BR112019012757A2

BR112019012757A2 - composto, composição farmacêutica, e, método.

Info

Publication number: BR112019012757A2
Application number: BR112019012757A
Authority: BR
Inventors: Richard Meijer Andreas; Christopher Bales Brian; James Rishel Michael; Jacob THANING Mikkel
Original assignee: Ge Healthcare As
Priority date: 2016-12-21
Filing date: 2017-12-21
Publication date: 2019-11-26
Also published as: EP3558394A1; KR102550339B1; JP7258753B2; RU2769699C2; PL3558394T3; JP2020503310A; KR20190098193A; RU2019118365A; US20200062791A1; DK3558394T3; WO2018115314A1; US10730897B2; ZA201904006B; ES2813077T3; CN110290815A; AU2017382953A2; EP3558394B1; RU2019118365A3; AU2017382953B2; MX2019007595A

Abstract

a invenção fornece compostos de fórmula (i) que representam um poliaza-macrociclo com braços laterais de ácido carboxílico complexando manganês como metal de núcleo. os complexos são adequados para uso como agentes de contraste em imagem por ressonância magnética (irm).

Description

COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E, MÉTODO

Campo Técnico da Invenção [001] A invenção se refere a compostos quelatos e seu uso como agentes de contraste em procedimentos de ressonância magnética.

Descrição da Técnica Relacionada [002] A imagem de ressonância magnética (IRM) é uma técnica de imagem médica em que as áreas do corpo são visualizadas através dos núcleos de átomos selecionados, especialmente núcleos de hidrogênio. O sinal de ressonância magnética depende do ambiente em torno dos núcleos visualizados e seus tempos de relaxamento longitudinal e transversal, TI e T2. Assim, no caso em que o núcleo visualizado é um próton, a intensidade do sinal de ressonância magnética dependerá de fatores como a densidade de prótons e o ambiente químico dos prótons. Os agentes de contraste podem ser usados na ressonância magnética para melhorar o contraste da imagem. Eles atuam efetuando o tempo de relaxamento Tl, T2 e/ou T2* e, assim, influenciam o contraste nas imagens.

[003] Sabe-se que os tempos de relaxamento Tl, T2 e/ou T2* podem ser otimizados para agentes de contraste paramagnéticos quelatados por modificação estrutural. De particular importância é a presença e o tempo de residência de uma molécula de água ligada ao íon paramagnético e o tempo de correlação rotacional do agente de contraste. A presença e o tempo de permanência de uma molécula de água, ligada ao íon paramagnético, podem ser modulados pela escolha do íon paramagnético e da porção de quelante. O tempo de correlação rotacional pode ser modulado variando o tamanho do agente de contraste.

[004] Sabe-se também que o íon paramagnético pode interferir nas vias biológicas e induzir toxicidade, de modo que o íon paramagnético precisa ser retido o mais possível dentro de um quelato. A capacidade de um quelato para reter o íon paramagnético, a partir de agora designada estabilidade,

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2/62 também é uma propriedade que pode ser modulada pelo desenho estrutural da porção de quelante. De particular interesse é a estabilidade cinética, medida como uma meia vida de dissociação, que indica o grau de inércia em relação a ambientes químicos alterados (isto é, íons endógenos).

[005] Vários tipos de agentes de contraste são conhecidos para uso em ressonância magnética. Agentes de contraste de RM para o conjunto de sangue, por exemplo, partículas de óxido de ferro superparamagnéticas, são retidos dentro da vasculatura por um tempo prolongado. Eles provaram ser extremamente úteis para melhorar o contraste, por exemplo, no fígado, mas também para detectar anormalidades de permeabilidade capilar, como paredes capilares “vazadas” em tumores que são resultado de angiogênese tumoral.

[006] A solubilidade do quelato paramagnético na água também é um fator importante quando eles são usados como agentes de contraste para a ressonância magnética, porque eles são administrados a pacientes em doses relativamente grandes. Um quelato paramagnético altamente solúvel em água requer um volume de injeção mais baixo, é assim mais fácil de administrar a um paciente e causa menos desconforto. Quelatos paramagnéticos solúveis em água, isto é, complexos de um quelante e um íon metálico paramagnético são bem conhecidos - por exemplo, os quelatos de gadolínio comercialmente disponíveis OmniscanTM (GE Healthcare), DotaremTM (Guerbet), GadavistTM (Bayer) e MagnevistTM (Bayer). Devido ao seu baixo peso molecular, distribuem-se rapidamente no espaço extracelular (isto é, o sangue e o interstício) quando administrados na vasculatura. Eles também são eliminados relativamente rapidamente do corpo.

[007] US 8540966 ensina a seguinte estrutura generalizada:

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em que L é um ligante e R é H ou uma porção de aminopoliol C2-70· Os exemplos experimentais de US 8540966 comparam certos quelatos de gadolínio disponíveis comercialmente com quelatos de gadolínio da invenção para demonstrar um perfil farmacocinético semelhante aos quelatos de gadoliíno disponíveis comercialmente, mas com maior relaxividade. US 8540966 não descreve qualquer efeito das porções aminopoliol na inércia de transmetallação.

[008] EP 1931673 ensina a seguinte estrutura generalizada:

cada R na estrutura acima é definido na EP 1931673 como um ligando de coordenação e cada X compreende pelo menos um grupo hidroxialquila C1-6. EP 1931673 enfatiza as propriedades de relaxividade dos compostos aqui ensinados. Os ensinamentos de EP 1931673 referem que o composto anterior pode ser complexado com um íon metálico paramagnético selecionado entre Gd³⁺, Mn²⁺ e Fe³⁺, mas na realidade o foco está nas estruturas de quelatos que são adequadas para a complexação estável de Gd³⁺,

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4/62 por exemplo, o seguinte complexo contendo gadolínio:

[009] Todos os complexos exemplificados são heptadentados, uma vez que quatro nitrogênios e três grupos de ácidos carboxílicos coordenam o íon metálico complexado. O efeito prejudicial dos quelatos de manganês heptadentados foi descrito em WO 2011073371. EP 1931673 não descreve qualquer efeito das porções hidroxialquila na inércia de transmetalação.

[0010] Como pode ser reconhecido a partir dos agentes comercialmente disponíveis e o foco da técnica anterior, o gadolínio é o íon metálico paramagnético mais amplamente utilizado para quelatos de IRM.

[0011] O íon manganês (II) é uma espécie paramagnética com alto número de spin e longo tempo de relaxamento eletrônico e o potencial de um agente de contraste de alta relaxividade à base de manganês (II) tem sido relatado na literatura (Tóth, E; Advances in Inorganic Chemistry, 2009, 61 (09), 63 a 129). Contudo, os quelatos de manganês (II) se revelaram muito menos estáveis em comparação com os quelatos de gadolínio correspondentes. Por exemplo, o quelato de manganês de DOTA (MnDOTA) é várias centenas de vezes menos estável em comparação com o complexo de gadolínio correspondente (GdDOTA (Drahos, B; Inorganic Chemistry, 2012 (12), 1975 a 1986).

[0012] Um problema importante a ser resolvido é, portanto, o de obter

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5/62 novos quelatos de manganês que exibem uma alta estabilidade, mantendo ao mesmo tempo propriedades de relaxamento eficazes.

[0013] Certos quelatos de manganês estáveis estão descritos no documento WO 2011073371. O desenho molecular aqui descrito demonstrou favorecer uma elevada estabilidade do quelato e uma elevada relaxividade. Isto toma estes compostos muito adequados para utilização como agentes de contraste para IRM. Um composto exemplar de WO 2011073371 tem a seguinte estrutura:

[0014] No entanto, ainda há espaço para novas melhorias em termos de estabilidade e relaxividade.

Sumário da Invenção [0015] Em um aspecto, a presente invenção se refere a um composto de Fórmula I ou um sal ou solvato do mesmo:

R¹

em que:

X é O ou S;

Y é O, S ou Q-R³, em que Q é N ou CH e R³ é selecionado a partir do grupo que compreende hidroxialquila C1-20, alquila C1-6 ou hidrogênio;

Z é O-L-R⁴, SL-R⁴ ou Q-R³-(L-R⁴) em que Q e R³ são como definidos para Y e L é um ligante opcional selecionado dos grupos

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6/62 compreendendo alquileno Ci-6, hidroxialquileno Ci-6 e um ligante PEG, R⁴ é selecionado a partir do grupo compreendendo alquila Ci-6-R⁵, arila C3-6-R⁵, hidroxi, -O-alquila C1-3-R⁵, sulfonila, um anel heterocíclico de 5 a 6 membros, uma porção de carboidrato , uma porção de quelante, uma porção de aminoácido, em que R⁵ representa um ou mais substituintes opcionais selecionados dentre hidroxi, amino, oxo, halo, alquila C1-3, sulfonamida ou C(=O)-NH-hidroxialquila Ci^; ou o próprio Z faz parte de uma porção de carboidrato ou um anel heterocíclico de 5 a 6 membros;

R¹ é alquila C1.3 ou -(CH₂)_m-Y¹-C(=X¹)-Z¹, em que X¹, Y¹ e Z¹são como definidos para X, Y e Z e m é um número inteiro de 2 a 5;

R² representa 0 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo compreendendo hidroxi, halo, amino, amido, alquila C1-6 e hidroxialquila C1-6; e, cada n é um número inteiro de 0 a 15;

em que o composto de Fórmula I compreende pelo menos dois grupos hidroxi; e, com a condição de que quando Y é Q-R³ em que Q é CH, Z não é Q-R³-(E-R⁴) em que Q é N.

[0016] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a uma composição farmacêutica compreendendo o composto de Fórmula I da invenção juntamente com um veículo biocompatível em uma forma adequada para administração a mamífero.

[0017] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a um método compreendendo:

(i) administrar a um indivíduo o composto de Fórmula I da invenção ou a composição farmacêutica da invenção;

(ii) detectar sinais de ressonância magnética (RM) do dito indivíduo ou partes do dito indivíduo em que o dito composto foi distribuído;

(iii) gerar imagens de RM e/ou espectros de RM a partir dos

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7/62 ditos sinais detectados.

[0018] Em outro aspecto, a presente invenção fornece o composto de Fórmula I da invenção para uso no método da invenção.

[0019] Os quelatos à base de manganês (II) da presente invenção são cineticamente estáveis e apresentam uma cinética de troca de água vantajosa, e podem ser usados como agentes de contraste de IRM.

[0020] Embora os compostos descritos no documento WO 2011073371 tenham sido caracterizados como muito estáveis (isto é, alto nível de inércia para a transmetalação), os presentes inventores obtiveram surpreendentemente sucesso na obtenção de quelatos de manganês dotados de uma estabilidade ainda maior. Esta inércia surpreendente em relação à transmetalação é obtida pela incorporação do quelato de manganês dentro de um escudo hidrofílico. O escudo hidrofílico é construído por enxerto de braços hidrofílicos aos grupos funcionais carboxílicos quelantes. Embora os efeitos vantajosos dos quelatos poli-hidroxilados nas propriedades de relaxividade sejam conhecidos da técnica anterior, o efeito surpreendente na cinética de dissociação demonstrada pela presente invenção não foi, contudo, descrito anteriormente.

Descrição Detalhada das Modalidades Preferidas [0021] Para descrever de forma mais clara e concisa e apontar o assunto da invenção reivindicada, definições e modalidades exemplificativas são fornecidas abaixo para termos específicos utilizados ao longo do presente relatório descritivo e reivindicações. Qualquer exemplificação de termos específicos aqui contidos deve ser considerada como um exemplo não limitativo.

[0022] Os termos “compreendendo” ou “compreende” têm o seu significado convencional ao longo deste pedido e implicam que o agente ou a composição devem ter as características ou componentes essenciais listados, mas que outros podem estar presentes adicionalmente. O termo

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8/62 “compreendendo” inclui como um subconjunto preferido “consistindo essencialmente em” o que significa que a composição tem os componentes listados sem outras características ou componentes estarem presentes.

[0023] Um “sal” de acordo com a invenção, inclui sais de adição de ácido fisiologicamente aceitáveis, tais como os derivados de ácidos minerais, por exemplo, ácidos clorídrico, bromídrico, fosfórico, metafosfórico, nítrico e sulfúrico, e os derivados de ácidos orgânicos, por exemplo, ácidos tartárico, trifluoroacético, cítrico, málico, láctico, fumárico, benzoico, glicólico, glucônico, succínico, metanossulfônico e para-toluenossulfônico.

[0024] Um “solvato” adequado de acordo com a invenção é selecionado dentre etanol, água, solução salina, tampão fisiológico e glicol.

[0025] O termo “alquila”, sozinho ou em combinação, significa um radical alquila de cadeia linear ou ramificada tendo a fórmula geral C_nH2n+i· Exemplos de tais radicais incluem metila, etila e isopropila.

[0026] O termo “hidroxila” se refere ao grupo -OH.

[0027] O termo “hidroxialquila” se refere a um grupo alquila como definido acima, compreendendo um substituinte hidroxila como definido acima.

[0028] O termo “arila” se refere a um grupo funcional ou substituinte derivado de um anel aromático, geralmente um hidrocarboneto aromático, exemplos dos quais incluem fenila e piridila. Em uma modalidade, os grupos arila da presente invenção são anéis aromáticos de 6 membros, com entre 0 a 3 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S.

[0029] O termo “halogênio” ou “halo” significa um substituinte selecionado dentre flúor, cloro, bromo ou iodo.

[0030] O termo “porção de carboidrato” se refere a um aldeído ou um derivado de cetona de um álcool poli-hídrico e inclui resíduos de monossacarídeos, dissacarídeos e oligossacarídeos. Exemplos não limitativos incluem resíduos de frutose, glucose e sacarose.

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9/62 [0031] O termo “alquileno” se refere ao grupo bivalente -(CH₂)_X- em que x é um número inteiro de 1 a 6. O termo “hidroxialquileno” se refere a um alquileno compreendendo um ou mais substituintes hidroxi.

Lingante PEG [0032] O termo “hidroxi” se refere ao grupo -OH.

[0033] O termo “sulfonil” se refere ao grupo -SO2.

[0034] O termo “porção de aminoácido” se refere a entre 1 a 3 aminoácidos.

[0035] O termo “porção de quelante” se refere a um substituinte que é um quelato de metal em que o termo “quelato de metal” se refere a um complexo de coordenação em que um íon metálico está ligado a um conjunto circundante de moléculas ou ânions compreendidos em um quelante. Uma “quelante” é aqui definido como um composto orgânico capaz de formar ligações coordenadas com um íon metálico paramagnético através de dois ou mais átomos doadores. Em uma quelante típico adequado para a presente invenção 2 a 6, e de um modo preferido 2 a 4, os átomos doadores de metal estão dispostos de tal modo que resultam anéis com 5 ou 6 membros (possuindo uma estrutura não coordenadora de átomos de carbono ou heteroátomos não coordenadores ligando os átomos doadores de metal). Exemplos de tipos de átomos doadores adequados em que o íon metálico é um íon metálico paramagnético incluem aminas, tióis, amidas, oximas e fosfinas. Em uma modalidade, o íon metálico é manganês.

[0036] O termo “amino” se refere ao grupo -NR'R em que R' e R são independentemente hidrogênio ou um alquila.

[0037] O termo “amido” se refere ao grupo -C(=O)NR'R, em que R' e R são como definidos para o termo amino.

[0038] O termo “oxo” se refere ao grupo =0.

[0039] O termo “sulfonamida” se refere ao grupo -SO2-NH2.

[0040] Em uma modalidade do composto da presente invenção, X é

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O, Y é Q-R³, em que Q é N e Z é Q-R³-(L-R⁴), em que Q é N.

[0041] Em uma modalidade do composto da presente invenção, X é S, Y é Q-R³, em que Q é N e Z é Q-R³-(L-R⁴), em que Q é N.

[0042] Em uma modalidade do composto da presente invenção X é O, ou Y é O ou Z é O-L-R⁴ e quando Y não é O é Q-R³ em que Q é N e quando Z não é O-L-R⁴ é Q-R³-(L-R⁴) em que Q é N.

[0043] Em uma modalidade do composto da presente invenção X é S, ou Y é O ou Z é O-L-R⁴ e quando Y não é O é Q-R³ em que Q é N e quando Z não é O é Q-R³-(L-R⁴) em que Q é N.

[0044] Em uma modalidade do composto da presente invenção, X é O, Y é Q-R³, em que Q é N e Z é Q-R³-(L-R⁴), em que Q é CH.

[0045] Em uma modalidade do composto da presente invenção X é O, ou Y é O ou Z é O-L-R⁴ e quando Y não é O é Q-R³ em que Q é CH e quando Z não é O é Q-R³-(L-R⁴) em que Q é CH.

[0046] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada L-R⁴ é hidroxialquila C1-12· [0047] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada L-R⁴ é hidroxialquila C3-6· [0048] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada L-R⁴ é hidroxialquila Cô.

[0049] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada L-R⁴ é independentemente selecionado a partir do grupo compreendendo:

*

OH OH

OH

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em que em cada caso o asterisco indica o ponto de ligação ao restante do composto de Fórmula I.

[0050] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada R⁴ é independentemente selecionado a partir do grupo compreendendo:

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[0051] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada R⁴ é um arila C3.6-R⁵ em que R⁵ é selecionado dentre halo e -C(=O)-NHhidroxialquila C1-6.

[0052] Em uma modalidade do composto da presente invenção, o halo é iodo.

[0053] Em uma modalidade do composto da presente invenção, o dito arila C3.6 é fenila.

[0054] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada R⁴ é um fenila tri-iodado.

[0055] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada R⁴é:

OH

I O OH em que o asterisco indica o ponto de ligação ao restante do composto de Fórmula I.

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13/62 [0056] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada R⁴ é o mesmo.

[0057] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada R³ é independentemente selecionado a partir do grupo compreendendo alquila Ci-3 ou hidrogênio.

[0058] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada R³ é alquila C1-3.

[0059] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada R³ é metila.

[0060] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada R³ é hidrogênio.

[0061] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada R³ é o mesmo.

[0062] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada n é um número inteiro de 1 a 6.

[0063] Em uma modalidade do composto da presente invenção, cada n é 2.

[0064] Em uma modalidade do composto da presente invenção, em que m é 3.

[0065] Em uma modalidade do composto da presente invenção, R¹ é alquila C1-3.

[0066] Em uma modalidade do composto da presente invenção, R¹ é um grupo metila.

[0067] Em uma modalidade do composto da presente invenção, R¹ é (CH₂)_m-Y-C(=X)-Z, em que X, Y, Z e m são como aqui definidos.

[0068] Em uma modalidade do composto da presente invenção, R²representa 0 substituintes.

[0069] Em uma modalidade do composto da presente invenção, R²representa 2 grupos hidroxi. Em uma modalidade do composto da presente

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14/62 invenção, os ditos grupos hidroxila estão nas posições meta do anel piridila. [0070] Em uma modalidade, o composto da presente invenção compreende pelo menos 4 grupos hidroxi.

[0071] Em uma modalidade, o composto da presente invenção compreende 4 a 15 grupos hidroxi.

[0072] Em uma modalidade, o composto da presente invenção compreende 5 a 10 grupos hidroxi.

[0073] Em uma modalidade do composto da presente invenção, o dito Mn é um isótopo enriquecido de Mn selecionado a partir do grupo compreendendo ⁵²Mn e ⁵⁴Mn.

[0074] Exemplos não limitativos de compostos particulares de

Fórmula I da invenção incluem os seguintes compostos:

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[0075] Nos compostos de Fórmula I, os carbonos ligados aos braços carboxilato são estereocentros. Os compostos de Fórmula I da invenção podem ser fornecidos como mistura racêmica ou como uma mistura enantiomericamente enriquecida, ou a mistura racêmica pode ser separada utilizando técnicas bem conhecidas e um enantiômero individual pode ser usado sozinho. Em uma modalidade, o composto de Fórmula I é uma mistura racêmica ou diastereomericamente pura.

[0076] A derivação hidrofílica dos compostos da invenção é conseguida através de um grupo de ligação não coordenador selecionado a partir de uma amida, uma ureia, uma tioureia, um carbamato, um tiocarbamato ou um ditiocarbamato. O grupo de fixação não coordenador está muito distante do íon manganês para estar significativamente envolvido na coordenação do manganês, permitindo assim a coordenação direta do manganês com a água e o subsequente contraste observado. O comprimento do ligante não coordenador da Fórmula I é muito importante, se for muito curto (por exemplo, se m = 1 na Fórmula I) há risco de coordenar o íon manganês, bloqueando o acesso da molécula de água, reduzindo drasticamente a relaxividade geral do complexo. O comprimento do ligante não coordenador ligado a um braço carboximetila (grupo de coordenação) pode ser curto (isto é, em que n = 0 na Fórmula I), pois o mesmo “braço” é incapaz de facilitar dois grupos de coordenação (o ângulo de coordenação será muito tenso).

[0077] Os compostos de Fórmula I podem ser sintetizados por várias vias sintéticas conhecidas da pessoa versada na técnica a partir de materiais de partida comercialmente disponíveis. Fontes adequadas de manganês para

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21/62 incorporação em um quelato quando da preparação de compostos da presente invenção incluem sais de carbonato (MnCCb), óxido (MnO), acetato (Mn(0Ac)2), cloreto (MnCF), hidróxido (Mn(0H)2), oxalato (MnC2O4), formiato (MnCHCChh) e nitrato (Mn(NO3)2· [0078] O seguinte procedimento generalizado pode ser utilizado e/ou facilmente adaptado para obter compostos de Fórmula I:

1. ) NaNO₂, NaBr, HBr

2. ) H₂SO₄

3. ) MeOH, H⁺

E o

nh₂ o

R¹

R², X, Y e Z são como aqui definidos em outro local. X¹ representa CH₃ ou CH2CH2CH2COOH. Y_n é definido de forma variada na

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22/62 etapa H abaixo.

[0079] Em resumo:

A: A tosilação do aminoetanol produz aziridina (Carrillo, Arkivoc, 2007).

[0080] B: Aziridação de ácido aminobutanoico (catálogo Sigma Aldrich 56-12-2). Em uma modalidade, a aziridinação de metilamina prossegue em acetonitrila pura. Em uma modalidade para este aminoácido, alguma base é utilizada para ativar a amina. Opcionalmente, a funcionalidade ácida pode ser protegida como um éster.

[0081] C: Ciclização com 2,6-bis(clorometil)-piridina (Sigma Aldrich catalog 3099-28-3). Em uma modalidade, esta etapa é realizada em acetonitrila com carbonato de potássio como base.

[0082] D: Detosilação usando, em uma modalidade, ácido sulfúrico concentrado. Em uma modalidade, esta etapa prossegue quantitativamente.

[0083] E: Brominação com base no método descrito na literatura (Henig, J., Tóth, É., Engelmann, J., Gottschalk, S., & Mayer, H. a. (2010). Inorganic Chemistry, 49 (13), 6124 a 6138).

[0084] F: Alquilação da poliamina/incorporação de metal, hidrólise do éster - Em uma modalidade, esta etapa é realizada em solução aquosa. Em modalidades em que os haletos secundários reagem lentamente, é possível sintetizar o bis-éster (E) e mudar para um solvente orgânico para melhorar a velocidade de alquilação. Após a alquilação, os ésteres podem ser hidrolisados com base e depois da neutralização do pH, ο íon Μη (II) pode ser carregado com MnCE e o excesso de Mn pode ser precipitado utilizando a base.

[0085] G: Ativação de carboxilato para Y_n (em que n representa vários grupos Y Y¹'⁵ como definidos para a Fórmula I da presente invenção).

[0086] H: Acoplamento de várias espécies ativadas com nucleófilos e eletrófilos:

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23/62 • Os carboxilatos podem ser ativados no isocianato usando difenilfosforilazida (Gilman, JW e Otonari, Y. A (1993) Synthetic Communications 23 (3) 335 a 341) para fornecer o intermediário ativado Y¹que pode ser posteriormente reagido em H com aminas ([a] Ranjan, A et al. (2014) Organic Letters, 16 (21), 5788 a 5791. [b] Petersen, TP et al. (2013) 19 (28), 9343 a 9350), álcoois ([a] Amamoto, Y. et al., (2007) Journal of American Chemical Society, 129 (43), 13298, [b] Kim I. et al., (2004) Journal of Medicinal Chemistry 47 (8), 2110 a 2122) ou tióis ([a] Peters, K. (2001) Journal of Enzyme Inhibition, 16 (4), 339 a 350 [b] Safavi-Sohi, R. (2016) ACS applied materials & interfaces 8 (35) 22808 a 22818) para produzir ureias, carbamatos e S-tiocarbamatos, respectivamente.

[0087] · Além disso, o isocianato Υ¹ pode ser decomposto para produzir a amina Y² por tratamento com base (Chavboun, I. et al. (2015) Journal of Natural Products, 78 (5), 1026 a 1036).

[0088] · Os derivados de amina Y² podem reagir com vários ácidos carboxílicos, isocianatos, isotiocianatos e cloroformatos para produzir amidas, ureias, tioureias e carbamatos, respectivamente.

[0089] · Altemativamente, a amina Y² pode ser convertida em um tioisocianato Y³ ativado por tratamento sob várias condições, incluindo, mas não limitado a, tratamento com tionildi-imidazol em DMF. Os eletrófilos de tioisocianatos ativados podem subsequentemente ser acoplados a aminas, álcoois ou tióis para produzir tioureias, O-tiocarbamatos e ditiocarbamatos, respectivamente.

[0090] · Além disso, há alguns casos em que Y_n pode ser ativado como um álcool (ver síntese do diol 36) para fornecer álcoois (Y⁴) que podem reagir com isocianatos, isotiocianatos para produzir carbamatos e Otiocarbamatos, respectivamente.

[0091] Além disso, existem casos em que Y_n pode ser ativado como um tiol nucleofílico (Y⁵), como representado na síntese do ditiol 40. A reação

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24/62 subsequente de tióis com isocianatos ou isotiocianatos levaria à formação de S-tiocarbamatos e ditiocarbamatos, respectivamente.

[0092] Na etapa Η, o composto da fórmula seguinte pode ser utilizado para a adição de um heterociclo:

Zn	Nome	Estrutura exemplar
Zi	amino	HN^
z₂	Aminoalquileno	H₂N^^
z₃	Hidroxialquileno
z₄	Tioalquileno
z₅	Isocianatoalquileno
z₆	Isotiocianatoalquileno	^s ^c ^NOo

[0093] Os compostos resultantes de Fórmula I têm uma estrutura de

Fórmula Ia:

[0094]

Quando o composto de Fórmula I compreende em R⁴ um arila substituído, tal como um fenila tri-iodiado, os compostos podem ser obtidos utilizando ou adaptando o seguinte esquema reacional (em que X, Y, Z, R² e n são como aqui definidos, e Y² e Z² representam grupos funcionais adequados para permitir que ocorra a reação de conjugação):

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[0095] Nos exemplos experimentais abaixo, a síntese de compostos particulares é proporcionada quer através de esquemas reacionais, tais como os descritos acima, quer por esquemas alternativos de reação. Estes esquemas de reação alternativos podem também ser facilmente adaptados por uma

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26/62 pessoa versada na técnica para obter outros compostos de Fórmula I.

[0096] A estrutura química de amida inversa dos compostos de quelato de Mn da presente invenção se distingue de compostos de quelato de Mn anteriores semelhantes. Acredita-se que os compostos da presente invenção têm uma estabilidade aumentada para a retenção de Mn, bem como contra o metabolismo in vivo.

[0097] Métodos adequados para a caracterização in vitro da estabilidade do quelato podem ser encontrados na literatura (Idée, J.-M. Journal of Magnetic Resonance Imaging: JMRI, 2009, 30 (6), 1249 a 1258 e Baranyai, Z. Chemistry - A European Journal, 2015, 21 (12), 4789 a 4799). Outros métodos adequados incluem estudos in vitro de meios fisiológicos (isto é, soro ou plasma humano) para monitorar a inércia de transmetalação. Outro método adequado para avaliar a inércia de transmetalação seria medir a retenção de íons metálicos in vivo, após a injeção do metal quelado. Sabe-se que os quelatos intactos normalmente seguem uma cinética de depuração muito rápida.

[0098] Em um aspecto da invenção, o composto de Fórmula I é fornecido como uma composição farmacêutica. Uma “composição farmacêutica” é uma composição compreendendo o composto da invenção, juntamente com um veículo biocompatível em uma forma adequada para administração em mamíferos. O “veículo biocompatível” é um fluido, especialmente um líquido, no qual o composto de Fórmula I é suspenso ou dissolvido, de tal modo que a composição resultante é fisiologicamente tolerável, isto é, pode ser administrada ao corpo de mamífero sem toxicidade ou desconforto indevido (que pode deve ser entendida como uma definição do termo “adequado para administração em mamíferos”).

[0099] A composição farmacêutica da invenção é adequada para uso como um meio de contraste de ressonância magnética (RM) em imagem de ressonância magnética (IRM) do corpo animal humano e não humano.

Petição 870190069290, de 22/07/2019, pág. 30/78 /62 [00100] Em uma modalidade, a composição farmacêutica da invenção pode compreender um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Estes adequadamente não interferem na fabricação, armazenamento ou uso da composição final.

[00101] Exemplos não limitativos de excipientes farmaceuticamente aceiteis adequados incluem agentes tamponantes, estabilizadores, antioxidantes, agentes de ajuste de osmolalidade, agentes de ajuste de pH, excesso de quelantes e complexos fracos de íons fisiologicamente toleráveis. Estes e outros excipientes adequados serão bem conhecidos das pessoas versadas na técnica e são ainda descritos em, por exemplo, WO 1990003804, EP 0463644-A, EP 0258616-A e US 5876695 cujo conteúdo é aqui incorporado por referência. A composição farmacêutica da invenção em uma modalidade está na forma adequada para administração parentérica, por exemplo, injeção. A composição farmacêutica de acordo com a invenção pode, por conseguinte, ser formulada para administração utilizando excipientes fisiologicamente aceitáveis de um modo totalmente dentro da especialidade da técnica. Por exemplo, o composto de Fórmula I, opcionalmente com a adição de excipientes farmaceuticamente aceitáveis, pode ser suspenso ou dissolvido em um meio aquoso, com a solução ou suspensão resultante sendo então esterilizada.

[00102] Um exemplo não limitativo de um agente tamponante adequado é o cloridrato de trometamina.

[00103] O termo “excesso de quelantes” é definido como qualquer composto capaz de eliminar o íon paramagnético livre (manganês), mas não o íon paramagnético (manganês) retido dentro dos complexos desta invenção, conforme descrito no documento EP 2988756A1. Embora pequenas quantidades sejam essenciais para a saúde humana, a superexposição a íons livres de manganês pode resultar em um distúrbio neurodegenerativo conhecido como manganismo, com sintomas semelhantes à doença de

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Parkinson. No entanto, a questão fundamental para o Mn, assim como para outros metais, como agentes de contraste, está na estabilidade da quelação. A estabilidade da quelação é uma propriedade importante que reflete a potencial liberação de íons metálicos livres in vivo. Sabe-se que existe uma correlação entre a quantidade de excesso de quelante em uma formulação de quelato paramagnético e a quantidade de metal paramagnético depositado em modelos animais (Sieber 2008 J Mag Res Imaging; 27 (5): 955 a 962). Por conseguinte, em outra modalidade, é selecionada uma quantidade de excesso de quelante que pode atuar como um sequestrador de Mn de modo a reduzir ou impedir a liberação de Mn da formulação após a injeção. A quantidade ótima de quelante livre resultará em uma composição farmacêutica com propriedades físico-químicas adequadas (isto é, viscosidade, solubilidade e osmolalidade) e evitando efeitos toxicológicos como a depleção de zinco no caso de demasiado quelante livre. US 5876695 descreve em particular um excesso de quelato linear, em particular de DTPA livre, e este é um exemplo não limitativo de um excesso de quelante adequado para uso na composição farmacêutica da presente invenção. Esta estratégia de formulação é usada para produtos como Magnevist™, Vasovist™ ou Primovist™. O documento WO 2009103744 descreve uma estratégia de formulação semelhante, baseada na adição de uma quantidade precisa de quelato livre, de modo a ter um excesso muito pequeno do dito quelato e uma concentração zero de lantanídeo livre. [00104] O íon fisiologicamente tolerável pode, em uma modalidade, ser selecionado entre íons fisiologicamente toleráveis, incluindo sais de cálcio ou sódio, tais como cloreto de cálcio, ascorbato de cálcio, gluconato de cálcio ou lactato de cálcio.

[00105] As formas administráveis parentericamente devem ser estéreis e isentas de agentes fisiologicamente inaceitáveis e devem ter baixa osmolalidade para minimizar a irritação ou outros efeitos adversos na administração e assim a composição farmacêutica deve ser isotônica ou

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29/62 ligeiramente hipertônica. Exemplos não limitativos de veículos adequados incluem veículos aquosos habitualmente utilizados para administração de soluções parentéricas, tais como injeção de cloreto de sódio, injeção de Ringer, injeção de dextrose, injeção de dextrose e cloreto de sódio, injeção de Ringer lactada e outras soluções como as descritas em Remington's Pharmaceutical Sciences, 22 Edição (2006 Lippincott Williams & Wilkins) e The National Formulary (https ://books. google. com/books?id=

O3qixPEMwssC&q=THE+NATIONAL+FORMULARY&dq=THE+NATIO NAL+FORMULARY&hl=pt_PT&sa=X&ved=()CC8Q6AEwAGoVChMImf PHrdTqyAIVJfNyChlRJw_E).

[00106] Para a composição farmacêutica da invenção ser administrada parentericamente, isto é, por injeção, a sua preparação compreende ainda etapas incluindo a remoção do solvente orgânico, adição de um tampão biocompatível e quaisquer ingredientes adicionais opcionais, tais como excipientes ou tampões. Para administração parentérica, também é necessário tomar medidas para assegurar que a composição farmacêutica seja estável e apirogênica.

[00107] Em outra modalidade, a presente invenção fornece um método compreendendo administrar o composto de Fórmula I, como aqui definido, na geração de imagens de RM e/ou espectros de RM.

[00108] Métodos de administração e indivíduos considerados adequados no contexto da presente invenção foram descritos acima em relação à composição farmacêutica. A administração do composto de Fórmula I, de um modo preferido, é realizada parentericamente e, de um modo muito preferido, intravenosamente. A via intravenosa representa a maneira mais eficiente de entregar o composto em todo o corpo do indivíduo. Além disso, a administração intravenosa não representa uma intervenção física substancial ou um risco substancial para a saúde. O composto de Fórmula I da invenção é preferencialmente administrado como a composição farmacêutica da

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30/62 invenção, como definido acima. O método da invenção também pode ser entendido como compreendendo as etapas (ii) a (iii) realizadas em um indivíduo a quem o composto da invenção foi pré-administrado. Em uma modalidade, a composição farmacêutica é administrada em uma quantidade adequada para melhorar o contraste em um método de formação de imagem por RM (IRM). Para mais detalhes sobre os métodos de IRM, o leitor é dito ao conhecimento geral comum na técnica, por exemplo, como ensinado no Capítulo 27 “Contrast agentes and magnetic resonance imaging” em “Magnetic resonance imaging: physical and biological principles” (4^a Edição 2015 Elsevier, Stewart Carlyle Bushong e Geoffrey Clarke, Eds.) ou em “Contrast agentes I: magnetic resonance imaging” (2002 Springer-Verlang, Werner Krause, Ed.).

[00109] O método da invenção pode ser utilizado para estudar um marcador ou processo biológico em indivíduos saudáveis ou, altemativamente, em indivíduos conhecidos ou suspeitos de terem um estado patológico associado à expressão anormal de um marcador biológico. Quando o método é utilizado para a imagem de um sujeito conhecido ou suspeito de ter uma condição patológica, tem utilidade em um método para o diagnóstico da dita condição.

[00110] A etapa de “detecção” do método da invenção envolve a detecção de sinais emitidos pelo composto de Fórmula I por meio de um detector sensível aos ditos sinais. Esta etapa de detecção também pode ser entendida como a aquisição de dados de sinal.

[00111] A etapa de “geração” do método da invenção é realizada por um computador que aplica um algoritmo de reconstrução aos dados de sinal adquiridos para produzir um conjunto de dados. Este conjunto de dados é então manipulado para gerar uma ou mais imagens e/ou um ou mais espectros mostrando a localização e/ou a quantidade de sinais.

[00112] O “indivíduo” da invenção pode ser qualquer indivíduo

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31/62 humano ou animal. Em uma modalidade, o indivíduo da invenção é um mamífero. Em uma modalidade, o dito indivíduo é um corpo de mamífero intacto in vivo. Em outra modalidade, o indivíduo da invenção é um humano. [00113] Esta descrição escrita utiliza exemplos para divulgar a invenção, incluindo o melhor modo, e também para permitir a qualquer pessoa versada na técnica praticar a invenção, incluindo fabricar e utilizar quaisquer dispositivos ou sistemas e realizar quaisquer métodos incorporados. O escopo patenteável da invenção é definido pelas reivindicações, e pode incluir outros exemplos que ocorrem para as pessoas versadas na técnica. Pretende-se que estes outros exemplos estejam dentro do escopo das reivindicações, se tiverem elementos estruturais que não diferem da linguagem literal das reivindicações, ou se incluírem elementos estruturais equivalentes com diferenças insubstanciais das linguagens literais das reivindicações. Todas as patentes e pedidos de patente mencionados no texto são aqui incorporados por referência na íntegra, como se fossem incorporados individualmente.

Breve Descrição dos Exemplos [00114] Os exemplos a seguir descrevem métodos pelos quais uma seleção não limitativa de compostos da presente invenção pode ser obtida. Os compostos 3 a 5, 8 a 10, 14 a 17, 19 a 22, 24 a 26, 28, 30, 32, 34, 37, 38, 41, 42 e 51 representam exemplos de compostos da presente invenção. Para quaisquer exemplos que sejam proféticos, ajustes podem ser necessários para considerar as variações na solubilidade e reatividade do reagente, incluindo o uso de solventes alternativos, diferentes tempos de reação, temperaturas ou concentrações ou sistemas reagentes alternativos, mas equivalentes. Quaisquer tais ajustes são considerados como rotina para uma pessoa versada na técnica.

Síntese do bisisocianato 2

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[00115] O material de partida 1 é suspenso em dimetilformamida desgaseificada. E adicionada trietilamina (2 equivalentes), seguida de difenilfosforilazida (2 equivalentes). A mistura reacional é agitada com aquecimento a 50 °C até a cromatografia analítica indicar o consumo do material de partida. A utilização de equivalentes adicionais de trietilamina e difenilfosforilazida pode ser necessária para conduzir a reação até à conclusão. Uma vez completa, o isocianato 2 é usado diretamente nas reações subsequentes como uma solução em DMF.

[00116] Uma solução de N-metil-D-glucamina em água (2 equivalentes) é adicionada ao isocianato 2 em DMF. A mistura reacional é agitada durante várias horas à temperatura ambiente e o seu progresso é monitorado utilizando técnicas cromatográficas analíticas. A adição de excesso de N-metil-D-glucamina pode ser necessária para levar a reação à conclusão. O produto 3 é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol.

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Síntese de conjugado 4

[00117] Uma solução de 2-(2-hidroxietoxi)acetato de etila em DMF (2 equivalentes) é adicionada a uma solução do isocianato 2 em DMF. Adicionase uma quantidade catalítica de dilaurato de dibutil-estanho à mistura reacional e aquece-se a mistura a 70 °C para conduzir a reação até o fim, utilizam-se procedimentos cromatográficos analíticos para determinar o progresso da reação. Após a conclusão, o solvente é removido sob pressão reduzida, o resíduo é suspenso em uma solução de metanol contendo uma quantidade catalítica de metóxido de sódio. A reação é deixada prosseguir até que seja observada a hidrólise completa dos grupos protetores de acetato. Uma vez completa, a mistura reacional é concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou águametanol.

Síntese de Conjugado 5

[00118] Uma solução de cloridrato de 2-(dietilamino)etanotiol (2

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34! 62 equivalentes) e trietilamina (2 equivalentes) em DMF desgaseificado é adicionada a uma solução do isocianato 2 em DMF. A mistura reacional é deixada a agitar à temperatura ambiente e o progresso da reação é monitorado utilizando cromatografia analítica. Após a conclusão, o solvente é removido sob pressão reduzida, e o resíduo é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol.

Síntese do trisisocianato 7

Fórmula Química:

Peso Molecular: 605,50

DMF ^SC r>í r>A h t.

Fórmula Química: I, M

Peso Molecular: 596,49 [00119] O material de partida 6 é suspenso em dimetilformamida desgaseificada. Adiciona-se trietilamina (3 equivalentes), seguida de difenilfosforilazida (3 equivalentes). A mistura reacional é agitada com aquecimento a 50 °C até a cromatografia analítica indicar o consumo do material de partida. A utilização de equivalentes adicionais de trietilamina e difenilfosforilazida pode ser necessária para conduzir a reação até à conclusão. Uma vez completa, o isocianato 7 é usado diretamente nas reações subsequentes como uma solução em DMF.

Síntese de conjugado 8

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[00120] Adiciona-se uma solução de 5-amino-N,N'-bis(2,3-dihidroxipropil)isoftalamida em DMF (2 equivalentes) ao isocianato 7 em DMF. A mistura reacional é agitada durante várias horas à temperatura ambiente e o seu progresso é monitorado utilizando técnicas cromatográficas analíticas. A adição de 5-amino-N,N'-bis(2,3-di-hidroxipropil)isoftalamida em excesso pode ser necessária para levar a reação até o fim. O produto 8 é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou águametanol.

Síntese de conjugado 9

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Fórmula Química:

Peso Molecular: 1157,97 [00121] Síntese de conjugado 9 - Uma solução de β-D-glucopiranose, 1,2,3,4-tetraacetato em DMF (3 equivalentes) é adicionada a uma solução de isocianato 7 em DMF. Adiciona-se uma quantidade catalítica de dilaurato de dibutil-estanho à mistura reacional e aquece-se a mistura a 70 °C para conduzir a reação até o fim, utilizam-se procedimentos cromatográficos analíticos para determinar o progresso da reação. Porções adicionais de β-Dglucopiranose, 1,2,3,4-tetraacetato podem ser necessárias para conduzir a reação até à conclusão. Após a conclusão, o solvente é removido sob pressão reduzida, o resíduo é suspenso em uma solução de metanol contendo uma quantidade catalítica de metóxido de sódio. A reação é deixada prosseguir até que seja observada a hidrólise completa dos grupos protetores de acetato. Uma vez completa, a mistura reacional é concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou águametanol.

Síntese de Conjugado 10

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[00122] Uma solução de éster metílico de N-trifluoroacetil-L-cisteína (3 equivalentes) em DMF desgaseificado é adicionada a uma solução de isocianato 7 em DMF. A mistura reacional é deixada a agitar à temperatura ambiente e o progresso da reação é monitorado utilizando cromatografia analítica. Após a conclusão, o solvente é removido sob pressão reduzida e o resíduo é tratado com hidróxido de sódio em água para remover os grupos protetores metiléster e trifluoroacetamida. O pH da mistura reacional é ajustado para 7 através da adição de HC1 aquoso e a reação é purificada diretamente utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou águametanol.

[00123] O bisisocianato 2 é dissolvido em metanol anidro à temperatura ambiente. Subsequentemente, é adicionada uma solução de NaOH em metanol para hidrolisar o carbamato de bismetila resultante na

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38/62 amina desejada 11. O progresso da reação é monitorado por cromatografia analítica. Após a conclusão, o pH da reação é ajustado para 7 e o solvente é removido sob pressão reduzida. Se necessário, o resíduo isolado pode ser purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou águametanol para produzir 11 puro.

Síntese alternativa do quelato funcionalizado por amina 11

butanoato de metila (2 equivalentes) são dissolvidos em acetonitrila e trietilamina (2,2 equivalentes) é adicionada. A reação é deixada continuar a agitação à temperatura ambiente e o progresso da reação a 13 monitorado utilizando cromatografia analítica. Após a conclusão, a reação é concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol para producir 13. O composto 13 é suspenso em HC1 aquoso a 6 M e aquecido com agitação a 100 °C durante 24 h. Após este tempo a mistura reacional é filtrada para remover os sólidos insolúveis e o filtrado é coletado e o seu pH ajustado para 7,4 utilizando uma solução de hidróxido de sódio a 50% p/p. Quando o pH da mistura reacional é estável a 7,4, adiciona-se MnCU x H₂O (-2,4 equivalentes) à mistura reacional e agita-se a mistura à temperatura ambiente. Solução de NaOH adicional é adicionada à mistura reacional para manter o pH da mistura reacional entre 7,0 e 7,4. O progresso da incorporação de

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39/62 manganês é monitorado por cromatografia analítica, e após a conclusão, o pH da reação é ajustado para 12 pela adição de NaOH aquoso. A mistura reacional é deixada continuar a agitar durante 1 h à temperatura ambiente, e depois a mistura reacional é filtrada para remover sólidos e o filtrado é coletado e o seu pH ajustado para 7,4 através da adição de uma solução aquosa de HC1. O composto desejado 11 é ainda purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol.

Síntese do conjugado 14

Fórmula Química:

Peso Molecular: 1057,95 [00125] A aminopiramina 13 é dissolvida em água e ácido Nacetilneuramínico (2,1 equivalentes) e adiciona-se EDC1-HC1 (2,1 equivalentes). O pH é ajustado para 6,5 com HC1 e HOBt (0,4 equivalentes) é então adicionado. O pH da solução resultante é mantido em aproximadamente 6 com agitação durante 16 h. Adiciona-se então EDCI-HC1 adicional (1,1 equivalentes), e o pH da reação é mantido a pH de aproximadamente 6 e é agitado durante mais 16 h. O solvente é removido sob vácuo e o composto 14 desejado é ainda purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou águametanol.

Síntese do conjugado 15

Fórmula Química: ,

Peso M-cfl-ecuían 741,75 [00126] Uma solução de (S)-4-(isotiocianatometil)-2,2-dimetil-l,3

Petição 870190069290, de 22/07/2019, pág. 43/78 / 62 dioxolano em DMF (2 equivalentes) é adicionada à diamina 11 em DMF. A mistura reacional é agitada durante várias horas à temperatura ambiente e o seu progresso é monitorado utilizando técnicas cromatográficas analíticas. A adição de excesso de (S)-4-(isotiocianatometil)-2,2-dimetil-l,3-dioxolano pode ser necessária para levar a reação até ao fim. Depois de completada, a mistura reacional é concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo é retomado em 9:1 MeOH-HiO e é adicionada resina Dowex 50W-8X. A mistura heterogênea é agitada à temperatura ambiente e o progresso da reação é avaliado por cromatografia analítica. Após a conclusão, a resina é removida por filtração e o filtrado é concentrado sob pressão reduzida. O resíduo é retomado em água e o pH da mistura é ajustado para 7,4. MnCh x H2O adicional (1 equivalente) é adicionado e a mistura é agitada à temperatura ambiente. Solução de NaOH adicional é adicionada à mistura reacional para manter o pH da mistura reacional entre 7,0 e 7,4. O progresso da incorporação de manganês é monitorado por cromatografia analítica, e após a conclusão, o pH da reação é ajustado para 12 pela adição de NaOH aquoso. A mistura reacional é deixada continuar a agitar durante 1 h à temperatura ambiente, e depois a mistura reacional é filtrada para remover sólidos e o filtrado é coletado e o seu pH ajustado para 7,4 através da adição de uma solução aquosa de HC1. O composto desejado 15 é ainda purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol.

[00127] Uma solução de 11 em DMF desgaseificado é adicionada a 3Petição 870190069290, de 22/07/2019, pág. 44/78

41/62 (isocianatometil)di-hidropirimidina-2,4(lH,3H)-diona (2 equivalentes) em DMF. A mistura reacional é agitada durante várias horas à temperatura ambiente e o seu progresso é monitorado utilizando técnicas cromatográficas analíticas. A adição de 3-(isocianatometil)di-hidropirimidina-2,4(lH,3H)diona em excesso pode ser necessária para levar a reação até o fim. O produto 16 é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou águametanol.

[00128] Adiciona-se uma solução de cloridrato de 2-(metilsulfonil) etila em DMF (2 equivalentes) a uma solução de 11 e trietilamina (2,5 equivalentes) em DMF a 0 °C. A solução é deixada aquecer até à temperatura ambiente durante a noite. Os procedimentos cromatográficos analíticos são usados para determinar o progresso da reação. Porções adicionais de carbonocloridato de 2-(metilsulfonil)etila podem ser necessárias para conduzir a reação até à conclusão. Após a conclusão, o solvente é removido sob pressão reduzida, o resíduo é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de águaacetonitrila ou água-metanol para produzir o composto do título 17.

Síntese do quelato funcionalizado por amina 18

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[00129] O trisisocianato 7 é dissolvido em metanol anidro à temperatura ambiente. Subsequentemente, é adicionada uma solução de NaOH em metanol para hidrolisar o carbamato de trismetila resultante. O progresso da reação é monitorado por cromatografia analítica. Após a conclusão, o pH da reação é ajustado para 7 e o solvente é removido sob pressão reduzida. Se necessário, o resíduo isolado pode ser purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol para produzir 18 puro.

[00130] A aminopiramina 18 é dissolvida em água e são adicionados sal de sódio do ácido D-galacturônico (3,1 equivalentes) e EDCI-HC1 (3,1 equivalentes). O pH é ajustado para 6,5 com HC1 e HOBt (0,6 equivalentes) é então adicionado. O pH da solução resultante é mantido em aproximadamente

Petição 870190069290, de 22/07/2019, pág. 46/78 /62 com agitação durante 16 h. É então adicionado EDCI-HC1 adicional (1,6 equivalentes), e o pH da reação é mantido a pH aproximadamente 6 e é agitado durante mais 16 h. O solvente é removido sob vácuo e o composto 19 desejado é ainda purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou águametanol.

[00131] Adiciona-se uma solução de 2,3,4-tri-O-acetil-oc-Darabinopiranosilisotiocianato em DMF desgaseificado (3,1 equivalentes) à triamina 18 em DMF. A mistura reacional é agitada durante várias horas à temperatura ambiente e o seu progresso é monitorado utilizando técnicas cromatográficas analíticas. A adição de excesso de isotiocianato pode ser necessária para levar a reação até a conclusão. Depois de completada, a mistura reacional é concentrada sob pressão reduzida e o resíduo é retomado em uma solução de metanol contendo uma quantidade catalítica de metóxido de sódio. A reação é deixada prosseguir até que seja observada a hidrólise completa dos grupos protetores de acetato. Uma vez completa, a mistura reacional é concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol.

Síntese do conjugado 21

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[00132] Uma solução de 18 em DMF desgaseificado adicionada a 1,1dióxido de 3-(isocianatometil)tetra-hidrotiofeno (3 equivalentes) em DMF. A mistura reacional é agitada durante várias horas à temperatura ambiente e o seu progresso é monitorado utilizando técnicas cromatográficas analíticas. A adição de excesso de 1,1-dióxido de 3-(isocianatometil)tetra-hidrotiofeno pode ser necessária para conduzir a reação até à conclusão. O produto 21 é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou águametanol.

[00133] Adiciona-se uma solução de carbonocloridato de (2,2-dimetill,3-dioxolan-4-il)metila em DMF (3 equivalentes) a uma solução de 18 e trietilamina (3,5 equivalentes) em DMF a 0 °C. A solução é deixada aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 16 h. Os procedimentos cromatográficos analíticos são usados para determinar o progresso da reação.

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Porções adicionais de carbonocloridato de (2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4-il) de metila podem ser necessárias para levar a reação até ao fim. Após a conclusão, o solvente é removido sob pressão reduzida, e o resíduo é retomado em 9:1 MeOH-HiO e resina Dowex 50W-8X é adicionada. A mistura heterogênea é agitada à temperatura ambiente e o progresso da reação é avaliado por cromatografia analítica. Após a conclusão, a resina é removida por filtração e o filtrado é concentrado sob pressão reduzida. O resíduo é retomado em água e o pH da mistura é ajustado para 7,4. MnCh x H2O adicional (1 equivalente) é adicionado e a mistura é agitada à temperatura ambiente. Solução de NaOH adicional é adicionada à mistura reacional para manter o pH da mistura reacional entre 7,0 e 7,4. O progresso da incorporação de manganês é monitorado por cromatografia analítica, e após a conclusão, o pH da reação é ajustado para 12 pela adição de NaOH aquoso. A mistura reacional é deixada continuar a agitar durante 1 h à temperatura ambiente, e depois a mistura reacional é filtrada para remover sólidos e o filtrado é coletado e o seu pH é ajustado para 7,4 através da adição de uma solução aquosa de HC1. O composto desejado 22 é ainda purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol.

Síntese de bisisotiocianato 23

[00134] O material de partida 11 é suspenso em dimetilformamida desgaseificada. Adiciona-se trietilamina (2 equivalentes), seguida de tionildi

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46/62 imidazol (2 equivalentes). A mistura reacional é agitada com aquecimento a 80 °C até a cromatografia analítica indicar o consumo do material de partida. A utilização de equivalentes adicionais de trietilamina e tionildi-imidazol pode ser necessária para conduzir a reação até à conclusão. Uma vez completo, o bistioisocianato 23 é usado diretamente nas reações subsequentes como uma solução no DMF.

Síntese de bistioureia 24

[00135] A uma solução de 23 em DMF à temperatura ambiente adiciona-se 2,2'-azanodi-ildietanol (2,1 equivalentes). A mistura reacional deixada continuar a agitar temperatura ambiente e o progresso da reação é monitorado por cromatografia analítica. A adição de excesso de 2,2'-azanodiildietanol pode ser necessária para levar a reação até a conclusão. Após a conclusão, o solvente é removido sob pressão reduzida, o resíduo é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol para produzir o composto do título 24.

Síntese de conjugado 25

[00136] Um éter monometílico de oligopolietilenoglicol (em que n está entre 0 e 150, e pode ser uma entidade química discreta, ou uma mistura de entidades químicas consistindo em valores “n” variáveis) é dissolvido em

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DMF a Ο °C e tratado com uma quantidade subestequiométrica de NaH. A mistura é agitada a 0 °C durante lhe depois é adicionada uma solução de 23 em DMF à mistura. Deixa-se a mistura continuar a agitar, aquecendo lentamente até à temperatura ambiente durante várias horas. O progresso da reação é seguido por cromatografia analítica. Depois de completo, o solvente é removido sob pressão reduzida, o resíduo é purificado usando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol para produzir o composto do título 25.

[00137] Uma solução de 23 em DMF é adicionada a uma solução de homocisteína HC1 em água. O pH da solução é ajustado para 6,5 e a mistura é deixada reagir e o seu progresso é monitorado por cromatografia analítica. Após conclusão, a mistura reacional é concentrada para proporcionar um resíduo bruto que é purificado adicionalmente utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol para produzir o composto do título 26. Síntese de trisisotiocianato 27

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[00138] O material de partida 18 é suspenso em dimetilformamida desgaseificada. Adiciona-se trietilamina (3 equivalentes), seguida de tionildiimidazol (3 equivalentes). A mistura reacional é agitada com aquecimento a 80 °C até a cromatografia analítica indicar o consumo do material de partida. A utilização de equivalentes adicionais de trietilamina e tionildi-imidazol pode ser necessária para conduzir a reação até à conclusão. Uma vez completo, o tristioisocianato 23 é usado diretamente nas reações subsequentes como uma solução em DMF.

[00139] A uma solução de 27 em DMF à temperatura ambiente adiciona-se l-aminoimidazolidina-2,4-diona (3,1 equivalentes). A mistura reacional é deixada continuar a agitar à temperatura ambiente e o progresso da

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49/62 reação é monitorado por cromatografia analítica. A adição de 1aminoimidazolidina-2,4-diona em excesso pode ser necessária para conduzir a reação até à conclusão. Após a conclusão, o solvente é removido sob pressão reduzida, o resíduo é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol para produzir o composto do título 28.

[00140] O material de partida 29 é dissolvido em DMF e é adicionada trietilamina (3 equivalentes) seguida de cloroacetato de terc-butila.

Síntese de Conjugado 30

[00141] A uma solução de 27 em DMF à temperatura ambiente adiciona-se 29 (3,1 equivalentes). A mistura reacional é deixada continuar a agitar à temperatura ambiente e o progresso da reação é monitorado por cromatografia analítica. A adição de excesso de 29 pode ser necessária para

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50/62 levar a reação até a conclusão. Após a conclusão, o solvente é removido sob pressão reduzida, o resíduo é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de águaacetonitrila ou água-metanol para produzir o composto do título 30.

Síntese de conjugado 32

[00142] Uma solução de 31 em DMF (3 equivalentes) é adicionada a uma solução do isotiocianato 27 em DMF contendo 4-dimetilaminopiridina (0,3 equivalentes) e dibutil-indilaurato (0,03 equivalentes). A mistura é aquecida a 70 °C para conduzir a reação até à conclusão, são utilizados procedimentos cromatográficos analíticos para determinar o progresso da reação. Porções adicionais de 31 podem ser necessárias para conduzir a reação até a conclusão. Após a conclusão, o solvente é removido sob pressão reduzida, o resíduo é suspenso em uma solução de metanol contendo uma quantidade catalítica de metóxido de sódio. A reação é deixada prosseguir até que seja observada a hidrólise completa dos grupos protetores de acetato. Uma vez completa, a mistura reacional é concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou águametanol.

Síntese de conjugado 34

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[00143] Uma solução de 27 em DMF é adicionada a uma solução de 33 em água. O pH da solução é ajustado para 6,5 e a mistura é deixada reagir e o seu progresso é monitorado por cromatografia analítica. Após conclusão, a mistura reacional é concentrada para produzir um resíduo bruto que é ainda purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou águametanol para produzir o composto do título 34.

Síntese do diol 36

Et₃N

MeCN

IMNaOH ho^A_nA_mA_n4^oh

[00144] A piramina 12 e o 2-bromo-3-hidroxipropanoato de metila (2 equivalentes) são dissolvidos em acetonitrila e adiciona-se trietilamina (2,2 equivalentes). A reação é deixada continuar a agitação à temperatura ambiente e o progresso da reação até 35 é monitorado utilizando cromatografia analítica. Após a conclusão, a reação é concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 eluindo com misturas de águaacetonitrila ou água-metanol para produzir 35. O composto 35 é dissolvido

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52/62 em água e o sólido NaOH é adicionado (4 equivalentes). A reação é agitada à temperatura ambiente e o seu progresso é monitorado por cromatografia analítica. Depois de completada, uma sonda de pH é adicionada à mistura reacional e o pH da reação é ajustado para 7,4 com uma solução aquosa de HC1. Ao atingir o pH desejado, é adicionado MnCF x H2O (—1,1 equivalentes) à mistura reacional e a mistura é agitada à temperatura ambiente. A solução de NaOH adicional é adicionada à mistura reacional para manter o pH da mistura reacional entre 7,0 e 7,4. O progresso da incorporação de manganês é monitorado por cromatografia analítica, e após a conclusão, o pH da reação é ajustado para 12 pela adição de NaOH aquoso. A mistura reacional é deixada continuar a agitar durante 1 h à temperatura ambiente, e depois a mistura reacional é filtrada para remover sólidos e o filtrado é coletado e o seu pH é ajustado para 7,4 através da adição de uma solução aquosa de HC1. O composto 36 desejado é ainda purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol.

Síntese de Conjugado 37

Fórmula Químca: CsoHLigMnNgOio

Peso Molecular: 733,67 [00145] Uma solução de 36 em DMF é adicionada a uma solução de 4(isocianatometil)morfolina (2,1 equivalentes) em DMF. Adiciona-se uma quantidade catalítica de dilaurato de dibutil-estanho à mistura reacional e aquece-se a mistura a 70 °C para conduzir a reação até o fim, utilizam-se procedimentos cromatográficos analíticos para determinar o progresso da reação. Se necessário, adiciona-se 4-(isocianatometil)morfolina adicional à mistura reacional. Uma vez completa, a mistura reacional é concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo é purificado utilizando cromatografia de fase

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53/62 reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de águaacetonitrila ou água-metanol para produzir 37.

Síntese de Conjugado 38 q_K h₂n--s o'

DBTDL, DMAP

DMF

Fórmula Química: C32H38MnN80ioS₄

Peso Molecular:877,89 [00146] Adiciona-se uma solução de 4-isotiocianatobenzeno sulfonamida em DMF (2,1 equivalentes) a uma solução de 36 em DMF contendo 4-dimetilaminopiridina (0,3 equivalentes) e dibutil-indilaurato (0,03 equivalentes). A mistura é aquecida a 70 °C para conduzir a reação até à conclusão, são utilizados procedimentos cromatográficos analíticos para determinar o progresso da reação. Porções adicionais de 4isotiocianatobenzenossulfonamida podem ser necessárias para conduzir a reação até à conclusão. Uma vez completa, a mistura reacional é concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol.

Síntese de ditiol 40

[00147] A piramina 12 e o 2-(tosiloxi)-4-(tritiltio)butanoato de metila (2 equivalentes) são dissolvidos em acetonitrila e adiciona-se trietilamina (2,2 equivalentes). A reação é deixada continuar a agitação à temperatura ambiente e o progresso da reação até 39 é monitorado utilizando cromatografia analítica. Após conclusão, a reação é concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante é purificado utilizando cromatografia de fase

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54/62 reversa em silica gel funcionalizada C-18 eluindo com misturas de águaacetonitrila ou água-metanol para produzir 39. O composto protegido 39 é dissolvido em HC1 aquoso 2M que é cuidadosamente desgaseificado sob nitrogênio antes do uso. A reação é aquecida sob atmosfera inerte para promover a hidrólise do éster metílico e clivagem do tioéter tritrlico. O progresso desta reação é monitorado por cromatografia analítica, após a conclusão, o pH da mistura reacional é ajustado para 7,4 através da adição de solução de NaOH 2M desgaseificada. Ao atingir o pH desejado, é adicionado MnCF x H2O (—1,0 equivalentes) à mistura reacional e a mistura é agitada à temperatura ambiente. Solução de NaOH adicional é adicionada à mistura reacional para manter o pH da mistura reacional entre 7,0 e 7,4. O progresso da incorporação de manganês é monitorado por cromatografia analítica, e após a conclusão, o pH da reação é ajustado para 12 pela adição de NaOH aquoso. A mistura reacional é deixada continuar a agitar durante 1 h à temperatura ambiente, e depois a mistura reacional é filtrada para remover sólidos e o filtrado é coletado e o seu pH ajustado para 7,4 através da adição de uma solução aquosa de HC1 desgaseificada. O composto desejado 40 é ainda purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou águametanol.

Síntese de Conjugado 41

Fórmula Química: C28^H4oMnN₆0₁₂S2

Peso Molecular: 771,72 [00148] Uma solução de ácido 2-(isocianatometoxi)acético (2 equivalentes) e trietilamina (2 equivalentes) em DMF desgaseificado é adicionada a uma solução de 40 em DMF desgaseificado. A mistura reacional é deixada a agitar à temperatura ambiente e o progresso da reação é

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55/62 monitorado utilizando cromatografia analítica. Após a conclusão, o solvente é removido sob pressão reduzida, e o resíduo é purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol.

Síntese de Conjugado 42

Fórmula Química: C₃4H54MnN₈O₆S₄

Peso Molecular: 854,04 [00149] 4-(2-isotiocianatoetil)morfolina (2,1 equivalentes) é adicionada a uma solução de 40 em água. O pH da solução é ajustado a 7,2 e a mistura é deixada reagir e o seu progresso é monitorado por cromatografia analítica. Após a conclusão, a mistura reacional é concentrada para produzir um resíduo bruto que é ainda purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de águaacetonitrila ou água-metanol para produzir o composto do título 42.

[00150] O intermediário 39 é dissolvido em diclorometano e adicionado a uma solução de ácido trifluoroacético, tri-isopropilsilano e água (95:2,5:2,5 v/v/v). A mistura reacional é deixada reagir à temperatura ambiente e o progresso da reação é monitorado por cromatografia analítica. Completada a concentração, a mistura reacional concentrada para produzir um resíduo bruto que é purificado adicionalmente utilizando cromatografia de

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56/62 fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol para produzir o composto do título 43. Uma solução de ácido 2-(isocianatometoxi)acético (2 equivalentes) e trietilamina (2 equivalentes) em DMF desgaseificado é adicionada a uma solução de 43 em DMF desgaseificado. A mistura reacional é deixada agitar à temperatura ambiente e o progresso da reação é monitorado utilizando cromatografia analítica. Uma vez completa, o solvente é removido sob pressão reduzida e o resíduo é tratado com NaOH 1M em água. A cromatografia analítica é usada para monitorar a hidrólise dos metilésteres. No final, o pH da mistura reacional é ajustado a 7,4 pela adição de HC1 aquoso 2M e MnCF x H2O (—1,0 equivalentes) é adicionado à mistura reacional e a mistura é agitada à temperatura ambiente. Solução de NaOH adicional é adicionada à mistura reacional para manter o pH da mistura reacional entre 7,0 e 7,4. O progresso da incorporação de manganês é monitorado por cromatografia analítica, e após a conclusão, o pH da reação é ajustado para 12 pela adição de NaOH aquoso. A mistura reacional é deixada continuar a agitar durante 1 h à temperatura ambiente, e depois a mistura reacional é filtrada para remover sólidos e o filtrado é coletado e o seu pH é ajustado para 7,4 através da adição de uma solução aquosa de HC1 desgaseificada. O composto desejado 41 é ainda purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou água-metanol.

Síntese alternativa de 42

MnCI₂ pH 7.2 _ pH 13 pH 7.4

H₂O h₂o h₂o [00151] Adiciona-se 4-(2-isotiocianatoetil)morfolina (2,1 equivalentes) a uma solução de 43 em água. O pH da solução é ajustado para 7,2 e a mistura

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57/62 é deixada reagir e o seu progresso é monitorado por cromatografia analítica. No final, o pH da mistura reacional é aumentado para 13,5 pela adição de NaOH aquoso 2,0 M. A saponificação dos metilésteres é monitorada por cromatografia analítica. Uma vez completa, o pH da mistura reacional é baixado para 7,4 pela adição de solução de HC1 a 2 M e adiciona-se MnCF x H2O (—1,0 equivalentes) à mistura reacional e a mistura é agitada à temperatura ambiente. Solução de NaOH adicional é adicionada à mistura reacional para manter o pH da mistura reacional entre 7,0 e 7,4. O progresso da incorporação de manganês é monitorado por cromatografia analítica, e após a conclusão, o pH da reação é ajustado para 12 pela adição de NaOH aquoso. A mistura reacional é deixada continuar a agitar durante 1 h à temperatura ambiente, e depois a mistura reacional é filtrada para remover sólidos e o filtrado é coletado e o seu pH é ajustado para 7,4 através da adição de uma solução aquosa de HC1 desgaseificada. O composto desejado 41 é ainda purificado utilizando cromatografia de fase reversa em silica gel funcionalizada C-18 e eluindo com misturas de água-acetonitrila ou águametanol.

Síntese de 51

[00152] Ácido 2-bromo-6-(2,2,2-trifluoroacetamido)hexanoico (44): Ν-ε-trifluoroacetamido-L-lisina (25 g, 103,2 mmol) e brometo de sódio (37,2 g, 361,2 mmol) foram adicionados a um recipiente de reação com camisa de 3 gargalos de 500 mL equipado com um termopar interno, um agitador mecânico e um funil de pó. Os sólidos foram subsequentemente dissolvidos

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58/62 em 69 mL de água e solução aquosa de HBr (20,9 mL, 8,9 Μ). O funil de pó foi removido e um funil de adição carregado com nitrito de sódio (12,8 g, 185,8 mmol) que tinha sólido pré-dissolvido em 16,5 mL de água ajustada com uma entrada de nitrogênio foi adicionado ao vaso reacional. O escape da reação foi passado através de uma solução de sulfito de sódio antes de ser ventilado para o exaustor. A temperatura interna da mistura reacional foi arrefecida para < 0 °C e depois a solução de nitrito de sódio foi lentamente adicionada à mistura reacional a uma velocidade tal que a temperatura da reação interna não foi permitida exceder 3 °C. Depois de completada a adição de nitrito de sódio, a mistura reacional estava praticamente incolor. O funil de adição que continha a solução de nitrito de sódio foi removido, e um segundo funil de adição pré-carregado com ácido sulfúrico concentrado (5,5 mL) foi adicionado ao vaso de reação. O ácido sulfúrico foi adicionado à mistura reacional a uma velocidade tal que a temperatura interna da reação não excedeu 5 °C. A mistura reacional tornou-se castanha e desenvolveu bromo durante esta adição. Após a adição de ácido sulfúrico, o funil de adição que continha o ácido sulfúrico foi substituído por uma purga de N2 ativo para remover o bromo liberado da mistura reacional e do espaço do topo. Após aspersão durante 20 minutos à temperatura ambiente, a mistura reacional tinha clareado consideravelmente. A purga de N2 ativo foi descontinuada e a mistura reacional foi submetida a partição contra 80 mL de éter metílico e terc-butílico (MTBE). A mistura foi rapidamente agitada durante cinco minutos e depois as fases foram separadas. A camada orgânica de cor castanha amarela foi coletada e a camada aquosa foi extraída com duas porções adicionais de 70 mL de MTBE. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com várias porções de solução de Na2SOs até quase incolor, e depois subsequentemente lavadas com salmoura (100 mL), secas (MgSCU), filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um óleo de cor amarelo claro. O material isolado foi seco sob alto vácuo durante a noite, e

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59/62 uma amostra foi posteriormente retirada para caracterização analítica (UPLCMS demonstrou > 80% de conversão para 44 (m/z 306)). O material isolado foi pesado, 28,1 g, e o resíduo foi subsequentemente levado para a próxima etapa sem purificação adicional.

[00153] 2-bromo-6-(2,2,2-trifluoroacetamido)hexanoato de metila (45): O composto 44 (28,1 g) foi dissolvido em metanol (350 mL) e foi adicionado ácido p-toluenossulfônico (0,35 g, 1,8 mmol). A mistura foi aquecida a 65 °C sob nitrogênio, durante a noite. Após este tempo, o aquecimento foi interrompido e a mistura reacional foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida para produzir um óleo amarelo que foi subsequentemente purificado por cromatografia flash sobre silica gel (coluna de 330 g, 200 mL/min, eluição com misturas de acetato de etila em hexanos). Programa de gradiente foi: condição inicial 5 % de acetato de etila em hexanos, reter 5% de acetato de etilo em hexanos para 1 volume de coluna, depois executar um gradiente linear para 50% de acetato de etila em hexanos em 12 volumes de coluna, finalmente conter 50% de acetato de etila em hexanos para 2 volumes adicionais de coluna. Os eluentes da coluna foram monitorados por UV a 230 nm e 254 nm e por dispersão de luz evaporativa. O produto desejado eluiu da coluna entre os volumes da coluna 6,4 e 9. O produto isolado foi um óleo incolor 20,3 g (63 mmol), [cc]^D2o,o = -31,10 ± 0,01 (c = 10,07 g/100 mL em MeOH), ESI-MS 322, 320 m/z; Ή RMN (CD3CN, 599,79 MHz) δ 7,58 (s br, 1H), δ 4,35 (t, 1H), δ 3,73 (s, 3H), δ 3,25 (dd, 2H), δ? 2,08-2,02 (m, 1H), δ 1,99-1,93 (m, 1H), δ 1,61-1,53 (m, 2H), δ 1,51-1,44 (m, 1H), δ 1,40-1,33 (m, 1H); ¹³C RMN (CD3CN, 150,83 MHz) δ 171,18, 157,83 (q, J = 37,0 Hz), 117,17 (q, J = 286,7 Hz), 53,57, 46,94, 40,03, 35,09, 28,59 e 25,01; ¹⁹F RMN (CD₃CN, 564,32 MHz) δ -76,67.

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[00154] Composto (47). A um frasco de 100 mL contendo metilpiramina 46 (5 g, 21,7 mmol) foram adicionados 45 mL de MeCN anidro seguido por 9,3 mL (52,1 mmol) de di-isopropiletilamina. Após agitação durante 5 minutos, adicionou-se 45 (15,3 g, 74,8 mmol) à mistura reacional. O vaso reacional foi colocado em um banho de óleo mantido a 65 °C durante 18 h. Após este tempo, adicionou-se mais 1,9 mL (10,8 mmol) de diisopropiletilamina e 3 g (9,4 mmol) de 45 à mistura reacional. A reação foi deixada continuar a agitação em um banho de óleo a 65 °C durante mais 24 h. Após o tempo alocado, a mistura reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e a mistura reacional foi subsequentemente concentrada sob pressão reduzida para produzir um resíduo oleoso vermelho. O resíduo isolado foi submetido à partição entre acetato de etila e água e as fases foram separadas. A camada orgânica foi lavada com duas porções adicionais de água e, em seguida, as lavagens aquosas combinadas foram novamente extraídas com duas porções adicionais de acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram secos (NaiSO^, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para fornecer um óleo vermelho que se expandiu sob vácuo. O óleo isolado foi triturado com duas porções de 40 mL de éter dietílico durante 10 minutos à temperatura ambiente, e depois a camada de éter foi decantada e descartada. O resíduo foi lavado com 50 mL de água (aquecida durante 10 minutos em um banho de água a 60 °C). A suspensão aquosa foi deixada a arrefecer a <

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61/62 °C e depois a mistura foi extraída com duas porções de 15 mL de éter dietílico. Os extratos de éter foram descartados. A camada aquosa foi diluída com uma porção de salmoura e extraída exaustivamente com acetato de etila (as extrações foram continuadas até haver pouco ou nenhum sinal para o produto remanescente na camada aquosa por HPLC, (5 x 30 mL). Os extratos foram secos (NazSOA filtrados e concentrados sob pressão reduzida para produzir uma espuma quase incolor 14,3 g (20,5 mmol, 94%), ESI-MS 699,70 (m/z).

[00155] Composto (48). A um balão de fundo redondo de 50 mL equipado com uma barra de agitação magnética foi adicionado 47 (2,018 g, 2,89 mmol) e em H₂O (9 mL). KOH (1,302 g, 23,2 mmol) foi adicionado e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h. A análise por HPLC-MS mostrou reação completa (ESI-MS: 479 (M + H +) (m/z)). O pH da solução reacional foi ajustado para 10,1 com HC1 concentrado e usado sem purificação adicional.

[00156] Composto (49). MnCl₂ x 4 H₂O (0,638 g, 3,22 mmol) foi adicionado à solução de pH 10,1 descrita na síntese do composto 5 e o pH diminuiu para 5,8 e foi ajustado para 7,0 com 3,4 M de KOH aquoso. A solução resultante foi então aquecida a 90 °C durante 3 horas antes de arrefecer até à temperatura ambiente. O pH foi então aumentado para 10,0 com KOH e a solução castanha turva resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 14,5 h. A filtração através de um filtro de PTFE de 0,45 pm produziu um filtrado ligeiramente turvo que foi concentrado até à secura sob vácuo. O resíduo castanho resultante foi triturado com MeOH (10 mL) para produzir um sólido branco em uma solução castanha límpida. O sólido foi removido por filtração através de um filtro de PTFE de 0,45 e o filtrado castanho claro foi concentrado até secura sob vácuo. O resíduo resultante castanho foi dissolvido em H₂O (5 mL) e purificado em silica Cl8 (5% de AcN em água até 10% de AcN em água) para dar 1,41 g (92%) do produto

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62/62 desejado como um sólido amarelo claro. ESI-MS: 532 (Μ + H +) (m/z). [00157] Composto (51). 20% em peso de 50 aquoso (1,651 mL, 3,11 mmol) foram adicionados a um balão de 2 gargalos de 25 mL equipado com uma barra de agitação magnética e uma sonda de pH. O pH da solução de ácido glicérico foi ajustado de 2,2 para 7,2 com 3,4 M de KOH. Adicionou-se 49 (0,701 g, 1,38 mmol) seguido por EDCI-HC1 (0,634 g, 3,31 mmol) e hidrato de hidroxibenzotriazol (0,028 g, 0,183 mmol). O pH da solução resultante foi mantido entre 6 e 7 com a adição de HC1 6M e/ou KOH 3,4 M, conforme apropriado, com agitação à temperatura ambiente durante 4,5 h. Adicionou-se EDCI-HC1 (0,530 g, 2,76 mmol) e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 15,5 h adicionais. Todo o solvente foi removido sob vácuo para dar um óleo amarelo dourado que foi purificado em silica Cl8 (2% de AcN em água até 20% de AcN em água) para produzir 0,31 g (32%) do produto desejado como um sólido esbranquiçado. ESI-MS: 708 (M + H +) (m/z).

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto de Fórmula I ou um sal ou solvato do mesmo:

caracterizado pelo fato de que:

X é O ou S;

Y é O, S ou Q-R³, em que Q é N ou CH e R³ é selecionado a partir do grupo que compreende hidroxialquila C1-20, alquila C1-6 ou hidrogênio;

Z é OL-R⁴, SL-R⁴ ou Q-R³-(L-R⁴) em que Q e R³ são como definidos para Y e L é um ligante opcional selecionado a partir dos grupos compreendendo alquileno C1-6, hidroxialquileno C1-6 e um ligante PEG, R⁴ é selecionado a partir do grupo compreendendo alquila C1-6-R⁵, arila C3-6-R⁵, hidroxi, -O-alquila C1-3-R5, sulfonila, um anel heterocíclico de 5 a 6 membros, uma porção de carboidrato, uma porção quelante, uma porção de aminoácido, em que R⁵ representa um ou mais substituintes opcionais selecionados dentre hidroxila, amino, oxo, halo, alquila C1-3, sulfonamida ou -C(=O)-NHhidroxialquila C1-6; ou o próprio Z faz parte de uma porção de carboidrato ou um anel heterocíclico de 5 a 6 membros;

R¹ é alquila C1.3 ou -(CH₂)_m-Y¹-C(=X¹)-Z¹, em que X¹, Y¹ e Z¹são como definidos para X, Y e Z e m é um número inteiro de 2 a 5;

R² representa 0 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir do grupo compreendendo hidroxi, halo, amino, amido, alquila C1-6 e hidroxialquila C1-6; e, cada n é um número inteiro de 0 a 15;

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2/n em que o composto de Fórmula I compreende pelo menos dois grupos hidroxi; e, com a condição de que quando Y é Q-R³ em que Q é CH, Z não é Q-R³-(E-R⁴) em que Q é N.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X é O, Y é Q-R³, em que Q é N e Z é Q-R³-(E-R⁴), em que Q éN.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X é S, Y é Q-R³, em que Q é N e Z é Q-R³-(E-R⁴), em que Q éN.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X é O, ou Y é O ou Z é OE-R⁴ e quando Y não é O é Q-R³, em que Q é N e quando Z não é OE-R⁴ é Q-R³-(L-R⁴), em que Q é N.
5. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X é S, ou Y é O ou Z é OL-R⁴ e quando Y não é O, é Q-R³, em que Q é N e quando Z não é O, é Q-R³-(L-R⁴), em que Q é N.
6. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X é O, Y é Q-R³, em que Q é N e Z é Q-R³-(L-R⁴), em que Q éCH.
7. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X é O, ou Y é O ou Z é O-L-R⁴ e quando Y não é O, é Q-R³, em que Q é CH e quando Z não é O, é Q-R³-(L-R⁴), em que Q é CH.
8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que cada -L-R⁴ é hidroxialquila C1-12.
9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações

1 a 8, caracterizado pelo fato de que cada -L-R⁴ é selecionado independentemente a partir do grupo compreendendo:

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3/n

em que em cada caso o asterisco indica o ponto de ligação ao restante do composto de Fórmula I.
10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações

1 a 9, caracterizado pelo fato de que cada R⁴ é o mesmo.

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11. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que cada R³ é independentemente selecionado a partir do grupo compreendendo alquila C1-3 ou hidrogênio.
12. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que cada R³ é alquila C1-3.
13. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que cada R³ é hidrogênio.
14. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que cada R³ é o mesmo.
15. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que cada n é um número inteiro de 1 a 6.
16. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que m é 3.
17. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que R¹ é alquila C1-3.
18. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações

1 a 16, caracterizado pelo fato de que R¹ é -(CH₂)_m-Y-C(=X)-Z, em que X, Y, Z e m são como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 16.
19. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizado pelo fato de que R² representa 0 substituintes.
20. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que R² representa 2 grupos hidroxi.
21. Composto de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que os ditos grupos hidroxi estão nas posições meta no anel piridila.
22. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que compreende pelo menos 4 grupos hidroxi.
23. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado

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5/12 pelo fato de ser selecionado dentre os seguintes compostos:

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7 /12

OH

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8/12

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9/n

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10/12

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11 / 12
24. Composto de Fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de ser uma mistura racêmica ou diastereomericamente pura.
25. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o composto de Fórmula I como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 24 em conjunto com um veículo biocompatível em uma forma adequada para administração a mamífero.
26. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação

25, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
27. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação

26, caracterizada pelo fato de que os ditos excipientes farmaceuticamente aceitáveis são selecionados dentre agentes tamponantes, estabilizadores, antioxidantes, agentes de ajuste de osmolalidade, agentes de ajuste de pH, quelante em excesso e complexos fracos de íons fisiologicamente toleráveis.
28. Método, caracterizado pelo fato de que compreende:

(i) administrar a um indivíduo o composto de Fórmula I, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 24, ou a composição farmacêutica, como definida em qualquer uma das reivindicações 25 a 27;

(ii) detectar os sinais de ressonância magnética (RM) do dito indivíduo ou partes do dito indivíduo em que o dito composto foi distribuído;

(iii) gerar imagens de RM e/ou espectros de RM a partir dos ditos sinais detectados.
29. Composto de Fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo fato de ser para uso no método como

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12/12 definido na reivindicação 28.