CN102164595A - 抗癌治疗中的免疫系统营养支持 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于预防在抗癌治疗中免疫功能损伤的方法和免疫营养组合物，由此获得更好的治疗效果。更具体的，本发明涉及可短暂提高或增强受试者中免疫细胞的免疫能力和肿瘤细胞的免疫原性的方法和组合物，所述受试者经历抗癌疗法引起的凋亡和提高的肿瘤细胞免疫原性，从而维持免疫细胞的先天和适应性免疫功能和正常生理机能，进而导致(i)对抗癌疗法的更好耐受和提高的效果；(ii)短暂提高或增强免疫细胞的免疫能力和肿瘤细胞的免疫原性；和(iii)优化抗癌疗法的效果和提高由抗癌疗法弱化的免疫细胞的免疫能力。

Description

抗癌治疗中的免疫系统营养支持

发明的技术领域

本发明涉及在抗癌疗法中支持免疫系统的方法和免疫营养组合物。

发明背景

凋亡是在多细胞生物中的一种程序性细胞死亡机制，通过消除不需要的或不正常工作的细胞促进细胞内稳态。凋亡机制异常可导致肿瘤发生，例如肿瘤细胞逃避凋亡信号和对抗癌疗法例如放射疗法和化学疗法的抵抗。

肿瘤细胞通过免疫选择(非免疫原性肿瘤细胞变体的选择或在小鼠模型中又被称为免疫编辑)或免疫破坏(对免疫反应的主动抑制)逃避先天和适应性免疫反应(免疫监视)。Zitvogel，L.，J.Clin.Invest.，118：1991-2001，2008；Koebel，C.M.，Nature，450：903-907，2007；Zitvogel，L.等人，Nat.Rev.Immunol.，6：715-727，2006。然而，肿瘤细胞可通过其他机制逃避免疫控制，所述机制涉及可干扰抗肿瘤免疫反应的肿瘤来源的因子。

慢性和隐性(smoldering)炎症增加瘤形成的风险。据预测，全世界超过15％的恶性肿瘤中涉及传染原。Balkwill，F.等人，Cancer Cell，7：211-217，2005。发炎的组织环境可促进癌细胞的产生，免疫抑制可能是对抗“免疫监视”的必要成分，免疫监视保护宿主对抗肿瘤产生(Koebel，C.M.等人，见上)。此外，一旦产生了肿瘤，其可维持炎症状态并募集促炎的和免疫抑制的骨髓来源细胞例如单核细胞。被称为“骨髓抑制细胞(MSC)”的从癌症患者的骨髓和骨髓细胞的其他免疫区室积聚的细胞伴随着对T细胞活化的抑制(Galina，G.等人，J.Clin.Invest.， 116：2777-2790，2006)。

如上所述，抗肿瘤防御，即免疫系统控制转化的肿瘤细胞的存在和过度生长的能力通常受到了损害。此外，由于抗癌疗法的毒性使其经受进一步的功能损害。

抗癌疗法例如放射疗法和化学疗法的成功不仅依赖于其自身对肿瘤细胞的细胞毒性作用，还依赖于在治疗同时的免疫能力。在抗癌治疗中免疫功能必要的健全性包括先天和适应性免疫反应二者都与抗癌药物或放射性治疗相配合。Apetoh，L.等人，Nature Med.，13：1050-1059，2007。

最近的研究揭示经受化学或放射疗法诱导凋亡的肿瘤细胞由于短暂的免疫原活性提高能够诱导强烈的免疫反应。通过诱导免疫原决定簇，肿瘤细胞可在其细胞表面短暂的表达“危险信号”，所述信号可促进树突细胞(DC)对其的吞噬作用，诱导DC成熟和刺激免疫反应。在垂死的肿瘤细胞上诱导的免疫原决定簇的示例包括但不限于，热休克蛋白(HSP70和HSP90)，自然杀伤细胞受体的配体(例如NKG2D)，高迁移率族蛋白B1(highmobility group box 1 protein，HMGB1)，所有这些均为活化免疫系统的“危险信号”。例如，HMGB1可通过与TL4R(TLR-4)的反应激活免疫细胞。然而，还有其他不能增强免疫反应的危险信号。例如，在抗癌治疗中在细胞死亡诱导下在肿瘤细胞表面表达的钙网织蛋白可以促进DC的吞噬作用。然而，通过钙网织蛋白的DC信号传导不足够激活抗肿瘤免疫反应。还需要由Toll样受体(TLR)的配体触发的另外的信号转导途径。Gardai，S.J.等人，Cell，123：321-334，2005。

Toll样受体(TLR)在免疫系统的调节中发挥关键的作用。它们能够识别微生物并直接起始特异的信号转导途径使宿主防御处于戒备状态。TLR配体包含非自我细菌基序和内源“危险信号”二者。内源危险信号的示例为高迁移率族蛋白B1(HMGB1)蛋白质，当与TLR4反应后，其能够激活DC并产生免疫反应对抗垂死的肿瘤细胞，并对抗癌治疗即化学和放射疗法(Apetoh，L.等人，Nature Med.，13：1050-1059，2007)的效力进行补充。因为HMGB1是从辐射后几小时的经辐射的肿瘤细胞中释放的，其似乎是在 垂死的肿瘤细胞的免疫原性中起作用的主要“危险信号”之一。

具有诱导细胞活化潜力的TLR4的其他配体为透明质酸(细胞外基质)，热休克蛋白(HSP)和纤维连接蛋白。HSP70和HSP90是应激的垂死细胞的主要免疫原性决定簇(Tesniere，A.等人，Cell Death & Differentiation，15：3-12，2008)。

从凋亡/坏死细胞中释放的其他危险信号例如尿酸，RNA，DNA，钾(K)，核苷酸能够激活先天免疫反应和之后的适应性免疫反应。

DNA损伤导致细胞上调在NK细胞上表达的NKG2D受体配体的表达并活化CD8 T细胞，导致细胞毒性反应(Gasser，S.等人，Cancer Res.，66：3959-3962，2006)。肿瘤细胞倾向于下调NKG2D配体从而逃避免疫检测。然而，在抗癌治疗诱导的基因毒性应激下，癌细胞上调NKG2D配体从而变成细胞毒性NK或CD8淋巴细胞的“可见”靶。

应激的癌症细胞表达或释放的其他危险信号可结合一类被称为NOD/NACHT-LRH(NLR)或炎性体(inflammasome)的胞质蛋白从而激活半胱天冬酶-1(caspase-1)，从而在促炎细胞因子例如IL-1β和IL-18的释放中起作用(Martinon，F.，Trends in Immunol.，26(8)：447-454，2005)。

此外，有报导危险信号例如HMGB1和DNA(CpG)的组合可通过TLR4和TLR9诱导干扰素-α信号转导的产生(Ivanov，S.等人，Blood，110：1970-1981，2007)。

与肿瘤的长期沉默生长相反，作为抗癌治疗的结果，许多上述代表“危险信号”的分子可从肿瘤细胞或组织中释放。抗癌治疗诱导的肿瘤细胞死亡导致这些肿瘤细胞的免疫原性短暂增强。然而，如果免疫细胞功能同时由于抗癌治疗引起的毒性而受损，则这些肿瘤细胞免疫原性的短暂增强对宿主是不利的。因为抗癌疗法也经常引起骨髓抑制和/或胸腺溶解，从而引起免疫系统在治疗中错过垂死肿瘤细胞的抗原性和免疫刺激能力的短暂增强。此外，抗癌疗法靶向肿瘤细胞，活跃分裂的淋巴细胞和先天免疫细胞，所有这些都是发动免疫反应所需要的。为了克服这个两难的问题，已设想用免疫疗法克服由抗癌疗法诱导的短暂免疫抑制。为此，一直将抗癌疗法 和免疫疗法视为拮抗性的。van der Most，R.G.等人，Cell DeathDifferentiation，15：13-20，2008。不幸的是，单独的免疫疗法不足以保护非肿瘤的分裂细胞免受抗癌疗法的细胞毒性作用。抗癌治疗对免疫系统的不同细胞亚群引起多种毒性，例如凋亡，自噬和活化能力的损害。因为免疫细胞经受抗癌疗法的副作用，从此免疫原性提高的时机获利的机会大大减少。在经历癌症疗法引起的凋亡的副作用过程中，宿主的抗原呈递细胞功能，先天细胞杀伤和抗原特异性肿瘤细胞杀伤也受到影响。在癌症疗法引起的细胞死亡中免疫原性的短暂增强期为免疫系统恢复对转化细胞的控制和控制仍然存活的肿瘤细胞提供了机会。为利用此增强的抗原性或免疫原性表达的时机，本发明提供了方法和免疫营养组合物，当对经历应激诱导的凋亡癌症疗法患者应用和施用时，可进一步增强他们的先天免疫反应和抗肿瘤免疫反应。因此，通过在化学和放射疗法治疗周期中对免疫系统(经免疫营养)进行营养调节，可纠正由这些治疗引起的急性免疫毒性，而这样的治疗看似矛盾的(paradoxically)同时对应肿瘤细胞免疫原性增强的时刻。

经历细胞应激、表达“危险信号”和由抗癌治疗引起的死亡的肿瘤细胞可变成先天反应对抗的更“可见的”靶，因此更容易被先天效应细胞例如自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、gamma-delta(γδ)T细胞和杀伤性树突细胞(KDC)攻击。Pillarisetty，V.G.等人，J.Immunol.，174：2612-2618，2005。此外，活化的DC可刺激肿瘤抗原特异性溶细胞性T细胞反应。先天免疫反应的活化可通过施用外源试剂或佐剂，共刺激性蛋白质的配体，细胞因子或药物增强。例如，DC经内体定位的TLR(TLR3，TLR9)的核酸识别(例如双链RNA，核苷酸)可帮助DC活化和之后的抗原特异性抗肿瘤免疫反应。Blattman，J.N.等人，Science，305：200-205，2004。另一个示例，寡核苷酸CpG可增强DC获得NK样活性的能力，增强DC活化态和因此避免肿瘤和肿瘤调节的免疫细胞(例如以另外方式活化的巨噬细胞)生成的“致耐受性”信号。

还有许多其他显示增强先天免疫功能活性的营养素(免疫营养素)。 例如，一些非病原性益生细菌具有活化巨噬细胞，树突细胞和自然杀伤(NK)细胞的能力，导致肿瘤细胞的抗原呈递和先天破坏的改善。如上所述，核苷酸作为替代的危险信号可活化免疫系统。一些研究已经证实了DNA，RNA和CpG对免疫反应性的刺激。

精氨酸和瓜氨酸，以及支链氨基酸可通过mTOR信号转导刺激蛋白质合成，从而避免由抗癌治疗应激引起的免疫细胞自噬过程。谷氨酰胺可提高NK，巨噬细胞和杀伤性树突细胞的先天溶细胞活性，在CD8⁺T细胞对抗肿瘤细胞的抗原特异性溶细胞活性中起作用。一些细菌或酵母分子模式可刺激具有对抗肿瘤细胞的细胞毒性的先天淋巴细胞群例如NK，NKT和γδT细胞的活性，并促进抗原呈递细胞的活化增强从而将肿瘤抗原加工和呈递给CD4⁺和CD8⁺T细胞。

已经开发了一些添加一种或多种这些具有免疫调节性能的免疫营养素的营养配方。

美国专利号6,210,700大体上描述了改进的免疫调节疗法，用于增强受抑制的宿主防御机制和改善同种异体移植的存活率，其包含使用ω-9不饱和脂肪酸改变与器官移植相关的免疫反应。其任选的与免疫调节饮食共同施用，所述饮食包含精氨酸及其盐，或精氨酸的代谢前体，同时进行免疫抑制治疗，所述治疗包含施用环孢菌素或其他免疫抑制剂，任选的包含或不含供体特异性输血。ω-9不饱和脂肪酸的特别优选来源为芥花籽(canola)油。

美国专利号5,330,972大体上描述了在感染人免疫缺陷病毒的人中的CD4细胞凋亡可通过对感染患者肠内喂食包含大豆蛋白水解产物的营养产品而阻止，所述水解产物具有约14至17范围的水解度和通过尺寸排阻层析测定的分子量分布(partition)，其中30％-60％的颗粒具有1500-5000道尔顿范围的分子量。营养产品还包含完整蛋白质和膳食纤维来源。营养产品具有约1.3∶1至2.5∶1的以重量计的n-6与n-3脂肪酸的比率。

美国专利号5,576,351涉及通过对免疫反应受损或具有免疫反应受损风险的人施用精氨酸或鸟氨酸，或精氨酸或鸟氨酸的功能性类似物，或其 混合物，以治疗损伤的人免疫反应或降低人免疫反应退化的严重度。通过对患者肠内施用添加精氨酸或鸟氨酸，或精氨酸或鸟氨酸的功能性类似物的组合物，或胃肠外施用添加精氨酸或鸟氨酸，或精氨酸或鸟氨酸的功能性类似物的氨基酸液。

美国专利申请公开号2008/0231525描述了胃肠外递送至垂危患者或用于改善线粒体功能的营养组合物。营养组合物包括谷氨酰胺前体分子和抗氧化剂例如硒，维生素C，锌，维生素E和β-胡萝卜素的组合。

美国专利申请公开号2005/0090451大体上描述了通过施用包括治疗有效量的谷氨酰胺或可药用盐的组合物保护非粘膜组织对抗放射疗法损害的方法。

美国专利申请公开号2005/0238660 A1涉及免疫刺激核酸和其他治疗制剂例如水包油乳剂组合的方法和组合物。治疗组合以不同剂量或在不同时间对非人受试者施用以治疗紊乱例如疾病和癌症。

然而，如此处讨论的，引用的现有技术都没有描述或建议在垂死的肿瘤细胞处于抗原或免疫原表达增强的时机的同时对经受癌症疗法引起的凋亡和/或坏死的癌症患者添加免疫营养素。毕竟免疫营养的目的应该是在抗癌疗法引起细胞死亡或损伤时抵消肿瘤引起的免疫耐受，由此将宿主-肿瘤平衡朝强化宿主防御方向倾斜。同时，当提供给癌症患者时，免疫营养可增强抗原呈递细胞的功能，增强转化细胞的先天细胞破坏和抗原特异性肿瘤细胞破坏。最后，如此处提出的，免疫营养的主要靶标应该是被抗癌治疗短暂弱化的非肿瘤细胞。

基于上述，需要下述方法和免疫营养组合物，其可用于预防癌症患者在抗癌治疗中的免疫功能损伤以获得更好的治疗效果。也需要下述方法和免疫营养组合物，当与抗癌疗法组合应用和施用时，可对癌症患者产生较少的副作用。更重要的，长期以来一直需要下述方法和免疫营养组合物，即其可在垂死的肿瘤细胞具有免疫原性的时机应用，与规定的抗癌疗法协同作用并进一步增强宿主的先天和适应性免疫过程以增强肿瘤细胞杀伤。还迫切需要下述方法和免疫营养组合物，即其可维持免疫细胞和其他造血 细胞(即骨髓)的正常生理机能并挽救其在抗癌疗法中被损伤的免疫能力。

在随后的详细描述中，以上及其他各种需要的方法和组合物及实现方式将是显而易见的。

发明概述

本发明提供了方法和免疫营养组合物，用于预防经历抗癌疗法的癌症患者的免疫功能损伤，以获得更好的治疗效果和最小化不希望的治疗副作用，因此使患者能够维持治疗(顺应治疗)并具有改善的生活质量。

为此，本发明提供了短暂提高或增强受试者的免疫细胞免疫能力的方法，所述受试者经历抗癌疗法引起的凋亡和肿瘤细胞增强的免疫原性，所述方法包括将免疫细胞暴露于免疫营养组合物，所述组合物包括至少一种能够维持免疫细胞的先天和适应性免疫功能和正常生理机能的免疫增强剂。免疫功能的维持导致提高的抗癌疗法效果和免疫细胞免疫能力的短暂提高或增强。

在一个实施方案中，本发明还提供了短暂提高或增强受试者的肿瘤细胞免疫原性的方法，所述受试者经历抗癌疗法引起的凋亡，所述方法包括将受试者的肿瘤细胞暴露于免疫营养组合物，所述组合物包含能够在肿瘤细胞中诱导至少一种免疫原决定簇的至少一种免疫增强剂。至少一种免疫原决定簇的诱导导致肿瘤细胞免疫原性的短暂提高或增强。

在另一个实施方案中，本发明还提供了短暂提高或增强受试者的免疫细胞的免疫能力和肿瘤细胞的免疫原性的方法，所述受试者经历抗癌疗法引起的凋亡，所述方法包括将受试者的免疫细胞和肿瘤细胞暴露于免疫营养组合物，所述组合物包含至少一种免疫增强剂，所述增强剂能够(1)维持免疫细胞的先天和适应性免疫功能和正常生理机能和(2)在肿瘤细胞中诱导至少一种免疫原决定簇。免疫细胞的先天和适应性免疫功能和正常生理机能的维持导致更好的耐受性和提高的抗癌疗法效果，以及免疫细胞免疫能力的短暂提高或增强。类似的，至少一种免疫原决定簇的诱导导致肿瘤细胞免疫原性的短暂提高或增强。

在一个实施方案中，根据本发明，免疫增强剂能够(1)优化被抗癌疗法弱化的免疫细胞作用和增强其免疫能力和(2)诱导免疫细胞和肿瘤细胞二者的至少一种免疫原决定簇。

在本发明的另一个实施方案中，免疫营养组合物可在抗癌疗法的一个周期前10-3天内至周期后10-7天内对患者施用。

在本发明的另一个实施方案中，免疫营养组合物可在抗癌疗法的一个周期前10-3天内至手术移除全部或部分肿瘤后10-7天内对患者施用。

在本发明的另一个实施方案中，免疫营养组合物可在抗癌疗法的一个周期前10-3天内至手术移除全部或部分肿瘤前10天至手术前对患者施用。

在另一个实施方案中，至少一种免疫增强剂可为益生菌，益生菌生物质，非复制生物，蛋白质来源，脂肪酸，氨基酸，核酸，钾，尿酸，单链寡核苷酸，病原体/微生物相关分子模式(PAMP/MAMP)，活性己糖相关化合物，类胡罗卜素，维生素D(包括维生素D前体，活性形式，维生素D激动剂或合成类似物，及其各种状态的羟基化(25-OH D或1，25-OH D))，维生素D受体，支链氨基酸，茶氨酸，维生素E，必需脂肪酸例如EPA和DHA或EPA/DHA，和乳铁蛋白，包括铁富集的任意状态(例如低饱和(apo-)乳铁蛋白，完全(holo-)乳铁蛋白和铁饱和乳铁蛋白)。

在另一个实施方案中，益生菌可为微生物例如乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)，长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)，副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)，约氏乳杆菌(Lactobacillusjohnsonii)，卢氏乳杆菌(Lactobacillus reuterii)或其混合物。蛋白质来源可为乳清，酪蛋白或大豆蛋白。乳清蛋白来源来自天然乳清，完整的未水解乳清，乳清蛋白浓缩物，乳清蛋白分离物或乳清蛋白水解物。酪蛋白和大豆蛋白可为酪蛋白和大豆蛋白水解物形式。

在本发明的另一个实施方案中，免疫增强剂可为至少一种氨基酸，例如支链氨基酸，例如亮氨酸，异亮氨酸和缬氨酸；谷氨酰胺，精氨酸，瓜氨酸，半胱氨酸和苏氨酸。免疫增强剂可为核糖核酸(RNA)，脱氧核糖核酸(DNA)或至少一种寡脱氧核苷酸，例如CpG寡脱氧核苷酸。

在本发明的一个实施方案中，至少一种免疫原决定簇选自热休克蛋白70(hsp70)，热休克蛋白90(hsp90)，自然杀伤细胞受体配体(例如，NKG2D配体)，钙网织蛋白和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)。

本发明的一个优势是在由于治疗作用导致的凋亡肿瘤细胞的免疫原性短暂增强时维持抗原呈递细胞，其他先天免疫细胞，NK，NKT，γδT和KDC的细胞活力和活化能力。

在本发明的一个具体实施方案中，在受试者肿瘤细胞免疫原性增强时，在抗癌疗法一个周期前10-3天内至周期后10-7天内短暂维持抗原呈递细胞和先天细胞毒性细胞的免疫能力。在另一个实施方案中，抗原呈递细胞和细胞毒性细胞可为巨噬细胞，树突细胞，杀伤性树突细胞或自然杀伤细胞(例如，NK，NKT)和细胞毒性CD8⁺T细胞(CTL)。

本发明还提供了免疫营养组合物，其包含至少一种在上下文中描述的方法中使用的免疫增强剂。

设想此处描述的任意方法或组合物可在此处描述的任意其他方法或组合物中实施。此外，明确设想实施方案可与其他实施方案组合，其组合达到可相容的程度。

本发明的其他特征和优势在下面的详细描述中显而易见。然而应当理解，详细描述和特定的实施例尽管指示了本发明的实施方案，但仅以说明的方式给出，而不是限制性的。通过详细描述，在本发明范围内的各种改变和修饰对本领域技术人员将是显而易见的。

附图简述

以下附图构成本发明的一部分，包含附图以进一步说明本发明的特定方面。通过参考此处展示的附图和特定实施方案的详细描述可以更好的理解本发明。

图1显示了与带瘤动物相比无肿瘤动物更高的LPS反应，通过增生的脾和B细胞表示。

优选实施方案详述

在描述本方法和组合物之前，应当理解本发明不局限于描述的特定方法、组合物和实验条件，因为这些方法和化合物可以变化。应当理解此处使用的术语仅为了描述特定实施方案，不是限制性的，因为本发明的范围仅受限于随附的权利要求书。此处提及的所有出版物在此以其整体引入作为参考以公开和描述与引用的出版物相关联的方法和/或材料。

在阐述本发明之前，定义以下术语以提供对本发明更好的理解。

如此处使用的，术语“癌症”和“肿瘤”可在此处互换使用，是指或描述哺乳动物中的生理症状，其中一群细胞的特征为上调的细胞生长。癌症的示例包括但不限于癌、淋巴癌、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。这些癌症的更具体示例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾腺癌、肾癌、肝癌(liver cancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)和各种类型的头和颈癌。

如此处使用的，动物包括但不限于哺乳动物，所述哺乳动物包括但不限于啮齿类、水生哺乳动物、家畜例如狗和猫、农场动物例如绵羊、猪、奶牛和马，和人。其中使用术语动物或哺乳动物或其复数，设想也应用于能够展示或根据段落上下文旨在展示效果的任意动物。

如此处使用的，“骨髓麻痹”包括骨髓活性的抑制或中止，包括但不限于骨髓在免疫功能和造血功能中的作用。

如此处使用的，“完全营养”优选的指含有对其施用的动物足够作为单独营养来源的足够种类和水平的大量营养素(蛋白质、脂肪和碳水化合物)和微量营养素的营养产品。

如此处使用的，“不完全营养”优选的指不含有对其施用的动物足够作为单独营养来源的足够水平的大量营养素(蛋白质、脂肪和碳水化合物)和微量营养素的营养产品。

如此处使用的，“长期施用”优选的为超过6周的连续施用。

如此处使用的，“微生物”包括细菌、酵母和/或真菌，具有微生物的细胞生长培养基或培养微生物的细胞生长培养基。

如此处使用的，“益生素”优选的为在肠内选择性促进有益细菌生长或抑制病原菌生长的食品。它们不在消化其的人的胃和/或肠上部中失活或在GI道中被吸收，而是通过胃肠微生物群和/或益生菌发酵。在例如GlennR.Gibson和Marcel B.Roberfroid，Dietary Modulation of the HumanColonic Microbiota：Introducing the Concept of Prebiotics，J.Nutr.1995 125：1401-1412中定义了益生素。

如此处使用的，益生菌微生物(下文的“益生菌”)优选的为微生物(存活的，包括半存活的或弱化的，和/或非复制的)，代谢物，微生物细胞制剂或微生物细胞成分，当以足够量施用时能对宿主赋予健康益处，更具体的，通过改善其肠内微生物平衡有益的影响宿主，导致对宿主的健康或幸福的影响。(Salminen S，Ouwehand A.Benno Y.等人“Probiotics：how should they be defined”Trends Food Sci.Technol.1999：10107-10)。一般的认为这些微生物抑制或影响肠道内病原菌的生长和/或代谢。益生菌还可活化宿主的免疫功能。因此，有多种不同的方法在食物产品中包括益生菌。

如此处使用的，“短期施用”优选的指少于6周的连续施用。

如此处使用的，“管饲”优选的指不经口服施用而对动物的胃肠系统施用的完全或不完全营养产品，其包括但不限于鼻胃管、口胃管、胃管、空肠造口管(J-管)、经皮内镜胃造瘘(PEG)、口(port)，例如提供通往胃的入口的胸壁口，空肠和其他合适入口的口。

此申请中包含的所有剂量范围旨在包括所述范围内包含的所有数字，整数或分数。

如此处使用的，术语“受试者”指任意动物(例如，哺乳动物)，包括但不限于人、非人灵长类、啮齿类等等，其作为特定治疗的接受者。一般的，当涉及人受试者时，术语“受试者”和“患者”在此处可互换使用。 “受试者”还可指经历抗癌疗法引起的凋亡的癌症患者，或者正在经历抗癌治疗，或在抗癌治疗之后。

如此处使用的，术语“治疗(treatment)”“治疗(treat)”和“缓解”优选预防或预防性治疗(预防和/或降低目标病理情况或紊乱)和治愈、治疗或疾病修饰治疗，包括治愈、减慢、减轻症状和/或停止所诊断的病理情况或紊乱的进程的治疗措施；和治疗处于患病风险下和疑为患病的患者，以及患病或已诊断为患有疾病或病症的患者。术语“治疗(treatment)”“治疗(treat)”和“缓解”还指维持和/或促进未患病但可能对不健康状态，例如氮失衡或肌肉萎缩，的发展敏感的个体的健康。术语“治疗(treatment)”“治疗(treat)”和“缓解”还旨在包括提高或增强一种或多种初级预防或治疗措施。

权利要求中使用术语“或”用于表示“和/或”，除非明确指出仅指可选方案或可选方案是互斥的，尽管此公开支持仅指可选方案和“和/或”。

在此申请中，使用术语“约”表示数值包括测定数值所使用的仪器或方法的标准误。

特别设想，本发明的实施方案包括在实施例部分描述的任意实施方案。

在权利要求或说明书中，术语“一(a)”和“一(an)”当与词语“包含”联合使用时，表示一或多，除非特别指出。

免疫营养剂或免疫营养素为下述饮食成分，其对患者免疫系统提供特定作用或赋予另外的益处，所述患者经历饥饿、疾病或手术和抗癌疗法引起的凋亡的副作用。发现这些已知对患者肠内或胃肠外施用后刺激免疫功能的试剂在手术前或癌症疗法治疗前期可能有效的改善效果，并降低手术后感染的机会和减少住院时间。具有免疫增强作用的市售肠内免疫营养方案示例包括 (Novartis Nutrition，Minneapolis)和Immune- 

(McGaw，Inc，Irvine CA)，Immunex- 

(Victus，Inc.，Miami，FL)和 

(Ross laboratories，Columbus OH)。这些方案包含关键营养素例如谷氨酰胺、ω-3脂肪酸、精氨酸和/或核糖核酸，但市售的不同制剂具有不同的组成和量。这些关键营养素的作用总结于Heys，S.D.等 人，Nutr.Hosp.19：325-332，2004的表1。可在经历了癌症手术例如胃肠癌手术和胰腺癌手术或抗癌疗法或正在经历这些手术或治疗的患者的标准营养制剂中加入免疫营养素。Braga，M.等人，Nutritional Therapy &Metabolism，24：115-119，2006；McCowen，K.C.等人，Am.J.Clin.Nutr.77：764-770，2003； 

ski，R.等人，Centr.Eur.J.Immunol.，32(3)：147-154，2007。所述免疫营养素优选的作为肠内制剂对癌症患者施用。可在手术前、围手术期和手术后或抗癌疗法治疗前、围治疗期和治疗后提供所述免疫营养素。然而，有研究显示手术前和围手术期添加免疫营养素比手术治疗后添加能更有效的改善GI癌症患者的临床效果。当在手术后提供免疫营养时，结果是矛盾的，很可能是因为在手术后头5天提供给癌症患者的底物量不足以很快达到足够的组织和血浆浓度以发挥活性。实际上，免疫营养素需要约5天的时间进入宿主组织并从而调节炎性介质和脂肪酸谱。Braga，M.等人，见上；McCowen，K.C.等人，见上。然而迄今为止，无论是在手术前、围手术期或手术后施用，有关肠内免疫营养对癌症患者的免疫调节作用的问题仍有待解决。

术语“免疫增强剂”或“免疫营养”涉及施用对经历癌症疗法或抗肿瘤疗法的患者或免疫功能损伤的患者的整个免疫系统具有“免疫增强”、“免疫加强”或“免疫提高”品质的特定营养化合物，以改变肿瘤引起的细胞毒性作用，改善临床效果和进一步维持和增强免疫宿主的先天和适应性免疫过程，从而活化响应如上示例的免疫原决定簇诱导的肿瘤细胞杀伤。免疫增强营养化合物的示例包括氨基酸例如L-精氨酸、瓜氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、ω-3脂肪酸和核苷酸。免疫增强剂的其他示例包括益生菌、益生菌生物质、非复制生物、蛋白质来源、脂肪酸、氨基酸、核酸、钾、尿酸、单链寡核苷酸、病原体/微生物相关分子模式(PAMP/MAMP)、活性己糖相关化合物、类胡罗卜素、维生素D受体、支链氨基酸、茶氨酸、维生素E、必需脂肪酸例如EPA和DHA或EPA/DHA。

免疫增强营养组合物可经胃内喂饲施用。

如此处使用的，术语“围手术期”指围绕患者手术程序的时期；这通 常包括进入病房、麻醉、手术和恢复。围手术期一般指手术的3个时期：手术前、手术中和手术后。围手术期护理的目的是在手术前、手术中和手术后为患者提供更好的条件，包括新辅助治疗。类似的，癌症疗法治疗前、围治疗期和治疗后指在癌症化学疗法或放射疗法前、中和后时期。

如此处使用的，术语“新辅助”或“新辅助治疗”指为了使赘生物/肿瘤更顺应较有攻击性的治疗而进行的治疗，例如使肿瘤集中(缩小方案)和/或缩小肿瘤，并降低在手术去除过程中癌症细胞接种的风险。

如此处使用的，术语“积极(aggressive)治疗”旨在指外科治疗，包括传统手术和放射策略手术、化学治疗、激素治疗和放射疗法治疗。

根据本发明的细胞死亡机制是通过化学疗法或放射疗法引起的细胞死亡或凋亡。由这些治疗引起的凋亡性细胞死亡是免疫原性细胞死亡，因为在死亡前所有肿瘤细胞均受到细胞应激。

抗原性或免疫原性的短暂提高适用于经历抗癌疗法引起的细胞死亡的肿瘤细胞。根据本发明，免疫营养组合物的影响和目标更优选的作用于受试者的所有免疫细胞，以在治疗应激下维持它们的免疫能力，尽管如此不能排除营养素例如谷氨酰胺可增强应激肿瘤细胞上的HSP的表达，因此甚至可进一步提高它们的免疫原性。一般来说，凋亡是一类不足以触发先天和适应性免疫反应的细胞死亡。然而有时，凋亡性细胞死亡通过表达“危险信号”传达信号，因此对免疫系统具有刺激能力。此外，在此特定时刻可能产生的免疫反应可平衡肿瘤细胞为了自身利益诱导的逃避免疫反应的致耐受性反应。

因此，在免疫疗法中使用的策略之一是避免可由非活化抗原呈递细胞(例如树突细胞)的肿瘤抗原加工和呈递触发的免疫耐受。一些研究已显示如果使用肿瘤激动剂例如CpG寡脱氧核苷酸(ODN)和其他核苷酸、RNA、DNA和其他危险信号，抗癌免疫反应可得到更好的刺激。

CpG ODN刺激表达Toll样受体9的细胞，所述受体起始免疫调节的级联反应，导致B和T淋巴细胞、自然杀伤细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突细胞的活化。CpG ODN通过加速和改进先天和适应性免疫反应的诱导改 善宿主抵抗感染的能力Klinman，D.M.等人，Expert Opin.Biol.Ther.，4(6)：937-946，2004。

此外，树突细胞(DC)可施加更原始的先天免疫细胞功能，即杀伤转化(癌症)细胞的能力。此功能可归功于一类树突细胞，其他人将其称为杀伤性树突细胞(KDC)。KDC具有杀伤肿瘤细胞的能力，通过多种机制避免“抵抗”肿瘤细胞逃避单一机制的死亡。

通过免疫营养干预活化DC群可避免在治疗中DC双功能的功能障碍，即抗原呈递和肿瘤细胞杀伤。抗癌治疗的组合方法例如化学疗法和/或放射疗法与免疫营养的组合可维持免疫能力，提供潜在的益处使治疗周期更有效，改善对可导致粘膜损伤(黏膜炎)和更高感染率的治疗免疫毒性的耐受。

自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞也参与对肿瘤细胞的先天细胞杀伤。在抗癌治疗中它们的功能性高度受损。然而为了行使这些功能，这些细胞需要维持保持活化的能力和完成细胞周期以扩增它们的细胞群。

选择的益生菌和其他微生物相关分子模式(MAMP)具有刺激此细胞群的能力，由此发挥肿瘤细胞杀伤能力。

识别靶细胞上特异性抗原的CD8⁺细胞毒性淋巴细胞(CTL)在抗原呈递以起始免疫反应的过程中被消耗，其施加细胞毒性的活性也被治疗抑制。氨基酸例如谷氨酰胺、精氨酸和瓜氨酸能够增强CTL产生的细胞毒性分子的代谢途径，由此当肿瘤抗原由于治疗引起的细胞死亡而更容易暴露时可在肿瘤细胞杀伤中起作用。

优选的，根据本发明的免疫营养组合物包含至少一种益生菌或益生菌组合。益生菌为活微生物，当以足够量施用时赋予宿主健康益处。益生菌可为市售的，或可一般通过发酵过程和任选的通过干燥产生。特定菌株通常具有特定培养基或底物偏好，这是技术人员已知的。微生物可为干燥形式，或例如对可形成孢子的微生物可为孢子形式。通过发酵制备后的微生物的干燥是技术人员已知的。见例如EP 0 818 529(Societe Des ProduitsNestle)，其中描述了粉碎干燥过程，或WO 0144440(INRA)。通常，从培 养基中浓缩细菌微生物并通过喷雾干燥、流化床干燥、冻干(冷冻干燥)或其他充分干燥的过程干燥。例如，在干燥中或干燥前微生物与载体物质例如碳水化合物，例如蔗糖、乳糖或麦芽糊精，脂或蛋白质，例如奶粉混合。然而，微生物不一定以干燥形式存在。其也可适合在发酵后直接与粉末状营养组合物混合，例如之后任选的进行干燥过程，优选的在低温下(低于70℃)进行。所述方法在WO 02065840(Societe Des Produits Nestle)中公开。

选择的益生菌可为双歧杆菌或乳杆菌菌株。优选的，其为乳双歧杆菌(德国培养物保藏中心：DSM20215)、长双歧杆菌，副干酪乳杆菌(CNCMI-2116，CNCM I-1292)，约氏乳杆菌，唾液乳杆菌(Lactobacillussalivarius)、卢氏乳杆菌或其混合物。

术语“益生菌”也包括非复制(死的)益生细菌、发酵底物和/或益生菌来源物质。在严重免疫受损患者情况下，本发明的免疫营养组合物可包含热灭活的或死的益生菌。

一般假设CD8⁺T细胞的保护性免疫反应的激活仅通过活疫苗实现。然而，将被杀伤的细菌抗原引入主要组织相容性复合物I型途径从而可被CD8⁺T细胞识别。通过接种非存活细菌刺激保护性CD8⁺T淋巴细胞。Szalay，G.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92(26)：12389-12392，1995。

乳杆菌，例如干酪乳杆菌，已经显示可在营养失调的动物中避免肠感染和刺激IgA。在不同喂食期，大肠中的IgA产生细胞和T淋巴细胞(TL)也有增加。IgA的增加可能指示益生菌抑制肿瘤发展的机制可能是通过降低炎症反应。另一方面，益生菌生物质形式的酸奶不仅包含2种细菌——嗜热链球菌(Streptoccus thermophilus)和保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)，还包含双歧杆菌，有时还包含干酪乳杆菌。酸奶可通过提高IgA、T细胞和巨噬细胞活性抑制肠癌的生长(Perdigon，G.等人，J.Dairy Sci.，78(7)：1597-1606，1995)。

添加至本发明免疫营养组合物的益生菌每日剂量在10⁷至10¹⁰CFU(菌落形成单位)范围内。

术语“活性己糖相关化合物(AHCC)”指来自几种担子菌类(Basidiomycete)蘑菇共培养菌丝的多糖、氨基酸、脂和矿物质的混合物。AHCC涉及免疫调节和保护感染。AHCC可通过调节先天和适应性免疫反应二者增强肿瘤免疫监视(Gao，Y.等人，Cancer Immunol.Immunother.，55(10)：1258-1266，2006；Ritz，B.W.等人，J.Nutr.136：2868-2873，2006)。AHCC由日本Amino Up化学有限公司商业提供。AHCC可增强巨噬细胞的抗原呈递活性和抑制肿瘤来源的免疫抑制因子，增强巨噬细胞增殖和活化，促进Th1细胞的分化；增强巨噬细胞产生IL-12，增强NK活性；促进癌细胞的凋亡。已有报导，AHCC在癌症患者中增加TNF-α、γ-干扰素、白介素-12和降低免疫抑制酸性蛋白(IAP)和肿瘤生长因子(TGF)-α。鉴于AHCC对免疫系统的这些可能作用，可在癌症辅助治疗中使用AHCC以改善化学疗法的一些不良副作用。

如此处使用的，术语“完整的蛋白质”指蛋白质优选的不经受化学或酶水解，优选的为与其天然状态基本上类似或相同的形式。根据本发明，“完整的蛋白质”可选自至少一种酪蛋白、乳清蛋白、大豆蛋白、胶原蛋白或小麦蛋白。

在本发明上下文中，术语“蛋白质来源”包括任意基于氨基酸的蛋白原(proteinogenic)物质，例如完整的或水解的膳食蛋白，以及例如添加的肽或游离氨基酸及其混合物。

蛋白质来源可包括通过酸或酶处理从动物和植物蛋白制备的高度水解的蛋白质水解物，例如酪蛋白水解物、乳清水解物、酪蛋白/乳清水解物、大豆水解物及其混合物。“高度水解的”蛋白质水解物指完整的蛋白质水解为肽片段，其中大部分肽片段具有低于1000道尔顿的分子量。更优选的，至少约75％(优选至少约95％)的肽片段具有低于约1000道尔顿的分子量。游离氨基酸和合成的短肽链可作为氮源替换或加入蛋白质水解物，只要营养组合物具有适于目的群体的氨基酸谱，这是熟悉营养制剂领域的人的技术范围内的。

在免疫营养组合物的一个优选实施方案中，根据本发明，蛋白质来源 可为动物、植物或植物蛋白质。因此，蛋白质来源可包括乳清蛋白、酪蛋白或大豆蛋白及其水解物的组合。

乳清蛋白来源可来自天然乳清、完整的未水解乳清、乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白分离物或乳清蛋白水解物。

酪蛋白可以游离形式或以盐的形式例如钠盐提供。可能以钙或钾盐提供酪蛋白。

如此处使用的，除非另外说明，术语“氨基酸”指游离形式和/或以盐形式的氨基酸，其选自至少一种必需氨基酸，例如异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸或组氨酸，条件必需氨基酸，例如酪氨酸、半胱氨酸、精氨酸或谷氨酰胺，或非必需氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、牛磺酸或肉碱。Peng Li及同事在British J.Nutr.，98(2)：237-252，2007中综述了氨基酸在免疫功能中的作用。

本发明还涉及免疫营养组合物，其进一步包含支链氨基酸，例如缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或其组合，以游离和/或盐的形式和/或完整蛋白质的形式存在。BCAA可为其游离形式，如二肽、如三肽、如多肽、如富含BCAA的蛋白质，和/或如经改造以富含BCAA含量的蛋白质形式。二肽、三肽和多肽可包括2种或多种BCAA。根据本发明的营养产品可类似的包括BCAA的前体和/或代谢物。

免疫细胞将BCAA插入蛋白质并能够氧化BCAA。免疫系统的功能是保护宿主免受病原感染性物和免受其他有害损伤的伤害。感染后，免疫系统对底物的需求显著提高；这些底物提供能量，并且是用于合成新细胞、效应分子和保护性分子的前体。研究显示BCAA在淋巴细胞合成蛋白质、RNA和DNA以及响应刺激的分裂中是绝对必需的。在小鼠实验中，膳食BCAA限制损伤免疫功能的一些方面并提高对病原体的易感性。对手术后或脓毒患者以静脉内形式提供BCAA展示了改善的免疫力，其可能得到改善的结果。因此，BCAA对淋巴细胞反应性是绝对必需的，对支持其他免疫细胞功能也是必需的。

BCAA还可促进谷氨酰胺合成和刺激Th1免疫反应，后者是一种细胞或细胞介导类型的适应性免疫反应。长时间的剧烈运动可能与免疫抑制相关，其进而影响自然杀伤细胞、淋巴因子激活的杀伤细胞和淋巴细胞。已有报导将谷氨酰胺作为巨噬细胞和淋巴细胞的重要营养物发挥免疫刺激作用。耐力型运动员运动后作为口服补充剂提供谷氨酰胺对之后的感染水平具有益影响。然而运动员的血浆谷氨酰胺浓度在应激后降低，例如在一次运动后。但是，通过BCAA补充消除了谷氨酰胺浓度降低的影响，并伴随外周血单核细胞增殖反应的提高。BCAA补充在运动后刺激IL-2和INF的产生和IL-4产生的更显著降低，显示朝向Th1免疫反应的转移。BCAA补充在维持血浆谷氨酰胺浓度恒定中也起作用。Bassit，R.A.等人，Nutrition，18(5)：376-379，2002。

除了改进代谢参数，富含BCAA的口服补充剂可改进经历肝大部分切除和化疗栓塞的患者的发病率和生活质量。然而尽管具有潜在的有益生物学性能，BCAA在对应激手术和癌症患者中的营养支持作用仍然需要明确的定义。Choudry，H.A.等人，J.Nutr.，136(1 Suppl.)：314S-8S，2006。

免疫反应需要更高的BCAA量，实际上经刺激的淋巴细胞显示了提高的BCAA摄取用于细胞扩增，包括亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸的摄取。此外，亮氨酸是mTOR信号转导途径的激活子，所述信号转导途径调节蛋白质合成和降解，还在应激或饥饿下拮抗细胞的自噬过程。当加入根据本发明的免疫营养组合物中时，BCAA的量在每天约2至30g的范围，优选每天约3g的量。

本发明的免疫营养组合物还可包含谷氨酰胺和/或精氨酸和/或瓜氨酸和/或支链氨基酸(BCAA)。

谷氨酰胺是免疫系统细胞的主要营养底物。除了作为谷氨酸的主要来源以外，Gln调节谷胱甘肽的合成并且为嘌呤和嘧啶核苷酸的前体，是肿瘤细胞增殖所必需的。在其抗癌活性作用中，Gln能够提高NK、巨噬细胞、杀伤性树突细胞的先天溶细胞活性。Gln还在对抗肿瘤细胞的CD8+T细胞的抗原特异性溶细胞活性中起作用。

谷氨酰胺可为添加的氨基酸的形式。“添加的氨基酸”在本发明的上下文中指不与蛋白质结合的氨基酸，而在一般膳食蛋白质来源例如奶、肉和植物蛋白质以外单独添加。添加的氨基酸可以游离氨基酸和/或以包含所述氨基酸的二肽和/或三肽形式存在。例如，谷氨酰胺可以二肽例如L-丙氨酰谷氨酰胺的形式添加。游离谷氨酰胺在液体环境中不稳定，因此如果组合物作为液体出售，谷氨酰胺必须以二肽或其他液体稳定形式添加。如果组合物作为液体提供，另一种可能性是以组件(modular)形式包括合适量的粉状谷氨酰胺，用于在消耗前立即与液体混合。

谷氨酰胺的量可在每天约5g至约30g，更优选的在每天约6g至约9g的的范围。

除了以上所述之外，Gln可提高肠正常上皮细胞的HSP表达。在抗癌治疗中肿瘤细胞的HSP表达可导致提高的肿瘤细胞免疫原性。抗癌治疗诱导肿瘤细胞的应激，进而提高先天免疫系统对转化细胞发挥细胞毒性作用和与药物一起消除肿瘤团块的效力。Gln的量优选的在约5g至约30g，更优选的约6g至约9g。

精氨酸在许多组织中但更重要的在肾中由作为直接前体由瓜氨酸合成。而瓜氨酸由谷氨酰胺、谷氨酸和脯氨酸在肠水平合成。在营养不良、禁食、不同类型的损伤、肿瘤、抗癌治疗和脓毒中血浆瓜氨酸和精氨酸水平显著降低。推测这在癌症中存在的免疫缺陷中起作用。

精氨酸对免疫功能的生物学活性可分为直接和间接的。因此推测瓜氨酸也可引发与精氨酸相同的效应，因为其在精氨酸合成中的作用。

对免疫系统的许多直接活性与T细胞功能有关，主要是由于T细胞受体成分之一的表达诱导。实际上，生理水平的精氨酸(150μM)调控T细胞受体ξ链，其是T细胞功能所需的。有趣的是在CD3ξ链的表达中瓜氨酸显示了与精氨酸的协同活性，延长了其mRNA的半衰期。

一些类型的肿瘤在免疫细胞中表达精氨酸酶或诱导精氨酸酶的表达，导致通常在宿主-肿瘤相互作用中观察到的免疫缺陷相关机制之一。免疫缺陷影响对转化细胞的CD8抗原特异性细胞毒性功能和NK和巨噬细胞的先天 细胞毒性。肿瘤相关巨噬细胞通过产生精氨酸酶直接参与免疫抑制过程，并另外表达可诱导调节性T细胞的表型以阻止免疫系统的细胞毒性活性。这些发现共同支持下述论点，即同时施用瓜氨酸和精氨酸能够补偿抗肿瘤活动中的免疫缺陷。

骨髓抑制细胞中的L-精氨酸代谢对抑制T细胞活化是至关重要的(Bronte，V.等人，Nat.Rev.Immunol.，5：641-654，2005)。已描述了在MCS中的不同代谢途径，用于增强的精氨酸消耗和T细胞中对此氨基酸的缺乏，此氨基酸是T细胞活化的先决条件。另外，活化的巨噬细胞的特征是精氨酸酶表达的提高，所述酶在消耗精氨酸中起作用。

本发明的免疫营养组合物中包括的精氨酸的每日剂量可在每天5g至约30g的范围，优选的在每天约10g至约15g的浓度范围。

本发明的免疫营养组合物中包括的瓜氨酸的每日剂量可在每天1g至约30g的范围，优选的在每天约2g至约15g的浓度范围。

已证明每次3-4克，每日服用2次在多个补充瓜氨酸的临床应用中是有效的。施用后，一般在3-5天时间内产生效果。现在转到一些现有技术，美国专利号5,576,351大体上描述了对损伤的人免疫反应的治疗，通过对免疫反应受损或具有免疫反应受损风险的人施用精氨酸或鸟氨酸或其混合物。然而，没有公开显示减轻或缓解这些病症的影响的任何益是来自于施用精氨酸。

WO/2007/114903中的发明提供了治疗或养护病症的方法和制剂，所述方法和制剂可能从提高或维持血液中的精氨酸水平中受益，并具有与现有的精氨酸补充剂相比改进的口味特征。此外，在血液中精氨酸水平的维持可能对其中精氨酸至瓜氨酸的生产率受损的急性和慢性疾病有益。此外所述发明提供了在个体中治疗至少一种饱腹感和消化不良的方法。在一个实施方案中，所述方法包括对个体施用有效量的L-瓜氨酸。

如上所述，这2个引用的文献既没有描述也没有建议对经历癌症疗法引起的凋亡的癌症患者在垂死的肿瘤细胞经历增强的抗原或免疫原表达时机时添加免疫营养，其中所述免疫营养的添加可在此短暂的免疫原性提高 期中提高或增强癌症疗法引起的患者的免疫细胞的免疫能力并提高肿瘤细胞的免疫原性。

茶氨酸，一种在茶饮料中独有的非蛋白质氨基酸是乙胺的饮食来源。施用包含茶氨酸和儿茶素的胶囊的受试者显示了降低的感冒和流感症状发生率和提高的γδT细胞功能。人γδT淋巴细胞是T细胞的一种亚群，是对抗微生物和肿瘤的第一道防线。双磷酸盐类和一些短链烷基胺可刺激这些γδT细胞，增强其在活体外暴露于多种微生物和肿瘤细胞后增殖和分泌细胞因子的能力。乙胺，一种烷基胺，是在肠中通过L-茶氨酸的酸性水解和在肝中通过酰胺酶介导的酶促水解产生(Asatoor，A.M.，Nature，210(5043)：1358-1360，1966)。酸性水解的L-茶氨酸在培养基中稀释后导致来自外周血单核细胞的γδT细胞的15倍扩增(5％-75％)。Bukowski，J.F.等人，Nutr.Rev.，66(2)：96-102，2008。

本发明的组合物因此还可用于制备营养制剂、药物或口服施用疗法的其他形式，用于治疗、预防或减轻放射疗法和化学疗法的副作用。

根据本发明的免疫营养组合物可按传统方法制备，例如，通过混合蛋白质来源、碳水化合物来源和脂来源。混合物中可包括乳化剂。此时可加入维生素和矿物质，但也可稍后添加以避免热降解。在混合前可在脂来源中溶解任意脂溶性维生素、乳化剂等等。可混合经反渗透处理的水以形成液体混合物。水的温度合宜的为约50℃至约80℃以帮助组分的扩散。可使用市售的液化剂形成液体混合物。

已有文献证明维生素例如维生素A及其衍生物或类胡萝卜素在体内和体外对免疫系统都具有刺激作用(Blomhoff，H.K.(1994)in Vitamin A inHealth and Disease(Blomhoff，R.，ed.)，pp.451-483，Marcel Dekker，New York)，但仍不清楚在所述作用中起作用的机制。这些作用可能通过视黄酸受体(RAR)成员和视黄醛衍生物X(retinoid X)受体介导。例如，视黄酸受体-γ对免疫细胞的发育不是必需的，但其是CD8+T细胞产生IFN-γ所需要的。Dzhagalov，I.等人，J.Immunol.，178(4)：2113-2121，2007。类胡萝卜素的示例包括但不限于β-胡萝卜素、α-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、 番茄红素、玉米黄质、辣椒黄素和叶黄素。β-胡萝卜素治疗的免疫调节作用可归功于维生素原A的性能。此发现与来自以前在人中进行的、观察到辅助细胞数的增加的研究一致，并与证明CD3⁺，CD4⁺和CD8⁺细胞数增加的试验相一致(Garcia，A.L.等人，Immunology，110：180-187，2003)。此外，已证明β-胡萝卜素可通过独立的途径增强免疫功能，即增强APC细胞的细胞表面表达，例如粘附分子细胞间粘附分子-1和白细胞功能相关抗原-3的表达。另一个可能的机制涉及维生素A及其衍生物，其可能通过β-胡萝卜素对环氧合酶或脂肪氧化酶活性的抑制作用。(Garcia，A.L.等人，见上)。

β-胡萝卜素和类胡萝卜素对器官和免疫系统功能的类似作用以前已有描述(Bendich，A.，J.Nutr.，119：112-115，1989；Bendich，A.，J.Nutr.，134：225S-230S，2004)。

其他具有免疫增强功能的维生素包括维生素D和E。例如，维生素D是一种已显示可调节常规T细胞反应而非T细胞发育的营养素/激素。具有不变的T细胞受体Vα14重排的CD1d-反应性自然杀伤T(NKT)细胞是淋巴细胞的一种独特亚群，其在免疫调节、肿瘤监视和宿主对抗病原体的防御中发挥重要作用。已有研究显示维生素D受体(CDR)的表达是iNKT细胞正常发育和功能所需要的(Yu，S.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，105(13)：5207-5212，2008)。

关于维生素E，已有报导对癌症患者的短期每日高剂量维生素E治疗可增强NK细胞功能。对癌症患者提供的维生素E的量为每天约750mg，持续2周。Hanson，M.G.等人，Cancer Immunol.Immunother.，56(7)：973-984，2007。短期维生素E治疗显著改进了NK细胞的溶细胞性活性。在患者外周血单核细胞中提高的NK细胞活性不是由于NK细胞数的提高或CD56(dim)NK细胞亚群比例的提高。此外，维生素E治疗在所有研究的患者中与少量但恒定的NKG2D表达的诱导相关。肿瘤诱导的免疫抑制不限于适应性T细胞系统，还包括树突细胞(DC)和NK细胞功能的缺陷。维生素E具有提高Th1细胞因子IL-2和IFN-γ和提高NK活性的能力，后 者的机制很可能与组胺的机制不同。Hanson，M.G.等人见上。

蛋白质为提供约20-40％的产品能量含量的乳蛋白(乳清或乳清蛋白和酪蛋白组合)和氨基酸，优选的约30％的产品能量含量。蛋白质可还包括大豆蛋白、酪蛋白和水解物。

脂来源可包含饱和脂肪酸(SFA)、单不饱和脂肪酸(MUFA)和/或多不饱和脂肪酸(PUFA)。SFA可部分以中链甘油三酯(MCT)存在。MCT，如此处讨论的，指含有C₆-C₁₂脂肪酸的甘油三酯。脂来源的总脂肪酸可以n-3脂肪酸形式存在。优选的，n-3脂肪酸选自α-亚麻酸(18:3n-3)、二十碳五烯酸(EPA，20:5n-3)、二十二碳五烯酸(DPA，22:5n-3)或二十二碳六烯酸(DHA，22:6n-3)或其混合物。

脂可提供25-40％范围的产品能量含量，优选的约30％的总能量，其中50％为中链甘油三酯。多不饱和脂肪酸(例如二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳五烯酸(DHA))来自具有少于6，优选约2-3的n6∶n3比率范围的植物油、鱼油。

必需脂肪酸(EFA)已显示在体外调节淋巴细胞反应性和破坏多种肿瘤细胞中发挥作用。Purasiri，P.等人，Eur.J.Surg.Oncol.，21(3)：254-260。在短期必需脂肪酸(EFA)口服补充(15天)中，EFA没有显著改变局部癌患者中的NK和LAK细胞的细胞毒性活性。而在晚期疾病组中，在第15天出现NK和LAK细胞的细胞毒性活性降低，并稳定降低，在补充6个月后达到最低水平。在晚期癌症组中NK和ALK的细胞毒性活性没有变化。然而，长期补充可能对恶性病患者的天然抗癌细胞毒性机制具有不利影响。Purasiri，P.等人，见上。

ω-3脂肪酸的示例包括EPA和DHA。EPA和DHA二者分别产生类二十烷酸和类二十二烷酸，其与花生四烯酸衍生的类二十烷酸可能具有不同性能。EPA和DHA产生resolvin。Calder，P.C.等人，Prostaglandins Leukot.Essent.Fatty Acids，77(5-6)：327-335，2007。另一方面，resolvin已知可通过抑制炎性细胞和化学物质产生和运输至炎症位点降低细胞炎症。它们在肾中具有免疫作用，作为对抗急性肾衰竭的工具。Serhan，C.N.等 人，J.Exp.Med.，196(8)：1025 37，2002。

EPA加入免疫细胞磷脂的提高可能导致EPA衍生的类二十烷酸例如列腺素E3(PGE3)和5-系白细胞三烯(LT)的产生提高，因为EPA可作为环氧合酶和脂肪氧化酶的底物。5-系LT产生的提高已在喂食鱼油的小鼠巨噬细胞，连续几天输注含有鱼油的脂乳剂的人受试者的嗜中性粒细胞，和连续几周口服补充鱼油的人的嗜中性粒细胞中证明。

基于上述，脂肪酸在免疫细胞内发挥了多种作用。它们可作为能量产生的原料；作用于这些膜的物理和功能性质的细胞膜磷脂成分；影响蛋白质细胞定位和功能的蛋白质结构的共价修饰物；通过对受体活性、细胞内信号转导过程或转录因子的激活的作用调节基因表达；和生物活性脂介质的合成前体，所述中介物例如前列腺素(PG)、白细胞三烯(LT)、脂氧素和resolvin。

膜磷脂脂肪酸组成的变化可影响免疫细胞功能，如此处以下说明的包括以下步骤：(1)膜物理性质的改变，例如膜结构和筏结构；(2)对细胞信号转导途径影响的改变，通过膜受体表达、活性或亲和力的改变，或修饰细胞内信号转导机制；和(3)脂介质(PGE2)的模式改变。作为这些多种变化的结果，转录因子激活被改变，基因表达被修饰。不同介质可导致不同生物学活性和效力。Calder，P.C.等人，见上。

图1.

碳水化合物可提供约30至50％范围的产品能量含量，优选约40％。

碳水化合物来源可为任意合适的可消化的碳水化合物或碳水化合物混合物。例如，碳水化合物来源可为麦芽糊精，天然或变性淀粉，例如来自木薯、玉米、大米、其他谷物、土豆，或高直链淀粉，蔗糖，葡萄糖，果糖和/或其混合物。

根据本发明的免疫营养组合物临床上可不含乳糖。术语“临床上不含乳糖”根据本发明的上下文指营养组合物每100kcal组合物最多含有0.2g乳糖。优选的，组合物每100kcal组合物含有少于0.2，更优选的少于0.17g乳糖。

根据本发明的免疫营养组合物还可不含谷蛋白。

本发明的免疫营养组合物还可具有其他营养补充物，例如维生素、矿物质、微量元素，以及另外的氮、碳水化合物和脂肪酸来源。它们可在患者的口服摄取中加入，或以完全营养制剂的形式提供从而使单一营养来源补充所有每日必需量的维生素、矿物质、碳水化合物、脂肪酸等等。

本发明的免疫营养组合物可以适于胃肠外或肠内施用的方式配制。它们特别适于肠内施用，例如口服施用和/或管饲。这些组合物可方便的以水性液体形式施用。适用于肠内应用的本发明组合物因此优选的为水性形式 或为粉末形式，其中在使用前粉末可方便的加入水中。用于管饲，加入的水量取决于患者的液体需要和条件。

术语“可药用盐”指下述盐，在合理的医学判断范围内，其适用于与人组织接触而不具有不适当的毒性、刺激、过敏反应等等，并符合合理的利益/风险比。

如此处使用的数字范围无论明确公开与否，旨在包括在该范围内包含的每一个数字和数字子集。此外，这些数字范围应被理解为对涉及在该范围内包含的任意数字和数字子集的权利要求提供支持。例如，从1至10的公开应被理解为支持从2至8，从3至5、6、7，从1至9，从3.6至4.6，从3.5至9.9的范围，等等。

所有涉及本发明的单数特征或限制应包括对应的复数特征或限制，反之亦然，除非在使用该指代的上下文中另外相反的特别或明确指示。

如此处使用的方法或过程步骤的所有组合可以任意顺序进行，除非在使用该组合的上下文中另外相反的特别或明确指示。

除非另外说明，如此处使用的所有百分比、部分和比例是以总组合物重量计的。有关所列组分的所有这些重量基于活性水平，因此不包括市售原料中可能包括的溶剂或副产品，除非另外说明。

本发明的组合物和方法可包含此处描述的本发明的必需元素和限制，由其组成或基本上由其组成，以及此处描述的或如此处描述的一般种类的组合物和方法中有用的其它的任意额外或任选的组分、成分或限制。

“治疗”指对哺乳动物，包括人施用药物或组合物或制剂或执行医疗程序，用于在患者经受痛苦或有缺陷的情况下，预防(防止)或治愈或减轻或正常化虚弱或疾病或缺陷。

“患者”或“受试者”指可能从本申请描述的营养组合物和方法中获利的人或非人哺乳动物。

“治疗有效量”或“营养有效量”指足以获得预期治疗效果的试剂、组合物或制剂的量。

“胃肠外”指物质穿过或基本上通过人体表皮层的途径，通常以静脉 内(IV)、肌肉内(IM)或皮下(SC)的方式。

如此处描述的，术语“肠内”指通过消化道的施用。熟练技术人员公认，此施用可在肠内，肠是从胃通到肛门的分为小肠和大肠的管状器官，通过嘴，通过鼻胃管进入胃，和本领域已知的其他方式。

“可药用的”指由联邦或州政府管理机构认可的或在美国药典或其他一般公认的药典中陈列的，在动物中和更具体的在人中使用的。

“载体”指与药物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体。这些制药载体可为无菌液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等等。还可应用盐溶液和水性葡萄糖和甘油溶液作为液体载体，特别是用于可注射的溶液。合适的制药赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、干燥的脱脂奶、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等等。

如此处描述的，术语“癌症疗法”指化学疗法、手术、放射、基因疗法、免疫疗法、生物疗法、分化剂、化学预防剂或其组合。在一些实施方案中，化学疗法指对细胞有细胞毒性的药物或试剂。

如此处描述的，术语“化学疗法”指使用细胞毒性剂杀死增生细胞的方法。词语“在化学疗法中”指施用的细胞毒性剂作用持续的时期。另一方面，词语“化学疗法后”的意思是覆盖施用细胞毒性剂后施用组合物的所有情况，不考虑该组合物任意以前的施用，也不考虑已施用的细胞毒性剂的效果的持续。

当此发明的方法应用于化学疗法时，可在化学疗法前、中或后(即在施用细胞毒性剂前、中或后)施用至少一种免疫营养组合物。例如，可在化学疗法的一个周期前10-3天内(化学疗法前或化学疗法之前)至周期后10-7天内(化学疗法后或化学疗法之后)对受试者施用本发明的免疫营养组合物。

甜味剂的示例包括但不限于糖精钠、阿斯巴甜、甜菊苷、甜叶菊提取物、对甲氧基肉桂醛、新橙皮苷二氢查耳酮、紫苏芦丁等等。

药物的有效剂量形式包括但不限于口服制品(液体制品例如提取物、酏剂、糖浆、酊剂和柠檬饮料)；固体制品例如胶囊、颗粒、丸剂、粉末和片剂)，注射剂，输注剂，滴鼻剂，滴眼剂，栓剂，喷雾，和用于经皮施用的剂量形式，例如软膏和贴片。

根据本发明，本发明的组合物可以下述形式提供：以饮食方式的形式，例如补充剂，或以营养制剂形式，例如医疗食物或饮料产品，例如以全餐、部分餐、作为食物添加剂或作为用于溶解的粉末形式，或以药物制剂的形式，例如以片剂、丸剂、药袋或胶囊的形式。

在本发明的另一个方面，提供了包含本发明的免疫营养组合物的医疗食物或饮料产品、饮食补充剂或营养或药物制剂。

以饮食方式，例如补充剂或药物制剂形式的本发明的组合物可仅包含本发明的组合物，和任选的包含可药用的或营养上可接受的载体。

本发明的组合物可为医疗食物或饮料产品的形式，例如用于溶解的粉末形式。粉末可与液体组合，所述液体为例如水，或其他液体例如奶或果汁，例如粉末和液体的比率为约1比约5，以获得可立即食用的组合物，例如立即饮用的组合物或方便饮料。

任选的，根据本发明的组合物可为营养完全的，即可包含维生素、矿物质、微量元素以及氮、碳水化合物和脂肪和/或脂肪酸来源，从而可作为唯一的营养来源使用，基本上提供所有每日所需量的维生素、矿物质、碳水化合物、脂肪和/或脂肪酸、蛋白质等等。因此，本发明的组合物可以营养均衡的全餐形式提供，例如适于口服或管饲，例如通过鼻胃、鼻十二指肠、食管造瘘、胃造瘘或空肠造瘘管，或周围营养或完全肠外营养。优选的本发明的组合物用于口服施用。

本发明提供在化学或放射疗法的抗癌治疗中支持免疫系统的方法。

本发明提供利用提高肿瘤细胞表达细胞应激分子(“危险信号”)和由此促进被先天免疫细胞例如自然杀伤细胞(NK)、自然杀伤T细胞(NKT)、巨噬细胞(Macs)和杀伤性树突细胞(KDC)的细胞识别和杀伤的方法。在抗癌治疗中先天免疫细胞在遭遇肿瘤细胞的“危险信号”后变得高度活化。

以下实施例描述了在经历先天和适应性免疫反应损伤，及经历或不经历化学疗法的带瘤动物中的免疫抑制细胞的存在和免疫功能。此外，提供了一个实施例描述免疫营养对经历抗癌疗法的带瘤小鼠的有益作用。此外，下文中提供了5种示例性免疫营养组合物，所有组合物在含有的免疫增强剂的类型和量上都互不相同。

实施例1

在带瘤动物中存在免疫抑制机制——先天和适应性免疫反应损伤

小鼠。在试验中使用近亲繁殖的8周大C57BL/6(H-2b)小鼠。在小鼠左侧腹部皮下(s.c.)接种1×10⁶肿瘤细胞，每2天通过卡尺测量监视肿瘤的生长。肿瘤接种后6天，用奥沙利铂或阿霉素处理动物。在化学疗法治疗后每2天监视肿瘤的生长，在肿瘤移植2周后处死动物。一些试验一直进行到化疗后28天以更好的评估肿瘤生长。

每2天评估体重直至处死。

在化学治疗后第2和4天，第10天和处死时(第14或28天)采集血液样品。进行尸检并评估肿瘤质量。

癌细胞系。甲基胆蒽(MCA)诱导的表达卵清蛋白(OVA)外源抗原的肉瘤细胞系在添加2mM L-谷氨酰胺，10mM HEPES，20μM 2-巯基乙醇，150U/mL链霉素，200U/mL青霉素，和10％热失活的FBS的DMEM或RPMI1640中生长。在化学疗法前6天在小鼠腹部注射1×10⁶肿瘤细胞。

血液学评估。在第2、4、10、14和28天测量红血球计数、血红蛋白和血细胞比容。

在同样的时间点检查白血球数和不同的白细胞组成(formulation)。另外使用血液样品以测量免疫细胞种群。

流式细胞分析。进行了CD11c⁺，CD11b⁺Gr-1⁺和CD11b⁺sGr-1-，CD14⁺，CD19⁺，CD16⁺，CD 56⁺，CD3⁺，CD8⁺，CD4⁺的细胞亚群分析。使用的一系列抗体允许评估：B和T细胞亚群NK、NKT细胞，巨噬细胞，树突细胞，颗粒细胞。

肿瘤生长的评估。

使用卡尺每2天监视肿瘤的生长，使用公式长×宽×宽×0.52mm³计算肿瘤体积。

结果

在小鼠中s.c.接种肿瘤细胞后，通过用卡尺评估，肿瘤需要5-6天开始生长。在头6天中的肿瘤生长未伴随体重减轻。

在处理后6天中，用奥沙利铂或阿霉素处理在所有检测剂量上都与体重减轻相关。更高的剂量诱导更显著的体重减轻，但大多数时候体重减轻不高于初始体重的10或15％。最大体重减轻在所有检测剂量的阿霉素中(2.5，5，7.5和10mg/kg)为约10％，在最大剂量的奥沙利铂中(10mg/kg。其他检测的剂量为5和7.5mg/kg)为约15％。

处死显示更高体重减轻(超过15％)的离群动物。之后体重保持稳定或显示轻微的恢复。在跟踪至28天的试验中，在化学治疗后约第20天开始出现新的体重减轻期并持续至处死。

通过红细胞数、血红蛋白和血细胞比容水平评估的红血球毒性显示了明确的模式。两种化学疗法试剂都诱导了水平减少的过程直到化疗后第6天达到稳定水平并持续到第16天，这时再一次开始减少的过程。

白血球数在化学疗法后立即显示了降低，在7天后开始恢复。有趣的是奥沙利铂处理的动物倾向于显示比基线数更高的白细胞数。

白细胞和免疫细胞亚群的流式细胞仪分析显示，化学疗法诱导了白细胞的整体降低，直至治疗后第10天。之后白细胞数开始增加和恢复至基线或甚至超过基线。

短暂的淋巴细胞减少涉及CD3和CD19(B细胞)，NK；(Ly亚群)；外周血包括少数树突细胞和单核细胞。

在皮下细胞移植后5-6天可观察到肿瘤的生长。在化学疗法后，肿瘤的大小没有显示显著的变化，但在化学疗法后约8-10天可再次观察到开始生长。之后肿瘤大小继续增长直至处死。在未经化学疗法处理的对照带瘤 小鼠中，生长的速度更快，直至试验结束(处死动物)。

图2说明了化学疗法治疗促进的免疫原性是如何刺激适应性免疫反应的。化学疗法损伤癌细胞，因此增加了它们对免疫系统的易感性。在图2中，2个处理组(oxa-10；oxa-12.5)与对照组在第14天的分歧与增强的免疫反应相关。尽管肿瘤继续生长，但其生长速率比对照(无化学疗法)要慢。

图2.奥沙利铂的抗癌作用，在植入了肿瘤的相比对照的啮齿类模型中

实施例2

在经历化学疗法的带瘤动物中存在免疫抑制机制。先天和适应性免疫反应的状态。

小鼠。在试验中使用近亲繁殖的8周大C57BL/6(H-2b)小鼠。动物分为7个不同的饮食组。对照组接受成年啮齿类的饮食AIN93(维持)。检测的饮食以适用于动物模型的剂量施用：(a)对照饮食添加1％(w/w)L-精氨酸，(b)25％蛋白质替换为谷氨酰胺，(c)1％(w/w)L-瓜氨酸，(d)1g/Kg体重的活性己糖相关化合物，(e)20mg/天的RNA核苷酸和(f)25mg/天的乳铁蛋白。一周后在小鼠左侧腹部皮下(s.c.)接种MCA-OVA 1×10⁶肿瘤细胞，通过卡尺测量每2天监视肿瘤生长。肿瘤接种后6天，用奥沙利铂或阿霉素处理动物。在化学疗法治疗后每2天监视肿瘤的生长，在肿 瘤移植2周后处死动物。不接受化学疗法治疗的对照动物在所有检测的饮食中平行进行试验。每2天评估体重。在化学治疗后第2、4和10天和处死时(第14或28天)采集血液样品。进行尸检并评估肿瘤质量。

癌细胞系。甲基胆蒽(MCA)诱导的表达卵清蛋白(OVA)外源抗原的肉瘤细胞系在添加2mM L-谷氨酰胺，10mM HEPES，20μM 2-巯基乙醇，150U/mL链霉素，200U/mL青霉素，和10％热失活的FBS的DMEM或RPMI1640中生长。在化学疗法前6天在小鼠腹部注射1×10⁶肿瘤细胞。

血液学评估。在第2、4、10、14和28天测量红血球计数、血红蛋白和血细胞比容。

在同样的时间点检查白血球数和不同的白细胞组成(formulation)。另外使用血液样品以测量免疫细胞种群。

流式细胞分析。进行了CD11c⁺，CD11b⁺Gr-1⁺和CD11b⁺Gr-1-，CD14⁺，CD19⁺，CD16⁺，CD 56⁺，CD3⁺，CD8⁺，CD4⁺的细胞亚群分析。使用的一系列抗体允许评估：B和T细胞亚群NK、NKT细胞，巨噬细胞，树突细胞，颗粒细胞。

肿瘤生长的评估。

使用卡尺每2天监视肿瘤的生长，使用公式长×宽×宽×0.52mm³计算肿瘤体积。

结果

所有检测的饮食在肿瘤转移前的8天中都引起了相似的体重增长曲线。在小鼠中s.c.接种肿瘤细胞后，通过用卡尺评估，肿瘤需要5-6天开始生长。在肿瘤细胞移植后和化学疗法前没有观察到肿瘤重量的改变。动物在化学疗法后头些天体重降低。在化疗后第4-10天内达到最大体重降低，之后动物维持稳定体重或甚至开始恢复体重。在不同饮食之间没有观察到差别。

最大体重减轻在所有检测剂量的阿霉素中(2.5，5，7.5和10mg/kg)为约10％，在最大剂量的奥沙利铂中(10mg/kg。其他检测的剂量为5和 7.5mg/kg)为约15％。

通过红细胞数、血红蛋白和血细胞比容水平评估的红血球毒性显示了明确的模式。两种化学疗法试剂都诱导了RBC的降低，在化疗后6-10天内达到最低水平，到第16天达到稳定水平。添加精氨酸的饮食避免了在第6-10天内观察到的红细胞的显著降低(图3)。此组与对照和其他治疗组都不同。此外，与单独使用化学疗法相比，精氨酸与化学疗法治疗的组合进一步降低了肿瘤大小(图4)。

图3与对照饮食相比，饮食精氨酸的添加降低骨髓毒性的作用。

图4与对照饮食相比膳食精氨酸与癌症疗法组合降低肿瘤大小

白血球数在化学疗法后头1周内降低。在第10天前，WBC数开始恢复，然后在第10天后超过起初的基线，并倾向于保持更高直至试验结束。没有用化学试剂处理的对照动物在试验中具有更稳定的WBC水平，在第15天后具有增高的趋势(图5)。在奥沙利铂处理的动物中，接受乳铁蛋白膳食添加的组的白细胞增加倾向于更高。

图5.奥沙利铂对白血球种群的作用

白细胞和免疫细胞亚群的流式细胞仪分析显示，治疗后约10天时化学疗法诱导了白细胞的整体降低。在接受添加精氨酸饮食的动物中，CD3⁺细胞的降低得到部分控制。在接受氨基酸谷氨酰胺和瓜氨酸以及乳铁蛋白的组中在化学治疗后整体淋巴细胞群受到较少的抑制。在接受膳食核苷酸的治疗组中观察到肿瘤大小的降低，甚至在没有进行化学疗法的情况下(图6)。此外，施用膳食核苷酸还导致白血球的增加(图7)。

图6.与没有进行化学疗法的对照饮食相比膳食核苷酸降低肿瘤大小

图7.膳食核苷酸对白血球种群在早期奥沙利铂诱导的毒性中的作用

如上所述，也观察了肿瘤细胞转移后的肿瘤生长，通过使用测量卡尺在细胞转移后5-6天可以测量。在化学疗法后肿瘤生长减慢直至化学疗法后约第10天，之后肿瘤生长速度提高直至试验结束。在没有用化学疗法治疗的对照带瘤小鼠中生长速度更高，直至试验结束(处死动物)。各饮食的作用不依赖于肿瘤生长，其与化学疗法治疗的相互作用和未处理的对照也是如此。实际上，与其他组相比食用添加精氨酸饮食的组似乎具有延迟的移植肿瘤进程。此外核苷酸似乎诱导了肿瘤生长的延迟，甚至在没有接受化学疗法试剂的对照动物中。

实施例3

经历化学疗法的带瘤动物中的免疫抑制机制的存在可通过特定设计的 免疫营养得到部分补偿

小鼠。在试验中使用8周大C57BL/6(H-2b)小鼠。在小鼠左侧腹部皮下(s.c.)接种肿瘤细胞，每2天通过卡尺测量监视肿瘤的生长。在肿瘤移植后10-20天内进行尸检，评估肿瘤质量。评估细胞瘤以获得经历凋亡、有丝分裂和通过细胞周期(Ki 67免疫组化染色)的频率。肿瘤移植10天后用化学疗法试剂处理动物。试验动物每周4次经腹腔(i.p.)注射以下药物，单独或组合：环磷酰胺(环磷酰胺一水合物)，100mg/kg；甲氨蝶呤，RNX-0396，25或50mg/kg；亚德里亚霉素(盐酸阿霉素)，5mg/kg；5-FUra，4，25或50mg/kg。在治疗施用后2、4和10天处死动物。

动物在肿瘤移植前5天开始食用检测的饮食。饮食是基于添加谷氨酰胺、瓜氨酸、半胱氨酸、苏氨酸和精氨酸、核苷酸的乳清蛋白，并包含每克饮食10⁷益生菌细胞数(双歧杆菌和乳杆菌的混合)。对照动物组接受正常饮食。

组织取样，细胞分离和培养。处死带瘤小鼠，它们的脾和s.c.肿瘤在布恩氏固定剂中固定或在无菌条件下收获。固定的组织在石蜡中包埋、切片并用苏木精和伊红或用免疫组化技术染色以评估由凋亡所致的细胞死亡和细胞增殖(Ki67)。制备单细胞悬浮液。在脾和肿瘤匀浆中进行CD11b⁺Gr-1⁺和CD11b⁺Gr-1^-脾细胞的细胞亚群分析。

此外，相同的2种细胞亚群在带肿瘤质组织的组织切片中分析。对脾和移植肿瘤周围组织中的CD11c⁺树突细胞和CD8⁺细胞毒性淋巴细胞染色。

³ H-TdR掺入。在96孔平底板中培养CD8⁺T细胞(2×10⁵细胞每孔)并用3μg/ml抗-CD3和2μg/ml抗-CD28刺激。将来自带瘤动物和不带瘤动物的CD11b⁺细胞加入培养物以构成总细胞的20％。培养2天后，培养物用1μCi/孔³H-TdR脉冲18小时，通过闪烁计数测量³H-TdR掺入。

CTL反应的评估。为了生成同种异体反应性CTL，接受检测或对照饮食的带瘤BALB/c小鼠的脾细胞(3×10⁶)与3×10⁶γ-受辐射C57BL/6脾细胞共培养。5天后，在5小时的⁵¹Cr-释放实验中检测培养物裂解同种异体靶(MBL-2)的能力，使用预先用100μCi Na₂ ⁵¹CrO₄标记60分钟的2× 10³靶细胞。从一式三份的样品中计算特异性裂解的百分比如下：(实验cpm-自发cpm)/(最大cpm-自发cpm)×100。裂解单位(LU)通过每10⁶效应细胞对2000个同种异体靶细胞(MBL-2细胞)给出30％特异性裂解的细胞数(LU30/10⁶细胞)计算。如果存在，将CT26对照靶的非特异性裂解百分比从MBL-2靶细胞得到的值中扣除。

结果

铬释放实验和抗-CD3抗CD28刺激中的增殖反应在经历化学疗法但接受免疫营养饮食的带瘤动物中更高。

在脾和肿瘤周围组织中观察到较少的骨髓抑制细胞。

与对照组相比，经历化学疗法和食用检测饮食的带瘤动物中的脾和B细胞恢复了对LPS的反应能力。

总的来说，食用检测饮食的动物与喂食对照正常饮食的动物相比显示了提高的免疫能力。

实施例4

实施例5

实施例6

实施例7

实施例8

营养干预预防和/或减轻由抗癌治疗引起的骨髓麻痹和特别是嗜中性粒细胞减少症的临床证据示例

发热性嗜中性粒细胞减少症和感染是接受恶性肿瘤治疗的患者中的常见并发症。嗜中性粒细胞减少症、发热性嗜中性粒细胞减少症和感染的预防可改善生活质量，坚持治疗方案，肿瘤对治疗产生反应，避免治疗失败和总体存活以及其他副作用。在预期的时间应用计划的剂量将改善肿瘤对治疗的反应和存活；相比之下，不希望剂量强度降低或时间延长。

在何杰金病(Hodgkin′s disease)治疗中细胞毒性药物的骨髓抑制作用。

使用生长因子治疗和使用免疫营养支持的二级预防。

二级预防。

病案报告。

一名26岁的患者在2个月的反复发热和体重减轻后经诊断患有何杰金病(HD)，，混合细胞型变体(mixed cellularity variant)。在第一次临床检查时发现2处颈淋巴结病变，在活体检查中组织学诊断为HD，混合细胞型变体。在x-光和扫描检查中发现多处纵膈淋巴结病变。影像中没有检测到涉及膈下的病变。使用标准化学疗法方案治疗患者，包括阿霉素、博来霉素、长春碱、氮烯唑胺(ABVD)。开始治疗15天后患者出现发热、 低白血球数和严重的嗜中性粒细胞减少症(800/μL)。使用抗生素和粒细胞集落刺激因子治疗患者。

4周后患者将进入化学疗法的下一个周期，白细胞组成(formula)在正常限度内，为5500粒细胞/μL。治疗前1周患者接受包含12.5g精氨酸，3.3g n-3脂肪酸和1.2g RNA的每日补充，对患者进行口服补充，体积为1升。建议患者在其正常饮食外食用1升所述产品。

营养补充缓解了化学疗法引起的嗜中性粒细胞减少症，患者可进行减少的或不需要进行粒细胞集落刺激因子治疗。在下一个化学疗法周期前重复相同的营养干预，仅观察到少量嗜中性粒细胞减少反应，而不需要另外的生长因子治疗或治疗可延迟。

针对实体瘤的细胞毒性药物的胃肠道和骨髓毒性。

使用免疫营养支持的一级预防。实验研究。

带有皮下人结肠DLD-1肿瘤的小鼠(每组20只)在肿瘤细胞移植后第17、24和31天经腹腔注射(肿瘤移植是实验表的第1天)5-氟尿嘧啶(50mg/kg)。在肿瘤移植后第10天动物开始营养干预，所述营养干预包含完全受控的添加精氨酸、n-3脂肪酸和核苷酸的饮食。对进行类似方案的对照动物组施用完全受控的不含精氨酸、n-3脂肪酸和核苷酸的饮食。每天监测存活率和体重。在第20和33天取血用于全血液计数和不同白细胞计数。在第35天试验结束时评估肿瘤重量。

动物存活率在检测饮食组中为75％，在对照饮食组为66％。动物死亡不是因为肿瘤生长而被解释是药物毒性的结果。实际上肿瘤重量在研究期内没有增长反而降低了，在食用添加免疫营养素的检测饮食的动物中发现具有较小的剩余肿瘤质量的倾向(-25％对-18％，相比化学疗法开始前时的肿瘤重量)。差异不具有统计学显著性。

在第20和33天测量了外周血成分。在第20天出现嗜中性粒细胞数的降低，在对照组中降至第16天(抗肿瘤治疗前1天)记录的平均值的50％，在接受添加免疫营养素的检测饮食的动物中降至28％。2组在血小板数的变 化上没有差别，都是20％。

在处死动物时的肠组织病理学显示了中度变化，包括绒毛变短和融合，隐窝中降低的有丝分裂活性和固有层中较高的炎症浸润。在接受检测饮食的组中，肠损伤较轻。

针对头颈部实验癌症的细胞毒性药物的胃肠道和骨髓毒性。使用免疫营养支持的一级预防。

购买8周大雄性CB6F1-Tg  

小鼠(Tg)并在塑料笼中饲养。允许它们自由食用粉末状基础饮食CRF(Charles River Formula)-1。在此研究中使用致癌物4-硝基喹啉-N-氧化物诱导舌头和/或食道肿瘤。

100％的小鼠在舌头上长出肿瘤(甚至多个肿瘤)，60％在食道上长出肿瘤。在肉眼没有发现肿瘤损伤的区域观察到一些发育不全的损伤。

保留具有舌头和食道肿瘤的动物用于后续试验。

使用顺铂、紫杉醇和阿霉素组合开始对它们进行治疗。在化学疗法治疗的第一个周期前7天，将动物随机分为2组：一组接受添加精氨酸，n-3脂肪酸和核苷酸的饮食，而对照组喂养等热量的、等氮量不含精氨酸，n-3脂肪酸和核苷酸的饮食。进行3个周期，彼此隔离2周。营养干预持续整个研究直到第55天处死动物。在第1个和第2个周期后10天和处死前进行外周血细胞研究。嗜中性粒细胞数在对照组中为开始化学疗法前一天记录的平均值的43％，在接受添加免疫营养素的检测饮食的动物中为70％。在2个不同饮食组中没有观察到肿瘤减退的区别。在2个组中测量了肿瘤质量的减少。对剩余的肉眼可见肿瘤损伤和发育不全的损伤的组织学研究显示了相似的有丝分裂活性或进入细胞周期的细胞(PCNA标记指数)。

对癌症疗法和肿瘤共同导致的骨髓和免疫区室毒性的治疗

在癌症治疗中维持免疫能力提高了机体自然识别和破坏身体中癌细胞的能力。因此，对涉及免疫系统产生、成熟或维持的区室的任意损伤都会提高癌演进的风险。化学和放射治疗设计用于破坏癌细胞；其中一些对降 低肿瘤的生长速率非常有效(图8)。

图8.奥沙利铂在移植肿瘤的啮齿类模型中的抗肿瘤作用

在化学和/或放射疗法的积极使用中，肿瘤生长的减慢，或甚至肿瘤大小的降低是手术干预前的新辅助疗法策略的一部分。然而，抗癌疗法同样可能负面的影响其他例如由骨髓产生的快速分裂的细胞，如同它们破坏癌细胞一样。

因为骨髓是制造血细胞的场所，(任意原因)毒性导致血细胞的缺乏。 此骨髓毒性的后果包括威胁生命的感染，因为机体无法产生白细胞以对抗入侵的细菌和病毒。此外，由于低红血球数，毒性可导致贫血症，甚至由血小板缺乏导致严重出血。

如上所述，由新辅助治疗损伤的癌细胞可表达免疫系统可识别的成分，但是机体只有在免疫系统不被该癌症疗法过度严重损伤的情况下才能进行反应。因此，必须通过降低的骨髓毒性维持免疫能力从而提高治疗的效果。免疫系统恢复对转化细胞的控制和抑制剩余肿瘤细胞的“时机”发生在化学疗法后的数天。为了利用此增强的抗原或免疫原表达时期，本发明描述了可增强先天免疫反应和抗肿瘤免疫反应的(营养及其他)方法。在化学和放射疗法治疗前、中和后选择性使用营养(和药物组合物)调节免疫系统可纠正由这些癌症疗法引起的急性免疫毒性。

我们的数据显示癌症疗法引起了对骨髓的初始损伤，因此也对血液和免疫细胞产生引起损伤。此癌症疗法的损伤或毒性在施用化学疗法试剂后开始后立即出现，并持续数天。我们的数据显示肿瘤自身也抑制骨髓活性，如通过白血球数所证明的。图(图9和10)证明毒性是如何快速开始并在约1周内持续下降。但是，施用癌症疗法1周后身体开始恢复，如通过血细胞测量的改善所证明的。此时肿瘤的生长速率已经被抑制，但是肿瘤仍然存活。出现由肿瘤导致的第二期骨髓毒性，并在血细胞测量中再次观察到衰退。

图9.阿霉素在移植肿瘤的和对照的动物中对骨髓产物的影响

图10.奥沙利铂在移植肿瘤的和对照动物中对骨髓产物的影响

传统的癌症疗法包括化学、放射和/或免疫疗法的多次施用。新辅助策略是为了使用较少剂量的化学或放射疗法以在主要干预前(例如手术或更积极的化学疗法方案)降低肿瘤的生长速率或大小。然而，如果患者的血细胞(例如血细胞比容、血小板、免疫细胞)数太低而将个体置于感染、出血或甚至呼吸困难的风险中时，肿瘤专科医生将推迟这些主要干预。此处描述的新型干预策略探索和提出了这些问题的解决方案。

我们的数据说明毒性分为两期。首先，由癌症疗法引起的毒性。其次，由肿瘤自身引起的毒性。因此，设想使用分为两期的方法治疗和/或预防由癌症疗法和肿瘤引起的骨髓毒性。

期望包括具有免疫细胞刺激活性的化合物组合的营养干预通过1)在第一期预防严重的骨髓毒性和2)在肿瘤引起的毒性期提高免疫反应对个体有益。

实施例：根据我们的数据，与以前描述的假说一致，与对照相比，乳铁蛋白(化合物5)的施用导致化学疗法治疗组中较低的毒性。

图11.在接受或不接受化学疗法的带瘤动物中，营养干预对免疫细胞的影响。

乳铁蛋白治疗组在第二期经历了免疫细胞群的增加。此外，在第二期中膳食核苷酸(饮食4)和精氨酸(饮食2)都报告了免疫细胞浓度的提高。因此，认为口服施用包括这些化合物的组合可以降低与两期毒性的两期均相关的骨髓抑制。证据支持我们的假说，即施用特定营养化合物可降低骨髓毒性从而改善患者对癌症治疗方案的坚持，改善生活质量和降低同病的风险。

新辅助疗法

以下发明实施例基于营养支持在癌症疗法中的使用，所述疗法包括但不限于新辅助癌症疗法。新辅助疗法是治疗消化道癌症例如食道和直肠肿瘤，以及头和颈部癌症及其他癌症的新兴方法。新辅助疗法是在主要疗法前使用放射疗法、化学疗法、激素疗法或其组合的预治疗，其中主要疗法为手术或更积极的化学或放射疗法。在主要治疗前的所述预治疗的基本原理是改善治疗的潜力。设想的新辅助癌症疗法和营养支持的益处包括但不限于：降低肿瘤大小，完全切除肿瘤(手术干预)的几率更高，降低手术中肿瘤接种的风险，预防局部或系统性复发，和更好的患者总体结果。此外，认为此方法将降低急性和慢性治疗毒性，手术和围手术期发病率和改善患者的生活质量。

应当理解本发明不受限于如此处说明和描述的精确组成。因此认为，通过此处陈述的公开，或通过由此的常规实验本领域普通技术人员可容易进行的任意方便的修饰是如随附的权利要求定义的本发明的精神和范围内的。

Claims (36)

1.短暂提高或增强免疫细胞免疫能力的免疫营养组合物，包含：

至少一种免疫增强剂和可药用的载体，其中所述至少一种免疫增强剂能够维持所述免疫细胞的先天和适应性免疫功能和正常生理机能，其中维持所述免疫功能和正常生理机能导致对所述抗癌疗法的更好耐受和提高的效力，并短暂提高或增强所述免疫细胞的免疫能力。

2.权利要求1的免疫营养组合物，其中所述至少一种免疫增强剂能够优化所述抗癌疗法的效果，并提高由所述抗癌疗法弱化的所述免疫细胞的免疫能力。

3.权利要求1的免疫营养组合物，其中所述至少一种免疫增强剂能够诱导所述免疫细胞的至少一种免疫原决定簇。

4.权利要求1的免疫营养组合物，其中所述免疫细胞为选自巨噬细胞、树突细胞、杀伤性树突细胞、抗原特异性溶细胞性淋巴细胞、细胞毒性CD8⁺T细胞(CTL)和自然杀伤细胞的抗原呈递细胞。

5.权利要求1的免疫营养组合物，其中所述至少一种免疫增强剂改善所述抗原呈递细胞的抗原呈递功能、先天细胞杀伤和抗原特异性肿瘤细胞杀伤。

6.权利要求1的免疫营养组合物，其中所述至少一种免疫增强剂选自益生菌、益生菌生物质、非复制生物、蛋白质来源、脂肪酸、氨基酸、核酸、钾、尿酸、单链寡核苷酸、病原体/微生物相关分子模式(PAMP/MAMP)、活性己糖相关化合物、类胡罗卜素、维生素D受体、支链氨基酸、茶氨酸、维生素E、必需脂肪酸例如EPA和DHA或EPA/DHA和乳铁蛋白。

7.权利要求6的免疫营养组合物，其中所述至少一种益生菌选自乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)，长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)，副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)，约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)，卢氏乳杆菌(Lactobacillusreuterii)或其混合物。

8.权利要求6的免疫营养组合物，其中所述至少一种蛋白质来源为乳清、大豆或酪蛋白。

9.权利要求8的免疫营养组合物，其中所述乳清蛋白来源来自天然乳清、完整的未水解乳清、乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白分离物或乳清蛋白水解物。

10.权利要求6的免疫营养组合物，其中所述至少一种氨基酸为支链氨基酸、谷氨酰胺、精氨酸、瓜氨酸、半胱氨酸或苏氨酸。

11.权利要求6的免疫营养组合物，其中所述至少一种核酸为核糖核酸(RNA)或脱氧核糖核酸(DNA)。

12.权利要求6的免疫营养组合物，其中所述至少一种寡脱氧核苷酸为CpG寡脱氧核苷酸。

13.权利要求3的免疫营养组合物，其中所述至少一种免疫原决定簇选自热休克蛋白70(hsp70)，热休克蛋白90(hsp90)，自然杀伤细胞受体配体(例如，NKG2D配体)，钙网织蛋白和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)。

14.在抗癌治疗中短暂提高或增强免疫细胞免疫能力的方法，包含：

将受试者的所述免疫细胞暴露于免疫营养组合物，所述免疫营养组合物包含至少一种能够维持所述免疫细胞的先天和适应性免疫功能和正常生理机能的免疫增强剂，其中所述免疫功能和正常生理机能的维持导致对所述抗癌疗法的更好耐受和提高的效力，并短暂提高或增强所述免疫细胞的免疫能力。

15.权利要求14的方法，其中所述免疫营养组合物选自权利要求1至权利要求13的任意一种组合物。

16.权利要求14的方法，其中所述免疫营养组合物诱导肿瘤细胞的免疫原性。

17.权利要求14的方法，其中所述免疫营养组合物增强肿瘤细胞的免疫原性。

18.权利要求14的方法，其中由所述至少一种免疫增强剂引起的所述免疫细胞免疫能力的短暂提高还导致在所述受试者中抗原呈递细胞的活化和杀肿瘤活性的起始。

19.权利要求14的方法，其中所述至少一种免疫增强剂改善所述抗原呈递细胞的抗原呈递功能、先天细胞杀伤和抗原特异性肿瘤细胞杀伤。

20.权利要求14的方法，其中所述至少一种免疫增强剂能够优化所述抗癌疗法的效果并提高由所述抗癌疗法弱化的所述免疫细胞的免疫能力。

21.权利要求14的方法，其中所述至少一种免疫增强剂能够优化所述抗癌疗法的效果并提高由所述抗癌疗法弱化的所述免疫细胞的能力。

22.权利要求14的方法，其中所述至少一种免疫增强剂能够诱导所述免疫细胞的至少一种免疫原决定簇。

23.权利要求14的方法，其中在抗癌治疗中的所述免疫细胞正经历抗癌治疗诱导的凋亡或坏死或其他细胞损伤。

24.权利要求14的方法，其中在抗癌治疗中的所述免疫细胞正经历抗癌治疗诱导的凋亡或坏死或其他细胞损伤，其中免疫营养组合物诱导肿瘤细胞的免疫原性。

25.权利要求14的方法，其中所述方法作为新辅助治疗的一部分。

26.权利要求25的方法，其中所述免疫营养组合物预防癌细胞在手术中和手术后的接种。

27.权利要求14的方法，其中在抗癌疗法的一个周期前10-3天内至积极治疗后约10-7天内对受试者施用所述免疫营养组合物。

28.权利要求27的方法，其中所述积极治疗为手术。

29.权利要求27的方法，其中所述积极治疗为激素治疗。

30.权利要求27的方法，其中所述积极治疗为放射疗法治疗。

31.权利要求27的方法，其中所述积极治疗为化学疗法治疗。

32.权利要求27的方法，其中所述免疫营养组合物预防癌细胞在手术中和手术后的接种。

33.权利要求14的方法，其中所述免疫营养组合物为管饲物。

34.权利要求14的方法，其中所述免疫营养组合物为凝胶。

35.权利要求14的方法，其中所述免疫营养组合物为完全营养的。

36.用于新辅助治疗的营养组合物，其包含权利要求1至权利要求13的任意一种组合物。

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