BR112019027089A2

BR112019027089A2 - atividade antibacteriana de galacto-oligossacarídeo e xilitol em tratamentos dermatológicos

Info

Publication number: BR112019027089A2
Application number: BR112019027089-2A
Authority: BR
Inventors: Andrea Zanardi; Alessandra Ceraci; Ivan Montaldo
Original assignee: Rottapharm Spa
Priority date: 2017-06-27
Filing date: 2018-06-27
Publication date: 2020-07-07
Also published as: EP3644945A1; RU2020102673A3; EP3644945C0; EP3644945B1; ES2948510T3; EP4241855A3; US20200171070A1; KR20200024786A; WO2019002421A1; AU2018293307A1; EP4241855A2; NZ759173A; JP2020525460A; RU2020102673A; US11234997B2; JP7170002B2; BR112019027089B1; PH12019502874A1; AU2018293307B2

Abstract

A invenção refere-se a formulações tópicas compreendendo: ? um galacto-oligossacarídeo; ? 0,01% a 10% em p/p de xilitol; e ? um veículo farmaceuticamente ou cosmeticamente aceitável. A invenção também se refere ao uso das formulações e métodos para sua preparação.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ATIVI- DADE ANTIBACTERIANA DE GALACTO-OLIGOSSACARÍDEO E XILITOL EM TRATAMENTOS DERMATOLÓGICOS".

[001] A presente invenção refere-se a uma formulação tópica compreendendo um galacto-oligossacarídeo e xilitol e seu uso em te- rapia por aplicação tópica.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] O maior órgão do corpo humano é a pele que desempenha um papel fundamental na proteção do hospedeiro de infecções pato- gênicas e penetração de agentes nocivos. Antes do nascimento, a pe- le é completamente estéril, mas após o nascimento, micróbios ambien- tais que estão em homeostase com o hospedeiro a colonizam. Além disso, após um parto vaginal, micróbios fecais e vaginais pertencendo à microflora bacteriana da mãe também colonizam a pele dos bebês. A comunidade microbiana que vive na pele humana é chamada microbi- ota da pele e é constituída por mais de 100 espécies distintas de bac- térias. A pele é a interface do corpo para o mundo exterior e ela abriga populações de microrganismos comensais não patogênicos e têm uma função importante na saúde e na doença da pele.

[003] A pele hospeda cerca de 106 bactérias por centímetro qua- drado as quais formam a microflora da pele. Uma biota de pele equili- brada saudável é o escudo microbiano contra microrganismos patogê- nicos e ela pode prevenir condições de pele seca e melhorar a saúde da pele.

[004] Alterações no microbioma da pele são um componente im- portante da fisiopatologia da dermatite atópica. A pele afetada pela dermatite atópica é frequentemente colonizada por Staphylococcus aureus (S. aureus), particularmente durante uma crise da doença, ao passo que a abundância de outras bactérias comensais é acentuada- mente diminuída. Estas mudanças no microbioma da pele afetam ne-

gativamente a barreira epidérmica e iniciam a inflamação. Quando bactérias, tal como S. aureus fixam à superfície da pele, elas formam biofilmes que agem como um andaime para crescimento bacteriano adicional. Antibióticos não são o tratamento ideal para remover bacté- rias da pele de pacientes de dermatite atópica devido a problemas, tal como irritação de pele e resistência bacteriana.

[005] É um objetivo da presente invenção fornecer uma formula- ção tópica para tratar uma doença ou distúrbio da pele, por exemplo, dermatite atópica.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[006] Em um primeiro aspecto, a invenção fornece uma formula- ção tópica que compreende:  um galacto-oligossacarídeo;  0,01% a 10% em p/p de xilitol; e  um veículo farmaceuticamente ou cosmeticamente acei- tável.

[007] Em um segundo aspecto, a invenção fornece a formulação como definida pelo primeiro aspecto da invenção para uso em terapia.

[008] Em um terceiro aspecto, a invenção fornece umaformula- ção compreendendo:  um galacto-oligossacarídeo,  xilitol, e  um veículo farmaceuticamente ou cosmeticamente acei- tável para uso em terapia por aplicação tópica.

[009] Em um quarto aspecto, a invenção proporciona a formula- ção, como definida pelo primeiro aspecto da invenção para uso como um cosmético.

[0010] Surpreendentemente, o requerente constatou que uma for- mulação compreendendo galacto-oligossacarídeo e xilitol tem um efei-

to benéfico no microbioma da pele e, desse modo, é adequada para tratar doenças e distúrbios da pele e para usos cosméticos para me- lhorar a aparência da pele.

[0011] Em um quinto aspecto, a invenção fornece uma formulação tópica compreendendo um galacto-oligossacarídeo para uso no trata- mento de dermatite atópica por aplicação tópica.

[0012] Aspectos adicionais da invenção são descritos mais deta- lhadamente na descrição detalhada a seguir das várias modalidades.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0013] A invenção fornece uma formulação tópica que compreen- de:  um galacto-oligossacarídeo;  0,01% a 10% em p/p de xilitol; e  um veículo farmaceuticamente ou cosmeticamente acei- tável.

[0014] A formulação tópica inclui um galacto-oligossacarídeo. Para evitar dúvidas, o termo galacto-oligossacarídeo inclui misturas (isto é, um ou mais) de galacto-oligossacarídeos e formulações compreen- dendo misturas de galacto-oligossacarídeos são cobertas pela inven- ção.

[0015] Os galacto-oligossacarídeos pertencem ao grupo de prebió- ticos, que são ingredientes alimentares não digeríveis que afetam be- neficamente o hospedeiro estimulando o crescimento e/ou a atividade de bactérias benéficas. O galacto-oligossacarídeo está presente em produtos comercialmente disponíveis, tal como alimentos para bebês e adultos. Os galacto-oligossacarídeos são produzidos através da con- versão enzimática de lactose ou de uma fonte botânica e sua compo- sição da fração de galacto-oligossacarídeo varia no comprimento de cadeia e no tipo de ligação entre as unidades de monômero.

[0016] Os galacto-oligossacarídeos são oligômeros ou polímeros de moléculas de galactose terminando principalmente com uma glico- se ou às vezes terminando com uma molécula de galactose e têm graus variados de polimerização e tipos de ligações. Em uma modali- dade, o galacto-oligossacarídeo compreende moléculas de galactose e glicose. Em outra modalidade, o galacto-oligossacarídeo compreende apenas moléculas de galactose. Em uma modalidade adicional, galac- to-oligossacarídeo são oligossacarídeos contendo galactose da forma de [β-D-Gal-(1-6)]n-β-D-Gal-(1-4)-D-Glc em que n é de 2 a 20. Em ou- tra modalidade, os galacto-oligossacarídeos são oligossacarídeos con- tendo galactose da forma Glc-α-1-4-[β-Gal1-6]n onde n=2-20. Em outra modalidade, os galacto-oligossacarídeos estão na forma de α-D-Glc(1- 4)-[β-D-Gal-(1-6)]n, em que n=2-20. Gal é uma unidade de galactopira- nose e Glc (ou Glu) é uma unidade de glicopiranose.

[0017] Os galacto-oligossacarídeos são encontrados no leite ma- terno humano e bovino. Os galacto-oligossacarídeos podem ser pro- duzidos a partir de xarope de lactose usando a atividade transgalacto- silase da enzima .beta.-galactosidase (Crittenden, (1999) Probiotics: A Critical Review. Tannock, G. (ed) Horizon Scientific Press, Wymond- ham, pp. 141-156). Sabe-se que a β-D-galactosidase catalisa não apenas a hidrólise da ligação β-D-galactosídeo da lactose para dar D- glicose e D-galactose, mas também realiza reações de transgalactosi- lação, em que o grupo D-galactosila de uma .beta.-D-galactosídeo é transferido para um aceitador hidroxilado. Por exemplo, quando um β- D-galactosídeo, tal como lactose ou outro carboidrato, está presente, é possível obter novas ligações glicosídicas entre a unidade de D- galactose e o aceitador. O galactosídeo de partida, tal como lactose, também pode estar presente em uma mistura de galacto-oligos- sacarídeo em seguida às reações de transgalactosilação.

[0018] Como aqui utilizado, o galacto-oligossacarídeo compreende um ou mais sacarídeos que foram produzidos de um glicosídeo e da reação de transgalactosilação de uma β-galactosidase. Assim, os ga- lacto-oligossacarídeos incluem sacarídeos, tal como oligossacarídeos transgalactosilados (isto é, transgalacto-oligossacarídeos) ou dissaca- rídeos transgalactosilatos. Os graus de polimerização (DP) do oligos- sacarídeo formado podem variar, tipicamente de 2 a 20, dependendo da fonte da enzima. Em uma modalidade, uma composição de galacto- oligossacarídeos é uma mistura de mais um sacarídeos com uma faixa de DP de 2 a 6 (isto é, di a hexassacarídeos).

[0019] Em outra modalidade, uma composição de galacto-oligos- sacarídeos é uma mistura de um ou mais sacarídeos com uma faixa de DP de 2 a 8 (isto é, di a octassacarídeos). Em outra modalidade, uma composição de galacto-oligossacarídeo é uma mistura de um ou mais sacarídeos com uma faixa de DP maior que 8. Em ainda outra modalidade, uma composição de galacto-oligossacarídeos é uma mis- tura de um ou mais sacarídeos com uma faixa de DP de 9 a 15. Em outra modalidade, uma composição de galacto-oligossacarídeos é uma mistura de um ou mais sacarídeos com um DP de 1, uma faixa de DP de 2 a 6, uma faixa de DP de 6 a 8 e uma faixa de DP maior que 8.

[0020] Em uma modalidade, a formulação tópica compreende 0,01% a 10% em p/p de galacto-oligossacarídeo, por exemplo, 0,01% a 5% em p/p de galacto-oligossacarídeo. Alternativamente, a formula- ção compreende 0,1% a 5% em p/p de galacto-oligossacarídeo ou 0,5% a 5% em p/p de galacto-oligossacarídeo.

[0021] Em uma modalidade preferida, a formulação tópica com- preende 0,01% a 5% em p/p de galacto-oligossacarídeo.

[0022] A formulação tópica inclui 0,01% a 10% em p/p de xilitol. Xilitol é um álcool de açúcar ocorrendo naturalmente usado como um adoçante. Ele é encontrado em baixas concentrações nas fibras de muitas frutas e vegetais e pode ser extraído de várias bagas, aveia e cogumelos, assim como de material fibroso, tal como casca de milho e bagaço de cana-de-açúcar.

[0023] Em uma modalidade, a formulação tópica compreende 0,01% a 5% em p/p de xilitol. Alternativamente, a formulação compre- ende 0,1% a 5% em p/p de xilitol ou 0,5% a 5% em p/p de xilitol.

[0024] Em uma modalidade preferida, a formulação tópica com- preende 0,01% a 5% em p/p de xilitol.

[0025] Em uma modalidade, a formulação tópica compreende uma razão em peso de galacto-oligossacarídeo:xilitol de 10:1 a 1:10, de 8:1 a 1:8, de 5:1 a 1:5 ou de 3:1 a 1:3

[0026] Em uma modalidade preferida, a formulação tópica com- preende uma razão em peso de galacto-oligossacarídeo:xilitol de 2:1 a 1:2.

[0027] As formulações tópicas são para uso em terapia, em parti- cular por aplicação tópica.

[0028] Em uma modalidade, a invenção fornece uma formulação tópica que compreende:  um galacto-oligossacarídeo;  xilitol; e  um veículo farmaceuticamente ou cosmeticamente acei- tável; para uso em terapia por aplicação tópica.

[0029] Em uma modalidade adicional, a invenção fornece uma formulação tópica compreendendo um galacto-oligossacarídeo para uso no tratamento de dermatite atópica por aplicação tópica.

[0030] Em uma modalidade, as formulações são para uso no tra- tamento de uma doença ou um distúrbio de pele.

[0031] Em uma modalidade, a invenção fornece um método para tratar uma doença ou um distúrbio de pele compreendendo a aplica- ção tópica de uma quantidade eficaz de formulação tópica de acordo com a invenção a um paciente em necessidade da mesma.

[0032] Em outra modalidade, a invenção fornece o uso de um ga- lacto-oligossacarídeo e xilitol para a fabricação de um medicamento para uso em um método para tratar uma doença ou um distúrbio de pele.

[0033] Em uma modalidade, as formulações tópicas são para uso no tratamento de uma doença ou um distúrbio de pele associado com S. aureus. Uma doença ou um distúrbio de pele associado com S. au- reus é um o qual é causado ou promovido por S. aureus.

[0034] S. aureus é uma cepa patogênica gram-positiva responsá- vel por uma ampla variedade de condições, variando de inflamação clínica a infecções severas que causam pneumonia, endocardite e septicemia. S. aureus é uma das bactérias mais importantes em doen- ças humanas. S. aureus está particularmente associada à dermatite atópica, uma doença de pele inflamatória crônica comum caracteriza- da por eritema de lesões eczematosas agudas. O prurido também é proeminente e consistente e, assim, tem um efeito na qualidade de vida. A dermatite atópica afeta 10 a 30% das crianças e 2 a 3% dos adultos em países industrializados. S. aureus também é um fator cau- sador ou composto na patogênese de outras infecções de pele meno- res, tal como espinhas, impetigo, celulite e foliculite, e em doenças mais graves e invasivas, tal como pneumonia, vaginite, meningite, os- teomielite, síndrome do choque tóxico, bacteremia e sepse.

[0035] Em uma modalidade, a doença ou o distúrbio de pele é dermatite atópica (isto é, eczema atópico) e, em particular, é dermatite atópica associada a S. aureus.

[0036] Sem estar limitado pela teoria, acredita-se que as formula- ções tópicas da invenção promovam o crescimento de Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis), a espécie de bactérias mais comumente isolada em pele saudável a qual representa até 90% da flora aeróbica. S. epidermidis equilibra a resposta inflamatória após a lesão de pele e produz moléculas antimicrobianas que inibem seletivamente patóge- nos de pele. Pensa-se que o crescimento de S. epidermidis inibe o crescimento de S. aureus.

[0037] Por conseguinte, a invenção fornece o uso de uma formula- ção tópica da invenção para impedir o crescimento de S. aureus, em particular na pele de um humano ou animal.

[0038] Novamente, sem estar limitado pela teoria, pensa-se que as formulações tópicas da invenção impedem a formação de um biofilme de S. aureus ou removem esse biofilme uma vez formado, em particu- lar na pele de um humano ou animal.

[0039] Por conseguinte, a invenção fornece o uso de uma formula- ção tópica da invenção para impedir a formação de um biofilme de S. aureus ou remover esse biofilme uma vez formado, em particular na pele de um humano ou animal.

[0040] Em outra modalidade, a invenção fornece o uso da formu- lação tópica como um cosmético. No uso cosmético da invenção, a formulação tópica não é usada em terapia. Em vez disso, a formulação é usada para melhorar a aparência da superfície, por exemplo, a pele à qual a formulação é aplicada topicamente.

[0041] Outro aspecto da presente invenção é um método para a preparação da formulação tópica compreendendo galacto-oligossa- carídeo. Em uma modalidade, o método envolve misturar o galacto- oligossacarídeo, xilitol e o veículo farmaceuticamente ou cosmetica- mente aceitável e, então, isolar a formulação tópica.

[0042] A formulação tópica é para aplicação tópica. A formulação tópica pode ser uma formulação dermatológica.

[0043] De preferência, a formulação tópica é aplicada à pele. Por conseguinte, as formulações tópicas tipicamente em forma líquida ou semissólida, por exemplo, como uma emulsão (por exemplo, uma emulsão óleo em água ou uma emulsão água em óleo), um emoliente,

uma pasta, um creme, um unguento, um gel, um xampu ou um lenço.

[0044] Por conseguinte, a formulação também compreende um veículo farmaceuticamente ou cosmeticamente aceitável do tipo ade- quado para aplicações destinadas a aplicação tópica.

[0045] A formulação tópica é de preferência uma emulsão óleo em água compreendedno um óleo, pelo menos um emulsificante tensoati- vo, galacto-oligossacarídeo, xilitol e água.

[0046] O óleo é geralmente um óleo mineral. A emulsão compre- ende outros ingredientes que tipicamente estão presentes em emul- sões óleo em água. Por exemplo, a formulação da invenção pode op- cionalmente conter um agente protetor de umidade, tal como glicerina. Esta formulação também pode conter um álcool de ácido graxo, por exemplo, álcool estearílico, álcool palmitílico, álcool maleico ou álcool cetílico. A presente formulação também contém um meio aquoso, por exemplo, água geralmente purificada.

[0047] O ácido graxo pode ter um máximo 16 a 18 carbonos, por exemplo, estearato e palmitato, dentre outros. Intensificadores opcio- nais podem ser incluídos, por exemplo, citrato, ácido maleico, ácido etilenodiaminatetracético, aminoácidos livres e carbopol, goma xanta- na, carragena e polímeros quaternarizados condicionantes.

[0048] Adicionalmente, é desejável incluir uma pequena quantida- de de conservante na formulação da presente invenção para permitir armazenamento das formulações em boas condições. Podem ser em- pregados conservantes tais como metil e propil parabeno, bem como outros conservantes conhecidos como fenoxietanol, benzoato de sódio e sorbato de potássio. As formulações podem ser preservadas usando também pentileno glicol, decileno glicol, 1,2-octanodiol, 1,2-hexanodiol e o-Cimen-5-ol.

[0049] Adicionalmente, é desejável incluir tensoativos na formula- ção da presente invenção. A formulação pode conter sódio laureth sul-

fato, sódio myreth sulfato, dissódio laureth sulfosuccinato, sódio coco- anfoacetato e sódio cocoanfoacetato.

[0050] Dependendo da formulação específica da formulação, os outros ingredientes ou excipientes variarão em sua funcionalidade e quantidade. Por exemplo, além de galacto-oligossacarídeo e xilitol, formulações de lavagem corporal, loção corporal, emolientes e lava- gem corporal contêm tipicamente as seguintes quantidades de excipi- entes. Lavagem corporal (quantidade % em p/p) Loção corporal (quantidade % em p/p) Água 75-90 Água 55-70 Tensoativo 5-10 Emoliente 5-20 Umectante 0,1-5 Condicionador 5-10 Condicionador 0,1-5 Umectante 0,1-10 Fragrância 0,1-2 Tensoativo 0,1-3 Emoliente 0,1-2 Fragrância 0,1-2 Agente gelificante 0,1-2 Antioxidante 0,1-2 Conservante 0,1-2 Agente estabilizador 0,1-5 Tampão 0,1-2 Controlador de viscosidade 0,1-2 Agente gelificante 0,1-2 Emulsificante 0,1-2 Absorvente 0,1-2 Tampão 0,01-0,5 Xampu (quantidade % em p/p) Emoliente (quantidade % em p/p) Água 80-95 Água 50-70 Tensoativo 5-12 Emoliente 5-15 Umectante 0,1-5 Umectante 5-15 Condicionador 0,1-2 Condicionador 5-15 Fragrância 0,1-2 Emulsificante 1-10 Emoliente 0,1-2 Agente estabilizador 0,1-5 Antioxidante 0,1-2 Antioxidante 0,1-2 Antimicrobiano 0,1-2 Agente gelificante 0,1-2 Tampão 0,1-2 Agente quelante 0,1-2 Agente quelante 0,01-0,5 Agente de mascaramento 0,1-2 Tampão 0,01-0,5

[0051] As formulações de acordo com a invenção são estáveis e exibem boa estabilidade física e química ao longo do tempo, mesmo a uma temperatura acima da temperatura ambiente.

[0052] Em outra modalidade, a formulação tópica é fornecida em um lenço. Nesta modalidade, o usuário pode aplicar topicamente a formulação usando o lenço.

[0053] Os exemplos seguintes descrevem a inibição bem-sucedida de S. aureus com as formulações da invenção e, portanto, indicam que as formulações tópicas seriam úteis para tratar doenças e distúrbios de pele, em particular dermatite atópica.

EXEMPLOS Exemplo 1

[0054] A seguinte formulação tópica é um limpador de pele. % em p/p Glicirrizinato de Potássio 0,1-0,5 Niacinamida 0,1-1 Xilitol 5 Galacto-oligossacarídeos 0,5 Goma xantana 0,1-0,5 Triglicerídeo caprílico/cáprico 4 Esteróis de Glycine soya (soja) 0,1-1 Glicosfingolipídeos, fosfolipídeos, colesterol 0,1-0,5 BHT 0,05-1 Ésteres de distearato de poligliceril-6 (e) jojoba (e) cera de abelha poligliceril- 3-5 3 (e) álcool cetílico Laurato de isoamila 1-3 cetil fosfato de potássio, glicerídeos de palma hidrogenados 0,4-1 Laureth-9 1-3 laurato de glicerila 1-3 Álcool cetearílico 1-3 Butyrospermum parkii 5-10 Lecitina hidrogenada 0,1-3 Glicirretinato de estearila 0,1-05 Óleo de semente de Linum usitatissimum 2-5 Acetato de Tocoferila 1-4 Acrilatos/ polímero reticulado de acrilato de alquila C10-30 0,1-2 Metilpropandiol, caprilil glicol, fenilpropanol 1-4 Arginina 1-3 Água até 100 Exemplo 2

[0055] A seguinte formulação tópica é um emoliente: % em p/p Xilitol 5 Laureth sulfossuccinato de dissódio 5-15 Laureth-9 1-3 Cocoanfoacetato de sódio 1-15 Cloreto de hidroxipropil guar hidroxipropiltrimônio 0,5-4 Ácido lático Caprilil glicol 0,5-3 Lauril sulfoacetato de sódio 1-5 Propileno glicol 1-5 Niacinamida 0,1-3 Galacto-oligossacarídeo 0,5 Glicirrizato dipotássico 0,1-1 Extrato de flor/folha/caule de Malva sylvestris 1-3 Aqua/água até 100

[0056] Aproximadamente 1 x 10 cfu de duas cepas diferentes de S. aureus (ATCC 29213 e 815) foram adicionados às formulações dos Exemplos 1 e 2. Os resultados são expressos como a % de inibição de crescimento e formação de biofilme em 3 horas. Tabela 1 Exemplo 1 Exemplo 2 S. aureus ATCC 29213 815 ATCC 29213 815 Inibição de crescimento 99,99% em 3h 99,99% em 3h 99,99% em 3h 100% em 3h Inibição de formação de 99,99% em 3h 99,99% em 3h 99,99% em 3h 99,99% em 3h biofilme

[0057] Todas as formulações inibiram rapidamente o crescimento de ambas as cepas de S. aureus dentro de 3 horas e inibiram a forma- ção de biofilmes. Estes resultados demonstram a possibilidade de ini- bir a microflora da pele patogênica em distúrbios de pele usando for- mulações contendo probióticos isentas de conservantes. Exemplo 3

[0058] A Tabela 2 estabelece quantidades típicas de galacto- oligossacarídeo (GOS) e xilitol (p/p) da formulação em tipos particula- res de formulação. Formulação GOS % em p/p xilitol % em p/p Limpador 0,01-3, por exemplo, 0,5 1-10, por exemplo, 5 Emoliente 0,01-3, por exemplo, 0,5 1-10, por exemplo, 5 Lavagem corporal 0,01-3, por exemplo, 0,5 0,01-3, por exemplo, 0,5 Creme para assaduras 0,5-2,5, por exemplo, 1 0,1-3, por exemplo, 1 Creme hidratante 0,1-3, por exemplo, 1 0,1-3, por exemplo, 1 Lenços úmidos 0,01-3, por exemplo, 0,1 0,01-3, por exemplo, 0,1 Espuma de banho 0,01-3, por exemplo, 0,1 0,01-3, por exemplo, 0,1 Xampu 0,01-3, por exemplo, 0,1 0,01-3, por exemplo, 0,1 Loção corporal 0,1-3, por exemplo, 1 0,1-3, por exemplo, 1 Exemplo 4

[0059] Galacto-oligossacarídeo e xilitol foram avaliados sozinhos e em combinação em diferentes concentrações (concentrações: 0,1, 2,5 e 5%) para afetar a produção planctônica bacteriana e a capacidade de formação de biofilme de culturas de caldo padronizado de S. au- reus 815 (cepa clínica) e S. epidermidis 317 (cepa clínica) foi avaliada.

[0060] A forma planctônica de bactérias é caracterizada por célu-

las separadas que flutuam ou existem independentemente como uma suspensão dentro dos meios líquidos. A forma de biofilme (ou agrega- da/séssil) é caracterizada por um estado no qual as células estão for- temente restritas e firmemente fixadas umas às outras. Tipicamente, a forma de biofilme está associada à inflamação e infecção clínica em humanos. Exemplo 4.1 - fase planctônica

[0061] Diferentes concentrações de galacto-oligossacarídeo, xilitol e sua combinação foram adicionadas a uma placa de 96 poços para avaliar seu efeito in vitro na população planctônica bacteriana de S. aureus e S. epidermidis. O inóculo bacteriano durante a noite foi pre- parado em caldo de soja Tryptic (TSB), renovado no mesmo meio e 6 ajustado para OD600 = 0,12 (aproximadamente 5 x 10 CFU/ml) para os experimentos. Para os controles, galacto-oligossacarídeo e xilitol também foram analisados sozinhos. As placas foram incubadas por t = 3 e 6 h a 37°C em condições aeróbicas. Cada determinação foi reali- zada em duplicata para três experimentos independentes e a biomas- sa foi avaliada usando um método de coloração de safranina.

[0062] Após cada tempo de incubação, a redução da OD600 foi avaliada em relação aos controles e as unidades formadoras de colô- nias (UFC)/ml em 0 e 24h foram detectadas. Cada determinação foi realizada em duplicata para três experimentos independentes e a bio- massa foi avaliada usando um método de coloração de safranina.

[0063] A Tabela 3 delineia a redução percentual do crescimento de S. aureus 815 e S. epidermidis 317 em fase planctônica na presença de galacto-oligossacarídeo, xilitol e suas combinações em diferentes concentrações (OD600) após 3 e 6h.

3h – S. aureus 815 Xilitol (%) 0 1 2,5 5 GOS (%) 0 0 14,38 23,93 26,70 1 13,88 22,47 27,94 30,23 2,5 18,78 26,80 32,24 34,96 5 29,52 34,26 38,88 40,66 6h – S. aureus 815 Xilitol (%) 0 1 2,5 5 GOS (%) 0 0 15,86 27,80 35,13 1 22,59 34,54 41,18 43,60 2,5 22,35 31,44 37,39 46,42 5 32,26 41,88 51,35 55,50 3h – S. epidermidis 317 Xilitol (%) 0 1 2,5 5 GOS (%) 0 0 13,40 19,36 27,13 1 10,89 19,94 27,10 32,94 2,5 20,94 32,16 34,57 38,81 5 31,35 33,38 38,70 45,34 6h – S. epidermidis 317 Xilitol (%) 0 1 2,5 5 GOS (%) 0 0 22,11 28,57 29,99 1 15,92 27,86 37,78 42,89 2,5 26,63 34,75 40,18 45,87 5 36,67 40,41 45,70 51,06

[0064] Galacto-oligossacarídeo e xilitol dosados sozinhos e em combinação proporcionam uma redução no crescimento planctônico de S. aureus 815 e S. epidermidis 317. Exemplo 4.2 - fase de biofilme

[0065] Suspensões bacterianas cultivadas em TSB suplementadas com glicose a 0,5% (v/v) em fase logarítmica foram incubadas em 96 placas de microlitro de fundo chato na presença de galacto- oligossacarídeo ou xilitol ou sua combinação em diferentes concentra- ções ou TSB (controle). Após incubação por 3h e 24h a 37°C, cada poço foi lavado duas vezes com PBS estéril, seco ao ar, corado por 1 min com safranina a 0,1% e lavado com PBS. O biofilme corado foi ressuspenso em 200 μl de etanol (95% v/v) e OD492 foi medida por es- pectrofotometria usando um leitor de ELISA.

[0066] A Tabela 4 delineia a porcentagem de redução de biofilme (antiadesivo (3h) e antibiofilme (24h)) de S. aureus 815 e S. epidermi- dis 317 na presença de galacto-oligossacarídeo, xilitol e suas combi- nações em diferentes concentrações. 3h – S. aureus 815 Xilitol (%) 0 1 2,5 5 GOS (%) 0 0 21,61 28,81 36,98 1 16,66 29,44 33,15 38,45 2,5 21,02 25,62 31,47 35,36 5 28,16 29,97 35,89 39,60 24h - S. aureus 815 Xilitol (%) 0 1 2,5 5 GOS (%) 0 0 51,68 47,8 56,02 1 38,59 35,94 48,94 51,53 2,5 40,88 33,76 39,79 61,13 5 32,14 33,93 36,07 50,03 3h – S. epidermidis 317 Xilitol (%) 0 1 2,5 5 GOS (%) 0 0 1,00 10,64 14,16 1 2,56 2,50 11,73 11,16 2,5 1,20 2,84 13,83 14,86 5 1,00 3,45 18,65 19,77 24h - S. epidermidis 317 Xilitol (%) 0 1 2,5 5 GOS (%) 0 0 22,81 22,18 5,67 1 4,70 8,34 18,02 11,50 2,5 8,13 4,64 1,33 21,05 5 8,76 8,30 12,49 13,69

[0067] O galacto-oligossacarídeo e o xilitol dosados sozinhos e em combinação proporcionam uma redução da formação de biofilme em S. aureus 815 de até 40% após 3 horas de tratamento (efeito antiade-

sivo) e até 60% após 24 h (efeito antibiofilme). Para S. epidermidis 317, este efeito não foi observado.

[0068] A presente invenção também inclui as seguintes modalida- des:

1. Um método para melhorar eficácia antibacteriana contra S. Aureus compreendendo a aplicação tópica de uma formulação der- matológica que compreende um Galacto-oligossacarídeo.

2. O método em que a formulação compreende ainda xilitol.

3. O método em que a formulação dermatológica é formu- lada como um emoliente, detergente, pasta ou gel.

4. O método em que o galacto-oligossacarídeo está presen- te em uma quantidade de 0% a 5% em p/p da formulação.

5. O método em que o xilitol está presente em uma quanti- dade de 0% a 5% em p/p da formulação.

6. Um método para melhorar eficácia antibacteriana contra S. Aureus compreendendo a aplicação tópica de uma formulação der- matológica que compreende de 0% a 5% em p/p da formulação de ga- lacto-oligossacarídeo e de 0% a 5% em p/p da formulação de xilitol.

7. Uma formulação dermatológica que compreende de 0% a 5% em p/p da formulação de galacto-oligossacarídeo e de 0% a 5% em p/p da formulação de xilitol.

8. Um método para o tratamento de dermatite atópica com- preendendo aplicar topicamente na pele de um indivíduo em necessi- dade de tal tratamento uma composição tópica compreendendo uma quantidade eficaz de galacto-oligossacarídeo.

9. O método em que a composição é formulada como uma emulsão.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Formulação tópica, caracterizada pelo fato de que com- preende:  um galacto-oligossacarídeo;  0,01% a 10% em p/p de xilitol; e  um veículo farmaceuticamente ou cosmeticamente acei- tável.

2. Formulação tópica, de acordo com a reivindicação 1, ca- racterizada pelo fato de que a formulação compreende 0,01% a 5% em p/p de xilitol.

3. Formulação tópica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a formulação compreende 0,01% a 10% em p/p de galacto-oligossacarídeo.

4. Formulação tópica, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que a formulação com- preende 0,01% a 5% em p/p de galacto-oligossacarídeo.

5. Formulação tópica, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a formulação com- preende uma razão em peso de galacto-oligossacarídeo:xilitol de 10:1 a 1:10.

6. Formulação tópica, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a formulação com- preende uma razão em peso de galacto-oligossacarídeo:xilitol de 2:1 a 1:2.

7. Formulação tópica, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que o compósito é uma emulsão (por exemplo, uma emulsão óleo em água ou uma emulsão água em óleo), um emoliente, uma pasta, um creme, um unguento ou um gel.

8. Formulação tópica, de acordo com qualquer uma das rei-

vindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que a formulação é uma emulsão óleo em água.

9. Formulação tópica, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que é para uso em tera- pia.

10. Formulação tópica para uso, de acordo com a reivindi- cação 9, caracterizada pelo fato de que é para uso em terapia por apli- cação tópica.

11. Formulação tópica, caracterizada pelo fato de que com- preende:  um galacto-oligossacarídeo;  xilitol; e  um veículo farmaceuticamente ou cosmeticamente acei- tável; para uso em terapia por aplicação tópica.

12. Formulação tópica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 11, caracterizada pelo fato de que a formu- lação é para o tratamento de uma doença ou distúrbio de pele.

13. Formulação tópica para uso, de acordo com a reivindi- cação 12, caracterizada pelo fato de que a doença ou o distúrbio de pele é uma doença de distúrbio associado a S. aureus.

14. Formulação tópica para uso, de acordo com a reivindi- cação 12 ou 13, caracterizada pelo fato de que a doença ou o distúrbio de pele é dermatite atópica.

15. Uso de uma formulação tópica, como definida em qual- quer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que é como um cosmético.