BR112019010394A2

BR112019010394A2 - vacina suína

Info

Publication number: BR112019010394A2
Application number: BR112019010394A
Authority: BR
Inventors: Arnoldus Christiaan Jacobs Antonius; Van Den Born Erwin; Sno Melanie
Original assignee: Intervet Int Bv
Priority date: 2016-11-29
Filing date: 2017-11-28
Publication date: 2019-09-03
Also published as: EP3548077A1; US11135285B2; RU2019120045A3; RU2019120045A; WO2018099889A1; US20200384102A1; JP2019535786A; JP7174698B2

Abstract

a invenção se refere a uma vacina compreendendo, em combinação, imunógenos não replicantes de erysipelothrix rhusiopathiae, parvovírus porcino, leptospira interrogans e vírus da prrs atenuado vivo, e um veículo farmaceuticamente aceitável, para uso em um método para o tratamento profilático de um suíno contra uma infecção com erysipelothrix rhusiopathiae, parvovírus porcino, leptospira interrogans e vírus da prrs, em que a vacina é administrada em uma dose única em relação ao tratamento contra uma infecção com o vírus da prrs.

Description

VACINA SUÍNA

Campo geral da invenção [001] A invenção em geral se refere ao campo da saúde suína. Suínos são propensos a muitos microrganismos patogênicos. O controle da infecção é comumente feito por gestão estável e alimentar, tratamento com produtos farmacêuticos como fármacos antivirais e antibióticos ou tratamento profilático com vacinas. Em particular, a invenção se refere a vacinas contra o vírus da PRRS (síndrome reprodutiva e respiratória porcina), Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino e Leptospira interrogans (Lato Sensu), e a um método de proteger um animal contra tais infecções com o uso de tais vacinas.

Antecedentes da invenção [002] O vírus da PRRS foi relatado pela primeira vez em 1987 na América do Norte e Europa Central. O vírus da PRRS é um vírus de RNA pequeno e envelopado. Contém um genoma de RNA de fita simples, de sentido positivo, com um tamanho de aproximadamente 15 kilobases. O genoma contém nove estruturas de leitura aberta. O vírus é um membro do gênero Arterivírus, família Arteriviridae, ordem Nidovirales. As duas cepas de protótipo de PRRSV são a cepa norte-americana VR-2332 e a cepa europeia, vírus Lelystad (LV). As cepas europeias e norte-americanas de PRRSV causam sintomas clínicos semelhantes. No início dos anos 2000, uma cepa altamente patogênica do genótipo norteamericano surgiu na China. Esta cepa, HP-PRRSV, é mais virulenta do que todas as outras cepas, e causa grandes perdas em países asiáticos em todo o mundo. Os sinais clínicos incluem falha reprodutiva em porcas, como abortos e nascimento de fetos natimortos ou mumificados, e cianose do ouvido e da vulva. Em porcos neonatais, a doença causa desconforto respiratório, com aumento da suscetibilidade a infecções respiratórias, como a doença de Glasser. Quanto ao vírus da PRRS, embora vacinas de vírus inativados tenham sido descritas e

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 estejam comercialmente disponíveis, o Vírus Vivo Modificado (MLV), compreendendo o tipo Europeu (tipo I) ou Norte-americano (tipo II) em forma viva atenuada, é a principal ferramenta imunológica para seu controle. Várias vacinas estão comercialmente disponíveis na técnica. A Porcilis® PRRS (disponível junto à MSD Animal Health, Boxmeer, Holanda) é uma vacina compreendendo o vírus da PRRS vivo atenuado tipo I e está registrada para reduzir a infecção (viremia) causada pela infecção com o vírus da PRRS. A Ingelvac PRRS® MLV (disponível junto à Boehringer Ingelheim, Ingelheim, Alemanha) é uma vacina que ajuda na redução de doenças causadas pelo vírus da PRRS. A Fostera® PRRS (disponível junto à Zoetis, Florham Park, Nova Jersey, EUA) é também uma vacina contra a MLV e é registrada para proteção contra ambas as formas respiratória e reprodutiva da doença causada pelo vírus da PRRS. Outras vacinas de PRRS são descritas, por exemplo, nos documentos W02006/074986, US 8728487 e WO2014/048955.

[003] A doença infecciosa causada por Erysipelothrix rhusiopathiae (Ery) em porcos é conhecida como erisipela e é uma das mais antigas doenças reconhecidas que afetam o crescimento e suínos adultos. Até 50% dos porcos em áreas de produção intensiva de suínos são considerados colonizados por Ery. O organismo geralmente reside no tecido tonsilar. Esses portadores típicos saudáveis podem eliminar o organismo em suas fezes ou secreções oronasais e são uma importante fonte de infecção para outros porcos. Os surtos de doenças podem ser agudos ou crônicos, e as infecções clinicamente inaparentes também ocorrem. Os surtos agudos são caracterizados por mortes súbitas e inesperadas, episódios de febre, articulações dolorosas e lesões na pele que variam de cianose generalizada às lesões de pele diamantada frequentemente descritas (urticária romboide). A erisipela crônica tende a seguir surtos agudos e é caracterizada por articulações e claudicação aumentadas. Uma segunda forma de erisipela crônica

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 é a endocardite valvar vegetativa. Porcos com lesões valvulares podem apresentar poucos sinais clínicos; no entanto, quando exercidas fisicamente, podem mostrar sinais de desconforto respiratório, letargia e cianose e, de repente, sucumbir à infecção. As porcas prenhas gravemente afetadas podem abortar, provavelmente devido à febre. A vacinação é muito eficaz no controle de surtos de doenças. A vacinação é muito eficiente no controle de surtos de doenças. As bacterinas injetáveis e outros imunógenos não replicantes são conhecidos e fornecem uma longa duração de imunidade. As vacinas disponíveis comercialmente compreendendo imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae são Porcilis® ERY+Parvo (MSD Animal Health), FarrowSure® Gold (Zoetis), ErySeng® Parvo (Hipra) e PARVORUVAX® (Merial). O momento ideal de vacinação pode variar de fazenda para fazenda. Os porcos suscetíveis podem ser vacinados antes do desmame, no desmame ou várias semanas após o desmame. Os suínos machos e fêmeas selecionados para adição ao rebanho reprodutor devem, preferencialmente, ser vacinados com um reforço de 3 a 5 semanas mais tarde. Posteriormente, o estoque reprodutor deve ser vacinado duas vezes por ano. Em geral, existe uma boa proteção cruzada entre as principais cepa de Erysipelothrix rhusiopathiae que infectam porcos.

[004] O parvovirus porcino é onipresente em porcos em todo o mundo. Quase todas as fêmeas são naturalmente infectadas antes de sua segunda gestação, e a imunidade é vitalícia. Consequentemente, é uma doença típica de porcos de primeira paridade. As marras que são imunologicamente ingênuas ou têm altas titulações de anticorpos passivos têm o maior risco de distúrbios reprodutivos causados pelo vírus. A infecção antes do dia 30 da gestação resulta em perda embrionária precoce. A infecção fetal entre 30 e 70 dias de gestação pode resultar em morte do feto e mumificação. Nem todos os fetos são infectados ao mesmo tempo, e a morte em diferentes fases da gestação é típica.

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Alguns fetos sobrevivem e nascem vivos, mas persistentemente infectados. A maioria dos fetos infectados após 70 dias de gestação aumenta a resposta imune, elimina o vírus e é saudável ao nascer. Ninhadas com fetos mortos de tamanhos variados, incluindo fetos mumificados, juntamente com porcos natimortos e nascidos saudáveis de marras de primeira paridade, são a marca registrada do parvovirus porcino. O diagnóstico é feito por testes de anticorpos fluorescentes, isolamento de vírus com o uso do pulmão de fetos mumificados ou demonstração de anticorpos pré-colostrais em porcos natimortos. Os javalis transmitem o vírus por vias variadas, incluindo o sêmen, por algumas semanas após a infecção aguda e podem introduzir o vírus em um rebanho. As vacinas eficazes compreendendo imunógenos não replicantes estão amplamente disponíveis, tais como, por exemplo, Porcilis® ERY+Parvo (MSD Animal Health), FarrowSure® Gold (Zoetis), e PARVORUVAX® (Merial).

[005] Leptospira interrogans (Lato Sensu, ou seja, todas as bactérias patogênicas da leptospira), especialmente o sorogrupo Pomona, é uma das principais causas de falha reprodutiva em suínos (infertilidade, aborto, natimortos e o nascimento de leitões fracos). Embora a leptospirose aguda ocorra em suínos adultos, a maioria dos casos é assintomática. Porcos infectados com sorogrupos Pomona e Australis, sorovar Bratislava, podem se tornar portadores renais crônicos. O aborto ocorre de 1 a 4 semanas após a infecção e os fetos são autolisados. A mumificação, maceração, natimortos e porcos fracos também são vistos. O diagnóstico é baseado na demonstração de leptospiras em tecidos fetais ou conteúdo do estômago. Entretanto, fetos severamente autolisados podem resultar em resultados de imuno-histoquímica e anticorpos fluorescentes ruins. O teste de PCR tem melhor sensibilidade e especificidade. A vacinação com uma bacterina (multivalente) ou outro imunogene não replicante, geralmente a cada 6 a 12 meses, ajuda a mitigar ou até prevenir a

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 leptospirose. Os resultados de campo indicam que a infecção por Leptospira não pode ser eliminada com segurança com antibióticos. As vacinas eficazes podem ser obtidas comercialmente, por exemplo, FarrowSure® Gold e Lepto-Eryvac® (Zoetis), e Porcilis® Ery+Parvo+Lepto (MSD Animal Health).

Objetivo da invenção [006] Existe uma necessidade contínua de meios convenientes, seguros e eficazes para a gestão da saúde suína. Em particular, existe a necessidade de uma vacina conveniente, segura e eficaz que possa ser usada para o tratamento profilático de um suíno contra uma infecção com Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans e vírus da PRRS. As infecções com esses patógenos, em particular, podem diminuir o desempenho reprodutivo de suínos fêmeas.

Sumário da invenção [007] A fim de atender o objetivo da invenção, concebe-se uma nova vacina para a proteção de suínos contra infecções com vários microrganismos causadores de doenças, a vacina compreendendo, em combinação, imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans e vírus da PRRS vivo atenuado e um veículo farmaceuticamente aceitável em que a vacina é administrada em uma dose única em relação ao tratamento contra uma infecção com o vírus da PRRS. Esta vacina é muito adequada para ser usada em suínos fêmeas para melhorar seu desempenho reprodutivo.

[008] Embora as vacinas sejam conhecidas e estejam disponíveis comercialmente para tratar Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans e infecções por vírus da PRRS, há uma necessidade contínua de novas formas de fornecer boa proteção de uma maneira segura e conveniente. Uma vacina combinada contra todos esses patógenos está

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 comercialmente disponível. De fato, nem todas as combinações de antígenos contemplados ou sugeridos pode conduzir a uma vacina combinada segura e eficaz. Na verdade, há sempre um nível de incerteza com relação à segurança e eficácia de qualquer vacina combinada.

[009] O comitê para produtos medicinais veterinários da Agência Européia para Avaliação de Produtos Medicinais (EMEA), na sua publicação Note for guidance: requirements for combined veterinary products (EMEA, 2000, CVMP/IWP/52/97- FINAL), afirmou (página 2/6) que o desenvolvimento de vacinas combinadas não é simples. Cada combinação deve ser desenvolvida e estudada individualmente em termos de qualidade, segurança e eficácia. O comitê indica ainda que a procura de uma boa vacina de combinação inclui tipicamente a compatibilidade entre os componentes individuais na vacina combinada, incluindo, por exemplo, conservantes, excipientes e estabilizadores, agentes de inativação e adjuvantes. Na página 3, parágrafo superior, afirma-se que Nas vacinas combinadas, a presença de mais de um componente pode causar uma interação, levando a uma resposta diminuída ou aumentada a componentes individuais, em comparação com quando o(s) componente(s) específicos(s) é(são) administrado(s) isoladamente. Tais interações são frequentemente de natureza imunológica, mas também podem ser causadas por outros fatores com menos efeitos diretos sobre o sistema imune.

[0010] O U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Biologies Evaluation and Research, publicou em abril de 1997 uma diretriz, a Guidance for Industry, forthe evaluation of combination vaccines for preventable diseases: Production, Testing and Clinical Studies, em cuja diretriz afirma-se (página 3, em Compatibility of Components) que A experiência demonstrou que a combinação de vacinas monovalentes pode resultar em uma nova combinação que é menos segura ou eficaz do que a

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 desejável. Às vezes, os componentes de vacinas inativadas podem agir de forma adversa em um ou mais dos componentes ativos, indicando que, especialmente, uma vacina inativada pode influenciar negativamente a eficácia de uma vacina viva, como por exemplo ocorreu ao combinar uma vacina de pertussis viva e uma vacina de poliovirus inativado que resultou em uma vacina com menor potência de pertussis. É indicado que quaisquer componentes adicionais na vacina podem complicar a segurança e a potência do produto final quando comparado com as vacinas individuais.

[0011] A Organização Mundial de Saúde (OMS) publicou um curso de elearning chamado Princípios Básicos de Segurança de Vacinas, que no MÓDULO 2 contempla vacinas combinadas. Este módulo começa com As vacinas combinadas licenciadas passam por testes extensivos antes da aprovação pelas autoridades nacionais para garantir gue os produtos sejam seguros, eficazes e de gualidade aceitável. Também é afirmado que Com todas as combinações, os fabricantes devem, portanto, avaliar a potência de cada componente antigênico, a eficácia dos componentes da vacina quando combinados para induzir imunidade, risco de possível reversão à toxicidade e reação com outros componentes da vacina.

[0012] Em suma, qualquer combinação de antígenos particulares não é simples e requer experimentação para determinar a segurança e a eficácia.

[0013] A presente invenção, junto à vacina como tal, também se refere a uma vacina combinada para uso em um método para tratamento profilático de um suíno contra uma infecção com Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans e vírus da PRRS, a um método para constituir tal vacina e a um método para o tratamento profilático de um suíno contra uma infecção com Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans e vírus da PRRS, compreendendo administrar a referida vacina ao

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 animal, em particular, uma dose única em relação ao vírus de PRRS, por via parental, em particular, por via intramuscular.

[0014] A invenção também se refere a uma combinação de uma primeira vacina compreendendo imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino e Leptospira interrogans, e um veículo farmaceuticamente aceitável e uma segunda vacina compreendendo o vírus liofilizado PRRS vivo atenuado e uma instrução de que a segunda vacina pode ser misturada com a primeira vacina para formar a vacina de acordo com as reivindicações 1 a 3. Na prática, a primeira e a segunda vacinas podem ser vendidas como vacinas independentes e separadas, mas com uma indicação no rótulo, folheto informativo ou de outra forma, de que as duas vacinas podem ser misturadas para formar uma vacina de combinação múltipla.

Definições [0015] Uma vacina é uma composição farmacêutica que é segura para administrar a um animal e é capaz de induzir imunidade protetora nesse animal contra um microrganismo patogênico (um patógeno), isto é, para induzir um tratamento profilático com sucesso contra uma infecção com o patógeno como definido aqui abaixo. Uma vacina pode ser utilizada em conjunto com um adjuvante, isto é, uma substância ou composição que é capaz de aumentar a resposta imune induzida pela vacina.

[0016] O imunogene não replicante de um patógeno é qualquer substância ou composto correspondente ao patógeno, diferente do patógeno replicante vivo como um todo (quer do tipo selvagem ou atenuado), patógeno contra o qual uma resposta imunológica deve ser desencadeada, tal que o correspondente patógeno virulento ou um ou mais de seus fatores de virulência serão reconhecidos pelo sistema imune do hospedeiro como um resultado desta resposta imune e são, pelo menos em parte, neutralizados. Exemplos típicos de

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 imunógenos não replicantes são patógenos totais inativados (mortos) e subunidades totais destes patógenos, tais como proteínas da capsídeo e proteínas expressas na superfície, por exemplo, proteínas recombinantemente expressas. Os imunógenos não replicantes (por exemplo, patógeno total morto, lisado celular, subunidade, etc.) evocam uma resposta imune que é principalmente do tipo humoral (isto é, indução de anticorpos).

[0017] Tratamento profilático contra uma infecção por um patógeno é o auxílio na prevenção ou melhoria de uma infecção com esse patógeno ou um distúrbio resultante dessa infecção, resultante de um desafio pós-tratamento com um patógeno, em particular, para reduzir a sua carga no hospedeiro após esse desafio e, opcionalmente, para ajudar a prevenir ou melhorar uma ou mais manifestações clínicas resultantes da infecção pós-tratamento com o patógeno.

[0018] Um patógeno vivo atenuado é uma forma viável, competente para replicação, do patógeno com virulência reduzida. O processo de atenuação toma um patógeno infeccioso e altera-o para que se torne inofensivo ou menos virulento, tipicamente por múltiplas passagens do patógeno através de sistemas celulares ou modificando geneticamente o patógeno.

[0019] Administração de dose única de uma vacina para uso em tratamento profilático significa que, para chegar à imunidade protetora, a vacinação não precisa ser reforçada com uma segunda administração da vacina. Em um regime de duas aplicações, a primeira vacinação (primária) é tipicamente reforçada dentro de 6 semanas a partir da primeira administração, geralmente dentro de 3 ou até 2 semanas da primeira administração, e somente após a segunda administração (reforço) da imunidade protetora, isto é, tratamento profilático bem-sucedido como definido acima, pode ser obtido.

[0020] Um veículo farmaceuticamente aceitável é um meio biocompatível, ou seja, um meio que após a administração não induz reações adversas

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 significativas no animal em questão, capaz de apresentar o antígeno ao sistema imune do animal hospedeiro após a administração da vacina. Um tal veículo pode ser um líquido contendo água e/ou qualquer outro solvente biocompatível, possivelmente formando uma emulsão com um ou mais líquidos hidrofóbicos, tal como um óleo. O veículo, no entanto, também pode ser um sólido, tal como habitualmente utilizado para obter vacinas liofilizadas (com base em açúcares e/ou proteínas).

Modalidades da invenção [0021] Em uma modalidade, os imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans são patógenos inativados de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino e Leptospira interrogans respectivamente. Por exemplo, simplesmente matando os patógenos, uma maneira simples de ter (todos) os imunógenos disponíveis em uma forma não replicante é fornecida. Embora qualquer vacina de subunidade também possa ser adequada para uso na presente vacina, ao ter-se os patógenos inativados disponíveis, os imunógenos relevantes estão presentes per se e, de um modo (semelhante ao modo em que) eles estão presentes no patógeno de ocorrência natural na fase viva.

[0022] Em uma outra modalidade, o patógeno de Leptospira interrogans compreende bactérias do sorogrupo Pomona, que é o mais importante patógeno da leptospira suína. Opcionalmente também estão presentes bactérias de pelo menos um dos sorogrupos Tarassovi, Australis, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae e Canicola, em que as bactérias do sorogrupo Australis, em particular, são bactérias do sorovar Bratislava.

[0023] Como indicado acima, também em uma outra modalidade da vacina para uso em um método para o tratamento profilático de um suíno contra uma infecção com Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 interrogans e o vírus da PRRS, os imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans são patógenos inativados (por exemplo, mortos). Em particular, o patógeno de Leptospira interrogans compreende bactérias do sorogrupo Pomona e, opcionalmente, bactérias de pelo menos um dos sorogrupos Tarassovi, Australis, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae e Canicola, em que as bactérias do sorogrupo Australis, em particular, são bactérias do sorovar Bratislava.

[0024] Ainda em outra modalidade da vacina para uso nesse método, a vacina é administrada em uma dose única em relação ao tratamento contra uma infecção com o vírus da PRRS. Foi vantajosamente descoberto que um suíno pode ser vacinado com sucesso com a vacina combinada contra infecção de vírus PRRS após uma única dose de administração da vacina. Essa modalidade não exclui que uma vacinação de acompanhamento. Essa vacinação de acompanhamento difere do esquema de vacinação de reforço inicial, em que se acredita apenas que a proteção seja obtida após a vacinação de reforço. Em um esquema de reforça inicial, as duas vacinações são tipicamente 2 a 3 semanas separadas.

[0025] Ainda em outra modalidade, a vacina é administrada por via parenteral, isto é, administrada em outra parte do corpo que não a boca e o canal alimentar. A vacina pode, por exemplo, ser administrada por via intramuscular.

[0026] Como afirmado acima, a invenção também se refere a um método para constituir a vacina de combinação em que o método compreende misturar uma primeira composição compreendendo o vírus da PRRS vivo atenuado com uma segunda composição compreendendo os imunógenos de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino e Leptospira interrogans no veículo farmaceuticamente aceitável. Em uma outra modalidade, a primeira composição

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 compreende o vírus liofilizado da PRRS, por exemplo, em um estabilizante tal como conhecido de Porcilis® PRRS. A mistura ocorre, de preferência, no máximo 24 horas antes da vacina ser administrada ao animal, ou no máximo 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2,1 ou 1/2 hora antes do início da administração.

[0027] A invenção será agora explicada de forma mais detalhada, usando os seguintes exemplos.

Exemplos

Experimento 1: a combinação de imunógenos não vivos de Ery, parvo e lepto [0028] Em um primeiro experimento, a segurança e a eficácia da combinação de imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino e Leptospira interrogans foram avaliadas. Para tal combinação de antígenos não vivos, em particular, a segurança é um aspecto importante. Isto é devido à quantidade relativamente alta de antígenos que é tipicamente usada em tal vacina (não viva), com o risco de um choque endotóxico, em particular, quando os imunógenos compreendem patógenos inativados de bactérias gram-negativas (em cujas bactérias as paredes das células compreendem lipopolissacarídeos endotóxicos).

[0029] O estudo foi concebido como um estudo de campo historicamente controlado. Foi realizado em uma fazenda com histórico de aumento nas taxas de aborto, associado à infecção por leptospira. Altas titulações de anticorpos contra o sorogrupo Pomona foram encontradas em vários animais, indicando uma infecção recente por Leptospira do sorogrupo Pomona. A fazenda foi negativa para infecção pelo vírus da PRRS.

[0030] No início do estudo, todas as porcas reprodutoras e marras de substituição na fazenda foram vacinadas no músculo do pescoço duas vezes, com um intervalo de 4 semanas, com uma vacina contendo imunógenos não

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae (bactérias inativadas com formalina, cepa M2), parvovirus porcino (vírus inativados BPL, cepa 014) e Leptospira interrogans (bactérias BPL inativadas dos sorogrupos Pomona, Tarassovi, Australis (sorovar Bratislava), Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae e Canicola) em um adjuvante à base de acetato de dl-a-tocoferol aquoso. Esta composição de vacina é designada por Ery/parvo/lepto. Os animais foram revacinados com Ery/parvo/lepto na segunda semana de cada lactação seguinte. Novas marras de substituição foram vacinadas usando o mesmo esquema.

[0031] O desempenho reprodutivo dos porcos no estudo foi monitorado. Os resultados de partos e dados de reprodução relevantes foram coletados para determinar se a vacinação teve algum efeito na incidência de aborto. Os resultados obtidos durante o período do estudo foram comparados com os dados históricos. Como o parvovirus e Ery também têm um impacto negativo significativo na reprodução (parvo pode matar os fetos e Ery pode causar aborto), uma melhoria substancial a esse respeito é uma boa indicação de que a vacina também é eficaz contra esses patógenos.

[0032] Nenhum evento adverso foi relatado durante o estudo, indicando que a vacina era segura. Em relação à eficácia, a porcentagem de abortos entre o período do estudo e o período pré-estudo foi comparada, levando-se em consideração o efeito da estação do ano. Após a vacinação, uma rápida melhora nos abortos se manifestou, de 12,6% na pré-vacinação, para 0,5% após o início da vacinação. Esta é uma diminuição na taxa de aborto de 96%. O número total de abortos na fazenda diminuiu de 55 para 6. A tendência de ter um baixo número de abortos na fazenda foi estável após o início do programa de vacinação e na estação seguinte. A frequência de abortos permaneceu baixa, ou seja, 0,6%. A segurança e a eficácia da vacina foram confirmadas em outro estudo relatado em Porcine Health management em Novembro de 2015

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 (Porcine Health Management 2015 1:16 / DOI: 10.1186/s40813-015-0011-0). Este estudo focou na viremia, infecção renal e perda urinária.

[0033] Pode-se assim concluir que a vacina compreendendo, em combinação, imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino e Leptospira interrogans é segura e eficaz contra todos esses patógenos. Adicionando-se um vírus da PRRS vivo a esta vacina, que (inerentemente) contém uma quantidade relativamente baixa de antígeno quando em comparação com os patógenos inativados de ery/parvo/lepto, não é esperado que haja um efeito negativo sobre a eficácia dos imunógenos ery/parvo/lepto. No entanto, a segurança pode ser comprometida e o efeito dos imunógenos inativados no vírus vivo da PRRS não é conhecido e precisa ser avaliado. Isso foi feito em outro experimento, cujos resultados são indicados abaixo.

Experimento 2: O efeito da vacina de combinação de EPL na vacina viva com PRRS [0034] O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial da vacina em leitões SPF com seis semanas de vida de uma reconstituição de vacina de Vírus da Síndrome Respiratória e Reprodutiva Porcina (PRRSV) Tipo 1 (Porcilis PRRS) vivo atenuado em uma vacina compreendendo, em combinação, imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino e Leptospira interrogans.

[0035] O estudo foi realizado com quarenta leitões negativos para o anticorpo PRRSV, distribuídos uniformemente em 2 grupos. Os grupos 1 e 2 foram vacinados uma vez por via intramuscular (IM) com 2 ml de Porcilis PRRS diluídos para 4,5logw TCIDso por dose (esta dose representa uma dose ligeiramente acima da dose mínima de 4,0logw TCIDso de Porcilis® PRRS). O grupo 1 recebeu a vacina de PRRS diluída em uma vacina experimental de

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Ery/Parvo/Lepto como indicado acima no experimento 1. As vacinas foram misturadas a uma temperatura de 25°C e deixadas durante pelo menos 1 hora antes da administração real aos animais. O grupo 2 recebeu o vírus vivo atenuado diluído em Diluvac Forte, e assim recebeu de fato a vacina normal Porcilis® PRRS ligeiramente acima da sua dose mínima. Este grupo de fato serviu como um controle positivo.

[0036] Os seguintes parâmetros foram medidos: reações locais e sistêmicas, viremia de PRRSV e sorologia de PRRSV. Deste modo, pode ser estabelecido se a cepa de vacina é capaz de replicar normalmente no animal hospedeiro, o que é um requisito para a indução de uma resposta imune eficaz. A partir do dia da vacinação até o final do experimento (28 dias após a vacinação, dpv), todos os leitões foram observados diariamente para sinais clínicos. Amostras de sangue foram coletadas imediatamente antes da vacinação e 2 e 4 semanas após a vacinação. As amostras de soro obtidas nos pontos de tempo após a vacinação foram utilizadas para determinar a viremia específica de PRRSV e as respostas sorológicas.

[0037] O exame veterinário mostrou que todos os leitões estavam saudáveis no dia da vacinação. Não foram encontrados eventos adversos que pudessem estar relacionados à vacinação. Um leitão no grupo 2 foi encontrado morto na coleta de sangue no final da tarde, 14 dias após a vacinação. A necropsia foi realizada e a causa da morte foi provavelmente um hematoma no pescoço, devido à coleta de sangue.

[0038] Os resultados da sorologia do vírus da PRRS estão indicados na Tabela 1. Os resultados da viremia do vírus da PRRS estão indicados na Tabela 2.

Tabela 1 Resultados sorológicos de PRRSV: porcentagem de animais positivos, 0,14 e 28 dpv

Grupo

0 dpv

14 dpv

28 dpv

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1	0	80	100
2 (controle positivo)	10	100	100

Tabela 2 Resultados da viremia de PRRSV: porcentagem de animais positivos, 14 e 28 dpv

Grupo	14 dpv	28 dpv
1	70	100
2 (controle positivo)	100	100

[0039] Pareceu que a sorologia, assim como os resultados de viremia para o vírus da PPRS da vacina de combinação, foi comparável à do controle positivo (Porcilis® PRRS como vacinação autônoma), tanto na dose mínima de proteção como na dose mais elevada. Estes dados indicam, assim, que o vírus da PRRS é capaz de sobreviver à incubação em uma vacina compreendendo imunógenos não replicantes em combinação de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino e Leptospira interrogans. Com base nestes dados, entende-se que uma vacina combinada (de duas vias) compreendendo imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae e o vírus da PRRS vivo atenuado também será segura e eficaz. Para esta vacina, imunógenos não replicantes do parvovirus porcino podem ser adicionados para fornecer também proteção contra uma infecção com o parvovirus porcino. Essa vacina de três vias também é entendida como segura e eficaz com base nos resultados atuais. Tudo isso oferece uma série de vacinas diferentes que permitem ajudar no fornecimento dos seguintes esquemas de vacinação para suínos, especificamente direcionados para melhorar o desempenho reprodutivo desses animais: uma vacinação básica, por exemplo, uma vacinação de reforço inicial, de um animal antes de sua primeira gestação (tipicamente entre 20 e 30 semanas de idade) com uma vacina de combinação compreendendo imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino e Leptospira interrogans, em que, se for

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 utilizado um esquema de reforço inicial, quer a vacina inicial ou de reforço é combinada com o vírus da PRRS vivo atenuado de acordo com a presente invenção (o componente de PRRS da vacina em qualquer caso sendo usado como vacina de dose única). Uma vacinação de reforço inicial podería, por exemplo, ocorrer às 20 e 24 semanas de idade. Esta vacinação básica pode então ser repetida anualmente contra a infecção por ery/parvo/lepto/prrs com uma dose única da vacina de combinação de acordo com a presente invenção, ou com uma vacina de combinação em que, dependendo das circunstâncias, um ou mais dos antígenos não estão presentes (por exemplo, nenhum antígeno leptospira se se não se espera que uma fazenda esteja infectada com qualquer bactéria leptospira). Em relação à PRRS, dependendo da pressão de infecção da PRRS na fazenda, a vacinação pode ser repetida a cada 6 meses (ou mesmo a cada 3 meses), se considerado necessário. Tal revacinação em um intervalo mais curto pode ser feita com uma vacina de combinação compreendendo próximo do vírus da PRRS vivo atenuado, imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae. Para o parvovirus e a leptospira, uma revacinação a curto prazo é normalmente considerada desnecessária, uma vez que as vacinas contra leptospira e parvo podem ter uma duração de imunidade de cerca de um ano em suínos.

[0040] Em conclusão, pode-se dizer que a segurança, bem como a eficácia da nova vacina de combinação é suficiente. Dados sorológicos adicionais (em particular, para bactérias leptospira e parvovirus) e/ou dados de desafio (em particular, para o vírus da PRRS e Erysipelothrix rhusiopathiae) podem ser usados para confirmar a eficácia da nova vacina combinada para cada um dos patógenos correspondentes.

Claims

1. Uma vacina compreendendo, em combinação, imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans e o vírus da PRRS vivo atenuado, e um veículo farmaceuticamente aceitável.

2. Uma vacina para uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizada em que os imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans são patógenos inativados de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino e Leptospira interrogans respectivamente.

3. Uma vacina para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada em que o patógeno Leptospira interrogans compreende bactérias do sorogrupo Pomona e, opcionalmente, bactérias de pelo menos um dos sorogrupos Tarassovi, Australis, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae e Canicola, em que as bactérias do sorogrupo Australis são, em particular, bactérias do sorovar Bratislava.

4. Uma vacina compreendendo, em combinação, imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans e o vírus da PRRS vivo atenuado, e um veículo farmaceuticamente aceitável, para uso em um método para o tratamento profilático de um suíno contra uma infecção com Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans e vírus da PRRS

5. Uma vacina para uso de acordo com a reivindicação 4, caracterizada em que imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans são patógenos inativos de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans respectivamente.

6. Uma vacina para uso de acordo com a reivindicação 4 ou 5, caracterizada em que o patógeno Leptospira interrogans compreende bactéria

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 do sorogrupo bactérias do sorogrupo Pomona e, opcionalmente, bactérias de pelo menos um dos sorogrupos Tarassovi, Australis, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae e Canicola, em que as bactérias do sorogrupo Australis são, em particular, bactérias do sorovar Bratislava.

7. Uma vacina para uso de acordo com a reivindicação 4 ou 6, caracterizada em que a vacina é administrada como uma dose única em relação ao tratamento contra uma infecção com o vírus da PRRS.

8. Uma vacina para uso de acordo com a reivindicação 4 ou 7, caracterizada em que a vacina é administrada por via parenteral.

9. Uma vacina para uso de acordo com a reivindicação 4 ou 8, caracterizada em que a vacina é administrada por via intramuscular.

10. Um método que constitui uma vacina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado em que o método compreende uma mistura de uma composição compreendendo vírus PRRS vivo atenuado com uma segunda composição compreendendo os imunógenos de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino e Leptospira interrogans e um veículo farmaceuticamente aceitável.

11. Um método de acordo com a reivindicação 10, caracterizado em que a primeira composição compreende vírus liofilizado PRRS.

12. Um método de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 ou 11, caracterizado em que a mistura ocorre no máximo a 24 horas antes da vacina ser administrada a um suíno.

13. Um método para o tratamento profilático de um suíno contra uma infecção com Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans e vírus da PRRS, compreendendo a administração da vacina como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 a um suíno.

14. Um método de acordo com a reivindicação 13, em que a vacina é

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Tradução Doc. Prioridade EP 16201122.5 administrada como dose única em relação ao tratamento contra uma infecção com o vírus da PRRS.

15. Uma combinação de uma primeira vacina compreendendo imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino e Leptospira interrogans, e um veículo farmaceuticamente aceitável, e uma segunda vacina compreendendo vírus liofilizado da PRRS vivo atenuado, e uma instrução de que a segunda vacina pode ser misturada com a primeira vacina para formar uma vacina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

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REIVINDICAÇÕES

1. Uma vacina compreendendo, em combinação, imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans e o vírus da PRRS vivo atenuado, e um veículo farmaceuticamente aceitável, para uso em um método para o tratamento profilático de um suíno contra uma infecção com Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans e vírus da PRRS, caracterizada em que a vacina é administrada em uma dose única em relação ao tratamento contra uma infecção com o vírus da PRRS.

3. Uma vacina para uso de acordo as reivindicações 1 ou 2, caracterizada em que o patógeno Leptospira interrogans compreende bactérias do sorogrupo Pomona e, opcionalmente, bactérias de pelo menos um dos sorogrupos Tarassovi, Australis, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae e Canicola, em que as bactérias do sorogrupo Australis são, em particular, bactérias do sorovar Bratislava.

4. Uma vacina para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada em que a vacina é administrada por via parenteral.

5. Uma vacina para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada em que a vacina é administrada por via intramuscular.

6. Um método para o tratamento profilático de um suíno contra uma infecção com Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans e vírus da PRRS, compreendendo a administração de uma vacina compreendendo, em combinação, imunógenos não replicantes de Erysipelothrix

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2/2 rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans e o virus da PRRS vivo atenuado e um veículo farmaceuticamente aceitável, caracterizado em que a vacina é administrada como uma dose única em relação ao tratamento contra uma infecção com o vírus da PRRS.

7. Uma combinação de uma primeira vacina compreendendo imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino e Leptospira interrogans, e um veículo farmaceuticamente aceitável, e uma segunda vacina compreendendo vírus liofilizado da PRRS vivo atenuado, e uma instrução de que a segunda vacina pode ser misturada com a primeira vacina para formar uma vacina compreendendo, em combinação, imunógenos não replicantes de Erysipelothrix rhusiopathiae, parvovirus porcino, Leptospira interrogans e o vírus da PRRS vivo atenuado, e um veículo farmaceuticamente aceitável, em que a vacina é administrada em uma dose única em relação ao tratamento contra uma infecção com o vírus da PRRS.