BR112018071026B1 - Polímero fluorescente solúvel em água e método para detectar um analito de uma amostra - Google Patents

Polímero fluorescente solúvel em água e método para detectar um analito de uma amostra Download PDF

Info

Publication number
BR112018071026B1
BR112018071026B1 BR112018071026-1A BR112018071026A BR112018071026B1 BR 112018071026 B1 BR112018071026 B1 BR 112018071026B1 BR 112018071026 A BR112018071026 A BR 112018071026A BR 112018071026 B1 BR112018071026 B1 BR 112018071026B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
polymer
group
independently
hetero
independently selected
Prior art date
Application number
BR112018071026-1A
Other languages
English (en)
Other versions
BR112018071026A2 (pt
Inventor
Arunkumar Easwaran
Sergei Gulnik
Original Assignee
Beckman Coulter, Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beckman Coulter, Inc filed Critical Beckman Coulter, Inc
Publication of BR112018071026A2 publication Critical patent/BR112018071026A2/pt
Publication of BR112018071026B1 publication Critical patent/BR112018071026B1/pt

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G61/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G61/12—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule
    • C08G61/122—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule derived from five- or six-membered heterocyclic compounds, other than imides
    • C08G61/123—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule derived from five- or six-membered heterocyclic compounds, other than imides derived from five-membered heterocyclic compounds
    • C08G61/126—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule derived from five- or six-membered heterocyclic compounds, other than imides derived from five-membered heterocyclic compounds with a five-membered ring containing one sulfur atom in the ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B67/00—Influencing the physical, e.g. the dyeing or printing properties of dyestuffs without chemical reactions, e.g. by treating with solvents grinding or grinding assistants, coating of pigments or dyes; Process features in the making of dyestuff preparations; Dyestuff preparations of a special physical nature, e.g. tablets, films
    • C09B67/0097—Dye preparations of special physical nature; Tablets, films, extrusion, microcapsules, sheets, pads, bags with dyes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G61/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G61/02—Macromolecular compounds containing only carbon atoms in the main chain of the macromolecule, e.g. polyxylylenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G61/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G61/12—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule
    • C08G61/122—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule derived from five- or six-membered heterocyclic compounds, other than imides
    • C08G61/123—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule derived from five- or six-membered heterocyclic compounds, other than imides derived from five-membered heterocyclic compounds
    • C08G61/124—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule derived from five- or six-membered heterocyclic compounds, other than imides derived from five-membered heterocyclic compounds with a five-membered ring containing one nitrogen atom in the ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B69/00—Dyes not provided for by a single group of this subclass
    • C09B69/10—Polymeric dyes; Reaction products of dyes with monomers or with macromolecular compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
    • C09K11/06—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing organic luminescent materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/10—Definition of the polymer structure
    • C08G2261/11—Homopolymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/10—Definition of the polymer structure
    • C08G2261/12—Copolymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/10—Definition of the polymer structure
    • C08G2261/12—Copolymers
    • C08G2261/124—Copolymers alternating
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/10—Definition of the polymer structure
    • C08G2261/14—Side-groups
    • C08G2261/142—Side-chains containing oxygen
    • C08G2261/1424—Side-chains containing oxygen containing ether groups, including alkoxy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/10—Definition of the polymer structure
    • C08G2261/14—Side-groups
    • C08G2261/143—Side-chains containing nitrogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/10—Definition of the polymer structure
    • C08G2261/14—Side-groups
    • C08G2261/145—Side-chains containing sulfur
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/10—Definition of the polymer structure
    • C08G2261/14—Side-groups
    • C08G2261/145—Side-chains containing sulfur
    • C08G2261/1452—Side-chains containing sulfur containing sulfonyl or sulfonate-groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/10—Definition of the polymer structure
    • C08G2261/16—End groups
    • C08G2261/164—End groups comprising organic end groups
    • C08G2261/1644—End groups comprising organic end groups comprising other functional groups, e.g. OH groups, NH groups, COOH groups or boronic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/10—Definition of the polymer structure
    • C08G2261/16—End groups
    • C08G2261/164—End groups comprising organic end groups
    • C08G2261/1646—End groups comprising organic end groups comprising aromatic or heteroaromatic end groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/30—Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain
    • C08G2261/31—Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain incorporating aromatic structural elements in the main chain
    • C08G2261/314—Condensed aromatic systems, e.g. perylene, anthracene or pyrene
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/30—Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain
    • C08G2261/31—Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain incorporating aromatic structural elements in the main chain
    • C08G2261/314—Condensed aromatic systems, e.g. perylene, anthracene or pyrene
    • C08G2261/3142—Condensed aromatic systems, e.g. perylene, anthracene or pyrene fluorene-based, e.g. fluorene, indenofluorene, or spirobifluorene
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/30—Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain
    • C08G2261/33—Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain incorporating non-aromatic structural elements in the main chain
    • C08G2261/332—Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain incorporating non-aromatic structural elements in the main chain containing only carbon atoms
    • C08G2261/3327—Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain incorporating non-aromatic structural elements in the main chain containing only carbon atoms alkene-based
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/30—Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain
    • C08G2261/34—Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain incorporating partially-aromatic structural elements in the main chain
    • C08G2261/342—Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain incorporating partially-aromatic structural elements in the main chain containing only carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/40—Polymerisation processes
    • C08G2261/41—Organometallic coupling reactions
    • C08G2261/411—Suzuki reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/50—Physical properties
    • C08G2261/52—Luminescence
    • C08G2261/522—Luminescence fluorescent
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/90—Applications
    • C08G2261/94—Applications in sensors, e.g. biosensors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/14—Macromolecular compounds
    • C09K2211/1408—Carbocyclic compounds
    • C09K2211/1416—Condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/14—Macromolecular compounds
    • C09K2211/1441—Heterocyclic
    • C09K2211/1491—Heterocyclic containing other combinations of heteroatoms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Polyoxymethylene Polymers And Polymers With Carbon-To-Carbon Bonds (AREA)
  • Polyethers (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Materials By The Use Of Fluid Adsorption Or Reactions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)

Abstract

A presente invenção refere-se a complexos macromoleculares fotoativos solúveis em água e a métodos para detectar um analito em uma amostra mediante o uso de um agente de ligação conjugado a uma macromolécula fotoativa solúvel em água.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO
[001] Esta invenção se refere aos complexos e métodos para de tectar analitos em uma amostra.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] Os polímeros fluorescentes solúveis em água podem ser usados em uma variedade de aplicações biológicas mediante a geração de sinais que podem ser monitorados em tempo real e fornecer métodos simples e rápidos para a detecção de alvos e eventos biológicos.
[003] O brilho de um corante é uma contribuição genérica a partir do coeficiente de extinção (ε, medida da quantidade de luz absorvida em um comprimento de onda específico) e do rendimento quântico de fluorescência (Φ, medida da luz emitida sob a forma de radiação a partir de seu estado singlete excitado). A maioria dos corantes violeta orgânicos relatados como cumarina, BODIPY, cianina, esquaraína, etc., são moléculas individuais e apresenta um coeficiente de extinção relativamente baixo na faixa de 10.000 a 70.000 M-1cm-1 a 405 nm. Demonstrou-se que as moléculas com múltiplos cromóforos exibem maior ε valor devido à contribuição total de diferentes cromóforos. Há vários relatos sobre abordagens da cadeia principal dendriméricas e polimé- ricas onde uma única molécula contém múltiplos cromóforos.
[004] Entretanto, muitos dos corantes poliméricos anteriormente relatados são altamente hidrofóbicos e são usados para aplicações materiais como diodos emissores de luz, células solares, etc. Consequentemente, muitos corantes poliméricos não são úteis sob condições aquosas devido à baixa solubilidade, brilho e ampliação dos espectros. Apenas alguns relatórios lidam com polímeros fluorescentes solúveis em água para aplicações biológicas que são excitados com um laser de 405 nm e 355 nm. Portanto, a identificação de novos núcleos poliméricos é necessária para expandir o arsenal de corantes poliméricos solúveis em água para aplicações biológicas, inclusive para a detecção de analitos.
[005] A presente invenção aborda essas e outras desvantagens dos complexos e métodos da técnica anterior para detectar analitos em uma amostra.
BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[006] A presente invenção fornece, em geral, novos polímeros fluorescentes solúveis em água e métodos para detectar analitos em uma amostra com o uso de complexos que compreendem os polímeros fluorescentes conjugados a agentes de ligação.
[007] Em uma primeira modalidade, a presente invenção apre senta um polímero fluorescente solúvel em água que tem a estrutura da fórmula I:
Figure img0001
[008] em que
[009] cada X é independentemente selecionado do grupo que consiste em um C e Si;
[0010] cada Y é independentemente selecionado do grupo que consiste em uma ligação, CR1R2 e SiR1R2;
[0011] quando Y é uma ligação, X é diretamente ligado a ambos os anéis;
[0012] cada R1 é independentemente selecionado do grupo que consiste em polietilenoglicol (PEG), sal de alquilamônio, sal de alquilo- xiamônio, sal de oligoéter amônio, sal de sulfonato de alquila, sal de sulfonato de alcóxi, sal de sulfonato de oligoéter, oligoéter sulfonamido
Figure img0002
[0013] cada R2 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, alquila, alqueno, alquino, cicloalquila, haloalquila, alcó- xi, (hetero)arilóxi, (hetero)arilamino, PEG, sal de alquilamônio, sal de alquiloxiamônio, sal de oligoéter amônio, sal de sulfonato de alquila, sal de sulfonato de alcóxi, sal de sulfonato de oligoéter, oligoéter sul- fonamido e
Figure img0003
[0014] cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, alquila, alqueno, alquino, cicloalquila, haloalquila, alcó- xi, (hetero)arilóxi, arila, (hetero)arilamino e PEG;
[0015] cada Z é independentemente selecionado do grupo que consiste em C, O e N;
[0016] cada Q é independentemente selecionado do grupo que consiste em uma ligação, NH, NR4 e CH2;
[0017] cada M é, independentemente, uma unidade ligante rica em elétrons capaz de alterar o band gap de polímero e é distribuída de maneira uniforme ou aleatória ao longo da cadeia principal do polímero e é, cada uma, independentemente selecionada do grupo que consiste
Figure img0004
[0018] em que,
[0019] cada R4 é um grupo lateral não iônico capaz de conferir so lubilidade em água em excesso de 10 mg/mL e é, cada um, indepen-dentemente selecionado do grupo que consiste em halogênio, hidroxi- la, alquila C1-C12, alqueno C2-C12, alquino C2-C12, cicloalquila C3-C12, haloalquila C1-C12, alcóxi C1-C12, (hetero)arilóxi C2-C18, (hete- ro)arilamino C2-C18, (CH2)x'(OCH2-CH2)y'OCH3, onde cada x' é inde-pendentemente um número inteiro de 0 a 20; cada y' é, independen-temente, um número inteiro de 0 a 50, e um grupo (hetero)arila C2-C18;
[0020] cada ligante opcional L é um grupo arila ou heterorila distri buído de maneira uniforme ou aleatória ao longo da cadeia principal do polímero e é substituído com uma ou mais cadeias pendentes terminadas com um grupo funcional selecionado do grupo consistindo em amina, carbamato, ácido carboxílico, carboxilato, maleimida, éster ativado, N-hidroxissuccinimidila, hidrazina, hidrazida, hidrazona, azida, alquino, aldeído, tiol e seus grupos protetores para conjugação com outro substrato, corante aceptor, molécula ou agente de ligação;
[0021] cada G1 e G2 são cada um independentemente seleciona dos a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, alquino, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída, arila substituída com halogênio, silila, sal de diazônio, triflato, acetilóxi, azida, sulfonato, fosfato, arila substituída com ácido borônico, arila substituída com éster borônico, éster borônico, ácido borônico, di- hidrofenantreno opcionalmente substituído (DHP), fluoreno opcionalmente substituído, arila ou heteroarila substituída com uma ou mais cadeias pendentes terminadas com um grupo funcional selecionado dentre amina, carbamato, ácido carboxílico, carboxilato, maleimida, éster ativado, N-hidroxissuccinimidila, hidrazina, hidrazida, hidrazona, azida, alquino, aldeído, tiol e grupos protegidos dos mesmos para conjugação com um substrato, ou um agente de ligação;
[0022] a, c e d definem a % em mol de cada unidade dentro da estrutura, em que cada um pode ser uniformemente ou aleatoriamente repetido, e onde a é uma % em mol de 10 a 100%, c é uma % em mol de 0 a 90%, e cada d é uma % em mol de 0 a 25%;
[0023] cada b é independentemente 0 ou 1;
[0024] m é um número inteiro de 1 a cerca de 10.000; e
[0025] cada n é independentemente um número inteiro de 1 a 20.
[0026] Em alguns casos, o polímero tem a estrutura da fórmula II:
Figure img0005
[0027] Em alguns casos, o polímero tem a estrutura da fórmula III:
Figure img0006
[0028] em que cada f é independentemente um número inteiro de 0 a 50 e cada R5 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, alquila C1-C12, alqueno C2-C12, alquino C2-C12, cicloalquila C3-C12, haloalquila C1-C12, alcóxi C1-C12, (hetero)arilóxi C2-C18, (hete- ro)arilamino C2-C18 e alcóxi C1-C12.
[0029] Em alguns casos o polímero tem a estrutura da fórmula IV:
Figure img0007
[0030] Em alguns casos, o polímero tem a estrutura da fórmula V:
Figure img0008
[0031] Em alguns casos, o polímero é um copolímero e tem a es trutura da Fórmula VI:
Figure img0009
[0032] em que g e a correspondem, juntos, a uma % em mol de 10 a 100%.
[0033] Em alguns casos, o polímero é um copolímero e tem a es- trutura da Fórmula VII:
Figure img0010
[0034] em que cada g e a correspondem, juntos, a uma % em mol de 10 a 100%; e cada f é independentemente um número inteiro de 0 a 50 e cada R5 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, alquila C1-C12, alqueno C2-C12, alquino C2-C12, cicloalquila C3-C12, haloalquila C1-C12, alcóxi C1-C12, (hetero)arilóxi C2-C18, (hete- ro)arilamino C2-C18 e alcóxi C1-C12.
[0035] Em alguns casos, o polímero é um copolímero que tem a estrutura da fórmula VIII:
Figure img0011
[0036] Em alguns casos, o polímero é um copolímero e tem a es- trutura da fórmula IX:
Figure img0012
[0037] Em algumas modalidades, L é, cada um, independente-
Figure img0013
Figure img0014
[0038] em que,
[0039] cada R6 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, OH, SH, NHCOO-t-butila, (CH2)nCOOH, (CH2)nCOOCH3, (CH2)nNH2, (CH2)nNH-(CH2)n-CH3, (CH2)nNHCOOH, (CH2)nNHCO- (CH2)n-CO-(CH2)n-CH3, (CH2)nNHCOO-(CH2)n-CH3, (CH2)nNHCOOC(CH3)3, (CH2)nNHCO-cicloalquila (C3-C12), (CH2)nNHCO(CH2CH2O)f, (CH2)nNHCO(CH2)nCOOH, (CH2)nNHCO(CH2)nCOO(CH2)nCH3, (CH2)n(OCH2CH2)fOCH3, N-maleimida, halogênio, alqueno C2-C12, al- quino C2-C12, cicloalquila C3-C12, haloalquila C1-C12, (hetero)arila C1C12, (hetero)arilamino C1-C12 e benzila opcionalmente substituída com um ou mais halogênio, hidroxila, alcóxi C1-C12 ou (OCH2CH2)fOCH3;
[0040] cada f é independentemente um número inteiro de 0 a 50; e
[0041] cada n é independentemente um número inteiro de 1 a 20.
[0042] Em algumas modalidades, G1 e G2 são, cada um, indepen dentemente selecionados a partir do grupo que consiste em di- hidrofenantreno (DHP) opcionalmente substituído, fluoreno opcionalmente substituído, arila substituída com uma ou mais cadeias pendentes terminadas com um grupo funcional e uma heteroarila substituída com uma ou mais cadeias pendentes terminadas com um grupo funcional.
[0043] Em algumas modalidades, G1 e G2 são, cada um, indepen- dentemente selecionados a partir do grupo que consiste em
Figure img0015
[0044] em que,
[0045] cada R6 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, OH, SH, NHCOO-t-butila, (CH2)nCOOH, (CH2)nCOOCH3, (CH2)nNH2, (CH2)nNH-(CH2)n-CH3, (CH2)nNHCOOH, (CH2)nNHCO- (CH2)n-CO-(CH2)n-CH3, (CH2)nNHCOO-(CH2)n-CH3, (CH2)nNHCOOC(CH3)3, (CH2)nNHCO-cicloalquila (C3-C12), (CH2)nNHCO(CH2CH2O)f, (CH2)nNHCO(CH2)nCOOH, (CH2)nNHCO(CH2)nCOO(CH2)nCH3, (CH2)n(OCH2CH2)fOCH3, N-maleimida, halogênio, alqueno C2-C12, al- quina C2-C12, cicloalquila C3-C12, haloalquila C1-C12, (hetero)arila C1C12, (hetero)arilamino C1-C12 e benzila opcionalmente substituída com um ou mais halogênio, hidroxila, alcóxi C1-C12 ou (OCH2CH2)fOCH3;
[0046] cada f é independentemente um número inteiro de 0 a 50; e
[0047] cada n é independentemente um número inteiro de 1 a 20.
[0048] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método para detectar um analito em uma amostra que compreende:
[0049]
[0050] conjugado a um polímero solúvel em água que tem a estrutura da fórmula I:
Figure img0016
[0051] em que
[0052] cada X é independentemente selecionado do grupo que consiste em um C e Si;
[0053] cada Y é independentemente selecionado do grupo que consiste em uma ligação, CR1R2 e SiR1R2;
[0054] quando Y é uma ligação, X é diretamente ligado a ambos os anéis;
[0055] consiste em sal de alquilamônio, sal de alquiloxiamônio, sal de oligoé- ter amônio, sal de sulfonato de alquila, sal de sulfonato de alcóxi, sal de sulfonato de oligoéter, oligoéter sulfonamido e
Figure img0017
[0056] cada R2 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, alquila, alqueno, alquino, cicloalquila, haloalquila, alcó- xi, (hetero)arilóxi, (hetero)arilamino, PEG, sal de alquilamônio, sal de alquiloxiamônio, sal de oligoéter amônio, sal de sulfonato de alquila, sal de sulfonato de alcóxi, sal de sulfonato de oligoéter, oligoéter sul- fonamido e
Figure img0018
[0057] cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, alquila, alqueno, alquino, cicloalquila, haloalquila, alcó- xi, (hetero)arilóxi, arila, (hetero)arilamino e PEG;
[0058] cada Z é independentemente selecionado do grupo que consiste em C, O e N;
[0059] cada Q é independentemente selecionado do grupo que consiste em uma ligação, NH, NR4 e CH2;
[0060] cada M é, independentemente, uma unidade ligante rica em elétrons capaz de alterar o band gap de polímero e é distribuída de maneira uniforme ou aleatória ao longo da cadeia principal do polímero e é, cada uma, independentemente selecionada do grupo que consiste em
Figure img0019
Figure img0020
[0061] em que,
[0062] cada R4 é um grupo lateral não iônico capaz de conferir so lubilidade em água em excesso de 10 mg/mL e é, cada um, indepen-dentemente selecionado do grupo que consiste em halogênio, hidroxi- la, alquila C1-C12, alqueno C2-C12, alquino C2-C12, cicloalquila C3-C12, haloalquila C1-C12, alcóxi C1-C12, (hetero)arilóxi C2-C18, (hete- ro)arilamino C2-C18, (CH2)x'(OCH2-CH2)y'OCH3, onde cada x' é inde-pendentemente um número inteiro de 0 a 20; cada y' é, independen-temente, um número inteiro de 0 a 50, e um grupo (hetero)arila C2-C18;
[0063] cada ligante opcional L é um grupo arila ou heterorila distri buído de maneira uniforme ou aleatória ao longo da cadeia principal do polímero e é substituído com uma ou mais cadeias pendentes terminadas com um grupo funcional selecionado do grupo consistindo em amina, carbamato, ácido carboxílico, carboxilato, maleimida, éster ativado, N-hidroxissuccinimidila, hidrazina, hidrazida, hidrazona, azida, alquino, aldeído, tiol e seus grupos protetores para conjugação com outro substrato, corante aceptor, molécula ou agente de ligação;
[0064] G1 e G2 são cada um independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, alquino, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída, arila substituída com halogênio, silila, sal de diazônio, triflato, acetilóxi, azi- da, sulfonato, fosfato, arila substituída com ácido borônico, arila substi-tuída com éster borônico, éster borônico, ácido borônico, di- hidrofenantreno opcionalmente substituído (DHP), fluoreno opcionalmente substituído, arila ou heteroarila substituída com uma ou mais cadeias pendentes terminadas com um grupo funcional selecionado dentre amina, carbamato, ácido carboxílico, carboxilato, maleimida, éster ativado, N-hidroxissuccinimidila, hidrazina, hidrazida, hidrazona, azida, alquino, aldeído, tiol e grupos protegidos dos mesmos para conjugação com um substrato ou um agente de ligação;
[0065] a, c e d definem a % em mol de cada unidade dentro da estrutura, em que cada um pode ser uniformemente ou aleatoriamente repetido, e onde a é uma % em mol de 10 a 100%, c é uma % em mol de 0 a 90%, e
[0066] cada d é uma % em mol de 0 a 25%;
[0067] cada b é independentemente 0 ou 1;
[0068] m é um número inteiro de 1 a cerca de 10.000; e
[0069] cada n é independentemente um número inteiro de 1 a 20; e
[0070] em que o agente de ligação é capaz de interagir com o ana- lito ou uma biomolécula associada alvo.
[0071] Em algumas modalidades, o método compreende ainda, aplicar uma fonte de luz à amostra que pode excitar o polímero; e de-tectar se a luz é emitida a partir do complexo polímero conjugado.
[0072] Em algumas modalidades, o agente de ligação é uma pro teína, peptídeo, ligante de afinidade, anticorpo, fragmento de anticorpo, açúcar, lipídio, ácido nucleico ou um aptâmero. Em algumas moda- lidades, o agente de ligação é um anticorpo.
[0073] Em algumas modalidades, o método é configurado para citometria de fluxo. Em algumas modalidades, o agente de ligação é ligado a um substrato. Em algumas modalidades, o analito é uma pro-teína expressa sobre uma superfície celular.
[0074] Em algumas modalidades, o método é configurado como um imunoensaio. Em algumas modalidades, o método compreende ainda fornecer agentes de ligação adicionais para detectar analitos adicionais simultaneamente.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0075] A Figura 1 mostra uma comparação entre os espectros de emissão de fluorescência do fluoreno (FF), di-hidrofenantreno (DD) e polímeros de fluoreno-DHP (DF).
[0076] A Figura 2 mostra os espectros de absorção do polímero FF e do polímero DD. O gráfico mostra a absorção do polímero DD (curva preta) a 390 e 410 nm, enquanto que o polímero FF (curva cinza) mostra os máximos em torno de 401 nm. As amostras foram medidas sob diferentes concentrações.
[0077] A Figura 3 mostra a análise por citometria de fluxo do san gue total lisado marcado com a CD4 anti-humana marcada com novos polímeros e a CD4 marcada com azul pacífico. A intensidade de sinal positivo dos corantes poliméricos foi quase 5 vezes mais alta que a do azul pacífico.
[0078] A Figura 4 mostra os polímeros da presente invenção que apresentam certas características físicas e químicas de absorção, fluo-rescência, brilho, peso molecular, polidispersidade, razão entre corante e proteína quando conjugados a um anticorpo, etc., A faixa preferencial desses parâmetros é mostrada nesta tabela.
[0079] A Figura 5 mostra os espectros de excitação e emissão dos polímeros em tandem. A excitação foi realizada no comprimento de onda máximo do polímero (405 nm) e as emissões foram observadas a partir dos vários corantes aceptores ligados à estrutura. Corante 1 - FITC, Corante 2 - Cy3B, Corante 3 - Cy55.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO I. Geral
[0080] A presente invenção fornece novos polímeros fluorescentes solúveis em água e métodos para detectar analitos em uma amostra usando complexos que compreendem os polímeros fluorescentes con-jugados a agentes de ligação. Os polímeros conjugados solúveis em água da presente invenção demonstram brilho significativamente maior em comparação com os outros corantes.
II. Definições
[0081] As abreviações usadas na presente invenção têm seus sig nificados convencionais dentro das técnicas químicas e biológicas.
[0082] Para uso na presente invenção, o termo "amônio" se refere a um cátion com a fórmula NHR3+, onde cada grupo R, independen-temente, é hidrogênio ou um grupo alquila, arila, aralquila ou alcóxi substituído ou não substituído. De preferência, cada um dos grupos R é hidrogênio.
[0083] Para uso na presente invenção, o termo "oligoéter" significa um oligômero contendo unidades de repetição estruturais tendo uma funcionalidade éter. Para uso na presente invenção, entende-se que um "oligômero" significa uma molécula que contém uma ou mais unidades de repetição estruturais identificáveis com fórmula igual ou diferente.
[0084] O termo "grupo funcional sulfonato" ou "sulfonato," como usado na presente invenção, se refere tanto ao ânion sulfonato livre (- S(=O)2O-) como aos sais dos mesmos. Portanto, o termo sulfonato abrange sais de sulfonato como sulfonato de sódio, lítio, potássio e amônio.
[0085] O termo "sulfonamido", para uso na presente invenção, se refere a um grupo de fórmula -SO2NR-, em que R é hidrogênio, alquila ou arila.
[0086] O termo "alquila", para uso na presente invenção, se refere a um radical alifático saturado, linear ou ramificado, que tem o número de átomos de carbono indicado. Por exemplo, alquila C1-C6 inclui, mas não se limita, a metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, pentila, isopentila, hexila, etc. Outros grupos alquila incluem, mas não se limitam, a heptila, octila, nonila, decila, etc. Alquila pode incluir qualquer número de carbonos, como 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 1-8, 1-9, 1-10, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 3-4, 3-5, 3-6, 4-5, 4-6 e 5-6. O grupo alquila é tipicamente monovalente, mas pode ser divalente, como quando o grupo alquila une duas porções.
[0087] O termo "cicloalquila", para uso na presente invenção, se refere a um conjunto de anel policíclico saturado ou parcialmente insa- turado, monocíclico, bicíclico fundido ou policíclico em ponte contendo de 3 a 12 átomos de anel, ou o número de átomos indicados nos anéis monocíclicos incluem, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopenti- la, ciclo-hexila e ciclo-octila. Os anéis bicíclicos e policíclicos incluem, por exemplo, norbornano, deca-hidronaftaleno e adamantano. Por exemplo, cicloalquila C3-8 inclui ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-octila e norbornano.
[0088] O termo "haloalquila", como usado na presente invenção, se refere a alquila, conforme definido acima, em que alguns ou todos os átomos de hidrogênio são substituídos por átomos de halogênio. O halogênio (halo), de preferência, representa cloro ou flúor, mas pode também ser bromo ou iodo. Por exemplo, haloalquila inclui trifluorome- tila, flourometila, 1,2,3,4,5-pentafluoro-fenila, etc. O termo "perfluoro" define um composto ou radical que tem ao menos dois hidrogênios disponíveis substituídos com flúor. Por exemplo, perfluorofenila se re- fere a 1,2,3,4,5-pentafluorofenila, perfluorometano se refere a 1,1,1- trifluorometila e perfluorometóxi se refere a 1,1,1-trifluorometóxi.
[0089] Para uso na presente invenção, o termo "halogênio" se re fere a flúor, cloro, bromo e iodo.
[0090] O termo "alcóxi", como usado aqui, se refere a um grupo alquila, conforme definido acima, tendo um átomo de oxigênio que liga o grupo alquila ao ponto de ligação. Os grupos alcóxi incluem, por exemplo, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, butóxi, 2-butóxi, isobutóxi, sec-butóxi, terc-butóxi, pentóxi, hexóxi, etc. Os grupos alcóxi podem ser ainda substituídos com uma variedade de substituintes descritos na presente invenção. Por exemplo, os grupos alcóxi podem ser subs-tituídos por halogênios para formar um grupo "haloalcóxi".
[0091] O termo "alqueno", como usado na presente invenção, se refere a um hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada, tendo pelo menos uma ligação dupla. Exemplos de grupos alqueno incluem, mas não se limitam, a vinila, propenila, isopropenila, 1-butenila, 2-butenila, isobutenila, butadienila, 1-pentenila, 2-pentenila, isopentenila, 1,3- pentadienila, 1,4-pentadienila, 1-hexenila, 2-hexenila, 3-hexenila, 1,3- hexadienila, 1,4-hexadienila, 1,5-hexadienila, 2,4-hexadienila ou 1,3,5- hexatrienila. O grupo alquenil é tipicamente monovalente, mas pode ser divalente, como quando o grupo alquenila une duas porções.
[0092] O termo "alquina", como usado na presente invenção, se refere a um hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada, tendo pelo menos uma ligação tripla. Exemplos de grupos alquinila incluem, mas não se limitam a, acetilenila, propinila, 1-butinila, 2-butinila, isobutinila, sec-butinila, butadi-inila, 1-pentinila, 2-pentinila, isopentinila, 1,3- pentadi-inila, 1,4-pentadi-inila, 1-hexinila, 2-hexinila, 3-hexinila, 1,3- hexadi-inila, 1,4-hexadi-inila, 1,5-hexadi-inila, 2,4-hexadi-inila ou 1,3,5- hexatri-inila. O grupo alquinila é tipicamente monovalente, mas pode ser divalente, como quando o grupo alquinila une duas porções.
[0093] O termo "arila", como usado na presente invenção, se refe re a um anel monocíclico ou bicíclico fundido, tricíclico ou maior, con-tendo 6 a 16 átomos de carbono no anel. Por exemplo, arila pode ser fenila, benzila ou naftila, de preferência fenila. "Arileno" significa um radical divalente derivado de um grupo arila. Os grupos arila podem ser mono, di ou trissubstituídos por um, dois ou três radicais selecionados de alquila, alcóxi, arila, hidróxi, halogênio, ciano, amino, amino- alquila, trifluorometila, alquilenodióxi e oxialquileno C2-C3; todos os quais são opcionalmente ainda substituídos, por exemplo, conforme definido anteriormente neste documento; ou 1 ou 2-naftila; ou 1 ou 2- fenantrenoíla. Alquilenodióxi é um substituto divalente ligado a dois átomos de carbono adjacentes de fenila, por exemplo, metilenodióxi ou etilenodióxi. O oxialquileno C2-C3 também é um substituinte divalente conectado a dois átomos de carbono adjacentes de fenila, por exemplo, oxietileno ou oxipropileno. Um exemplo para a oxialquileno C2-C3- fenila é 2,3-di-hidrobenzofuran-5-ila.
[0094] São preferidos como arila a naftila, fenila ou fenila mono ou dissubstituída por alcóxi, fenila, halogênio, alquila ou trifluorometila, especialmente fenila ou fenila mono ou dissubstituída por alcóxi, halo- gênio ou trifluorometila, e em particular fenila.
[0095] O termo "arilóxi", como usado na presente invenção, se re fere a um grupo O-arila, em que arila é conforme definida acima. Um grupo arilóxi pode ser não substituído ou substituído com um ou dois substituintes adequados. O termo "fenóxi" se refere a um grupo arilóxi, em que a porção arila é um anel fenila. O termo "heteroarilóxi", para uso na presente invenção, significa um grupo -O-heteroarila, em que a heteroarila é conforme definida abaixo. O termo "(hetero)arilóxi" é usado para indicar que a porção é um grupo arilóxi ou heteroarilóxi.
[0096] Os termos "polietilenoglicol" ou "PEG", para uso na presen te invenção, referem-se à família de polímeros lineares solúveis em água biocompatíveis com base na unidade monomérica de etilenogli- col.
[0097] O termo "heteroarila", como usado na presente invenção, se refere a um conjunto de anel monocíclico, bicíclico fundido ou tricí- clico aromático contendo 5 a 16 átomos no anel, onde de 1 a 4 átomos do anel são um heteroátomo, cada um sendo N, O ou S. Por exemplo, heteroarila inclui piridila, indolila, indazolila, quinoxalinila, quinolinila, isoquinolinila, benzotienila, benzofuranila, furanila, pirrolila, tiazolila, benzotiazolila, oxazolila, isoxazolila, triazolila, tetrazolila, pirazolila, imidazolila, tienila ou quaisquer outros radicais substituídos, especial-mente mono ou dissubstituídos, por exemplo, alquila, nitro ou halogê- nio. A piridila representa 2-, 3- ou 4-piridila, vantajosamente, 2- ou 3- piridila. Tienila representa 2- ou 3-tienila. Quinolinila representa, de preferência, 2-, 3- ou 4-quinolinila. Isoquinolinila representa, de prefe-rência, 1-, 3- ou 4-isoquinolinila. Benzopiranila, benzotiopiranila repre-senta, de preferência, 3-benzopiranila ou 3-benzotiopiranila, respecti-vamente. Tiazolila representa, de preferência, 2- ou 4-tiazolila, e com a máxima preferência, 4-tiazolila. Triazolila é, de preferência, 1-, 2- ou 5- (1,2,4-triazolila). Tetrazoila é, de preferência, 5-tetrazolila.
[0098] De preferência, a heteroarila é piridila, indolila, quinolinila, pirrolila, tiazolila, isoxazolila, triazolila, pirazolila, imidazolila, tienila, fu- ranila, benzotiazolila, benzofuranila, isoquinolinila, benzotienila, oxa- zolila, indazolila ou qualquer um dos radicais substituídos, especialmente mono ou dissubstituídos.
[0099] De modo similar, os substituintes para os grupos arila e he- teroarila são variados e selecionados dentre: -halogênio, -OR', - OC(O)R', -NR'R", -SR', -R', -CN, -NO2, -CO2R', -CONR'R", -C(O)R', -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR"C(O)2R',-NR'-C(O)NR"R"', -NH- C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -N3, -CH(Ph)2, perfluoroalcóxi (C1-C4) e perfluoroalquila (C1-C4), em um número na faixa de zero até o número total de valências abertas no sistema de anel aromático; e onde R', R" e R"' são in-dependentemente selecionados dentre hidrogênio, alquila (C1-C8) e heteroalquila, arila e heteroarila não substituída, (arila substituída)- alquila (C1-C4) e (arila substituída)oxialquila (C1-C4).
[00100] Dois dos substituintes em átomos adjacentes do anel arila ou heteroarila podem, opcionalmente, ser substituídos por um substi- tuinte com a fórmula -T-C(O)-(CH2)q-U-, em que T e U são, indepen-dentemente, -NH-, -O-, -CH2- ou uma ligação simples, e q é um número inteiro de 0 a 2. Alternativamente, dois dos substituintes nos átomos adjacentes do anel arila ou heteroarila podem ser opcionalmente subs-tituídos por um substituinte de fórmula -A-(CH2)r-B-, em que A e B são independentemente -CH2-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR'- ou uma ligação simples, e r é um número inteiro de 1 a 3. Uma das ligações simples do novo anel assim formado pode ser, opcionalmente, substituída por uma ligação dupla. Alternativamente, dois dos subs- tituintes nos átomos adjacentes do anel arila ou heteroarila podem ser opcionalmente substituídos por um substituinte de fórmula -(CH2)s-X- (CH2)t-, onde s e t são independentemente números inteiros de 0 a 3, e X é -O-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)2- ou -S(O)2NR'-. O substituinte R' em -NR' e -S(O)2NR'- é selecionado dentre hidrogênio ou alquila (C1-C6) não substituída.
[00101] O termo "(hetero)arilamino", como usado na presente invenção, se refere a um radical amina substituído por um grupo arila (por exemplo, -NH-arila). Um arilamino também pode ser um radical arila substituído com um grupo amina (por exemplo, -arila-NH2). Ari- laminos podem ser substituídos ou não substituídos.
[00102] O termo "amina", como usado na presente invenção, se refere a grupos alquila, conforme definidos nesse documento, com um ou mais grupos amino. Os grupos amino podem ser primários, secun-dários ou terciários. A alquilamina pode ser ainda substituída com um grupo hidroxila. As aminas úteis à presente invenção incluem, mas não se limitam a, etilamina, propilamina, isopropilamina, etilenodiamina e etanolamina. O grupo amino pode ligar a alquilamina ao ponto de ligação com o restante do composto, estar na posição ômega do grupo alquila ou ligar ao menos dois átomos de carbono do grupo alquila. Um versado na técnica reconhecerá que outras alquilaminas são úteis na presente invenção.
[00103] O termo "carbamato", como usado na presente invenção, se refere ao grupo funcional que tem a estrutura -NR"CO2R', onde R' e R" são independentemente selecionados dentre hidrogênio, alquila (C1-C8) e heteroalquila, arila e heteroarila não substituída, (arila não substituída)-alquila (C1-C4) e (arila não substituída)oxialquila (C1-C4). Exemplos de carbamatos incluem t-BOC, Fmoc, benziloxicarbonila, alloc, carbamato de metila, carbamato de etila, carbamato de 9-(2- sulfb)fluorenilmetila, carbamato de 9-(2,7-dibromo)fluorenilmetila, Tbfmoc, Climoc, Bimoc, DBD-Tmoc, Bsmoc, Troc, Teoc, carbamato de 2-feniletila, Adpoc, carbamato de 2-cloroetila, carbamato de 1,1- dimetil-2-haloetila, DB-t-BOC, TCBOC, Bpoc, t-Bumeoc, Pyoc, Bnpe- oc, carbamato de _V-(2- pivaloilamino)- 1,1 -dimetiletila e NpSSPeoc.
[00104] O termo "carboxilato", como usado na presente invenção, se refere à base conjugada de um ácido carboxílico, que geralmente pode ser representada pela fórmula RCOO. Por exemplo, o termo "carboxilato de magnésio" se refere ao sal de magnésio do ácido car- boxílico.
[00105] O termo "éster ativado", para uso na presente invenção, se refere a grupos ativadores de carboxila utilizados em química peptídica para promover a condensação fácil de um grupo carboxila com um grupo amino livre de um derivado de aminoácido. As descrições des- tes grupos ativadores de carboxila são encontradas em livros-textos gerais de química de peptídeos; por exemplo, K. D. Kopple, "Peptides and Amino Acids", W. A. Benjamin, Inc., New York, 1966, pp. 50 - 51 e E. Schroder e K. Lubke, "The Peptides"; Vol. 1, Academic Press, New York, 1965, pp. 77 - 128.
[00106] Os termos "hidrazina" e "hidrazida" referem-se a compostos que contêm nitrogênios ligados por meio de ligações simples, sendo um dos quais um grupo amino-funcional primário.
[00107] O termo "aldeído", para uso na presente invenção, se refere a um composto químico que tem um grupo -CHO.
[00108] O termo "tiol", para uso na presente invenção, se refere a um composto que contém o grupo funcional composto de uma ligação sulfo-hidrogênio. A estrutura química geral do grupo funcional tiol é R- SH, em que R representa um grupo alquila, alquileno, arila ou outro grupo de átomos contendo carbono.
[00109] O termo "silila" como usado na presente invenção, se refere a Si(Rz)3, em que cada Rz é independentemente alquilarila ou outro grupo de átomos contendo carbono.
[00110] O termo "sal de diazônio", como usado na presente invenção, se refere a um grupo de compostos orgânicos com uma estrutura de R-N2+X-, em que R pode ser qualquer resíduo orgânico (por exemplo, alquila ou arila) e X é um ânion inorgânico ou orgânico (por exemplo, halogênio).
[00111] O termo "triflato", também chamado de trifluorometanossul- fonato, é um grupo com a fórmula CF3SO3.
[00112] O termo "ácido borônico", como usado na presente invenção, se refere a uma estrutura -B(OH)2. É reconhecido pelos versados na técnica que um ácido borônico pode estar presente como um éster de boronato em vários estágios na síntese dos supressores. O ácido borônico destina-se a incluir tais ésteres. O termo "éster borônico" ou "éster de boronato", como usado aqui, se refere a um composto químico contendo uma porção -B(Z1)(Z2), em que Z1 e Z2, juntos formam uma porção onde o átomo ligado a boro em cada caso é um átomo de oxigênio. Em algumas modalidades, a porção de éster borônico é um anel de 5 membros. Em algumas outras modalidades, a porção de éster borônico é um anel de 6 membros. Em algumas outras modalidades, a porção de éster borônico é uma mistura de um anel de 5 membros e um anel de 6 membros.
III. Composições Polímeros
[00113] Os compostos da presente invenção compreendem polímeros fluorescentes solúveis em água que têm a estrutura das fórmulas IXIII. Em algumas modalidades, os polímeros da presente invenção utilizam di-hidrofenantreno (DHP), fluoreno e combinações de DHP e monômeros de fluoreno, conforme mostrado na Fórmula I:
Figure img0021
[00114] Os complexos de polímeros da presente invenção podem conter unidades capazes de alterar o band gap de polímero e são distribuídos de maneira uniforme ou aleatória ao longo da cadeia principal do polímero. Essas unidades são representadas na Fórmula I como M. Os complexos de polímeros da presente invenção também podem conter ligantes representados na Fórmula I como L. Cada ligante opcional L é um grupo arila ou heterorila distribuído de maneira uniforme ou aleatória ao longo da cadeia principal do polímero e é substituído com uma ou mais cadeias pendentes terminadas com um grupo funcional selecionado do grupo consistindo em amina, carbamato, ácido carboxílico, carboxilato, maleimida, éster ativado, N-hidroxis- succinimidila, hidrazina, hidrazida, hidrazona, azida, alquino, aldeído, tiol e seus grupos protetores para conjugação com outro substrato, corante aceptor, molécula ou agente de ligação.
[00115] Os complexos de polímero da presente invenção também contêm unidades terminais G1 e G2, que são cada uma, independentemente, selecionadas a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, alquino, arila opcionalmente substituída, silila, sal de diazô- nio, triflato, acetilóxi, azida, sulfonato, fosfato, arila substituída com ácido borônico, arila substituída com éster borônico, éster borônico, ácido borônico, di-hidrofenantreno opcionalmente substituído (DHP), fluoreno opcionalmente substituído, arila ou heteroarila substituída com uma ou mais cadeias pendentes terminadas com um grupo funcional selecionado dentre amina, carbamato, ácido carboxílico, carboxi- lato, maleimida, éster ativado, N-hidroxissuccinimidila, hidrazina, hi- drazida, hidrazona, azida, alquino, aldeído, tiol e grupos protegidos dos mesmos para conjugação com um substrato, ou agente de ligação.
[00116] Em alguns casos, o polímero tem a estrutura da fórmula II:
Figure img0022
[00117] Em alguns casos o polímero tem a estrutura da fórmula IV:
Figure img0023
[00118] Em alguns casos, o polímero tem a estrutura da fórmula V:
Figure img0024
[00119] Em alguns casos, o polímero é um copolímero e tem a es- trutura da Fórmula VI:
Figure img0025
[00120] Em alguns casos, o polímero é um copolímero e tem a es-
Figure img0026
[00121] Em algumas modalidades, o polímero possui corantes aceptores ligados à cadeia principal que permitirão excitar a estrutura do polímero e observar o monitoramento da emissão dos corantes aceptores ligados à estrutura por meio de transferência de energia. Os corantes aceptores úteis na invenção incluem FITC, CY3B, Cy55, Alexa 488, vermelho Texas, Cy5, Cy7, Alexa 750 e 800CW. Por exemplo, polímeros com corantes aceptores da presente invenção incluem:
Figure img0027
Monômeros
[00122] Os monômeros da presente invenção incluem di-hidrofe- nantreno (DHP) e monômeros à base de fluoreno. Por exemplo, os monômeros da presente invenção incluem:
Figure img0028
[00123] Onde ambas as extremidades terminais dos monômeros são independentemente ou ambas um átomo de halogênio, éster borônico ou ácido borônico, silila, sal de diazônio, triflato, acetilóxi, sulfonato ou fosfato, que podem sofrer reações de polimerização catalisadas por sal de Pd ou de níquel. R1 é, independentemente, um grupo lateral capaz de conferir solubilidade em água/tampão e cada R1 é independentemente selecionado do grupo que consiste em sal de alqui- lamônio, sal de alquiloxiamônio, sal de oligoéter amônio, sal de sulfonato de alquila, sal de sulfonato de alcóxi, sal de sulfonato de oligoé- ter, oligoéter sulfonamido e
Figure img0029
[00124] cada R2 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, alquila, alqueno, alquino, cicloalquila, haloalquila, alcó- xi, (hetero)arilóxi, (hetero)arilamino, PEG, sal de alquilamônio, sal de alquiloxiamônio, sal de oligoéter amônio, sal de sulfonato de alquila, sal de sulfonato de alcóxi, sal de sulfonato de oligoéter, oligoéter sul- fonamido e
Figure img0030
[00125] cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, alquila, alqueno, alquino, cicloalquila, haloalquila, alcó- xi, (hetero)arilóxi, arila, (hetero)arilamino e PEG; cada Z é independen-temente selecionado do grupo que consiste em C, O e N; cada Q é independentemente selecionado do grupo que consiste em uma ligação, NH, NR4 e CH2; e cada R5 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, alquila C1-C12, alqueno C2-C12, alquino C2C12, cicloalquila C3-C12, haloalquila C1-C12, alcóxi C1-C12, (hetero)arilóxi C2-C18, (hetero)arilamino C2-C18 e alcóxi C1-C12.
[00126] Em algumas modalidades, os monômeros da presente invenção também incluem monômeros em ponte. Por exemplo, os mo- nômeros em ponte da presente invenção incluem:
Figure img0031
Síntese
[00127] Os monômeros de DHP da presente invenção podem ser produzidos conforme mostrado abaixo.
Figure img0032
[00128] Por exemplo, 2,7-dibromotrans-9,10-di-hidrofenantreno 9,10-diol (DHP-OH) podem ser preparados como a seguir. Em um frasco cônico (2000 L), adicionar cerca de 26 g de NaBH4 em uma mistura de água e etanol sob agitação (120 mL + 780 mL). A esta solução, adicionar cerca de 24 g de 2,7-dibromofenantreno-9,10-diona em porções rapidamente (em 5 minutos). A mistura reacional foi deixada agitar durante um dia. A cor da solução muda de laranja avermelhado para amarelo pálido a branco ao término da reação. Interromper a reação e neutralizar a mistura reacional com ácido HCl diluído. Após a neutra-lização, filtrar o precipitado branco e lavar com água em excesso. O precipitado branco assim obtido foi lavado com etanol muito frio (< - 15°C) (100 mL) e metanol (100 mL).
[00129] DHP-OSO3H pode ser preparado como a seguir. Em um frasco de fundo redondo de 2 gargalos, (3,6 g) de DHP-OH e 18C6 (500 mg) foram dissolvidos em 120 mL de THF. A solução foi purgada com nitrogênio (20 min) e NaH (2 g) foi adicionado enquanto a purga de ni-trogênio continuou. A cor da solução muda de incolor a rosa pálido, rosa escuro, marrom e verde escuro em 10 a 15 min. Em outro RB, 12 g de 1,3-propano sultona foram dissolvidos em 20 mL de THF e purgados em nitrogênio. Esta solução de sultona foi adicionada à solução de DHP-OH através de um funil de adição durante um período de 20 a 30 minutos. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 4 a 5 horas. Os solventes foram evaporados e o precipitado foi dissolvido em água. Acetona foi adicionada para obter um precipitado branco de DPS sob a forma de sal dissódico. O filtrado foi precipitado e redissolvido em água (quantidade mínima), neutralizado com HCl e precipitado novamente em acetona. A precipitação foi repetida (2 a 3 vezes) seguido por centrifugação, produzindo DPS como um sólido branco.
[00130] DHP-OSO2Cl pode ser preparado como a seguir. 5 g de DHP-OSO3H foram colocados em um frasco de fundo redondo e mis-turados com 25 mL de DMF. A isso, cerca de 10 mL de SOCl2 foram adicionados por gotejamento e a mistura foi deixada agitar de um dia para o outro. Na manhã seguinte, a mistura de reação foi vertida em 200 mL de água e o precipitado foi filtrado e seco.
[00131] A DHP-sulfonamida PEG pode ser preparada como a seguir. DHP-OSO2Cl foi misturado com 2,2 equivalentes de PEG amina em uma mistura de diclorometano/TEA. Após 3 h de reação sob ultrassom, o produto bruto foi extraído em diclorometano, seguido por cromatografia em coluna (sílica-gel, MeOH-CHCl3).
[00132] O éster diborônico de DHP-sulfonamida PEG pode ser preparado conforme exposto a seguir. O composto dibromo foi misturado com DMSO sob nitrogênio e, a isso, 3 equivalentes de bispinacolatodi- boro foram adicionados. Os reagentes reagiram com 12 equivalentes de acetato de potássio e 4 equivalentes de catalisador Pd(dppf)Cl2 durante 5 horas a 80 graus. A mistura reacional foi resfriada e extraída com CHCl3/água. A camada orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna (sílica-gel, MeOH-CHCl3.
[00133] De modo similar, os monômeros de fluoreno da presente invenção podem ser produzidos conforme descrito abaixo. Por exemplo, FL-OSO3H pode ser preparado como a seguir. Em um frasco de fundo redondo de 2 gargalos, 5 g de fluoreno foram misturados com 70 de DMSO. A solução foi purgada com nitrogênio (20 min) e NaOH 50% (12 eq) foi adicionado durante a purga com nitrogênio. A cor da solução muda de incolor para castanho escuro. Propano sultona (3 eq) foi pesado e dissolvido em DMSO. Isto foi adicionado à mistura reacional de fluoreno por gotejamento durante um período de 5 minutos. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 4 a 5 horas. Os solventes foram evaporados e o precipitado foi dissolvido em água. Acetona foi adicionada para obter um precipitado branco de DPS sob a forma de sal dissódico. O filtrado foi precipitado e redissolvido em água (quantidade mínima), neutralizado com HCl e precipitado nova- mente em acetona. A precipitação foi repetida (2 a 3 vezes) seguido por centrifugação, produzindo FL-OSO3H como um sólido branco.
[00134] FL-OSO2Cl pode ser preparado como a seguir. 5 g de FL- OSO3H foram colocados em um frasco de fundo redondo e misturados com 25 mL de DMF. A isso, cerca de 10 mL de SOCl2 foram adicionados por gotejamento e a mistura foi deixada agitar de um dia para o outro. Na manhã seguinte, a mistura de reação foi vertida em 200 mL de água e o precipitado foi filtrado e seco.
[00135] A FL-sulfonamida PEG pode ser preparada como a seguir. FL-OSO2Cl foi misturado com 2,2 equivalentes de PEG amina em uma mistura de diclorometano/TEA. Após 3 h de reação sob ultrassom, o produto bruto foi extraído em diclorometano, seguido por cromatografia em coluna (sílica-gel, MeOH-CHCl3).
[00136] O éster diborônico de FL-sulfonamida PEG pode ser preparado conforme exposto a seguir. O composto dibromo foi misturado com DMSO sob nitrogênio e, a isso, 3 equivalentes de bispinacolatodi- boro foram adicionados. Os reagentes reagiram com 12 equivalentes de acetato de potássio e 4 equivalentes de catalisador Pd(dppf)Cl2 durante 5 horas a 80 graus. A mistura reacional foi resfriada e extraída com CHCl3/água. A camada orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna (sílica-gel, MeOH-CHCl3.
Polimerização
[00137] Os compostos descritos nas modalidades acima podem ser produzidos usando os procedimentos conhecidos na técnica. Em al-gumas modalidades, os polímeros fluorescentes podem ser produzidos a partir de monômeros de di-hidrofenantreno (DHP) combinados com unidades ligantes ricas em elétrons. Em algumas modalidades, corantes poliméricos brilhantes podem ser produzidos a partir de mo- nômeros de fluoreno combinados com unidades ligantes ricas em elétrons. Em algumas modalidades, os corantes poliméricos brilhantes podem ser produzidos a partir de uma combinação de monômeros de DHP e fluoreno combinados com unidades ligantes ricas em elétrons.
[00138] Em geral, a polimerização de unidades monoméricas descrita acima pode ser realizada usando técnicas de polimerização conhecidas pelos versados na técnica ou usando métodos conhecidos na técnica em combinação com os métodos aqui descritos. Por exemplo, a síntese de derivados de éster diborônico a partir de um monô- mero di-haleto pode ser realizada através do acoplamento de Suzuki com bis(pinacolato)diboro:
Figure img0033
[00139] De modo similar, a polimerização também pode ser realiza- da através do acoplamento de Suzuki:
Figure img0034
[00140] onde J1 e J2 são, independentemente, H, Br, B(OH)2, ou um éster borônico.
[00141] Por exemplo, a polimerização pode prosseguir como a seguir. Em um frasco de fundo redondo, ambos os monômeros de bromo e borônico foram colocados em uma mistura (DMF-água) e purgados com nitrogênio durante 10 minutos. Sob nitrogênio, cerca de 20 equivalentes de CsF e 10% de Pd(OAc)2 foram misturados e aquecidos a 80° Celsius. A polimerização foi monitorada com o uso de espectros- copia UV-Vis e cromatografia SEC. Posteriormente à mistura reacio- nal, um agente de terminação (selecionado de G1) contendo o grupo funcional adequado foi adicionado e, 3 horas depois, o segundo agente de terminação (selecionado de G2) foi adicionado. Após a reação, a mistura de reação bruta foi removida por evaporação e passou através de uma coluna de filtração em gel para remover pequenas moléculas orgânicas e oligômeros de baixo peso molecular.
Unidades de terminação
[00142] Ligantes e unidades de terminação podem ser conjugados a uma estrutura polimérica desta invenção através de mecanismos similares, conforme descrito anteriormente. Por exemplo, ésteres de bromo e borônico de unidades de terminação podem ser usados para anexar uma ou ambas as extremidades de um polímero. O uso dos ésteres de bromo e borônico de unidades de terminação irá adicionar ambas as extremida-des do polímero. O uso de apenas uma forma, de éster de bromo ou borônico de uma unidade de terminação, irá acrescentar apenas aquelas extremidades terminadas com seu respectivo complemento e para poli- merizações simétricas podem ser usadas para modificar estatisticamente apenas uma extremidade de um polímero. Para polímeros assimétricos, essa abordagem é usada para assegurar quimicamente que os polímeros sejam modificados apenas em uma terminação da cadeia simples. Unidades de terminação também podem ser ligadas assimetricamente primeiro reagindo uma unidade de terminação de bromo com um polímero com extremidades Y e posteriormente reagindo o polímero com uma unidade de terminação de éster borônico.
[00143] Por exemplo, os agentes de terminação da presente invenção podem ser produzidos conforme mostrado abaixo.
Figure img0035
Agentes de ligação
[00144] Um "agente de ligação" da invenção pode ser qualquer molécula ou complexo de moléculas capazes de se ligar especificamente ao analito alvo. Um agente de ligação da invenção inclui, por exemplo, proteínas, moléculas orgânicas pequenas, carboidratos (incluindo po- lissacarídeos), oligonucleotídeos, polinucleotídeos, lipídios, ligante de afinidade, anticorpo, fragmento de anticorpo, um aptâmero e similares. Em algumas modalidades, o agente de ligação é um anticorpo ou fra-gmento do mesmo. A ligação específica no contexto da presente in-venção se refere a uma reação de ligação que é determinante da pre-sença de um analito alvo na presença de uma população heterogênea. Dessa forma, sob condições de ensaio designadas, os agentes de li-gação especificados se ligam, de preferência, a uma proteína particular ou isoforma da proteína particular e não se ligam em uma quantidade significativa a outras proteínas ou outras isoformas presentes na amostra.
[00145] Quando os agentes de ligação são anticorpos, eles podem ser anticorpos monoclonais ou policlonais. O termo anticorpo, para uso na presente invenção, se refere a moléculas de imunoglobulina e a porções imunologicamente ativas de moléculas de imunoglobulina (Ig). Tais anticorpos incluem, mas não se limitam, a anticorpos policlonais, anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais monoespecíficos, mi- méticos de anticorpos, fragmentos quiméricos, de cadeia simples, Fab, Fab' e F(ab')2, Fv e uma biblioteca de expressão de Fab.
Complexos
[00146] Em geral, os polímeros fluorescentes da presente invenção podem ser conjugados a agentes de ligação com o uso de técnicas conhecidas pelos versados na técnica ou usando métodos conhecidos na técnica em combinação com os métodos descritos na presente invenção.
Figure img0036
[00147] Por exemplo, a preparação do éster de NHS polimérico pode ocorrer da seguinte forma. Colocar 5 mg do polímero em um frasco limpo e dissolver em 1 mL de CH3CN seco. A isso, adicionar 15 mg de TSTU e agitar durante mais 2 minutos. A isto adicionar 100 uL de DIPEA e continuar a agitação de um dia para o outro com a tampa selada com parafilme. Posteriormente, remover por evaporação os solventes orgânicos na mistura reacional. Dissolver o NHS bruto em cerca de 750 uL de 1 x tampão BBS (pH 8,8) por um rápido vórtice e transferi-lo para a coluna Zeba com PMC de 40 K. Decantar a amostra a 2.200 RPM durante 2 min e usar esse NHS polimérico imediatamente.
[00148] A conjugação do NHS polimérico com CD4 pode ocorrer da seguinte forma. Colocar o NHS polimérico em 1XBBS (~800 uL), em que foi centrifugado, adicionar a 0,6 mg de CD4 e misturar com 100 uL de tampão borato 0,5 M (pH 9,0). Submeter a vórtice rapidamente por 30 segundos e deixar misturar durante 3 a 4 horas na mistura coulter.
[00149] A purificação do conjugado através da coluna Histrap HP pode ocorrer como a seguir. Abordagem 1: Após a reação bruta purificar o conjugado usando uma coluna Histrap HP. Colocar a amostra usando tampão 1XPBS e coletar a fração não ligada. Isso pode ser feito usando 20CV de tampão. Posteriormente, trocar o tampão para lavar a fração ligada que tem tanto o anticorpo conjugado como o anticorpo livre. Isso pode ser feito usando 1XPBS com imidazol 0,25 M e analisando para 10CV.
[00150] Abordagem 2: Coluna Hitrap SP Sepharose FF. Equilibrar a coluna e colocar a amostra usando tampão citrato 20 mM em pH 3,5 e coletar a fração não ligada. Isso pode ser feito usando 20CV de tampão. Posteriormente, trocar o tampão para eluir a fração ligada, que tem tanto anticorpo conjugado como livre. Isso pode ser feito usando tampão Tris 20 mM em pH 8,5 e analisando para 20CV.
[00151] Abordagem 3: Colocar o conjugado bruto em um sistema de filtração em fluxo tangencial equipado com uma membrana com PMC de 300 K. O conjugado é lavado usando 1XPBS até o filtrado não apresentar absorção a 405 nm. Posteriormente, o composto é concentrado.
[00152] A purificação do conjugado através da coluna SEC pode ocorrer da seguinte forma. Colocar o conjugado bruto que contém anticorpo livre na coluna de exclusão por tamanho, usando 1XPBS. Juntar os tubos após a verificação dos espectros de absorção e concentrá-los em um Amicon Ultra-15 com um concentrador centrífugo com PMC de 30 KDa.
IV. Métodos de Detecção de um Analito Visão Geral
[00153] A presente invenção fornece um método para detectar um analito em uma amostra que compreende: fornecer uma amostra que é suspeita de conter um analito; fornecer um complexo de polímero conjugado, que compreende um agente de ligação conjugado a um polímero conjugado solúvel em água. O agente de ligação é capaz de interagir com o analito. Uma fonte de luz é aplicada à amostra que pode excitar o polímero e a luz emitida do complexo polimérico conjugado é detectada. No ensaio típico, os polímeros fluorescentes da invenção são excitáveis com uma luz com comprimento de onda que tem entre cerca de 395 nm e cerca de 415 nm. A luz emitida é tipicamente entre cerca de 415 nm e cerca de 475 nm. Alternativamente, a luz de excitação pode ter um comprimento de onda entre cerca de 340 nm e cerca de 370 nm, e a luz emitida situa-se entre cerca de 390 nm e cerca de 420 nm.
Amostra
[00154] A amostra nos métodos da presente invenção pode ser, por exemplo, sangue, medula óssea, células do baço, células linfáticas, aspirados de medula óssea (ou quaisquer células obtidas da medula óssea), urina (lavagem), soro, saliva, líquido cefalorraquidiano, urina, fluido amniótico, fluido intersticial, fezes, muco ou tecido (por exemplo, amostras de tumor, tecido desagregado e tumor sólido desagregado). Em certas modalidades, a amostra é uma amostra de sangue. Em al-gumas modalidades, a amostra de sangue é sangue total. O sangue total pode ser obtido a partir do indivíduo usando procedimentos clínicos padrão. Em algumas modalidades, a amostra é um subconjunto de uma ou mais células de sangue total (por exemplo, eritrócitos, leucócitos, linfócitos (por exemplo, células T, células B ou células NK), fagóci- tos, monócitos, macrófagos, granulócitos, basófilos, neutrófilos, eosi- nófilos, plaquetas ou qualquer célula com um ou mais marcadores de- tectáveis). Em algumas modalidades, a amostra pode ser de uma cultura de células.
[00155] O indivíduo pode ser um ser humano (por exemplo, um paciente que sofre de uma doença), um mamífero comercialmente relevante, incluindo, por exemplo, um macaco, vaca ou cavalo. As amos- tras também podem ser obtidas de animais de companhia, incluindo, por exemplo, um cão ou um gato. Em algumas modalidades, o indivíduo é um animal de laboratório utilizado como um modelo animal de doença ou para triagem de fármacos, por exemplo, um camundongo, um rato, um coelho ou porquinho-da-índia.
Analitos
[00156] Um "analito", para uso na presente invenção, se refere a uma substância, por exemplo, molécula, cuja abundância/concen- tração é determinada por algum procedimento analítico. Por exemplo, na presente invenção, um analito pode ser uma proteína, peptídeo, ácido nucleico, lipídio, carboidrato ou molécula pequena.
[00157] O analito alvo pode ser, por exemplo, ácidos nucleicos (DNA, RNA, mRNA, tRNA ou rRNA), peptídeos, polipeptídeos, proteínas, lipídios, íons, monossacarídeos, oligossacarídeos, polissacarí- deos, lipoproteínas, glicoproteínas, glicolipídios ou fragmentos dos mesmos. Em algumas modalidades, o analito alvo é uma proteína e pode ser, por exemplo, um microfilamento estrutural, microtúbulo e proteínas filamentosas intermediárias, marcadores específicos de or- ganela, proteassomas, proteínas transmembranares, receptores de superfície, proteínas de poro nuclear, translocases de proteína/pep- tídeo, chaperonas para dobra de proteína, estruturas de sinalização, canais iônicos e similares. A proteína pode ser uma proteína ativável ou uma proteína diferencialmente expressada ou ativada em células doentes ou aberrantes, incluindo, mas não se limitando, a fatores de transcrição, proteínas de ligação e modificação de DNA e/ou RNA, receptores de importação e exportação nuclear, reguladores de apopto- se ou sobrevivência e similares.
Ensaios
[00158] Sistemas de ensaio que utilizam um agente de ligação e um marcador fluorescente para quantificar moléculas ligadas são bem co- nhecidos. Exemplos de tais sistemas incluem citômetros de fluxo, ci- tômetros de varredura, citômetros de imageamento, microscópios de fluorescência e microscópios de fluorescência confocais.
[00159] Em algumas modalidades, a citometria de fluxo é usada para detectar a fluorescência. Vários dispositivos adequados para esse uso estão disponíveis e são conhecidos pelos versados na técnica. Exemplos incluem os citômetros de fluxo BCI Navios, Gallios, Aquios e CytoFLEX.
[00160] Em outras modalidades, o ensaio é um imunoensaio. Exemplos de imunoensaios úteis na invenção incluem, mas não se limitam, a um ensaio de fluoroluminescência (FLA) e similares. Os ensaios também podem ser realizados em matrizes de proteína.
[00161] Quando os agentes de ligação são anticorpos, anticorpo ou anticorpos múltiplos, os ensaios tipo sanduíche também podem ser usados. Um ensaio sanduíche se refere ao uso de eventos de reco-nhecimento sucessivos para construir camadas de vários agentes de ligação e elementos de relatório para sinalizar a presença de um anali- to específico. Exemplos de ensaios sanduíches são apresentados na patente US n° 4.486.530 e nas referências observadas no mesmo. V. Exemplos Exemplo 1: Preparação do Complexo de Polímero de DHP
Figure img0037
[00162] Método 1: Em um frasco de fundo redondo, ambos os mo- nômeros DHP dibromo e DHP diborônico (1:1) foram misturados (DMF-água) e foram purgados com nitrogênio durante 10 minutos. Sob nitrogênio, cerca de 20 equivalentes de CsF e 10% de Pd(OAc)2 foram misturados e aquecidos a 80 graus Celsius. A polimerização foi moni-torada com o uso de espectroscopia UV-Vis e cromatografia SEC. Posteriormente à mistura reacional, um agente de terminação (seleci-onado de G1) contendo o grupo funcional adequado foi adicionado e, 3 horas depois, o segundo agente de terminação (selecionado de G2) foi adicionado. Após a reação, a mistura de reação bruta foi removida por evaporação e passou através de uma coluna de filtração em gel para remover pequenas moléculas orgânicas e oligômeros de baixo peso molecular. Posteriormente, o polímero bruto passou por um sistema de filtração em fluxo tangencial equipado com uma membrana com PMC de 100 K. Ele foi lavado usando etanol a 20% até que a absorção do filtrado diminui.
[00163] Método 2: Alternativamente, a polimerização pode ser feita pela autopolimerização de um éster bromoborônico da molécula de DHP. Em um frasco de fundo redondo, o éster de DHP bromoborônico (DMF-água) foi misturado e purgado com nitrogênio durante 10 minutos. Sob nitrogênio, cerca de 10 equivalentes de CsF e 5% de Pd(OAc)2 foram misturados e aquecidos a 80 graus Celsius. A polime- rização foi monitorada com o uso de espectroscopia de UV-Vis e cro- matografia por SEC. Posteriormente à mistura reacional, um agente de terminação (selecionado de G1) contendo o grupo funcional adequado foi adicionado e, 3 horas depois, o segundo agente de terminação (selecionado de G2) foi adicionado. Após a reação, a mistura de reação bruta foi removida por evaporação e passou através de uma coluna de filtração em gel para remover pequenas moléculas orgânicas e oligô- meros de baixo peso molecular. Posteriormente, o polímero bruto passou por um sistema de filtração em fluxo tangencial equipado com uma membrana com PMC de 100 K. Ele foi lavado usando etanol a 20% até que a absorção do filtrado diminui.
[00164] Método 3: Em um frasco de fundo redondo, ambos os mo- nômeros de dibromo di-hidrofenantreno e de di-hidrofenantreno di- borônico (1:1) foram tomados e dissolvidos em uma mistura de THF- água (4:1) contendo 10 equivalentes de K2CO3 e Pd(PPh3)4 a 3%. A mistura reacional foi colocada em uma linha de Schlenk e foi desgasei- ficada com três ciclos de congelamento-bombeamento-descongela- mento e, em seguida, aquecida a 80 graus C sob nitrogênio, sob agi-tação vigorosa durante 18 horas. Posteriormente à mistura reacional, um agente de terminação (selecionado de G1) contendo o grupo funcional adequado foi adicionado por meio de uma cânula sob pressão de nitrogênio em excesso e, 3 horas depois, o segundo agente de ter-minação (selecionado de G2) foi adicionado. Após a reação, a mistura de reação bruta foi removida por evaporação e passou através de uma coluna de filtração em gel para remover pequenas moléculas orgânicas e oligômeros de baixo peso molecular. Posteriormente, o polímero bruto passou por um sistema de filtração em fluxo tangencial equipado com uma membrana com PMC de 100 K. Ele foi lavado usando etanol a 20% até que a absorção do filtrado diminui.
[00165] Método 4: Alternativamente, a polimerização pode ser feita pela auto-polimerização de uma molécula de éster bromoborônico de di-hidrofenantreno. Em um frasco de fundo redondo, éster di-hidrofe- nantreno bromoborônico foi colocado e dissolvido em THF-água (mistura 4:1) contendo 10 equivalentes de K2CO3 e 3% Pd(PPh3)4. A mistura reacional foi colocada em uma linha de Schlenk e foi desgaseifi- cada com três ciclos de congelamento-bombeamento- descongelamento e, em seguida, aquecida a 80 graus C sob nitrogênio, sob agitação vigorosa durante 18 horas. Posteriormente à mistura reacional, um agente de terminação (selecionado de G1) contendo o grupo funcional adequado foi adicionado por meio de uma cânula sob pressão de nitrogênio em excesso e, 3 horas depois, o segundo agen- te de terminação (selecionado de G2) foi adicionado. Após a reação, a mistura de reação bruta foi removida por evaporação e passou através de uma coluna de filtração em gel para remover pequenas moléculas orgânicas e oligômeros de baixo peso molecular. Posteriormente, o polímero bruto passou por um sistema de filtração em fluxo tangencial equipado com uma membrana com PMC de 100 K. Ele foi lavado usando etanol a 20% até que a absorção do filtrado diminui.
Figure img0038
[00166] Método 1: Em um frasco de fundo redondo, ambos os mo- nômeros DHP dibromo e fluoreno diborônico (1:1) foram misturados (DMF-água) e foram purgados com nitrogênio durante 10 minutos. Sob nitrogênio, cerca de 20 equivalentes de CsF e 10% de Pd(OAc)2 foram misturados e aquecidos a 80 graus Celsius. A polimerização foi moni-torada com o uso de espectroscopia de UV-Vis e cromatografia por SEC. Posteriormente à mistura reacional, um agente de terminação (selecionado de G1) contendo o grupo funcional adequado foi adicionado e, 3 horas depois, o segundo agente de terminação (selecionado de G2) foi adicionado. Após a reação, a mistura de reação bruta foi removida por evaporação e passou através de uma coluna de filtração em gel para remover pequenas moléculas orgânicas e oligômeros de baixo peso molecular. Posteriormente, o polímero bruto passou por um sistema de filtração em fluxo tangencial equipado com uma membrana com PMC de 100 K. Ele foi lavado usando etanol a 20% até que a absorção do filtrado diminui.
[00167] Método 2: Em um frasco de fundo redondo, ambos os mo- nômeros de dibromo fluoreno como os de DHP diborônico (1:1) foram colocados em uma mistura (DMF-água) e foram purgados com nitrogênio durante 10 minutos. Sob nitrogênio, cerca de 20 equivalentes de CsF e 10% de Pd(OAc)2 foram misturados e aquecidos a 80 graus Celsius. A polimerização foi monitorada com o uso de espectroscopia de UV-Vis e cromatografia por SEC. Posteriormente à mistura reacio- nal, um agente de terminação (selecionado de G1) contendo o grupo funcional adequado foi adicionado e, 3 horas depois, o segundo agente de terminação (selecionado de G2) foi adicionado. Após a reação, a mistura de reação bruta foi removida por evaporação e passou através de uma coluna de filtração em gel para remover pequenas moléculas orgânicas e oligômeros de baixo peso molecular. Posteriormente, o polímero bruto passou por um sistema de filtração em fluxo tangencial equipado com uma membrana com PMC de 100 K. Ele foi lavado usando etanol a 20% até que a absorção do filtrado diminui.
[00168] Método 3: Em um frasco de fundo redondo, ambos os mo- nômeros de dibromo di-hidrofenantreno e fluoreno diborônico (1:1) foram colocados e dissolvidos em mistura de THF-água (4:1) contendo 10 equivalentes de K2CO3 e 3% Pd(PPh3)4. A mistura reacional foi colocada em uma linha de Schlenk e foi desgaseificada com três ciclos de congelamento-bombeamento-descongelamento e, em seguida, aquecida a 80 graus C sob nitrogênio, sob agitação vigorosa durante 18 horas. Posteriormente à mistura reacional, um agente de terminação (selecionado de G1) contendo o grupo funcional adequado foi adicionado por meio de uma cânula sob pressão de nitrogênio em excesso e, 3 horas depois, o segundo agente de terminação (selecionado de G2) foi adicionado. Após a reação, a mistura de reação bruta foi removida por evaporação e passou através de uma coluna de filtração em gel para remover pequenas moléculas orgânicas e oligômeros de baixo peso molecular. Posteriormente, o polímero bruto passou por um sistema de filtração em fluxo tangencial equipado com uma membrana com PMC de 100 K. Ele foi lavado usando etanol a 20% até que a ab-sorção do filtrado diminui.
[00169] Método 4: Em um frasco de fundo redondo, monômeros de dibromo fluoreno e di-hidrofenantreno diborônico (1:1) foram colocados e dissolvidos em uma mistura de THF-água (4:1) contendo 10 equivalentes de K2CO3 e Pd(PPh3)4 a 3%. A mistura reacional foi colocada em uma linha de Schlenk e foi desgaseificada com três ciclos de con- gelamento-bombeamento-descongelamento e, em seguida, aquecida a 80 graus C sob nitrogênio, sob agitação vigorosa durante 18 horas. Posteriormente à mistura reacional, um agente de terminação (selecionado de G1) contendo o grupo funcional adequado foi adicionado por meio de uma cânula sob pressão de nitrogênio em excesso e, 3 horas depois, o segundo agente de terminação (selecionado de G2) foi adicionado. Após a reação, a mistura de reação bruta foi removida por evaporação e passou através de uma coluna de filtração em gel para remover pequenas moléculas orgânicas e oligômeros de baixo peso molecular. Posteriormente, o polímero bruto passou por um sistema de filtração em fluxo tangencial equipado com uma membrana com PMC de 100 K. Ele foi lavado usando etanol a 20% até que a absorção do filtrado diminui. Exemplo 3 Comparação dos Espectros de Emissão de Fluorescência
[00170] Comparação dos espectros de emissão de fluorescência de fluoreno (Fl-Fl), di-hidrofenantreno (DHP-DHP) e polímeros de fluore- no-DHP (DHP-Fl) foram realizadas. Os polímeros contendo DHP mostram uma diferença acentuada em suas fluorescências máximas, que é a 426-428 nm, enquanto os polímeros à base de fluoreno mostram um máximo de 421 nm (Figura 1). Exemplo 4 Comparação dos Espectros de Absorção
[00171] Os espectros de absorção tanto do polímero de fluoreno (Fl-Fl) como do polímero de di-hidrofenantreno (DHP-DHP) foram me-didos. O gráfico mostra a absorção do polímero DHP-DHP (curva preta) a 390 e 410 nm, enquanto que o polímero Fl-Fl (curva cinza) mostra os máximos em torno de 400 nm. As amostras foram medidas sob diferentes concentrações (Figura 2). Exemplo 5 Razão Sinal-Ruído para CD4
[00172] A análise citométrica de fluxo do sangue total lisado marcado com CD4 anti-humano marcado com os novos polímeros e CD4 marcado com e Azul Pacífico foi realizada. A intensidade de sinal positivo dos corantes poliméricos foi quase 5 vezes mais alta do que a observada com o Azul Pacífico (Figura 3). Exemplo 6:
[00173] Verificou-se que os polímeros da presente invenção possuem determinadas características físicas e químicas de absorção, fluo-rescência, brilho, peso molecular, polidispersividade e razão entre co-rante e proteína, quando conjugados a um anticorpo, etc. As faixas preferenciais desses parâmetros são mostradas na tabela da Figura 4.
[00174] Os espectros de excitação e emissão dos polímeros em tandem foram medidos. A excitação foi realizada no comprimento de onda máximo do polímero (405 nm) e nas emissões observadas a partir dos vários corantes aceptores ligados à cadeia principal (Figura 5).
[00175] Deve-se compreender que os exemplos e modalidades aqui descritos são apenas para fins ilustrativos e que várias modificações ou alterações à luz dos mesmos serão sugeridas para os versados na técnica e devem ser incluídas dentro do espírito e âmbito desse pedido e do escopo das reivindicações em anexo. Todas as publicações, patentes e pedidos de patente citados na presente invenção estão aqui incorporados, a título de referência, em suas totalidades para todos os fins.

Claims (28)

1. Polímero, caracterizado pelo fato de que apresenta a es trutura da fórmula II: ZR3 Q I S02
Figure img0039
na qual cada X é independentemente selecionado do grupo que consiste em um C e Si; cada Y é independentemente selecionado do grupo que consiste em uma ligação, CR1R2 e SiR1R2; quando Y é uma ligação, X é diretamente ligado a ambos os anéis; cada R1 é independentemente selecionado do grupo que consiste em polietilenoglicol (PEG), sal de alquilamônio, sal de alquilo- xiamônio, sal de oligoéter amônio, sal de sulfonato de alquila, sal de sulfonato de alcóxi, sal de sulfonato de oligoéter, oligoéter sulfonami- do, e
Figure img0040
cada R2 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, alquila, alqueno, alquino, cicloalquila, haloalquila, alcó- xi, (hetero)arilóxi, arila, (hetero)arilamino, um grupo PEG, sal de alqui- lamônio, sal de alquiloxiamônio, sal de oligoéter amônio, sal de sulfonato de alquila, sal de sulfonato de alcóxi, sal de sulfonato de oligoé- ter, oligoéter sulfonamido, e
Figure img0041
cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, alquila, alqueno, alquino, cicloalquila, haloalquila, alcó- xi, (hetero)arilóxi, arila, (hetero)arilamino e um grupo PEG; cada Z é independentemente selecionado do grupo que consiste em CH2, O e NH; cada Q é independentemente selecionado do grupo que consiste em uma ligação, NH, NR4 e CH2; cada M é, independentemente, uma unidade ligante rica em elétrons capaz de alterar o band gap de polímero e é distribuída de ma-neira uniforme ou aleatória ao longo da cadeia principal do polímero e é, cada uma, independentemente selecionada do grupo que consiste em
Figure img0042
Figure img0043
nas quais, cada R4 é um grupo lateral não iônico capaz de conferir so-lubilidade em água em excesso de 10 mg/mL e é, cada um, indepen-dentemente selecionado do grupo que consiste em halogênio, hidroxi- la, alquila C1-C12, alqueno C2-C12, alquino C2-C12, cicloalquila C3-C12, haloalquila C1-C12, alcóxi C1-C12, (hetero)arilóxi C2-C18, (hetero) arila- mino C2-C18, (CH2)x’(OCH2-CH2)y’OCH3, onde cada x' é independente-mente um número inteiro de 0 a 20; cada y' é, independentemente, um número inteiro de 0 a 50, e um grupo (hetero)arila C2-C18; cada ligante opcional L é independentemente um grupo ari- la ou heteroarila distribuído de maneira uniforme ou aleatória ao longo da cadeia principal do polímero e é substituído com uma ou mais cadeias pendentes terminadas com um grupo funcional selecionado do grupo consistindo em amina, carbamato, ácido carboxílico, carboxilato, maleimida, éster ativado, N-hidroxissuccinimidila, hidrazina, hidrazida, hidrazona, azida, alquino, aldeído, tiol e seus grupos protetores opcio-nalmente conjugado com outro substrato, corante aceptor, molécula ou agente de ligação; G1 e G2 são cada um independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, alquino, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída, arila substituída com halogênio, silila, sal de diazônio, triflato, acetilóxi, azi- da, sulfonato, fosfato, arila substituída com ácido borônico, arila substi-tuída com éster borônico, éster borônico, ácido borônico, di-hidro- fenantreno opcionalmente substituído (DHP), fluoreno opcionalmente substituído, arila ou heteroarila substituída com uma ou mais cadeias pendentes terminadas com um grupo funcional selecionado dentre amina, carbamato, ácido carboxílico, carboxilato, maleimida, éster ativado, N-hidroxissuccinimidila, hidrazina, hidrazida, hidrazona, azida, alquino, aldeído, tiol e grupos protegidos dos mesmos opcionalmente conjugados com um substrato, ou um agente de ligação; a, c e d definem a % em mol de cada unidade dentro da es-trutura, sendo que cada um pode ser uniformemente ou aleatoriamente repetido, e onde a é uma % em mol de 10 a 100%, c é uma % em mol de 0 a 90% e cada d é uma % em mol de 0 a 25%; cada b é independentemente 0 ou 1; m é um número inteiro de 1 a 10.000; e cada n é independentemente um número inteiro de 1 a 20.
2. Polímero, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que cada X é C; e cada Y é CR1R2.
3. Polímero, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que cada X é C; cada Y é uma ligação; X está diretamente ligado a ambos os anéis; e
Figure img0044
4. Polímero, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, caracte-rizado pelo fato de que cada R3 é independentemente um grupo PEG.
5. Polímero, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que cada grupo PEG é independentemente (PEG)f-R5, no qual cada f é independentemente um número inteiro de 0 a 50; e cada R5 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em H, alquila C1-C12, alqueno C2-C12, alquino C2-C12, cicloalquila C3-C12, haloalquila C1-C12, (hetero) ariloxi C2-C18, C2-C18 (hetero) arilamino e alcoxi C1-C12.
6. Polímero, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que cada Q é independentemente NH.
7. Polímero, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracte-rizado pelo fato de que apresenta a estrutura da fórmula III:
Figure img0045
em que cada f é independentemente um número inteiro de 0 a 50 e cada R5 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, alquila C1-C12, alqueno C2-C12, alquino C2-C12, cicloalquila C3-C12, haloalquila C1-C12, alcóxi C1-C12, (hetero)arilóxi, C2-C18 (hete- ro)arilamino,e alcóxi C1-C12 .
8. Polímero, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que apresenta a estrutura da fórmula IV:
Figure img0046
9. Polímero, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que apresenta a estrutura da fórmula V:
Figure img0047
10. Polímero, de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o polímero é um copolímero e apresenta a estrutura da fórmula VI:
Figure img0048
sendo que g e a correspondem, juntos, uma % em mol de 10 a 100%.
11. Polímero, de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o polímero é um copolímero e apresenta a estrutura da fórmula VII:
Figure img0049
na qual cada g e a juntos correspondem a uma % em mol de 10 a 100%; e cada f é independentemente um número inteiro de 0 a 50 e cada R5 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, alquila C1-C12, alqueno C2-C12, alquino C2-C12, cicloalquila C3-C12, haloalquila C1-C12, alcóxi C1-C12, (hetero)arilóxi C2-C18, (hetero)arila- mino C2-C18 e alcóxi C1-C12.
12. Polímero, de acordo com a reivindicação 11, caracteri-zado pelo fato de que o polímero é um copolímero e apresenta a estru-tura da fórmula VIII:
Figure img0050
13. Polímero, de acordo com a reivindicação 12, caracteri- zado pelo fato de que o polímero é um copolímero e apresenta a estru-
Figure img0051
14. Polímero, de acordo com qualquer uma das reivindica ções 1 a 3, 7, 8 e 10 a 12, caracterizado pelo fato de que cada L é, ca- da um, independentemente selecionado do grupo que consiste em
Figure img0052
nas quais cada R6 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, OH, SH, NHCOO-t-butila, (CH2)nCOOH, (CH2)nCOOCH3, (CH2)nNH2, (CH2)nNH-(CH2)n-CH3, (CH2)nNHCOOH, (CH2)nNHCO-(CH2)n-CO-(CH2)n-CH3, (CH2)nNHCOO-(CH2)n-CH3, (CH2)nNHCOOC(CH3)3, (CH2)nNHCO-cicloalquila (C3-C12), (CH2)nNHCO(CH2)nCOOH, (CH2)nNHCO(CH2)nCOO(CH2)nCH3, (CH2)n(OCH2CH2)fOCH3, N-maleimida, halogênio, alqueno C2-C12, al- quino C2-C12, cicloalquila C3-C12, haloalquila C1-C12, (hetero)arila C1C12, (hetero)arilamino C1-C12 e benzila opcionalmente substituída com um ou mais halogênio, hidroxila, alcóxi C1-C12 ou (OCH2CH2)fOCH3; cada L independente é opcionalmente conjugado com um substrato ou corante aceptor; cada f é independentemente um número inteiro de 0 a 50; e cada n é independentemente um número inteiro de 1 a 20.
15. Polímero, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que G1 e G2 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em di- hidrofenantreno opcionalmente substituído (DHP), fluoreno opcionalmente substituído, arila substituída com uma ou mais cadeias pendentes terminadas com um grupo funcional e uma heteroarila substituída com uma ou mais cadeias pendentes terminadas com um grupo funcional.
16. Polímero, de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 14, caracterizado pelo fato de que G1 e G2 são, cada um, in-dependentemente selecionados a partir do grupo que consiste em
Figure img0053
Figure img0054
em que cada R6 é independentemente selecionado do grupo que consiste em H, OH, SH, NHCOO-t-butila, (CH2)nCOOH, (CH2)nCOOCH3, (CH2)nNH2, (CH2)nNH-(CH2)n-CH3, (CH2)nNHCOOH, (CH2)nNHCO-(CH2)n-CO-(CH2)n-CH3, (CH2)nNHCOO-(CH2)n-CH3, (CH2)nNHCOOC(CH3)3, (CH2)nNHCO-cicloalquila (C3-C12), (CH2)nNHCO(CH2CH2O)f, (CH2)nNHCO(CH2)nCOOH, (CH2)nNHCO(CH2)nCOO(CH2)nCH3, (CH2)n(OCH2CH2)fOCH3, N-malei- mida, halogênio, alqueno C2-C12, alquino C2-C12, cicloalquila C3-C12, haloalquila C1-C12, (hetero)arila C1-C12, (hetero)arilamino C1-C12 e ben-zila opcionalmente substituída com um ou mais halogênio, hidroxila, alcóxi C1-C12 ou (OCH2CH2)fOCH3; cada f é independentemente um número inteiro de 0 a 50; e cada n é independentemente um número inteiro de 1 a 20.
17. Polímero, de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 16, caracterizado pelo fato de que compreende ainda um agente de ligação ligado ao referido polímero.
18. Polímero, de acordo com a reivindicação 17, caracteri-zado pelo fato de que o agente de ligação é um anticorpo.
19. Polímero, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 18, caracterizado pelo fato de que compreende um corante aceptor ligado ao ligante L do referido polímero.
20. Método para detectar um analito em uma amostra, ca-racterizado pelo fato de compreender: fornecer uma amostra que é suspeita de conter o analito; contatar a amostra com um agente de ligação conjugado a um polímero solúvel em água como definido em qualquer uma das rei-vindicações 1 a 19.
21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o agente de ligação é uma proteína, peptídeo, li- gante de afinidade, anticorpo, fragmento de anticorpo, açúcar, lipídeo, ácido nucleico ou um aptâmero.
22. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o agente de ligação é um anticorpo.
23. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que o método é configurado para citometria de fluxo.
24. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que o agente de ligação é ligado a um substrato.
25. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que o analito é uma proteína expressa na superfície de uma célula.
26. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que o método é configurado como um imunoensaio.
27. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda fornecer agentes de ligação adicionais para detectar analitos adicionais simultaneamente.
28. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o polímero fluorescente solúvel em água compre-endendo um agente de ligação compreende ainda um corante aceptor ligado ao ligante L do referido polímero.
BR112018071026-1A 2016-04-15 2017-04-14 Polímero fluorescente solúvel em água e método para detectar um analito de uma amostra BR112018071026B1 (pt)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662323444P 2016-04-15 2016-04-15
US62/323,444 2016-04-15
PCT/US2017/027611 WO2017180998A2 (en) 2016-04-15 2017-04-14 Photoactive macromolecules and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BR112018071026A2 BR112018071026A2 (pt) 2019-02-12
BR112018071026B1 true BR112018071026B1 (pt) 2023-04-11

Family

ID=59297339

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112018071026-1A BR112018071026B1 (pt) 2016-04-15 2017-04-14 Polímero fluorescente solúvel em água e método para detectar um analito de uma amostra

Country Status (10)

Country Link
US (3) US11208527B2 (pt)
EP (3) EP4183853A1 (pt)
JP (4) JP6882331B2 (pt)
KR (4) KR102558780B1 (pt)
CN (3) CN109415623B (pt)
AU (3) AU2017250778B2 (pt)
BR (1) BR112018071026B1 (pt)
CA (1) CA3020926C (pt)
ES (2) ES2874129T3 (pt)
WO (1) WO2017180998A2 (pt)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102558780B1 (ko) * 2016-04-15 2023-07-26 베크만 컬터, 인코포레이티드 광활성 거대분자 및 그의 용도
CN109923179A (zh) 2016-12-12 2019-06-21 贝克顿·迪金森公司 水溶性聚合物染料
US11492493B2 (en) * 2017-12-26 2022-11-08 Becton, Dickinson And Company Deep ultraviolet-excitable water-solvated polymeric dyes
WO2020072100A1 (en) 2018-05-05 2020-04-09 Azoulay Jason D Open-shell conjugated polymer conductors, composites, and compositions
EP3833716A4 (en) * 2018-08-07 2022-04-27 Becton, Dickinson and Company POLYMER TANDE DYES WITH AN ATTACHED NARROW EMISSION ACCEPTOR
EP3853288A4 (en) * 2018-09-21 2022-07-27 Joshua Tropp THIOL-BASED POST MODIFICATION OF CONJUGATED POLYMERS
BR102019025989A2 (pt) 2018-12-14 2020-06-23 Beckman Coulter, Inc. Modificação de corantes poliméricos e aplicações
US11781986B2 (en) 2019-12-31 2023-10-10 University Of Southern Mississippi Methods for detecting analytes using conjugated polymers and the inner filter effect
EP4244625A1 (en) 2020-11-13 2023-09-20 Beckman Coulter, Inc. Additives for reducing non-specific interactions between fluorescent polymer conjugates and cells in a biological sample
AU2022216619A1 (en) 2021-02-05 2023-09-07 Beckman Coulter, Inc. Compositions and methods for preventing non-specific interactions between polymer dyes-antibody conjugates
AU2022269592A1 (en) 2021-05-04 2023-10-05 Beckman Coulter, Inc. Uv-absorbing polymers, compositions and uses thereof
WO2023056460A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Beckman Coulter, Inc. Water-soluble tetrahydropyrene based fluorescent polymers
WO2023086103A1 (en) * 2021-11-12 2023-05-19 Beckman Coulter, Inc. Novel formulation for drying of polymer dye conjugated antibodies
WO2024007016A2 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Beckman Coulter, Inc. Novel fluorescent dyes and polymers from dihydrophenanthrene derivatives
WO2024044327A1 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Beckman Coulter, Inc. Dhnt monomers and polymer dyes with modified photophysical properties

Family Cites Families (107)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL96874C (pt) 1954-04-03
US4486530A (en) 1980-08-04 1984-12-04 Hybritech Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4703004A (en) 1984-01-24 1987-10-27 Immunex Corporation Synthesis of protein with an identification peptide
US6086737A (en) 1984-03-29 2000-07-11 Li-Cor, Inc. Sequencing near infrared and infrared fluorescence labeled DNA for detecting using laser diodes and suitable labels therefor
JP3010067B2 (ja) * 1989-09-06 2000-02-14 トロピックス・インコーポレーテッド 安定で水溶性の化学発光性１、２―ジオキセタンおよびそれらの中間体の合成法
US5723218A (en) 1990-04-16 1998-03-03 Molecular Probes, Inc. Dipyrrometheneboron difluoride labeled flourescent microparticles
US5326692B1 (en) 1992-05-13 1996-04-30 Molecular Probes Inc Fluorescent microparticles with controllable enhanced stokes shift
US5187288A (en) 1991-05-22 1993-02-16 Molecular Probes, Inc. Ethenyl-substituted dipyrrometheneboron difluoride dyes and their synthesis
US5576424A (en) 1991-08-23 1996-11-19 Molecular Probes, Inc. Haloalkyl derivatives of reporter molecules used to analyze metabolic activity in cells
EP0605655B1 (en) 1991-09-16 1997-05-07 Molecular Probes, Inc. Dimers of unsymmetrical cyanine dyes
US5658751A (en) 1993-04-13 1997-08-19 Molecular Probes, Inc. Substituted unsymmetrical cyanine dyes with selected permeability
US5453505A (en) 1994-06-30 1995-09-26 Biometric Imaging, Inc. N-heteroaromatic ion and iminium ion substituted cyanine dyes for use as fluorescence labels
DE4431039A1 (de) 1994-09-01 1996-03-07 Hoechst Ag Poly(4,5,9,10-tetrahydropyren-2,7-diyl)-Derivate und ihre Verwendung als Elektrolumineszenzmaterialien
US5656449A (en) 1995-03-06 1997-08-12 Molecular Probes, Inc. Neutral unsymmetrical cyanine dyes
US5798276A (en) 1995-06-07 1998-08-25 Molecular Probes, Inc. Reactive derivatives of sulforhodamine 101 with enhanced hydrolytic stability
US6596522B2 (en) 1997-05-08 2003-07-22 The Regents Of The University Of California Detection of transmembrane potentials by optical methods
US6004536A (en) 1995-11-14 1999-12-21 Molecular Probes, Inc. Lipophilic cyanine dyes with enchanced aqueous solubilty
US6162931A (en) 1996-04-12 2000-12-19 Molecular Probes, Inc. Fluorinated xanthene derivatives
US6005113A (en) 1996-05-15 1999-12-21 Molecular Probes, Inc. Long wavelength dyes for infrared tracing
US5846737A (en) 1996-07-26 1998-12-08 Molecular Probes, Inc. Conjugates of sulforhodamine fluorophores with enhanced fluorescence
US5696157A (en) 1996-11-15 1997-12-09 Molecular Probes, Inc. Sulfonated derivatives of 7-aminocoumarin
US6358633B1 (en) 1997-05-15 2002-03-19 Sanyo Electric Co., Ltd. Organic electroluminescence element
US6130101A (en) 1997-09-23 2000-10-10 Molecular Probes, Inc. Sulfonated xanthene derivatives
DE69934572T2 (de) 1998-10-27 2007-04-26 Molecular Probes, Inc., Eugene Übergangsmetallkomplex-haltige lumineszente proteinfarben
WO2000064988A1 (en) 1999-04-23 2000-11-02 Molecular Probes, Inc. Xanthene dyes and their application as luminescence quenching compounds
TW484341B (en) 1999-08-03 2002-04-21 Sumitomo Chemical Co Polymeric fluorescent substance and polymer light emitting device
US7102024B1 (en) * 2000-08-01 2006-09-05 Schwartz David A Functional biopolymer modification reagents and uses thereof
US6579718B1 (en) 2000-08-04 2003-06-17 Molecular Probes, Inc. Carbazolylvinyl dye protein stains
AU2001279185B2 (en) 2000-08-04 2005-07-07 Molecular Probes, Inc. Derivatives of 1,2-dihydro-7-hydroxyquinolines containing fused rings
AU2001294859A1 (en) 2000-09-29 2002-04-08 Molecular Probes, Inc. Modified carbocyanine dyes and their conjugates
US6972326B2 (en) 2001-12-03 2005-12-06 Molecular Probes, Inc. Labeling of immobilized proteins using dipyrrometheneboron difluoride dyes
SE0201468D0 (sv) 2002-05-13 2002-05-13 Peter Aasberg Metod att använda luminescenta polymerer för detektion av biospecifik växelverkan
ATE476521T1 (de) 2002-06-20 2010-08-15 Univ California Verfahren und zusammensetzungen zum nachweis und zur analyse von polynukleotiden unter verwendung von licht einfangenden multichromophoren
US10001475B2 (en) 2002-06-20 2018-06-19 The Regents Of The University Of California Light harvesting multichromophore compositions and methods of using the same
US9371559B2 (en) 2002-06-20 2016-06-21 The Regents Of The University Of California Compositions for detection and analysis of polynucleotides using light harvesting multichromophores
US7144950B2 (en) 2003-09-17 2006-12-05 The Regents Of The University Of California Conformationally flexible cationic conjugated polymers
US20040101909A1 (en) 2002-08-20 2004-05-27 Hema-Quebec, 2535 Boul. Laurier, Ste-Foy, Quebec, Canada G1V 4M3 Purification of polyreactive autoantibodies and uses thereof
KR20050055717A (ko) 2002-08-26 2005-06-13 더 리전츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 집광 다발색단을 사용하여 폴리뉴클레오티드를 검출 및 분석하기 위한 방법 및 조성물
DE10337346A1 (de) * 2003-08-12 2005-03-31 Covion Organic Semiconductors Gmbh Konjugierte Polymere enthaltend Dihydrophenanthren-Einheiten und deren Verwendung
JP2005139126A (ja) 2003-11-07 2005-06-02 Konica Minolta Medical & Graphic Inc 蛍光造影剤及び体外蛍光造影方法
EP2607431B1 (en) 2003-12-05 2016-08-24 Life Technologies Corporation Cyanine dye compounds
CN1906227A (zh) 2004-02-18 2007-01-31 国立大学法人东京工业大学 二卤化物、高分子化合物及其制造方法
JPWO2005100437A1 (ja) * 2004-04-14 2008-03-06 有限会社金沢大学ティ・エル・オー 特異な発光性を示すポリフルオレン誘導体およびその製造法
CN1594314A (zh) 2004-06-24 2005-03-16 复旦大学 基于芴的水溶性共轭聚合物及其制备方法
CA2580141C (en) 2004-09-23 2013-12-10 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
GB2433512B (en) 2004-10-11 2009-06-03 Cambridge Display Tech Ltd Polar semiconductive hole transporting material
US20060094859A1 (en) 2004-11-03 2006-05-04 Marrocco Matthew L Iii Class of bridged biphenylene polymers
US20060160109A1 (en) 2004-11-22 2006-07-20 Odyssey Thera, Inc. Harnessing network biology to improve drug discovery
EP1838752B1 (en) 2005-01-10 2017-10-04 The Regents of The University of California Cationic conjugated polymers suitable for strand-specific polynucleotide detection in homogeneous and solid state assays
WO2006083932A2 (en) 2005-01-31 2006-08-10 The Regents Of The University Methods and compositions for aggregant detection
US8354249B2 (en) 2005-08-11 2013-01-15 Omrix Biopharmaceuticals Ltd. Intravenous immunoglobulin composition
DE102006038683A1 (de) 2006-08-17 2008-02-21 Merck Patent Gmbh Konjugierte Polymere, deren Darstellung und Verwendung
MY150757A (en) 2006-09-15 2014-02-28 Siemens Medical Solutions Click chemistry-derived cyclopeptide derivatives as imaging agents for integrins
US8158444B2 (en) * 2006-10-06 2012-04-17 Sirigen, Inc. Fluorescent methods and materials for directed biomarker signal amplification
WO2009051560A1 (en) 2007-10-17 2009-04-23 Agengy For Science, Technology And Research Water-soluble fluorescent material with balanced hydrophilicity and hydrophobicity
CN101983194B (zh) * 2008-04-03 2014-09-10 港大科桥有限公司 荧光团化合物
US8114904B2 (en) * 2008-04-05 2012-02-14 Versitech Limited & Morningside Ventures Limited Luminescence quenchers and fluorogenic probes for detection of reactive species
WO2010006852A1 (en) 2008-06-23 2010-01-21 Basf Se Novel polymers
DE102008049037A1 (de) 2008-09-25 2010-04-22 Merck Patent Gmbh Neue Polymere mit niedriger Polydispersität
US20100150942A1 (en) 2008-12-03 2010-06-17 Cantor Thomas L Affinity purified human polyclonal antibodies and methods of making and using them
WO2010075514A1 (en) * 2008-12-23 2010-07-01 Michigan Technological University Fluorescent conjugated polymers with a bodipy-based backbone and uses thereof
US8431416B2 (en) 2009-04-01 2013-04-30 Becton, Dickinson And Company Reactive heterocycle-substituted 7-hydroxycoumarins and their conjugates
US8969509B2 (en) * 2009-06-26 2015-03-03 Sirigen, Inc. Signal amplified biological detection with conjugated polymers
US8350038B2 (en) * 2009-10-20 2013-01-08 Roche Diagnostics Operations, Inc. Fluorescence quencher molecules
EP2526138B1 (en) 2010-01-19 2024-02-28 Sirigen II Limited Novel reagents for directed biomarker signal amplification
WO2011119272A2 (en) * 2010-03-22 2011-09-29 Henkel Corporation Macro-photoinitiators and curable compositions thereof
KR20110113297A (ko) 2010-04-09 2011-10-17 다우어드밴스드디스플레이머티리얼 유한회사 신규한 유기 전자재료용 화합물 및 이를 포함하는 유기 전계 발광 소자
CA2799540A1 (en) 2010-06-08 2011-12-15 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
US8623324B2 (en) 2010-07-21 2014-01-07 Aat Bioquest Inc. Luminescent dyes with a water-soluble intramolecular bridge and their biological conjugates
CN102146077B (zh) 2011-01-13 2014-10-01 上海大学 芴并咪唑衍生物及其制备方法
CN102267948B (zh) 2011-06-17 2013-09-04 上海大学 芴并二咪唑衍生物及其制备方法
US8623332B2 (en) 2011-07-06 2014-01-07 Fertin Pharma A/S Chewing gum having sustained release of nicotine
US20130108619A1 (en) 2011-11-02 2013-05-02 Isaac Melamed Intravenous immunoglobulin processing, diagnostic, and treatment systems and methods
US20130177574A1 (en) 2012-01-11 2013-07-11 Paul I. Terasaki Foundation Laboratory ANTI-HLA CLASS-Ib ANTIBODIES MIMIC IMMUNOREACTIVITY AND IMMUNOMODULATORY FUNCTIONS OF INTRAVENOUS IMMUNOGLOBULIN (IVIg) USEFUL AS THERAPEUTIC IVIg MIMETICS AND METHODS OF THEIR USE
US9206271B2 (en) * 2012-03-25 2015-12-08 Wisconsin Alumni Research Foundation Fully backbone degradable and functionalizable polymers derived from the ring-opening metathesis polymerization (ROMP)
US9933341B2 (en) 2012-04-05 2018-04-03 Becton, Dickinson And Company Sample preparation for flow cytometry
JP6071398B2 (ja) 2012-10-05 2017-02-01 キヤノン株式会社 インデノ［１，２−ｂ］フェナンスレン化合物及びこれを有する有機発光素子
CN104704366B (zh) 2012-10-24 2018-06-19 贝克顿·迪金森公司 异羟肟酸取代的氮杂吲哚啉-花菁染料和它的生物共轭物
US9977014B2 (en) 2013-05-10 2018-05-22 Agency For Science, Technology And Research Nanoparticle sensor for nucleic acid-protein interaction
CZ2014527A3 (cs) 2014-08-05 2016-02-17 Ústav Organické Chemie A Biochemie Akademie Věd Čr, V.V.I. Způsob detekce aktivní formy analytů ve vzorku a stanovení schopnosti dalších látek vázat se do aktivních míst těchto analytů
EP3215515A1 (en) 2014-11-03 2017-09-13 Life Technologies Corporation Dibenzosilole monomers and polymers and methods for their preparation and use
CN104557723A (zh) 2014-11-05 2015-04-29 上海大学 不对称芴并咪唑衍生物及其制备方法
CN114989636A (zh) 2015-03-12 2022-09-02 贝克顿·迪金森公司 聚合物bodipy染料及其使用方法
EP3268434A4 (en) 2015-03-12 2019-03-27 Becton, Dickinson and Company UV ABSORBENT POLYMER DYES AND METHOD OF USE THEREOF
WO2017105928A1 (en) 2015-12-16 2017-06-22 Becton, Dickinson And Company Photostable fluorescent polymeric tandem dyes including luminescent metal complexes
WO2017105927A1 (en) 2015-12-16 2017-06-22 Becton, Dickinson And Company Polymeric dye ratiometric sensor for analyte detection and methods of using the same
WO2017172608A1 (en) 2016-03-28 2017-10-05 Aat Bioquest, Inc. Polyfluoreno[4,5-cde]oxepine conjugates and their use in methods of analyte detection
KR102558780B1 (ko) 2016-04-15 2023-07-26 베크만 컬터, 인코포레이티드 광활성 거대분자 및 그의 용도
CA3018266A1 (en) 2016-04-22 2017-10-26 Becton, Dickinson And Company Multiplex polymeric dye devices and methods for using the same
WO2018009581A1 (en) 2016-07-07 2018-01-11 Becton, Dickinson And Company Fluorescent water-solvated conjugated polymers
WO2018009861A1 (en) 2016-07-08 2018-01-11 Biolegend Substituted polyfluorene compounds
CN109689796A (zh) 2016-07-11 2019-04-26 贝克顿·迪金森公司 可激发蓝色的水溶剂化聚合物染料
KR101815773B1 (ko) * 2016-07-18 2018-01-05 건국대학교 산학협력단 전하수송층을 포함하는 유기 광전변환 소자 및 이의 제조방법
CN109923179A (zh) 2016-12-12 2019-06-21 贝克顿·迪金森公司 水溶性聚合物染料
CA3052595A1 (en) 2017-02-08 2018-08-16 Becton, Dickinson And Company Dried dye reagent devices and methods for making and using the same
WO2019023463A1 (en) 2017-07-28 2019-01-31 Biolegend CONJUGATED POLYMERS AND METHODS OF USE
US11492493B2 (en) 2017-12-26 2022-11-08 Becton, Dickinson And Company Deep ultraviolet-excitable water-solvated polymeric dyes
EP3775052B1 (en) 2018-03-30 2024-06-05 Becton, Dickinson and Company Water-soluble polymeric dyes having pendant chromophores
EP3833716A4 (en) 2018-08-07 2022-04-27 Becton, Dickinson and Company POLYMER TANDE DYES WITH AN ATTACHED NARROW EMISSION ACCEPTOR
WO2020101831A1 (en) 2018-11-13 2020-05-22 Becton, Dickinson And Company Dried reagent strainers and methods for making and using the same
BR102019025989A2 (pt) 2018-12-14 2020-06-23 Beckman Coulter, Inc. Modificação de corantes poliméricos e aplicações
US11220628B2 (en) 2019-02-20 2022-01-11 Aat Bioquest, Inc. Condensed polycyclic conjugated polymers and their use for biological detection
EP4047057A4 (en) 2019-11-19 2024-01-17 SFC Co., Ltd. EXTINGUISHER AND ITS USES
US20230257587A1 (en) 2020-06-08 2023-08-17 Biotium, Inc. Fluorenyl cyanine dyes
US20230287170A1 (en) 2020-07-16 2023-09-14 Miltenyi Biotec B.V. & Co. KG Fluorescent dyes comprising m-conjugated 1,1 -binaphthyl-based polymers
EP4244625A1 (en) 2020-11-13 2023-09-20 Beckman Coulter, Inc. Additives for reducing non-specific interactions between fluorescent polymer conjugates and cells in a biological sample
US20220260464A1 (en) 2021-02-16 2022-08-18 Aat Bioquest, Inc. Fluorogenic cyanine compounds for detecting nucleic acids

Also Published As

Publication number Publication date
EP3889237B1 (en) 2022-12-28
US20190144601A1 (en) 2019-05-16
JP2021165407A (ja) 2021-10-14
JP6882331B2 (ja) 2021-06-02
AU2021212098A1 (en) 2021-08-26
AU2021212098B2 (en) 2023-03-23
KR20180132750A (ko) 2018-12-12
EP4183853A1 (en) 2023-05-24
KR102331668B1 (ko) 2021-11-25
AU2023203991A1 (en) 2023-07-13
JP7141485B2 (ja) 2022-09-22
ES2936226T3 (es) 2023-03-15
JP2023101725A (ja) 2023-07-21
WO2017180998A2 (en) 2017-10-19
CN109415623B (zh) 2022-07-08
EP3889237A1 (en) 2021-10-06
AU2021212098B9 (en) 2023-03-30
BR112018071026A2 (pt) 2019-02-12
US20220213260A1 (en) 2022-07-07
EP3443049A2 (en) 2019-02-20
JP2019519623A (ja) 2019-07-11
KR102438354B1 (ko) 2022-08-31
KR20220123561A (ko) 2022-09-07
US11208527B2 (en) 2021-12-28
CN109415623A (zh) 2019-03-01
AU2017250778B2 (en) 2021-09-23
KR102558780B1 (ko) 2023-07-26
JP7402843B2 (ja) 2023-12-21
AU2017250778A1 (en) 2018-11-01
EP3443049B1 (en) 2021-04-14
US20240052092A1 (en) 2024-02-15
CA3020926C (en) 2024-04-02
ES2874129T3 (es) 2021-11-04
KR20230113837A (ko) 2023-08-01
WO2017180998A3 (en) 2017-12-28
US11834551B2 (en) 2023-12-05
CN113801297A (zh) 2021-12-17
CN113801296A (zh) 2021-12-17
JP2021102779A (ja) 2021-07-15
CA3020926A1 (en) 2017-10-19
KR20210147091A (ko) 2021-12-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BR112018071026B1 (pt) Polímero fluorescente solúvel em água e método para detectar um analito de uma amostra
JP7097885B2 (ja) 水溶性ポリマー色素
BR102019025989A2 (pt) Modificação de corantes poliméricos e aplicações
CN116997797A (zh) 用于在生物样品中降低荧光聚合物缀合物与细胞之间的非特异性相互作用的添加剂
US20230399565A1 (en) Polymer dyes and uses thereof
WO2023056460A1 (en) Water-soluble tetrahydropyrene based fluorescent polymers
WO2024044327A1 (en) Dhnt monomers and polymer dyes with modified photophysical properties
CN117015711A (zh) 用于阻止聚合物染料-抗体缀合物之间的非特异性相互作用的组合物和方法
WO2024007016A2 (en) Novel fluorescent dyes and polymers from dihydrophenanthrene derivatives
Marquez et al. Targeting sialic acids with poly-DOTA (Gd)-boronic acids and DOTA (Gd)-BSA-boronic acid conjugate as potential imaging agents: Challenges with non-specific binding

Legal Events

Date Code Title Description
B06W Patent application suspended after preliminary examination (for patents with searches from other patent authorities) chapter 6.23 patent gazette]
B350 Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette]
B06A Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette]
B09A Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette]
B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 14/04/2017, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS