WO2018079701A1 - ラクトフェリン活性を有するタンパク質を含む、抗ガン治療補助剤 - Google Patents

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lactoferrin
protein
activity
anticancer
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竹内　崇
伸治 加賀谷
達雄 星野
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株式会社Ｎｒｌファーマ
国立大学法人鳥取大学
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the present invention relates to an anti-cancer comprising a protein having lactoferrin activity, which enhances the anti-cancer activity of the composition for use in combination with a platinum-based anti-cancer agent composition and reduces pain derived from the composition. It relates to treatment aids.
  • Lactoferrin is a glycoprotein having a molecular weight of about 80,000, which is present mainly in the milk of mammals and is also found in neutrophils, tears, saliva, nasal discharge, bile, semen and the like. Lactoferrin belongs to the transferrin family because it binds iron.
  • the physiological activities of lactoferrin include antibacterial action (Patent Document 1), iron metabolism regulation action, cell proliferation activation action, hematopoiesis action, anti-inflammatory action, antioxidant action, phagocytosis action, antiviral action, and bifidobacteria growth promotion.
  • An action Patent Document 2
  • an anticancer action an anticancer action, a cancer metastasis inhibitory action, a translocation inhibitory action and the like are known.
  • lactoferrin has a lipid metabolism improving action, an analgesic / anti-stress action, and an anti-aging action.
  • lactoferrin is a physiologically active protein having various functions, and is expected to be used for uses such as pharmaceuticals and foods for the maintenance, recovery or enhancement of health. It is already on the market.
  • Non-patent Document 1 when lactoferrin and its antibacterial peptide are added in vitro to a cancer cell line in vitro, the effect of each strain varies, but growth inhibition and induction of apoptosis have been reported (Non-patent Document 1). Similarly, in vivo using mice or the like, lactoferrin has been reported to have a therapeutic effect on lung cancer (Non-patent Document 2). On the other hand, in the colorectal cancer model, although there is no therapeutic effect on the primary lesion, there is a report that it has a metastasis-inhibiting ability. .
  • lactoferrin was also being studied for clinical development as an anticancer agent. Although it was developed as an oral solution for non-small cell lung cancer, side effects such as diarrhea caused by paclitaxel and carboplatin were attenuated by about 17% and overall survival was increased by about 122% in a phase 2 study. (Patent Document 4) Since the effect was not obtained in the single treatment test of the third phase test, the development was stopped thereafter (Non-Patent Document 5). Even in the case of using a cancer model animal, there is a known case where an effect by itself is not seen (Non-Patent Document 6).
  • Non-patent Document 7 Cancer pain causes include nerve factor pain, bone metastasis pain, gastrointestinal obstruction, and abdominal distension. About 80% of those pains can be controlled by appropriate dosing.
  • therapeutic agents non-opioids such as aspirin and opioids such as morphine are used.
  • nervous system pain including the periphery may occur due to anticancer agents during cancer treatment.
  • platinum preparations cause side effects such as hyperalgesia and allodynia (feeling pain that does not feel pain; feel pain when touching cold or cold objects such as water) as non-opioids.
  • side effects such as hyperalgesia and allodynia (feeling pain that does not feel pain; feel pain when touching cold or cold objects such as water) as non-opioids.
  • opioid drugs such as morphine.
  • opioid drugs may not work for such nerve factor pain, and development of therapeutic drugs is necessary.
  • lactoferrin As an injection to ensure the anti-cancer effect and cancer preparation pain of lactoferrin.
  • the anticancer effect is not effective with lactoferrin, and even with lactoferrin stabilized in blood, it can be remarkably improved by using a platinum preparation in combination with lactoferrin stabilized in blood, and the analgesic effect is also dramatically improved. It is expected to improve and clinical efficacy is expected to increase.
  • Lactoferrin has been reported to have a pain relieving effect on a neuropathic pain model caused by sciatic nerve strangulation (Non-patent Document 8).
  • Non-patent Document 8 a composition for treating neuropathic pain containing lactoferrin as an active ingredient is known (Patent Document 3).
  • the present invention relates to an anti-cancer comprising a protein having lactoferrin activity, which enhances the anti-cancer activity of the composition for use in combination with a platinum-based anti-cancer agent composition and reduces pain derived from the composition. It relates to treatment aids.
  • Anticancer agents include known types such as platinum-based preparations, alkylating agents, antimetabolites, hormone agents, molecular targeted drugs, and the like, and the treatment method is selected according to the type of cancer.
  • oxaloplatin Oxaliplatin (OXL)
  • OXL oxaloplatin
  • OXL platinum-based anticancer agent
  • side effects that frequently express acute and chronic peripheral neuropathy are known, (Excerpt from HIGHLIGHTS OF PRESCRIBING INFORMATION These highlights do not include all the information needed to use ELOXATIN safely and effectively.
  • a mouse lung cancer model using a mouse as a host was used to evaluate the anticancer activity by using a protein having lactoferrin activity in combination with a platinum-based anticancer agent composition. Compared to administration, it was found that the combined use with a platinum-based anticancer agent composition had stronger anticancer activity. Further, in the present invention, an oxaloplatin-induced neuropathic pain model mouse is prepared, the pain relief effect of the platinum-based preparation is verified, and as a result of intensive research, an anti-cancer treatment adjuvant containing a protein having lactoferrin activity is used. The present inventors have found that an agent for relieving the cold-like irritation-like pain characteristic of platinum-based anticancer agents is provided.
  • the present invention provides the following anticancer treatment adjuvant and method.
  • An anti-cancer treatment comprising a protein having lactoferrin activity for enhancing the anti-cancer activity of the composition and reducing pain derived from the composition for use in combination with a platinum-based anti-cancer agent composition Adjuvant.
  • the anti-cancer according to (1) or (2) above, wherein the pain derived from the platinum-based anticancer agent composition is pain caused by abnormal cold sensation that is an abnormal body temperature. Treatment adjuvant.
  • the cancer targeted by the anti-cancer treatment adjuvant is colon cancer, ovarian cancer, testicular cancer, cervical cancer, lung cancer, malignant lymphoma, breast cancer, bladder cancer, prostate cancer, esophageal cancer, stomach cancer, head and neck.
  • the platinum-based anticancer agent composition is at least one selected from the group consisting of cisplatin, oxaliplatin, carboplatin, and nedaplatin. Treatment adjuvant.
  • an anti-cancer comprising a protein having lactoferrin activity, which enhances the anti-cancer activity of the composition for use in combination with a platinum-based anti-cancer agent composition and reduces pain derived from the composition
  • a therapeutic adjuvant is provided.
  • action can be provided.
  • FIG. 3 is a graph showing the relationship between the expression level of TNF- ⁇ and TNF- ⁇ .
  • G1 vehicle control group
  • G2 cisplatin (5 mg / kg) group
  • G5 human lactoferrin-Fc binding protein (rhLF-Fc) (30 mg / kg) group
  • rhLF-Fc human lactoferrin-Fc fusion protein
  • G1 vehicle control group
  • G2 cisplatin (5 mg / kg) group
  • G5 human lactoferrin-Fc binding protein (rhLF-Fc) (30 mg / kg) group
  • IFN- ⁇ expression level It is a figure which shows the effect
  • OXL was administered (2 mg / kg, iv) after von Frey twice a week (Monday, Thursday).
  • the present invention relates to an anticancer treatment adjuvant containing a protein having lactoferrin activity.
  • Proteins with lactoferrin activity used in the present invention are natural lactoferrin (natural lactoferrin) obtained from humans and various animals (cow, horse, buyu, sheep, goat, camel, etc.), or these These may have the same amino acid sequence as natural lactoferrin, and some amino acids may be deleted, added or substituted as long as they have the desired activity.
  • the lactoferrin activity of the present invention means, for example, the iron chelate (binding) ability of natural lactoferrin.
  • the fusion protein of the present invention is at least 50% or more (for example, about 50% or more when the iron binding ability of natural lactoferrin is 100% as measured by the measurement method described in JP-A-2016-117717, for example. % To about 150% or about 50% to about 120%) iron binding capacity, and in preferred embodiments, the protein of the present invention comprises about 70% to about 100% or more of natural lactoferrin (eg, About 70% to about 150% or about 70% to about 120%), and further about 90% or more.
  • the iron binding capacity may have an error of about 2% soil, 5% soil, 10% soil, or 20% soil when measured by the method described in the examples or a method equivalent thereto.
  • the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 is 90% or more, 91% or more, 92% or more, 93% or more, 94% or more, 95% or more, 96% or more 97% or more, 98% or more, 99% or more, 99.1% or more, 99.2% or more, 99.3% or more, 99.4% or more, 99.5% or more, 99.6% or more, 99 A protein having an amino acid sequence having a sequence identity of 0.7% or more, 99.8% or more, or 99.9% or more.
  • the protein having lactoferrin activity is 10% or more, 20% or more, 30% or more, 40% or more, 50% or more, 60% or more, 70% or more, 80% or more of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, or What consists of arrangement
  • the lactoferrin activity means that having the iron chelating ability described above, that is, the important biological activity of lactoferrin based on at least the iron binding ability is retained.
  • the protein having lactoferrin activity of the present invention may be produced using a gene recombination technique. Furthermore, the protein having the lactoferrin activity of the present invention and a protein having another function can be fused to form a fusion protein.
  • the dose of the protein having lactoferrin activity of the present invention is appropriately selected depending on the degree of disease, administration route, patient age, sex, body weight, etc., for example, 0.1 to 1000 mg / kg / day, preferably Sequential administration, combined administration or simultaneous administration can be performed at a dose of 1 to 500 mg / kg / day, more preferably 10 to 100 mg / kg / day.
  • the protein having lactoferrin activity of the present invention is usually a pharmacologically acceptable carrier, excipient, diluent, extender, disintegrant, stabilizer, preservative, buffer, emulsifier, aroma known per se.
  • Tablets, pills, powders, granules, suppositories, injections, eye drops, liquids, capsules mixed with colorants, colorants, sweeteners, thickeners, flavoring agents, solubilizers, and other additives Preparations, troches, aerosols, suspensions, emulsions, syrups and the like and can be administered orally or parenterally.
  • the protein having lactoferrin activity of the present invention can be administered simultaneously or sequentially with a platinum-based anticancer agent, combined administration or simultaneous administration.
  • a protein having lactoferrin activity it can also be used as an anti-cancer treatment auxiliary composition.
  • the protein having lactoferrin activity of the present invention has antibacterial action, iron metabolism regulation action, cell proliferation activation action, hematopoiesis action, anti-inflammatory action, antioxidant action, phagocytosis action, antiviral action, bifidobacteria growth promotion action, It has a wide range of physiological activities including anti-cancer action, cancer metastasis prevention action, translocation prevention action, lipid metabolism improvement action, analgesic action, anti-stress action, etc. Many diseases or symptoms, including cholesterolemia, hyperlipidemia), neuropathic pain, collagen disease (dry eyes and dry mice with Sjogren's syndrome, rheumatoid arthritis, etc.), periodontal disease, hepatitis C, etc. Treatment (including improvement) and prevention.
  • Anticancer agents of the present invention include those effective for general cancers, such as adrenal cortex cancer, anal cancer, bile duct cancer, bladder cancer, breast cancer, cervical cancer, chronic lymphocytic leukemia, chronic bone marrow Sexual leukemia, colon cancer, endometrial cancer, esophageal cancer, Ewing cancer, gallbladder cancer, Hodgkin's disease, hypopharyngeal cancer, laryngeal cancer, oral cavity cancer, liver cancer, non-small cell lung cancer, non-Hodgkin lymphoma, melanoma, Compositions effective for cancers such as mesothelioma, multiple myeloma, ovarian cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, stomach cancer, testicular cancer, thyroid cancer are included.
  • general cancers such as adrenal cortex cancer, anal cancer, bile duct cancer, bladder cancer, breast cancer, cervical cancer, chronic lymphocytic leukemia, chronic bone marrow Sexual leukemia, colon cancer, endometrial cancer
  • the anticancer agent of the present invention is at least colon cancer, ovarian cancer, testicular cancer, cervical cancer, lung cancer, malignant lymphoma, breast cancer, bladder cancer, prostate cancer, esophageal cancer, stomach cancer, head and neck cancer, small cell lung cancer, non Agents suitable for the treatment of small cell lung cancer are included.
  • Platinum-based anti-cancer agent composition used in combination with the anti-cancer treatment adjuvant of the present invention includes alkylating agents, platinum-based anti-cancer agents, antimetabolites, anti-cancer antibiotics, and anti-cancer properties. Examples include plant alkaloids.
  • the platinum-based anticancer agent composition is an anticancer agent comprising a platinum complex, and covalently bonds to DNA to crosslink the strand, thereby inhibiting DNA synthesis or inhibiting transcription.
  • Cisplatin, oxaliplatin, carboplatin, nedaplatin, etc. can be used as the platinum anticancer agent composition.
  • the platinum-based anticancer agent composition is oxaliplatin.
  • the platinum-based anticancer agent composition is administered sequentially, in combination, or simultaneously with other anticancer agents such as paclitaxel. In one embodiment, the platinum-based anticancer agent composition can be administered sequentially, in combination, or simultaneously with irinotecan and / or fluorouracil.
  • anticancer treatment adjuvant refers to stabilizing, enhancing or sustaining the action of a sequential administration, combined administration, or coadministered anticancer agent, and / or the anticancer agent. Means one or more agents that act to reduce, eliminate or alleviate side effects, particularly pain.
  • Pain derived from anticancer agent composition includes pain such as tingling and burning pain, numbness of the extremities of the extremities, abnormal perception such as burning sensation, abnormal body temperature Examples include pain due to a certain cold sensation abnormality, sensory abnormalities such as loss of sensation / paresis and discomfort, sensory ataxia, muscle weakness, etc. (WO2012 / 105476).
  • Pain derived from the platinum-based anticancer agent composition includes sensory abnormalities or sensory insufficiency around the hands, feet, and lips (pain associated with peripheral nerves, pain caused by abnormal cold sensation such as abnormal body temperature, etc.) Among these, pain caused by abnormal cold sensation is characterized by the difficulty of opioid analgesics.
  • the protein having lactoferrin activity not only relieves neuropathic pain, Pain caused by an abnormal cooling sensation, which is an abnormal body temperature caused by a platinum-based anticancer agent, is reduced.
  • Anti-cancer activity is based on indices such as the increase or decrease of the volume or weight of transplanted solid cancer cells using the cancer cell transplantation model or the genetic model, or the growth rate or the rate of apoptosis. Can be measured.
  • “enhance anticancer activity” means that when a protein having lactoferrin activity and a platinum-based anticancer agent are administered under the conditions of a cancer transplantation model, the volume of solid cancer cells is greater than that of a control or control agent. Means suppressed and decreased.
  • Pain Reduction The pain reduction of the present invention is described in Von-Frey test (Dun Linglu. Li Yuxiang. Xu Yaqiong. Zhou Ru. Ma Lin. Jin Shaoju. Du Juan. Sun Tao. Yu Jianqiang, Neurol Sci (2014) 35: 815-82) and Cold plate test (un Linglu. Li Yuxiang. Xu Yaqiong. Zhou Ru. Ma Lin. Jin Shaoju. Du Juan. Sun Tao. Yu Jianqiang, Neurol Sci (2014) 35: 815-821) Can be measured.
  • “enhancing the anti-pain effect” means that the suppression of pain and analgesic effect caused by the platinum-based anticancer agent was sustained by the administration of a protein having lactoferrin activity under the conditions of administration of the platinum-based anticancer agent. To do.
  • FIG. 1 shows the results of Von-Frey test that evaluated the preventive effect of hLf against oxaliplatin-induced neuropathic pain. Filaments with different thicknesses were pressed against the foot pads on the mouse limbs, and the 50% reaction threshold was measured.
  • hLf 100 mg / kg, ip was administered, and oxaliplatin 10 mg / kg, ip (administered only once) was performed 2 hours later.
  • P ⁇ 0.05 vs. OXL + saline.
  • Example 2 the result of the Cold plate test performed on the same conditions as Example 1 is shown in FIG.
  • the mouse was placed on an 8 ° C. plate, and a 5-minute pain response (lifting the hind limbs, licking the hind limbs, bringing the face closer to the hind limbs) was measured and determined. From the results of Examples 1 and 2, it is shown that pain derived from abnormalities of mechanical and cold stimulation caused by oxaliplatin is alleviated by lactoferrin.
  • TGI (1-T / C) ⁇ 100% formula, where T is the average cancer growth rate% of the treatment group and C is the control group The average cancer growth rate was calculated.
  • the change in cancer growth rate during the experiment is shown in the graph of FIG. As shown in FIG. 4, in the observation on the 12th day after cancer transplantation, when rhLF-Fc was administered at 10 mg / kg, the TGI was 33.5% (P value relative to the control group: 0.01). . On the other hand, no significant anticancer activity was observed for rhLF.
  • Anti-cancer activity evaluation test using rhLF-Fc and cisplatin in combination with mouse lung cancer Using 7 to 8 week-old C57BL / 6 mice (body weight 17 to 21 g), the effect on mouse lung cancer, Lewis lung cancer, was evaluated. -Evaluated in combination with Fc alone, cisplatin alone, rhLF-Fc and cisplatin in combination. Logarithmically growing Lewis lung cancer cells (3 ⁇ 10 5 ) were implanted subcutaneously in the lower right flank of mice. Treatment was started from the time when the size of the cancer reached about 84 mm 3 (5 days after the transplantation). The outline of the experiment is shown below. Eight mice were used per group.
  • TGI cancer growth inhibition rate
  • rhLF-Fc 10 mg / kg + cisplatin 5 mg / kg group, TGI 38.6% (P value 0.03 compared to control group), rhLF-F 30 mg / kg + cisplatin 5 mg / kg group, TGI 41.8 % (P value relative to the control group: 0.015).
  • This experiment was a homologous experiment in which a mouse cancer was transplanted into a mouse, and the enhancement of the host's immune activity due to the increase in IL-2 and IFN- ⁇ levels of the host by rhLF-Fc appeared as an anti-cancer activity. Can think.
  • FIG. 1 After the Pre measurement, measurement of Von-Frey test was performed (1st day), and oxaliplatin 2 mg / kg iv (administered twice a week, Monday (4th day) and Thursday (7th day)) Administration of rhLf-Fc 100 mg / kg or saline ip on the first day after the fourth administration (every Friday (day 15 in FIG. 9) (day 22 in FIG. 9) (day 29 in FIG.
  • the protein having lactoferrin activity of the present invention is useful for reducing pain by a platinum-based anticancer agent composition for use in combination with a platinum-based anticancer agent, and further increasing the anticancer activity, preventing or treating a disease. Provide the agent.

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Abstract

本発明は、白金系抗ガン剤組成物と併用するための、該組成物の抗ガン活性を増強し、また該組成物に由来する疼痛を低減する、ラクトフェリン活性を有するタンパク質を含む、抗ガン治療補助剤に関する。本発明のラクトフェリン活性を有するタンパク質は、白金系抗ガン剤と併用するための、白金系抗ガン剤組成物による疼痛の軽減に有用であり、さらに抗ガン活性を増加させる、疾患の予防又は治療剤を提供する。

Description

ラクトフェリン活性を有するタンパク質を含む、抗ガン治療補助剤
　本発明は、白金系抗ガン剤組成物と併用するための、該組成物の抗ガン活性を増強し、また該組成物に由来する疼痛を低減する、ラクトフェリン活性を有するタンパク質を含む、抗ガン治療補助剤に関する。
　ラクトフェリンは、主に哺乳類動物の乳汁中に存在し、好中球、涙、唾液、鼻汁、胆汁、精液などにも見出されている、分子量約８０，０００の糖タンパク質である。ラクトフェリンは、鉄を結合することから、トランスフェリンファミリーに属する。ラクトフェリンの生理活性としては、抗菌作用（特許文献１）、鉄代謝調節作用、細胞増殖活性化作用、造血作用、抗炎症作用、抗酸化作用、食作用亢進作用、抗ウイルス作用、ビフィズス菌生育促進作用（特許文献２）、抗ガン作用、ガン転移阻止作用、トランスロケーション阻止作用などが知られている。さらに、ラクトフェリンが脂質代謝改善作用、鎮痛・抗ストレス作用、アンチエイジング作用を有することも明らかにされている。このように、ラクトフェリンは、多様な機能を示す生理活性タンパク質であり、健康の維持、回復又は増進のため、医薬品や食品などの用途に使用されることが期待されており、ラクトフェリンを含む食品は既に市販されている。
　また、ラクトフェリンはＩｎ　ｖｉｔｒｏにおいてラクトフェリンやその抗菌ペプチドをガン培養細胞株に添加すると、株により効果は異なるが、増殖抑制やアポトーシスの誘導が報告されている（非特許文献１）。マウス等を用いたｉｎ　ｖｉｖｏにおいても同様に、肺ガンに対してラクトフェリンは治療効果が報告されている（非特許文献２）。一方、大腸ガンモデルにおいては、原発巣への治療効果は見られないものの、転移抑制能があるとの報告もあり、ガン種によっては、その治療効果は異なると考えられる（非特許文献３）。
　この他、ラクトフェリンは抗ガン剤としての臨床開発研究もおこなわれていた。非小細胞性肺ガンに対し、経口溶液製剤として開発が行われ、第２相試験ではパクリタキセルとカルボプラチンによる下痢などの副作用を１７％程度弱め、全生存期間を１２２％程度延ばしたが、（非特許文献４）第３相試験の単独治療試験で、効果が得られなかったことから、その後開発は中止されている（非特許文献５）。ガンモデル動物を用いた場合においても、同様に単独での効果が見られない場合が知られている（非特許文献６）。
　ラクトフェリン経口製剤のガン治療のメカニズムとしては、腸管吸収の際に生じる樹状細胞、ＮＫ細胞の活性化が報告されている。樹状細胞の活性化はナイーブＴ細胞からエフェクターＴ細胞への分化を促進させる。現在、ガン免疫療法としてエフェクターＴ細胞の活性化に関わるＰＤ―１やＣＴＬ４を標的とした抗体医薬が開発・製造されているが、奏効率に対して薬価が非常に高く、甲状腺機能異常、下痢、倦怠感、発熱、肝機能異常、間質性肺疾患、発疹等といった副作用も多く、それらに取って代われる治療薬の開発が求められている。
　また、ガン治療において、疼痛は患者のＱＯＬを著しく損なう。通常の治療以外にガン発生初期からモルヒネを少量投与する緩和療法を行うと、全生存期間が延長する報告もあり（非特許文献７）、疼痛を制御することも、ガン治療において重要であると考えられる。ガンの疼痛原因は、神経因子疼痛、骨転移疼痛、消化管閉塞、腹部膨満等がある。それらの疼痛の約８０％は、適切な投薬により制御できる。治療薬として、アスピリン等の非オピオイド系、モルヒネ等のオピオイド系が利用されている。また、ガン治療時にも抗ガン剤による、末梢も含めた神経系疼痛が生じることがある。
　特に白金製剤は投薬を行うと半数以上が副作用として痛覚過敏やアロディニア（疼痛とは感じない刺激を痛みと感じること。水等の低温又は冷たい物に触ると痛みを感じる）を生じ、非オピオイド系や、症状の悪化により、モルヒネの様な強オピオイド薬の服用を必要とされる。しかし、この様な神経因子疼痛はオピオイド系薬剤が効かない場合もあり、治療薬の開発は必要である。
　本発明では、ラクトフェリンの抗ガン効果とガン製剤疼痛を確実にするために、ラクトフェリンを注射剤として開発することに着目した。また、抗ガン効果は、ラクトフェリンでは効果が無く、血中安定化させたラクトフェリンでも低いが、白金製剤と血中安定化させたラクトフェリンを併用することで著しく改善ができ、鎮痛効果も劇的に改善することが見られ、臨床的有効性が高まると期待される。
　ラクトフェリンは、坐骨神経絞扼による神経障害性疼痛モデルに対して疼痛緩和効果を有することが報告されている(非特許文献８)。また、ラクトフェリンを有効成分とする神経因性疼痛治療用組成物が公知である（特許文献３）。
特開２０１３－０７５９２７ 特開１９９６－４７３７０ 特開２００５－２６３７６２
Yuichi Yamada et al, J. Vet. Med. Sci. 70: 443-448, 2008, Jamie S. Mader et al, Mol Cancer Ther 4 612-624 2005 Varadhachary A, Wolf JS, Petrak K, O’Malley BW Jr, Spadaro M, Curcio C, Forni G, Pericle F., Int J Cancer. 2004 Sep 1; 111(3):398-403. Masaaki Iigo, et al. Clinical & Experimental Metastasis 17: 35-40, 1999 Parikh PM. et al. J Clin Oncol. 29: 4129-36, 2011 Ramalingam S, Crawford J, Chang A, Manegold C, Perez-Soler R, Douillard JY, Thatcher N, Barlesi F,  Owonikoko T, Wang Y, Pultar P, Zhu J, Malik R, Giaccone G; FORTIS-M Study Investigators. Ann Oncol. 2013 Nov; 24(11):2875-80 Arcella A, Oliva MA, Staffieri S, Aalberti S, Grillea G, Madonna M, Bartolo M, Pavone L, Giangaspero F, Cantore G, Frati A.J Neurosurg. 2015 Oct; 123(4): 1026-35 Temel js.et al. N Engl J Med. 363: 733-42, 2010 Onal A. et al., Life Sci. 2010 Feb 13; 86(7-8): 251-9. 2010
　本発明は、白金系抗ガン剤組成物と併用するための、該組成物の抗ガン活性を増強し、また該組成物に由来する疼痛を低減する、ラクトフェリン活性を有するタンパク質を含む、抗ガン治療補助剤に関するものである。
　抗ガン剤には、白金系製剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、ホルモン剤、分子標的薬などの種類が知られており、ガンの種類に応じて治療方法が選択される。これらのうち、白金系抗ガン剤であるオキサロプラチン（Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ（ＯＸＬ））は大腸ガン治療のキードラッグであるが、急性および慢性の末梢神経障害を高頻度で発現する副作用が知られており、（HIGHLIGHTS OF PRESCRIBING INFORMATION These highlights do not include all the information needed to use ELOXATIN safely and effectively. See full prescribing information for ELOXATIN_FDAより抜粋＿http://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2009/021492s011,021759s009lbl.pdf）、この好ましくない副作用の程度によっては、投薬の減量、休薬、中止等の処置を余儀なくされる場合がある（非特許文献：エルプラット（登録商標）点滴静注液　医薬品添付文書）。特にオキサロプラチンの投与により特異的に引き起こされる痛覚過敏や末梢神経障害といった副作用があり、また、既存の末梢神経障害に対する疼痛低減剤であっても症状が緩和しないケースも見られる（趙 萌　京都大学学術情報リポジトリ　2014/3/14）。そのため、白金系抗ガン剤に特有の冷感刺激様の末梢神経障害を緩和する剤の開発が望まれていた。
　本発明では、マウスを宿主としたマウス肺ガンのモデルを用いて、ラクトフェリン活性を有するタンパク質と白金系抗ガン剤組成物と併用することによる抗ガン活性を評価したところ、ラクトフェリン活性を有するタンパク質単独投与に比べて、白金系抗ガン剤組成物と併用したほうがより強い抗ガン活性があることが認めた。また、本発明では、オキサロプラチン誘発性神経障害性疼痛モデルマウスを作製し、白金系製剤による疼痛緩和効果の検証を行い、鋭意研究の結果、ラクトフェリン活性を有するタンパク質を含む抗ガン治療補助剤により、白金系抗ガン剤に特有の冷感刺激様の疼痛を緩和する剤が提供されることを見いだした。
　即ち、本発明は、以下の抗ガン治療補助剤および方法を提供する。
（１）　白金系抗ガン剤組成物と併用するための、該組成物の抗ガン活性を増強し、また該組成物に由来する疼痛を低減する、ラクトフェリン活性を有するタンパク質を含む、抗ガン治療補助剤。
（２）　前記ラクトフェリン活性を有するタンパク質が、天然型ラクトフェリン、遺伝子組換え型ラクトフェリン、遺伝子組換え型ラクトフェリン融合タンパク質であることを特徴とする、上記（１）に記載の抗ガン治療補助剤。
（３）　前記白金系抗ガン剤組成物に由来する疼痛が、体感温度異常である冷感刺激異常に起因する疼痛であることを特徴とする上記（１）または（２）に記載の抗ガン治療補助剤。
（４）　前記ラクトフェリン活性を有するタンパク質が０．１～１，０００ｍｇ／ｋｇ／日、１～５００ｍｇ/ｋｇ/日、または１０～１００ｍｇ/ｋｇ/日の投与量で投与される、上記（１）～（３）のいずれかに記載の抗ガン治療補助剤。
（５）　前記白金系抗ガン剤組成物と前記ラクトフェリン活性を有するタンパク質が、逐次投与、併用投与、または同時投与されることを特徴とする、上記（１）～（４）のいずれかに記載の抗ガン治療補助剤。
（６）　前記ラクトフェリン活性を有するタンパク質が経口または非経口で投与されることを特徴とする、上記（１）～（５）のいずれかに記載の抗ガン治療補助剤。
（７）　前記抗ガン治療補助剤が対象とするガンが、大腸ガン、卵巣ガン、精巣ガン、子宮頸ガン、肺ガン、悪性リンパ腫、乳癌、膀胱ガン、前立腺ガン、食道ガン、胃ガン、頭頸部ガン、小細胞肺ガン、非小細胞肺ガンからなる群から選択される１つである、上記（１）～（６）のいずれかに記載の抗ガン治療補助剤。
（８）　前記白金系抗ガン剤組成物が、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ネダプラチンからなる群から選択される少なくとも１つである、上記（１）～（７）のいずれかに記載の抗ガン治療補助剤。
（９）　前記ラクトフェリン活性を有するタンパク質が、オキサリプラチンによる疼痛を緩和することを特徴とする、上記（１）～（８）に記載の抗ガン治療補助剤。
（１０）　上記（１）～（９）のいずれかに記載の剤を含む、抗ガン治療補助組成物。
　本発明により、白金系抗ガン剤組成物と併用するための、該組成物の抗ガン活性を増強し、また該組成物に由来する疼痛を低減する、ラクトフェリン活性を有するタンパク質を含む、抗ガン治療補助剤が提供される。また、本発明では、抗ガン作用の向上と同時に、白金系抗ガン剤の投与量を抑える効果のある剤を提供できることが示される。
オキサリプラチン誘発性神経障害性疼痛に対するヒトラクトフェリン（ｈＬｆ）の予防効果を示す、Ｖｏｎ－Ｆｒｅｙ　ｔｅｓｔの結果である。 オキサリプラチン誘発性神経障害性疼痛に対するｈＬｆの予防効果を示す、Ｃｏｌｄ　ｐｌａｔｅ　ｔｅｓｔの結果である。 オキサリプラチン誘発性神経障害性疼痛に対するｈＬｆの改善効果を示す図である。 ガン移植後のガン成長にラクトフェリンが与える影響を示す図である。 ガン移植後のガン成長にラクトフェリンとシスプラチンの合剤が与える影響を示す図である。 Ｇ１：ビークルコントロール群、Ｇ２：シスプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）群、Ｇ５：ヒトラクトフェリン－Ｆｃ結合タンパク質（ｒｈＬＦ－Fc）（３０ｍｇ／ｋｇ）群、ヒトラクトフェリン－Ｆｃ融合タンパク質（ｒｈＬＦ－Fc）＋シスプラチン群とＴＮＦ－α発現量の関係を示す図である。 Ｇ１：ビークルコントロール群、Ｇ２：シスプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）群、Ｇ５：ヒトラクトフェリン－Ｆｃ結合タンパク質（ｒｈＬＦ－Fc）（３０ｍｇ／ｋｇ）群、ヒトラクトフェリン－Ｆｃ融合タンパク質（ｒｈＬＦ－Fc）＋シスプラチン群とＩＬ－２発現量の関係を示す図である。 Ｇ１：ビークルコントロール群、Ｇ２：シスプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）群、Ｇ５：ヒトラクトフェリン－Ｆｃ結合タンパク質（ｒｈＬＦ－Fc）（３０ｍｇ／ｋｇ）群、ヒトラクトフェリン－Ｆｃ融合タンパク質（ｒｈＬＦ－Fc）＋シスプラチン群とＩＦＮ－γ発現量の関係を示す図である。 オキサリプラチン（ＯＸＬ）誘発性神経障害性疼痛に対するＬｆの作用を示す図である。ＯＸＬは週２回（月曜、木曜）のｖｏｎ－Ｆｒｅｙ後に投与（２　ｍｇ／ｋｇ，　ｉｖ）　した。ＰＢＳ，　ｒｈＬｆ－Ｆｃは金曜日のｖｏｎ－Ｆｒｅｙ後に投与（１００ｍｇ／ｋｇ，　ｉｐ）とし、１５日目を初回投与とした。図中の▲、●、■はそれぞれグラフ横軸に示す日付におおいて行われたｖｏｎ－Ｆｒｅｙ測定の結果を示す。

　以下、本発明を詳細に説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をこの実施の形態のみに限定する趣旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、様々な形態で実施をすることができる。　なお、本明細書において引用した全ての文献、および公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。また、本明細書は、２０１６年１０月２８日に出願された本願優先権主張の基礎となる日本国特許出願（特願２０１６－２１２０７６号）の明細書及び図面に記載の内容を包含する。
　本発明は、ラクトフェリン活性を有するタンパク質を含む抗ガン治療補助剤に関する。
　ラクトフェリン活性を有するタンパク質
　本発明で用いるラクトフェリン活性を有するタンパク質は、ヒト及び種々の動物（ウシ、ウマ、ブ夕、ヒツジ、ヤギ、ラクダ等）から得られる天然のラクトフェリン（天然型ラクトフェリン）、またはこれらの天然のラクトフェリンと同一のアミノ酸配列を有するものでもよいし、目的とする活性を有する限りにおいて、一部のアミノ酸が欠失、付加、置換していてもよい。
　ここで本発明のラクトフェリン活性とは、例えば天然ラクトフェリンが有する鉄キレート（結合）能を意味する。具体的には、例えば特開２０１６－１１７７１７に記載の測定法で測定した、天然ラクトフェリンの鉄結合能を１００％とした場合に、本発明の融合タンパク質等は、少なくとも５０％以上（例えば約５０％～約１５０％又は約５０％～約１２０％）の鉄結合能を保持しており、好ましい態様においては、本発明のタンパク質は、天然ラクトフェリンの約７０％～約１００％又はそれ以上（例えば約７０％～約１５０％又は約７０％～約１２０％）、さらには約９０％以上に相当する鉄結合能を有する。なお、鉄結合能は、実施例に記載した方法又はそれと同等の方法によって測定する場合、土２％、土５％、土１０％、または、土２０％程度の誤差がありうる。
　ラクトフェリン活性を有するペプチドは、種々のものが公知であり（例えば、「プログラム・抄録集第２回臨床ラクトフェリンシンポジウム２００９」、２１～２７頁（島崎敬一））等を参照し、必要に応じて設計することができる。変異（欠失、付加、置換）を有するラクトフェリンを用いる場合、配列番号１のアミノ酸配列と９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、９９．１％以上、９９．２％以上、９９．３％以上、９９．４％以上、９９．５％以上、９９．６％以上、９９．７％以上、９９．８％以上、または９９．９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質が挙げられる。上記配列同一性の数値は一般的に大きい程好ましい。また、ラクトフェリン活性を有するタンパク質としては、配列番号１のアミノ酸配列の１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、または９０％以上を占める配列からなるものを用いることができる。ラクトフェリン活性とは、先に述べた鉄キレート能を有するもの、つまり、少なくとも鉄結合能に基づくラクトフェリンの重要な生物活性が保持されていることを意味する。
　本願発明のラクトフェリン活性を有するタンパク質は遺伝子組み換え技術を用いて作製してもよい。さらに、本発明のラクトフェリン活性を有するタンパク質と他の機能を有するタンパク質を融合し、融合タンパク質とすることもできる。
　本発明のラクトフェリン活性を有するタンパク質の投与量は、疾患の程度、投与経路、患者の年齢、性別、体重などにより適宜選択されるが、例えば、０．１～１０００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは、１～５００ｍｇ/ｋｇ/日、より好ましくは１０～１００ｍｇ/ｋｇ/日の投与量で逐次投与、併用投与または、同時投与することができる。
　本発明のラクトフェリン活性を有するタンパク質は、通常、それ自体公知の薬理学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤、増量剤、崩壊剤、安定剤、保存剤、緩衝材、乳化剤、芳香剤、着色剤、甘味料、粘ちょう剤、矯味剤、溶解補助剤、その他の添加剤などと混合して錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、座剤、注射剤、点眼剤、液剤、カプセル剤、トローチ剤、エアゾール剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤などの形態にし、経口的または非経口的に投与することができる。本発明のラクトフェリン活性を有するタンパク質は白金系抗ガン剤と同時または逐次投与、併用投与または、同時投与することができる。また、ラクトフェリン活性を有するタンパク質を同時投与を目的として、抗ガン治療補助組成物とすることもできる。
　本発明のラクトフェリン活性を有するタンパク質は、抗菌作用、鉄代謝調節作用、細胞増殖活性化作用、造血作用、抗炎症作用、抗酸化作用、食作用亢進作用、抗ウイルス作用、ビフィズス菌生育促進作用、抗ガン作用、ガン転移阻止作用、トランスロケーション阻止作用、脂質代謝改善作用、鎮痛作用、抗ストレス作用などを含む広範な生理活性を有しており、これらの作用によって、生活習慣病（例えば、高コレステロール血症、高脂血症など）、神経因性疼痛、膠原病（シェーグレン症候群によるドライアイ及びドライマウス、リウマチ性関節炎など）、歯周病、Ｃ型肝炎などを含む、多くの疾患又は症状の治療（改善を含む）及び予防が可能である。
　抗ガン剤
　本発明の抗ガン剤は、一般的なガンに有効なものが含まれ、副腎皮質ガン、肛門ガン、胆管ガン、膀胱ガン、乳ガン、子宮頚ガン、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、大腸ガン、子宮内膜ガン、食道ガン、ユーイングガン、胆嚢ガン、ホジキン病、下咽頭ガン、喉頭ガン、口唇口腔ガン、肝臓ガン、非小細胞肺ガン、非ホジキンリンパ腫、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、卵巣ガン、膵臓ガン、前立腺ガン、胃ガン、睾丸ガン、甲状腺ガン等のガンに有効な組成物が含まれる。本発明の制ガン剤は少なくとも、大腸ガン、卵巣ガン、精巣ガン、子宮頸ガン、肺ガン、悪性リンパ腫、乳ガン、膀胱ガン、前立腺ガン、食道ガン、胃ガン、頭頸部ガン、小細胞肺ガン、非小細胞肺ガンの治療に好適な薬剤が含まれる。
　白金系抗ガン剤組成物
　本発明の抗ガン治療補助剤に併用される抗ガン剤組成物としては、アルキル化剤、白金系抗ガン剤、代謝拮抗剤、抗ガン性抗生物質、抗ガン性植物アルカロイド等が挙げられる。これらのうち、白金系抗ガン剤組成物は、白金の錯体からなる抗ガン剤であり、ＤＮＡと共有結合して鎖を架橋させ、ＤＮＡ合成を阻害し、または転写を阻害するものである。白金系抗ガン剤組成物としては、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン等を用いることができる。一実施形態において、白金系抗ガン剤組成物はオキサリプラチンである。一実施形態として、白金系抗ガン剤組成物は、パクリタキセル等の他の抗ガン剤と、逐次投与、併用投与または同時投与をする。また一実施形態において、白金系抗ガン剤組成物は、イリノテカンおよび／またはフルオロウラシルと逐次投与、併用投与または同時投与をすることができる。
　治療補助剤
　本明細書における「抗ガン治療補助剤」とは、逐次投与、併用投与、または同時投与された抗ガン剤の作用を安定化、増強または持続させるか、および／あるいは前記抗ガン剤の副作用、特に疼痛を減少、消滅または軽減する作用を呈する１つ又はそれ以上の剤を意味する。
　抗ガン剤組成物に由来する疼痛
　抗ガン剤組成物に由来する末梢神経障害としては、刺痛や焼けるような痛み等の疼痛、四肢末端のしびれ、灼熱感等の知覚異常、体感温度異常である冷感刺激異常に起因する疼痛、感覚消失・感覚麻痺や違和感等の感覚異常、知覚性運動失調、筋力の低下等が挙げられる（WO2012/105476）。
白金系抗ガン剤組成物に由来する疼痛としては、手、足や口唇周囲部の感覚異常又は知覚不全（末梢神経に伴う疼痛、体感温度異常である冷感刺激異常に起因する疼痛等が知られており、これらのうち冷感刺激異常に起因する疼痛は、オピオイド系鎮痛剤が効きにくいという特徴が有る。本発明において、ラクトフェリン活性を有するタンパク質は、神経因性疼痛の緩和のみならず、少なくとも白金系抗ガン剤により生じる体感温度異常である冷感刺激異常に起因する疼痛を低減する。
　抗ガン活性
　本発明の抗ガン活性は、ガン細胞移植モデルであるＸｅｎｏｇｒａｆｔモデル、Ｓｙｎｇｅｎｉｃモデルを用いた移植固形ガン細胞の体積や重量の増減、または増殖率、アポトーシスの割合などの指標をもとに測定することができる。本発明において「抗ガン活性を増強する」とは、ガン移植モデルの条件で、ラクトフェリン活性を有するタンパク質と白金系抗ガン剤を投与した際に、固形ガン細胞体積がコントロール又は、対照薬より体積が抑制、減少したことを意味する。
　疼痛の低減
　本発明の疼痛の低減は、Ｖｏｎ－Ｆｒｅｙ　ｔｅｓｔ（Dun Linglu . Li Yuxiang . Xu Yaqiong . Zhou Ru . Ma Lin . Jin Shaoju . Du Juan .　Sun Tao . Yu Jianqiang, Neurol Sci (2014) 35:815-82）およびＣｏｌｄ　ｐｌａｔｅ　ｔｅｓｔ（un Linglu . Li Yuxiang . Xu Yaqiong . Zhou Ru . Ma Lin . Jin Shaoju . Du Juan .　Sun Tao . Yu Jianqiang, Neurol Sci (2014) 35:815-821）などの手法で測定することができる。本発明において「抗疼痛効果を増強する」とは、白金系抗がん剤投与の条件で、ラクトフェリン活性を有するタンパク質の投与により白金系抗ガン剤により生じる疼痛抑制や鎮痛効果持続したことを意味する。
　オキサリプラチン誘発性神経障害性疼痛に対するヒトラクトフェリン（ｈＬｆ）の予防効果
　オキサリプラチン誘発性神経障害性疼痛に対するｈＬｆの予防効果を評価した、Ｖｏｎ－Ｆｒｅｙ　ｔｅｓｔの結果を図１に示す。マウスの肢に太さの異なるフィラメントをフットパットに押し当て、５０％反応閾値を計測した。ここで、Ｐｒｅ　測定の後、ｈＬｆ　１００　ｍｇ／ｋｇ，　ｉｐ投与し、その２時間後にオキサリプラチン１０　ｍｇ／ｋｇ，　ｉｐ（１回のみ投与）を行った。　＊Ｐ＜０．０５　ｖｓ．　ＯＸＬ＋ｓａｌｉｎｅである。
　また、実施例１と同じ条件で行ったＣｏｌｄ　ｐｌａｔｅ　ｔｅｓｔの結果を図２に示す。
マウスを８℃のプレートに乗せ、５分間の疼痛反応（後肢の挙上、後肢をなめる、後肢に顔を近づける）を計測して判定した。実施例１および２の結果から、オキサリプラチンによって生じる、機械的・冷感刺激異常に由来する疼痛がラクトフェリンにより緩和されていることが示される。
　オキサリプラチン誘発性神経障害性疼痛に対するｈＬｆの治療効果
　オキサリプラチン誘発性神経障害性疼痛に対するｈＬｆの治療効果を評価した。Ｖｏｎ－Ｆｒｅｙ　ｔｅｓｔの結果を図３に示す。ここで、Ｐｒｅ測定の後、オキサリプラチン１０ｍｇ／ｋｇ　ｉｐ（１回のみ投与）を行い、その５日後に，ｈＬｆ　１００ｍｇ／ｋｇ，または生理食塩水のｉｐ投与を行い、３０分後にＶｏｎ－Ｆｒｅｙ　ｔｅｓｔを行った。　＊＊Ｐ＜０．０１　ｖｓ．　ＯＸＬ＋ｓａｌｉｎｅである。予防効果等同様に機械的刺激異常に対する疼痛をラクトフェリンが緩和することが示された。
　マウス肺ガンに対するラクトフェリン類の活性評価試験
　６～８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（体重　１８～２２ｇ）を用いて、マウスのガンであるルイス肺ガンに対する効果を、ヒト組換えラクトフェリン（以下ｒｈＬＦと記載）およびヒト組換えラクトフェリンとヒトＩｇＧのＦｃ領域との融合体（以下ｒｈＬＦ－Ｆｃと記載）について評価した。
　対数増殖期のルイス肺ガン細胞（３ｘ１０５個）を、マウスの右下方脇腹の皮下に移植した。ガンのサイズが約７６ｍｍ３になった時点（ガン移植後５日目）から治療を開始した。実験の概要を以下に示した。グループあたり１０匹のマウスを用いた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　薬剤は、リン酸バッファー（ｐＨ７）に溶解し、１０ｍｌ／ｋｇの用量で投与した。ガンの大きさは、週２回長径と短径を測定し計算で求めた。抗ガン効果については、ガン増殖阻害率（ＴＧＩと表す）を、ＴＧＩ＝（１‐Ｔ／Ｃ）ｘ　１００％式、（Ｔは治療グループの平均ガン増殖率％であり、Ｃは対照グループの平均ガン増殖率％）で計算して求めた。実験中のガン増殖率の変化を図４のグラフに示した。図４に示したように、ガン移植後１２日目の観察において、ｒｈＬＦ－Ｆｃは１０　ｍｇ／ｋｇ投与した時、ＴＧＩは３３．５％であった（対照グループに対するＰ値：０．０１）。一方、ｒｈＬＦについては、有意な抗ガン活性は認められなかった。
　マウス肺ガンに対するｒｈＬＦ－Ｆｃとシスプラチンの併用による抗ガン活性評価試験
　７～８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（体重　１７～２１ｇ）を用いて、マウスのガンであるルイス肺ガンに対する効果を、ｒｈＬＦ－Ｆｃ単独、シスプラチン単独、ｒｈＬＦ－Ｆｃおよびシスプラチンとの併用の組み合わせで評価した。
　対数増殖期のルイス肺ガン細胞（３　ｘ　１０５個）を、マウスの右下方脇腹の皮下に移植した。ガンのサイズが約８４ｍｍ３になった時点（ガン移植後５日目）から治療を開始した。実験の概要を以下に示した。グループあたり８匹のマウスを用いた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　薬剤は、リン酸バッファー（ｐＨ７）に溶解し、１０ｍｌ／ｋｇの用量で投与した。ガンの大きさは、週２回長径と短径を測定し計算で求めた。抗ガン効果については、ガン増殖阻害率（ＴＧＩと表す）を、ＴＧＩ＝（１‐Ｔ／Ｃ）ｘ１００％式、（Ｔは治療グループの平均ガン増殖率％であり、Ｃは対照グループの平均ガン増殖率％）で計算して求めた。実験中のガン増殖率の変化を図５のグラフに示した。図５に示すように、薬剤投与開始後１４日目（実験開始後１９日目）で判定した場合、ｒｈＬＦ－Ｆｃ単独およびシスプラチン単独グループでは有意な抗ガン活性を示さなかった。一方、ｒｈＬＦ－Ｆｃおよびシスプラチンとの併用グループでは、有意な抗ガン活性を認めた。ｒｈＬＦ－Ｆｃ　１０ｍｇ／ｋｇ＋シスプラチン　５ｍｇ／ｋｇグループで、ＴＧＩが３８．６％（対照グループに対するＰ値：０．０３）で、ｒｈＬＦ－Ｆ　３０ｍｇ／ｋｇ＋シスプラチン５ｍｇ／ｋｇグループで，ＴＧＩが４１．８％（対照グループに対するＰ値：０．０１５）であった。
　血中サイトカインの測定
　実施例２の実験終了時に、グループ１（Ｇ１：ビークルコントロール）、グループ２（Ｇ２：シスプラチン５　ｍｇ／ｋｇ）、グループ５（Ｇ５：ｒｈＬＦ－Ｆｃ　３０ｍｇ／ｋｇ）、およびグループ６（Ｇ６：シスプラチン５ｍｇ／ｋｇ＋　ｒｈＬＦ－Ｆｃ　３０ｍｇ／ｋｇ）のマウスの血液を回収し、ＴＮＦα（図６）ＩＬ－２（図７）、ＩＦＮ－γ（図８）、の測定を行った。その結果、ｒｈＬＦ－Ｆｃ単独およびシスプラチンとの併用グループにおいては、対照グループと比較して、ＩＬ－２およびＩＦＮ－γの値が上昇する傾向が認められた。本実験は、マウスのガンをマウスに移植した同種性の実験であり、ｒｈＬＦ－Ｆｃによる、宿主のＩＬ－２およびＩＦＮ－γレベルの上昇による宿主の免疫活性の増強が抗ガン活性として現れたと考えることができる。
 
　オキサリプラチン誘発性神経障害性疼痛に対するｒｈＬｆ－Fｃの治療効果
　オキサリプラチン誘発性神経障害性疼痛に対するｒｈＬｆ－Fｃの治療効果を評価した。Ｖｏｎ－Ｆｒｅｙ　ｔｅｓｔの結果を図９に示す。ここで、Ｐｒｅ測定の後、Ｖｏｎ－Ｆｒｅｙ　ｔｅｓｔの測定を行い（１日目）、オキサリプラチン２ｍｇ／ｋｇ　ｉｖ（週２回投与、月曜（４日目）および木曜（７日目））を行い、４回目投与の１日目後（毎週金曜日（図９のday 15）（図９のday 22）（図９のday 29））に，rｈＬｆ－Fｃ　１００ｍｇ／ｋｇ，または生理食塩水のｉｐ投与を行い、金曜日(１５、２２及び２９日目)並びに翌週の月曜日（１８、２５及び３２日目）及び木曜日（２１、２８および３５日目）にＶｏｎ－Ｆｒｅｙ　ｔｅｓｔを行った。　機械的刺激異常に対する疼痛をｒｈＬｆ－Fcが緩和する傾向が示された（図９）。図９中の▲、●、■はそれぞれグラフ横軸に示す日付におおいて行われたｖｏｎ－Ｆｒｅｙ測定の結果を示す。
　本発明のラクトフェリン活性を有するタンパク質は、白金系抗ガン剤と併用するための、白金系抗ガン剤組成物による疼痛の軽減に有用であり、さらに抗ガン活性を増加させる、疾患の予防又は治療剤を提供する。
 
配列番号１
Met Lys Leu Val Phe Leu Val Leu Leu Phe Leu Gly Ala Leu Gly Leu 
1               5                   10                  15      
 
 
Cys Leu Ala Gly Arg Arg Arg Arg Ser Val Gln Trp Cys Ala Val Ser 
            20                  25                  30          
 
 
Gln Pro Glu Ala Thr Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys 
        35                  40                  45              
 
 
Val Arg Gly Pro Pro Val Ser Cys Ile Lys Arg Asp Ser Pro Ile Gln 
    50                  55                  60                  
 
 
Cys Ile Gln Ala Ile Ala Glu Asn Arg Ala Asp Ala Val Thr Leu Asp 
65                  70                  75                  80  
 
 
Gly Gly Phe Ile Tyr Glu Ala Gly Leu Ala Pro Tyr Lys Leu Arg Pro 
                85                  90                  95      
 
 
Val Ala Ala Glu Val Tyr Gly Thr Glu Arg Gln Pro Arg Thr His Tyr 
            100                 105                 110         
 
 
Tyr Ala Val Ala Val Val Lys Lys Gly Gly Ser Phe Gln Leu Asn Glu 
        115                 120                 125             
 
 
Leu Gln Gly Leu Lys Ser Cys His Thr Gly Leu Arg Arg Thr Ala Gly 
    130                 135                 140                 
 
 
Trp Asn Val Pro Ile Gly Thr Leu Arg Pro Phe Leu Asn Trp Thr Gly 
145                 150                 155                 160 
 
 
Pro Pro Glu Pro Ile Glu Ala Ala Val Ala Arg Phe Phe Ser Ala Ser 
                165                 170                 175     
 
 
Cys Val Pro Gly Ala Asp Lys Gly Gln Phe Pro Asn Leu Cys Arg Leu 
            180                 185                 190         
 
 
Cys Ala Gly Thr Gly Glu Asn Lys Cys Ala Phe Ser Ser Gln Glu Pro 
        195                 200                 205             
 
 
Tyr Phe Ser Tyr Ser Gly Ala Phe Lys Cys Leu Arg Asp Gly Ala Gly 
    210                 215                 220                 
 
 
Asp Val Ala Phe Ile Arg Glu Ser Thr Val Phe Glu Asp Leu Ser Asp 
225                 230                 235                 240 
 
 
Glu Ala Glu Arg Asp Glu Tyr Glu Leu Leu Cys Pro Asp Asn Thr Arg 
                245                 250                 255     
 
 
Lys Pro Val Asp Lys Phe Lys Asp Cys His Leu Ala Arg Val Pro Ser 
            260                 265                 270         
 
 
His Ala Val Val Ala Arg Ser Val Asn Gly Lys Glu Asp Ala Ile Trp 
        275                 280                 285             
 
 
Asn Leu Leu Arg Gln Ala Gln Glu Lys Phe Gly Lys Asp Lys Ser Pro 
    290                 295                 300                 
 
 
Lys Phe Gln Leu Phe Gly Ser Pro Ser Gly Gln Lys Asp Leu Leu Phe 
305                 310                 315                 320 
 
 
Lys Asp Ser Ala Ile Gly Phe Ser Arg Val Pro Pro Arg Ile Asp Ser 
                325                 330                 335     
 
 
Gly Leu Tyr Leu Gly Ser Gly Tyr Phe Thr Ala Ile Gln Asn Leu Arg 
            340                 345                 350         
 
 
Lys Ser Glu Glu Glu Val Ala Ala Arg Arg Ala Arg Val Val Trp Cys 
        355                 360                 365             
 
 
Ala Val Gly Glu Gln Glu Leu Arg Lys Cys Asn Gln Trp Ser Gly Leu 
    370                 375                 380                 
 
 
Ser Glu Gly Ser Val Thr Cys Ser Ser Ala Ser Thr Thr Glu Asp Cys 
385                 390                 395                 400 
 
 
Ile Ala Leu Val Leu Lys Gly Glu Ala Asp Ala Met Ser Leu Asp Glu 
                405                 410                 415     
 
 
Gly Tyr Val Tyr Thr Ala Gly Lys Cys Gly Leu Val Pro Val Leu Ala 
            420                 425                 430         
 
 
Glu Asn Tyr Lys Ser Gln Gln Ser Ser Asp Pro Asp Pro Asn Cys Val 
        435                 440                 445             
 
 
Asp Arg Pro Val Glu Gly Tyr Leu Ala Val Ala Val Val Arg Arg Ser 
    450                 455                 460                 
 
 
Asp Thr Ser Leu Thr Trp Asn Ser Val Lys Gly Lys Lys Ser Cys His 
465                 470                 475                 480 
 
 
Thr Ala Val Asp Arg Thr Ala Gly Trp Asn Ile Pro Met Gly Leu Leu 
                485                 490                 495     
 
 
Phe Asn Gln Thr Gly Ser Cys Lys Phe Asp Glu Tyr Phe Ser Gln Ser 
            500                 505                 510         
 
 
Cys Ala Pro Gly Ser Asp Pro Arg Ser Asn Leu Cys Ala Leu Cys Ile 
        515                 520                 525             
 
 
Gly Asp Glu Gln Gly Glu Asn Lys Cys Val Pro Asn Ser Asn Glu Arg 
    530                 535                 540                 
 
 
Tyr Tyr Gly Tyr Thr Gly Ala Phe Arg Cys Leu Ala Glu Asn Ala Gly 
545                 550                 555                 560 
 
 
Asp Val Ala Phe Val Lys Asp Val Thr Val Leu Gln Asn Thr Asp Gly 
                565                 570                 575     
 
 
Asn Asn Asn Glu Ala Trp Ala Lys Asp Leu Lys Leu Ala Asp Phe Ala 
            580                 585                 590         
 
 
Leu Leu Cys Leu Asp Gly Lys Arg Lys Pro Val Thr Glu Ala Arg Ser 
        595                 600                 605             
 
 
Cys His Leu Ala Met Ala Pro Asn His Ala Val Val Ser Arg Met Asp 
    610                 615                 620                 
 
 
Lys Val Glu Arg Leu Lys Gln Val Leu Leu His Gln Gln Ala Lys Phe 
625                 630                 635                 640 
 
 
Gly Arg Asn Gly Ser Asp Cys Pro Asp Lys Phe Cys Leu Phe Gln Ser 
                645                 650                 655     
 
 
Glu Thr Lys Asn Leu Leu Phe Asn Asp Asn Thr Glu Cys Leu Ala Arg 
            660                 665                 670         
 
 
Leu His Gly Lys Thr Thr Tyr Glu Lys Tyr Leu Gly Pro Gln Tyr Val 
        675                 680                 685             
 
 
Ala Gly Ile Thr Asn Leu Lys Lys Cys Ser Thr Ser Pro Leu Leu Glu 
    690                 695                 700                 
 
 
Ala Cys Glu Phe Leu Arg Lys 
705                 710     
 

Claims (10)

  1. 　白金系抗ガン剤組成物と併用するための、該組成物の抗ガン活性を増強し、また該組成物に由来する疼痛を低減する、ラクトフェリン活性を有するタンパク質を含む、抗ガン治療補助剤。
  2. 　前記ラクトフェリン活性を有するタンパク質が、天然型ラクトフェリン、遺伝子組換え型ラクトフェリン、遺伝子組換え型ラクトフェリン融合タンパク質であることを特徴とする、請求項１に記載の抗ガン治療補助剤。
  3. 　前記白金系抗ガン剤組成物に由来する疼痛が、体感温度異常である冷感刺激異常に起因する疼痛であることを特徴とする請求項１または２に記載の抗ガン治療補助剤。
  4. 　前記ラクトフェリン活性を有するタンパク質が０．１～１，０００ｍｇ／ｋｇ／日、１～５００ｍｇ/ｋｇ/日、または１０～１００ｍｇ/ｋｇ/日の投与量で投与される、請求項１～３のいずれかに記載の抗ガン治療補助剤。
  5. 　前記白金系抗ガン剤組成物と前記ラクトフェリン活性を有するタンパク質が、逐次投与、併用投与、または、同時投与されることを特徴とする、請求項１～４のいずれかに記載の抗ガン治療補助剤。
  6. 　前記ラクトフェリン活性を有するタンパク質が経口または非経口で投与されることを特徴とする、請求項１～５のいずれかに記載の抗ガン治療補助剤。
  7. 　前記抗ガン治療補助剤が対象とするガンが、大腸ガン、卵巣ガン、精巣ガン、子宮頸ガン、肺ガン、悪性リンパ腫、乳癌、膀胱ガン、前立腺ガン、食道ガン、胃ガン、頭頸部ガン、小細胞肺ガン、非小細胞肺ガンからなる群から選択される１つである、請求項１～６のいずれかに記載の抗ガン治療補助剤。
  8. 　前記白金系抗ガン剤組成物が、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ネダプラチンからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１～７のいずれかに記載の抗ガン治療補助剤。
  9. 　前記ラクトフェリン活性を有するタンパク質が、オキサリプラチンによる疼痛を緩和することを特徴とする、請求項１～８に記載の抗ガン治療補助剤。
  10. 　請求項１～９のいずれかに記載の剤を含む、抗ガン治療補助組成物。
     
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