BR112012009859B1

BR112012009859B1 - composição de diagnóstico

Info

Publication number: BR112012009859B1
Application number: BR112012009859A
Authority: BR
Inventors: Newton Ben; Wistrand Lars-Göran; Thaning Mikkel
Original assignee: Ge Healthcare As
Priority date: 2009-10-29
Filing date: 2010-10-28
Publication date: 2019-10-22
Also published as: US8815210B2; CN102596257A; AU2010311478B2; BR112012009859A2; CA2773685A1; IL218456A0; NZ598540A; MX2012005021A; JP2013509378A; CO6531477A2; IN2012DN02126A; PT2493511E; ZA201203505B; KR101545045B1; US20120328522A1; HRP20130991T1; PL2493511T3; IL218456A; EP2493511B1; WO2011051387A1

Abstract

composição de diagnóstico a presente invenção se refere a uma nova composição de diagnóstico para raio-x que apresenta um perfil de segurança cardíaca superior. a composição compreende um dímero não iônico iodado em um carreador farmaceuticamente aceitável. mais particularmente, a invenção fornece uma composição de diagnóstico compreendendo um composto i, um carreador farmaceuticamente aceitável, e um composto de sódio nela dissolvido e um composto de cálcio que fornece uma concentração de íon de sódio de 40 a 50 mm e uma concentração de íon de cálcio de o, 1 a o, 7 mm. a invenção também se refere aos métodos de formação de imagem que utilizam tais composições de diagnóstico.

Description

A presente invenção se refere a uma nova composição de diagnóstico para raio-X que apresenta um perfil de segurança cardíaca superior. A composição compreende um dímero não iônico iodado em um carreador farmaceuticamente aceitável. A invenção também se refere aos métodos de formação de imagem usando tal composição de diagnóstico.

Toda a formação de imagem de diagnóstico baseia-se na obtenção de diferentes níveis de sinais a partir de diferentes estruturas dentro do corpo. Assim, na formação de imagem por raio-X, por exemplo, para uma dada estrutura corporal a ser visível na imagem, a atenuação de raio-X por essa estrutura deve ser diferente daquela dos tecidos circundantes. A diferença de sinal entre a estrutura do corpo e seus arredores é frequentemente chamada de contraste e muito esforço tem sido dedicado aos meios de intensificação de contraste na formação de imagem de diagnóstico, visto que quanto maior o contraste entre uma estrutura corporal e seus arredores tanto maior a qualidade das imagens e tanto maior o seu valor para o médico que realiza o diagnóstico. Além do mais, quanto maior o contraste tanto menor as estruturas do corpo que podem ser visualizadas nos procedimentos de formação de imagem, isto é, o aumento de contraste pode levar ao aumento da resolução espacial. A qualidade de diagnóstico das imagens é fortemente dependente do nível de ruído inerente no procedimento de formação de imagem, e a relação do nível de contraste para o nível de ruído pode assim ser vista de representar um fator de qualidade de diagnóstico eficaz para as imagens de diagnóstico. Alcançar melhora em um tal fator de qualidade de diagnóstico tem sido e continua a ser um objetivo importante.

Nas técnicas tais como raio X, uma abordagem para melhorar o fator de qualidade de diagnóstico tem sido a de introduzir materiais de intensificação de contraste formulados como meios de contraste para a região do corpo a ser trabalhada. Assim, para raio-X, os primeiros exemplos de agentes de contraste foram sais de bário inorgânicos insolúveis que reforçaram a atenuação de raio-X nas zonas do corpo em que eles foram distribuídos. Nos últimos 50 anos o campo de agentes de contraste para raioX tem sido dominado pelos compostos contendo iodo solúvel. Os meios de contraste disponíveis comerciais (CM) contendo agentes de contraste iodados são geralmente classificados como monômeros iônicos tais como diatrizoato (comercializados, por exemplo, sob a marca comercial Gastrografen™), dímeros iônicos tais como ioxaglato (comercializados, por exemplo, sob a marca comercial Hexabrix™), monômeros não iônicos tais como iohexol (comercializados, por exemplo, sob a marca comercial Omnipaque™), iopamidol (comercializado, por exemplo, sob a marca comercial Isovue™), iomeprol (comercializado, por exemplo, sob a marca comercial lomeron™) e o dímero não iônico iodixanol (comercializado sob a marca comercial Visipaque™). A segurança clínica de meios de contraste para raio-X iodados tem sido continuamente melhorada nas últimas décadas através do desenvolvimento de novos agentes, de monômeros iônicos (Isopaque™) a monômeros não iônicos (por exemplo, Omnipaque™) e dímeros não iônicos (por exemplo, dímeros Visipaque™). No entanto, mesmo os meios de contraste para raio-X altamente refinados atualmente no mercado apresentam um baixo grau de efeitos colaterais clínicos indesejáveis, tais como a Nefropatia Induzida por Contraste (CIN), eventos cardíacos adversos, e reações adversas retardadas (DARS). Consequentemente, existe uma necessidade clínica de um novo e mais seguro meio de contraste para raio-X, especialmente no que diz respeito às investigações de diagnóstico envolvendo pacientes em que existe um risco elevado destes efeitos colaterais.

A utilidade dos meios de contraste é regulada em grande parte pela sua toxicidade, pela sua eficácia de diagnóstico, por efeitos adversos que eles podem ter sobre o indivíduo a qual o meio de contraste é administrado, e pela facilidade de produção, armazenagem e administração. A toxicidade e efeitos biológicos adversos de um meio de contraste são contribuídos pelos componentes do meio de formulação, isto é, da composição de diagnóstico, por exemplo, o solvente ou carreador assim como o próprio agente de contraste e os seus componentes tais como íons para os agentes de contraste iônicos e também pelos seus metabólitos.

O número de procedimentos de arteriografia coronariana continua a aumentar de acordo com as capacidades de expansão das intervenções coronarianas, incluindo a angioplastia coronariana transluminal percutânea, implante de stents, e administração intracoronariana de produtos terapêuticos. Mais de 70 milhões de procedimentos, uma maioria deles cardíaca relacionada, são executados em todo o mundo anualmente. Os efeitos colaterais graves causados pelos meios de contraste radiográficos iodados são raros, mas podem ocorrer em pacientes de alto risco e durante a intervenção coronariana percutânea.

Na arteriografia coronariana o sangue nas artérias coronárias deve de maneira ideal ser completamente substituído por um bolo de meios de contraste radiográficos iodados para maximizar a atenuação das radiografias e desse modo otimizar a formação de imagem de diagnóstico. Quando o meio de contraste substitui o sangue, as moléculas de meio de contraste causam efeitos quimiotóxicos e osmóticos nos vasos coronários e também alterações nas concentrações de eletrólito, viscosidade e tensão de oxigênio. Estas alterações podem influenciar a força contrátil e o ritmo cardíaco e causar fibrilação ventricular (VF). A injeção seletiva de meio de contraste nas artérias coronárias induz efeitos eletrofisiológicos e hemodinâmicos regionais. As arritmias ventriculares graves, assim como a cardiodepressão, são complicações conhecidas de arteriografia coronariana que podem estar relacionadas com os meios de contraste.

As WO 91/13636 e WO 90/11094, ambas da Nycomed AS (agora GE Healthcare AS), são direcionadas para meios de contraste para raio-X e suas formulações, incluindo diferentes sais. Existem também numerosos estudos sobre as vantagens das formulações de agentes de contraste para raio-X com a inclusão de sais, principalmente NaCl, na literatura. Os estudos foram executados em corações isolados de ratos (Jynge et al., Investigative Radiology 1993, 28, 20-25) e coelhos (Baath et al., Investigative Radiology 1993, 28, 223-227), em cães (Pedersen et al., Acad. Radiol. 1994, 1, 136-144) e em porcos. De particular relevância é o estudo de Chai et al. (Acad. Radiol. 2004, 11, 583-593) onde é mostrado que uma formulação de iodixanol contendo 19 mM de NaCl e 0,3 mM de CaCl₂apresenta uma frequência mais baixa de fibrilação ventricular do que o iodixanol isoladamente.

Jacobsen et al., Investigative Radiology 1993; 28, 917-924 mostram que as injeções rapidamente repetidas de meios de contraste em cães resultam em efeitos aditivos na inotropia e potencial de ação monofásica enquanto que a solução de Ringer não teve nenhum efeito. Isso foi investigado para se compreender como a angiografia na prática clínica, onde as injeções repetidas não são incomuns para encher toda a árvore coronária, pode induzir alterações nos parâmetros cardíacos e levar a complicações.

A formulação comercializada atual de iodixanol, 320 mgl/ml, contém 19 mM íons de sódio e 0,3 mM de íons cálcio (Visipaque™). Esta formulação foi experimentalmente demonstrada de apresentar um perfil de segurança cardíaca superior, em comparação com iodixanol sem sais adicionados, principalmente através de estudos in vivo em um modelo de porco cardíaco, mas também através de estudos em corações isolados de animal. Em estudos semelhantes, foi demonstrado que o iohexol também mostra uma tolerabilidade cardíaca aumentada quando formulado com sais adicionados, principalmente NaCl.

A WO 2009/008734 da GE Healthcare AS divulga uma nova classe de compostos e seu uso como agentes de contraste para raio-X. Os compostos são dímeros contendo dois grupos de fenila iodados ligados. A ponte que liga os dois grupos de fenila iodados é uma cadeia de C3 a C9 reta opcionalmente substituída por um a seis grupos de -OH ou OCH₃. Uma faixa de compostos é coberta pela fórmula geral (I) do pedido e muitos compostos específicos são sugeridos.

O composto I, que é um agente de contraste para raio-X dimérico específico, que cai dentro da fórmula I da WO 2009/008734, observou-se ter propriedades favoráveis:

Composto I: 5-[formil-[3-[formil-[3,5-bis(2,3diidroxipropilcarbamoil)-2,4,6-triiodofenil]amino]-2-hidroxipropil]amino]N,N’-bis(2,3-diidroxipropil)-2,4,6-triiodobenzeno-l,3-dicarboxamida.

Agora surpreendentemente, foi identificada uma nova composição de diagnóstico para raio-X que apresenta um perfil de segurança cardíaca superior em comparação com Visipaque™, como mostrado nos estudos in vivo similares como indicado acima.

Assim, em um primeiro aspecto a invenção fornece uma composição de diagnóstico compreendendo um composto I

um carreador farmaceuticamente aceitável;

e dissolvidos no mesmo um composto de sódio e um composto de cálcio que fornecem uma concentração de íon de sódio de 40 a 50 mM e uma concentração de íon de cálcio de 0,1 a 0,7 mM.

As propriedades físico-químicas do Composto I são observadas abaixo. Outras informações sobre os métodos utilizados, além da biodistribuição e informação sobre a toxicidade aguda, são fornecidas no Exemplo 1.

Ligação de proteína: A ligação do Composto I à albumina sérica humana (HSA) foi determinada utilizando um método de diálise em equilíbrio. A ligação do Composto I com a albumina sérica humana foi determinada de ser muito baixa, 3,1 ± 1,3 %, o que confirma a interação insignificante da substância com proteínas endógenas.

Coeficiente de divisão: A capacidade hidrófila do Composto I, como determinada através da divisão entre octanol e água, mostrou que o Composto I é muito hidrófilo com um logP de -4,28.

Viscosidade: A viscosidade do composto I foi determinada a 20°C e 37°C em três concentrações diferentes. Os resultados são mostrados na Fig. 4. A viscosidade em 320 mgl/ml e 20°C é ao redor de 24 mPas.

Osmolalidade: A osmolalidade do Composto I foi determinada em quatro concentrações diferentes, 204, 254, 310 e 324 mgl/ml. A osmolalidade do Composto I em 320 mgl/ml é de 136 mOsm/kg.

Uma nova composição de diagnóstico para raio-X que apresenta um perfil de segurança cardíaca superior em comparação com Visipaque™, foi identificada. Além da segurança do próprio composto, isto é, o composto que fornece o contraste, os componentes adicionais da composição de diagnóstico são cruciais.

O estudo de Chai et al. mostra que uma formulação de iodixanol contendo 19 mM de NaCl e 0,3 mM de CaCl₂ apresenta uma menor frequência de fibrilação ventricular (FV) do que o iodixanol isoladamente. Este estudo foi realizado em porcos onde o meio foi injetado diretamente dentro da artéria coronária esquerda (LCA) que tinha sido anteriormente ocluída. Nenhuma ocorrência de fibrilação ventricular foi observada na injeção de Visipaque™. Como parte do teste de segurança do Composto I, e identificação de uma formulação para isso, as formulações de Composto I foram testadas e comparadas com Visipaque™. Visto que no estudo anteriormente publicado (acima) a injeção intracoronária de 20 ml de iodixanol foi realizada durante um tempo de injeção de 40 s e nenhum caso de VF ocorreu, o volume de injeção foi aumentado para 25 ml durante um período de 62,5 s para aumentar os casos de VF para fins de comparação. Além disso, as soluções de teste e de referência foram seletivamente injetadas na artéria coronária descendente anterior esquerda (LAD) de modo a aumentar ainda mais a sensibilidade do modelo. Neste volume elevado, mesmo o Visipaque apresentou uma frequência significativa de fibrilação ventricular, 100 %. (Figura 3). As experiências são delineadas no Exemplo 2.

Para nossa surpresa, o novo agente de contraste para raio-X Composto I, quando formulado em uma composição de diagnóstico com tanto quanto 40 a 50 mM de NaCl e 0,1 a 0,7 mM de CaCl₂, não apresentou nenhuma ocorrência de fibrilação ventricular (Ver a Figura 3 e a Tabela 3 para detalhes).

Quando se comparam os resultados dos dois estudos diferentes, um aumento na frequência de fibrilação ventricular de 0 % a 100 % foi observado com Visipaque. No entanto, mesmo na dose elevada, o agente de contraste para raio-X dimérico Composto I não apresentou nenhuma fibrilação ventricular. A maior diferença é que o Composto I foi formulado com 45 mM de NaCl neste estudo, que é significativamente mais elevado do que aquele de Visipaque (19 mM). Embora nenhum efeito significativo fosse observado na fibrilação ventricular (FV) com a concentração de íon de cálcio entre 0,1 e 0,7 mM, houve uma redução significativa na pressão arterial sistólica (SAP) e da pressão sistólica ventricular esquerda (LVP) quando menos cálcio estava presente (Tabela 2).

Estes dados indicam que o principal fator que influencia a frequência de fibrilação ventricular é a concentração de cloreto de sódio, enquanto que o cálcio possui um efeito significativo sobre a pressão arterial sistólica e a pressão sistólica ventricular esquerda (LVSP). De fato, um estudo em porcos normais mostrou que embora a injeção LAD de uma composição de composto I contendo 45 mM de NaCl sem CaCl₂ adicionado tenha resultado em uma redução na LVSP 45 a 70 segundos após a injeção (média de -5,7 mm Hg normalizado com Lactato de Ringer), a injeção de uma composição de composto I contendo 45 mM de NaCl e 0,5 mM de CaCl₂ manteve a LVSP em uma maneira semelhante ao Visipaque (-0,3 e +0,1 mm Hg normalizado com Lactato de Ringer, respectivamente) (Exemplo 2b). Além disso, a injeção de lopamidol na mesma taxa e volume induziu a VF em cada ocasião (total de 9 injeções em 3 porcos) entre aproximadamente 27 a 50 segundos após o início da injeção (isso limitou qualquer análise da resposta de LVSP). Estes resultados indicam ainda que a presença de 0,5 mM de CaCl₂ na composição de Composto I é benéfica e limita quaisquer efeitos negativos sobre a LVSP de uma maneira semelhante à Visipaque. Além disso, os eletrólitos adicionados presentes na composição de diagnóstico do Composto I e Visipaque podem reduzir a propensão para induzir a VF em comparação com o lopamidol que não possui nenhum eletrólito adicionado. As quantidades e relações dos eletrólitos estudados são fornecidas na tabela 4 do Exemplo 2b.

Em um estudo de mais injeções rápidas (40 ml, a 5 ml/s) a pressão sistólica ventricular esquerda foi mantida e semelhante àquela observada após a administração de Lactato de Ringer e Visipaque quando o Composto I em uma composição com 45 mM de NaCl e 0,5 mM de CaCl₂ foi injetado seletivamente à LAD de porcos normais. Ao contrário, a injeção de lopamidol, que não contém nenhum eletrólito adicionado, induziu uma redução significativa na LVSP (Exemplo 2c).

Além disso, o lopamidol induziu um aumento substancial na dP/dt (69 %) enquanto que o Composto I foi semelhante ao Lactato de Ringer e Visipaque a este respeito (um aumento modesto de até 30 %). Considera-se que a presença e relação dos eletrólitos de sódio (Na) e cálcio (Ca) nas formulações do Composto I e Visipaque estudados, que estão mais próximas da composição equilibrada de Na/Ca de lactato de Ringer e do fluido intersticial, contribuíram para uma manutenção superior de função cardíaca em comparação com aquela seguinte a injeção de lopamidol, que não contém nenhum eletrólito adicionado. As quantidades e relações dos eletrólitos são fornecidas na Tabela 5 do Exemplo 2b.

Em uma outra forma de realização da invenção, a composição da invenção compreende um composto de sódio que fornece uma concentração de íons de sódio de 42 a 47 mM, e ainda mais preferivelmente uma concentração de íons de sódio de 44 a 46 mM, e o mais preferível uma concentração de íons de sódio de 45 mM.

Em mais outra forma de realização da invenção, a composição da invenção compreende um composto de cálcio que fornece concentração de íons de cálcio de 0,3 a 0,6 mM, e ainda mais preferivelmente uma concentração de cálcio de 0,4 a 0,5 mM e o mais preferível uma concentração de íons de cálcio de 0,5 mM.

Neste aspecto, a relação entre a concentração de íons de sódio e a concentração de íons de cálcio deve estar entre 57 e 500, tal como entre 63 e 117, mais preferivelmente entre 70 e 156, mais preferivelmente entre 85 e 115 e o mais preferível entre 88 e 95.

Em um segundo aspecto, a invenção proporciona uma composição de diagnóstico compreendendo um composto I

Composto I um carreador farmaceuticamente aceitável;

e dissolvidos no mesmo um composto de sódio e um composto de cálcio em que a relação entre a concentração de íons de sódio e a concentração de íons de cálcio está entre 40 e 45, e é de preferência 43. Isto é para refletir as concentrações de eletrólito de uma composição de lactato de Ringer.

O composto de sódio e o composto de cálcio da composição podem ser fornecidos na forma de sais, isto é, os compostos incluem contra-íons fisiologicamente toleráveis, por exemplo, selecionados do grupo de cloreto, sulfato, fosfato e carbonato de hidrogênio. Preferivelmente, o composto de sódio é o cloreto de sódio e o composto de cálcio é o cloreto de cálcio.

O carreador farmaceuticamente aceitável é uma solução aquosa, de preferência água pura.

O sódio é essencial para a despolarização do miocárdio, que depende de uma corrente d e Na⁺ interna. Acreditamos que a adição de 40 a 50 mM de íons de sódio, e de preferência 45 mM de NaCl, ao Composto I o leva mais próximo da concentração intersticial de Na⁺ normal do que iodixanol +19 mM Na⁺/L. Assim, o Composto I pode ser mais fisiológico e mais capaz de manter o potencial de ação dos canais de sódio rápidos, contrariando assim o potencial de ação de “resposta lenta” motivado pelo pouco ou nenhum sódio.

As investigações anteriores demonstraram que a adição de pequenas quantidades de sódio (10 a 30 mmol/L) ao meio de contraste não iônico pode diminuir o risco de fibrilação ventricular (FV) destes meios de contraste. No entanto, os estudos mostram também que a adição de mais sódio ao meio de contraste também pode aumentar a inotropia negativa, como indicado pela pressão arterial sistólica reduzida/pressão sistólica ventricular esquerda (SAP/LVP). Para manter as conexões de sódio-cálcio (Na-Ca) extracelulares e intracelulares normais, a adição de cálcio ao meio de contraste não iônico reduz os efeitos inotrópicos negativos. A questão chave, contudo, é quanto de cálcio deve ser adicionado para evitar o aumento da inotropia negativa. A adição de 19 mM de NaCl e 0,3 mM de CaC12 ao iodixanol 320 mg I/ml na formulação de Visipaque foi considerada ideal a fim de minimizar os distúrbios fisiológicos tais como VF e aumento da inotropia negativa durante a angiografia coronariana.

Em nossos estudos, o benefício de CaCl₂ no Composto I contendo 45 mM de NaCl foi confirmado (Tabela 3). Uma formulação (Fl) com 0,1 rnM de CaCl₂ induziu a SAP e a LVP significativamente mais baixa do que a formulação com 0,3 mM de CaCl₂ (F3) ou 0,7 rnM de CaCl₂ (F5), respectivamente. A formulação de Composto I com 0,3 mM de CaCl₂ causou SAP mais baixa do que a formulação com 0,7 mM de CaCl₂. Daí resulta que a adição de íons de cálcio nos meios de contraste pode neutralizar a inotropia negativa causada pela adição de sódio.

No entanto, existe um equilíbrio crítico entre os íons de sódio e cálcio. A adição de concentrações apropriadas de sódio e cálcio ao meio de contraste não iônico diminui o risco de VF e reduz os efeitos adversos sobre a força contrátil. A adição de muito sódio diminui a força contrátil do miocárdio. Este efeito é neutralizado pela adição de íons de Ca. A formulação do Composto I, contendo 45 mM de NaCl e 0,7 mM de CaCl₂ (F7), parece ser a melhor formulação porque não causou nenhuma VF e manteve mais inotropia do que as formulações Fl e F3. No entanto, os efeitos hemodinâmicos da formulação F5 do Composto I, entretanto, foram iguais àqueles do Visipaque, desse modo uma concentração de cálcio entre F3 e F5 é preferível. Assim, em uma forma de realização preferida, a composição da invenção compreende 45 rnM de NaCl e 0,5 mM de CaCl₂.

A segurança intravenosa e intra-arterial desta composição de Composto I foi mostrada em um estudo separado. Neste estudo, os efeitos cardiovasculares do Composto I em uma composição de 45 mM de NaCl e

0,5 mM de CaCl₂ foram avaliados em três níveis de dose in vivo em um modelo de suíno agudo. Em resumo não houve mudanças globais para o desempenho do miocárdio, quando a composição foi administrada através da via intravenosa e intra-arterial. O estudo é ainda descrito no Exemplo 3.

Geralmente, os meios de contraste iodados podem causar reações de hipersensibilidade tardia em pacientes susceptíveis a partir de 1 hora a vários dias após a exposição. Estas reações são principalmente erupções cutâneas não graves, tais como erupções maculares, maculopapulares e semelhantes à urticária. As reações adversas retardadas induzidas por meios de contraste (DARs) tais como erupções cutâneas parecem ser motivadas pelas células T reativas ao meio de contraste que, após reconhecer os meios de contraste, proliferam e subsequentemente orquestram uma reação inflamatória na pele. Foi avaliado um modelo de proliferação das células T in vitro designado para prever a frequência relativa com que o meio de contraste, tal como o Composto I, irá causar reações cutâneas tardia em pacientes após a administração intravascular. Dois meios de contraste, iodixanol e iohexol, com taxas conhecidas de reações cutâneas retardadas, e o novo meio de contraste, Composto I, foram rastreados (2 e 5 mg I/ml) durante a proliferação de células T in vitro em células mononucleares do sangue periférico esgotadas CD25⁺ a partir de 100 doadores que representam as frequências de HLA-DR da população mundial. As respostas de células T positivas foram avaliadas de acordo com protocolos publicados e os valores do índice de estimulação (resposta positiva > 1,9). A toxicidade in vitro foi testada pela medição da viabilidade celular das primeiras 10 amostras de doadores incubadas com o meio de contraste de teste (5 mg I/ml). Os resultados foram que todos os principais alótipos de HLA-DR foram representados com uma frequência equivalente à da população mundial. Nenhum meio de contraste testado pareceu ter um efeito significativo sobre a viabilidade celular. O Composto I tinha menos amostras de doadores de proliferação de células T positivas em comparação com iodixanol e iohexol em ambas as concentrações.

Para o iodixanol e o iohexol, as respostas de proliferação de células T para a maioria dos doadores ocorreram nos dias 7 e 8; a significância estatística favoreceu uma resposta de proliferação reduzida para o Composto I no dia 8. Nas conclusões, o modelo com sucesso estabeleceu a frequência relativa com a qual os meios de contraste causaram a ativação das células T in vitro. Os resultados se correlacionaram com a frequência relatada de reações cutâneas tardias com dois meios de contraste comercializados e identificaram uma frequência mais baixa com relação ao Composto I.

Os resultados, portanto, indicam que o Composto I possui a capacidade mais baixa para estimular a proliferação das células T in vitro em comparação com iodixanol e iohexol. Dada a associação mais frequente de DAR com os meios de contraste diméricos, nossa descoberta de que um dímero não iônico intimamente relacionado com iodixanol não estimula a proliferação de células T in vitro na mesma extensão como o iodixanol, ou de fato na mesma medida que o monômero iohexol, é de considerável interesse. Pois sabe-se agora que a proliferação de células T realça a DAR, os nossos dados sugerem que uma estrutura dimérica per se não pode em si causar uma maior frequência de proliferação de células T. A diferença estrutural chave entre o Composto I e iodixanol é que 2 grupos de acetila em iodixanol foram substituídos por 2 grupos de formila no Composto I. Esta modificação tem um efeito sobre a estrutura ligante da molécula, conformação e comportamento físico-químico, e surpreendentemente o Composto I como uma capacidade mais baixa para estimular a proliferação de células T in vitro do que iodixanol e iohexol. Portanto, uma composição de diagnóstico de acordo com os primeiros aspectos da invenção é esperada de causar menos reações de hipersensibilidade tardias do que os meios de contraste comercializados tais como Omnipaque™ (Iohexol) e Visipaque™ (iodixanol).

O Composto I pode ser preparado como delineado na WO 2009/008734. Um procedimento geral é delineado nas páginas de 16 a 20, e um método específico para a preparação é fornecido no Exemplo 1 da WO 2009/008734. O pedido WO 2009/008734, com a sua descrição de um processo para a preparação é por meio desta incorporado por referência.

O Composto I pode existir em várias formas isoméricas devido aos átomos de carbono quirais. Além disso, o composto apresenta exo/endo isomerismo devido à rotação restrita da ligação de N-CO na função de formila causada pela proximidade do átomo de iodo volumoso. Ambos os produtos enantiomericamente puros assim como as misturas de isômeros ópticos são incluídos.

A composição de diagnóstico da invenção está em uma concentração pronto para uso. Geralmente as composições em uma forma pronta para uso terão concentrações de iodo de pelo menos 100 mg I/ml, de preferência pelo menos 150 mg I/ml, com concentrações de pelo menos 300 mg I/ml, por exemplo, 320 mg I/ml sendo preferível. A composição de diagnóstico de preferência ainda inclui carreadores ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos de tais são ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) e tris(hidroximetil)amino metano (TRIS).

A composição de diagnóstico da invenção é de preferência para utilização como um meio de contraste para raio-X no diagnóstico por raio-X ou formação de imagem por raio-X. A composição pode ser administrada como uma injeção de bolo ou por infusão. Além disso, a composição pode ser administrada pela administração intravascular, intravenosa ou intra-arterial. Altemativamente, a composição também pode ser administrada por via oral.

Em um terceiro aspecto, a invenção fornece a utilização de um Composto I

Composto I para a fabricação de uma composição de diagnóstico para uso no diagnóstico de raios-x, em que a composição compreende um carreador farmaceuticamente aceitável;

Em mais outro aspecto, a invenção proporciona um método de diagnóstico compreendendo a administração de uma composição de diagnóstico da invenção a um corpo humano ou animal, examinando o corpo com um dispositivo de diagnóstico e compilação de dados a partir do exame. No método de diagnóstico o corpo também pode ser pré-administrado com a composição de diagnóstico.

Em mais outro aspecto, a invenção fornece um método de detecção de formação de imagem in vivo compreendendo as seguintes etapas;

i) administrar uma quantidade detectável da composição de diagnóstico da invenção;

ii) deixar a composição administrada distribuir;

iii) detectar os sinais emitidos pelo composto I da composição distribuída, iv) gerar uma imagem representativa do local e/ou quantidade de dito sinal.

O método de formação de imagem é um método de formação de imagem por raio-X e em uma forma de realização preferida deste aspecto, o método de detecção é um método de arteriografia coronária, e mais preferivelmente a composição de diagnóstico é administrada como uma injeção de bolo nas artérias coronárias.

Em mais outro aspecto, a invenção fornece uma composição da invenção para uso na formação de imagem de raio-x ou diagnóstico, tal como na arteriografia coronariana.

Breve descrição dos desenhos:

A Figura 1 representa uma comparação da distribuição de radioatividade em ratos Wistar machos e fêmeas em 48 horas após a administração de Composto I rotulado com [ I],

A Figura 2 representa a frequência de fibrilação ventricular causada pela injeção de manitol, manitol + sódio e cálcio adicionados, iodixanol + manitol, Visipaque™ e solução de Ringer. Os dados obtidos de Chai et al.

A Figura 3 representa a frequência de fibrilação ventricular causada pela injeção de composições de Composto I, compreendendo diferentes concentrações de cloreto de cálcio, em comparação com as injeções de Visipaque. O volume de injeção foi de 25 ml durante um período de 62,5 s e as soluções foram seletivamente injetadas na LAD.

A Figura 4 representa a viscosidade do Composto I a 20°C e 37°C versus concentração.

A Figura 5 representa o efeito do Composto I (com e sem Ca adicionado) e Visipaque em LVSP 45 a 70 segundos a partir do início da injeção na LAD de porcos normais normalizados para a injeção de lactato de Ringer (LR).

A Figura 6 representa o efeito sobre os parâmetros cardiovasculares após a injeção de 40 ml (5 ml/s) de Lactato de Ringer, Composto I, Visipaque ou lopamidol na LAD de porcos normais.

Exemplos:

Exemplo 1. Propriedades físico-químicas, toxicidade aguda e dados de biodistribuição de Composto I.

Ligação à proteína:

A ligação do Composto I à albumina de soro humano (HSA) foi determinada utilizando um método de diálise em equilíbrio. Uma solução de matéria-prima do Composto I (5,0 mg/ml em salina tamponada de fosfato (PBS)) foi misturada com citrato:plasma humano em uma relação de 1:9. O equilíbrio foi realizado em um Diachem Dianorm Dialyser contra uma salina tamponada de fosfato aquosa que utiliza uma membrana Diachem 10.17 MW cutoff 10000 e foi realizado durante 25 horas. A análise das soluções foi executada utilizando um instrumento ICP-AES. Além disso, as soluções de PBS reforçadas também foram equilibradas em comparação com as soluções de plasma humano submetidas a citrato para assegurar que o equilíbrio foi obtido. A ligação do Composto I à albumina de soro humano foi determinada de ser muito baixa, 3,1 ± 1,3 %, o que confirma a interação insignificante da substância com as proteínas endógenas. Como uma referência, a ligação de iodixanol à HSA foi determinada em 0,4 ± 0,9 %.

Coeficiente de divisão.

Como uma medida da capacidade hidrófila do Composto I, o coeficiente de divisão entre octanol e água foi determinado. A água (5 ml) contendo a substância de teste (0,3 mg/ml) foi agitada com 15 ml de n-octanol até que o equilíbrio tenha sido obtido. A fase aquosa foi separada por centrifugação e analisada por HPLC (HP1100 equipado com uma coluna Discovery Cl8, 100 x 2,1 mm) usando a detecção UV em 244 nm e um fluxo de 0,3 ml/min. As condições de HPLC isocráticas foram utilizadas, 8 % de acetonitrila em água (v/v). A fase de octanol (12,5 ml) foi extraída com água (0,75 ml) até que o equilíbrio tenha sido obtido e as fases foram separadas por centrifugação. A fase aquosa foi analisada por HPLC utilizando as condições detalhadas acima. Tanto o octanol quanto a água foram pré-saturados com água e octanol, respectivamente, antes das experiências de coeficiente de divisão. A capacidade hidrófila do Composto I, como determinada através da divisão entre octanol e água, mostrou que o Composto I é muito hidrófilo com um logP de -4,28. Como uma comparação, o logP correspondente de iodixanol foi determinado em -4,02. O valor de literatura relatado é -4,05. A capacidade hidrófila aumentada do Composto I em relação ao iodixanol é confirmada pelo seu comportamento de HPLC. Viscosidade.

A viscosidade do Composto I foi determinada em duas temperaturas diferentes, 20°C e 37°C e três concentrações diferentes, 246, 295 e 313 mg I/ml. As soluções de teste foram isotônica através do ajuste da osmolalidade com NaCl e foram esterilizadas por autoclivagem. A densidade das soluções foi determinada usando um medidor de densidade, DMA58 (Anton Paar). Uma técnica de tubo U calibrado foi utilizada, onde o tempo de queda foi utilizado como uma medida da viscosidade dinâmica. A viscosidade do composto I foi determinada em 20°C e 37°C em três diferentes concentrações. Os resultados são mostrados na Fig. 4. Em comparação com Visipaque, a viscosidade em 320 mgl/ml e 20°C é semelhante, em tomo de 24 mPas.

Osmolalidade:

A osmolalidade do Composto I foi determinada em quatro concentrações diferentes, 204, 254, 310 e 324 mgl/ml. Um osmômetro com pressão de vapor Vapro 5520 da Vapro Inc. foi usado. A osmolalidade do Composto I mostra uma conexão com a concentração que está próxima da linear. A osmolalidade do Composto I em 320 mgl/ml é menor do que aquela do iodixanol, 136 mOsm/kg vs 210 mOsm/kg a 320 mgl/ml.

Toxicidade aguda:

Ratos Sca:SD machos adultos jovens (Scanbur, Suécia), pesando 200 ± 20 g, foram injetados por via intravenosa em uma taxa de 1,2 ml/min com um Composto I (340 mgl/ml, 286 mosmol/kg), iodixanol (321 mgl/ml, 284 mosmol/kg), manitol de controle osmótico (283 mosmol/kg), ou salina (290 mosmol/kg), administrado como 2 doses separadas de 4 horas de intervalo. Para os animais mortos nesse ínterim (dia 2 pós-tratamento), o Composto I e iodixanol foram dosados em 8, 10 e 12,8 gl/kg, correspondendo aos volumes de dose totais de 23,7, 29,7 e 38,0 ml/kg, e 25, 31,3 e 40 ml/kg, respectivamente, enquanto que para o manitol e salina, o volume da dose foi de 40 ml/kg. Para os animais mortos terminais de 7 dias, haviam 4 grupos de dose; Composto I e iodixanol (12,8 gl/kg), e salina e manitol (40 ml/kg). Em todos os casos, cada grupo incluía 8 animais.

As seguintes avaliações foram feitas durante o estudo, sinais clínicos, pesos corporais e sangue para hematologia e química clínica nos dias 0, 2 e 7, e observações macroscópicas, peso de órgãos e exame histomorfológica dos tecidos dos animais mortos por injeção intravenosa de tiopental em excesso no dia 2 ou 7. O dia da dosagem foi definido como o dia 0. Os parâmetros bioquímicos clínicos (Na, K, Cl, PO₄, Ca, AST, ALT, ALP, colesterol, creatinina, CK, GGT, TG (triglicerídeo), bilirrubina total, proteína total, uréia, albumina, LDH e GLDH foram medidos em um Beckman Synchron CX5 a 37°C. Os parâmetros de hematologia (WBC, relação diferencial de WBC, RBC, WBC/RBC, Hgb, PLT, HCT, MCH, MCHC, MCV, MPV e RDW) foram analisados com um analisador hematológico automatizado Abbott Cell-Dyn 3500 CS. Os rins de controle de salina e o Composto I 12,8 gl/kg e os grupos foram de iodixanol foram mergulhados em 10 % fixo de formalina tamponada neutra, processados em cera de parafina, seccionados em uma espessura nominal de 5 pm, manchados com hematoxilina e eosina e examinados por microscopia óptica.

Os dados foram analisados por ANO VA unidirecional paramétrica, seguido pelo teste após o procedimento de Dunnett, utilizando os grupos de salina de 2 dias e 7 dias para comparação com os grupos de iodixanol e Composto I de 2 dias e 7 dias. A análise estatística foi aplicada no dia 1 (linha de base), dia 2 e dia 7.

Biodistribuição:

Para cada ponto de tempo (2, 20 min, 1, 2, 4, 24, 48 horas) 3 animais de cada sexo foram anestesiados com isoflurano. Cada animal de estudo recebeu 2 injeções dentro de aproximadamente 20 segundos. A primeira injeção foi uma formulação de Composto I (não radioativa) em —320 mgl/ml, administrada para fornecer uma dose química total de ~1,6 gl/kg através de uma veia da cauda específica (esquerda ou direita). Assim que possível mais tarde (dentro de aproximadamente 20 segundos) o Item de Teste de Composto I [¹²³I] radioativo (~1 a ~8 MBq, até 350 ug) foi injetado como um bolo intravenoso na veia da cauda oposta. Esta abordagem permitiu que a quantidade de radioatividade administrada fosse ajustada de acordo com o momento de dissecção (estudo dia 1, 2 ou 3) sem significativamente alterar a dose de produto químico total de Composto I. Os animais foram então colocados em gaiolas de metabolismo para a coleta de urina e fezes até que o tempo apropriado após a injeção de Composto I rotulado. Neste momento, os animais foram novamente anestesiados com isoflurano e sacrificados por deslocamento cervical. Os órgãos e tecidos selecionados (sangue, rins, bexiga e urina, pulmão, fígado, estômago, intestino delgado e grosso, coração, testículos, ovários, útero e fezes) foram removidos juntamente com a cauda, que foi avaliada como o local de injeção. A quantidade de radioatividade nos órgãos selecionados, tecidos e fezes foi depois avaliada utilizando um contador gama de cristal duplo automático e um sistema de análise. Resultados de toxicidade aguda:

Não foi observado nenhum sinal clínico adverso nos ratos tratados com salina ou manitol, enquanto que naqueles tratados com o Composto I e iodixanol, depressão branda a moderada e movimentos descoordenados e fraqueza/inatividade foram vistos, assim como edema e eritema das extremidades. Estes efeitos começariam 10 a 20 min após a primeira administração e durariam de 2 a 3 h, mas sem uma resposta de dose clara. As análises da hematologia e os dados de química clínica indicaram que não houve nenhum efeito adverso toxicologicamente significativo em qualquer um dos grupos.

Nos rins, as principais descobertas relacionadas ao tratamento foram a formação de vacúolos citoplasmáticos dos túbulos proximais, e nos glomérulos, dilatação do espaço de Bowman contendo material proteico. No dia 2, a gravidade da formação de vacúolos foi maior naquele iodixanol apresentado em comparação ao Composto I. Durante o Dia 7, a gravidade da formação de vacúolos foi um pouco menor em comparação com o Dia 2 em ambos os grupos, como foi a dilatação espacial de Bowman e a presença de material proteico.

Tabela 1 - Sumário das principais descobertas histomorfológicas nos rins:

Formação de vacúolos dos Glomérulo: destilação Glomérulo: material túbulos proximais do espaço de proteico do espaço de

Browman Browman

	No. de	Dia da	Item de	Dose	Rim	Rim	Rim	Rim	Rim direito	Rim
Grupo	ratos	necropsia	teste	(gl/kg)	esquerdo	direito	direito	direito		direito
					0,0,0,0	ο,ο,ο,ο	ο,ο,ο,ο	Ο,Ο,Ο,Ο	ο,ο,ο,ο	Ο,Ο,Ο,Ο
1	8	2	Salina	-	0,0,0,0	ο,ο,ο,ο	ο,ο,ο,ο	Ο,Ο,Ο,Ο	ο,ο,ο,ο	Ο,Ο,Ο,Ο
			Compos		3,3,3,3	3,4,3,3	Ρ,Ρ,Ο,Ρ,	ο,ο,ο,ο,	Ρ,Ρ,Ο,Ρ,	Ο,Ο,Ο,Ο,
5	8	2	to I	12,8	3,3,3,3	3,3,3,3	0,0,0,P	Ρ,Ο,Ρ,Ο	0,0,0,Ρ	Ρ,Ο,Ρ,Ο
			lodixano		4,4,4,4,	4,4,4,4,	Ρ,Ρ,Ο,Ο,	Ρ,Ρ,Ρ,Ρ,	Ρ,Ρ,Ο,Ο,	Ρ,Ρ,Ρ,Ρ,
8	8	2	1	12,8	4,4,4,4	4,4,4,4	Ρ,Ο,Ρ,Ρ	Ρ,Ρ,Ρ,Ρ	Ρ,Ο,Ρ,Ρ	Ρ,Ρ,Ρ,Ο
					0,0,0,0	ο,ο,ο,ο	ο,ο,ο,ο	ο,ο,ο,ο	Ο,Ο,Ο,Ο	Ο,Ο,Ο,Ο
9	8	7	Salina	-	0,0,0,0	ο,ο,ο,ο	ο,ο,ο,ο	ο,ο,ο,ο	Ο,Ο,Ο,Ο	Ο,Ο,Ο,Ο
			Compos		3,3,2,2,	3,3,2,2,	0,0,Ρ,Ρ,	ο,ρ,ο,ο,	ο,ο,Ρ,Ρ,	Ο,Ρ,Ο,Ο,
10	8	7	to I	12,8	2,2,3,3	3,2,3,3	ο,ο,Ρ,Ο	0,0,0,Ρ	0,0,Ρ,Ο	0,0,0,Ρ
			lodixano		3,3,2,2,	3,3,2,2,	Ο,Ο,Ο,Ο,	ο,ο,ο,ο,	Ο,Ο,Ο,Ο,	ο,ο,ο,ο,
11	8	7	1	12,8	3,3,3,3	3,3,3,3	Ρ,Ο,0,0	0,0,Ρ,Ο	Ρ,Ο,0,0	ο,ο,Ρ,Ο
Chave para conclusões: 0 = não presente; P =	Presente,	1 = mínimo	, 2 = suave, 3	= moderado, 4 = marcado	; 5 = grave.

Resultados da biodistribuição:

Após a administração intravenosa o Composto I rotulado com [¹²³I] foi rapidamente excretado com > 80 % de dose injetada (id) presente na bexiga e na urina 2 horas após a injeção. Os níveis no sangue diminuíram de 21 % id em 2 minutos após a injeção a 0,6 % id 2 horas após a injeção. Houve uma pequena, mas significativa, quantidade de excreção através da via fecal, que se mostrou ligeiramente maior em animais fêmeas (14,3 % id nas fezes) em comparação com os animais machos (8,2 % id nas fezes) em 48 horas após a injeção, embora esta diferença não fosse estatisticamente significativa. Menos do que 2 % id foram retidos no corpo 48 horas após a injeção de Composto I rotulado, com aproximadamente 0,5 % retido nos rins, 0,1 % retido no fígado e menos do que 1 % na carcaça restante (Figura 1), todos dos quais tinham diminuído ainda mais a partir do instante de 24 horas. Isto provavelmente reflete a excreção lenta contínua do

Composto I retido no corpo após a fase inicial de excreção rápida. Não houve retenção de radioatividade nos órgãos reprodutivos. Em geral, o perfil de biodistribuição do Composto I rotulado foi semelhante aos outros agentes de contraste iodados diméricos.

Exemplo 2. Estudos de comparação

2a) Comparação de cardiotoxicidade de Visipaque™ e composições de diagnóstico do Composto I em um modelo de oclusão LAD de porco

Referência é feita ao estudo por Chai et al. (Acad. Radiol. 2004, 11, 583-593), onde foi demonstrado que uma formulação de lodixanol contendo 19 mM de NaCl e 0,3 mM de CaCl₂ apresenta uma menor frequência de fibrilação ventricular do que o lodixanol isoladamente. O estudo foi realizado em porcos onde o meio foi injetado diretamente dentro da artéria coronária esquerda (LCA) que tinha sido previamente ocluída. Fica claro a partir da Figura 2 que uma formulação de lodixanol, contendo 19 mM de NaCl e 0,3 rnM de CaCl₂ apresenta uma menor frequência de fibrilação ventricular do que o lodixanol isoladamente (P < 0,01). Neste caso, nenhuma ocorrência de fibrilação ventricular foi observada na injeção de Visipaque™. A dose dada nestas experiências foi de 20 ml em uma taxa de injeção de 2,0 ml/minuto.

Visto que no estudo de Chai et al. a injeção intracoronariana de 20 ml de iodixanol (formulado como Visipaque) foi realizada ao longo de um tempo de injeção de 40 s e nenhum caso de VF ocorreu, foi executado um estudo em que o volume de injeção foi aumentado para 25 ml durante um período de 62,5 s para aumentar os casos de VF para fins de comparação. Além disso, as soluções de teste e de referência foram seletivamente injetadas na artéria coronária descendente anterior esquerda (LAD) de modo a aumentar ainda mais a sensibilidade do modelo. As propriedades físicas e químicas das soluções de teste são fornecidas na Tabela 2 e os resultados são apresentados na

Figura 3.

Tabela 2. Propriedades físicas e químicas das soluções de teste

Agente de teste	Concentração de iodo (mg I/mL)	Eletrólitos (mM)
Na	Ca
Fl: Composto I + NaCl + CaCE	320	45	0.1
F3: Composto I + NaCl + CaCE	320	45	0.3
F5: Composto I + NaCl + CaCE	320	45	0.7
Iodixanol + NaCl + CaCE (Visipaque)	320	19	0.3

Neste volume elevado de injeção, até o Visipaque™ apresentou uma frequência significativa de fibrilação ventricular, 100 % (Figura 3).

No entanto, para nossa surpresa, o novo agente de contraste para raio-X, Composto I, quando formulado com 45 mM de NaCl e 0,1 a 0,7 mM de CaCl₂, não apresentou nenhuma ocorrência de fibrilação ventricular (Ver a Figura 3 e a Tabela 3 para detalhes).

Quando se compara os resultados dos dois estudos diferentes, um aumento na frequência de fibrilação ventricular de 0 % a 100 % é observado com Visipaque™. No entanto, mesmo na dose elevada, o Composto I de contraste para raio-X dimérico em uma composição de diagnóstico não apresenta nenhuma fibrilação ventricular. A diferença principal é que o Composto I foi formulado com 45 mM de NaCl, que é significativamente mais elevado do que aquele com Visipaque (19 mM). Embora nenhum efeito significativo fosse observado na VF, com a concentração de íons de cálcio entre 0,1 e 0,7 mM na VF, houve uma redução significativa na SAP e LVP quando menos cálcio estava presente (Tabela 3).

Tabela 3. Alterações hemodinâmicas em 50 s após o início da injeção,% do valor de pré-injeção

	Fl	F3	F5	Visipaque
SAP	-18% ± 11	-9% ± 7.2*	-4% ±6.1 fi	-5% ± 4.5f§
LVP	-16 %± 10	-7% ± 8*	-3±7f	-4% ± 5t
dP/dt max	+10% ±27	+31% ±38	±34% ± 29	±21% ± 10.8
HR	-1%± 1.0	0% ± 0.8	-2% ±3.0	0%±3.5

SAP: pressão arterial sistólica (mm Hg)

LVP: pressão sistólica ventricular esquerda (mm Hg) dP/dt max: taxa máxima de geração de pressão LV (mm Hg/s) HR: frequência cardíaca (batimentos/min) *P<0,05 vsFl. f P < 0,01 vs Fl.

t P < 0,05 vs F3 §P<0,01 vs F3.

Estes dados indicam que o principal fator que influencia a frequência de fibrilação ventricular é a concentração de cloreto de sódio, enquanto que o cálcio possui um efeito significativo sobre a pressão arterial sistólica e pressão sistólica ventricular esquerda.

2b: Comparação do Composto I nas composições com e sem CaCI₂ adicionado com Visipaque e lopamidol

Os efeitos hemodinâmicos das composições de Composto I com e sem CaCl₂ adicionado foram comparados com Visipaque e lopamidol após a administração seletiva na LAD em porcos normais sem oclusão de balão. Os efeitos de cada um dos meios de contraste foram normalizados para todos os efeitos observados com uma injeção equivalente de solução de Lactato de Ringer, que atuou como um volume e eletrólito - “relação” de controle. Havia um total de 12 porcos neste estudo, e cada porco recebeu um único CM injetado 3 vezes com volumes de 10 ml (4 ml/s), 20 ml (1 ml/s) e 25 ml (0,4 ml/s) (total de 9 injeções de CM em cada porco). Cada CM foi precedido ou seguido por uma injeção de controle de Lactato de Ringer, e a ordem de cada injeção (volume) foi escolhida a esmo em cada porco. A Tabela 4 fornece as quantidades e relações de eletrólitos de sódio e cálcio utilizados.

Tabela 4:

Eletrólitos	Visipaque mM	Composto I mM	Composto I +CaCI₂mM	Lactato de Ringer mM ou (relação)	Fluido intersticial humano mM ou (relação)
Na	19	45	45	130	140(135-145)
Ca	0.3	-	0.5	3	1.2(1.2-1.3)
Na/Ca	63	-	90	43	117

Em um volume de injeção de 25 ml de Composto I em uma composição sem CaCl₂ adicionado foi associado com uma redução na LVSP entre 45 e 70 segundos após a injeção (média de -5,7 mm Hg normalizado com Lactato de Ringer), enquanto que o Composto I em uma composição com CaCl₂ adicionado e Visipaque teve pouco ou nenhum efeito (-0,3 e +0,1 mm Elg normalizado com Lactato de Ringer, respectivamente) (Figura 5). A diminuição na LVSP observada com a composição de Composto I sem CaCl₂adicionado foi significativamente diferente do que aquela com CaCl₂adicionado, que não foi significativamente diferente com Visipaque. Além disso, uma resposta correspondente à injeção de lopamidol não pode ser analisada visto que a VF foi observada em cada caso entre aproximadamente 27 e 50 segundos após o início da injeção de 25 ml. Estes resultados indicam que a presença de 0,5 mM de CaCl₂ na composição de Composto I é benéfica e limita quaisquer efeitos negativos sobre a LVSP de uma maneira semelhante à Visipaque. Além disso, os eletrólitos adicionais presentes na composição de diagnóstico do Composto I e Visipaque podem reduzir a propensão para a indução de VF em comparação com lopamidol que não possui nenhum eletrólito adicionado.

2c: Comparação de uma composição de Composto I com Visipaque, lopamidol e Lactato de Ringer em porcos normais com uma taxa de injeção rápida

Em um estudo adicional os efeitos hemodinâmicos do Composto I em uma composição com 45 mM de NaCl e 0,5 mM de CaCl₂foram comparados com Visipaque e lopamidol após a administração seletiva na LAD de porcos normais com uma taxa de injeção rápida (5 ml/s). O Lactato de Ringer também foi estudado como um controle da “relação de volume e eletrólito. No total, 3 porcos foram estudados, e cada CM foi administrado duas vezes em cada porco em ordem aleatória. A taxa de injeção utilizada foi de 5 ml/s, com um volume de injeção total de 40 ml. A Tabela 5 fornece as quantidades e relações de eletrólitos de sódio e cálcio utilizados.

Tabela 5:

Eletrólitos	Visipaque mM	Composto I mM	lactato de Ringer mM ou (relação)	Fluido intersticial humano mM ou (relação)
Na	19	45	130	140(135-145)
Ca	0.3	0.5	3	1.2(1.2-1.3)
Na/Ca	63	90	43	117

Embora a injeção de Composto I e Visipaque não tenha induzido as alterações na LVSP ou dP/dt a partir da linha de base que foram significativamente diferentes da administração de Lactato de Ringer, o lopamidol induziu uma diminuição e um aumento significativos nos valores de LVPS e dP/dt respectivamente (Figura 6). A LVSP foi reduzida em 9 % ± 6 e dP/dt aumentou 69 % ± 16 após a administração de lopamidol. Isso estava em contraste com a injeção de Lactato de Ringer, Composto I e Visipaque, que foram associados com um ligeiro aumento na LVSP (~5 %) e um aumento modesto na dP/dt (até ~30 %). Estes resultados indicam que após a injeção rápida na LAD de porcos normais, o Composto I em uma composição com 45 mM de NaCl e 0,5 mM de CaCl₂ teve efeitos mínimos sobre os parâmetros hemodinâmicos semelhantes a Visipaque ou solução fisiológica de Ringer. Considera-se que a presença de eletrólitos nas formulações do Composto I e Visipaque estudados, que são mais semelhantes à composição equilibrada de Lactato de Ringer e do fluido intersticial, contribuíram para uma manutenção superior da função cardíaca em comparação com aquela após a injeção de lopamidol, que não contém nenhum eletrólito adicionado.

Exemplo 3. Segurança intravenosa e intra-arterial de composição de diagnóstico de Composto I

A segurança intravenosa (iv) e intra-arterial (ia) de uma composição de Composto I foi mostrada em um estudo separado (ref. B145095). Neste estudo, os efeitos cardiovasculares do Composto I em uma composição com 45 mM de NaCl e 0,5 mM de CaCl₂ foram avaliados em três níveis de dose in vivo em um modelo de suíno agudo.

Métodos: A composição foi administrada intra-arterialmente ou por via intravenosa, em grupos de três animais em um dos três níveis de dose (1 vez, 2 vezes ou 3 vezes o volume padrão de 2 ml/kg). Cada animal recebeu também um volume equivalente de solução de Lactato de Ringer como um controle de volume. Efeitos CV: frequência cardíaca (FC), oximetria de pulso, eletrocardiograma (ECG), pressão aórtica (sistólica, diastólica e média), pressão diastólica final do ventrículo esquerdo (PDFVE) foram avaliados. Ultra-som/ecocardiografia para avaliar o volume de pulsação, a fração de ejeção e a contratilidade cardíaca também foram avaliadas.

Resultados: A avaliação do resumo dos dados preliminares sugere que não houve nenhum efeito importante relacionado com a dose ou via de administração do Composto I na HR, oximetria de pulso e ECG no coração de suíno. A análise de oximetria de pulso mostrou que a saturação de oxigênio manteve-se em aproximadamente 98 % ao longo da dosagem. A HR também se manteve dentro da normalidade. Não houve nenhum distúrbio de ritmo relacionado com o Composto I: intervalo QT estava dentro da faixa normal independente da dosagem i.a. ou i.v. de Composto I. Similarmente, pouco ou nenhum efeito do Composto I foi observado sobre a pressão aórtica (sistólica, diastólica e média) ao longo de toda a faixa de dose. As alterações na pressão aórtica se mostraram semelhantes, quer o Composto I tenha sido administrado através das vias i.v. ou i.a. Houve ligeiros aumentos na LVEDP com doses crescentes de Composto I, o efeito foi semelhante quer o Composto I tenha sido administrado através da vias i.v. ou i.a.. Além disso, os aumentos na LVEDP foram semelhantes em magnitude àqueles observados após a administração de volumes crescentes de Lactato de Ringer. A análise do volume de pulsação, fração de ejeção e contratilidade cardíaca pelo ecocardiograma mostrou apenas uma ligeira alteração no volume diastólico 5 final (EDV), confirmando que todos os efeitos foram de relacionados ao volume e não específicos à administração do Composto I.

Portanto, não houve nenhuma mudança global no desempenho do miocárdio quando o Composto I foi administrado através da via i.a. ou i.v. As pequenas alterações nos parâmetros da função CV foram atribuídas ao 10 volume administrado e não ao item de teste Composto I, porque efeitos similares foram observados após a injeção com solução de Lactato de Ringer. Todos os parâmetros do miocárdio estavam dentro das faixas normais após a administração intravenosa ou intra-arterial de Composto I até 3 vezes o volume de dose padrão de 2 ml/kg.

Claims

1. Composição de diagnóstico, caracterizado pelo fato de que compreende um Composto I:

Composto I um carreador farmaceuticamente aceitável;

e dissolvidos no mesmo um composto de sódio e um composto de cálcio que fornecem uma concentração de íons de sódio de 40 a 50 mM e uma concentração de íons de cálcio de 0,1 a 0,7 mM.

2. Composição de diagnóstico de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende um composto de sódio que fornece uma concentração de íons de sódio de 42 a 47 mM.

3. Composição de diagnóstico de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende um composto de sódio que fornece uma concentração de íons de sódio de 44 a 46 mM.

4. Composição de diagnóstico de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende um composto de sódio que fornece concentração de íons de sódio de 45 mM.

5. Composição de diagnóstico de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 4, caracterizada pelo fato de que compreende um composto de cálcio que fornece uma concentração de íons de cálcio de 0,3 a 0,6 mM.

6. Composição de diagnóstico de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 4, caracterizada pelo fato de que compreende um composto de cálcio que fornece uma concentração de cálcio de 0,4 a 0,5 mM.

Petição 870190052110, de 03/06/2019, pág. 6/7

7. Composição de diagnóstico de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 4, caracterizada pelo fato de que compreende um composto de cálcio que fornece uma concentração de cálcio de 0,5 mM.

8. Composição de diagnóstico de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a relação entre a concentração de íons de sódio e a concentração do íons de cálcio está entre 63 e 117.

9. Composição de diagnóstico de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o composto de sódio e o composto de cálcio são sais compreendendo íons de ligação selecionados do grupo de cloreto, sulfato, fosfato e carbonato de hidrogênio.

10. Composição de diagnóstico de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o composto de sódio é cloreto de sódio e o composto de cálcio é cloreto de cálcio.

11. Composição de diagnóstico de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 10, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente EDTA e/ou TRIS.

12. Composição de diagnóstico de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 11, caracterizada pelo fato de ser para uso como um meio de contraste para raio-X no diagnóstico por raio-X ou formação de imagem por raio-X.