool, preferencialmente etanol.

[00352] 20. Processo de qualquer um dos parágrafos 12 a 19, em que as células bacterianas são células bacterianas gram-positivas ou células bacterianas gram-negativas.

[00353] 21. Processo de qualquer um dos parágrafos 12 a 20, em que as células bacterianas são células de Lactobacillus.

[00354] 22. Processo de qualquer um dos parágrafos 12 a 21, em que o polipeptídeo LPMO é selecionado a partir do grupo consistindo em um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 9 (AA9), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 10 (AAIO), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 11 (AAI1), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 13 (AA13), e combinações das mesmas.

[00355] 23. Processo de qualquer um dos parágrafos 12 a 22, em que o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AAS9 selecionado a partir do grupo

128 /147 consistindo em:

1) o polipeptídeo AA9 de Thermoascus aurantiacus de SEQ ID NO: 1 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

it) o polipeptídeo AA9 de Penicillium emersonii de SEQ ID NO: 2 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

iii) o polipeptídeo AAS9 de Thielavia terrestris de SEQ ID NO: 3 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

iv) o polipeptídeo AA9 de Aspergillus fumigatus de SEQ ID NO: 4 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

v) o polipeptídeo AA9 de Thermoascus crustaceus de SEQ ID NO: 5 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; e vi) o polipeptídeo de Penicillium emersonii de SEQ ID NO: 6 expresso em antecedentes de Trichoderma reesei, ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%,

129 / 147 pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências de com este.

[00356] 24. Processo de qualquer um dos parágrafos 12 a 23, em que o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AA13 selecionado a partir do grupo consistindo em: i) o polipeptídeo AA13 de Aspergillus terreus de SEQ ID NO: 119 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; i) o polipeptídeo AAI3 de Aspergillus lentulus de SEQ ID NO: 120 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iii) o polipeptídeo de Aspergillus nidulans de SEQ ID NO: 123 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iv) o polipeptídeo de Penicillium polonicum de SEQ ID NO: 124 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; v) o polipeptídeo de Penicillium oxalicum de SEQ ID NO: 125 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos

130/ 147 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

viii) o polipeptídeo de Fusarium sp-75363 de SEQ ID NO: 132 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

ix) o polipeptídeo de Myrothecium sp. de SEQ ID NO: 133 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos

70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xiv) o polipeptídeo de Penicillium sclerotiorum de SEQ ID NO: 141 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xv) o polipeptídeo de Penicillium sp-52627 de SEQ ID NO:

142 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

Xix) o polipeptídeo de Pestalotiopsis sp-71627 de SEQ ID NO: 148 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xx) o polipeptídeo de Setophaeosphaeria sp.

NNOS1506 de SEQ ID NO: 149 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xxi) o polipeptídeo de Talaromyces sayulitensis de SEQ ID NO: 150 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; XXxii) o polipeptídeo de Trichocladium asperum de SEQ ID NO: 151 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este.

[00357] 25. Uso de um polipeptídeco LPMO ou composição enzimática compreendendo um polipeptídeo LPMO de modo a reduzir e/ou eliminar a contaminação bacteriana em um sistema de fermentação de biocombustível.

[00358] 26. Uso de um polipeptídico LPMO ou composição enzimática compreendendo um polipeptídeo LPMO de modo a reduzir e/ou eliminar a contaminação bacteriana durante a propagação da levedura.

[00359] 27. Uso de um polipeptíideo LPMO ou composição enzimática compreendendo um polipeptídeo LPMO de modo a reduzir os níveis de ácido lático durante a fermentação em um processo de produção de etanol.

[00360] 28. Uso de um polipeptíideo LPMO ou composição enzimática compreendendo um polipeptídeo LPMO de modo a reduzir os níveis de ácido lático durante a propagação da levedura.

[00361] 29. Uso de acordo com qualquer um dos parágrafos 25 a 28, em que o polipeptídeo LPMO é selecionado a partir do grupo consistindo em um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 9 (AA9), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 10 (AA1IO), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 11 (AAI1), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 13 (AAl3), e combinações das mesmas.

[00362] 30. Uso de acordo com qualquer um dos parágrafos 25 a 29, em que o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AAS9 selecionado a partir do grupo consistindo em: 1) o polipeptídeo AA9 de Thermoascus aurantiacus de SEQ ID NO: 1 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; ii) o polipeptídeo AA9 de Penicillium emersonii de SEQ ID NO: 2 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; ili) o polipeptídeo AA9 de Thielavia terrestris de SEQ ID NO: 3 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; 1v) o polipeptídeo AA9 de Aspergillus fumigatus de SEQ ID NO: 4 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; v) o polipeptídeo AA9 de Thermoascus crustaceus de SEQ ID NO: 5 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; e vi) o polipeptídeo de Penicillium emersonii de SEQ ID NO: 6 expresso em antecedentes de Trichoderma reesei, ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências de com este.

[00363] 31. Uso de acordo com qualquer um dos parágrafos 25 a 30, em que o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AA13 selecionado a partir do grupo consistindo em: i) o polipeptídeo AA13 de Aspergillus terreus de SEQ ID NO: 119 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; ii) o polipeptídeo AA1I3 de Aspergillus lentulus de SEQ ID NO: 120 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; 111) o polipeptídeo de Aspergillus nidulans de SEQ ID NO: 123 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iv) o polipeptídeo de Penicillium polonicum de SEQ ID NO: 124 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

136 / 147 v) o polipeptídeo de Penicillium oxalicum de SEQ ID NO: 125 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

vili) o polipeptídeo de Fusarium sp-75363 de SEQ ID NO: 132 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%

137 /147 ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

ix) o polipeptídeo de Myrothecium sp. de SEQ ID NO: 133 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xvil1) o polipeptídeo de Penicillium vulpinum de SEQ ID NO: 147 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xx) o polipeptídeo de Setophaeosphaeria sp.

NNOS1506 de SEQ ID NO: 149 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo

139 / 147 menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; XXxi) o polipeptídeo de Talaromyces sayulitensis de SEQ ID NO: 150 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; xxii) o polipeptídeo de Trichocladium asperum de SEQ ID NO: 151 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este.

[00364] A invenção descrita e reivindicada neste documento não é para estar limitada no escopo pelas modalidades específicas divulgadas neste documento, uma vez que essas modalidades se destinam como ilustrações dos vários aspectos da invenção. Quaisquer modalidades equivalentes se destinam a estar dentro do escopo desta invenção. De fato, várias modificações da invenção adicionalmente àquelas mostradas e descritas neste documento se tornarão aparentes aos peritos na técnica a partir da descrição anterior. Tais modificações se destinam também a estar dentro do escopo das reivindicações anexas. Em caso de conflito, a presente divulgação, incluindo definições prevalecerá. Diversas referências são citadas no presente documento, cujas divulgações são incorporadas a título de referência em suas totalidades. À presente invenção é adicionalmente descrita pelos seguintes exemplos que não devem ser interpretados como limitando o escopo da invenção. Materiais & Métodos

[00365] AA9 Ta: polipeptídeo AA9 a partir de Thermoascus aurantiacus tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.

140 / 147

[00366] AAS9 Pe: polipeptídeo AAS9 a partir de Penicillium emersonii tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.

[00367] AAS9 Tt: polipeptídeo AA9 a partir de Thielavia terrestris tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3.

[00368] AAS9 Af: polipeptídeo AAS9 a partir de Aspergillus fumigatus tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4.

[00369] AA9 Tc: polipeptídeo AA9 a partir de Thermoascus crustaceus tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 5.

[00370] VL-AAS: polipeptídeo AAS9 a partir de Penicillium emersonii expresso em antecedentesTrichoderma reesei tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 6.

[00371] At-AAI3: polipeptídeo AAI3 a partir de Aspergillus terreus tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: SEQ ID NO: 119.

[00372] AI-AAI3: polipeptídeo AAI3 a partir de Aspergillus lentulus tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: SEQ ID NO: 120.

[00373] An-AA 13: polipeptídeo AA 13 a partir de Aspergillus nidulans tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 123.

[00374] Pp-AAlI3: polipeptídeo AAI3 a partir de Penicillium polonicum tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 124.

[00375] Po-AA 13: polipeptídeo AA13 a partir de Penicillium oxalicum tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 125.

[00376] Mt-AAI3: polipeptídeo AAI3 a partir de Mycothermus thermophiles tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 127.

[00377] Alfa-Amilase 369 (AA369): Alfa-amilase de Bacillus stearothermophilus com as mutações: 1181* + G182* + NI93F + V59A + Q89R + E129V + K177L + R179E + Q254S + M284V (SEQ ID NO: 95 neste documento) truncada até 491 aminoácidos.

[00378] Glucoamilase SA (GSA): Combinação compreendendo glucoamilase de Talaromyces emersonii divulgada como SEQ ID NO: 34 no documento WOS99/28448, glucoamilase de Trametes cingulata divulgada como SEQ ID NO: 2 no documento WO 06/69289 e alfa-amilase de Rhizomucor pusillus com ligante de glucoamilase e domínio de ligação ao amido (SBD) de Aspergillus niger, divulgada na SEQ ID NO: 113 neste documento tendo as seguintes substituições G128D + DI43N (a proporção de atividades de AGU: AGU:FAU-F é cerca de 20:5:1).

[00379] Protease Pfu: Protease derivada a partir de Pyrococcus Juriosus mostrada na SEQ ID NO: 111 neste documento.

EXEMPLOS Exemplo 1 - Avaliação da LPMO como biossolução de controle microbiano na fermentação de biocombustíveis

[00380] Esse exemplo demonstra que as LPMOs podem ser usadas de forma a reduzir os níveis de contaminação bacteriana durante a fermentação de etanol conforme evidenciado pela redução dos níveis de um produto metabólico das bactérias presentes no mosto de milho infectado. Em particular, esse exemplo demonstra que as LPMOSs, tais como polipeptídeos AAS9, podem reduzir o impacto da contaminação bacteriana em mosto de milho durante a fermentação de etanol, tal como evidenciado por uma redução nos níveis de formação de ácido láctico no mosto de fermentação.

[00381] Mosto de milho limpo: O mosto de milho foi preparado nos nossos laboratórios sob condições típicas de liquefação usando uma mistura de AA369 e Protease Pfu. Foi verificado que a infecção era indetectável por meio de revestimento em meio seletivo. O substrato é congelado e descongelado antes do uso.

[00382] Mosto de milho infectado: O mosto de milho relevante para o setor industrial comercial com um grau desconhecido de infecção (identificado pela formação de ácido lático e contagem inicial de células em torno de 10” células/mL) foi incubado durante a noite e usado como a fonte de contaminação.

[00383] Controle: Mosto de milho limpo mais 1% de mosto de milho infectado foi utilizado em sólidos secos a 36% e misturado com ureia, até uma concentração final de 400 ppm, e glucoamilase comercial GSA, a 0,6 AGU por g de sólidos secos em fermentação. A mistura foi incubada durante 60 minutos a 32 ºC. Depois disso, a levedura foi adicionada tendo como objetivo um resultado de 0,5 g/L na fermentação. Seis repetições de fermentações foram realizadas ao longo de 3 dias.

[00384] Controlo com antibiótico comercial: Mosto de milho limpo mais 1% de mosto de milho infectado foi utilizado em sólidos secos a 36% e misturado com ureia, até uma concentração final de 400 ppm, glucoamilase comercial GSA, a 0,6 AGU por g de sólidos secos em fermentação, e penicilina a 2, 6 ou 12 ppm por sólidos secos. A mistura foi incubada durante 60 minutos a 32 ºC. Depois disso, a levedura foi adicionada tendo como objetivo um resultado de 0,5 g/L na fermentação. As fermentações foram realizadas em triplicado ao longo de 3 dias.

[00385] Mosto de milho limpo mais 1% de mosto de milho infectado foi utilizado em sólidos secos a 36% e misturado com ureia, até uma concentração final de 400 ppm, glucoamilase comercial GSA, a 0,6 AGU por g de sólidos secos em fermentação, e os polipeptídeos AAS9 listados na secção Materiais & Métodos acima, a 5, 25 ou 125 ppm de proteína por sólidos secos. A mistura foi incubada durante 60 minutos a 32 ºC. Depois disso, a levedura foi adicionada tendo como objetivo um resultado de 0,5 g/L na fermentação. As fermentações foram realizadas em triplicado ao longo de 3 dias.

[00386] A FIG. 2 mostra concentrações de ácido lático após a fermentação do mosto de milho na presença de vários polipeptídeos AAS9 e controle (Controle, Controle com antibiótico comercial). Conforme mostrado na FIG. 2, cada um dos polipeptídeos AAS9 testados reduziu a formação de ácido lático até uma maior extensão do que no controle (sem utilização de

143 /147 antibiótico) e comparável com o controle positivo em que a maior dosagem de penicilina foi usada. Esses dados demonstram que as LPMOSs, tais como polipeptídeos AAS9, são eficazes na redução dos níveis de formação de ácido láctico em um mosto infectado durante a fermentação de etanol. A FIG. 3 mostra concentrações de etanol após a fermentação do mosto de milho na presença de vários polipeptídeos AAS9 e controle (Controle, Controle com antibiótico comercial). Conforme mostrado na FIG. 3, os polipeptídeos AA9 testados melhoraram a formação de etanol até uma maior extensão do que no controle (sem utilização de antibiótico) e comparável com o controle positivo em que a maior dosagem de penicilina foi usada. Esses dados demonstram que as LPMOSs, tais como polipeptídeos AAS9, são eficazes na melhoria dos níveis de formação de etanol em um mosto infectado durante a fermentação de etanol.

[00387] As LPMOs da presente divulgação podem ser utilizadas durante a fermentação de etanol de forma a reduzir o impacto da contaminação bacteriana de linha de base, bem como eventos de infecções causados por bactérias produtoras de ácido láctico e de ácido acético, alinhados com melhoramentos na produção de etanol, em sistemas de fermentação de biocombustíveis. Exemplo 2 - Avaliação da LPMO como biossolução de controle microbiano na fermentação de biocombustíveis

[00388] Esse exemplo demonstra que as LPMOs podem ser usadas de forma a reduzir o impacto da contaminação bacteriana durante a fermentação de etanol conforme evidenciado pela redução dos níveis de um produto metabólico das bactérias presentes no mosto de milho infectado. Em particular, esse exemplo demonstra que LPMOSs, tais como polipeptídeos AA1I3, podem reduzir o ácido láctico produzido a partir de células bacterianas indesejadas presentes durante a fermentação de etanol.

[00389] Mosto de milho limpo liquefeito: O mosto de milho limpo foi

144 / 147 preparado nos nossos laboratórios sob condições típicas de liquefação usando uma mistura de AA369 e Protease Pfu. Foi verificado que a taxa infecção era indetectável por meio de revestimento em meio seletivo. O substrato é armazenado congelado e descongelado antes do uso.

[00390] Mosto de milho infectado liquefeito: O mosto de milho limpo foi inoculado com uma população bacteriana mista previamente isolada a partir de um mosto de milho comercial infectado. O mosto infectado foi incubado com o inoculante durante até 24 horas a aproximadamente 32 ºC. Se verificou-se que a taxa de infecção final é superior a 10º unidades formadoras de colônias (UFC) por revestimento em meio seletivo MRS. O substrato é congelado em solução de glicerol a 20% e depois descongelado antes do uso.

[00391] Mosto liquefeito infectado a 1%: Por cada 100 g de mosto “limpo”, é adicionado 1 g de mosto infectado e misturado homogeneamente. Procedimentos de Fermentação

[00392] Fermentação com Baixo Teor de Sólidos Secos. O Mosto Infectado a 1% foi diluído até 20% de sólidos secos. 200 ppm de ureia alvo foram adicionados como uma fonte de nitrogênio exógeno à levedura. Glucoamilase comercial GSA, foi usada a uma dose de 0,6 AGU/g de sólidos secos. A levedura foi lançada a uma taxa de 0,25 g/L. As enzimas experimentais foram doseadas entre 2 ppm e 100 ppm. A dosagem foi contra sólidos secos.

[00393] Controle positivo: Penicilina foi usada a 25 ppm.

[00394] Controle negativo: Não foi adicionado tratamento.

[00395] Levedura, enzimas e qualquer água da torneira adicional foram adicionados aproximadamente ao mesmo tempo para iniciar a fermentação. As fermentações foram incubadas em banho-maria estático a 32 ºC ao longo de até 24 horas. Todos os tratamentos foram realizados em triplicado. Análise HPLC

[00396] As fermentações foram amostradas em vários momentos de

145 /147 forma a examinar os carboidratos solúveis e os ácidos orgânicos. As amostras foram primeiro centrifugadas a aproximadamente 3 krpm ao longo de até 5 minutos. O sobrenadante foi então filtrado através de um filtro de 0,2 1. O filtrado foi diluído até 5x (de forma a estar dentro da faixa linear de padrões interiores) com fase móvel de ácido sulfúrico 5 molL' e usando uma coluna H para separação dos analitos. O índice de refração utilizado foi o modo de detecção. Os analitos foram quantificados contra padrões internos. Os analitos de interesse foram: maltotriose, maltose, glicose, frutose, arabinose, ácido lático, glicerol, ácido acético e etanol. Análise de dados

[00397] Os dados foram analisados usando o software estatístico SAS JMP. Resultados

[00398] No início da fermentação, os tratamentos mediram títulos de ácido láctico inferiores a 0,3 g/L. FIG. 4 mostra concentrações de ácido láctico após 24 horas de fermentações com baixo teor de sólidos secos de mosto de milho na presença de vários polipeptídeos AAI3 e controles. Conforme mostrado na FIG. 4, cada um dos polipeptídeos AA13 testados reduziu a formação de ácido láctico mais do que o controle negativo. Esses dados sugerem que as LPMOSs, tal como os polipeptídeos AA13, podem reduzir os níveis de formação láctica em um mosto infectado durante a fermentação do etanol, como os polipeptídeos AA9 no Exemplo 1 acima.

[00399] O At-AAI3 foi selecionado para triagem adicional quanto à resposta à dose, e continuou a mostrar títulos reduzidos de ácido láctico em comparação com o controle após 20 horas de fermentação com baixo teor de sólidos secos do mosto de milho nas condições descritas acima. Esses resultados são mostrados na FIG. 5. Exemplo 3 - Avaliação da LPMO como biossolução de controle de ácido lático na fermentação de biocombustíveis

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[00400] Esse exemplo demonstra que as LPMOs podem ser usadas para reduzir os níveis de ácido láctico durante a fermentação do etanol desafiados por infecção. Em particular, esse exemplo demonstra que as LPMOSs, tais como polipeptídeos AA13, podem reduzir os níveis de ácido láctico durante a fermentação do etanol quando desafiados por infecção.

[00401] Um mosto de controlo foi preparado internamente com uma mistura de indústria relevante de AA369 e Protease Pfu usando uma incubadora Lab-O-Mat durante 2 horas a 36% de DS 85 ºC de forma a simular as condições típicas da indústria. A mistura foi, então, congelada antes de ser usada em SSF. Um mosto infectado foi preparado infectando o mosto de controle com uma cultura de LAB multi-estirpe cultivada em MRS. As bactérias no mosto de controle foram incubadas durante a noite e depois congeladas com glicerol a 20%. Para essa experiência, 1% de peso/peso do mosto infectado foi misturado no mosto de controle. Isso imita um evento de infecção em uma instalação de etanol em larga escala. Para o SSF, todo o mosto foi preparado com 1,000 ppm de ureia de forma a auxiliar com a fermentação da levedura. Todos os tratamentos foram doseados com uma glucoamilase comercial de linha de base GSA, enquanto os candidatos AA13 foram doseados entanto 10ug/g de DS ou 50ug/g de DS. O SSF foi realizado na escala de 5g com 10 uL/g de levedura de Etanol Vermelho reidratada a 32 ºC durante até 24 horas a 20% de DS. No final da fermentação, as amostras foram desativadas com 50uL de ácido sulfúrico a 40% e depois centrifugadas. O sobrenadante foi filtrado através de um filtro de 0,2um e depois medido para carboidratos solúveis e ácidos orgânicos usando uma coluna H de permuta iônica em HPLC.

[00402] Neste estudo, vários candidatos mostraram diminuição do ácido lático, além do aumento do etanol, em comparação com o controle sem tratamento em ambas as doses elevada e baixa, conforme apresentado na tabela abaixo. Os candidatos de interesse são destacados em negrito.

Resultados: Coseemppm | Delta%ce | Deita% |Ácdolátiico| Etanol

Dose por Tratamento o dens| ácidolético| demtenol | méciogt | méciogL Sem Tratamento o 0.0% 0.0% 33 776 Penicíllin 25 -62.4% 31% 12 80.1 Aspergillus terreus 10 13% -0.7% 34 TI Penicillium víticola 10 22% 13% 34 76.6 Fusarium sp-75363 10 -35% 06% 32 781 Aspergillus insuetus 10 17% -1.2% 34 76.7 Penicilium samsonianum 10 22% -0.6% 34 TIA Penicillium sp-52627 10 39% 0.0% 34 776 Pestalotiopsis sp-71627 10 0.0% 05% 33 78.0 Myrothecium sp. 10 08% 0.4% 3.3 77.9 Paraphoma sp. 10 14% 12% 34 78.5 Penicillium vulpinum 10 29% 17% 32 79.0 Talaromyces say ulitensis 10 15% 13% 34 78.7 Penicillium steckii 10 45% 14% 35 76.6 Penicillium antarcticum 10 22% -1.6% 34 76.4 Penicillium paxilli 10 49% 02% 32 778 Acremonium sp.

XZ1982 10 -25% 13% 30 78.7 Penicillium sp-72443 10 12.5% 22% 29 793 Acrostalagmus luteoalbus 10 -10.9% 17% 30 78.9 Cladosporium gossy piicola 10 18% -0.2% 33 TS Setophaeosphaeria sp.

NNO51506) 10 02% -0.5% 33 772 Trichocladium asperum 10 15% 05% 33 78.0 Penicillium roseopurpureum 10 13% 05% 33 78.0 Penicillium sclerotiorum 10 6.9% -1.6% 35 764 Penicillium sp-54569 10 3.0% -1.8% 34 76.2 Penicillium hoeksii 10 28% 06% 32 781 Penicillium concentricum 10 0.6% 0.6% 33 181 Sem Tratamento o 0.0% 0.0% 33 776 Penicillin 25 -62.4% 31% 12 80.1 Aspergillus terreus so 13% 04% 34 78.0 Penicillium víticola so 28% 0.2% 34 778 Fusarium sp-75363 so 16% 12% 33 78.5 Aspergillus insuetus 50 21% -0.6% 34 TT 2 Penicillium samsonianum 50 20% -0.4% 34 TIA Penicillium sp-52627 so 0.8% 01% 33 EA Pestalotiopsis sp-71627 so 29% 04% 34 780 Myrothecium sp. so -0.9% 07% 33 78.2 Paraphoma sp. so 6.9% 02% 35 778 Penicillium vulpinum so 4.6% 0.9% 35 78.3 Talaromyces say ulitensis 50 14% 12% 34 T85 Penicillium steckii E 10% -0.4% 33 7713 Penicillium antarcticum 50 3.0% 18% 34 76.2 Penicillium paxilli so 57% 05% 31 781 Acremonium sp.

XZ1982 so 41% 0.4% 32 78.0 Penicillium sp-72443 so -10.3% 23% 30 79.5 Acrostalagmus luteoalbus 50 13.2% 30% 29 80.0 Cladosporium gossypiicola 50 46% 11% 32 78.5 Setophaeosphaeria sp.

NNOS51506 | 50 117% -0.1% 33 775 Trichocladium asperum 50 04% 03% 33 778 Penicillium roseopurpureum 50 18% 06% 33 781 Penicillium sclerotiorum so -0.9% 06% 33 781 Penicillium sp-54569 so 06% -0.3% 33 TIA Penicillium hoeksii so 48% 19% 32 79.1 Penicillium concentricum so 32% 07% 32 78.2

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Processo para reduzir e/ou prevenir um aumento nos níveis de ácido lático em um sistema de fermentação de biocombustível, o processo caracterizado pelo fato de compreender a introdução de um polipeptídeo monoxigenase lítica de polissacarídeo (LPMO), ou uma composição enzimática compreendendo um polipeptídeo LPMO, a um sistema de fermentação de biocombustível, em que o sistema de fermentação compreende um ou mais vasos, tubos e/ou componentes de fermentação, e em que o polipeptídeo LPMO, ou composição enzimática compreendendo o polipeptídeo LPMO, é adicionado(a) a uma concentração suficiente para reduzir e/ou prevenir um aumento nos níveis de ácido lático no sistema de fermentação de biocombustível.

2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que pelo menos um dos vasos de fermentação é um tanque de fermentação e o polipeptídeo LPMO, ou a composição enzimática, é introduzido(a) no tanque de fermentação.

3. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que pelo menos um dos vasos de fermentação é um tanque de fermentação e o polipeptídeo LPMO, ou a composição enzimática, é introduzido(a) no tanque de fermentação.

4. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que pelo menos um dos vasos de fermentação é um tanque de propagação de levedura e o polipeptídeo LPMO, ou a composição enzimática, é introduzido(a) no tanque de propagação de levedura.

5. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que o biocombustível é etanol.

6. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4 ou 5, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo LPMO é selecionado a partir do grupo consistindo em um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 9 (AA9), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 10 (AAIO), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 11 (AAI1), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 13 (AAl3), e combinações dos mesmos.

7. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3,4, 5 ou 6, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AAS9 selecionado a partir do grupo consistindo em: i) o polipeptídeo AA9 de Thermoascus aurantiacus de SEQ ID NO: 1 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; ii) o polipeptídeo AA9 de Penicillium emersonii de SEQ ID NO: 2 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iii) o polipeptídeo AA9 de Thielavia terrestris de SEQ ID NO: 3 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iv) o polipeptídeo AA9 de Aspergillus fumigatus de SEQ ID NO: 4 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; v) o polipeptídeo AA9 de Thermoascus crustaceus de SEQ ID NO: 5 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%,

pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; e vi) o polipeptídeo de Penicillium emersonii de SEQ ID NO: 6 expresso em antecedentes de Trichoderma reesei, ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências de com este.

8. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3,4,5,6 ou 7, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AA13 selecionado a partir do grupo consistindo em: i) o polipeptídeo AA13 de Aspergillus terreus de SEQ ID NO: 119 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; ii) o polipeptídeo AAI3 de Aspergillus lentulus de SEQ ID NO: 120 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iii) o polipeptídeo de Aspergillus nidulans de SEQ ID NO: 123 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iv) o polipeptídeo de Penicillium polonicum de SEQ ID NO: 124 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

viii) o polipeptídeo de Fusarium sp-75363 de SEQ ID NO:

132 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xl) o polipeptídeo de Penicillium concentricum de SEQ ID NO: 136 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xii) o polipeptídeo de Penicillium roseopurpureum de SEQ ID NO: 139 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xvi1) o polipeptídeo de Penicillium steckii de SEQ ID NO: 145 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xix) o polipeptídeo de Pestalotiopsis sp-71627 de SEQ ID NO: 148 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%

ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; xx) o polipeptídeo de Setophaeosphaeria sp. NNOS1506 de SEQ ID NO: 149 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; Xxi) o polipeptídeo de Talaromyces sayulitensis de SEQ ID NO: 150 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; xxii) o polipeptídeo de Trichocladium asperum de SEQ ID NO: 151 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este.

9. Processo para produção de um produto de fermentação a partir de um material contendo amido, o processo caracterizado pelo fato de que compreende: a) liquefação de material contendo amido na presença de uma alfa-amilase para formar um mosto liquefeito; b) sacarificação do mosto liquefeito usando uma enzima geradora de fontes de carboidratos para produzir um açúcar fermentável; c) fermentação do açúcar usando um organismo fermentador sob condições adequadas para produzir o produto de fermentação, em que pelo menos um polipeptídeo LPMO, ou composição enzimática compreendendo pelo menos um polipeptídeo LPMO, é adicionado(a) antes ou durante o passo de sacarificação b) e/ou o passo de fermentação c).

10. Processo de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que os passos b) e c) são levados a cabo simultaneamente.

11. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 ou 10, caracterizado pelo fato de que uma pasta semifluida do material contendo amido é aquecida até acima da temperatura de gelatinização.

12. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 9, 10 ou 11, caracterizado pelo fato de que pelo menos um polipeptídeo LPMO, ou composição enzimática, é adicionado(a) durante a liquefação.

13. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 9, 10, 11 ou 12, caracterizado pelo fato de que pelo menos um polipeptídeo LPMO, ou a pelo menos uma composição enzimática, é adicionado(a) antes ou durante a sacarificação.

14. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 9,10, 11 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que pelo menos um polipeptídeo LPMO, ou a pelo menos uma composição enzimática, é adicionado(a) antes ou durante a fermentação.

15. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 9, 10, 11, 12, 13 ou 14, caracterizado pelo fato de que o organismo de fermentação é levedura e o pelo menos um polipeptídeo LPMO, ou a pelo menos uma composição enzimática, é adicionado(a) antes ou durante a propagação da levedura.

16. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que o produto de fermentação é um álcool, preferencialmente etanol.

17. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo LPMO é selecionado a partir do grupo consistindo em um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 9 (AA9), polipeptídeo de Atividade Auxiliar 10 (AAIO), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 11 (AAII), um polipeptídeo de

Atividade Auxiliar 13 (AAl3), e combinações dos mesmos.

18. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 ou 17, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AAS9 selecionado a partir do grupo consistindo em: 1) o polipeptídeo AA9 de Thermoascus aurantiacus de SEQ ID NO: 1 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; ii) o polipeptídeo AA9 de Penicillium emersonii de SEQ ID NO: 2 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; ii1) o polipeptídeo AA9 de Thielavia terrestris de SEQ ID NO: 3 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; 1v) o polipeptídeo AA9 de Aspergillus fumigatus de SEQ ID NO: 4 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; v) o polipeptídeo AA9 de Thermoascus crustaceus de SEQ ID NO: 5 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos

98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; e vi) o polipeptídeo de Penicillium emersonii de SEQ ID NO: 6 expresso em antecedentes de Trichoderma reesei, ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências de com este.

19. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou 18, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AA13 selecionado a partir do grupo consistindo em: i) o polipeptídeo AA13 de Aspergillus terreus de SEQ ID NO: 119 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; à) o polipeptídeo AAI3 de Aspergillus lentulus de SEQ ID NO: 120 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iii) o polipeptídeo de Aspergillus nidulans de SEQ ID NO: 123 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iv) o polipeptídeo de Penicillium polonicum de SEQ ID NO: 124 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos

xiv) o polipeptídeo de Penicillium sclerotiorum de SEQ ID

xx) o polipeptídeo de Setophaeosphaeria sp. NNOS1506 de SEQ ID NO: 149 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; Xxi) o polipeptídeo de Talaromyces sayulitensis de SEQ ID NO: 150 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; xxii) o polipeptídeo de Trichocladium asperum de SEQ ID NO: 151 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este.

20. Uso de um polipeptídeo LPMO, ou uma composição enzimática, caracterizado pelo fato de que compreende um polipeptídeo LPMO, de modo a reduzir os níveis de ácido lático durante a fermentação em um processo de produção de etanol.

21. Uso de um polipeptídeo LPMO, ou uma composição enzimática, caracterizado pelo fato de que compreende um polipeptídeo LPMO, de modo a reduzir os níveis de ácido lático durante a propagação da levedura.

22. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 ou 21, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo LPMO é selecionado a partir do grupo consistindo em um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 9 (AA9), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 10 (AA1O), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 11 (AAIl1), um polipeptídeo de Atividade Auxiliar 13 (AAI3), e combinações dos mesmos.

23. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 20, 21 ou 22, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AAS9 selecionado a partir do grupo consistindo em:

ili) o polipeptídeo AA9 de Thielavia terrestris de SEQ ID NO: 3 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

v) o polipeptídeo AA9 de Thermoascus crustaceus de SEQ ID NO: 5 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; e vi) o polipeptídeo de Penicillium emersonii de SEQ ID NO: 6 expresso em antecedentes de Trichoderma reesei, ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências de com este.

24. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 20, 21, 22 ou 23, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo LPMO é um polipeptídeo AA13 selecionado a partir do grupo consistindo em: i) o polipeptídeo AA13 de Aspergillus terreus de SEQ ID NO: 119 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; ii) o polipeptídeo AA1I3 de Aspergillus lentulus de SEQ ID NO: 120 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iii) o polipeptídeo de Aspergillus nidulans de SEQ ID NO: 123 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; iv) o polipeptídeo de Penicillium polonicum de SEQ ID NO: 124 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este; v) o polipeptídeo de Penicillium oxalicum de SEQ ID NO: 125 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xiv) o polipeptídeo de Penicillium sclerotiorum de SEQ ID NO: 141 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos

98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xx) o polipeptídeo de Setophaeosphaeria sp.

NNOS1506 de SEQ ID NO: 149 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos

85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

xxi) o polipeptídeo de Talaromyces sayulitensis de SEQ ID NO: 150 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este;

XxXxii) o polipeptídeo de Trichocladium asperum de SEQ ID NO: 151 ou uma variante do mesmo tendo pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequências com este.