BR102016007036A2

BR102016007036A2 - material de reparo de tecido derivado de pele de peixe e método de fabricação do mesmo

Info

Publication number: BR102016007036A2
Application number: BR102016007036A
Authority: BR
Inventors: Horng-Ji Lai; Jui-Min Ho; Kuan-Hao Haung; Min-Chang Huang; Ta-Wei Su; Yu-Chi Lin; Yu-Wei Chang; Yun-Ting Hsu
Original assignee: Body Organ Biomedical Corp
Priority date: 2015-03-31
Filing date: 2016-03-30
Publication date: 2016-10-04
Also published as: US20160287643A1; KR20180000708A; KR101885487B1; JP6190911B2; KR101822266B1; IL244798A0; US20190070224A1; US10172891B2; CN106075579B; TW201634063A; BR102016007036A8; EP3075399A1; KR20160117341A; EP3075399B1; JP2016193891A; US10695381B2; CN106075579A; TWI566789B

Abstract

um material de reparo de tecido derivado de pele de peixe e método de fabricação do mesmo são aplicados para fornecer o material de reparo de tecido adequado para uso como um emplastro, um revestimento, um veículo, uma sustentação, um implante ou um reagente em vários tecidos. o material de reparo de tecido tem colágenos para melhorar o reparo do tecido ferido, e tem características particulares quanto à aplicação de reparo de tecido desejada. além disso, até agora os fatores da doença transmitida por animal terrestre (causada por vírus) não sobreviveram no material de reparo de tecido de pele de peixe.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "IVIATERIAL DE REPARO DE TECIDO DERIVADO DE PELE DE PEIXE E MÉTODO DE FABRICAÇÃO DO MESMO". ANTECEDENTES Campo Técnico [001] A presente invenção refere-se a um material de reparo de tecido, e particularmente refere-se a um material de reparo de tecido derivado de pele de peixe e método de fabricação do mesmo, onde o material de reparo de tecido é adequado para uso como um emplastro, um revestimento, um veículo, uma sustentação, um implante ou um reagente em vários tecidos. Técnica Relacionada [002] A engenharia de tecido que envolve a incorporação de um biomaterial com produtos biológicos e/ou farmacêuticos e na implantação em um paciente estimulará a angiogênese, integração de tecido, e/ou remodelagem de tecido. O biomaterial é um material de reparo de tecido que é sintético e biocompatível e é usado para construir órgãos artificiais, dispositivos de reabilitação, ou próteses e substituir tecidos corporais naturais.

[003] Colágenos são componentes importantes no material de reparo de tecido, e têm as capacidades de melhorar o crescimento de tecido, melhorar a cicatrização de ferida, e etc. Adicionalmente, as aplicações do material de reparo de tecido com colágenos continuam a ser expandir. Consequentemente, é um dos tópicos de pesquisa que o material de reparo de tecido com colágenos que tem valores médicos elevados e diversidades mais amplas é desenvolvido para várias aplicações.

[004] Atualmente, os materiais de reparo de tecido com colágenos são autólogos ou se originam do doador ou dos animais. Entretanto, em certas doenças os materiais de reparo de tecido autólogos não podem ser adquiridos ou os materiais de reparo de tecido adquiridos não são suficientes para usar. Além disso, estes materiais de reparo de tecido que se originam do doador têm a dificuldade no suprimento do doador, o procedimento de preparação complicado, relativamente caros, risco de rejeição imunológica, e etc. E, estes materiais de reparo de tecido que se originam dos animais têm o procedimento de preparação complicado, relativamente caros, risco de rejeição imunológica e doença transmitida por animal terrestre.

SUMÁRIO

[005] Em uma modalidade, um material de reparo de tecido derivado de pele de peixe inclui uma lâmina oticamente clara derivada de uma pele de peixe. A lâmina oticamente clara é célula clara e inclui uma matriz de colágeno e água na matriz de colágeno.

[006] Em algumas modalidades, a lâmina oticamente clara tem uma transmitância de luz maior do que ou igual a 70%, uma tensão final maior do que ou igual a 5 MPa, e uma capacidade de costura maior do que ou igual a 40g.

[007] Em algumas modalidades, a matriz de colágeno é uma estrutura de camada formada com uma pluralidade de fibras de colágeno, e cada uma das pluralidades de fibras de colágeno se estende ao longo de uma superfície da lâmina oticamente clara. Em outras modalidades, a matriz de colágeno é uma estrutura de camada formada com uma pluralidade de fibras de colágeno, e uma parte da pluralidade de fibras de colágeno se estende ao longo de uma direção de uma superfície da lâmina oticamente clara à outra superfície da lâmina oticamente clara.

[008] Em algumas modalidades, a lâmina oticamente clara é derivada da pele de peixe completamente sem escamas de peixe e uma carne de peixe.

[009] Em algumas modalidades, a lâmina oticamente clara é derivada da pele de peixe sem moagem.

[0010] Em algumas modalidades, a lâmina oticamente clara é feita por um método de fabricação compreendendo a remoção de escamas de peixe, óleo, células, cromatóforos e estruturas de bolsa da pele de peixe para obter uma pele de peixe purificada, tratamento da pele de peixe purificada com a primeira solução acídica para obter uma lâmina moldável sem ruptura, moldagem da pele de peixe moldável para obter uma lâmina moldada em uma forma particular, e realização de um procedimento de estabilização para estabilizar a lâmina moldada.

[0011] Em uma modalidade, um método de fabricação de um material de reparo de tecido derivado de pele de peixe inclui obtenção de uma pele de peixe sem uma carne de peixe, remoção de escamas de peixe, óleo, células, cromatóforos e estruturas de bolsa da pele de peixe para obter uma pele de peixe purificada, e tratamento da pele de peixe purificada com solução acídica para obter uma lâmina moldável sem ruptura.

[0012] Em algumas modalidades, o método de fabricação também inclui a lavagem da pele de peixe moldada com água. Em algumas modalidades, a lâmina moldada pode ser desidratada antes da etapa de lavagem ou após a etapa de lavagem. Em algumas modalidades, a lâmina moldada pode ser reidratada após as etapas de desidratação.

[0013] Em algumas modalidades, o método de fabricação também inclui moldagem da pele de peixe moldável para obter uma lâmina moldada em uma forma particular. Em alguns casos, a etapa de moldagem pode incluir cortar a lâmina moldável para obter a lâmina moldada, e uma superfície da lâmina moldada é um corte transversal da lâmina moldável. Em outros casos, a etapa de moldagem pode incluir cortar a lâmina moldável para obter a lâmina moldada, e uma superfície da lâmina moldada é uma superfície da lâmina moldável.

[0014] Em algumas modalidades, o método de fabricação também inclui a extração de uma solução de colágeno da lâmina moldável.

[0015] Em algumas modalidades, o método de fabricação também inclui a liofilização da lâmina moldável.

[0016] Em algumas modalidades, o método de fabricação também inclui remoção de pelo menos uma camada externa da lâmina moldável: e tratamento da lâmina moldável sem pelo menos uma camada externa com solução acídica.

[0017] Em uma modalidade, um material de reparo de tecido derivado da pele de peixe feito pelo método de fabricação anteriormente mencionado.

[0018] Como acima, de acordo com as modalidades, o material de reparo de tecido de pele de peixe e método de fabricação do mesmo é aplicado para fornecer o material de reparo de tecido adequado para uso como um emplastro, um revestimento, um veículo, uma sustentação, um implante ou um reagente em vários tecidos. O material de reparo de tecido tem colágenos para melhorar o reparo do tecido ferido, e tem características particulares quanto à aplicação de reparo de tecido desejada. Além disso, até agora os fatores da doença transmitida por animal terrestre (causada por vírus) não sobreviveram no material de reparo de tecido de pele de peixe.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0019] A invenção tornar-se-á mais completamente entendida a partir da descrição detalhada fornecida aqui, acompanhada pelas seguintes figuras que são apenas ilustração, e desse modo, não limitativas da invenção, em que: [0020] A figura 1 ilustra um fluxograma de uma modalidade de um método de fabricação do material de reparo de tecido de pele de peixe;

[0021] a figura 2 ilustra um fluxograma de uma modalidade de etapa 20;

[0022] a figura 3 ilustra um fluxograma de uma modalidade de etapa 30;

[0023] a figura 4 ilustra um fluxograma de outra modalidade do método de fabricação do material de reparo de tecido de pele de peixe;

[0024] a figura 5 ilustra um fluxograma de primeira modalidade de etapa 40;

[0025] a figura 6 ilustra um fluxograma de segunda modalidade de etapa 40;

[0026] a figura 7 ilustra um fluxograma de terceira modalidade de etapa 40;

[0027] a figura 8 ilustra um fluxograma de quarta modalidade de etapa 40;

[0028] a figura 9 ilustra um fluxograma de quinta modalidade de etapa 40;

[0029] a figura 10 ilustra um fluxograma de sexta modalidade de etapa 40;

[0030] a figura 11 ilustra um fluxograma de sétima modalidade de etapa 40;

[0031] a figura 12 ilustra um fluxograma de oitava modalidade de etapa 40;

[0032] a figura 13 ilustra um fluxograma de ainda outra modalidade do método de fabricação do material de reparo de tecido de pele de peixe;

[0033] a figura 14 é uma imagem mostrando a superfície da pele de peixe original;

[0034] as figuras 15 a 17 são micrógrafos de SEM da pele de peixe original;

[0035] a figura 18 é micrógrafo de SEM da segunda pele de peixe purificada.

[0036] a figura 19 é uma imagem mostrando a primeira lâmina moldável;

[0037] a figura 20 é um micrógrafo de SEM da primeira lâmina moldável;

[0038] a figura 21 é um micrógrafo da amostra de secção manchada da primeira lâmina moldável;

[0039] a figura 22 é uma imagem mostrando a primeira lâmina estável;

[0040] as figuras 23 e 24 são micrógrafos de SEM da primeira lâmina estável;

[0041] a figura 25 é um micrógrafo de SEM da quarta lâmina estável;

[0042] a figura 26 é um micrógrafo de SEM da quinta lâmina estável;

[0043] a figura 27 é um micrógrafo de SEM da sexta lâmina estável; e [0044] a figura 28 é um micrógrafo de SEM da sétima lâmina estável.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0045] Os termos usuais, tais como primeiro, segundo, terceiro, etc., mencionados aqui a seguir são aplicados para distinguir os elementos apenas, porém não aplicados para sequenciar ou restringir os elementos; além disso, eles não são aplicados para limitar o escopo da invenção.

[0046] Em uma modalidade, um material de reparo de tecido derivado de pele de peixe inclui uma lâmina derivada de uma pele de peixe. A lâmina é célula clara, e a lâmina inclui uma matriz de colágeno e água na matriz de colágeno. A lâmina derivada de uma pele de peixe tem capacidade de costura suficiente para ser aplicada em várias aplicações de reparo de tecido. Aqui, o material de reparo de tecido de pele de peixe é adequado para uso como um emplastro, um revestimento, um veículo, uma sustentação, um implante ou um reagente em vários tecidos, tais como tecidos oculares, tecidos orais, a pele, ossos, etc. Em algumas modalidades, a lâmina é uma lâmina eticamente clara, de modo a observar a ferida e/ou ser adequada para reparar os tecidos oculares. Em algumas modalidades, a lâmina também tem tensão final suficiente para usar como um emplastro, um revestimento, um veículo, uma sustentação, ou um implante.

[0047] Em algumas modalidades, a lâmina eticamente clara tem uma transmitância de luz maior do que ou igual a 70%, e uma tensão final maior do que ou igual a 5 MPa. Em algumas modalidades, a lâmina eticamente clara tem a capacidade de costura maior do que ou igual a 40g.

[0048] Em algumas modalidades, a matriz de colágeno é uma estrutura de camada formada com uma pluralidade de fibras de colágeno. Em algumas modalidades, cada uma das pluralidades de fibras de colágeno se estende ao longo de uma superfície da lâmina eticamente clara. Em outras modalidades, uma parte da pluralidade de fibras de colágeno se estende ao longo de uma direção de uma superfície da lâmina eticamente clara à outra superfície da lâmina eticamente clara.

[0049] Por favor, referindo-se â figura 1, em uma modalidade, um método de fabricação do material de reparo de tecido de pele de peixe principalmente tem um procedimento de purificação (etapa S20) e um procedimento de moldagem (etapa S30) após obtenção de uma pele de peixe sem uma carne de peixe (etapa S10).

[0050] Em algumas modalidades da etapa S10, a pele de peixe pode ser uma pele de peixe original com escamas de peixe, porém sem a carne de peixe. Em modalidade particular, um peixe é obtido de um mercado de peixe capaz de fornecer documentos de rastreabilidade ou outros documentos certificados relevantes, e a pele de peixe do peixe obtido é separada da carne de peixe do mesmo, para obter a pele de peixe original que tem escamas de peixe, porém não tem a carne de peixe. Em algumas modalidades, o peixe pode ser um peixe cujos cromatóforos apenas existem na camada da superfície da pele de peixe da mesma, tais como robalo, dourado, peixes Serranidae (por exemplo, garoupa), tilápia, ou qualquer combinação dos mesmos.

[0051] Por favor, referindo-se à figura 2, o procedimento de purificação (etapa S20) inclui remoção de escamas de peixe da pele de peixe (etapa S210), remoção de óleos e células da pele de peixe (etapa S230), e remoção de cromatóforos e estruturas de bolsa da pele de peixe (etapa S250). O procedimento de purificação (etapa S20) é concluído para obter uma pele de peixe purificada.

[0052] Em uma modalidade da etapa S210, as escamas de peixe são removidas da pele de peixe original completamente usando pelo menos um primeiro método para obter uma pele de peixe descarnada, e em seguida a pele de peixe descarnada é lavada por água limpa para remover substâncias indesejadas sobre ela, tal como os fluidos teciduais, sangues, ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, pelo menos um primeiro método pode ser pelo menos um método físico, pelo menos um método químico, ou qualquer combinação dos mesmos. No método químico, por exemplo, porém não limitado a ele, as escamas de peixe são removidas manualmente, as escamas de peixe são raspadas por uma ferramenta plaina, as escamas de peixe são removidas por forças de cisalhamento líquido, as escamas de peixe são removidas por gás de pressão elevada (ou líquido), ou a pele de peixe original é imersa em água quente com uma temperatura de 25 Graus Celsius (°C) a 60 (°C) para remover as escamas de peixe. Em uma modalidade do método químico, por exemplo, porém não limitado a ele, a pele de peixe original é imersa em uma solução acídica para remover as escamas de peixe. Em algumas modalidades, a solução acídica pode ser uma solução acídica orgânica ou uma solução acídica inorgânica. Aqui, a solução acídica pode ser ácido succínico, ácido fórmico, ácido acético, ácido cítrico, ácido pirúvico, ácido fumárico, ácido clorídrico (HCI), ácido nítrico (HNO3), ou ácido suifúrico (H2SO4). Em outra modalidade do método químico, por exemplo, porém não limitado a ele, a pele de peixe originai é imersa em uma solução básica para remover as escamas de peixe. Aqui, a solução básica pode ser hidróxido de sódio (NaOH), ou hidróxido de potássio (KOH). Ainda em outra modalidade do método químico, por exemplo, porém não limitado a ele, a pele de peixe originai é imersa em peróxido de hidrogênio (H2O2) para remover as escamas de peixe.

[0053] Em uma modalidade da etapa S230, o óleo e as células são removidas da pele de peixe descarnada no mesmo tratamento ou em diferentes tratamentos. Finalmente, a pele de peixe tratada (isto é, a pele de peixe descarnada após remoção do óleo e das células) é lavada com água para remover substâncias indesejadas na pele de peixe tratada e/ou neutralizar o valor de pH da pele de peixe tratada. Aqui, a água pode ser água limpa, água deionizada, água duplamente destilada (DDW), salina normal, salina tamponada por fosfato (PBS), ou tampão de fosfato de sódio (PB). Em algumas modalidades, para remoção do óleo, a pele de peixe descarnada pode ser tratada com pelo menos um agente químico. Aqui, o agente químico pode ser uma solução alcoólica, uma solução básica ou qualquer combinação dos mesmos. Por exemplo, a solução alcoólica pode ser isopropanol. Por exemplo, a solução básica pode ser NaOH, ou KOH. Em algumas modalidades, para remoção das células, a pele de peixe descarnada pode ser tratada usando pelo menos um segundo método. Em algumas modalidades, pelo menos um segundo método pode ser pelo menos um método químico, pelo menos um método de tratamento de enzima, pelo menos um método físico, ou qualquer combinação dos mesmos. No método químico, pelo menos um agente químico é usado para remover as células da pele de peixe descarnada. Aqui, o pelo menos um agente químico pode ser pelo menos um sal, pelo menos uma solução básica, pelo menos uma solução acídica, pelo menos um agente de oxidação, pelo menos um agente quelante, ou qualquer combinação dos mesmos. Por exemplo, o sal pode ser cloreto de sódio (NaCI), ou cloreto de potássio (KCI). Por exemplo, a solução básica pode ser NaOH, ou KOH. Por exemplo, a solução acídica pode ser ácido succínico, ácido fórmico, ácido acético, ácido cítrico, ácido pirúvico, ácido fumárico, HCI, HNO3, ou H2SO4. Por exemplo, o agente de oxidação pode ser peróxido de hidrogênio, ou íon de persulfato. Por exemplo, o agente quelante pode ser o agente contendo metal de transição tal como Ca^*, fe^*, Mn^"", ou qualquer combinação dos mesmos. No método de tratamento com enzima, pelo menos uma enzima é usada para remover as células da pele de peixe descarnada. Aqui, a enzima pode ser protease, endonuclease, ou exonuclease. Por exemplo, a endonuclease pode ser EcoRI, BamHI, Hindill, Taql, Notl, Hinfl, ou Sau3A. Por exemplo, a exonuclease pode ser ribonuclease R, ribonuclease II, ribonuclease D, RNase BN, ribonuclease PH, ou exonuclease I. Em algumas modalidades do método físico, a pele de peixe descarnada é congelada para remover as células da pele de peixe descarnada. Em um exemplo da etapa S230, a pele de peixe descarnada é imersa em uma solução de mistura de NaOH e NaCI por 12 a 24 horas, e a solução de mistura é renovada durante diversas vezes durante a imersão, para obter a pele de peixe tratada. Após a imersão, a pele de peixe tratada é lavada com a DDW para lavar a solução de mistura até o valor do pH da pele de peixe ser neutro. Em algumas modalidades, durante a etapa S230, a temperatura de tratamento pode ser controlada em 4°C a 20°C. Por exemplo, na etapa S230, todas as soluções usadas têm a temperatura de 4°C a 20 °C, e/ou a temperatura ambiente é controlada em 4 °C a 20 °C.

[0054] Em uma modalidade da etapa S250, os cromatóforos e as estruturas de bolsa são removidos da pele de peixe tratada (neutra) no mesmo tratamento ou em diferentes tratamentos. Em uma modalidade, a pele de peixe tratada é imersa em pelo menos uma solução acídica, de modo que a pele de peixe tratada seja dilatada (aqui a seguir referida como pele de peixe em dilatação). Em seguida, a pele de peixe em dilatação é aplicada com um método de remoção de bolsa, para remover as estruturas de bolsa. Aqui, a solução acídica pode ser, por exemplo, porém não limitada a ela, ácido succínico, ácido fórmico, ácido acético, ácido cítrico, ácido pirúvico, ácido fumárico, HCI, HNO3, ou H2SO4. As diferentes concentrações das soluções acídicas são consideradas de acordo com as diferentes espécies das soluções acídicas. Além disso, os diferentes tempos de imersão são considerados de acordo com as diferentes concentrações das soluções acídicas. Por exemplo, quando ácido acético a 0,01 M a 0,5 M é usado, o tempo de imersão é de 0,5 horas a 18 horas; ou quando ácido acético a 0,3 M é usado, o tempo de imersão é de cerca de 30 minutos a 50 minutos. Além disso, os parâmetros (isto é, concentrações e tempos de imersão) são também ajustados de acordo com o tamanho da pele de peixe tratada. Em outro caso, os cromatóforos são também removidos da pele de peixe em dilatação durante a realização de método de remoção de bolsa. Em outro caso, a pele de peixe em dilatação é também tratada com pelo menos um agente de remoção de cromatóforo. Em algumas modalidades do método de remoção de bolsa, uma ferramenta sem corte é usada para remover as estruturas de bolsa. Por exemplo, a ferramenta sem corte pode ser as mãos, uma folha de ferro, uma folha de plástico, ou outra ferramenta que não danifica a superfície da pele de peixe. Em algumas modalidades, o agente de remoção de cromatóforo pode ser agente de oxidação (por exemplo, peróxido de hidrogênio, hipoclorito de sódio) ou tensoativo (por exemplo, Triton X100). Em algumas modalidades, o grão da superfície, os tecidos musculares e os tecidos residuais desnecessários são também removidos da pele de peixe em dilatação durante a realização de método de remoção de bolsa.

[0055] Deve-se entender que a sequência da realização da etapa S210, da etapa S230 e da etapa S250 não está limitada à explicação descrita acima. A sequência de implementação pode ser ajustada de acordo o teor de cada etapa, ou duas ou todas as etapas S210, S230 e S250 são combinadas em uma etapa de acordo com o teor de cada etapa. Por exemplo, a pele de peixe é imersa em uma solução acídica a ser dilatada, e em seguida as escamas de peixe, as estruturas de bolsa são removidas da pele de peixe em dilatação usando uma ferramenta sem corte.

[0056] Por favor, referindo-se à figura 3, o procedimento de moldagem (etapa S30) inclui tratamento da pele de peixe purificada com a primeira solução acídica para obter uma lâmina moldável derivada da pele de peixe sem ruptura (etapa S310), e moldagem da lâmina moldável para obter uma lâmina moldada derivada da pele de peixe em uma forma particular (etapa S330). Aqui, a lâmina moldada pode ser eticamente clara.

[0057] Em algumas modalidades da etapa S310, a pele de peixe purificada é imersa em pelo menos uma solução acídica, de modo que a pele de peixe purificada seja dilatada, porém sem ruptura (isto é, a lâmina moldável derivada da pele de peixe). Em seguida, a lâmina moldável é moldada em uma forma particular usando uma ferramenta ou um molde, para formar a lâmina moldada. Aqui, a solução acídica pode ser, por exemplo, porém não limitada a ela, ácido succínico, ácido fórmico, ácido acético, ácido cítrico, ácido pirúvico, ácido fumárico, HCI, HNO3, ou H2SO4. As diferentes concentrações das soluções acídicas são consideradas de acordo com as diferentes espécies das soluções acídicas. Além disso, os diferentes tempos de imersão são considerados de acordo com as diferentes concentrações das soluções acídicas. Em algumas modalidades, a forma particular da lâmina moldada pode ser em folha, bolsa com superfície plana, convexa, tubular, barra linear ou não linear (por exemplo, chavetas de uma única linha, ou uma pluralidade de linhas), bola (por exemplo, pó, ou partícula fina), volume, agulha, poliedro sólido ou poliedro oco.

[0058] Em algumas modalidades, durante a etapa de moldagem (etapa S330), a lâmina moldável pode ser cortada em um tamanho particular. Em outro caso, após o corte, a superfície da lâmina moldada origina-se da superfície da lâmina moldável. Em outro caso, a superfície da lâmina moldada origina-se do corte transversal da lâmina moldável.

[0059] Em algumas modalidades, durante a etapa de moldagem (etapa S330), não existe nenhuma moagem da lâmina moldável.

[0060] Em outra modalidade, referindo-se à figura 4, um procedimento de estabilização (etapa S40) é realizado após o procedimento de moldagem (etapa S30).

[0061] Em uma modalidade, o procedimento de estabilização (etapa S40) inclui estabilização da lâmina moldada para obter a lâmina oticamente clara em estado estável.

[0062] Na primeira modalidade da etapa de estabilização, referindo-se à figura 5, após o procedimento de moldagem (etapa S30), a lâmina moldável é direta mente lavada com água até o valor de pH da lâmina ser neutro (etapa S450). Isto é, não existe qualquer etapa de desidratação entre o procedimento de moldagem (etapa S30) e a etapa de lavagem (etapa S450).

[0063] Na segunda modalidade da etapa de estabilização, referindo-se à figura 6, após o procedimento de moldagem (etapa S30), a lâmina moldável é diretamente lavada com água até o valor de pH da lâmina ser neutro para obter uma lâmina neutra derivada de pele de peixe (etapa S450). Após a etapa de lavagem, a lâmina neutra é desidratada (etapa S470), e em seguida imersa na água para rei d ratar (etapa S490).

[0064] Na terceira modalidade da etapa de estabilização, referindo-se à figura 7, após o procedimento de moldagem (etapa S30), a lâmina moldada é desidratada (etapa S430), e em seguida lavada com água até o valor de pH da lâmina ser neutro para obter a lâmina neutra derivada de pele de peixe (etapa S452).

[0065] Na quarta modalidade da etapa de estabilização, referindo-se à figura 8, após o procedimento de moldagem (etapa S30), a lâmina moldada é desidratada (etapa S430), e em seguida lavada com água até o valor de pH da lâmina ser neutro para obter a lâmina neutra derivada de pele de peixe (etapa S452). Após a etapa de lavagem, a lâmina neutra é redesidratada (etapa S472), e em seguida imersa na água para rei d ratar (etapa S490).

[0066] No procedimento de estabilização (etapa S40), a água usada pode ser água limpa, água deionizada, DDW, salina normal, PBS, ou PB. No procedimento de estabilização (etapa S40), o método de desidratação é suave, tal como desidratação por ar, ou desidratação por baixa temperatura.

[0067] Em outra modalidade, referindo-se às figuras 9 a 12, durante o procedimento de estabilização (etapa S40), uma etapa de padronização de superfície (etapa 410) é realizada antes da etapa de estabilização.

[0068] Em uma modalidade da etapa de padronização de superfície (etapa 410), a lâmina moldada é colocada em um molde tendo padrão específico, de modo que a superfície da lâmina moldada tem grão. O grão da superfície da lâmina moldada e o padrão específico na superfície interna do molde são ligados um ao outro. Aqui, o grão da superfície pode ser, por exemplo, porém não limitado a ele, um grão saliente, um grão ressecado, ou combinação dos mesmos. Em outras palavras, o padrão específico na superfície do molde pode ser, por exemplo, porém não limitado a ele, um padrão ressecado, um padrão saliente, ou combinação dos mesmos.

[0069] Em algumas modalidades, a etapa de padronização de superfície (etapa 410) pode ser combinada na etapa de moldagem (etapa S330). isto é, o grão da superfície pode ser formado na etapa de moldagem (etapa S330), e não existe nenhuma etapa de padronização de superfície (etapa 410) durante o procedimento de estabilização (etapa S40).

[0070] Em algumas modalidades, o procedimento de moldagem (etapa S30) e o procedimento de estabilização (etapa S40) podem ser alternativamente realizados uma vez ou diversas vezes (não mostrado).

[0071] Ainda em outra modalidade, referindo-se à figura 13, um procedimento de corte (etapa S50) é realizado após o procedimento de estabilização (etapa S40). Durante o procedimento de corte (etapa S50), a lâmina eticamente clara no estado estável é cortada em um tamanho específico.

[0072] Em algumas modalidades (não mostradas nas figuras), um procedimento de reticulação é realizado entre o procedimento de purificação (etapa S20) e o procedimento de moldagem (etapa S30), entre o procedimento de moldagem (etapa S30) e o procedimento de estabilização (etapa S40), Juntamente com o procedimento de moldagem (etapa S30), ou juntamente com o procedimento de estabilização (etapa S40). Durante o procedimento de reticulação, a pele de peixe purificada ou a lâmina oti ca mente clara são tratadas usando pelo menos um método de reticulação, para também melhorar as propriedades mecânicas. Em algumas modalidades, o método de reticulação pode ser método de reticulação físico ou método de reticulação químico. Por exemplo, o método de reticulação físico pode ser UV, raio γ ou calor. Por exemplo, o método de reticulação químico pode ser glutaraldeído (GA), 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE), genipina, ou 1-Etil-3-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida/N- hidroxissuccinimida (EDC/NHS).

[0073] Em modalidades modificadas, o procedimento de moldagem (S30) pode ser modificado, e o procedimento após o procedimento de moldagem (S30) pode ser removido. Aqui, o procedimento de moldagem pode incluir o tratamento da pele de peixe purificada com a primeira solução acídica para obter uma lâmina moldável derivada da pele de peixe; e extração de uma solução de colágeno da lâmina moldável. Aqui, o material de reparo de tecido de pele de peixe é a solução de colágeno. Em alguns casos, a etapa de moldagem (etapa S330) pode ser removida. Em outros casos, a etapa de moldagem (etapa S330) pode manter cortar a lâmina moldável em um tamanho particular e/ou forma adequada para extração.

[0074] Além disso, uma etapa de neutralização pode ser realizada entre a etapa de tratamento com ácido e a etapa de extração, para neutralizar o valor de pH da lâmina moldável para ser neutro. A etapa de neutralização pode incluir, por exemplo, lavagem da lâmina moldável com a água.

[0075] Em outras modalidades modificadas, o procedimento de moldagem (S30) pode ser modificado, e o procedimento após o procedimento de moldagem (S30) pode ser removido. Aqui, o procedimento de moldagem pode incluir tratamento da pele de peixe purificada com a primeira solução acídica para obter uma lâmina moldável derivada da pele de peixe sem ruptura (etapa S310); e liofilização da lâmina moldável para obter uma esponja de colágeno. Aqui, o material de reparo de tecido de pele de peixe é uma esponja de colágeno. Em alguns casos, a etapa de moldagem (etapa S330) pode ser removida. Em outros casos, a etapa de moldagem (etapa S330) pode manter-se entre a etapa de tratamento com ácido (etapa S310) e a etapa de liofilização.

[0076] Além disso, uma etapa de neutralização pode ser realizada entre a etapa de tratamento com ácido (etapa S310) (ou a etapa de moldagem (etapa S330)) e a etapa de liofilização, para neutralizar o valor de pH da lâmina moldável (ou a lâmina moldada) para ser neutro. A etapa de neutralização pode incluir, por exemplo, lavar a lâmina com a água.

[0077] Ainda em outras modalidades modificadas, o procedimento de moldagem (S30) pode ser modificado. Aqui, durante o procedimento de moldagem, a etapa de tratamento com ácido (etapa S310) pode ser realizada mais vezes. E, pelo menos uma camada externa da lâmina moldável é removida entre as duas etapas de tratamento com ácido (etapa S310). Finalmente, o material de reparo de tecido de pele de peixe sendo uma película de colágeno é obtido. Aqui, o parâmetro de tratamento com ácido para quaisquer duas etapas de tratamento com ácido (etapa S310) pode ser igual ou diferente.

[0078] Em alguns casos, a etapa de moldagem (etapa S330) pode ser removida. Em outros casos, a etapa de moldagem (etapa S330) pode manter-se após qualquer etapa de tratamento com ácido (etapa S310).

[0079] Em alguns casos, o procedimento após o procedimento de moldagem (S30) pode ser removido. Em outros casos, o procedimento após o procedimento de moldagem (S30) pode manter-se. Se o procedimento após o procedimento de moldagem (S30) for removido, uma etapa de neutralização poderá ser realizada após a etapa de tratamento com ácido (etapa S310), para neutralizar o valor de pH da lâmina (ou a película de colágeno) para ser neutro. A etapa de neutralização pode incluir, por exemplo, lavagem da lâmina moldável com a água.

Primeiro procedimento de preparação: Preparação de amostra de SEM

[0080] Uma amostra (isto é, a pele de peixe a ser observada ou a lâmina a ser observada) é colocada na água deionizada durante 30 minutos. Em seguida, a água deionizada é substituída por solução de glutaraldeído a 2,5 %, e a amostra é imersa na solução de glutaraldeído durante 20 minutos. Após a imersão da solução de glutaraldeído, a amostra é lavada por água deionizada três vezes durante 10 minutos por vez. A seguir, o ácido osmótico é adicionado para reagir com a amostra durante 2 horas. Em seguida, o ácido osmótico é removido, e a amostra é lavada pela água deionizada três vezes durante 10 minutos por vez. A seguir, os álcoois com concentrações de gradiente (30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95%, e 100%) são aplicados para desidratar a amostra. Em seguida, a amostra é desidratada em um secador de ponto crítico (EM CPD300, Leica) para obter a amostra para avaliação SEM por um microscópio eletrônico de varredura (S-3000 N, Hitachi).

Segundo procedimento de preparação: corte congelado e manchado por H&E

[0081] Uma amostra (isto é, a lâmina a ser observada) é imobilizada por paraformaldeído a 4% durante 24 horas, em seguida desidratada em solução de sacarose a 30% a 4 °C para impedir a formação de cristais de gelo que podem danificar os tecidos da amostra. A amostra desidratada a é em seguida colocada em um molde em que um agente de incrustação (O.C.T) já está adicionado, e o molde é congelado por nitrogênio líquido, para formar uma amostra incrustada. Após o O.C.T ser ajustado, a amostra incrustada é cortada por uma máquina de seccionamento congelado (CM1900, Leica) a -25°C, e a espessura da secção é de 10 pm, para obter uma amostra de secção. A amostra de secção é manchada por solução de hematoxilina e armazenada em temperatura ambiente durante 1 minuto. Em seguida, a amostra de secção é lavada por água deionizada e imersa na água deionizada durante 10 minutos. A seguir, a amostra de secção é também manchada por solução de eoxina durante 6 minutos, e em seguida lavada por água deionizada durante 8 minutos. Em seguida, a amostra de secção manchada é sequencialmente desidratada pelos álcoois com concentrações de gradiente (75%, 85%, 95%, e 100%) e desidratada por ar. Após a desidratação, a amostra de secção manchada é montada e observada em um miscroscópio ótico (DM6000B, Leica).

Primeiro procedimento teste: teste mecânico [0082] Uma amostra (isto é, a lâmina a ser testada) é cortada como pedaços em forma de halteres com base nas regulamentações de ASTM D638-2003 e fixada em uma fixação de uma máquina de teste universal (3365, INSTRON). O teste mecânico é realizado pela máquina de teste universal com a velocidade de 5 mm/minuto e a força de 500 N. O número de amostras é maior do que ou igual a 6, e a tensão final média das amostras é calculada.

Segundo procedimento teste: teste de transmitância de luz [0083] Uma amostra (isto é, a lâmina a ser testada) é imersa no DDW durante 16 horas para reidratar. Aqui, 8 pedaços da amostra são imersos em 500 ml de DDW. A amostra é cortada em um pequeno disco com 0,7 cm de diâmetro, e cada pequeno disco é colocado em uma cavidade do prato de multicavidades juntamente com os 100 μΙ de DDW. A absorvência do pequeno disco é medida por um medidor ELISA (Sunrise, TECAN) de 400 nm a 700 nm. A cavidade de controle é somente adicionada aos 100 pi de DDW. A absorvência média da absorvência para 400 nm a 700 nm é calculada. A transmitância de luz é calculada de acordo com a seguinte fórmula;

[0084] A=log 1/T

[0085] T representa a transmitância de luz, e A representa a média da absorvência medida do pequeno disco.

Terceiro procedimento teste: teste de espessura [0086] A espessura de uma amostra (isto é, a lâmina a ser testada) é medida por um medidor de espessura de película em uma pluralidade de posições diferentes e aleatórias, e a espessura média da espessura nas posições diferentes e aleatórias é calculada para obter a espessura testada da amostra.

Quarto procedimento teste: teste de capacidade de costura [0087] Uma amostra (isto é, a lâmina a ser testada) é cortada em tamanho de 1*1 cm. A amostra cortada é encadeada embora a posição a 0,2 cm das bordas superiores e inferiores da mesma por suturas não absorvíveis (STIN-ST4 4.0). O encadeamento de sutura superior através da borda superior é fixado em um estágio de teste de capacidade de costura, e um objeto pesado é suspenso do encadeamento inferior através da borda inferior. O peso do objeto pesado quando a amostra de corte quebra é a capacidade de costura da amostra.

Quinto procedimento teste: teste de conteúdo de água [0088] Uma amostra desidratada é obtida e pesada para registrar seu peso original. Em seguida, a amostra desidratada é duas vezes aquecida por um forno de secagem a 105±3°C até a variação de peso ser menos do que 0,05% do peso original. Após aquecimento, a amostra aquecida é pesada para registrar seu peso aquecido. O conteúdo de água é calculado de acordo com a seguinte fórmula; o conteúdo de água=[(o peso original-o peso aquecido)/o peso original]x100%.

Primeiro experimento: a observação da pele de peixe original [0089] Na visão macroscópica, a pele de peixe original com escamas de peixe é branca e opaca, e a pele de peixe original tem uma grande quantidade de cromatóforos na estrutura de bolsa, como mostrado na figura 14.

[0090] A pele de peixe original com escamas de peixe é tratada na amostra para medição SEM pelo primeiro procedimento de preparação.

[0091] O corte transversal da pele de peixe original é mostrado na figura 15, onde a superfície da pele de peixe original tem tecidos conectivos salientes como bolsa para proteger a escama de peixe. Além da estrutura de bolsa, o corte transversal da pele de peixe originai em maior ampliação é mostrado nas figuras 16 e 17, onde a pele de peixe original tem uma estrutura de camada.

Segundo experimento: o procedimento de purificação [0092] Após a pele de peixe original (armazenada em um estado de baixa temperatura menor do que 4°C) ser obtida, as escamas de peixe são completamente removidas da pele de peixe original por meios manuais para obter a pele de peixe descarnada, e a pele de peixe descarnada é lavada com água limpa para remover os fluidos dos tecidos e sangues para obter a pele de peixe descarnada limpa. A pele de peixe descarnada limpa é imersa em uma solução de mistura tendo NaOH a 0,5 M e NaCi a 0,5 M durante 12 horas, de modo que a pele de peixe inche e torne-se opaca (chamada como a pele de peixe tratada). Em seguida, a pele de peixe tratada é lavada com o volume igual de água agitando a água, e a água é renovada uma vez ou repetidamente para repetidamente lavar a pele de peixe até a solução de mistura ser removida (isto é, até a cor da pele de peixe tornar-se branca, e o valor de pH ficar neutro). A pele de peixe tratada (neutra) é imersa em solução de ácido acético a 1 L/0,3 M durante 60 minutos. Após a imersão da solução de ácido acético, as estruturas de bolsa sobre a superfície da pele de peixe tratada tornam-se frágeis, e as estruturas de bolsa podem ser completamente removidas por um dedo, para obter a pele de peixe purificada (a seguir referida como primeira pele de peixe purificada).

Terceiro experimento: o procedimento de purificação [0093] Após a pele de peixe original (armazenada em um estado de baixa temperatura menor do que 4°C) ser obtida, as escamas de peixe são completamente removidas da pele de peixe original por meios manuais para obter a pele de peixe descarnada, e a pele de peixe descarnada é lavada com água limpa para remover os fluidos de tecido e sangues para obter a pele de peixe descarnada limpa. A pele de peixe descarnada limpa é imersa em uma solução de mistura tendo NaOH a 0,1 M e 10% de NaCI durante 12 horas, de modo que a pele de peixe inche e torna-se opaca (chamada como a pele de peixe tratada). Em seguida, a pele de peixe tratada é lavada com o volume igual de água agitando a água, e a água é renovada uma vez ou repetidamente para repetidamente lavar a pele de peixe até a solução de mistura ser removida (isto é, até a cor da pele de peixe tornar-se branca, e o valor de pH ficar neutro). A pele de peixe tratada (neutra) é imersa em solução de ácido acético a 0,1 M durante 30 minutos. Após a imersão da solução de ácido acético, as estruturas de bolsa sobre a superfície da pele de peixe tratada tornam-se frágeis, e as estruturas de bolsa podem ser completamente removidas pela ferramenta sem corte, para obter a pele de peixe purificada (a seguir referida como segunda pele de peixe purificada).

Quarto experimento: a observação da segunda pele de peixe purificada [0094] A segunda pele de peixe purificada é tratada em uma amostra para medição SEM pelo primeiro procedimento de preparação.

[0095] O corte transversal da segunda pele de peixe purificada tem uma matriz de colágeno, e a matriz de colágeno é a estrutura de camada formada com uma pluralidade de fibras de colágeno, como mostrado na figura 18. Com referência à figura 18, as fibras de colágeno são livremente dispostas em uma pluralidade de camadas da estrutura de camada, as fibras de colágeno na mesma camada são dispostas na mesma direção, e as fibras de colágeno em duas camadas adjacentes cruzam em ângulo de 90 graus na horizontal. Além disso, existem as fibras longitudinais verticais àquelas camadas horizontais.

Quinto experimento: o procedimento de modelagem, o procedimento de estabilização e o procedimento de reticulacão [0096] A primeira pele de peixe purificada é imersa em uma solução de ácido acético a 0,5L/0,3 M durante 24 horas, de modo que a primeira pele de peixe purificada vem em um estado moldável (a seguir referida como primeira lâmina moldável) em que a espessura e a forma podem ser controladas facilmente.

[0097] A primeira lâmina moldável é colocada em um molde com uma superfície lisa para obter a lâmina moldada, e em seguida a lâmina moldada é colocada em um exaustor Juntamente com o molde até a lâmina moldada ser completamente desidratada. Após a desidratação, a lâmina moldada é imersa em 1 L de água agitando a água até a solução ser lavada. Em seguida, a lâmina moldada é colocada no molde novamente, e em seguida é completamente desidratada novamente. Conformemente, a lâmina eticamente clara em estado estável é obtida (a seguir referida como primeira lâmina estável).

[0098] Em um caso, a primeira lâmina estável é colocada em uma posição a 50 cm de distância da luz UV (110 V, 8 W, e 254 nm). Cada superfície da primeira lâmina estável é iluminada pela luz UV durante 60 minutos duas vezes por superfície, para a lâmina oticamente clara em estado estável (a seguir referida como segunda lâmina estável).

[0099] Em outro caso, a primeira lâmina estável é colocada em uma solução de BDDE a 1 % (ou 0,05 % de GA) durante 12 horas juntamente com agitação da solução de BDDE. Em seguida, a primeira lâmina estável é lavada pela água deionizada três vezes durante 10 minutos por vez, para a lâmina oticamente clara em estado estável (a seguir referida como terceira lâmina estável).

Sexto experimento: a observação da primeira lâmina moldável [00100] Na visão macroscópica, a primeira lâmina moldável é transparente e tipo um gel de água, como mostrado na figura 19.

[00101] A primeira lâmina moldável é tratada em uma amostra para medição SEM por um primeiro procedimento de preparação. Sob medição SEM, o corte transversal da primeira lâmina moldável é mostrado na figura 20, onde a estrutura de camada da primeira lâmina moldável está solta.

[00102] A primeira lâmina moldável é tratada na amostra de seção manchada pelo segundo procedimento de preparação. Na amostra de seção manchada da primeira lâmina moldável observa-se que a primeira lâmina moldável não mantém qualquer célula, como mostrado na figura 21. Sétimo experimento: a observação da primeira a terceira lâminas estáveis [00103] Na visão macroscópica, a primeira lâmina estável é transparente e lisa, como mostrado na figura 22.

[00104] A primeira lâmina estável é tratada em uma amostra para medição SEM pelo primeiro procedimento de preparação. Sob medição SEM, o corte transversal da primeira lâmina estável é mostrado nas figuras 23 e 24, onde a estrutura da primeira lâmina estável é densa e a superfície da primeira lâmina estável é muito lisa.

[00105] As tensões finais médias da primeira a terceira lâminas estáveis são mostradas na seguinte tabela 1.

Tabela 1 [00106] As tensões finais médias da primeira a terceira lâminas estáveis encontram-se perto de ou maiores do que as da córnea humana normal.

Oitavo experimento: o procedimento de modelagem [00107] A(s) segunda(s) pele(s) de peixe purificada(s) é(/são) cortada(s) em pequenos discos com 16 mm de diâmetro, os pequenos discos divididos em 40 grupos. Os 40 grupos dos pequenos discos são imersos na solução de ácido acético nas diferentes condições de reação como mostrado na seguinte tabela 2.

Tabela 2 [00108] Após a imersão, a segunda pele de peixe purificada nos 30" e 33° ao 40° grupos foi avariada, isto é, suas formas não puderam se manter.

Nono experimento: o procedimento de modelagem e o procedimento de estabilização [00109] A segunda pele de peixe purificada é cortada da parte traseira do peixe, a parte da barriga do peixe e a parte da cauda do peixe onde têm menos colágeno e não podem dilatar melhor, para reter porção retangular central da segunda pele de peixe purificada. O tamanho da porção retangular central é 7*24 cm. A porção retangular central é novamente cortada em 8 pedaços com o tamanho de 7*3 cm. Aqui, a superfície de cada pedaço se origina da superfície da porção retangular central. Cada pedaço é imerso em uma solução de ácido acético a 0,5L/ 0,1 M durante 6 horas, e em seguida colocado no gelo durante 16 horas. Em seguida, cada pedaço é laminado nas lâminas {a seguir referidas como segunda lâmina moldável).

[00110] A segunda lâmina moldável é tratada de acordo com a precedente primeira modalidade da etapa de estabilização, para obter a lâmina eticamente clara em estado estável (a seguir referida como quarta lâmina estável). A segunda lâmina moldável é tratada de acordo com a precedente segunda modalidade da etapa de estabilização, para obter a lâmina eticamente clara em estado estável {a seguir referida como quinta lâmina estável). A segunda lâmina moldável é tratada de acordo com a precedente terceira modalidade da etapa de estabilização, para obter a lâmina eticamente clara em estado estável (a seguir referida como sexta lâmina estável). A segunda lâmina moldável é tratada de acordo com a precedente quarta modalidade da etapa de estabilização, para obter a lâmina eticamente ciara em estado estável (a seguir referida como sétima lâmina estável). Décimo primeiro experimento: a observação da quarta a sétima lâminas estáveis [00111] O corte transversal da quarta lâmina estável sob medição SEM é mostrado na figura 25, onde a quarta lâmina estável retém as fibras de colágeno longitudinais, porém a estrutura da quarta lâmina estável está solta e as tensões finais médias da mesma são relativamente baixas (forma inchaço).

[00112] O corte transversal da quinta lâmina estável sob medição SEM é mostrado na figura 26, onde a quinta lâmina estável retém as fibras de colágeno longitudinais, e a transmitância de luz da segunda lâmina estável é cerca de 70%.

[00113] O corte transversal da sexta lâmina estável sob medição SEM é mostrado na figura 27, onde apesar da sexta lâmina estável perder algumas fibras de colágeno longitudinais, a sexta lâmina estável ainda tem a maior parte das fibras de colágeno longitudinais. A transmitância de luz da sexta lâmina estável é cerca de 80-85%, e as tensões finais médias da sexta lâmina estável são perto daquelas da sétima lâmina estável.

[00114] O corte transversal da sétima lâmina estável sob medição SEM é mostrado na figura 28, onde apesar da sétima lâmina estável perder algumas fibras de colágeno longitudinais, e a estrutura da mesma ser ordenada e estreitamente empilhada, a sétima lâmina estável ainda tem a maior parte das fibras de colágeno longitudinais. A transmitância de luz da sétima lâmina estável é maior do que 90%, e as tensões finais médias da sétima lâmina estável são 2,5 vezes maiores do que aquelas da quinta lâmina estável. Décimo segundo experimento: as diferentes espessuras [00115] Em um caso, a segunda lâmina moldável é cortada por ferramenta braçadeira de 2 mm, e em seguida é tratada de acordo com a precedente quarta modalidade da etapa de estabilização, para obter a lâmina eticamente clara em estado estável (a seguir referida como oitava lâmina estável).

[00116] Em outro caso, a segunda lâmina moldável é cortada por ferramenta braçadeira de 5 mm, e em seguida é tratada de acordo com a precedente quarta modalidade da etapa de estabilização, para obter a lâmina eticamente clara em estado estável (a seguir referida como nona lâmina estável).

[00117] A espessura da oitava lâmina estável é 208±36,8 pm, a transmitância de luz da oitava lâmina estável é maior do que ou igual a 90%, e a capacidade de costura da oitava lâmina estável é maior do que ou igual a 40 g.

[00118] A espessura da nona lâmina estável é 500±60,8 pm, e a capacidade de costura da nona lâmina estável é maior do que ou igual a 55 g.

[00119] A relação da espessura de corte e a espessura final (após estabilização) é cerca de 1:0,1. Décimo segundo experimento: o teste de teor de água [00120] A segunda lâmina moldável é cortada, e em seguida é tratada de acordo com a quarta modalidade anterior da etapa de estabilização, para obter a lâmina eticamente clara em estado estável (aqui a seguir referida como a décima lâmina estável).

[00121] Quando a décima lâmina estável tem a espessura de 200 pm, o teor de água da mesma é de cerca de 90%. Décimo terceiro experimento: teste de citotoxicidade [00122] O teste de teste de citotoxicidade é realizado de acordo com ISO10993-12. O extrato de material é extraído da sétima lâmina estável, e em seguida extrato de material é adicionado no meio de cultura para cultivar as células. O valor testado do meio de cultura com o extrato de material dividido pelo valor testado do meio de cultura sem o extrato de cultura é igual a maior do que 92%. O resultado do teste de citotoxicidade maior do que 70% significa passagem. Décido quarto experimento: o procedimento de moldaqem, o procedimento de estabilização e o procedimento de reticulacão [00123] A segunda pele de peixe purificada é cortada da porção posterior do peixe, e a porção da barriga do peixe e a porção da cauda do peixe onde têm menos colágeno e não podem melhor dilatar-se, para manter a porção retangular central da segunda pele de peixe purificada. O tamanho da porção retangular central é 7*24 cm. A porção retangular central é cortada novamente em 8 pedaços com o tamanho de 7*3 cm. Aqui, a superfície de cada secção se origina do corte transversal da porção retangular central. Cada pedaço é imerso em uma solução de ácido acético de 0,5L/ 0,1 M durante 6 horas, e em seguida colocado em gelo durante 16 horas, para obter a lâmina moldável (aqui a seguir referida como a terceira lâmina moldável).

[00124] A seguir, a terceira lâmina moldável é tratada de acordo com a quarta modalidade anterior da etapa de estabilização, para obter a lâmina eticamente clara em estado estável (aqui a seguir referida como a décima primeira lâmina estável). Décimo Quinto experimento: a observação da décima primeira lâmina estável [00125] Quando a décima primeira lâmina estável tem a espessura de 50 pm a 60 pm, a transmitância de luz da décima primeira lâmina estável é maior do que ou igual a 95%, e a capacidade de costura da oitava lâmina estável é maior do que ou igual a 60g. Quando a décima primeira lâmina estável tem a espessura de 90 pm a 170 pm, a transmitância de luz da décima primeira lâmina estável é maior do que ou igual a 90%, e a capacidade de costura da oitava lâmina estável é maior do que ou igual a 60 g. Quando a décima primeira lâmina estável tem a espessura de 190pm a 250pm, a transmitância de luz da décima primeira lâmina estável é maior do que ou igual a 85%, e a capacidade de costura da oitava lâmina estável é maior do que ou igual a 60 g. Quando a décima primeira lâmina estável tem a espessura de 280 pm a 320 pm, a transmitância de luz da décima primeira lâmina estável é maior do que ou igual a 70%, e a capacidade de costura da oitava lâmina estável é maior do que ou igual a 60g. A maior capacidade de costura é maior do que 150 g. As tensões finais médias da décima primeira lâmina estável são 2 vezes maiores do que aquelas da sétima lâmina estável. Décimo sexto experimento: Preparação de uma solução de coláqeno [00126] A segunda pele de peixe purificada é imersa em uma solução de ácido acético a 0,01 M durante 2 horas, e em seguida removidas as impurezas, para obter a lâmina moldável. A seguir, a solução de colágeno é extraída desta lâmina moldável por um procedimento de extração. Décimo sétimo experimento: Preparação de uma esponja de coláqeno [00127] A segunda pele de peixe purificada é imersa em uma solução de ácido acético a 0,1 M durante 1 hora, e em seguida liofilizada, para obter a esponja de colágeno. Décimo oitavo experimento: Preparação de uma película de coláqeno [00128] A segunda pele de peixe purificada é imersa em uma solução de ácido acético a 0,01 M durante 2 horas, e em seguida removida a camada externa, para obter a lâmina moldável. A seguir, a lâmina moldável é imersa novamente em uma solução de ácido acético a 0,1 M durante 1 hora, para obter a película de colágeno.

[00129] Como acima, de acordo com as modalidades, o material de reparo de tecido de pele de peixe e método de fabricação do mesmo são aplicados para fornecer o material de reparo de tecido adequado para uso como um emplastro, um revestimento, um veículo, uma sustentação, um implante ou um reagente em vários tecidos. O material de reparo de tecido tem colágenos para melhorar o reparo do tecido ferido, e tem características particulares quanto à aplicação de reparo de tecido desejada. Além disso, até agora os fatores da doença transmitida por animal terrestre (causada por vírus) não sobreviveram no material de reparo de tecido de pele de peixe.

REIVINDICAÇÕES

Claims

1. Material de reparo de tecido derivado de pele de peixe, caracterizado pelo fato de compreender; uma lâmina oticamente clara derivada de uma pele de peixe, a lâmina oticamente clara sendo célula clara e compreendendo uma matriz de colágeno e água na matriz de colágeno.

2. Material de reparo de tecido derivado de pele de peixe de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a lâmina oticamente clara tem uma transmitância de luz maior do que ou igual a 70%, uma tensão final maior do que ou igual a 5 MPa, e uma capacidade de costura maior do que ou igual a 40g.

3. Material de reparo de tecido derivado de pele de peixe de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a matriz de colágeno é uma estrutura de camada formada com uma pluralidade de fibras de colágeno, e cada uma das pluralidades de fibras de colágeno se estende ao longo de uma superfície da lâmina oticamente clara.

4. Material de reparo de tecido derivado de pele de peixe de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a matriz de colágeno é uma estrutura de camada formada com uma pluralidade de fibras de colágeno, e uma parte da pluralidade de fibras de colágeno se estende ao longo de uma direção de uma superfície da lâmina oticamente clara à outra superfície da lâmina oticamente clara.

5. Material de reparo de tecido derivado de pele de peixe de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a lâmina oticamente clara é derivada da pele de peixe completamente sem escamas de peixe e uma carne de peixe.

6. Material de reparo de tecido derivado de pele de peixe de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a lâmina oticamente clara é derivada da pele de peixe sem moagem.

7. Material de reparo de tecido derivado de pele de peixe de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a lâmina eticamente clara é feita por um método de fabricação compreendendo a remoção de escamas de peixe, óleo, células, cromatóforos e estruturas de bolsa da pele de peixe para obter uma pele de peixe purificada, tratamento da pele de peixe purificada com a primeira solução acídica para obter uma lâmina moldável sem ruptura, moldagem da pele de peixe moldável para obter uma lâmina moldada em uma forma particular, e realização de um procedimento de estabilização para estabilizar a lâmina moldada.

8. Método de fabricação de um material de reparo de tecido derivado de pele de peixe, caracterizado pelo fato de compreender; obtenção de uma pele de peixe sem uma carne de peixe; remoção de escamas de peixe, óleo, células, cromatóforos e estruturas de bolsa da pele de peixe para obter uma pele de peixe purificada; e tratamento da pele de peixe purificada com solução acídica para obter uma lâmina moldável sem ruptura.

9. Método de fabricação de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de ainda compreender a lavagem da pele de peixe moldada com água.

10. Método de fabricação de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de ainda compreender a desidratação da lâmina moldada antes da etapa de lavagem.

11. Método de fabricação de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de ainda compreender a desidratação da lâmina moldada após a etapa de lavagem.

12. Método de fabricação de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de ainda compreender rei d ratar a lâmina moldada após as etapas de desidratação.

13. Método de fabricação de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de ainda compreender a desidratação da lâmina moldada antes da etapa de lavagem.

14. Método de fabricação de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de ainda compreender; moldagem da pele de peixe moldável para obter uma lâmina moldada em uma forma particular.

15. Método de fabricação de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a etapa de moldagem compreende cortar a lâmina moldável para obter a lâmina moldada, em que uma superfície da lâmina moldada é um corte transversal da lâmina moldável.

16. Método de fabricação de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a etapa de moldagem compreende cortar a lâmina moldável para obter a lâmina moldada, em que uma superfície da lâmina moldada é uma superfície da lâmina moldável.

17. Método de fabricação de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de ainda compreender: extração de uma solução de colágeno da lâmina moldável.

18. Método de fabricação de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de ainda compreender; liofilização da lâmina moldável.

19. Método de fabricação de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de ainda compreender: remoção de pelo menos uma camada externa da lâmina moldável: e tratamento da lâmina moldável sem pelo menos uma camada externa com solução acídica.

20. Material de reparo de tecido derivado de pele de peixe caracterizado pelo fato de ser feito pelo método de fabricação como definido na reivindicação 8.