BR112012003283B1

BR112012003283B1 - Sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico, composição farmacêutica, kit para uso em um método de internalização fotoquímica e uso de um sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico

Info

Publication number: BR112012003283B1
Application number: BR112012003283-6A
Authority: BR
Inventors: Jo Klaveness; Anders Hogset
Original assignee: Pci Biotech As
Priority date: 2009-08-14
Filing date: 2010-08-16
Publication date: 2020-06-16
Also published as: RS55530B1; BR112012003283A2; RU2012109559A; BR112012003283A8; MX337481B; CN102648004A; WO2011018635A2; EP2464384A2; DK2464384T3; WO2011018635A3; JP5946407B2; MX2012001953A; NZ598380A; PT2464384T; EP2464384B1; ME02616B; SI2464384T1; CN102648004B; AU2010283565A1; KR20120094900A

Abstract

sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico, composição farmacêutica, kit para uso em um método de internalização fotoquímica e uso de um sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico a invenção refere-se aos sais farmaceuticamente aceitáveis de agentes fotossensibilizantes anfifílicos que possuem uma solubilidade em água de pelo menos 0,5 mg/ml e ao seu uso em métodos de internalização fotoquímica. tais sais podem ser formados a partir de uma base farmaceuticamente aceitável, por exemplo, uma amina orgânica tal como um amino álcool, ou a partir de um ácido farmaceuticamente aceitável, por exemplo, um ácido sulfônico ou um derivado de ácido sulfônico. devido à sua maior solubilidade em água, tais sais são particularmente adequados para utilização na preparação de preparações farmacêuticas parenterais, por exemplo, para utilização como soluções para injeção ou infusão.

Description

SAL FARMACEUTICAMENTE ACEITÁVEL DE UM AGENTE FOTOSSENSIBILIZANTE ANFIFÍLICO, COMPOSIÇÃO

FARMACÊUTICA, KIT PARA USO EM UM MÉTODO DE INTERNALIZAÇÃO FOTOQUÍMICA E USO DE UM SAL FARMACEUTICAMENTE ACEITÁVEL DE UM AGENTE FOTOSSENSIBILIZANTE ANFIFÍLICO

[001] A presente invenção refere-se às composições fotossensibilizantes e à sua utilização em métodos para a liberação de moléculas de medicamento nas células por internalização fotoquímica (“PCI”). Mais particularmente, refere-se às composições para a utilização em tais métodos que compreendem sais solúveis em água de agentes fotossensibilizantes anfifílicos e que são, portanto, adequados para a administração parenteral.

[002] A fotoquimioterapia ou terapia fotodinâmica (PDT) é uma técnica para o tratamento de várias anormalidades ou distúrbios. A PDT pode ser usada para o tratamento de distúrbios da pele ou de outros órgãos epiteliais ou mucosa, especialmente lesões cancerosas ou pré-cancerosas. Também encontra utilização no tratamento de condições não cancerosas, tais como acne e a degeneração macular relacionada com a idade. A PDT envolve a aplicação de um agente fotossensibilizante na área afetada do corpo, seguido pela exposição da área a luz fotoativadora, a fim de ativar o agente fotossensibilizante. A ativação do agente fotossensibilizante o converte em uma forma citotóxica que mata ou de outra forma reduz o potencial proliferativo das células afetadas.

[003] Uma faixa de agentes fotossensibilizantes é conhecida para uso na PDT. Aqueles conhecidos para uso clínico incluem ácido 5aminolevulínico (5-ALA), éster metílico de 5-ALA, éster hexílico de 5-ALA, verteporfina, psoralenos e porfímero. 5-ALA (Levulan®) e éster metílico de

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 7/42 / 33

5-ALA (Metvix®) são utilizados para tratamento de várias condições dérmicos; o éster hexílico de 5-ALA (Hexvix®) é utilizado para o diagnóstico de câncer da bexiga urinária; verteporfina (Visudyne®) é utilizado para o tratamento de degeneração macular nos olhos; e porfímero (Photofrin®) é utilizado para o tratamento de câncer do pulmão e tratamento paliativo de câncer do esôfago obstrutivo.

[004] A internalização fotoquímica (também conhecida simplesmente como “PCI”) é um método de liberação de medicamento que envolve o uso de luz e um agente fotossensibilizante para a introdução de outra maneira de medicamentos impermeáveis à membrana para dentro do citosol de uma célula, mas que não necessariamente resulta na destruição da célula ou morte celular. Neste método, a molécula a ser internalizada ou transferida é aplicada às células em combinação com um agente fotossensibilizante. A exposição das células à luz de um comprimento de onda adequado ativa o agente fotossensibilizante que por sua vez leva à ruptura das membranas do compartimento intracelular e a subseqüente libertação da molécula no citosol. Na PDT é o efeito da luz sobre o agente fotossensibilizante que forma os materiais tóxicos celulares que afetam diretamente a doença. Ao contrário, na PCI, a interação entre o agente fotossensibilizante e a luz é usada para afetar a célula de tal modo que a absorção intracelular do medicamento é melhorada. Ambos os mecanismos passam através de uma via que envolve as espécies de oxigênio singleto. O oxigênio singleto é uma forma altamente reativa de oxigênio que pode oxidar várias biomoléculas, incluindo as moléculas nas membranas celulares. Na PDT um agente terapêutico de atuação direta não é normalmente utilizado, enquanto que na PCI um medicamento de atuação direta (ou seu prómedicamento) é sempre usado em conjunto com o agente fotossensibilizante. Os medicamentos que podem ser considerados de serem de “atuação direta”

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 8/42 / 33 são aqueles que possuem uma atividade biológica inerente (quer terapêutica ou profiláctica). Quando presente in vivo no local alvo desejado, tais medicamentos não requerem luz para serem ativos. Os agentes fotossensibilizantes que podem ser utilizados na PCI podem também ser utilizados na PDT, no entanto, nem todos os fotossensibilizantes ativos da PDT podem ser utilizados na PCI.

[005] A PCI é descrita nos seguintes documentos de patente: WO

96/07432, WO 00/54708, WO 02/44396, WO 02/44395, WO 03/020309, USA-6.680.301 e US-A-5.876.989. A tecnologia é ainda descrita nas seguintes publicações: Berg, K. et al. in Cancer Res.(1999) 59,1180-1183, Hqgset, A. et al. in Hum. Gene Ther. (2000) 11, 869-880, Prasmickaite, L. et al. in J. Gene Med. (2000) 2, 477-488, Selbo, P.K. et al. in Biochim. Biophys. Acta (2000) 1475, 307-313, Selbo, P.K. et al. in Int. J. Cancer (2000) 87, 853-859, Selbo, P.K. et al. in Int. J. Cancer (2001) 92, 761-766, Berg, K. et al. in Photodynamics News (2001) 4, 2-5, Prasmickaite, L. et al in Photochem. Photobiol.(2001) 73, 388-395, Selbo, P.K. et al. in Photochem. Photobiol. (2001) 74, 303-310, Selbo. P.K. et al in Tumor Biol. (2002) 23, 103-112, Hqgset, A. et al. in Adv. Drug Deliv. Rev. (2004) 56, 95-115, Berg, K et al. in Curr. Opin. Mol. Ther. (2004) 6, 279-287, Prasmickaite, L. et al. in Expert Opin. Mol. Ther. (2004) 4, 1403-1412, Berg, K.et al. in Clin. Cancer. Res.(2005) 11, 8476-8485, Berg, K. et al. in Curr. Pharmacol. Biotech (2006) 8, 362-372 e Weyergang, A. et al. in Photochem. Photobiol. Sci.(2008) 7, 1032-1040.

[006] Muitos agentes fotossensibilizantes diferentes têm sido propostos para uso na PCI. Estes incluem, por exemplo, ftalocianinas tais como ftalocianinas di-sulfonadas (por exemplo, AlPcS₂ e AlPcS_2a); tetrafenilporfirinas sulfonadas (por exemplo, TPPS2a, TPPS4, TPPS1 e TPPS2o); nilo azul; clorinas e derivados de clorina incluindo bacterioclorinas e

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 9/42 / 33 cetoclorinas; uroporfirina I; filoeritrina; porfirinas naturais e sintéticas incluindo hematoporfirina e benzoporfirinas; azul de metileno; corantes catiônicos; tetraciclinas, naftalocianinas; texafirinas; feoforbides; purpurinas; rodaminas; fluoresceínas; bases fracas lisossomotrópicas; e porficenos.

[007] Os presentes inventores identificaram que esses agentes fotossensibilizantes que apresentam propriedades anfifílicas e que compreendem um ou mais grupos carregados são particularmente adequados para a utilização na PCI. Tais agentes incluem, em particular, as tetrafenil porfirinas sulfonadas e clorinas. No entanto, apesar dos resultados encorajadores que foram obtidos quando se utiliza is fotossensibilizantes anfifílicos para a PCI em estudos in vitro, estes compostos têm ainda de alcançar o uso clínico corrente.

[008] Os presentes inventores reconheceram que um problema significativo quando se utiliza os agentes fotossensibilizantes anfifílicos conhecidos para PCI a refere-se à fraca solubilidade dos agentes em solução, especialmente em soluções aquosas tais como podem ser utilizadas para a administração parenteral (a solubilidade aquosa de tais agentes é muito menos do que 0,5 mg por ml). Este problema até agora não foi identificado em qualquer parte da literatura da técnica anterior. Como serão observados, os fotossensibilizantes que têm solubilidade aquosa muito baixa possuem uma tendência de precipitar fora da solução o que pode resultar em efeitos colaterais graves in vivo, especialmente quando o fotossensibilizante for administrado no sistema vascular. Estes efeitos colaterais podem incluir febre e várias reações imunológicas e, em alguns casos, podem ser fatais. Como um resultado, mesmo os fotossensibilizantes anfifílicos mais potentes são, no momento, inadequados para preparações farmacêuticas parenterais, por exemplo, para utilização como soluções para injeção ou infusão.

[009] Os inventores desenvolveram agora métodos alternativos (por

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 10/42 / 33 exemplo, melhorados) de condução da PCI in vivo que envolve o uso de agentes fotossensibilizantes anfifílicos que são facilmente solúveis em água e que são assim essencialmente livres dos efeitos colaterais acima mencionados. [0010] Observado a partir de um aspecto a invenção assim fornecem sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico para uso em um método de internalização fotoquímica, em que dito sal possui uma solubilidade em água de pelo menos 0,5 mg/ml. O sal preferivelmente possui uma solubilidade em água que excede a 1 mg/ml, ainda mais preferivelmente mais do que 3 mg/ml ou mais do que 5 mg/ml. O mais preferível, ele terá uma solubilidade de mais do que 10 mg/ml.

[0011] Os sais para uso na invenção podem ter uma solubilidade de pelo menos 20 mg/ml, mais preferivelmente pelo menos 25 mg/ml, por exemplo, pelo menos 30 mg/ml.

[0012] Os agentes fotossensibilizantes para uso na invenção serão anfifílicos. Como aqui utilizado, “anfifílico” é planejado para referir-se ao caráter global da molécula em que a extensão da hidrofilicidade e hidrofobicidade não é constante ao longo da molécula inteira e uma região de maior hidrofilicidade (por exemplo, uma região polar) está presente em relação ao resto da molécula. O agente fotossensibilizante tipicamente compreenderá moléculas que carregam um ou mais grupos carregados e que possuem uma carga global positiva (catiônica) ou negativa (aniônica).

[0013] Para os propósitos da invenção, “solubilidade em água” referese à solubilidade em água na temperatura ambiente, por exemplo, ao redor de 20 °C. A solubilidade em água pode ser determinada pela agitação de uma quantidade pesada de fotossensibilizante sólido com uma pequena quantidade de água a 20 °C tal que o sólido não se dissolve completamente e pela medição da concentração de fotossensibilizante na solução acima do sólido (isto é, na solução sobrenadante).

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 11/42 / 33

[0014] O termo “sal farmaceuticamente aceitável” refere-se a um sal que retém a eficácia biológica e as propriedades do agente fotossensibilizante e que é formado a partir de um ácido ou base não tóxico adequado.

[0015] Os termos “internalização fotoquímica” e “PCI” são aqui utilizados para se referir à liberação citossólica de moléculas (por exemplo, moléculas de medicamento) que inclui a etapa de liberação de moléculas de compartimentos intracelulares/ligados à membrana no citosol das células de um paciente.

[0016] Em um outro aspecto a invenção fornece um sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico tendo uma solubilidade em água de pelo menos 0,5 mg/ml para a preparação de um agente terapêutico para a utilização em um método de internalização fotoquímica.

[0017] Em mais um outro aspecto a invenção fornece um método de introdução de uma molécula de medicamento no citosol de uma célula em um paciente, dito método compreendendo as seguintes etapas:

(a) colocar em contato dita célula com um sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico tendo uma solubilidade em água de pelo menos 0,5 mg/ml;

(b) colocar em contato dita célula com a referida molécula de medicamento; e (c) irradiar dita célula com luz de um comprimento de onda eficaz para ativar o agente fotossensibilizante.

[0018] O agente fotossensibilizante a ser usado de acordo com a invenção pode ser qualquer agente fotossensibilizante conhecido tendo as propriedades anfifílicas requeridas e que se localiza em compartimentos intracelulares, particularmente endossomas ou lisossomas. Uma faixa de agentes adequados é conhecida na técnica e descrita na literatura para

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 12/42 / 33 utilização na PCI, incluindo em WO 96/07432, WO 03/020309 e em GB-A2.420.784. Estas incluem, em particular, as ftalocianinas tais como alumínio ftalocianinas di-sulfonadas (em particular aquelas com sulfonação adjacente); tetrafenilporfirinas sulfonadas (TPPS_n, por exemplo, TPPS_2a e TPPS1); clorinas e derivados de clorina incluindo bacterioclorinas e cetoclorinas; e porfirinas naturais e sintéticas incluindo hematoporfirina e benzoporfirinas.

[0019] O que segue estão entre os fotossensibilizantes mais preferidos para utilização na invenção: TPCS2a, TPPS2a, AlPcS2a e porfímero (Photofrin®). Porfímero (Photofrin®) é uma mistura heterogênea de substâncias, pelo menos algumas das quais são anfifílicas.

[0020] O sal para uso na invenção pode ser formado a partir de uma base farmaceuticamente aceitável tal como uma amina orgânica, em particular um amino álcool (ou alcanolamina). Estes compostos são capazes de formar sais com fotossensibilizantes aniônicos. Como aqui utilizado, o termo “amino álcool” é planejado de incluir qualquer composto orgânico que contém tanto pelo menos um grupo funcional de amina e pelo menos um grupo funcional de álcool.

[0021] Alternativamente, o sal para uso na invenção pode ser um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável. Os ácidos formadores de sal adequados são ácidos sulfônicos e derivados de tais ácidos que são capazes de formar sais com fotossensibilizantes catiônicos.

[0022] As bases adequadas para formar sais de acordo com a invenção incluem os amino álcoois. Tais compostos podem ser lineares, ramificados ou cíclicos. Entre os amino álcoois que são particularmente adequados para a preparação dos sais aqui descritos são os amino álcoois alifáticos inferiores tais como monoetanolamina, di-etanolamina, trietanolamina e 2-amino-2-(hidroximetil) propano-1,3-diol, etc. Outros amino alcoóis adequados incluem os compostos cíclicos tais como 4-(2-hidroxietil)

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 13/42 / 33 morfolina e 1-(2-hidroxietil)-pirrolidina. Particularmente preferidos para uso na invenção são os sais básicos com os açúcares de amino glucamina e Nmetilglucamina (meglumina). Os sais particularmente preferidos para a utilização na invenção são os sais de N-metilglucamina e sais de etanolamina. [0023] Como aqui utilizado, o termo “ácido sulfônico” destina-se incluir qualquer composto orgânico contendo pelo menos um grupo de SO3H. Este pode compreender 1, 2 ou 3 grupos de SO3H, mais preferivelmente 1 ou 2, por exemplo 1. O termo “derivados”, quando usados em relação ao ácido sulfônico destina-se a abranger quaisquer tais compostos que contêm pelo menos um (de preferência 1, 2 ou 3, mais preferivelmente 1 ou 2, por exemplo, 1) grupo de SO3X (onde X é um cátion fisiologicamente tolerável, tal como um cátion de sódio, cálcio, potássio, magnésio ou meglumina).

[0024] Os sais de adição de ácido de acordo com a invenção tipicamente serão derivados de um agente fotossensibilizante catiônico e um ácido sulfônico mono-prótico tal como o ácido metano sulfônico, formando assim um sal 1:1. Alternativamente, os sais podem ser formados entre o fotossensibilizante e um ácido sulfônico di- ou tri-prótico, tal como o ácido etano-1,2-dissulfônico. No caso onde um ácido tendo mais do que um próton acídico é usado, o sal resultante pode ter uma relação estequiométrica diferente de 1:1, por exemplo, 2:1 (fotossensibilizante: ácido) ou 3:1 (fotossensibilizante: ácido).

[0025] Os ácidos sulfônicos e derivados de ácido sulfônico adequados para uso na formação dos sais de acordo com a invenção incluem aqueles de fórmulas R-SO3H (I) e R-SO3X (II) em que R pode ser um átomo de hidrogênio ou uma alquila opcionalmente substituída (por exemplo, um grupo de alquila C_1-20) ou um grupo de arila (por exemplo, um grupo de arila com até 20 átomos de carbono), de preferência um grupo de alquila ou arila opcionalmente substituído.

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 14/42 / 33

[0026] Como aqui utilizado, o termo “alquila” inclui qualquer grupo de hidrocarboneto de cadeia longa ou curta, de cadeia reta, ramificada ou cíclica alifático, saturado ou insaturado. Opcionalmente, esse grupo pode ser substituído (por exemplo, mono- ou poli-substituído), por exemplo, por grupos de hidróxi, alcóxi, acilóxi, nitro, alcoxicarbonilóxi, amino, arila, oxo ou halo (por exemplo, flúor ou cloro). Os grupos de alquila insaturados podem ser mono- ou poli-insaturados e incluem grupos tanto de alquenila quanto de alquinila.

[0027] Os sais preferidos para uso de acordo com a invenção são aqueles formados a partir de ácidos de fórmulas (I) ou (II) em que R é um grupo de alquila opcionalmente substituído (isto é, mono- ou polisubstituído), linear, ramificado ou cíclico (por exemplo, mono- ou bicíclico, ligado com ponte ou não ligado com ponte) que pode conter até 20 átomos de carbono, ou um grupo de arila opcionalmente substituído (isto é, mono-ou poli-substituído), que preferivelmente contém até 20 átomos de carbono. Os substituintes preferidos que podem estar presentes no grupo R incluem alquila C_1-6 (por exemplo, metila), hidróxi, alcóxi, acilóxi, nitro, alcoxicarbonilóxi, amino, arila, oxo e halo (por exemplo, flúor ou cloro).

[0028] Em geral, os sais de acordo com a invenção que são formados entre um agente fotossensibilizante e um composto de ácido sulfônico compreendem um componente de ácido sulfônico único, isto é, um ácido mono-prótico. No entanto, como observado acima, os sais formados a partir de ácidos que têm mais do que um componente de ácido sulfônico (por exemplo, 2 ou 3 tais grupos) podem também ser utilizados. Outros substituintes que podem estar presentes no grupo R, portanto, incluem um ou mais, de preferência um, grupo de -SO2OH, -SO2OX (onde X é como mais acima definido) ou SO2O. Os exemplos representativos de ácidos dissulfônicos que podem ser utilizados para preparar os sais de acordo com a

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 15/42 / 33 invenção incluem ácido etano-1,2-dissulfônico e ácido naftaleno-1,5dissulfônico.

[0029] Os grupos de alquila preferidos para o grupo R podem conter até 20, mas preferivelmente até 15, por exemplo, até 12 átomos de carbono. No entanto, os grupos de alquila contendo até 10, por exemplo, até 5, mais preferivelmente 1, 2 ou 3 átomos de carbono são preferidos. Em particular, os grupos de alquila lineares tendo até 10 átomos de carbono são preferidos, por exemplo, grupos de metila, etila ou propila. Embora estes grupos possam ser substituídos ou não substituídos, de preferência serão não substituídos.

[0030] Os grupos de arila preferidos para o grupo R incluem grupos de fenila ou naftila opcionalmente substituídos. De preferência, o grupo de arila é substituído, por exemplo, por um ou mais (por exemplo, por um, dois ou três) substituintes que podem incluir grupos de alquila C_1-6 (de preferência alquila C_1-4, por exemplo, metila), alcóxi (por exemplo, metóxi), nitro, halo (por exemplo flúor ou cloro), -SO3H, -SO3X (onde X é como mais acima definido) -SO2O^- ou grupos de trifluorometila. Exemplos representativos de grupos de arila incluem tolueno (por exemplo, p-tolueno), benzeno, naftaleno e naftaleno sulfonato (por exemplo, 2-naftaleno sulfonato).

[0031] Exemplos de ácidos sulfônicos adequados para formar os ácidos para uso na presente invenção incluem: ácido etano-1,2-dissulfônico, ácido etanossulfônico, ácido 2-hidróxi-etanossulfônico, ácido metanossulfônico e ácido naftaleno-1,5-dissulfônico.

[0032] Exemplos de sais preferidos para uso na invenção para a liberação de PCI de medicamentos incluem o seguinte:

sal de TPCS2a dietanolamina sal de TPCS2a etanolamina sal de TPCS2a N-metil-glucamina sal de TPCS2a trietanolamina

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 16/42 / 33 sal de TPCS_2a 1-(2-hidroximetil)-pirrolidina sal de TPCS_2a 2-amino-2-(hidroximetil) propano-1,3-diol sal de TPPS_2a dietanolamina sal de TPPS2a etanolamina sal de TPPS2a N-metil-glucamina sal de TPPS2a trietanolamina sal de TPPS_2a 1-(2-hidroximetil)-pirrolidina sal de TPPS_2a 2-amino-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol sal de porfímero dietanolamina sal de porfímero etanolamina sal de porfímero N-metil-glucamina sal de porfímero trietanolamina sal de porfímero 1-(2-hidróximetil)-pirrolidina sal de porfímero 2-amino-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol.

[0033] Os vários sais aqui descritos são eles mesmos novos e formam um outro aspecto da invenção. Tais sais podem estar no estado sólido (por exemplo, em pó ou granulado) ou em uma forma dissolvida ou líquido (isto é, pronto para uso).

[0034] Os sais para uso na invenção podem ser preparados utilizando processos e procedimentos padrão bem conhecidos na técnica. Por exemplo, estes podem ser preparados pela reação do agente fotossensibilizante anfifílico desejado com o ácido ou base apropriada na presença de um solvente adequado. Um tal solvente pode facilmente ser selecionado por aqueles versados na técnica e tipicamente pode ser água ou uma solução aquosa. Alternativamente, a reação pode ser realizada em um solvente orgânico em que os componentes são solúveis tais como DMSO, DMF, álcoois e acetonitrila.

[0035] Na preparação dos sais de acordo com a invenção, o agente

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 17/42 / 33 fotossensibilizante pode ser misturado com uma solução aquosa ou de solvente orgânico do ácido ou base. Tipicamente, o ácido ou base estará presente em excesso (por exemplo, em pelo menos 10 % de excesso) de uma quantidade equimolar requerida para a reação. A mistura pode então ser aquecida e, no esfriamento, o sal desejado do agente fotossensibilizante precipita e pode ser recuperado na forma sólida, por exemplo, por técnicas adequadas tais como filtração. Além disso, a purificação do sal deve ser necessária ou desejável, pode ser efetuada por métodos conhecidos tais como lavagem com um solvente orgânico adequado. Os solventes adequados incluem metanol, etanol, isopropanol, acetona, éter dietílico, THF, acetato de etila e suas misturas.

[0036] A presente invenção ainda diz respeito às composições farmacêuticas que compreendem um sal como aqui descrito em combinação com pelo menos um portador ou excipiente farmacêutico. As composições farmacêuticas da invenção incluem a forma de dosagem unitária assim como as formulações intermediarias tais como um pó ou solução concentrada. Tipicamente, as composições serão fornecidas na forma do produto acabado, isto é, formas de dosagem prontas para uso. Estas incluem as formas de dosagem parenterais tais como uma solução injetável ou uma solução para infusão. Uma dose unitária de uma solução injetável geralmente será um frasco. As concentrações preferidas do sal em soluções parenterais serão de 0,1 a 100 mg/ml, de preferência de 0,5 a 50 mg/ml.

[0037] Preferivelmente, a composição pronta para uso será fornecida na forma de uma solução, por exemplo, uma solução aquosa. Por exemplo, o sal pode ser dissolvido em um solvente selecionado da água, etanol ou uma mistura de água e etanol. Tipicamente, o solvente consistirá essencialmente de água estéril. A solução final pronta para a administração deve ser de preferência isotônica ou ligeiramente hipertônica em relação ao sangue (por

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 18/42 / 33 exemplo, tendo uma osmolalidade de 300 mOsm/kg ou mais elevada).

[0038] As formas de dosagem líquidas podem ser produzidas pelas técnicas convencionais conhecidas no ofício. Por exemplo, os sais solúveis em água aqui descritos podem ser dissolvidos em um solvente aquoso, antes ou após a adição de quaisquer outros excipientes, geralmente com agitação e opcionalmente em temperaturas elevadas. Se desejável, as composições podem ser produzidas inicialmente como uma solução ou suspensão concentrada e ainda diluídas na concentração requerida antes do uso.

[0039] Embora os agentes fotossensibilizantes aqui descritos destinam-se principalmente para a administração parenteral, eles podem também ser administrados através de outras vias, por exemplo, através da administração tópica ou oral. As formulações adequadas para a administração tópica incluem cremes e emulsões. As formulações adequadas para a administração oral incluem tabletes e cápsulas.

[0040] As composições podem incluir excipientes adicionais bem conhecidos na técnica, tais como portadores, diluentes, cargas, etc. Tais excipientes são tipicamente descritos na Martindale's Extra Pharmacopoeia (36th Edition, 2009) e no The Merck Index (14th Edition, 2006). Os excipientes mais preferidos para serem utilizados em soluções de fotossensibilizantes para a PCI incluem compostos farmaceuticamente aceitáveis que são capazes de ajustar a osmolalidade para formar soluções isotônicas, antioxidantes, tampões, substâncias tensoativas, solventes e solubilizantes. Para a administração parenteral, as soluções devem ter preferivelmente um pH de 2 a 10

[0041] Os sais solúveis em água aqui descritos são particularmente adequados para produzir composições farmacêuticas líquidas para a administração parenteral. De preferência, tais soluções são aquosas, o que significa que a água compreende uma proporção do meio solvente. Em geral,

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 19/42 / 33 a água irá compreender pelo menos 50 % do solvente, mais preferivelmente pelo menos 60 %, ainda mais preferivelmente pelo menos 80 %, ainda mais preferivelmente pelo menos 90 %, por exemplo, essencialmente 100 % do solvente. Onde outro solvente que não seja a água estiver presente, este tipicamente será etanol.

[0042] As composições de acordo com a presente invenção podem ser estéreis ou não estéreis. No entanto, para a maioria das utilizações exceto o uso externo e uso no sistema gastrointestinal incluindo a cavidade oral, as composições devem ser estéreis. Métodos de esterilização incluem autoclavagem, esterilização de ponta seca, esterilização gama e tratamento com óxido de etileno.

[0043] As composições aqui descritas podem ser fornecidas na forma “pronta para uso” em que a forma de sal do fotossensibilizante já está dissolvida na solução aquosa. Alternativamente, isso pode ser fornecido na forma seca (por exemplo, em pó) com instruções para a sua dissolução em uma solução aquosa, com agitação antes do uso.

[0044] Para a utilização na PCI, as composições aqui descritas serão administradas em combinação com um agente terapêutico (também aqui referido como “moléculas de medicamento”). Dependendo da condição para o tratado, a natureza da composição, etc., os agentes fotossensibilizantes podem ser co-administrados com as moléculas de medicamento, por exemplo, em uma única composição, ou eles podem ser administrados sequencialmente ou separadamente.

[0045] Visto de um outro aspecto, a invenção fornece assim um produto que compreende um sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico como aqui descrito, juntamente com um agente terapêutico para uso simultâneo, separado ou sequencial em um método de internalização fotoquímica.

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 20/42 / 33

[0046] Alternativamente observado, este aspecto da invenção também fornece um kit para uso em um método de internalização fotoquímica compreendendo:

(a) um primeiro recipiente contendo um sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico como aqui descrito;

(b) um segundo recipiente contendo um agente terapêutico; e (c) onde dito sal estiver na forma sólida, um terceiro recipiente contendo uma solução aquosa para dissolver o sal antes do uso.

[0047] Onde o agente terapêutico for destinado para a coadministração com o sal do agente fotossensibilizante, este pode ser dissolvido ou colocado em suspensão na mesma solução (por exemplo, uma solução aquosa) antes do uso.

[0048] A molécula de medicamento a ser deslocada em compartimentos intracelulares das células do paciente e do agente fotossensibilizante pode ser aplicada nas células em conjunto ou sequencialmente, após o que o composto fotossensibilizante e a molécula são submetidos a endocitose ou de outra forma deslocados para endossomas, lisossomas ou outros compartimentos restritos da membrana intracelular. A molécula a ser internalizada dentro da célula é liberada pela exposição das células à luz de comprimentos de onda adequados para ativar o composto fotossensibilizante que por sua vez leva à ruptura das membranas di compartimento intracelular e a subseqüente liberação da molécula no citosol. [0049] O momento exato da adição da molécula a ser transferida (isto é, a molécula de medicamento) e agente fotossensibilizante e tempo de irradiação para atingir os efeitos acima descritos necessita levar em conta vários fatores incluindo as células a serem tratadas, a natureza das moléculas de medicamento, o ambiente das células, e se a administração é direta no tecido alvo ou em um sítio distal. Levando estas considerações em conta os

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 21/42 / 33 momentos apropriados podem ser facilmente determinados por aqueles versados na técnica. Tipicamente, a molécula de medicamento e o agente fotossensibilizante serão colocados em contato com as células antes da irradiação. A irradiação de luz pode ser efetuada a qualquer momento após a administração do agente fotossensibilizante. Em geral, a molécula de medicamento e o agente fotossensibilizante podem ser aplicados simultânea ou separadamente de 1 a 72 horas antes da irradiação, de preferência de 4 a 48, por exemplo, de 4 a 24 horas antes da irradiação.

[0050] No entanto, a irradiação pode ser executada antes que a molécula de medicamento tenha sido incluída no mesmo compartimento intracelular da célula como o agente fotossensibilizante (ver a WO 02/44396 que descreve como isso pode ser conseguido em mais detalhes), por exemplo, mediante a irradiação antes da administração da molécula de medicamento, por exemplo, pela adição da molécula de medicamento de 5 minutos a 24 horas, por exemplo, de 30 minutos a 2 horas, após a irradiação.

[0051] Em certos casos, a molécula de medicamento será administrada simultaneamente com o agente fotossensibilizante. Em um outro aspecto a invenção fornece assim uma composição farmacêutica compreendendo um sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico como aqui descrito, juntamente com um agente terapêutico. Um portador ou excipiente farmaceuticamente aceitável pode adicionalmente estar presente.

[0052] Alternativamente, e mais tipicamente, o fotossensibilizante pode ser administrado antes da administração das moléculas de medicamento. [0053] Em mais um outro aspecto a invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo um sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico como aqui descrito, juntamente com um agente terapêutico, para uso em terapia, por exemplo, para uso na

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 22/42 / 33 terapia do câncer, genética ou de oligonucleotídeo (por exemplo, siRNA).

[0054] Em ainda mais um outro aspecto a invenção fornece o uso de um sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico como aqui descrito e/ou um agente terapêutico para a preparação de um medicamento para a utilização em terapia, por exemplo, terapia de câncer, genética ou de oligonucleotídeo (por exemplo, siRNA), em que dito sal do agente fotossensibilizante e dito agente terapêutico são colocados em contato (separada, simultânea ou sequencialmente) com células ou tecidos de um paciente e ditas células ou tecidos são irradiados com luz de um comprimento de onda eficaz para ativar o referido agente fotossensibilizante. Os métodos de tratamento compreendendo tais métodos formam outros aspectos da invenção.

[0055] Os agentes fotossensibilizantes aqui descritos podem ser utilizados para o transporte ou transfecção de qualquer molécula de droga no citosol de células vivas in vivo. Estes podem ser utilizados não apenas para transferir as moléculas (ou partes ou seus fragmentos) para dentro do interior de uma célula, mas também, em determinadas circunstâncias, para apresentar ou expressá-las na superfície celular. Assim, na seguinte ao transporte e liberação de uma molécula de medicamento no citosol da célula, se as células em questão forem células especializadas, tais como, por exemplo, as células apresentadoras de antígeno, a molécula ou fragmento, podem ser transportadas para a superfície da célula onde pode ser apresentada no lado de fora da célula, isto é, na superfície celular. Tais métodos têm utilidade particular no campo da vacinação, onde os componentes da vacina, isto é, antígenos ou imunógenos, podem ser introduzidos em uma célula para a apresentação na superfície desta célula, a fim de induzir, facilitar ou aumentar uma resposta imune. Outros detalhes quanto à utilidade das moléculas de expressão na superfície celular são descritos na WO 00/54802.

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 23/42 / 33

[0056] As moléculas de medicamento que podem ser introduzidas no citosol de células usando os agentes fotossensibilizantes aqui descritos incluem moléculas que não penetram facilmente as membranas celulares. Adicionalmente, os agentes aqui descritos podem aumentar a liberação de citosol e atividade das moléculas de medicamento que são apenas parcialmente capazes de penetrar na membrana da célula ou as membranas das vesículas intracelulares. As moléculas de medicamento podem ser compostos orgânicos, proteínas ou fragmentos de proteínas tais como, por exemplo, peptídeos, anticorpos ou antígenos ou seus fragmentos. Outra classe de moléculas de medicamento que podem ser introduzidas utilizando os agentes aqui descritos são medicamentos citotóxicos tais como toxinas proteicas ou compostos orgânicos citotóxicos. As moléculas que podem ser de interesse clínico para o tratamento de câncer, mas são restritas pela baixa ou nenhuma absorção no citosol podem ser introduzidas no citosol e direcionadas para células específicas quando se utiliza os métodos aqui descritos. A gelonina é um exemplo de uma tal molécula. Um outro exemplo de um agente citotóxico que pode ser utilizado em conjunto com os agentes fotossensibilizantes aqui descritos é a bleomicina.

[0057] As formas particulares de câncer que podem ser tratadas de acordo com os métodos aqui descritos incluem cânceres da cabeça e pescoço (por exemplo, carcinoma de células escamosas), osteossarcoma e metástases na pele, em particular as provenientes de cânceres da mama.

[0058] Dependendo da natureza da molécula de medicamento, os métodos aqui descritos podem ser utilizados para o tratamento de vários distúrbios, tais como artrite reumatóide, aterosclerose e outras doenças cardiovasculares, vírus e outras infecções, psoríase, ceratose solar, cicatrização de feridas, cura da fratura, verrugas e distúrbios genéticos herdados tais como fibrose cística, síndrome de Gorlin e ataxia telangiectasia.

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 24/42 / 33

[0059] Outra classe de moléculas de medicamento apropriadas são os ácidos nucleicos. Os ácidos nucleicos podem ser utilizados na forma de genes que codificam, por exemplo, as proteínas terapêuticas, moléculas de RNA anti-sentido, ribozimas, aptâmeros de RNA, RNAs hairpin curtos (shRNAs), microRNAs ou oligonucleotídeos formadores triplos. Alternativamente os ácidos nucleicos podem ser empregados na forma de moléculas não codificadoras tais como, por exemplo, moléculas anti-sentido de DNA ou RNA sintético, ribozimas, siRNAs, microRNAs, aptâmeros, oligonucleótidos formadores triplos, ácidos nucleicos de peptídeos (PNAs), DNA “chamariz” do fator de transcrição ou oligonucleotídeos quiméricos para a reparação de mutações específicas no paciente. Onde apropriado as moléculas de ácido nucleico podem estar na forma de genes inteiros ou fragmentos de ácido nucleico opcionalmente incorporados em uma molécula de vetor, por exemplo, um plasmídeo ou um vetor viral. A última forma tem aplicabilidade particular quando a molécula de transferência for para ser utilizada em métodos de terapia genética em que os genes são terapeuticamente transferidos para uma célula do paciente. Isto pode ser usado no tratamento de muitas doenças tais como câncer, doenças cardiovasculares, infecções virais, e distúrbios monogênicos tais como a fibrose cística.

[0060] Opcionalmente, um ou outro ou ambos do sal farmaceuticamente aceitável do agente fotossensibilizante e da molécula de medicamento a ser introduzida nas células podem ser ligados ou associados ou conjugados com as moléculas portadoras, moléculas alvo ou vetores que podem atuar para facilitar ou aumentar a absorção do agente fotossensibilizante ou da molécula de medicamento ou podem atuar para direcionar ou liberar estas entidades para um tipo de célula particular, tecido ou compartimento intracelular. Exemplos de sistemas portadores incluem polilisina, quitosanos e polietileniminas ou outros policátions, sulfato de

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 25/42 / 33 dextrano, diferentes lipídeos catiônicos, lipossomas, partículas de LDL reconstituídas ou lipossomas estericamente estabilizados. Estes sistemas portadores podem geralmente melhorar os farmacocinéticos e aumentar a absorção celular da molécula de medicamento e/ou do agente fotossensibilizante e pode também direcionar a molécula de medicamento e/ou o agente fotossensibilizante para os compartimentos intracelulares que são especialmente benéficos para a obtenção de internalização fotoquímica, mas eles em geral não possuem a capacidade de atingir a molécula de medicamento e/ou o agente fotossensibilizante nas células específicas (por exemplo, células cancerosas) ou tecidos. No entanto, para alcançar tal direcionamento específico ou seletivo as moléculas portadoras, a molécula de medicamento e/ou o fotossensibilizante podem estar associados, ligados ou conjugados com às moléculas alvo específicas que irão promover a absorção celular específica da molécula de medicamento nas células ou tecidos desejados. Tais moléculas alvos podem também direcionar a molécula de medicamento para os compartimentos intracelulares que são especialmente benéficos para a obtenção da internalização fotoquímica.

[0061] Muitas moléculas alvos diferentes podem ser empregadas, por exemplo, como descritas em Curiel, D.T. (1999), Ann. New York Acad. Sci. 886, 158-171; Bilbao, G. et al. (1998), in Gene Therapy of Cancer (Walden et al., eds., Plenum Press, New York), Peng K.W. and Russell S.J. (1999), Curr. Opin. Biotechnol. 10, 454-457; e Wickham T.J. (2000), Gene Ther. 7, 110114.

[0062] A molécula portadora e/ou a molécula alvo podem ser associadas, ligadas ou conjugadas à molécula de medicamento, ao agente fotossensibilizante ou ambos, e as mesmas ou diferentes moléculas portadoras ou alvos podem ser utilizadas. Tais moléculas alvos ou portadores também podem ser utilizados para direcionar a molécula de medicamento para os

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 26/42 / 33 compartimentos intracelulares particulares especialmente benéficos para o emprego de PCI, por exemplo, lisossomas ou endossomas.

[0063] As composições da invenção podem ser formuladas de modo convencional com um ou mais portadores ou excipientes fisiologicamente aceitáveis de acordo com as técnicas bem conhecidas no ofício. A natureza da composição e os portadores ou materiais de excipiente, dosagens etc. podem ser selecionados de modo rotineiro de acordo com a escolha e a via desejada de administração, propósito de tratamento, etc. As dosagens da mesma maneira podem ser determinadas de forma rotineira e podem depender da natureza da molécula de medicamento, do propósito de tratamento, da idade do paciente, do modo de administração, etc.

[0064] As composições geralmente serão administradas tópica ou sistemicamente. As composições tópicas incluem géis, cremes, pomadas, pulverizações, loções, supositórios vaginais, aerossóis, gotas, soluções e qualquer uma das outras formas farmacêuticas convencionais na técnica. A administração tópica em locais de difícil acesso pode ser conseguida por técnicas conhecidas no ofício, por exemplo, através da utilização de cateteres ou outros sistemas de liberação de medicamento adequados.

[0065] De preferência, as composições podem ser fornecidas em uma forma adaptada para a administração parenteral, por exemplo, por injeção intradérmica, subcutânea, intraperitoneal ou intravenosa, ou por infusão. As formas farmacêuticas alternativas assim incluem suspensões e soluções contendo o sal do agente fotossensibilizante opcionalmente em conjunto com um ou mais portadores e/ou diluentes convencionais inertes. As formulações para a administração parenteral podem estar na forma de soluções ou suspensões de injeção não aquosas, isotônicas, estéreis. Estas soluções podem ser preparadas a partir de pós ou grânulos estéreis, utilizando um ou mais portadores ou excipientes, por exemplo, agentes dispersantes, umectantes ou

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 27/42 / 33 de suspensão adequados. Os portadores adequados para a preparação de soluções para injeção incluem água, salina e dextrose. Outros diluentes ou solventes não tóxicos parentericamente aceitáveis podem ser utilizados, incluindo as soluções de aminoácido, tais como Glavamin® (Fresenius Kabi), soluções de carboidratos tais como Glucos® (Braun), eletrólitos tais como soluções de cloreto de sódio, solução de Ringer, soluções de trometamol, ou misturas de qualquer um dos precedentes.

[0066] A dose total, concentração e volume de administração do fotossensibilizante e do medicamento irão variar sobre uma grande faixa dependendo de vários fatores. Os principais fatores são: indicação (natureza da doença), estágio da doença, sistemas de órgãos e escolha do fotossensibilizante e medicamento.

[0067] A concentração dos compostos como descritos mais acima nas composições depende do uso pretendido do composto, da natureza da composição, do modo de administração, da condição a ser tratada e do paciente e pode ser variada ou ajustada de acordo com a escolha. Para utilização em PCI, é importante que a concentração do agente fotossensibilizante seja tal que assim que absorvido dentro da célula, por exemplo, em, ou associado com, um ou mais dos seus compartimentos intracelulares e ativado por irradiação, uma ou mais estruturas celulares são rompidas, por exemplo, um ou mais compartimentos intracelulares são submetidos a lise ou interrompidos. Os agentes fotossensibilizantes podem ser utilizados em uma concentração de, por exemplo, 0,5 a 100 mg por ml. Para tratamentos humanos in vivo o agente fotossensibilizante pode ser utilizado na faixa de 0,05 a 20 mg/kg de peso corporal quando administrado sistemicamente ou de 0,1 a 20 % em um solvente para aplicação tópica. O tempo de incubação das células com o agente fotossensibilizante (isto é, o tempo de “contacto”) pode variar de alguns minutos a várias horas, por

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 28/42 / 33 exemplo, mesmo até 48 horas ou mais. O tempo de incubação deve ser tal que o agente fotossensibilizante é absorvido pelas células apropriadas. A incubação das células com o agente fotossensibilizante pode opcionalmente ser seguida por um período de incubação com meio livre de fotossensibilizante antes das células serem expostas à luz e/ou da molécula de medicamento ser administrada.

[0068] A determinação das doses apropriadas de moléculas de medicamento para utilização de acordo com a presente invenção é prática de rotina para uma pessoa versada na técnica. Quando a molécula de medicamento for uma proteína ou peptídeo, as moléculas de medicamento devem ser em geral utilizadas em doses inferiores de menos do que 5 mg/kg (por exemplo, de 0,1 a 5 mg/kg). Quando a molécula de medicamento for um ácido nucleico, aproximadamente 10^-6 a 1 g de ácido nucleico por injeção pode ser utilizado em seres humanos.

[0069] Após a administração de um composto ou composição como aqui descrito a área tratada é exposta à luz para alcançar o efeito desejado. A etapa de irradiação de luz para ativar o agente fotossensibilizante pode ser efetuada de acordo com técnicas e procedimentos bem conhecidos na técnica. Fontes de luz adequadas capazes de fornecer o comprimento de onda e intensidade de luz desejados, também são bem conhecidas na técnica. O tempo durante o qual a superfície do corpo ou células são expostas à luz nos métodos da presente invenção pode variar. Por exemplo, a eficiência da internalização da molécula de medicamento para o citosol parece aumentar com a exposição à luz aumentada. Geralmente, o período de tempo para a etapa de irradiação está na ordem de minutos a várias horas, por exemplo, de preferência até 60 minutos, por exemplo, de 1 a 30 minutos, por exemplo, de 0,5 a 3 minutos ou de 1 a 5 minutos ou de 1 a 10 minutos, por exemplo, de 3 a 7 minutos, e de preferência aproximadamente 3 minutos, por exemplo, de 2,5

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 29/42 / 33 a 3,5 minutos. As doses de luz apropriadas podem ser selecionadas por uma pessoa versada na técnica e dependerão da quantidade de fotossensibilizante acumulada nas células alvo ou tecidos. A irradiação será em geral aplicada em um nível de dose de 40 a 200 Joules/cm², por exemplo, em 100 Joules/cm² em uma faixa de fluência de menos do que 200 mW/cm². A irradiação com comprimentos de onda de luz na faixa de 500 a 750 nm, por exemplo, 550 a 700 nm, é particularmente adequada para a utilização in vivo nos métodos aqui descritos.

[0070] Os métodos para a irradiação de diferentes áreas do corpo, por exemplo, por lâmpadas ou lasers são bem conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Van den Bergh, Chemistry in Britain, May 1986 p. 430-439). Para as regiões inacessíveis isto pode ser convenientemente conseguido usando fibras óticas. Para algumas utilizações, vários dispositivos tais como cateteres podem ser requeridos para a liberação de luz nas áreas de interesse.

[0071 ] A invenção será agora descrita com maiores detalhes por meio dos seguintes Exemplos não limitativos:

Exemplo 1 - Preparação de dissulfonato de meso-tetrafenil porfirina bis (monoetanolamina) ((MEA)₂-TPPS_2a)

[0072] Dissulfonato de meso-tetrafenil porfirina bis (trietilamina) preparado a partir do ácido livre foi dissolvido em metanol e um excesso de etanolamina adicionada. A solução foi agitada durante 15 minutos antes que o solvente tenha sido removido in vacuo a 30 ° C com um evaporador rotativo. Este procedimento foi repetido mais duas vezes.

Exemplo 2 - Preparação de dissulfonato bis meso-tetrafenil porfirina (meglumato) ((Megl)2-TPPS2a)

[0073] Dissulfonato de meso-tetrafenil porfirina (200 mg, 0,26 mmol) foi adicionado a uma solução de N-metil-D-glucamina (102 mg, 0,52 mmol)

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 30/42 / 33 em água desionizada (5 ml) na temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 15 minutos e a mistura foi liofilizada durante a noite. O composto do título foi isolado como um material sólido vermelho escuro. Rendimento: 310 mg (100 %).

Exemplo 3 - Preparação de dissulfonato bis de meso-tetrafenil porfirina (tris (hidroximetil) metilamina) ((TRIS)2-TPPS2a)

[0074] Dissulfonato de meso-tetrafenil porfirina (200 mg, 0,26 mmol) foi adicionado a uma solução de tris (hidroximetil) metilamina (63 mg, 0,52 mmol) em água desionizada (5 ml) na temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 15 minutos e a mistura foi liofilizada durante a noite. O composto do título foi isolado como um material sólido vermelho escuro. Rendimento: 260 mg (100 %).

Exemplo 4 - Preparação de dissulfonato bis de meso-tetrafenil porfirina (dietanolamina) ((DEA)2-TPPS2a)

[0075] Dissulfonato de meso-tetrafenil porfirina (100 mg, 0,13 mmol) foi adicionado a uma solução de dietanolamina (27 mg, 0,26 mmol) em água desionizada (5 ml) na temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 15 minutos e a mistura foi liofilizada durante a noite. O composto do título foi isolado como um material sólido vermelho escuro. Rendimento: 103 mg (80 %).

Exemplo 5 - Preparação de dissulfonato bis de meso-tetrafenil porfirina (1-(2hidroxietil) pirrolidina) ((HEP)2-TPPS2a)

[0076] Dissulfonato de meso-tetrafenil porfirina (100 mg, 0,13 mmol) foi adicionado a uma solução de 1-(2-hidroxietil) pirrolidina) (30 mg, 0,26 mmol) em água desionizada (5 ml) na temperatura ambiente. A mistura foi

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 31/42 / 33 agitada durante 15 minutos e a mistura foi liofilizada durante a noite. O composto do título foi isolado como um material sólido vermelho escuro. Rendimento: 117 mg (90 %).

Exemplo 6 - Preparação de dissulfonato bis de meso-tetrafenil porfirina (trietanolamina) ((TEA)2-TPPS2a)

[0077] Dissulfonato de meso-tetrafenil porfirina (100 mg, 0,13 mmol) foi adicionado a uma solução de trietanolamina (39 mg, 0,26 mmol) em água desionizada (5 ml) na temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 15 minutos e a mistura foi liofilizada durante a noite. O composto do título foi isolado como um material sólido vermelho escuro. Rendimento: 106 mg (79 %).

Exemplo 7 - Preparação de dissulfonato bis de meso-tetrafenil clorina (monoetanolamina) ((MEA)2-TPCS2a)

[0078] Dissulfonato bis de meso-tetrafenil porfirina (trietilamina) preparado a partir do ácido livre foi dissolvido em metanol e um excesso de etanolamina adicionado. A solução foi agitada durante 15 minutos antes que o solvente fosse removido in vacuo a 30 °C com um evaporador rotativo. Este procedimento foi repetido mais duas vezes

Exemplo 8 - Preparação de dissulfonato bis de meso-tetrafenil clorina (meglumato) ((Megl)2-TPCS2a)

[0079] Dissulfonato de meso-tetrafenil clorina (100 mg, 0,13 mmol) foi adicionado a uma solução de N-metil-D-glucamina (51 mg, 0,26 mmol) em água desionizada (5 ml) na temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 15 minutos e a mistura foi liofilizada durante a noite. O composto do título foi isolado como um material sólido vermelho escuro. Rendimento: 157

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 32/42 / 33 mg (100 %).

Exemplo 9 - Preparação de dissulfonato bis de meso-tetrafenil clorina (tris (hidroximetil) metilamina) ((TRIS)2-TPCS2a)

[0080] Dissulfonato de meso-tetrafenil clorina (100 mg, 0,13 mmol) foi adicionado à uma solução de tris (hidroximetil) metilamina (31 mg, 0,26 mmol) em água desionizada (5 ml) na temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 15 minutos e a mistura foi liofilizada durante a noite. O composto do título foi isolado como um material sólido vermelho escuro. Rendimento: 157 mg (100 %).

Exemplo 10 - Solubilidade dos sais de dissulfonato de meso-tetrafenil porfirina (TPPS2a)

[0081] Água foi adicionada em porções de 0,2 ml nos vários sais descritos nos Exemplos de 1 a 6 (aprox. 50 mg) em um tubo de ensaio. A mistura foi agitada até que as partículas sólidas foram fragmentadas e dissolvidas.

Exemplo No.	Composto	Solubilidade mínima em água
1	(MEA)2-TPPS2a	42,3 mg/ml
2	(Megl)2-TPPS2a	89,7 mg/ml
3	(TRIS)2-TPPS2a	49,9 mg/ml
4	(DEA)2-TPPS2a	31,4 mg/ml
5	(HEP)2-TPPS2a	28,3 mg/ml
6	(TEA)2-TPPS2a	32,1 mg/ml
[0082] As soluções altamente concentradas de sais de TPPS2a eram

viscosas.

Exemplo 11 - Solubilidade dos sais de dissulfonato de meso-tetrafenil clorina (TPCS2a)

[0083] Água foi adicionada em porções de 0,2 ml aos vários sais

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 33/42 / 33 descritos nos Exemplos de 7 a 9 (aprox. 50 mg) em um tubo de ensaio. A mistura foi agitada até que as partículas sólidas foram fragmentadas e dissolvidas.

Exemplo No.	Composto	Solubilidade mínima em água
7		(MEA)2-TPCS2a	34,9 mg/ml
8		(Megl)2-TPCS2a	38,9 mg/ml
9		(TRIS)2-TPCS2a	32,1 mg/ml
[0084]	As soluções altamente concentradas de sais de TPPS2a eram

viscosas.

Exemplo 12 - Estabilidade de sais de dissulfonato de meso-tetrafenil porfirina (TPPS2a)

[0085] As soluções aquosas de sais de TPPS_2a (aprox. 1 % em peso) foram mantidas a 40 °C durante 31 dias. As soluções foram analisadas por HPLC (HP 1100). As condições de HPLC foram como se segue:

Coluna: Agilent Extend C-18

Fase móvel: 85 % metanol, 15 % água

Fluxo: 1,0 ml por minuto

Detector: detector de UV, 415 nm

Exemplo No.	Composto	Degradação
1	(MEA)2-TPPS2a	Nenhuma degradação
2	(Megl)2-TPPS2a	Nenhuma degradação
3	(TRIS)2-TPPS2a	Nenhuma degradação
4	(DEA)2-TPPS2a	Nenhuma degradação
5	(HEP)2-TPPS2a	Nenhuma degradação
6	(TEA)2-TPPS2a	Nenhuma degradação

Conclusão: todas as amostras foram estáveis a 40 °C durante 31 dias.

[0086] Exemplo 13 - Estabilidade de sais de dissulfonato de mesotetrafenil clorina (TPCS2a)

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 34/42 / 33

[0087] As soluções aquosas de sais de TPCS_2a (aprox. 1 % em peso) foram mantidas a 40 °C durante 31 dias. As soluções foram analisadas por HPLC (HP 1100) de acordo com o método utilizado no Exemplo 12.

Exemplo No.	Composto	Degradação
7	(MEA)2-TPCS2a	Nenhuma degradação
8	(Megl)2-TPCS2a	Nenhuma degradação
9	(TRIS)2-TPCS2a	Nenhuma degradação

Conclusão: todas as amostras foram estáveis a 40 °C durante 31 dias.

Exemplo 14 - Cápsula contendo (MEA)2-TPPS2a para a administração oral [0088] (MEA)2-TPPS2a (30 mg) do Exemplo 1 foi misturado volumetricamente com monoidrato de lactose 0,15 mm (900 mg) (Apotekproduksjon AS, Oslo, Norway) utilizando um almofariz e um pilão. O pó foi suprido em uma cápsula de gelatina sólida no. 000 (Apotekproduksjon AS, Oslo, Norway).

Exemplo 15 - Solução estéril isotônica de (TRIS)2-TPCS2a sem substância tensoativa

[0089] (TRIS)2-TPCS2a (30 mg) do Exemplo 9 foi dissolvido em salina (cloreto de sódio a 0,9 %) (1,0 ml) usando um misturador (3M ESP CapMix) durante 2 minutos. A solução marrom foi livre de particulados (examinada por microscopia).

Exemplo 16 - Kit compreendendo (TRIS)₂-TPCS_2a e solvente [0090] Um kit foi produzido compreendendo dois frascos: [0091] Composição do frasco A: (TRIS)₂-TPCS_2a (20 mg) do Exemplo 9 como pó seco em um frasco (100 ml) [0092] Composição do frasco B: Uma solução aquosa (52 ml) que compreende: Cloreto de sódio 120 mM

Diidrogênio fosfato de potássio 4,3 mM

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 35/42 / 33

Hidrogenofosfato de dipotássio 4,3 mM

HCl/NaOH q.s. ad pH 6,0

Água para injeção q.s.

[0093] A solução no frasco B foi adicionada ao frasco A, e o frasco A foi agitado manualmente durante 3 minutos. A solução deve ser livre de partículas visíveis antes da utilização.

Exemplo 17 - Formulação tópica compreendendo (TRIS)2-TPCS2_a para a administração na pele ou mucosa

[0094] (TRIS)2-TPCS2a (20 mg) do Exemplo 9 foi misturado volumetricamente com Unguentum Merck usando um almofariz e um pilão. O creme marrom compreendendo 4 mg de (TRIS)2-TPCS2a por ml foi suprido em um frasco de vidro.

Exemplo 18 - Formulação de emulsão compreendendo (TRIS)₂-TPCS_2a para a administração parenteral ou enteral

[0095] (TRIS)₂-TPCS_2a (24 mg) do Exemplo 9 foi dissolvido em uma emulsão lipídica (ClinOleic 200 mg/ml (20 %) da Baxter) utilizando um misturador (3M ESP CapMix) durante 2 minutos. A emulsão marrom estava livre de particulados de (TRIS)2-TPCS2a (examinada por microscopia).

Exemplo 19 - Formulação contendo dissulfonato bis de tetrafenil clorina (monoetanolamina) ((MEA)₂-TPCS_2a) com Cremophor.

[0096] (MEA)₂-TPCS_2a do Exemplo 7 foi formulado em Cremophor

ELP a 10 % aquoso nas concentrações de 30 ou 60 mg/ml de acordo com o seguinte procedimento:

- (MEA)₂-TPCS_2a foi pesado em um recipiente;

- Cremophor ELP foi aquecido para 60 a 70 °C;

- O Cremophor aquecido foi adicionado ao (MEA)₂-TPCS_2a sob condições de agitação;

- A solução foi agitada durante aproximadamente 5 minutos em 60

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 36/42 / 33 a 70 °C e água estéril pré-aquecida (em 60 a 70 °C) foi adicionada lentamente até que a concentração de Cremophor foi de 10 %. A solução foi mantida em 60 a 70 °C durante todo o procedimento; e

- A solução foi depois submetida a autoclave.

[0097] A formulação de 30 mg/ml pode ser utilizada para a administração intravenosa, por exemplo, com uma dose inicial de 0,25 mg/kg de peso corporal.

Exemplo 20 - Formulação contendo dissulfonato bis de tetrafenil clorina (monoetanolamina) ((MEA)₂-TPCS_2a) em Tween 80.

[0098] (MEA)₂-TPCS_2a foi formulado em Tween 80 a 3 % de acordo com o seguinte procedimento:

- (MEA)₂TPCS_2a foi pesado em um frasco;

- Tampão 50 mM Tris (pH 8,5) foi adicionado ao frasco e a solução foi agitada (500 a 700 rpm) durante 10 minutos;

- Tween 80 foi adicionado e a solução foi agitada (500 a 700 rpm) durante 10 minutos. A concentração final de Tween 80 na formulação foi de 3 %;

- Manitol foi adicionado e a solução foi agitada (500 a 700 rpm) durante 20 horas. A concentração final de manitol na formulação foi de 2,8 %;

- A formulação de (MEA)₂TPCS_2a foi filtrada com um filtro de 0,22 μm para remover as partículas;

- A formulação foi suprida em frascos com rolhas e tampas;

- A formulação foi então submetida a autoclave durante 20 minutos a 121 °C.

[0099] A formulação deve ser armazenada em 2 a 8 °C protegida da luz.

Exemplo 21 - Estudo de fase clínica I/II em pacientes com câncer.

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 37/42 / 33

[00100] Em um estudo clínico de fase I/II os pacientes com câncer foram ministrados com o fotossensibilizante TPCS_2a (30 mg/ml do sal de dietanolamina ((MEA)2-TPCS2a) em uma formulação aquosa de Cremophor ELP a 10 % (ver o Exemplo 19). 11 pacientes em 3 grupos receberam doses de 0,25, 0,5 e 1,0 mg respectivamente de TPCS_2a por kg de peso corporal 4 dias antes da iluminação (652 nm de comprimento de onda, 60 J/cm²) de um tumor alvo definido. Além disso, os pacientes receberam uma injeção intravenosa do agente citotóxico bleomicina (15000 UI por m² de superfície corporal) 3 horas antes da iluminação. A formulação de TPCS2a foi administrada como uma injeção intravenosa lenta e os pacientes não experimentaram nenhuma dor ou outras reações adversas relacionadas com a administração; isto está em contraste com a utilização de outros fotossensibilizantes (por exemplo, temoporfina) formulados em formulações não aquosas onde a administração pode estar associada com dor forte. A formulação aquosa também tornou possível esguichar a agulha de injeção e a veia com salina após a injeção de fotossensibilizante, eliminando assim o efeito indesejado de fotossensibilidade no ou perto do local de injeção, que é frequentemente observado para fotossensibilizantes em formulações não aquosas onde tal esguicho não é possível.

[00101] A população de pacientes incluiu os pacientes com câncer de cabeça e pescoço (carcinoma de células escamosas), osteossarcoma e metástases cutâneas de câncer de mama. A regressão clínica completa do tumor alvo foi induzida em todos os pacientes algumas semanas após o tratamento, mostrando que a internalização fotoquímica mediada com TPCS2a de bleomicina constitui um tratamento eficaz de tumores sólidos, através de vários tipos de tumores diferentes.

Exemplo 22 - Composição de tablete compreendendo (MEA)₂-TPPS_2a para a administração oral

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 38/42 / 33

(MEA)2-TPPS2a	100 mg
Celulose microcristalina	800 mg
Croscarmelose(Na) (AcDiSol)	30 mg
Estearato de magnésio	30 mg

[00102] Todos os ingredientes foram misturados. Um tablete foi comprimido (diâmetro do tablete: 13 mm; peso do tablete: 960 mg).

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico, caracterizado pelo fato de que o dito sal é o dissulfonato bis de meso-tetrafenil clorina (monoetanolamina) (TPCS2a).
2. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um sal como definido na reivindicação 1, juntamente com pelo menos um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
3. Kit para uso em um método de internalização fotoquímica, caracterizado pelo fato de que compreende:

(a) um primeiro recipiente contendo um sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico como definido na reivindicação 1;

(b) um segundo recipiente contendo um agente terapêutico; e (c) onde dito sal está na forma sólida, um terceiro recipiente contendo uma solução aquosa para dissolver o sal antes do uso.
4. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico como definido na reivindicação 1, juntamente com um agente terapêutico.
5. Uso de um sal farmaceuticamente aceitável de um agente fotossensibilizante anfifílico como definido na reivindicação 1 e um agente terapêutico, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para a utilização em terapia de câncer, genética ou de oligonucleotídeo.
6. Uso de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a dita terapia é uma terapia de siRNA.
7. Kit de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido agente terapêutico é bleomicina.

Petição 870200040296, de 27/03/2020, pág. 40/42

2 / 2
8. Composição de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que o referido agente terapêutico é bleomicina.
9. Uso de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o referido agente terapêutico é bleomincina.
10. Kit de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido agente terapêutico compreende um componente de vacina.
11. Composição de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que o referido agente terapêutico compreende um componente de vacina.
12. Uso de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o referido agente terapêutico é um componente de vacina.