BR102016021058A2

BR102016021058A2 - composições de compostos orgânicos de selênio e métodos de uso das mesmas

Info

Publication number: BR102016021058A2
Application number: BR102016021058A
Authority: BR
Inventors: Power Ronan; Lan Zi-Jian
Original assignee: Alltech Inc
Priority date: 2014-03-14
Filing date: 2016-09-13
Publication date: 2017-05-30
Also published as: RU2731383C2; KR20170032862A; EP3116511A1; PT3116511T; MX2016011898A; RU2665135C2; AU2019246818B2; RU2016133469A; DK3116511T3; WO2015137983A1; JP7009053B2; KR20160125989A; CN106456658A; KR20210104070A; NZ723233A; JP2017078056A; KR102448455B1; MX2016011897A; HUE056172T2; JP6313479B2

Abstract

"composições de compostos orgânicos de selênio e métodos de uso das mesmas". a presente invenção refere-se a composições compreendendo compostos de selênio, tais como 5'-metilselenoadenosina, seadenosil-l-homocisteína, gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de fórmula (i), fórmula (ii) ou fórmula (iii), e combinações dos mesmos, e métodos de uso das mesmas para modulação do metabolismo de glicose em um indivíduo.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSIÇÕES DE COMPOSTOS ORGÂNICOS DE SELÊNIO E MÉTODOS DE USO DAS MESMAS".

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDO RELACIONADO

[001] O presente pedido de patente é uma continuação-em-parte do Pedido de Patente Internacional No. de Série PCT/US2014/029542, depositado em 14 de março de 2014, pedido que é aqui incorporado a título de referência.

CAMPO DO PRESENTE PEDIDO

[002] O presente pedido refere-se a composições de composições de selênio orgânicas e compostos e métodos para seu uso para substituir insulina, aumentar a atividade de insulina, inibir produção de glicose ou modular metabolismo de glicose em vários cursos biológicos.

ANTECEDENTES

[003] O selênio (Se) é um elemento traço essencial que desempenha um papel crítico em muitos processos biológicos, tais como reprodução, metabolismo de hormônio da tireoide, síntese de DNA e proteção de dano oxidativo e infecção. O selênio é incorporado ao sítio catalítico de várias enzimas dependentes de selênio tais como glutati-ona peroxidase (GPx), tiorredoxina redutases e uma metionina-sulfoxidorredutase. Estas selenoenzimas contribuem para regulagem de atividade metabólica, função imune, defesa antioxidante, regulagem redox intracelular e função mitocondrial.

[004] Ainda, resultados na literatura indicam que formas químicas diferentes de selênio têm bioatividades diferentes. Por exemplo, uma selenozolidina era mais eficaz na redução do número de tumores de pulmão do que selenometionina. (Poerschke e outros, J. Biochem. Molecular Toxicology 2012 26:344). Barger e outros mostraram que ca-mundongos alimentados com diferentes fontes de selênio, por exem- pio, metionina do selênio, selenita de sódio e levedura selenizada, tinham efeitos diferenciais sobre expressão de gene e sobre cursos funcionais específicos de estrutura e função mitocondriais. (Barger e outros, Genes and Nutrition 2012 7:155). Levedura selenizada contém muitos compostos de selênio e enxofre, mas não todos os compostos de selênio em levedura selenizada impactam processos biológicos. Ainda, uma mistura de compostos de selênio e enxofre em levedura selenizada foi mostrada inibir uns aos outros, impactar negativamente processos biológicos ou ser tóxica para células.

[005] Diabetes Mellitus (DM) Não Insulino-Dependente (Tipo II) é uma doença caracterizada por resistência à insulina em músculo es-queletal, fígado e gordura, combinada com defeitos em secreção de insulina devido à função de célula β pancreática. Resistência à insulina é uma característica central de diabetes Tipo II. No fígado, membros da família de fator de transcrição de gene Forkhead Box Class O (FO-XO) se tornam ativados em seu estado não fosforilado e eles residem no núcleo celular. No núcleo, fatores de transcrição FOXO se ligam à região promotora de genes, tal como Glicose 6-Fosfatase (G6pc). Junto com outros fatores de transcrição, tal como PGC-1a, transcrição aumentada de G6pc ocorre, desta maneira aumentando a taxa de produção de glicose. Glicose 6-fosfatase também catalisa a última etapa em gluconeogênese e glicogenólise causando a liberação de glicose a partir do fígado. G6pc é importante no controle de homeostase de glicose, particularmente em indivíduos diabéticos.

[006] A aparente diferença em bioatividade e disponibilidade de formas químicas distintas de selênio requer identificação de compostos contendo selênio que impactam positivamente processos biológicos. Em particular, há uma necessidade de caracterizar os efeitos de selênio em substituição de insulina, atividade de insulina aumentada, inibição de produção de glicose ou modulação de metabolismo de gli- cose em vários cursos biológicos. Ainda, há uma necessidade de determinar o efeito de compostos de selênio e sua eficácia como terapias de substituição de insulina para indivíduos sofrendo de diabetes Tipo I ou Tipo II.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[007] A presente invenção provê um método de substituição de insulina em um indivíduo. O método de substituição de insulina compreende administração de uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. A composição do método pode também compreender um veículo.

[008] A presente invenção também provê um método de aumento da atividade de insulina em um indivíduo. O método de aumento de atividade de insulina compreende administrar uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. A composição do método pode compreender também um veículo. O método de aumento da atividade de insulina pode compreender ainda administração de insulina ou um análogo ou derivado do mesmo.

[009] A presente invenção provê ainda um método de inibição de produção de glicose em um indivíduo. O método de inibição de produção de glicose compreende administração de uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. A composição do método pode também compreender um veículo.

[0010] A presente invenção provê ainda um método de modulação de metabolismo de glicose em um indivíduo. O método de modulação de metabolismo de glicose compreende: administração de uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. A composição do método pode também compreender um veículo.

[0011] Em qualquer um dos métodos de substituição de insulina, aumento da atividade de insulina, inibição de produção de glicose ou modulação do metabolismo de glicose em um indivíduo, a composição pode compreender 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína e Gama-glutamil-metilseleno-cisteína. Em qualquer um dos métodos de substituição de insulina, aumento da atividade de insulina, inibição de produção de glicose ou modulação do metabolismo de glicose em um indivíduo, a composição pode compreender pelo menos 0,1% (p/v) de 5'-Metilselenoadenosina. Em qualquer um dos métodos de substituição de insulina, aumento da atividade de insulina, inibição de produção de glicose ou modulação do metabolismo de glicose em um indivíduo, a composição pode estar em uma forma seca ou capsular.

[0012] Em qualquer um dos métodos de substituição de insulina, aumento da atividade de insulina, inibição de produção de glicose ou modulação de metabolismo de glicose em um indivíduo, a composição pode compreender ainda insulina ou um análogo ou derivado da mesma. Em qualquer um dos métodos de substituição de insulina, aumento da atividade de insulina, inibição da produção de glicose, ou modulação de metabolismo de glicose em um indivíduo, a composição pode compreender ainda um sensibilizador de insulina, um secretagogo de insulina ou um mimético de incretina. Em qualquer um dos métodos de substituição de insulina, aumento da atividade de insulina, inibição de produção de glicose ou modulação de metabolismo de glicose em um indivíduo, a composição pode excluir um ou mais 5'-Metilselenoadenosina, S-Adenosil-L-homocisteína ou Gama-glutamil-metil-cisteína.

[0013] Em qualquer um dos métodos de substituição de insulina, aumento da atividade de insulina, inibição de produção de glicose ou modulação do metabolismo de glicose em um indivíduo, a composição pode ser administrada oralmente. Em qualquer um dos métodos de substituição de insulina, aumento da atividade de insulina, inibição da produção de glicose ou modulação de metabolismo de glicose em um indivíduo, a 5'-Metilselenoadenosina ou o composto da Fórmula (I) é um selenoglicosídeo. Em qualquer um dos métodos de substituição de insulina, aumento da atividade de insulina, inibição de produção de glicose ou modulação de metabolismo de glicose em um indivíduo, a composição pode ser administrada a células do fígado do indivíduo.

[0014] A presente invenção provê uma composição compreendendo pelo menos dois compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II) e um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. A composição também pode compreender um veí- culo.

[0015] A presente invenção provê ainda uma composição compreendendo pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína e Gama-glutamil-metilseleno-cisteína. A composição também pode compreender um veículo.

[0016] A presente invenção provê ainda uma composição compreendendo pelo menos 0,1% (p/v) de um composto de acordo com a Fórmula (I): [0017] ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profár-maco do mesmo.

[0018] Ri é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR', onde R' é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R-ι junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[0019] R2 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R-ι junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[0020] R3 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloalquila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais ele estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[0021] R4 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloal-quila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[0022] R5 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloal-quila, arila ou aralquila.

[0023] R6 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloal-quila, arila ou aralquila.

[0024] R7 é uma C3-C16 alquila, onde a C3-C16 alquila não é uma alquila substituída tendo ambos um grupo carboxila e um grupo amino, alquenila, alquinila, cetona, amino álcool, aminoácido selecionado do grupo consistindo em arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocis-teína, glicina, prolina, alanina, valina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina e triptofano, OR', Se-R', S-R', onde R' para OR' é selecionado do grupo consistindo em H, alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para Se-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C-|6 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para S-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C16 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila.

[0025] R8 é hidrogênio, azido, alquila, alquenila, alquinila. A composição de Fórmula (I) pode também compreender um veículo. Ainda, a 5'-Metilselenoadenosina ou o composto de Fórmula (I) da composição pode ser um selenoglicosídeo. A composição da Fórmula (I) pode ser também administrada às células do fígado do indivíduo.

[0026] A presente invenção também provê uma composição compreendendo pelo menos 0,1% (p/v) de um composto de acordo com a Fórmula (II): [0027] ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profár-maco do mesmo.

[0028] é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR', onde R' é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R1 junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[0029] R2 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R-ι junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[0030] R3 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloalquila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[0031] R4 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloalquila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[0032] R5 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR', ou ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloalqui-la, arila ou aralquila.

[0033] R6 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloal-quila, arila ou aralquila.

[0034] R8 é hidrogênio, azido, alquila, alquenila, alquinila.

[0035] R9 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)0R', onde R' é alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R9 junto com R10 forma um anel heterocí-clico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[0036] R10 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)R', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou Rg junto com R10 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[0037] Rn é OR, alcóxi, aralcóxi ou amino, onde R é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila, heterociclila ou um sal farma-ceuticamente aceitável ou sal interno.

[0038] A composição da Fórmula (II) pode compreender um veículo. A composição da Fórmula (II) pode ser também administrada às células do fígado do indivíduo.

[0039] Finalmente, a presente invenção provê uma composição compreendendo pelo menos 0,1% (p/v) de um composto de acordo com a Fórmula (III): [0040] ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profár-maco do mesmo.

[0041] Ri é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R\ C(0)OR', onde R' é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou Ri junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[0042] R2 H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxila, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou Ri junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[0043] R3 é OH, OR, alcóxi, aralcóxi ou amino, onde R é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila, heterociclila ou um sal farmaceuticamente aceitável ou sal interno.

[0044] R4 é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila, heterociclila ou um sal farmaceuticamente aceitável ou sal interno.

[0045] R5 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila ou aralquila.

[0046] R6 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila ou aralquila.

[0047] R7 é uma C3-Ci6 alquila, onde a C3-Ci6 alquila não é uma alquila substituída tendo ambos um grupo carboxila e um grupo amino, alquenila, alquinila, cetona, aminoálcool, aminoácido selecionado do grupo consistindo em arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocis-teína, glicina, prolina, alanina, valina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina e triptofano, OR', Se-R', S-R\ onde R' para OR' é selecionado do grupo consistindo em H, alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para Se-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C16 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para S-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C16 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila.

[0048] A composição da Fórmula (III) pode compreender um veículo. A composição da Fórmula (III) pode também ser administrada às células do fígado do indivíduo.

[0049] As composições descritas aqui podem compreender pelo menos cerca de 0,033% (p/v) da composição de cada um de dois compostos ou pelo menos cerca de 0,033% (p/v) da composição de cada um de três compostos.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0050] Uma breve descrição dos desenhos é como segue. Quando uma mistura de compostos selênio é indicada, a quantidade em ppb indica a quantidade de ppb de selênio em cada composto selênio na mistura. Quando uma mistura de composto enxofre é indicada, quantidade em ppb indica a quantidade de ppb de enxofre de cada composto enxofre na mistura. Por exemplo, 150 ppb de Compostos CDE contêm 150 ppb de selênio no Composto C, 150 ppb de selênio no Composto D e 150 ppb de selênio no Composto E em combinação para uma concentração de selênio total de 450 ppb. Por exemplo, 150 ppb de Composto HIJ contêm 150 ppb de enxofre no Composto H, 150 ppb de enxofre no Composto I e 150 ppb de enxofre no Composto J em combinação para uma concentração de enxofre total de 450 ppb.

[0051] A FIG. 1 é um gráfico mostrando o efeito de 150 ppb de ca- da um dos compostos individuais e várias combinações de Composto C, Composto D, Composto E, Composto H, Composto I e Composto J sobre viabilidade celular em células de fígado AML-12 como indicado por OD490.

[0052] A FIG. 2 mostra o efeito de várias combinações de Composto C, Composto D, Composto E, Composto H, Composto I e Composto J sobre níveis de expressão de mRNA do gene G6pc em células do fígado AML-12.

[0053] A FIG. 2A é um gráfico em barras mostrando níveis de mRNA de G6pc em células AML-12 tratadas com um controle e 150 ppb de Compostos CDE e Compostos HIJ por 48 horas.

[0054] A FIG. 2B é um gráfico em barras mostrando expressão de mRNA de G6pc relativa em células AML-12 tratadas com Composto C, Composto D, Composto E, Composto H, Composto I e Composto J individual por 48 horas.

[0055] A FIG. 3 é um gráfico em barras mostrando os efeitos de insulina, Compostos CDE e combinações de ambos insulina e Compostos CDE sobre níveis de expressão de mRNA de G6pc relativos em células AML-12. *, P < 0,05, **P < 0,01 quando comparado com grupo controle (grupo de tratamento sem insulina e Compostos CDE).

[0056] A FIG. 4 é um gráfico em barras mostrando os efeitos de insulina, Compostos CDE e combinações de ambos insulina e compostos CDE sobre níveis de expressão de mRNA de G6pc relativos em células AML-12 cotratadas com 8-CPT/Dex. A figura inserida é um gráfico em barras com uma ampliação grande mostrando níveis de expressão de mRNA de G6pc relativos em células AML-12 tratadas com água sozinha (controle), uma combinação de 8-CPT/Dex e insulina e combinações de 8-CPT/Dex, insulina e Compostos CDE.

[0057] A FIG. 5 mostra o efeito de Compostos CDE e Compostos HIJ sobre níveis de expressão de mRNA relativos de genes Insre Igflr em células de fígado AML-12.

[0058] A FIG. 5A é um gráfico em barras mostrando níveis de expressão de mRNA de Insr relativos em células AML-12 tratadas com 150 ppb de Compostos CDE e 150 ppb de Composto HIJ por 24 horas. **P < 0,01 quando comparado com grupo controle (tratado com veículo água).

[0059] A FIG. 5B é um gráfico em barras mostrando níveis de expressão de mRNA de Igflr relativos em células AML-12 tratadas com 150 ppb de Compostos CDE e 150 ppb de Composto HIJ por 24 horas. **P < 0,01 quando comparado com grupo controle (tratado com veículo água).

[0060] A FIG. 5C é um gráfico em barras mostrando níveis de expressão de mRNA de Insr relativos em células AML-12 tratadas com controle, 10 ou 100 nM de insulina, 150 ppb ou 300 ppb de Compostos CDE ou cotratadas com 8-CPT/Dex, insulina e Compostos CDE. *, P < 0,05, ** P < 0,01 quando comparado com controle grupo (tratado sem 8-CPT/Dex/insulina/Compostos CDE).

[0061] A FIG. 5D é um gráfico em barras mostrando níveis de expressão de mRNA de Igfrl relativos em células AML-12 tratadas com controle, 10 ou 100 nM de insulina, 150 ppb ou 300 ppb de Compostos CDE ou cotratadas com 8-CPT/Dex, insulina e Compostos CDE. *, P < 0,05, ** P < 0,01 quando comparado com controle grupo (tratado sem 8-CPT/Dex/insulina/Compostos CDE).

[0062] A FIG. 6 mostra o efeito de Compostos CDE e Compostos HIJ sobre níveis de proteína de Foxo3 fosforilada em treonina 32 (pFoxo3T32) e Foxo4 fosforilada em treonina 28 (pFoxo4T28) em células AML-12 culturadas em meios contendo soro.

[0063] A FIG. 6A é um Western blot mostrando expressão de proteína de várias moléculas de sinalização, incluindo pFoxo3T32 e pFo-xo4T28, em resposta a tratamento de células AML-12 com um controle de água ou 150 ppb de Compostos CDE e 150 ppb de Compostos HIJ por 6 horas.

[0064] A FIG. 6B é um gráfico em barras mostrando análise quantitativa de níveis de proteína pFoxo3T32 no gel da FIG. 6A.

[0065] A FIG. 6C é um gráfico em barras mostrando análise quantitativa de níveis de proteína pFoxo4T28 no gel da FIG. 6A.

[0066] A FIG. 7 mostra o efeito de Compostos CDE, Compostos CE e Compostos DE sobre níveis de proteína de pFoxo3T32 e pFo-xo4T28 em células AML-12 culturadas em meios livres de soro.

[0067] A FIG. 7A é um Western blot mostrando expressão de proteína de várias moléculas de sinalização, incluindo pFoxo3T32 e pFo-xo4T28, em resposta a tratamento de células AML-12 com um controle de água ou 150 ppb de Compostos CDE, 150 ppb de Compostos CE e 150 ppb de Compostos DE por 6 horas.

[0068] A FIG. 7B é um gráfico em barras mostrando análise quantitativa de níveis de proteína pFoxo3T32 no gel da FIG. 7A.

[0069] A FIG. 7C é um gráfico mostrando análise quantitativa de níveis de proteína pFoxo4T28 no gel da FIG. 7A.

[0070] A FIG. 8 é um Western blot mostrando o efeito de um controle ou 150 ppb de Compostos CDE e 150 ppb de Compostos HIJ sobre níveis de proteína pF0X04T28, pF0X04S193 e outras moléculas de sinalização em células neuronais IMR-32 humanas.

[0071] A FIG. 9 mostra o efeito de Compostos CDE sobre produção de glicose, expressão de mRNA de G6pc e atividade de lactato desidrogenase extracelular (LDH) em hepatócitos de camundongo primários.

[0072] A FIG. 9A é um gráfico em barras mostrando níveis de glicose relativos nos meios de cultura de células de hepatócito de camundongo tratadas com controle, 8-CPT/Dex, 10 ou 100 nM de insulina, 150 ppb ou 300 ppb de Compostos CDE e combinações de insuli- na e Compostos CDE. * P < 0,05 vs grupo tratamento com veículo (a primeira barra nos gráficos).

[0073] A FIG. 9B é um gráfico em barras mostrando níveis de mRNA de G6pc relativos em células de hepatócito de camundongo tratadas com controle, 10 ou 100 nM de insulina, 150 ppb ou 300 ppb de Compostos CDE e combinações de insulina e Compostos CDE. * P < 0,05 vs grupo de tratamento de veículo (a primeira barras nos gráficos).

[0074] A FIG. 9C é um gráfico em barras mostrando níveis de LDH relativos nos meios de cultura de células de hepatócito de camundongo tratadas com controle, 10 ou 100 nM de insulina, 150 ppb ou 300 ppb de Compostos CDE e combinações de insulina e Compostos CDE.

[0075] A FIG. 10 mostra o efeito de Compostos CDE sobre produção de glicose, expressão de mRNA de G6pc e atividade de LDH ex-tracelular em hepatócitos de camundongo primários estimulados com 8-CPT/Dex.

[0076] A FIG. 10A é um gráfico em barras mostrando níveis de glicose relativos nos meios de cultura de células de hepatócito de camundongo tratadas com controle, 8-CPT/Dex, combinações de 8-CPT/Dex e insulina ou Compostos CDE, e combinações de 8-CPT/Dex, insulina e Compostos CDE.

[0077] A FIG. 10B é um gráfico em barras mostrando níveis de mRNA de G6pc relativos em células de hepatócito de camundongo tratadas com controle, 8-CPT/Dex, combinações de 8-CPT/Dex e insulina ou Compostos CDE, e combinações de 8-CPT/Dex, insulina e Compostos CDE.

[0078] A FIG. 10C é um gráfico em barras mostrando níveis de LDH relativos no meio de cultura de hepatócitos de camundongo tratados com controle, 8-CPT/Dex, combinações de 8-CPT/Dex e insulina ou Compostos CDE, e combinações de 8-CPT/Dex, insulina e Compostos CDE. * P < 0,05 vs grupo de tratamento com veículo (a primeira barra no gráfico).

[0079] A FIG. 11 mostra o efeito de Compostos CDE sobre produção de glicose e atividade de LDH extracelular em hepatócitos de ca-mundongo primários culturados em meios livres de soro.

[0080] A FIG. 11A é um gráfico em barras mostrando níveis de glicose relativos em meios de cultura de hepatócito de camundongo tratado com controle basal (veículo água), 10 ou 100 nM de insulina (Ins), 150 ppb ou 300 ppb de Compostos CDE e combinações de insulina e Compostos CDE na presença ou ausência de 8-CPT/Dex por 6 horas. # P < 0,05 vs grupo controle basal (a primeira barra no gráfico). * P < 0,05 vs o grupo de tratamento 8-CPT/Dex (a primeira barra cheia no gráfico).

[0081] A FIG. 11B é um gráfico em barras mostrando níveis de LDH relativos nos meios de cultura de células de hepatócito de camundongo tratadas com controle basal (veículo água), 10 ou 100 nM de insulina (Ins), 150 ppb ou 300 ppb de Compostos CDE e combinações de insulina e Compostos CDE na presença ou ausência de 8-CPT/Dex por 6 horas.

[0082] A FIG. 12 mostra o efeito de Compostos CDE sobre os níveis de expressão de proteína de Pdk1 fosforilada (pPdkl), Akt na se-rina 473 (pAktS473), Foxol na treonina 24 (pFoxo1T24), Foxo3 na treonina 32 (pFoxo3T32), Foxo4 na treonina 28 (pFoxo4T28) e Gsk3b na serina 9 (pGsk3bS9) em hepatócitos de camundongo primários.

[0083] A FIG. 12A é um Western blot mostrando o efeito de um controle, insulina ou 150 ppb ou 300 ppb de Compostos CDE sobre níveis de proteína pPdkl, pAktS473, pFoxo1T24, pFoxo3T32, pFo-xo4T28 e pGsk3bS9 em hepatócitos de camundongo primários.

[0084] A FIG. 12B é um gráfico em barras mostrando os níveis de proteína pPdkl relativos em hepatócitos de camundongo tratados com um controle, 100 nM de insulina ou 150 ppb ou 300 ppb de Compostos CDE.

[0085] A FIG. 12C é um gráfico em barras mostrando os níveis de proteína pAktS473 relativos em hepatócitos de camundongo tratados com um controle, 100 nM de insulina ou 150 ppb ou 300 ppb de Compostos CDE.

[0086] A FIG. 12D é um gráfico em barras mostrando os níveis de proteína pFoxo1T24 relativos em hepatócitos de camundongo tratados com um controle, 100 nM de insulina ou 150 ppb ou 300 ppb de Compostos CDE.

[0087] A FIG. 12E é um gráfico em barras mostrando os níveis de proteína pFoxo3T32 relativos em hepatócitos de camundongo tratados com um controle, 100 nM de insulina ou 150 ppb ou 300 ppb de Compostos CDE.

[0088] A FIG. 12F é um gráfico em barras mostrando os níveis de proteína pGsk3bS9 relativos em hepatócitos de camundongos tratados com um controle, 100 nM de insulina ou 150 ppb ou 300 ppb de Compostos CDE.

[0089] A FIG. 13 mostra o efeito de tempo de tratamento com Compostos CDE sobre níveis de expressão de proteína de Pdk1, Akt, Foxol e Foxo3 fosforiladas em hepatócitos de camundongo primários culturados sob condições livres de soro.

[0090] A FIG. 13A é um Western blot mostrando o efeito de tratamento com Compostos CDE por 0 minuto, 5 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas e 3 horas sobre níveis de proteína pPkdl, pAktT308, pFoxo3T32, Akt e Actb em hepatócitos de camundongo primários.

[0091] A FIG. 13B é um gráfico em barras mostrando os níveis de proteína pPdkl relativos após tratamento de hepatócitos de camundongo com Composto CDE por 0 minuto, 5 minutos, 30 minutos, 1 ho- ra, 2 horas e 3 horas. * P pelo menos < 0,05 quando comparado com tratamento sem quaisquer compostos CDE (grupo 0 minuto).

[0092] A FIG. 13C é um gráfico em barras mostrando os níveis de proteína pAktT308 relativos após tratamento de hepatócitos de ca-mundongo com Compostos CDE por 0 minuto, 5 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas e 3 horas. # P < 0,15, * P pelo menos < 0,05 quando comparado com tratamento sem compostos CDE (grupo 0 minuto).

[0093] A FIG. 13D é um gráfico em barras mostrando os níveis de proteínas pFoxo1T24 e pFoxo3T32 combinadas após tratamento de hepatócitos de camundongo com Compostos CDE por 0 minuto, 5 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas e 3 horas. # P < 0,15, * P pelo menos < 0,05 quando comparado com tratamento sem compostos CDE (grupo 0 minuto).

[0094] A FIG. 14 mostra o efeito de Compostos CDE sobre níveis de glicose no sangue em camundongos Lep^b/db.

[0095] A FIG. 14 é um gráfico em barras mostrando os níveis de glicose no sangue em camundongos LeprQ,ft/aíft após intraperitonealmen-te injetados com solução salina fisiológica ou Compostos CDE dia-sim-dia-não da idade de camundongo de 27 dias a 3,5 meses.

[0096] A FIG. 14B é um gráfico em barras mostrando os níveis de glicose no sangue em camundongos LeprQ,fe/a,fe após intraperitonealmen-te injetados com solução salina fisiológica ou Compostos CDE diariamente a partir da idade de camundongo de 38 dias a 66 dias.

[0097] A FIG. 15 mostra o efeito de Compostos CDE sobre tolerância à glicose em camundongos Lep/3'670'6 após intraperitonealmente injetados com solução salina fisiológica ou Compostos CDE dia-sim-dia-não a partir da idade de camundongo de 27 dias a 3,5 meses.

[0098] A FIG. 15A é um gráfico em barras mostrando o efeito de Compostos CDE sobre níveis de glicose no sangue em camundongos Lep/^b/dò tratados com solução salina e Compostos CDE no ponto de tempo zero (determinado imediatamente antes da injeção de glicose) e vários pontos de tempo (0,25 hora, 0,5 hora, 1 hora e 2 horas) após as injeções de glicose. * P se refere a pelo menos < 0,05 quando comparado com grupo tratado com solução salina no mesmo ponto de tempo.

[0099] A FIG. 15B é um gráfico mostrando a análise quantitativa da área sob a curva (AUC) do gráfico na FIG. 15A.

DESCRIÇÃO DETALHADA DEFINIÇÕES

[00100] Conforme aqui usado, os termos "administração" e "administrando" se referem ao ato de dar um fármaco, profármaco ou outro agente ou tratamento terapêutico (por exemplo, composições do presente pedido) a um indivíduo a células, tecidos e órgãos in vivo, in vitro ou ex vivo. Os compostos e composições da presente invenção podem ser dados a um indivíduo através de qualquer via de administração conhecida na técnica. Vias de administração exemplares para o corpo humano podem ser através dos olhos (oftálmica), boca (oral), pele (tópica ou transdermal), nariz (nasal), pulmões (inalante), mucosa oral (bucal), cérebro, ouvido, retal, vaginal ou através de injeção. Vias de injeção podem ser administradas intravenosamente, subcutaneamen-te, intratumoralmente, intraperitonealmente e similar.

[00101] O termo "alquila" se refere a um grupo hidrocarboneto saturado ramificado ou não ramificado de 1 a 24 átomos de carbono e, preferivelmente, pelo menos três átomos de carbono. Em algumas modalidades, um grupo "alquila" contém 1 a 16 átomos de carbono (isto é, C-M6 alquila), especificamente, em outras modalidades, a alquila compreende 3 a 16 átomos (isto é, C3.16 alquila). O grupo alquila pode ser opcionalmente substituído com um grupo acila, amino, amido, azido, carboxila, alquila, arila, halo, guanidinila, oxo, sulfanila, sulfenila, sulfo-nila, heterociclila ou hidroxila. Exemplos adicionais de um grupo alquila incluem, mas não estão limitados a, metila, etila, propila, iso-propila, butila, iso-butila, butila secundária, butila terciária, pentila, isopentila, neo-pentila, hexila, iso-hexila, 3-metilpentila, 2,3-dimetilbutila, neo-hexila, heptila, octila, nonila, decila, undecila, dodecila, tridecila, tetra-decila, pentadecila e hexadecila.

[00102] Em uma modalidade de uma C3-C16 alquila, a alquila não é uma alquila substituída. Em outras modalidades, a alquila substituída não tem ambos um grupo carboxila e um grupo amino. Em modalidades adicionais, a C3-C16 alquila não é uma alquila substituída tendo ambos um grupo carboxila e um grupo amino.

[00103] O termo "metal alcalino" se refere a sais metálicos que incluem, mas não estão limitados a, sais de metal alcalino apropriados (por exemplo, Grupo IA), sais de metal alcalinoterroso (por exemplo, Grupo IIA) e outros metais fisiologicamente aceitáveis. Sais metálicos podem ser feitos a partir de alumínio, cálcio, lítio, magnésio, potássio, sódio, zinco ou combinações dos mesmos.

[00104] O termo "alquenila" se refere a uma cadeia de carbono reta ou ramificada contendo pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono. Em algumas modalidades, "alquenila" se refere a um hidro-carboneto contendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 átomos de carbono (isto é, C-mo alquenila). Exemplos de um grupo alquenila incluem, mas não estão limitados a, eteno, propeno, buteno, penteno, hexeno, hep-teno, octeno, noneno e deceno. O grupo alquenila pode ser opcionalmente substituído com um grupo amino, alquila, halo ou hidroxila.

[00105] O termo "amido" se refere a ou um grupo C-amido, tal como uma porção --CONR'R" ou um grupo N amido, tal como --NR'COR", onde R' e R" podem ser independentemente hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, alcóxi, carbocíclico, heterocíclico, arila ou aralquila. Um grupo "sulfonamido" inclui a porção --NR'--S02--R", onde oR'eo R" podem ser hidrogênio, alquila, arila ou aralquila.

[00106] O termo "alquinila" se refere a uma cadeia de carbono reta ou ramificada compreendendo pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono. Em modalidades exemplares, "alquinila" se refere a um hi-drocarboneto contendo 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 átomos de carbono (isto é, C2-io alquinila). Exemplos de um grupo alquinila incluem, mas não estão limitados a, etina, propina, butina, pentina, hexina, heptina, octina, nonina e decina. O grupo alquinila pode ser opcionalmente substituído com um grupo amino, alquila, halo ou hidroxila.

[00107] O termo "arila" se refere a um sistema aromático carbocícli-co compreendendo um, dois ou três anéis. Os anéis podem ser ligados juntos de uma maneira pendente ou podem ser fundidos juntos. O termo "arila" compreende grupos aromáticos tais como fenila, naftila, tetra-hidronaftila, tetralina, indano e bifenila. O grupo arila pode ser opcionalmente substituído com um grupo amino, alquila, halo, hidroxila, carbocíclico, heterocíclico ou um outro grupo arila.

[00108] Uma "combinação" conforme aqui usado se refere a uma pluralidade de componentes. A combinação pode compreender, consistir essencialmente em ou consistir em átomos, compostos, composições, componentes, constituintes, elementos, porções, moléculas ou misturas. Uma combinação inclui, mas não está limitada a, uma mistura.

[00109] O termo "fundido" significa que um segundo anel está presente (isto é, ligado ou formado) ao ter dois átomos adjacentes em comum (isto é, compartilhados) com o primeiro anel. O termo "fundido" é equivalente aos termos "condensado", "unido" e "ligado", que podem ser usados intercomutavelmente.

[00110] O termo "cicloalquila" se refere a um anel de carbono saturado ou parcialmente saturado monocíclico compreendendo vários átomos no anel. Em algumas modalidades, "cicloalquila" se refere a um anel de carbono contendo 3-12 átomos no anel (isto é, C3_12 ciclo- alquila). Conforme aqui usado, uma cicloalquila compreende estruturas de anel monociclo, em ponte, espiro, fundido, biciclo e triciclo. Exemplos de um grupo cicloalquila incluem, mas não estão limitados a, ci-clopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclopentenila, ciclo-hexila, ciclo-hexenila, ciclo-heptila, ciclo-heptenila, norbornila, decalina, adamantila e ciclo-octila. O grupo cicloalquila pode ser opcionalmente substituído com um grupo amino, alquila, halo ou hidroxila.

[00111] O termo "aralquila" se refere a porções alquila substituídas com arila. Grupos aralquila podem ser grupos "aralquila inferior", onde os grupos são unidos a grupos alquila tendo um a seis átomos de carbono. Exemplos de grupos aralquila incluem benzila, difenilmetila, tri-fenilmetila, feniletila e difeniletila. Os termos "benzila" e "fenilmetila" são intercomutáveis. Em algumas modalidades, a alquila é uma C3-C16 alquila. Em outras modalidades, a alquila não é uma alquila substituída tendo ambos um grupo carboxila e um grupo amino.

[00112] O termo "arilóxi" se refere a um grupo arila ligado a um átomo de oxigênio. O grupo arilóxi pode ser opcionalmente substituído com um grupo halo, hidroxila ou alquila. Exemplos de tais grupos incluem, mas não estão limitados a, fenóxi, 4-cloro-3-etilfenóxi, 4-cloro-3-metilfenóxi, 3-cloro-4-etilfenóxi, 3,4-diclorofenóxi, 4-metilfenóxi, 3-trifluormetoxifenóxi, 3-trifluormetilfenóxi, 4-fluorfenóxi, 3,4-dimetilfenóxi, 5-bromo-2-fl uorfenóxi, 4-bromo-3-fl uorfenóxi, 4-fl úor-3-meti Ifenóxi, 5,6,7,8-tetra-hidronaftilóxi, 3-isopropilfenóxi, 3-ciclopropilfenóxi, 3-etilfenóxi, 4-terc-butilfenóxi, 3-pentafluoretilfenóxi e 3-(1,1,2,2-tetrafl uoretóxi )fenóxi.

[00113] O termo "alcóxi" se refere a um grupo contendo óxi substituído com um grupo alquila ou cicloalquila. Exemplos de um grupo alcóxi incluem, sem limitação, metóxi, etóxi, terc-butóxi e ciclo-hexiloxi. Grupos "alcóxi inferior" têm um a seis átomos de carbono e incluem, mas não estão limitados a, grupos metóxi, etóxi, propóxi, butóxi, iso- propóxi e terc-butóxi.

[00114] O termo "aralcóxi" se refere a um grupo aralquila contendo óxi unido através de um átomo de oxigênio a outros grupos. Grupos "aralcóxi inferior" são grupos fenila ligados a um grupo alcóxi inferior. Exemplos de um grupo aralcóxi inferior incluem, mas não estão limitados a, benzilóxi, 1-feniletóxi, 3-trifluormetoxibenzilóxi, 3-trifuormetil benzí I óxi, 3,5-difluorbenzilóxi, 3-bromobenzilóxi, 4-propilbenzilóxi, 2-flúor-3-trifluormetilbenzilóxi e 2-feniletóxi.

[00115] O termo "acila" se refere a uma porção -C (=0)R, onde R é hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, carbocíclico, heterocíclico, arila ou aralquila. Preferivelmente, R é hidrogênio, alquila arila ou aralquila.

[00116] O termo "carboxila" se refere a uma porção --R'C(=0)OR", onde R' e R" são independentemente hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, carbocíclico, heterocíclico, heterocicloalquila, arila, éter ou aralquila. R' pode ser ainda uma ligação covalente. Uma "carboxila" inclui ambos ácidos carboxílicos e ésteres de ácido carboxílico.

[00117] O termo "ácido carboxílico" se refere a um grupo carboxila onde R" é hidrogênio ou um sal. Ácidos carboxílicos incluem, mas não estão limitados a, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido butírico, ácido valérico, ácido 2-metil propiônico, ácido oxirano-carboxílico e ácido ciclopropano carboxílico.

[00118] O termo "éster do ácido carboxílico" ou "éster" se refere a um grupo carboxila onde R" é alquila, alquenila, alquinila, carbocíclico, heterocíclico, arila ou aralquila. Exemplos de ácidos carboxílicos incluem, mas não estão limitados a, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido butanoico, ácido pentanoico, ácido hexanoico, ácido heptanoico, ácido octanoico, ácido nonanoico, ácido decanoico, ácido ciclopropanocarboxílico, ácido ciclobutanocarboxílico, ácido ciclopen-tanocarboxílico, ácido ciclo-hexanocarboxílico, ácido ciclo-heptanocarboxílico, ácido ciclo-octanocarboxílico ou ácido ciclonona- nocarboxílico.

[00119] O termo "carbonila" se refere a uma porção C=0, também conhecida como um grupo "oxo".

[00120] O termo "heterociclo" ou "heterociclila" ou "anel heterocícli-co" se refere a um hidrocarboneto cíclico aromático ou não aromático com 3 a 12 átomos de carbono. Em modalidades exemplares, "heterociclila" se refere a um hidrocarboneto cíclico contendo 3, 4, 5 ou 6 átomos no anel (isto é, C3.6 heterociclila). A heterociclila pode ser opcionalmente substituída, saturada ou insaturada. Tipicamente, pelo menos um dos átomos no anel é um Oxigênio (O), Nitrogênio (N), Enxofre (X), Fósforo (P) ou Selênio (Se). Por exemplo, em algumas modalidades, um átomo de N no anel da heterociclila é o átomo de ligação a uma porção -C(O) para formar uma amida, um carbamato ou uma ureia. Exemplos de um grupo heterocíclico incluem, mas não estão limitados a, aziridina, oxirano, tirano, azetidina, oxetano, tietano, pirro-lidina, imidazol, tetra-hidrofurano, pirano, tiopirano, tiomorfolina, S-óxido de tiomorfolina, oxazolina, tetra-hidrotiofeno, piperidina, tetra-hidropirano, tiano, imodazolidina, oxodioxolenila, oxazolidina, tiazolidi-na, dioxolano, ditiolano, piperazina, oxazina, ditiano, dioxana, piridinila, furanila, benzofuranila, isobenzofuranila, pirrolila, tienila, 1,2,3-triazolila, 1,2,4-triazolila, indolila, imidazolila, tiazolila, tiadiazolila, piri-midinila, oxazolila, triazinila e tetrastila, heterociclos exemplares incluem benzimidazol, di-hidrotiofeno, dioxina, dioxano, dioxolano, ditiano, ditiazina, ditiazol, ditiolano, furano, indol, 3-H-indazol, 3-H-indol, indoli-zina, isoindol, isotiazol, isoxazol, morfolina, oxazol, oxadiazol, oxati-azol, oxatiazolidina, oxazina, oxadiazina, piperazina, piperidina, purina, pirano, pirazina, pirazol, piridina, pirimidina, pirimidina, piridazina, pir-rol, pirrolidina, tetra-hidrofurano, tetrazina, tiadiazina, tiadiazol, tiatri-azol, tiazina, tiazol, tiofeno, triazina e triazol. O heterociclo pode ser opcionalmente substituído com um grupo amino, alquila, alquenila, al- quinila, halo, hidroxila, carbocíclico, tio, outro heterocíclico ou arila.

[00121] O termo "heteroarila" se refere a um hidrocarboneto cíclico, onde pelo menos um de uma pluralidade de átomos no anel é O, N, S, P ou Se. O anel da heteroarila é caracterizado por elétrons [pi] deslo-calizados (aromaticidade) compartilhados dentre os membros do anel. Porções heteroarila como aqui definido podem ter mãos de ligação (,bonding hands) de Carbono (C), N, S, P ou Se. Por exemplo, em algumas modalidades, um átomo de N no anel da heteroarila é o átomo de ligação a uma porção -C(O) para formar uma amida, um carbamato ou uma ureia. Em modalidades exemplares, "heteroarila" se refere a um cíclico compreendendo 5 ou 6 átomos no anel (isto é, C5.6 heteroarila). Exemplos de um grupo heteroarila incluem, mas não estão limitados a, pirrol, furano, tieno, oxazol, tiazol, isoxazol, isotiazol, imidazol, pirazol, oxadiazol, tiadiazol, triazol, tetrazol, piridina, pirimidina, pirazi-na, piridazina e triazina.

[00122] O termo "hidróxi" ou "hidroxila" se refere ao substituinte -OH.

[00123] O termo "oxo" se refere ao substituinte =0.

[00124] O termo "nitro" se refere a N02.

[00125] O termo "azido" se refere a N3.

[00126] O termo "análogo(s) de enxofre" se refere a um análogo de um composto, onde um ou mais átomos de selênio foram substituídos por um ou mais átomos de enxofre.

[00127] O termo "sulfanila" se refere a uma porção --R', onde R' é hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, carbocíclico, heterocíclico, arila ou aralquila.

[00128] O termo "sulfenila" se refere a uma porção --SOR', onde R' é hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, carbocíclico, heterocíclico, arila ou aralquila.

[00129] O termo "sulfonila" se refere a uma porção --SOR', onde R' se refere a hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, carbocíclico, hete-rocíclico, arila ou aralquila.

[00130] O termo "cetona" se refere a uma porção contendo pelo menos um grupo carbonila onde o carbono carbonila é ligado a dois outros átomos de carbono. Em modalidades exemplares, uma "cetona" se refere a uma porção contendo carbonila contendo 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 átomos de carbono (isto é, C3.10 cetona). Exemplos de um grupo cetona incluem, mas não estão limitados a, cetona, butanona, penta-nona, hexanona, heptanona, octanona, nonanona, decanona, ciclobu-tanona, ciclopentanona, ciclo-hexanona, ciclo-heptanona, ciclo-octanona, ciclononanona e ciclodecanona.

[00131] O termo "amino" se refere a um grupo primário, secundário ou terciário tendo a fórmula --NR'R", onde R' e R" são independentemente hidrogênio, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, arila, carboxila, cicloalquila, heterocíclico ou um outro grupo amino (como no caso de hidrazida). R' e R", junto com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados, formam um anel tendo 4 a 8 átomos. Desta maneira, o termo "amino" inclui grupos amino não substituídos, monossubsti-tuídos (por exemplo, monoalquilamino ou monoarilamino) e dissubsti-tuídos (por exemplo, dialquilamino ou aralquilamino). Grupos amino incluem uma porção --NH2, metilamino, etilamino, dimetilamino, dieti-lamino, metil-etilamino, pirrolidin-1 -ila ou piperidino, morfolino, etc. Outros grupos "amino" exemplares formando um anel incluem pirrolila, imidazolila, pirazolila, isotiazolila, isoxazolila, piridila, pirazinila, pirimi-dinila, piridazinila, indolizinila, imidazolila, isoindolila, indolila, indazoli-la, purinila, quinolizinila. O anel contendo o grupo amino pode ser opcionalmente substituído com um outro grupo amino, alquila, alquenila, alquinila, halo ou hidroxila.

[00132] O termo "amina" se refere a um grupo amino primário, secundário ou terciário da fórmula --NR'R", onde R' e R" como usado nesta definição são independentemente hidrogênio, acila, alquila, al-quenila, alquinila, aralquila, arila, carboxila, cicloalquila, heterocíclico ou outro amino (no caso de hidrazida) ou R' e R" junto com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados formam um anel tendo 4-8 átomos. Desta maneira, o termo "amino" como aqui usado inclui grupos amino não substituídos, monossubstituídos (por exemplo, monoalqui-lamino ou monoarilamino) e dissubstituídos (por exemplo, dialquilami-no ou aralquilamino). Grupos amino incluem --NH2, metilamino, etila-mino, dimetilamino, dietilamino, metil-etilamino, pirrolidin-1 -ila ou pipe-ridino, morfolino, etc. Outros grupos "amino" exemplares formando um anel incluem, mas não estão limitados a, pirrolila, imidazolila, pirazolila, isotiazolila, isoxazolila, piridila, pirazinila, pirimidinila, piridazinila, indo-lizinila, imidazolila, isoindolila, indolila, indazolila, purinila, quinolizinila. O anel contendo o grupo amino pode ser opcionalmente substituído com um outro grupo amino, alquila, alquenila, alquinila, halo ou hidroxi-la.

[00133] O termo "álcool" se refere a "hidróxi", "hidroxila" ou qualquer substituinte compreendendo a porção -OH.

[00134] O termo "aminoálcool" se refere a um grupo funcional contendo ambos um álcool e um grupo amina. "Amino álcoois" se refere também a aminoácidos tendo um carbono ligado a um álcool no lugar do grupo de ácido carboxílico. Em modalidades exemplares, um "amino álcool" compreende uma amina ligada ao carbono adjacente ao carbono carregando álcool. Em modalidades exemplares, "amino álcool" se refere a uma amina e uma porção contendo álcool contendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 átomos de carbono (isto é, C1-12 amino álcool). Exemplos de amino álcoois incluem, mas não estão limitados a, etanolamina, heptaminol, isoetarina, norepinefrina, propa-nolamina, esfingosina, metanolamina, 2-amino-4-mercaptobutan-1-ol, 2-amino-4-(metiltio)butan-1-ol, cisteinol, fenilglicinol, prolinol, 2-amino- 3-feniI-1 -propanol, 2-amino-1-propanol, ciclo-hexilglicinol, 4-hidróxi-prolinol, Leucinol, terc-leucinol, fenilalaninol, a-fenilglicinol, 2-pirrolidinometanol, tirosinol, valinol, serinol, 2-dimetilaminoetanol, histi-dinol, isoleucinol, Leucinol, metioninol, 1-metil-2-pirrolidinometanol, treoninol, triptofanol, alaninol, argininol, glicinol, glutaminol, 4-amino-5-hidroxipentanamida, ácido 4-amino-5-hidroxipentanoico, ácido 3-amino-4-hidroxibutanoico, 3-amino-4-hidroxibutanamida e 4-hidróxi-prolinol.

[00135] O termo "aminoácido" se refere a um grupo contendo um ácido carboxílico e uma amina ligada ao átomo de carbono imediatamente adjacente ao grupo carboxilato e inclui ambos aminoácidos naturais e sintéticos. Exemplos de aminoácidos incluem, mas não estão limitados a, arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteína, glici-na, prolina, alanina, valina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina e triptofano. Em algumas modalidades, a carboxila é substituída com H, um sal, éster, alquila ou aralquila. O grupo amino pode também ser substituído com H, acila, alquila, alquenila, alquinila, carboxila, cicloalquila, aralquila ou heterociclila.

[00136] O termo "éter" se refere à porção --R'--0-R", onde R' e R" são independentemente hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, carbo-cíclico, heterocíclico, arila ou aralquila. R' pode ser ainda uma ligação covalente ligada a um carbono.

[00137] O termo "halogênio" se refere a um átomo de flúor, cloro, bromo ou iodo.

[00138] O termo "haleto" se refere a um grupo funcional contendo um átomo ligado a um átomo de flúor, cloro, bromo ou iodo. Modalidades exemplares reveladas aqui podem incluir grupos "haleto de alquila", "haleto de alquenila, "haleto de alquinila", "haleto de cicloalquila", "haleto de heterociclila" ou "haleto de heteroarila". Em modalidades exemplares, "haleto de alquila" se refere a uma porção contendo uma ligação carbono-halogênio contendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 átomos de carbono (isto é, haleto de C^o alquila). Exemplos de um grupo haleto de alquila incluem, mas não estão limitados a, grupos fluormeti-la, fluormetila, clorometila, clorometila, bromometila, bromometila, io-dometila e iodoetila. A menos que de outro modo indicado, qualquer grupo contendo carbono referido aqui pode conter uma ou mais ligações carbono-halogênio. A título de exemplo não limitante, um grupo alquila pode ser, mas não é limitado a, metila, fluormetila, difluorme-tila, trifluormetila, clorometila, diclorometila, triclorometila, bromometila, dibromometila, tribromometila, iodometila, diiodometila, triiodometila, clorofluormetila, diclorofluormetila e difluorclorometila.

[00139] Nos compostos descritos aqui, heteroátomos são capazes de carregar valências diferentes múltiplas. A título de exemplo não limitante, S, Se e N podem ser neutros ou ter uma carga positiva. Ainda, O pode ser neutro ou ter uma carga positiva ou negativa.

[00140] Modalidades exemplares dos compostos e composições da presente invenção compreendem Fórmulas (I), (II) e (III), que podem compreender diastereômeros e enantiômeros dos compostos ilustrativos. Enantiômeros são definidos como uma de um par de entidades moleculares que são imagens de espelho um do outro e não superpostas. Diastereômeros ou diastereoisômeros são definidos como estere-oisômeros outros que não enantiômeros. Diastereômeros ou diastereoisômeros são estereoisômeros não relacionados como imagens de espelho. Diastereoisômeros são caracterizados por diferenças em propriedades físicas.

[00141] Uma modalidade da presente invenção pode compreender um composto de acordo com a Fórmula (I): [00142] ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profár-maco do mesmo.

[00143] é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R\ C(0)0R', onde R' é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou Ri junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00144] R2 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR'; onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou Ri junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00145] R3 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloalquila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00146] R4 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloalquila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00147] R5 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloal- quila, arila ou aralquila.

[00148] R6 é oxo, hidroxila, alquila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila ou aralquila.

[00149] R7 é C3-C16 alquila, onde a C3_16 alquila não é alquila substituída tendo ambos um grupo carboxila e um grupo amino, alquenila, alquinila, cetona, amino álcool, aminoácido selecionado do grupo consistindo em arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteína, glici-na, prolina, alanina, valina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina e triptofano, OR', Se-R', S- R', onde R' para OR' é selecionado do grupo consistindo em H, alquila, cicloalquila, arila, aralquila e hete-rociclila, onde R' para Se-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C6 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para S-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C16 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila; e [00150] R8 é hidrogênio, azido, alquila, alquenila, alquinila.

[00151] O termo "Composto C" se refere à 5'-Metilselenoadenosina, também conhecida como (2R,4S,5S)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((metilselanil)metil)tetra-hidrofuran-3,4-diol (Número de Registro CAS 5135-40-0), e inclui quaisquer sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

[00152] Uma outra modalidade da presente invenção pode compreender um composto de acordo com a Fórmula (II): [00153] ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profár-maco do mesmo, onde [00154] Ri é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)0R', onde R' é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila ou R-ι junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio;

[00155] R2 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR'; onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R-ι junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio;

[00156] R3 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloalquila, carboxila ou amino; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio;

[00157] R4 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloalquila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio;

[00158] R5 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloal- quila, arila ou aralquila;

[00159] R6 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloal-quila, arila ou aralquila;

[00160] R8 é hidrogênio, azido, alquila, alquenila, alquinila;

[00161] R9 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)0R', onde R' é alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou Rg junto com R10 formam um anel hetero-cíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio;

[00162] R10 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou Rg junto com R10 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio; e [00163] Rn é OR, alcóxi, aralcóxi ou amino, onde R é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila, heterociclila ou um sal farma-ceuticamente aceitável ou sal interno.

[00164] O termo "Composto D" se refere à 5'-Selenoadenosil homo-cisteína; ácido (2R)-2-amino-4-((((2S,3S,5R)-5-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metil)selanil)butanoico (Número Registro CAS 4053-91-2) e inclui quaisquer sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

[00165] Uma modalidade adicional da presente invenção pode compreender um composto de acordo com a Fórmula (III): [00166] ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profár-maco do mesmo, onde [00167] Ri é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)0R', onde R' é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou Ri junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio;

[00168] R2 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR'; onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou Ri junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio;

[00169] R3 é OH, OR, alcóxi, aralcóxi ou amino, onde R é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila, heterociclila ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou sal interno;

[00170] R4 é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila, heterociclila ou um sal farmaceuticamente aceitável ou sal interno;

[00171] R5 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila ou aralquila;

[00172] R6 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila ou aralquila; e [00173] R7 é C3-C16 alquila, onde a C3-Ci6 alquila não é uma alquila substituída tendo ambos um grupo carboxila e um grupo amino, alquenila, alquinila, cetona, amino álcool, amino ácido selecionado do grupo consistindo em arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâ-mico, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteína, glicina, prolina, alanina, valina, isoleucina, leucina, metionina, fenilala-nina, tirosina e triptofano, OR', Se-R', S- R', onde R' para OR' é selecionado do grupo consistindo em H, alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para Se-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C16 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para S-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C16 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila.

[00174] O termo "Composto E" se refere a γ-L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína; também conhecida como N5-(1-carbóxi-2-(metilselanil)etil)-L-glutamina ou qualquer sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00175] Os termos "Composto CDE", "Compostos CDE", "combinação de Composto CDE" ou "Composto CDE em combinação" se referem a uma combinação ou mistura de Composto C, Composto D e Composto E ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

[00176] O termo "Composto H" se refere a 5'-Metiltioadenosina; 5'-S-Metil-5'-tioadenosina (No Registro CAS. 2457-80-9) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00177] O termo "Composto I" se refere a S-Adenosil-L- homocisteína, também conhecida como (S)-5'-(S)-(3-Amino-3-carboxipropil)-5'-tioadenosina (No. Registro CAS No. 979-92-0) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00178] O termo "Composto J" se refere a γ-L-glutamil-metil-L-cisteína, também conhecida como Gama-glutamil-metil-cisteína ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00179] O termo "Composto HIJ" se refere a uma mistura de Composto H, Composto I e Composto J ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

[00180] Os termos "análogo" e "derivado são intercomutáveis e se referem a uma modificação natural ou não natural de pelo menos uma posição de uma dada molécula. Por exemplo, um derivado de um dado composto ou molécula pode ser modificado ou através da adição de um grupo funcional ou átomo, remoção de um grupo funcional ou átomo ou mudança de um grupo funcional ou átomo para um grupo funcional ou átomo diferente (incluindo, mas não limitado a, isótopos).

[00181] O termo "compreendendo" se refere a uma composição, composto, formulação ou método que é inclusivo e não exclui elementos ou etapas de método adicionais. O termo "compreendendo" também se refere a uma composição, composto, formulação ou modalida- des de método da presente invenção que é inclusivo e não exclui elementos ou etapas de método adicionais.

[00182] O termo "consistindo em" se refere a um composto, composição, formulação ou método que exclui a presença de qualquer componente ou etapas de método adicionais. O termo "consistindo em" se refere também a um composto, composição, formulação ou método da presente invenção que exclui a presença de qualquer componente ou etapas de método adicionais.

[00183] O termo "consistindo essencialmente em" se refere a uma composição, composto, formulação ou método que é inclusivo de elementos ou etapas de método adicionais que não afetam materialmente a(s) característica(s) da composição, composto, formulação ou método. O termo "consistindo essencialmente em" também se refere a uma composição, composto, formulação ou método da presente invenção que é inclusivo de elementos ou etapas de método adicionais que não afetam materialmente a(s) característica(s) da composição, composto, formulação ou método.

[00184] O termo "composto(s)" se refere a qualquer um ou mais entidade química, porção, agente farmacêutico, fármaco e similar que pode ser usado para tratar, diagnosticar ou prevenir uma doença, enfermidade, moléstia ou distúrbio de função corporal. Um composto pode ser determinado ser terapêutico ao usar os métodos de avaliação do presente pedido.

[00185] O termo "composição(ões)" se refere à combinação de um ou mais compostos com ou sem um outro agente, tal como, mas não limitado a um agente veículo (por exemplo, um ou mais compostos contendo selênio com um veículo, inerte ou ativo, tornando a composição especialmente adequada para uso para diagnóstico ou terapêutico in vitro, in vivo ou ex vivo).

[00186] O termo "componente" se refere a uma parte constituinte de um composto ou uma composição. Por exemplo, componentes de uma composição podem incluir um composto, um veículo e qualquer outro agente presente na composição.

[00187] O termo "quantidade eficaz" se refere à quantidade de uma composição ou composto suficiente para obter resultados benéficos ou desejados. Uma quantidade eficaz pode ser administrada em uma ou mais aplicações ou dosagens e não pretende ser limitada a uma formulação ou via de administração particular.

[00188] O termo "hidrato" se refere a um composto que é associado com água na forma molecular (isto é, onde a ligação H- OH não é separada) e pode ser representado, por exemplo, pela fórmula R x H20, onde R é um composto revelado aqui. Um dado composto pode formar mais de um hidrato incluindo, por exemplo, monoidratos (R x H20), dii-dratos (R2 x H20), triidratos (R3 x H2) e similar.

[00189] O termo "inibidor" ou "antagonístico" se refere à propriedade de um composto que diminui, limita, inibe ou bloqueia a ação ou função de um outro composto.

[00190] O termo "isolado" se refere à separação de um material de pelo menos um outro material em uma mistura ou de materiais que estão naturalmente associados com o material. Por exemplo, um composto sintetizado sinteticamente é separado de um material de partida ou um intermediário.

[00191] Um "composto terapêutico conhecido" se refere a um composto terapêutico que foi mostrado (por exemplo, através de testes animais ou experiência anterior com administração a humanos) ser eficaz em um tratamento. Em outras palavras, um composto terapêutico conhecido não é limitado a um composto conhecido ou mostrado ser eficaz no tratamento de doença (por exemplo, doença neurodege-nerativa).

[00192] O termo "potencial mitocondrial" se refere a uma diferença de tensão através da membrana mitocondrial interna mantida pelo movimento líquido de cargas positivas através da membrana.

[00193] O termo "modula metabolismo de glicose" se refere a uma mudança no estado (por exemplo, atividade ou quantidade) de um estado conhecido ou determinado em uma célula ou organismo vivo de um curso bioquímico que forma, converte ou quebra glicose ou componente da mesma.

[00194] Opcional" ou "opcionalmente" se refere a uma circunstância onde o evento ou circunstância subsequentemente descrito pode ou não ocorrer, e que a descrição inclui casos onde o dito evento ou circunstância ocorre e casos onde não. "Opcionalmente" é inclusivo de modalidades onde as condições descritas estão presentes e modalidades onde a condição descrita não está presente. Por exemplo, "feni-la opcionalmente substituída" significa que a fenila pode ou não ser substituída, e que a descrição inclui ambas fenila não substituída e fenila onde há substituição.

[00195] O termo "selênio orgânico" ou "composto orgânico de selê-nio" se refere a qualquer composto orgânico onde selênio substitui enxofre. Desta maneira, selênio orgânico pode se referir a qualquer composto biossintetizado por levedura ou a compostos orgânicos de selênio livres que são quimicamente sintetizados, tal como selenometioni-na livre.

[00196] Os termos "paciente" e "indivíduo" são usados intercomuta-velmente e se referem a qualquer membro do Reino Animalia. Um indivíduo pode ser um mamífero, tal como um humano, mamífero domesticado (por exemplo, cachorro ou gato) ou um mamífero de pecuária (por exemplo, vaca/gado ou porco/suíno).

[00197] O termo "ppb" conforme aqui usado se refere a partes por bilhão com base em selênio para compostos contendo selênio ou com base em enxofre para compostos contendo enxofre. Exemplos de compostos contendo Selênio são Composto C, Composto D e Composto E. Exemplos de compostos contendo enxofre são Composto H, Composto I e Composto J. A fim de converter ppb com base em selênio em ppb do composto contendo selênio multiplicar o ppb indicado pelos fatores que seguem: 4,35 para Composto C, 5,46 para Composto D e 3,94 para Composto E. A fim de converter ppb com base em enxofre em ppb do composto contendo enxofre multiplicar a ppb pelos fatores que seguem: 9,28 para Composto H, 12,00 para Composto I e 8,25 para Composto J.

[00198] A expressão "farmaceuticamente aceitável" se refere àqueles compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, dentro do escopo de julgamento médico importante, adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais em toxidez, irritação, resposta alérgica excessiva ou outro problema ou complicação, comensurado com uma razão benefício/risco razoável.

[00199] O termo "veículo" se refere a um veículo farmaceuticamente aceitável. A expressão "veículo farmaceuticamente aceitável" se refere a um material, composição ou controle farmaceuticamente aceitável, tal como uma carga líquida ou sólida, diluente, excipiente, solvente ou material de encapsulação, envolvido no carreamento ou transporte de um composto contendo selênio, análogo ou derivado de um órgão ou porção do corpo para outro órgão ou porção do corpo. Um veículo deve ser aceitável no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não prejudicial para o paciente ou indivíduo.

[00200] Alguns exemplos de materiais que podem servir como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a: (1) açúcares, tais como lactose, glicose e sacarose; (2) amidos, tais como amido de milho e amido de batata; (3) celulose, e seus derivados, tais como carboximetil celulose de sódio, etil celulose e acetato de celulose; (4) tragacanto em pó; (5) malte; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tais como manteiga de cacau e ceras de supositório; (9) óleos, tais como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de açafrão, óleo de sésamo, óleo de oliva, óleo de milho e óleo de soja; (10) glicóis, tal como propileno glicol; (11) polióis, tais como glicerina, sorbitol, manitol e polietileno glicol; (12) ésteres, tais como oleato de etila e laurato de etila; (13) ágar; (14) agentes de tamponamento, tais como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; (15) ácido algínico; (16) água livre de pirógeno; (17) solução salina isotônica; (18) solução de Ringer; (19) álcool de etila; (20) soluções tampão de fosfato; e (21) outras substâncias não tóxicas compatíveis empregadas em formulações farmacêuticas.

[00201] O termo "profármaco" se refere a um composto farmacolo-gicamente ativo. Mais tipicamente, um "profármaco" se refere a um composto inativo que é convertido em um agente farmacologicamente ativo através de uma transformação metabólica. Um profármaco de um composto ou composição descrito aqui é preparado através da modificação de grupos funcionais presentes no composto de qualquer uma das fórmulas acima de tal maneira que as modificações podem ser cli-vadas in vivo para liberar o composto parental. Um profármaco pode prontamente sofrer mudanças químicas in vivo sob condições fisiológicas (por exemplo, hidrólise ou catálise de enzima) resultando em liberação do agente farmacologicamente ativo). Profármacos incluem compostos de qualquer fórmula descrita aqui, onde um grupo hidróxi, amino ou carbóxi é ligado a qualquer grupo que pode ser clivado in vivo para regenerar o grupo hidroxila, amino ou carbóxi livre, respectivamente. Exemplos de profármacos incluem, mas não estão limitados a, ésteres (por exemplo, derivados de acetato, formato e benzoato) de compostos de qualquer fórmula acima ou qualquer outro derivado, que quando trazido para o pH fisiológico ou através de ação de enzima é convertido no fármaco parental ativo. Procedimentos convencionais para a seleção e preparação de derivados de profármaco adequados são descritos na técnica (vide, por exemplo, Bundgaard. Design of Prodrugs. Elsevier, 1985).

[00202] O termo "purificado" ou "substancialmente purificado" se refere à remoção de componentes inativos ou inibidores (por exemplo, contaminantes) de uma composição para o ponto que 10% ou menos (por exemplo, 10% ou menos, 9% ou menos, 8% ou menos, 7% ou menos, 6% ou menos, 5% ou menos, 4% ou menos, 3% ou menos, 2% ou menos ou 1% ou menos) da composição compreendem componentes inativos, compostos ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.

[00203] O termo "sais" pode incluir sais de adição ácidos farmaceuticamente aceitáveis ou sais de adição de bases livres. Exemplos de ácidos que podem ser empregados para formar sais de adição farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a, sais derivados de ácidos inorgânicos não tóxicos tal como ácido nítrico, fosfóri-co, sulfúrico ou bromídrico, iodídrico, fluorídrico, fosforoso, bem como sais derivados de ácidos orgânicos não tóxicos tais como ácidos mono- e dicarboxílicos alifáticos, ácidos alcanoicos substituídos com feni-la, ácidos hidroxil alcanoicos, ácidos alcanodioicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfônicos alifáticos e aromáticos e ácidos acético, maleico, succínico ou cítricos. Exemplos não limitantes de tais sais incluem na-padisilato, besilato, sulfato, pirossulfato, bissulfato, sulfeto, bissulfeto, nitrato, fosfato, monoidrogenofosfato, di-hidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, cloro, bromo, iodo, acetato, trifluoracetato, propionato, ca-prilato, isobutirato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, mandelato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoa-to, dinitrobenzoato, ftalato, benzenossulfonato, toluenossulfonato, feni-lacetato, citrato, lactato, maleato, tartrato, metanossulfonato e similar. Também compreendidos são sais de aminoácidos tais como, mas não limitado a, arginato, gluconato, galacturonato e outros sais tais como, mas não limitado a, aqueles revelados em Berge e outros ("Pharma-ceuticals Salts", J. Pharma. Sei. 1977; 66:1-19).

[00204] A expressão "sais farmaceuticamente aceitáveis" inclui, mas não está limitada a, sais bem conhecidos daqueles versados na técnica. Por exemplo, monossais (por exemplo, sais de metal alcalino e amônio) e polissais (por exemplo, dissais ou trissais) da presente invenção. Sais farmaceuticamente aceitáveis de compostos da invenção são preparados, por exemplo, quando um grupo permutável, tal como hidrogênio nas porções --OH, --NH-- ou --P(=0)(0H)--, é substituído com um cátion farmaceuticamente aceitável (por exemplo, um íon de sódio, potássio ou amônio) e pode ser convenientemente preparado a partir de um composto correspondente revelado aqui através de, por exemplo, reação com uma base adequada.

[00205] Em casos onde compostos são suficientemente básicos ou ácidos para formar sais ácidos ou de base não tóxicos, administração dos compostos como sais pode ser apropriada. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis são sais de adição ácidos orgânicos formados com ácidos que formam um ânion fisiológico aceitável, por exemplo, tosilato, metanossulfonato, acetato, citrato, malonato, tartara-to, succinato, benzoato, ascorbato, alfa-cetoglutarato e alfa-glicerofosfato. Sais inorgânicos adequados podem também ser formados, incluindo sais de cloridrato, sulfato, nitrato, bicarbonato e carbonato. Sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser obtidos usando procedimentos-padrão bem conhecidos na técnica, por exemplo, através de reação de um composto suficientemente básico, tal como uma amina com um ácido adequado fornecendo um ânion fisiologicamente aceitável. Sais de metal alcalino (por exemplo, sódio, potássio ou lítio) ou sais de metal alcalinoterroso (por exemplo, cálcio) de ácidos carbo-xílicos podem ser também feitos.

[00206] Os termos "levedura enriquecida com selênio" e "levedura selenizada" se referem a qualquer levedura (por exemplo, Saccha-romyces cerevisiae) que é cultivada em um meio contendo uma fonte de selênio, tais como sais de selênio inorgânicos. A quantidade de sal de selênio inorgânico residual no produto acabado é geralmente bem baixa (por exemplo, menos de 2%).

[00207] O termo "substituído" em conexão com uma porção se refere a um substituinte adicional que é unido em qualquer local aceitável na porção. A menos que de outro modo indicado, porções podem ser ligadas através de um átomo de carbono, nitrogênio, oxigênio, enxofre ou qualquer outro aceitável. Exemplos de substituintes incluem, mas não estão limitados a, aminas, álcoois, tióis, éteres, alcenos, alcinas, epóxido, aziridina, oxirano, azetidina, di-hidrofuranos, pirrolidinas, pira-nos, piperidinas, aldeídos, cetonas, ésteres, ácidos carboxílicos, car-boxilatos, iminas, imidas, azidas, grupos azo, eneaminas, haletos de alquila, haletos de alquenila, haletos de alquinila, haletos de arila, fos-finas, óxidos de fosfino, fosfinitos, fosfonitos, fosfitos, fosfonato, fosfa-tos, sulfatos, sulfóxidos, grupos sulfonila, grupos sulfoxila, sulfonatos, nitratos, nitritos, nitrilas, grupos nitro, grupos nitrosos, cianatos, tiocia-natos, isotiocianato, carbonatos, haletos de acila, peróxidos, hidrope-róxicos, hemiacetais, hemicetais, acetais, cetais, ortoésteres, ésteres de ortocarbonato, sulfetos, dissulfetos, ácidos sulfônicos, ácidos sulfô-nicos, tionas, tiais, fosfodiésteres, ácidos borônicos, ésteres borônicos, ácidos borônicos e ésteres borônicos.

[00208] O termo "tratando", "tratar" e "tratamento" se referem a um tratamento terapêutico onde o objetivo é deixar lento (por exemplo, diminuir ou postergar) o início de uma condição fisiológica indesejada, reduzir sintomas de um distúrbio ou doença presente ou obter resultados benéficos ou desejados, tal como restauração ou inibição parcial ou total em declínio de um parâmetro, valor, função, métrica ou resul- tado que tinha se tornado ou tornaria anormal. Resultados benéficos ou desejados incluem, mas não estão limitados a, alívio de sintomas; diminuição do grau ou vigor ou taxa de desenvolvimento da condição, distúrbio ou doença; estabilização (isto é, não piora) do estado da condição, distúrbio ou doença; retardo em início ou deixar mais lenta a progressão da condição, distúrbio ou doença; melhora da condição, distúrbio ou estado de doença; e remissão (seja parcial ou total), se ou não se traduz em diminuição imediata de sintomas clínicos reais ou melhora da condição, distúrbio ou doença.

[00209] O termo "reagente(s) capaz de detectar especificamente expressão de gene" se refere a reagentes capazes de ou suficientes para detectar a expressão de vários genes descritos aqui. Exemplos de reagentes adequados incluem, mas não estão limitados a, primers ou sondas de ácido nucleico capazes de especificamente hibridizar para mRNA ou cDNA e anticorpos (por exemplo, anticorpos monoclo-nais ou policlonais).

[00210] O termo "tóxico" se refere a quaisquer efeitos negativos ou prejudiciais em um indivíduo, uma célula ou um tecido comparado com a mesma célula ou tecido antes da administração do intoxicante. COMPOSTOS E COMPOSIÇÕES

[00211] A presente invenção refere-se a compostos orgânicos de selênio, composições e métodos de uso dos compostos e composições. Os compostos e composições revelados aqui podem substituir insulina, aumentar a atividade da insulina, inibir produção de glicose ou modular metabolismo de glicose em vários cursos biológicos. Composições, compostos e métodos da presente invenção não parecem afetar de modo adverso metabolismo de glicose em células do fígado, então eles podem ser também usados para tratar ou prevenir Diabetes Melitus Não Insulino-Dependente (Tipo II).

[00212] Uma modalidade da presente invenção refere-se a uma composição compreendendo, consistindo essencialmente em ou consistindo em um composto de Fórmula (I): [00213] ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profár-maco do mesmo.

[00214] Ri é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)0R', onde R' é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R^ junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00215] R2 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R-ι junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00216] R3 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloalquila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais ele estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00217] R4 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloalquila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00218] R5 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloal-quila, arila ou aralquila.

[00219] R6 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloal-quila, arila ou aralquila.

[00220] R7 é uma C3-C16 alquila, onde a C3-C16 alquila não é uma alquila substituída tendo ambos um grupo carboxila e um grupo amino, alquenila, alquinila, cetona, amino álcool, aminoácido selecionado do grupo consistindo em arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocis-teína, glicina, prolina, alanina, valina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina e triptofano, OR', Se-R', S-R', onde R' para OR' é selecionado do grupo consistindo em H, alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para Se-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C16 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para S-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C-i6 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila.

[00221] R8 é hidrogênio, azido, alquila, alquenila, alquinila.

[00222] Uma modalidade adicional das composições descritas aqui pode compreender, consistir em ou consistir em 5'-Metilselenoadenosina ("Composto C") e quaisquer análogos, derivados e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo. O Composto C é (2R,4S,5S)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-5-((metilselanil)metil)tetra-hidrofuran-3,4-diol (Número Registro CAS 5135-40-0) e inclui quaisquer análogos, derivados e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

[00223] Uma composição da presente invenção pode compreender, consistir essencialmente em ou consistir em um composto de Fórmula (I), Composto C e combinações dos mesmos. Por exemplo, um aspecto do presente pedido provê composições compreendendo um composto selecionado do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, um composto de Fórmula (I) e combinações dos mesmos. Em modalidades adicionais, um ou mais desses compostos podem ser sintéticos, isolados e/ou purificados.

[00224] Em algumas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em ou consiste em pelo menos 5'-Metilselenoadenosina e um outro composto. Em outras modalidades, o outro composto é um composto contendo selênio. Em modalidades adicionais, a composição compreende uma razão de 5'-Metilselenoadenosina para o outro composto (por exemplo, um composto contendo selênio) de pelo menos 1:1 a 100:1, 1:1 a 50:1, 1:1 a 10:1, 1:1 a 6:1 ou 1:1 a 3:1.

[00225] Em algumas modalidades, é provida uma composição compreendendo, consistindo essencialmente em ou consistindo em um composto de acordo com a Fórmula (I) ou um sal farmaceutica-mente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo, onde R-ι, R3, R4 e R8 são cada um H; R2 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxila, cicloalquila, C(0)R' ou C(0)OR', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; R5 e R6 estão cada um ausentes; e R7é uma C3-C6 alquila, onde a C3-Ci6 alquila não é uma alquila substituída tendo ambos um grupo carboxila e um grupo amino, alquenila, alquinila, cetona, amino álcool, aminoácido selecionado do grupo consistindo em arginina, histidina, lisina, ácido aspárti-co, ácido glutâmico, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteína, glicina, prolina, alanina, valina, isoleucina, leucina, me-tionina, fenilalanina, tirosina e triptofano, OR', Se-R', S- R', onde R' para OR' é selecionado do grupo consistindo em H, alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para Se-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C16 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para S-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C16alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila.

[00226] Em uma modalidade específica, é provida uma composição compreendendo, consistindo essencialmente em ou consistindo em pelo menos cerca de 0,033% (p/v) a pelo menos cerca de 0,1% (p/v) de um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo de acordo com a Fórmula (I) ou 5'-Metilselenoadenosina ("Composto C"). Em uma outra modalidade, a composição exclui 5'-Selenoadenosil homocisteína e/ou Gama-L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína. Em modalidades adicionais, a composição exclui um ou mais de 5'-Metildioadenosina, S-Adenosil-L-homocisteína e Gama-glutamil-metil-cisteína. Em algumas modalidades, as composições compreendem um composto de acordo com a Fórmula (I) ou 5'-Metilselenoadenosina ("Composto C") ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo, contanto que um ou mais de 5'-Metiltioadenosina, Gama-glutamil-metil-cisteína ou adenosil homocisteína, homocisteína ou metionina sejam excluídos.

[00227] Em algumas modalidades, é provida uma composição compreendendo um composto de acordo com a Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo, onde R-ι, R3, R4 e R8 são cada um H; R2 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxila, cicloalquila, C(0)R' ou C(0)OR', onde R' é se- lecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; R5 e R6 estão cada um ausentes; e R7 é alquila selecionada do grupo consistindo em iso-propila, butila, iso-butila, butila secundária, butila terciária, pentila, iso-pentila, neo-pentila, hexila, iso-hexila, 3-metilpentila, 2,3-dimetilbutila, neo-hexila, heptila, octila, nonila, decila, undecila, do-decila, tridecila, tetradecila, pentadecila e hexadecila ou aminoácido.

[00228] Em algumas modalidades, é provida uma composição compreendendo, consistindo essencialmente em ou consistindo em um composto de acordo com a Fórmula (I) ou 5'-Metilselenoadenosina ("Composto C") ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou pro-fármaco do mesmo, onde R^ R3, R4 e R8são cada um H; R2 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxila, cicloalquila, C(0)R', C(0)0R', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; R5 e R6 estão cada um ausentes; e R7 é alquila ou aminoácido; contanto que 5-selenoadenosil metionina, desidroxi 5'-metilselenoadenosina, etilselenoadenosina, seleno(hidroxil)-selenofeno-(3'-desóóxi-adenosina), alilselenoadenosil homocisteína, seleno-adenosil homocisteína, seleno-hidroxiadenosil homocisteína, seleno adenosina, seleno-adenosil-Se(metil)-selenóxido, adenosil-hidroxisselenóxido, etil selenoadenosina, seleno-(hidróóxi)-selenofeno-(3'-desóóxi-adenosina), adenosil-hidroxisselenóxido e seleno-adenosil-Se(metil)-selenóxido possam cada um ser excluídos da composição.

[00229] Em algumas modalidades da presente invenção, é provida uma composição compreendendo, consistindo essencialmente em ou consistindo em um composto de acordo com a Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo, onde R7 é uma alquila selecionada do grupo consistindo em iso-propila, butila, isobutila, butila secundária, butila terciária, pentila, iso-pentila, neo-pentila, hexila, iso-hexila, 3-metilpentila, 2,3-dimetilbutila, neo-hexila, heptila, octila, nonila, decila, undecila, dodecila, tridecila, tetradecila, pentadecila e hexadecila, alquenila, alquinila, cetona, amino álcool, um aminoácido selecionado do grupo consistindo em arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteína, glicina, prolina, alanina, valina, iso-leucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina e triptofano, OR', Se-R\ onde R' é selecionado de uma alquila selecionada do grupo consistido em iso-propila, butila, iso-butila, butila secundária, butila terciária, pentila, iso-pentila, neo-pentila, hexila, iso-hexila, 3-metilpentila, 2,3-dimetilbutila, neo-hexila, heptila, octila, nonila, decila, undecila, dodeci-la, tridecila, tetradecila, pentadecila e hexadecila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; e R8 é hidrogênio, azido, alquila, alquenila, alquinila.

[00230] Em algumas modalidades, as composições da presente in- venção compreendem, consistem em ou consistem essencialmente em um composto de acordo com a Fórmula (I), 5'- Metilselenoadenosina ("Composto C") ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo, contanto que 5'-selenoadenosil metionina, desidróxi 5'-metilselenoadenosina, etilsele-noadenosina, seleno(hidroxil)-selenofeno-(3'-desóxi-adenosina), alilse-lenoadenosil homocisteína, selenoadenosil homocisteína, seleno-hidroxiadenosil homocisteína, seleno adenosina, seleno-adenosil-Se(metil)-selenóxido, adenosil-hidroxi selenóxido, etil selenoadenosi-na, seleno-(hidróxi)-selenofeno-(3'-desóxi-adenosina), adenosil-hidroxi selenóxido e seleno-adenosil-Se(metil)-selenóxido possam cada um ser excluídos da composição.

[00231] Em outras modalidades, é provida uma composição compreendendo, consistindo essencialmente em ou consistindo em um ou mais compostos de acordo com um ou mais de Fórmula (I) ou 5'-Metilselenoadenosina ("Composto C"), onde cada um dos compostos que seguem é excluído da composição a fim de minimizar toxicidade do selênio, remover compostos inativos ou inibidores e/ou maximizar o índice terapêutico da composição, onde os compostos excluídos são Y-glutamoilcisteína-2,3-DHP-selenocisteína, di-γ- glutamoilselenocisteína, selenoglutationa-Y-glutamoilcisteína, γ-glutamoil selenocisteína- γ-glutamoil cisteína, Y-glutamoilcisteína-2,3-DHP-selenocisteína, di- γ-glutamoilselenocisteína, selenoglutationa- γ-glutamoilcisteínja, desidróxi 5'-metilselenoadenosina, etilselenoadeno-sina, seleno(hidroxil)selenofeno-(3'-desóxi-adenosina), alilselenoade-nosil homocisteína, seleno-adenosil homocisteína, seleno-hidroxiadenosil homocisteína, seleno adenosina, seleno-adenosil-Se(metil)-selenóxido, adenosil-hidroxisselenóxido, etil selenoadenosi-na, seleno-(hidróxi)-selenofeno-(3'-desóxi-adenosina), adenosil-hidroxisselenóxido e seleno-adenosil-Se(metil)-selenóxido.

[00232] Uma outra modalidade da composição da presente invenção compreende, consiste essencialmente em ou consiste em um composto de acordo com a Fórmula (II): [00233] ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profár-maco do mesmo, onde [00234] R-ι é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR', onde R' é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R-ι junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00235] R2 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi- Ia, cicloalquila, C(0)R', C(0)0R', onde R' é selecionado de alquila, ci-cloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou Ri junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00236] R3 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloalquila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00237] R4 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloalquila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00238] R5 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila ou aralquila.

[00239] R6 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila ou aralquila.

[00240] R8 é hidrogênio, azido, alquila, alquenila, alquinila.

[00241] Rg é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxila, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR', onde R' é alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou Rg junto com R10 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00242] R-io é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxila, cicloalquila, C(0)R', C(0)R', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R9 junto com R10 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio; e [00243] Rn é OR, alcóxi, aralcóxi ou amino, onde R é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila, heterociclila ou um sal farma-ceuticamente aceitável ou sal interno.

[00244] Uma modalidade adicional das composições descritas aqui compreende, consiste essencialmente em ou consiste em 5'-Selenoadenosil homocisteína ("Composto D") e inclui quaisquer análogos, derivados e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. O Composto D é ácido (2R)-2-amino-4-((((2S,3S,5R)-5-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metil)selanil)butanoico (Número Registro CAS 4053-91-2) e inclui quaisquer análogos, derivados e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

[00245] Uma composição da presente invenção pode compreender, consistir essencialmente em ou consistir em um composto de Fórmula (II), Composto D e combinações dos mesmos. Por exemplo, um aspecto do presente pedido provê composições compreendendo um composto selecionado do grupo consistindo em 5'-selenoadenosil homocisteína, um composto de Fórmula (II) e combinações dos mesmos. Em modalidades adicionais, um ou mais destes compostos podem ser sintéticos, isolados e/ou purificados.

[00246] Em algumas modalidades de Fórmula (II), uma composição compreende, consiste essencialmente em ou consiste em pelo menos 5'-selenoadenosil homocisteína ("Composto D") e um outro composto. Em algumas modalidades, a composição compreende uma razão de 5'-selenoadenosil homocisteína para um outro composto contendo se- lênio de pelo menos 1:1 a 100:1, 1:1 a 50:1, 1:1 a 10:1, 1:1 a 6:1 ou 1:1 a 3:1. Em modalidades, o outro composto é 5'-metilselenoadenosina. Em modalidades, o outro composto é γ-L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína.

[00247] Em algumas modalidades, é provida uma composição compreendendo, consistindo essencialmente em ou consistindo em um composto de acordo com a Fórmula (II) ou um sal farmaceutica-mente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo, onde R-ι, R3, R4, R8 e R9 são cada um H; R2 é H, acila, alquila, carboxila, C(0)R' ou C(0)OR', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; R5 e R6 estão ausentes; R10 é H, acila, alquila, alqueni-la, alquinila, aralquila, carboxila, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; e Rn é OR, alcóxi, aralcóxi ou amino, onde R é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila, heterociclila ou um sal farmaceuticamente aceitável ou sal interno.

[00248] Em algumas modalidades, é provida uma composição compreendendo, consistindo essencialmente em ou consistindo em um composto de acordo com a Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo, onde R-ι, R2, R3, R4, R5, R6, R7, Re, Rg, R-ioSão como acima definido e onde Rn é OR, onde R é selecionado de metila, etila, propila, isopropila, butila, sec-butila ou terc-butila.

[00249] Em um aspecto específico, é provida uma composição compreendendo, consistindo essencialmente em ou consistindo em um composto de acordo com a Fórmula (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo, 5'-selenoadenosil homocisteína ("Composto D") o um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo.

[00250] Em algumas modalidades, as composições compreendem, consistem essencialmente em ou consistem em um composto de acordo com a Fórmula (II), selenoadenosil homocisteína ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo; contanto que um ou mais de adenosil homocisteína, 5'-selenoadenosil me-tionina, alilselenoadenosil homocisteína e seleno-hidroxiadenosil homocisteína possam ser excluídos da composição. Em modalidades, uma composição exclui um ou mais compostos, uma ou mais 5'-Metiltioadenosina, Gama-glutamil-metil-cisteína ou adenosil homocisteína, homocisteína ou metionina.

[00251] Uma modalidade adicional da composição da presente invenção pode compreender, consistir essencialmente em ou consistir em um composto de acordo com a Fórmula (III): [00252] ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo, onde [00253] Ri é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR', onde R' é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R-ι junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00254] R2 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)OR', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R-ι junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio.

[00255] R3 é OH, OR, alcóxi, aralcóxi ou amino, onde R é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila, heterociclila ou um sal farmaceuticamente aceitável ou sal interno;

[00256] R4 é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila, heterociclila ou um sal farmaceuticamente aceitável ou sal interno;

[00257] R5 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila ou aralquila;

[00258] R6 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila ou aralquila; e [00259] R7 é uma C3-C16 alquila, onde a C3-C16 alquila não é uma alquila substituída tendo ambos um grupo carboxila e um grupo amino, alquenila, alquinila, cetona, amino álcool, aminoácido selecionado do grupo consistindo em arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocis-teína, glicina, prolina, alanina, valina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina e triptofano, OR', Se-R', S- R', onde R' para OR' é selecionado do grupo consistindo em H, alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para Se-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-Ci6 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para S-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C16 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila.

[00260] Uma modalidade adicional das composições descritas aqui pode compreender, consistir essencialmente em ou consistir em Gama (Y)-L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína ("Composto E") e inclui quaisquer análogos, derivados e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. O Composto E é N5-(1-carbóxi-2-(metilselanil)etil)-L-glutamina e inclui quaisquer análogos, derivados e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

[00261] Uma composição da presente invenção pode compreender, consistir essencialmente em ou consistir em um composto de Fórmula (III), Composto E e combinações dos mesmos. Por exemplo, um aspecto do presente pedido provê composições compreendendo um composto selecionado do grupo consistindo em Gama (Y)-L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína, um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em modalidades adicionais, um ou mais destes compostos podem ser sintéticos, isolados e/ou purificados.

[00262] Um aspecto do presente pedido provê composições compreendendo um composto selecionado do grupo consistindo em Ga-ma-L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína, um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em modalidades adicionais, um ou mais destes compostos podem ser isolados e/ou purificados. Em modalidades, uma composição compreende pelo menos 0,033% (p/v) de um dos compostos.

[00263] Em modalidades, uma composição compreende pelo menos Gama-L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína e um outro composto. Em algumas modalidades, a composição compreende uma razão de Gama-L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína para um outro composto contendo selênio de pelo menos 1:1 a 100:1, 1:1 a 50:1, 1:1 a 10:1, 1:1 a 6:1 ou 1:1 a 3:1. Em modalidades, o outro composto é 5'-metil selenoadenosina. Em modalidades, o outro composto é Gama (γ)-Ι_-glutamil-metil-L-cisteína.

[00264] Em um aspecto específico, é provida uma composição compreendendo um composto de acordo com a Fórmula (III) ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo, Ga- ma-L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína ("Composto E") ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo em uma razão para um outro composto contendo selênio na composição de pelo menos 1:1.

[00265] Em algumas modalidades, uma composição compreende um composto de acordo com a Fórmula (III), Gama-L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo, contanto que um ou mais de γ-glutamoil se-lenocisteína-Y-glutamoil-cisteína, Y-glutamoilcisteína-2,3-DHP- selenocisteína, di-Y-glutamoilselenocisteína, selenoglutationa-γ-glutamoilcisteína, γ-glutamoil selenocisteína-Y-glutamoil cisteína, γ-glutamoilcisteína-2,3-DHP-selenocisteína, di-Y-glutamoilselenocisteína e selenoglutationa-Y-glutamoilcisteína possam cada um ser excluídos da composição.

[00266] Em algumas modalidades, uma composição compreende um composto de acordo com a Fórmula (III), Gama-L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo, contanto que um ou mais de 5'-Metiltioadenosina, Gama-glutamil-metil-cisteína ou adenosil homocis-teína, homocisteína ou metionina sejam excluídos.

[00267] Um outro aspecto do presente pedido provê análogos ou derivados dos compostos contendo selênio biologicamente ativos descritos aqui, por exemplo, Fórmulas (I), (II) e (III). Análogos e/ou derivados dos compostos contendo selênio podem ser preparados sintetica-mente. Por exemplo, uma modalidade de Fórmulas (I), (II) e (III) compreende qualquer análogo, derivado ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Uma outra modalidade da presente composição compreende um composto de Fórmulas (I), (II) e (III) e combinações dos mesmos.

[00268] Modalidades adicionais da composição da presente inven- ção podem compreender, consistir essencialmente em ou consistir em misturas dos compostos descritos aqui. Por exemplo, uma modalidade da presente composição é "Compostos CDE". Os Compostos CDE compreendem uma mistura de Composto C, Composto D e Composto E e quaisquer análogos, derivados e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Os Compostos CE compreendem uma mistura de Composto C e Composto E e quaisquer análogos, derivados e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Os Compostos DE compreendem uma mistura de Composto D e Composto E e quaisquer análogos, derivados e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

[00269] Em algumas modalidades, uma composição do presente pedido compreende, consiste essencialmente em ou consiste em pelo menos cerca de 0,033% (p/v) a pelo menos cerca de 0,1% (p/v) de um dos compostos: Composto C, Composto D, Composto E, Compostos CDE, Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III) ou misturas dos mesmos. Por exemplo, uma composição pode compreender pelo menos 0,033% (p/v), pelo menos 0,05% (p/v), pelo menos 0,1% (p/v), pelo menos cerca de 0,033% (p/v), pelo menos cerca de 0,05% (p/v), pelo menos cerca de 0,1% (p/v), pelo menos cerca de 0,033% (p/v) a pelo menos cerca de 0,1% (p/v) ou pelo menos cerca de 0,05% (p/v) a pelo menos cerca de 0,1% (p/v) de Composto C, Composto D, Composto E, um composto de acordo com a Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Compostos CDE ou misturas dos mesmos.

[00270] Por exemplo, em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos cerca de 0,033% (p/v) a pelo menos cerca de 0,035% (p/v), pelo menos cerca de 0,033% a pelo menos cerca de 0,040% (p/v), pelo menos cerca de 0,033% a pelo menos cerca de 0,045% (p/v), pelo menos cerca de 0,033% a pelo menos cerca de 0,050% (p/v), pelo menos cerca de 0,033% a pelo menos cerca de 0,055% (p/v), pelo menos cerca de 0,033% a pelo menos cerca de 0,060% (p/v), pelo menos cerca de 0,033% a pelo menos cerca de 0,065% (p/v), pelo menos cerca de 0,033% a pelo menos cerca de 0,070% (p/v), pelo menos cerca de 0,033% a pelo menos cerca de 0,075% (p/v), pelo menos cerca de 0,033% a pelo menos cerca de 0,080% (p/v), pelo menos cerca de 0,033% a pelo menos cerca de 0,085% (p/v), pelo menos cerca de 0,033% a pelo menos cerca de 0,090% (p/v), pelo menos cerca de 0,033% a pelo menos cerca de 0,095% (p/v) ou pelo menos cerca de 0,033% a pelo menos cerca de 0,1% (p/v) de um composto de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Composto C, Composto D, Composto E, Compostos CDE ou misturas dos mesmos e todos os valores de faixa percentual entre eles.

[00271] Por exemplo, em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos cerca de 0,05% a pelo menos cerca de 0,060% (p/v), pelo menos cerca de 0,05% a pelo menos cerca de 0,065% (p/v), pelo menos cerca de 0,05% a pelo menos cerca de 0,070% (p/v), pelo menos cerca de 0,05% a pelo menos cerca de 0,075% (p/v), pelo menos cerca de 0,05% a pelo menos cerca de 0,080% (p/v), pelo menos cerca de 0,05% a pelo menos cerca de 0,085% (p/v), pelo menos cerca de 0,05% a pelo menos cerca de 0,090% (p/v), pelo menos cerca de 0,05% a pelo menos cerca de 0,095% (p/v) ou pelo menos cerca de 0,05% a pelo menos cerca de 0,1% (p/v) de um composto de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Composto C, Composto D, Composto E, Compostos CDE ou misturas dos mesmos e todos os valores de faixa de porcentagem entre eles.

[00272] Em outras modalidades, a composição compreende cerca de 0,033% (p/v) a cerca de 99,9% (p/v), cerca de 0,033% a cerca de 90% (p/v), cerca de 0,033% a cerca de 80% (p/v), cerca de 0,033% a cerca de 70% (p/v), cerca de 0,033% a cerca de 60% (p/v), cerca de 0,033% a cerca de 50% (p/v), cerca de 0,033% a cerca de 40% (p/v), cerca de 0,033% a cerca de 30% (p/v), cerca de 0,033% a cerca de 20% (p/v), cerca de 0,033% a cerca de 10% (p/v), cerca de 0,033% a cerca de 5% (p/v) ou cerca de 0,033% a cerca de 1% (p/v) de um composto de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Composto C, Composto D, Composto E, Compostos CDE ou misturas dos mesmos e todos os valores de faixa percentual entre eles.

[00273] Em outras modalidades, a composição compreende cerca de 0,05% (p/v) a cerca de 99,9% (p/v), cerca de 0,05% a cerca de 90% (p/v), cerca de 0,05% a cerca de 80% (p/v), cerca de 0,05% a cerca de 70% (p/v), cerca de 0,05% a cerca de 60% (p/v), cerca de 0,05% a cerca de 50% (p/v), cerca de 0,05% a cerca de 40% (p/v), cerca de 0,05 a cerca de 30% (p/v), cerca de 0,05% a cerca de 20% (p/v), cerca de 0,05% a cerca de 10% (p/v), cerca de 0,05% a cerca de 5% (p/v) ou cerca de 0,05% a cerca de 1% (p/v) de um composto de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Composto C, Composto D, Composto E, Compostos CDE ou misturas dos mesmos e todos os valores de faixa percentual entre eles.

[00274] Em modalidades adicionais, a composição compreende cerca de 0,1% (p/v) a cerca de 99,9% (p/v), cerca de 0,1% a cerca de 90% (p/v), cerca de 0,1% a cerca de 80% (p/v), cerca de 0,1% a cerca de 70% (p/v), cerca de 0,1% a cerca de 60% (p/v), cerca de 0,1% a cerca de 50% (p/v), cerca de 0,1% a cerca de 40% (p/v), cerca de 0,1% a cerca de 30% (p/v), cerca de 0,1% a cerca de 20% (p/v), cerca de 0,1% a cerca de 10% (p/v), cerca de 0,1% a cerca de 5% (p/v) ou cerca de 0,1% a cerca de 1% (p/v) de um composto de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Composto C, Composto D, Composto E, Compostos CDE ou misturas dos mesmos e todos os valores de faixa percentual entre eles.

[00275] Em outras modalidades, uma composição compreende pelo menos cerca de 0,033% (p/v) a pelo menos cerca de 0,1% (p/v) ou pe- Io menos cerca de 0,05% (p/v) a pelo menos cerca de 0,1% (p/v) de um composto de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Composto C, Composto D, Composto E, Compostos CDE ou uma mistura dos mesmos.

[00276] Em modalidades, uma composição compreende pelo menos 5'-Metilselenoadenosina e um outro composto. Em algumas modalidades, a composição compreende uma razão de 5'-Metilselenoadenosina para um outro composto contendo selênio de pelo menos 1:1 a 100:1, 1:1 a 50:1, 1:1 a 10:1, 1:1 a 6:1 ou 1:1 a 3:1. Em modalidades, o outro composto é 5-selenoadenosil homocisteína. Em outras modalidades, o outro composto é L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína.

[00277] Em outras modalidades, as composições podem excluir um ou mais de 5'-Metiltioadenosina ("Composto H"), S-Adenosil-L-homocisteína ("Composto I"), Gama-glutamil-metil-cisteína ("Composto J"), Gama-L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína, Se-adenosil homocisteína ou glutamil selenocisteína, porque um ou mais destes compostos podem ser desnecessários para a composição ou inibidores para outros compostos na composição.

[00278] Um aspecto do presente pedido provê composições compreendendo pelo menos dois compostos selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em modalidades adicionais, um ou mais destes compostos podem ser sintéticos, isolados e/ou purificados.

[00279] Um aspecto do presente pedido refere-se à 5'-Metilselenoadenosina ("Composto C"), Se-Adenosil-L-homocisteína ("Composto D"), L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína ("Composto E") e análogos dos mesmos. Algumas modalidades incluem uma composi- ção compreendendo um composto de Fórmula (I), Fórmula (II) e/ou Fórmula (III) e misturas dos mesmos e um veículo.

[00280] Em outras modalidades, a composição compreende pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em: 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II) e um composto de Fórmula (III) e misturas dos mesmos. Em ainda modalidades adicionais, a composição compreende pelo menos cerca de 0,033% (p/v) de pelo menos um destes compostos. Em outras modalidades, a composição compreende pelo menos cerca de 0,05% (p/v) para cada um de dois destes compostos. Em ainda uma outra modalidade, a composição compreende pelo menos cerca de 0,033% (p/v) para cada um de três destes compostos.

[00281] Em modalidades adicionais, um ou mais destes compostos de Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III) podem ser sintéticos, isolados e/ou purificados. Em modalidades, composições compreendendo compostos de Fórmula (I), Fórmula (II) e Fórmula (III) compreendem ainda um veículo tais como água, solução salina fisiológica, tampão fisiológico incluindo tensoativos e aminoácidos estabilizadores.

[00282] Em algumas modalidades, é provida uma composição compreendendo um ou mais compostos de acordo com uma ou mais de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Composto C, Composto D, Composto E, Compostos CDE ou misturas dos mesmos, onde um ou mais de cada um dos compostos que seguem são excluídos da composição a fim de minimizar a toxidez do selênio, remover compostos inativos ou inibidores e/ou maximizar o índice terapêutico da composição, onde os compostos excluídos são γ -glutamoil selenocisteína-γ-glutamoil cisteína, γ -glutamoilcisteína-2,3-DHP-selenocisteína, di-γ -glutamoilselenocisteína, selenoglutationa-Y-glutamoilcisteína, γ -glutamoil selenocisteína-Y-glutamoil cisteína, Y-glutamoilcisteína-2,3- DHP-selenocisteína, di-γ -glutamoilselenocisteína, selenoglutationa-γ-glutamoilcisteína, desidróxi 5'-metilselenoadenosina, etilselenoadeno-sina, seleno(hidroxil)-selenofeno-(3'-desóxi-adenosina), alilselenoade-nosil homocisteína, seleno-adenosil homocisteína, seleno-hidroxi ade-nosil homocisteína, seleno adenosina, seleno-adenosil-Se(metil)-selenóxido, adenosil-hidroxi selenóxido, etil selenoadenosina, seleno-(hidróxi)-selenofeno-(3'-desóxi-adenosina), adenosil-hidroxi selenóxido e seleno-adenosil-Se(metil)-selenóxido.

[00283] Em algumas modalidades, uma composição compreende pelo menos dois compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em: 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Ga-ma-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II) e um composto de Fórmula (III) e misturas dos mesmos; e um veículo. Em outras modalidades, uma composição compreende pelo menos dois compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em: 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína; e um veículo. Em modalidades, a composição compreende 5'-Metilselenoadenosina e Gama-glutamil-metilseleno-cisteína. Em modalidades, cada um dos dois compostos está presente na composição pelo menos cerca de 0,033% (p/v).

[00284] Em outras modalidades, uma composição compreende pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em: 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II) e um composto de Fórmula (III) e misturas dos mesmos; e um veículo. Em outras modalidades, uma composição compreende pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em: 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína; e um veículo. Em modalidades, cada um dos três compostos está presente na composição pelo menos cerca de 0,033% (p/v).

[00285] Em algumas modalidades, qualquer um dos compostos do presente pedido descritos aqui pode ser modificado com um profárma-co para prolongar a meia-vida. Profármacos podem ser também úteis para proteger o composto contra oxidação, para direcionar o composto a um tecido ou para permitir que o composto passe pela barreira sangue cérebro.

[00286] Em algumas modalidades, um profármaco compreende um selenoglicosídeo. Glicosídeos incluem monossacarídeos, dissacarí-deos e oligossacarídeos. Sacarídeos podem incluir ribose, glicose, galactose ou manose. Por exemplo, uma galactose conjugada a uma porção selênio podería direcionar o composto ao fígado.

[00287] Em outras modalidades, um profármaco compreende uma selenazolidina. Estes compostos proveem liberação lenta do composto.

[00288] Em ainda uma modalidade adicional, um profármaco compreende conjugação de um composto orgânico de selênio a uma vitamina, tal como Vitamina C ou Vitamina E. Estes conjugados de profármaco têm efeitos protetores aumentados.

[00289] Em ainda outras modalidades, um profármaco pode ser um profármaco ativado por citocromo P450, tais como fosfatos ou fosfona-tos cíclicos. Outras modalidades de profármacos ativados por citocromo P450 aumentam a biodisponibilidade. Em particular, nucleosídeos foram modificados com estas moléculas e proveem direcionamento de moléculas para o fígado. Profármacos exemplares incluem profármacos HepDirect. Outras modalidades de profármaco ativado por citocromo P450 melhoram a biodisponibilidade e são descritos em Huttu-nen e outros, Current Medicinal Chemistry 2008 15:2346.

[00290] Em modalidades, qualquer um dos compostos de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Composto C, Composto D, Composto E ou Compostos CDE pode ser modificado para reduzir oxidação de se-lênio. Em modalidades, compostos podem formar um dímero através de ligação entre átomos de selênio.

[00291] Em modalidades, qualquer um dos compostos de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Composto C, Composto D, Composto E ou Compostos CDE pode ser modificado por ligação a um agente de direcionamento a tecido ou outro agente para aumento da meia-vida do composto. Agentes de direcionamento a tecido podem incluir qualquer agente conhecido na técnica incluindo, mas não limitado a, anticorpos específicos para ligação a um antígeno específico de tecido, um receptor de transferrina ou um profármaco conforme descrito aqui.

[00292] Em algumas modalidades, uma composição da invenção é formulada para cruzar a barreira sangue cérebro. As composições da invenção podem ser combinadas com um material de implante adequado para administração ao cérebro, tal como um implante ou veículo biodegradável polimérico. Tais veículos poliméricos incluem, mas não estão limitados a, polietileno glicol, polilactídeos, poliglicolídeos, polior-toésteres, polivinil pirrolidona e álcoois de polivinila e acetato de etile-no-co-vinila.

[00293] Em outras modalidades, os compostos podem ser ligados a ou combinados com um veículo em nanopartícula para administrar composições ao cérebro e prover outro direcionamento a tecido. Outras nanopartículas incluem fosfolipídeos, quitosana, ácido láctico e d extra no.

[00294] Microesferas e lipossomos são veículos adicionais que podem ser usados na presente invenção. Por exemplo, microesferas e lipossomos podem incluir, mas não estão limitados a, ácido po-li(lactídeo-co-glicólico) ou veículos PLGA. Em outras modalidades, administração com veículo de composições ao cérebro ou outros teci- dos do corpo pode ser direcionada usando lipossomos ou microesfe-ras compreendendo um anticorpo, um receptor de transferrina ou um profármaco como um agente de direcionamento. Direcionamento a tecido pode envolver também transporte mediador por receptor, tal como com o receptor de insulina ou o receptor de transferrina. Estes receptores podem ser integrados a lipossomos ou microesferas que também incluem as composições como aqui descritas.

[00295] Profármacos de lipídeo são também adequados para uso com os compostos da invenção. Através de exemplo não limitante, certos profármacos de lipídeo são descritos em Hostetler e outros, (1997 Biochem. Pharm. 53:1815-1822) e Hostetler e outros, 1996 Anti-vira! Research 31:59-67), ambos aqui incorporados a título de referência em sua totalidade. Exemplos adicionais de tecnologia de profármaco adequada são descritos no WO 90/00555; WO 96/39831; WO 03/095665A2; Pat. U.S. Nos. 5.411.947; 5.463.092; 6.312.662; 6.716.825; e Pedidos de Patente Publicados U.S. Nos. 2003/0229225 e 2003/0225277 cada um deles é aqui incorporado em sua totalidade a título de referência. Tais profármacos também podem possuir a habilidade em direcionar o composto fármaco a um tecido particular dentro do paciente, por exemplo, fígado, como descrito por Erion e outros (2004, J. Am. Chem. Soc. 126:5154-5163; Erion e outros, Am. Soc. Pharm. & Exper. Ther. DOM0.1124/jept. 104.75903 (2004); WO 01/18013 A1; Pat. U.S. No. 6.752.981), cada um deles aqui incorporado em sua totalidade a título de referência.

[00296] Tais profármacos também podem possuir a habilidade em direcionar o composto fármaco a um tecido particular dentro do paciente, por exemplo, fígado, como descrito por Erion e outros (2004 J. Am. Chem. Soc. 126:5154-5163; Erion e outros, Am. Soc. Pharm. & Exper. Ther. DOI: 10.1124/jept. 104.75903 (2004); WO 01/18013 A1; Pat. U.S. No. 6.752.981), cada um deles é aqui incorporado em sua totalidade a título de referência. A título de exemplo não limitante, outros profármacos adequados para uso com os compostos da invenção são descritos no WO 03/090690; Pat. U.S. No. 6.903.081; Pedido de Patente U.S. No. 2005/0171060A1; Pedido de Patente U.S. No. 2002/0004594A1; e por Harris e outros (2002 Antiviral Chem & Che-mo. 12:293-300; Knaggs e outros, 2000 Biooorganic & Med. Chem. Letters 10: 2075-2078) cada um deles é aqui incorporado em sua totalidade a título de referência.

[00297] Em algumas modalidades, é provida uma composição compreendendo um ou mais compostos cada um de acordo com a Fórmula (I). Em alguns aspectos, a composição compreende 5'-metilselenoadenosina ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo; e 5'-selenoadenosil homocisteína ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo.

[00298] Em algumas modalidades, é provida uma composição compreendendo um ou mais compostos cada um de acordo com Fórmula (I) e Fórmula (II). Em alguns aspectos, a composição compreende 5'-metilselenoadenosina ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo; 5'-selenoadenosil homocisteína ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo; e gama-L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo.

[00299] Em algumas modalidades, a composição compreende 5'-metilselenoadenosina ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo; e gama-L-glutamil-Se-metil-L-selenocisteína ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profármaco do mesmo.

[00300] Em algumas modalidades, é provida uma composição compreendendo um ou mais compostos cada um de acordo com a Fórmula (I) e Fórmula (II). Em algumas modalidades, é provida uma composição compreendendo um ou mais compostos cada um de acordo com as Fórmulas (II) e (III).

[00301] Em modalidades, qualquer uma das composições descritas aqui pode compreender ainda um agente terapêutico diferente para modulação do metabolismo de glicose ou tratamento do diabetes.

[00302] Em algumas modalidades, o agente terapêutico diferente é insulina ou um análogo do mesmo. Análogos de insulina incluem análogos de insulina de ação rápida e análogos de insulina de ação longa. Análogos de insulina podem ter uma ou mais mudanças de aminoáci-do. Análogos de insulina de ação rápida incluem Aspart, Glulisine e LisPro. Insulinas de ação longa incluem insulina NPH, Insulina deter-mir, insulina Degludec ou Insulina glargine.

[00303] Em uma modalidade, a composição compreende ainda um agente terapêutico diferente para modulação do metabolismo de glicose ou tratamento do diabetes. Em algumas modalidades, o agente terapêutico diferente é insulina ou um análogo da mesma. Em algumas modalidades, o agente terapêutico diferente é um sensibilizador de insulina, um secretagogo de insulina ou um mimético de incretina. Outros agentes terapêuticos exemplares eficazes na presente composição que podem ser usados para tratar diabetes incluem metforminas, sulfonilureias, meglitinidas, derivados de D-fenilalanina, tiazolidinodio-nas, inibidores de DPP-4, inibidores de alfa glicosidase, sequestrantes de ácido da bile e combinações dos mesmos.

[00304] De acordo com um outro aspecto da presente invenção, uma composição farmacêutica compreende uma quantidade terapeuti-camente eficaz de um ou mais compostos da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável, éster ou profármaco do mesmo junto com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. Diluentes e veículos exemplares da presente invenção são descritos em detalhes na seção Definições do presente pedido. Por exemplo, em algumas modalidades, veículos podem incluir água, solução salina fisiológica e soluções tamponadas aquosas contendo tensoativos ou aminoácidos estabilizantes, tal como histidina ou glicina. Em uma modalidade do presente pedido, o veículo farmaceuticamente aceitável é farmaceuti-camente inerte.

[00305] Em algumas modalidades do presente pedido, composições e/ou formulações compreendendo selênio podem ser administradas a um indivíduo sozinhas ou em combinação com outras formas de selênio, fármacos, moléculas pequenas ou em composições farmacêuticas onde elas são misturadas com excipiente(s) ou outros veículos farmaceuticamente aceitáveis. Em outras modalidades, as composições do presente pedido podem ser formuladas usando veículos farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos na técnica em dosagens adequadas para administração oral. Os veículos podem permitir que as composições farmacêuticas sejam formuladas como comprimidos, pílulas, cápsulas, líquidos, géis, xaropes, pastas fluidas, suspensões e similar, ou para ingestão oral ou nasal por um paciente a ser tratado. Ainda, composições compreendendo um ou mais compostos incluindo, mas não limitado a, 5'-Metilselenoadenosina, um composto de Fórmula (I) e combinações dos mesmos podem ser administradas a um indivíduo (por exemplo, um paciente) intravenosamente em um veículo farmaceuticamente aceitável, tal como solução salina fisiológica.

[00306] As composições podem ser formuladas para qualquer via de administração, em particular para administração oral, retal, trans-dermal, subcutânea, intravenosa, intramuscular ou intranasal. As composições podem ser formuladas em qualquer forma convencional, por exemplo, como comprimidos, cápsulas, caplets, soluções, suspensões, dispersões, xaropes, sprays, géis, supositórios, emplastros e emulsões.

[00307] Como é bem conhecido na arte médica, dosagens para qualquer indivíduo podem depender de muitos fatores, incluindo o tamanho do paciente, área de superfície corporal, idade, o composto particular a ser administrado, sexo, momento e via de administração, saúde geral e interação com outros fármacos sendo concomitantemente administrados. Dependendo do alvo pretendido ser alterado pelo tratamento, as composições farmacêuticas podem ser formuladas e administradas sistemicamente ou localmente.

[00308] Técnicas conhecidas na área para formulação e administração de compostos terapêuticos são suficientes para administrar os compostos e composições da presente invenção e podem ser encontradas na última edição de "Remington's Pharmaceutical Sciences" (Mack Publishing Co, Easton Pa.). As composições da presente invenção podem ser formuladas para qualquer via de administração, em particular para administração oral, retal, transdermal, subcutânea, in-travenosa, intramuscular ou intranasal. Vias de administração adequadas podem, por exemplo, incluir administração oral ou transmucosal; bem como administração parenteral, incluindo administração intramuscular, subcutânea, intramedular, intratecal, intraventricular, intraveno-sa, intraperitoneal ou intranasal.

[00309] Para injeção, uma composição do presente pedido (por exemplo, uma composição contendo selênio) pode ser formulada em soluções aquosas, tal como em tampões fisiologicamente compatíveis tal como solução de Hank, solução de Ringer e/ou solução salina fisiologicamente tamponada. Para administração a tecido, órgão ou celular, penetrantes apropriados para a barreira particular a ser permeada são usados na formulação. Tais penetrantes são geralmente conhecidos na técnica.

[00310] Composições farmacêuticas adequadas para uso no presente pedido incluem composições onde os ingredientes ativos (por exemplo, 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Ga- ma-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (lll)e misturas dos mesmos) estão contidos em uma quantidade eficaz para obter o propósito pretendido. Por exemplo, em uma modalidade preferida, uma quantidade eficaz de uma composição farmacêutica compreende uma quantidade de um composto selecionado do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II) um composto de Fórmula (III) e misturas dos mesmos. Determinação de quantidades eficazes está dentro da capacidade daqueles versados na técnica, especialmente à luz da invenção provida aqui.

[00311] Alguns compostos contendo selênio foram preparados sin-teticamente, purificados e avaliados em um ensaio de bioatividade. Nem todos os componentes e compostos encontrados em levedura selenizada ou extrato aquoso da mesma têm atividade biológica quando obtidos de tal levedura e, na verdade, podem ser tóxicos para as células.

[00312] As composições da presente invenção podem ser formuladas para qualquer via de administração, em particular para administração oral, retal, transdermal, subcutânea, intravenosa, intramuscular ou intranasal. Vias de administração adequadas podem, por exemplo, incluir administração oral ou transmucosal; bem como administração pa-renteral, incluindo administração intramuscular, subcutânea, intrame-dular, intratecal, intraventricular, intravenosa, intraperitoneal ou intranasal.

[00313] Para injeção, uma composição do presente pedido (por exemplo, uma composição contendo selênio) pode ser formulada em soluções aquosas, tal como em tampões fisiologicamente compatíveis tal como solução de Hank, solução de Ringer ou solução salina fisiologicamente tamponada. Para administração a tecido ou celular, pene- trantes apropriados para a barreira particular a ser permeada são usados na formulação. Tais penetrantes são geralmente conhecidos na técnica.

[00314] Em modalidades, composições contendo ou compostos sin-teticamente formulados podem compreender uma quantidade igual de cada componente contendo selênio, por exemplo, uma razão de pelo menos 1:1:1 de Gama-glutamil-metilseleno-cisteína para 5'-Metilselenoadenosina para Se-Adenosil-L-homocisteína. Em outras modalidades, uma composição pode compreender pelo menos dois componentes em razões de 1:1 a 100:1, 1:1 a 50:1, 1:1 a 10:1, 1:1 a 6:1 ou 1:1 a 3:1.

[00315] Composições compreendendo um ou mais compostos incluindo 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos podem ser administradas a um indivíduo (por exemplo, um paciente) intravenosamente em um veículo farmaceuticamente aceitável tal como solução salina fisiológica. Métodos padrão para administração intracelular de compostos podem ser usados (por exemplo, administração através de lipossomo). Tais métodos são bem conhecidos daqueles de habilidade comum na técnica.

[00316] Composições compreendendo selênio são úteis para administração intravenosa bem como administração parenteral, tais como intravenosa, subcutânea, intramuscular e intraperitoneal. Para injeção, uma composição compreendendo selênio (por exemplo, uma composição farmacêutica) do presente pedido pode ser formulada em soluções aquosas, preferivelmente em tampões fisiologicamente compatíveis tal como solução de Hank, solução de Ringer ou solução fisiologicamente tamponada. Para administração a tecido ou celular, penetrantes apropriados para a barreira particular a ser permeada são usados na formulação. Tais penetrantes são geralmente conhecidos na técnica.

[00317] Em algumas modalidades, as formulações farmacêuticas podem conter um desintegrantes, amido gelatinizado e um revestimento. Em modalidades, desintegrantes incluem polivinil pirrolidona reticu-lada, gomas, amidos incluindo amido gelatinizado e produtos de celulose. Em modalidades, revestimentos incluem álcool de polivinila, derivados de celulose e derivados de ácido metacrílico.

[00318] Em algumas modalidades do presente pedido, composições e/ou formulações compreendendo selênio podem ser administradas a um indivíduo sozinhas ou em combinação com outras formas de selênio, fármacos, moléculas pequenas ou em composições farmacêuticas onde elas são misturadas com excipiente(s) ou outros veículos farmaceuticamente aceitáveis. Em modalidades, as composições podem incluir um ou mais aminoácidos ou seleno aminoácidos, tal como metionina, cisteína ou selenocisteína a fim de minimizar a toxidez. Em uma modalidade do presente pedido, o veículo farmaceuticamente aceitável é farmaceuticamente inerte. Em uma outra modalidade do presente pedido, composições compreendendo selênio podem ser administradas sozinhas a indivíduos sujeitos a, sob risco de ou sofrendo de uma doença ou condição associada com metabolismo de glicose.

[00319] As composições podem ser também formuladas em qualquer forma convencional, por exemplo, como comprimidos, cápsulas, caplets, soluções, suspensões, dispersões, xaropes, sprays, géis, su-positórios, emplastros e emulsões. As composições do presente pedido, particularmente composições compreendendo 5'-Metilselenoadenosina, um composto de Fórmula (I) e combinações dos mesmos, podem ser também adicionadas a bebidas nutricionais ou produtos alimentícios (por exemplo, ENSURE, POWERBAR ou si- milar), uma multivitamina, produtos nutricionais, etc, para auxiliar no consumo diário.

MÉTODOS DE USO DE COMPOSTOS E COMPOSIÇÕES

[00320] Compostos e composições da presente invenção exibem especificidade de tecido com relação à expressão de gene de genes relacionados a processos biológicos e ativação/inativação transcripci-onal. Por exemplo, o presente pedido se refere a métodos de uso dos compostos e composições descritos aqui para substituir insulina, aumentar a atividade de insulina, aumentar a sensibilidade à glicose, inibir produção de glicose ou modular metabolismo de glicose em vários cursos biológicos de um indivíduo. Desta maneira, composições e compostos compreendendo selênio podem ser administrados sozinhos ou em combinações a um indivíduo sujeito a, sob risco de ou sofrendo de uma doença ou condição associada com aberração dos genes descritos aqui. Por exemplo, os métodos do presente pedido podem encontrar uso em diagnóstico ou tratamento (por exemplo, profilatica-mente ou terapeuticamente) de um indivíduo com uma condição associada com diabetes mellitus (DM) não insulino-dependente (Tipo II).

[00321] Em uma modalidade da presente invenção, um método de substituição de insulina em um indivíduo compreende administrar uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em: 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em uma outra modalidade, uma quantidade eficaz da composição substitui insulina em células do fígado do indivíduo comparado com células do fígado do indivíduo não tratado com a composição. Em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'- Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em modalidades, a composição compreende pelo menos 0,05% (p/v) para cada um dos dois compostos. Em outras modalidades, a composição compreende pelo menos 0,033% (p/v) para cada um dos três compostos.

[00322] Em uma outra modalidade, um método de aumento da atividade de insulina em um indivíduo compreende administrar uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em: 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em uma outra modalidade, uma quantidade eficaz da composição aumenta a atividade de insulina em células do fígado do indivíduo comparado com células do fígado do indivíduo não tratado com a composição. Em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em modalidades, a composição compreende pelo menos 0,05% (p/v) para cada um dos dois compostos. Em outras modalidades, a composição compreende pelo menos 0,033% (p/v) para cada um dos três compostos. Uma modalidade adicional do método de aumento de atividade de insulina em um indivíduo compreende ainda administração de insulina ou um análogo ou derivado da mesma.

[00323] Em ainda outras modalidades, um método de inibição de produção de glicose em um indivíduo compreende administração de uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em: 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em uma outra modalidade, uma quantidade eficaz da composição inibe produção de glicose em células do fígado do indivíduo comparado com células do fígado do indivíduo não tratado com a composição. Em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em modalidades, a composição compreende pelo menos 0,05% (p/v) para cada um dos dois compostos. Em outras modalidades, a composição compreende pelo menos 0,033% (p/v) para cada um dos três compostos.

[00324] Em uma outra modalidade, um método de aumento de fos-forilação de FOX03 e/ou FOX04 em um indivíduo compreende administração de uma composição ao indivíduo compreendendo pelo menos dois compostos selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em uma outra modalidade, uma quantidade eficaz da composição aumenta fosforilação de FOX03 e FOX04 em células de fígado do indivíduo comparado com células do fígado do indivíduo não tratado com a composição. Em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em modalidades, a composição compreende pelo menos 0,05% (p/v) para cada um dos dois compostos. Em outras modalidades, a composição compreende pelo menos 0,033% (p/v) para cada um dos três compostos.

[00325] Em modalidades, um método de modulação de metabolismo de glicose em um indivíduo compreende: administração de uma quantidade eficaz de uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos dois compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III). Em uma outra modalidade, uma quantidade eficaz da composição modula o metabolismo de glicose em células do fígado do indivíduo comparado com células do fígado do indivíduo não tratado com a composição. Em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em modalidades, a composição compreende pelo menos 0,05% (p/v) para cada um dos dois compostos. Em outras modalidades, a composição compreende pelo menos 0,033% (p/v) para cada um dos três compostos.

[00326] Em modalidades, um método de aumento da sensibilidade à glicose em um indivíduo compreende administrar uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos dois compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil- metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em uma outra modalidade, uma quantidade eficaz da composição aumentou a sensibilidade à glicose em células do fígado do indivíduo comparado com células do fígado do indivíduo não tratado com a composição. Em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em modalidades, a composição compreende pelo menos 0,05% (p/v) para cada um dos dois compostos. Em outras modalidades, a composição compreende pelo menos 0,033% (p/v) para cada um dos três compostos.

[00327] Em modalidades, um método de tratamento de diabetes em um indivíduo compreende administração de uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos dois compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em: 5'- Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em uma outra modalidade, uma quantidade eficaz da composição trata diabetes em células do fígado do indivíduo comparado com células do fígado do indivíduo não tratado com a composição. Em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em: 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em modalidades, a composição compreende pelo menos 0,05% (p/v) para cada um dos dois compostos. Em outras modalidades, a composição compreende pelo menos 0,033% (p/v) para cada um dos três compostos.

[00328] Em algumas modalidades, é provido um método ou uso para inibição de expressão de G6pc em um indivíduo compreendendo administração de uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos dois compostos selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em uma outra modalidade, uma quantidade eficaz da composição inibe expressão de gene G6pc em células de fígado do indivíduo comparado com células do fígado do indivíduo não tratado com a composição. Em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em modalidades, a composição compreende pelo menos 0,05% (p/v) para cada um dos dois compostos. Em outras modalidades, a composição compreende pelo menos 0,033% (p/v) para cada um dos três compostos.

[00329] Em algumas modalidades do método, uma diminuição em G6pc varia de um aumento ou diminuição de aproximadamente 50% a um aumento ou diminuição de 500% comparado com uma célula de tipo idêntico não tratada com o composto. A magnitude da resposta de G6pc depende do tipo de célula, do composto específico e do tempo em contato com a célula.

[00330] Em outras modalidades, é provido um método ou uso para aumento da expressão de receptor de insulina (INSR) em um indivíduo compreendendo administrar uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos dois compostos selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em uma outra modalidade, uma quantidade eficaz da composição aumenta a expressão de receptor de insulina em células de fígado do indivíduo comparado com células do fígado do indivíduo não tratado com a composição. Em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em modalidades, a composição compreende pelo menos 0,05% (p/v) para cada um dos dois compostos. Em outras modalidades, a composição compreende pelo menos 0,033% (p/v) para cada um dos três compostos.

[00331] Em modalidades, é provido um método ou uso para aumento da expressão de receptor de fator de crescimento tipo insulina (IGF1R) em um indivíduo compreendendo administrar uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos dois compostos selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em uma outra modalidade, uma quantidade eficaz da composição aumenta a expressão de receptor de fator de crescimento tipo insulina em células do fígado do indivíduo comparado com células do fígado do indivíduo não tratado com a composição. Em algumas modalidades, a composição compreende pelo menos três compostos dife- rentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos. Em modalidades, a composição compreende pelo menos 0,05% (p/v) para cada um dos dois compostos. Em outras modalidades, a composição compreende pelo menos 0,033% (p/v) para cada um dos três compostos.

[00332] Em qualquer um dos métodos descritos aqui, a composição pode compreender 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína ou mistura dos mesmos. Em qualquer um dos métodos descritos aqui, a composição pode compreender pelo menos cerca de 0,1% (p/v) de 5'-Metilselenoadenosina.

[00333] Em qualquer um dos métodos descritos aqui, a composição pode estar em uma forma seca ou capsular. Em qualquer um dos métodos descritos aqui, a composição pode compreender ainda insulina ou um análogo ou derivado da mesma. Em qualquer um dos métodos descrito aqui, a composição pode compreende ainda um sensibilizador de insulina, um secretagogo de insulina ou um mimético de incretina.

[00334] Em qualquer um dos métodos descritos aqui, a composição pode excluir um ou mais de 5'-Metilselenoadenosina, S-Adenosil-L-homocisteína ou Gama-glutamil-metil-cisteína. Em qualquer um dos métodos descritos aqui, a composição pode ser administrada oralmente.

[00335] Em qualquer um dos métodos descritos aqui, a composição pode ser administrada a uma ou mais células do fígado do indivíduo. Em algumas modalidades, qualquer um dos métodos como aqui descrito compreende ainda administração de insulina ou análogo da mesma ou compreende ainda administração de um agente terapêutico diferente para modulação do metabolismo de glicose ou tratamento do diabetes.

[00336] Em modalidades dos métodos do presente pedido, é provido um uso para uma composição compreendendo pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) para substituição de insulina ou aumento de atividade de insulina em um indivíduo. Em modalidades, o uso compreende ainda um agente terapêutico diferente para modulação de metabolismo de glicose ou tratamento de diabetes. Em outras modalidades do presente pedido, é provido um uso para uma composição compreendendo pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos para inibição de G6pc no fígado.

[00337] Compostos contendo selênio afetam expressão de gene em células do fígado diferentemente de células neuronais. Em contraste com o efeito que compostos e composições têm sobre células do fígado conforme aqui descrito, a mesma composição ou uma similar pode afetar células neuronais de uma maneira oposta. Por exemplo, uma composição como aqui descrita diminui a fosforilação de F0X03 e/ou F0X04 em células neuronais, ao invés de aumentar expressão de F0X03 ou F0X04 como especificado nos métodos da presente descrição.

[00338] Em modalidades adicionais do método da presente invenção, a quantidade eficaz de compostos e composições como aqui descrito é uma quantidade eficaz para inibir expressão de G6pc, diminuir produção de glicose em células do fígado ou aumentar fosforilação de FOXO em uma célula do fígado sem ser tóxico para as células. As quantidades eficazes de compostos selecionados não mostram toxidez para nenhuma das células exemplificadas incluindo células esqueletais de camundongo, neuronais humanas ou de fígado de camundongo. Ainda, a composição compreendendo os compostos descritos aqui não afeta de modo adverso o metabolismo de glicose em células do fígado.

[00339] Métodos de determinação de expressão de gene em uma célula de um indivíduo são conhecidos daqueles versados na técnica, e podem incluir hibridização com primers e/ou sondas, tal como em uma disposição ou através de métodos de PCR. Disposições e/ou primers para determinação de expressão de gene estão comercialmente disponíveis. Primers e disposições ou microdisposições podem ser prontamente projetados usando sequências publicamente disponíveis para os genes descritos aqui, tais como G6pc, F0X03, F0X04, INSR e IGF1R. Por exemplo, Sequências exemplares para G6pc são encontradas em NM_000151.3, Gl:393537030, Gene ID: 2538; F0X03 são encontrados em NM_001455.3, Gl: 146260266, Gene ID: 2309; FO-X04 são encontrados em NM_001170931.1, Gl:283436082, Gene ID: 4303; INSR são encontrados em NM_000208.2, Gl: 119395735, Gene ID: 3643; e IGF1R são encontrados em XM_011521513.1, Gl:767983996, Gene ID: 3480. Modulação de expressão de gene em células de fígado pode ser determinada como descrito aqui usando vários ensaios em uma amostra obtida de um indivíduo tratado de acordo com as composições descritas aqui.

[00340] Como é bem conhecido na arte médica ou de pesquisa, do-sagens para qualquer indivíduo podem depender de muitos fatores, incluindo, mas não limitado, o tamanho do paciente, área de superfície corporal, idade, o composto particular a ser administrado, sexo, momento e via de administração, saúde geral e interação com outros fár- macos sendo concomitantemente administrados. Em modalidades, a dose da presente composição pode ser ajustada dependendo da eficácia ou da presença de sinais evidentes de toxicose por selênio sendo observada no indivíduo. Toxicose por selênio pode ser indicada por sintomas incluindo, mas não limitado a, hálito de alho, perda de cabelo ou unhas descarnadas.

[00341] Em algumas modalidades, a dose da presente composição é administrada pelo menos uma vez por dia por um período de tempo para obter um estado uniforme de selênio elementar no sangue. Em ainda outras modalidades, a dose da presente composição pode ser administrada enquanto o indivíduo está tendo sintomas de uma doença ou distúrbio.

EXEMPLOS

[00342] Os exemplos que seguem proveem exemplos ou modalidades ilustrativos das composições, compostos e métodos da presente invenção. Modalidades ilustrativas dos compostos, composições e métodos da presente invenção são providas aqui a título de exemplos. Embora os conceitos e tecnologia da presente invenção sejam suscetíveis a várias modificações e formas alternativas, modalidades específicas dos mesmos foram mostradas a título de exemplo nas figuras e serão descritas aqui em detalhes. Deve ser compreendido, no entanto, que não há nenhuma intenção em limitar os conceitos da presente invenção às formas particulares reveladas, mas ao contrário, a intenção é compreender todas as modificações, equivalentes e alternativas consistentes com a presente invenção e as reivindicações apensas.

[00343] Será compreendido que a tecnologia descrita aqui tem aplicações amplas. As modalidades acima foram escolhidas e descritas a fim de ilustrar princípios da tecnologia bem como algumas aplicações práticas. Embora certas modalidades tenham sido descritas e/ou exemplificadas aqui, é compreendido que variação e modificação con- sideráveis das mesmas são possíveis.

Exemplo 1: Síntese e Caracterização de 5'-Metilselenoadenosina ("Composto C") [00344] O esquema de síntese e metodologia para produzir Composto C foram: [00345] Boroidreto de sódio (227 mg, 6,0 mM, sob Ar°) foi posto em um frasco de fundo redondo de 200 ml_ contendo 200 ml_ de álcool etílico anidro, equipado em um agitador magnético e localizado em um banho de arrefecimento com gelo. Dimetildisselenida (190 uL, 376 mg, 2,0 mM) foi adicionada ao frasco com arrefecimento, agitação e sob fluxo de Ar. Após formação de uma solução amarelada, 5'-cloro-5'-desoxiadenosina sólida (1,143 g, 4,0 mM) foi adicionada. 100 ml_ de álcool de etila foram adicionados para dissolver o precipitado. A mistura foi agitada em temperatura ambiente pelos quatro dias seguintes. Espectrometria de Massa foi usada para monitorar a conversão de aproximadamente 75% que foi obtida após cinco dias. Os solventes foram evaporados e 3,22 g do produto (com aproximadamente 20% de material de partida (SM - Starting Material)) foram coletados e purificados através de cromatografia preparativa de fase reversa (C-8). Um rendimento de 1,1 g de produto puro foi coletado, que teve seu peso molecular confirmado através de espectrometria de massa.

Exemplo 2: Síntese e Caracterização de Se-Adenosil-L-homocisteína ("Composto D") [00346] O esquema de síntese e a metodologia para produzir o Composto D são mostrados abaixo nas etapas 1-6: 5'-Cloro-5'-desoxiadenosina (639-62) [00347] Oitenta e nove (89) gramas (0,366 mmol, 1 eq.) de adeno-sina, 59,3 ml_ (58, 1,833 mol, 2 eq.) de piridina anidra e 1 L de acetoni-trila anidra foram postos em um frasco de 4 gargalos, 2 L, seco no forno, equipado em um funil de gotejamento, um agitador, uma entra-da/saída de gás e um termômetro. O conjunto de reação foi posto em um banho de gelo/sal e agitação foi iniciada. Quando a temperatura da solução caiu abaixo de 3o C, cloreto de tionila foi adicionado lentamente. A temperatura da mistura de reação foi mantida abaixo de 5o C durante adição de cloreto de tionila e por mais 4 horas (neste momento a solução é amarela com precipitado branco-amarelo no fundo). A reação foi deixada de um dia para o outro em temperatura ambiente.

[00348] Na manhã seguinte, o precipitado volumoso foi filtrado usando filtro de vidro sinterizado e lavado no filtro com volume de 300 mL de acetonitrila seca. Durante este tempo, a cor do precipitado mudo para branco. O precipitado úmido foi então transferido de volta para o frasco de reação de 2 L contendo uma mistura de 800ml_ de metanol e 160 mL de água. Oitenta mililitros (80 mL) de solução de hidróxido de amônio concentrada foram adicionados gota a gota ao frasco de reação com agitação mecânica e esfriamento com um banho de água. A mistura foi agitada por 45 minutos em temperatura ambiente e um precipitado branco se formou, o qual foi separado do líquido através de filtragem a vácuo.

[00349] O filtrado foi concentrado até secagem usando um evapo-rador giratório a vácuo enquanto o precipitado foi cristalizado de a partir de aproximadamente 560 mL de água quente. O precipitado foi esfriado em um banho de água gelada e a primeira coleta dos cristais foi filtrada e seca com congelamento. O filtrado foi usado como um solvente na cristalização de sólidos, que resultou da evaporação giratória do primeiro filtrado para obter a segunda coleta do produto. A segunda coleta do produto foi seca por congelamento por dois dias. Ambas as coletas de cristais foram finalmente secas por dois dias em pentóxido fosforoso em um dissecador a vácuo. Oitenta e quatro (84) gramas de cristais brancos, com um rendimento de 80,5%, foram obtidos. MS(286-M+H), pf. 187° C. Selenoadenosil homocisteína (655-40).

[00350] L-selenometionina (9,806 gramas, 50 mM, 1 eq.) foi carregada em um frasco de três gargalos, 2 L, equipado em um termômetro, um dedo de refrigeração grande (com medidor de bolha na saída), entrada de gás de amônia (atingindo o fundo do frasco) e uma barra de agitação magnética e posta em um recipiente Duar de 2,5 L contendo banho de arrefecimento de C02-Acetona. Ar° foi passado por um frasco antes da adição de C02 sólido ao banho de acetona e o dedo de refrigeração. Quando a temperatura dentro do frasco caiu abaixo de -35° C o fluxo da amônia anidra (gás) foi iniciado e quando níveis de amônia líquida atingiram o volume de 8000 mL o fluxo de gás foi parado.

[00351] Pedaços pequenos de sódio metálico foram adicionados a uma solução bem agitada até que coloração azul-violeta da solução persistiu por aproximadamente 30 s. Um total de 2,645 gramas (115 mM, 2,3 eq.) de sódio foi adicionado dentro de 45 min. Agitação e esfriamento foram mantidos por mais 30 min. Neste momento todos os componentes estavam na solução. 5'-Cloro-5'-desoxiadenosina anidra (14,856 gramas, 52 mM, 1,04 eq.) foi adicionada em uma porção única e a mistura de reação foi deixada com agitação e fluxo de Ar° muito lento de um dia para o outro.

[00352] Na manhã seguinte, 350 mL de metanol anidro foram adicionados aos sólidos brancos que estavam presentes no frasco. O frasco foi posto em um banho de óleo, um condensador de refluxo foi instalado, fluxo de gás Ar° foi mantido e um banho de óleo foi aquecido para 50° C pelas 24 horas subsequentes. Um mililitro (1 mL) da solução foi acidificado para pH 3,5 com algumas gotas de HCI 0,1N e a amostra foi analisada quanto à presença de substratos usando espec-trometria de massa.

[00353] Se abaixo de 5%, a mistura pode ser acidificada com HCI 1N para pH 3,5, filtrada de sais, concentrada até secagem usando evaporador giratório a vácuo e o produto bruto pode ser purificado através de cristalização a partir da mistura de água-etanol. A primeira coleta de cristais de Selenoadenosil homocisteína forneceu 15,98 gramas de produto com um rendimento de 74%. Ainda, aproximadamente 95% do produto estavam limpos, e poderíam ser usados em estudos biológicos sem purificação adicional.

Exemplo 3: Síntese e Caracterização de Gama-qlutamil-metilselenocisteína ("Composto E") [00354] O esquema de síntese e metodologia para produzir o Composto E são mostrados abaixo nas etapas 1-4: Síntese de N-Boc-(Q-tBu)-L-Glu-OSe (655-90) [00355] N-Boc-(0-tBu)-L-Glu-OH (303 mg, 1,0 Mmol), N-hidroxissuccinimida (121 mg, 1,05 mmol) e diciclo-hexil carbodiimida (227 mg, 1,1 mmol) foram suspensos/dissolvidos em 15 ml_ de éter de etila anidro e 10 uL de dimetiletilbenzilamina foram adicionados a partir de uma seringa na mistura de reação. Agitação em temperatura ambiente (22° C) foi mantida por 48 h. A mistura foi filtrada e o precipitado foi lavado 10 x 10 ml_ de éter de dietila. O filtrado foi concentrado e seco sob vácuo alto fornecendo produto cristalino branco (570 mg, -90% de rendimento). MS (M+Na+) = 423,17. Síntese de N-Boc-(Q-tBu)-L-Glu-MeSe-Cvs-OH (655-90) [00356] N-Boc-(0-tBu)-L-Glu-OSe (570 mg, 0,9 mmol), metilseleno-cisteína (175 mg, 0,8 mmol), trietilamina (152 mg, 209 pL, 1,5 mmol) foram adicionados a uma mistura de 6 ml_ de 1,4-Dioxana e 2 ml_ de água. Agitação magnética da mistura de reação foi mantida por 100 h. Após este tempo, HCI 1,21M (1,65 mL) foi adicionado e a mistura pós-reação foi extraída com três rodadas (3x) de 20 mL de éter de etila. O extrato foi concentrado até secagem usando um evaporador giratório a vácuo fornecendo 649 mg de produto ceroso que foi submetido à HPLC preparativa. Duzentos e oitenta e três miligramas (283 mg) do produto foram coletados tendo um rendimento de 75,6%. Espectro de massa confirmou o peso molecular do produto, e a presença de um átomo único de Se nele. A massa calculada para Ci8H32N207Se=468,42; Estes resultados encontrados 469,24 m/e (M+H+) e 491,24 m/e (M+Na+). Síntese de Y-Glutamil-metilselenocisteína (655-92) [00357] Uma mistura de 283 mg (0,6 mmol) de N-Boc-(0-tBu)-L-Glu-MeSe-Cys-OH, 2 ml_ de tioanisol e 5 ml_ de ácido trifluoracético foi aquecida com agitação magnética em um banho de óleo por 6 horas a 63° C. A mistura foi deixada de um dia para o outro em temperatura ambiente (22° C). A mistura de reação foi adicionada gota a gota a 20 ml_ de um éter de etila vigorosamente agitado. O precipitado que se formou foi lavado com duas rodadas (2x) de 20 ml_ de éter de etila. O produto forneceu 138,3 mg de precipitado cremoso, que foi então purificado através de HPLC preparativa.

Exemplo 4: [00358] Compostos orgânicos de selênio individuais sintéticos, combinações dos compostos orgânicos de selênio individuais e seus análogos de enxofre foram testados em cultura celular (in vitro) quanto a efeitos sobre sobrevivência ou viabilidade celular e expressão de gene nos exemplos descritos aqui. Em particular, as células testadas foram células de fígado AML-12 de camundongo.

Materiais e Métodos Linhagens de célula e Compostos [00359] A linhagem de célula de fígado de camundongo AML-12 e células IMR-32 de neuroblasto humanas foram compradas da American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, Virgínia). Células AML-12 foram amplificadas em meio da Eagle modificado com da Dulbecco e meio F12 de Ham (DMEM/F12) suplementado com soro bovino fetal 10% (FBS), dexametasona 40 ng/ml (Dex, Sigma) e solução ITX 1X (contendo 0,01 mg/ml de insulina bovina, 0,0055 mg/ml de transferrina humana, 5 ng/ml de selênio de sódio) (Sigma). Células IMR-32 foram culturadas em Meio Essencial Mínimo da Eagle (EMEM) suplementado com FBS 10%.

[00360] O Composto C (5'-Metilselenoadenosina), Composto D (Se-Adenosil-L-homocisteína) e Composto E (Gama-glutamil-metilseleno-cisteína) e seus análogos de enxofre), Composto H (5-Metiltioadenosina), Composto I (S-Adenosil-L-homocisteína) e Composto J (Gama-glutamil-metil-cisteína) foram ou sintetizados ou obtidos de fontes comerciais (onde disponível). As purezas de todos os compostos testados foram verificadas ser > 99%, conforme determinado através de Espectrometria de Massa. Três bateladas dos compostos sintetizados acima foram usadas nos experimentos que seguem.

[00361] Os valores de ppb mostrados nos presentes exemplos se referem a ppb de selênio em compostos contendo selênio ou ppb de enxofre em compostos contendo enxofre a fim de assegurar que quantidades equivalentes de selênio ou enxofre estivessem sendo testadas nos experimentos.

[00362] A fim de converter ppb com base em selênio em ppb do composto, a % de Se em um composto é calculada dividindo o peso atômico de selênio pelo peso molecular do composto e multiplicando o dividendo por 100. A fim de converter ppb com base em enxofre em ppb do composto a % de S em um composto é calculada dividindo o peso atômico de enxofre pelo peso molecular do composto e multiplicando o dividendo por 100.

[00363] Por exemplo, dividindo o peso atômico de Selênio de 78,96 pelo peso molecular de Composto C de 344 e multiplicando o resultado por 100, resulta em uma % de selênio em Composto C de 23%. Da mesma maneira, para Composto D, dividindo o peso atômico de Selê- nio de 78,96 pelo peso molecular de Composto D de 432 e multiplicando o resultado por 100, resulta em uma % de selênio no Composto D de 18%. Para o Composto E, dividindo o peso atômico de Selênio de 78,96 pelo peso molecular de Composto E de 311 e multiplicando o resultado por 100, resulta em uma % de selênio no Composto E de 25%.

[00364] Estes valores de Se % são usados para derivar fatores para conversão de ppb de selênio em ppb do composto. Estes fatores são: 4,35 para Composto C, 5,46 para Composto D e 3,94 para Composto E. A fim de converter ppb com base em selênio em ppb do composto multiplicar a ppb indicada de selênio pelo fator para cada composto como mostrado na Tabela abaixo. Por exemplo, 150 ppb de Composto C nos experimentos abaixo se refere a 150 ppb de selênio e seu equivalente a 653 ppb de Composto C.

[00365] Para os compostos de enxofre, divisão do peso atômico do Enxofre por 32 pelo peso molecular do Composto H de 297, e multiplicação do resultado por 100, resulta em uma % de enxofre no Composto H de 11%. Da mesma maneira, para o Composto I, divisão do peso atômico de Enxofre de 32 pelo peso molecular do Composto I de 384 e multiplicação do resultado por 100 resulta em uma % de enxofre no Composto I de 8%. Para o Composto J, divisão do peso atômico de Enxofre por 32 pelo peso molecular de Composto J de 264, e multiplicação do resultado por 100, resulta em uma % de enxofre no Composto J de 12%.

[00366] Estes valores de S % são usados para derivar fatores para conversão de ppb de enxofre em ppb do composto. Estes fatores são: 9,28 para H, 12,00 para Composto I e 8,25 para Composto J. A fim de converter ppb com base em enxofre em ppb do composto multiplicar o ppb indicado de enxofre pelo fator para cada composto como mostrado na Tabela abaixo. Por exemplo, 150 ppb de Composto H como descrito nos experimentos abaixo se refere a 150 ppb e enxofre e é equivalente a 1392 ppb de Composto H.

Ensaio de Viabilidade Celular [00367] Viabilidade celular em AML-12 culturada foi determinada usando estojos de ensaio CellTiter96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay da Promega, de acordo com o protocolo e instruções do fabricante. Em suma, AML-12 (1x104 células/cavidade) foram semeadas em placas transparentes de 96 cavidades (VWR) e culturadas em meio DMEM/F12 contendo FBS 10%, 1XITS e 40 ng/ml de Dex de um dia para o outro. As células foram então tratadas com controle (água) ou compostos em meios DMEM/F12 livres de ITS contendo FBS 10% e 40 ng/mL de Dex por 48 horas.

[00368] As células culturadas foram incubadas com solução AQue- ous One (100 ul/por cavidade) a 37° C por 1 hora e a absorbância de OD490 nm em cada amostra foi determinada pela leitora de micropla-ca Bio-Tek. A viabilidade celular em células de cultura foi determinada pela subtração de OD490 nm em células culturadas com a OD490 nm em meios de cultura planos (sem semeadura de sementes). Oito amostras por cada tratamento foram examinadas para a análise acima. Os dados são apresentados como Média ± SEM de oito amostras. Tratamentos de Célula para RNA e Análise de Proteína [00369] Para análise de RNA de receptor de insulina (Insr), receptor de fator de crescimento do tipo insulina (Igflr) e Glicose-6-Fosfatase (G6pc), células AML-12 foram amplificadas em meios DMEM/F12 contendo ITS, Dex e FBS e culturadas em placas de 24 cavidades (6,7 x 104 células/cavidade) em meios DMEM/F12 livres de ITS FBS 10% com ou sem Dex de um dia para o outro. Estas células foram tratadas com controle (água) ou vários compostos (diluídos em meio DMEM/F12 livre de ITS FBS 10% com ou sem Dex) por 6 horas, 24 horas ou 48 horas.

[00370] Em alguns experimentos, as células AML-12 foram lavadas duas vezes com PBS após os tratamentos com composto por 24 horas, e então incubadas com compostos de selênio (150 ou 300 ppm de cada composto) na presença ou ausência de insulina (10 ou 100 nM), 8-CPT 0,1 mM (Sigma) ou Dex 0,5 μΜ em meio DMEM livre de soro, livre de glicose/vermelho fenol suplementado com lactose 20 mM e piruvato 2 mM e HEPES 15 mM (meio de produção de glicose) por mais 6 horas. Após tratamentos, meios celulares foram coletados e submetidos a ensaios de glicose usando estojo de ensaio de glicose Abcam de acordo com o protocolo do fabricante. Células lisadas e coletadas para isolamento de RNA e análise de PCR de G6pc, Insr e Ig-flr.

[00371] Para os estudos de expressão de proteína, células AML-12 foram amplificadas em meios DMEM/F12 contendo ITS, Dex e FBS e culturadas em placas de 6 cavidades (3,33 x 105 células/placa) em meios DMEM/F12 livres de ITS FBS 10% com ou sem Dex de um dia para o outro. Estas células foram tratadas com controle (água) ou vários compostos ou em contendo soro (meio DMEM/F12 livre de ITS FBS 10% suplementado com Dex) ou livre de soro (meio DMEM/F12 livre de ITS/Dex) por 6 horas e 24 horas. Ainda, células IMR-32 de neuroblastoma humano foram culturadas em meio EMEM FBS 10% e então tratadas com controle (água), compostos de selênio e seus análogos de enxofre no mesmo meio contendo soro por 6 horas e 24 horas.

Isolamento de RNA e Análise de PCR em Tempo Real [00372] RNA total destas células foi isolado usando Trizol (Invitro-gen) de acordo com o protocolo do fabricante, e então incubado com DNase I para remover qualquer DNA genômico contaminado potencial. Amostras de RNA foram submetidas à análise de PCR em tempo real usando o estojo RT da Applied-Bioscience e sondas Taqman pré-projetadas (Invitrogen), como anteriormente descrito (Lan e outros, EMBO J, 2003). Três a seis amostras foram analisadas em cada grupo de tratamento. Os dados foram normalizados por níveis de mRNA de Actina B (Actb) em cada amostra e são apresentados como média ± SEM de 3-6 amostras.

Preparação de Proteína e Análise Western Blot [00373] Células de fígado AML-12 ou células neuronais IMR-32 foram semeadas em placas de 6 cavidades, e então tratadas com veículo e vários compostos por 6 horas e 24 horas, como descrito aqui. Após tratamentos, as células foram enxaguadas com PBS gelado e lisadas no tampão de RIPA gelado contendo inibidores de proteinase e fosfatase completos (Thermo-Fisher Scientific, Waltham, MA) em gelo por 30 minutos. Os lisatos de célula foram coletados usando um ras- pador de célula e pipeta de transferência, e então centrifugados a 12000x g por 30 minutos a 4o C para remover o pelete de DNA e obter o extrato de proteína. Os níveis de proteína no sobrenadante destes lisatos de célula foram determinados usando o estojo de ensaio de proteína Pierce Micro-BCA (Thermo Scientific-Piece Biotechnology, Rockford, IL) de acordo com o protocolo do fabricante.

[00374] Para análise Western blot, cinco microgramas de proteínas totais para células tratadas com controle e composto(s) foram submetidos à separação em gel SDS-PAGE e então transferidos para membranas PVDF, como anteriormente descrito (Reddy, Liu e outros, 2008, Science). As membranas foram bloqueadas em uma solução salina tamponada com fosfato (PBS) contendo 5% (p/v) de albumina de soro bovino (Sigma, St. Louis, MO) e incubadas com anticorpos primários específicos. As membranas foram então incubadas com anticorpos secundários anti-camundongo ou anti-coelho conjugados a HRP (diluição de 1:5000, Cell Signaling, Inc.).

[00375] Todos os anticorpos primários exceto Actb (Li-COR, Lincoln, Nebraska), Elf2b8 e pElf2b8 (Abcam, Cambridge, MA) foram comprados da Cell Signaling Inc. Sinais positivos nas manchas de membrana foram detectados usando os reagentes Western Blotting Prime Detection de quimioluminescência aumentada da Amersham (GE healthcare Lifescience, Pittsburg, PA). Imagens de sinais de lumi-nescência nas manchas de membrana foram capturadas usando o LICOR Odyssey Fc Imagem system (Lincoln, Nebraska). A mesma mancha de membrana foi descarnada e novamente manchada com um outro anticorpo como descrito no protocolo de detecção GE WB ECL-prime (GE healthcare Lifescience, Pittsburg, PA). Densidades de faixa de proteína nos Western blots foram determinadas usando o software Li-COR Image studio ou software NIH ImageJ e então normalizadas pelo nível de Actb em cada amostra. Os dados apresentados são mé- dia ± SEM de três amostras por cada grupo.

Análise Estatística [00376] Onde aplicável, um teste t de Student foi usado para determinar a significância estatística ou diferença entre grupos tratados com solução salina e tratados com Compostos CDE com um valor p de menos do que 0,05.

Resultados e Discussão: Efeito de Compostos CDE sobre Viabilidade de Células AML12 [00377] Para testar se há algum efeito tóxico de compostos de se-lênio sobre a sobrevivência de células AML-12, ensaios de viabilidade celular foram realizados em células do fígado. Células AML-12 foram tratadas com um controle de água ou 150 ppb de Composto C, Composto D, Composto E, Composto H, Composto I e Composto J individual; combinações de Compostos I e J ("Composto IJ"); combinações de Composto D e Composto E ("Composto DE"); e combinações de Composto C, Composto D e Composto E ("Compostos CDE") por 48 horas.

[00378] Nenhum tratamento com composto, incluindo ambos compostos sozinhos e combinações de composto, causou uma diminuição significante de viabilidade celular (indicado por OD490 nM) em células AML-12 quando comparado com o grupo controle (FIG. 1). Estes resultados demonstraram que Compostos CDE de selênio não tiveram nenhum efeito negativo sobre a sobrevivência ou viabilidade de células AML-12.

Inibição de expressão de mRNA de G6pc por Compostos CDE em células AML-12 culturadas em meios contendo FBS e Dex sem ITS

[00379] O fígado é o principal órgão para produção de glicose para manutenção de níveis de glicose normais na corrente sanguínea. A subunidade Glicose-6-Fosfatase Catalítica (G6pc) é uma enzima essencial para gluconeogênese no fígado. Para explorar a função poten- ciai de Compostos CDE no fígado, expressão de G6pc foi examinada por análise QRT-PCR em células AML-12 culturadas sob várias condições descritas aqui.

[00380] É recomendado que células AML-12 devam ser culturadas ou amplificadas em meio contendo soro, suplemento de Insulina-Transferrina-Selenita de sódio (ITS) e Dexametasona (Dex). Para excluir a possibilidade que insulina e selenita de sódio em ITS pudessem interferir com a ação dos compostos de selênio testados em células AML-12, a expressão de G6pc em células AML-12 culturadas em meio livre de ITS, mas contendo FBS e Dex, foi investigada. Em suma, células AML-12 foram culturadas/amplificadas em meio de amplificação completo (DMEM/F12 contendo ITS e Dex, FBS 10%), semeadas em placas de cultura e culturadas em meio contendo FBS e Dex livre de ITS de um dia para o outro. Estas células foram tratadas com controle (água), compostos individuais de selênio: Composto C, Composto D, Composto E na dose de 150 ppb de cada composto e compostos individuais de enxofre: Composto H, Composto I, Composto J. Uma combinação de Compostos CDE e uma combinação de Compostos HIJ foram também testadas nas células por 48 horas. Após estes tratamentos, as células foram coletadas e submetidas à análise QRT-PCR.

[00381] Como mostrado na FIG. 2A, tratamento de células do fígado AML-12 com a combinação de Compostos CDE, mas não a combinação de Compostos HIJ análogo de enxofre, causou uma diminuição muito significante (aproximadamente 50%) em expressão de G6pc em células do fígado sob as condições experimentais. Ainda, expressão de G6pc foi examinada mais em células AML-12 após tratamento com todos os compostos individuais (vide FIG. 2B). Nenhuma alteração significante (por exemplo, aumento ou diminuição) em expressão de G6pc foi observada. Os dados são apresentados como média ± SEM de 4 amostras.

[00382] O efeito de expressão de G6pc diminuída em resposta à combinação de Compostos CDR foi observada em três experimentos de repetição usando bateladas de células diferentes (dados não mostrados). Este efeito não foi devido aos efeitos tóxicos potenciais de compostos de selênio sobre sobrevivência celular uma vez que os Compostos CDR não afetaram a viabilidade de células AML-12 sob as mesmas condições experimentais (vide FIG. 1). Estes resultados demonstram que os Compostos CDE em combinação, mas não compostos individuais ou seus análogos de enxofre, podem inibir expressão de G6pc em células AML-12 na presença de FBS e Dex em meios de cultura.

Uma combinação de Compostos CDE inibe expressão de G6dc em células AML12 em meios livres de ITS e Dex com FBS por 24 horas seguido por meios livres de soro por 6 horas [00383] Foi relatado que Dex pode regular expressão de G6pc no fígado. Os efeitos de Compostos CDE em células AML-12 sob condições de cultura livres de ITS/Dex foram investigados. Células AML-12 do fígado culturadas sob condições livres de soro por 24 horas e 48 horas exibiram um pouco de morfologia de célula anormal. No entanto, quaisquer mudanças morfológicas substanciais em células AML-12 após cultura em meios livres de soro por 6 horas foram observadas (dados não mostrados). Desta maneira, células AML-12 foram pretra-tadas com Compostos CDE em meios contendo soro mas livres de ITS/Dex por 24 horas seguido por novo tratamento com compostos em meios livres de soro/ITS/Dex por 6 horas para investigar mais os efeitos de expressão de Compostos CDE sobre G6pc.

[00384] Em suma, células AML-12 foram tratadas ou com 150 ou 300 ppb de combinação de Compostos CDE (diluídos em meios FBS 10% mas livres de ITS/Dex) por 24 horas. As células foram então lavadas duas vezes com PBS para remover FBS residual e incubadas com as mesmas doses destes compostos de selênio na presença ou ausência de 10 ou 100 nM de insulina (diluída em meios livres de FBS/ITS/Dex) por 6 horas. Tratamentos com insulina sozinha foram incluídos para a comparação da eficácia dos efeitos de Compostos CDE e as ações aditivas ou sinergísticas potenciais entre Compostos CDE e insulina.

[00385] Como mostrado na Fig. 3, tratamentos de ambas as doses de insulina (10 e 100 nM) inibiu significantemente expressão de G6pc, o que é esperado. Tratamento de Compostos CDE sozinhos na dose de 150 ppb causou uma tendência de redução em expressão de G6pc (Fig. 3). Mais drasticamente, tratamentos com Compostos CDE na dose de 300 ppb causaram uma redução robusta e significante em expressão de G6pc nestas células do fígado AML-12, com a eficácia pelo menos comparável a 100 nM de insulina (Fig. 3).

[00386] Ainda, a combinação testada de tratamento de insulina com 150 ou 300 ppb de Compostos CDE também resultou em uma redução significante em expressão de RNA de G6pc, quando comparado com o controle (Fig. 3). Os resultados demonstram claramente que os Compostos CDE podem imitar insulina para inibir expressão de G6pc em células AML-12 e a dose eficaz de 300 ppb de Compostos CDE é comparável a 100 nM de insulina.

Inibição de expressão de G6pc e aumento de ação de insulina na re-qulaqem de expressão de G6pc por Compostos CDE em células AML-12 culturadas sob condições diabéticas simuladas (estimulada por ambos cAMP e Dex) [00387] Para investigar mais os efeitos de Compostos CDE sobre expressão de G6pc, expressão de mRNA de G6pc em células AML-12 cotratadas com cAMP 8-(4-clorofeniltio) (8-CPT) permeável à célula e Dexametasona (Dex) foi examinada. AMP (8-CPT) e Dex cíclicos são estímulos bem conhecidos de expressão de G6pc e produção de gli- cose no fígado, o que imita condições diabéticas in vivo. Em suma, células do fígado AML-12 foram pretratadas com água (controle) ou 150 ppb ou 300 ppb de combinação de Compostos CD em meios com FBS 10% mas livres de ITS/Dex por 24 horas. Este tratamento inicial foi seguido por novo tratamento destes compostos de selênio na presença ou ausência de 10 nM ou 100 nM de insulina, 0,1 mM de 8-CPT e 0,5 μΜ de Dex em meios livres de soro por 6 horas. Após estes tratamentos, as células foram coletadas e submetidas à análise QRT-PCR. Os dados são apresentados na FIG. 4 como média ± SEM de quatro amostras por cada grupo. Letras diferentes (a vs b, a' vs b' vs c', a" vs b" vs c") na FIG. 4 querem dizer uma diferença significante entre estes dois grupos.

[00388] Como mostrado na FIG. 4, células do fígado AML-12 tratadas com 8-CPT/Dex mostraram um grande aumento na expressão de mRNA de G6pc. Tratamento com ambas as doses de insulina diminuiu significantemente expressão de G6pc induzida por 8-CPT/Dex em células AML-12 (quando comparado com grupo 8-CPT/Dex no gráfico de barras na Figura 4). Mais importante, os Compostos CDE na dose de 150 ppb também atenuaram significantemente expressão de G6pc induzida por 8-CPT/Dex. Os níveis médios de expressão de G6pc foram reduzidos mais em células AML-12 após tratamentos com 8-CPT/Dex e a combinação de Compostos CDE em uma dose maior (300 ppb), embora o valor P tenha sido maior do que 0,05 (quando comparado com o grupo 8-CPT/Dex) devido à variação alta de expressão de G6pc neste grupo de tratamento. Independentemente, estes estudos demonstraram que, tal como a insulina, os Compostos CDE sozinhos nas doses testadas podem inibir expressão de G6pc induzida por 8-CPT/Dex (uma redução de cerca de 40-48% quando comparado com o grupo de 8-CPT/Dex).

[00389] Ainda, tratamento com Compostos CDE em dose de 150 ppb em combinação com 10 nM de insulina, junto com 8-CPT/Dex, inibiu mais expressão de G6pc em células AML-12 quando comparado com o grupo de 10 nM de insulina e 8-CPT/Dex (indicado por um a' vs b' no gráfico em barras na FIG. 4). Também, os níveis médios de níveis de mRNA de G6pc foram menores em células AML-12 após tratamento com 10 nM de insulina, 8-CPT/Dec e uma dose maior de Compostos CDE (grupo de 10 nM de insulina/8-CPT/Dex/300 ppb de Compostos CDE vs grupo de 10 nM de insulina/8-CPT/Dex/150 ppb de Compostos CDE). No entanto, não havia nenhuma diferença estatística entre estes dois grupos.

[00390] Mais drasticamente, como mostrado no gráfico de barras inserido, tratamento com Compostos CDE a 300 ppb em combinação com 100 nM de insulina junto com 8-CPT/Dex inibiu significantemente expressão de G6pc em células AML-12 quando comparado com o grupo de 100 nM de insulina e 8-CPT/Dex (indicado por um a" vs b" vs c" no gráfico de barras na FIG. 4). Ainda, os níveis de mRNA de G6pc em células AML-12 após tratamentos de 100 nM de insulina, 8-CPT/Dex e 300 ppm de Composto CDE foram significantemente menores do que aqueles no grupo de 100 nM de insulina/8-CPT/Dex/150 ppb de Compostos CDE (vide gráfico inserido na FIG. 4).

[00391] Juntos, estes resultados demonstram que a combinação de insulina e Compostos CDE era ainda mais eficaz do que a insulina sozinha ou Compostos CDE sozinhos na inibição de expressão aumentada de G6pc devido a tratamento com 8-CPT/Dex.

[00392] Análise de glicose foi também realizada nos meios de cultura de células AML-12 após os tratamentos acima. Infelizmente, os níveis de glicose produzida por células AML-12, mesmo após estimulação com 8-CPT/Dex, foram muito baixos para serem detectados pelo ensaio de glicose por fluorescência sensível (Abcam) (dados não mostrados).

[00393] Em suma, estes resultados em células AML-12 culturadas sob as condições de cultura descritas acima demonstraram que os Compostos CDE podem imitar insulina para inibir expressão de G6pc sob ambos modelos normal e in vitro de condição patológica ou diabética (por exemplo, tratamento de células com 8-CPT/Dex). Ainda, os Compostos CDE podem aumentar a ação da insulina para inibir expressão de G6pc em células AML-12 culturadas sob condições diabéticas simuladas. Estes resultados proveem evidência molecular que Compostos CDE têm o potencial em inibir produção de glicose em excesso em Diabéticos Tipo I e/ou Tipo II.

Suprarrequlaqem da expressão de Insre laflrem células AML-12 após tratamento com os Compostos CDE

[00394] Receptor de insulina (Insr) e receptor 1 de fator de crescimento do tipo insulina 1 (Igflr) são essenciais para ação de insulina e IGF1 para controlar expressão de G6pc, e subsequentemente produção de glicose no fígado. Para examinar se a combinação de Compostos CDE pode modular sensibilidade à insulina ou IGF1 nas células do fígado de uma maneira dependente de receptor, a expressão dos receptores de insulina e IGF1 por análise QRT-PCR foi determinada.

[00395] Células AML-12 foram primeiro tratadas com um controle de água (controle n = 4), Compostos selênio CDE e seus análogos de enxofre Compostos HIJ (n=4) em meios contendo FBS/Dex mas livres de ITS por 24 horas e então submetidos à análise QRT-PCR de Insre Igflr. Como mostrado na FIG. 5A, o nível de mRNA de Insr foi robus-tamente aumentado em 2,78 vezes seguindo tratamento com Compostos CDE. Similarmente, expressão de Igflr foi também significante-mente estimulada pelos Compostos CDE em um aumento de cerca de 2,2 vezes (vide Fig. 5B). No entanto, análogos enxofre Compostos HIJ não afetaram expressão de Insr e Igflr em células AML-12 (vide FIGURAS 5A e 5B).

[00396] Para validar mais que os Compostos CDR podem aumentar a expressão de Insr e Igflr, células AML-12 foram tratadas com duas doses de Compostos CDE em meios contendo FBS, mas livres de ITS/Dex por 24 horas. As células foram então novamente tratadas com as mesmas doses de Compostos CDE na presença ou ausência de 8-CPT/Dex em meios livres de FBS/ITS/Dex por 6 horas. Ainda, estas células foram tratadas com insulina por 6 horas para ver se havia alguma diferença entre insulina e Compostos CDE no controle de expressão de Insr e Igflr.

[00397] Como mostrado nas FIGURASFIGURAS 5C e 5D, tratamentos de Compostos CDE em ambas as doses de 150 ppb e 300 ppb aumentou significantemente a expressão de Insr e Igflr em células AML-12 sem cotratamentos com 8-CPT/Dex, quando comparado com o controle (isto é, grupo de CDE 0 ppb/sem insulina e sem 8-CPT/Dex). No entanto, Insulina sozinha não aumentou a expressão de Insr e Igflr em células AML-12 (vide FIGURASFIGURAS 5B e 5C). Similarmente, tratamentos com Compostos CDE na dose de 300 ppb, mas não insulina, também aumentou significantemente expressão de Insre Igflr em células AML-12 cotratadas com 8-CPT/Dex (vide barras pretas nas FIGURASFIGURAS 5C e 5D).

[00398] Estes resultados demonstram que os Compostos CDE podem estimular expressão de Insr e Igflr em células AML-12 sob as condições testadas. Ainda, estes dados mostram que há uma diferença entre ação de insulina e Compostos CDE em regulagem de expressão de gene em células AML-12. Também, os resultados sugerem que Compostos CDE podem ser úteis para tratamento de diabéticos Tipo I e Tipo II através do aumento da sensibilidade à insulina.

[00399] Juntos, os estudos de expressão de gene acima (FIGU-RASFIGURAS 2-4) demonstram que os Compostos CDE, mas não compostos individuais ou seus análogos de enxofre, podem imitar in- sulina para atenuar significantemente expressão de G6pc, desta maneira representando uma nova maneira de reduzir a produção de glicose hepática. Estes dados também proveem evidência molecular que os Compostos CDE podem agir de uma maneira similar à insulina na inibição de expressão de G6pc em células de fígado de camundongo mesmo na presença de um estimulante de produção de glicose, tal como 8-CPT/Dex (FIGURASFIGURAS 3-4).

[00400] Ainda, Compostos CDE em combinação também aumentam a ação de insulina para inibir mais a expressão de G6pc em células AML-12 estimuladas com 8-CPT (FIG. 4). Compostos CDE em combinação podem estimular expressão de Insr e Igflr (FIG. 5) que também contribui para expressão reduzida de G6pc para produção de glicose no fígado junto com sensibilidade à insulinallgfl aumentada e tráfego de glicose. Além disso, Compostos CDE em combinação não tiveram efeitos tóxicos sobre a viabilidade de células do fígado (FIG. 1). Em suma, estes resultados demonstram que os Compostos CDE em combinação imitam insulina para inibir expressão de G6pc e também aumentam a ação de insulina no processo, da mesma maneira através da estimulação de expressão de Insr e/ou Igflr, em células AML-12 do fígado de camundongo sem quaisquer efeitos tóxicos sobre sobrevivência ou viabilidade celular.

Exemplo 5: Compostos CDE se direcionam à fosforilação de Foxo3 e Foxo4 em células AML-12 [00401] A subclasse O da família de fator de transcrição Forkhead (FOXO) desempenha um papel crítico em metabolismo, gluconeogê-nese e sensibilidade à insulina no fígado. Atividade intracelular de genes de FOXO é estritamente regulada por modificação pós-traducional. Em particular, fosforilação de FOXOs os exclui do núcleo, desta maneira bloqueando seu acesso a seus genes alvo. Em indivíduos resistentes à insulina ou diabéticos, não há nenhum sinal para excluir FOXOs do núcleo, então ele permanece presente no núcleo e estimula a transcrição de G6pc. Expressão aumentada de G6pc leva à gluconeogênese, levando à hiperglicemia. Fatores de crescimento do tipo insulina (IGFs) também podem modular ação de insulina para controlar expressão de G6pc mediada por FOXO para produção de glicose no fígado.

[00402] Como descrito antes, células do fígado AML-12 demonstraram que Compostos CDE em combinação podem imitar ação de insulina para inibir expressão de G6pc e podem aumentar ação de insulina no processo. Uma vez que FOXOs são as principais moléculas de sinalização para gluconeogênese e sensibilidade à insulina no fígado, a questão de se Compostos CDE, tal como insulina, se direcionarão a FOXOs e outras moléculas de sinalização relacionadas em células AML-12 foi examinada.

Compostos CDE se direcionam à fosforilacão de Foxo3 e Foxo4 em células AML-12 culturadas em meios contendo soro [00403] Para determinar se a combinação de Compostos CDE pode regular fosforilação de FOXO no fígado, células AML-12 foram tratadas com controle, e 150 ppb de Compostos CDE de selênio, e seus análogos de enxofre, 150 ppb de Compostos HIJ, em meios contendo soro e Dex, mas sem ITS por 6 horas. As células tratadas foram submetidas à análise Western blot. Dados quantitativos de expressão de proteína em Western blots são apresentados como média ± SEM de 3 amostras. Letras diferentes nos gráficos de barra querem dizer uma diferença significante entre estes grupos (P < 0,05).

[00404] A FIG. 6A mostra expressão de proteína de várias moléculas de sinalização incluindo Foxo3T32 fosforilada (Treonina 32; pFo-xo3T32), Foxo T28 fosforilada (Treonina 28; pFoxo4T28), PDK1 fosforilada (pPKD1), ΑΚΤ T308 fosforilada (Treonina 308; pAKTT308), AKT S473 fosforilada (Serina 473; pAKTS473), AKT, Gsk3a S21 fosforilada (Serina 21; pGsk3bS21), Gsk3bS9 fosforilada (Serina 9; pGsk3bS9), Gsk3a, Gsk3b, 4EBP1 T37/46 (Treonina 37 e Treonina 46; p4EB1T37T46), Elf2b8S539 fosforilada (Serina 530; pElf2b8S530) e Elf2b8 em células AML-12 após tratamento com água e 150 ppb de Compostos HIJ e 150 ppb de Compostos CDE diluídos em meios contendo soro e Dex (mas sem ITS) por 6 horas. Foi constatado que formas fosforiladas de proteínas Foxo3 (por exemplo, pFoxo3 na Treonina 32, pFoxo3T32) e Foxo4 (por exemplo, pFoxo4 na Treonina 28, pFoxo4T28) foram verificadas ser visivelmente elevadas em células AML-12 após tratamento com Composto CDE, mas não compostos HIJ, por 6 horas (FIG. 6A). Análise quantitativa mostrou que havia um aumento de aproximadamente 2,5 vezes de pFoxo3T32 e aumento de cerca de 3,2 vezes de pFoxo4T28 em células AML-12 tratadas com Compostos CDE (FIGURAS 6B e 6C). A requerente também testou vários anticorpos para Foxol fosforilada (pFoxol), mas falhou em detectar uma faixa de proteína pFoxol específica em Western blots por estes anticorpos (dados não mostrados). Os resultados sugerem que a expressão de pFoxol em células AML-12 é provavelmente muito baixa.

[00405] Análises QRT-PCR de níveis de proteína Foxol, Foxo3 e Foxo4 em células AML-12 após o mesmo tratamento descrito acima foram realizadas. Não houve nenhuma observação de mudança signi-ficante de expressão de mRNA de Foxol, 3 ou 4 (dados não mostrados) e o aumento observado de Foxo3 e Foxo4 fosforilada (vide FIG. 6) não é devido ao aumento potencial de expressão de proteína Fo-xo3/4 em células AML-12 pelos compostos CDE. Na realidade, níveis de proteína Foxo3 e Foxo4 totais não foram afetados pelos Compostos CDE em células AML-12 culturadas em condição livre de soro (vide FIG. 7A).

[00406] Ainda, Composto C, Composto D e Composto E individuais cada um a 150 ppb em células AML-12 foram testados para determinar o efeito sobre fosforilação de Foxo3/4 na mesma condição de cultura (em meios contendo soro) por 6 horas e 24 horas. Nenhuma mudança de níveis de proteína pFoxo3T32 e pFoxo4T28 após tratamento com tratamento com Composto C, Composto D ou Composto E individual foi observada (dados não mostrados), indicando que existe um efeito sinergístico entre Composto C, Composto D e Composto E em combinação que leva à fosforilação de Foxo3 e FOxo4 em células AML-12.

[00407] Juntos, estes resultados demonstram que os Compostos CDE, mas não os compostos individuais ou seus análogos de enxofre, podem aumentar a fosforilação de Foxo3 e Foxo4 em células AML-12 quando culturadas em meios contendo soro. Como fosforilação de FOXOs resulta em exclusão nuclear destes fatores de transcrição, estes resultados sugerem que Compostos CDE funcionarão como inati-vadores de Foxo3 e Foxo4 em células do fígado AML-12.

[00408] Uma vez que proteína cinase 1 (PDK1)/Proteína Cinase B (AKT) dependente de fosfatidilinositol 3-cinase (PI3K)/fosfoinositídeo é o curso de sinalização principal a montante de FOXOs para o controle mediado por insulina de produção de glicose no fígado, foi avaliado se houve alguma mudança nos níveis de PKD1 (pPDK1) e AKT (pAKT) fosforilada nestas células AML-12 tratadas com composto. Surpreendentemente nas 6 horas de tratamento testadas, os Compostos CDE não afetaram a fosforilação de PDK1 e AKT ou níveis de AKT totais (FIG. 6A). Isto podería ser devido aos efeitos transientes potenciais de Compostos CDE sobre ativação de PDK1 e AKT que ocorre em células AML-12 em pontos de tempo iniciais (antes do ponto de tempo de 6 horas testado examinado).

[00409] Ainda, níveis de duas outras moléculas de sinalização a jusante, GSk3a e GSK3b fosforiladas, que são diretamente controla- dos por AKT, não foram observados ter nenhuma mudança em seus níveis de proteína (FIG. 6A). Os níveis de 4EBP1 fosforilada (um alvo molecular a jusante de sinalização de AKT/mTOR) e pelf2BS S539 (um alvo molecular a jusante de Gsk3) que são chave para síntese ou tradução de proteína direcionada por insulina também não foram afetados (vide FIG. 6A). Estes resultados proveem evidência molecular direta adicional que Compostos CDE não tiveram um efeito tóxico sobre proliferação ou sobrevivência de célula AML-12 como descrito antes (FIG. 1).

[00410] Juntos, estes resultados sugerem que Compostos CDE não afetaram várias moléculas de sinalização a jusante diretas ou indiretas AKT tais como Gsk3a, Gsk3b, p4EBP1 e pElf2bS S539, exceto as Fo-xo3 e Foxo4 descritas acima em células AML-12 na presença de soro em meios de cultura. Em outras palavras, os Compostos CDE podem inativar seletivamente FOXOs através do aumento de sua fosforilação em células do fígado AML-12.

Compostos CDE direcionam fosforilação de Foxo3/4 em células AML-12 culturadas em condições livres de soro [00411] Como mencionado antes, células AML-12 podem ser culturadas em meios livres de soro por um período curto de tempo (isto é, 6 horas) sem defeitos morfológicos óbvios (dados não mostrados). Desta maneira, os níveis de proteína de proteínas Foxo3 e Foxo4 fosfori-ladas em células AML-12 culturadas sob condições livres de soro foram examinados.

[00412] Em suma, células AML-12 foram tratadas com controle (água), Compostos CDE (150 ppb de selênio de cada composto), Compostos CE (150 ppb de selênio de cada composto) ou Compostos DE (150 ppb de selênio de cada composto) em meios livres de soro, livres de ITS e livres de Dex por 6 horas e submetidos à análise l/Ves-tern blot e análise quantitativa. Dados quantitativos foram normaliza- dos por nível de proteína Actb e são apresentados como média ± SEM de 3 amostras. Letras diferentes nos gráficos em barras das FIGU-RASFIGURAS 7B e 7C significam diferença entre estes dois grupos (P < 0,05).

[00413] Como mostrado na FIG. 7A, os níveis de proteína fosforila-da de Foxo3 (pFoxo3 na Treonina 32) e Foxo4 (pFoxo4 na Treonina 28) foram verificados ser elevados em células AML-12 após tratamento com Compostos CDE e Compostos CE, mas não Compostos DE, por 6 horas em meio livre de soro. Não houve nenhuma mudança óbvia de níveis de proteína Foxo3 e Foxo4 totais após os tratamentos com os compostos de selênio (FIG. 7A). Nenhuma faixa específica de pFoxol foi detectada usando vários anticorpos para pFoxol específicos nestas amostras de proteína (dados não mostrados).

[00414] Análise quantitativa mostrou que houve aproximadamente um aumento de 1,8 vez de pFoxo3T32 (FIG. 7B) e aumento de cerca de 6 vezes de níveis de pFoxo4T28 (FIG. 7C) em células AML-12 tratadas com Compostos CDE e tratadas com Compostos CE. Todas as outras moléculas testadas tais como pPdkl, pAkt, pGsk3a, pGsk3b e p4ebp1 foram não obviamente alteradas pelos Compostos CDE (vide FIG. 7A). Os resultados acima obtidos de células AML-12 culturadas em condição livre de soro pelos Compostos CDE estão de acordo com as constatações de células AML-12 culturadas em meios contendo soro (FIG. 6). O aumento de fosforilação de Foxo3 e Foxo4 pelos Compostos CDE em células AML-12 é totalmente independente de FBS, fatores de crescimento ou insulina, uma vez que insulina ou FBS não foi adicionada ao meio de cultura das células neste experimento. Em outras palavras, Compostos CDE podem ignorar insulina ou fatores de crescimento para inativar Foxo3 e Foxo4 em células do fígado.

[00415] Em suma, estes resultados demonstram que Compostos CDE podem especificamente se direcionar à fosforilação de Foxo3 e Foxo4 em células AML-12 culturadas em ambos os meios contendo soro (FIG. 6) e livre de soro (FIG. 7). Desta maneira, pode ser concluído a partir deste estudo que os Compostos CDE são novos inativado-res de FOXO e a inativação destas moléculas de FOXO pelos Compostos CDE é independente de insulina, FBS e outros fatores de crescimento em células de fígado de camundongo.

[00416] Para testar se o aumento observado de fosforilação de FO-X04 nas células do fígado AML-12 é um efeito geral da combinação de Compostos CDE em células de mamífero, a requerente examinou níveis de pF0X04 em uma linhagem de célula neuronal IMR-32 de não fígado onde testes foram realizados ao mesmo tempo e sob as mesmas condições experimentais que as células de fígado AML-12. Como mostrado na FIG. 8, fosforilação de F0X04 aumentada não foi observada em células neuronais IMR-32 tratadas com Compostos CDE. Os níveis de proteína de F0X01 e F0X03 fosforiladas foram também examinados e constatados que F0X03 fosforilada foram dificilmente detectadas e F0X01 fosforiladas não foram detectadas em células IMR-32 por seus anticorpos específicos (dados não mostrados). Independentemente, a ausência de fosforilação aumentada de F0X04 em células IMR-32 pelos Compostos CDE (FIG. 8) indica que os Compostos CDE em combinação provavelmente não têm efeitos tóxicos sobre células neuronais. Desta maneira, a requerente pode concluir que fosforilação de FOXO aumentada pelos compostos CDE é provavelmente específica de célula do fígado.

[00417] Juntos, estes resultados sugerem que os Compostos CDE, mas não os compostos individuais ou seus análogos de enxofre, funcionarão como inativadores de FOXO específicos de célula do fígado novos e que a inativação destas moléculas de FOXO em células do fígado de camundongo pelos compostos CDE é independente de insulina e quaisquer outros fatores de crescimento.

[00418] Dados anteriores descritos aqui demonstraram que Compostos CDE podem imitar ação de insulina para inibir expressão de G6pc e aumentar a ação de insulina para inibir mais a expressão de G6pc em células AML-12 (FIGURAS 3-4). A última (FIG. 4), como discutido antes, podería ser também atribuída à expressão de Insr e Igflr aumentada (FIG. 5). Todos estes eventos são provavelmente devido à inativação independente de insulina/fator de crescimento/FBS de Fo-xo3 e Foxo4 por Compostos CDE (FIGURAS 6-7), uma vez que G6pc é um gene-alvo de FOXO bem conhecido em fígado humano enquanto Insr e Igflr são dois genes-alvo de Foxo3/4 potenciais devido à presença de muitos motivos de ligação de Foxo em seus promotores de gene (dados não mostrados). Expressão de Insr e Igflr aumentada pelos Compostos CDE (FIG. 5) aumentará mais a ação de insulina ou aumentará a sensibilidade à insulina para estimular mais fosforilação de Foxo3/4 para inibir expressão de G6pc.

[00419] Independentemente, estes resultados sugerem que a combinação de Compostos CDE pode especificamente agir como um inati-vador de FOXO independente de insulina ou independente de fator de crescimento potente em células do fígado AML-12 para reduzir expressão de G6pc e provavelmente diminuir a produção de glicose he-pática. Ainda, administração de Compostos CDE provavelmente diminuirá as consequências fisiológicas de uma célula do fígado se tornar resistente à insulina, no contexto de controle de expressão de G6pc para diminuir a produção de glicose hepática. Ignorar insulina para aumentar a fosforilação de Foxo por Compostos CDE, enquanto ainda sendo capaz de controlar homeostase de glicose através da regula-gem de expressão de G6pc mediada por FOXO, abre muitas possibilidades terapêuticas para o tratamento de diabetes em geral. Como uma consequência, tratamento do diabetes se torna menos dependente da administração unilateral de insulina exógena ou funcionamento correto de receptores de insulina.

Exemplo 6 Os Compostos CDE em combinação aumentam acão de insulina na inibição de expressão de G6dc e produção de glicose e ignoram insulina para regular sinalização de Pdk1/Akt/Foxo 1/3/4 em hepatócitos de camundonqo primários sem serem tóxicos para células [00420] Uma combinação de três compostos orgânicos de selênio, Compostos CDE, foi testada em combinação em cultura de célula de hepatócitos de camundongo primários quantoa efeitos sobre produção de glicose, expressão de G6pc e fosforilação de Foxo1/3/4.

Materiais e Métodos Isolamento de hepatócito de camundonqo primário e compostos [00421] Hepatócitos de camundongo primários foram comprados do Triangle Research Labs, LLC (Research Triangle Park, Carolina do Norte). Estes hepatócitos de camundongo primários foram isolados de camundongos C57BL6 normais saudáveis adultos, culturados em placas de 12 cavidades ou 24 cavidades revestidas com colágeno por 24 horas no Triangle Research Labs (TRL) e então enviados para o laboratório da requerente para os experimentos.

[00422] O Composto C (5'-Metilselenoadenosina), D (Se-Adenosil-L-homocisteína) e E (Gama-glutamil-metilseleno-cisteína) foram sintetizados no Chemistry Laboratory of Alltech, Inc. As purezas de todos os compostos testados foram verificadas ser >99%, conforme determinado através de Espectrometria de Massa.

Cultura de célula e tratamentos [00423] Hepatócitos de camundongo primários, cultivados em placas de cultura revestidas com colágeno de 12 ou 24 cavidades, foram recebidos do Triangle Research Lab (TRL) no dia 3 após o isolamento fresco de hepatócitos de camundongos e culturados em meio de manutenção de hepatócito (TRL) em uma incubadora de C02 5% a 37° C para permitir que os hepatócitos aclimatassem por 8 horas ou de um dia para o outro, de acordo com o procedimento recomendado pelo TRL (Research Triangle Park, NC).

[00424] Os hepatócitos aclimatados de um dia para o outro foram lavados duas vezes com PBS (para remover qualquer FBS residual e outros aditivos no meio de manutenção de hepatócito de TRL), pretra-tados com controle (água) ou Compostos CDE de selênio (150 ou 300 ppb de cada composto de selênio) em meios DMEM/F12 suplementado com soro bovino fetal 10% (FBS) por 24 horas. Estas células foram então lavadas duas vezes com PBS e incubadas com a mesma dose de Compostos CDE de selênio (150 ou 300 ppb) na presença ou ausência de insulina (10 ou 100 nM, Sigma), 8-CPT 0,1 mM (Sigma) ou Dex 0,5 pm (Sigma) em meios DMEM livres de soro e livres de glicose (Invitrogen) suplementados com lactose 20 mM (Sigma) e piruvato 2 mM (Sigma) e HEPES 15 mM (Sigma) por mis 6 horas. Após tratamentos, meios de célula foram coletados e submetidos a ensaio de glicose e estudos toxicológicos de lactato desidrogenase (LDH) e as células foram coletadas para análise de RNA e proteína.

[00425] Para os estudos de Compostos CDE de hepatócitos de ca-mundongo primários sob condições de cultura totalmente livres de soro, os hepatócitos foram aclimatados em meio de manutenção de hepatócito (TRL) por 8 horas, lavados duas vezes com PBS (para remover qualquer FBS residual e outros aditivos na placa de cultura) e então deixados em inanição em meios DMEM/F12 livres de soro de um dia para o outro. Alguns destes hepatócitos em inanição em soro foram tratados com controle (água), compostos de selênio (150 ou 300 ppb de cada composto) na presença ou ausência de insulina (10 ou 100 nM), 8-CPT 0,1 mM (Sigma) ou Dex 0,5 μΜ (Sigma) em meios DMEM livres de soro e livres de glicose/vermelho fenol suplementados com lactose 20 mM e piruvato 2 mM e HEPES 15 mM por 6 horas.

Após tratamento de 6 horas, meios de cultura foram coletados para análise de glicose e estudos toxicológicos monitorando atividade de LDH e células culturadas foram isolados para análise de proteína. Ainda, alguns hepatócitos em inanição em soro foram tratados com Compostos CDE (300 ppb de cada composto) em meios DMEM/F12 planos por 0, 5, 30, 60, 120 e 180 min e as células foram coletadas para a análise de proteína de tempo de várias moléculas de sinalização. Isolamento de RNA e Análise de PCR em Tempo real [00426] RNA total destas células foi isolado usando Trizol (Invitro-gen) de acordo com o protocolo do fabricante e então incubado com DNase I para remover qualquer DNA genômico contaminado potencial. Então amostras de RNA foram submetidas à análise de PCR em tempo real usando o estojo RT da Applied-Bioscience e sondas Taqman pré-projetadas (Invitrogen), como anteriormente descrito (Lan e outros, EMBO J, 2003). Três a quatro amostras foram analisadas em cada grupo de tratamento. Os dados foram normalizados através de nível de mRNA Actb em cada amostra e são apresentados como média ± SEM de 3-4 amostras.

Preparação de proteína e análise Western blot [00427] Após os tratamentos descritos acima, hepatócitos de ca-mundongos primários foram enxaguados com PBS gelado e o tampão RIPA gelado contendo inibidores de proteinase e fosfatase completos (Thermo-Fisher Scientific, Waltham, MA) em gelo por 30 min. Lisatos de célula foram coletados usando um raspador de célula e pipeta de transferência e então centrifugados a 12000 x g por 30 min a 4o C para remover o pelete de DNA e obter o extrato de proteína. Os níveis de proteína no sobrenadante destes lisatos de célula foram determinados usando o estojo de ensaio de proteína Pierce Micro-BCA (Thermo Scientific-Piece Biotechnology, Rockford, IL) de acordo com o protocolo dos fabricantes.

[00428] Para análise Western blot, cinco microgramas de proteínas totais de células tratadas com controle e composto(s) foram submetidos à separação em gel SDS-PAGE e então transferidos para membranas de PVDF, como anteriormente descrito (Reddy e outros, 2008 Science). As membranas foram bloqueadas em uma solução tampo-nada com fosfato (PBS) contendo 5% (p/v) de albumina de soro bovino (Sigma, St. Louis, MO) e incubadas com anticorpos primários específicos seguido pela incubação com anticorpos secundários anti-camundongo ou anti-coelho conjugados a HRP (diluição 1:5000, Cell Signaling Inc.). Todos os anticorpos primários exceto Actb (Li-COR, Lincoln, Nebraska) foram comprados da Cell Signaling Inc. Sinais positivos nas manchas de membrana foram detectados usando os reagen-tes Western Blotting Prime Detection de quimioluminescência aumentada da Amersham (GE Healthcare Lifescience, Pittsburg, PA). Imagens destes sinais de luminescência nas manchas de membrana foram capturadas usando o sistema LI-COR Odyssey Fc Image (Lincoln, Nebraska). A mesma mancha da membrana foi descarnada e novamente manchada com um outro anticorpo como descrito no protocolo de detecção GE WB ECL-prime (GE Healthcare Lifescience, Pittsburg, PA). Densidades de faixa de proteína nos Western blots foram determinadas usando o software NIH ImageJ e então normalizadas por nível Actb em cada amostra. Os dados são apresentados como média ± SEM de três amostras por cada grupo.

Análise de produção de glicose [00429] Meios de cultura de célula dos tratamentos descritos acima foram coletados e centrifugados a 300 x g por 5 minutos para remover quaisquer hepatócitos desalojados potenciais e submetidos à análise de glicose usando um estojo de ensaio de glicose colormétrico (Ab-cam) de acordo com o protocolo do fabricante. A absorbância em OD570 nm nas amostras e várias concentrações de padrões de glico- se foi determinada pela leitora de microplaca Bio-Tek, e concentração de glicose no meio de cada amostra foi obtida da curva padrão de glicose, e então normalizada pelo seu nível de proteína em células ligadas que foram determinadas usando o estojo de ensaio de proteína Pierce Micro-BCA (Thermo Scientific-Piece Biotechnology, Rockford, IL) de acordo com o protocolo do fabricante. Os níveis de glicose em cada grupo de tratamento foram divididos pelo nível médio em grupo controle (sem os tratamentos de Compostos CDE, insulina, 8-CPT e Dex) para obter o nível de glicose relativo. Os dados são apresentados como Média ± SEM de 3-4 amostras.

Estudos toxicolóqicos através do exame do nível de LDH em meios de cultura [00430] Similar ao ensaio de glicose acima, meios de cultura de célula dos tratamentos descritos acima foram coletados e centrifugados a 300 x g por 5 minutos para remover quaisquer hepatócitos desalojados potenciais e submetidos à análise LDH usando um estojo de ensaio de glicose colormétrico (Abcam) de acordo com o protocolo do fabricante. Em suma, a absorbância em OD450 nm em padrões de LDH e nas amostras de meio de cultura após incubação com substratos de LDH a cada dois minutos até 40 minutos foi determinada pela leitora de microplaca Bio-Tek. Concentrações de LDH no meio de cada amostra foram obtidas subtraindo a leitura de OD450 dentro da faixa linear de absorbância seguido pelo uso da curva padrão de LDH, de acordo com o protocolo do fabricante. O nível de LDH obtido no meio de cada amostra foi então normalizado pelo seu nível de proteína em células ligadas. Os níveis de LDH em cada grupo de tratamento foram normalizados adicionalmente pelo valor médio de grupo controle (sem os tratamentos de Compostos CDE, insulina, 8-CPT e Dex) para obter o nível de LDH relativo em cada grupo. Os dados são apresentados como Média ± de 3-4 amostras.

Análise estatística [00431] Se aplicável, um teste t de Student foi realizado para determinar a diferença estatística entre dois grupos. Valor P de menos do que 0,05 foi considerado significante.

Resultados e Discussão Compostos CDE em combinação inibem produção de glicose e expressão de G6dc em hepatócitos de camundonqo primários [00432] Estudos anteriores descritos aqui em células AML-12 demonstram que Compostos CDE podem imitar insulina para inibir expressão de G6pc (FIGURAS 3-4), mas não têm quaisquer efeitos tóxicos sobre viabilidade de célula AML-12 (FIG. 1). No entanto, se Compostos CDE podem controlar produção de glicose em células AML-12 não foi estabelecido, uma vez que os níveis de glicose em meios de cultura produzidos por células AML-12 foram muito baixos para serem detectados por um estojo de ensaio de glicose por fluorescência sensível (Abcam, dados não mostrados). Desta maneira, hepatócitos de camundongo primários foram usados para investigar se Compostos CDE podem imitar insulina para inibir produção de glicose e confirmar mais os efeitos inibidores de Compostos CDE sobre expressão de G6pc, mas quaisquer efeitos tóxicos sobre sobrevivência de célula observada em células AML-12.

[00433] Similar aos estudos em células AML-12, hepatócitos de camundongo primários foram pretratados com um controle (água) ou 150 ppb e 300 ppb de Compostos CDE de selênio em meios DMEM/F12 contendo soro por 24 horas. Este tratamento foi seguido por novos tratamentos com estes compostos de selênio na presença ou ausência de insulina (10 e 100 nM) ou insulina sozinha por 6 horas. Ainda, cAMP permeável à célula, 8-CPT e Dex foram também adicionados a alguns hepatócitos pretratados com controle por 6 horas para validar se os hepatócitos de camundongo primários estavam funcio- nando em reposta a estes estímulos bem conhecidos de produção de glicose em células do fígado. Após os tratamentos descritos acima, meios de cultura de célula foram coletados para ensaio de glicose e análise toxicológica (através de medição de níveis de LDH). As células ligadas foram submetidas à análise de proteína para determinar níveis de proteína em cada cavidade refletindo as células totais na amostra. Então níveis de glicose obtidos em meio de cultura foram normalizados por níveis de proteína em cada amostra. Os dados foram apresentados como média ± SEM de 4 amostras. Nas FIGURASFIGURAS 9, o * P < 0,05 vs grupo de tratamento com veículo (a primeira barra nos gráficos). Na FIG. 9C, nenhum aumento significante em todos os grupos de tratamento vs grupo de tratamento controle (a primeira barra no gráfico).

[00434] Como mostrado na FIG. 9A, tratamentos com 8-CPT/Dex causou um aumento significante de produção de glicose em hepatóci-tos primários, indicando que estes hepatócitos primários eram biologicamente funcionais mesmo após terem sido processados, enviados e culturados por 5 dias desde seu isolamento inicial de fígados de ca-mundongo. Para apoiar mais esta constatação, tratamento com insulina sozinha em doses de 10 nM e 100 nM causou uma diminuição significante de produção de glicose (diminuição de cerca de 25-30% quando comparado com o grupo tratado com água; vide FIG. 9A).

[00435] Mais importante, tratamentos com Compostos CDE em ambas as doses (150 ppb e 300 ppb) reduziram significantemente a produção de glicose em uma diminuição de cerca de 20-28% quando comparado com o grupo controle tratado com água (vide FIG. 9A). Co-tratamentos com Composto CDE com insulina também inibiu significantemente produção de glicose em cerca de 32-38% de diminuição em tratamentos testados quando comparado com grupo controle (vide FIG. 9A).

[00436] Deve ser enfatizado aqui que a extensão da diminuição de produção de glicose por Compostos CDE em ambas as doses de teste era comparável à insulina (10 ou 100 nM), sugerindo que os Compostos CDE nas doses testadas são tão eficazes quanto a insulina na concentração de 100 nM para inibir produção de glicose. Os dados da requerente também indicam que a diminuição máxima que pode ser atingida de produção de glicose por insulina, Compostos CDE ou ambos é cerca de 20-38% nestes hepatócitos. Independentemente, os dados da requerente demonstram que os Compostos CDE podem imitar insulina para inibir produção de glicose em hepatócitos de camun-dongo primários.

[00437] G6pc é essencial para produção de glicose no fígado. Desta maneira, a requerente examinou a expressão de G6pc na mesma batelada de hepatócitos após os mesmos tratamentos. Em suma, um conjunto duplicado de hepatócitos primários foi pretratado com controle (água) ou Compostos CDE de selênio nas doses de 150 e 300 ppb em meios DMEM/F12 contendo soro, seguido por novos tratamentos com estes compostos de selênio na presença ou ausência de insulina (10 e 100 nm) por 6 horas. Após estes tratamentos, os hepatócitos foram coletados e submetidos a isolamento de RNA seguido por análise QRT-PCR de G6pc e Actb.

[00438] Como mostrado na Fig. 9B, insulina sozinha ou na presença de ambas as doses de Compostos CDE inibiu significantemente expressão de G6pc. Os Compostos CDE em 150 ppb também causaram uma diminuição de expressão de G6pc (cerca de 31% de diminuição, Fig. 9B), embora não tenha sido estatisticamente significante provavelmente devido ao número limitado de amostras. No entanto, uma diminuição significante (diminuição de 42%) de níveis de mRNA de G6pc foi observada em hepatócitos após tratamento com Compostos CDE sozinhos a 300 ppb (Fig. 9B). Estes resultados demonstram que Compostos CDE também podem imitar insulina, embora ligeiramente menos eficientemente do que insulina na dose de 100 nM, para inibir expressão de G6pc em hepatócitos de camundongo primários. Estas constatações estão de acordo com a inibição de expressão de G6pc em células AML-12 (FIG. 3) e produção de glicose atenuada por Compostos CDE em hepatócitos de camundongo primários descritos acima (FIG. 9A).

[00439] Lactato Desidrogenase (LDH) é amplamente usada em desenvolvimento de fármaco para estudo de toxidez de composto em células do fígado. Um aumento de nível de LDH em meios de cultura (após normalizado por níveis de proteína em células culturadas) por tratamentos com composto sugere que o composto será tóxico para células do fígado devido à ruptura de célula ou vazamento de membrana de célula para liberar LDH citosólico em meio de cultura. Para investigar se Compostos CDE são tóxicos para hepatócitos de camundongo primários e se a diminuição observada de produção de glicose e expressão de G6pc por Compostos CDE (FIGURAS 9A e 9B) foi devido à toxidez, níveis de LDH nos meios de hepatócitos de camundongo primários após tratamento com Compostos CDE como descrito no ensaio de glicose acima foram examinados.

[00440] Em suma, hepatócitos de camundongo primários foram pre-tratados com controle (água) ou Compostos CDE de selênio nas doses de 150 e 300 ppb em meios DMEM/F12 contendo soro, seguido por novo tratamento com estes compostos de selênio na presença ou ausência de insulina (10 e 100 nm) por 6 horas. Meios de cultura de célula foram então coletados para análise toxicológica de LDH e células ligadas foram submetidas à análise de proteína para determinar níveis de proteína em cada um. O nível de LDH obtido no meio de cultura foi normalizado pelo seu nível de proteína em cada amostra.

[00441] Como mostrado na FIG. 9C, tratamento com Compostos CDE, insulina ou ambos não causou um aumento significante de níveis de LDH nos meios. Ao invés, níveis de LDH parecem ser ligeiramente diminuídos em hepatócitos após tratamento com Compostos CDE na dose de 300 ppb ou na presença ou ausência de insulina, indicando que Compostos CDE em uma dose maior podem mesmo até impactar um efeito protetor contra ruptura de célula.

[00442] Desta maneira, estes resultados demonstram que Compostos CDE são não tóxicos para hepatócitos de camundongo primários, o que está de acordo com os efeitos não tóxicos de Compostos CDE sobre a viabilidade de células AML-12 (FIG. 1). Ainda, estes resultados também excluem a possibilidade que a diminuição observada acima de produção de glicose e expressão de G6pc (FIGURAS 9A e 9B) seja causada por hepatócitos menos saudáveis em hepatócitos de camundongo primários após tratamento com Compostos CDE.

[00443] Juntos, os estudos acima demonstram que compostos CDE podem imitar insulina para inibir expressão de G6pc e, mais importante, produção de glicose em hepatócitos de camundongo primários sem serem tóxicos para as células. Estes resultados estão de acordo com inibição independente de insulina de expressão de G6pc e nenhuma toxidez para sobrevivência de célula observada em células AML-12 de fígado de camundongo estáveis (FIG. 1 e FIG. 3).

Inibição de produção de glicose e expressão de G6pc e aumento de ação de insulina nestes processos em hepatócitos de camundongo primários sob condições diabéticas simuladas (simuladas por ambos 8-CPT e Dex) por Compostos CDE

[00444] Os estudos descritos aqui demonstram que Compostos CDE em combinação podem imitar insulina para inibir expressão de G6pc e aumentar a ação de insulina em células AML-12 sob a estimulação de 8-CPT/Dex (FIG. 4). Para investigar mais os efeitos de Compostos CDE, produção de glicose e expressão de mRNA de G6pc fo- ram examinadas em hepatócitos de camundongo primários contratados com cAMP e Dex, dois estímulos bem conhecidos de produção de glicose e expressão de G6pc no fígado.

[00445] Em suma, hepatócitos de camundongo primários foram pre-tratados com controle (água) ou 150 ou 300 ppb de Compostos CDE em combinação em meios DMEM/F12 FBS 10% por 24 horas seguido por novo tratamento destes compostos de selênio na presença ou ausência de 10 ou 100 nM de insulina, 0,1 mM de 8-CPT e 0,5 μΜ de Dex em meios livres de soro por 6 horas. Após estes tratamentos, meios de cultura foram coletados para ensaios de glicose e LDH conforme anteriormente descrito. Também um conjunto duplicado de hepatócitos de camundongo primários (da mesma batelada de hepatócitos) após os mesmos tratamentos conforme acima descrito foi submetido à análise QRT-PCR de expressão de G6pc. Os dados são apresentados como média ± SEM de 3-4 amostras. Nas FIGURAS 10A-10B, letras diferentes (a vs b, a' vs b' vs c', a" vs b" vs c") querem dizer uma diferença significante entre estes dois grupos. Na FIG. 10C, o * P < 0,05 vs grupo tratamento com veículo (a primeira barra no gráfico).

[00446] Como mostrado na FIG. 10A, tratamento com 8-CPT/Dex causou um aumento significante em produção de glicose quando comparado com grupo de tratamento de controle apenas. Estes dados indicam que os hepatócitos de camundongo primários culturados são funcionais. Tratamentos com ambas as doses de insulina diminuíram significantemente produção de glicose induzida por 8-CPT/Dex nos hepatócitos quando comparado com grupo de 8-CPT/Dex (vide FIG. 10A). Importante, tratamento com Compostos CDE na dose de 150 ppb tendeu a inibir produção de glicose estimulada por 8-CPT/Dex em hepatócitos. Mais drasticamente, Compostos CDE na dose de 300 ppb inibiram significantemente produção de glicose estimulada por 8-CPT/Dex em hepatócitos e o grau de extensão de produção de glicose foi quase idêntico aos efeitos de 100 nM de insulina. Estes resultados sugerem que os Compostos CDE em 300 ppb são tão eficazes quanto insulina na concentração de 100 nM para inibir produção de glicose em hepatócitos primários mesmo sob condições similares às condições diabéticas. Estes resultados estão de acordo com as constatações observadas nos hepatócitos de camundongo primários cotrata-dos sem 8-CPT/Dex (FIG. 9A), sugerindo ainda que Compostos CDE em combinação imitarão insulina, mas de uma maneira independente de insulina, para inibir produção de glicose.

[00447] Ainda, Compostos CDE em ambas as doses testadas em combinação com 10 nM ou 100 nM de insulina não apenas inibiram significantemente produção de glicose induzida por 8-CPT/Dex em hepatócitos de camundongo primários quando comparado com grupo de tratamento com 8-CPT/Dex, mas também exibiram mais eficácia no processo do que Compostos CDE ou insulina sozinhos nas doses testadas (FIG. 10A). Por exemplo, o grau de produção de glicose induzida por 8-CPT/Dex diminuído em hepatócitos após tratamento com a combinação de 150 ppb de Compostos CDE e 10 nM de insulina foi mais acentuado do que 150 ppb de Compostos CDE ou 10 nM de insulina sozinha. Mais evidentemente, produção de glicose foi diminuída mais nos hepatócitos após o tratamento de 300 ppb de Compostos CDE e 100 nM de insulina (uma diminuição para abaixo dos níveis de grupo de célula tratado com controle), embora Compostos CDE em 300 ppb ou 100 nM de insulina sozinha tenham sido muito eficazes na inibição de produção de glicose induzida por 8-CPT/Dex (FIG. 10A). As combinações de 10 nM de insulina e Compostos CDE a 150 ppb ou 300 ppb e a combinação de 100 nM de insulina e Compostos CDE a 150 ppb quase que completamente inibiu produção de glicose induzida por 8-CPT/Dex (uma diminuição quase para os níveis de células controle sem tratamento com 8-CPT/Dex). Estes resultados demonstram que Compostos CDE podem ou substituir ou aumentar ação de insulina para inibir produção de glicose induzida por 8-CPT/Dex em hepatóci-tos de camundongo primários.

[00448] Como descrito antes, foi constatado que Compostos CDE em combinação podem imitar insulina para inibir expressão de G6pc induzida por 8-CPT/Dex e aumentar ação de insulina no processo em células AML-12 (vide FIG. 4). A inibição de expressão de G6pc podería levar a uma inibição de produção de glicose em hepatócitos de camundongo primários. Desta maneira, hepatócitos de camundongo foram pretratados com água (controle) ou 150 ou 300 ppb de Compostos CDE em combinação em meios DMEM/F12 FBS 10% por 24 horas seguido por novo tratamento destes compostos de selênio na presença ou ausência de 10 ou 100 nM de insulina, 8-CPT 0,1 mM e Dex 0,5 μΜ em meios livres de soro por 6 horas. Após estes tratamentos, as células foram coletadas e submetidas à análise QRT-PCR de expressão de G6pc.

[00449] Como mostrado na FIG. 10B, 8-CPT-Dex causou um grande aumento (aumento de cerca de 130 vezes) na expressão de mRNA de G6pc. Estes dados confirmam mais que os hepatócitos estavam funcionando corretamente. Tratamento com ambas as doses de insulina diminuiu significantemente expressão de G6pc induzida por 8-CPT/Dex em hepatócitos de camundongo primários quando comparado com grupo de 8-CPT/Dex (quando comparado com grupo de 8-CPT/Dex no gráfico em barras na FIG. 10B). Similar aos estudos de glicose acima, tratamento com Compostos CDE na dose de 150 ppb mostrou uma tendência, embora não significante, em inibir G6pc estimulada por 8-CPT/Dex em hepatócitos (vide FIG. 10B). No entanto, Compostos CDE na dose de 300 ppb inibiram significantemente expressão de mRNA de G6pc induzida por 8-CPT/Dex, mas isto não foi tão potente quanto as doses testadas de insulina (vide FIG. 10B). Es- tes resultados demonstram claramente que Compostos CDE podem inibir expressão de G6pc induzida por 8-CPT/Dex de uma maneira independente de insulina, similar aos resultados obtidos em células AML-12 (FIG. 4).

[00450] Tratamento com Compostos CDE em 300 ppb em combinação com 10 nM ou 100 nM de insulina inibiu significantemente mais expressão de G6pc estimulada por 8-CPT/Dex em hepatócitos quando comparado com tratamentos com 10 ou 100 nM de insulina ou 300 ppb de Compostos CDE. Estes resultados são indicados nas FIGURAS 10B por a' vs b' ou a" vs b" no gráfico de barras. Estes resultados indicam que a combinação de insulina e Compostos CDE em 300 ppb foi ainda mais eficaz na inibição de expressão aumentada de G6pc por 8-CPT/Dex.

[00451] Os estudos acima demonstram que Compostos CDE, especialmente na dose de 300 ppb, podem imitar insulina, embora menos eficazmente do que insulina, para inibir expressão de G6pc induzida por 8-CPT/Dex e aumentam a ação de insulina no processo nos hepatócitos de camundongo primários. Estes resultados são parcialmente consistentes com as constatações observadas em células AML-12 (FIG. 4). Uma vez que G6pc é requerido para produção de glicose, a inibição observada acima de produção de glicose estimulada por 8-CPT/Dex por Compostos CDE (FIG. 10A) é pelo menos em parte devido à sub-regulagem de expressão de G6pc em hepatócitos de camundongo primários (FIG. 10B).

[00452] Os níveis de LDH nos meios culturados dos hepatócitos tratados acima foram examinados para investigar mais de Compostos CDE são tóxicos para hepatócitos primários culturados na presença de 8-CPT/Dex e se a diminuição observada acima de produção de glicose e expressão de G6pc pelos Compostos CDE (FIG. 10A-B) é devido à toxidez potencial (como indicado por níveis de LDH elevados no meio) de Compostos CDE nos hepatócitos.

[00453] Como mostrado na FIG. 10C, tratamentos com 8-CPT/Dex ou na ausência ou presença de insulina aumentaram ligeiramente níveis de LDH quando comparado com controle de veículo. No entanto, não houve nenhum aumento significante de níveis de LDH em hepatócitos após tratamento com 8-CPT/Dex junto com Compostos CDE em ambas as doses testadas na ausência ou presença de insulina (vide FIG. 10C). Também, os níveis de LDH ligeiramente aumentados em hepatócitos após tratamento com 8-CPT/Dex e insulina não foram observados por cotratamento com Compostos CDE em ambas as doses testadas (vide FIG. 10C).

[00454] Estes resultados indicam ainda que Compostos CDE são não tóxicos para hepatócitos primários culturados na presença de 8-CPT/Dex. Também, estes resultados excluem a possibilidade que a diminuição observada acima de produção de glicose estimulada por 8-CPT/Dex e expressão de G6pc (vide FIGURAS 10A e 10B) seja causada por hepatócitos menos saudáveis em hepatócitos de camundon-go primários após tratamento com Compostos CDE.

[00455] Em suma, os estudos acima demonstram que Compostos CDE podem imitar insulina para inibir produção de glicose e expressão de G6pc e aumentar a ação da insulina nestes processos sem nenhuma toxidez em hepatócitos de camundongo primários mesmo sob condições similares a condições diabéticas (estimuladas por 8-CPT/Dex).

[00456] A inibição de produção de glicose por Compostos CDE (descritos acima) foi caracterizada em hepatócitos de camundongo primários pretratados com os compostos da presente invenção em meios contendo soro. Para confirmar mais que os Compostos CDE podem imitar insulina para inibir produção de glicose de uma maneira independente de insulina e independente de fator de crescimento, condições de cultura totalmente livres de soro foram adotadas para remover qualquer traço potencial de insulina ou outros fatores de crescimento em FBS. Os efeitos de compostos CDE sobre produção de glicose bem como seu efeito tóxico potencial (isto é, nível de LDH em meios de cultura) em hepatócitos de camundongo primários culturados sob condições livres de soro foram examinados.

[00457] Em suma, hepatócitos de camundongo primários foram mantidos sob inanição de soro de um dia para o outro. As células foram então tratadas com controle (água) ou 150 ppb ou 300 ppb de Compostos CDE na presença ou ausência de insulina, 8-CPT e Dex em meios totalmente livres de soro por um período de tempo curto (isto é, 6 horas). Então meios foram coletados e submetidos à análise de glicose e LDH e células culturadas para análise de proteína para normalização de produção de glicose e nível de LDH. Os dados são apresentados como média ± SEM de 3 amostras. Na FIG. 11 A, o grupo * P < 0,05 vs grupo controle basal (a primeira barra no gráfico) e o * P < 0,05 vs o grupo de tratamento com 8-CPT/Dex (a primeira barra cheia no gráfico).

[00458] Os efeitos de Compostos CDE sobre produção de glicose em hepatócitos de camundongo sem cotratamento com 8-CPT/Dex foram investigados (vide FIG. 11). Como mostrado na FIG. 11 A, tratamentos de ambas as doses de insulina sozinha inibiu significantemen-te a produção de glicose em uma diminuição de cerca de 40-47% em hepatócitos de camundongo primários. Estes resultados indicam que esta batelada de hepatócitos de camundongo primários era biologicamente funcional.

[00459] Mais importante, tratamentos com Compostos CDE a 150 ppb causaram uma diminuição significante de produção de glicose em hepatócitos de camundongo primários tão eficazmente quanto 100 nM de insulina, enquanto os Compostos CDE a 300 ppb foram ainda mais eficazes do que 100 nM de insulina na inibição de produção de glicose (vide FIG. 11 A). Cotratamentos com ambos os Compostos CDE e insulina também inibiram significantemente produção de glicose, embora não houvesse nenhuma ação aditiva ou sinergística entre insulina e Compostos CDE nestes hepatócitos primários. Estes resultados foram consistentes com os resultados obtidos de hepatócitos pretratados com Compostos CDE em meios contendo FBS (vide FIG. 9A). Juntos, estes resultados claramente demonstram que Compostos CDE podem imitar insulina, tão eficazmente quanto ou ainda mais eficazmente do que a insulina na concentração de 100 nM, para inibir produção de glicose de uma maneira independente de insulina e de fator de crescimento. Pode ser concluído também que Compostos CDE são eficazes na inibição de produção de glicose em hepatócitos de camundongo primários após um tempo de tratamento relativamente curto (isto é, 6 horas), similar à insulina.

[00460] Compostos CDE foram também testados para ver se produção de glicose estimulada por 8-CPT/Dex foi inibida em hepatócitos de camundongo sob condições de cultura livres de soro. Como mostrado na FIG. 11 A, tratamento com 8-CPT/Dex realmente causou um aumento significante em produção de glicose quando comparado com um grupo controle basal (tratado com veículo), indicando ainda que esta batelada de hepatócitos de camundongo primários estava funcionando biologicamente. Tratamento com 10 nM de insulina inibiu significantemente produção de glicose, embora tenha havido uma tendência em produção de glicose diminuída em hepatócitos após tratados com 100 nM de insulina. O último resultado podería ser devido a um número pequeno de amostras testadas (n=3) onde produção de glicose em uma amostra era bem maior quando comparado com as outras duas amostras no mesmo grupo (dados não mostrados).

[00461] Mais importante, tratamento com Compostos CDE a 150 ppb mostrou uma tendência em inibir produção de glicose estimulada por 8-CPT/Dex, enquanto Compostos CDE na concentração de 300 ppb foi tão eficaz quanto insulina a 10 nM em inibir significantemente produção de glicose estimulada por 8-CPT/Dex de uma maneira independente de insulina ou independente de outro fator de crescimento (FIG. 11 A). Deve ser notado que Compostos CDE na concentração de 300 ppb quase que completamente aboliram os efeitos estimuladores de 8-CPT/Dex, uma vez que o nível de glicose neste grupo de tratamento era comparável ao grupo controle basal sem estimulação com 8-CPT/Dex.

[00462] Similarmente, cotratamento com ambos os Compostos CDE e insulina também inibiu significantemente produção de glicose estimulada por 8-CPT/Dex (vide FIG. 11 A). Ainda, houve uma diminuição mais acentuada de produção de glicose estimulada por 8-CPT/Dex pela combinação de 150 ppb de Compostos CDE e 100 nM de insulina do que 150 ppb de Composto CDE ou 100 nM de insulina sozinhos. Estes resultados indicam que existe uma ação aditiva entre Compostos CDE e insulina no processo (FIG. 11 A).

[00463] Os efeitos de Compostos CDE para inibir produção de glicose estimulada por 8-CPT/Dex nos hepatócitos de camundongo primários de cultura livre de soro acima estão de acordo com as constatações observadas em hepatócitos pretratados com Compostos CDE em meios contendo soro (FIG. 10A). Uma vez que hepatócitos foram postos em inanição em soro e tratados com Compostos CDE em condição totalmente livre de soro, estes dados demonstram claramente que Compostos CDE podem imitar insulina, pelo menos tão eficaz quanto 10 nM de insulina, para inibir produção de glicose estimulada por 8-CPT/Dex de uma maneira independente de insulina e independente de fator de crescimento. Pode ser também concluído que os compostos descritos aqui agem rapidamente, após um tempo de tra- tamento relativamente muito curto, para inibir produção de glicose estimulada com 8-CPT/Dex nestes hepatócitos de camundongo primários de cultura livre de soro, similar à ação de insulina. Existe também uma ação aditiva ou sinergística entre Compostos CDE e insulina, pelo menos entre doses de 150 ppb de Compostos CDE e 100 nM de insulina, sobre a inibição de produção de glicose estimulada por 8-CPT/Dex nestes hepatócitos de camundongo primários em cultura livre de soro (vide FIG. 11A).

[00464] Finalmente, Compostos CDE foram testados para determinar qualquer toxidez para hepatócitos de camundongo primários que foram culturados em condição livre de soro. Níveis de LDH nos meios de cultura em hepatócitos de camundongo primários após os tratamentos acima foram examinados e então normalizados pelos seus níveis de proteína. Como mostrado na FIG. 11B, não houve nenhum aumento significante de níveis de LDH em hepatócitos após todos os tratamentos acima quando comparado com grupo controle basal contendo um grupo tratado com veículo água (isto é, a primeira barra na FIG. 11B). Estes resultados indicaram que não houve nenhum dano celular ou vazamento de membrana celular em hepatócitos após exposição a Compostos CDE. Ao contrário, uma diminuição significante de nível de LDH foi observada em hepatócitos após tratados com uma dose de 300 ppb alta de Compostos CDE (vide FIG. 11B). Desta maneira, os resultados sugerem que Compostos CDE são não tóxicos para hepatócitos primários e, ao contrário, em uma dose maior, podem ter algum efeito protetor contra vazamento de membrana de célula nestas células. Também, estes resultados excluem a possiblidade que a inibição observada acima de produção de glicose estimulada por 8-CPT/Dex (vide FIG. 11 A) seja causada por hepatócitos menos saudáveis em hepatócitos de camundongo primários após tratamento com Compostos CDE.

[00465] Concluindo, os estudos acima sobre hepatócitos de ca-mundongo primários de cultura livre de soro demonstram que Compostos CDE podem imitar insulina para inibir produção de glicose ambas basal e estimulada por 8-CPT/Dex de uma maneira independente de FBS, mais especificamente independente de insulina e fator de crescimento. Também, estes resultados sugerem ainda que Compostos CDE não têm toxidez sobre células do fígado.

Compostos CDE: ativação independente de insulina de sinalização de PI3K/Pdk1/Akt para aumentar a fosforilacão de Foxo1/3/4 em hepatócitos de camundonqo primários [00466] Os estudos iniciais da requerente sobre células AML-12 sugerem que Compostos CDE podem imitar insulina para aumentar fos-forilação de Foxo3 e Foxo4, resultando em inibição de expressão de G6pc para produção de glicose (FIGURAS 6-7). É bem documentado que a insulina age rápido em células do fígado para ativar sinalização de PI3K/PDK1/AKT para inativar fatores de transcrição Foxol, Foxo3, Foxo4 que diminuem muito rapidamente a produção de glicose.

[00467] Para investigar mais se Compostos CDE imitarão insulina, mas agem de uma maneira independente de insulina para ativar sinalização de Pdk1/Akt para subsequentemente aumentar a fosforilação de FOXO para a inibição de produção de glicose, o estado de fosforilação destas moléculas de sinalização, chave para gluconeogênese, foi investigado em hepatócitos de camundongo primários sob duas condições de cultura/tratamento diferentes.

Compostos CDE se direcionam à fosforilação de Foxol/3/4 em hepatócitos de camundonqo primários pretratados com Compostos CDE em meios contendo soro por 24 horas seguido por meios livres de soro por 6 horas [00468] Para determinar se a combinação de Compostos CDE pode imitar insulina para regular sinalização de PI3k/Pdk1/Akt/Foxo 1/3/4, hepatócitos de camundongo primários foram pretratados com controle (água) ou Compostos CDE de selênio nas doses de 150 e 300 ppb em meios DMEM/F12 contendo soro por 24 horas. Este tratamento foi seguido por novos tratamentos com estes compostos de selênio em meios livres de soro por 6 horas. Os hepatócitos pretratados com controle foram também incubados com 100 nM de insulina por 6 horas. Após estes tratamentos, meios de cultura foram coletados para análise de glicose e LDH conforme detalhado na FIG. 9. As células foram coletadas e submetidas à análise de proteína para determinar níveis de proteína totais para análise Western blot de várias moléculas de sinalização de PI3k/Pdk1/Akt/Foxo1/3/4. Níveis de expressão de proteína destas moléculas de sinalização foram normalizados por níveis de proteína Actb e são apresentados como média ± SEM de três amostras na FIG. 12B-F. Letras diferentes nos gráficos de barras na FIG. 12B-F querem dizer uma diferença significante entre estes dois grupos (P < 0,05).

[00469] Como mostrado na FIG. 12A, tratamento com insulina causou um aumento significante das formas fosforiladas de Pdk1, Akt no resíduo serina 473, Foxol na treonina 24 (pFoxo1T24), Foxo3 na treo-nina 32 (pFoxo3T32), mas não Gsk3b na serina 9 (pGsk3bS9) enquanto os níveis de Foxo4 fosforilada na treonina 28 (pFoxo4T28) nestas células após tratamento com insulina eram dificilmente detectáveis. Estes resultados sugerem que a insulina na verdade pode regular sinalização de PI3k/Pdk1/Akt para inativar Foxol e Foxo3 nestes hepatócitos sob as condições experimentais descritas acima. Mais importante, os níveis de proteína pPdkl, pAktS473, pFoxo1T24 e pFo-xo3T32, mas não pGsk3bS9, eram visivelmente elevados nestes hepatócitos após tratamentos com ambas as doses de Compostos CDE (FIG. 12A). Ainda, os níveis de pFoxo4T28 foram também robusta-mente aumentados em hepatócitos após tratamento com Compostos CDE em 300 ppb (FIG. 12A).

[00470] Análise quantitativa mostrou que houve um aumento de aproximadamente 1,5 vez de pPdkl, aumento de 2,2-3 vezes de pAktS473, aumento de 3-4 vezes de pFoxo1T24, um aumento de cerca de 3 vezes de pFoxo3T32, mas nenhum aumento de pGsk3bS9 em hepatócitos de camundongo primários tratados com Compostos CDE (FIGURAS 12B-F). A expressão aumentada de pFoxo3T32 e pFo-xo4T28 pelos Compostos CDE em hepatócitos de camundongo primários estava de acordo com a primeira observação da requerente em células AML-12 (FIGURAS 6-7), embora pPdkl e pAkt aumentadas tenham sido observadas em células AML-12 em 6 horas de tratamento com Compostos CDE (FIGURAS 6-7).

[00471] Os níveis de proteínas pPdkl e pAktS473 aumentados nestes hepatócitos causados por insulina e Compostos CDE em ambas as doses testadas indicaram que Compostos CDE, tal como insulina, podem ativar sinalização de Pdk1/Akt. Embora o grau de fosforilação aumentada de pAkt/Foxo1/3 por Compostos CDE não tenha sido tão forte quanto 100 nM de insulina, Compostos CDE em ambas as doses testadas foram tão eficazes quanto 100 nM de insulina para inibir produção de glicose em hepatócitos de camundongos primários sob as mesmas condições experimentais (FIG. 9A). Desta maneira parece que um aumento aproximado de 3-4 vezes de pFoxo1T24 e pFo-xo3T32 pelos Compostos CDE (FIGURASFIGURAS 12D-E) foi suficiente para inativar Foxo2 e Foxo3, levando à inibição de expressão de G6pc e produção de glicose nestes hepatócitos de camundongo primários. Os resultados da requerente demonstram claramente que Compostos CDE podem imitar insulina para ativar sinalização de PI3K/Pdk1/Akt para aumentar a fosforilação de Foxo1/3/4 nos hepatócitos de camundongo primários sob as condições de cultura e tratamento descritas acima.

Compostos CDE agem rapidamente para sequencialmente ativar sinalização de Pdk1/Akt para aumentar a fosforilacão de Foxo1/3 em hepa-tócitos primários sob condições livres de soro [00472] Para investigar mais de os Compostos CDE podem imitar insulina para ativar sinalização de PI3K para aumentar a fosforilação de Foxo1/3, estudos de expressão de período destas moléculas de sinalização em hepatócitos de camundongo primários sob condições livres de soro foram realizados. Em suma, hepatócitos de camundongo primários ficaram em inanição de soro de um dia para o outro e então incubados com Compostos CDE de selênio na dose de 300 ppb em meios DMEM/F12 livres de soro por 0 minuto, 5 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas e 3 horas. Após tratamentos, os hepatócitos foram coletados e submetidos à análise Western blot.

[00473] Como mostrado nas FIGURASFIGURAS 13A-B, níveis de Pdk1 fosforilada tendem a ser aumentados nestes hepatócitos de cultura livre de soro em 5 minutos após 0 tratamento com Compostos CDE. Após 30 minutos de tratamento com Compostos CDE, houve um aumento robusto e significante de níveis de pPdkl nestes hepatócitos (FIGURASFIGURAS 13A-B). Estes resultados sugerem que os Compostos CDE podem ativar rapidamente sinalização de PI3k/Pdk1 nestes hepatócitos. Subsequente à ativação de Pdk1, houve uma tendência a níveis de pAktT308 aumentados em hepatócitos em 30 minutos de tratamento com Compostos CDE e, mais importante, um aumento robusto e significante de pAktT308a após 1 hora de tratamento com Compostos CDE (FIGURASFIGURAS 13A, C). Estes resultados sugerem que os Compostos CDE podem subsequentemente ativar Akt.

[00474] Os níveis de ambas pFoxo1T24 e pFoxo3T32, os alvos a jusante de sinalização de PI3k/Pdk1/Akt ativada, não foram afetados em hepatócitos por Compostos CDE antes de 30 minutos de incubação (FIGURASFIGURAS 13A, D). Em 1 hora de tratamento com Com- postos CDE, houve uma tendência à fosforilação aumentada de Foxol e Foxo3 nos hepatócitos (FIG. 13D). Em 2 e 3 horas de tratamento, os Compostos CDE aumentaram significantemente a fosforilação de ambas Foxol e Foxo3 nestes hepatócitos de camundongo primários cul-turados sob as condições livres de soro (FIGURASFIGURAS 13A, D). Desta maneira, existe uma ativação sequencial de Pdk1 e Akt seguido por fosforilação aumentada de Foxol e Foxo3 por Compostos CDE nestes hepatócitos, e estes eventos ocorrem menos de duas horas após tratamento com Compostos CDE de uma maneira muito similar à ação de insulina. Considerando que não há nenhuma insulina ou fatores de crescimento no meio DMEM/F12 plano, e nenhum FBS foi adicionado aos meios de cultura nestes experimentos, o aumento de fosforilação de Pdk1, Akt, Foxol e Foxo3 pelos Compostos CDE nestes hepatócitos é independente de FBS, fatores de crescimento ou insulina. Em outras palavras, os Compostos CDE podem ignorar ação de insulina ou fatores de crescimento para rapidamente ativar sinalização de PI3k/Pdk1/Akt e subsequentemente inativar Foxol e Foxo3 (fosforilação de Foxo1/3 aumentada) nos hepatócitos de camundongo primários.

Sumário [00475] Os estudos da requerente demonstram que compostos CDE podem imitar insulina para inibir produção de glicose em hepatócitos de camundongo primários de uma maneira independente de insulina sem serem tóxicos para células do fígado. Estas constatações foram claramente estabelecidas a partir de estudos em hepatócitos de camundongo primários que foram culturados sob três condições diferentes. Primeiro, foi constatado que produção de glicose foi notada-mente diminuída por pretratamento com Compostos CDE em meios contendo soro por 24 horas seguido por novo tratamento destes compostos em meios livres de soro por 6 horas, com a eficácia comparável à insulina na dose de 100 nM (FIG. 9A). Em seguida, produção de glicose foi também verificada ser significantemente inibida em hepatóci-tos de camundongo primários através de pretratamento com Compostos CDE em meios contendo soro por 24 horas seguido por novo tratamento destes compostos em meios livres de soro na presença de 8-CPT/Dex (os estímulos de produção de glicose para imitar as condições diabéticas) por 6 horas, e que a eficácia de 300 ppb de Compostos CDE no processo era comparável à insulina na concentração de 100 nM (FIG. 10A). Finalmente, a requerente adotou a técnica de cultura livre de soro e demonstrou que os Compostos CDE podem imitar insulina para inibir a produção de glicose ambas basal e estimulada por 8-CPT/Dex de uma maneira independente de FBS ou, mais especificamente, de maneira independente de insulina e fator de crescimento após um tempo de tratamento curto (tratamento de 6 horas) (FIG. 11 A). Também, a eficácia de Compostos CDE na inibição de produção de glicose era comparável à insulina pelo menos na dose de 10 nM (FIG. 11A). Ainda, tratamento com Compostos CDE não teve um efeito tóxico (tal como elicitação de um vazamento de membrana de célula) sobre a saúde de hepatócitos de camundongo primários cul-turados sob as três condições diferentes descritas acima, uma vez que não houve nenhum aumento significante de LDH nos meios de cultura após tratamento com Compostos CDE (FIGURASFIGURAS 9C, 10C, 11B).

[00476] A produção de glicose reduzida observada nestes estudos é pelo menos em parte atribuída à inibição de expressão de G6pc em hepatócitos de camundongo primários pelos Compostos CDE. Foi constatado que os Compostos CDE em 300 ppb causaram uma diminuição significante (diminuição de 42%) em níveis de mRNA de G6pc em hepatócitos enquanto uma tendência à expressão de G6pc diminuída (diminuição de cerca de 31%, embora não estatisticamente signifi- cante) foi também observada em hepatócitos após tratamento com 150 ppb de Compostos CDE (FIG. 9B). Resultados similares também foram obtidos em hepatócitos de camundongo primários estimulados por 8-CPT/Dex (FIG. 10B). Desta maneira, estes resultados demonstram claramente que os Compostos CDE podem imitar insulina para inibir expressão de G6pc em hepatócitos de camundongo primários mesmo na presença de 8-CPT/Dex de uma maneira independente de insulina. Estes resultados estão de acordo com as constatações observadas em células AML-12 (FIGURASFIGURAS 3-4).

[00477] Deve ser notado que o grau de expressão de G6pc reduzida pelos compostos CDE na dose mais alta testada foi menor do que insulina (10 nM) em hepatócitos de camundongo primários sob as duas condições de cultura descritas acima (isto é, com ou sem cotrata-mento com 8-CPT/Dex), enquanto os Compostos CDE foram tão eficazes quanto insulina pelo menos na dose de 10 nM para inibir produção de glicose basal e estimulada por 8-CPT/Dex nos hepatócitos (Fl-GURASFIGURAS 9A, 10A, 11B). Desta maneira é possível que além de G6pc, os Compostos CDE possam regular outras moléculas para diminuir os níveis de glicose em hepatócitos de camundongo cultura-dos. Independentemente, os resultados da requerente sugerem que a inibição de produção de glicose em hepatócitos de camundongo primários pelos Compostos CDE é pelo menos parcialmente devido à sua inibição de expressão de G6pc.

[00478] Ainda, os resultados também demonstram que Compostos CDE podem aumentar ou elevar a ação de insulina para inibir produção de glicose e expressão de G6pc em hepatócitos de camundongo primários sob condições diabéticas simuladas (usando 8-CPT/Dex) (FIGURASFIGURAS 10A-B, 11A). Estes podem ser apoiados pelas observações que seguem: [00479] uma diminuição mais pronunciada de produção de glicose induzida por 8-CPT/Dex nos hepatócitos pela combinação de 150 ppb de Compostos CDE e 10 nM de insulina do que com 150 ppb de Compostos CDE ou 10 nM de insulina sozinha (FIG. 10A);

[00480] uma diminuição maior de produção de glicose induzida por 8-CPT/Dex nos hepatócitos pela combinação de 300 ppb de Compostos CDE e 100 nM de insulina do que com 300 ppb de Compostos CDE ou 100 nM de insulina sozinha (FIG. 10A);

[00481] uma diminuição mais pronunciada de produção de glicose estimulada por 8-CPT/Dex pela combinação de 150 ppb de Compostos CDE e 100 nM de insulina do que 150 ppb de Compostos CDE ou 100 nM de insulina sozinha em hepatócitos em condição livre de soro (FIG. 11 A); e [00482] uma diminuição mais pronunciada de expressão de G6pc induzida por 8-CPT/Dex pela combinação de 300 ppb de Compostos CDE e insulina (10 e 100 nM) do que com 300 ppb de Compostos CDE, 10 ou 100 nM de insulina sozinha (FIG. 10B).

[00483] Uma inibição mais pronunciada de expressão de G6pc induzida por 8-CPT/Dex pela combinação de Compostos CDE e insulina do que com Compostos CDE ou insulina sozinhos foi também observada em células AML-12 (FIG. 4). Juntos, os resultados da requerente demonstram que os Compostos CDE podem aumentar a ação de insulina para inibir produção de glicose induzida por 8-CPT/Dex e expressão de G6pc em hepatócitos de camundongo primários.

[00484] Ainda, as análises de moléculas de sinalização demonstram que Compostos CDE podem imitar insulina para rapidamente ativar sinalização de PI3K/Pdk1/Akt para aumentar a fosforilação de Fo-xo1, 3 e 4 em hepatócitos de camundongo primários. Análise Western blot de proteínas fosforiladas destas moléculas em hepatócitos de camundongo ou pretratados com Compostos CDE em meios contendo soro por 24 horas seguido por novos tratamentos com estes compos- tos em meios livres de soro por 6 horas (FIG. 12) ou tratados com estes compostos em condições totalmente livre de soro por um período curto de 5 a 180 minutos (FIG. 13) apoia esta conclusão.

[00485] Em células AML-12, a requerente também constatou que os Compostos CDE podem se direcionar a Foxo3/4 para aumentar sua fosforilação, embora fosforilação aumentada de Pdk1 e Akt não tenha sido observada em células AML-12 no período de tempo testado (6 horas após tratamento com Compostos CDE) (FIGURASFIGURAS 67). O último resultado podería ser devido à ativação transiente potencial de Pdk1/Akt por Compostos CDE que pode ocorrer em um ponto de tempo anterior (antes de 6 horas).

[00486] Independentemente, os estudos em hepatócitos de camun-dongo primários demonstram claramente que os Compostos CDE podem ignorar insulina ou quaisquer fatores de crescimento para ativar rapidamente sinalização de PI3k/Pdk1/Akt e subsequentemente aumentar fosforilação de Foxo1/3/4. Uma vez que proteínas FOXO, especialmente Foxol, no fígado são importantes para a regulagem de expressão de G6pc e produção de glicose, a produção de glicose e expressão de G6pc inibidas observadas acima em hepatócito de ca-mundongo primário pelos Compostos CDE é mais provavelmente causada pela inativação de FOxo1/3/4 resultante de ativação independente de insulina de sinalização de Pdk1/Akt e subsequentemente fosforilação de Foxol/3/4 aumentada. Também o aumento de ação de insulina no processo acima é provavelmente devido a efeitos aditivos de fosforilação de Foxol/3/4 aumentada pelos Compostos CDE e insulina.

[00487] Em suma, a requerente encontrou uma combinação de composto de selênio que pode ignorar a ação de insulina para inibir produção de glicose e expressão de G6pc em hepatócitos de camun-dongo primários mesmo na presença de estímulos diabéticos para produção de glicose e sem ser tóxica para as células do fígado. Também, esta combinação de composto, Compostos CDE, pode aumentar a ação de insulina para inibir mais a produção de glicose induzida por estímulos diabéticos e expressão de G6pc em hepatócitos de camun-dongo primários. Ainda, esta combinação de composto pode também imitar, mas ignorar insulina para ativar rapidamente sinalização de PI3k/Pdk1/Akt e, subsequentemente, aumentar fosforilação de Fo-xol/3/4 nos hepatócitos. Desta maneira, esta combinação de composto pode ser usada não apenas como um remédio de substituição de insulina potente, mas também como um remédio de potencialização de insulina para os tratamentos de diabéticos de ambos os tipos I e II. Compostos CDE em combinação podem ser úteis no tratamento de obesidade ao ignorar insulina para reduzir produção de glicose hepáti-ca através de inativação independente de insulina de Foxo1/3/4, inibição de expressão de G6pc mediada por Foxo e/ou aumento de ação de insulina nestes processos no fígado ou administrados para prevenir que células do fígado se tornem resistentes à insulina.

Exemplo 7: Redução de níveis de glicose na corrente sanguínea e tolerância à glicose aumentada em resposta a tratamento combinado com Compostos CDE em camundonqos resistentes à insulina e mu-tantes nulos espontâneos em receptor de leptina diabéticos (Lepr) Materiais e Métodos Compostos [00488] O Composto C (5'-Metilselenoadenosina), Composto D (Se-Adenosil-L-homocisteína) e Composto E (Gama-glutamil-metilseleno-cisteína) foram sintetizados no Chemistry Laboratory of Alltech, Inc. As purezas de todos os compostos testados foram verificadas ser > 99%, conforme determinado através de Espectrometria de Massa.

Animais e Tratamentos [00489] Camundongos Lep^/+ com mutação espontânea (mutação no receptor de leptina) diabéticos heterozigotos adultos (linhagem C57BL/6J) foram comprados do The Jackson Laboratory (Bar Harbor, Manine) e então intercruzados para gerar camundongos Lepho-mozigotos (determinado por genotipação de camundongo). Genotipa-ção da cauda do camundongo no momento do desmame (no dia 21 pós-natal) foi realizada, de acordo com o protocolo do The Jackson Laboratory. Estes camundongos Leprdb/db no dia pós-natal 27 foram injetados intraperitonealmente com solução salina fisiológica (NaCI 0,09%) ou Compostos CDE. Os Compostos CDE compreendendo Composto C, Composto D e Composto E em combinação (5 pg de se-lênio de cada composto por quilograma de peso corporal equivalente a 5 ppb de cada composto de selênio por injeção) dia-sim-dia-não até a idade de 3,5 meses, e então submetidos à análise de glicose e ensaios de tolerância à glicose. Os pesos corporais dos camundongos tratados acima foram registrados usando uma balança toda semana, e qualquer morfologia flagrante de animal anormal visível e comportamento ambulante foram monitorados diariamente.

[00490] Mais camundongos Lepr0'^ machos de 5 semanas de vida foram comprados da Jackson Laboratory e intraperitonealmente injetados diariamente com solução salina fisiológica (NaCI 0,09%) ou Compostos CDE. Os Compostos CDE compreendem Composto C, Composto D e Composto E em combinação (5 pg de selênio de cada composto por quilograma de peso corporal, diluídos em solução salina fisiológica estéril) começando no dia pós-natal 38 por 28 dias. Este experimento foi planejado para testar o uso potencial destes compostos como um tratamento para diabetes aguda (camundongos Lepi^^ôe > 35 dias de vida têm ou logo desenvolverão hiperglicemia). Teste dos camundongos mais jovens que tinham sido injetados por um período mais longo pretendia avaliar os compostos mais como uma prepara- ção preventiva para indivíduos pré-diabéticos ou sob risco. Também pesos corporais dos camundongos tratados acima foram registrados usando uma balança toda semana e qualquer morfologia flagrante de animal anormal visível e comportamento ambulante foram monitorados diariamente.

Ensaio de glicose no sangue [00491] Após a última injeção de solução salina fisiológica ou Compostos CDE, os camundongos foram deixados em jejum de um dia para o outro. Então uma pequena gota de sangue destes camundongos foi coletada cortando a ponta da cauda do camundongo e os níveis de glicose foram determinados usando um Glucômetro com uma capacidade máxima para medição de glicose de 600 mg/dL.

Teste de tolerância à glicose e quantizacão de área sub a curva (AUC) [00492] Testes de tolerância à glicose foram realizados como descrito anteriormente (Li e outros, Int. J. Biol. Sei. 2008; 4:29-36). Em suma, camundongos Lep^*3 em jejum de um dia para o outro após tratamento com solução salina ou Compostos CDE Foram injetados intraperitonealmente com 2 gramas/kg de peso corporal de D-glicose 20%. Os níveis de glicose no sangue no tempo 0 (imediatamente antes da injeção de glicose), 0,25, 0,5, 1 e 2 horas após injeção de glicose foram determinados usando um glucômetro com uma capacidade de medição de glicose máxima de 600 mg/dL. Devido a isso, os níveis de glicose no sangue acima de 600 mg/dL foram contados como 600 mg/dL na análise de dados da requerente. A quantização da área sob a curva (AUC) de cada camundongo no ensaio de teste de glicose acima foi calculada usando Microsoft Excel.

Análise estatística [00493] Onde aplicável, um teste t de Student foi usado para determinar a significância estatística de diferença entre grupos tratados com solução salina e Compostos CDE com um valor P de menos do que 0,05. Os dados são apresentados como média ± SEM dos números indicados de camundongos nas figuras.

Resultados e Discussão [00494] Camundongos Lepnão têm todas as isoformas do gene receptor de leptina (Lepr). Este modelo de camundongo homozigo-to é um modelo de camundongo diabético Tipo II agressivo com tolerância à glicose aumentada, sensibilidade à insulina reduzida, hipergli-cemia e hiperinsulinemia. Estes camundongos exibem obesidade flagrante em torno de 3 a 4 semanas de vida, elevação de insulina no plasma começando em 10 a 14 dias e hiperglicemia (isto é, níveis de açúcar no sangue altos) em 4 a 8 de vida (Coleman, D.L., 1978, Dia-betologia 14:141-8).

[00495] Os estudos em células AML-12 e hepatócitos de camundongo primários descritos aqui indicam que Compostos CDE podem imitar insulina ao ignorar insulina para inativar Foxol, Foxo3 e Foxo4 em células do fígado. Ainda, os Compostos CDE podem inibir expressão de G6pc mediada por Foxo para diminuir a produção de glicose sem serem tóxicos para estas células do fígado (FIGURAS 1-4, 6-7 e 9-13). Também, estes estudos in vitro mostram que Compostos CDE podem aumentar a ação da insulina para diminuir a produção de glicose e expressão de G6pc em células do fígado sob condições diabéticas simuladas (FIGURAS 4, 10-11). Desta maneira, o modelo de camundongo Lep^h é um modelo ideal para investigar o uso desta nova combinação de composto em potencialmente diminuir glicose na corrente sanguínea e aumento da sensibilidade à insulina e tolerância à glicose contra diabetes.

Redução de níveis de glicose no sangue em camundongos Lepι?άΜά após administração de Compostos CDE ambos antes e após o início de hiperglicemia [00496] Dois regimes de administração de Compostos CDE foram adotados para investigar o papel potencial de Compostos CDE na prevenção e tratamento de hiperglicemia como revelado em camundon-gos Leprx/ò/aíò. Os compostos descritos aqui foram investigados para determinar se eles têm efeitos na prevenção do desenvolvimento de hiperglicemia, que se desenvolve na idade de 4 a 8 semanas em ca-mundongos LepOs camundongos foram administrados com tratamentos através de injeção intraperitoneal de Compostos CDE um pouco antes do início da hiperglicemia.

[00497] Em suma, camundongos LeprQ,6/Q'6 juvenis na idade de 27 dias foram injetados intraperitonealmente com Compostos CDE (5 pg de selênio de cada compostos por quilograma de peso corporal, equivalente a 5 ppb de cada composto por injeção em cada camundongo) ou solução salina fisiológica dia-sim-dia-não até que os camundongos atingiram a idade de 3,5 meses. No final do tratamento, os camundongos foram deixados em jejum de um dia para o outro para análise de glicose. Os pesos corporais destes camundongos tratados foram registrados usando uma balança dia-sim-dia-não para testar se há algum efeito destes compostos sobre o ganho de peso corporal durante o período de tempo de tratamento. Os dados apresentados são média ± SEM de número indicado de camundongos sob os gráficos de barras na FIG. 14A.

[00498] Foi constatado que tratamento com Compostos CDE não afetou ganhos de peso corporal nestes camundongos mutantes (dados não mostrados), indicando que os Compostos CDE provavelmente têm poucos ou quaisquer efeitos inibidores sobre o apetite anormalmente aumentado para consumo de alimento exibido em camundongos Le-p^b/db' yaij^ém, não havia nenhuma diferença visível em morfologia flagrante de animal e comportamento ambulante entre camundongos Lep^^ tratados com solução salina (controle) e Compostos CDE durante o período de tratamento (dados não mostrados). Estes resulta- dos indicam que os compostos CDE nas doses testadas não tiveram quaisquer efeitos sobre o comportamento ou atividade animal.

[00499] No entanto, tratamento com Compostos CDE causou uma diminuição significante, redução de cerca de 40% comparado a controles, de níveis de glicose na corrente sanguínea de camundongos Le-pi^b/db (vjc|e fiq 14A) embora os níveis de glicose no sangue em camundongos Leprx/fe/Q,fe tratados com Compostos CDE estivessem ainda maiores do que os camundongos do tipo selvagem normais em idade equivalente (cerca de 100 mg/dL, dados não mostrados). Embora Compostos CDE na dose testada não tenham prevenido completamente o desenvolvimento de hiperglicemia em camundongos Lepι^ό/άά, estes resultados demonstram claramente que Compostos CDE podem reduzir significantemente os níveis de glicose na corrente sanguínea neste modelo de camundongo de diabetes Tipo II severa, indicando o potencial de Compostos CDE para a prevenção de hiperglicemia.

[00500] Para investigar mais o papel de Compostos CDE na diminuição da produção de glicose em camundongos Lepr0^ diabéticos, um outro regime de administração, onde Compostos CDE foram injetados intraperitonealmente após ou durante o início de hiperglicemia em camundongos Lepi^b/db, foi adotado para examinar os níveis de glicose no sangue nestes camundongos. Em suma, camundongos machos Lep^0 com 38 dias de vida foram intraperitonealmente injetados com solução salina ou Compostos CDE (5 pg de selênio de cada composto por quilograma de peso corporal) diariamente por 28 dias. O peso corporal do camundongo e qualquer morfologia ou comportamento ambulante anormal foram registrados e monitorados diariamente.

[00501] Após os tratamentos acima, os animais foram deixados em jejum de um dia para o outro e então submetidos à análise de glicose no sangue. Similar aos estudos animais acima, tratamento com Compostos CDE não afetou o ganho de peso corporal, morfologia flagrante animal e comportamento ambulante em camundongos Lepr0^ durante o período de tempo de tratamento (dados não mostrados). No entanto, tratamento com compostos CDE causou uma diminuição signifi-cante (redução de cerca de 25%) de níveis de glicose no sangue nestes camundongos Lep^tídb quando comparado com camundongos tratados com solução salina (vide FIG. 14B). Estes estudos demonstram ainda que Compostos CDE podem diminuir a produção de glicose nestes camundongos com diabetes tipo II severa, indicando o potencial destes compostos para o tratamento de hiperglicemia.

[00502] Em suma, estes resultados demonstram que os Compostos CDE podem diminuir a produção de glicose em camundongos Lep através de injeção intraperitoneal destes compostos ambos antes e após ou durante o início de hiperglicemia nestes animais mutantes.

[00503] Ainda, não houve quaisquer mudanças morfológicas ou no comportamento ambulante visíveis em camundongos Lepr0'^ após os tratamentos destes compostos sob os regimes de injeção descritos acima. Na realidade, os efeitos agudos de Compostos CDE sobre a saúde animal em camundongos C57BL/6 do tipo selvagem normais foram examinados, mas quaisquer observações de anormalidades morfológicas flagrantes e de comportamento ambulante durante uma semana após injeção intraperitoneal de uma dose alta de Compostos CDE ocorreram (500 pg de selênio de cada compostos por quilograma de peso corporal, dados não mostrados). Desta maneira, os compostos CDE provavelmente têm poucos ou quaisquer efeitos tóxicos nestes camundongos.

[00504] Juntos, estes resultados demonstram que os Compostos CDE podem diminuir significantemente os níveis de glicose no sangue em modelo de camundongo de diabetes Tipo II agressivo. Estes resultados indicam o potencial de Compostos CDE para ambos a prevenção e o tratamento de hiperglicemia em indivíduos diabéticos.

Tolerância à glicose aumentada em camundonqos Lepr0^ diabéticos após administração de Compostos CDE antes do início de hiperqlice-mia [00505] O teste de intolerância à glicose identifica anormalidades na maneira que o corpo lida com a glicose após um aumento alto e rápido de açúcar no sangue (por exemplo, geralmente após uma refeição). A insulina desempenha um papel crítico não apenas na inibição de produção de glicose no fígado, mas também em absorção, armazenamento e metabolismo de glicose em células do músculo, fígado e gordurosas, causando níveis de glicose menores na corrente sanguínea.

[00506] Pacientes diabéticos têm uma tolerância à glicose muito baixa ou devido à sua incapacidade em produzir insulina ou responder à insulina eficientemente para manter a homeostase de glicose. Os estudos in vitro descritos aqui indicam que Compostos CDE não apenas podem imitar a insulina, mas também podem ignorar a insulina e aumentar a ação da insulina para inibir produção de glicose e/ou a expressão de G6pc, um gene-chave para produção de glicose, em células do fígado (FIGURAS 2-4, 9-11). Camundongos Lepr0'670'6 são o modelo diabético de Tipo II de camundongo ideal para investigar o papel de Compostos CDE na manutenção de homeostase de glicose, considerando que sua tolerância à glicose prejudicada e resistência à insulina são exibidas nestes camundongos mutantes. Desta maneira, efeito dos Compostos CDE sobre tolerância à glicose aumentada em camundongos Lepr0,fe/0,fe após injeção intraperitoneal de Compostos CDE em camundongos de 27 dias a 3,5 meses de idade foi investigado.

[00507] Similar aos estudos descritos acima, camundongos Lep com idade de 27 dias foram injetados intraperitonealmente com solução salina fisiológica ou Compostos CDE em combinação (5 pg de se-lênio de cada composto por quilograma de peso corporal equivalente a 5 ppb de cada composto por injeção em cada camundongo) dia-sim- dia-não até que os camundongos atingiram a idade de 3,5 meses. No final do tratamento, estes camundongos foram deixados em jejum de um dia para o outro, injetados com glicose (2 g/kg de peso corporal) e níveis de glicose no sangue medidos em 0,25 hora (15 minutos), 0,5 hora (30 minutos), 1 hora (60 minutos) e 2 horas (120 minutos) pós-injeção de glicose. Os níveis de glicose no sangue imediatamente antes da injeção de glicose (referido como ponto de tempo zero) foram também registrados. Média ± SEM. O * na FIG. 15 indica que P se refere a pelo menos < 0,05 quando comparado com grupo tratado com salina no mesmo ponto de tempo.

[00508] Como mostrado na FIG. 15A, um aumento significante em níveis de glicose no sangue foi observado em camundongos Lep tratados com solução salina após injeção de glicose começando em 0,25 hora e em todos os pontos de tempo testados que seguem. Como declarado, o limite de medição de glicose do glucurômetro empregado para estas análises foi 600 mg/dL. Desta maneira, níveis de glicose em excesso deste limite ainda tinham que ser registrados como 600 mg/dL. A razão para declarar isto é apontar que medições, particularmente para os animais tratados com solução salina, podem representar bem subestimações das concentrações de glicose no sangue verdadeiras.

[00509] Em camundongos Lep^0 tratados com CDE, os níveis de glicose no sangue foram significantemente menores do que camundongos tratados com solução salina antes da injeção de glicose. Similar a camundongos tratados com solução salina, cinco de seis camundongos tratados com Compostos CDE tinham níveis de glicose no sangue próximos ou maiores do que 600 mg/dL em 0,5 hora e 1 hora após injeção de glicose (vide FIG. 15A). No entanto, os níveis de glicose no sangue em todos os seis camundongos Lepr0^ testados após tratamento com Compostos CDE foram significantemente meno- res do que ninhadas tratadas com solução salina 2 horas após injeção de glicose (vide FIG. 15A).

[00510] Análise quantitativa da área sob a curva (AUC) do gráfico acima mostrado na FIG. 15A demonstra que também houve uma diminuição significante de glicose no sangue durante o período de tempo testado após injeção de glicose em camundongos LeptM/db tratados com Compostos CDE quando comparado com camundongos tratados com solução salina (vide FIG. 15B). Novamente, no entanto, devido ao limite de medição do glucurômetro, é provável que esta diminuição tenha sido mais drástica do que mostrado na FIG. 15B. Não obstante, deve ser enfatizado que a diminuição era ainda significantemente diferente.

[00511] Foi notado que níveis de glicose em camundongos Lep tratados com Compostos CDE 2 horas após injeção de glicose eram ainda maiores do que os níveis de glicose antes da injeção de glicose (vide FIG. 15A). Estes resultados sugerem que uma eliminação completa da glicose administrada na corrente sanguínea de camundongos Lep^13 por Compostos CDE provavelmente levará mais do que 2 horas do período de monitoramento empregado neste experimento.

[00512] Em suma, os estudos acima demonstram que Compostos CDE na dose testada podem aumentar significantemente tolerância à glicose em camundongos Lepr0,fe/a,ft. A ação destes compostos é provavelmente mediada através do aumento de sensibilidade à insulina na eliminação de glicose no fígado bem como outros órgãos tais como músculo e tecido adiposo.

Sumário [00513] Estes resultados demonstram pela primeira vez que Compostos CDE não apenas podem diminuir níveis de glicose em jejum (FIG. 14), mas também podem aumentar a tolerância à glicose (FIG. 15) em um modelo de camundongo diabético Tipo II agressivo. Com base em trabalho de cultura de célula extensivo, o provável modo de ação de Compostos CDE nestes animais é (1) ignorar insulina para inativar Foxol, Foxo3, Foxo4, levando à expressão de G6pc e produção de glicose reduzidas em células do fígado, como demonstrado em hepatócitos de camundongo primários e células do fígado AML-12 (vide FIGURAS 2-4, 6-7, 9-13); (2) aumentar a sensibilidade à insulina pela inibição de expressão de G6pc mediada por Foxol, Foxo3, Foxo4 e produção de glicose no fígado, como também indicado por estudos em células de fígado culturadas (FIGURAS 4, 10-11); e/ou (3) aumentar a ação da insulina ou ignorar a insulina para aumentar a absorção e/ou metabolismo de glicose em células do fígado, músculo e de gordura, como sugerido na FIG. 15. Ainda, o aumento em sensibilidade à insulina pode ser devido ao aumento de expressão de Insr e Igflr pelos Compostos CDE, como indicado por estudos em células AML-12 de fígado de camundongo (FIG. 5).

[00514] Independentemente, os estudos da requerente demonstram que os Compostos CDE podem inibir produção de glicose e aumentam a tolerância à glicose em um modelo de camundongo diabético, resistente à insulina. Estes resultados sugerem que os Compostos CDE podem ser desenvolvidos para o tratamento de hiperglicemia e insensibilidade à insulina em pacientes diabéticos. Além disso, os Compostos CDE podem também ser uados para prevenção do desenvolvimento de hiperglicemia em indivíduos prediabéticos pela sua habilidade em diminuir a produção de glicose na corrente sanguínea se administrados antes do início da hiperglicemia em pacientes sob risco. Ainda, os Compostos CDE podem ser também úteis para o tratamento de obesidade devido à sua habilidade em diminuir níveis de glicose na corrente sanguínea.

[00515] Todas as publicações e patentes mencionadas no presente pedido são aqui incorporadas a título de referência. Várias modifica- ções e variação dos métodos e composições descritos do presente pedido serão aparentes àqueles versados na técnica sem se afastar do escopo e espírito do presente pedido. Embora o presente pedido tenha sido descrito em conexão com modalidades específicas preferidas, deve ser compreendido que o presente pedido como reivindicado não deve ser limitado indevidamente a tais modalidades específicas. Na verdade, várias modificações dos modos descritos para realizar o presente pedido que são óbvias àqueles versados nos campos relevantes pretendem estar dentro do escopo das reivindicações que seguem.

REIVINDICAÇÕES

Claims

1. Método de substituição de insulina em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende: administração de uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos; e um veículo.

2. Método de aumento da atividade de insulina em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende: administrar uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos; e um veículo.

3. Método de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que compreende ainda administração de insulina ou um análogo ou derivado da mesma.

4. Método de inibição de produção de glicose em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende: administrar uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos; e um veículo.

5. Método de modulação de metabolismo de glicose em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende: administrar uma composição ao indivíduo, a composição compreendendo pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos; e um veículo.

6. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a composição compreende 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína e Gama-glutamil-metilseleno-cisteína.

7. Método de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a composição compreende 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína e Gama-glutamil-metilseleno-cisteína.

8. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a composição compreende 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína e Gama-glutamil-metilseleno-cisteína.

9. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a composição compreende 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína e Gama-glutamil-metilseleno-cisteína.

10. Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a composição compreende 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína e Gama-glutamil-metilseleno-cisteína.

11. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a composição compreende pelo menos 0,1% (p/v) de 5'-Metilselenoadenosina.

12. Método de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a composição compreende pelo menos 0,1% (p/v) de 5'-Metilselenoadenosina.

13. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a composição compreende pelo menos 0,1% (p/v) de 5'-Metilselenoadenosina.

14. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a composição compreende pelo menos 0,1% (p/v) de 5'-Metilselenoadenosina.

15. Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a composição compreende pelo menos 0,1% (p/v) de õ-Metilselenoadenosina.

16. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda insulina ou um análogo ou derivado da mesma.

17. Método de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda insulina ou um análogo ou derivado da mesma.

18. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda insulina ou um análogo ou derivado da mesma.

19. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda insulina ou um análogo ou derivado da mesma.

20. Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda insulina ou um análogo ou derivado da mesma.

21. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda um sensibilizador de insulina, um secretagogo de insulina ou um mimético de incretina.

22. Método de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda um sensibilizador de insulina, um secretagogo de insulina ou um mimético de incretina.

23. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda um sensibilizador de insulina, um secretagogo de insulina ou um mimético de incretina.

24. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda um sensibilizador de insulina, um secretagogo de insulina ou um mimético de incretina.

25. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a composição exclui um ou mais de 5'-Metiltioadenosina, S-Adenosil-L-homocisteína ou Gama-glutamil-metil-cisteína.

26. Método de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a composição exclui um ou mais de 5'- Metiltioadenosina, S-Adenosil-L-homocisteína ou Gama-glutamil-metil-cisteína.

27. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a composição exclui um ou mais de 5'- Metiltioadenosina, S-Adenosil-L-homocisteína ou Gama-glutamil-metil-cisteína.

28. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a composição exclui um ou mais de 5'- Metiltioadenosina, S-Adenosil-L-homocisteína ou Gama-glutamil-metil-cisteína.

29. Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a composição exclui um ou mais de 5'- Metiltioadenosina, S-Adenosil-L-homocisteína ou Gama-glutamil-metil-cisteína.

30. Composição caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos dois compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III) e combinações dos mesmos; e um veículo.

31. Composição caracterizada pelo fato de que compreen- de pelo menos três compostos diferentes selecionados do grupo consistindo em 5'-Metilselenoadenosina, Se-Adenosil-L-homocisteína, Gama-glutamil-metilseleno-cisteína, um composto de Fórmula (I), um composto de Fórmula (II), um composto de Fórmula (III); e um veículo.

32 .Composição de acordo com a reivindicação 30, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos cerca de 0,033% (p/v) de um composto de acordo com a Fórmula (I): ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profár-maco do mesmo, onde: R-ι é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)0R', onde R' é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R-ι junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio; R2 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)0R', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R-ι junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio; R3 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloalquila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais ele estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio; R4 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloal-quila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio; R5 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloal-quila, arila ou aralquila; R6 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloal-quila, arila ou aralquila; R7 é uma C3-C16 alquila, onde a C3-C16 alquila não é uma alquila substituída tendo ambos um grupo carboxila e um grupo amino, alquenila, alquinila, cetona, amino álcool, aminoácido selecionado do grupo consistindo em arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocis-teína, glicina, prolina, alanina, valina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina e triptofano, OR', Se-R', S-R', onde R' para OR' é selecionado do grupo consistindo em H, alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para Se-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-Ci6 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para S-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C-i6 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila; e R8 é hidrogênio, azido, alquila, alquenila, alquinila; e um veículo.

33. Composição de acordo com a reivindicação 30, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos cerca de 0,033% (p/v) de um composto de acordo com a Fórmula (II): ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profár-maco do mesmo onde Ri é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)0R', onde R' é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R-ι junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio; R2 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)0R', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R-ι junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio; R3 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloalquila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio; R4 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, cicloalquila, carboxila ou C-amido; ou R3 junto com R4 e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio; R5 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloal- quila, arila ou aralquila; R6 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloal-quila, arila ou aralquila; R8 é hidrogênio, azido, alquila, alquenila, alquinila; Rg é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)0R', onde R' é alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou Rg junto com R10 formam um anel hetero-cíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio; R10 é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)R', onde R' é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R9 junto com R10 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio; e Rn é OR, alcóxi, aralcóxi ou amino, onde R é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila, heterociclila ou um sal farma-ceuticamente aceitável ou sal interno; e um veículo.

34. Composição de acordo com a reivindicação 30, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos cerca de 0,033% (p/v) de um composto de acordo com a Fórmula (III): ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou profár-maco do mesmo, onde R-ι é H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxi-la, cicloalquila, C(0)R', C(0)0R', onde R' é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou R-ι junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio; R2 H, acila, alquila, alquenila, alquinila, aralquila, carboxila, cicloalquila, C(0)R\ C(0)0R', onde R' é selecionado de alquila, ciclo-alquila, arila, aralquila ou heterociclila; ou Ri junto com R2 formam um anel heterocíclico tendo 4 a 8 membros no anel com pelo menos um heteroátomo selecionado de oxigênio ou nitrogênio; R3 é OH, OR, alcóxi, aralcóxi ou amino, onde R é selecionado de alquila, cicloalquila, arila, aralquila, heterociclila ou um sal farmaceuticamente aceitável ou sal interno; R4 é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, aralquila, heterociclila ou um sal farmaceuticamente aceitável ou sal interno; R5 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila ou aralquila; R6 é oxo, hidroxila, alquila, alquenila, alquinila, OR' ou está ausente; onde R' é selecionado de alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila ou aralquila; e R7 é uma C3-Ci6 alquila, onde a C3-Ci6 alquila não é uma alquila substituída tendo ambos um grupo carboxila e um grupo amino, alquenila, alquinila, cetona, aminoálcool, aminoácido selecionado do grupo consistindo em arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocis-teína, glicina, prolina, alanina, valina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina e triptofano, OR', Se-R', S-R', onde R' para OR' é selecionado do grupo consistindo em H, alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para Se-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C16 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila, onde R' para S-R' é selecionado do grupo consistindo em H, C3-C16 alquila, cicloalquila, arila, aralquila e heterociclila; e um veículo.