BR112015028164B1 - Usos da bactéria probiótica, lactobacillus paracasei, para tratar uma infecção microbiana e para prevenir ou reduzir a gravidade de uma infecção microbiana - Google Patents

Abstract

probióticos e métodos de uso. a presente invenção representa os métodos para o tratamento ou redução da gravidade de uma infecção microbiana em uma criança de uma mãe lactante. as composições compreendendo os produtos alimentícios fermentados por lactobacillus paracasei cba l74, depositário internacional número de acessão lmg p-24778 são administradas a uma grávida ou mãe lactante a fim de tratar ou atenuar a gravidade de uma infecção microbiana em sua descendência.

Description

Referência Cruzada a Pedidos Relacionados

[001]Este pedido reivindica o benefício dos dados do depósito do Pedido Provisional dos Estados Unidos No. 61/ 821.990, o qual foi depositado em 10 de maio de 2013. Para o propósito de qualquer pedido dos Estados Unidos que pode reivindicar o benefício do Pedido Provisional dos Estados Unidos No. 61/ 821.990, os teores deste pedido anteriormente depositados são aqui incorporados por referência na totalidade.

Campo da Invenção

[002]A presente invenção se refere às composições compreendendo organismos probióticos e métodos de administração destas composições às pacientes grávidas e lactantes. Os métodos são úteis para o tratamento da infecção na descendência de tais pacientes.

Antecedentes da Invenção

[003]Apesar de avanços clínicos modernos, as infecções continuam a causar significante mortalidade e morbidez neonatal, especialmente nos pequenos neonatos prematuros. De acordo com a Organização Mundial de Saúde, as infecções, incluindo sepse, pneumonia, tétano e diarreia, são responsáveis por 36 % das 3,3 milhões mortes neonatais por todo o mundo por ano. O sistema imune neonatal é funcionalmente imaturo. A diagnose das infecções no neonato pode ser desafiadora porque os sintomas podem ser sutis e não específicos. Se bem que muitas infecções respondem bem aos antibióticos, o prolongamento nas terapias antibióticas pode levar à rápida progressão das infecções e o desenvolvimento de condições muito graves, tal como, sepse neonatal. A sepse neonatal não tratada é invariavelmente fatal. As taxas de mortalidade para sepse nas crianças tratadas com antibiótico variam entre 5 % e 60 % com as taxas mais elevadas relatadas pelos países com renda mais baixa. Existe uma necessidade contínua de novas estratégias e agentes para o tratamento e prevenção das infecções nas crianças.

Sumário da Invenção

[004]A presente invenção fornece os métodos de tratamento de uma infecção microbiana na criança de uma mãe lactante, o método compreende a administração de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo um produto alimentício à mãe, onde o alimentício foi fermentado pela bactéria probiótica, Lactobacillus paracasei CBA L74, Depositário Internacional Número de Acessão LMG P-24778. A bactéria pode ser não replicante. A composição pode ser administrada pré-natalmente, pós-natalmente ou pré-natalmente e pós-natalmente até a criança ser desmamada. O método também pode incluir a etapa de identificar uma criança com necessidade do tratamento. O micróbio pode ser Salmonella typhimurium, Cronobacter sakazakii, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Streptococcus pneumoniae Neisseria meningitidis ou um rotavírus. O produto alimentício fermentado pode ser um produto de cereal ou um leiteiro. Também fornecidos são os métodos de prevenção ou redução da gravidade de uma infecção microbiana na criança de uma mãe lactante, o método compreende a administração de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo um produto alimentício à mãe, onde o alimentício foi fermentado pela bactéria probiótica, Lactobacillus paracasei CBA L74, Depositário Internacional Número de Acessão LMG P-24778. A bactéria pode ser não replicante.

Breve Descrição dos Desenhos

[005]Estas e outras características e vantagens da presente invenção devem ser mais completamente descritas em, ou tornam-se óbvias por, a descrição detalhada que segue das modalidades preferidas da invenção, que é para ser considerada juntamente com os desenhos anexos em que números semelhantes se referem a partes semelhantes e também em que:

[006]A Figura 1 é um gráfico representando os resultados de uma análise do efeito da administração do maternal de L. paracasei, arroz fermentado cepa CBA L74 na sobrevivência de descendência infectada com Cronobacter sakazakii.

[007]A Figura 2 é um gráfico representando os resultados de uma análise do efeito da administração do maternal de L. paracasei, arroz fermentado cepa CBA L74 na sobrevivência de descendência infectada com Cronobacter sakazakii.

[008]A Figura 3 é um gráfico representando os resultados de uma análise do efeito da administração do maternal de leite fermentado com L. paracasei CBA L74 na sobrevivência de descendência infectada com Salmonella typhimurium FB62.

Descrição Detalhada da Modalidade Preferida

[009]A presente invenção é com base, em parte, na descoberta dos inventores com a condição de que aquela administração do alimento fermentado pelo organismo probiótico Lactobacillus paracasei, cepa CBA L74, aos animais grávidos e lactantes pode reduzir ou atenuar a gravidade de infecções microbianas em sua descendência. Mais especificamente, os inventores têm constatado que a administração de arroz fermentado por L. paracasei, cepa CBA L74 às mães lactantes e grávidas resultou em uma porcentagem aumentada de sobrevivência em seus filhotes após a infecção com Cronobacter sakazakii. Semelhantemente, os inventores também constataram que a administração de leite fermentado por L paracasei, cepa CBA L74 às mães lactantes e grávidas resultou em uma porcentagem aumentada de sobrevivência em seus filhotes após a infecção com Salmonella typhimurium FB62. Desse modo, a invenção representa os métodos de redução ou atenuação da gravidade de ou prevenção nos organismos neonatais por administrar as composições compreendendo os produtos alimentícios fermentados por L. paracasei, cepa CBA L74 às suas mães. As composições podem ser administradas à mãe durante a gestação da criança, isto é, pré-natalmente. Alternativamente ou além do que as composições podem ser administradas à mãe após a criança ter nascido, isto é, pós-natalmente. Em algumas modalidades, a L. paracasei, cepa CBA L74 é não replicante.

[010]A Lactobacillus paracasei, cepa CBA L74 foi isolada pelos inventores e depositada sob o Tratado de Budapeste no Reconhecimento Internacional do Depósito de Micro-organismos para os Propósitos do Procedimento de Patente em 09 de setembro de 2008 na Coordenação Belga de Coleções de Micro-organismos (BCCM) Laboratorium voor Microbiologie (LMG), Ghent, Bélgica. O Número de Acessão dado pela Autoridade Depositária Internacional é LMG P-24778. Para facilidade de leitura, não vamos repetir a frase "Número de Acessão LMG P-24778" em todas as ocasiões. É para ser entendido que quando nos referimos a L. paracasei, cepa CBA L74, nos referimos à cepa depositada tendo o Número de Acessão LMG P-24778.

[011]Ao mesmo tempo que acreditamos entender que certos eventos que ocorrem na administração das composições compreendendo ou produzidos pela fermentação com L. paracasei CBA L74, as composições da presente invenção não são limitadas àquelas que trabalham por afetar qualquer mecanismo celular específico. Composições L. paracasei CBA LI 4

[012]As composições da invenção podem incluir o organismo probiótico, L. paracasei CBA L74. A Organização Mundial de Saúde definiu os probióticos como: "Microorganismos vivos que quando administrados em quantidades adequadas conferem um benefício à saúde do hospedeiro." Em algumas modalidades, a L. paracasei CBA L74 pode ser submetidas aos tratamentos que a tornar não replicante, por exemplo, exposição ao calor, irradiação de Y, ou irradiação de uv. Uma L. paracasei CBA L74 não replicante pode ser uma célula morta ou uma célula viva que tenha se tornar incapaz de divisão celular. Uma L. paracasei CBA L74 não replicante pode ser uma célula intacta ou um célula que tenha sido submetida à lise parcial ou completa. Em algumas modalidades, as células não replicantes podem incluir uma mistura de células intactas e lisadas.

Produtos Alimentícios

[013]As composições da invenção podem incluir um portador fisiologicamente aceitável. O portador fisiológico pode ser um produto alimentício ou um portador farmacêutico. Usamos o termo "fisiologicamente aceitável" (ou "farmacologicamente aceitável") para se referir a composições e entidades moleculares que não produzem uma outra reação adversa, alérgica ou inconveniente quando administrada a um animal ou um humano, conforme apropriado. Deste modo, as composições da invenção incluem produtos alimentícios fermentados pelo organismo probiótico, L. paracasei CBA L74. O produto alimentício pode incluir células L. paracasei CBA L74, ou viva ou não replicante. Em algumas modalidades, o produto alimentício pode ser processado para remover toda ou substancialmente todas as células L. paracasei CBA L74. Qualquer produto alimentício acessível à fermentação pela L. paracasei CBA L74 pode ser empregado. O produto alimentício pode ser um produto leiteiro, por exemplo, leite ou um produto com base em leite. As fontes de leite exemplares incluem, sem limitação, gado, ovelha, cabras, iaques, búfala de água, cavalos, asnos, rena e camelos. Independente da fonte, o leite ou os produtos do leite podem ser de qualquer forma adequada para fermentação pela L. paracasei CBA L74. Por exemplo, o leite pode ser leite integral ou leite que foi processado para remover um pouco ou a totalidade da nata, por exemplo, 2 % de leite, 1 % de leite ou leite sem gordura. Alternativamente ou além do que o leite pode ser previamente pasteurizado e ou homogenizado, seco e reconstituído, condensado ou evaporado. As frações dos produtos do leite incluindo caseína, proteína do soro ou lactose também podem ser empregadas. Em algumas modalidades, o produto do leite pode ser de cerca de 1 % a cerca de 30 % de leite em pó desnatado reconstituído, por exemplo, de cerca de 2 %, de cerca de 5 %, de cerca de 7 %, de cerca de 9 %, de cerca de 10 %, de cerca de 12 %, de cerca de 15 %, de cerca de 20 %, de cerca de 25 %, de cerca de 30 % de leite em pó desnatado reconstituído. Antes da fermentação o produto do leite pode ser combinado com um ou mais dos que seguem: a) um carboidrato (por exemplo, um dissacarídeo, tal como, dextrose ou um amido; b) um lipídeo; c) uma vitamina e d) um mineral. Por exemplo, o leite em pó desnatado pode ser combinado com dextrose a cerca de 2 %, por exemplo, de cerca de 0,25 %, de cerca de 0,50 %, de cerca de 0,75 %, de cerca de 1,0 %, de cerca de 1,5 % ou cerca de 2,0 %.

[014]O produto alimentício pode ser um produto de cereal, por exemplo, arroz, aveias, milho, sorgo, ou milho miúdo. Em algumas modalidades, o produto de cereal pode ser trigo, cevada, centeio ou triticale. O produto de cereal pode ser um grão inteiro ou ser moído em uma farinha. O produto alimentício pode ser uma espécie única de cereal ou uma mistura de duas ou mais espécies de cereais, por exemplo, farinha de aveia mais farinha de arroz. Os produtos de cereais podem ser de uma classificação e tipo adequados para o consumo humano ou podem ser os produtos adequados para o consumo pelos animais domésticos. De modo geral, o produto de cereal é hidratado antes da fermentação. A concentração de cereais pode variar, mas as faixas úteis incluem de cerca de 5 % a cerca de 50 % de peso/ volume, por exemplo, de cerca de 8 % de peso/ volume, de cerca de 10 % de peso/ volume, de cerca de 12 % de peso/ volume, de cerca de 15 % de peso/ volume, de cerca de 18 % de peso/ volume, de cerca de 20 % de peso/ volume, de cerca de 22 % de peso/ volume, de cerca de 25 % de peso/ volume, de cerca de 30 % de peso/ volume, de cerca de 35 % de peso/ volume, de cerca de 40 % de peso/ volume, de cerca de 45 % de peso/ volume ou cerca de 50 % de peso/ volume. As concentrações exemplares incluem 15 % de peso/ volume de arroz ou uma mistura de 18,5 % de peso/ volume de farinha de aveia mais 5 % de peso/ volume de farinha de cevada maltada. O pH dos cereais hidratados pode ser ajustado empregando qualquer ácido adequado para o consumo. O ácido pode ser, por exemplo, um ácido orgânico. Os ácidos orgânicos úteis incluem ácido acético, ácido cítrico, ácido láctico, ácido adípico, ácido málico e ácido tartárico. Qualquer combinação de dois ou mais ácidos pode ser empregada. Em algumas modalidades, o pH pode ser ajustado para cerca de 4,0 empregando ácido cítrico.

[015]O produto alimentício também pode ser um produto de fruta ou de um vegetal, por exemplo, um suco, um purê, um concentrado, uma pasta, um molho, um conserva ou um ketchup. As frutas e vegetais exemplares incluem, sem limitação, abóboras, por exemplo, abobrinha, abóbora amarela, abóbora de inverno, abóbora; batatas, aspargo, brócolis, couve de Bruxelas, feijões, por exemplo, feijões verdes, feijões manteiga, feijões de lima, feijões favas, feijões de soja, repolho, cenouras, couve-flor, pepinos, couve-rábano, alhos-porós, cebolinha, cebolas, ervilhas de açúcar, ervilhas Inglesas, pimentas, nabos, rutabagas, tomates, maçãs, peras, pêssegos, ameixas, morangos, framboesas, amoras pretas, mirtilos, amoras alpinas, boysenberries, groselhas, uvas, groselhas, laranjas, limões, toranja, bananas, mangas, kiwi, e carambola.

[016]O produto alimentício também pode ser um "leite" produzido a partir de nozes da árvore ou legumes, por exemplo, leite de soja ou leite de amêndoa.

[017]Também considerados são os produtos alimentícios compreendendo proteínas de animais, por exemplo, carne, por exemplo, salsichas, carnes secas, peixe e produtos do peixe seco.

[018]Independente do tipo de produto alimentício, que é, empregado, o produto é combinado com L. paracasei CBA L74 e incubado em uma temperatura e durante um tempo suficiente para a fermentação ocorrer. Qualquer método padrão de fermentação conhecido na técnica pode ser empregado. As condições específicas de fermentação variarão de acordo com muitos fatores incluindo, por exemplo, do tipo de produto alimentício, da concentração do produto alimentício, a instrumentação, que é, empregada, do volume da amostra, da concentração inicial do inóculo da L. paracasei CBA L74, da presença, se existir, de um co-inóculo, das propriedades organolépticas do alimento fermentado, e do uso pretendido do alimento fermentado.

[019]Igualmente a instrumentação e o substrato (isto é, o produto alimentício a ser fermentado) são esterilizados antes da inoculação com L. paracasei CBA L74 a fim de diminuir o nível de, ou eliminar, viroses infecciosas e/ ou fungos e/ ou bactérias viáveis. A instrumentação pode ser esterilizada empregando os métodos padrões ou de acordo com as instruções do fabricante. A escolha de um método específico para esterilização do substrato dependerá, em parte, da estabilidade do substrato para o método esterilização. Por exemplo, o substrato pode ser esterilizado por meio de vapor e pressão, por exemplo, por meio de autoclavagem, ciclos repetidos of aquecimento e resfriamento (por exemplo, tindalização) exposição a altas pressões (por exemplo, pascalização), ultrafiltragem, ou radiação (por exemplo, exposição à gama-, x-, feixe de elétrons, e/ ou ultravioleta (comprimento de onda de 10 nm a 320 nm, por exemplo, de 50 nm a 320 nm, de 100 nm a 320 nm, de 150 nm a 320 nm, de 180 nm a 320 nm, ou de 200 nm a 300 nm). As alíquotas do substrato podem ser removidas em seguida ao tratamento e semeadas no meio adequado para confirmar a ausência de contaminantes fúngicos e/ ou bacterianos. Se o substrato foi esterilizado por meio de exposição à elevadas temperaturas, deve ser resfriado até pelo menos 37 °C antes da inoculação com L. paracasei CBA L74.

[020]O substrato pode ser inoculado com L. paracasei CBA L74 de acordo com os métodos padrões, por exemplo, a partir de cultura de líquido fresco ou uma cultura de secado por congelamento que foi ressuspenso em meio aquoso durante um curto tempo antes da inoculação. Em geral, a L. paracasei CBA L74 é adicionada nas concentrações de cerca de 0,5 x 106 a cerca de 1 x 106 cfu/ ml de substrato, por exemplo, de cerca de 1 x 106 cfu/ ml, de cerca de 2 x 106 cfu/ ml, de cerca de 5 x 106 cfu/ ml, 7 x 106 cfu/ ml 8x 106 cfu/ ml. A cultura deve ser agitada suficientemente para produzir uma distribuição relativamente uniforme das bactérias e substrato, mas não excessivamente, uma vez que, a L. paracasei CBA L74 é uma bactéria anaeróbica. Por exemplo, uma cultura de cinco litros pode ser agitada em torno de 150 rpm. A temperatura da fermentação é, de modo geral, a 37 °C. Vários parâmetros, por exemplo, o pH, a pressão parcial de O2, velocidade do agitador, temperatura, mistura de gás, nível de espuma e concentração de substrato podem ser monitorados durante a fermentação e ajustados assim. O crescimento da L. paracasei CBA L74 pode ser monitorado empregando métodos microbiológicos padrões. A fermentação é realizada até que a concentração de L. paracasei CBA L74 seja quase entre cerca de 108/ ml e cerca de 109/ ml. Dependendo do substrato e de outras condições, esta concentração pode ser alcançada em cerca de 10 a cerca de 30 horas após inoculação, por exemplo, de cerca de 12 horas, de cerca de 15 horas, de cerca de 18 horas, de cerca de 24 horas, de cerca de 30 horas.

[021]As amostras do substrato podem ser analisadas antes, durante e após a fermentação para a qualidade da garantia empregando os métodos microbiológicos padrões. Os métodos exemplares incluem, mas não estão limitados a, o crescimento no ágar Rogosa para L. paracasei CBA L74, o crescimento no ágar padrão de contagem (PCA) para os aeróbios totais, o crescimento no ágar McConkay para os coliformes, o crescimento no ágar clostridial reforçado (RCM) para Clostridia. Além das contagens de colônias, as morfologias de colônias podem ser observadas e comparadas às amostras de referência.

[022]Em algumas modalidades, um co-inóculo pode ser adicionado juntamente com a L. paracasei CBA L74 a fim de auxiliar a iniciar a fermentação. Os co-inóculos úteis para fermentação dos produtos do leite incluem, por exemplo, sem limitação, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus salivarious, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus casei, Lactobacillus lactis, Lactobacillus delbrueckii, subespécie Bulgaricus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis, ou Leuconostoc mesenteroides. Em geral, a concentração do co-inóculo deve ser mais baixa do que aquela da L. paracasei CBA L74, por exemplo, de cerca de 1 x 104 ml x 105/ ml. A concentração final de S. thermophilus pode variar de cerca de 0,5 x 108/ ml a cerca de 2.5 x 108/ ml.

[023]Uma vez que as concentrações adequadas de L. paracasei CBA L74 foram alcançadas, o alimento fermentado pode ser ainda processado para uso. Em algumas modalidades, o alimento fermentado pode ser fracionado para remover toda ou substancialmente a totalidade das células L. paracasei CBA L74. Em algumas modalidades, o pH do alimento fermentado pode ser ajustado, por exemplo, de cerca de 3,0 para mais perto da neutralidade, por exemplo, 6,5, com a adição de NaOH ou KOH. Em algumas modalidades, o alimento fermentado pode ser seco. O produto alimentício fermentado pode ser seco por meio de qualquer método conhecido na técnica que resultará na retenção das propriedades imunomoduladoras do alimento fermentado. Os métodos de secagem exemplares incluem secagem por spray, secagem por congelamento, por exemplo, liofilização, ou secagem por tambor. O teor final de água do produto alimentício fermentado pode variar, mas pode ser entre cerca de 1 % e cerca de 10 % ou mais. Em algumas modalidades, o processo de secagem pode produzir a L. paracasei CBA L74 não replicante.

[024]Os alimentos fermentados secos podem ser hidratados antes do uso. Dependendo da quantidade de líquido usado na hidratação, os produtos alimentícios fermentados podem conter o equivalente a cerca de 102 e 1012 cfu/ ml de L. paracasei CBA L74. A L. paracasei CBA L74 seca não forma colônias, desse modo, é entendido que esta quantidade é calculada com base no número de bactérias vivas que estavam presentes nos alimentos fermentados antes da etapa de secagem. Em algumas modalidades, os produtos alimentícios fermentados podem incluir o equivalente a cerca de 107 a cerca de 1012 cfu/ g, por exemplo, de cerca de 5 x 107cfu/ g, de cerca de 1 x 108cfu/ g, de cerca de 5 x 108 cfu/ g, de cerca de 1 x 109 cfu/ g, de cerca de 5 x 109 cfu/ g, de cerca de 1 x 1010 cfu/ g, de cerca de 5 x 1010 cfu/ g, de cerca de 1 x 1011 cfu/ g, de cerca de 5 x 1011 cfu/ g do peso seco.

[025]Dois ou mais produtos alimentícios fermentados preparados pelos métodos da invenção podem ser combinados antes da administração. Por exemplo, os produtos do leite fermentado podem ser combinados com os produtos de cereais fermentados. Alternativamente, o produto alimentício fermentado pode ser combinado com outros produtos alimentícios, por exemplo, produtos alimentícios não fermentados ou produtos alimentícios fermentados empregando outras cepas bacterianas. Qualquer combinação pode ser empregada com a condição de que os efeitos nos peptídeos de gliadina do alimento fermentado sejam mantidos. Os produtos alimentícios exemplares incluem, sem limitação, produtos leiteiros, por exemplo, leite, iogurte, coalhada, queijo e produtos com base em queijo, leites fermentados, produtos fermentados com base em leite, pós com base em leite, fórmulas para criança, alimentos para crianças coados com base em leite, sorvete, gelato, pudins, sopas, molhos, purês, ou temperos, fórmulas nutricionais para o idoso; produtos de cereais, por exemplo, pábulo, alimentos para crianças coados com base em cereais, farinha de aveia, fécula, semolina, polenta, pasta, biscoitos, bolachas, barras de energia; produtos de vegetais; por exemplo, purês, alimentos para crianças coados com base em vegetais, vegetais em conserva incluindo pepinos, repolho, cenouras, feijões, pimentas, ou sabores; produtos de frutas, por exemplo, alimentos para crianças coados com base em frutas, produtos de tomate, purês, molhos, pastas, ketchups, purês de frutas; ou um dos produtos com base em proteína, por exemplo, legumes, salsichas, frios, cachorros quentes, ou patês. Em algumas modalidades, o alimento fermentado pode ser combinado com alimentos para animais de estimação ou comidas para animais.

Composições Farmacêuticas

[026]As composições descritas aqui podem ser combinadas com um portador farmaceuticamente aceitável. O termo "portador farmaceuticamente aceitável," como empregado aqui, inclui qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, antibacteriana, agentes retardantes de absorção e isotônicos, tampões, excipientes, aglutinantes, lubricantes, géis, tensoativos e assim por diante, que podem ser empregados como meios para uma substância farmaceuticamente aceitável.

[027]Deste modo, a invenção também inclui as composições farmacêuticas que contêm, como o ingrediente ativo, a L. paracasei CBA L74 ou um ou mais metabólitos produzidos pela L. paracasei CBA L74 descritos aqui, em combinação com um ou mais portadores farmaceuticamente aceitáveis. Em algumas modalidades, a L. paracasei CBA L74 pode ser esterilizada empregando as técnicas convencionais de esterilização antes ou após ser combinada com o portador farmaceuticamente aceitável. Na produção as composições da invenção, a L. paracasei CBA L74 ou um ou mais metabólitos produzidos pela L. paracasei CBA L74, são caracteristicamente misturados com um excipiente, diluídos por um excipiente ou fechados em um tal portador na forma de, por exemplo, uma cápsula, comprimido, sachê, papel, ou outro recipiente. Quando o excipiente serve como um diluente, pode ser um material sólido, semissólido, ou líquido (por exemplo, salina normal), o qual age como um veículo, portador ou meio para o ingrediente ativo. Deste modo, as composições podem ser na forma de comprimidos, pílulas, pós, losangos, sachês, selos, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, aerossóis (como um sólido ou em um meio líquido), unguentos, cápsulas macias e duras de gelatina, supositórios, soluções estéreis injetáveis, e pós-estéreis embalados. Como é conhecido na técnica, o tipo de diluente pode variar dependendo da via pretendida de administração. As composições resultantes podem incluir agentes adicionais, tais como, conservantes. O excipiente ou portador é selecionado na base do modo e via de administração. Os portadores farmacêuticos adequados, assim como, as necessidades farmacêuticas para uso nas formulações farmacêuticas, são descritos em Remington's Pharmaceutical Sciences (E. W. Martin), um texto de referência bem conhecido neste campo, e na USP/ NF (United States Pharmacopeia and the National Formulary). Alguns exemplos de excipientes adequados incluem lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos, goma de acácia, fosfato de cálcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de cálcio, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, celulose, água, xarope, e metil celulose. As formulações podem adicionalmente incluir: agentes lubrificantes, tais como, talco, estearato de magnésio, e óleo mineral; agentes de umectação; agentes de emulsificação e de suspensão; agentes conservantes, tais como, metil- e propilhidróxi-benzoatos; agentes adoçantes; e agentes aromatizantes. As composições farmacêuticas podem ser formuladas a fim de fornecer liberação prolongada, sustentada ou rápida do ingrediente ativo após a administração à paciente empregando-se os procedimentos conhecidos na técnica.

[028]As formulações farmaceuticamente aceitáveis para uso nos atuais métodos, incluindo aquelas em que a L. paracasei CBA L74 ou um ou mais metabólitos produzidos pela L. paracasei CBA L74, são apanhados em um colóide para liberação oral, podem ser preparados de acordo com as técnicas padrões. A L paracasei CBA L74 ou um ou mais metabólitos produzidos pela L. paracasei CBA L74, podem ser secos e compactados por meio de moagem ou pulverização e inseridos em uma cápsula para administração oral. Em algumas modalidades, a L paracasei CBA L74 ou um ou mais metabólitos produzidos pela L. paracasei CBA L74, podem ser combinados com um ou mais excipientes, por exemplo, um desintegrante, um enchimento, um deslizante, ou um conservante. As cápsulas adequadas incluem igualmente as cápsulas com casca dura ou as cápsulas com casca macia. Qualquer colóide com base em polímero ou com base em lipídeo pode ser empregado para formar a cápsula. Os polímeros exemplares úteis para as preparações de colóide incluem gelatina, polissacarídeos de plantas ou seus derivados, tais como, carrageninas e formas modificadas de amido e celulose, por exemplo, hipromelose. Opcionalmente, outros ingredientes podem ser adicionados à solução de agente de gelificação, por exemplo, plastificantes, tais como, glicerina e/ ou sorbitol para diminuir a resistência da cápsula, agentes corantes, conservantes, desintegrantes, lubrificantes e tratamento de superfície. Em algumas modalidades, a cápsula não inclui gelatina. Em outras modalidades, a cápsula não inclui polissacarídeos de plantas ou seus derivados.

[029]Independente da sua fonte original ou do modo em que são obtidos, a L. paracasei CBA L74 ou um ou mais metabólitos produzidos pela L. paracasei CBA L74, podem ser formulados de acordo com seu uso. Estas composições podem ser preparadas de certo modo bem conhecidas na técnica farmacêutica, e podem ser administradas por meio de uma variedade de vias, dependendo de se o tratamento local ou sistêmico é desejado e na área a ser tratada. A administração pode ser oral ou tópica (incluindo oftálmica e para as membranas mucosas incluindo liberação intranasal, vaginal e retal). Em algumas modalidades, a administração pode ser pulmonar (por exemplo, por meio de inalação ou insuflação de pós ou aerossóis, incluindo por meio de nebulizador; intratraqueal, intranasal, epidérmico and transdérmico) ou ocular. Os métodos para liberação ocular podem incluir administração tópica (colírios), injeção subconjuntival, periocular ou intravitreal ou introdução por meio de cateter balão ou inserções oftálmicas cirurgicamente colocadas no sac. conjuntival. A administração parenteral inclui infusão ou injeção intravenosa, intra-arterial, subcutânea, intraperitoneal ou intramuscular; ou intracraniana, por exemplo, administração intratecal ou intraventricular. A administração parenteral pode ser na forma de uma dose de bolo único, ou pode ser, por exemplo, por meio de uma bomba de perfusão contínua. As formulações e composições farmacêuticas para administração tópica podem incluir emplastros transdérmicos, unguentos, loções, cremes, géis, gotas, supositórios, sprays, líquidos, pós, e assim por diante. Os portadores farmacêuticos convencionais, de bases aquosas, em pó ou oleosas, espessantes e assim por diante podem ser necessários ou desejáveis.

[030]As composições podem ser formuladas em uma forma de dosagem de unidade, cada dosagem contendo, por exemplo, de cerca de 0,005 mg a cerca de 2.000 mg de L. paracasei CBA L74 ou um ou mais metabólitos produzidos pela L. paracasei CBA L74, por dose diária. O termo "formas de dosagens de unidades" se refere às unidades fisicamente distintas adequadas como dosagens unitárias para as pacientes humanas e outros mamíferos, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de material ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com um excipiente farmacêutico adequado. Para a preparação das composições sólidas, tais como, comprimidos, o principal ingrediente ativo é misturado com um excipiente farmacêutico para formar uma composição de preformulação sólida contendo uma mistura homogênea de um composto da presente invenção. Quando se referindo àquelas composições de preformulação conforme o ingrediente ativo, homogêneo, é caracteristicamente disperso uniformemente através da composição a fim de que a composição possa ser facilmente subdividida em formas de dosagens de unidades igualmente eficazes, tais como, comprimidos, pílulas e cápsulas. Esta preformulação sólida é em seguida subdividida nas formas de dosagens de unidades do tipo descritas acima contendo de, por exemplo, 0,005 mg a cerca de 1.000 mg da L. paracasei CBA L74 ou um ou mais metabólitos produzidos pela L. paracasei CBA L74, da presente invenção.

[031]As composições podem ser formuladas em uma forma de dosagem de unidade, cada dosagem contendo, por exemplo, de cerca de 0,1 mg a cerca de 50 mg, de cerca de 0,1 mg a cerca de 40 mg, de cerca de 0,1 mg a cerca de 20 mg, de cerca de 0,1 mg a cerca de 10 mg, de cerca de 0,2 mg a cerca de 20 mg, de cerca de 0,3 mg a cerca de 15 mg, de cerca de 0,4 mg a cerca de 10 mg, de cerca de 0,5 mg a cerca de 1 mg; de cerca de 0,5 mg a cerca de 100 mg, de cerca de 0,5 mg a cerca de 50 mg, de cerca de 0,5 mg a cerca de 30 mg, de cerca de 0,5 mg a cerca de 20 mg, de cerca de 0,5 mg a cerca de 10 mg, de cerca de 0,5 mg a cerca de 5 mg; de cerca de 1 mg de cerca de 50 mg, de cerca de 1 mg a cerca de 30 mg, de cerca de 1 mg a cerca de 20 mg, de cerca de 1 mg a cerca de 10 mg, de cerca de 1 mg a cerca de 5 mg; de cerca de 5 mg a cerca de 50 mg, de cerca de 5 mg a cerca de 20 mg, de cerca de 5 mg a cerca de 10 mg; de cerca de 10 mg a cerca de 100 mg, de cerca de 20 mg a cerca de 200 mg, de cerca de 30 mg a cerca de 150 mg, de cerca de 40 mg a cerca de 100 mg, de cerca de 50 mg a cerca de 100 mg do ingrediente ativo.

[032]Em algumas modalidades, os comprimidos ou as pílulas da presente invenção podem ser revestidos ou de outra forma composto para fornecer uma forma de dosagem oferecendo a vantagem de ação prolongada. Por exemplo, o comprimido ou a pílula pode compreender uma componente de dosagem interna e um de dosagem externa, o último sendo na forma de um envelope sobre o primeiro. Os dois componentes podem ser separados por uma camada entérica que serve para resistir à desintegração no estômago e permitir ao componente interno passar intacto no duodeno ou ser prolongado na liberação. Uma variedade de materiais pode ser empregada para tais revestimentos ou camadas entéricas, tais materiais incluindo um número de ácidos poliméricos e misturas de ácidos poliméricos com tais materiais como goma-laca, álcool de cetila, e acetato de celulose.

[033]As formas líquidas em que as composições da presente invenção podem ser incorporadas para administração oralmente ou por meio de injeção incluem soluções aquosas, xaropes adequadamente aromatizados suspensões aquosas ou oleosas, e emulsões aromatizadas com óleos comestíveis, tais como, óleo de caroço de algodão, óleo de gergelim, óleo de coco, ou óleo de amendoim, assim como, elixires e veículos farmacêuticos semelhantes.

[034]A proporção ou a concentração das composições da invenção em uma composição farmacêutica pode variar dependendo de um número de fatores incluindo dosagem, características químicas (por exemplo, hidrofobicidade), e a via de administração. Por exemplo, a L. paracasei CBA L74 ou um ou mais metabólitos produzidos pela L.paracasei CBA L74, da invenção pode ser fornecida em uma cápsula contendo de cerca de 0,005 mg grama a cerca de 1.000 mg para administração oral.

[035]Em algumas modalidades, as composições podem incluir fermentados de L. paracasei CBA L74, a partir das quais todas ou substancialmente todas, as células L. paracasei CBA L74 foram removidas. Os métodos para separar as células dos meios de crescimentos são bem conhecidos na técnica e podem depender dos métodos físicos, por exemplo, centrifugação para produzir a pélete de células e uma cultura sobrenadante, filtragem, ultrafiltragem, filtração com fluxo tangencial, filtração com fluxo normal ou osmose reversa. Alternativamente ou além do que, o método de separação pode ser com base no ligando e incluem, por exemplo, um anticorpo que especificamente se liga a L. paracasei CBA L74. O anticorpo pode ser acoplado a um suporte sólido, tal como, uma esfera magnética.

[036]As composições incluem um ou mais metabólitos L. paracasei CBA L74, isto é, qualquer substância produzida por L. paracasei CBA L74. O metabólito pode ser codificado por um ou mais genes ou pode ser gerado pela atividade enzimática de um ou mais produtos do gene. Os metabólitos incluem, por exemplo, moléculas pequenas, por exemplo, aminoácidos, nucleosídeos, nucleotídeos, assim como, maiores estruturas poliméricas, tais como, polipeptídeos, carboidratos, ácidos nucléicos, proteoglicanos e lipídeos. O metabólito pode ser um metabólito primário, por exemplo, um metabólito diretamente envolvido na função da célula normal, ou um metabólito secundário, por exemplo, um metabólito caracteristicamente não necessário para as funções celulares fundamentais. Um metabólito também pode incluir qualquer intermediário metabólico gerado durante a síntese de um metabólito primário ou secundário. Os intermediários podem incluir, mas não estão limitados aos intermediários de Embden-Meyerhof, séries de reações de pentose fosfato (pentose-P), séries de reações de Entner-Doudoroff, ciclo de citrato e biossíntese de aminoácido.

[037]Os metabólitos primários exemplares incluem, sem limitação, álcoois, por exemplo, etanol, metanol, butanol; aminoácidos, por exemplo, lisina, arginina, ornitina, histidina, citrulina, isoleucina, alanina, valina, leucina, glicina, treonina, serina, prolina, fenilalanina, tirosina, triptofano, cisteína, cistina, metionina, ácido glutâmico, ácido aspártico, glutamina, e asparagina; nucleotídeos, por exemplo, ácido 5' guanílico; antioxidantes, por exemplo, ácido isoasórbico; ácidos orgânicos, por exemplo, ácido acético, ácido láctico, ácido cítrico; vitaminas, por exemplo, vitamina B12; açúcares, ácidos graxos.

[038]Um metabólito também pode ser um metabólito secundário. Os metabólitos secundários são caracteristicamente àqueles que não são necessários para as funções celulares fundamentais. Os metabólitos secundários podem variar amplamente; os metabólitos secundários exemplares incluem antibióticos, hormônios, flavonóides, terpenóides, alcalóides, fenilpropanóides, derivados de fenila, derivados de hexanol, cumarinas, estilbenos, cianidrinas, glicosinolatos, esteróis, e saponinas.

[039]A Lactobacilli caracteristicamente produz os metabólitos que seguem durante a fermentação dos produtos do leite: ácido láctico/ lactato, acetato, etanol, formiato, acetaldeído, α-acetolactato, acetoína, diacetila, e 2,3 butileno glicol (butanediol) durante a fermentação dos produtos do leite. A fermentação pode ser de qualquer processo em que um micróbio causa ou contribui para uma decomposição de uma substância orgânica complexa nas substâncias mais simples.

[040]O metabólito L. paracasei CBA L74 pode estar contido nos meios, fermentados ou culturas sobrenadantes. Em algumas modalidades, o metabólito pode ser parcialmente ou substancialmente isolado dos meios, fermentados ou culturas sobrenadantes. Os métodos de isolamento dos metabólitos variarão de acordo com a estrutura e química do metabólito específico. Um metabólito parcialmente ou substancialmente isolado manterá a atividade funcional, isto é, a capacidade de conferir um efeito terapêutico em uma descendência quando administrado à mãe lactante da descendência. Os métodos padrões conhecidos na técnica podem ser empregados para o isolamento e a caracterização dos metabólitos L. paracasei CBA L74. Os métodos exemplares incluem, por exemplo, análises da estabilidade, por exemplo, estabilidade ao calor, pH, e/ ou atividade enzimática; análise cromatográfica, por exemplo, cromatografia de exclusão por tamanho, cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC), cromatografia gasosa, cromatografia em camada fina, cromatografia de permuta de ânions, cromatografia de afinidade, cromatografia de fase reversa; espectrometria de massa.

Métodos de Uso

[041]As composições e os métodos descritos aqui são, de modo geral, e variadamente úteis para tratar ou reduzir a gravidade das infecções microbianas nas crianças quando administrada às mães lactantes dessas crianças. As composições podem ser administradas à mãe pré-natalmente, isto é, antes da criança ter nascido, ou pós-natalmente, isto é, após a criança ter nascido, ou igualmente pré-natalmente, isto é, antes da criança ter nascido, e pós-natalmente, isto é, após a criança ter nascido. As pacientes para quem tal tratamento é benéfico incluem crianças normais, nascidas a termo, assim como, prematuras, crianças pré-termos ou de baixo peso ao nascer.

[042]A invenção não é, desse modo, limitadora de qualquer modo e os métodos podem ser empregados no tratamento e prevenção das infecções nas crianças lactantes de qualquer idade, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 30 dias de idade; ou 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, ou 12 meses de idade; ou 1, 2, 3, ou cerca de 4 anos de idade ou até a criança ter desmamado. Os métodos são aplicáveis a ambas as infecções congênitas, isto é, as infecções adquiridas no útero, e infecções neonatais, isto é, as infecções adquiridas em ou logo após o nascimento. Uma infecção microbiana pode incluir uma infecção causada por uma bactéria, vírus, protozoários ou fungo. As infecções congênitas são caracteristicamente o resultado da transmissão transplacental e presente pré- natalmente, intranatalmente ou imediatamente após o parto. Os agentes infecciosos congênitos comuns incluem Viridans streptococci e S. agalactiae. As infecções neonatais, de modo geral, são adquiridas como infecções ascendentes do canal do parto, ou através do ambiente externo ou através do leite materno. Tais infecções presentes durante o período de pós-parto, por exemplo, dentro de cerca de um mês após o nascimento. Os agentes infecciosos neonatais comuns incluem, por exemplo, Viridans streptococci, S. agalactiae e outra Streptococcus do Grupo B, Cronobacter sakazakii, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Klebsiella spp., Listeria monocytogenes, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Yersinia, Shigella, Clostridium, e Helicobacter pylori. Em algumas modalidades, o agente infeccioso pode ser um vírus, por exemplo, rotavírus, rubéola, citomegalovírus, ou um vírus do herpes. Em algumas modalidades, o agente infeccioso pode ser um protozoário, por exemplo, Entamoeba histolytica, Cryptosporidium spp, Campylobacter spp., ou Toxoplasma spp. Em algumas modalidades, o agente infeccioso pode ser um fungo, por exemplo, Candida spp., por exemplo, C. albicans ou C. parapsilosis, ou Malassezia, Zygomycetes, ou Aspergillus

[043]Uma paciente, por exemplo, de uma descendência de uma mãe lactante recebendo um produto alimentício ou composição farmacêutica compreendendo L. paracasei CBA L74 descrita aqui, é efetivamente tratada assim que um resultado clinicamente benéfico acontece. Isto pode significar, por exemplo, uma resolução completa dos sintomas associados com uma infecção, uma diminuição na gravidade dos sintomas associados com uma infecção, ou uma redução da progressão dos sintomas associados com uma infecção. Estes métodos também podem incluir as etapas de a) identificar uma paciente (por exemplo, uma paciente e, mais especificamente, uma paciente humana) que tem uma infecção; e b) fornecer à mãe lactante da paciente uma composição compreendendo L. paracasei CBA L74 descrita aqui, tal como, qualquer composição ou produto alimentício fermentado compreendendo L. paracasei CBA L74 em um portador fisiologicamente aceitável. Uma quantidade de uma tal composição fornecida à mãe lactante que resulta em uma resolução completa dos sintomas na criança associados com uma infecção, uma diminuição na gravidade dos sintomas associados com uma infecção, ou uma redução da progressão dos sintomas associados com uma infecção é considerada uma quantidade terapeuticamente eficaz. Os atuais métodos também podem incluir uma etapa de monitoramento para ajudar a otimizar a dosagem e agendamento assim como prognosticar o resultado.

[044]Os métodos descritos aqui podem ser aplicados à uma ampla faixa de espécies, por exemplo, humanos, primatas não humanos (por exemplo, macacos), cavalos, porcos, vacas ou outros de pecuária, cães, gatos ou outros mamíferos mantidos como animais de estimação, ratos, camundongos, ou outros animais de laboratório. As composições descritas aqui são úteis nos regimes e composições terapêuticas ou para a produção de um medicamento para uso no tratamento de condições como descrito aqui (por exemplo, uma infecção neonatal ou congênita).

[045]As composições nutricionais descritas aqui podem ser administradas oralmente como parte da dieta diária ordinária da grávida ou mãe lactante. Quando formuladas como farmacêuticos, as composições podem ser administradas à qualquer parte do corpo do hospedeiro para subsequente liberação em uma célula alvo. Uma composição pode ser liberada para, sem limitação, o cérebro, o líquido cerebroespinal, articulações, mucosa nasal, sangue, pulmões, intestinos, tecidos musculares, pele, ou a cavidade peritoneal de um mamífero. Nos termos de vias de liberação, uma composição pode ser administrada por meio de injeção intravenosa, intracraniana, intraperitoneal, intramuscular, subcutânea, intramuscular, intraretal, intravaginal, intratecal, intratraqueal, intradérmica, ou transdérmica, por meio de administração oral ou nasal, ou por perfusão gradual ao longo do tempo. Em um outro exemplo, uma preparação de aerossol de uma composição pode ser dada à um hospedeiro por meio de inalação.

[046]Independente de se as composições são formuladas como produtos alimentícios ou como farmacêuticos, a dosagem necessária dependerá da via de administração, da natureza da formulação, do tamanho, peso, área superficial, idade, e sexo da mãe, outros fármacos sendo administrados, e o diagnóstico dos clínicos assistentes. As dosagens adequadas estão na faixa de 0,01 - 1.000 mg/ kg. Algumas faixas de dosagem típicas são de cerca de 1 pg/ kg a cerca de 1 g/ kg de peso corporal por dia. Em algumas modalidades, a faixa de dosagem é de cerca de 0,01 mg/ kg a cerca de 100 mg/ kg de peso corporal por dia. Em algumas modalidades, a dose pode ser, por exemplo, 1 mg/ kg, 2 mg/ kg, 5 mg/ kg, 10 mg/ kg, 20 mg/ kg, 50 mg/ kg ou 100 mg/ kg. A dosagem é provavelmente depender de tais variáveis como do tipo e extensão da progressão da doença ou distúrbio, do estado geral da saúda do paciente específico, da eficácia biológica relativa do composto selecionado, da formulação do excipiente, e de sua via de administração.

[047]As doses eficazes podem ser extrapoladas das curvas de resposta à dose derivadas de um dos sistemas de teste de modelo animal ou in vitro. Por exemplo, análise in vitro do funcionamento do sistema imune, por exemplo, produção de citocina pelas células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) pode ser uma útil para analisar as respostas pró- e anti-inflamatória, por exemplo, a secreção de IL-I β, IL-12, IL-4, TNF-α, ou IL-10 respectivamente. As composições também podem ser analisadas para os efeitos nos modelos animais, por exemplo, as taxas de sobrevivência no modelo de sistemas de infecção, por exemplo, com C. sakazakii ou S. typhimurium ou outros indicadores do funcionamento do sistema imune, por exemplo, produção de IgA, produção de citocina por meio dos explantes dos emplastros de Peyer, e célula dendrítica e respostas as células T.

[048]Amplas variações na dosagem necessária são para serem esperadas em vista da variedade de alvos celulares e as diferentes eficiências de várias vias de administração. As variações nestes níveis de dosagem podem ser ajustadas empregando as rotinas padrões empíricas para otimização, como é bem entendido na técnica. As administrações podem ser únicas ou múltiplas (por exemplo, 2- ou 3-, 4-, 6-, 8-, 10-, 20-, 50-, 100-, 150-, ou mais vezes). A encapsulação dos compostos em um veículo adequado de liberação (por exemplo, micropartículas poliméricas ou dispositivos implantáveis) pode aumentar a eficiência da liberação.

[049]A duração do tratamento com qualquer composição fornecida aqui também pode variar. A administração das composições pode começar durante a gravidez e continuar após o nascimento até a descendência ser desmamada. Alternativamente, a administração pode ser descontinuada após o nascimento ou a administração pode começar a qualquer tempo após o nascimento da descendência e continuar até a descendência ser desmamada. Também é observado que a frequência de tratamento pode ser variável. Por exemplo, as atuais composições podem ser administradas uma vez (ou duas vezes, três vezes, etc.) diariamente, semanalmente, mensalmente. Quando as composições são formuladas como produto alimentício, por exemplo, as composições podem ser administradas diariamente em cada refeição.

[050]Qualquer método conhecido por àqueles na técnica pode ser empregado para determinar se uma resposta específica é induzida. Os métodos clínicos que podem avaliar a intensidade de um estado específico da doença podem ser empregados para determinar se uma resposta é induzida. Por exemplo, uma paciente pode ser monitorada para alívio sintomático, por exemplo, alívio de febre, cólica, diarreia, náusea, vômitos, convulsões, icterícia, níveis baixos de glicose no sangue, além de monitoramento pelos ensaios clínicos, por exemplo, cultura de microorganismos, hemogramas, análise do líquido cerebroespinal, marcadores séricos, técnicas de imagem, por exemplo, ultrassom, raios x, e métodos endoscópicos.

[051]As composições também podem ser administradas em conjunto com outras modalidades terapêuticas. Em algumas modalidades, a descendência pode ser tratada com os agentes padrões, por exemplo, antibióticos, agentes anti- inflamatórios, anti-histaminas e outros tratamentos dietéticos, por exemplo, fórmulas para criança hipoalergênica. A administração simultânea de dois ou mais agentes terapêuticos não exige que os agentes sejam administrados ao mesmo tempo ou pela mesma via, uma vez que existe uma sobreposição no período de tempo durante o qual os agentes estão exercendo seu efeito terapêutico. A administração simultânea ou sequencial é considerada, conforme é a administração em diferentes dias ou semanas.

[052]Esta descrição das modalidades preferidas é destinada a ser compreendida em relação aos desenhos anexos os quais são para serem considerados parte de toda a descrição escrita desta invenção. As figuras dos desenhos não são necessariamente a escala e certas características da invenção podem ser mostradas exageradas em escala ou em forma um pouco esquemática no interesse da clareza e concisão. Na descrição, os termos relativos, tais como, "horizontal," "vertical," "para cima," "para baixo," "superior" e "inferior" assim como seus derivados (por exemplo, "horizontalmente," "descendentemente," "ascendentemente," etc.) devem ser interpretados para se referirem à orientação conforme em seguida descrito ou como mostrado na figura do desenho em discussão. Estes termos relativos são por conveniência de descrição e normalmente não são destinados à exigir uma orientação específica. Os termos incluindo "interiormente" versus "exteriormente," "longitudinal" versus "lateral" e assim por diante são para serem interpretados em relação uns aos outros ou em relação a um eixo de prolongamento, ou um eixo ou centro de rotação, conforme apropriado. Os termos relacionados às anexações, acoplamento e assim por diante, tais como, "ligado" e "interligado," se referem a uma relação em que as estruturas são presas ou unidas umas às outras ou diretamente ou indiretamente através das estruturas intermédias, assim como, ambas as relações ou anexações rígidas ou móveis, a não ser que expressamente descritos de outra forma. O termo "operacionalmente conectado" é uma tal anexação, acoplamento ou ligação que permite as estruturas pertinentes funcionarem como pretendido devido àquela relação. Quando apenas uma única máquina é ilustrada, o termo "máquina" também será empregado para incluir qualquer coleção de máquinas que individualmente ou conjuntamente executa um conjunto (ou múltiplos conjuntos) de instruções para realizar qualquer uma ou mais das metodologias discutidas aqui. Nas reivindicações, cláusulas de meios mais função, se empregadas, são destinados a revestir as estruturas descrita, sugeridas, ou tornadas óbvias pela descrição escrita ou desenhos para realizar a função relacionado, incluindo não apenas os equivalentes estruturais, mas também as estruturas equivalentes.

Exemplos Exemplo 1: Materiais e Métodos

[053]Preparação de leite fermentado com L. paracasei CBA L74: • Substrato: 9 % de leite em pó desnatado reconstituído, dextrose adicionada a 0,25 % • Substrato com tratamento térmico: UHT - 135 °C durante 3 segundo ou Fo equivalente • Co-Inóculo: 5 x 106 para Lactobacillus paracasei CBA-L74 5 x 104 para Streptococcus thermophilus (como iniciador da fermentação) • Temperatura da fermentação: 37 °C • Tempo de fermentação: 15 h horas • pH durante a fermentação: nenhum ajuste • No término da fermentação o pH ajustado para 6,5 com solução de NaOH • Secagem por spray com temperatura de entrada de 190 °C e temperatura de saída de 90 °C. • Análise: Contagem de células no fermentado para determinar Streptococcus thermophilus e Lactobacillus paracasei CBA L74

[054]Galvanização: Ágar seletivo para Lactobacilli (LBS) foi empregado para a detecção de Lactobacillus paracasei CBA L74. Ágar para L-M17 foi empregado para as contagens de Streptococcus thermophilus. Ambos foram incubados a 37 °C anaerobicamente. Ágar padrão de contagem (PCA) foi empregado para a detecção de contaminantes e incubado a 30 °C aerobicamente.

[055]Fermentação: co-inóculo de S. thermophilus 1773 e L. paracasei CBA L74 foram adicionados como novas culturas. A fermentação foi realizada durante 15 horas, em uma concentração de 108 cfu/ ml de L. paracasei CBA L74. O pH inicial foi de 6,6. No término da fermentação o pH foi de 5,1. O pH foi ajustado para 6,5 adicionando-se 2,5 N de NaOH. A concentração inicial de L. paracesei CBA L74 foi de 5 x 106 cfu/ ml; a concentração final foi mais do que 108 cfu/ ml. A concentração inicial de Streptococcus thermophilus foi de 5 x 104 cfu/ ml; a concentração final foi de 1 x 108 cfu/ ml. A contagem inicial bacteriana total no PCA foi de 0 no leite antes da inoculação e no T0 e muitas poucas colônias para contar (TFTC) após o período de fermentação de 15 horas, foi de 5 x 104 cfu/ ml; a concentração final foi de 1 x 108 cfu/ ml.

[056]Secagem: O fermentado foi seco em uma temperatura de entrada de 190 °C e uma temperatura de saída de 90 °C. O teor de umidade do pó após secagem por spray foi de 4,87 %.

[057]Preparação de arroz fermentado com L. paracasei CBA L74: Preparamos uma solução de um litro de 15 % de peso/ volume de arroz combinando-se 150 g de arroz e 900 ml de água. A mistura foi preparada em temperatura ambiente e misturada por meio de agitação durante vários minutos de 1000 a 1300 rpm. A mistura de arroz foi tratada por meio de tindalização aquecendo- se a mistura dentro do instrumento a 70 °C, penúria a 70 °C durante 20 a 30 minutos, resfriamento de 30 a 37 °C, penúria de 30 a 37 °C por 20 a 30 minutos, aquecimento a 70 °C, penúria a 70 °C por 20 a 30 minutos, resfriamento na temperatura da fermentação (37 °C) ao mesmo tempo que agitando de 150 a 600 rpm.

[058]A L.paracasei CBA L74 foi adicionada de uma amostra secada por congelamento em uma concentração final de 1x106 cfu/ ml. A amostra secada por congelamento foi ressuspensa em água e incubada brevemente a 37 °C para ativar as bactérias. Após a inoculação, a mistura foi homogenizada por meio de agitação brevemente de 300 a 600 rpm; durante a fermentação a solução foi agitada a 150 rpm. A fermentação foi realizada a 37 °C durante 24 horas em uma pO2 de < 15 %. As alíquotas foram coletas no momento da inoculação (T0), em 16 horas (T16), 18 horas (T18), 21 horas (T21) e em 24 horas (T24). Após a fermentação, o cereal foi aquecido a 50 °C com misturação contínua. O cereal aquecido foi em seguida seco por spray em T airin de 80 °C, T airout de 210 °C. O teor final de umidade foi de 6 %.

[059]As amostras foram analisadas em ágar Rogosa (+ vancomicina de 12 microgr./ ml) (48 horas a 37 °C), para quantificação do L.paracasei CBA L74), no PCA para os aeróbios totais (24 horas a 37 °C), no ágar McConkay para os coliformes e ágar RCM para Clostridia.

[060]Os resultados desta fermentação foram como segue:

[061]inóculo (L.paracasei CBA-174): 1 x 106 (+/ - % log) cfu/ ml (no instrumento) de concentração de L.paracasei CBA L74 após 24 horas de fermentação: 1 x 108 (+/ - % log) cfu/ ml

[062]Contaminantes no PCA antes do inóculo: < 104 cfu/ ml

[063]Contaminantes no McConkay antes do inóculo: < 104 cfu/ ml

[064]Contaminantes no RCM antes do inóculo: < 10 cfu/ ml

[065]Contaminantes no PCA após o inóculo: < 104 cfu/ ml

[066]Contaminantes no PCA após 24 horas de fermentação: < 104 cfu/ ml

[067]pH antes da adição do inóculo: 6 (+/ - 0,20)

[068]pH de 16 a 18 horas: 3,70 (+/ - 0,20)

[069]pH de 24 horas: 3,60 (+/ - 0,20).

Exemplo 2: Efeito da administração do maternal do arroz fermentado com L. paracasei CBA L74 na sobrevivência de descendência infectada com C. sakazakii

[070]O arroz fermentado com L. paracasei CBA L74 foi preparado como descrito no Exemplo 1. Péletes padrões com alimento do camundongo (Mucedola, SLR, 4RF21 GLP Certificate) foram misturados ou com arroz fermentado com L paracasei CBA L74 ou arroz não fermentado, de modo que o arroz constituiu 10 % da dieta diária total dos camundongos. Esta quantidade foi projetada para simular a quantidade por dia de L paracasei CBA L74 que uma criança deveria receber se o arroz fermentado fosse administrado diretamente à criança. Os camundongos CD1 grávidas receberam péletes com alimento contendo ou arroz fermentado com L. paracasei CBA L74 ou arroz não fermentado começando no 14° dia de gravidez até a liberação no 21° dia de gravidez e durante a lactação.

[071]A infecção bacteriana dos filhotes com C. sakazakii foi realizada como segue. C. sakazakii cepa N13 foi cultivada em caldo M17 até OD600 « 0,6 e ressuspensa em tampão de carbonato (5 % em água) em uma concentração de 1010 CFU/ 100 μl. As diluições em série foram semeadas no ágar LB para verificar a concentração de inóculo.

[072]Os filhotes foram administrados em doses com 100 μl de solução bacteriana (isto é,1010 CFU) administrada através de sonda oral no dia 3 pós-natal. Os filhotes foram avaliados diariamente pela sobrevivência e os resultados apresentados como curva de sobrevivência Kaplan-Meier. Os resultados desta experiência são mostrados na Figura 1 e na Figura 2. Como mostrado na Figura 2, uma porcentagem mais elevada dos filhotes das mães que receberam arroz fermentado com L. paracasei CBA L74 durante gravidez e lactação ("E (RF)) (barras sólidas) sobreviveram à infeção por C. sakazakii quando comparados àqueles filhotes cujas mães receberam arroz não fermentado ("D(RNF)) (barras brancas).

[073]Exemplo 3: Efeito da administração do maternal de leite fermentado com L. paracasei CBA L74 na sobrevivência da descendência infectada com S. typhimurium FB62

[074]O leite fermentado com L. paracasei CBA L74 foi preparado como descrito no Exemplo 1. Péletes padrões com alimento do camundongo (Mucedola, SLR, 4RF21 GLP Certificate) foram misturados com leite não fermentado ou leite fermentado com L. paracasei CBA L74 de modo que o leite constituiu 5 % da dieta diária total dos camundongos. Esta quantidade foi projetada para simular a quantidade por dia de L. paracasei CBA L74 que uma criança deveria receber se o leite fermentado fosse administrado diretamente à criança. Os camundongos CD1 grávidas receberam péletes com alimento contendo ou leite não fermentado ou leite fermentado com L. paracasei CBA L74 começando no 14° dia de gravidez até a liberação no 21°t dia de gravidez e durante a lactação.

[075]A infecção bacteriana dos filhotes com S. typhimurium FB62 foi realizada como segue. S. typhimurium FB62 foi cultivada em LB até OD600 « 0,6 e ressuspensa em tampão de carbonato (5 % em água) em uma concentração de 108 CFU/ 100 μl. As diluições em série foram semeadas no ágar LB para verificar a concentração de inóculo.

[076]Os filhotes foram administrados em doses com 100 μl de solução bacteriana administrada através de sonda oral no dia 15 pós-natal. Os filhotes foram avaliados diariamente pela sobrevivência e os resultados apresentados como curva de sobrevivência Kaplan-Meier. Os resultados desta experiência são mostrados na Figura 3. Como mostrado na Figura 3, uma porcentagem mais elevada dos filhotes das mães que receberam leite fermentado com L. paracasei CBA L74 durante gravidez e lactação ("C (LF)") sobreviveram à infecção por S. typhimurium FB62 quando comparada àqueles filhotes cujas mães receberam leite não fermentado ("B(LNF)").

Claims (12)

1. Uso da bactéria probiótica, Lactobacillus paracasei CBA L74, Número de Acesso de Depósito Internacional LMG P-24778, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a preparação de um produto alimentício para tratamento de uma infecção microbiana na criança de uma mãe grávida ou lactante, em que o produto alimentício é formulado para ser administrado à mãe em uma quantidade de 0,01 a 1.000 mg por kg com base no peso da mãe.

2. Uso da bactéria probiótica, Lactobacillus paracasei CBA L74, Número de Acesso de Depósito Internacional LMG P-24778, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a preparação de um produto alimentício para prevenir ou reduzir a gravidade de uma infecção microbiana na criança de uma mãe grávida ou lactante, em que o produto alimentício é formulado para ser administrado à mãe em uma quantidade de 0,01 a 1.000 mg por kg com base no peso da mãe.

3. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o produto alimentício é formulado para ser administrado pré-natalmente.

4. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o produto alimentício é formulado para ser administrado pós-natalmente.

5. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o produto alimentício é formulado para ser administrado pré-natalmente e pós-natalmente.

6. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que a bactéria probiótica é não replicante.

7. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda identificar uma criança em necessidade de tratamento.

8. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o micro-organismo é Salmonella typhimurium, Cronobacter sakazakii, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis ou um rotavírus.

9. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o micro-organismo é Salmonella typhimurium FB62.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o micro-organismo é Cronobacter sakazakii.

11. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o produto alimentício é um produto lácteo ou um produto de cereal.

12. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o produto alimentício é formulado para ser administrado até que um sintoma da infecção melhore.