BR112019027638A2

BR112019027638A2 - processo rápido de purificação de alto rendimento para o polissacarídeo capsular do sorogrupo x de neisseria meningitidis

Info

Publication number: BR112019027638A2
Application number: BR112019027638-6A
Authority: BR
Inventors: Sandeep Sharma; Nitin Kumar; Sarmad HANIF; Davinder Gill
Original assignee: Msd Wellcome Trust Hilleman Laboratories Pvt. Ltd.
Priority date: 2017-06-27
Filing date: 2018-04-26
Publication date: 2020-07-07
Also published as: ZA201908281B; AR112366A1; RU2019142860A3; CN110892076A; KR20200021933A; RU2019142860A; WO2019003239A1

Abstract

A presente invenção divulga um processo rápido de purificação de alto rendimento para o polissacarídeo capsular do sorogrupo X de Neisseria meningitidis. O polissacarídeo capsular da presente invenção é capaz de ser utilizado na produção de vacinas econômicas monovalentes conjugadas de polissacarídeo capsular ou de polissacarídeo-proteína ou vacinas multivalentes combinadas, bem como uma ferramenta de diagnóstico contra infecções pelo sorogrupo X de meningococos. O processo emprega sais simples e uma menor quantidade de etanol. O processo é rápido, econômico e escalável, com alto rendimento de polissacarídeo purificado do sorogrupo X de Neisseria meningitidis.

Description

PROCESSO RÁPIDO DE PURIFICAÇÃO DE ALTO RENDIMENTO PARA O POLISSACARÍDEO CAPSULAR DO SOROGRUPO X DE NEISSERIA MENINGITIDIS CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção diz respeito a um processo rápido de purificação de alto rendimento para o polissacarídeo capsular do sorogrupo X de Neisseria meningitidis. O polissacarídeo capsular bacteriano do sorogrupo X da N. meningitidis da presente invenção pode ser utilizado na produção de vacinas econômicas monovalentes conjugadas de polissacarídeo capsular ou de polissacarídeo-proteína ou vacinas multivalentes combinadas, bem como uma ferramenta de diagnóstico contra infecções pelo sorogrupo X de meningococos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] A N. meningitidis (meningococcus ou Men) é uma bactéria aeróbica Gram-negativa que foi classificada sorologicamente em 13 principais sorogrupos A, B, C, D, 29E, H, I, K, L, W135, X, Y e Z. O sistema de agrupamento se baseia nos polissacarídeos capsulares dos organismos.

[003] O site oficial da OMS afirma que a N. meningitidis é uma das causas mais comuns de meningite bacteriana no mundo e é a única bactéria capaz de gerar grandes epidemias de meningite. Foram relatadas epidemias com taxas de incidência de até 1000 casos por 100.000 habitantes, particularmente na África Subsaariana.

[004] A N. meningitidis é transmitida por aerossol ou contato direto com secreções respiratórias de pacientes ou portadores humanos saudáveis. Por via de regra, a doença endêmica ocorre principalmente em crianças e adolescentes, com maiores taxas de incidência em crianças de 3 a 12 meses, enquanto nas epidemias podem estar mais envolvidos crianças mais velhas e adultos jovens. No entanto, a rápida progressão da doença meningocócica frequentemente resulta em morte dentro de 1 a 2 dias após o surgimento. As infecções por N. meningitidis podem ser prevenidas por vacinação.

[005] A MenA tem sido o sorogrupo mais prevalente na África e na Ásia, mas é rara/praticamente inexistente na América do Norte. Na Europa e nos Estados Unidos, o sorogrupo B (MenB) é a causa predominante de doença e mortalidade, seguido pelo sorogrupo MenC e MenW. No passado recente, surtos de MenX começaram a aparecer na África Subsaariana. De acordo com Xie O et al., “Emergence of serogroup X meningococcal disease in Africa: need for a vaccine” ("Emergência da doença meningocócica do sorogrupo X na África: necessidade de uma vacina") Vaccine. 12 de junho de 2013; 31 (27): 2852-6, os meningococos do sorogrupo X já foram anteriormente considerados uma causa rara de meningite esporádica, mas durante os anos de 2006 a 2010 ocorreram surtos de meningite do sorogrupo X no Níger, Uganda, Quênia, Togo e Burquina Faso, este último com pelo menos 1.300 casos de meningite do sorogrupo X entre os 6.732 casos relatados.

[006] De acordo com outra publicação do NCBI, no Togo, durante os anos de 2006 a 2009, os meningococos do sorogrupo X representaram 16% dos 702 casos confirmados de meningite bacteriana. O distrito de Kozah sofreu um surto de meningococos do sorogrupo X em março de 2007, com uma incidência cumulativa sazonal de meningococos do sorogrupo X de 33/100.000. No Burquina Faso, durante o período de 2007 a 2010, os meningococos do sorogrupo X representaram 7% dos 778 casos confirmados de meningite bacteriana, com um aumento de 2009 a 2010 (de 4% a 35% de todos os casos confirmados, respectivamente). Em 2010 ocorreram epidemias de meningococos do sorogrupo X nas regiões norte e central do Burquina Faso; a maior incidência cumulativa distrital de meningococos do sorogrupo X foi estimada em 130/100.000 durante o período de março a abril.

[007] Os múltiplos sorogrupos impediram o desenvolvimento de uma vacina universal para a doença meningocócica. A produção da primeira vacina de polissacarídeos contra a meningite foi realizada em 1978, pois havia uma necessidade urgente de combater esta doença fatal. Mais tarde, observou-se que as vacinas simples de polissacarídeos não eram muito eficientes em crianças com menos de dois anos de idade. Essas observações levaram a novas pesquisas que revelaram que os bebês têm um sistema imunológico imaturo e não são capazes provocar uma resposta imune contra polissacarídeos simples.

[008] A resposta imune pode ser caracterizada como resposta imune dependente de células T (TD) e resposta imune independente de células T (TI). Sabe-se que proteínas e peptídeos provocam antígenos TD, estimulando os linfócitos T auxiliares e gerando células de memória. Por outro lado, os polissacarídeos pertencem aos antígenos TI que não induzem a ativação das células T e não formam nenhuma célula B de memória, o que é uma grande desvantagem ao lidar com bebês, pois eles têm um sistema imunológico imaturo.

[009] Portanto, houve a necessidade de se conjugar o polissacarídeo bacteriano a um transportador de proteínas que induz uma resposta imune dependente de células T caracterizada por aumento da imunogenicidade em bebês, duração prolongada de proteção e redução do transporte nasofaríngeo de meningococos. Essa necessidade foi atendida por pesquisas engenhosas que resultaram na produção de vacinas conjugadas de polissacarídeo-proteína e a primeira vacina meningocócica conjugada foi licenciada no Reino Unido em

1999.

[010] Os polissacarídeos, especialmente os polissacarídeos capsulares antigênicos utilizados na preparação de vacinas, podem ser vacinas monovalentes, bivalentes e poli(multi)valentes contendo um, dois ou mais polissacarídeos, respectivamente. Estas estão prontamente disponíveis no mercado para prevenção de certas doenças ou infecções causadas por diversos micro-organismos. As vacinas monovalentes ou multivalentes à base de polissacarídeos são utilizadas há muitos anos e têm se mostrado valiosas na prevenção de doenças como doenças pneumocócicas, meningocócicas ou Haemophilus influenzae. No entanto, não existe vacina licenciada contendo conjugado meningocócico do sorogrupo X.

[011] A produção de polissacarídeos capsulares purificados de N. meningitidis é o principal requisito para uma conjugação eficaz com a proteína transportadora e seu desenvolvimento como uma vacina conjugada. O custo para o cultivo de N. meningitidis e a purificação de polissacarídeos é geralmente alto e envolve longas horas de trabalho, uma vez que envolve uma série de etapas de produção e purificação.

[012] A melhoria nas etapas de produção e purificação levaria à formulação de vacinas conjugadas eficazes e economicamente viáveis.

[013] Há várias patentes e publicações não patentárias que descrevem os processos de produção e purificação de polissacarídeos. Em uma literatura não patentária, David Bundle et al., “Studies on the Group-specific Polysaccharide of Neisseria meningitidis Serogroup X and an improved Procedure for its isolation” (Estudos sobre o polissacarídeo de grupo específico do sorogrupo X de Neisseria meningitidis e um procedimento aprimorado para seu isolamento"), Journal of Biological Chemistry, 1974, discute a preparação e o isolamento do polissacarídeo da Men. X da estirpe 247 X da N. meningitidis, em que a referida estirpe foi cultivada em um meio quimicamente definido (NCDM) por 18 horas e produz cerca de 20 mg/L. Outra publicação é a US2015/0299750, Pisal Sambhaji Shankar et al., que diz respeito à purificação da Men. X utilizando um novo meio de fermentação, solução ideal de alimentação, incluindo estratégias de adição e um processo de purificação aprimorado sem qualquer método cromatográfico. O pedido de patente divulgado utiliza múltiplas etapas para a purificação de polissacarídeos brutos e muitas horas para o processo de purificação.

[014] Atualmente, os diversos métodos utilizados para a purificação do sorogrupo X da N. meningitidis requerem um tempo de purificação relativamente longo, aumentando assim o custo de produção e tornando o processo menos viável comercialmente, uma vez que não podem ser ampliados de maneira econômica e oportuna. Além disso, eles incluem solventes inflamáveis em vários estágios.

[015] É um objetivo da presente invenção prover um processo aprimorado de purificação do polissacarídeo bacteriano do sorogrupo X da N. meningitidis em tempo reduzido e com alto rendimento utilizando sais simples tais como citrato trissódico e sulfato de sódio, e requeiram que uma menor quantidade de solventes inflamáveis. O referido processo aprimorado de purificação da presente invenção resultará na produção da vacina conjugada de polissacarídeo-proteína a um preço menor e, subsequentemente, a vacina poderá ser disponibilizada a crianças, especialmente de países em desenvolvimento, a um preço acessível.

OBJETIVO DA INVENÇÃO

[016] O objetivo principal da presente invenção é prover um processo rápido de purificação de alto rendimento para o polissacarídeo capsular do sorogrupo X de Neisseria meningitidis.

[017] Outro objetivo da presente invenção é prover um processo rápido de purificação de alto rendimento para o polissacarídeo do sorogrupo X de Neisseria meningitidis utilizando sais simples para precipitar impurezas.

[018] Outro objetivo da presente invenção é prover um processo de purificação rápido e de alto rendimento para o polissacarídeo X do sorogrupo X de Neisseria meningitidis, utilizando uma quantidade reduzida de solventes inflamáveis.

[019] Um objetivo adicional da presente invenção é prover um processo de purificação rápido e de alto rendimento para o polissacarídeo X do sorogrupo X de Neisseria meningitidis que seja simples, econômico, eficaz em termos de tempo e aplicável em escala comercial.

[020] Ainda outro objetivo da presente invenção é prover um processo de purificação rápido e de alto rendimento para se obter um polissacarídeo purificado do sorogrupo X de Neisseria meningitidis que possa ser utilizado na produção de vacinas econômicas monovalentes conjugadas de polissacarídeo capsular ou de polissacarídeo-proteína ou vacinas multivalentes combinadas, bem como uma ferramenta de diagnóstico contra infecções meningocócicas pelo sorogrupo X.

[021] Ainda outro objetivo da presente invenção é produzir produto de alta qualidade com melhor rendimento que atenda às especificações de qualidade relevantes.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[022] De forma correspondente, a presente invenção provê um processo de purificação rápido e de alto rendimento para os polissacarídeos capsulares do sorogrupo X de Neisseria meningitidis. Os polissacarídeos capsulares bacterianos purificados do sorogrupo X da N. meningitidis obtidos a partir do processo da presente invenção pode ser utilizado na produção de vacinas econômicas monovalentes conjugadas de polissacarídeo capsular ou de polissacarídeo-proteína ou vacinas multivalentes combinadas, bem como uma ferramenta de diagnóstico contra infecções pelo sorogrupo X de meningococos.

[023] O referido processo de purificação provê um polissacarídeo purificado do sorogrupo X da N. meningitidis (também referido como MenX) em um tempo significativamente reduzido. O referido processo de purificação não requer nenhuma etapa de cromatografia.

[024] O processo de purificação da presente invenção utiliza sal simples, tais como citrato trissódico e sulfato de sódio nas concentrações ideais. O polissacarídeo bruto do caldo de fermentação é misturado com sais simples, adicionado com solvente orgânico e submetido a centrifugação e diafiltração com membrana de poliéter sulfona 100KDa MWCO para formar uma solução com impurezas reduzidas. A referida solução com impureza reduzida é tratada com um reagente catiônico, preferencialmente surfactante de amônio quaternário (CTAB), e submetida a mistura à temperatura ambiente.

[025] A solução resultante da mistura é submetida a centrifugação para se obter péletes. O pélete é dissolvido em sal e etanol e submetido a incubação. A solução incubada resultante é novamente centrifugada para se obter grânulos que são dissolvidos em MQW juntamente com sais, detergente e etanol e depois submetidos a mistura. A solução resultante é novamente submetida a centrifugação e o sobrenadante é coletado.

[026] O sobrenadante coletado é submetido à filtração de carbono seguida pela concentração e diafiltração com água Milli-Q (MQW) e finalmente submetido a filtração estéril e o polissacarídeo bacteriano purificado é armazenado.

[027] O polissacarídeo purificado é, desse modo, recuperado em um tempo significativamente reduzido utilizando-se um método escalável, econômico e eficiente.

[028] O processo apresenta uma série de vantagens sobre a técnica anterior, como o provimento de um método rápido e robusto de produção de polissacarídeos purificados que atendem às especificações desejadas, com melhores rendimentos e uso mínimo de solventes inflamáveis. Uma vantagem adicional é que esse processo é totalmente escalável.

[029] Os polissacarídeos bacterianos purificados da presente invenção podem ser utilizados na produção de vacinas econômicas monovalentes conjugadas de polissacarídeo capsular ou de polissacarídeo-proteína ou vacinas multivalentes combinadas, bem como uma ferramenta de diagnóstico contra infecções pelo sorogrupo X de meningococos.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[030] A Figura 1 mostra o fluxo do processo para a purificação da MenX-

PS

[031] A Figura 2 mostra o cromatograma por HPLC de MenX PS purificado utilizando o detector de RI

[032] A Figura 3 mostra o espectro de 1H-RMN de MenX PS purificado

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO COM EXEMPLOS E ILUSTRAÇÕES NÃO LIMITANTES

[033] A presente invenção provê um processo de purificação rápido e de alto rendimento para os polissacarídeos capsulares do sorogrupo X de Neisseria meningitidis. Os polissacarídeos capsulares bacterianos purificados do sorogrupo X da N. meningitidis obtidos a partir do processo da presente invenção pode ser utilizado na produção de vacinas econômicas monovalentes conjugadas de polissacarídeo capsular ou de polissacarídeo-proteína ou vacinas multivalentes combinadas, bem como uma ferramenta de diagnóstico contra infecções pelo sorogrupo X de meningococos.

[034] O referido processo de purificação provê um polissacarídeo purificado do sorogrupo X da N. meningitidis (também referido como MenX) em um tempo significativamente reduzido. O referido processo de purificação não requer nenhuma etapa de cromatografia.

[035] O processo de purificação da presente invenção utiliza sais simples, tais como citrato trissódico e sulfato de sódio nas concentrações ideais. O polissacarídeo bruto do caldo de fermentação é misturado com sais simples, adicionado com solvente orgânico e submetido a centrifugação e diafiltração com membrana de poliéter sulfona (PES) 100KDa MWCO para formar uma solução com impurezas reduzidas. A referida solução com impureza reduzida é tratada com um reagente catiônico, preferencialmente surfactante de amônio quaternário (CTAB), e submetida a mistura à temperatura ambiente.

[036] A mistura resultante é submetida a centrifugação para se obter péletes. Os péletes são dissolvidos em sal e etanol e submetidos a incubação. A solução incubada resultante é novamente centrifugada para se obter grânulos que são dissolvidos em MQW juntamente com sais, detergente e etanol e depois submetidos a mistura. A solução resultante é novamente submetida a centrifugação e o sobrenadante é coletado.

[037] O sobrenadante coletado é submetido à filtração de carbono seguida pela concentração e diafiltração com MQW e finalmente submetido a filtração estéril e o polissacarídeo bacteriano purificado é armazenado.

[038] A Figura 1 mostra o fluxo do processo de purificação de Men X. O processo de purificação rápido e de alto rendimento para os polissacarídeos bacterianos do sorogrupo X de Neisseria meningitidis da presente invenção compreende as etapas de: (a) tratar um caldo de fermentação do sorogrupo X de Neisseria meningitidis adicionando-se uma solução salina simples predeterminada e pó de sal seco a uma concentração específica; (b) adicionar um volume específico de solvente orgânico à solução tratada com sal da etapa (a); (c) misturar a solução da etapa (b) à temperatura ambiente por um período específico; (d) realizar a centrifugação da solução da etapa (c) a um rpm específico por um período predeterminado; (e) coletar o sobrenadante da solução centrifugada da etapa (d); (f) submeter o referido sobrenadante da etapa (e) à concentração e diafiltração utilizando uma membrana de corte de peso molecular para se obter o polissacarídeo bacteriano parcialmente purificado; (g) precipitar o referido polissacarídeo bacteriano parcialmente purificado da etapa (f) com pelo menos um detergente catiônico sob condição específica, seguida por centrifugação a uma velocidade de rotação específica durante um período predeterminado para se obter o primeiro pélete; (h) dissolver o referido primeiro pélete em um agente precipitante inorgânico; (i) submeter o referido primeiro pélete dissolvido da etapa (h) à mistura em pelo menos um solvente orgânico sob condições predeterminadas de incubação para aumentar a precipitação; (j) submeter a referida solução da etapa (i) a centrifugação sob condições específicas seguida pela coleta do segundo pélete; (k) dissolver o referido segundo pélete em MQW e tratar com reagentes químicos específicos e solvente orgânico específico seguido por incubação em condições específicas; (l) submeter a referida solução encubada da etapa (k) a centrifugação sob condições específicas de centrifugação seguida pela coleta do sobrenadante; (m) submeter o referido sobrenadante da etapa (l) a filtração de carbono para se obter o filtrado até que a densidade óptica desejada seja alcançada; (n) filtrar o referido filtrado de carbono da etapa (m) utilizando o conjunto de filtração PES seguido por concentração e diafiltração sob condições específicas; (o) filtrar o referido sobrenadante diafiltrado da etapa (n) utilizando um conjunto de filtração PES específico para se obter o polissacarídeo purificado; (p) armazenar o referido polissacarídeo purificado da etapa (o) sob condições específicas.

[039] O processo produz o polissacarídeo purificado do sorogrupo X de Neisseria meningitidis em uma faixa de 147 a 323 mg/L. O rendimento médio é de 200 mg/L. O processo de purificação é concluído em 24 ± 2 horas.

[040] Em uma das melhores modalidades, o caldo de fermentação foi tratado adicionando-se citrato trissódico 0,25 M, solução de sulfato de sódio a 25% v/v da solução padrão 2M seguida pela adição de 25% v/v de etanol absoluto. A solução foi misturada continuamente por 2 horas à temperatura ambiente (RT, 25 ± 2 °C). A solução foi centrifugada a 10.550 x g por 30 minutos e o sobrenadante foi coletado. O sobrenadante foi concentrado e diafiltrado com 0,1 m2 de membrana de poliéter sulfona (PES) de 100 kDa com 10 a 12 volumes de MQW.

[041] O material concentrado e diafiltrado foi tratado com 15% v/v de solução padrão a 10% de brometo de hexadeciltrimetilamônio (CTAB) com mistura contínua por 4 horas à temperatura ambiente. Foi realizada centrifugação a 10.550 x g por 40 minutos e o pélete coletado foi dissolvido em solução de cloreto de cálcio 0,15 M. Após a dissolução, 90% v/v de etanol absoluto foi adicionado e incubado durante a noite a 2 a 8 °C. A centrifugação a

10.550 x g por 40 minutos foi realizada e o pélete coletado foi dissolvido adequadamente em MQW e posteriormente tratado com 10% p/v de acetato de sódio, 1,1% p/v de desoxicolato de sódio (DOC) e 30% v/v de etanol absoluto com incubação por 2 horas a 2 a 8 °C. A centrifugação a 10.550 x g por 30 minutos foi realizada e o sobrenadante coletado foi filtrado em carbono utilizando filtros de carvão Milistak Pod preparados com etanol até a densidade óptica de 260 nm atingir ≤ 0,2. O material foi filtrado utilizando um conjunto de filtração PES de 0,2 µm. Posteriormente, o filtrado foi concentrado e diafiltrado com membrana PES de 0,1 m2 de 100 kDa com 15 a 20 volumes de MQW e, em seguida, filtrado utilizando um conjunto de filtração PES de 0,2 µm. O MenX PS purificado é armazenado a -20 ± 2 °C.

[042] Os rendimentos do processo de purificação da presente invenção a uma escala de fermentação de 2,5 L são de aproximadamente 147 a 323 mg/L de MenX PS purificado.

[043] O polissacarídeo purificado é, desse modo, recuperado em um tempo significativamente reduzido utilizando-se um método escalável, econômico e eficiente.

[044] O processo apresenta uma série de vantagens sobre a técnica anterior, como o provimento de um método rápido e robusto de produção de polissacarídeos purificados que atendem às especificações desejadas, com melhores rendimentos e uso mínimo de solventes inflamáveis. Uma vantagem adicional é que esse processo é totalmente escalável.

[045] Os polissacarídeos bacterianos purificados da presente invenção podem ser utilizados na produção de vacinas econômicas monovalentes conjugadas de polissacarídeo capsular ou de polissacarídeo-proteína ou vacinas multivalentes combinadas, bem como uma ferramenta de diagnóstico contra infecções pelo sorogrupo X de meningococos.

[046] Os polissacarídeos purificados foram testados utilizando uma bateria de testes analíticos conhecidos para controlar a qualidade do polissacarídeo. Os diferentes ensaios realizados em cada lote de polissacarídeos foram listados na tabela 1, juntamente com os resultados de lotes representativos de polissacarídeos purificados de MenX. Tabela 1: Análise de MenX purificado Parâmetros Lote 1 Lote 2 Lote 3 Lote 4 Média SD 10,3 9,73 10,3 10,1 10,1 0,3 Fósforo (%) 456 569 661 554 560,0 83,9 Peso molecular (kD) 1,97 0,9 0,67 0,83 1,1 0,6 Teor de PS (mg/mL) Teor de ácido 1,34 0,9 0,8 0,7 0,9 0,3 nucleico (%) 0,44 0,44 0,42 0,47 0,4 0,0 Teor proteico (%) 7,8 7,8 7,8 7,8 7,8 0,0 Endotoxina (UE/µg) Distribuição do tamanho molecular 93,38 99,77 99,23 98,38 97,7 2,9 (%) Rendimento PS (caldo de 323 152 147 179 200 83 fermentação em mg/L) UE: Unidade de endotoxina; SD: Desvio padrão

[047] A Fig. 2 mostra o cromatograma HPLC-SEC de polissacarídeos representativos purificados de MenX utilizando o detector de RI. A análise por HPLC-SEC do polissacarídeo purificado é feita utilizando as colunas TSK 4000 - 5000 PWXL HPLC em série e monitorada por detector de UV utilizando nitrato de sódio como tampão de corrida. O pico principal único no cromatograma HPLC-SEC e outras análises físico-químicas (Tabela 1) confirmam a pureza do polissacarídeo de MenX nos níveis desejados. 1

[048] A Fig. 3 mostra o espectro de H-RMN de polissacarídeo representativo purificado de MenX.

O 1H-RMN para polissacarídeo purificado de MenX é registrado no instrumento Bruker Avance 500 MHz utilizando óxido de deutério (D2O) como solvente.

Os picos espectrais confirmam a identidade do polissacarídeo de MenX.

O pico a 2 ppm no espectro corresponde aos três prótons do grupo CH3 do grupo N-acetil (NH-Ac) presentes na estrutura monomérica dos polissacarídeos.

O pico a 5,5 ppm representa o próton anomérico alfa H-1. O multipleto amplo de 4,5 a 3,6 ppm corresponde a todos os outros prótons no anel de glucosamina.

O espectro não mostra nenhum grande pico de impureza, indicando a pureza do polissacarídeo.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Processo rápido de purificação de alto rendimento para polissacarídeo capsular do sorogrupo X de Neisseria meningitidis, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: (a) tratar um caldo de fermentação do sorogrupo X de Neisseria meningitidis adicionando-se soluções salinas simples predeterminadas e pó de sal seco a uma concentração específica; (b) adicionar um volume específico de solvente orgânico à solução tratada com sal da etapa (a); (c) misturar a solução da etapa (b) à temperatura ambiente por um período específico; (d) realizar a centrifugação da solução da etapa (c) a um rpm específico por um período predeterminado; (e) coletar o sobrenadante obtido a partir da solução centrifugada da etapa (d); (f) submeter o referido sobrenadante da etapa (e) à concentração e diafiltração utilizando uma membrana de corte de peso molecular para se obter o polissacarídeo bacteriano parcialmente purificado; (g) precipitar o referido polissacarídeo bacteriano parcialmente purificado da etapa (f) com pelo menos um detergente catiônico sob condição específica, seguida por centrifugação a um rpm específico durante um período predeterminado para se obter o primeiro pélete; (h) dissolver o referido primeiro pélete em um agente precipitante inorgânico; (i) adicionar ao referido primeiro pélete dissolvido da etapa (h) pelo menos um solvente orgânico seguido pela incubação sob condições predeterminadas; (j) submeter a referida solução da etapa (i) a centrifugação sob condições específicas seguida pela coleta do segundo pélete; (k) dissolver o referido segundo pélete em MQW e tratar com reagentes químicos específicos e solvente orgânico específico seguido por incubação sob condições específicas; (l) submeter a referida solução encubada da etapa (k) a centrifugação sob condições específicas de centrifugação seguida pela coleta do sobrenadante; (m) submeter o referido sobrenadante da etapa (l) a filtração de carbono para se obter o filtrado de carbono até que a densidade óptica desejada seja alcançada; (n) filtrar o referido filtrado de carbono da etapa (m) utilizando-se o conjunto de filtração PES seguido por concentração e diafiltração sob condições específicas; (o) filtrar o referido sobrenadante diafiltrado da etapa (n) utilizando-se um conjunto de filtração PES específico para se obter o polissacarídeo purificado; (p) armazenar o referido polissacarídeo purificado da etapa (o) sob condições específicas; em que o referido processo é econômico, escalável e produz polissacarídeo purificado do sorogrupo X de Neisseria meningitidis em uma faixa de 147 a 323 mg/L de caldo de fermentação.

2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a referida solução salina simples predeterminada e o pó de sal seco de concentração específica são citrato trissódico 0,25 ± 0,1 M e solução de sulfato de sódio 25 ± 5% v/v a partir de solução padrão 2 M.

3. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido solvente orgânico da etapa (b) é 25 ± 5% v/v de álcool absoluto.

4. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a referida duração específica da etapa (c) para mistura é de 2 ± 0,5 horas.

5. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a referida centrifugação na etapa (d) é realizada a 10.000 a 11. 000 x g por 30 ± 5 minutos.

6. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a referida diafiltração na etapa (f) é realizada com membrana PES de 100 kDa com 10 a 12 volumes de MQW.

7. Processo de acordo com reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido detergente catiônico da etapa (g) é 15 ± 2% v/v da solução padrão de CTAB a 10%.

8. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a referida condição específica na etapa (g) para precipitação com detergente catiônico é de 4 ± 1 horas à temperatura ambiente.

9. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a referida centrifugação na etapa (g) é realizada a 10.000 a 11.000 x g por 40 ± 10 minutos.

10. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido agente precipitante inorgânico é uma solução de cloreto de cálcio 0,15 ± 0,03 M.

11. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido pelo menos um solvente orgânico na etapa (i) é 90 ± 5% v/v de etanol absoluto.

12. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a referida condição de incubação predeterminada na etapa (i) é a incubação durante a noite a 2 a 8°C.

13. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a referida condição específica de centrifugação é 10.000 a 11.000 x g por 40 ± 10 minutos.

14. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os referidos reagentes químicos específicos da etapa (k) incluem, mas não são limitados a 10 ± 2% p/v de acetato de sódio e 1,1 ± 0,1% p/v de desoxicolato.

15. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido solvente orgânico específico da etapa (k) é 30 ± 5% v/v de etanol absoluto.

16. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as referidas condições específicas para incubação da etapa (k) são 2 a 8°C por 2 ± 0,5 horas.

17. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as referidas condições específicas para centrifugação da etapa (l) são

10.000 a 11.000 x g por 30 ± 5 minutos.

18. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a referida filtração de carbono da etapa (m) é realizada com filtros de carvão Milistak Pod preparados com etanol.

19. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a referida densidade óptica desejada da etapa (m) é OD260 nm menor ou igual a 0,2.

20. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as referidas condições específicas para concentração e diafiltração na etapa (n) são a membrana PES de corte de 100 kDa com 10 a 20 volumes de MQW.

21. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido conjunto de filtração PES específico da etapa (o) é conjunto de filtração PES de 0,2 µm.

22. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as referidas condições específicas para armazenar o referido polissacarídeo purificado são -20 ± 2°C.

23. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido processo está em conformidade com padrões de qualidade específicos de polissacarídeos.

24. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o rendimento do polissacarídeo purificado do sorogrupo X de Neisseria meningitidis é de até 323 mg/L.

25. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido processo para se obter o referido polissacarídeo purificado do sorogrupo X de Neisseria meningitidis termina em 24 ± 2 horas.

26. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido polissacarídeo bacteriano purificado é capaz de ser utilizado na produção de vacinas econômicas monovalentes conjugadas de polissacarídeo capsular ou de polissacarídeo-proteína ou vacinas multivalentes combinadas, bem como uma ferramenta de diagnóstico contra infecções pelo sorogrupo X de meningococos.