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FIDIA S. P. A., Via Ponte della Fabbrica, 3/A, 35031 Abano Terme, Italie MELANGE DE GANGLIOSIDES UTILE COMME INSTRUMENT THERAPEUTIQUE D'ELIMINATION D'EFFETS DOULOUREUX DE NEUROPATHIES PERIPHERIQUES
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Priorité de la demande de brevet en Italie No. 48491 A/84 o3J'e du 1984.
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MELANGE DE GANGLIOSIDES UTILE COMME INSTRUMENT THERAPEUTIQUE C'ELIMINATION DELIMINtiliON DIL,--FFL- : i-S D0J : L-Olu'R-'-UX DE NEI. : ROPATHY-r < z E-rn K uc-
La présente invention concerne une composition spécifique constituée d'un mélange de gangliosides dont on a trouvê qu'i'i possêdmt unp
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activité de sou'iagement Les glioside5 1' de membranes celua'ires, en particulier des neurones. Ces composants sont dans de différentiation de régénératien des neurones. Une application exogène de gangliosides leur permet , aCi-, n StaLle de s'insérer de facon stable des neurones.
Cette icorporat. activation e' x mpmhranes:consistdr'te'!(Nd.K) 'actTw'ltë Le11E dti0 ln C2se. e de cirinc'r'.'atc"par ''c'rat'' 'o'o''-nfe rveu ristiq dans les processus de réinnervation musculaire de restaL'rat'io Des preuves électrophysioioqi- -. ues et-, ar u,- ! ques OL t'-e'i übtenues aux. la récupération de la fonction sensorielle nerveuse après transection des nerfs, : de la douleur ou analgésique importante.guérison des dommages causés aux nerfs cochléaires par le bruit, la guérison des neuropathies diabétiques chez des souris diabétiques mutantes et la guérison des intoxications par les neurotoxines.
Les gangliosides sont des glycolipides acides appartenant à la famille des composés biologiques appelés glycosphingolipides. lis sont composés de 4 unités structurelles de base : un aminoalcool à longue
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chaîne, un acide gras, un radical oligosaccharide et un ou plusieurs restes sialosyles.
1. cerveau est ogue -. est la 4-eicosasphingénine ; ces composés sont communément désignés sous le nom de sphingosmes-
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CHOH H-C-NH0 n = H-C-OH c .-7 \\/ " I c (CH)-CH, . ?) n-'i
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Les composés saturés également dans les gangliosides.
2. gras est relié à ! sphingosine au moyen d'une liaison amide. Dans les gangllosides gras est B 'scide rencontre en moindre cirle erac' p V) 'fide 'n' : t' ac''de -'- /ir/l. \ . . 11--x , , -, < -. m : ! ;.-=t : : . ,.
1'ünité ide hydrophobe de la molécule de ganglioside.
3.-La au céramide est tique appartiennent' les Les sphingolipides se classent deux sous-groupes, sur la base de l'hydrate de carbone immédiatement Le premier sous-groupe. dérive du galactosyle céramide.
La plupart des glycosphingolipides, donc sensiblement tous les gangliosides, appartiennent au sous-groupe dérivé du glucosyle céramide.
4.-L'acide sialique est présent dans les gangliosides du cerveau surtout sous sa forme N-acétyle mais, dans quelques espèces de gangliosides, on a également identifié la forme N-glycolyle. Ce
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reste est généralement désigné sous le nom d'acide neuraminique (NANA ou NGNA).
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F-ig. ne hémicétal.
Le ca'ractère ios'ides ne o'i'igusacchar-ide et au nombre de restes cette chaîne.
D' des gangliosides La de gangliosides la plus élevée se trouve dans la mtière de f'NA ds de at'iveent C, des) sar Rp'-. , tot r-'/ s i'Jf ffiàmmifères 4 re s e s t+ e--ons t-4141, 91 ride est identique : 1 ! 1 Li Gal p 1 + 3GalNAc 61- 4 Gal bol- > Glc 61 Cer La majorité rnòll est constituée de gangliosides auxquels manquent Ie motif galactose terminal (Svennerhom L., Mansson Li Y., J. Biol. Chem. 248 : 740 Structure et nomenclature des gangliosides On a isolé et purifié les gangliosides du cerveau par chromatographie. La structure du ganglioside G.., a été déterminée la première et on a démontré qu'elle était commune aux quatres principaux gangliosides présents dans le cerveau des mammifères.
Le tableau 1 donne une description sommaire de leurs structures et il est suivi de descriptions distinctes détaillées des quatre principaux du cerveau des mammifères.
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TOS TABLEAU SOMMAIRE DE LA STRUCTURE DES GANGLIOSIDES
EMI5.2
EMI5.3
TABLEAU 1 Structures des osces in'r" r. le princi !-of--v------1, k...
EMI5.4
<tb>
<tb>
- <SEP> L'asymhole <SEP> selon
<tb> abréviation <SEP> selon <SEP> IUPAC-AUB <SEP> R <SEP> R
<tb> Svennerholm*
<tb> GM1 <SEP> II3α-NeuAc-GgOserCer <SEP> H <SEP> H
<tb> GD1a <SEP> II3α-NeuAc-IV3-α-NeuAc-GgOse4Cer <SEP> NAN <SEP> H
<tb> GD1b <SEP> II3α-(NeuAc)-2GgOse4Cer <SEP> H <SEP> NANA
<tb> GT1b <SEP> II3α-(NeuAc)-2-IV3-α-NeuAc-GgOse4Cer <SEP> NANA <SEP> NANA
<tb>
EMI5.5
* L., J. Neurochem. 1û, 613 1.
Le ganglioside GEL présente la structure simple des quatre gangliosides principaux ; les autres la identiques à l'exception de 1'addition de un ou plusieurs restes sialosyles reliés par des liaisons glycosides au radical oligosaccharide.
1. 1 Structure Galei- (3
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Les substituants sur 1'oligosaccharide de base sont donnés au début de leur nom par un chiffre romain qui indique le reste
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monosaccharide est situé substituant. Un chiffre de la liaison glycoside.
1. 2 Formule empirique (Kuhn Wiegandt H, (1963), (à partir du cêramide) sur lequel96, 866)
C13H131 N3031 1. 3 Poids moleculaire
1536,9, calculé sur la base de 2 Gal, 1 Glc, 1 NANA,
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1 GalNAc, sphingosine (CI8 acide stéarique.
2.-Ganglios'!de 2.
NeuAca2 2. 2 Foniiu' L vo rpiu 1 iip 1 l96, 866) v84"148"4u39 2. 3 Poids moléculaire 1838, 0 calculé sur la base de 2 Gal, 1 Clc, 2 NANA, l GalNAc,
EMI6.3
ioSie ip. /9 oe 3.-GhdeG 3.
C .''NAcSl G5' 1 3. 'leqandt 95, 84"148"'4 39 016, 894) LQ4h A'2 N40, 20 - -' 's OtCculare 1838 base de 2 1 sphingosine ..). acide stéarique.
. 18 : 1 4.
1 b 4. 1 Structure NeuAca2 -2aNeuAc82aNeuAc) 4.2 Formule empirique (Kuhn R., Wiegandt H. (1963), Chem. Ber.
96, 866) C95H16547 4.3 Poids moléculaire
2129,4 calculé sur la base de 2 Gal, 3 NANA, 1 GalNAc,
1 sphingosine (CI8 : 1)' 1 acide stéarique.
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On a maintenant trouvé qu'un mélange particulier de gangliosides procurait à la fois une activité de stimulation de réinnervation des
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nerfs et une activité analgésique. On a trouvé qu'un melange dans un 1 rapport spécifique des gangosidesG.,,,G.Gr.-.. mi, G Dla'D-1 b i% Tlb Présen4 !--a4 ! t- une activité analgésique significative que 1'on ne connaissait pas auparavant pour ces mélanges.
La présente invention a pour but de procurer une composition pharmaceutique constituée d'un melange de gangliosides possédant une activité analgésique.
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1 La présente invention a pour de procurer une composition pharmaceutique constituée d'un mélange des gangliosideG..,,Gp)-., GDlb U. U lib qui en résulte possède une activité analgésique supérieure à celle des composants individuels du melange
La présente invention a pour but en outre de procurer une methode de traitement de la douleur occasionnée par des neurophaties périphéri- ques par administration d'un composition constituée d'un mélange de
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gangliosides, en particulier un melange ,, , t et G La présente'invention efnent tant externe d'une compositicn tique el p' (a) t pet dpla peaub cnnti=nan . +4o,- D'armaceutiQ ! ! e. une composition DharmaceutiQue :
des gangliosides G(b) ladite composition pharmaceutique, constituée d'une part d'une quantité efficace pour ie soulagement de la douleur,
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¯C, n-¯t44-Ué nar d'au moins groupe constitué G d'un véhicule ou Mi'Dla'Dib Tlb un gang1ioside chûisi dans leexcipient phermaceutiquement acceptable permettant à ces gangliosides de passer à travers la peau.
Ces buts de 1'invention et d'autres encore s'obtiennent pas la préparation d'une composition qui est un melange des gangliosides G,, Gela, gelb et GTlb dans un rapport spécifique de poids. Cette composition présente une activité analgésique significative et elle est utile au traitement et au soulagement de la douleur occasionnée par divers neuropathies périphériques.
Comme on l'a discuté ci-dessus, les gangliosides représentent une famille de molécules de glycolipides complexes, composants naturels des
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membranes cellulaires. Les gangliosides étant surtout associés à la membrane des neurones, il a été suggéré (Fishman et col1., Science, 194, 906-915) qu'ils pouvaient jouer un rôle dans ie transfert de l informa-
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tion par ces membranes. Cette suggestion a été confortée par une série d'observations impliquant ces molécules dans toute une série d'événe- ments liés à la membrane des cellules, y compris 1e développement des neurones (Dimpfel W. et coll., "Gangliosides in Neurological and Neuromuscular Function, Development and Repair". Eds.
Rapport and Gorio, Raven Press 119-134 (1981)), différentiation (Leon A. et coll., 1981a) "Membranes in Growth & Development". Hoffman et coll., 311-320, (1981) et régénration (Gorio A. et coll. "Gangliosides in Neurological and Neuromuscular Function, Development and Repair". Eds. Rapport and Gorio, Raven Press 177-195).
11 a été démontré qu'un melange des gangliosides GM1, GD1a, GD1b et GT purifié en vue de leur utilisation parentéraie possédait une activité de stimulation de la réinnervation due à 1'amélioration du bourgeonnement nerveux (Gorio A. et coll.
Bram Res. 197, 236-241
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i i (1980)). du bourgeonnement nerveux a êtê conf. me B (Rciser ., , !'.'. ... .'..-. . ..-.- ''2 c'7''/iooi. i-, i o rc, r 4-1, R P Co -er, 19 197 0')' Defects e Les modèles animaux in vivo (dénervation d'un muscle du rat par
L'activitê de promotionécrasement du nerf sciatique, dénervation partielle du muscle soleus du rat par résection et dislocation de la racine nerveuse en L5) ont donné des preuves à la fois électrophysiologiques et morphologiques d'une amélioration du bourgeonnement des nerfs collatéraux, après traitement
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on TP) @ par des gangliosides exogènes (5 50 mg/kg/j par injection IP), ce traitement conduisant à une récupération fonctionnelle rapide.
Des preuves électrophysiologiques et fonctionnelles d'une guérison accélérée de dommages nerveux produite par un traitement aux gangliosides a été décrite sur plusieurs modèles animaux, dont la récupération de la fonction nerveuse sensorielle après transection des nerfs (Norido F. et coll., Experientia, 37,301-302 (1981) ; la guérison d'un nerf cochléaire endommagé par le bruit (Aporti F. et coll. Nuovo Arch. Otol. Rinol.
Laringol. 5, (1), 25-32 (1977) ; la guérison d'une neuropathie diabétique
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chez des souris atteintes d'un diabète congénital (Norido F. et coli., Muscle & Nerve), 5,107-110 (1982)) ; la guérison d'une intoxication par des toxines ayant endommagées les nerfs (Aporti F. et col1., Acta
EMI9.1
Otolaryngologica, 92, 433-437, (1981) mcal 1 1 ; Maroni M ; et coll. CToxicology 18, (12), 1475-1484 (1981).
Sur la base de ces données expérimentales ; Ie melange des ganglio-
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sides 11'Gnl'Gnlb et G, est indiqué en thérapeutique comme étant I'- U a'u 11. " utile dans une large gamme de conditions du système nerveux périphérique dans ! er
Ces neuropathies périphériques comprennent : Polyneuropathies dysmethaboliques Neuropathte d-iabetlque, Pozza G. et coll., "Gangliosides in Neurological and Neuromuscular Function, Development and Rapair". Eds.
Rapport and Gario. Raven Press 253-258 (1981) ; Bassi S. et cGll.. Muscle & Nerve, 5, 351-356 (1982); neuropathie urémique, Catizone L. et coll., Clin.Terap.,85, (4),395(1978).
Neuropathies mécaniques
Le syndrome dit carpal tunnel syndrom, Trontel J.V. et coll.,
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Effects of cerebral gangliosides in carpal tunnel syndrome (1981).
C : j . or 1eìle r' .-T'M 1. 3'' P. . hC ?--.--.... ..-.-...- -'t -----,.. -.. . ...
't-am'iQWQ i /) 11 n nhc '71 europathies Neuropathie Policlìnicv-Sez. 85, (4), 255-262 (1978) ; neuropathie Mamoli B. et coil. Europ. Neurol. 19, 320-326 (1980) Bassi S. et colt., ElectroyoQrsph'ic cohoc yieurooath' patients treated with gangliosides. Nerve, 5, 351-356 (1982).
Neuropathies diverses (Bell'spalsy,NegrinM.etcoll.,Min.Med.,69(48),3277-3282 (1978) ; syndromes menieriformes, Molino R. et coll., Giorn. It. Ric.
Clin. Terap., 2, 102-106 (1978) ; ulcères neurotrophiques, Ferrandi C., 11 Policlinico (Sez. Medica) 89 (3), 279-289 (1981)).
Methode de Préparation
Les composants individuels des gangliosides qui forment la composition selon 1'invention peuvent s'extraire par divers modes opératoires connus en soi. Par exemple, le cortex du cerveau des bovins (tissu nerveux) extrait des animaux est homogénéisé dans un tampon de phosphate
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fà pH 6,8. Six (6) volumes de tétrafuranne sont alors ajoutés et 1'on centrifuge le mélange qui en résulte. La fraction qui surnage ou flotte en surface est ré-extraite deux fois avec du têtrahydrofuranne. Aprês
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centrifugation les matiëres res tes par fractionnement avec de l'ethylether et 1 la phase de nor : po''aires ou apotatétrahydrofuranne aqueuse dans une colonne d'échange d'ions équilibrée par de l'éthanol à 50%. Comme éluant, on utilise de l'éthanol (50%).
A l'effluent de la colonne, on ajoute de 1'hydroxyde de baryum et quatre volumes d'éthanol glacé. Après 18 heures dans des conditions froides, on recueille un précipité et l'on ajoute ensuite une petite quantité d'acide chlorhydrique pour la redissolution dans l'eau. Cette solution
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est isêe. en ganglioside brut par de tissu
On disperse la poudre lyophilisée dans 20 volumes d'un mélange chloroforme/méthanol (2/1),onfiltrelasolutionpourqu'ellesoit claire et on fractionne par addition de 0, 2 volume de solution de chlorure de potassium dans l'eau (0, 88%). La phase supérieure est séparée, dialysée et lyophilisée. Le rendement final est d'environ 0 : 3 ma de ganglioside par gramme de tissu nerveux.
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Pour séparer or. iPeur séparer s rle5 lcique des milages nol forme. Avant 'L faut procéder dr spas 3'"3. re d'activité d'histamine.
Compositions pharmaceutiques Po Hcn formulation de gang'hosides dolt contenir les gangliosides les fractiQindividuels dans les rapports suivants :
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<tb>
<tb> Ganglioside <SEP> individuel <SEP> % <SEP> en <SEP> poids
<tb> . <SEP> GM1 <SEP> .......................... <SEP> environ <SEP> 19 <SEP> à <SEP> 23
<tb> . <SEP> GD1a <SEP> .......................... <SEP> environ <SEP> 36 <SEP> à <SEP> 44
<tb> . <SEP> GD1b <SEP> .......................... <SEP> environ <SEP> 14 <SEP> à <SEP> 18
<tb> . <SEP> GT1h <SEP> ....................... <SEP> environ <SEP> 17 <SEP> à <SEP> 21
<tb> Pour <SEP> une <SEP> formulation <SEP> que <SEP> l'on <SEP> préfère <SEP> particulièrement, <SEP> les
<tb> gangliosides <SEP> individuels <SEP> sont <SEP> combinés <SEP> dans <SEP> le <SEP> rapport <SEP> pondéral <SEP> suivant <SEP> :
<tb> . <SEP> GM1 <SEP> ....................... <SEP> 21%
<tb>
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<tb>
<tb> A. <SEP> GD1a <SEP> ....................... <SEP> 40%
<tb> . <SEP> GD1b <SEP> ....................... <SEP> 16%
<tb> . <SEP> GT1b <SEP> ....................... <SEP> 19%
<tb>
EMI11.2
On a ég lement importante de soulagement la douleur selon la présente invention pouvait également s'obtenir par administration individuelle des gangliosides ci-dessus. sous la forme de melanges binaires ou sous la forme d'un mélange tertiaire. Ainsi, 1 quelconque de ces gangliosides peut s sous la forme d'une fraction par combinaison de deux quelconques ou de trois quelconques de ces gangliosides.
Par exemple, on peut administrer sous la forme de mélanges binaires le UM et a' n Pour selon 1'invent-ior de préférence, contenir ganglicsides(G,+G + GOlb mi Dia Dlb 1lb au noi,-iz-ser-). Les nr4parati au peuvent être des solutions des composes gangHosides des composés associées à ni plusieurs véhicules ou diluants pharmaceutiquement acceptables, et êtrp contenues dans des milieux tamponnés á un pH convenable isosmotique r-ha-lue dose de-, é"', ange doit co,--, ten-* : t- ' c'iog'jques.
IC osides indi',/1duels s - ''!sdsperfdde'effetrechercht 'ïtrstmn dose peut, de composé actif kg de poids du corps par jour, une dose unitaire prise entre 10. et 100 mg/kg de poids du corps.
On donne ci-apres Prëparation de 1 ml contient
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<tb>
<tb> trouv- <SEP> rapport <SEP> du <SEP> mélange <SEP> de <SEP> gangliosides <SEP> 100 <SEP> mg
<tb> . <SEP> GM1 <SEP> ........................ <SEP> 21 <SEP> %
<tb> . <SEP> Gela <SEP> 40 <SEP> % <SEP>
<tb> . <SEP> GD1b <SEP> ........................ <SEP> 16 <SEP> %
<tb> . <SEP> GTl........................... <SEP> 19 <SEP> % <SEP>
<tb> - <SEP> tampon <SEP> de <SEP> phosphate <SEP> à <SEP> pH <SEP> 7, <SEP> 6M/100
<tb> dans <SEP> de <SEP> l'eau <SEP> bi-distillée <SEP> stérile
<tb> à <SEP> pyrogène, <SEP> q. <SEP> s. <SEP> .................. <SEP> 2 <SEP> ml
<tb>
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Préparation n 2-une fiole de 2 ml contient :
EMI12.2
<tb>
<tb> - <SEP> rapport <SEP> du <SEP> mélange <SEP> de <SEP> gangliosides <SEP> 10 <SEP> mg
<tb> . <SEP> GM1 <SEP> ......................... <SEP> 21 <SEP> %
<tb> r) <SEP> ! <SEP>
<tb> . <SEP> GD1a <SEP> ......................... <SEP> 40 <SEP> %
<tb> . <SEP> GD1b <SEP> ......................... <SEP> 16 <SEP> %
<tb> . <SEP> GT1b <SEP> ......................... <SEP> 19 <SEP> %
<tb> - <SEP> tampon <SEP> de <SEP> phosphate <SEP> à <SEP> pH <SEP> 7,6M/100
<tb> dans <SEP> de <SEP> l'eau <SEP> bi=distillée <SEP> stérile
<tb> à <SEP> pyrogène, <SEP> q.s. <SEP> ............... <SEP> 2 <SEP> ml
<tb>
EMI12.3
Préparation n03 2 ml !
EMI12.4
<tb>
<tb> - <SEP> une- <SEP> rapport <SEP> du <SEP> mélange <SEP> de <SEP> gangliosides <SEP> 25 <SEP> mg
<tb> . <SEP> GM1 <SEP> .......................... <SEP> 21 <SEP> %
<tb> .
<SEP> GD1a <SEP> .......................... <SEP> 40 <SEP> %
<tb> . <SEP> GD1b <SEP> .......................... <SEP> 16 <SEP> %
<tb> . <SEP> GT1b <SEP> .......................... <SEP> 19 <SEP> %
<tb> - <SEP> tampon <SEP> de <SEP> phosphate <SEP> à <SEP> pH <SEP> 7,6M/100
<tb> dans <SEP> de <SEP> l'eau <SEP> hi-distillée <SEP> stérile
<tb> à <SEP> pyrogène, <SEP> q.s. <SEP> ................ <SEP> 2 <SEP> ml
<tb>
EMI12.5
Préparation n 4-une fiole de 2 ml contient :
EMI12.6
<tb>
<tb> - <SEP> rapport <SEP> du <SEP> mélange <SEP> de <SEP> gangliosides <SEP> 75 <SEP> mg
<tb> . <SEP> GM1 <SEP> ........................... <SEP> 21 <SEP> %
<tb> . <SEP> GD1a <SEP> ........................... <SEP> 40 <SEP> %
<tb> G <SEP> Tlb <SEP>
<tb> - <SEP> GT1b <SEP> .......................... <SEP> 19 <SEP> %
<tb> - <SEP> tampon <SEP> de <SEP> phosphate <SEP> à <SEP> pH <SEP> 7 <SEP> 6mû <SEP>
<tb> dans <SEP> de <SEP> l'eau <SEP> bi-distillée <SEP> stérile
<tb> à <SEP> pyrogène <SEP> q. <SEP> s. <SEP> .................... <SEP> 2 <SEP> ml
<tb>
EMI12.7
Preparation e er-t
EMI12.8
<tb>
<tb> n 5-u- <SEP> monosialoganglioside <SEP> GM1 <SEP> .........
<SEP> 10 <SEP> mg
<tb> - <SEP> tampon <SEP> de <SEP> phosphate <SEP> à <SEP> pH <SEP> 7,6M/100
<tb> dans <SEP> de <SEP> l'eau <SEP> bi-distillée <SEP> stérile
<tb> à <SEP> pyrogène, <SEP> q. <SEP> s. <SEP> .................... <SEP> 2 <SEP> mi
<tb>
EMI12.9
Préparation n 6-une fiole de 2 ml contient :
EMI12.10
<tb>
<tb> - <SEP> trisialoganglioside <SEP> (GT1b) <SEP> ....... <SEP> 10 <SEP> mg
<tb> - <SEP> tampon <SEP> de <SEP> phosphate <SEP> à <SEP> pH <SEP> 7, <SEP> 6M/100
<tb>
<Desc/Clms Page number 13>
EMI13.1
dans
EMI13.2
<tb>
<tb> de <SEP> l'eau <SEP> bi-distillée <SEP> stérileà <SEP> pyrogène, <SEP> q. <SEP> s. <SEP> 2 <SEP> ml <SEP>
<tb> Préparation <SEP> n 7-une <SEP> fiole <SEP> de <SEP> 2 <SEP> ml <SEP> contient <SEP> :
<tb> - <SEP> un <SEP> mélange <SEP> binaire <SEP> de <SEP> fractions
<tb> individuelles <SEP> dans <SEP> le <SEP> rapport <SEP> suivant <SEP> .............................. <SEP> 30 <SEP> mg
<tb> - <SEP> monosialoganglioside <SEP> GM1 <SEP> ........ <SEP> 60 <SEP> %
<tb> - <SEP> trisialoganglioside <SEP> (GT1b) <SEP> ....... <SEP> 40 <SEP> %
<tb> - <SEP> tampon <SEP> de <SEP> phosphate <SEP> a <SEP> pH <SEP> 7, <SEP> 6M/100
<tb> dans <SEP> de <SEP> 1'eau <SEP> bi-distillée <SEP> stérile
<tb> à <SEP> pyrogène, <SEP> q. <SEP> s.................. <SEP> 2 <SEP> ml <SEP>
<tb>
EMI13.3
Préparation nns :
EMI13.4
<tb>
<tb> - <SEP> une- <SEP> un <SEP> mélange <SEP> binaire <SEP> de <SEP> fractions
<tb> individuelles <SEP> dans <SEP> le <SEP> rapport <SEP> suivant <SEP> 60 <SEP> mg
<tb> - <SEP> monosialoganglioside <SEP> GM1 <SEP> ......... <SEP> 45 <SEP> %
<tb> - <SEP> trisialoganglioside <SEP> (GT1b) <SEP> ...... <SEP> 55 <SEP> %
<tb> -tampon <SEP> de <SEP> phosphate <SEP> à <SEP> pH <SEP> 7,6M/100
<tb> dans <SEP> de <SEP> l'eau <SEP> bi-distillée <SEP> stérile
<tb> à <SEP> pyrogène, <SEP> q.s. <SEP> ................ <SEP> 2 <SEP> ml
<tb>
EMI13.5
Pppa'tlor de 2 :
EMI13.6
<tb>
<tb> !" 9-une <SEP> f' <SEP> ! <SEP> de- <SEP> un <SEP> melange <SEP> ternaire <SEP> de <SEP> fractions
<tb> individuelles <SEP> dans <SEP> Ie <SEP> rapport <SEP> sui- <SEP>
<tb> vant <SEP> ................................. <SEP> 15 <SEP> mg
<tb> - <SEP> monosialoganglioside <SEP> GM1 <SEP> ........ <SEP> 30 <SEP> %
<tb> - <SEP> disialoganglioside <SEP> (GD1a <SEP> ou <SEP> GD1b) <SEP> 45 <SEP> %
<tb> - <SEP> tampon <SEP> de <SEP> phosphate <SEP> à <SEP> pH <SEP> 7,6M/100
<tb> dans <SEP> de <SEP> 1'eau <SEP> bi-distillée <SEP> stérile
<tb> à <SEP> pyrogène, <SEP> q.s. <SEP> .................. <SEP> 2 <SEP> ml
<tb>
EMI13.7
Préparation n O :
EMI13.8
<tb>
<tb> chaque <SEP> empl tre <SEP> contient- <SEP> gangliosides..................... <SEP> 100 <SEP> mg
<tb> - <SEP> glycérine <SEP> 1, <SEP> 6 <SEP> g <SEP>
<tb> - <SEP> alcool <SEP> polyvinylique <SEP> 0,2 <SEP> 9
<tb> - <SEP> polyvinylpyrrolidone <SEP> ............ <SEP> 0,1 <SEP> 9
<tb> - <SEP> excipient <SEP> pour <SEP> favoriser <SEP> la <SEP> pénétration <SEP> intradermique <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<Desc/Clms Page number 14>
EMI14.1
Préparation n ll-100 de crème contiennent :
- dans 5 9 de liposoms
EMI14.2
<tb>
<tb> ou <SEP> phospholipides <SEP> mélangés....... <SEP> 4 <SEP> 9
<tb> - <SEP> monostéarate <SEP> de <SEP> polyéthylène
<tb> glycol <SEP> 15 <SEP> g
<tb> - <SEP> glycérine <SEP> ......................... <SEP> 1,5 <SEP> g
<tb> - <SEP> sorbitol <SEP> 1,5 <SEP> 9
<tb> - <SEP> ester <SEP> d'acide <SEP> paraoxybenzoique... <SEP> 0,125 <SEP> 9
<tb> - <SEP> eau <SEP> ............................... <SEP> 72,9 <SEP> 9
<tb>
EMI14.3
Propriétés Comme on 1'a décrit ci-dessus, on a constaté que , c, á-1 biaires analgêsique ""j"tf6*''"-Lt'v't r' * ! 'f ''j'L u" duels. mlans , 2 ei : quez. n. : a d v L t-i vi, , u ;-ii ; iiu, u li , 1 u A'X Co#-, lpos es u , 4u2 1 r v i té de s--u 1 a ge,-"ent Ae 1 A-ou eL-e-- ; @-.
P i ; c2 p"r !-j occasionnées par la sur les souris On des souris Suisses mâles (26 On évalue la réaction par injection intrapèritonéale de e u 1 1'lcooi 'coc,-1 que Cn CettE une réaction mesurer L'étude évalue 1'effet des gangliosides G. -j., cn nventcr. dêcnt en abrégé ie no oside e nge administrés par voie sous-cutanée 30 mn avant la phénylquinone (soìubilisatior. dans 10 m1/kg d'eau Les animaux témoins recoivent 10 miikg d'eau distillée par voie sous-cutanée.
On évalue le nombre de contorsions effectuées par chaque animal dans une période de 5 mn, (de la tion de phénylquinone, et !'on calcule de la réaction nerveuse par comparaison à celle des témoins.
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pharmacologiquesRésultats du test de contorsion
Les résultats obtenus sont résumés sur Ie tableau 2.
TABLEAU 2
EMI15.1
Résultats du test de par injecticn intraperitoneale de 0, 5 ml d'une solution de phénylbenzoquinone à 25% dans de l'alcool éthylique à 5%
EMI15.2
<tb>
<tb> contotraitement <SEP> dose <SEP> nombre <SEP> nombre <SEP> de <SEP> inhibition
<tb> (S.C.) <SEP> mg/kg <SEP> d'animaux <SEP> contorsion <SEP> %
<tb> contrôle <SEP> (eau <SEP> 10 <SEP> ml
<tb> par <SEP> kg <SEP> S.
<SEP> C.) <SEP> -- <SEP> 60 <SEP> 39,9 <SEP> ¯ <SEP> 0,76 <SEP> -GA <SEP> 1 <SEP> 6 <SEP> 30,3 <SEP> ¯ <SEP> 2,20 <SEP> 24,0
<tb> 2,5 <SEP> 6 <SEP> 17,9 <SEP> ¯ <SEP> 0,72 <SEP> 55,1
<tb> 5 <SEP> 6 <SEP> 13,0 <SEP> ¯ <SEP> 0,63 <SEP> 66,9
<tb> 10 <SEP> 12 <SEP> 11,9 <SEP> ¯ <SEP> 0,76 <SEP> 70,1
<tb> 20 <SEP> 6 <SEP> 16,6 <SEP> ¯ <SEP> 0,84 <SEP> 58,3
<tb> 30 <SEP> 6 <SEP> 16,8 <SEP> ¯ <SEP> 57,9
<tb> 50 <SEP> 6 <SEP> 26,8 <SEP> ¯ <SEP> 1,96 <SEP> 32,8
<tb> GM1 <SEP> 1 <SEP> 6 <SEP> 32,4 <SEP> ¯ <SEP> 1,98 <SEP> 18,7
<tb> 2,5 <SEP> 6 <SEP> 23,3 <SEP> ¯ <SEP> 1,40 <SEP> 41,6
<tb> 5 <SEP> 6 <SEP> 19,8 <SEP> ¯ <SEP> 0,60 <SEP> 50,3
<tb> 10 <SEP> 12 <SEP> 18,8 <SEP> ¯ <SEP> 1,28 <SEP> 52,8
<tb> 20 <SEP> 6 <SEP> 19,1 <SEP> ¯ <SEP> 0,89 <SEP> 52,1
<tb> 30 <SEP> 6 <SEP> 19,5 <SEP> ¯ <SEP> 0,43 <SEP> 51,1
<tb> GD1a <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 34,2 <SEP> ¯ <SEP> 0,32 <SEP> 14,
2
<tb> 10 <SEP> 6 <SEP> 20,8 <SEP> ¯ <SEP> 1,38 <SEP> 47,8
<tb> 20 <SEP> 6 <SEP> 20,3 <SEP> ¯ <SEP> 1,12 <SEP> 49,1
<tb> 30 <SEP> 6 <SEP> 20,2 <SEP> ¯ <SEP> 49,3
<tb> GD1b <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 40,1 <SEP> ¯ <SEP> 0,86 <SEP> -
<tb> 10 <SEP> 6 <SEP> 33,5 <SEP> ¯ <SEP> 1,43 <SEP> 16,0
<tb> 20 <SEP> 12 <SEP> 20,8 <SEP> ¯ <SEP> 0,54 <SEP> 47,8
<tb> 30 <SEP> 6 <SEP> 18,6 <SEP> ¯ <SEP> 53,3
<tb> GT1b <SEP> 1 <SEP> 6 <SEP> 34,2 <SEP> ¯ <SEP> 0,68 <SEP> 14,2
<tb> 2,5 <SEP> 6 <SEP> 26,8 <SEP> ¯ <SEP> 32,8
<tb> 5 <SEP> 6 <SEP> 21,8 <SEP> ¯ <SEP> 0,81 <SEP> 46,6
<tb> 10 <SEP> 6 <SEP> 19,6 <SEP> ¯ <SEP> 1,12 <SEP> 50,8
<tb> 20 <SEP> 6 <SEP> 18,1 <SEP> ¯ <SEP> 54,6
<tb> 30 <SEP> 6 <SEP> 18,3 <SEP> ¯ <SEP> 54,1
<tb>
<Desc/Clms Page number 16>
D'après les données du tableau 2, on peut voir que l'activité analgésique du mélange de gangliosides (GA)
et de ses fractions individuelles a tendance à produire un effet dépendant de la dose. On a observé que 1'effet maximum s'obtenait a la dose de 10 mg/kg, tandis que pour des doses plus élevées (20-30 et 50 mg/kg), l'activité diminuait progressivement, et conduisait a une courbe dose-effet en forme de cloche.
On a démontré, en outre, que l'activité analgésique des ganglia- sides individuels était la suivante, en allant de la plus élevée à a plus faible :
GA > GM1 > GTl > G,la > G Dlb
Le pourcentage maximum de l'inhibition des contorsions obtenu par chaque ganglioside individuel ne dépasse en aucun cas une valeur maximum de 55%. En fait, l'activité a tendance à se stabiliser autour des valeurs atteintes pour la dose de 10 mgikg sans que Ton enregistre une augmentation significative de la réponse analgésique lorsque l'on augmente encore les doses.
Si on extrapole les données des courbes dose-effet, il est clair
EMI16.1
"activité du mélange de gangliosides est interacque 1 L u Hor m 'j de synergie du au rapport entre les fractions individuelles de ganqiiosidps bien qu'il s ' mct Yduelles esentent le résultat d'unebonne activité de soulagement de la douleur.
Utilisationthérapeutique
Les résultats expérimentaux décrits ci-dessus mettent en évidence que le mélange particulier de gangliosides selon 1'invention et ses frctionsindividuellespossèdentuneactivitédesoulagementdela douleur ou analgésique significative. 11 en résulte que le mélange de gangliosides, ses fractions individuelles, ses mélanges binaires ou ses mélanges tertiaires, sont utiles pour soulager la douleur occasionnée par différentes neuropathies périphériques telles que les neuropathies diabétiques, les neuralgies trigéminales, la sciatique, la brachialgie cervicale, Ie zooster herpétique, les neuropathies post-thérapeutiques et d'autres neuropathies présentant un composant douloureux extrêmement sérieux.
Pour Ie traitement des pathologies ci-dessus, les gangliosides que
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ce soit à titre individuel ou en mélanges binaire, tertiaire ou quaternaire, peuvent se préparer dans des formulations telles qu'en ampoule, fiole, emplâtre ou crème dûment préparées en combinaison avec un véhicule : un diluant ou un excipient pharmaceutiquement acceptable. Ces formulations peuvent, en tant que de besoin, être administrées à un patient par diverses voies d'administration, y compris les voies souscutanée, intramusculaire, intraveineuse, topique, injection, hypocutanée, hypo-dermique.
Par exemple, les composés de gangliosides peuvent se formuler sous la forme d'un mélange avec un excipient approprié et se préparer sous la forme de pansement que l'on applique ensuite directement à la peau et les composés passent à travers la peau à 1 ; intérieur du patient.
L'invention ayant ainsi été décrite, il est évident que 1'on peut la fa. re varier de diverses facons. Ces variantes ne doivent pas être considérées comme s'écartant de 1'esprit et de la portée de 1'invention et leute modification qui sont évidentes pour 1 ! homme de l'art doivent être comprises dans la portée des revendications suivantes.