BR112013005517B1

BR112013005517B1 - emulsão comestível, bebida compreendendo a mesma e método para produzir uma emulsão

Info

Publication number: BR112013005517B1
Application number: BR112013005517-0A
Authority: BR
Inventors: Tang Dongming; Cloutier Sylvie
Original assignee: Dsm Nutritional Products Ag
Priority date: 2010-09-07
Filing date: 2011-09-07
Publication date: 2018-08-14
Also published as: CA2810474A1; US20120058241A1; CA2810474C; JP5979726B2; EP2613652B1; ES2610907T3; WO2012032416A2; CN103429100A; AU2011300428A1; MX336776B; RU2580470C2; MX2013002644A; JP2013538817A; CN103429100B; EP2613652A2; US8722131B2; RU2013115296A; WO2012032416A3; AU2011300428B2; BR112013005517A2

Abstract

emulsões comestíveis. são divulgadas emulsões comestíveis que compreendem ácidos graxos poli-insaturados e métodos de preparar as mesmas. as emulsões permanecem claras ou semiclaras mediante diluição. as emulsões compreendem um ou mais ácidos graxos poli-insaturados ou derivados dos mesmos, um ou mais emulsionantes ou um ou mais solventes orgânicos e um ou mais poliois em uma solução de água. as emulsões são particulamente adequadas para incorporação em bebidas.

Description

(54) Título: EMULSÃO COMESTÍVEL, BEBIDA COMPREENDENDO A MESMA E MÉTODO PARA PRODUZIR UMA EMULSÃO (51) lnt.CI.: A23L 2/38; B01F 3/08 (30) Prioridade Unionista: 07/09/2010 US 61/380,577 (73) Titular(es): DSM NUTRITIONAL PRODUCTS AG (72) Inventor(es): DONGMING TANG; SYLVIE CLOUTIER (85) Data do Início da Fase Nacional: 07/03/2013

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EMULSÃO COMESTÍVEL, BEBIDA COMPREENDENDO A MESMA E MÉTODO PARA PRODUZIR UMA EMULSÃO

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS [001] O presente pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório US 61/380.577, depositado em 7 de setembro de 2010, que é incorporado aqui por referência em sua totalidade.

ANTECEDENTES [002] Ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs), incluindo ácidos graxos ômega-3, ômega-6 e ômega-9, são vitais para a vida diária e função. Por exemplo, os efeitos benéficos dos ácidos graxos ômega-3 como ácido all-cis5,8,11,14,17-eicosapentaenoico (EPA) e ácido all-cis4,7,10,13,16,19-docosa-hexaenoico (DHA) na redução dos triglicerídeos que diminuem o soro são bem estabelecidos. Ácido all-cis- 9,12,15-octadecatrienoico (ALA) é o ácido graxo precursor essencial de EPA e DHA. Ácido all-cis5,8,11,14-eicosatetraenoico (AA) e seus precursores ácido all-cis-6,9,12-octadecatrienoico (GLA) e ácido all-cis9,12-octadecadienoico (LA) foram mostrados por serem benéficos para as crianças.

[003] Vários destes compostos também são conhecidos por outros benefícios cardioprotetores como a prevenção de arritmias cardíacas, estabilização de placas ateroscleróticas, redução da agregação de plaqueta, e redução da pressão sanguínea. Ver por exemplo, Dyrberg et al., In: Omega-3 Fatty Acids: Prevention and Treatment of Vascular Disease. Kristensen et al. , eds., Bi & Gi Publ, Verona- Springer-Verlag, London, pp. 217-26, 1995; O'Keefe

2/47 and Harris, Am J Cardiology 2000, 85: 1239-41; Radack et al., The effects of low doses of omega-3 fatty acid supplementation on blood pressure in hypertensive subjects: a randomized controlled trial. Arch Intern Med 151: 1173-80, 1991; Harris, Extending the cardiovascular benefits of omega-3 fatty acids.Curr Atheroscler Rep 7:37580, 2005; Holub, Clinical nutrition: 4 omega-3 fatty acids in cardiovascular care, CMAJ 166(5):608-15, 2002. De fato, a American Heart Association também relatou que os ácidos graxos ômega-3 podem reduzir o risco de doenças cardiovasculares e do coração. Outros benefícios dos PUFAs são aqueles relacionados à prevenção e/ou tratamento da inflamação e doenças neurodegenerativas, e ao desenvolvimento cognitivo aprimorado. Vide, por exemplo, Sugano and Michihiro, Balanced intake of polyunsaturated fatty acids for health benefits.J Oleo Sci 50(5):305-l 1, 2001.

[004] Além das fontes de óleo de peixe, PUFAs podem ser e são derivados de fontes microbianas incluindo, sem limitação, Mortiarella alpina para ARA e várias espécies de Thraustochytrids para DHA e EPA. Plantas estão agora sendo modificadas geneticamente para incluir genes que produzem vários PUFAs em esforços adicionais para reduzir custos associados com a produção comercial destes óleos.

[005] Apesar a forte evidência para os benefícios dos PUFAs na prevenção da doença cardiovascular, o consumo médio diário destes ácidos graxos pelos norte-americanos é estimado estar entre 0,1 a 0,2 grama, em comparação com uma ingestão diária sugerida de 0,65 grama para conferir

3/47 o benefício (Webb, Alternative sources of omega-3 fatty acids. Natural Foods Merchandiser 2005, XXVI (8) :40-4) . Já que alterar os padrões alimentares das populações é difícil, a suplementação de dietas com PUFAs é uma abordagem importante para abordar este problema. Infelizmente, muitos PUFAs são sensíveis à oxidação e podem ter propriedades organolépticas desagradáveis. Além disso, a conformidade com os regimes de suplementos alimentares exige disciplina, que é muitas vezes força de vontade. À luz dos benefícios à saúde dos PUFAs é desejável encontrar novas formas de distribuir estes e outros materiais benéficos para um indivíduo.

[006] A distribuição dos PUFAs pela formulação dos mesmos em composições comestíveis seria um método desejável de um ponto de vista de aceitação do consumidor e conformidade. No entanto, a hidrofobicidade e características de estabilidade oxidativas associadas com PUFAs criam muitos desafios significativos para a sua incorporação em composições comestíveis. Uma abordagem envolve a utilização de emulsões. As emulsões têm sido utilizadas como veículos de distribuição de várias substâncias. Por exemplo, as emulsões têm sido usadas na indústria de cosméticos, de detergente, de cuidados pessoais, agrícola e de exploração de petróleo. No entanto, a maioria das emulsões não são diluíveis em água, isto é, a emulsão torna-se branca e turva ou leitosa após diluição com água. Como tal, tem havido um grande interesse em obter uma emulsão que permaneça límpida após diluição e seja estável durante um longo período de tempo. Para fins co4/47 merciais, a criação de emulsões que permanecem claras depois da diluição e são estáveis ao longo de um longo período de tempo tem sido um objetivo. É também de grande importância que a emulsão tenha um fator de carga elevado, para a distribuição mais eficaz, e que seja econômica o suficiente para ser eficaz em custo nas bebidas sensíveis aos custos. O processo para a preparação de tal emulsão deve ser comercialmente rentável. Uma emulsão com estas propriedades pode ser incorporada às águas e outras bebidas claras ou próximas de claras, sem afetar a aparência da bebida subjacente e sem aumentar significativamente o custo da bebida para o consumidor. Este objetivo ainda não foi satisfatoriamente atingido com PUFAs, ésteres, e seus glicerídeos.

[007] A patente US 5.798.333 divulga um método de fazer uma emulsão de ciclosporina em água clara diluível em água usando tocofersolan (Vitamina E TPGS) como emulsificante. Esta patente revela a utilização de emulsificante em excesso (7,5 vezes) para dissolver a ciclosporina. A ciclosporina tem um peso molecular baixo e uma melhor solubilidade do que vários PUFAs de cadeia longa. O produto final é um gel semissólido, que não escorre contido na cápsula de gelatina de duas peças.

[008] A publicação internacional WO2009/117152 divulga uma nanoemulsão não polar clara diluível em água, contendo Vitamina E TPGS, óleo de peixe ômega-3 triacilglicerol e água. A razão de emulsificante para óleo de peixe é de 1,6:1 (p/p) de 6:1 (p/p) . Além disso, componentes adicionais incluindo álcool benzílico, propileno glicol,

5/47 glicerol, fosfolipídeos, e estabilizadores de emulsão à base de goma são usados.

[009] Em outro exemplo, da Patente US 5.753.241, uma etapa de homogeneização de pressão muito alta a 10⁸ Pa foi usada para fazer a emulsão. No entanto, essa pressão está, geralmente, além da faixa de pressão normal usada em aplicações alimentares, a qual é, normalmente, de 10,34 MPa (1500 psi) a 41,36 MPa (6000 psi).

[010] Em face do exposto, o que é necessário na técnica são emulsões de PUFAs e outros materiais benéficos e métodos para a sua preparação em que a emulsão não é discernível no líquido no qual está incorporada, tem um fator de carregamento elevado, têm propriedades organolépticas favoráveis, e é rentável. As composições e métodos aqui descritos satisfazem estas e outras necessidades.

SUMÁRIO [011] De acordo com as finalidades dos materiais, compostos, composições, artigos e métodos descritos, como configurados e amplamente aqui descritos, a matéria divulgada, em um aspecto, refere-se a composições e métodos para a preparação e utilização de tais composições. Em um aspecto adicional, a matéria divulgada refere-se a emulsões. Também são divulgados métodos para produzir e utilizar as emulsões descritas.

[012] As vantagens adicionais serão apresentadas em parte na descrição a seguir, e em parte serão óbvias a partir da descrição, ou podem ser aprendidas pela prática dos aspectos descritos abaixo. As vantagens descritas abaixo serão realizadas e atingidas por meio dos elemen6/47 tos e combinações particularmente apontadas nas reivindicações anexas. Deve ser entendido que tanto a descrição geral anterior como a descrição detalhada a seguir são apenas exemplificativas e explicativas e não são restritivas.

DESCRIÇÃO DETALHADA [013] Os materiais, compostos, composições e métodos aqui descritos podem ser mais facilmente compreendidos por referência à seguinte descrição detalhada de aspectos específicos da matéria divulgada e os Exemplos nela incluídos.

[014] Antes dos presentes materiais, compostos, composições e métodos serem divulgados e descritos, deve ser entendido que os aspectos descritos abaixo não são limitados a determinados métodos sintéticos ou reagentes específicos, como tal, podem, obviamente, variar. Também deve ser compreendido que a terminologia utilizada aqui é para o propósito de descrever aspectos particulares apenas e não pretende ser limitante.

[015] Além disso, ao longo deste relatório descritivo várias publicações são referenciadas. As divulgações destas publicações na sua totalidade são aqui incorporadas por referência neste pedido de modo a descrever mais completamente o estado da técnica ao qual pertence a matéria divulgada. As referências descritas também são individualmente e especificamente aqui incorporadas por referência para o material contido nelas que é discutido na frase na qual a referência é invocada.

Definições Gerais

7/47 [016] Neste relatório descritivo e nas reivindicações que se seguem será feita referência a inúmeros termos que serão definidos para ter os seguintes significados:

[017] Ao longo da descrição e das reivindicações deste relatório descritivo a palavra compreender e outras formas da palavra, tais como compreendendo e compreende, significa incluindo, mas não limitado a, e não se destina a excluir, por exemplo, outros aditivos, componentes, números inteiros ou etapas.

[018] Tal como utilizado na descrição e nas reivindicações anexas, as formas singulares um, uma, e o/a incluem referentes plurais a menos que o contexto indique claramente o contrário. Assim, por exemplo, a referência a um composto inclui misturas de dois ou mais de tais compostos, referência a um emulsificante inclui misturas de dois ou mais tais emulsificantes, a referência a cossolvente inclui misturas de dois ou mais tais cossolventes e similares.

[019] Opcional ou opcionalmente significa que o evento ou circunstância descrita subsequentemente pode ou não ocorrer, e que a descrição inclui casos em que o acontecimento ou circunstância ocorre e casos onde não ocorre.

[020] Faixas podem ser aqui expressas como de cerca de um valor particular e/ou a cerca de outro valor particular. Quando essa faixa é expressa, outro aspecto inclui desde um valor particular e/ou a outro valor particular. Do mesmo modo, quando os valores são expressos como aproximações, pela utilização do antecedente cerca

8/47 de, deve entender-se que o valor particular forma outra aspecto. Será adicionalmente entendido que os pontos extremos de cada uma das faixas são significativas, tanto em relação à outra extremidade, e independentemente do outro ponto extremo. Entende-se também que existe uma série de valores aqui apresentados, e que cada valor é também aqui divulgado como cerca de esse valor particular em adição ao valor propriamente dito. Por exemplo, se o valor 10 é divulgado, então, cerca de 10 também é divulgado. Entende-se também que quando um valor é divulgado menor ou igual ao valor maior ou igual ao valor de, e as faixas possíveis entre os valores também são divulgadas, como adequadamente compreendidas por um especialista na matéria. Por exemplo, se o valor de 10 é descrito, em seguida, inferior ou igual a 10, bem como superior ou igual a 10 também é descrito. Entende-se também que em todo o pedido dados são fornecidos em inúmeros formatos diferentes e que estes dados representam pontos extremos e pontos de partida e faixas para qualquer combinação dos pontos de dados. Por exemplo, se um determinado ponto de dados 10 e um ponto de dados em particular 15 são divulgados, entende-se que maior do que, maior ou igual a, menor que, menor ou igual a, e igual a 10 e 15 são considerados divulgados, bem como entre 10 e 15. Entende-se também que cada unidade entre duas unidades particulares também são divulgadas. Por exemplo, se 10 e 15 são divulgados, então, 11, 12, 13, e 14 também são divulgados.

[021] Referências no relatório descritivo e nas rei9/47 vindicações finais a partes por peso de um componente particular em uma composição denotam a relação de peso entre o componente e quaisquer outros componentes na composição para a qual uma parte em peso é expressa. Assim, em um composto que contém 2 partes em peso do componente X e 5 partes em peso do componente Y, X e Y estão presentes em uma razão de peso de 2:5, e estão presentes em tal razão de modo geral, independentemente do fato de componentes adicionais estarem contidos no composto.

[022] Uma percentagem em peso (% em peso) de um componente, a não ser que especificamente indicado em contrário, é baseada no peso total da formulação ou composição em que o componente está incluído.

[023] Indivíduo, como aqui utilizado, significa um animal. Em um aspecto, o indivíduo é um mamífero, tal como um primata, e, em outro aspecto, o indivíduo é um ser humano. O termo indivíduo inclui também animais domesticados (por exemplo, cães, gatos, etc.), e gado (por exemplo, bois, cavalos, porcos, ovelhas, cabras, etc.).

[024] Por óleo compreende-se uma composição contendo um ou mais PUFAs, por exemplo, ácidos graxos ômega-3, ácidos graxos ômega-6, e/ou ácidos graxos ômega-9, ou seus derivados, tal como descrito em outro lugar aqui. Os PUFAs podem estar na sua forma de ácido livre, na forma de sal, forma de triacilglicerol éster, fitosterol éster e/ou na forma de metil ou etil éster e o termo óleo pode incluir qualquer uma ou mais destas formas. A menos que especificado em contrário, o termo óleo é usado aqui e geralmente não se destina a sugerir qualquer nível

10/47 específico de pureza, qualquer nível específico de hidrofobicidade, sob qualquer forma física específica ou propriedade, ou qualquer outra fonte específica. Óleo, a menos que indicado em contrário, inclui composições derivadas de fontes animais marinhas, como por exemplo, peixes, fontes microbianas e/ou fontes de plantas. O termo óleo pode ser usado como sinônimo do termo fase dispersa aqui.

[025] Emulsão é aqui utilizada para significar qualquer sistema heterogêneo que contém uma fase dispersa e fase contínua. O termo não se destina a ser limitado pelo tamanho particular das gotículas ou partículas da fase dispersa. O termo emulsão aqui utilizado inclui microemulsões e nanoemulsões.

[026] Uma microemulsão é uma emulsão termodinamicamente estável que se forma espontaneamente.

[027] Uma nanoemulsão é usada para se referir a um tipo específico de emulsão em que o tamanho das partículas ou gotículas da fase dispersa é, tipicamente, inferior a 0,1 pm.

[028] Clara é aqui utilizado para se referir a uma característica das emulsões descritas. A clareza de uma emulsão pode ser medida através de vários métodos. No entanto, a menos que indicado de outro modo, uma emulsão que tem uma absorbância de menos de cerca de 0,1A de uma amostra de 1,3 cm de espessura, a 400 nm é considerada clara. A emulsão semiclara tem uma absorbância de cerca de 0,3A a 0,1A quando medida a 400 nm em uma amostra de

1,3 cm. Por emulsão clara diluível entende-se que, após

11/47 a diluição com água em qualquer proporção, incluindo a diluição com água indefinidamente, a absorção da luz da emulsão não se torne maior do que cerca de 1% do seu valor antes da diluição.

[029] Referência será feita agora em detalhes aos aspectos específicos dos materiais, compostos, composições, artigos e métodos descritos, exemplos dos quais são ilustrados nos Exemplos anexos.

Materiais e Composições [030] Aqui são descritos materiais, compostos, composições e componentes que podem ser utilizados para, podem ser utilizados em conjunto com, podem ser utilizados na preparação de, ou são produtos dos métodos e composições divulgados. Estes e outros materiais são divulgados no presente documento e entende-se que quando combinações, subconjuntos, interações, grupos, etc. destes materiais são divulgados, embora referência específica de cada uma das várias combinações individuais e coletivas e permutação destes compostos possam não ser explicitamente divulgadas, cada um deles é especificamente contemplado e descrito aqui. Por exemplo, se um composto é divulgado e uma série de modificações que podem ser feitas a uma série de componentes ou resíduos do composto é discutida, toda e cada combinação e permutação que são possíveis são especificamente contempladas, a menos que especificamente indicado em contrário. Assim, se uma classe de componentes A, B e C é divulgada, bem como uma classe de componentes D, E, e F e um exemplo de uma composição de combinação AD são divulgados, então, mesmo se cada um não for indivi12/47 dualmente recitado, cada um é individual e coletivamente contemplado. Assim, neste exemplo, cada uma das combinações de A-E, A-F, B-D, B-E, B-F, C-D, C-E e C-F é especificamente contemplada e deve ser considerada divulgada a partir da divulgação de A, B, e C; D, E, e F, e a combinação de exemplo A-D. Da mesma forma, qualquer subconjunto ou combinação destes também é especificamente contemplada e divulgada. Assim, por exemplo, o subgrupo de A-E, B-F, e C-E é especificamente contemplado e deve ser considerado divulgado a partir da divulgação de A, B, e C; D, E, e F, e da combinação de exemplo A-D. Este conceito aplica-se a todos os aspectos da presente divulgação incluindo, mas não se limitando a, etapas dos métodos de fabricação e utilização das composições descritas. Assim, se houver uma grande variedade de etapas adicionais que podem ser executadas entende-se que cada uma dessas etapas adicionais pode ser realizada com qualquer aspecto específico ou uma combinação de aspectos dos métodos descritos, e que cada uma dessas combinações é especificamente contemplada e deve ser considerada divulgada.

Emulsões [031] São divulgadas aqui emulsões que compreendem uma fase dispersa (por exemplo, óleo) e uma fase contínua. A fase dispersa pode compreender um ou mais PUFA e/ou derivados do mesmo. Além disso, presente nas emulsões descritas está um ou mais emulsificantes, um ou mais cossolventes e um ou mais mono e/ou dissacarídeos.

[032] Nas emulsões descritas, a razão de emulsificante para a fase dispersa é calculada dividindo a percenta13/47 gem em peso do emulsificante na emulsão pela percentagem em peso da fase dispersa. As emulsões descritas têm uma razão de emulsificante para fase dispersa de cerca de 1,5 ou menos. Isto é, a quantidade de emulsificante utilizada nas emulsões descritas é ligeiramente superior, mas na maioria dos casos, aproximadamente igual a ou menor do que a quantidade da fase dispersa. Em alguns exemplos específicos, a razão de emulsificante para a fase dispersa é de cerca de 1,5, 1,4, 1,3, 1,2, 1,1, 1,0, 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, ou 0,5, em que qualquer um dos valores indicados pode formar um ponto extremo superior ou inferior de uma faixa, por exemplo, de cerca de 1,5 a cerca de 0,1, de cerca de 1,2 a cerca de 0,3, de cerca de 1 a cerca de 0,5, ou de cerca de 1 a cerca de 0,7.

Tamanho [033] As emulsões divulgadas podem ter gotículas ou partículas de vários tamanhos. Por exemplo, a emulsão divulgada pode ser de até cerca de 200 nm, em especial inferior a cerca de 100 nm. Os exemplos específicos incluem, mas não estão limitados a, emulsões que possuem um

tamanho	de gotícula	médio	de	menos de	cerca de 5,	10,	11,
12, 13,	14, 15, 16,	17,	18,	19, 20,	21, 22, 23,	24,	25,
26, 27,	28, 29, 30,	31,	32,	33, 34,	35, 36, 37,	38,	39,
40, 41,	42, 43, 44,	45,	46,	47, 48,	49, 50, 60,	70,	80,
90, 100,	110, 120,	130, 140,	150, 160, 170, 180,	190	, ou
200 nm,	em que qualquer	um	dos valores indicados	pode

formar um ponto extremo superior ou inferior.

[034] O tamanho das gotículas pode ser determinado por métodos conhecidos na técnica, tais como a dispersão

14/47 de luz, microscopia, espectroscopicamente e similares.

Clareza [035] Existem vários métodos pelos quais a clareza de uma emulsão pode ser medida ou caracterizada. Em alguns casos, um turbidímetro pode ser usado. Outro método, que é aqui usado, é a medida espectroscópica da absorbância. Especificamente, a clareza das emulsões descritas é determinada pela diluição da emulsão com água deionizada para ter 50 mg de fase dispersa por 250 g de fase contínua. Um ultrospectrômetro, Ultrospec 2000 de Pharmacia Biotech (Cambridge, UK), é usado para medir a absorbância de luz da amostra de emulsão diluída a 400 nm. A água deionizada pura é usada como referência. A dimensão das cubetas é de 4,5 cm por 1,3 cm por 1,3 cm. As emulsões claras aqui divulgadas têm uma absorbância a 400 nm de menos do que cerca de 0,3, 0,2, ou 0,1 A.

Fase dispersa [036] A fase dispersa das emulsões descritas pode compreender um, dois, ou mesmo mais componentes. Por exemplo, a fase dispersa pode compreender um ou mais PUFA e/ou derivados dos mesmos. Derivados de PUFA podem incluir alquil ésteres (por exemplo, etil ésteres), ésteres de glicerídeos (por exemplo, mono, di e triglicerídeos), ésteres de esterol (por exemplo, ésteres de fitosteróis), e sais de PUFA. Misturas e combinações de PUFAs e seus derivados também são adequadas para utilização nas fases dispersas neste documento.

[037] Exemplos específicos de PUFAs incluem, mas não estão limitados a, ácido α-linolênico natural e sintético

15/47 (18:3 ω3) (ALA), ácido octadecatetraenoico (18:4 ω3) (ácido estearidônico), ácido eicosapentaenoico (20:5 ω3) (EPA), ácido docosa-hexaenoico (22:6 ω3) (DHA), ácido docosapentaenoico (22:5 ω3) (DPA), ácido eicosatetraenoico (24:4 ω3), 16:3 ω3, 24:5 ω3, e/ou ácido nisínico (24:6 ω3 ), ácido araquidônico (20:4 ω6) (ARA), outros são observados em qualquer outra parte do relatório descritivo. Estes e outros PUFAs, quer em suas formas livres, esterificadas, ou de sal, podem ser encontrados e obtidos a partir de óleos marinhos (por exemplo, óleo de peixe, óleo de foca, óleo de krill), óleos microbianos (incluindo naturais, bem como, os micróbios modificados quer por forma de mutagênese clássica ou alteração genética), tais como óleo de algas (por exemplo, óleo de microalgas), óleo fúngico, óleo de perila, bem como óleo vegetal (quer derivados de plantas de ocorrência natural ou de plantas geneticamente modificadas), entre outros. Precursores de PUFAs, por exemplo, ALA e GLA e seus derivados tais como derivados poliglicolisados ou derivados de polioxietileno também podem estar presentes na fase dispersa. Em outros exemplos específicos, a fase dispersa pode compreender DHA e/ou EPA, um C1-C6 éster de alquila do mesmo, um triacilglicerol éster do mesmo, um fitosterol éster do mesmo, um sal do mesmo, e/ou uma mistura dos mesmos.

[038] Nos exemplos específicos, a fase dispersa pode compreender um óleo microbiano, por exemplo, óleo de algas (por exemplo, óleo de um flagelado como Crypthecodinium cohnii) ou óleo de fungos (por exemplo, óleo de Mortiarella Alpina, Thraustochytrium, Schizochytrium, ou

16/47 uma mistura dos mesmos), e/ou óleo vegetal, incluindo misturas destes.

[039] Em exemplos específicos, a fase dispersa pode compreender um óleo marinho, tal como óleo de peixe concentrado refinado e natural. Exemplos de óleos de peixe adequados incluem, mas não estão limitados a, óleo de peixe do Atlântico, óleo de peixe do Pacífico, óleo de peixe do Mediterrâneo, óleo de peixe prensado leve, óleo de peixe tratado alcalino, óleo de peixe tratado termicamente, óleo de peixe marrom leve e pesado, óleo de bonito, óleo de sardinha, óleo de tilápia, óleo de atum, óleo de perca-do-mar, óleo de halibute, óleo de marlim, óleo de barracuda, óleo de bacalhau, óleo de sável, óleo de sardinha, óleo de anchova, óleo de capelim, óleo de bacalhau do Atlântico, óleo de arenque do Atlântico, óleo de cavala do Atlântico, óleo de sável do Atlântico, óleo de salmonídeo, óleo de atum e óleo de tubarão e, incluindo misturas e combinações dos mesmos. Óleo de peixe não alcalino tratado é também uma substância de carga apropriada. Outros óleos marinhos adequados para utilização na presente invenção incluem, mas não estão limitados a, óleo de lula, óleo de polvo, óleo de krill, óleo de foca, óleo de baleia, e outros similares, incluindo misturas e combinações dos mesmos. Qualquer óleo de PUFA e combinação de óleos de PUFA podem ser utilizados nas composições descritas e nos métodos divulgados para prepará-las.

[040] Os PUFAs aqui descritos também podem ser óleos brutos, semirrefinados (também chamados alcalinorefinados), ou óleos refinados de tais fontes aqui des17/47 critas. Ainda, além disso, as emulsões descritas podem utilizar óleos que compreendem triacilgliceróis reesterificados.

[041] Além disso, a fase dispersa pode estar presente em uma quantidade compreendida entre cerca de 1% a cerca de 15% em peso da emulsão. Em exemplos específicos, a fase dispersa pode estar presente em uma quantidade de cerca de 1% a cerca de 15%, de cerca de 3% a cerca de 12%, de cerca de 5% a cerca de 10%, de cerca de 7% a cerca de 10%, ou de cerca de 8% a cerca de 9%, com base no peso total da emulsão. Em um aspecto preferido, a fase dispersa é de cerca de 8,5% em peso da emulsão.

Emulsificantes [042] As emulsões descritas compreendem um ou mais emulsificantes. Além de estarem presentes com a fase dispersa em uma razão particular, os emulsificantes que são adequados para utilização na presente invenção têm um valor de HLB de cerca de 10 a cerca de 40. Tipicamente, o emulsificante tem um valor de HLB de cerca de 10, 11, 12,

13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26,

27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, ou 40, em que qualquer um dos valores indicados pode formar um ponto extremo superior ou inferior de um intervalo. Em exemplos específicos, o emulsificante tem um HLB de cerca de 12 a cerca de 16, mais especificamente, cerca de 12 a

14, ou cerca de 13. Valores de HLB podem ser calculados pelo método de Griffin (Griffin, W.C., Journal of the Society of Cosmetic Chemists 1, 311 (1949)) ou outro método empírico como método de solubilidade (Little R.C., Jour18/47 nal of Colloid and Interface Science, 65 (3): 587, 1978).

Derivados de vitamina E [043] Em vários exemplos aqui descritos, o emulsificante é um derivado de polialquileno glicol da Vitamina E, tal como emulsificantes de tocoferol e derivados de tocotrienol nos quais a porção da Vitamina E representa a região hidrofóbica do emulsificante e está ligada através de um ligante a um polialquileno glicol. Estes emulsificantes podem ser formados por meio de esterificação de um tocoferol éster com um polialquileno glicol. O tocoferol éster é feito por esterificação de tocoferol com o ligante. O termo tocoferol refere-se a qualquer forma de ocorrência natural ou sintética da vitamina E, e pode referir-se a um único composto ou uma mistura. Os exemplos de tocoferois incluem, por exemplo, α-tocoferol, D-αtocoferol, β-tocoferol, γ-tocoferol, e δ-tocoferol. O ligante é um ácido dicarboxílico (um ácido carboxílico com dois grupos carbóxi, por exemplo, ácido succínico), tal como o ácido succínico. Ácidos dicarboxílicos exemplares que podem ser utilizados como ligantes nestes emulsificantes diéster de PEG de tocoferol e tocotrienol são o ácido succínico, ácido sebácico, ácido dodecanodioico, ácido subérico ou ácido azelaico, ácido citracônico, ácido metilcitracônico, ácido itacônico, ácido maleico, ácido glutárico, ácido glutacônico, ácidos fumáricos e ácidos ftálicos.

[044] Os exemplos adequados de emulsificantes derivados de vitamina E incluem, mas não estão limitados a, derivados de polietileno glicol (PEG) de tocoferol, tal co19/47 mo diésteres de polietileno glicol de tocoferol (TPGD). Um emulsificante preferido é succinato de polietileno glicol de tocoferol (TPGS). Os análogos de TPGS, homólogos de TPGS e derivados de TPGS também são adequados. Outros exemplos de emulsificantes incluem polietileno glicol de sebacato de tocoferol, polietileno glicol de dodecanodioato de tocoferol, polietileno glicol de suberato de tocoferol, polietileno glicol de azelato de tocoferol, polietileno glicol de citraconato de tocoferol, polietileno glicol de metil citraconato de tocoferol, polietileno glicol de itaconato de tocoferol, polietileno glicol de maleato de tocoferol, polietileno glicol de glutarato de tocoferol, polietileno glicol de glutaconato de tocoferol, e polietileno glicol de ftalato de tocoferol, entre outros.

[045] Os emulsificantes adequados podem incluir também outros derivados de PEG que têm propriedades similares, por exemplo, os derivados de PEG de esteróis, por exemplo, um colesterol ou um sitosterol e derivados de PEG de outras vitaminas solúveis em gordura, por exemplo, algumas formas de Vitamina A (por exemplo, Retinol) ou Vitamina D (por exemplo, vitamina D1-D5).

[046] Em um aspecto preferido, o emulsificante compreende o succinato de polietileno glicol de tocoferol (TPGS), tal como um TPGS-1000 e/ou um d-a-TPGS. Em outro exemplo, o emulsificante é um análogo de TPGS. O análogo de TPGS refere-se a compostos, com exceção de TPGS, que são similares ao composto parental de TPGS, mas diferem um pouco na composição, por exemplo, pela variação, adi20/47 ção ou remoção de um átomo, uma ou mais unidades (por exemplo, unidade(s) de metileno - (CH₂)_n) ou um ou mais grupos funcionais. Análogos de TPGS incluem surfactantes derivados de vitamina E, incluindo derivados de PEG de vitamina E, incluindo diésteres de PEG de vitamina E, tais como, mas não limitados a, sebacato de polietileno glicol de tocoferol (PTS), dodecanodioato de polietileno glicol de tocoferol (PTD), suberato de polietileno glicol de tocoferol (PTSr), azelaato de polietileno glicol de tocoferol (PTAz), e sebacato de polioxietanil tocotrienil (PTrienS), bem como outros derivados de PEG de vitamina E.

[047] As frações de PEG no emulsificante derivado de PEG, incluindo as frações de PEG nos derivados de PEG da vitamina E, incluem frações de PEG selecionadas dentre qualquer um ou mais de PEG-OH, PEG-NHS, PEG-CHO, PEG-SH, PEG-NH₂, PEG-CO₂H, PEGs metilados (m-PEGs) e PEGs ramificados, e inclui frações de PEG possuindo um peso molecular de cerca de 200 kDa a cerca de 20.000 kDa, de cerca de 2 00 kDa a cerca de 6.000 kDa, de cerca de 6 00 kDa a cerca de 6.000 kDa, de cerca de 200 kDa a cerca de 2000 kDa, de cerca de 600 kDa a cerca de 1500 kDa, ou de cerca de 600 kDa a cerca de 1000 kDa.

[048] Exemplos preferidos de emulsificantes adequados são os emulsificantes derivados de (PEG) de polietileno glicol da vitamina E, tais como succinato de polietileno glicol de α-tocoferol (TPGS), com um HLB de cerca de 12 a cerca de 14 (por exemplo, cerca de 13).

[049] Desejavelmente, os emulsificantes são aceitá21/47 veis por parte das autoridades reguladoras alimentares ao seu nível específico de utilização. Por exemplo, TPGS1000, que tem uma fração de PEG de 1000 kDa, é considerado de qualidade alimentar e é vendido sob o nome de Eastman Vitamin E TPGS™, pela Eastman Chemical Company, Kingsport, TN, EUA. Este TPGS é uma forma solúvel em água da vitamina E de fonte natural, que é preparado por esterificação do grupo carboxila do succinato de ácido dalfa-tocoferil cristalino com polietileno glicol 1000 (PEG 1000) , e contém entre 260 e 300 mg/g de tocoferol total. Um composto similar pode ser feito através da esterificação do grupo carboxila da forma d,1 da vitamina E sintética com PEG 1000. Este tocoferil polietilenoglicol é uma preparação solúvel em água de uma vitamina solúvel em gordura (Vitamina E), por exemplo, tal como divulgado nas Patentes US 3.102.078, 2.680.749 e Pedido Publicado US 2007/0184117 e 2007/0141203. Também exemplar do surfactante TPGS que pode ser utilizado nas composições fornecidas é a vitamina E natural solúvel em água (TPGS), vendida por ZMC-EUA, The Woodlands, Texas, USA.

Polissorbatos [050] Em outros exemplos, os emulsificantes podem ser polissorbatos. Polissorbatos são líquidos oleosos derivados de sorbitano PEGuilado (um derivado de sorbitol) esterificado com ácidos graxos. Exemplos de polissorbatos apropriados são polissorbato 20 (Tween 20 ou monolaurato de sorbitano de polioxietileno (20)), polissorbato 40 (Tween 40 ou monosterato de sorbitano de polioxietileno (20)), polissorbato 60 (Tween 60 ou monosterato de sorbi22/47 tano de polioxietileno (20)), e polissorbato 80 (Tween 80 ou monooleato de sorbitano de polioxietileno (20)). O número após a parte de polioxietileno refere-se ao número total de grupos oxietileno-(CH2CH2O) presentes na molécula. O número após a parte de polissorbato está relacionado ao tipo de ácido graxo associados com a parte de sorbitano de polioxietileno da molécula. Monolaurato é indicado por 20, monopalmitato é indicado por 40, monoestearato por 60 e monoleato por 80.

[051] Em certos exemplos, o emulsificante não é lecitina.

Solventes [052] A fase contínua das emulsões divulgadas compreende água. No entanto, solventes adicionais (isto é, cossolventes) também podem estar presentes na fase contínua e em alguns casos são preferidos. Por exemplo, um solvente polar tal como propileno glicol, glicerol e glicerina pode ser utilizado. Estes cossolventes podem estar presentes em uma quantidade compreendida entre cerca de 1% a

cerca de 45%	em peso	da	emulsão.	No	exemplo específico, o
cossolvente	está presente em de	cerca de 1, 2, 3, 4, 5,
6, 7, 8, 9,	10, 11,	12,	13, 14,	15	, 16, 17, 18, 19, 20,
21, 22, 23,	24, 25,	26,	27, 28,	29	, 30, 31, 32, 33, 34,
35, 36, 37,	38, 39,	40,	41, 42,	43	, 44 e 45% em peso da

composição em que qualquer um dos valores pode formar um ponto extremo superior ou inferior de um faixa de, por exemplo, cerca de 5% a cerca de 20%, de cerca de 9% a cerca de 18%, de cerca de 13% a cerca de 17%, de cerca de

13% a cerca de 17%, de cerca de 14% a cerca de 16%, de

23/47 cerca de 20% a cerca de 45%, ou cerca de 15% em peso da emulsão.

[053] Nas emulsões divulgadas, a quantidade de água é de cerca de 13 a cerca de 25% em peso da emulsão, por exemplo, cerca de 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 e 25% em peso da emulsão, em que qualquer um dos valores indicados pode formar um ponto extremo superior ou inferior de um faixa de, por exemplo, cerca de 14% a cerca de 22%, de cerca de 17% a cerca de 20%, de cerca

17% a cerca de 25%, de cerca de 20% a cerca de 23%, de cerca de 21% a cerca de 24%, e de cerca de 22% a cerca de 25% em peso da emulsão.

[054] Em geral, a quantidade total do solvente (tanto água quanto qualquer cossolvente) é menor do que cerca de 50% em peso da emulsão total. Em vários exemplos, a quantidade total de solvente nas emulsões descritas é inferior a cerca de 45%. Ainda mais, a quantidade total de solvente na emulsão é de cerca de 30, 31, 32, 33, 34, 35,

36, 37,38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, ou 50% em peso da emulsão, em que qualquer um dos valores indicados pode formar o ponto extremo superior ou inferior de um faixa, por exemplo, de cerca de 30% a cerca de 50%, de cerca de 32% a cerca de 45%, de cerca de 34% a cerca de 42%, de cerca de 36% a cerca de 40%, ou de cerca de 37 a cerca de 38% em peso da emulsão.

[055] Em certos exemplos a emulsão é substancialmente livre de álcool benzílico, por exemplo, menos do que cerca de 5, 4, 3, 2 ou 1% de álcool benzílico, ou cerca de 0% de álcool benzílico por peso da emulsão.

24/47

Mono e Dissacarídeos [056] A fase contínua das emulsões divulgadas também compreende um ou mais mono- e/ou dissacarídeos. Exemplos de monossacarídeos incluem glicose, frutose, galactose, arabinose, ribose, ribulose, manose, xilose e xilulose. Exemplos de dissacarídeos incluem sacarose, lactose, celobiose, sorbose, trealose, maltose, rafinose e similares. Vários derivados de sacarídeos, tais como xilitol, sorbitol e isomalte também são adequados para utilização nas emulsões descritas.

[057] Em geral, a quantidade total do mono ou dissacarídeo é maior do que cerca de 40% em peso da emulsão total. Em vários exemplos, a quantidade total destes açúcares nas emulsões divulgadas é de cerca de 30% a cerca de 66% em peso da emulsão. Ainda mais, a quantidade total

de	solvente	na	emulsão	pode	ser	cerca de	30,	31,	32,	33,
34,	35, 36,	37	, 38, 39	, 40,	41,	42, 43,	44,	45,	46,	47,
48,	49, 50,	51	, 52, 53	, 54,	55,	56, 57,	58,	59,	60,	61,
62,	63, 64,	65	e 66% em peso	da	emulsão,	em	que	qualquer

um dos valores indicado pode formar o ponto extremo superior ou inferior de um intervalo, por exemplo, de cerca de 40 até cerca de 66%, de cerca de 45% a cerca de 50%, de cerca de 46% a cerca de 48%, de cerca de 48% a cerca de 50%, de cerca de 47% a cerca de 49%, ou de cerca de 45 a cerca de 47% em peso da emulsão.

[058] As composições descritas também são substancialmente livres de polissacarídeos, tais como gomas, por exemplo, menos do que cerca de 5, 4, 3, 2 ou 1% de polissacárido, ou cerca de 0% de polissacarídeo em peso da

25/47 emulsão. As emulsões descritas podem, em alguns casos, ser substancialmente isentas de xarope de milho de frutose.

Antioxidantes [059] As emulsões descritas neste documento também podem conter um antioxidante. O antioxidante pode estar presente na fase contínua e/ou fase dispersa. Exemplos apropriados dos antioxidantes incluem, mas não estão limitados a, um composto fenólico, um extrato de planta ou um composto contendo enxofre. Em certos exemplos aqui descritos, o antioxidante pode ser o ácido ascórbico ou um sal do mesmo, por exemplo, ascorbato de sódio. Em outros exemplos, o antioxidante pode ser a vitamina E, CoQ10, tocoferóis, derivados solúveis de lipídeos de antioxidantes mais polares, tais como ésteres de ácidos graxos de ascobil (por exemplo, palmitato de ascobil), extratos de plantas (por exemplo, óleos de alecrim, salva e orégano, extratos de chá verde), extratos de algas e antioxidantes sintéticos (por exemplo, BHT, TBHQ, etoxiquina, galatos de alquila, hidroquinonas, tocotrienóis).

Método de Preparação de Emulsões [060] Os métodos para preparar as emulsões descritas também são aqui descritos. Em geral, as emulsões descritas podem ser preparadas por emulsão de uma mistura do emulsificante, a fase dispersa (por exemplo, o óleo), o solvente, e o mono e/ou dissacarídeo. Como um exemplo mais específico, o emulsificante é primeiro fundido e em seguida, caso necessário misturado com os componentes da fase dispersa e cossolvente(s). A razão de emulsificante

26/47 para fase dispersa é de cerca de 1,5 ou menos. A concentração do emulsificante nesta primeira mistura está acima de concentração micelar crítica (CMC) dos emulsificantes, assim as micelas de emulsificantes em nano-escala contendo a fase dispersa se formam. O cossolvente ajuda também as micelas do emulsificante a dispersar e evitar a gelificação de alguns dos emulsificantes, quando eles estão em contato com a água.

[061] A mistura pode, então, ser combinada com uma solução de mono e/ou dissacarídeo em água. Embora não desejando estar limitado pela teoria, esta solução de açúcar tem duas funções: primeira, a solução de açúcar aumenta a viscosidade e facilita a redução do tamanho das partículas por homogeneização na etapa seguinte, segunda, o açúcar atua como um estabilizador para a emulsão e evita a formação de cristais líquidos, que provoca a agregação das gotículas e turbidez para a emulsão.

[062] A mistura final pode então ser homogeneizada. A homogeneização é usada para reduzir o tamanho de gotículas da emulsão. Porque pequenas quantidades de emulsificantes são utilizadas na primeira etapa, e a concentração de emulsificante é diluída na segunda fase, a emulsão que sai da segunda etapa não é uma microemulsão, e o tamanho de gotículas está acima de 100 nm. Para reduzir o tamanho das gotas da emulsão, por exemplo, para menos de 100 nm, e ter uma emulsão clara uma homogeneização a alta pressão pode ser usada. O número de etapas que pode ser necessário depende da pressão aplicada. Para 34,47 MPa (5000 psi), cinco a dez passadas serão geralmente suficientes.

27/47

Pressões típicas que podem ser usadas são de cerca de

10,34 MPa (1500 psi) a cerca de 41,36 MPa (6000 psi) .

Tecnologias a base de processador de microfluidizante também podem ser usadas para preparar as emulsões.

[063] A etapa de emulsificação pode ser efetuada a uma temperatura adequada dado o ponto de fusão do óleo e para reduzir a possibilidade de oxidação. Por exemplo, a emulsificação pode ser de cerca de -4 e cerca de 80 °C, de cerca de 0 a cerca de 20 °C, de cerca de 30 °C a cerca de 60 °C, ou de cerca de 40 °C a cerca de 50 °C.

[064] Antioxidantes como observados aqui podem ser adicionados quer na fase dispersa ou contínua para proteger os óleos. Estes podem ser adicionados em qualquer etapa durante o processo de formação da emulsão. Em qual etapa o antioxidante é adicionado, e em que quantidade, dependerá do antioxidante particular.

Métodos de Utilização [065] As emulsões descritas podem ser utilizadas para preparar composições comestíveis de modo a proporcionar óleos para um indivíduo. Em um exemplo particular, as emulsões descritas podem ser adicionadas a uma bebida, de modo que a bebida possa ser uma fonte de PUFAs e seus derivados. Em outro exemplo particular, são aqui descritos métodos de suplementar PUFAs e seus derivados em um indivíduo através da administração de uma quantidade eficaz de uma emulsão aqui descrita. Em outro exemplo, são aqui descritos métodos de tratamento de várias condições humanas incluindo, mas não limitadas a, redução dos níveis de colesterol, níveis de triglicerídeos ou suas combinações,

28/47 em um indivíduo pela administração de uma quantidade eficaz de uma emulsão aqui descrita.

EXEMPLOS [066] Os exemplos a seguir são apresentados abaixo para ilustrar os métodos e os resultados de acordo com a matéria divulgada. Estes exemplos não se destinam a ser inclusivos de todos os aspectos da matéria divulgada no presente documento, mas sim para ilustrar métodos e resultados representativos. Estes exemplos não têm a intenção de excluir equivalentes e variações da presente invenção que são evidentes para uma pessoa versada na técnica.

[067] Esforços foram feitos para assegurar a exatidão em relação aos números (por exemplo, quantidades, temperatura, pH, etc.), mas alguns erros e desvios devem ser considerados. Salvo indicação em contrário, as partes são partes por peso, a temperatura está em °C ou é a temperatura ambiente, e a pressão é a atmosférica ou próxima. Existem numerosas variações e combinações de condições, por exemplo, as concentrações de componentes, temperaturas, pressões e as faixas da reação e outras condições que podem ser utilizadas para otimizar a pureza do produto e rendimento obtido a partir do processo descrito. Apenas experimentação de rotina e razoável será necessária para otimizar as condições do processo deste tipo.

[068] Certos materiais, compostos, composições e componentes aqui descritos podem ser obtidos comercialmente ou são prontamente sintetizados utilizando técnicas geralmente conhecidas pelos versados na técnica. Por exem29/47 plo, os materiais de partida e reagentes utilizados na preparação das composições divulgadas podem ser adquiridos a partir de fornecedores comerciais tais como Ocean Nutrition Canada Limited (Dartmouth, Canadá), Aldrich Chemical Co., (Milwaukee, Wisconsin), Acros Organics (Morris Plains, NJ), Fisher Scientific (Pittsburgh, PA) ou Sigma (St. Louis, MO) ou são preparados por métodos conhecidos pelos especialistas na matéria seguindo procedimentos apresentados em referências tais como Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, Volumes 1-17 (John Wiley and Sons, 1991); Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Volumes 1-5 e Suplementos (Elsevier Science Publishers, 1989); Organic Reactions, Volumes 1-40 (John Wiley and Sons, 1991); March's Advanced Organic Chemistry, (John Wiley and Sons, 4^a Edição); e Larock's Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers Inc., 1989).

Exemplos 1-7: micro e nanoemulsões claras a base de

Vitamina E TPGS [069] Vários exemplos foram preparados utilizando os ingredientes nas quantidades indicadas na Tabela 1. A Vitamina E TPGS (Zhejiang Medicine Company, Xinchang, Zhejiang, China) foi fundida usando um banho de água ajustado a 60°C. Os TPGS, propileno glicol, glicerol derretidos (Nealander International Inc., Mississauga, Canada) e óleo de peixe (Ocean Nutrition Canada Limited, Dartmouth, Canadá) foram, então, misturados em conjunto. Certos exemplos (como observado na Tabela 2) foram adicionados lentamente a uma solução aquosa de açúcar a 66,7%. A mis30/47 tura resultante foi, então, adicionada à água DI com agitação até uma emulsão clara ser formada. A homogeneização a 34,47 MPa (5000 psi) foi então realizada durante 10 passagens. O tamanho das gotículas das emulsões foi de cerca de 72 nm, tal como determinado pelo Particle Analyzer Beckman Coulter LS230. As emulsões permaneceram claras após a diluição com água em qualquer proporção. O armazenamento foi a 4 °C.

[070] A clareza da maior parte das amostras da emulsão foi testada pela absorção de luz de uma solução a 0,94% em água DI (0,94 g da emulsão/100 g de água para se obter 50 mg de EPA + DHA por 250 g da dose) a 400 nm 0,068 (água DI como referência).

Tabela 1. Fórmula das emulsões feitas com emulsificante de Vitamina E TPGS, óleos diferentes e razão de emulsificante/óleo diferente.

	Exemplo n°
Ingredientes (em % em peso)	Comp 1	Comp 2	3	4	5	6	7
Vitamina E TPGS*	19,3	19,9	8,5	5,4	6,0	6,8	5,4
Lecitina							1,3
Propileno glicol	4,1	4,8	8,5	5,3	6,0	6,8	5,3
Glicerol	1,9	1,9	7,9	8,0	6,0	6,8	8,0
Açúcar	_{- -}	_{- -}	44,4	48,3	49,0	47,3	47,4
Água	65,7	64,9	22,2	24,2	24,5	23,7	23,7
Óleo ômega-3	8,9A	8,5^b	8,5^b	8,8^C	8,5^C	8,5^C	8,8^C

31/47

HLB	13,2	13,2	13,2	13,2	13,2	13,2	12
Razão emul- sifi- cante/óleo	2,1	2,3	1,0	0,61	0,7	0,8	0,72
Absorbância de luz a 400 nm (A)			0,068	0,117	0,105	0,098	0,073
^A Óleo de Peixe Ômega-3 30TG (270 mg/g EPA + DHA; 320 mg/g de Ω-3 na forma TG) ^B Óleo de Peixe Ômega-3 30TG (290 mg/g EPA + DHA; 350 mg/g de Ω-3 na forma TG) ^C Óleo de Peixe Ômega-3 30TG (250 mg/g EPA + DHA; 300 mg/g de Ω-3 na forma TG)

[071] Os Exemplos 1 e 2 são exemplos comparativos, em que a razão de emulsificante para a fase dispersa (nestes casos, o óleo de peixe ômega-3) é de 2,1 e 2,3. Nenhum açúcar foi utilizado nos Exemplos 1 e 2, e a quantidade de cossolvente foi relativamente baixa.

Exemplos 8-12: Micro e nanoemulsões utilizando vários emulsificantes [072] O método descrito para os Exemplos 1-7 acima foi seguido usando vários outros emulsificantes. Os Exemplos 8-12 usaram emulsificantes que possuem valores de HLB iguais ou diferentes. Os vários exemplos foram preparadas utilizando os ingredientes nas quantidades indicados na Tabela 2.

[073] O óleo foi combinado com o polissorbato, propileno glicol, lecitina de soja (Solae Company, St. Louis, Missouri, EUA), sulfato de dodecil sódio e ou monoglice32/47 rídeo (Abitech, Northampton, UK) como descrito na Tabela 2 para formar uma mistura homogênea. A mistura foi então adicionada lentamente a uma solução de açúcar a 66,7% sob agitação. Glicerol foi adicionado como observado na Tabela 2. A mistura foi agitada durante 5 minutos e, em seguida, homogeneizada a 34,47 MPa (5000 psi), utilizando um microfluidizador durante 10 passagens. O armazenamento foi a 4°C.

[074] A clareza da maior parte das amostras de emulsão foi testada pela absorbância de luz de uma solução a 1,8% em água DI (1,8 g de emulsão/100 g de água para obter 50 mg de EPA + DHA por 250 g de dose) a 400 nm 0,052 (água DI como referência).

Tabela 2. Fórmula de emulsões com diferentes valores de HLB feita com diferentes emulsificantes e diferentes óleos.

	Exemplo n°
Ingredientes (em % em peso)	8	9	10	11	Comp 12
Polissorbato 80					7,7
Polissorbato 85	6,6	6,6	_{- -}	_{- -}	_{- -}
Sulfato de dodecil sódio	_{- -}	_{- -}	0,9	0,8	_{- -}
Polietileno glicol	4,4	4,4	8,8	8,3	4,4
Glicerol	4,0	4,0	_{- -}	_{- -}	4,0
Lecitina	2,2	2,2	_{- -}	_{- -}	_{- -}
Monoglicerídeo					1,2
Açúcar	52,2	52,2	58,7	55,1	52,2
Água	26,1	29,4	29,4	27,5	26,2
Óleo ômega-3	4,5^a	4,4^a	2,2^b	8,3^b	4,4^a

33/47

HLB	10	10	40	40	13,5
Razão Emulsificante/óleo	1,5	1,5	0,4	0,1	1,8
Absorbâcia de luz a 400 nm (A)	--	0,052	0,018	0,046	0,012
^A Óleo de Peixe ômega 3 3 0TG adaptado para inverno (54 6 mg/g EPA + DHA na forma TG) ^B Óleo de Peixe Ômega-3 30TG (250 mg/g EPA + DHA; 300 mg/g de Ω-3 na forma TG)

[075] Estes exemplos indicam que os métodos descritos são relativamente independentes do valor de HLB de um emulsificante. Assim, uma vasta gama de emulsificantes com valores diferentes de HLB pode ser utilizada.

Avaliações organolépticas de emulsões de óleo em água de ômega-3 claras em bebidas [076] A emulsão no Exemplo Comparativo 2 foi testada em várias bebidas. Todas as bebidas foram pasteurizadas. A emulsão foi adicionada antes da pasteurização a um nível de dosagem de 32 mg de EPA + DHA por 500 gramas da dose. A aceitabilidade do sabor, foi dimensionada de 1 a 7, em que 1 é o mais aceitável e 7 sendo o mais inaceitável. Quatro a cinco panelistas participaram da avaliação sensorial. Qualquer amostra com uma pontuação de aceitabilidade do sabor maior que 4 foi rejeitada. Os resultados são mostrados na Tabela 3.

Tabela 3. Resultados organolépticos das bebidas fortificadas com emulsão de óleo de peixe em água

Aceitabilidade do Sabor após Armazenamento sob 4 °C

34/47

Tempo de Arma-	1	7	14	21	28	35	42	49	56
zenamento
(dias)
GATORADE^TM	1,5	2,	3	3	2,7	2,5	2,1	2,	4
de Limão-Lima					5		25	5
Suco de maçã	4	4,4	4,5	6	Descartadas
GATORADE^TM	2	1,8	2	3	1,7	2,5	1,7	1,	2,
de Laranja					5		5	25	25
Refresco	3,75	4,4	5,2	4,7	Descartadas
de frutas			5	5

[077] Emulsão clara de óleo em água de ômega-3 a base de Vitamina E TPGS pode ser usada para fortificar o GATORADE™ de laranja a 32 mg de EPA + DHA por 500 gramas da dose. O sensorial do GATORADE™ fortificado é aceitável após armazenamento de até 56 dias. O GATORADE ™ de limalimão foi aceitável até 56 dias.

[078] Para avaliar duas fórmulas de emulsão clara: 1:1 e 2:1 em vários níveis de PUFA em GATORADE™ de laranja incluindo 20 mg, 32 mg e 50 mg por 250 g de dose. A fórmula da amostra de emulsão clara 1:1 é a mesma que a fórmula mostrada no Exemplo 3, e a fórmula de emulsão clara da amostra 2:1 é a mesma que a fórmula mostrada no Exemplo Comparativo 2. A aceitabilidade do sabor foi determinada como descrito acima, com uma pontuação inferior a 4 sendo aceitável. Sabor de peixe foi baseado em uma escala de 0 a 6, com 0 sendo completamente sem gosto de peixe e 6 sendo totalmente com gosto de peixe. Uma pontuação de sabor de peixe abaixo de 2,0 é aceitável. Os re35/47 sultados são mostrados na Tabela 4.

Tabela 4. Resultados organolépticos do GATORADE™ de laranja fortificado com emulsão de óleo de peixe em água.

Razão de Emul sifican- te:óleo	Dose de EPA+DHA / 250g	Sabor	Em relação ao controle (0)	Aceitabilida- de (1 a 7)	Sabor de peixe
Controle			0	1,0	0,0
1:1	20	laranjas, aromatizado, doce, azedo, levemente salgado	0,3	1,9	0,1
1 :1	32	laranjas, aromatizado, doce, atenuado, saponáceo, ressaibo floral, levemente suave, atenuado	0,4	1,6	0,1
1 :1	50	laranjas, aromatizado, doce, textura levemente oleosa, levemente atenuado, de peixe, azedo, levemente saponáceo, levemente saponáceo	0,6	2,2	0,4
2 :1	20	laranjas, aromatizado, doce, verde,	0,3	1,8	0,1

		azedo, muito levemente saponáceo
2 :1	32	laranjas, aromatizado, doce, levemente plástico, levemente verde, azedo, floral, levemente saponáceo, gorduroso, levemente mais ácido	0,6	2,1	0,0
2 : 1	50	laranjas, aromatizado, doce, levemente amargo, verde, cítrico, floral, levemente saponáceo, verde, gorduroso	0,4	2,1	0,2

37/47

38/47 [079] Emulsão de óleo em água de PUFA a base de Vitamina E TPGS pode ser usada para fortificar o GATORADE™ de laranja até 50 mg de EPA+DHA por 250 gramas da dose. O sensorial do GATORADE™ fortificado é aceitável no início do teste.

[080] A aceitabilidade organoléptica do GATORADE™ de Lima Limão fortificado pelas emulsões de óleo em água de PUFAs foi avaliada pela preparação das amostras a um nível de dose de 50 mg de EPA+DHA por 250 grama de dose e com diferentes antioxidantes. A fórmula base da emulsão clara, antes da adição de diferentes antioxidantes, usou a mesma razão de emulsificante:óleo que a do Exemplo 3:especificamente, Vitamina E TPGS (4,38%); óleo de peixe ômega-3 30TG (4,38%); propileno glicol (4,38%); açúcar (55,8%); água (27,9%); e glicerol (3,2%) (total 100%).

[081] Diferentes antioxidantes incluindo ácido cítrico, ácido ascórbico, extrato de chá verde da Taiyo International Inc. (Minneapolis, MN) e 20M de extrato de chá verde da Danisco Canada Inc. (Scarborough, Canada) foram adicionados separadamente para obter a concentração de antioxidantes desejada especificada na Tabela 5.

[082] Um estudo de meia-vida acelerada foi usado para estimar a meia vida do GATORADE™ fortificado. Todas as amostras foram armazenadas a 35°C no escuro e provadas a cada duas semanas. Os resultados são mostrados na Tabela

5.

[083] É possível usar a emulsão de óleo de peixe em água a base de Vitamina E TPGS para fortificar o GATORADE™ de Lima Limão com PUFAs. A bebida fortificada pode

39/47 ter uma meia vida de 6 a 8 meses.

Tabela 5. Avaliação organoléptica do GATORADE de Lima limão com 50 mg de EPA+DHA através da emulsão de óleo de peixe em água e com diferentes antioxidantes.

Composição da amostra a 35°C	Aceitabilidade do sabor	Sabor de peixe
Dia 1	Sem 2	Sem 4	Sem 6	Sem 8	Dia 1	Sem 2	Sem 4	Sem 6	Sem 8
1:1, sem antioxidantes ou AP^a na fase de água	1,8	3,2				0,2	1,4
0,8% ácido cítrico, 4,09% de óleo de peixe	1,3	3,4				0	1,4
0,5% ácido cítrico, 4,22% de óleo de peixe	1,8	3,8				0,2	2
0,5% ácido cítrico, 33,33% de HFCS^b	1,8	3,6				0,2	1,4
0,2% ácido cítrico	1,6	3,4				0	1,6
2% de ácido ascórbico	1,8	4				0,9	1,8
1% de ácido ascórbico, 3,97% de óleo de peixe	3,3	4,6				1	2,2
1% de ácido ascórbico,33,33% deHFCS	1,8	5				0	3,4

40/47

0,5% de ácido ascórbico	1,3	5,6	_{- -}	_{- -}	_{- -}	0	3	_{- -}	_{- -}	_{- -}
0,05% do Extrato de Chá Verde Danisco 20M	1,4	3,4	_{- -}	_{- -}	_{- -}	0	1	_{- -}	_{- -}	_{- -}
0,05% 20M, 33,33% de HFCS	1	3,6	_{- -}	_{- -}	_{- -}	0	0,8	_{- -}	_{- -}	_{- -}
0,1% do Extrato de Chá Verde Danisco 20M	1	2,4	3,3	3,6	5,2	0	0,4	1	1,5	3
0,05% do Extrato de Chá Verde Taiyo,	1,5	3,3	--	--	--	0,2	1,4	--	--	--
4,35% de óleo de peixe
0,1% do Extrato de Chá Verde Taiyo, 4,35%	2	3,3	--	--	--	0,4	1,2	--	--	--
de óleo de peixe
0,1% do Extrato de Chá Verde Taiyo,	1,4	3,6	--	--	--	0	1,8	--	--	--
33,33% de HFCS
0,2% do Extrato de Chá Verde Taiyo, 4,13%	1,8	2,4	3,2	3,6	4,7	0,4	0,8	1,2	1,8	3,2
de óleo de peixe
551 ppm AP, 5,8% de óleo de peixe	2,2	2,4	3,8	- -	- -	0,4	0,4	1,8	- -	- -

^aAP-Palmato de Ascorbil b

41/47

HFCS- Xarope de Milho com Alta Frutose

42/47 [084] Nota-se que alguns óleos de peixe já tem antioxidantes adicionados à eles. Por exemplo, óleos de peixe podem conter Duralox, que é uma mistura de ácido cítrico com tocoferol natural e extratos de alecrim misturados. Assim, os antioxidantes listados na Tabela 6 foram em adição àqueles já presentes nos óleos.

Exemplos Comparativos 13-23: Microemulsão clara a base de polissorbato [085] Vários exemplos foram preparados usando os ingredientes nas quantidades observadas na Tabela 6. O açúcar (Redpath Sugar Ltd., Toronto, Canada) foi dissolvido em água DI para fazer uma solução de açúcar em 50%. Polissorbato 80 (Sigma-Aldrich, Co., St. Louis, MO, USA), propileno glicol (Fisher Scientific Inc. Ottawa, Canada), polissorbato 85 (Sigma-Aldrich, Co., St. Louis, MO, USA), e óleo de ômega-3 (Ocean Nutrition Canada Limited, Dartmouth, Canada) foram então adicionados à solução de açúcar. A mistura foi, então, emulsificada até se tornar clara pela inspeção visual. O armazenamento foi a 4°C.

[086] Todas as emulsões permaneceram claras por mais de um ano pela checagem visual. Elas também permaneceram claras quando diluídas por água em qualquer razão. A transparência foi verificada visualmente contra água. Algumas foram verificadas por métodos espectroscópicos como divulgado acima. Por exemplo, a diluição da emulsão do Exemplo 16 na Tabela 2 a concentração de 0,9%, que produz 50 mg de EPA+DHA por 250 g de dose, teve absorbância de luz de 0,024A a 400 nm. Alguns cristais de açúcar cristalizaram fora da emulsão, mas isso não afetou a transpa43/47 rência da emulsão e a diluição da emulsão.

Tabela 6. Fórmula das emulsões feitas com emulsificantes a base de polissorbato e diferentes PUFAs.

	Exemplo	n. °
Ingredien-	13	14	15	16	17	18	19	20	21	22	23
tes (em
% em peso)
Polissorba-	52	59	43	43	43	43	42	42	43	42	35,
to 80	,1	,6	,5	,4	,5	,4	,0	,2	,4	,1	1
Polissorba-	--	3,	2,	2,	2,	2,	5,	5,	5,	5,	14,
to 85		0	2	3	2	3	8	4	5	0	2
Polietileno	41	29	21	22	21	22	21	21	20	21	20,
glicol	,7	, 9	,7	,2	,7	,2	,0	,1	,7	,8	1
Abimono 90	2,
LS	9
Açúcar	--	--	13	13	13	13	13	12	12	12	10,
			,6	,3	,6	,3	,0	,9	,5	,4	2
Água	--	--	13	13	13	13	13	12	12	--	--
			,6	,3	,6	,3	,0	,9	,5
Óleo ômega-	3,	7,	5,	5,	5,	5,	5,	5,	5,	5,	10,
3	2^C	5^a	4^a	6^B	4^a	6^b	3^d	6^e	3^f	6^g	3^g
HLB	14	14	14	14	14	14	14	14	14	14	13,
	,5	,8	,8	,8	,8	,8	,5	,5	,5	,6	8
Razão	17	8,	8,	8,	8,	8,	9,	8,	9,	8,	4,8
Emulsifi-	,2	3	5	2	5	2	1	5	2	4
cante/óleo
^A Óleo de Peixe	Ômega 3	Etil	Éster (660	mg/g EPA + DHA;
740 mg/g de Ω-3 total na	forma EE)
^BÓleo de Peixe Ômega 3	adaptado	para inverno (546 mg/g

44/47

EPA + DHA na forma TG) ^C Óleo de Peixe Ômega-3 30TG (270 mg/g EPA + DHA; 320 mg/g de Ω-3 na forma TG) ^D Óleo de Alga Ômega-3 adaptado para inverno (350 mg/g EPA + DHA) ^E Óleo de Peixe Ômega 3 adaptado para inverno Marinho 18/12 TG (250 mg/g EPA + DHA; > 300 mg/g de Ω-3 total na forma TG) ^F Cadeia lateral do óleo de peixe de Ômega-3 adaptado para inverno (420 mg/g EPA + DHA) ^G Óleo de Peixe de Ômega 3 adaptado para inverno XB 18/12 TG (287 mg/g EPA + DHA na forma TG) [087] Estes exemplos revelam que emulsões claras com PUFAs podem ser preparadas com emulsificantes a base de polissorbato, mas grande excesso destes emulsificantes particulares para o óleo são usados.

Exemplo Comparativo 24:

[088] O procedimento indicado no Exemplo 1 da Patente US 5.753.241 foi seguido, exceto pelo fato de que os emulsificantes divulgados aqui foram substituídos com Vitamina E TPGS (Zhejiang Medicine Company, Xinchang, Zhejiang, China), e etanol foi substituído por propileno glicol (Fisher Scientific Inc. Ottawa, Canada). Os ingredientes e quantidades são mostrados na Tabela 7. Ainda a emulsão foi homogeneizada a 34,47 MPa (5000 psi) usando Microfluidizer (Microfluidics, Newton, MA, USA) por 15 passagens a serem comparáveis ao Exemplo 6 na Tabela 1 acima onde a razão de emulsificante/óleo = 0,8.

Tabela 7.

45/47

Ingredientes	Peso (g)	Porcentagem (%)
Vitamina E TPGS	20,4	6,8
Óleo de Peixe	25,5	8,5
Propileno glicol	45	15
Água	191,4	63,8
Glicerol	17,7	5,9
Total	300	100

[089] A absorbância de luz da diluição (0,94 g da emulsão/100 g de água para render 50 mg de EPA+DHA por 250 g de água servindo a 400 nm é 0,419, que não é clara ou semiclara. A amostra correspondente na Tabela 1 (i.e., Exemplo 6) tem uma absorbância de luz de 0,098. Assim, a presença de açúcar fez uma grande diferença na clareza.

Exemplo Comparativo 25:

[090] O procedimento indicado no Exemplo 1 da Patente US 5.798.333 foi seguido exceto pelo fato de que a ciclosporina foi substituída por óleo de peixe 30TG. Os ingredientes e quantidades são mostrados na Tabela 8.

Tabela 8.

Ingredientes	Peso (g)	Porcentagem (%)
Vitamina E TPGS	8	28,6
Óleo de peixe (30 TG)	10	35,7
Propileno glicol	10	35,7
Total	28	100

[091] A absorbância de luz da diluição (0,23 g emulsão/100 g água para render 50 mg EPA+DHA por 250 g de dose de água) a 400 nm foi 1,237, que não é clara ou semi46/47 clara. A amostra correspondente na Tabela 1 (i.e., Exemplo 6) tem uma absorbância de luz de 0,098.

Exemplo Comparativo 26:

[092] O procedimento indicado na WO 2009/117152, página 155 a 157, foi seguido usando a fórmula na Tabela 2A (ix), mas uma quantidade reduzida da Vitamina E TPGS foi usada pra torná-la comparável ao Exemplo 6 na Tabela 1 aqui, que tem uma razão de emulsificante/óleo = 0,8. Os ingredientes e quantidades são mostrados na Tabela 9. Também, a amostra foi homogeneizada a 7400 rpm usando Polytron PT 6100 por 10 min ao invés de 850 rpm a 1200 rpm usando um homogeneizador reversível CJ-4E (Arde Barinco, Inc.)

Tabela 9.

Ingredientes	Fase	Peso (g)	Porcentagem (%)
Óleo de Peixe (30 TG)	Óleo	40	10
Água	Água	325,2	81
Saladizer (TIC Gum, White Marsh, MD)	Água	0,8	0,2
Vitamina E TPGS	Óleo	32	8
Saladizer	Óleo	0,254	0,06
Álcool benzílico	Óleo	2,0	0,5
Ácido Cítrico	Emulsão	1,12	0,3
Total		28	100

[093] A absorbância de luz da diluição (0,8 g de emulsão/100 g de água para render 50 mg de EPA+DHA por 250 g da dose de água) a 400 nm é de 2,162, que não é clara ou semiclara. A amostra correspondente na Tabela 1,

47/47 isto é, Exemplo 6, tem uma absorbância de luz de 0,098.

[094] Será aparente para aqueles versados na técnica que várias modificações e variações podem ser feitas na presente invenção sem se afastar do escopo ou âmbito da invenção. Outras modalidades da invenção serão aparentes para aqueles versados na técnica a partir da consideração do relatório descritivo e da prática da invenção divulgada aqui. Pretende-se que o relatório descritivo e os exemplos sejam considerados como exemplares somente, com um escopo e âmbito verdadeiro da invenção sendo indicados pelas reivindicações a seguir.

1/4

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Emulsão caracterizada pelo fato de que compreende :

a. de 4 até 15% em peso de um emulsionante, o qual é um polialquileno glicol derivado da vitamina E;

b. de 5 até 10% em peso de uma fase dispersa, em que a fase dispersa compreende um ou mais ácidos graxos poliinsaturados ou derivados dos mesmos;

c. de 20 até 25% em peso de água;

d. de 5 a 18% em peso de um cossolvente, e

e. de 40 até 55% em peso de um monossacarídeo, um dissacarídeo ou ambos, em que a razão do emulsionante para a fase dispersa é de 1,5 ou menos, e em que a quantidade combinada de água e cossolvente é de 50% em peso ou menos.
2. Emulsão, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o emulsionante está presente de

5,4 a 8,5% em peso; e/ou em que a fase dispersa está de 8 a 9% em peso; e/ou em que a água está de 22 a 24% em peso; e/ou em que o cossolvente está de 14 a 16% em peso; e/ou em que o monossacarídeo e/ou o dissacarídeo está de

44 a 49% em peso.
3. Emulsão, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a razão do emulsionante para a fase dispersa é de 1 a 0,5, preferencialmente de 1 a 0,7.
4. Emulsão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que a quantidade

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2/4 combinada de água e cossolvente é de 30 a 50% em peso, preferencialmente em que a quantidade total de água e cossolvente é de 36 a 40% em peso.
5. Emulsão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o emulsionante compreende succinato de tocoferol polietilenoglicol (TPGS) ou um análogo do mesmo.
6. Emulsão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a fase dispersa compreende óleo marinho, um óleo microbiano, ou um óleo derivado de uma planta, preferencialmente em que o microrganismo ou planta foi geneticamente modificado.
7. Emulsão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que a fase dispersa compreende ácido eicosapentaenoico (EPA), ácido docosa-hexaenoico (DHA), ácido eicosatetraenoico (AA), ácido octadecatrienoico (GLA), ácido octadecadienoico (LA) e/ou ácido docosapentaenoico (DPA), ésteres de alquila dos mesmos, ésteres de glicerídeo dos mesmos, sais dos mesmos, ou qualquer combinação dos mesmos, e/ou em que o cossolvente compreende propilenoglicol, glicerol ou uma mistura dos mesmos; e/ou em que o dissacarídeo está presente e compreende sacarose.
8. Emulsão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que a emulsão é substancialmente isenta de uma goma, e/ou é substancialmente isenta de álcool de benzila, e/ou é substancialmente isenta de fosfatidilcolina.

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9. Emulsão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que a emulsão tem uma absorbância a 400 nm de menos de 0,3 A, preferencialmente de menos de 0,1 A.
10. Emulsão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que a emulsão tem o tamanho de gotícula de 100 nm ou menos.
11. Bebida caracterizada pelo fato de que compreende a emulsão como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 10.
12. Método para produzir uma emulsão caracterizado pelo fato de que compreende:

a. emulsionar uma mistura compreendendo:

i. de 4 até 15% em peso de um emulsionante, o qual é um polialquileno glicol derivado da vitamina E;

ii. de 5 até 10% em peso de uma fase dispersa; e iii. de 5 a 18% em peso de um cossolvente;

em que a razão do emulsionante para a fase dispersa é de 1,5 ou menos;

b. combinar a emulsão da etapa a com uma solução compreendendo:

i. de 20 até 25% em peso de água;

ii. de 40 até 55% em peso de um monossacarídeo, um dissacarídeo, ou ambos;

em que a quantidade combinada de água e cossolvente é de 50% em peso ou menos; e

c. homogeneizar a mistura da etapa b por homogeneização de alta pressão.
13. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracPetição 870180037272, de 07/05/2018, pág. 10/19

4/4 terizado pelo fato de que a etapa de homogeneização é conduzida a 10,34 MPa (1500 psi) a 41,36 MPa (6000 psi) .
14. Método, de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que os componentes (i) a (iii) da dita mistura e/ou os componentes (i) a (ii) da dita solução são como definidos em qualquer uma das reivindicações 2 a 5 ou 7 a 10.
15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 14, caracterizado pelo fato de que a dita fase dispersa compreende um óleo marinho, óleo microbiano, ou óleo de alga.

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