BR112019023237A2 - Micróbios de promoção de crescimento de planta, composições, e usos - Google Patents

Abstract

o presente pedido se refere a micróbios de promoção de crescimento de planta (pgpms), composições que compreendem esses pgpms e métodos para usar esses pgpms e/ou composições para melhorar a saúde de planta, o crescimento de planta e/ou o rendimento de planta e/ou para impedir, inibir ou tratar o desenvolvimento de patógenos de planta ou o desenvolvimento de doenças fitopatogênicas. este pedido também fornece variedades de plantas de ocorrência não natural que são artificialmente infectadas com um pgpm descrito no presente documento, bem como semente, tecido reprodutor, tecido vegetativo, tecidos regeneradores, partes de planta ou progenitura dos mesmos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para: MICRÓBIOS DE PROMOÇÃO DE CRESCIMENTO DE PLANTA, COMPOSIÇÕES, E USOS

[001] Este pedido refere-se a cepas microbianas, composições e métodos úteis para melhorar o crescimento ou rendimento de planta e/ou para suprimir o desenvolvimento de patógenos de plantas e doenças fitopatogênicas.

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[002] Este pedido reivindica o beneficio do Pedido Provisório n° U.S. 62/503,377, depositado em 9 de maio de 2017, Pedido Provisório n° U.S. 62/503,448, depositado em 9 de maio de 2017, e Pedido Provisório n° U.S. 62/508,514, depositado em 19 de maio de 2017, cujo é incorporado ao presente documento a titulo de referência em sua totalidade. REFERÊNCIA A UMA LISTAGEM DE SEQUÊNCIA ENVIADA A UM ARQUIVO DE TEXTO POR MEIO DE EFS-WEB

[003] A Listagem de Sequência criada em 23 de abril de 2 018 como um arquivo de texto nomeado 7441WO_Seq_List.txt, e que tem um tamanho de 251769 bytes é incorporado por meio deste a titulo de referência em conformidade com 37 C.F.R. § 1.52(e)(5).

FUNDAMENTOS

[004] Micróbios promotores de crescimento de plantas (PGPMs), tais como rizobactéria promotora de crescimento de planta (PGPR), ganharam importância mundial e aceitação para benefícios agrícolas. PGPMs podem afetar o

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2/136 crescimento de planta por mecanismos diferentes diretos e indiretos. Alguns exemplos desses mecanismos, que podem ser ativos simultânea ou sequencialmente nos mesmos estágios ou em estágios diferentes de crescimento de planta, incluem (1) solubilização de nutriente mineral aumentada e fixação de nitrogênio (isto é, criar nutrientes mais disponíveis para a planta); (2) repressão de patógenos relacionados ao solo (por exemplo, pela produção de cianeto de hidrogênio, sideróforos, antibióticos, e/ou competição por nutrientes); (3) aprimorar a tolerância a estresse de planta a estiagem, inundação, salinidade, e toxidade de metal; e (4) produção de fitohormônios tais como ácido indole-3-acético (IAA). Ademais, alguns PGPMs produzem a enzima 1-aminociclopropano1-carboxilato (ACC) deaminase, que hidrolisa 1aminociclopropano-l-carboxilato (ACC), o precursor imediato de etileno em plantas. Reduzindo-se a concentração de etileno em semeaduras e desse modo, seu efeito inibitório, esses PGPMs estimulam o comprimento de raiz das semeaduras. Alguns grupos exemplificadores de PGPMs podem ser encontrados dentre a fila: Cianobactérias, actinobactérias, Bacteroidetes, Firmicutes e Proteobactérias. Há uma quantidade considerável de pesquisas científicas em curso direcionadas a entender PGPMs, incluindo os aspectos de sua adaptação, efeitos em fisiologia de planta e crescimento, resistência sistêmica induzida, biocontrole de patógenos de

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3/136 planta, biofertilização, viabilização de coinoculação, interações com micro-organismos de planta, e mecanismos de colonização de raiz.

[005] Em virtude de sua colonização de rizosfera rápida e estimulação de crescimento de planta e/ou rendimento, há interesse atualmente considerável em explorar PGPMs para aprimorar produção de safra. De fato, a inoculação de plantas cultivadas com PGPMs é atualmente considerada uma abordagem agrícola promissora. Conforme as preocupações ambientais aumentam, por exemplo, preocupações acerca de qualidade de águas subterrâneas com excesso de fertilizante e exposição de pesticida em alimentos, alternativas biológicas são promissoras e se tornam necessárias. Desse modo, desenvolver tratamentos biológicos compatíveis com fertilizantes e pesticidas e/ou mesmo reduzir a quantidade desses compostos químicos usados podería ser um avanço significativo na indústria agrícola.

[006] No entanto, há uma falta de triagem eficiente e procedimentos de seleção para obter cepas microbianas que têm capacidades de promoção de saúde/crescimento/rendimento de planta. Há também uma falta de métodos de seleção eficientes para obter combinações de cepas microbianas (ou consórcios microbianos) que interagem de modo sinérgico no contexto de promover saúde, crescimento e/ou rendimento de planta. A falta de tais procedimentos de triagem e/ou

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4/136 seleção, infelizmente, retarda o estudo de simbioses bacterianas de planta, e a instalação de novos PGPMs na agricultura. Portanto, há uma necessidade continua e de pressão para a identificação de novos PGPMs, consórcios sintéticos de PGPM, e/ou teste de sua compatibilidade com produtos de gerenciamento de safra disponíveis comercialmente existentes.

SUMÁRIO

[007] As modalidades deste pedido abordam a necessidade supracitada fornecendo-se novos micróbios promotores de crescimento de planta (PGPMs), isolates, culturas, composições, consórcios sintéticos, e métodos úteis para melhorar a saúde, crescimento e/ou rendimento de uma planta. Outros aspectos das presentes modalidades fornecem métodos para identificar consórcios microbianos que compreendem dois ou mais PGPMs úteis para promover saúde, crescimento e/ou rendimento de planta. São também fornecidos métodos para o tratamento de plantas ou sementes de planta com uso das cepas microbianas (PGPMs), isolates, culturas ou composições reveladas no presente documento. São também fornecidos métodos para prevenir, inibir ou tratar o desenvolvimento de patógenos de planta ou o desenvolvimento de doenças fitopatogênicas. Este pedido também fornece variedades de planta de ocorrência não natural que são artificialmente infectados com pelo menos uma cepa

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5/136 microbiana revelada no presente documento. Outras modalidades fornecem semente, tecido reprodutivo, tecido vegetative, tecidos regenerativos, partes de plantas, ou progenia das variedades de planta de ocorrência não natural. Outras modalidades fornecem adicionalmente um método para preparar composições agrícolas.

[008] Outras modalidades fornecem cepas microbianas (PGPMs) isoladas, culturas isoladas das mesmas, culturas biologicamente puras das mesmas, e culturas enriquecidas das mesmas. Em algumas modalidades, a cepa microbiana compreende um gene de rRNA 16S que compreende uma sequência de nucleotideos selecionada a partir das SEQ ID NOs 1 a 461. Em algumas modalidades, a cepa microbiana compreende um gene de rRNA 16S que compreende uma sequência de nucleotideos selecionada a partir das SEQ ID NOs 165 a 461. Em algumas modalidades, a cepa microbiana compreende um gene de rRNA 16S que compreende uma sequência de nucleotideos selecionada a partir das SEQ ID NOs 172 a 182. Em algumas modalidades, um gene de rRNA 16S da cepa microbiana compreende uma sequência de nucleotideos que exibe pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5%, ou pelo menos 99,9% de identidade de sequência com qualquer uma das sequências de nucleotideo conforme estabelecido em

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6/136 qualquer uma das SEQ ID NOs 1 a 461. Algumas modalidades fornecem um gênero de micro-organismos que compreende qualquer uma das sequências de DNA descritas acima e que melhora a saúde, crescimento e/ou rendimento de uma planta, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, a cepa microbiana é P0032_C7, P0048_B9, P0050_F5 (também denominado S2199,), P0035_B2 (também denominado S2145, n° de depósito NRRL B-67091), P0020_Bl, P0047_Al (também denominado S2284, n° de depósito NRRL B67102), P0033_El (também denominado S2177), P0032_A8 (também denominado S2181, n° de depósito NRRL B-67099), P0049_E7, P0042_A8 (também denominado S2167), P0042_D5 (também denominado S2165), P0042_B2 (também denominado S2168, n° de depósito NRRL B-67096), P0042_B12 (também denominado S2189), P0042_C2 (também denominado S2173, n° de depósito NRRL B67098), P0042_D10 (também denominado S2172, n° de depósito NRRL B-67097), P0044_A3 (também denominado S2476), P0018_All, P0044_A5, P0047_E2, P0047_Cl, P0038_D2 ou S2166, P0042_El, P0047_E8, P0018_Al, S2159_P0058_B9 (n° de depósito NRRL B-67092), S2161_P0054_E8 (n° de depósito NRRL B-67094), S2164_P0054_F4, P0057_A3 (também denominado S2160, n° de depósito NRRL B-67093), S2142_P0061_E11, S2163_P0019_A12 (n° de depósito NRRL B-67095), P0147_D10 (também denominado S2291, n° de depósito NRRL B-67104), P0147_G10 (também denominado S2292, n° de depósito NRRL B-67105), P0160_F7

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7/136 (também denominado S2351), P0140_C10 (também denominado S2300, n° de depósito NRRL B-67107), S2387, P0157_G5 (também denominado S2303, n° de depósito NRRL B-67108), P0160_El (também denominado S2374), P0134_G7 (também denominado S2280), S2384 (n° de depósito NRRL B-67112), S2275 (n° de depósito NRRL B-67101), S2278, S2373 (n° de depósito NRRL B67109), S2370, S2293 (n° de depósito NRRL B- 67106) S2382 (n° de depósito NRRL B-67111), P0132_A12, P0132_C12, P0140_D9, P0173_H3 (também denominado S2404), S2385 (n° de depósito NRRL B-67113), S2197 (n° de depósito NRRL67100), S2285 (n° de depósito NRRL B-67103), S2477, S2376, S2420, S2424, S2445, S2333, S2329, S2327, S2330, S2423 (n° de depósito NRRL B-67115), S2435, S2158, S2437, S2332, S2521, S2228, S2473, P0156_G2, P0154_G3, S2487, S2488, S2421 (n° de depósito NRRL B-67114), P0105_C5, P0154_H3, P0156JG1, S1112 (n° de depósito NRRL B-67090), S2375 (n° de depósito NRRL B67110), e S2669 (n° de depósito NRRL B-67117), S2651, S2652, S2653, S2654, S2655, S2656, S2668, S2644 (n° de depósito NRRL B-67116), S2328, S2646, S2834 (n° de depósito NRRL B67441), S2381 (n° de depósito NRRL B-67442), S2543 (n° de depósito NRRL B-67443), S2695 (n° de depósito NRRL B-67444), S2700 (n° de depósito NRRLB 67445) S2145-2 (NRRL B-67331), S2292-2 (NRRL B-67332), S2300-2 (NRRL B-67333), S2303-2 (NRRL B-67334), S2375-2 (NRRL B-67335), S2382-2 (NRRL B67336), S2423-2 (NRRL B-67337), S2669-2 (NRRL B-67338), ou

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8/136 uma cepa derivada de qualquer uma dessas cepas. Os depósitos foram criados sob as condições do Tratado de Budapeste no Reconhecimento Internacional do Depósito de Micro-organismos para os propósitos de Procedimento de Patente.

[009] Outra modalidade fornece uma composição microbiana que compreende uma cepa microbiana, tal como uma cepa microbiana selecionada dentre aquelas descritas no presente documento, ou uma cultura da mesma. Em algumas modalidades, a composição microbiana compreende uma cepa microbiana, em que o gene de rRNA 16S da dita cepa compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs 1 a 461. Em algumas modalidades, a composição microbiana compreende uma cepa microbiana, em que o gene de rRNA 16S da dita cepa compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs 165 a 461, ou uma cultura da mesma. Em algumas modalidades, a composição microbiana compreende uma cepa microbiana, em que o gene de rRNA 16S da dita cepa compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs 172 a 182, ou uma cultura da mesma. Qualquer uma das composições microbianas pode compreender opcionalmente uma segunda cepa microbiana cuja sequência de genes de rRNA 16S compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs 1 a 461, ou uma cultura da mesma.

[010] Em algumas modalidades, a composição

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9/136 microbiana compreende uma ou mais cepas microbianas selecionadas dentre S2834 (n° de depósito NRRL B-67441), S2381 (n° de depósito NRRL B-67442), S2543 (n° de depósito NRRL B-67443), S2695 (n° de depósito NRRL B-67444), S2700 (n° de depósito NRRLB67445), S2837 (n° de depósito NRRL B67446), S2839 (n° de depósito NRRL B-67447), S2876 (n° de depósito NRRL B- 67448), S2871 (n° de depósito NRRL B-67440), S2145-2 (NRRL B-67331), S2292-2 (NRRL B-67332), S2300-2 (NRRL B-67333), S2303-2 (NRRL B-67334), S2375-2 (NRRL B67335), S2382-2 (NRRL B- 67336), S2423-2 (NRRL B-67337), S2669-2 (NRRL B-67338), ou uma cepa derivada da mesma, ou uma cultura da mesma.

[011] Outras modalidades fornecem uma composição que compreende um consórcio microbiano sintético. Em algumas modalidades, um consórcio sintético compreende a) um primeiro conjunto de micróbios que compreende um ou mais micróbios que promovem saúde, crescimento, e/ou rendimento de planta; e b) um segundo conjunto de micróbios que compreende um ou mais micróbios que aumentam a aptidão competitiva do primeiro conjunto de micróbios em a); em que o primeiro e o segundo conjuntos de micróbios são combinados em uma mistura única como um consórcio sintético. Em algumas modalidades, o consórcio sintético ou uma composição promove ou melhora a saúde, crescimento e/ou rendimento de planta. Em algumas modalidades, o consórcio sintético ou uma

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10/136 composição do mesmo de acordo com o presente pedido é aplicado a uma planta (ou uma parte da mesma), uma semente, ou uma muda.

[012] Em algumas modalidades, uma composição microbiana conforme descrito no presente documento, tal como qualquer uma das composições microbianas descritas acima e abaixo, compreende adicionalmente uma quantidade agricolamente eficaz de um composto ou composição selecionada dentre, porém, sem limitação, um nutriente, um fertilizante, um acaricida, um bactericida, um fungicida, um inseticida, um microbicida, um nematicida, e um pesticida e combinações dos mesmos. Em algumas modalidades das composições microbianas descritas no presente documento, a composição microbiana compreende adicionalmente um carreador, tal como (porém, sem limitação) um carreador orgânico ou um carreador inorgânico e combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, os carreadores adequados para as composições microbianas incluem, porém, sem limitação, lodo, turfa, relva, talco, lignito, caulinita, pirofilita, zeólito, montemorilonita, alginato, lama prensada, serragem e vermiculita e combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o carreador é uma semente de planta. Em algumas modalidades, a composição microbiana é preparada como uma formulação selecionada dentre, porém, sem limitação, um emulsão, um coloide, uma poeira, um grânulo, um pélete, um

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11/136 pó, um aspersor e uma solução. Em algumas modalidades, a composição microbiana descrita no presente documento é uma formulação de revestimento de semente.

[013] Outras modalidades fornecem um tratamento de semente de planta que tem um revestimento que compreende uma cepa microbiana ou uma cultura da mesma conforme descrito no presente documento. É também fornecida uma planta ou uma semente que tem um revestimento que compreende uma composição microbiana conforme descrito no presente documento.

[014] Outras modalidades fornecem um método de preparo de um consórcio microbiano sintético, que compreende a) selecionar um primeiro conjunto de micróbios que compreende um ou mais micróbios que promovem saúde, crescimento, e/ou rendimento de planta; b) selecionar um segundo conjunto de micróbios que compreende um ou mais micróbios que aumentam a aptidão competitiva do primeiro conjunto de micróbios na etapa a) ; e c) combinar esses micróbios em uma mistura única e designar a combinação como um consórcio sintético. Em algumas modalidades, o método compreende uma etapa adicional de aplicar o consórcio sintético conforme descrito no presente documento a uma planta (ou uma parte da mesma), uma semente ou uma muda. As presentes modalidades também fornecem um consórcio microbiano sintético preparado conforme descrito no presente documento. As presentes modalidades fornecem adicionalmente

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12/136 um método de promoção de saúde de planta, crescimento de planta e/ou rendimento de planta, que compreende aplicar um consórcio microbiano sintético preparado conforme descrito no presente documento a uma planta, uma parte de planta ou os arredores da planta.

[015] Outras modalidades fornecem um método para tratar sementes de planta ou preparação de semente. Em algumas modalidades, o método inclui expor ou colocar a semente de planta em contato com uma cepa microbiana de acordo com as presentes modalidades ou uma cultura da mesma. Em algumas modalidades, o método inclui expor ou colocar a semente de planta em contato com uma composição microbiana de acordo com as presentes modalidades.

[016] Outras modalidades fornecem um método para melhorar a saúde, crescimento e/ou rendimento de uma planta. Em algumas modalidades, tal método envolve aplicar uma quantidade eficaz de uma cepa microbiana, ou uma cultura da mesma à planta, uma parte de planta, ou aos arredores da planta. Em algumas modalidades, tal método envolve aplicar uma quantidade eficaz de uma composição microbiana à planta ou aos arredores da planta. Em algumas modalidades, o método envolve cultivar uma ou mais cepas microbianas em um meio de crescimento ou solo de uma planta hospedeira ou parte de planta antes ou simultaneamente com o crescimento da planta hospedeira no dito meio de crescimento ou solo. Em algumas

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13/136 modalidades do método acima, uma cepa microbiana é aplicada à planta, parte de planta, ou aos arredores da planta (por exemplo, camada de solo imediata ou rizosfera) em uma cultura ou uma composição de acordo com as presentes modalidades em uma concentração que é pelo menos 2x, 5x, lOx, lOOx, 500x, ou lOOOx a concentração da mesma cepa microbiana encontrada na natureza ou detectada em uma planta de controle não tratada, parte de planta, ou os arredores da planta de controle, respectivamente. Em algumas modalidades, mediante ou após a aplicação, a concentração da cepa microbiana na planta tratada, parte de planta, ou os arredores da planta (por exemplo, camada de solo imediata ou rizosfera) é pelo menos 2x, 5x, lOx, lOOx, 500x, ou lOOOx a concentração da mesma cepa microbiana encontrada na natureza ou detectada em uma planta de controle não tratada, parte de planta, ou os arredores da planta de controle. Em algumas modalidades do método acima, uma cepa microbiana é aplicada à planta, parte de planta, ou aos arredores da planta (por exemplo, camada de solo imediata ou rizosfera) em uma cultura ou uma composição em uma concentração que é maior do que IX 10² CFU/ml. Em algumas modalidades, as faixas de concentração são de cerca de 1 X 10² a cerca de 1 X IO¹⁰ CFU/ml, tais como as concentrações que variam de 1 X 10⁵ a 1 X 10⁹ CFU/ml. Em algumas modalidades, a aplicação de uma cepa microbiana (PGPM) conforme descrito no presente documento a uma planta,

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14/136 parte de planta, ou aos arredores da planta (por exemplo, camada de solo imediata ou rizosfera) em uma cultura ou uma composição em uma concentração que é pelo menos 1 X 10⁶ CFU/ml causa uma concentração da cepa microbiana na planta tratada, parte de planta ou os arredores da planta que é pelo menos 2x a quantidade da cepa encontrada em uma planta não-tratada ou seus arredores.

[017] Em algumas modalidades, uma ou mais cepas microbianas são estabelecidas como endófitos na planta, depois de ser aplicada à planta, parte de planta, ou aos arredores da planta. Em algumas modalidades, uma ou mais cepas microbianas são estabelecidas como endófitos na planta no tecido reprodutivo, tecido vegetative, tecidos regenerativos, partes de plantas, e/ou progenia dos mesmos. Em algumas modalidades, uma ou mais cepas microbianas são estabelecidas como endófitos na prole de sementes da planta que é exposta ou tratada com uma cepa microbiana, isolate, cultura, ou composição conforme descrito no presente documento. Algumas modalidades se referem a uma planta, parte de planta, ou uma semente que é infectada com pelo menos uma cepa microbiana conforme descrito no presente documento.

[018] Outras modalidades fornecem um método para prevenir, inibir ou tratar o desenvolvimento de uma doença patogênica de uma planta ou o desenvolvimento de uma peste de planta, inseto ou patógeno. Em algumas modalidades, tal

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15/136 método envolve aplicar uma quantidade eficaz de uma cepa microbiana, ou uma cultura da mesma à planta, parte de planta, ou aos arredores da planta. Em algumas modalidades, tal método envolve aplicar uma quantidade eficaz de uma composição microbiana à planta, parte de planta, ou os arredores da planta. Em algumas modalidades, o método envolve cultivar uma ou mais cepas microbianas em um meio de crescimento ou solo de uma planta hospedeira antes ou concorrente com a crescimento de planta hospedeira no dito meio de crescimento ou solo. Em algumas modalidades do método acima, uma cepa microbiana é aplicada à planta (ou uma parte da mesma) ou aos arredores da planta (por exemplo, camada de solo imediata ou rizosfera) em uma cultura ou uma composição em uma concentração que é pelo menos 2x, 5x, lOx, lOOx, 500x, ou lOOOx a concentração da mesma cepa microbiana encontrada ou detectada em uma planta de controle não tratada, parte de planta, ou os arredores da planta de controle, respectivamente. Em algumas modalidades, mediante ou após a aplicação, a concentração da cepa microbiana na planta tratada (ou uma parte da mesma) ou os arredores da planta (por exemplo, camada de solo imediata ou rizosfera) é pelo menos 2x, 5x, lOx, lOOx, 500x, ou lOOOx a concentração da mesma cepa microbiana encontrada ou detectada em uma planta de controle não tratada, parte de planta, ou os arredores da planta de controle. Em algumas modalidades do método acima,

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16/136 uma cepa microbiana é aplicada à planta, parte de planta, ou aos arredores da planta (por exemplo, camada de solo imediata ou rizosfera) em uma cultura ou uma composição em uma concentração que é maior do que 1 X 10² CFU/ml. Em algumas modalidades, as faixas de concentração de cerca de 1 X 10² a cerca de 1 X IO¹⁰ CFU/ml, tal como concentrações que variam de 1 X 10⁵ a 1 X 10⁹ CFU/ml. Em algumas modalidades, a aplicação de uma cepa microbiana (PGPM) a uma planta, parte de planta, ou aos arredores da planta (por exemplo, camada de solo imediata ou rizosfera) em uma cultura ou uma composição em uma concentração que é pelo menos 1 X 10⁶ CFU/ml causa uma concentração da cepa microbiana na planta tratada, parte de planta ou os arredores da planta que é pelo menos 2x a quantidade da cepa encontrada em uma planta não-tratada ou seus arredores.

[019] Em algumas modalidades, um método que compreende uma ou mais cepas microbianas são estabelecidas como endófitos na planta, depois de ser aplicada à planta, parte de planta ou aos arredores da planta. Em algumas modalidades, uma ou mais cepas microbianas são estabelecidas como endófitos na planta no tecido reprodutivo, tecido vegetative, tecidos regenerativos, partes de plantas, e/ou progenia dos mesmos. Em algumas modalidades, uma ou mais cepas microbianas são estabelecidas como endófitos no pólen da planta. Em algumas modalidades, uma ou mais cepas

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17/136 microbianas são estabelecidas como endófitos na prole de sementes da planta que é exposta ou tratada com uma cepa microbiana, isolato, cultura, ou composição conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o desenvolvimento de uma doença patogênica de uma planta, ou parte de planta, que pode ser prevenido, inibido, ou tratado por uma cepa microbiana, isolato, cultura, ou composição de acordo com as presentes modalidades, é causado por um patógeno de planta selecionada dentre, porém, sem limitação, organismos Colletotríchum, Fusarium, Gíbberella, Monographella, Penícíllíum, Pythíum, Xanthomonas, Ralstonía e Stagnospora. Em algumas modalidades, o patógeno cujo desenvolvimento pode ser prevenido, inibido ou tratado por uma cepa microbiana ou uma cultura da mesma, ou uma composição microbiana, de acordo com as presentes modalidades, é selecionado dentre, porém, sem limitação, organismos Colletotríchum, Fusarium, Gíbberella, Monographella, Penicillium, Pythíum, Xanthomonas, Ralstonía e Stagnospora.

[020] Outras modalidades fornecem uma planta de ocorrência não natural. Em algumas modalidades, a planta de ocorrência não natural é artificialmente infectada com uma ou mais cepas microbianas (PGPMs) de acordo com as presentes modalidades. É adicionalmente fornecida em algumas modalidades desse aspecto uma semente de planta, tecido

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18/136 reprodutivo, tecido vegetative, tecido regenerativo, parte de planta ou progenia da planta de ocorrência não natural.

[021] Outras modalidades fornecem um método para preparar uma composição agrícola. Tais métodos envolvem inocular a cepa microbiana, um isolate ou uma cultura da mesma, ou uma composição microbiana, de acordo com as presentes modalidades, em ou a um substrato e permitir que a mesma cresça.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[022] A menos que definido de outro modo, todos os termos da técnica, notações e outros termos científicos ou terminologia usada no presente documento são destinados a ter os significados comumente entendidos pelos especialistas no assunto a qual este pedido se refere. Em alguns casos, termos com significados comumente entendidos são definidos no presente documento por clareza e/ou para referência imediata, e a inclusão de tais definições no presente documento não deve ser necessariamente considerada para representar uma diferença substancial sobre o que é geralmente entendido na técnica. Muitas das técnicas e procedimentos descritos ou de referência no presente documento são entendidos e comumente empregados pelos especialistas no assunto.

[023] A forma no singular um, uma, o e a incluem referentes no plural, a menos que o contexto indique

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19/136 claramente o contrário. Por exemplo, o termo uma célula inclui uma (1) ou mais células, incluindo misturas das mesmas.

[024] Conforme usado no presente documento, uma cepa isolada de um micróbio é uma cepa que foi removida de seu ambiente natural. Sendo assim, o termo isolado não necessariamente reflete a extensão a qual o micróbio foi purificado. Mas, em diferentes modalidades, uma cultura isolada foi purificada pelo menos 2x ou 5x ou lOx ou 50x ou lOOx a partir da matéria-prima a qual a mesma é isolada. Como um exemplo não limitador, se uma cultura for isolada do solo como matéria-prima, o organismo pode ser isolado a uma extensão que sua concentração em uma dada quantidade de material purificado ou parcialmente purificado (por exemplo, solo) é pelo menos 2x ou 5x ou lOx ou 50x ou lOOx daquele na matéria-prima original.

[025] Uma cultura substancialmente pura da cepa de micróbio se refere a uma cultura que não contém substancialmente nenhum outro micróbio além da capa ou cepas desejadas de micróbio. Em outras palavras, uma cultura substancialmente pura de uma cepa de micróbio é substancialmente livre de outros contaminantes, que podem incluir contaminantes microbianos assim como contaminantes químicos indesejáveis.

[026] Conforme usado no presente documento, uma

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20/136 cepa agricolamente é destinada a significar a cepa separada de materiais com os quais a mesma é normalmente associada em natureza. Uma cepa associada a outras cepas, ou a compostos ou materiais que a mesma não é normalmente encontrada na natureza, é ainda definida como biologicamente pura. Uma monocultura de uma cepa particular é, evidentemente, biologicamente pura. Em modalidades diferentes, uma cultura biologicamente pura foi purificada pelo menos 2x ou 5x ou lOx ou 50x ou lOOx ou lOOOx ou mais (na extensão considerada viável por um especialista no assunto) a partir do material ao qual a mesma é normalmente associada na natureza. Como um exemplo não limitador, se uma cultura for normalmente associada ao solo, o organismo pode ser biologicamente puro em uma extensão que sua concentração em uma dada quantidade de material purificado ou parcialmente purificado ao qual a mesma é normalmente associada (por exemplo, solo) é pelo menos 2x ou 5x ou lOx ou 50x ou lOOx, ou lOOOx ou maior (na extensão considerada viável por um especialista no assunto) que no material não purificado original.

[027] Conforme usado no presente documento, o termo cultura enriquecida de uma cepa microbiana isolada se refere a uma cultura microbiana em que a população microbiana total da cultura contém mais do que 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, ou 95% da cepa isolada.

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[028] O termo cultivar, conforme usado no presente documento, se refere à propagação de organismos em ou sobre meios de vários tipos. Meios adequados são conhecidos a um elemento de habilidade comum na técnica.

[029] Uma composição conforme usado no presente documento significa uma combinação de um agente ativo (por exemplo, um PGPM ou cepa microbiana descrita no presente documento) e pelo menos um outro composto, carreador, ou composição, que pode ser inerte (por exemplo, um agente detectável ou marcação ou carreador liquido) ou ativo, tal como, porém, sem limitação, um fertilizante, nutriente, ou pesticida. Uma composição microbiana se refere a uma composição que compreende pelo menos uma espécie microbiana.

[030] Ribossomos, que são compreendidos por inúmeras proteínas ribosssomais e três moléculas de RNA ribossomal (rRNA), são um componente principal de síntese de proteína. O rRNA de subunidade 16S, que é codificado pelo gene de rRNA 16S, foi o foco de muita atenção em estudos filopatogênicos. A sequência de genes de rRNA 16S é altamente conservada entre grupos taxonômicos, ainda tem também regiões que são altamente polimórficas. Ademais, acreditase que a taxa de mudança na sequência de RNA tenha sido relativamente constante ao longo do tempo evolucionário, permitindo que cientistas determinem a associação relativa de diferentes organismos.

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[031] Uma quantidade eficaz, conforme usado no presente documento, é uma quantidade suficiente para afetar resultados benéficos e/ou desejados. Uma quantidade eficaz pode ser administrada em uma ou mais administrações. Em termos de tratamento, inibição ou proteção, uma quantidade eficaz é aquela quantidade suficiente para melhorar, estabilizar, reverter, retardar ou atrasar o progresso da infecção alvo, estresse abiótico, ou estado de doença. A expressão micro-organismo eficaz usado no presente documento em referência a um micro-organismo é destinada a significar que a cepa submetida exibe um grau de promoção de saúde, crescimento e/ou rendimento de planta ou um grau de inibição de uma doença patogênica que excede, em um nível estatisticamente significativo, que de um controle não tratado. Em alguns casos, a expressão uma quantidade eficaz é usada no presente documento em referência a essa quantidade de tratamento microbiano que é necessário para obter um beneficiai ou resultado desejado relativo ao que ocorre em um controle não tratado sob condições adequadas de tratamento conforme descrito no presente documento. Por exemplo, a expressão uma quantidade agricolamente eficaz é usada no presente documento em referência a essa quantidade de tratamento microbiano que é necessário para obter um resultado agricolamente benéfico ou desejado relativo ao que ocorre em um controle não tratado sob condições adequadas de

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23/136 tratamento conforme descrito no presente documento. A quantidade eficaz de uma formulação agrícola ou composição que deve ser aplicada para o aprimoramento de saúde, crescimento e/ou rendimento de planta, para o controle de, por exemplo, insetos, doenças de planta, ou ervas, podem ser prontamente determinadas por meio de uma combinação de conhecimento geral do campo aplicável.

[032] Um nutriente conforme usado no presente documento significa um composto ou composição que tem capacidade de fornecer um ou mais elementos de nutriente às plantas. Em algumas modalidades, um nutriente fornece um ou mais elementos de nutriente selecionados dentre nitrogênio (N) , fósforo (P), potássio (K), cálcio (Ca), magnésio (Mg), enxofre (S), ferro (Fe), manganês (Mn), zinco (Zn), cobre (Cu), níquel (Ni), boro (B) e molibdênio (Mo) às plantas. Em algumas modalidades, um nutriente conforme usado no presente documento fornece pelo menos um dentre nitrogênio (N), fósforo (P) e potássio (K) às plantas. Em algumas modalidades, um nutriente fornece pelo menos um dentre cálcio (Ca), magnésio (Mg) e enxofre (S) às plantas. Em algumas modalidades, um nutriente das modalidades dessa aplicação fornece pelo menos um dentre ferro (Fe), manganês (Mn), zinco (Zn), cobre (Cu), níquel (Ni), boro (B) e molibdênio (Mo) às plantas. Em algumas modalidades, um nutriente é um composto ou composição que promove a captação de planta de um ou mais

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24/136 elementos de nutriente selecionados dentre nitrogênio (N) , fósforo (P) , potássio (K) , cálcio (Ca), magnésio (Mg) , enxofre (S), ferro (Fe), manganês (Mn), zinco (Zn), cobre (Cu), níquel (Ni), boro (B) e molibdênio (Mo), do solo.

[033] A fertilizante conforme usado no presente documento significa um composto ou composição que é adicionado às plantas ou solo para aprimorar a saúde, crescimento e/ou rendimento de planta. Em algumas modalidades, um fertilizante aprimora a saúde, crescimento e/ou rendimento de planta fornecendo-se um nutriente (tal como aqueles descritos no presente documento) à planta. Fertilizantes incluem, porém, sem limitação, fertilizantes inorgânicos, fertilizantes orgânicos (ou naturais), fertilizantes granulares e fertilizantes líquidos. Fertilizantes granulares são grânulos sólidos, enquanto fertilizantes líquidos são feitos de pós solúveis em água ou concentrados líquidos que se mistura com água para formar uma solução de fertilizante líquido. Em algumas modalidades, plantas podem captar rapidamente a maior parte dos fertilizantes solúveis em água, enquanto fertilizantes granulares podem precisar de um tempo para se dissolverem ou se decomporem antes que as plantas possam acessar seus nutrientes. Fertilizantes granulares de alta tecnologia têm propriedades de liberação lenta, liberação de tempo programado, ou liberação controlada, termos sinônimos que

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25/136 significam que os mesmos liberam seus nutrientes lentamente por um periodo de tempo. Fertilizante orgânico é oriundo de uma fonte orgânica tal como, porém, sem limitação, adubo, esterco, refeição de sangue, refeição de semente de algodão, refeição de pena, refeição de caranguejo, ou outros, em oposição a fontes sintéticas. Há também alguns fertilizantes naturais que não são orgânicos, tais como Greensand, que contêm potássio, ferro, cálcio, e outros nutrientes. São considerados adequados para jardinagem orgânica devido ao fato de que os mesmos não são sintetizados, mas são oriundos de depósitos naturais ricos em minerais na terra. Fertilizantes orgânicos dependem dos micróbios no solo para quebrar os mesmos em porções digeríveis para plantas. Em algumas modalidades, fertilizantes orgânicos encorajam solo micróbios, minhocas, e outra flora mais do que fertilizantes sintéticos, devido ao fato de que a maioria dos fertilizantes orgânicos não adiciona sais em excesso e ácido ao solo. Fertilizantes inorgânicos são também conhecidos como fertilizantes sintéticos ou artificiais. Fertilizantes inorgânicos são fabricados.

[034] Um composto ou agente bacterioestático, ou um bacteriostato (abreviado Bstatic), é um agente biológico ou químico que interrompe o crescimento e reprodução das bactérias, enquanto não as danifica de outro modo. Um acaricida significa um composto ou composição que aumenta

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26/136 a mortalidade de, ou inibe materialmente o crescimento, reprodução, ou espalhamento de ácaros indesejados, incluindo, porém, sem limitação ácaros de pó. Um bactericida significa um composto ou composição que aumenta a mortalidade de, ou inibe materialmente o crescimento, reprodução, ou espalhamento de bactérias indesejadas, tais como (porém, sem limitação) aquelas desfavoráveis para o crescimento de planta. Um fungicida se refere a um composto ou composição que aumenta a mortalidade de, ou inibe materialmente o crescimento, reprodução, ou espalhamento de fungos indesejados, tais como (porém, sem limitação) aqueles desfavoráveis para o crescimento de planta. Um nematicida se refere a um composto ou composição que aumenta a mortalidade de, ou inibe materialmente o crescimento, reprodução, ou espalhamento de nematódeos indesejados. Um inseticida se refere a um composto ou composição que aumenta a mortalidade de, ou inibe materialmente o crescimento, reprodução, ou espalhamento de insetos indesejáveis, tais como (porém, sem limitação) aqueles que são nocivos para o crescimento de planta. Um microbicida se refere a um composto ou composição que aumenta a mortalidade de, ou inibe materialmente o crescimento, reprodução, ou espalhamento de micróbios indesejáveis, tais como (porém, sem limitação) aqueles que são nocivos para o crescimento de planta. A pesticida se

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27/136 refere a um composto ou composição que aumenta a mortalidade de, aumenta a resistência de planta, inibe materialmente o crescimento de, inibe materialmente a reprodução de, ou inibe materialmente o espalhamento de pestes indesejadas, tais como (porém, sem limitação) aquelas que são nocivas para o crescimento de planta.

[035] Um carreador conforme usado no presente documento se refere a uma substância ou uma composição que suporta a sobrevivência dos micróbios. Tais carreadores podem ser tanto orgânicos como não orgânicos. Em algumas modalidades, um carreador pode ser um carreador agricolamente aceito.

[036] Preparação de semente ou preparação de semente significa controlar o nivel de hidratação dentro das sementes de modo que a atividade metabólica necessária para germinação pode ocorrer, mas alongamento pelo eixo geométrico embrionário, isto é, geralmente emergência de radicula, é prevenida. Diferentes atividades fisiológicas dentro da semente ocorrem em diferentes níveis de umidade (Leopold e Vertucci, 1989, Moisture as a regulator of physiological reactions in seeds. Em: Seed Moisture, eds. P. C. Stanwood e M.B. McDonald. CSSA Special Publication Number 14. Madison, WI: Crop Science Society of America, pp.51 a 69; Taylor, 1997, Seed storage, germination and quality. Em: The Physiology of Vegetable Crops, ed. H.C. Wien.

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Wallingford, R.U.: CAB International, pp.1 a 36). A última atividade fisiológica no processo de germinação é emergência de radicula. A iniciação de emergência de radicula exige um alto teor de água de semente. Limitando-se o teor de água de semente, todas as etapas metabólicas necessárias para germinação podem ocorrer sem a ação irreversível de emergência de radicula. Antes da emergência de radicula, a semente é considerada tolerante a dissecação, desse modo o teor de umidade de semente preparada pode ser diminuído na secagem. Após a secagem, sementes preparadas podem ser armazenadas até o tempo de semeadura. Por exemplo, em algumas modalidades, uma semente de planta é exposta ou colocada em contato com uma cepa microbiana ou uma cultura da mesma, ou uma composição de acordo com as modalidades deste pedido durante o tratamento com hidratação de preparação de semente. Em algumas modalidades, a exposição ou contato de uma semente de planta com a cepa microbiana ou uma cultura da mesma ou uma composição das modalidades deste pedido, durante o processo de preparação aprimora o desempenho de germinação de semente, saúde de planta, crescimento de planta, e/ou final rendimento de planta posterior.

[037] Conforme usado no presente documento, um endófito é um endossimbionte que vive dentro de uma planta por pelo menos parte de sua vida. Endófitos podem ser transmitidos tanto verticalmente (diretamente do percursor

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29/136 à prole) ou horizontalmente (de indivíduo a indivíduo não relacionado). Em algumas modalidades, endófitos fúngicos verticalmente transmitidos são assexuais e transmitem da planta materna à prole por meio de hifas fúngicas que penetra nas sementes do hospedeiro. Endófitos bacterianos também podem ser transferidos verticalmente das sementes às mudas (Ferreira et al., FEMS Microbiol. Lett.287:8 a 14, 2008). Em algumas modalidades, endófitos horizontalmente transmitidos são tipicamente sexuais, e transmitem por meio de esporos que podem ser espalhados pelo vento e/ou vetores de inseto. Endófitos microbianos de plantas de safra receberam atenção considerável em relação a sua capacidade para controlar doença e infestação de inseto, assim como seu potencial em promover o crescimento de planta. Por exemplo, algumas cepas microbianas descritas no presente documento podem ter capacidade de estabelecer como endófitos em plantas que entram em contato com as mesmas. Tais cepas microbianas são endófitos microbianos.

[038] O termo patógeno conforme usado no presente documento se refere a um organismo tal como uma alga, um aracnídeo, uma bactéria, um fungo, um inseto, um nemátodo, uma planta parasitica, um protozoário, uma levedura, ou um vírus com capacidade de produzir uma doença em uma planta ou animal. O termo fitopatógeno conforme usado no presente documento se refere a um organismo patogênico que infecta

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30/136 uma planta. Uma doença patogênica é uma doença, tal como uma doença de planta, que é causada por pelo menos um patógeno. Uma doença fitopatogênica é uma doença, tal como uma doença de planta, que é causada por pelo menos um fitopatógeno. Alguns patógenos que podem causar doenças patogênicas de planta incluem, porém, sem limitação, organismos Colletotríchum, Fusarium, Gíbberella_r Monographella_r Penícíllíum e Stagnospora.

[039] Percentagem (%) de identidade de sequência em relação a uma sequência de referência (cobaia) é determinada como a porcentagem de resíduos de aminoácido ou nucleotídeos em uma sequência candidata (consulta) que são idênticas com os respectivos resíduos de aminoácido ou nucleotídeos na sequência de referência, depois de alinhar as sequências e introduzir lacunas, se necessário, para alcançar a porcentagem máxima de identidade de sequência, e não considerando nenhuma substituição conservativa de aminoácido como parte da identidade de sequência. O alinhamento para propósitos de determinar a porcentagem de identidade de sequência pode ser alcançada de vários modos que estão dentro da habilidade na técnica, por exemplo, com uso de software de computador publicamente disponível tal como BLAST, BLAST-2. Os especialistas no assunto podem determinar parâmetros apropriados para alinhar sequências, incluindo quaisquer algoritmos necessários para alcançar

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31/136 alinhamento máximo no comprimento total das sequências que são comparadas. A porcentagem de identidade entre as duas sequências é uma função do número de posições idênticas compartilhadas pelas sequências (por exemplo, porcentagem de identidade de sequência de consulta = número de posições idênticas entre sequências de consulta e submetida/número total de posições de sequência de consulta χΙΟΟ).

[040] Em algumas modalidades um polipeptídeo que compreende uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais a porcentagem de identidade de sequência através do comprimento inteiro da sequência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID NOS: 1 a 461.

[041] Conforme usado no presente documento em referência a um ácido nucleico e polipeptídeo, o termo variante é usado no presente documento para denotar um polipeptídeo, proteína ou molécula de polinucleotídeo com algumas diferenças, geradas sintética ou naturalmente, em suas sequências de aminoácido ou ácido nucleico conforme comparado a um polipeptídeo de referência ou polinucleotídeo, respectivamente. Por exemplo, essas diferenças incluem substituições, inserções, deleções ou quaisquer combinações desejadas de tais mudanças em um polipeptídeo ou polipeptídeo de referência. Polipeptídeo e

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32/136 variantes de proteína pode consistir adicionalmente em mudanças de carga e/ou modificações pós-translacionais (tais como glicosilação, metilação. micro-habitat

[042] O termo variante, quando usado no presente documento em referência a um micro-organismo, é uma cepa microbiana que tem características de identificação das espécies ás quais o mesmo pertence, enquanto tem pelo menos uma variação de sequência de nucleotídeos ou trato de diferença identificável em relação à cepa parental, em que o trato é geneticamente baseado (hereditário).

[043] PGPM se refere a micro-organismos promotores de crescimento de planta (ou micróbios). Em algumas modalidades, PGPMs não somente podem promover a saúde, crescimento e/ou rendimento de planta, mas também pode sobreviver e multiplicar em micro-habitats associados à superfície de raiz, em competição com outros microbiota, e/ou têm capacidade de colonizar a raiz, pelo menos pelo tempo necessário para expressar suas atividades de promoção e/ou proteção de planta. Em algumas modalidades, cepas microbianas cujo gene de rRNA 16S compreende uma sequência de ácidos nucleicos selecionada dentre as SEQ ID NOs.: 1 a 461, são PGPMs.

[044] As PGPMs, isolates, culturas, composições ou consórcios sintéticos promovem ou melhoram saúde de planta, crescimento ou rendimento, e/ou têm atividade de promoção de

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33/136 crescimento de planta. 0 termo atividade de promoção de crescimento de planta, conforme usado no presente documento, abrange uma ampla faixa de propriedades de planta aprimoradas, incluindo, por exemplo, sem limitação, fixação de nitrogênio aprimorada, desenvolvimento de raiz aprimorado, área de folha aumentada, rendimento de planta aumentado, germinação de semente aumentada, fotossintese aumentada, ou um aumento de biomassa acumulada da planta. Em algumas modalidades, as cepas microbianas, isolates, culturas, composições ou consórcios sintéticos conforme descrito no presente documento aprimora tolerância a estresse (por exemplo, tolerância a estiagem, inundação, salinidade, calor, peste), aprimora a captação de nutriente, saúde e vigor da planta, aprimora o desenvolvimento de raiz, aumenta a área de folha, aumenta o rendimento de planta, aumenta a germinação de semente, ou um aumento de biomassa acumulada da planta. Em algumas modalidades, as cepas microbianas, isolates, culturas, composições ou consórcios sintéticos conforme descrito no presente documento aumentam o tamanho ou massa de uma planta ou partes da mesma, conforme comparado a uma planta de controle, ou partes da mesma ou conforme comparado a um padrão predeterminado. Em algumas modalidades, as cepas microbianas, isolates, culturas, composições ou consórcios sintéticos conforme descrito no presente documento promovem o crescimento de planta

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34/136 promovendo-se a germinação de semente, conforme comparado a uma semente de controle. Em algumas modalidades, as cepas microbianas, isolates, culturas, composições ou consórcios sintéticos conforme descrito no presente documento aprimoram a saúde, vigor, e/ou rendimento de uma planta, conforme comparado a uma planta de controle.

[045] Conforme usado no presente documento, o termo rendimento se refere às quantidades de material de planta passível de colheita ou produto derivado de planta, e é normalmente definido como o produto mensurável de valor econômico de uma safra. Para as plantas de safra, rendimento também significa a quantidade de material passível de colheita por acre ou unidade de produção. Rendimento pode ser definido em termos de quantidade e/ou qualidade. O material passível de colheita pode variar de safra para safra, por exemplo, o mesmo pode ser sementes, acima de biomassa terrestre, raízes, frutas, fibras de algodão, qualquer outra parte da planta, ou qualquer produto derivado de planta que é de valor econômico.

[046] O termo rendimento também abrange potencial de rendimento, que é o rendimento máximo obtenível. Rendimento pode ser dependente de um número de componentes de rendimento, que podem ser monitorados por determinados parâmetros. Esses parâmetros são conhecidos por especialistas no assunto e variam de safra para safra. O

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35/136 termo rendimento também abrange índice de coleta, que é a razão entre a biomassa colhida sobre a quantidade total de biomassa.

[047] Em algumas modalidades, as cepas microbianas, isolates, culturas e composições de acordo com as modalidades deste pedido causam o aprimoramento de crescimento de planta que é um aumento de pelo menos 2%, aumento de pelo menos 3%, aumento de pelo menos 4%, aumento de pelo menos 5%, aumento de pelo menos 10%, aumento de pelo menos 15%, pelo menos 20%, aumento de pelo menos 25%, aumento de pelo menos 50%, aumento de pelo menos 75%, ou pelo menos um aumento de 100% na propriedade a ser medida. Desse modo, como exemplos nãolimitadores, as cepas microbianas, isolates, culturas e composições de acordo com as modalidades deste pedido podem produzir um aumento de porcentagem declarado acima na fixação de nitrogênio, ou um aumento declarado acima no peso total de raiz, ou na área de folha ou no rendimento de produto de planta (por exemplo, um aumento de porcentagem declarado acima no peso de produto de planta) , ou um porcentagem aumentada de sementes que germinam dentro de 10 dias ou 14 dias ou 30 dias, ou taxa de fotossíntese (por exemplo, determinado por consumo de CO2) ou biomassa acumulada da planta (por exemplo, determinada em peso e/ou altura da planta). O produto de planta é o item - geralmente, porém, não necessariamente - um item alimentício produzido pela

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36/136 planta .

[048] A planta de controle, conforme usado no presente documento, fornece um ponto de referência para medir mudanças no fenótipo da planta cobaia, e pode ser qualquer célula vegetal adequada, semente, componente de planta, tecido vegetal, órgão vegetal ou planta inteira. A planta de controle pode compreender, por exemplo (porém, sem limitação), (a) uma planta ou célula de tipo selvagem, isto é, do mesmo genótipo que o material de partida para a alteração genética que resultou na planta ou célula cobaia; (b) uma planta ou célula do genótipo do material de partida, mas que foi transformado com um construto nulo (isto é, um construto que não tem efeito colateral no trato de interesse, tais como um construto que compreende um gene repórter); (c) uma planta ou célula que é um segregante não-transformado dentre progenia de uma planta ou célula cobaia; (d) uma planta ou célula que é geneticamente idêntica à planta ou célula cobaia, mas que não é exposta ao mesmo tratamento (por exemplo, tratamento com inoculante) que a planta ou célula cobaia; (e) a própria planta ou célula cobaia, sob condições nas quais o gene de interesse não é expresso; ou (f) a própria planta ou célula cobaia, sob condições nas quais a mesma não foi exposta a um tratamento particular, tal como, por exemplo, um inoculante ou combinação de inoculantes, cepas microbianas, e/ou outros produtos

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37/136 químicos. Inoculante conforme usado no presente documento se refere a qualquer cultura ou preparação que compreende pelo menos um micro-organismo. Em algumas modalidades, um inoculante (algumas vezes como inoculante microbiano, ou inoculante de solo) é uma alteração agrícola que usa micróbios benéficos, tais como PGPMs, (incluindo, porém, sem limitação endófitos) para promover a saúde, crescimento e/ou rendimento de planta. Muitos dos micróbios adequados para uso em um inoculante de relações simbióticas com as safras alvo em que ambas as partes se beneficiam (mutualismo).

[049] A aptidão competitiva se refere à aptidão dos micróbios para competir com seus vizinhos por espaço e recursos. Aptidão significa a capacidade ou propensão de um dado genótipo (por exemplo, uma sequência de genes de rRNA 16S) tanto para sobreviver quanto para reproduzir em um dado ambiente.

[050] Biofertilizantes designam os produtos biológicos que contêm micro-organismos que fornecem ganhos diretos e/ou indiretos em saúde, crescimento e/ou rendimento de planta.

[051] Um biorreator se refere a qualquer dispositivo ou sistema que suporta um ambiente biologicamente ativo. Conforme descrito no presente documento um biorreator é um reservatório no qual microorganismos que incluem o micro-organismo das modalidades

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38/136 deste pedido pode ser cultivado.

[052] Todas as publicações, patentes e pedidos de patente publicados em referência neste pedido são especificamente incorporados a título de referência ao presente documento.

[053] Diversos micro-organismos associados a planta, incluindo, porém, sem limitação, muitas espécies rizobacteriais, podem causar impacto positivo na saúde de planta e fisiologia em uma variedade de maneiras. Esses micróbios benéficos são geralmente denominados como PGPMs, tais como bactérias promotoras de crescimento de planta (PGPB) ou rizosfera promotora de crescimento de planta (PGPR). Cepas isoladas de micro-organismos foram relatadas como tendo atividade de promoção de crescimento de planta e/ou atividade de biocontrole, e novos gêneros e espécies com atividades similares estão sendo ainda descobertos. Adicionalmente, dentro de some gêneros bacterianos, múltiplas espécies e subespécies de agentes de biocontrole foram identificados e podem ser encontrados através de múltiplas escalas espaciais, do nível global a nível de fazenda, e mesmo em plantas únicas. Ademais, foi relatado que alguns isolados microbianos individuais podem exibir biocontrole e/ou atividade de promoção de crescimento de planta não somente nas plantas ou safras das quais as mesmas foram obtidas, mas também em outras safras. Isso indica a

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39/136 natureza generalista de alguns genótipos, especialmente aqueles com uma ampla distribuição geográfica. Se introduzido em números suficientes e ativos por uma duração suficiente, uma população microbiana única pode ter um impacto significativo na saúde de planta.

[054] As modalidades reveladas incluem novas cepas microbianas que são PGPMs. Em algumas modalidades, o gene de rRNA 16S da cepa microbiana compreende uma sequência de nucleotideos selecionada a partir das SEQ ID NOs 1 a 461. Em algumas modalidades, a cepa microbiana compreende um gene de rRNA 16S que compreende uma sequência de nucleotideos selecionada a partir das SEQ ID NOs 165 a 461. Em algumas modalidades, o gene de rRNA 16S da cepa microbiana compreende uma sequência de nucleotideos que exibe pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99.5%, pelo menos 99.6%, pelo menos 99.7%, pelo menos 99.8%, ou pelo menos 99,9% de identidade de sequência com qualquer uma das sequências de nucleotideo conforme estabelecido nas SEQ ID NOs 1 a 461. Algumas modalidades fornecem um gênero de microorganismos promotores de crescimento de planta que compreende qualquer uma das sequências de DNA descritas no presente documento e que melhora a saúde, crescimento e/ou rendimento de uma planta, conforme descrito no presente

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40/136 documento .

[055] Em algumas modalidades, a cepa microbiana é selecionada dentre P0032_CA P0048_BU P0050_F5 (também denominado S2199,), P0035_B2 (também denominado S2145, n° de depósito NRRL B-67091), P0020_BU P0047_Al (também denominado S2284, n° de depósito NRRL B-67102), P0033_El (também denominado S2177), Ρ0032_Αθ (também denominado S2181, n° de depósito NRRL B-67099), P0049_E⁷, Ρ0042_Αθ (também denominado S2167), P0042_D5 (também denominado S2165), P0042_B2 (também denominado S2168, n° de depósito NRRL B-67096), P0042_B12 (também denominado S2189), P0042_C2 (também denominado S2173, n° de depósito NRRL B-67098), P0042_D10 (também denominado S2172, n° de depósito NRRL B67097), P0044_A3 (também denominado S2476), P0018_AH< P0044_A5, P0047_E2, P0047_CG P0038_D2 ou S2166, P0042_EU Ρ0047_Εθ/ ΡΟΟΙδ-Α¹' S2159_P°⁰⁵⁸_^B9 (ⁿ° de depósito NRRL B67092), S2161_P0054_E⁸ (n° de depósito NRRL B-67094), S2164_P0054_F4, P0057_A3 (também denominado S2160, n° de depósito NRRL B-67093), S2142_P°⁰61_^B11’ S2163_P°⁰1⁹_^Α12 (n° de depósito NRRL B-67095), P0147_D10 (também denominado S2291, n° de depósito NRRL B-67104), P0147_G10 (também denominado S2292, n° de depósito NRRL B-67105), P0160_F7 (também denominado S2351), P0140_C10 (também denominado S2300, n° de depósito NRRL B-67107), S2387, P0157_G5 (também denominado S2303, n° de depósito NRRL B-67108), P0160_El

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41/136 (também denominado S2374), P0134_G7 (também denominado S2280), S2384 (n° de depósito NRRL B-67112), S2275 (n° de depósito NRRL B-67101), S2278, S2373 (n° de depósito NRRL B67109), S2370, S2293 (n° de depósito NRRL B- -67106) S2382 (n° de depósito NRRL B-67111), P0132_A12, P0132_C12, P0140_D9, P0173_H3 (também denominado S2404), S2385 (n° de depósito NRRL B-67113), S2197 (n° de depósito NRRL67100), S2285 (n° de depósito NRRL B-67103), S2477, S2376, S2420, S2424, S2445, S2333, S2329, S2327, S2330, S2423 (n° de depósito NRRL B-67115), S2435, S2158, S2437, S2332, S2521, S2228, S2473, P0156_G2, P0154_G3, S2487, S2488, S2421 (n° de depósito NRRL B-67114), P0105_C5, P0154_H3, P0156JG1, S1112 (n° de depósito NRRL B-67090), S2375 (n° de depósito NRRL B67110), e S2669 (n° de depósito NRRL B-67117), S2651, S2652, S2653, S2654, S2655, S2656, S2668, S2644 (n° de depósito NRRL B-67116), S2328, S2646, S2834 (n° de depósito NRRL B67441), S2381 (n° de depósito NRRL B-67442), S2543 (n° de depósito NRRL B-67443), S2695 (n° de depósito NRRL B-67444), S2700 (n° de depósito NRRLB 67445) S2145-2 (NRRL B-67331), S2292-2 (NRRL B-67332), S2300-2 (NRRL B-67333), S2303-2 (NRRL B-67334), S2375-2 (NRRL B-67335), S2382-2 (NRRL B67336), S2423-2 (NRRL B-67337), S2669-2 (NRRL B-67338), ou uma cepa derivada de qualquer uma dessas cepas. Os depósitos foram criados sob as condições do Tratado de Budapeste no Reconhecimento Internacional do Depósito de Micro-organismos

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42/136 para os propósitos de Procedimento de Patente. Além disso, esses depósitos serão mantidos sob os termos do Tratado de Budapeste no Reconhecimento Internacional do Depósito de Micro-organismos para os propósitos de Procedimento de Patente. 0 acesso a esses depósitos será disponível durante a pendência do pedido ao Comissário de Patentes e Marcas e pessoas determinadas pelo Comissário a serem intituladas a mesma mediante solicitação. Mediante concessão de quaisquer reivindicações no pedido, a Depositante tornará disponível ao público de acordo com o protocolo 37 C.F.R. § 1.808, amostra (ou amostras) dos depósitos. Os depósitos serão mantidos no depositário de NRRL, que é um depositário público, por um período de 30 anos, ou 5 anos após a solicitação mais recente, ou para a vida aplicável da patente, seja qual for o mais longo, e será substituído se o mesmo se tornar não viável durante esse período. Adicionalmente, a Depositante atendeu a todos os requisitos do protocolo 37 C.F.R. §§1.801 - 1.809, incluindo fornecer uma indicação da viabilização da amostra mediante depósito.

[056] Algumas modalidades também fornecem isolatos e culturas das cepas microbianas conforme descrito no presente documento, e composições e consórcios sintéticos que compreendem várias combinações daquelas cepas microbianas, isolatos ou culturas.

[057] Em algumas modalidades, os PGPMs, quando

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43/136 aplicados à semente, superfícies de planta, partes de plantas, ou solo, coloniza rizosfera e/ou o interior da planta e promove o crescimento da planta hospedeira. Em algumas modalidades, PGPMs são biofertilizantes. Em algumas modalidades, os PGPMs são fertilizantes microbianos, que suprem a planta com nutrientes e assim, podem promover o crescimento de planta na ausência de pressão de patógeno. Em algumas modalidades, os PGPMs podem promover diretamente o crescimento de planta e/rendimento através de mecanismos, incluindo, porém, sem limitação, capacidade de produzir ou mudar a concentração de hormônios vegetais; fixação de nitrogênio assimbiótica; e/ou solubilização de fosfato mineral e outros nutrientes.

[058] Em algumas modalidades, PGPMs podem afetar o crescimento e desenvolvimento de planta como fitoestimulantes. Por exemplo, alguns PGPMs descritos no presente documento têm a capacidade para produzir ou mudar a concentração de hormônios vegetais, incluindo, porém, sem limitação os cinco fitohormônios clássicos, isto é, auxina, etileno, ácido abscisíco, citocinina e giberelina. Alguns PGPMs também podem produzir enzimas ou metabólitos secundários que afetam a produção de fito-hormônio em plantas. Em algumas modalidades, PGPMs pode ter a capacidade para produzir ou mudar a concentração de outros hormônios assim como determinados compostos orgânicos voláteis (VOCs)

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44/136 e a cofator quinona de pirrolquinolina (PQQ), estimulando assim crescimento de planta e/ou rendimento.

[059] Em algumas modalidades, PGPMs podem afetar o crescimento e desenvolvimento de planta modificando-se a disponibilidade de nutriente ou captação. As PGPMs podem alterar as taxas de captação de nutriente, por exemplo, por efeitos diretos em raízes, por efeitos no ambiente, o que, por sua vez, modificam comportamento de raiz, e competindo diretamente por nutrientes. Alguns fatores pelos quais PGPMs descritos no presente documento podem desempenhar uma função em modificar o nutriente usam eficiência em solos incluem, por exemplo, geometria de raiz, solubilidade de nutriente, disponibilidade de nutriente produzindo-se formas de íon congenial de planta, divisão dos nutrientes em planta e eficiência de utilização. Por exemplo, um baixo nível de fosfato solúvel pode limitar o crescimento de plantas. Alguns micróbios promotores de crescimento de planta têm capacidade de solubilizar fosfato tanto a partir de fosfatos de ligação orgânica como a partir de fosfatos de ligação inorgânica, facilitando assim crescimento de planta.

[060] Em algumas modalidades, PGPMs podem afetar o crescimento e desenvolvimento de planta como controladores de estresse de planta. Por exemplo, alguns PGPMs podem controlar e/ou reduzir vários tipos de estresse de planta, incluindo, porém, sem limitação, estresse dos efeitos de

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45/136 bactérias fitopatogênicas, estresse de hidrocarbonetos poliaromáticos, estresse de metal pesado tal como Ca²⁺ e Ni²⁺ e estresse de sal e condições climáticas severas (por exemplo, estiagem ou inundação).

[061] Em algumas modalidades, PGPMs podem promover saúde, crescimento e/ou rendimento de planta diretamente controlando-se fitopatógenos ou pestes em plantas. Em algumas modalidades, PGPMs descritos no presente documento exibem um ou mais mecanismos de controle de doença biológica, sendo que a maioria das quais envolve competição e produção de metabolites que afetam o patógeno diretamente. Exemplos de tais metabólitos incluem antibióticos, enzimas de degradação de parede celular, sideróforos e HCN. Vale salientar que diferentes mecanismos podem ser encontrados em uma única cepa de PGPM e atuam simultaneamente. Em algumas modalidades, PGPMs podem afetar o crescimento e desenvolvimento de planta produzindo-se sideróforos extracelulares. Alguns PGPMs descritos no presente documento podem secretar cofatores microbianos quelantes férricos de alta afinidade de baixo peso molecular que melhoram especificamente sua aquisição de ferro por ligação de receptores de sideroforo ligado a membrana. Sideroforos são pequenos quelantes de alta afinidade que se ligam a Fe, tornando-o mais (ou menos) disponível a determinado membro de microflora natural. Por exemplo, um sideroforo pode tornar

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Fe mais disponível a uma planta ou micróbio que tem a capacidade de reconhecer e importar a estrutura molecular de sideroforo específico. Muitos tipos diferentes de sideroforo e estruturas existem com diferentes afinidades de ligação de Fe. Ademais, a troca de Fe de um sideroforo com baixa afinidade de ligação de Fe a um com maior afinidade de ligação de Fe é conhecida por ocorrer, o que pode também influenciar na disponibilidade de Fe a qualquer dado organismo. Um dos sideróforos produzidos por alguns PGPMs de pseudomonados é conhecido como pseudobactina que exibe o crescimento de Erwinia cartovora (organismo causai do apodrecimento de batatas) (consultar, por exemplo, Kloepper et al. Current Microbiol.4: 317 a 320, 1980) . Adições de pseudobactina ao meio de crescimento inibiram a infecção por apodrecimento e também reduziu ao número de fungos patogênicos na planta de batata junto com um aumento significativo no rendimento de batata. A maior evidência para corroborar a teoria de sideroforo de controle biológico por PGPM vêm do trabalho com as pioverdinas, uma classe de sideoforos que compreende os pigmentos fluorescentes de pseudomonados fluorescentes (Demange et al. in Iron Transport in Microbes, Plants and Animals, pp 167 a 187, 1987) . De acordo com a teoria de sideroforo, pioverdinas demonstram determinada especificidade de cepa funcional que se dá devido ao reconhecimento seletivo de receptores de

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47/136 sideroforo de membrana externa (Bakker et al. Soil Biology and Biochemistry 19: 443 a 450, 1989) . A produção de sideroforo (ou sideroforos) pode modular a aptidão e/ou crescimento de outras cepas. Adicionalmente à inibição de determinadas cepas (por exemplo, Erwinia), a produção de sideroforo (ou sideroforos) também pode suportar a aptidão/crescimento de outras cepas microbianas que têm receptores para um dado sideroforo, mas não têm capacidade própria de sintetizar a molécula.

[062] Em algumas modalidades, os PGPMs podem atuar indiretamente na planta aumentando-se a aptidão competitiva de uma segunda cepa microbiana (por exemplo, outro PGPM), por exemplo, fornecendo-se nutrientes, metabólitos e/ou sideroforos (e/ou por qualquer outro mecanismo de beneficiamento conforme descrito no presente documento) à segunda cepa microbiana. Em algumas modalidades, os PGPMs podem atuar indiretamente na planta aumentando-se a aptidão competitiva de uma segunda cepa microbiana (por exemplo, outro PGPM), por exemplo, fornecendo-se nutrientes, metabólitos e/ou sideroforos (e/ou por qualquer outro mecanismo de beneficiamento conforme descrito no presente documento) à segunda cepa microbiana, e/ou diminuindo-se a aptidão competitiva de uma terceira cepa microbiana que exibe, compete com, ou exclui ou de outro modo tem um impacto negativo na aptidão da segunda cepa microbiana.

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[063] Em algumas modalidades, os PGPMs são agentes de biocontrole de doenças de planta ativando-se defesas químicas e/ou físicas das plantas hospedeiras, isto é, induzindo resistência sistêmica induzida (ISR) ou resistência adquiridas sistêmicas (SAR). Em algumas modalidades, a indução de resistência promovida por PGPMs das presentes modalidades é ativa e sinalizante na rota de ácido salicílico com indução de proteínas relacionada à patogênese (PR-proteínas) ou rota do ácido jasmônico e etileno. Algumas vezes, quando os PGPMs colonizam a raiz sistema, constituintes das moléculas de célula de microorganismo atuam como um sinal bioquímico, e os genes que codificam para a síntese das PR-proteínas são ativadas. Adicionalmente às PR-proteínas, plantas produzem outras enzimas da defesa, incluindo peroxidases, amônia-lise de fenilalanina (PAL), e polifenoloxidase (PPG). Peroxidase e PPG são catalisadores na formação de lignina. PAL e outras enzimas são envolvidas na formação de fitoalexinas. Em algumas modalidades, os PGPMs descritos no presente documento induzem resistência de planta a doenças aumentando-se a produção de peroxidases, PPG e/ou PAL.

[064] Em algumas modalidades, os PGPMs das modalidades deste pedido promovem a saúde, crescimento e/ou rendimento de planta por meio de um ou mais dos mecanismos conforme descrito no presente documento.

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[065] Em algumas modalidades, os PGPMs das modalidades deste pedido são biofertilizantes ou agentes de biocontrole, que são compatíveis com agricultura orgânica.

[066] Outros aspectos das presentes modalidades contemplam PGPMs isolados e/ou cultivados. Em um aspecto, uma modalidade fornece cepas microbianas isoladas (ou PGPMs), culturas isoladas das mesmas, culturas biologicamente puras das mesmas, e culturas enriquecidas das mesmas. Em algumas modalidades, o isolato ou cultura microbiana compreende pelo menos uma cepa microbiana, em que o gene de rRNA 16S da cepa microbiana compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir das SEQ ID NOs 1 a 461. Em algumas modalidades, o isolato ou cultura microbiana compreende pelo menos uma cepa microbiana, em que o gene de rRNA 16S da cepa microbiana compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir das SEQ ID NOs 165 a 461. Em algumas modalidades, o isolato ou cultura microbiana compreende pelo menos uma cepa microbiana, em que um gene de rRNA 16S da cepa microbiana compreende uma sequência de nucleotídeos que exibe pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 99,5% de identidade de sequência com qualquer uma das sequências de nucleotídeo conforme estabelecido nas SEQ ID NOs 1 a 461.

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[067] Algumas modalidades fornecem um isolate ou cultura microbiana do mesmo que compreende pelo menos cepa microbiana selecionada dentre: P0032_C7, P0048_B9, P0050_F5 (também denominado S2199,), P0035_B2 (também denominado S2145, n° de depósito NRRL B-67091), P0020_Bl, P0047_Al (também denominado S2284, n° de depósito NRRL B- -67102), P0033_El (também denominado S2177), P0032_A8 (também denominado S2181, n° de depósito NRRL B-67099), P0049_E7, P0042_A8 (também denominado S2167), P0042_D5 (também denominado S2165), P0042_B2 (também denominado S2168, n° de depósito NRRL B-67096), P0042_B12 (também denominado S2189) , P0042_C2 (também denominado S2173, n° de depósito NRRL B67098), P0042_D10 (também denominado S2172, n° de depósito NRRL B-67097), P0044_A3 (também denominado S2476), P0018_All, P0044_A5, P0047_E2, P0047_Cl, P0038_D2 ou S2166, P0042_El, P0047_E8, P0018_Al, S2159_P0058_B9 (n° de depósito NRRL B-67092), S2161_P0054_E8 (n° de depósito NRRL B-67094), S2164_P0054_F4, P0057_A3 (também denominado S2160, n° de depósito NRRL B-67093), S2142_P0061_E11, S2163_P0019_A12 (n° de depósito NRRL B-67095), P0147_D10 (também denominado S2291, n° de depósito NRRL B-67104), P0147_G10 (também denominado S2292, n° de depósito NRRL B-67105), P0160_F7 (também denominado S2351), P0140_C10 (também denominado S2300, n° de depósito NRRL B-67107), S2387, P0157_G5 (também denominado S2303, n° de depósito NRRL B-67108), P0160_El

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51/136 (também denominado S2374), P0134_G7 (também denominado S2280), S2384 (n° de depósito NRRL B-67112), S2275 (n° de depósito NRRL B-67101), S2278, S2373 (n° de depósito NRRL B67109), S2370, S2293 (n° de depósito NRRL B-67106) S2382 (n° de depósito NRRL B-67111), P0132_A12, P0132_C12, P0140_D9, P0173_H3 (também denominado S2404), S2385 (n° de depósito NRRL B-67113), S2197 (n° de depósito NRRL67100), S2285 (n° de depósito NRRL B-67103), S2477, S2376, S2420, S2424, S2445, S2333, S2329, S2327, S2330, S2423 (n° de depósito NRRL B67115), S2435, S2158, S2437, S2332, S2521, S2228, S2473, P0156JG2, P0154JG3, S2487, S2488, S2421 (n° de depósito NRRL B-67114), P0105_C5, P0154_H3, PO156_G1, S1112 (n° de depósito NRRL B-67090), S2375 (n° de depósito NRRL B-67110), e S2669 (n° de depósito NRRL B-67117), S2651, S2652, S2653, S2654, S2655, S2656, S2668, S2644 (n° de depósito NRRL B67116), S2328, S2646, S2834 (n° de depósito NRRL B-67441), S2381 (n° de depósito NRRL B-67442), S2543 (n° de depósito NRRL B-67443), S2695 (n° de depósito NRRL B-67444), S2700 (n° de depósito NRRLB 67445) S2839 (NRRL B-67447), S2876 (NRRL B-67448), S2871 (NRRL B-67440), S2145-2 (NRRL B67331), S2292-2 (NRRL B-67332), S2300-2 (NRRL B-67333), S2303-2 (NRRL S2375-2), S2382-2 (NRRL B-67336), ou uma cepa derivada de qualquer uma dessas cepas. Os isolates ou culturas microbianas promovem a saúde, crescimento e/ou rendimento de planta, por exemplo, por meio de um ou mais

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52/136 dos mecanismos conforme descrito no presente documento.

COMPOSIÇÕES MICROBIOLÓGICAS

[068] Modalidades deste pedido fornecem uma composição microbiana que compreende um PGPM ou uma cepa microbiana, tal como uma cepa microbiana selecionada dentre aquelas descritas no presente documento, ou uma cultura da mesma. Em algumas modalidades, a composição microbiana compreende uma cepa microbiana, em que o gene de rRNA 16S da dita cepa compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs 1 a 461, ou uma cultura da mesma.

[069] Em algumas modalidades, uma composição microbiana compreende pelo menos uma cepa microbiana, em que o gene de rRNA 16S da dita cepa compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs 1 a 461, ou uma cultura da mesma. Em algumas modalidades, a composição microbiana compreende pelo menos uma cepa microbiana, em que um gene de rRNA 16S da cepa microbiana compreende uma sequência de nucleotideos que exibe pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 99,5% de identidade de sequência com qualquer uma das sequências de nucleotideo conforme estabelecido nas SEQ ID NOs 1 a 461, ou uma cultura da mesma.

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[070] Em algumas modalidades, uma composição microbiana compreende pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos dez, ou pelo menos 20 cepas microbianas, em que o gene de rRNA 16S da dita cepa compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs 1 a 461, ou uma cultura da mesma. Em algumas modalidades, a composição microbiana compreende pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos dez, ou pelo menos 20 cepas microbianas, em que o gene de rRNA 16S da cepa microbiana compreende uma sequência de nucleotídeos que exibe pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 99,5% de identidade de sequência com qualquer uma das sequências de nucleotídeo conforme estabelecido in SEQ ID NOs 1 a 461, ou uma cultura da mesma.

[071] Em algumas modalidades, a composição microbiana compreende uma ou mais cepas microbianas selecionadas dentre P0032_C7, P0048_B9, P0050_F5 (também denominado S2199,), P0035_B2 (também denominado S2145, n° de depósito NRRL B-67091), P0020_Bl, P0047_Al (também denominado S2284, n° de depósito NRRL B-67102), P0033_El (também denominado S2177), P0032_A8 (também denominado S2181, n° de depósito NRRL B-67099), P0049_E7, P0042_A8

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54/136 (também denominado S2167), P0042_D5 (também denominado S2165), P0042_B2 (também denominado S2168, n° de depósito NRRL B-67096), P0042_B12 (também denominado S2189), P0042_C2 (também denominado S2173, n° de depósito NRRL B-67098), P0042_D10 (também denominado S2172, n° de depósito NRRL B67097), P0044_A3 (também denominado S2476), P0018_All, P0044_A5, P0047_E2, P0047_Cl, P0038_D2 ou S2166, P0042_El, P0047_E8, P0018_Al, S2159_P0058_B9 (n° de depósito NRRL B67092), S2161_P0054_E8 (n° de depósito NRRL B-67094), S2164_P0054_F4, P0057_A3 (também denominado S2160, n° de depósito NRRL B-67093), S2142_P0061_E11, S2163_P0019_A12 (n° de depósito NRRL B-67095), P0147_D10 (também denominado S2291, n° de depósito NRRL B-67104), P0147_G10 (também denominado S2292, n° de depósito NRRL B-67105), P0160_F7 (também denominado S2351), P0140_C10 (também denominado S2300, n° de depósito NRRL B-67107), S2387, P0157_G5 (também denominado S2303, n° de depósito NRRL B-67108), P0160_El (também denominado S2374), P0134_G7 (também denominado S2280), S2384 (n° de depósito NRRL B-67112), S2275 (n° de depósito NRRL B-67101), S2278, S2373 (n° de depósito NRRL B67109), S2370, S2293 (n° de depósito NRRL B- 67106) S2382 (n° de depósito NRRL B-67111), P0132_A12, P0132_C12, P0140_D9, P0173_H3 (também denominado S2404), S2385 (n° de depósito NRRL B-67113), S2197 (n° de depósito NRRL67100), S2285 (n° de depósito NRRL B-67103), S2477, S2376, S2420,

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S2424, S2445, S2333, S2329, S2327, S2330, S2423 (n° de depósito NRRL B-67115), S2435, S2158, S2437, S2332, S2521, S2228, S2473, P0156_G2, P0154_G3, S2487, S2488, S2421 (n° de depósito NRRL B-67114), P0105_C5, P0154_H3, P0156JG1, S1112 (n° de depósito NRRL B-67090), S2375 (n° de depósito NRRL B67110), e S2669 (n° de depósito NRRL B-67117), S2651, S2652, S2653, S2654, S2655, S2656, S2668, S2644 (n° de depósito NRRL B-67116), S2328, S2646, S2834 (n° de depósito NRRL B67441), S2381 (n° de depósito NRRL B-67442), S2543 (n° de depósito NRRL B-67443), S2695 (n° de depósito NRRL B-67444), S2700 (n° de depósito NRRLB 67445) S2145-2 (NRRL B-67331), S2292-2 (NRRL B-67332), S2300-2 (NRRL B-67333), S2303-2 (NRRL B-67334), S2375-2 (NRRL B-67335), S2382-2 (NRRL B67336), S2423-2 (NRRL B-67337), S2669-2 (NRRL B-67338), e qualquer combinação das mesmas e cepas derivadas das mesmas ou culturas das mesmas. Em algumas modalidades, a composição microbiana compreende pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos dez, ou pelo menos 20 cepas microbianas reveladas no presente documento. Em outra modalidade, a composição microbiana compreende uma pluralidade de cepas reveladas no presente documento.

[072] Em algumas modalidades, a composição microbiana compreende pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos dez, ou pelo menos 20 cepas microbianas selecionadas dentre

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P0032_C7, P0048_B9, P0050_F5 (também denominado S2199), P0035_B2 (também denominado S2145, n° de depósito NRRL B67091), P0020_Bl, P0047_Al (também denominado S2284, n° de depósito NRRL B-67102), P0033_El (também denominado S2177), P0032_A8 (também denominado S2181, n° de depósito NRRL B67099), P0049_E7, P0042_A8 (também denominado S2167), P0042_D5 (também denominado S2165), P0042_B2 (também denominado S2168, n° de depósito NRRL B-67096), P0042_B12 (também denominado S2189), P0042_C2 (também denominado S2173, n° de depósito NRRL B-67098), P0042_D10 (também denominado S2172, n° de depósito NRRL B-67097), P0044_A3 (também denominado S2476), P0018_All, P0044_A5, P0047_E2, P0047_Cl, P0038_D2 ou S2166, P0042_El, P0047_E8, P0018_Al, S2159_P0058_B9 (n° de depósito NRRL B-67092), S2161_P0054_E8 (n° de depósito NRRL B-67094), S2164_P0054_F4, P0057_A3 (também denominado S2160, n° de depósito NRRL B-67093), S2142_P0061_E11, S2163_P0019_A12 (n° de depósito NRRL B67095), P0147_D10 (também denominado S2291, n° de depósito NRRL B-67104), P0147_G10 (também denominado S2292, n° de depósito NRRL B-67105), P0160_F7 (também denominado S2351), P0140_C10 (também denominado S2300, n° de depósito NRRL B67107), S2387, P0157_G5 (também denominado S2303, n° de depósito NRRL B-67108), P0160_El (também denominado S2374), P0134_G7 (também denominado S2280), S2384 (n° de depósito NRRL B-67112), S2275 (n° de depósito NRRL B-67101), S2278,

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S2373 (n° de depósito NRRL B-67109), S2370, S2293 (n° de depósito NRRL B- -67106) S2382 (n° de depósito NRRL B-67111), P0132_A12, P0132_C12, P0140_D9, P0173_H3 (também denominado S2404), S2385 (n° de depósito NRRL B-67113), S2197 (n° de depósito NRRL67100), S2285 (n° de depósito NRRL B-67103), S2477, S2376, S2420, S2424, S2445, S2333, S2329, S2327, S2330, S2423 (n° de depósito NRRL B-67115), S2435, S2158, S2437, S2332, S2521, S2228, S2473, P0156_G2, P0154_G3, S2487, S2488, S2421 (n° de depósito NRRL B-67114), P0105_C5, P0154_H3, P0156JG1, S1112 (n° de depósito NRRL B-67090), S2375 (n° de depósito NRRL B-67110), e S2669 (n° de depósito NRRL B-67117), S2651, S2652, S2653, S2654, S2655, S2656, S2668, S2644 (n° de depósito NRRL B-67116), S2328, S2646, S2834 (n° de depósito NRRL B-67441), S2381 (n° de depósito NRRL B-67442), S2543 (n° de depósito NRRL B-67443), S2695 (n° de depósito NRRL B-67444), S2700 (n° de depósito NRRLB 67445) S2145-2 (NRRL B-67331), S2292-2 (NRRL B-67332), S2300-2 (NRRL B-67333), S2303-2 (NRRL B-67334), S2375-2 (NRRL B-67335), S2382-2 (NRRL B-67336), S2423-2 (NRRL B67337), S2669-2 (NRRL B-67338), ou cepas derivadas das mesmas ou culturas das mesmas. Em outra modalidade fornece uma composição que compreende um ou mais cepas microbianas de Arthrobacter. Em outra modalidade fornece uma composição que compreende um ou mais cepas microbianas de Arthrobacter globiformis.

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[073] Em outra modalidade, é fornecida uma composição que compreende um consórcio microbiano sintético. Em algumas modalidades, um consórcio sintético compreende: (a) um primeiro conjunto de micróbios que compreende um ou mais micróbios que promovem saúde, crescimento, e/ou rendimento de planta; e (b) um segundo conjunto de micróbios que compreende um ou mais micróbios que aumentam (diretamente ou indiretamente) a aptidão competitiva de um ou mais dos micróbios do primeiro conjunto de micróbios na etapa (a); em que o primeiro e o segundo conjuntos de micróbios são combinados em uma mistura única como um consórcio sintético. Em uma modalidade, o consórcio sintético compreende adicionalmente cepas microbianas não encontradas em conjunto na natureza. Em outra modalidade, o consórcio sintético compreende cepas microbianas não encontradas em concentrações comparáveis relativas umas às outras na natureza. Em algumas modalidades de um consórcio sintético, um ou mais micróbios do primeiro conjunto de micróbios ((a) acima) melhoram a disponibilidade de nutriente e/ou captação de nutriente de uma planta. Em algumas modalidades de um consórcio sintético, um ou mais micróbios no primeiro conjunto de micróbios ((a) acima) modulam níveis de hormônio de planta. Em algumas modalidades de um consórcio sintético, um ou mais micróbios no primeiro conjunto de micróbios ((a) acima) demonstram uma ou mais das atividades selecionadas

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59/136 dentre fixação de nitrogênio, produção de IAA, atividade de ACC deaminase, solubilização de fosfato, e/ou solubilização de ferro (e/ou quaisquer outras atividades a partir das quais saúde, crescimento, e/ou rendimento de planta podem ser beneficiados). Em algumas modalidades de um consórcio sintético, um ou mais micróbios do primeiro conjunto de micróbios ((a) acima) inibem ou suprime um patógeno de planta (por exemplo, como um pesticida biológico tal como um selecionado dentre aqueles descritos no presente documento). Em algumas modalidades de um consórcio sintético, um ou mais micróbios no segundo conjunto de micróbios ((b) acima) aumentam diretamente a aptidão competitiva de um ou mais micróbios no primeiro conjunto de micróbios ((a) acima). Em algumas modalidades, um ou mais micróbios no segundo conjunto de micróbios produzem um metabólito que melhora a aptidão competitiva de um ou mais micróbios no primeiro conjunto de micróbios. Por exemplo, um ou mais micróbios no segundo conjunto de micróbios produzem um sideroforo que melhora a aquisição de ferro de um ou mais dos micróbios no primeiro conjunto de micróbios. Em algumas modalidades de um consórcio sintético, um ou mais micróbios no segundo conjunto de micróbios ((b) acima) diminuem a aptidão competitiva de um micro-organismo que é distinto dos micróbios do primeiro ou do segundo conjuntos de micróbios ( (a) ou (b) acima), e potencialmente prejudicial (por exemplo, inibindo,

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60/136 competindo com, excluindo, ou de outro modo tendo um impacto negativo) na aptidão de um ou mais micróbios no primeiro conjunto de micróbios ((a) acima). Em algumas modalidades de um consórcio sintético, um ou mais micróbios no segundo conjunto de micróbios ( (b) acima) produzem um metabólito que é bactericida, bacterioestático ou de outro modo modula o crescimento de um micro-organismo que é distinto dos micróbios do primeiro e do segundo conjuntos de micróbios, e que é prejudicial (por exemplo, inibindo, competindo com, excluindo, ou de outro modo tendo um impacto negativo) na aptidão de um ou mais micróbios no primeiro conjunto de micróbios ( (a) acima) . Por exemplo, um ou mais dos micróbios no segundo conjunto de micróbios ( (b) acima) produzem um sideroforo que exibe o crescimento ou aptidão de um microorganismo que é potencialmente prejudicial a um ou mais micróbios no primeiro conjunto ( (a) acima) . Desse modo, a função do segundo conjunto de micróbios é aumentar direta ou indiretamente a aptidão ou aptidão competitiva do primeiro conjunto de micróbios. Em algumas modalidades de um consórcio sintético, o primeiro e o segundo conjuntos de micróbios são combinados e suplementados com um componente formulário inerte. Em algumas modalidades, o consórcio sintético e composições dos mesmos promove ou melhora a saúde, crescimento e/ou rendimento de uma planta. Em algumas modalidades, o consórcio sintético ou uma composição do mesmo

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61/136 de acordo com o presente pedido é aplicado a uma planta (ou uma parte da mesma), uma semente, ou uma muda.

[074] Em algumas modalidades, as composições microbianas descritas no presente documento, tais como qualquer uma das composições microbianas descritas acima, compreendem adicionalmente uma quantidade agricolamente eficaz de uma substância, composto ou composição adicional, tal como, porém, sem limitação, um nutriente, um fertilizante, um acaricida, um bactericida, um fungicida, um inseticida, um microbicida, um nematicida, um pesticida, ou uma combinação dos mesmos.

[075] Em algumas modalidades, as composições são quimicamente inertes; portanto os mesmos são compatíveis com substancialmente quaisquer outros constituintes do agendamento de aplicação. As composições também podem ser usadas em combinação com substâncias que afetam o crescimento de planta, tal como fertilizantes, reguladores de crescimento de planta, e similares, desde que tais compostos ou substâncias sejam biologicamente compatíveis. As composições também podem ser usadas em combinação com agentes ativos pesticidas biologicamente compatíveis como, por exemplo, herbicidas, nematócidos, fungicidas, inseticidas e similares.

[076] Em algumas modalidades, as cepas microbianas e composições podem estar adicionalmente na forma de uma

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62/136 mistura com sinergistas. Sinergistas são compostos pelos quais a atividade das composições ativas é aumentada sem a mesma sendo necessária para o sinergista adicionado para ser ativo por si só.

[077] Em algumas modalidades, as cepas microbianas e composições podem ser adicionalmente na forma de uma mistura com inibidores (por exemplo, preservativos) que reduzem a degradação das composições ativas após a aplicação no habitat da planta, na superfície de partes de plantas ou em tecidos vegetais.

[078] As cepas microbianas e composições ativas podem ser usadas como uma mistura com fertilizantes conhecidos, acaricidas, bactericidas, fungicidas, inseticidas, microbicidas, nematicidas, pesticidas, ou combinações de qualquer uma das mesmas, por exemplo, de modo a ampliar o espectro de ação ou evitar o desenvolvimento de resistências a pesticidas desse modo. Em muitos casos, efeitos sinergísticos, isto é, a atividade da mistura pode exceder a atividade dos componentes individuais. Uma mistura com outros compostos ativos conhecidos, tais como reguladores de crescimento, agentes de segurança e/ou produtos semioquímicos é também contemplada.

[079] Em algumas modalidades, as composições podem incluir pelo menos um fertilizante químico ou biológico. A quantidade de pelo menos um fertilizante químico ou biológico

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63/136 empregado nas composições pode variar dependendo da formulação final assim como o tamanho da planta e semente a ser tratada. Em algumas modalidades, o pelo menos um fertilizante químico ou biológico empregado é cerca de 0,1% p/p a cerca de 80% p/p com base na formulação inteira. Em algumas modalidades, o pelo menos um fertilizante químico ou biológico está presente em uma quantidade de cerca de 1% p/p a cerca de 60%> p/p e em algumas modalidades cerca de 10%> p/p a cerca de 50% p/p.

[080] As composições microbiológicas também incluem opcionalmente pelo menos um fertilizante biológico.

[081] Fertilizantes biológicos exemplificadores que são adequados para uso no presente documento e podem ser incluídos em uma composição microbiológica de acordo com as modalidades deste pedido para promover o crescimento de planta e/rendimento incluem micróbios, animais, bactérias, fungos, material genético, planta, e produtos naturais de organismos vivos. Nessas composições, o micro-organismo é isolado antes da formulação com um organismo adicional. Por exemplo, micróbios tais como, porém, sem limitação, espécies de Achromobacter, Ãmpelomyces, Aureobasidium, Azospirillum, Azotobacter, Bacillus, Beauveria, Bradyrhizobium, Candida, Chaetomium, Cordyceps, Cryptococcus, Dabaryomyces, Delftia, Erwinia , Exophilia, Gliocladium, Herbaspirillum, Lactobacillus, Mariannaea, Microccocus, Paecilomyces,

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Paenibacillus, Pantoea, Pichia, Rhizobium, Saccharomyces, Sporobolomyces, Stenotrophomonas, Talaromyces, e Trichoderma podem ser fornecidos em uma composição com os microorganismos. 0 uso das composições microbiológicas de acordo com as presentes modalidades em combinação com os microorganismos microbianos revelados nas Publicações de Pedido de Patente n°s U.S.20030172588A1, U.S.20030211119A1, U.S.20130276493, U.S.20140082770; patentes N°s U.S.7, 084,331; U.S.7, 097,830; U.S.7, 842,494; Pedido PCT N°s WO2010109436A1, W02013158900, e W02013090628 é também contemplado.

[082] Em algumas modalidades, as composições podem incluir pelo menos um produto químico ou pesticida biológico, acaricida, bactericida, fungicida, inseticida, microbicida, nematicida ou uma combinação dos mesmos. A quantidade de pelo menos um produto químico ou pesticida biológico, acaricida, bactericida, fungicida, inseticida, microbicida, nematicida, ou uma combinação dos mesmos empregados nas composições pode variar dependendo da formulação final assim como o tamanho da planta e semente a ser tratada. Em algumas modalidades, o pelo menos um produto químico ou pesticida biológico, acaricida, bactericida, fungicida, inseticida, microbicida, nematicida, ou uma combinação dos mesmos empregada é cerca de 0,1% p/p a cerca de 80% p/p com base na formulação inteira. Em algumas modalidades, o pelo menos um

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65/136 produto químico ou pesticida biológico, acaricida, bactericida, fungicida, inseticida, microbicida, nematicida, ou uma combinação dos mesmos está presente em uma quantidade de cerca de 1% p/p a cerca de 60%> p/p e com a maior preferência cerca de 10%> p/p a cerca de 50% p/p.

[083] Uma variedade de pesticidas químicos é evidente a um especialista no assunto e pode ser usada. Pesticidas químicos exemplificadores incluem aqueles em carbamato, organofosfato, organocloreto, e classes piretróides. São também incluídos agentes de controle químico tais como, porém, sem limitação, benomil, bórax, captafol, captana, corotalonila, formulações que contêm cobre; formulações que contêm diclone, diclorana, iodina, zinco; fungicidas, tais como, porém, sem limitação blastididina, cimoxanil, fenarimol, flusilazol, folpete, imazalil, ipordiona, maneb, manocozeb, metalaxil, oxicarboxina, miclobutanila, oxitetraciclina, PCNB, pentaclorofenol, procloraz, propiconazol, quinometionato, aresenita de sódio, DNOC de sódio, hipocloreto de sódio, fenilfenato de sódio, estreptomicina, enxofre, tebuconazol, terbutrazol, tiabendazol, tiofanato-metila, triadimefão, triciclazol, triforina, validimicina, vinclozolina, zineb, e ziram.

[084] Em algumas modalidades, as composições incluem pelo menos um pesticida biológico. Pesticidas

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66/136 biológicos exemplificadores que são adequados para uso no presente documento e podem ser incluídos em uma composição microbiológica para prevenir uma planta doença patogênica incluem micróbios, animais, bactérias, fungos, material genético, planta, e produtos naturais de organismos vivos. Nessas composições, o micro-organismo é isolado antes da formulação com um organismo adicional. Por exemplo, micróbios tais como, porém, sem limitação espécies de Anthrobacter_r Ãmpelomyces, Aureobasidium, Bacillus, Beauveria, Candida_r Chaetomium, Cordyceps, Cryptococcus, Dabaryomyces_r Erwinia , Exophilia, Gliocladium, Mariannaea, Paecilomyces, Paenibacillus, Pantoea, Pichia, Pseudomonas_r Sporobolomyces, Streptomyces, Talaromyces, e Trichoderma podem ser fornecidos em uma composição com os microorganismos revelados no presente documento, com cepas fúngicas do gênero Muscodor sendo preferenciais. 0 uso das composições microbiológicas em combinação com os antagonistas microbianos revelados nos documentos de patente n° U.S. 7.518.040; documento de patente n° U.S.7.601.346; e documento de patente n° U.S.6.312.940 é também contemplado.

[085] Exemplos de fungos que podem ser combinados com cepas microbianas e composições em uma composição incluem, sem limitação, espécies Muscodor_r Aschersonia aleyrodis _r Beauveria bassiana (muscarina branca), Beauveria brongniartii_r Chladosporium herbarum, Cordyceps

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67/136 clavulata , Cordyceps en tomorrhiza , Cordyceps facis, Cordyceps gracilis, Cordyceps melolanthae, Cordyceps militaris, Cordyceps myrmecophila, Cordyceps ravenelii, Cordyceps sinensis, Cordyceps sphecocephala, Cordyceps subsessilis, Cordyceps unilateralis, Cordyceps variabilis, Cordyceps washingtonensis, Culicinomyces clavosporus, Entomophaga grylli, Entomophaga maimaiga, Entomophaga muscae, Entomophaga praxibulli, Entomophthora plutellae, Fusarium lateritium, Glomus, Hirsutella citriformis, Hirsutella thompsoni, Metarhizium anisopliae (muscarina verde), Metarhizium flaviride, Muscodor albus, Neozygitesfloridana, Nomuraea rileyi, Paecilomyces farinosus, Paecilomyces fumosoroseus, Pandora neoaphidis, Tolypocladium cylindrosporum, Verticillium lecanii, Zoophthora radicans, e espécies mycorrhizal, tais como Laccaria bicolor. Outras espécies micopesticidas serão evidentes aos especialistas no assunto.

[086] Em ainda outra modalidade, as composições de PGPM, consórcios e métodos revelados no presente documento podem ser usados para tratar uma planta geneticamente modificada ou semente ou uma planta ou semente transgênica. Conforme usado no presente documento, o termo geneticamente modificado é destinado a significar qualquer espécie que contém um trato genético, locais, ou sequência que não encontrada nas espécies ou cepa antes da manipulação. A

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68/136 planta geneticamente modificada pode ser transgênica, cisgênica, de genoma editado, ou reproduzida para conter um novo trato genético, locais ou sequência. Uma planta geneticamente modificada pode ser preparada por meios conhecidos aos especialistas no assunto, tais como transformação por bombardeamento, por um sistema Cas/CRISPR ou TALENS, ou por técnicas de reprodução. Conforme usado no presente documento, um trato é um locus novo ou modificado ou sequência de uma planta geneticamente modificada, incluindo, porém, sem limitação a uma planta transgênica. Um trato pode fornecer resistência a herbicida ou inseto à planta geneticamente modificada. Conforme usado no presente documento, uma planta transgênica, parte de planta, ou semente se refere a uma planta, parte de planta, ou semente que contêm pelo menos um gene heterólogo que permite a expressão de um polinucleotideo ou polipeptideo não naturalmente encontrado na planta. 0 gene heterólogo na semente transgênica pode se originar, por exemplo, de microorganismos das espécies Bacillus , Rhizobium, Pseudomonas_r Serratia_r Trichoderma_r Clavibacter , Glomus ou Gliocladium.

[087] Uma modalidade adicional refere-se a um método de aumento da durabilidade das composições de peste de planta que compreende fornecer uma composição de proteção de planta a uma planta ou área plantada, e que fornece as composições de PGPM, consórcios e métodos descritos no

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69/136 presente documento à planta ou área plantada, em que as composições de PGPM, consórcios e métodos descritos no presente documento têm um modo diferente de ação do que a composição de proteção de planta.

[088] A presente revelação fornece adicionalmente composições que contêm pelo menos uma das cepas microbianas isoladas ou culturas das mesmas, tais como qualquer uma daquelas descrita no presente documento e um carreador. O carreador pode ser qualquer um ou mais de um número de carreadores que conferem uma variedade de propriedades, tais como estabilidade aumentada, capacidade de umidificação, dispersibilidade, etc. Agentes de umidificação, tais como tensoativos naturais ou sintéticos, que podem ser tensoativos não-iônicos ou iônicos ou uma combinação dos mesmos, podem ser incluídos em uma composição das modalidades. Emulsões, tais como emulsões de água em óleo também podem ser usados para formular uma composição que inclui pelo menos um micro-organismo isolado das presentes modalidades (consultar, por exemplo, o Documento de Patente n° U.S.7.485.451). Formulações adequadas que podem ser preparadas incluem pós passíveis de umidificação, grânulos, géis, tiras de ágar ou péletes, agentes espessantes, e similares, partículas microencapsuladas e similares, líquidos tais como fluíveis aquosos, suspensões aquosas, emulsões de água em óleo, etc. A formulação pode incluir

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70/136 produtos em grão ou legume (por exemplo, grão moldo ou feijões, caldo ou farinha derivada de grão ou feijões), amido, açúcar ou óleo. O carreador pode ser um carreador agrícola. Em determinadas modalidades preferenciais, o carreador é uma semente, e a composição pode ser aplicada ou revestida na semente ou permitida a saturar a semente.

[089] Em algumas modalidades, o carreador agrícola pode ser meio de crescimento de solo ou crescimento de planta. Outros carreadores agrícolas que podem ser usados incluem fertilizantes, óleos de base vegetal, agentes umidificantes ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, um carreador agrícola não inclui somente água como um carreador. Alternativamente, o carreador agrícola pode ser um sólido, tal como terra de diatomáceas, argila, silica, alginato, barro, bentonita, vermiculita, invólucros de semente, outros produtos vegetais e animais, ou combinações, incluindo grânulos, péletes ou suspensões. Misturas de qualquer um dos ingredientes supracitados são também contemplados como carreadores, tais como, porém, sem limitação, pesta (farinha e barro de caulim), péletes à base de ágar ou farinha em argila, areia, ou barro, etc. Formulações podem incluir fontes de alimentos para os organismos cultivados, tais como cevada, arroz, ou outros materiais biológicos, tais como semente, partes de plantas, bagaço de cana de açúcar, cascas ou caules de processamento

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71/136 de grão, material vegetal moldo (Parque de resíduos), composto, ou madeira de refugo de local de edifícios, serragem ou fibras pequenas de reciclagem de papel, tecido ou madeira. Outros carreadores agrícolas adequados são conhecidos pelos especialistas no assunto.

[090] Em algumas modalidades, o carreador adequado para as composições descritas no presente documento é um carreador orgânico. Os carreadores orgânicos incluem, porém, sem limitação, turfa, relva, talco, lignite, caolinita, pirofillita, zeolita, montmorillonita, alginato, lama prensada, serragem e vermiculita. Talco é um natural mineral denominado como esteatito ou soapstona composta de vários minerais em combinação com cloreto e carbonato.

[091] Quimicamente, o mesmo é denominado como silicato de magnésio e disponível como forma de pó das industries adequadas para ampla faixa de aplicações. Talco tem hidrofobicidade relativa, baixo equilíbrio de umidade, inércia química, absorção de umidade reduzida e isso previne a formação de pontes de hidrato que permitem maiores períodos de armazenamento. Turfa (relva) é um tecido vegetal carbonizado formado em condições de umidade pela decomposição de várias plantas e musgo. Turfa é formado pela lenta deterioração de camadas sucessivas de plantas aquáticas ou semiaquáticas, tais como junças, canas, juncos e musgo. Lama Prensada é um subproduto de indústrias de

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72/136 açúcar. Vermiculita é um mineral similar a mica leve usada para aprimorar aeração e retenção de umidade. Em algumas modalidades, composições com carreadores orgânicos conforme descrito no presente documento são adequados para agricultura orgânica. Outros carreadores orgânicos adequados são conhecidos aos especialistas no assunto.

[092] As composições microbiológicas que compreendem cepas microbianas isoladas ou culturas das mesmas podem ser em uma variedade de formas, incluindo, porém, sem limitação, ainda culturas, culturas inteiras, estoques armazenados de células, micélio e/ou hifas (particularmente, estoques de glicerol), tiras de ágar, tampões de ágar armazenados em glicerol/água, estoques liofilizados, e estoques secos, tais como liofilisato ou micélios secos em filtros de papel ou sementes de grão. Conforme definido no presente documento, cultura isolada ou equivalentes gramaticais conforme usado nesta revelação e na técnica é entendido como significando que a referência à cultura é um fluido de cultura, pélete, raspagem, amostra seca, liofilisato, ou seção (por exemplo, hifas ou micélios); ou um suporte, recipiente, ou meio tal como uma placa, papel, filtro, matriz, palha, pipeta ou ponta de pipeta, fibra, agulha, gel, esfregão, tubo, frasco, partícula, etc. que contém um tipo único de organismo. Uma cultura isolada de um antagonista microbiano é uma fluido de cultura ou uma

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73/136 raspagem, pélete, preparação seca, liofilisato, ou seção do micro-organismo, ou um suporte, recipiente, ou meio que contém o micro-organismo, na ausência de outros organismos.

[093] Em algumas modalidades, as composições estão em forma liquida. Por exemplo, na forma liquida, por exemplo, soluções ou suspensões, os micro-organismos das presentes modalidades podem ser misturados ou suspensos em água ou em soluções aquosas. Diluentes líquidos adequados ou carreadores incluem água, soluções aquosas, destilados de petróleo, ou outros carreadores líquidos.

[094] Em algumas modalidades, as composições estão em forma sólida. Por exemplo, composições sólidas podem ser preparadas dispersando-se os micro-organismos das modalidades em e sobre um carreador sólido dividido apropriadamente, tais como turfa, trigo, farelo, vermiculita, barro, talco, bentonita, terra de diatomáceas, terra de fuller, solo pasteurizado e similares. Quando tais formulações são usadas como pós passíveis de umidificação, agentes dispersantes biologicamente compatíveis tais como agentes não-iônicos, aniônicos, anfotéricos, ou catiônicos dispersantes e emulsificantes podem ser usados.

[095] Em uma modalidade, a composição microbiana promove saúde, crescimento e/ou rendimento de planta por meio de um ou mais mecanismos pelos quais os PGPMs funcionam, conforme descrito no presente documento. Em algumas

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74/136 modalidades, as composições contempladas no presente documento melhoram o crescimento e rendimento de plantas de safra atuando como fertilizantes microbianos, agentes de biocontrole de doenças de planta, e/ou indutores de resistência de planta. As composições, de modo similar a outros agentes biofertilizadores, podem ter uma alta margem de segurança devido ao fato de que os mesmos tipicamente não queimam ou prejudicam a planta. Em algumas modalidades, um agente de biocontrole compreende uma bactéria, um fungo, uma levedura, um protozoário, um vírus, um nemátodo entomopatogênico, um extrato botânico, uma proteína, um ácido nucleico, um metabólito secundário, e/ou um inoculante.

[096] Conforme descrito em todo o presente pedido, o melhoramento de crescimento de planta e rendimento de planta pode ser efetuado pela aplicação de uma ou mais das composições a uma planta hospedeira ou partes da planta hospedeira. As composições podem ser aplicadas em uma quantidade eficaz para melhorar crescimento ou rendimento de planta relativo a aquele em um controle não tratado. Os constituintes ativos são usados em uma concentração suficiente para melhorar o crescimento da planta alvo quando aplicada à planta. Conforme será evidente a um especialista no assunto, concentrações eficazes podem variar dependendo de vários fatores, tais como, por exemplo, (a) o tipo da

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75/136 planta ou bem agrícola; (b) a condição fisiológica da planta ou bem agrícola; (c) a concentração de patógenos que afetam a planta ou bem agrícola; (d) o tipo de dano por doença na planta ou bem agrícola; (e) condições climáticas (por exemplo, temperatura, umidade); e (f) o estágio de doença da planta. Concentrações de aplicação típicas são de cerca de 10 a 1 x 10¹⁴ unidades de formação de colônia (cfu) por semente, incluindo cerca de 1 x 10³ cfu/semente, ou cerca de 1 x 10⁴ cfu/semente, 1 x 10⁵ cfu/semente, ou cerca de 1 x 10⁶ cfu/semente, ou cerca de 1 x 10⁷ cfu/semente, ou cerca de 1 x 10⁸ cfu/semente, ou cerca de 1 x 10⁹ cfu/semente, ou cerca de 1 x IO¹⁰ cfu/semente, ou cerca de 1 x 10¹¹ cfu/semente, ou cerca de 1 x 10¹² cfu/semente, ou cerca de 1 x 10¹³ cfu/semente incluindo cerca de 1 x 10³ a 1 x 10⁸ cfu/semente cerca de 1 x 10³ a 1 x 10⁷ cfu/semente, cerca de 1 x 10³ a 1 x 10⁵ cfu/semente, cerca de 1 x 10³ a 1 x 10⁶ cfu/semente, cerca de 1 x 10³ a 1 x 10⁴ cfu/semente, cerca de 1 x 10³ a 1 x 10⁹ cfu/semente, cerca de 1 x 10³ a 1 x IO¹⁰ cfu/semente, cerca de 1 x 10³ a 1 x 10¹¹ cfu/semente, cerca de 1 x 10³ a 1 x 10¹² cfu/semente, cerca de 1 x 10³ a 1 x 10¹³ cfu/semente, cerca de 1 x 10⁴ a 1 x 10⁸ cfu/semente cerca de 1 x 10⁴ a 1 x 10⁷ cfu/semente, cerca de 1 x 10⁴ a 1 x 10⁵ cfu/semente, cerca de 1 x 10⁴ a 1 x 10⁶ cfu/semente, cerca de 1 x 10⁴ a 1 x 10⁹ cfu/semente, cerca de 1 x 10⁴ a 1 x IO¹⁰ cfu/semente, cerca de 1 x 10¹¹ a 1 x 10⁹ cfu/semente, cerca de 1 x 10⁴ a 1 x 10¹²

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76/136 cfu/semente cerca de 1 x 10⁴ a 1 x 10¹³ cfu/semente, cerca de 1 x 10⁵ a 1 x 10⁷ cfu/por semente, cerca de 1 x 10⁵ a 1 x 10⁶ cfu/por semente, cerca de 1 x 10⁵ a 1 x 10⁸ cfu/por semente, cerca de 1 x 10⁵ a 1 x 10⁹ cfu/por semente, cerca de 1 x 10⁵ a 1 x IO¹⁰ cfu/por semente, cerca de 1 x 10⁵ a 1 x 10¹¹ cfu/por semente, cerca de 1 x 10⁵ a de 1 x 10⁵ a 1 x 10¹³ cfu/por 10⁸ cfu/por semente, cerca semente, cerca de 1 x 10⁶ a de 1 x 10⁶ a 1 x 10¹⁰ cfu/por 10¹¹ cfu/por semente, cerca semente, cerca de 1 x 10⁶ a de 1 x 10⁷ a 1 x 10⁸ cfu/por 10⁹ cfu/por semente, cerca semente, cerca de 1 x 10⁷ a de 1 x 10⁷ a 1 x 10¹² cfu/por 10¹³ cfu/por semente, cerca semente, cerca de 1 x 10⁸ a de 1 x 10⁸ a 1 x 10¹¹ cfu/por 10¹² cfu/por semente, cerca semente, cerca de 1 x 10⁹ a de 1 x 10⁹ a 1 x 10¹¹ cfu/por 10¹² cfu/por semente, cerca semente, cerca de 1 x 10¹⁰ a de 1 x 10¹⁰ a 1 x 10¹² cfu/po x 10¹² cfu/por semente, cerca semente, cerca de 1 x 10⁶ a 1 x de 1 x 10⁶ a 1 x 10⁷ cfu/por 1 x 10⁹ cfu/por semente, cerca semente, cerca de 1 x 10⁶ a 1 x de 1 x 10⁶ a 1 x 10¹² cfu/por 1 x 10¹³ cfu/por semente, cerca semente, cerca de 1 x 10⁷ a 1 x de 1 x 10⁷ a 1 x 10¹⁰ cfu/por 1 x 10¹¹ cfu/por semente, cerca semente, cerca de 1 x 10⁷ a 1 x de 1 x 10⁸ a 1 x 10⁹ cfu/por 1 x 10¹⁰ cfu/por semente, cerca semente, cerca de 1 x 10⁸ a 1 x de 1 x 10⁸ a 1 x 10¹³ cfu/por 1 x 10¹⁰ cfu/por semente, cerca semente, cerca de 1 x 10⁹ a 1 x de 1 x 10⁹ a 1 x 10¹³ cfu/por 1 x 10¹¹ cfu/por semente, cerca t? semente, cerca de 1 x 10¹⁰ a 1

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77/136 x IO¹³ cfu/por semente, cerca de 1 x 10¹¹¹ a 1 x 10¹² cfu/por semente, cerca de 1 x 10¹¹ a 1 x 10¹³ cfu/por semente, e cerca de 1 x 10¹² a 1 x 10¹³ cfu/por semente. Conforme usado no presente documento, o termo unidade de formação de colônia ou cfu é uma unidade com capacidade de cultivar e produzir uma colônia de uma cepa microbiana em condições favoráveis. A contagem de cfu serve como uma estimativa do número de estruturas ou células viáveis em uma amostra. Em algumas modalidades, concentrações são aquelas de cerca de 1 a cerca de 100 mg de massa bacteriana seca por milímetro de carreador (composição líquida) ou por grama de carreador (formulação seca) . Em algumas modalidades, as concentrações variam de 1 X 10² a cerca de 1 X IO¹⁰ célula/ml, tal como as concentrações que variam de 1 X 10⁵ a 1 X 10⁹ célula/ml da composição ou carreador.

[097] Em algumas modalidades, a quantidade de um ou mais dos micro-organismos nas composições pode variar dependendo da formulação final assim como tamanho ou tipo da planta ou semente utilizada. Preferencialmente, o um ou mais micro-organismos nas composições estão presentes em cerca de 0,01% p/p a cerca de 80% p/p da formulação inteira. Em algumas modalidades, os pesos secos de um ou mais microorganismos empregados nas composições é cerca de 0,01%, 0,1%, 1%, 5% p/p a cerca de 65% p/p e com a maior preferência cerca de 1% p/p a cerca de 60% p/p em peso da formulação inteira.

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[098] As composições microbiológicas podem ser aplicadas à planta alvo (ou parte (ou partes) dos mesmos) com uso de uma variedade de métodos convencionais, tais como varredura, revestimento, injeção, fricção, rolagem, imersão, aspersão, ou escovamento, ou qualquer outra técnica apropriada que não prejudica significativamente a planta alvo a ser tratada. Métodos exemplificadores incluem, porém, sem limitação, a inoculação de meio de crescimento ou solo com suspensões de células microbianas e o revestimento de sementes de planta com células microbianas e/ou esporos.

[099] São também fornecidos métodos de tratamento de uma planta pela aplicação de qualquer de uma variedade de formulações comuns em uma quantidade eficaz tanto ao solo (isto é, em sulco), uma porção da planta (isto é, encharcamento) como na semente antes do plantio (isto é, revestimento ou tratamento de semente). Formulações comuns incluem soluções, concentrado emulsificante, pós passíveis de umidificação, concentrado de suspensão, pós solúveis, grânulos, concentrado de suspensão-emulsificação, materiais naturais ou sintéticos impregnados com composto ativo, e cápsulas de liberação de controle muito fino em substâncias poliméricas. Em determinadas modalidades, as composições microbianas são formuladas em pós que são disponíveis tanto em uma formulação de uso imediato como são misturadas entre si no tempo de uso. Em qualquer modalidade, o pó pode ser

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79/136 misturado por adição com o solo antes ou no tempo de plantio. Em uma modalidade alternativa, um ou tanto o agente promotor de crescimento de planta quanto o agente de biocontrole é uma formulação líquida que é misturado no tempo de tratamento. Elemento de habilidade comum na técnica entende que uma quantidade eficaz das composições descritas depende da formulação final da composição assim como o tamanho da planta ou o tamanho da semente a ser tratada.

[100] Dependendo da formulação final e método de aplicação, um ou mais aditivos de semente adequados (aditivos) também podem ser introduzidos às composições. Adesivos tais como carboximetilcelulose e natural e polímeros sintéticos na forma de pós, grânulos ou látex, tais como goma arábica, quitina, álcool de polivinila e acetato de polivinila, assim como fosfolipídios naturais, tais como cefalinas e lecitinas, e fosfolipídios sintéticos, trealose, manitol, sorbitol, mio-inositol, soforose, maltotriose, glucose, (+)-galactose, metil-beta-Dgalactopiranosídeo, agente de segurança, um lipoquiitoligossacarídeo, um sal de lipoglicina de triglucosamina, uma isoflavona, e um modulador de receptor de rianodina pode ser adicionado às presentes composições.

[101] Em algumas modalidades, as composições são formuladas em uma solução estável única, ou emulsão, ou suspensão. For soluções, os compostos ativos químicos são

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80/136 tipicamente dissolvidos em solventes antes de o agente biológico ser adicionado. Solventes líquidos adequados incluem aromáticos à base de petróleo, tais como xileno, tolueno ou alquilnaftalenos, hidrocarbonetos alifáticos, tais como ciclohexano ou parafinas, por exemplo frações de petróleo, óleos minerais ou vegetais, álcoois, tais como butanol ou glicol, assim como seus éteres e ésteres, cetonas, tais como cetona de metiletila, cetona de metilisobutila ou ciclohexanona, solventes de forte polaridade, tais como dimetilformamida e sulfóxido de dimetila. Para emulsão ou suspensão, o meio líquido é água. Em uma modalidade, o agente químico e agente biológico são suspensos em líquidos separados e misturados no tempo de aplicação. Em uma modalidade preferencial de suspensão, o agente químico e agente biológico são combinados em uma formulação de uso imediato que exibe uma vida de prateleira razoavelmente longa. Em uso, o líquido pode ser aspergido ou pode ser aplicado de modo foliar como um aspersor atomizado ou em sulco no tempo de plantio da safra. A composição líquida pode ser introduzida em uma quantidade eficaz na semente (isto é, revestimento ou tratamento de semente) ou no solo (isto é, em sulco) antes da germinação da semente ou diretamente no solo em contato com as raízes utilizando-se uma variedade de técnicas conhecidas na técnica que inclui, porém, sem limitação, irrigação de imersão, pulverizadores,

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81/136 injeção no solo ou encharcamento no solo. Opcionalmente, agentes estabilizantes e tampões podem ser adicionados, incluindo sais alcalinos de metal de terras raras alcalinas e sais orgânicos, tais como ácido cítrico e ácido ascórbico, ácidos inorgânicos, tais como ácido clorídrico ou ácido sulfúrico. Biocidas também podem ser adicionados e podem incluir formaldeídos ou agentes de liberação de formaldeído e derivados de ácido benzoico, tais como ácido phidroxibenzoico.

FORMULAÇÃO DE REVESTIMENTO DE SEMENTES

[102] Em um aspecto, as cepas microbianas, culturas e/ou composições descritas no presente documento são formuladas como uma semente tratamento. Em algumas modalidades, sementes pode ser revestidas de modo parcial, ou substancialmente uniforme com uma ou mais camadas das cepas microbianas, culturas, e/ou composições reveladas no presente documento com uso de métodos convencionais, incluindo porém, sem limitação, misturar, aspergir ou uma combinação dos mesmos através do uso de equipamento de aplicação de tratamento que é especificamente projetado e fabricado para aplicar de modo preciso, seguro e eficiente produtos de tratamento de semente às sementes.

[103] Em algumas modalidades, sementes podem ser revestidas com uso de uma tecnologia de revestimento tal como, porém, sem limitação, revestidores giratórios,

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82/136 revestidores batedores, técnicas de leito fluidizado, leitos vertidos, névoas rotatórias ou uma combinação dos mesmos. Tratamentos líquidos de semente, tais como aqueles das presentes modalidades podem ser aplicados, por exemplo, por meio tanto de um disco atomizador giratório ou um bocal de aspersão que distribui uniformemente o tratamento de semente na semente à medida que a mesma se move por todo o padrão de aspersão. Em determinadas modalidades, a semente é então misturada ou tombada por um período adicional de tempo para alcançar distribuição de tratamento adicional e secagem. As sementes podem ser preparadas ou não preparadas antes do revestimento com as composições para aumentar a uniformidade de germinação e emergência. Em uma modalidade alternativa, uma formulação de pó seco pode ser medida na semente em movimento e permitida a se misturar até ser completamente distribuída.

[104] Outros aspectos fornecem sementes tratadas com as composições microbianas em questão. Uma modalidade fornece sementes que têm pelo menos parte da área de superfície revestida com uma composição microbiológica de acordo com as presentes modalidades. Em uma modalidade, as sementes tratadas com micro-organismo têm uma cepa microbiana ou concentração de esporos ou concentração de célula microbiana de cerca de IxlO² a cerca de IxlO¹⁰ por semente. As sementes também podem ter mais esporos ou células

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83/136 microbianas por semente. Os esporos e/ou células microbianas podem ser revestidos livremente nas sementes ou, preferencialmente, os mesmos podem ser formulados em uma composição liquida ou sólida antes de serem revestidos nas sementes. Por exemplo, uma composição sólida que compreende os micro-organismos pode ser preparados misturando-se um carreador sólido com uma suspensão dos esporos até que os carreadores sólidos são impregnados com o esporo ou suspensão de célula. Essa mistura pode ser então seca para obter as partículas desejadas.

[105] Em algumas outras modalidades, as composições microbianas contêm agentes funcionais com capacidade de proteger sementes dos efeitos nocivos de herbicidas seletivos tais como carbono ativado, nutrientes (fertilizantes), e outros agentes com capacidade de aprimorar a germinação e qualidade dos ou uma combinação dos mesmos.

[106] Métodos e composições de revestimento de semente que são conhecidos na técnica podem ser particularmente úteis quando os mesmos são modificados pela adição de uma das composições reveladas no presente documento. Tais métodos de revestimento e aparelho para sua aplicação são revelados, por exemplo, porém, sem limitação, nos Documentos de Patente N° U.S. 5.918.413; N° U.S. 5.554.445; N° U.S. 5.389.399; N° U.S. 4.759.945; e N° U.S.

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4.465.017. Composições de revestimento de semente são revelados, por exemplo, no Pedido de Patente N° U. S. 20100154299, Documentos de Patente N° U.S. 5.939.356; N° U.S. 5.876.739, N° U.S. 5.849.320; N° U.S. 5.791.084, N° U.S. 5.661.103; N° U.S. 5.580.54 4, N° U.S. 5.32 8.942; N° U.S. 4.735.015; N° U.S. 4.634.587; N° U.S. 4.372.080, N° U.S. 4.339.456; e N° U.S. 4.245.432, que são todos incorporados ao presente documento a título de referência.

[107] Uma variedade de aditivos pode ser adicionada às formulações de tratamento de semente que compreende as composições reveladas no presente documento. Ligantes podem ser adicionados e incluem aqueles compostos preferencialmente de um polímero adesivo que pode ser natural ou sintético sem efeito fitotóxico na semente a ser revestida. O ligante pode ser selecionado dentre acetatos de polivinila; copolímeros de acetato de polivinila; copolímeros de acetato de etilenovinila (EVA); álcoois de polivinila; copolímeros de álcool de polivinila; celuloses, incluindo etilceluloses, metilceluloses, hidroximetilceluloses, hidroxipropilceluloses e carboximetiicelulose; polivinilpirolidonas; polissacarídeos, incluindo amido, amido modificado, dextrinas, maltodextrinas, alginato e chitosanos; gorduras; óleos; proteínas, incluindo gelatina e zeínas; aráveis de goma; gomas-lacas; cloreto de vinilideno e copolímeros de

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85/136 cloreto de vinilideno; lignosulfonatos de cálcio; copolímeros acrílicos; polivinilacrilatos; óxido de polietileno; polímeros e copolímeros de acrilamida; acrilato de polihidroxietila, monômeros de metilacrilamida; e policloropreno.

[108] Qualquer um dentre uma variedade de aditivos colorantes pode ser empregado, incluindo cromóforos orgânicos classificados como nitroso; nitro; azo, incluindo monoazo, bisazo e poliazo; acridina, antraquinona, azina, difenilmetano, indamina, indofenol, metina, oxazina, ftalocianina, tiazina, tiazol, triarilmetano, xanteno. Outros aditivos que podem ser adicionados incluem nutrientes de traço tais como sais de ferro, manganês, boro, cobre, cobalto, níquel, molibdênio e zinco. Um polímero ou outro agente de controle de poeira pode ser aplicado para reter o tratamento na superfície de semente.

[109] Em algumas modalidades específicas, adicionalmente às células microbianas ou esporos, o revestimento pode compreender adicionalmente uma camada de aderente. O aderente deve ser não tóxico, biodegradável, e adesiva. Exemplos de tais materiais incluem, porém, sem limitação, acetatos de polivinila; copolímeros de acetato de polivinila; álcoois de polivinila; copolímeros de álcool de polivinila; celuloses, tais como metilceluloses, hidroximetilceluloses, e hidroximetilpropilceluloses;

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86/136 dextranos; alginatos; açúcares; melaços; polivinil pirrolidonas; polissacarideos; proteínas; gorduras; óleos; aráveis de goma; gelatinas; xaropes; e amidos. Mais exemplos podem ser encontrados, por exemplo, no documento de Patente N° U.S. 7.213.367 e Pedido de Patente.

[110] N° U.S.20100189693, incorporados no presente documento a título de referência.

[111] Vários aditivos, tais como aderentes, agentes dispersantes, tensoativos, e ingredientes de nutriente e tampão, também podem ser incluídos na formulação de tratamento de semente. Outros semente tratamento aditivos incluem, porém, sem limitação, agentes de revestimento, agentes de umidificação, agentes de tamponamento e polissacarideos. Pelo menos um carreador agricolamente aceitável pode ser adicionado à formulação de tratamento de semente tal como água, sólidos ou pós secos. Os pós secos podem ser derivados de uma variedade de materiais tais como carbonato de cálcio, gesso, vermiculita, talco, húmus, carvão ativado, e vários compostos fosforosos.

[112] Em algumas modalidades, a composição de revestimento de semente pode compreender pelo menos uma carga que é um componente natural ou sintético, orgânico ou inorgânico com o qual os componentes ativos são combinados para facilitar sua aplicação na semente. Em determinadas modalidades, a carga é um sólido inerte tais como argilas,

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87/136 silicatos naturais ou sintéticos, silica, resinas, ceras, fertilizantes sólidos (por exemplo, sais de amônia), minerais de solo natural, tais como caulins, argilas, talco, cal, quartzo, atapulgita, montmorilonita, bentonita ou terras de diatomáceas, ou minerais sintéticos, tais como silica, alumina ou silicatos, em particular, silicatos de alumínio ou magnésio.

[113] A formulação de tratamento de semente pode incluir adicionalmente um ou mais dos seguintes ingredientes: outros pesticidas, incluindo compostos que atuam somente abaixo do solo; fungicidas, tais como captana, tirame, metalaxila, fludioxonila, oxadixila, e isômeros de cada um daqueles materiais e similares; herbicidas, incluindo compostos selecionados dentre glifosato, carbamatos, tiocarbamatos, acetamidas, triazinas, dinitroanilinas, éteres de glicerol, piridazinonas, uracilas, fenoxis, ureias, e ácidos benzoicos; agentes de segurança herbicidas tais como benzoxazina, derivados de benzhidrila, dicloroacetamida de Ν,Ν-dialila, vários compostos de dihaloacila, oxazolidinila e tiazolidinila, etanona, anidritos naftálicos, e derivados de oxima; fertilizantes químicos; fertilizantes biológicos; e agentes de biocontrole, tais como outros bactérias e fungos de ocorrência natural ou recombinantes dos gêneros Rhizobium, Bacillus, Pseudomonas, Serratia, Trichoderma, Glomus,

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Gliocladium e mycorrhizal fungi. Esses ingredientes podem ser adicionados como uma camada separada na semente ou alternativamente, podem ser adicionados como parte da composição de revestimento de semente das modalidades.

[114] Em algumas modalidades, a quantidade da composição ou outros ingredientes usados na semente tratamento não deve inibir a germinação da semente, ou causar danos fitotóxicos à semente.

[115] A formulação que é usada para tratar a semente nas composições deste pedido pode estar na forma de uma suspensão; emulsão; pasta fluida de partículas em um meio aquoso (por exemplo, água); pó umidificante; grânulos umidificantes (fluíveis secos); e grânulos secos. Se formulados como uma suspensão ou pasta fluida, a concentração do ingrediente ativo na formulação é cerca de 0,5% a cerca de 99% em peso (p/p) , 5% a 40% ou como de outro modo formulado pelos especialistas no assunto.

[116] Em algumas modalidades, outros ingredientes inativos ou inertes convencionais podem ser incorporados na formulação de tratamento de semente. Tais ingredientes inertes incluem, porém, sem limitação, agentes de pegajosidade convencionais; agentes de dispersão, tais como metilcelulose, por exemplo, servem como agentes dispersantes/de pegajosidade combinados para uso em tratamentos de semente; álcool de polivinila; lecitina,

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89/136 agentes dispersantes poliméricos (por exemplo, acetato de polivinilpirrolidona/vinila); agentes espessantes (por exemplo, agentes espessantes de barro para aprimorar a viscosidade e reduzir o assentamento de suspensões de partícula); agentes estabilizantes de emulsão; tensoativos; compostos anticongelamento (por exemplo, ureia), corantes, colorantes e similares. Ingredientes inertes adicionais úteis nas modalidades deste pedido podem ser encontrados em McCutcheon's, vol.l, Emulsifiers and Detergents, MC Publishing Company, Glen Rock, N.J., E.U.A., 1996. Ingredientes inertes adicionais úteis nas modalidades deste pedido podem ser encontrados em McCutcheon's, vol.2, Functional Materials, MC Publishing Company, Glen Rock, N.J., E.U.A., 1996.

[117] As formulações de revestimento deste pedido podem ser aplicadas às sementes por uma variedade de métodos, incluindo, porém, sem limitação, misturar em um recipiente (por exemplo, uma garrafa ou bolsa), aplicação mecânica, tamboração, aspersão e imersão. Uma variedade de material ativo ou inerte pode ser usada para colocar as sementes em contato com as composições microbianas, tais como materiais de revestimento de filme convencionais incluindo, porém, sem limitação, materiais de revestimento de filme à base de água, tais como SEPIRET™ (Seppic, Inc., N.J.) e OPACOAT™ (Berwind Pharm. Services, P.A.)

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[118] A quantidade de uma composição de acordo com as modalidades deste pedido que é usada para o tratamento da semente variará dependendo do tipo de semente e o tipo de ingredientes ativos, mas o tratamento compreenderá colocar as sementes em contato com uma quantidade agricolamente eficaz da composição descrita. Conforme descrito no presente documento, uma quantidade eficaz significa que a quantidade da composição descrita que é suficiente para efetuar resultados benéficos ou desejados. Uma quantidade eficaz pode ser administrada em uma ou mais administrações.

[119] Adicionalmente à camada de revestimento, a semente pode ser tratada com um ou mais dos seguintes ingredientes: outros pesticidas incluindo fungicidas e herbicidas; agentes de segurança herbicidas; fertilizantes e/ou agentes de biocontrole. Esses ingredientes podem ser adicionados como uma camada separada ou alternativamente, podem ser adicionados na camada de revestimento.

[120] As formulações de revestimento de semente das modalidades deste pedido podem ser aplicadas às sementes com uso de uma variedade de técnicas e máquinas, tais como técnicas de leito fluidizado, o método de moagem de rolete, tratadores de semente rotoestáticos, e revestidores batedores. Outros métodos, tais como leitos vertidos também podem ser úteis. As sementes podem ser pré-dimensionadas antes do revestimento. Em algumas modalidades, após o

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91/136 revestimento, as sementes são secas e então transferidas para uma máquina de dimensionamento para dimensionamento. Tais procedimentos são conhecidos a um especialista no assunto.

[121] As sementes tratadas com micro-organismo também podem ser envelopadas com um filme com sobrerrevestimento para proteger o revestimento. Tais sobrerrevestimentos são conhecidos na técnica e podem ser aplicados com uso de leito fluidizado e técnicas de revestimento de filme de tambor, assim como quaisquer outros métodos adequados conhecidos na técnica.

[122] Em outra modalidade, cepas microbianas, isolatos, culturas, e/ou composições deste pedido podem ser introduzidos em uma semente por uso de preparação de matriz sólida. Por exemplo, uma quantidade de uma composição descrita pode ser misturada com um material de matriz sólido e então a semente pode ser colocada em contato com o material de matriz sólido para um período para permitir a composição a ser introduzida às sementes. A semente pode ser então opcionalmente separada do material de matriz sólido e armazenada ou usada, ou a mistura de material de matriz sólido mais semente pode ser armazenada ou plantada diretamente. Materiais de matriz sólidos que são úteis podem incluir poliacrilamida, amido, barro, silica, alumina, solo, areia, poliureia, poliacrilato, ou qualquer outro material

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92/136 com capacidade de absorver ou adsorver a composição por um tempo e liberar essa composição à ou na semente. Isso é útil para garantir que a composição e o material de matriz sólido sejam compatíveis entre si. Por exemplo, o material de matriz sólido deve ser escolhido de modo que o mesmo possa liberar a composição em uma taxa razoável, por exemplo, por um período de minutos, horas, dias ou meses.

[123] Em algumas modalidades, qualquer semente de planta com capacidade de germinar para formar uma planta pode ser tratada com as composições contempladas no presente documento. Sementes adequadas incluem, porém, sem limitação, aquelas de cereais, café, safras de repolho, safras de fibra, flores, frutas, legume, safras de óleo, árvores, safras de tubérculos, vegetais, assim como outras plantas das espécies monocotiledóneas, e dicotiledôneas. Em algumas modalidades, sementes de safra são revestidas incluem, porém, sem limitação, feijão, cenoura, milho, algodão, gramas, alface, amendoim, pimenta, batata, colza, arroz, centeio, sorgo, soja, beterraba, girassol, tabaco, e sementes de tomate. Em determinadas modalidades, cevada ou trigo (trigo de primavera ou trigo de inverno) sementes são revestidas com as presentes composições.

MÉTODOS PARA PREPARAR A COMPOSIÇÃO

[124] Culturas dos micro-organismos podem ser preparadas para uso nas composições do presente pedido com

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93/136 uso de técnicas conhecidas na técnica, incluindo, porém, sem limitação, secagem estática padrão e fermentação liquida. Crescimento é comumente efetuado em um biorreator. Um biorreator pode ser de qualquer formato ou tamanho apropriado para cultivar os micro-organismos (PGPMs). Um biorreator pode variar de tamanho e escala de 10 ml a litros a metros cúbicos e podem ser feitos de aço inoxidável ou qualquer outro material apropriado conforme conhecido e usado na técnica. O biorreator pode ser um biorreator do tipo lote, um biorreator do tipo alimentador ou um biorreator de tipo contínuo (por exemplo, um reator agitado contínuo). Por exemplo, um biorreator pode ser um quimioestato conforme conhecido e usado na técnica de microbiologia para cultivo e colheita de micro-organismos. Um biorreator pode ser obtido a partir de qualquer fornecedor comercial (consultar também Bioreactor System Design, Asenjo & Merchuk, CRC Press, 1995). Para operações de pequena escala, um biorreator de lote pode ser usado, por exemplo, para testar e desenvolver novos processos, e para processos que não podem ser convertidos em operações contínuas.

[125] Micro-organismos ou PGPMs cultivados em um biorreator podem ser suspensos ou imobilizados. O crescimento no biorreator está geralmente sob condições aeróbicas em temperaturas e pH adequados para crescimento. Crescimento celular pode ser alcançado em temperaturas entre

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94/136 e 40° C, com a temperatura preferencial estando na faixa de 15 a 30° C, 15 a 28° C, 20 a 30° C, ou 15 a 25° C. O pH do nutriente meio pode variar entre 4,0 e 9,0, mas a faixa operacional preferencial é geralmente ligeiramente ácido a neutro em pH 4,0 a 7,0, ou 4,5 a 6,5, ou pH 5,0 a 6,0. Tipicamente, rendimento máximo de célula é obtido em 18 a 96 horas após a inoculação.

[126] As condições ideais para o cultivo dos microorganismos deste pedido podem depender da cepa particular. No entanto, em virtude das condições aplicadas no processo de seleção e requisitos gerais da maioria dos microorganismos, um elemento de habilidade comum na técnica podería determinar nutrientes e condições essenciais. Os micro-organismos ou PGPMs seriam tipicamente cultivados em culturas líquidas aeróbicas nos meios que contêm fontes de carbono, nitrogênio, e sais inorgânicos que podem ser assimilados pelo micro-organismo e suportar o crescimento de célula eficiente. Fontes de carbono exemplificadoras (porém, sem limitação) são hexoses tais como glucose, mas outras fontes que são prontamente assimiladas tais como aminoácidos, podem ser substituídos. Muitos materiais inorgânicos proteináceos podem ser usados como fontes de nitrogênio no processo de crescimento. Fontes de nitrogênio exemplificadoras (porém, sem limitação) são aminoácidos e ureia, mas outros incluem amônia gasosa, sais inorgânicos de

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95/136 nitrato e amônio, vitaminas, purinas, pirimidinas, extrato de levedura, extrato de carne, peptona de proteose, farinha de soja, hidrolisados de caseina, solúveis do destilador e similares. Dentre os minerais inorgânicos que podem ser incorporados no meio de nutriente são os sais comuns com capacidade de render cálcio, zinco, ferro, manganês, magnésio, cobre, cobalto, potássio, sódio, molibdato, fosfato, sulfate, cloreto, borato, e ions similares. Em algumas modalidades, meio liquido de dextrose de batata para cepas fúngicas e pré-mistura de caldo R2A para cepas bacterianas é usado.

MÉTODOS PARA UTILIZAÇÃO DE CEPAS, CULTURAS E/OU COMPOSIÇÕES MICROBIANAS

[127] Outros aspectos fornecem um método para tratar uma semente de planta, que compreende uma etapa de expor ou colocar a dita semente de planta em contato com uma cepa microbiana, isolato, cultura, e/ou composição conforme descrito no presente documento.

[128] Outros aspectos fornecem um método para melhorar o crescimento ou rendimento de uma planta, sendo que o dito método compreende aplicar uma quantidade eficaz de uma cepa microbiana, isolato, cultura, e/ou composição conforme descrito no presente documento à planta ou aos arredores da planta. Outro aspecto, fornece um método para prevenir, inibir ou tratar o desenvolvimento de uma doença

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96/136 patogênica de uma planta, sendo que o dito método compreende aplicar uma quantidade eficaz de uma cepa microbiana, isolate, cultura e/ou composição conforme descrito no presente documento à planta ou aos arredores da planta. Em algumas modalidades dos métodos, a cepa microbiana é cultivada em um meio de crescimento ou solo de uma planta hospedeira antes ou simultaneamente com o crescimento de planta hospedeira no dito meio de crescimento ou solo. Em algumas modalidades, a cepa microbiana é estabelecida como um endófito na dita planta. Em algumas modalidades do método acima, uma cepa microbiana (PGPM) é aplicada à planta (ou uma parte da mesma) ou aos arredores da planta (por exemplo, camada de solo imediata ou rizosfera) em uma cultura ou uma composição em uma concentração que é pelo menos 2x, 5x, lOx, lOOx, 500x, ou lOOOx a concentração da mesma cepa microbiana encontrada na natureza ou detectada em uma planta de controle não tratada (ou uma parte da mesma) , ou os arredores da planta de controle, respectivamente. Em algumas modalidades, mediante ou após a aplicação, a concentração da cepa microbiana (PGPM) na planta tratada (ou uma parte da mesma) ou os arredores da planta (por exemplo, camada de solo imediata ou rizosfera) é pelo menos 2x, 5x, lOx, lOOx, 500x, ou lOOOx a concentração da mesma cepa microbiana encontrada ou detectada em uma planta de controle não tratada (ou uma parte da mesma), ou os arredores da planta de controle. Em

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97/136 algumas modalidades do método acima, uma cepa microbiana (PGPM) é aplicada à planta (ou uma parte da mesma) ou aos arredores da planta (por exemplo, camada de solo imediata ou rizosfera) em uma cultura ou uma composição em uma concentração que é maior do que 1 X 10² CFU/ml. Em algumas modalidades, as faixas de concentração de cerca de 1 X 10² a cerca de 1 X IO¹⁰ CFU/ml, tal como as concentrações que variam de 1 X 10⁵ a 1 X 10⁹ CFU/ml. Em algumas modalidades, a aplicação de uma cepa microbiana (PGPM) à planta (ou uma parte da mesma) ou aos arredores da planta (por exemplo, camada de solo imediata ou rizosfera) em uma cultura ou uma composição em uma concentração que é pelo menos 1 X 10⁶ CFU/ml causa uma concentração da cepa microbiana na planta tratada, parte de planta ou os arredores da planta que é pelo menos 2x a quantidade da cepa encontrada na planta nãotratada ou seus arredores.

[129] Em algumas modalidades do método acima, a cepa microbiana é estabelecida como um endófito na planta e a prole de sementes da planta após a aplicação. Em algumas modalidades desse aspecto, o endófito microbiano introduzido na planta pode ser um micro-organismo endofítico que tem uma atividade de promoção de crescimento de planta, uma atividade de controle biológico, ou uma combinação de ambas as atividades. Uma variedade de métodos anteriormente constatados como eficazes para a introdução de um endófito

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98/136 microbiano em espécie de grama cereal é conhecida na técnica. Exemplos de tais métodos incluem aqueles descritos no Pedido de Patente N° U.S.20100154299, Pedido de Patente N° U.S. 20010032343A1, e Documento de Patente No.U.S.7084.331 Em algumas modalidades, a cepa microbiana, isolate, cultura, e/ou composição é aplicada a um ou mais locais selecionados dentre o solo, uma semente, um raiz, uma flor, uma folha, uma fruta, uma porção da planta ou a planta inteira. Nesse aspecto, a cepa microbiana, cultura ou composição pode ser entregue à planta por qualquer do sistema de entrega descrito no presente documento.

[130] Exemplos de doenças fitopatogênicas que são adequados para aplicações dos métodos e materiais incluem, porém, sem limitação, doenças causadas por uma ampla faixa de fungos patogênicos. Os métodos das presentes modalidades são preferencialmente aplicados contra fungos patogênicos que são importantes ou interessantes para agricultura, horticultura, biomassa de planta para a produção de moléculas de biocombustivel e outros produtos químicos, e/ou silvicultura. Em algumas modalidades, os fungos patogênicos são espécie Pseudomonas patogênica (por exemplo, Pseudomonas solanacearum), Xylella fastidiosa; Ralstonia solanacearum, Xanthomonas campestris, Erwinia amylovora, espécie Fusarium, espécie Phytophthora, (por exemplo, P. infestans), espécie Botrytis, espécie Leptosphaeria, espécie de míldio

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99/136 (Ascomycota) e ferrugem (Basidiomycota) , etc.

[131] Exemplos não limitadores de patógenos de planta de interesse incluem, por exemplo, Acremonium strictum, Agrobacteríum tumefacíens, Alternaria alternata, Alternaria solani, Aphanomyces euteiches, Aspergillus fumigatus, Athelia rolfsii, Aureobasidium pullulans, Bipolaris zeicola, Botrytis cinerea, Calonectria kyotensis, Cephalosporium maydis, Cercospora medicaginis , Cercospora sojina, Colletotrichum coccodes, Colletotrichum fragariae, Colletotrichum graminicola , Coniella diplodiella, Coprinopsis psychromorbida, Corynespora cassiicola, Curvularia pallescens, Cylindrocladium crotalariae , Diplocarpon earlianum, Diplodia gossyina, Diplodia spp. , Epicoccum nigrum, Erysiphe dehor acearum, Fusarium graminearum, Fusarium oxysporum, Fusarium oxysporum f.sp. tuberosi, Fusarium proliferatum var. proliferatum, Fusarium solani, Fusarium verticillioides, Ganoderma boninense, Geotrichum candidum, Glomerella tucumanensis, Guignardia bidwellii, Kabatiella zeae, Leptosphaerulina briosiana, Leptotrochila medicaginis, Macrophomina, Macrophomina phaseolina, Magnaporthe grisea, Magnaporthe oryzae, Microsphaera manshurica, Monilinia fructicola, Mycosphaerella fijiensis, Mycosphaerella fragariae , Nigrospora oryzae, Ophiostoma ulmi, Pectobacterium carotovorum, Pellicularia sasakii (Rhizoctonia solani,),

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Peronospora manshurica, Phakopsora pachyrhizi, Phoma foveata, Phoma medicaginis , Phomopsis longicolla, Phytophthora cinnamomi, Phytophthora erythroseptica, Phytophthora fragariae, Phytophthora infestans, Phytophthora medicaginis, Phytophthora megasperma, Phytophthora palmivora, Podosphaera leucotricha, Pseudopeziza medicaginis, Puccinia graminis subsp. Tritici (UG99), Puccinia sorghi, Pyricularia grisea, Pyricularia oryzae, Pythíum ultimum, Pythíum aphanidermatum, Rhizoctonia solani, Rhizoctonia zeae, Rosellinia sp. , Sclerotinia sclerotiorum, Sclerotinina tri foliorum, Sclerotium rolfsii, Septoria glycines, Septoria lycopersici, Setomelanomma turcica, Sphaerotheca macularás , Spongospora subterranea, Stemphylium sp, Synchytrium endobioticum, Thecaphora (Angiosorus), Thielaviopsis , Tilletia indica, Trichoderma viride, Ustilago maydis, Verticillium albo-atrum, Verticillium dahliae, Verticillium dahliae, Xanthomonas axonopodis ou Xanthomonas oryzae pv. oryzae.

[132] Em algumas modalidades, os métodos e materiais são úteis em suprimir o desenvolvimento dos patógenos Aspergillus fumigatus, Botrytis cinerea, Cerpospora betae, Colletotríchum sp., Curvularia spp., Fusarium sp. , Ganoderma boninense, Geotrichum candidum, Gíbberella sp., Monographella sp., Mycosphaerella fijiensis, Phytophthora palmivora, Phytophthora ramorum, Penicillium

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101/136 sp. , Pythium ultimum, Pythium aphanidermatum, Rhizoctonia solani, Rhizopus spp., Schizophyllum spp., Sclerotinia sclerotiorum, Stagnospora sp., Verticillium dahliae ou Xanthomonas axonopodis. Em algumas modalidades, os métodos e materiais podem ser usados para suprimir o desenvolvimento de vários patógenos de planta de importância comercial, incluindo Fusarium graminearum NRRL-5883, Monographella nivalis ATCC MYA-3968, Gibberella zeae ATCC-16106, Stagnospora nodurum ATCC-26369, Colletotríchum gramínícola ATCC-34167, e Penicillium sp. patógenos.

[133] Em algumas modalidades, o método para melhorar o crescimento ou rendimento de uma planta, incluindo qualquer de tais métodos descritos no presente documento, compreende adicionalmente uma etapa de processamento de solo antes do plantio uma planta, uma semente de planta ou uma muda de planta no dito solo. Em algumas modalidades, o solo é total ou parcialmente esterilizado na etapa de processamento de solo. Em algumas modalidades, o método de processamento de solo compreende criar um movimento de radiador de micro-onda no solo, e em seguida, irradiar microondas do radiador de micro-onda ao solo a ser processado. Exemplos de tal método pode ser encontrado, por exemplo, no documento n° U.S.20060283364. Em algumas modalidades, o solo é total ou parcialmente esterilizado por autoclavagem (por exemplo, em 121 °C, 1 h ou outras condições similares) ou

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102/136 por irradiação gama (γ) (50 kGy). Em algumas modalidades, o solo é total ou parcialmente esterilizado por aquecimento, vaporização ou gasificação com óxido de etileno. Em algumas modalidades, o solo é parcial ou totalmente esterilizado por solarização do solo. A solarização de solo é um método amigável ao meio-ambiente de uso de potência solar para processamento de solo (por exemplo, esterilização) cobrindo com palha o solo e cobrindo o mesmo com lona, geralmente com uma cobertura de plástico (por exemplo, polietileno transparente), para capturar energia solar. Outros métodos de processamento de solo adequados são conhecidos aos especialistas no assunto.

[134] Em algumas modalidades, o método para melhorar o crescimento ou rendimento de uma planta compreende (a) processar o solo antes do plantio a planta, semente de planta ou muda da mesma no dito solo; (b) plantar a planta, semente de planta ou muda da mesma no solo processado na etapa (a); e (3) aplicar uma quantidade eficaz de uma cepa microbiana, isolato, cultura, e/ou composição conforme descrito no presente documento à planta, semente de planta ou muda, ou arredores da mesma. Em algumas modalidades, o solo é totalmente esterilizado. Em algumas modalidades, o solo é parcialmente esterilizado. Em algumas modalidades, o solo é processado por autoclavagem na etapa (a). SISTEMA DE ENTREGA

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[135] Cepas microbianas, isolates ou culturas das mesmas, ou composições microbianas podem ser entregues através de vários meios. Em algumas modalidades, os mesmos são entregues por tratamento de semente, preparação de semente, imersão de muda, aplicação de solo, aspersão foliar, aspersão em fruta, inserção em colmeia, tratamento com sugador, tratamento com arjão e um sistema de múltiplas entregas.

[136] Em algumas modalidades, as cepas microbianas, culturas das mesmas ou composições que compreendem as mesmas, conforme descrito no presente documento, podem ser entregues por exposição direta ou contato com uma semente de planta. Em algumas modalidades, a semente pode ser revestida com uma cepa microbiana (ou um isolato ou uma cultura da mesma) ou uma composição da mesma. Tratamento de semente com PGPMs pode ser eficaz contra várias doenças de planta.

[137] Em algumas modalidades, as cepas microbianas, isolates, culturas ou composições, conforme descrito no presente documento, pode ser entregue por exposição direta ou contato com uma semente de planta durante processo de preparação de semente. A preparação com PGPMs pode aumentar a germinação e aprimorar o estabelecimento de muda. Tais procedimentos de preparação podem iniciar o processo fisiológico de germinação, mas previne a emergência de plúmula e radícula. Foi reconhecido a iniciação do processo

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104/136 fisiológico ajuda no estabelecimento e proliferação dos PGPMs na espermosfera.

[138] Em algumas modalidades, as cepas microbianas, isolatos, culturas das mesmas ou composições que compreendem a mesma, conforme descrito no presente documento, podem ser entregues por imersão de muda. Patógenos de planta frequentemente inserem plantas hospedeiras através da raiz. Em algumas modalidades, a proteção da região de rizosfera por colonização anterior com PGPMs evita o estabelecimento de uma relação de parasita-hospedeiro.

[139] Em algumas modalidades, as cepas microbianas, isolatos, culturas ou composições, conforme descrito no presente documento, podem ser entregues por aplicação direta ao solo. O solo é o repertório tanto de micróbios benéficos quanto de micróbios patogênicos. Em algumas modalidades, entregar PGPMs ao solo pode suprimir o estabelecimento de micróbios patogênicos.

[140] Em algumas modalidades, as cepas microbianas, isolatos, culturas ou composições, conforme descrito no presente documento, podem ser entregues por aspersão foliar ou aspersão em fruta. Em algumas modalidades, entregar PGPMs diretamente à folhagem de planta ou fruta pode suprimir micróbios patogênicos que contribuem para várias doenças foliares ou doenças pós-colheita.

[141] Em algumas modalidades, as cepas microbianas,

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105/136 isolatos, culturas ou composições são entregues por inserto em colmeia. Abelhas meliferas e abelhas de gênero Bombus servem como um vector para a dispersão de agentes de biocontrole de doenças de floração e safras de frutas. Em algumas modalidades, um dispensador pode ser fixado à colmeia e carregado com os PGPMs, opcionalmente em combinação com outros agentes desejados.

[142] Em algumas modalidades, as cepas microbianas, isolatos, culturas ou composições são entregues por tratamento com sugador ou tratamento com arjão. PGPMs podem desempenhar uma função vital no gerenciamento de doenças relacionadas ao solo de safras propagadas de modo vegetative. A entrega de PGPMs varia dependendo da safra. Para safras tais como banana, PGPMs podem ser entregues através de tratamento com sugador (por exemplo, imersão com sugador). For safras tais como cana de açúcar, PGPMs podem ser entregues através de tratamento com arjão (por exemplo, imersão com arjão) .

[143] Em algumas modalidades, as cepas microbianas, isolatos, culturas ou composições são entregues por um sistema de múltiplas entregas que compreende duas ou mais dos sistemas de entrega conforme descrito no presente documento.

VARIEDADES DE PLANTAS E PROLE DE SEMENTES INFECTADAS COM UMA CEPA MICROBIANA

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[144] É também fornecido, em outros aspectos das presentes modalidades, uma planta artificialmente infectada criada introduzindo-se artificialmente um endófito microbiano revelado no presente documento na planta. Em algumas modalidades desse aspecto, o endófito microbiano introduzido na planta pode ser um micro-organismo endofítico que tem uma atividade de promoção de crescimento de planta, uma atividade de controle biológico, ou uma combinação de ambas as atividades. Em algumas modalidades, a cepa microbiana é estabelecida como um endófito na planta ou uma progenia da mesma (por exemplo, a prole de sementes) que é exposta ou tratada com uma cepa microbiana (endofítica) , isolate, cultura ou composição da mesma, conforme descrito no presente documento. Consequentemente, outra modalidade fornece uma semente da planta artificialmente infectada, que compreende o endófito microbiano revelado no presente documento.

[145] Uma variedade de métodos anteriormente constatados como eficazes para a introdução de um endófito microbiano em espécie de grama cereal é conhecida na técnica. Exemplos de tais métodos incluem aqueles descritos no Pedido de Patente N° U.S.20030195117A1, documento de Patente N° U.S. 20010032343A1, e Documento de Patente N° U.S.7.084.331, entre outros.

[146] Em algumas modalidades, após a infecção

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107/136 artificial, uma sequência de DNA do micro-organismo endofítico isolado é amplificado por PCR e o endófito é confirmado realizando-se uma busca de homologia para a sequência de DNA amplificada. Em algumas modalidades, um gene externo que expressa um meio identificável é introduzido no micro-organismo endofítico mencionado acima, e a presença da colonização do micro-organismo endofítico mencionado acima que infecta a planta é confirmada pelo meio identificável acima com uso do gene externo.

PLANTAS ADEQUADAS

[147] A princípio, os métodos e composições deste pedido podem ser empregados para qualquer espécie de planta. Monocotiledôneas, assim como espécies de plantas dicotiledôneas são particularmente adequadas. Os métodos e composições são preferencialmente usados com plantas que são importantes ou interessantes para agricultura, horticultura, para a produção de biomassa usada ao produzir moléculas de combustível líquido e outros produtos químicos, e/ou silvicultura.

[148] Em ainda outra modalidade, as composições de PGPM, consórcios e métodos revelados no presente documento podem ser usados para tratar semente transgênica. A semente transgênica se refere à semente de plantas que contêm pelo menos um gene heterólogo que permite a expressão de um polipeptídeo ou proteína não naturalmente encontrado na

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108/136 planta. O gene heterólogo na semente transgênica pode se originar, por exemplo, de micro-organismos das espécies Bacillus, Rhizobium, Pseudomonas, Serratia, Trichoderma, Clavibacter, Glomus ou Gliocladium.

[149] Desse modo, modalidades deste pedido têm uso em uma ampla faixa de plantas, preferencialmente plantas maiores relativos à classes de Angiospermae e Gymnospermae. Plantas de subclasses das Dicotylodenae e das Monocotyledonae são particularmente adequadas. Plantas dicotiledôneas pertencem às ordens das Aristochiales, Asterales, Batales, Campanulales, Capparales, Caryophyllales, Casuarinales_r Celastrales, Cornales_r Díapensales _r Dilleniales, Dipsacales, Ebenales, Ericales, Eucomiales, Euphorbiales, Fabales_r Fagales , Gentianales, Geraniales_r Haloragales, Hamamelidales, Middles , Juglandales_r Lamiales, Laurales, Lecythidales, Leitneriales, Magniolales_r Malvales_r Myricales, Myrtales_r Nymphaeales, Papeverales, Piperales, Plantaginales, Plumb aginales, Podostemales, Polemoniales, Polygalales, Polygonales, Primulales_r Proteales _r Rafflesiales, Ranunculales, Rhamnales, Rosales, Rubiales, Salicales, Santales, Sapindales, Sarraceniaceae_r Scrophulariales, Theales, Trochodendrales, Umbellales, Urticales e Violates. Monocotiledôneas plantas pertencem às ordens da Alismatales, Arales, ArecaJ.es, Bromeliales, Commelinales, Cyclanthales,

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Cyperales , Eriocaulales, Hydrocharitales, Juncales, Lilliales, Najadales, Orchidales, Pandanales, Poales, Restionales, Triuridales, Typhales e Zingiberales. Plantas pertencentes à classe das Gymnospermae são Cycadales, Ginkgoales, Gnetales e Pinales.

[150] Espécies adequadas podem incluir membros do gênero Abelmoschus, Abies, Acer, Agrostis, Allium, Alstroemeria, Ananas, Andrographis, Andropogon, Artemisia, Arundo, Atropa, Berberis, Beta, Bixa, Brassica, Calendula, Camellia, Camptotheca, Cannabis, Capsicum, Carthamus, Catharanthus, Cephalotaxus, Chrysanthemum, Cinchona, Citrullus, Coffea, Colchicum, Coleus, Cucumis, Cucurbita, Cynodon, Datura, Dianthus, Digitalis, Dioscorea, Elaeis, Ephedra, Erianthus, Erythroxylum, Eucalyptus, Festuca, Fragaria, Galanthus, Glycine, Gossypium, Helianthus, Hevea, Hordeum, Hyoscyamus, Jatropha, Lactuca, Linum, Lolium, Lupinus, Lycopersicon, Lycopodium, Manihot, Medicago, Mentha, Miscanthus, Musa, Nicotiana, Oryza, Panicum, Papaver, Parthenium, Pennisetum, Petunia, Phalaris, Phleum, Pinus, Poa, Poinsettia, Populus, Rauwolfia, Ricinus, Rosa, Saccharum, Salix, Sanguinaria, Scopolia, Secale, Solanum, Sorghum, Spartina, Spinacea, Tanacetum, Taxus, Theobroma, Triticosecale, Triticum, Uniola, Veratrum, Vinca, Vitis e Zea .

[151] Os métodos e composições podem ser usados em

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110/136 plantas que são importantes ou interessantes para agricultura, horticultura, biomassa para a produção de moléculas de biocombustivel e outros produtos químicos, e/ou silvicultura. Exemplos Não limitadores incluem, por exemplo, Panícum vírgatum (painço amarelo), Sorghum bicolor (sorgo, capim do sudão), Miscanthus gíganteus (miscanto), Saccharum sp. (cana energética), Populus balsamifera (choupo), Zea mays (milho), Glycine max (soja), Brassica napus (canola), Triticum aestivum (trigo), Gossypium hirsutum (algodão), Oryza sativa (arroz), Helianthus annuus (girassol), Medicago sativa (alfalfa), Beta vulgaris (beterraba), Pennisetum glaucum (mexoeira), Panicum spp., Sorghum spp., Miscanthus spp. , Saccharum spp., Erianthus spp., Populus spp., Andropogon gerardii (bluestem grande), Pennisetum purpureum (grama de elefante), Phalaris arundinacea (capim amarelo), Cynodon dactylon (grama-bermuda), Festuca arundinacea (féscuta alta), Spartina pectinata (grama de pradaria), Arundo donax (cana palustre), Secale cereale (centeio), Salix spp. (salgueiro), Eucalyptus spp. (eucalipto), Triticosecale spp. (triticum—trigo X centeio), Bambuseae (Bambu), Carthamus tinctorius (cártamo), Jatropha curcas (Jatrofa), Ricinus communis (rícino), Elaeis guineensis (óleo de palma), Phoenix dactylifera (palmeira), Archontophoenix cunninghamiana (palmeira real), Syagrus romanzoffiana (jerivá), Linum usitatissimum (linho),

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Brassica juncea, Manihot esculenta (mandioca) , Lycopersicon esculentum (tomate) , Lactuca sativa (alface), Musa paradisíaca (banana), Solanum tuberosum (batata,), Brassica oleracea (brocolis, couve-flor, brotos de Bruxelas), Camellia sinensis (chá), Fragaria ananassa (morango), Theobroma cacao (cacau), Coffea arabica (café), Vitis vinifera (uva), Ananas comosus (abacaxi), Capsicum annum (pimenta malagueta e doce), Allium cepa (cebola), Cucumis melo (melão), Cucumis sativus (pepino), Cucurbita maxima (abóbora), Cucurbita moschata (abóbora), Spinacea oleracea (espinafre), Citrullus lanatus (melancia), Abelmoschus esculentus (quiabo), Solanum melongena (beringela), Papaver somniferum (papoula), Papaver orientale, Taxus baccata, Taxus brevifolia, Artemisia annua, Cannabis sativa, Camptotheca acuminate, Catharanthus roseus, Vinca rosea, Cinchona officinalis, Coichicum autumnale, Veratrum californica, Digitalis lanata, Digitalis purpurea, Dioscorea spp. , Andrographi s paniculata, Atropa belladonna, Datura stomonium, Berberis spp., Cephalotaxus spp., Ephedra sinica, Ephedra spp., Erythroxylum coca, Galanthus wornorii, Scopolia spp., Lycopodium serratum (musgo chinês), Lycopodium spp., Rauwolfia serpentina, Rauwolfia spp., Sanguinaria canadensis, Hyoscyamus spp., Calendula officinalis, Chrysanthemum parthenium, Coleus forskohlii, Tanacetum parthenium, Parthenium argentatum (guaiúle), Hevea

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112/136 spp. (borracha), Mentha spicata (menta,), Mentha piperita (menta), Bixa orellana, Alstroemeria spp., Rosa spp. (rosa), Dianthus caryophyllus (carnation), Petunia spp. (petúnia), Poinsettia pulcherrima (flor do natal), Nicotiana tabacum (tabaco), Lupinus albus (tremoço), Uniola paniculata (aveias),Agrostis spp. (agróstis), Populus tremuloides (álamo), Pinus spp. (pinho), Abies spp. (abeto), Acer spp. (bordo), Hordeum vulgare (cevada) , Poa pratensis (poa dos bosques), Lolium spp. (azevém), Phleum pratense (timóteo), e coníferas. De interesse são plantas cultivadas para produção de energia, então chamadas safras de energia, tais como safras de energia à base de celulose como Panicum virgatum (painço amarelo), Sorghum bicolor (sorgo, capim do sudão), Miscanthus giganteus (miscanto), Saccharum sp. (cana energética), Populus balsam!fera (choupo), Andropogon gerardii (bluestem grande), Pennisetum purpureum (grama de elefante), Phalaris arundinacea (capim amarelo), Cynodon dactylon (grama-bermuda), Festuca arundinacea (féscuta alta), Spartina pectinata (grama de pradaria), Medicago sativa (alfalfa), Arundo donax (cana palustre), Secale cereale (centeio), Salix spp. (salgueiro), Eucalyptus spp. (eucalipto), Triticosecale spp. (triticum- trigo X centeio), e Bambuseae (Bambu) ; e safras de energia à base de amido como Zea mays (milho) e Manihot esculenta (cassava); e safras de energia à base de açúcar like Saccharum sp. (cana de

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113/136 açúcar), Beta vulgaris (beterraba), e Sorghum bicolor (L.) Moench (sorgo doce); e safras de energia de produção de biocombustivel como Glycine max (soja), Brassica napus (canola), Helianthus annuus (girassol), Carthamus tinctorius (cártamo), Jatropha curcas (Jatrofa), Ricinus communis (ricino), Elaeis guineensis (óleo de palma africano), Elaeis oleifera (óleo de palma americano), Cocos nucifera (coco), Camelina sativa (linho selvagem), Pongamia pinnata (Pongam), Olea europaea (oliva), Linum usitatissimum (linho), Crambe abyssinica (couve abissinio) e Brassica juncea.

[152] Em algumas modalidades, os métodos e composições podem ser usados em milho, incluindo porém, sem limitação, farinha de milho (Zea mays var. amylacea), pipoca (Zea mays var. everta), milho dente (Zea mays var. indentata), milho duro (Zea mays var. indurate), milho doce (Zea mays var. saccharata e Zea mays var. rugosa) , milho ceroso (Zea mays var. ceratina), mais de amilose (Zea mays), milho selvagem (Zea mays var. tunicata Larrahaga ex A. St. Hil.), e mais listrada (Zea mays var. japonica). Em algumas modalidades, os métodos e composições são usados em milho doce.

[153] Esta revelação será mais bem entendida a partir dos exemplos a seguir. No entanto, um especialista no assunto verificará prontamente que os métodos específicos e resultados discutidos são meramente ilustrativos da

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114/136 revelação conforme descrito mais completamente nas modalidades.

EXEMPLOS

Exemplo 1 coleta de amostras de solo e sequenciamento de micro-organismos de solo

[154] Amostras de solo foram coletadas de campos agrícolas. Por exemplo, amostras de solo foram coletados do milho e campos de soja nos Estados Unidos. Amostras foram coletadas nos Estados Unidos e na Áustria. 0 presente pedido contempla PGPMs identificados e isolados de quaisquer tipos adequados de materiais ambientais, tais como amostras coletadas, sem limitação, do solo, rochas, plantas, animais, detritos orgânicos, água, aerossóis, etc. De cada campo, plantas de milho de estágio V3 a V5 foram selecionados, removidos do solo e coletados do solo. Para cada planta, altura e peso foi registrado, solo fixado às raízes foram coletados para cultivo e extração de DNA, e solo de massa que circunda a estrutura de raiz foi coletada para análise química de solo e arquivamento.

[155] A raiz associada às amostras de solo (cerca de 0,5 g) foram coletadas em triplicata da rizosfera de plantas de milho para extração de DNA e sequenciamento. Amostras foram colocadas em tubos centrífugos de tampa de rosca de 2 ml que contém uma matriz de microesfera de cerâmica estéril que consiste em uma esfera de vidro de 4 mm

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115/136 (GSM-40), 1,0 g de microesfera de silicate de zircônio de 1,4 a 1,6 mm (SLZ-15) e 0,75 g de microesfera de silicato de zircônio de 0,070 a 0,125 mm (BSLZ-1) obtida de Vidro Gero (Columbia, TN) . Amostras foram mantidas frias e transportadas ao laboratório para extração de DNA.

[156] Amostras foram mecanicamente Usadas com uso de um instrumento FastPrep FP 120 (Bio-101, Vista, CA) a 6,5 m/s para 45 s em 1 ml de tampão de fosfato (200 mM de fosfato de sódio, 200 mM de NaCl, 20 mM de EDTA, pH 8,0) e 10% de SDS (sulfato de dodecila de sódio) . Amostras Usadas foram centrifugadas a 13.000 x g por 5 min a 4^o C para separar o sobrenadante com DNA e matéria particulada. Sobrenadantes foram transferidos em novos tubos centrífugos de 1,5- ml e adicionalmente purificados adicionando-se 500 μΐ de álcool de fenol-cloroforme-isoamila (25:24:1) e centrifugando a 13.200 x g por 5 min em temperatura ambiente. Uma fase aquosa separada que contém o DNA foi coletada para purificação final em colunas QIAprep Plasmid Spin (Qiagen, Valencia, CA) seguindo as instruções do fabricante.

[157] A identificação de organismos-chave foi realizada extraindo-se primeiro DNA genômico e então usando sequenciamento de próxima geração de 16S rRNA (NGS) para gerar perfis microbianos ambientais de campos agrícolas seguindo os métodos de Patin et al. (Microb. Ecol.65:709719, 2013). A análise de correlação de tags de sequência 16S

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116/136 de micróbio e fenótipos alvo-desejados, incluídos, porém, sem limitação, biomassa de planta, altura de planta, classificação de tolerância a estiagem, e antítese a intervalo de formação de seda determinou os organismos de interesse.

Exemplo 2 identificação de consórcios microbianos

[158] As plantas de milho para amostragem estavam no estágio V3 a V5 de desenvolvimento e foram escolhidos com base em serem tanto plantas de desempenho inferior como plantas de desempenho superior de plantas com base em inspeção visual e comparação com plantas vizinhas. Plantas de desempenho inferior foram escolhidas com base em serem iguais ou menores em tamanho às plantas vizinha que coletivamente apresentadas como menor em tamanho com o tamanho médio de plantas através do campo inteiro. Plantas de desempenho superior foram escolhidas com base em serem maior em tamanho do que o tamanho médio de plantas através da área geral ou campo inteiro. Outro critério para escolher uma planta de desempenho superior foi que seus vizinhos imediatos foram também de desempenho superior em relação ao tamanho de plantas na área geral ou campo inteiro. Plantas foram coletadas em pares que cada um incluiu uma planta de desempenho inferior ou desempenho superior que foram localizados dentro de 5 metros uns dos outros. Entre 6 a 18 pares de plantas foram coletados de cada campo.

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[159] Antes da amostragem, a altura de cada planta foi determinada estendendo-se as folhas superiores verticalmente ao ponto mais alto e medindo esse nível. 0 peso da planta foi determinado pós- amostragem removendo-se a porção de solo acima inteira da planta e transferindo para uma bolsa de tamanho de um quarto Ziploc vedado. As amostras vedadas foram usadas para minimizar a variabilidade devido a evaporação d'água da planta pós-colheita. 0 peso da planta foi determinado dentro de aproximadamente 1 hora após a coleta.

[160] Amostras de solo associadas à raiz de milho foram conduzidas enterrando-se as plantas de milho com uma pá e escavando-se as raízes com uma espátula de aço inoxidável estéril. A adesão do solo às raízes foi removida diretamente em tubos centrífugos de 2ml que contém esferas para lise celular.

[161] A extração de DNA e perfilagem foram realizadas conforme descrito no Exemplo 1. (Consultar Patin et al. Microb. Ecol.65:709-719, 2013).

[162] De modo a comparar comunidades microbianas associadas a raízes de milho de plantas de diferentes campos, as alturas e alturas de cada planta coletada do mesmo campo foram normalizados. Um número de métodos diferente de normalização foram empregados que incluíram pontuações Z, a interpelação dos valores entre 0 a 1 e classificações de

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118/136 porcentagem. A razão para normalizar os valores foi permitir a comparação de plantas entre campos que, em alguns casos, foram de diferentes tamanhos como resultado de diferentes datas de plantio, tipos de solo, condições climáticas, etc.

[163] Aproximadamente 100.000 tags de sequência de rRNA V5V616S foram determinadas para cada amostra.

[164] Valores de correlação Pearson foram determinados para a porcentagem de abundância de cada tag de sequência de rRNA 16S e o peso (ou altura) de planta de milho normalizado através de cerca de 150 amostras de 4 campos em Victoria e Queensland, Austrália que compreende tanto milho doce como milho de campo. Marcações de sequência de rRNA 16S bacterianas com a maior correlação tanto ao peso como à altura da planta foram identificadas. As quatro tags de sequência de rRNA 16S com a maior correlação ao desempenho da planta (altura ou peso da planta normalizada) foram selecionadas para identificar outros micróbios que potencialmente compartilharam interações funcionais e desse modo, constituíram consórcios. Para identificar membros de consórcio potencial, a distribuição das tags de sequência de rRNA 16S mais bem correlacionada ao desempenho da planta foi comparada com a cada duas tags de sequência no conjunto de dados para identificar as sequências de raiz. Uma lista classificada de correlações de Pearson dessas comparações foi criada e revelou PGPMs candidatos para cada uma das

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119/136 quatro tags de sequência correlacionadas ao desempenho da planta. As tags de sequência de rRNA V5V616S identificadas incluem SEQ ID NOs 1 a 461.

[165] Triagens de cultivo foram também realizadas a partir das mesmas amostras em que as comunidades microbianas associadas à raiz foram resolvidas por perfilagem de gene de rRNA 16S. Aproximadamente 20.000 isolatos foram recuperados por cultivo em sete diferentes formulações de meio sólido. A identidade dos isolatos foi determinada por amplificação de PCR de uma porção do gene de rRNA 16S que compreende as regiões variáveis v5-v8. As sequências foram aparadas à mesma região V5V6 conforme usado para os perfis de gene de rRNA 16S conduzidos acima. Essa etapa permitiu a indexação cruzada entre os dados de cultivo e perfilagem de gene de rRNA 16S.

[166] Cepas cultivadas correspondentes as quatro melhores tags de sequência correlacionadas a desempenho da planta e suas melhores tags de sequência de codistribuição foram recuperadas e testadas para sua capacidade para aumentar o desempenho da planta.

Exemplo 3 testes de campo de consórcios sintéticos

[167] Um campo de 0,8 acres na forma de 6 fileiras de 670,56 m (2.200 pés) de comprimento foi dividido em 84 lotes. O solo do campo é designado como Capay Clay, Wet. Os níveis de nitrogênio no campo foram 30 a 50 ppm, Fórforo foi 20 a 70 ppm, e potássio foi 230 a 300 ppm de acordo com a

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120/136 análise de solo de vários pontos no campo. Fertilizante de pré-planta em sulco foi aplicado, e uma segunda aplicação foi realizada quando milho estava em cerca de V4 . Cada lote consistiu em 6 fileiras espaçadas em 33 de distância, e tinha 25' de comprimento, com 1' entre cada lote. As duas fileiras externas da seção experimental inteira foram deixadas sem semeadura e não receberam tratamento. As quatro fileiras restantes foram semeadas com variedade de milho doce tratada com fungicida 3674 e tratadas.

[168] As quatro fileiras internas foram primeiro sachadas para criar um sulco, seguido por semeadura manual colocando um miolo a cada 17,78 cm (7 polegadas) ao longo do sulco. Cada lote foi semeado com 42 sementes por fileira para um total de 168 sementes por lote. Dos 84 lotes totais, 2 lotes foram não tiveram tratamento, 4 lotes tiveram um tratamento de tampão de controle (sais de lx M9 estéreis; Sigma-Aldrich M6030) e 78 lotes receberam tratamento microbiano em tampão M9. Um milímetro de líquido de tratamento (consórcios ou cepas únicas) foi aplicado diretamente em cada semente e foi então coberto com solo manualmente. Depois que todo o plantio foi concluído, pulverizadores foram usados para regar as sementes. Visto que o teste de campo foi circundado pelos campos do cultivador, o teste foi tratado do mesmo modo que o resto do campo pela totalidade da estação de cultivo, e foi colhido

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121/136 em 10/14/14. Para eliminar a possibilidade de efeitos de borda afetarem os resultados, somente as 2 fileiras internas (das 4 plantadas e tratadas para cada lote) foram colhidas.

[169] Os tratamentos de líquido consistiram em 6 consórcios e 5 cepas únicas (P0147_D10 ou S2291, P0140_C10 ou S2300, S2384, S2373, S2376) cada um aplicado em três concentrações de célula diferentes. Todos os isolates microbianos foram obtidos com uso do método do Exemplo 3 e cultivados em culturas individuais. Membros de consórcios foram combinados na concentração final de cada membro foi tanto: cerca de IxlO⁹, cerca de IxlO⁸ ou cerca de ou IxlO⁷ células/ml.

[170] Consórcio E: P0147_D10 ou S2291, P0160_F7 ou S2351, P0147_G10 ou S2292.

[171] Consórcio F: P0140_C10 ou S2300, S2387,

P0157JG5 ou S2303.

[172] Consórcio G: S2384, P0160_El ou S2374,

P0134JG7 ou S2280.

[173] Consórcio H: S2275, S2278.

[174] Consórcio I: S2373, S2375, P0157_G5 ou S2303.

[175] Consórcio J: S2293, S2382.

[176] Brotos foram contados em cada planta de milho um mês depois que as sementes foram plantadas. Para cada tratamento e cepa única, o número de brotos por planta é representado em porcentagem em relação ao tampão (Figura

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14) .

[177] Clorofila foi medida de 10 lotes no início da formação de borla (Figura 15) . O teor de clorofila médio (unidades de SPAD) e erro padrão do meio (SEM) é mostrado para quatro tratamentos e controle (Figura 13). Na colheita, o número de espigas comercializáveis por acre foi contado para cada tratamento. A porcentagem de rendimento aumenta em relação ao tratamento de controle é mostrada na Figura 16.

Exemplo 4 experimentos de teste de campo

[178] A cepa Streptomyces canus S2381 (16S v5v6 SEQ ID NO 172) e a cepa de Streptomyces coelicoflavus S2543 (16S v5v6 SEQ ID NO 173) foram dois candidatos selecionados para teste de campo com base em análise de correlação bioinformática, entre outras coisas, biomassa de planta e altura aumentada conforme descrito no Exemplo 1. S2381 foi originalmente isolado como uma cepa endófita de milho potencial e teve fixação de nitrogênio positiva e pontuações de produção de ACC deaminase em ensaios bioquímicos conforme descrito no Exemplo 2.

[179] As cepas foram aplicadas como emendas de tratamento de sementes biológico e avaliadas para crescimento precoce melhorado, estabelecimento padrão e rendimento em um total de sete locais durante as estações de milho de 2016 (três locais) e 2017 (quatro locais). Em todas as localizações, a safra foi gerenciada de acordo com as

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123/136 práticas comerciais locais com controle eficaz de ervas e pestes.

[180] Dados de rendimento foram coletados em todas as localizações. Para avaliar os dados de rendimento, uma estrutura de modelo misturado foi usada para realizar a análise de localização única e localizações múltiplas. Na análise de localização única, o efeito principal de construto é considerado como um efeito aleatório. O efeito principal de evento foi considerado como aleatório. Os fatores de bloqueamento, tais como réplicas e bloco incompleto dentro de réplicas foram considerados como aleatórios. Na análise de localização múltipla, o efeito principal de evento ou construto e sua interação com loc_id foram considerados como efeitos aleatórios. Houve 3 componentes de efeitos espaciais incluindo x_adj, y_adj e correlação autorregressiva como AR1*AR1 para remover o ruído causado por variação espacial no campo. A análise de rendimento se deu por ASREML (VSN International Ltd) (Best Linear Unbiased Prediction) (Cullis, B. Ret al (1998) Biometrics 54: 1-18, Gilmour, A. R. et al (2009). ASReml User Guide 3.0, Gilmour, A.R., et al (1995) Biometrics 51: 1440-50).

[181] Resultados indicaram que tanto S2543 quanto S2381 aumentaram o rendimento em relação a um controle biológico comercial e não tratado, com um aumento significativo positivo no rendimento (S25439.9 Bu/ac e

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S23818.6 Bu/ac) através das três localizações testadas (p > 0.1) in 2016 (Consultar a Tabela 1).

Tabela 1. Impacto de rendimento de cepa de streptomyces canus s2381 e cepa de streptomyces coelicoflavus s2543

Cepa microbiana	Diferença de rendimento para não tratado (Média BLUP, BU/Ac)
S2543	9, 9
S2381	8, 6

* Diferença de rendimento para não tratado (Média BLUP,

BU/Ac)

[182] Em 2017, rendimentos médios através de todos os oito híbridos testados variaram de 191 a 251 bu/acre. Através de todas as localizações e híbridos, o maior rendimento entre o tratamento microbiano foi produzido no tratamento de S2381. Tratamentos microbianos P0147_D10 (também denominados S2291, n° de depósito NRRL B-67104), S2373 (n° de depósito NRRL B-67109) , S2543 e S2644 (n° de depósito NRRL B-67116) também influenciaram a altura precoce de planta em alguns híbridos e localizações (Consultar a Tabela 2)

Tabela 2. Efeitos em altura de planta precoce de dois híbridos em 4 localizações

EVENTO	Grupo de localização	Híbrido P1151YXR	Híbrido P1498XRCR
S2291	Localização 1	1,29	1,29
S2373	Localização 1	1, 18	2,04
S2543	Localização 1	-0, 99	3,35

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EVENTO	Grupo de localização	Híbrido P1151YXR	Híbrido P1498XRCR
S2644	Localização 1	1,57	0, 97
S2291	Localização 2	0, 13	0,32
S2373	Localização 2	0, 83	-0,32
S2543	Localização 2	0, 09	0, 94
S2644	Localização 2	0,72	0, 63
S2291	Localização 3	2,43	1, 12
S2373	Localização 3	3, 69	1,92
S2543	Localização 3	3, 68	2,14
S2644	Localização 3	3, 07	0,51
S2291	Localização 4	-0,43	0,77
S2373	Localização 4	0,55	0, 82
S2543	Localização 4	-0, 67	1,47
S2644	Localização 4	-0,49	-0, 98

* Diferença de altura para não tratado (centímetros BLUP)

[183] Cepa de Arthrobacter globiformis S2695 (16S v5v6 SEQ ID NO 174) e Pseudomonas brassicacearum cepa S2700 (16S v5v6 SEQ ID NO 175) foram selecionados como candidatos com base em correlações a traços fenotípicos previstos para ter relevância para tolerância a estiagem em plantas, seguindo os métodos descritos nos Exemplos 1 e 2. As cepas foram também selecionadas para resposta positiva na fixação de nitrogênio, IAA, sideroforo e ensaios bioquímicos de produção de ACC deaminase.

[184] 0 teste de campo dos micróbios em milho em 2016 foi conduzido em um local próximo a Woodland, CA (WO). Vários traços fenotípicos foram avaliados e tratamentos biológicos foram aplicados em sulco como culturas celulares

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126/136 líquidas. A aplicação de irrigação foi gerenciada para impor estresse próximo à floração e a safra foi, de quatro maneiras, gerenciado por práticas comerciais locais com controle eficaz de ervas e pestes. Em 2017, cepa S2700 foi avaliada em Woodland, CA (WO) com estresse de floração em quatro híbridos enquanto teste de campo de S2695 foi conduzido em 4 locais próximos a Woodland, CA (WO) e duas localizações a oeste de Kansas. A aplicação de irrigação foi gerenciada para expor estresse próximo à floração em um local, e estresse durante o preenchimento de grãos nos dois outros locais. Tratamentos biológicos foram aplicados como revestimentos de semente com uso de um polímero de gama de xantana.

[185] Dados de rendimento foram coletados em todas as quatro localizações e analisados com uma estrutura de modelo misturado conforme descrito acima. Resultados de 2016 indicaram um aumento médio de 7 bu/ac (p < 0.1) de rendimento relativo a um controle não tratado através de 4 híbridos para S2695. Diferenças específicas de híbridos no efeito são mostrados na Tabela 3 com no efeito de rendimento mais forte por S2695 visto em P1498 (+12 Bu/ac; p < 0,1), e o efeito mais fraco visto em P1197 (+0,3 Bu/ac; p > 0,1). A cepa S2700 teve um efeito de rendimento positivo e significativo em P1151 (+12,5 Bu/ac; p<0,l). Em 2017, um efeito específico híbrido foi observado para a cepa S2700, com um efeito de

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127/136 rendimento positivo em P1498 ( + 10 Bu/ac; p < 0,1), e um efeito negativo visto em P1151 e P1197 (-13 Bu/ac; p > 0,1). A variação no efeito através de anos foi também observada para S2695; nas localizações de alto rendimento da Califórnia, a cepa teve um efeito significativo negativo no rendimento no híbrido P1151, mas esse efeito não foi detectado em condições de estiagem, em que essa cepa foi selecionada. A tabela 4 mostra dados de 2017 em que S2695 melhorou em rendimento sob irrigação limitada em todas as quatro localizações para P1498 (média 4 Bu/ac; mais forte +5,44 Bu/ac) e dois das três localizações para P1197 (média 3,5 Bu/ac; mais forte +9,98 Bu/ac). Essas observações foram coerentes com essas cepas que tem atividade biológica, mas o impacto da atividade no final rendimento foi misturado, possivelmente devido a variações no momento e durações de estresse. Pequenas diferenças de maturidade híbrida ou outras características podem ter também interagido para causar impacto no rendimento.

Tabela 3. Impacto de rendimento de sob irrigação limitada

Cepa	P0876YHR	P1151YHR	P1197YHR	P1498YHR
S2695	8,45	8,95	0,32	11, 61
S2700	3, 12	12,47	-16, 2	-6, 09

* Diferença de rendimento para não tratado (Média BLUP, BU/Ac)

Tabela 4. Impacto de Rendimento de s2695 sob irrigação limitada em 3 localizações

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128/136

Híbrido	GC	WO1	WO2
P1498	3, 18	3,38	5, 44
P1197	-3, 17	9, 98	3, 68

* Diferença de rendimento para não tratado (Média BLUP,

BU/Ac)

Exemplo 5 experimentos de teste de campo

[186] Um conjunto de cepas, incluindo Streptomyces roseiscleroticus S2834 (16S v5v6 SEQ ID NO 177), Bacillus megaterium S2839 (16S v5v6 SEQ ID NO 179), Niastella yeongjuensis S2876 (16S v5v6 SEQ ID NO 176), e Streptomyces galilaeus S2871 (16S v5v6 SEQ ID NO 178), foram avaliadas como emendas de tratamento de sementes biológicas para crescimento precoce melhorado, estabelecimento padrão e rendimento. As cepas foram candidatas selecionadas para teste com base em análise de correlação bioinformática, entre outras coisas, à biomassa e altura de planta aumentadas conforme descrito nos Exemplos 1 e 2.

[187] 0 teste de campo em 2017 foi conduzido em 4 locais próximo a Woodland, CA (WO). Cepas microbianas S2834, S2839, S2876, e S2871 foram aplicadas como revestimentos de semente com uso de um polímero de gama de xantana, a um conjunto de oito híbridos de milho comerciais com uma faixa de genéticas de planta. A aplicação de irrigação foi gerenciada para impor estresse próximo à floração em um local, e estresse durante preenchimento com grãos em outro local, os dois locais restantes receberam irrigação padrão.

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129/136

Em todas as localizações, a safra foi gerenciada de acordo com as práticas comerciais locais com controle eficaz de ervas e pestes. Dados de rendimento foram coletados em todas as localizações. Para avaliar os dados de rendimento, uma estrutura de modelo misturado foi usada para realizar a análise de localização única e localizações múltiplas. Na análise de localização única, o efeito principal de construto foi considerado como um efeito aleatório. 0 efeito principal de evento foi considerado como aleatório. Os fatores de bloqueamento, tais como réplicas e bloco incompleto dentro de réplicas foram considerados como aleatórios. Na análise de localização múltipla, o efeito principal de evento ou construto e sua interação com loc_id foram considerados como efeitos aleatórios. Houve 3 componentes de efeitos espaciais incluindo x_adj, y_adj e correlação autorregressiva como AR1*AR1 para remover o ruído causado pela variação espacial no campo. A análise de rendimento se deu por ASREML (VSN International Ltd) (Best Linear Unbiased Prediction) (Cullis, B. Ret al (1998) Biometrics 54: 1-18, Gilmour, A. R. et al (2009). ASReml User Guide 3.0, Gilmour, A.R., et al (1995) Biometrics 51: 1440-50.

[188] Resultados indicam o tratamento microbiano aprimoram rendimento sob irrigação limitada e têm resultados misturados sob irrigação total (Consultar as Tabelas 5 e 6) . Alguns tratamentos indicaram um efeito em traços de

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130/136 maturidade, tais como tempo térmico para formação de seda (Consultar a Tabela 7) .

Tabela 5. Impacto de rendimento sob irrigação total e limitada em uma localização

FATO R	Local izaçã o Grupo	P0589CY XRCR	P0969CY XRCR	P099 3XR	P1151 YXR	P1197CY XRCC	P1366C YXR	P1417 YXR	P1498X RCR
S269 5	Irrig ação limit ada	3,11	-13,14	2,13	-2,27	-5,07	2,36	3,58	4,01
S269 5	Irrig ação total	-0,77	-5,95	0,4	1,36	-2,25	-3,19	11,48	4,93
S283 4	Irrig ação limit ada	4,58	-1,97	1,26	2,02	-0,21	2,45	4,16	3,25
S283 4	Irrig ação total	-3,92	-0,7	3,77	2,9	-1,91	1,88	-14,3	0,84
S283 9	Irrig ação limit ada	2,47	-2,42	-4, 64	-0,89	3,25	2,97	3,09	-4,98
S283 9	Irrig ação total	-5,95	-2,55	2,68	1,99	-4,39	-2,19	-8,27	5,58
S287 1	Irrig ação limit ada	3,4	0,84	3,84	-2,9	1,62	-1,03	2,38	-0,51
S287 1	Irrig ação total	-3,43	-2,07	3,18	0,52	-2,13	-0,53	3,48	1,59
S287 6	Irrig ação limit ada	2,23	-6, 34	1,24	1	4,42	0,12	4,18	5,54
S287 6	Irrig ação Total	0,94	-1,69	3,58	3,69	-3,15	-2,77	-7,87	2,51

* Diferença de rendimento para não tratado (Média BLUP,

BU/Ac)

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131/136

Tabela 6. Impacto de rendimento de localização múltipla média sob irrigação limitada e total

EVE NTO	Loca liza ção Grup o	P0589C YXRCR	P0969C YXRCR	PO99 3XR	P1151 YXR	P1197C YXRCC	P1366C YXR	P141 7 YXR	P1498 XRCR	Todos os hibri dos
S28 34	Irri gaçã o limi tada	4,58	-1,97	1,26	2,02	-0,21	2,45	4,16	3,25	1,94
S28 34	Irri gaçã o tota 1	-3,92	-0,7	3,77	2,9	-1,91	1,88	14,3	0,84	-1,43
S28 71	Irri gaçã o limi tada	3,4	0,84	3,84	-2,9	1,62	-1,03	2,38	-0,51	0,95
S28 71	Irri gaçã o tota 1	-3,43	-2,07	3,18	0,52	-2,13	-0,53	3,48	1,59	-0,72
S28 76	Irri gaçã o limi tada	2,23	-6, 34	1,24	1	4,42	0,12	4,18	5,54	1,24
S28 76	Irri gaçã o tota 1	0,94	-1,69	3,58	3,69	-3,15	-2,77	7,87	2,51	-0,59

* Diferença de rendimento para não tratado (Média BLUP,

BU/Ac)

Tabela 7. Impacto em tempo térmico para formação de seda sob irrigação limitada e total em múltiplas localizações (médias)

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FATO R	Grupo	P0589CY XRCR	P0969CY XRCR	P099 3XR	P1151 YXR	P1197CY XRCC	P1366 CYXR	P1417 YXR	P1498X RCR
S269 5	Irriga ção limita da	-3,58	-19,31	22,9 5	-1,54	-9,98	-4	13,02	-1,21
S269 5	Irriga ção total	-11,97	7,8	13,1 4	0,58	3,13	-4,75	0,03	5,91
S283 4	Irriga ção limita da	6, 13	2,78	22,6 1	11,63	-4,48	14,24	-1,02	-32,17
S283 4	Irriga ção total	12,87	2,16	4,98	-0,47	15,16	27,53	4,35	-9,49
S283 9	Irriga ção limita da	-3,58	8,64	3,52	2,34	-13,32	-0,94	5,39	-24,47
S283 9	Irriga ção total	-7,87	11,12	16, 4 4	-1,4	4,6	-0,66	3,74	22,38
S287 1	Irriga ção limita da	4,05	-7,84	23,8 1	-9,26	7,54	16, 66	-7,52	-20,59
S287 1	Irriga ção total	14,41	-3,64	6, 61	0,84	13,93	0,38	12,8	-2,47
S287 6	Irriga ção limita da	8,94	10,3	7,37	8,86	-6, 92	16, 52	-9,02	7,91
S287 6	Irriga ção total	12,94	6, 14	7,68	11,83	-4,53	-3,1	-4,66	-0,65.

* Tempo térmico para diferença de formação de seda para não tratado (BLUP GDU)

Exemplo 6: Experimentos de ambiente controlado

Ensaio de crescimento vegetative precoce de milho

[189] Sementes com ou sem tratamento microbiano foram plantadas em potes de 15,24 cm (6 polegadas) então germinadas na estufa e mantidas sob condições ideais (regadas

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133/136 com fertilizante contendo nutrientes suficientes para desenvolvimento apropriado; aproximadamente periodo de 15 horas por dia com luz suplementar) . Em 20 dias após o plantio (DAP), plantas foram colhidas e medições de biomassa realizadas (altura de planta, e pesos novos e secos de mudas).

[190] Tratamentos microbianos mostraram um aumento positivo em altura de planta, peso de planta úmida e peso de planta seca em relação a potes de controle não tratado através de dois experimentos, SPR_E117 e SPR_E120 (Consultar as Tabelas 8 e 9).

[191] SPR E117

[192] Bio6: S2373

[193] Bio7: S2373 em dose dupla

[194] Bio8: S2373 e S2385

[195] Bio9:S1112

[196] SPR E120

[197] Bio4: S2373,

[198] Bio5: S2373 em dose dupla

[199] Bio6: S2373 e S2385

[200] Bio7: S1112

[201] Bio8: S2373, S2385, S2375, e S2669

Tabela 8. SPR117 experimentos de ambiente controlado

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134/136

TRATAMENTO	HÍBRIDO	Med (Peso Fresco em gramas)
Nenhum	P1151	79, 95
S2373	P1151	82, 63
S2373 2x dose	P1151	82,76
S2372 & S2385	P1151	77,37
S1112	P1151	81, 82

Tabela 9. SPR 120 Experimentos de ambiente controlado

TRATAMENTO	HÍBRIDO	Med. (Altura em centímetros )	Med. (Peso fresco em gramas)	Med. (Peso seco em gramas)
nenhum	P1151	82, 68	33,45	2,56
S2373	P1151	82,81	33,76	2,55
S2373 2x dose	P1151	83,75	35,79	2,71
S2373 & S2385	P1151	83, 04	34	2,54
S1112	P1151	85, 67	35, 97	2,82
S2373/S2385 / S2375/S2669	P1151	84, 17	35, 68	2,76

Ensaio de estiagem de milho

[202] Sementes com ou sem tratamento microbiano foram cultivadas para crescimento vegetative estágio 4 (V4) sob condições de estufa padrão (regadas com fertilizante que contém nutrientes suficientes para desenvolvimento apropriado; período de aproximadamente 15 horas por dia com luz suplementar). Em V4, água foi retida tanto para um como para dois ciclos de estiagem. 0 uso de água foi calculado medindo-se o peso de pote duas vezes durante cada ciclo assim como peso de planta dividido pelo tamanho para calcular a

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135/136 eficiência de uso de água (WUE) . A altura da planta foi medida semanalmente começando em V4, e altura de planta e peso medida ao fim do experimento.

[203] Tratamentos microbianos com cepa de Arthrobacter globiformis S2695 (16S v5v6 SEQ ID NO 174) e cepa de Pseudomonas brassicacearum S2700 (16S v5v6 SEQ ID NO 175) mostraram um aumento positivo em altura da planta precoce em relação aos potes de controle não tratado em três experimentos e múltiplos antecedentes de genética de planta, SPR_E134, SPR_E136 e SPR_E139 (Consultar as Tabelas 10 a 12) .

Tabela 10. SPR 134 Ensaio de Estiagem de milho de

Experimentos de Ambiente Controlado

Tratamento	Tempo 1	Tempo 2
Nenhum	15, 73	27,13
S2695	16, 33	27,98

* Altura média em centímetros

Tabela 11. SPR 136 Ensaio de Estiagem de milho de

Experimentos de Ambiente Controlado

		Tempo 1	Tempo 1	Tempo 2	Tempo 2
	HÍBRIDO	P1151	P1498	P1151	P1498
Tratamento	Nenhum	12,29	14, 04	22,94	23, 67
S2695	13, 19	14,74	23, 83	24,46

* Altura média em centímetros

Tabela 12. SPR 139 Ensaio de Estiagem de milho de

Experimentos de Ambiente Controlado

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136/136

HÍBRIDO	TRATAMENTO	Tempo 1	Tempo 2
P1151	Nenhum	18,4	29, 53
P1151	S2695	19	31,03
P1151	S2700	18, 67	29, 97
P1197	Nenhum	22,73	36, 6
P1197	S2695	23,2	36, 97
P1197	S2700	22,57	35, 37

* Altura média em centímetros

Claims (25)

1. Composição caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais cepas microbianas, em que a sequência 16S de uma ou mais cepas microbianas compreende pelo menos 97% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID Nos: 165 a 461.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda pelo menos uma cepa microbiana adicional, em que a sequência 16S de pelo menos uma cepa microbiana adicional compreende pelo menos 97% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID Nos: 1 a 461.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda pelo menos duas cepas microbianas adicionais, em que a sequência 16S de pelo menos duas cepas microbianas adicionais compreende pelo menos 97% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID Nos: 1 a 461.

4. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda pelo menos três cepas microbianas adicionais, em que a sequência 16S de pelo menos três cepas microbianas adicionais compreende pelo menos 97% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID Nos: 1 a 461.

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2/12

5. Composição caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais cepas microbianas selecionadas a partir de S2834 (n° de Depósito NRRL B- 67441), S2381 (n° de Depósito NRRL B-67442), S2543 (n° de Depósito NRRL B67443), S2695 (n° de Depósito NRRL B-67444), S2700 (n° de Depósito NRRLB 67445), S2837 (n° de Depósito NRRL B-67446), S2839 (n° de Depósito NRRL B-67447), S2876 (n° de Depósito NRRL B-67448), S2871 (n° de Depósito NRRL B-67440), S2145-2 (NRRL B-67331), S2292-2 (NRRL B-67332), S2300-2 (NRRL B67333), S2303-2 (NRRL B-67334), S2375-2 (NRRL B-67335), S2382-2 (NRRL B-67336), S2423-2 (NRRL B-67337), S2669-2 (NRRL B-67338), ou uma cepa derivada das mesmas, ou uma cultura das mesmas.

6. Composição, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que compreende ainda pelo menos uma cepa microbiana adicional, em que pelo menos uma cepa microbiana adicional é selecionada a partir de P0032_C7, P0048_B9, P0050_F5 (também denominada S2199,), P0035_B2 (também denominada S2145, n° de Depósito NRRLB-67091), P0020_Bl, P0047_Al (também denominada S2284, n° de Depósito NRRLB-67102), P0033_El (também denominada S2177), P0032_A8 (também denominada S2181, n° de Depósito NRRLB-67099), P0049_E7, P0042_A8 (também denominada S2167), P0042_D5 (também denominada S2165), P0042_B2 (também denominada S2168, n° de Depósito NRRLB-67096), P0042_B12 (também

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3/12 denominada S2189), P0042_C2 (também denominada S2173, n° de Depósito NRRLB-67098), P0042_D10 (também denominada S2172, n° de Depósito NRRL B-67097), P0044_A3 (também denominada S2476), P0018_All, P0044_A⁵, P0047_E2, P0047_CU P0038_D2 ou S2166, P0042_El, P0047_EU P0018_AU S2159_P0058_B9 (n° de Depósito NRRLB-67092), S2161_P0054_E⁸ (n° de Depósito NRRLB-67094), S2164_P0054_F4, P0057_A3 (também denominada S2160, n° de Depósito NRRLB-67093), S2142_P°⁰⁶l_^EH/ S2163_P0019_A12 (n° de Depósito NRRLB-67095), PO147_D1° (também denominada S2291, n° de Depósito NRRLB-67104), P0147_G10 (também denominada S2292, n° de Depósito NRRLB67105), P0160_F7 (também denominada S2351), P0140_C10 (também denominada S2300, n° de Depósito NRRLB-67107), S2387, P0157_G5 (também denominada S2303, n° de Depósito NRRLB-67108) , P0160_El (também denominada S2374), P0134_G⁷ (também denominada S2280), S2384 (n° de Depósito NRRLB67112), S2275 (n° de Depósito NRRLB-67101), S2278, S2373 (n° de Depósito NRRLB-67109) , S2370, S2293 (n° de Depósito NRRLB-67106) S2382 (n° de Depósito NRRLB-67111), P0132_A¹², P0132_C12, P0140_DU P0173_H3 (também denominada S2404), S2385 (n° de Depósito NRRLB-67113), S2197 (n° de Depósito NRRL67100), S2285 (n° de Depósito NRRLB-67103), S2477, S2376, S2420, S2424, S2445, S2333, S2329, S2327, S2330, S2423 (n° de Depósito NRRLB-67115), S2435, S2158, S2437, S2332, S2521, S2228, S2473, P0156_G2, P0154_G3, S2487,

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S2488, S2421 (n° de Depósito NRRLB-67114), P0105_C5, P0154_H3, PO156_G1, S1112 (n° de Depósito NRRLB-67090), S2375 (n° de Depósito NRRLB-67110), e S2669 (n° de Depósito NRRL B-67117), S2651, S2652, S2653, S2654, S2655, S2656, S2668, S2644 (n° de Depósito NRRLB-67116), S2328, S2646, S2834 (n° de Depósito NRRL B-67441), S2381 (n° de Depósito NRRL B-67442), S2543 (n° de Depósito NRRL B-67443), S2695 (n° de Depósito NRRL B-67444), S2700 (n° de Depósito NRRLB67445), S2837 (n° de Depósito NRRL B-67446), S2839 (n° de Depósito NRRL B-67447), S2876 (n° de Depósito NRRL B67448), S2871 (n° de Depósito NRRL B-67440), S2145-2 (NRRL B-67331), S2292-2 (NRRL B-67332), S2300-2 (NRRL B-67333), S2303-2 (NRRL B-67334), S2375-2 (NRRL B-67335), S2382-2 (NRRL B-67336), S2423-2 (NRRL B-67337), S2669-2 (NRRL B67338), ou uma cepa derivada das mesmas, ou uma cultura das mesmas .

7. Composição, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que compreende ainda pelo menos duas cepas microbianas adicionais, em que pelo menos as duas cepas microbianas adicionais são selecionadas a partir de P0032_C7, P0048_B9, P0050_F5 (também denominada S2199,), P0035_B2 (também denominada S2145, n° de Depósito NRRLB67091), P0020_Bl, P0047_Al (também denominada S2284, n° de Depósito NRRLB-67102) , P0033_El (também denominada S2177), P0032_A8 (também denominada S2181, n° de Depósito NRRLB

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67099), P0049_E7, P0042_A8 (também denominada S2167), P0042_D5 (também denominada S2165), P0042_B2 (também denominada S2168, n° de Depósito NRRLB-67096) , P0042_B12 (também denominada S2189) , P0042_C2 (também denominada S2173, n° de Depósito NRRLB-67098), P0042_D10 (também denominada S2172, n° de Depósito NRRL B-67097), P0044_A3 (também denominada S2476), P0018_All, P0044_A5, P0047_E2, P0047_Cl, P0038_D2 ou S2166, P0042_El, P0047_E8, P0018_Al, S2159_P0058_B9 (n° de Depósito NRRLB-67092), S2161_P0054_E8 (n° de Depósito NRRLB-67094), S2164_P0054_F4, P0057_A3 (também denominada S2160, n° de Depósito NRRLB-67093), S2142_P0061_E11, S2163_P0019_A12 (n° de Depósito NRRLB67095), P0147_D10 (também denominada S2291, n° de Depósito NRRLB-67104), P0147_G10 (também denominada S2292, n° de Depósito NRRLB-67105), P0160_F7 (também denominada S2351), P0140_C10 (também denominada S2300, n° de Depósito NRRLB67107), S2387, P0157_G5 (também denominada S2303, n° de Depósito NRRLB-67108) , P0160_El (também denominada S2374), P0134_G7 (também denominada S2280), S2384 (n° de Depósito NRRLB-67112), S2275 (n° de Depósito NRRLB-67101), S2278, S2373 (n° de Depósito NRRLB-67109), S2370, S2293 (n° de Depósito NRRLB-67106) S2382 (n° de Depósito NRRLB-67111), P0132_A12, P0132_C12, P0140_D9, P0173_H3 (também denominada S2404), S2385 (n° de Depósito NRRLB-67113), S2197 (n° de Depósito NRRL67100), S2285 (n° de Depósito NRRLB-67103),

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S2477, S2376, S2420, S2424, S2445, S2333, S2329, S2327,

S2330, S2423 (n° de Depósito NRRLB-67115), S2435, S2158, S2437, S2332, S2521, S2228, S2473, P0156_G2, P0154_G3, S2487, S2488, S2421 (n° de Depósito NRRLB-67114), P0105_C5, P0154_H3, P0156JG1, S1112 (n° de Depósito NRRLB-67090), S2375 (n° de Depósito NRRLB-67110), e S2669 (n° de Depósito NRRL B-67117), S2651, S2652, S2653, S2654, S2655, S2656, S2668, S2644 (n° de Depósito NRRLB-67116), S2328, S2646, S2834 (n° de Depósito NRRL B-67441), S2381 (n° de Depósito NRRL B-67442), S2543 (n° de Depósito NRRL B-67443), S2695 (n° de Depósito NRRL B-67444), S2700 (n° de Depósito NRRLB67445), S2837 (n° de Depósito NRRL B-67446), S2839 (n° de Depósito NRRL B-67447), S2876 (n° de Depósito NRRL B67448), S2871 (n° de Depósito NRRL B-67440), S2145-2 (NRRL B-67331), S2292-2 (NRRL B-67332), S2300-2 (NRRL B-67333), S2303-2 (NRRL B-67334), S2375-2 (NRRL B-67335), S2382-2 (NRRL B-67336), S2423-2 (NRRL B-67337), S2669-2 (NRRL B67338), ou uma cepa derivada das mesmas, ou uma cultura das mesmas .

8. Composição, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que compreende ainda pelo menos três cepas microbianas adicionais, em que pelo menos as três cepas microbianas adicionais são selecionadas a partir de P0032_C7, P0048_B9, P0050_F5 (também denominada S2199,), P0035_B2 (também denominada S2145, n° de Depósito NRRLB

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67091), Ρ0020_Β1, P0047_Al (também denominada S2284, n° de Depósito NRRLB-67102 ) , P0033_El (também denominada S2177), P0032_A8 (também denominada S2181, n° de Depósito NRRLB67099), P0049_E7, P0042_A8 (também denominada S2167), P0042_D5 (também denominada S2165), P0042_B2 (também denominada S2168, n° de Depósito NRRLB-67096) , P0042_B12 (também denominada S2189) , P0042_C2 (também denominada S2173, n° de Depósito NRRLB-67098), P0042_D10 (também denominada S2172, n° de Depósito NRRL B-67097), P0044_A3 (também denominada S2476), P0018_All, P0044_A5, P0047_E2, P0047_Cl, P0038_D2 ou S2166, P0042_El, P0047_E8, P0018_Al, S2159_P0058_B9 (n° de Depósito NRRLB-67092), S2161_P0054_E8 (n° de Depósito NRRLB-67094), S2164_P0054_F4, P0057_A3 (também denominada S2160, n° de Depósito NRRLB-67093), S2142_P0061_E11, S2163_P0019_A12 (n° de Depósito NRRLB67095), P0147_D10 (também denominada S2291, n° de Depósito NRRLB-67104), P0147_G10 (também denominada S2292, n° de Depósito NRRLB-67105), P0160_F7 (também denominada S2351), P0140_C10 (também denominada S2300, n° de Depósito NRRLB67107), S2387, P0157_G5 (também denominada S2303, n° de Depósito NRRLB-67108) , P0160_El (também denominada S2374), P0134_G7 (também denominada S2280), S2384 (n° de Depósito NRRLB-67112), S2275 (n° de Depósito NRRLB-67101), S2278, S2373 (n° de Depósito NRRLB-67109), S2370, S2293 (n° de Depósito NRRLB-67106) S2382 (n° de Depósito NRRLB-67111),

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P0132_A12, P0132_C12, P0140_D9, P0173_H3 (também denominada S2404), S2385 (n° de Depósito NRRLB-67113), S2197 (n° de Depósito NRRL67100), S2285 (n° de Depósito NRRLB-67103),

S2477, S2376, S2420, S2424, S2445, S2333, S2329, S2327, S2330, S2423 (n° de Depósito NRRLB-67115), S2435, S2158, S2437, S2332, S2521, S2228, S2473, P0156_G2, P0154_G3,

S2487, S2488, S2421 (n° de Depósito NRRLB-67114), P0105_C5, P0154_H3, P0156JG1, S1112 (n° de Depósito NRRLB-67090),

S2375 (n° de Depósito NRRLB-67110), e S2669 (n° de Depósito NRRL B-67117), S2651, S2652, S2653, S2654, S2655, S2656, S2668, S2644 (n° de Depósito NRRLB-67116), S2328, S2646, S2834 (n° de Depósito NRRL B- 67441), S2381 (n° de Depósito NRRL B-67442), S2543 (n° de Depósito NRRL B-67443), S2695 (n° de Depósito NRRL B-67444), S2700 (n° de Depósito

NRRLB67445), S2837 (n° de Depósito NRRL B-67446), S2839 (n° de Depósito NRRL B-67447), S2876 (n° de Depósito NRRL B67448), S2871 (n° de Depósito NRRL B-67440), S2145-2 (NRRL B-67331), S2292-2 (NRRL B-67332), S2300-2 (NRRL B-67333), S2303-2 (NRRL B-67334), S2375-2 (NRRL B-67335), S2382-2 (NRRL B-67336), S2423-2 (NRRL B-67337), S2669-2 (NRRL B67338), ou uma cepa derivada dos mesmos, ou uma cultura dos mesmos .

9. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que compreende ainda uma quantidade agricolamente eficaz de um

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9/12 composto ou composição selecionado a partir do grupo que consiste em um nutriente, um fertilizante, um acaricida, um bactericida, um fungicida, um inseticida, um microbicida, um nematicida e um pesticida.

10. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um carreador.

11. Composição, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que o dito carreador é selecionado a partir de turfa, relva, talco, lignito, caulinita, pirofilita, zeólito, montemorilonita, alginato, lama prensada, serragem, perlita, mica, silicas, pó de quartzo, bentonita cálcica, vermiculita e misturas dos mesmos.

12. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, em que a composição é caracterizada pelo fato de que é preparada como uma formulação selecionada a partir do grupo que consiste em uma emulsão, um coloide, uma poeira (dust), um grânulo, um pélete, um pó (powder), um aspersor e uma solução.

13. Composição, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que o dito carreador compreende uma semente de planta.

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14. Semente de planta caracterizada pelo fato de que tem um revestimento compreendendo a composição conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 10.

15. Semente de planta, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que a semente é revestida com um aditivo de semente.

16. Semente de planta, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que a composição compreende pelo menos 10² CFUs de pelo menos uma cepa microbiana.

17. Semente, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que a semente de planta é uma semente de planta geneticamente modificada ou uma semente de planta transgênica.

18. Semente, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que o revestimento compreende ainda um agente de biocontrole selecionado a partir do grupo que consiste em uma bactéria, um fungo, uma levedura, um protozoário, um vírus, um nemátodo entomopatogênico, um extrato botânico, uma proteína, um ácido nucleico, um metabolite secundário e um inoculante.

19. Semente, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que o revestimento compreende ainda um composto selecionado a partir do grupo que consiste em um protetor, um lipo-quito-oligossacarídeo, um

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11/12 sal de lipoglicina triglicosamina, uma isoflavona e urn modulador receptor de rianodina.

20. Método para aumentar crescimento de planta caracterizado pelo fato de que compreende aplicar a composição conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 10 a uma planta, parte de planta ou semente.

21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a semente é revestida com um aditivo de semente.

22. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a composição compreende pelo menos 10² CFUs de pelo menos uma cepa microbiana.

23. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a semente de planta é uma semente de planta geneticamente modificada ou uma semente de planta transgênica.

24. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o revestimento compreende ainda um agente de biocontrole selecionado a partir do grupo que consiste em uma bactéria, um fungo, uma levedura, um protozoário, um virus, um nemátodo entomopatogênico, um extrato botânico, uma proteína, um ácido nucleico, um metabolito secundário e um inoculante.

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25. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda um composto selecionado a partir do grupo que consiste em um protetor, um lipo-quito-oligossacarídeo, um sal de lipoglicina triglicosamina, uma isoflavona e um modulador receptor de rianodina.