BR112020003022A2

BR112020003022A2 - composição farmacêutica para o uso no crescimento de cabelo, modificação do couro cabeludo ou pele, cicatrização de uma ferida, promoção da osteogênese ou modificação do cabelo

Info

Publication number: BR112020003022A2
Application number: BR112020003022-8A
Authority: BR
Inventors: Hirotaro FUKUOKA
Original assignee: Hirotaro Fukuoka
Priority date: 2017-12-26
Filing date: 2018-12-26
Publication date: 2020-08-25
Also published as: JP2020128399A; AU2018396512B2; TWI787423B; JP6628946B2; JP2020128400A; KR20200102978A; JPWO2019131712A1; AU2018396512A1; MX2020001764A; SG11202000906YA; US20200246409A1; CN111050763A; JP6732088B2; JP6765024B2; WO2019131712A1; EP3733173A4; TW201929848A; US11413321B2; EP3733173A1; CA3070854A1

Abstract

A presente invenção fornece uma composição farmacêutica para o uso no crescimento de cabelo, modificação do couro cabeludo ou pele, cicatrização de uma ferida, promoção da osteogênese ou modificação do cabelo, a composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como um ingrediente ativo.

Description

“COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA O USO NO CRESCIMENTO DE CABELO, MODIFICAÇÃO DO COURO CABELUDO OU PELE, CICATRIZAÇÃO DE UMA FERIDA, PROMOÇÃO DA OSTEOGÊNESE OU MODIFICAÇÃO DO CABELO” CAMPO TÉCNICO

[001]A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica para o uso no crescimento de cabelo, modificação do couro cabeludo ou pele, cicatrização de feridas, promoção da osteogênese ou modificação do cabelo; e a um método.

FUNDAMENTOS DA TÉCNICA

[002]O leite de mamíferos (particularmente o colostro) contém várias substâncias, incluindo nutrientes, tais como substâncias imunes, transmissores intracelulares, exossomas, mRNA e citocinas. Quando uma criança ingere oralmente o leite, estas substâncias são levadas ao corpo para contribuir para o crescimento da criança.

[003]Foi relatado que as células de linhagem de gordura impulsionar a ciclagem capilar contribuindo para nichos de células-tronco da pele em estudos comparativos com e sem células de linhagem de gordura (Literatura de Não Patente 1). A Literatura de Não Patente 1 indica que o surgimento de células CD34 positivas, o aumento no número de células adiposas positivas para PPAR-γ e a maturidade de células adiposas estão relacionados ao crescimento do cabelo. A Literatura de Não Patente 2 relata que o número de macrófagos do tipo M2 residentes nos tecidos aumenta na ocorrência de regeneração tecidual nos tecidos.

LISTA DE CITAÇÃO LITERATURA DE NÃO PATENTE

[004]Literatura de Não Patente 1: Festa E et al., Cell, 146: 761 a 71, 2011

[005]Literatura de Não Patente 2: Satoh T. et al., Nature, 495: 524 a 528, 2013

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[006]A presente invenção fornece uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso na modificação do couro cabeludo ou pele. A presente invenção também fornece uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso no tratamento de uma ferida. A presente invenção fornece adicionalmente uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso na promoção do crescimento do cabelo ou modificação do cabelo.

[007]Os presentes inventores descobriram que leite, ingredientes sobrenadantes do leite centrifugado e óleo de soja e composições contendo ácidos graxos, tais como ácidos graxos principais contidos na mesma, são úteis para a modificação do couro cabeludo ou pele, cicatrização de feridas, promoção da osteogênese e modificação do cabelo. A presente invenção é baseada nestas descobertas.

[008]A seguinte invenção será fornecida, de acordo com a presente invenção. (1) Uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, a composição farmacêutica sendo (i) uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso na modificação do couro cabeludo ou pele, (ii) uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso no tratamento de uma ferida ou (iii) uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso na promoção do crescimento do cabelo ou uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso na modificação do cabelo. (2) A composição farmacêutica, de acordo com (1) acima, para o uso na modificação do couro cabeludo ou pele. (3) A composição farmacêutica, de acordo com (1) acima, para o uso no tratamento de uma ferida.

(4) A composição farmacêutica, de acordo com (1) acima, para o uso na promoção do crescimento do cabelo. (5) A composição farmacêutica, de acordo com (1) acima, para o uso na promoção da osteogênese. (6) A composição farmacêutica, de acordo com (6) acima, em que o ácido graxo saturado está em uma forma aplicada a uma película biocompatível. (7) A composição farmacêutica descrita em qualquer um entre (1) a (6) acima, em que o ácido graxo saturado é um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido palmítico, ácido esteárico e ácido mirístico. (8) A composição farmacêutica descrita em qualquer um entre (1) a (7) acima, compreendendo adicionalmente um ácido graxo insaturado. (9) A composição farmacêutica descrita em qualquer um entre (1) a (6) acima, compreendendo óleo de soja ou leite ou um produto extraído ou um produto processado do mesmo que contém uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. (10) A composição farmacêutica, de acordo com (9) acima, em que o leite é esterilizado. (11) A composição farmacêutica, de acordo com (10) acima, em que o leite é esterilizado em uma temperatura alta.

[009]A presente invenção é vantajosa pelo fato de que fornece uma composição farmacêutica ou um método de tratamento que pode ser usado para várias aplicações farmacêuticas, conforme descrito acima, e que é capaz de exibir continuamente um efeito mesmo depois da conclusão do tratamento.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[010]Figura 1. A Figura 1 é uma fotografia que mostra uma influência da administração do leite nas cutículas do cabelo.

[011]Figura 2A. A Figura 2A é fotografias de uma área tópica que mostra um efeito de administração do leite na redução de cabelos brancos.

[012]Figura 2B. A Figura 2B é fotografias de uma superfície lateral da cabeça que mostra um efeito de administração do leite na redução de cabelos brancos.

[013]Figura 3. A Figura 3 mostra uma relação entre a administração do leite e a espessura de uma camada adiposa da pele, onde os símbolos #1 a #6 denotam, respectivamente, um a seis meses depois do tratamento.

[014]Figura 4A. A Figura 4A mostra tecidos pigmentados de colágeno tipo I e colágeno tipo III nos tecidos da pele antes e depois do tratamento.

[015]Figura 4B. A Figura 4B mostra tecidos pigmentados de colágeno tipo I e colágeno tipo III nos tecidos da pele antes e depois do tratamento.

[016]Figura 5. A Figura 5 mostra um efeito de administração do leite sobre o tamanho das células adiposas.

[017]Figura 6A. A Figura 6A mostra um efeito de administração do leite sobre a cura do ferimento.

[018]Figura 6B. A Figura 6B mostra um efeito de administração de lactoferrina sobre a cura do ferimento.

[019]Figura 6C. A Figura 6C mostra um efeito de administração de um ácido graxo saturado ou um ácido graxo insaturado sobre a cura do ferimento.

[020]Figura 6D. A Figura 6D mostra um efeito de administração de óleo de soja sobre a cura do ferimento.

[021]Figura 7. A Figura 7 mostra os resultados da pigmentação imuno- histológica dos tecidos da camada adiposa subcutânea dorsal de ratos Wistar (pigmentação de células adiposas positivas para Ki67 e pigmentação de macrófagos positivos para CD68) depois da administração do leite.

[022]Figura 8A. A Figura 8A mostra os resultados da pigmentação imuno- histológica dos tecidos da camada adiposa do couro cabeludo (pigmentação CD31 e pigmentação CD34) depois da administração do leite.

[023]Figura 8B. A Figura 8B mostra os resultados da pigmentação imuno- histológica de tecidos da camada adiposa do couro cabeludo (pigmentação de macrófagos positivos para CD68, pigmentação de macrófagos do tipo M2 residentes nos tecidos positivos para CD163 e pigmentação de células positivas para PPAR-γ) depois da administração do leite.

[024]Figura 9. A Figura 9 mostra os resultados da pigmentação imuno- histológica de tecidos da camada adiposa subcutânea dorsal de ratos (pigmentação de células positivas para CD68 e PPAR-γ) depois da administração oral de lactoferrina.

[025]Figura 10A. A Figura 10A mostra os resultados da pigmentação de células positivas para CD68 e PPAR-γ em tecidos quatro semanas e oito semanas depois da administração de solução salina fisiológica. As setas na Figura indicam um local na qual as células positivas estão presentes e o número entre parênteses na parte direita inferior de cada imagem pigmentada 3 indica o número de células positivas no campo visual.

[026]Figura 10B. A Figura 10B mostra os resultados da pigmentação de células positivas para CD68 e PPAR-γ em tecidos quatro semanas e oito semanas depois da administração de ácido palmítico. As setas na Figura indica um local na qual células positivas estão presentes e o número entre parênteses na parte direita inferior de cada imagem pigmentada indica o número de células positivas no campo visual.

[027]Figura 10C. A Figura 10C mostra os resultados da pigmentação de células positivas para CD68 e PPAR-γ em tecidos quatro semanas e oito semanas depois da administração de ácido esteárico. As setas na Figura indicam um local na qual células positivas estão presentes e o número entre parênteses na parte direita inferior de cada imagem pigmentada indica o número de células positivas no campo visual.

[028]Figura 10D. A Figura 10D mostra os resultados da pigmentação de células positivas para CD68 e PPAR-γ em tecidos quatro semanas e oito semanas depois da administração de ácido mirístico. As setas na Figura indicam um local na qual células positivas estão presentes e o número entre parênteses na parte direita inferior de cada imagem pigmentada indica o número de células positivas no campo visual.

[029]Figura 10E. A Figura 10E mostra os resultados da pigmentação de células positivas para CD68 e PPAR-γ em tecidos quatro semanas e oito semanas depois da administração de ácido oleico. As setas na Figura indicam um local na qual células positivas estão presentes e o número entre parênteses na parte direita inferior de cada imagem pigmentada indica o número de células positivas no campo visual.

[030]Figura 10F. A Figura 10F mostra os resultados da pigmentação de células positivas para CD68 e PPAR-γ em tecidos quatro semanas e oito semanas depois da administração de ácido α-linolênico. As setas na Figura indicam um local na qual células positivas estão presentes e o número entre parênteses na parte direita inferior de cada imagem pigmentada indica o número de células positivas no campo visual.

[031]Figura 10G. A Figura 10G mostra os resultados da pigmentação de células positivas para CD68 e PPAR-γ em tecidos quatro semanas e oito semanas depois da administração de ácido linoleico. As setas na Figura, indica um local na qual células positivas estão presentes e o número entre parênteses na parte direita inferior de cada imagem pigmentada indica o número de células positivas no campo visual.

[032]Figura 11A. A Figura 11A mostra a soma de valores obtidos pela multiplicação do comprimento pelo número de cabelos para cada comprimento de cabelo depois da administração do leite.

[033]Figura 11B. A Figura 11B é uma forma de um gráfico de barras que mostra os resultados da Figura 11A. Na Figura 11B, “1,4 mm ou mais” significa a soma dos comprimentos de cabelos que apresentam 1,4 mm ou mais de comprimento e o “todos” significa a soma dos comprimentos de cabelos que apresentam um comprimento de 0,9 mm ou mais.

[034]Figura 12. A Figura 12 é uma imagem da osteogênese observada por 3D-CT depois que uma película biocompatível revestida com ácido palmítico ou uma película biocompatível não revestida é colocada sobre um sítio de resseção óssea (diâmetro: 8,8 mm). Para a amostragem de tecidos, um orifício com um diâmetro de 3 mm é artificialmente perfurado em parte do osso depois da osteogênese.

[035]Figura 13. A Figura 13 apresenta imagens pigmentadas com hematoxilina-eosina de seções ósseas obtidas por amostragem de tecidos depois da osteogênese. As elipses tracejadas indicam um osso recém formado sobre o sítio de resseção óssea e valores numéricos indicam a área do osso formado (o número de pixels e mm2).

[036]Figura 14. A Figura 14 mostra variações na expressão gênica da proteína morfogenética óssea-4 (Bmp4) e da proteína morfogenética óssea-7 (Bmp7) em indivíduos que receberam palmitina ou leite.

[037]Figura 15. A Figura 15 mostra variações na expressão gênica depois da administração de ácido palmítico ou leite a um controle.

DESCRIÇÃO DAS FORMAS DE REALIZAÇÃO

[038]Conforme usado neste relatório, o “indivíduo” significa um mamífero. Exemplos do mamífero incluem seres humanos (machos e fêmeas).

[039]Conforme usado neste relatório, o “leite” significa leite derivado de mamífero. Exemplos do mamífero incluem seres humanos e bovinos.

[040]Conforme usado neste relatório, o “soro do leite” significa uma solução aquosa obtida por meio da remoção dos componentes da gordura do leite e caseína a partir do leite. O soro do leite pode ser obtido, por exemplo, submetendo o leite ao tratamento, tal como centrifugação e remoção de precipitados.

[041]Conforme usado neste relatório, o “couro cabeludo” significa a pele de uma região da cabeça, que inclui o topo da cabeça, mas exclui a face, a mandíbula e o pescoço (incluindo as orelhas). Conforme usado neste relatório, a “pele” é interpretada como incluindo o couro cabeludo e a pele, exceto o couro cabeludo. O couro cabeludo de um ser humano apresenta uma área de cerca de 700 mm2 a cerca de 800 mm2.

[042]Conforme usado neste relatório, a “modificação” significa que a qualidade é aperfeiçoada, melhorada, atualizada ou aprimorada. Conforme usado neste relatório, a “melhora” é interpretada como incluindo a melhoria de uma situação atual e melhoria de partes ruins.

[043]Conforme usado neste relatório, o “cabelo” significa o cabelo que cresce sobre a pele. Conforme usado neste relatório, o “cabelo da cabeça” significa o cabelo que cresce sobre o couro cabeludo.

[044]Conforme usado neste relatório, o “cabelo branco” significa o cabelo, particularmente o cabelo da cabeça, que exibe uma cor branca devido à falta de pigmentos, tais como eumelanina (ou melanina verdadeira) e/ou feomelanina. Conforme usado neste relatório, o “cabelo preto” significa o cabelo que contém eumelanina e exibe uma cor preta.

[045]Conforme usado neste relatório, a “cutícula” é uma estrutura que cobre a superfície de cabelo e existente na camada mais externa do cabelo. A cutícula apresenta um papel na proteção do cabelo contra estímulos externos e um papel na prevenção de perda de umidade ou ingredientes para o exterior do córtex interno. A cutícula cobre o cabelo em uma maneira escalonada estendendo-se da raiz até a ponta do cabelo.

[046]Conforme usado neste relatório, a “ferida” significa dano físico aos tecidos. A ferida inclui feridas da superfície do corpo.

[047]A presente invenção fornece: (A) uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso na modificação do couro cabeludo ou pele, a composição farmacêutica contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo (particularmente um ácido graxo saturado) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (B) uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso no tratamento de uma ferida, a composição farmacêutica contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo (particularmente um ácido graxo saturado) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (C) uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso na promoção do crescimento do cabelo ou uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso na modificação do cabelo, a composição farmacêutica contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo (particularmente um ácido graxo saturado) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (D) uma composição farmacêutica para o uso na promoção da osteogênese, a composição farmacêutica contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo (particularmente um ácido graxo saturado) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (em seguida, as composições farmacêuticas, de acordo com (A) a (D) acima são, algumas vezes, referidas coletivamente como uma “composição farmacêutica da presente invenção”).

[048]Em certas formas de realização da presente invenção, exemplos da composição contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo incluem leite, produtos extraídos do leite (por exemplo, soro do leite) e produtos processados do leite (por exemplo, produtos lácteos, por exemplo, soro do leite do queijo e soro do leite do iogurte) e misturas dos mesmos. O leite, produtos extraídos do leite ou produtos processados do leite podem ser esterilizados, por exemplo, esterilizados em uma temperatura baixa (por exemplo, esterilizados por meio de aquecimento entre 62 C a 68 C) ou esterilizados em uma temperatura alta (esterilizados por meio de aquecimento a 120 C ou superior). A esterilização do leite é normalmente classificada amplamente em esterilização em temperatura baixa realizada entre 62 C a 68 C durante cerca de 30 minutos (por exemplo, a 65 C durante 30 minutos) e esterilização em temperatura alta realizada entre 120 C a 150 C durante 1 segundo a 4 segundos (por exemplo, 120 C a 130 C durante 2 segundos a 3 segundos). Portanto, em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica da presente invenção contém leite como um ingrediente ativo.

[049]Em certas formas de realização da presente invenção, exemplos da composição contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo incluem óleo animal, óleo vegetal, produtos extraídos ou produtos processados destes óleos (por exemplo, óleo de soja, produtos extraídos do óleo de soja ou produtos processados do óleo de soja), e misturas dos mesmos.

[050]Conforme usado neste relatório, o produto extraído do leite ou do óleo de soja é uma fração extraída do leite ou da soja, pode ser chamado um produto extraído do leite ou um produto extraído do óleo de soja e contém uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[051]Conforme usado neste relatório, o produto processado do leite ou do óleo de soja é um produto obtido por meio do processamento do leite ou do óleo de soja, pode ser chamado um produto processado do leite ou um produto processado da soja e contém uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[052]Exemplos da composição contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo incluem soluções contendo leite e soro do leite e preparações liofilizadas das mesmas.

[053]O ácido graxo contido na composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, pode ser um ácido graxo contido como um ingrediente do leite.

[054]Em certas formas de realização da presente invenção, o ácido graxo saturado contido na composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, é um ou mais ácidos graxos saturados selecionados a partir do grupo que consiste de ácido palmítico, ácido esteárico e ácido mirístico.

[055]Em certas formas de realização da presente invenção, o ácido graxo contido na composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, pode ser um ácido graxo saturado e é um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido palmítico, ácido esteárico e ácido mirístico.

[056]Em certas formas de realização da presente invenção, o ácido graxo saturado contido na composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, é ácido palmítico.

[057]Em certas formas de realização da presente invenção, o ácido graxo saturado contido na composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, é ácido esteárico.

[058]Em certas formas de realização da presente invenção, o ácido graxo saturado contido na composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, é ácido mirístico.

[059]Em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, pode conter adicionalmente um ácido graxo insaturado e o ácido graxo insaturado pode ser, por exemplo, um ou mais ácidos graxos insaturados selecionados a partir do grupo que consiste de ácido oleico, ácido α-linolênico e ácido linoleico.

[060]Em certas formas de realização da presente invenção, o ácido graxo contido na composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, é ácido oleico.

[061]O ácido graxo contido na composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, é ácido α-linolênico.

[062]O ácido graxo contido na composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, é ácido linoleico.

[063]Em certas formas de realização, o ácido graxo contido na composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, pode ser uma mistura de pelo menos um ácido graxo saturado e pelo menos um ácido graxo insaturado. Em certas formas de realização, a composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, contém ácido palmítico e ácido linoleico como o ácido graxo. Em certas formas de realização, a composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, contém ácido palmítico e ácido oleico como o ácido graxo. Em certas formas de realização, a composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, contém ácido esteárico e ácido linoleico como o ácido graxo. Em certas formas de realização, a composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, contém ácido esteárico e ácido oleico como o ácido graxo. Em certas formas de realização, a composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, contém ácido palmítico, ácido esteárico e ácido linoleico como o ácido graxo. Em certas formas de realização,

a composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, contém ácido palmítico, ácido esteárico e ácido oleico como o ácido graxo. Em certas formas de realização, a composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, contém ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico e ácido α-linolênico como o ácido graxo.

[064]Em certas formas de realização, leite, um produto extraído do leite, um produto processado do leite ou uma mistura dos mesmos, que podem ser usados na presente invenção, podem conter um ou mais ácidos graxos selecionados a partir de ácidos graxos saturados (neste relatório, a frase “podem conter ácidos graxos” inclui casos em que o leite contém naturalmente os ácidos graxos e casos em que os ácidos graxos são adicionados ao leite). Em certas formas de realização, leite, um produto extraído do leite, um produto processado do leite ou uma mistura dos mesmos, que podem ser usados na presente invenção, podem conter adicionalmente um ácido graxo insaturado. Em certas formas de realização, leite, um produto extraído do leite, um produto processado do leite ou uma mistura dos mesmos, que podem ser usados na presente invenção, podem conter, por exemplo, um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido palmítico, ácido esteárico e ácido mirístico. Em certas formas de realização, leite, um produto extraído do leite, um produto processado do leite ou uma mistura dos mesmos, que podem ser usados na presente invenção, podem conter, por exemplo, um ou mais ácidos graxos insaturados selecionados a partir do grupo que consiste de ácido oleico, ácido α-linolênico e ácido linoleico. Em certas formas de realização, leite, um produto extraído do leite, um produto processado do leite ou uma mistura dos mesmos, que podem ser usados na presente invenção, podem conter, por exemplo, um ou mais ácidos graxos saturados e um ou mais ácidos graxos insaturados. Em certas formas de realização, leite, um produto extraído do leite, um produto processado do leite ou uma mistura dos mesmos, que podem ser usados na presente invenção, podem conter um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido palmítico, ácido esteárico e ácido mirístico e um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido oleico, ácido α-linolênico e ácido linoleico. Em certas formas de realização, leite, um produto extraído do leite, um produto processado do leite ou uma mistura dos mesmos, que podem ser usados na presente invenção, podem conter ácido mirístico, ácido palmítico e ácido oleico. Em certas formas de realização, leite, um produto extraído do leite, um produto processado do leite ou uma mistura dos mesmos, que podem ser usados na presente invenção, podem conter ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico e ácido α-linolênico. Em certas formas de realização da presente invenção, um ou mais ácidos graxos podem ser adicionados à composição farmacêutica na forma do leite, de um produto extraído do leite, de um produto processado do leite ou de uma mistura dos mesmos.

[065]Em certas formas de realização da presente invenção, leite, um produto extraído do leite, um produto processado do leite ou uma mistura dos mesmos podem apresentar um teor aumentado de um ou mais ácidos graxos selecionados a partir de ácidos graxos saturados e ácidos graxos insaturados. O aumento do teor significa que o teor dos ácidos graxos no leite, em um produto extraído do leite, em um produto processado do leite ou em uma mistura dos mesmos é maior depois do aumento do teor do que antes do aumento do teor. O aumento do teor pode ser realizado, por exemplo, por meio da adição de um ou mais ácidos graxos selecionados a partir de ácidos graxos saturados e ácidos graxos insaturados ao leite, a um produto extraído do leite, a um produto processado do leite ou a uma mistura dos mesmos. Em certas formas de realização, o aumento do teor pode ser, por exemplo, o aumento do teor de um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido palmítico, ácido esteárico e ácido mirístico. Em certas formas de realização, o aumento do teor pode ser, por exemplo, o aumento do teor de um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido oleico, ácido α-linolênico e ácido linoleico. Em certas formas de realização, o aumento do teor pode ser o aumento do teor de um ou mais ácidos graxos saturados e de um ou mais ácidos graxos insaturados. Em certas formas de realização, o aumento do teor pode ser, por exemplo, o aumento do teor de um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido palmítico, ácido esteárico e ácido mirístico e do teor de um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido oleico, ácido α-linolênico e ácido linoleico. Em certas formas de realização, o aumento do teor pode ser o aumento do teor de cada um entre ácido mirístico, ácido palmítico e ácido oleico. Em certas formas de realização, o aumento do teor pode ser o aumento do teor de cada um entre ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico e ácido α-linolênico.

[066]Em certas formas de realização da presente invenção, leite, um produto extraído do leite, um produto processado do leite ou uma mistura dos mesmos podem apresentar um teor de lactoferrina reduzido. O teor de lactoferrina pode ser reduzido por um método, tal como esterilização em temperatura alta.

[067]Leite, um produto extraído do leite, um produto processado do leite ou uma mistura dos mesmos podem apresentar um teor de ácido graxo aumentado e um teor de lactoferrina reduzido.

[068]Em certas formas de realização da presente invenção, óleo animal, óleo vegetal, um produto extraído ou um produto processado do óleo ou uma mistura dos mesmos podem conter um ou mais ácidos graxos selecionados a partir de ácidos graxos saturados. Em certas formas de realização, óleo animal, óleo vegetal, um produto extraído ou um produto processado do óleo ou uma mistura dos mesmos pode conter adicionalmente um ácido graxo insaturado. Em certas formas de realização, óleo animal, óleo vegetal, um produto extraído ou um produto processado do óleo ou uma mistura dos mesmos, que podem ser usados na presente invenção, podem conter, por exemplo, um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido palmítico, ácido esteárico e ácido mirístico. Em certas formas de realização, óleo animal, óleo vegetal, um produto extraído ou um produto processado do óleo ou uma mistura dos mesmos, que podem ser usados na presente invenção, podem conter, por exemplo, um ou mais ácidos graxos insaturados selecionados a partir do grupo que consiste de ácido oleico, ácido α-linolênico e ácido linoleico. Em certas formas de realização, óleo animal, óleo vegetal, um produto extraído ou um produto processado do óleo ou uma mistura dos mesmos, que podem ser usados na presente invenção, podem conter, por exemplo, um ou mais ácidos graxos saturados e um ou mais ácidos graxos insaturados. Em certas formas de realização, óleo animal, óleo vegetal, um produto extraído ou um produto processado do óleo ou uma mistura dos mesmos, que podem ser usados na presente invenção, podem conter um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido palmítico, ácido esteárico e ácido mirístico e um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido oleico, ácido α-linolênico e ácido linoleico. Em certas formas de realização, óleo animal, óleo vegetal, um produto extraído ou um produto processado do óleo ou uma mistura dos mesmos, que podem ser usados na presente invenção, podem conter ácido mirístico, ácido palmítico e ácido oleico. Em certas formas de realização, óleo animal, óleo vegetal, um produto extraído ou um produto processado do óleo ou uma mistura dos mesmos, que podem ser usados na presente invenção, podem conter ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico e ácido α-linolênico.

[069]Em certas formas de realização da presente invenção, óleo animal, óleo vegetal, um produto extraído ou um produto processado do óleo ou uma mistura dos mesmos podem apresentar um teor aumentado de um ou mais ácidos graxos selecionados a partir de ácidos graxos saturados e ácidos graxos insaturados. O aumento do teor significa que o teor dos ácidos graxos no óleo animal, no óleo vegetal, em um produto extraído ou em um produto processado do óleo ou em uma mistura dos mesmos é maior depois do aumento do teor do que antes do aumento do teor. O aumento do teor pode ser realizado, por exemplo, por meio da adição de um ou mais ácidos graxos selecionados a partir de ácidos graxos saturados e ácidos graxos insaturados ao óleo animal, ao óleo vegetal, a um produto extraído ou a um produto processado do óleo ou a uma mistura dos mesmos. Em certas formas de realização, o aumento do teor pode ser, por exemplo, o aumento do teor de um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido palmítico, ácido esteárico e ácido mirístico. Em certas formas de realização, o aumento do teor pode ser, por exemplo, o aumento do teor de um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido oleico, ácido α-linolênico e ácido linoleico. Em certas formas de realização, o aumento do teor pode ser o aumento do teor de um ou mais ácidos graxos saturados e um ou mais ácidos graxos insaturados. Em certas formas de realização, o aumento do teor pode ser, por exemplo, o aumento do teor de um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido palmítico, ácido esteárico e ácido mirístico e do teor de um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido oleico, ácido α-linolênico e ácido linoleico. Em certas formas de realização, o aumento do teor pode ser o aumento do teor de cada um entre ácido mirístico, ácido palmítico e ácido oleico. Em certas formas de realização, o aumento do teor pode ser o aumento do teor de cada um entre ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico e ácido α- linolênico.

[070]Em certas formas de realização, a composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, contém o ácido graxo em uma forma solúvel. Em certas formas de realização, a composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, contém o ácido graxo como um sal farmaceuticamente aceitável. Em certas formas de realização, a composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, contém o ácido graxo em uma forma de emulsão. Em certas formas de realização, o ácido graxo não está em uma forma de éster ou em uma forma de glicerídeo na composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção.

[071]O ácido graxo é solúvel em sulfóxido de dimetila, etanol, clorofórmio e éter dietílico. A solubilidade em água do ácido graxo é aperfeiçoada quando o ácido graxo está na forma de um sal farmaceuticamente aceitável, por exemplo, um sal de sódio. O ácido graxo sal pode ser dissolvido em água por meio da formação de micelas.

[072]Em certas formas de realização, a composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, pode ser uma preparação para injeção. Em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica para a administração tópica, de acordo com a presente invenção, pode ser fornecida na forma de um kit, incluindo uma preparação liofilizada de uma solução contendo ácido graxo e água para injeção e a preparação liofilizada pode ser preparada com a água para injeção no momento de necessidade. A água para injeção pode ser aquecida antes do uso.

[073]A composição farmacêutica para o uso na promoção da osteogênese, de acordo com a presente invenção, pode ser fornecida em um estado de ser aplicada a uma película biocompatível. Portanto, a presente invenção pode fornecer um agente farmacêutico contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado aplicado sobre uma película biocompatível, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Exemplos da película biocompatível incluem películas finas que apresentam uma superfície de fosfato de cálcio (por exemplo, películas finas de fosfato de cálcio), películas finas que apresentam uma superfície de ácido poliláctico (por exemplo, películas finas de ácido poliláctico), películas finas que apresentam uma superfície de ácido poliglicólico (por exemplo, películas finas de ácido poliglicólico),

películas finas de uma superfície de um copolímero ou copolímero em bloco de ácido láctico e ácido poliglicólico (por exemplo, películas finas de um copolímero ou copolímero em bloco de ácido láctico e ácido poliglicólico) e películas finas que apresentam uma superfície de hidroxiapatita (por exemplo, películas finas de hidroxiapatita). A aplicação de um ingrediente ativo sobre a película biocompatível pode ser realizada, por exemplo, por meio da adição às gotas de uma solução do ingrediente ativo sobre a película biocompatível e secagem da solução adicionada. Por exemplo, cerca de 10 a 50 μg do ingrediente ativo farmacêutico podem ser aplicados à película biocompatível.

[074]A composição farmacêutica para a administração tópica contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o uso na modificação do couro cabeludo ou pele, melhora o couro cabeludo da proximidade de uma parte de administração depois da administração e o efeito é gradualmente propagado para os arredores com o tempo. Portanto, a composição pode ser espalhada sobre o couro cabeludo ou pele para propagar o efeito da presente invenção aos arredores com o tempo ou densificada para reduzir o tempo exigido para a propagação. Em certas formas de realização da presente invenção, a densidade de administração da composição farmacêutica da presente invenção não é particularmente limitada e pode ser de 1 local por 1 cm2 a 10 cm2, 1 cm2 a 5 cm2, 1 cm2 a 4 cm2, 1 cm2 a 3 cm2, 1 cm2 a 2 cm2, 0,5 cm2 a 2 cm2 ou 0,7 cm2 a 1,5 cm2. Em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica da presente invenção pode ser administrada em uma densidade de administração, por exemplo, de 1 ou menos local por 0,5 cm2, 1 ou menos local por 0,6 cm2, 1 ou menos local por 0,7 cm2, 1 ou menos local por 0,8 cm2, 1 ou menos local por 0,9 cm2, ou 1 ou menos por 1 cm2. Em certas formas de realização da presente invenção, por exemplo, a composição farmacêutica da presente invenção pode ser topicamente administrada imediatamente sob a pele ou sobre a camada da derme até a camada adiposa superior. A administração pode ser realizada, por exemplo, por injeção.

[075]Uma quantidade terapeuticamente eficaz do ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser administrada na forma de uma solução em um quantidade, por exemplo, de 10 μL a 50 μL, 15 μL a 30 μL, 15 μL a 25 μL ou cerca de 20 μL por local.

[076]O sítio de administração pode ser apropriadamente selecionado e, por exemplo, a composição pode ser administrada a todo o couro cabeludo ou administrada a uma parte mais deficiente em comparação a outras partes do couro cabeludo inteiro.

[077]Surpreendentemente, os presentes inventores descobriram que, quando a composição é administrada a um sítio relativamente satisfatório do couro cabeludo inteiro, o efeito da mesma é facilmente propagado. A parte satisfatória apresenta alta responsividade à composição farmacêutica da presente invenção e o efeito é propagado aos arredores da administração local. O efeito de melhora através da propagação é mais notável em um local mais próximo ao local de administração e cobre uma faixa de vários cm (por exemplo, 1 cm a 4 cm) a partir do local de administração. Portanto, a composição pode ser administrada a um sítio relativamente satisfatório do couro cabeludo. Visto que o efeito de melhora é propagado a partir do sítio satisfatório até o sítio relativamente deficiente, um efeito terapêutico sobre o sítio deficiente pode ser obtido por meio da administração da composição apenas ao sítio relativamente satisfatório.

[078]Portanto, a composição pode ser administrada a um sítio relativamente satisfatório do couro cabeludo para melhorar uma parte mais deficiente através do efeito de propagação. Quando a melhora é obtida em um sítio relativamente deficiente, a responsividade à composição farmacêutica da presente invenção é acentuada. Portanto, a composição pode ser administrada a um sítio relativamente satisfatório do couro cabeludo para promover a melhora de uma parte mais deficiente através do efeito de propagação, seguido por administração da composição farmacêutica da presente invenção à parte que era deficiente.

[079]É considerado que cada vez que a composição farmacêutica da presente invenção é administrada, estímulos do tecido, a atividade de macrófagos e a atividade de células adiposas imaturas são aumentados para acentuar a função de reparo no sítio de administração. É desejável administrar a composição à luz do sintoma (condição) de um paciente e do grau de melhora.

[080]Em certas formas de realização, a administração tópica pode ser aplicada entre 150 locais a 250 locais (por exemplo, cerca de 200 locais) ou 250 locais a 800 locais por couro cabeludo do adulto e o número de locais de administração pode ser determinado, conforme necessário. Neste relatório, o termo “cerca de” significa a inclusão de uma faixa de valor numérico dentro de 10 % ou 5 % a partir do valor numérico após este termo.

[081]O intervalo de administração da composição farmacêutica da presente invenção não é particularmente limitado e, por exemplo, a composição farmacêutica pode ser administrada em um intervalo de uma vez por mês a uma vez por 6 meses, duas vezes por mês a uma vez por 5 meses, duas vezes por mês a uma vez por 4 meses, duas vezes por mês a uma vez por 3 meses, duas vezes por mês a uma vez por 2 meses, 1,5 vez a mês a uma vez por 1,5 mês, ou 1,2 vez ao mês a uma vez por 1,2 mês, por exemplo cerca de uma vez por mês.

[082]A composição farmacêutica da presente invenção exibe um efeito de modificação do couro cabeludo ou pele mesmo quando administrada apenas uma vez e este efeito pode ser sustentado. Portanto, a administração pode ser realizada uma vez ou duas ou mais vezes. A composição farmacêutica da presente invenção pode ser continuamente administrada até que o tratamento seja concluído ou até que um paciente esteja satisfeito. Particularmente, de acordo com a presente invenção, o efeito de modificação do couro cabeludo ou pele é exibido mais cedo em uma parte que apresenta uma condição satisfatória do que em uma parte que apresenta uma condição ruim. Portanto, o período de tratamento e o intervalo de tratamento podem variar, dependendo da condição do couro cabeludo ou pele. O período de tratamento com a composição farmacêutica da presente invenção pode ser, por exemplo, um tratamento no período mais curto a 3 anos, um tratamento no período mais curto a 2 anos, um tratamento no período mais curto a 1,5 ano, um tratamento no período mais curto a 1 ano, um tratamento no período mais curto a oito meses, um tratamento no período mais curto a seis meses ou um tratamento no período mais curto a quatro meses. A composição farmacêutica da presente invenção pode ser administrada antes, quando ou depois que uma alteração relacionada à idade é observada no cabelo, couro cabeludo ou pele. A administração da composição farmacêutica da presente invenção pode ser iniciada novamente antes, quando ou depois que uma alteração relacionada à idade é observada no cabelo, couro cabeludo ou pele de um indivíduo depois do tratamento com a composição farmacêutica.

[083]Em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica, de acordo com (A) acima pode ser uma composição farmacêutica para rejuvenescimento ou promoção do rejuvenescimento do couro cabeludo ou pele. Em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica, de acordo com (A) acima pode ser uma composição farmacêutica para regeneração ou promoção da regeneração do couro cabeludo ou pele. Em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica, de acordo com (A) acima, pode ser uma composição farmacêutica para a ativação do couro cabeludo ou pele. Em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica, de acordo com (A) acima, pode ser usada em combinação com um agente de aumento de cabelo ou um agente de crescimento de cabelo.

[084]Em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica, de acordo com (B) acima, pode ser usada para tratar uma ferida. Na presente invenção, o tratamento de uma ferida pode ser a cicatrização de uma ferida, promoção da cicatrização de uma ferida ou aceleração da cicatrização de uma ferida.

[085]A melhora do couro cabeludo induz um efeito sobre o cabelo por si só. Conforme mostrado nos Exemplos abaixo, exemplos do efeito de melhora do cabelo incluem a redução de cabelos brancos, redução do peso das partes de cabelos brancos, redução da proporção de cabelos brancos, melhora da rugosidade das cutículas e melhora da espessura e da taxa de crescimento do cabelo. Portanto, em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica, de acordo com (C) acima, pode ser uma composição farmacêutica para o uso na redução de cabelos brancos. Exemplos da redução de cabelos brancos incluem a redução do número de cabelos brancos, redução do peso das partes de cabelos brancos e redução da proporção dos cabelos brancos. A redução dos cabelos brancos pode estar associada ao aumento no número de cabelos coloridos com vários tipos de melanina, aumento no peso de tais partes do cabelo e aumento na proporção de tais cabelos. Em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica, de acordo com (C) acima, pode ser uma composição farmacêutica para o uso na melhora da rugosidade das cutículas do cabelo. Exemplos da melhora da rugosidade das cutículas do cabelo incluem o aumento do nível de alinhamento das cutículas e redução da área das regiões onde as cutículas estão desordenadas. Em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica, de acordo com (C) acima, pode ser uma composição farmacêutica para o uso na melhora da espessura ou da taxa de crescimento do cabelo. Exemplos da melhora da espessura do cabelo incluem espessamento do cabelo, aumento do número de cabelos espessos e aumento da proporção dos cabelos espessos. Exemplos da melhora da taxa de crescimento incluem aumento do número ou da proporção de cabelos que apresentam uma taxa de crescimento de 10 mm ou mais, 11 mm ou mais, 12 mm ou mais, 13 mm ou mais, 14 mm ou mais, 15 mm ou mais, 16 mm ou mais, 17 mm ou mais, 18 mm ou mais, 19 mm ou mais, 20 mm ou mais ou 21 mm ou mais por mês.

[086]Em certos aspectos, a presente invenção fornece: (a) um método para a modificação do couro cabeludo ou pele em um indivíduo em necessidade do mesmo (em um sítio em necessidade do mesmo), o método incluindo administrar topicamente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ao couro cabeludo ou pele; (b) um método para tratar uma ferida em um indivíduo em necessidade do mesmo, o método incluindo administrar topicamente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ao couro cabeludo ou pele; (c) um método para a promoção do aumento do cabelo em um indivíduo em necessidade do mesmo ou modificação do cabelo em um indivíduo em necessidade do mesmo, o método incluindo administrar topicamente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ao couro cabeludo ou pele; e (d) um método para a promoção da osteogênese em um indivíduo em necessidade do mesmo, o método incluindo administrar topicamente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo (particularmente um ácido graxo saturado) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um sítio em necessidade de osteogênese (por exemplo, sítio danificado do osso) (neste relatório, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo (particularmente um ácido graxo saturado) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser administrada em um estado de ser aplicada a uma película biocompatível).

[087]Em certos aspectos, a presente invenção fornece: (α) o uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em fabricação de uma formulação farmacêutica para a administração tópica para o uso na modificação do couro cabeludo ou pele; (β) o uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de uma formulação farmacêutica para a administração tópica para o uso no tratamento de uma ferida; (γ) o uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de uma formulação farmacêutica para a administração tópica para o uso na promoção do crescimento do cabelo ou modificação do cabelo; e (δ) o uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de uma composição farmacêutica ou uma formulação farmacêutica para o uso na promoção da osteogênese (neste relatório, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo (particularmente um ácido graxo saturado) ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na preparação farmacêutica pode ser fornecida em um estado de ser aplicada a uma película biocompatível).

[088]Em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica pode conter excipientes (por exemplo, solventes, cossolventes, solubilizantes, agentes umectantes, suspensões, espessantes, emulsificantes, agentes quelantes, tampões, soluções tampão, ajustadores de pH, antioxidantes, agentes redutores, agentes antibacterianos, preservantes, enchedores, agentes de proteção e/ou agentes isotônicos), além de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica pode estar na forma de uma injeção. Em certas formas de realização da presente invenção, a composição farmacêutica pode ser topicamente administrada, por exemplo, intracutânea ou subcutaneamente administrada.

EXEMPLOS Exemplo 1: Preparação e administração do leite (1) O leite foi preparado da seguinte maneira.

[089]Como leite a ser administrado a seres humanos, chamado colostro (leite coletado dentro de três semanas depois da liberação) foi obtido a partir de mulheres de 34 e 40 ano de idade usando uma bomba de leite.

[090]Como leite a ser administrado aos ratos, colostro bovino obtido por ordenha manual ou leite bovino comercialmente disponível foi usado como leite bovino. (2) O leite foi administrado da seguinte maneira.

[091]Leite foi injetado em uma quantidade de 20 μL por local na metade direita ou na metade esquerda de um couro cabeludo humano ou de uma pele dorsal de um rato. Pata os seres humanos, 2 mL de colostro no total foram injetados em um paciente em uma metade da cabeça do paciente (isto é, 100 locais por paciente). Para os ratos, três regiões foram definidas entre a cabeça e a cauda da parte dorsal de um rato Wistar com 12 semanas de vida (macho) e cada região foi dividida entre a esquerda e a direita da espinha dorsal em duas regiões para definir um total de seis regiões sobre a parte dorsal. Leite foi injetado em uma quantidade de 20 μL por local em dois locais na proximidade do centro de cada região. A distância entre os dois locais foi de 1 cm. Exemplo 2: Alteração na qualidade do cabelo

[092]Neste Exemplo, a melhora das cutículas do cabelo antes e depois do tratamento foi examinada.

[093]O colostro humano descrito no Exemplo 1 foi usado como leite. A taxa de crescimento média do cabelo é de cerca de 10 mm por mês. Um cabelo foi coletado a partir de cada sítio de administração e de não administração e considerando a taxa de crescimento de cabelo do paciente, uma parte do cabelo correspondente a três meses antes do tratamento e uma parte do cabelo correspondente a três meses e meio depois do início do tratamento foram coletadas como uma amostra. No dia da coleta do cabelo ou no dia seguinte, o cabelo do sítio de exame foi firmemente preso a uma placa de fixação com resina. No dia seguinte ou depois, o cabelo foi submetido à fixação de carbono e, no mesmo dia, o estado das cutículas do cabelo foi observado com um microscópio eletrônico de varredura por um método convencional. Como um controle negativo, uma parte não tratada (sítio sem administração) do mesmo paciente foi usada. Uma parte recém crescida (lado da raiz) e uma parte existente (lado da extremidade da ponta) foram comparadas entre si. A Figura 1 mostra um exemplo representativo. A Figura 1 mostra uma imagem do microscópio eletrônico do cabelo do mesmo paciente.

[094]Os resultados mostraram que para o cabelo tratado, as cutículas foram ásperas sobre o lado da extremidade da ponta, ao passo que as cutículas foram ordenadas sobre o lado da raiz onde o cabelo foi parte recém crescida e, assim, a diferença de qualidade do cabelo foi evidentemente melhorada. Por outro lado, para o cabelo da parte não tratada como um controle negativo, as cutículas foram ásperas sobre o lado da raiz e sobre o lado da extremidade da ponta e não houve efeito de melhora da qualidade do cabelo na parte não tratada.

[095]A mesma avaliação foi realizada em um número maior de pacientes. A avaliação foi realizada, de acordo com os seguintes scores com base nas imagens do microscópio eletrônico. Sete profissionais de saúde, incluindo médicos etc. realizaram a avaliação. Um valor médio de escores foi calculado.

TABELA DE ESCORE PARA A AVALIAÇÃO DA QUALIDADE DO CABELO

Escore 5: As cutículas são ordenadas e não são ásperas. Escore 4: As cutículas são mais ordenadas do que a média e são levemente ásperas. Escore 3: As cutículas são tão ordenadas quanto a média. Escore 2: As cutículas são mais ásperas do que a média e são levemente descascadas. Escore 1: As cutículas são, em geral, ásperas e são, em geral, descascadas. A Tabela 1 mostra os resultados. Tabela 1: Melhora na avaliação da qualidade do cabelo por tratamento Paciente Escore Escore Escore No (raiz sobre o lado (raiz sobre o lado (extremidade da ponta sobre tratado) não tratado) o lado tratado) 1 4,43 2,86 3,29 1 3,71 3,00 2,00 2 3,29 3,86 3,00 2 3,29 2,29 3,29 3 3,43 3,29 3,00 3 3,43 2,71 3,14 4 3,43 3,29 2,57 4 3,14 2,14 2,00 Média 3,52 2,93 2,79 total

[096]Conforme mostrado na Tabela 1, uma diferença entre os escores da extremidade da ponta e a raiz do mesmo cabelo e os resultados mostraram que a raiz apresentou um escore maior tanto no lado tratado quanto no lado não tratado. Especificamente, o escore médio para as imagens do microscópio eletrônico das raízes sobre o lado tratado foi de 3,52, ao passo que o escore médio para as extremidades da ponta sobre o lado tratado foi de 2,79, e a diferença entre estes escore médios foi estatisticamente significante (p = 0,017). Mais especificamente, o grau de melhora (escore da raiz - escore da extremidade da ponta) foi de 0,73 sobre o lado tratado e de 0,39 sobre o lado não tratado e, assim, o grau de melhora foi maior sobre o lado tratado (n = 4, 33 a 56 anos de idade, quatro mulheres, idade média de 45,8). Conforme mostrado na Tabela 1, o escore médio para as raízes sobre o lado tratado foi de 3,52, ao passo que o escore médio para as raízes sobre o lado não tratado foi de 2,93, e, assim, a diferença entre os escores para as raízes sobre o lado tratado e o lado não tratado foi estatisticamente significante (p = 0,036). Isto revelou que, devido à administração do leite, um efeito de melhora da qualidade do cabelo foi exibido sobre uma porção da raiz sobre o lado tratado, isto é, uma parte do cabelo recém produzido depois do tratamento. Exemplo 3: Alteração na qualidade do cabelo

[097]Neste Exemplo, atenção foi dada à cor do cabelo (cabelos brancos) e o efeito de melhora da cor do cabelo foi examinado antes e depois do tratamento.

[098]Especificamente, as extremidades dos olhos do paciente foram estendidas, dois pontos nos quais as extremidades estendidas que cruzavam as linhas que se conectam às orelhas e ao topo da cabeça foram tatuados com tinta nanquim e o cabelo foi raspado dentro de um círculo com um raio de 2 cm em torno da marcação. Três dias depois da raspagem do cabelo, 2 mL do colostro humano descrito no Exemplo 1 foram injetados no couro cabeludo na metade da cabeça. Neste relatório, o colostro humano foi injetado em 100 locais em uma quantidade de 20 μL por local. O couro cabeludo foi observado depois de um mês. Um tricograma foi feito com a marcação ajustada ao centro a cada tempo (Canon Power Shot A520, Tóquio, Japão), o cabelo dentro de um círculo dentro da faixa fotografada e tendo um diâmetro de 11 mm (uma área de 95 mm2) com a tatuagem no centro foi fotografado e a quantidade de cabelo foi visualmente medida.

[099]Os resultados mostraram que, com respeito à parte depilada, todos os três pacientes com cabelos brancos antes do tratamento reduziram os cabelos brancos seis meses depois do tratamento de injeção única e os cabelos brancos foram reduzidos em 7,7 cabelos/95 mm2 na faixa fotografada acima (n = 3). O número de cabelos brancos foi reduzido para 92,9 % antes e depois do tratamento sobre o lado tratado. Onde o número de cabelos brancos antes do início do tratamento sobre o lado não tratado é definido como 100, a proporção de redução de cabelos brancos sobre o lado não tratado foi menor em 28,2 % do que aquela sobre o lado tratado quando o número de cabelos brancos antes do início do tratamento sobre o lado tratado é definido como 100, e isto mostra que os cabelos brancos foram bastante reduzidos sobre o lado tratado (n = 3).

[0100]A Figura 2A mostra um exemplo representativo do cabelo da cabeça de um paciente (mulher de 48 anos de idade) depois da passagem de meio ano depois da raspagem do cabelo e injeção única de colostro. Conforme mostrado na Figura 2A, os cabelos brancos não foram reduzidos no sítio sem administração e os cabelos brancos foram evidentemente reduzidos no sítio de administração. Especificamente, no sítio sem administração, o número de cabelos brancos foi de 49 antes do tratamento e aumentou para 63 depois de seis meses, ao passo que no sítio de administração, o número de cabelos brancos foi de 85 antes do tratamento e diminuiu para 66 depois do tratamento.

[0101]Além disso, para um paciente (homem de 50 anos de idade) em quem o colostro humano descrito no Exemplo 1 foi injetado no couro cabeludo quatro vezes em uma quantidade de 20 μL por local, o lado da cabeça treze meses depois do início do tratamento foi comparado ao lado da cabeça sobre o lado não tratado. A Figura 2B mostra os resultados. Conforme mostrado na Figura 2B, a área das regiões dos cabelos brancos foi de 833 cm2 no lado da cabeça sobre o lado não tratado, ao passo que a área dos cabelos brancos foi de 294 cm2 no lado da cabeça sobre o lado tratado. Assim, foi revelado que a administração de colostro reduziu os cabelos brancos. Na Figura 2B, uma grade foi sobreposta sobre uma fotografia do lado da cabeça e, entre as células da grade, as células determinadas como brancas por inspeção visual receberam um símbolo “O”. Sobre o lado tratado, o número de símbolos “O” foi evidentemente menor em comparação ao lado não tratado. Exemplo 4: Verificação do efeito de modificação do couro cabeludo

[0102]A modificação do couro cabeludo, com base em quais cabelos foram modificados, conforme descrito acima, foi verificada.

[0103]Como leite, o colostro humano descrito nos Exemplos foi usado. Leite foi injetado no couro cabeludo do paciente em 100 locais em uma quantidade de 20 μL por local (seis pacientes foram injetados uma vez e um paciente foi injetado quatro vezes em um intervalo de uma vez por mês).

[0104]No exame de eco usando uma sonda em 10 Mz, uma alteração na espessura da camada adiposa de tecidos subcutâneos do couro cabeludo depois da administração única foi observada. Neste exame, é considerado que a região de uma parte inferior a partir da região da glândula sebácea é medida como a espessura de uma região aproximadamente até a camada da derme (o valor medido não inclui a camada da derme). A Figura 3 mostra os resultados. Na Figura 3, os símbolos “#1” a “#6” indicam que os dados são obtidos um a seis meses, respectivamente, depois do tratamento. Conforme mostrado na Figura 3, a espessura da camada adiposa aumentou levemente, mas não mudou muito seis meses depois do início do tratamento. Exemplo 5: Imagem do tecido do couro cabeludo

[0105]Nos Exemplos acima, um efeito de melhora da cutícula e um efeito de redução de cabelos brancos foram confirmados. Neste Exemplo, a quantidade de colágeno no couro cabeludo foi examinada para determinar se estes efeitos surgiram a partir da melhora do couro cabeludo.

[0106]Leite foi subcutaneamente administrado no couro cabeludo de um paciente humano em uma quantidade de 20 μL por local. A administração foi realizada uma vez por mês. Como o leite, o colostro humano descrito no Exemplo 1 foi usado.

(1) Alteração na imagem do colágeno

[0107]Primeiro, um aumento ou diminuição nas quantidades de colágeno tipo I e colágeno tipo III foi observado. Especificamente, uma seção de um tecido do couro cabeludo (superfície que se estende para o osso do crânio a partir da epiderme) foi preparada e usando reagente Picrosirius Red Stain Kit (Polysciences, Inc., Cat#: 24901-250), colágeno tipo I e colágeno tipo III foram pigmentados, de acordo com as instruções escritas do fabricante. O colágeno tipo I foi pigmentado de amarelo e o colágeno tipo III foi pigmentado de verde. Neste sistema, colágeno, exceto o colágeno tipo III, foi pigmentado de amarelo avermelhado.

[0108]As imagens pigmentadas foram observadas com um microscópio (Nikon Corporation ou Olympus Corporation) equipado com um dispositivo de filtro polarizador e foram fotografadas com uma câmera (DP-22 a partir da Olympus Corporation ou DS-Fi3 a partir da Nikon Instech Co., Ltd.) que acompanha o microscópio. As imagens foram armazenadas em um computador como imagens digitais em uma escala de cinza e a quantidade de colágeno foi estimada a partir das intensidades de pixels. A Figura 4A mostra uma amostra de couro cabeludo a partir de uma paciente do sexo feminino (49 anos de idade) depois da passagem de meses depois da administração única e a Figura 4B mostra um paciente do sexo masculino (50 anos de idade) depois da passagem de quinze meses depois do tratamento inicial, com a administração realizada quatro vezes em um intervalo de uma vez por mês.

[0109]Os resultados mostraram que o colágeno tipo I e o colágeno tipo III estavam presente antes do tratamento e sobre o lado não tratado, conforme mostrado nas Figuras 4A e 4B.

[0110]O número de pixels verdes (correspondentes à quantidade de colágeno tipo III), o número de pixels amarelos (correspondentes à quantidade de colágeno tipo I) e o número de pixels amarelos avermelhados (correspondentes à quantidade total de colágeno, exceto colágeno tipo III) na Figura 4A são coletivamente mostrados em uma tabela. Tabela 2: Resultados da análise de pixels nas fotografias da Figura 4A Aumento ou diminuição Antes do Depois do Número de pixels (porcentagem de diferença tratamento tratamento de pontos) 27,084 (49,6 11,217 (19,6 Diminuição de 30 % de Verde %) %) pontos Amarelo 27,546 (50,4 46,022 (80,4 Aumento de 30 % de pontos avermelhado %) %) O número de 16,469 (30,1 35,635 (62,3 Aumento de 32,1 % de pixels amarelos %) %) pontos incluídos 54,630 (100 57,239 (100 Total %) %) *O número indica o número de pixels na fotografia e o número entre parênteses indica uma proporção do mesmo para o número de pixels total.

[0111]Conforme mostrado na Tabela 2, é evidente que no paciente depois da passagem de cinco meses depois de administração única, a proporção de colágeno tipo III diminui de 49,6 % a 19,6 % e a proporção de colágeno tipo I aumenta de 30,1 % a 62,3 %. É evidente que a quantidade total de todo o colágeno, exceto o colágeno tipo III, aumentou similarmente de 50,4 % para 80,4 % e este aumento pode resultar principalmente do aumento na quantidade de colágeno tipo I.

[0112]O número de pixels verdes (correspondente à quantidade de colágeno tipo III), o número de pixels amarelos (correspondente à quantidade de colágeno tipo I) e o número de pixels amarelos avermelhados (correspondente à quantidade total de colágeno, exceto colágeno tipo III) na Figura 4B são coletivamente mostrados em uma tabela.

Tabela 3: Resultados da análise de pixels nas fotografias da Figura 4B Aumento ou diminuição Lado não Lado Número de pixels (porcentagem de diferença de tratado tratado pontos) 9,640 1,815 (2,8 Verde Diminuição de 23,5 % de pontos (26,3 %) %) 27,023 62,214 Amarelo avermelhado Aumento de 23,5 % de pontos (73,7 %) (97,2 %) Número de pixels 9,047 36,071 Aumento de 31,7 % de pontos amarelos incluídos (24,7 %) (56,3 %) 36,663 64,029 Total (100 %) (100 %) *O número indica o número de pixels na fotografia e o número entre parênteses indica uma proporção do mesmo para o número de pixels total.

[0113]Conforme mostrado na Tabela 3, verificou-se que no paciente quinze meses depois do início do tratamento, a proporção de colágeno tipo III diminuiu consideravelmente de 26,3 % para 2,8 % e a proporção de colágeno tipo I aumentou de 24,7 % para 56,3 % sobre o lado tratado em comparação ao lado não tratado (veja a Figura 4B). É evidente que a quantidade total de todo o colágeno, exceto colágeno tipo III, aumentou similarmente de 73,7 % para 97,2 % e este aumento pode resultar principalmente do aumento na quantidade de colágeno tipo I.

[0114]A mesma tendência foi exibida na comparação antes e depois da comparação sobre o lado tratado e a comparação esquerda e direita entre o lado não tratado e o lado tratado, e foi revelado que a administração do leite diminuiu a quantidade de colágeno tipo III e aumentou a quantidade de colágeno tipo I. Além disso, uma observação similar foi feita nas amostras humanas (n = 3) e os resultados mostraram que, para todas as amostras, a administração do leite diminuiu a quantidade de colágeno tipo III e aumentou a quantidade de colágeno tipo I. Estes resultados mostraram que a quantidade de colágeno pigmentado de amarelo avermelhado (colágeno, exceto colágeno tipo III) aumentou similarmente até a quantidade de colágeno tipo I pigmentado de amarelo.

[0115]Um fenômeno em que a quantidade de colágeno tipo III diminui e a quantidade de colágeno tipo I aumenta ocorre no reparo de tecidos, particularmente, na cicatrização de feridas. Os resultados neste Exemplo indicam que a administração do leite induz o reparo de tecidos no couro cabeludo e pele. (2) Rejuvenescimento das células adiposas

[0116]Em seguida, o rejuvenescimento de células adiposas foi observado.

[0117]Conforme uma célula adiposa cresce, a maior parte do citoplasma se transforma em gotículas de gordura, de modo que a gotícula de gordura é acumulada no citoplasma, levando ao aumento da célula. Assim, uma célula grande significa uma célula antiga amadurecida e uma célula pequena é considerada uma célula nova imatura (isto é, célula adiposa imatura). Neste Exemplo, foi examinado se a administração do leite aumentou o número de células imaturas pequenas. Mais especificamente, observou-se uma seção do tecido do couro cabeludo humano que recebeu 20 μL do leite para examinar uma alteração no tamanho das células adiposas na camada adiposa. Imagens das células adiposas foram tomadas como círculos aproximados e as células foram classificadas como S, M ou L. As células com o diâmetro de 51 μm ou menor foram definidas como “S”, as células com o diâmetro maior do que 51 μm e 63 μm ou menor foram definidas como “M” e as células com o diâmetro maior do que 63 μm foram definidas como “L”. As células de cada classe foram contadas. Os pacientes utilizados foram os seguintes: um paciente seis meses depois da administração única (em seguida, referido como “paciente 1”); e um paciente quinze meses depois do início do tratamento com a administração realizada quatro vezes em um intervalo de uma vez por mês (em seguida, referido como “paciente 2”). A Figura 5 mostra os resultados.

[0118]Conforme mostrado na Figura 5, a administração do leite aumentou consideravelmente a proporção de células adiposas “S” tanto no paciente seis meses depois do tratamento (paciente 1, homem de 51 ano de idade) quanto no paciente quinze meses depois do tratamento (paciente 2, homem de 50 anos de idade). A comparação entre o paciente 1 e o paciente 2 mostraram que a proporção de células adiposas “S” aumentou mais consideravelmente no paciente 2. Isto revelou que o tratamento por quatro vezes aumentou a proporção de células adiposas “S” mais do que o tratamento único.

[0119]Estes resultados mostram que a administração do leite aumenta o número de células imaturas, levando ao rejuvenescimento dos tecidos. Além disso, é indicado que o rejuvenescimento dos tecidos pode levar ao aumento da capacidade de reparo do tecido. Exemplo 6: Efeito sobre a cicatrização de feridas

[0120]Neste Exemplo, foi examinado se a administração do leite apresentou ou não um efeito de acelerar a cicatrização de feridas na pele.

[0121]Formação de feridas: os pelos na parte dorsal de um rato Wistar com 12 semanas de vida foi raspado com tosquiadeiras e um defeito de pele circular de espessura total com um diâmetro de 8 mm foi produzido em cada um dos lados esquerdos e direitos da cabeça e dos lados esquerdos e direitos da cauda. O defeito de pele de espessura total foi formado em quatro locais por corpo.

[0122]Administração do leite: 20 μL do leite foram subcutaneamente injetados em cada um dos quatro locais, isto é, superior, inferior, esquerdo e direito, em um local a 4 mm da borda periférica da ferida. Como o leite, o leite bovino comercialmente disponível esterilizado por meio de aquecimento (a 130 graus durante 2 segundos e 65 graus durante 30 minutos), conforme descrito no Exemplo, 1 foi usado.

[0123]Administração de ácido graxo: Como um ácido graxo contido no leite, água purificada estéril (líquido de administração) contendo ácido palmítico, ácido esteárico, ácido mirístico, ácido linolênico, ácido α-linoleico e ácido oleico, respectivamente, foi administrada. Neste relatório, a água foi aquecida e administrada para os ácidos graxos saturados e a água foi administrada na temperatura ambiente para os ácidos graxos insaturados. 20 μL do líquido de administração (contendo 1 mg do ácido graxo) foram subcutaneamente administrados em cada um dos quatro locais, isto é, superior, inferior, esquerdo e direito, em um local a 4 mm da borda periférica da ferida. Escore de cicatrização de feridas Escore 5: Cicatrizada Escore 4: A proporção de redução do sítio da área da ferida é de 70 % ou mais. Escore 3: A proporção de redução do sítio da área da ferida é de 50 % ou mais e menos do que 70 %. Escore 2: A proporção de redução do sítio da área da ferida é de 20 % ou mais e menos do que 50 %. Escore 1: A proporção de redução do sítio da área da ferida é menor do que 20 %.

[0124]O resultado foi fornecido como uma proporção obtida por meio da divisão do escore acima pelo escore para a solução salina fisiológica. Conforme mostrado na Figura 6A, um efeito de promoção de cicatrização de feridas foi exibido em um grupo que recebeu o leite.

[0125]Dois tubos de 8 mL de leite comercialmente disponível esterilizado em uma temperatura baixa (65 graus durante 30 minutos) foram centrifugados por um separador centrífugo (2600 g  6 minutos), 2 mL de um quarto do sobrenadante exclusivo de uma parte de chicote foram coletados a partir de cada tubo os dois líquidos coletados foram combinados para obter 4 mL de um líquido e 4 mL do líquido resultante foram agitados e usados para os experimentos (em seguida, a amostra obtida é referida como um “amostra centrifugada”). A amostra centrifugada obtida foi administrada ao sítio da ferida em uma dosagem de 20 μL por local da mesma maneira descrita acima. Os resultados são mostrados em “Amostra Centrifugada” na Figura 6A.

[0126]Conforme mostrado na Figura 6A, a amostra centrifugada exibiu um efeito de melhora de cicatrização de feridas equivalente a ou maior do que aquele do leite. Isto indicou que o efeito de cicatrização de feridas do leite foi um efeito dos ingredientes contidos em um componente que não foi precipitado por centrifugação. Foi mostrado que as feridas foram naturalmente cicatrizadas depois da administração da solução salina fisiológica e tanto a administração do leite quanto a administração da amostra centrifugada promoveram a cicatrização em comparação à cicatrização natural depois da administração da solução salina fisiológica (Figura 6A).

[0127]Em seguida, um efeito de promoção de cicatrização de feridas de lactoferrina foi examinado. Como lactoferrina, Nice rim essence 62971 (nome comercial) adquirida a partir da Lion Corporation foi usada e administrada em um local em uma quantidade de 20 μg ou 60 μg da mesma maneira descrita acima. Especificamente, a lactoferrina foi moída e, depois, completamente dissolvida em água purificada. A concentração de lactoferrina foi ajustada, de modo que uma quantidade de injeção de 20 μL incluiu a quantidade de administração acima. O resultado foi fornecido como um valor obtido por meio da divisão de cada um dos escores depois de sete dias e depois de dez dias pelo escore para o grupo de administração solução salina fisiológica. A Figura 6B mostra os resultados. Conforme mostrado na Figura 6B, a lactoferrina não exibiu um efeito promotor significante na cicatrização de feridas. Isto mostrou que os ingredientes, exceto lactoferrina, apresentaram um efeito de promoção de cicatrização de feridas.

[0128]Considera-se que leite cru normal contém lactoferrina (também referida como “LF”) em uma quantidade de cerca de 3 mg por L. Assim, 20 μL de leite cru contêm cerca de 0,06 μg de lactoferrina. A lactoferrina é sensível ao calor e, assim, pode ser principalmente eliminada a partir do leite bovino esterilizado por meio de aquecimento em uma temperatura alta e usada nos Exemplos acima (veja, Mirai Noro, et al., “Electrophoresis” 59: 21 a 24, 2015). Portanto, a conclusão de que lactoferrina não é um ingrediente ativo é sustentada pelo fato de que um efeito de promoção de cicatrização de feridas foi exibido na administração de leite bovino esterilizado em uma temperatura alta e um efeito de promoção de cicatrização de feridas foi exibido na administração da amostra centrifugada, ao passo que quase não houve efeito de promoção de cicatrização de feridas na administração de lactoferrina.

[0129]O Exemplo acima revela que a administração do leite ou de um sobrenadante do leite centrifugado promove a cicatrização de feridas. O Exemplo acima também indica que a administração do leite ou de um sobrenadante do leite centrifugado pode vitalizar a regeneração de tecidos da pele.

[0130]Em seguida, os ingrediente ativos do leite foram identificados. Especificamente, os ácidos graxos contidos no leite foram administrados a uma parte da ferida, conforme descrito acima e foi examinado se um efeito de promoção de cicatrização de feridas foi ou não exibido. A Figura 6C mostra os resultados. Conforme mostrado na Figura 6C, revelou-se que ácido palmítico, ácido esteárico e ácido mirístico apresentam um alto efeito de promoção sobre a cicatrização de feridas. Isto revelou a possibilidade de que estes ácidos graxos poderiam contribuir para o efeito de promoção de cicatrização de feridas na administração do leite. Ácido oleico, ácido α-linolênico e ácido linoleico apresentaram um efeito de promoção de cicatrização de feridas fraco.

[0131]Óleo de soja comestível (fabricado pela RIKEN Nosan-Kako Co., Ltd., Fukuoka Factory), conhecido por ser rico em ácido palmítico, ácido esteárico, ácido linoleico e ácido α-linolênico, foi administrado a uma parte da ferida e foi examinada se um efeito de promoção de cicatrização de feridas foi ou não exibido. A Figura 6D mostra os resultados. Conforme mostrado na Figura 6D, o óleo de soja exibiu um alto efeito de promoção da cicatrização de feridas.

[0132]Os ácidos graxos representativos contidos no leite bovino comum e no óleo de soja e os teores dos mesmos em 1 g do leite bovino e 1 g do óleo de soja são mostrados abaixo. Tabela 4: Ácidos graxos típicos contidos no leite bovino e óleo de soja e teor dos mesmos (unidade: mg/g da parte comestível) Ingrediente do ácido graxo Teor (leite bovino) Teor (óleo de soja) Ácido mirístico 3,6 0,71 Ácido palmítico 10 99 Ácido esteárico 4 40 Ácido oleico * 7,6 220 Ácido linoleico 0,88 500 ácido α-linolênico 0,13 61 Tabelas Padrão da Composição de Alimentos no Japão, 2015 (sétima edição revisada), Seção Composição de Ácido Graxo Calculado a partir da Tabela 1. Composição de Ácido Graxo por 100 g da Parte Comestível *Ácido oleico inclui ácido cis-vacênico Exemplo 7: Detecção de macrófagos do tipo M2 residentes nos tecidos e células adiposas positivas para PPAR-γ nos tecidos do couro cabeludo depois da administração do leite

[0133]Foi relatado que no momento quando a regeneração do tecidos ocorre em tecidos periféricos (particularmente, tecido adiposos), o número de macrófagos do tipo M2 residentes nos tecidos aumenta (Satoh T., et al., Nature, 495: 524 a 528, 2013), células positivas para CD34 são produzidas ou o número de células adiposas positivas para PPAR-γ aumenta (Festa E, et al., Cell, 146: 761 a 71, 2011). Assim, neste Exemplo, foi examinado se o número de macrófagos do tipo M2 residentes nos tecidos aumentou ou o número de células positivas para PPAR-γ aumentou nos tecidos do couro cabeludo depois da administração de 20 μL do leite. Além disso, foi examinado se o número de células positivas para Ki67 aumentou como um marcador de ativação do crescimento celular na pele dorsal do rato Wistar com 12 semanas de vida. Os macrófagos do tipo M2 residentes nos tecidos foram detectados como células positivas para CD68 ou células positivas para CD163. Neste Exemplo, como leite, o colostro humano foi administrado a seres humanos e o colostro bovino foi administrado aos ratos.

[0134]Uma seção do tecido da pele dorsal de cada rato em um grupo de administração de leite (administração única) de uma pluralidade de ratos foi fixada por um método convencional e submetida à pigmentação imuno-histológica. Nos ratos, uma amostra foi coletada em dois locais: um sítio de administração e um sítio (distal) 10 mm de distância do sítio de administração, cinco semanas e oito semanas depois da administração. Nos pacientes, metade da cabeça foi tratada e a outra metade da cabeça não foi tratada. Uma seção com diâmetro de punção de 3 mm, incluindo uma região a partir da superfície do couro cabeludo até o topo do periósteo do crânio ou até o topo da fáscia temporal do paciente, foi fixada. Anticorpos primários e anticorpos secundários usados para pigmentação neste Exemplo são os seguintes.

Tabela 5: Anticorpos primários e anticorpos secundários usados para imuno- histológica pigmentação de amostras de rato Produto Ki-67 Designação Lote Fabricante No Anti-Rato de Camundongo Monoclonal Primário M7248 20030236 DaKo Dinamarca Antígeno Ki-67 (clone: MIB-5) Sistema LSAB2-HRP Secundário para o uso em Amostras K0609 - DaKo Dinamarca de Rato Produto CD68 Designação Lote Fabricante No ANTI-RATO de Primário Camundongo CD68 MCA341R 1014 BIO-RAD EUA (clone: ED1) Sistema LSAB2-HRP Secundário para o uso em Amostras K0609 - DaKo Dinamarca de Rato Produto PPAR γ Designação Lote Fabricante No Cell mAb de coelho PPAR γ Primário #2435 No 4 Signaling EUA (C26H12) Technology Anti-Coelho de Polímero Secundário Rotulado com K4003 - DaKo Dinamarca EnVision+Sistema- HRP

[0135]A Figura 7 mostra os resultados. Conforme mostrado na Figura 7, o número de células adiposas positivas para Ki67 e o número de macrófagos positivos para CD68 aumentaram cinco semanas depois da administração e diminuíram oito semanas depois da administração. Por outro lado, distalmente, as células positivas não foram observadas cinco semanas depois da administração e as células positivas para Ki67 e os macrófagos positivos para CD68 foram observados oito semanas depois da administração.

[0136]Isto revelou que a administração do leite aumentou o número de células adiposas positivas para Ki67, isto é, ativou células adiposas para vitalizar a divisão das células e aumentou o número de macrófagos nos tecidos. A partir das imagens de microscópio, as células adiposas positivas para Ki67 foram consideradas principalmente células adiposas e células-tronco adiposas. Entretanto, o número de células adiposas positivas para Ki67 e o número de macrófagos diminuíram oito semanas depois da administração. Por outro lado, surpreendentemente, o número de células adiposas positivas para Ki67 e o número de macrófagos positivos para CD68 aumentaram até distalmente mais tarde do que no sítio de administração. Isto indica que o efeito de administração do leite é propagado através dos tecidos.

[0137]Experimentos similares foram conduzidos em seres humanos. Tecidos humanos foram pigmentados com CD34, CD68, CD163 e PPAR-γ, além de CD31. Tabela 6: Anticorpos primários e anticorpos secundários usados para pigmentação imuno-histológica de amostras humanas

Produto CD31 Designação Lote Fabricante No Anti- Humano de Primário Camundongo M0823 000083027 DaKo Dinamarca Monoclonal CD31 Anti-Camundongo de Polímero Rotulado Secundário com K4001 - DaKo Dinamarca EnVision+Sistema-

HRP Produto CD34 Designação Lote Fabricante No. Anti-Humano de Primário Camundongo M7165 00048997 DaKo Dinamarca Monoclonal CD34 Anti-Camundongo de Polímero Rotulado Secundário com K4001 - DaKo Dinamarca EnVision+Sistema-

HRP Produto CD68 Designação Lote Fabricante No. Anticorpo monoclonal MCL- Primário de camundongo CD68- 211710 NOVOCASTRA Inglaterra CD68 KP1 Anti-Camundongo de Polímero Rotulado Secundário com K4001 - DaKo Dinamarca EnVision+Sistema-

HRP Produto CD163 Designação Lote Fabricante No. Anticorpo Monoclonal do Antígeno de Trans Genic Primário Superfície de KT013 TG201213 Japão Inc. Macrófagos Anti- Humano Anti-Camundongo de Polímero Rotulado Secundário com K4001 - Dako Dinamarca EnVision+Sistema-

HRP Produto PPAR γ Designação Lote Fabricante No. mAb de coelho Cell Signaling Primário #2435 No 4 EUA PPAR γ (C26H12) Technology Anti-Coelho de Polímero Rotulado Secundário com K4003 - Dako Dinamarca EnVision+Sistema-

HRP

[0138]A Figura 8A mostra a pigmentação de CD31 e a pigmentação de CD34. As células positivas para CD31 foram observadas apenas no endotélio vascular. Por outro lado, as células positivas para CD34 foram observadas em regiões, exceto nos vasos sanguíneos. Isto indicou que a administração do leite aumentou o número de células negativas para CD31 positivas para CD34 no local de administração. Conforme mostrado na Figura 8A, o número de células positivas para CD por área cinco meses depois do tratamento único foi maior do que aquele antes do tratamento (mulher de 49 anos de idade). O número de células positivas para CD34 foi de 106,7 em média (n = 3) sobre o lado não tratado, e de 129,7 em média (n = 3) sobre o lado tratado sobre a seção de punção de 3 mm total, e em todos os pacientes, o número de células positivas para CD34 aumentou sobre o lado tratado. As células positivas para CD34 são conhecidas como um marcador de células-tronco adiposas, e o aumento no número de células positivas para CD34 indica o aumento no número de células-tronco adiposas. Portanto, estes resultados revelaram que os tecido adiposos no sítio de administração do leite foram modificados para produzir células-tronco adiposas.

[0139]A Figura 8B mostra os resultados da pigmentação de macrófagos positivos para CD68 e células positivas para PPAR-γ. Conforme mostrado na Figura 8B, a administração de 20 μL do leite aumentou os números de macrófagos positivos para CD68, macrófagos positivos para CD163 e células positivas para PPAR-γ por área no ser humano (mulher de 49 anos de idade). No paciente do sexo masculino (50 anos de idade) depois da passagem de quinze meses depois do início do tratamento (administração de quatro vezes), a administração do leite aumentou os números de macrófagos positivos para CD68, macrófagos positivos para CD163 e células positivas para PPAR-γ por área sobre o lado tratado.

[0140]Assim, no sítio de administração do leite, o número de macrófagos do tipo M2 residentes nos tecidos aumentou, o que indica contribuição das células adiposas imaturas sendo células positivas para PPAR-γ.

[0141]Nas Figuras 8A e 8B, o símbolo “H” denota um folículo piloso, o símbolo “V” denota um vaso sanguíneo e o símbolo “S” denota uma glândula sebácea. Exemplo 8: Exame da alteração nos tecidos com lactoferrina (ingestão oral forçada em grande quantidade)

[0142]Como um teste comparativo, lactoferrina foi administrada ao invés do leite e foi examinado se o número de células positivas para CD68 e o número de células positivas para PPAR-γ aumentou ou não. Como lactoferrina, três tabletes de Nice rim essence 62971 (fabricada pela Lion Corporation) correspondentes a 300 mg de lactoferrina ativa (quantidade ingerida por dia por um ser humano) foram oralmente administrados a um rato Wistar com 12 semanas de vida (n = 3). A administração foi realizada uma vez por dia com os tabletes injetado (ingeridos à força) no estômago usando uma agulha de alimentação. Oito semanas depois da administração, uma seção embebida em parafina da pele dorsal foi preparada por um método convencional e submetida à pigmentação imuno-histológica. A Figura 9 mostra os resultados.

[0143]Conforme mostrado na Figura 9, tanto o número de células positivas para CD68 quanto o número de células positivas para PPAR-γ não aumentaram na administração de lactoferrina. Isto revelou que, embora a administração de lactoferrina apresente um efeito de aumento do cabelo, mas, diferentemente do leite, lactoferrina não apresentou efeito de modificação da pele. Tecidos normais (parte dorsal) de um rato Wistar com 18 semanas de vida foram pigmentados, respectivamente, com um anticorpo anti-CD68 e um anticorpo PPAR-γ e não houve diferença significante entre os tecidos normais e os tecidos oito semanas depois da administração de lactoferrina (20 semanas de vida). Foi relatado que a lactoferrina suprime a atividade de PPAR-γ,

enquanto suprime a diferenciação de células precursoras de gordura na gordura (veja, M. Yag, et al., Journal of Oral Science, 50: 419 a 425, 2008), e os resultados acima são compatíveis com este relatório. Os ingredientes do leite, exceto lactoferrina, foram considerados para contribuir para o rejuvenescimento de células adiposas e aumento das células precursoras de gordura por meio da administração do leite. Exemplo 9: Alteração nos tecidos com ácidos graxos representativos contidos no leite e atividade de PPAR-γ

[0144]Em seguida, ácidos graxos representativos contidos no leite foram administrados a um rato Wistar com 12 semanas de vida em uma pluralidade de locais sobre a pele dorsal, como no Exemplo 1(2) acima, e uma alteração nos tecidos por meio da administração foi observada depois que os tecidos foram submetidos à pigmentação imuno-histológica. Mais especificamente, solução salina fisiológica foi administrada em uma quantidade de 20 μL por local, um líquido de administração contendo 1 mg de um ácido graxo foi administrado em uma quantidade de 20 μL por local e uma alteração nas imagem pigmentadas de macrófagos positivos para CD68 e imagens de células positivas para PPAR-γ por meio da administração foi observada. As amostras do rato Wistar foram obtidas por sítios de administração de amostragem (quatro semanas depois da administração e oito semanas depois da administração). As Figuras 10A a 10G mostram os resultados. A Figura 10A mostra os resultados em uma solução salina fisiológica administrada para o grupo (controle negativo).

[0145]Na administração de ácido palmítico, ácido esteárico ou ácido mirístico, o número de células positivas para PPAR-γ e o número de células positivas para CD68 no sítio de administração aumentaram quatro semanas depois da administração, conforme mostrado nas Figuras 10B a 10D, respectivamente. Para qualquer um dos ácidos graxos acima, o aumento no número de células positivas para PPAR-γ e o número de células positivas para CD68 no sítio de administração foram mantidos oito semanas depois da administração do ácido graxo.

[0146]Nos sítios de injeção de ácido graxo saturado, a infiltração de um grande número de células positivas para CD68 foi observada e a fibrilização de tecidos normais foi observada. Portanto, nas Figuras 10B a 10D, uma alteração nos tecidos adiposos foi examinada em um local mais próximo do sítio de administração e onde os tecidos normais foram mantidos (local de não fibrilização).

[0147]Na administração de ácido oleico, ácido α-linolênico ou ácido linoleico, o número de células positivas para PPAR-γ e o número de células positivas para CD68 não aumentou consideravelmente em comparação ao controle quatro semanas depois da administração e o número de células positivas para CD68 aumentou oito semanas depois da administração, conforme mostrado nas Figuras 10E a 10G. Por outro lado, na administração de ácido oleico, ácido α-linolênico ou ácido linoleico, o número de células positivas para CD68 não aumentou consideravelmente (um efeito fraco foi observado no geral). AS células positivas para CD68 foram diferenciadas em macrófagos do tipo M2 residentes nos tecidos por PPAR-γ para promover a homeostase dos tecidos. Na administração de um ácido graxo saturado, tal como ácido palmítico, ácido esteárico ou ácido mirístico, o número de células positivas para CD68 e o número de células positivas para PPAR-γ aumentaram e, portanto, o número de macrófagos do tipo M2 residentes nos tecidos aumentou nos tecidos onde o ácido graxo foi administrado. Por outro lado, na administração de um ácido graxo insaturado, o número de células positivas para PPAR-γ aumentou, mas o número de células positivas para CD68 não aumentou consideravelmente e, assim, foi considerado que o efeito de indução de macrófagos do tipo M2 residentes nos tecidos foi limitado. Estes resultados foram compatíveis ao fato de que no Exemplo 6 acima, os ácidos graxos saturados exibiram um alto efeito de promoção de cicatrização de feridas, ao passo que o efeito de promoção de cicatrização de feridas de ácidos graxos insaturados foi limitado. Visto que a atividade PPAR-γ dos macrófagos foi relatada contribuir consideravelmente para a função dos ácidos graxos (veja, Odegaard JI, et al., Nature,

447: 1116 a 1121, 2007), o aumento no número de células positivas para CD68 e no número de células positivas para PPAR-γ nos tecido adiposos por meio da administração de um ácido graxo saturado foram os resultados que sustentaram a visão de que a administração de um ácido graxo saturado modificou a pele. O aumento no número de células adiposas positivas para PPAR-γ foi confirmado a partir do aumento no número de células positivas para PPAR-γ que apresentam gotículas de gordura nas células e este resultado indicou que a administração de um ácido graxo saturado ativou as células-tronco adiposas positivas para PPAR-γ.

[0148]Ácido palmítico, ácido esteárico ou ácido mirístico é um ácido graxo saturado, e ácido oleico, ácido α-linolênico ou ácido linoleico é um ácido graxo insaturado. Os resultados nas Figuras 10B a 10G mostram que um ácido graxo saturado apresentou um efeito de induzir a expressão de células positivas para PPAR- γ (incluindo as células adiposas imaturas) aos tecidos precocemente e um ácido graxo insaturado apresentou um efeito de induzir a expressão de células positivas para PPAR-γ (células adiposas imaturas) posteriormente. A partir destes resultados, é considerado que um ácido graxo saturado induz a inflamação intensa do tecido para integrar macrófagos e, durante a integração de macrófagos nos tecidos, o ácido graxo saturado aumenta o número de células positivas para PPAR-γ para suprimir a inflamação induzida. Por outro lado, é considerado que um ácido graxo insaturado foi menos capaz de integrar macrófagos nos tecidos e um efeito de supressão de inflamação de PPAR-γ foi dominante.

[0149]Os ácidos graxos são conhecidos por promover a secreção de citocinas inflamatórias (veja, Hotamisligil G.S., Nature, 542:177 a 185, 2017). Os resultados deste Exemplo mostram que, durante a indução da reação de inflamação intensa, um ácido graxo saturado promoveu a regeneração tecidual por meio do aumento do número de células positivas para PPAR-γ para diminuir a inflamação. Isto indica que as células positivas para PPAR-γ cultivadas em tecidos por meio da administração de ácido graxo saturado podem induzir células-tronco adiposas e células adiposas imaturas e induzir macrófagos M2, levando à ocorrência da reação de cicatrização de feridas e regeneração tecidual. Foi confirmado que a expressão de PPAR-γ e sua ação sobre os macrófagos ativam as células imunes (particularmente, derivam macrófagos M1 para macrófagos M2) (veja, Croadell A. et al., PPAR Research, ID 549691, 2015). Exemplo 10: Relação entre a melhora do couro cabeludo e o efeito de melhora da qualidade do cabelo e efeito de aumento do cabelo

[0150]Os Exemplos 1 a 9 acima revelaram que a administração do leite regenerou e modificou o couro cabeludo ou pele para exibir um efeito de melhora da qualidade do cabelo.

[0151]Neste Exemplo, os cabelos que apresentam uma alta taxa de crescimento receberam atenção tendo em vista os resultados dos Exemplos acima e o efeito de administração do leite foi avaliado. Especificamente, os cabelos que cresceram 0,9 mm ou mais por 3 dias foram selecionados a partir de uma imagem do couro cabeludo e a soma de comprimentos obtidos foi calculada. Sabe-se que o cabelo adulto cresce em uma taxa de cerca de 10 mm por mês (isto é, uma taxa de cerca de 1 mm por 3 dias).

[0152]Para este propósito, o cabelo em uma parte do couro cabeludo de cada um entre uma pluralidade de adultos que receberam leite em uma quantidade de 20 μL/local (seis pacientes foram tratados por administração única e um paciente foi tratado durante quatro meses em um intervalo de uma vez por mês) foi raspado, o sítio raspado do cabelo foi representado visualmente depois de três dias e análise da imagem foi realizada. O cabelo no mesmo local foi raspado novamente um ano depois da administração, o sítio raspado do cabelo foi representado visualmente depois de três dias e a análise da imagem foi realizada. Depois da raspagem do cabelo, o cabelo apresentou um comprimento de 0,4 mm em média. Em seguida, a soma dos comprimentos obtidos para os cabelos que apresentam um comprimento de 1,4 mm ou mais foi calculada três dias depois da raspagem do cabelo.

[0153]As Figuras 11A e 11B mostram os resultados da contagem dos comprimentos das partes do cabelo dos pacientes usando software de imagem. Neste relatório, como exemplos de medição representativos, a Figura 11A mostra os resultados de contagem comparativos no curso do tratamento para o paciente A (homem de 50 anos de idade, tratado durante quatro meses em um intervalo de uma vez por mês, depois da passagem de um ano depois do início do tratamento), e a Figura 11B os resultados de medição comparativos sobre o lado não tratado e o lado tratado para dois pacientes (paciente A e paciente B (mulher de 47 anos de idade, tratada apenas com uma administração, depois da passagem de um ano depois do tratamento)).

[0154]Na Figura 11A, os resultados da medição antes do tratamento e um ano depois do início do tratamento do paciente A são comparados. A Figura 11A mostra a soma dos comprimentos de cabelos que apresentam um comprimento de 1,4 mm ou mais três dias depois da raspagem do cabelo (1,4 mm ou mais) e a soma (todos) dos comprimentos de todos os cabelos, incluindo os cabelos que apresentam um comprimento de 0,9 mm ou mais e menos do que 1,4 mm três dias depois da raspagem do cabelo. No paciente A, a soma dos comprimentos de cabelos que apresentam um comprimento de 1,4 mm ou mais depois de três dias foi de 311,9 antes do tratamento e de 337,9 um ano depois do início do tratamento. A soma dos comprimentos de todos os cabelos três dias depois da raspagem do cabelo foi de 405,7 antes do tratamento e de 419,2 um ano depois do início do tratamento.

[0155]Na Figura 11B, os resultados da medição sobre o lado não tratado e sobre o lado tratado um ano depois do início do tratamento para os pacientes A e B são comparados. A Figura 11B mostra a soma dos comprimentos de cabelos que apresentam um comprimento de 1,4 mm ou mais três dias depois da raspagem do cabelo (1,4 mm ou mais) e a soma (todos) dos comprimentos de todos os cabelos, incluindo os cabelos que apresentam um comprimento de 0,9 mm ou mais e menos do que 1,4 mm três dias depois da raspagem do cabelo. No paciente A, a soma dos comprimentos de cabelos que apresentam um comprimento de 1,4 mm ou mais três dias depois da raspagem do cabelo foi de 199,4 sobre o lado não tratado e de 337,9 sobre o lado tratado. No paciente B, a soma dos comprimentos de cabelos que apresentam um comprimento de 1,4 mm ou mais três dias depois da raspagem do cabelo foi de 114,3 sobre o lado não tratado e de 300,7 sobre o lado tratado.

[0156]Similarmente, no paciente A, a soma dos comprimentos de cabelos que apresentam um comprimento de 0,9 mm ou mais três dias depois da raspagem do cabelo foi de 357,8 sobre o lado não tratado e de 419,2 sobre o lado tratado. No paciente B, a soma dos comprimentos de todos os cabelos três dias depois da raspagem do cabelo foi de 261,5 sobre o lado não tratado e de 378,1 sobre o lado tratado.

[0157]Como um controle negativo, solução salina fisiológica foi injetada na metade da cabeça. Uma alteração no cabelo (o número de cabelos que apresentam um comprimento de 1,4 mm ou mais) por injeção de solução salina fisiológica na metade da cabeça foi observada a cada mês durante seis meses e o resultado mostrou que a proporção de alteração antes do tratamento e seis meses depois do tratamento foi de -0,84 % a +1,24 %, com a média de 1,03 %. Sobre o lado tratado onde a solução salina fisiológica foi injetada, e sobre o lado não tratado, a alteração seis meses depois do tratamento foi de -0,99 % a +1,25 %, com a média de 1,06 % (n = 4). Uma alteração no cabelo (a soma dos comprimentos de cabelos que apresentam um comprimento de 1,4 mm ou mais) por injeção de solução salina fisiológica na metade da cabeça foi observada a cada mês durante seis meses e o resultado mostrou que a alteração antes do tratamento e seis meses depois do tratamento foi de -0,79 % a +1,33 %, com a média de 1,05 %. Sobre o lado tratado onde a solução salina fisiológica foi injetada, e sobre o lado não tratado, a alteração seis meses depois do tratamento foi de -0,95 % a +1,28 %, com a média de 1,07 % (n = 4). Assim, no grupo que recebeu solução salina fisiológica como um controle negativo, não houve aumento no cabelo que apresenta um comprimento de 1,4 mm ou mais três dias depois da raspagem do cabelo.

[0158]Assim, ficou evidente que a administração do leite (20 μL/administração no local) modificou o couro cabeludo e, consequentemente, aperfeiçoou a taxa de crescimento de cabelo.

[0159]O cabelo que apresenta um comprimento de 1,4 mm ou mais depois de três dias foi examinado e a análise da imagem revelou que o cabelo foi mais espesso do que o cabelo que apresenta uma baixo taxa de crescimento (cabelo que apresenta um comprimento menor do que 1,4 mm depois de três dias). Especificamente, a espessura do cabelo que apresenta um comprimento de 2,1 a 2,2 mm foi de 97,42 μm em média, ao passo que a espessura do cabelo que apresenta um comprimento menor do que 1,4 mm foi de 75,39 μm em média. Estes resultados revelaram que a administração do leite (20 μL/local) aumentou o cabelo espesso que apresenta uma alta taxa de crescimento.

[0160]Na administração do leite, a melhora da tensão e rigidez do cabelo foi observada (a tensão e rigidez do cabelo melhorado e o aumento no volume do cabelo foram observados) e isto foi compatível com o aumento no cabelo espesso.

[0161]Assim, em indivíduos que receberam o leite, o aumento no cabelo foi observado e a modificação do couro cabeludo por meio da administração do leite levou à melhora da taxa de crescimento de cabelo e aumento no cabelo espesso que apresenta rigidez e tensão e qualidade satisfatória. Exemplo A11: Ação de promoção da osteogênese

[0162]Neste Exemplo, o efeito de administração de ácido palmítico sobre a osteogênese foi examinado.

[0163]Formação de defeito ósseo: O pelo na cabeça de ratos Wistar (machos) (quatro ratos com quatro 12 semanas de vida e um rato com 18 semanas de vida) foi raspado com tosquiadeiras, linhas tangentes foram diagonalmente desenhadas acima de um olho e na frente de uma aurícula em um lado oposto, e um defeito no osso do crânio com um diâmetro de 8,8 mm foi formado no lado posterior a partir da interseção das linhas. O defeito no osso do crânio foi formado por meio da realização de 1. anestesia geral, 2. Incisão na pele, 3. separação do periósteo e 4. Corte do osso do crânio (diâmetro: 8,8 mm), nesta ordem. O defeito no osso do crânio foi formado gradualmente lascando um osso circundante com uma broca trefina e um microdrill e, finalmente, retirando o osso.

[0164]Observação da osteogênese: Uma película fina de hidroxiapatita formada para se ajustar ao tamanho da parte de defeito ósseo foi colocada sobre a parte de defeito ósseo. Neste relatório, 0,02 mg (20 μg) de ácido palmítico foi aplicada à folha. Especificamente, 0,02 mL (20 μL) de uma solução obtida por meio da dissolução de 1 mg de ácido palmítico em 1 mL de um solvente foi descartado na película fina e seco para ser colocado sobre a parte de defeito ósseo.

[0165]Os animais foram criados durante oito semanas, os tecidos depois foram coletados e os animais depois foram mortos. Os tecidos foram perfundidos e fixados. Uma seção transversal do osso do crânio foi submetida à pigmentação de hematoxilina-eosina e observada com um microscópio. Posteriormente, as áreas das partes onde a osteogênese foi observada foram comparadas entre uma amostra com uma película fina revestida com ácido palmítico e uma amostra com uma película fina não revestida. A imagem J foi usada para análise.

[0166]As imagens 3D-CT do osso do crânio foram adquiridas usando o seguinte sistema. Aparelho: ScanXmate-E090 fabricado pela Comscantecno Co., Ltd. Condições da fotografia:

Voltagem do tubo de raios X: 88kV Corrente do tubo de raios X: 89 μA Resolução: 30,649 μm/pixel

[0167]A reconstrução tridimensional foi realizada usando VGSTUDIO MAX (VOLUME GRAPHICS INC.).

[0168]A Figura 12 mostra os resultados. Conforme mostrado na Figura 12, o osso do crânio foi quase completamente fechado pela formação de um novo osso quando uma película fina revestida com ácido palmítico foi usada, ao passo que a formação de um novo osso foi insuficiente quando uma película fina não revestida foi usada.

[0169]Em seguida, a Figura 13 mostra as seções pigmentadas com hematoxilina-eosina. Conforme mostrado na Figura 13, um osso pigmentado de vermelho (veja as linhas tracejadas) foi formado em uma grande quantidade quando uma película fina revestida com ácido palmítico foi colocada, ao passo que um osso pigmentado de vermelho (veja as linhas tracejadas) foi formado em uma pequena quantidade quando uma película fina foi colocada. A área pigmentada (o número de pixels e mm2) da parte da osteogênese na seção do tecido foi de 12,132 pixels (0,984 mm2) para a película fina revestida com ácido palmítico e de 1,025 pixels (0,083 mm2) para o controle. O osso formado foi consideravelmente mais espesso para a película fina revestida com ácido palmítico do que para a película fina controle.

[0170]Isto revelou que o ácido palmítico apresentou ação de promoção de osteogênese.

[0171]No momento da morte dos animais, fragmentos de tecido ósseo (diâmetro: 3 mm) foram coletados.

[0172]Os animais foram criados durante oito semanas e os tecidos foram coletados, perfundidos e fixados. Os tecidos ósseos foram coletados com uma broca trefina (diâmetro: 3 mm) quando a osteogênese foi suficiente e um osso existente e um osso regenerado de uma parte da margem óssea aberta foram coletados com pinça óssea (pinça Luer) para as amostras (ratos) em que a osteogênese foi insuficiente.

[0173]Os fragmentos de tecido coletados foram imersos em uma solução de estabilização de RNA (Thermo Fisher Scientific, Lituânia) e congelados com nitrogênio líquido e armazenados a -80 °C. O RNA total foi purificado e extraído a partir dos fragmentos de tecido armazenados por meio do uso de uma coluna de rotação, de acordo com um protocolo que acompanha um kit depois que 25 mg de fragmentos de tecido foram encapsulados em um tubo de amostra juntamente com cinco esferas inoxidáveis (diâmetro: 3 mm) e os fragmentos de tecido foram homogeneizados usando RNeasy Mini Kit (QIAGEN GmbH, Hilden, Alemanha) e TissueLyser II (QIAGEN GmbH, Hilden, Alemanha). A análise da expressão gênica por PCR quantitativa foi realizada da seguinte maneira: A Integrated FNA technologies, Inc (Skokie, IL, EUA) foi solicitada para projetar e sintetizar os iniciadores e sondas específicos do gene e usando PrimeTime gene Expression Master Mix Reagent (Integrated DNA Technologies, Inc, Skokie, IL, EUA) e Rotor-Gene Q PCR Apparatus (QIAGEN GmbH, Hilden, Alemanha), a análise de PCR foi realizada duas vezes por gene por amostra para analisar o nível de expressão de um gene alvo. As informações de sete genes de rato usados para a análise de expressão gênica por PCR quantitativa (qPCR; método ΔΔCt) e sequências de nucleotídeos de conjuntos de sondas sintetizadas e conjuntos de iniciador são as seguintes.

1.) Subunidade da haste lateral da proteína ribossômica P0 (RplP0), Rattus norvegicus: mRNA, 1,093 bp, NM_022402.2, GI: 310616731 6-FAM/CCT GTC TTC/ZEN/CCT GGG CAT CAC G/IABkFQ

CAA TCC CTG ACG CAC CG TGT CTG CTC CCA CAA TGA AG

2.) Ligante da quimiocina com motivo C-X-C 12 (Cxcl12), variante do transcrito 1, Rattus norvegicus: mRNA 1,880 bp NM_022177.3 GI: 7649650 56-FAM/TCA ACA CTC/ZEN/CAA AGE GTG CCC TTC UM/3IABkFQ

GAG CCA ACG TCA AAC ATC TG GGC TTT GTC CAG GTA CTC TTG

3.) Receptor da quimiocina com motivo C-X-C 4 (Cxcr4), Rattus norvegicus: mRNA 1,726 bp NM_022205.3 GI: 82617587 56-FAM/CAA TGC TCG/ZEN/CTC TCC AGC CCT/3IABkFQ

CGT TTG GTG CTC CGG TAG TCT CCA GAC CCT AGE TCT TCG

4.) Subunidade alfa da integrina 4 (Itga4), Rattus norvegicus: mRNA 3,736 bp NM_001107737.1 GI: 157819948 56-FAM/CGA AGG ACG/ZEN/TCA AAT CAG CCA GTC UM/3IABkFQ

GCA TCT CCT CTA CAT AGE CAC AG CAC CAA CCG CTA CAT CAA CA

5.) CD34, Rattus norvegicus: molécula CD34 (Cd34), mRNA 1,161 bp NM_001107202.2 GI: 169790781 56-FAM/TCC CTG GAA/ZEN/GTA CCA GCC AGE AGE/3IABkFQ

GGA GTA TTT CCA CCA GTT CCT AC GAT GGC TGG TGT GGT CTT ATT

6.) Proteína morfogenética óssea-4 (BMP4), Rattus norvegicus: mRNA 1,559 bp NM_012827.2 GI: 148747215 56-FAM/CCT TGT TTT/ZEN/CTG TCA AGA CAC CAT GAT TCC/3IABkFQ

ATA AAA CGA CCA TCA GCA TTC G GCC TTT CCA GCA AGT TTG TTC

7.) Proteína morfogenética óssea-7 (BMP7), Rattus norvegicus: mRNA 2,448 bp NM_001191856.2 GI: 683523995

56-FAM/TGC GAT GAT/ZEN/CCA GTC CTG CCA G/3IABkFQ

CGT TCA TGT AGG AGT TCA GAG G CTG TAT GTT AGC TTC CGA GAC C

[0174]Uma diferença no nível de expressão de mRNA (valor Ct) entre a subunidade da haste lateral da proteína ribossômica P0 (RplP0) sendo um gene de limpeza e um gene alvo (média para dois exames de amostras, um animal com 12 semanas de vida e um animal com 18 semanas de vida) foi comparada a uma diferença no nível de expressão de mRNA entre RplP0 e um gene alvo para um controle (animal com 12 semanas de vida sem administração de ácido palmítico), uma diferença entre o primeiro e o último foi convertida em uma proporção de expressão gênica (fator) e o fator foi submetido adicionalmente à conversão de log2 e mostrado em uma forma gráfica (veja a Figura 14).

[0175]Conforme mostrado na Figura 14, houve um aumento em BMP4 e BMP7 importante para a osteogênese em comparação ao caso de embeber apenas uma película fina. Exemplo A12: Alteração na expressão gênica nos tecidos depois da administração subcutânea

[0176]Em seguida, uma alteração na expressão gênica nos tecidos foi examinada. Três regiões foram definidas entre a cabeça e a cauda da parte dorsal de um rato Wistar com 12 semanas de vida (macho) e cada região foi dividida entre a esquerda e a direita da espinha dorsal em duas regiões para definir um total de seis regiões na parte dorsal. Leite ou ácido palmítico foi injetado em uma quantidade de 20 μL por local em dois locais na proximidade do centro de cada região. A distância entre os dois locais foi de 1 cm.

[0177]Os fragmentos de tecido coletados foram congelados com nitrogênio líquido e armazenados a -80 °C. O RNA total foi purificado e extraído a partir dos fragmentos de tecido armazenados por meio do uso de uma coluna giratória, de acordo com um protocolo que acompanha um kit depois que 25 mg de fragmentos de tecido foram encapsulados em um tubo de amostra juntamente com cinco esferas inoxidáveis (diâmetro: 3 mm) e os fragmentos de tecido foram homogeneizados usando RNeasy Mini Kit (QIAGEN GmbH, Hilden, Alemanha) e TissueLyser II (QIAGEN GmbH, Hilden, Alemanha). A análise da expressão gênica por PCR quantitativa foi realizada da seguinte maneira: A Integrated DNA technologies, Inc (Skokie, IL, EUA) foi solicitada para projetar e sintetizar iniciadores e sondas específicos do gene e usando PrimeTime gene Expression Master Mix Reagent (Integrated DNA Technologies, Inc, Skokie, IL, EUA) e Rotor-Gene Q PCR Apparatus (QIAGEN GmbH, Hilden, Alemanha), a análise de PCR foi realizada duas vezes por gene por amostra para analisar o nível de expressão de um gene alvo. Uma diferença no nível de expressão de mRNA (valor Ct) entre a subunidade da haste lateral da proteína ribossômica P0 (RplP0) sendo um gene de limpeza e um gene alvo (média para três animais em dois exames de cada amostra) foi comparada a uma diferença no nível de expressão de mRNA entre RplP0 e um gene alvo para um controle (sem administração de ácido palmítico ou leite), uma diferença entre o primeiro e o último foi convertida em uma proporção de expressão gênica (fator) e o fator foi submetido adicionalmente à conversão de log2 e mostrado em uma forma gráfica.

[0178]A Figura 15 mostra os resultados. Conforme mostrado na Figura 15, foi revelado que tanto a administração de ácido palmítico quanto a administração do leite aumentaram consideravelmente os níveis de expressão de Cxcl12, Cxcr4 e Itga4 nos tecidos. Itga4 e Cxcr4 são marcadores que são observados nas células da medula óssea e a expressão destes marcadores nos tecidos indica que as células derivadas da medula óssea foram recrutadas nos tecidos. A expressão de Cxcl12 indica que, ao mesmo tempo, estas células derivadas da medula óssea estavam prontas para ser aceitas. Além disso, conforme mostrado na Figura 15, ao mesmo tempo houve um aumento em CD34. As células adiposas podem ser derivadas na presença das células precursoras da medula óssea e macrófagos.

LISTA DE REFERÊNCIAS Mirai Noro, et al., “Electrophoresis” 59: 21 a 24, 2015 Satoh T. et al., Nature: 495, 524 a 528, 2013 Festa E et al., Cell, 146: 761 a 71, 2011 M. Yag, et al., Journal of Oral Science, 50: 419 a 425, 2008 Odegaard J I, et al., Nature, 447: 1116 a 1121, 2007 Hotamisligil G. S., Nature, 542: 177 a 185, 2017 Croadell A. et al., PPAR Research, ID 549691, 2015

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, a composição farmacêutica sendo (i) uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso na modificação do couro cabeludo ou pele, (ii) uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso no tratamento de uma ferida, (iii) uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso na promoção do crescimento do cabelo ou uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso na modificação do cabelo ou (iv) uma composição farmacêutica para a administração tópica para o uso na promoção da osteogênese.

2. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que é para o uso na modificação do couro cabeludo ou pele.

3. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que é para o uso no tratamento de uma ferida.

4. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que é para o uso na promoção do crescimento do cabelo.

5. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que é para o uso na promoção da osteogênese.

6. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 5, CARACTERIZADA pelo fato de que o ácido graxo saturado está em uma forma aplicada a uma película biocompatível.

7. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 6, CARACTERIZADA pelo fato de que o ácido graxo saturado é um ou mais ácidos graxos selecionados a partir do grupo que consiste de ácido palmítico, ácido esteárico e ácido mirístico.

8. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende adicionalmente um ácido graxo insaturado.

9. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 6, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende óleo de soja ou leite ou um produto extraído ou um produto processado do mesmo que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ácido graxo saturado ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

10. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 9, CARACTERIZADA pelo fato de que o leite é esterilizado.

11. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADA pelo fato de que o leite é esterilizado em uma temperatura alta.