LU85974A1 - Melange de gangliosides utile comme instrument therapeutique d'elimination d'effets douloureux de neuropathies peripheriques - Google Patents

Description

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MELANGE DE GANGLIOSIDES UTILE COMME INSTRUMENT THERAPEUTIQUE D'ELIMINATION D'EFFETS DOULOUREUX DE NEUROPATHIES PERIPHERIQUES

La présente invention concerne une composition spécifique consti-5 tuée d'un mélange de gangliosides dont on a trouvé qu'il possédait une activité de soulagement de la douleur ou analgésique importante.

Les gangliosides représentent une famille de molécules de glycolipides complexes, composants naturels de membranes cellulaires, en particulier de la membrane des neurones. Ces composants sont impliqués lu dans les processus de développement, de différentiation et de régénération des neurones. Une application exogène de gangliosides leur permet de s'insérer de façon stable dans la membrane des neurones. Cette incorporation est associée à l’activation d‘un système d'enzyme lié aux membranes, consistant en (Na+, K+) ATPase, dont l'activité est essen-15 tielle à la conduction des impulsions nerveuses. Il a été démontré que des préparations de gangliosides possédaient une activité de stimulation de la réinnervatiers par amelioration du bourgeonnement, nerveux, caractéristique essentielle dans les processus de réinnervation musculaire et de restauration des contacts des synaps. Des preuves électroph.ysiologi-20 ques et fonctionnelles d'une récupération rapide, produite par un traitement parentéral aux gangliosides, des nerfs endommagés, ont été obtenues sur plusieurs modèles d'animaux. Ceci comprend la récupération de la fonction sensorielle nerveuse après transection des nerfs, la guérison des dommages causés aux nerfs cochléaires par le bruit, la 25 guérison des neuropathies diabétiques chez des souris diabétiques mutantes et la guérison des intoxications par les neurotoxines.

Les gangliosides sont des glycolipides acides appartenant à la famille des composés biologiques appelés glycosphingolipides. Ils sont composés de 4 unités structurelles de base: un aminoalcool à longue 30 >. ν 2 chaîne, un acide gras, un radical oligosaccharide et un ou plusieurs restes sialosyles.

1. - L'aminoalcool à longue chaîne, présent dans les gangliosides du cerveau est la 4-sphingênine et son analogue à chaîne plus longue 5 est la 4-eicosasphingënine; ces composés sont communément désignés sous le nom de sphingosines. ch2oh H-C-NHg n - 12 4-spingénine H-C-QH n = 14 4-eicosasphîr.gënîne

10 C

V/ / n y.

15 (Cn„) - CH0 Fiq.l: structure des sphir.gGsir.es v c'n 3

Les composés saturés correspondants (sphinganines) sont également présents en moindre proportion dans les gangliosides.

2. - Un acide gras est relié à la base de sphingosine au moyen d'une liaison ami de. Dans les gangliosides du cerveau, cet. acide gras 20 est s plus de 35¾ représente par de l'acide stéarique {18/0}. Or.

rencontre d'autres acides gras en moindre proportion: l'acide arnrhidique (20/0), l'acide palmitique (16/0) ou l'acide palmito- Λ lëlqus {16/l4y}. L'aminoalcool associé à l'acid? gras forme l'unité désignée sous le nom de cëramide qui représente la partie 25 hydrophobe de la molécule de ganglioside.

3. - La chaîne oligosaccharide attachée au cëramide est la caractéris tique de la grande famille de glycosphingolipides à laquelle appartiennent les gangliosides. Les sphingolipides se classent en deux sous-groupes, sur la base de l'hydrate de carbone immédiate-3Ö ment rattaché au céramide. Le premier sous-groupe, le plus petit, dérive du galactosyle céramide.

La plupart des glycosphingolipides, donc sensiblement tous les gangliosides, appartiennent au sous-groupe dérivé du glucosyle céramide.

35 4,- L'acide sialique est présent dans les gangliosides du cerveau surtout sous sa forme N-acétyle mais, dans quelques espèces de gangliosides, on a également identifié la forme N-glycolyle. Ce ’ . 3 v reste est généralement désigné sous le nom d'acide neuraminique (NANA ou NGNA).

COOH

C=0 5 CH2 L oh

ΗΓ.0Η CKSCONH

CHoCONHCH H0 3 1 î * !

HOCH j COOH

HCOH H0 V" CH2OH

10 HCOH

ch2oh

Fig. 2: acide N-acétylneuraminique; chaîne ouverte et cycle hémicétal.

Le caractère hydrophile des gangliosides est dû à la chaîne 15 oligosaccharide et au nombre de restes sialosyles rattachés à cette chaîne.

Distribution des gangliosides

La concentration de gangliosides la plus élevée se trouve dans la matière grise cérébrale qui contient approximativement 2,5 mmoles de •°0 NANA par gramme de poids humide (approximativement 0,4¾ du poids sec, 0,6" du total des lipides) (Ledeen R., Salsmar K., Cabrera M., J. Lipîd Rest-: 9. 1?9 (3968))..

90¾ environ de la teneur totale en gangliosides du cerveau des mammifères est constitué de 4 gangliosides dont la séquence oligosaccha-25 ride est identique:

Gai B 1 + 3GalNAc 61 4 Gai 61- 4 > Glc 61 1 Cer

La majorité des 10% restants des gangliosides du cerveau des mammifères est constituée de gangliosides auxquels manquent le motif galactose terminal ou le motif galactosyle-N-acétylgalactosamine 30 (Svennernolm L,s Mansson S., Li Y., J. Biol. Chem. 248: 740 (1973)). Structure et nomenclature des gangliosides

On a isolé et purifié les gangliosides du cerveau par chromatographie. La structure du ganglioside G^j a été déterminée la première et on a démontré qu'elle était commune aux quatres principaux gangliosides 35 présents dans le cerveau des mammifères. Le tableau 1 donne une description sommaire de leurs structures et il est suivi de descriptions distinctes détaillées des quatre principaux gangliosides du cerveau des mammifères.

4 ί.

TABLEAU SOMMAIRE DE LA STRUCTURE DES GANGLIOSIDES

5

OH CHjOH OH CH2OH

/ chzch

Cj-CO-mA^.O-V * V^TY»

10 m-f ’ SS

* ,·0Λ CK2oM t-,___^ »1-Te.t riese 15 NM£ Cerii·..^ TABLEAU 1 2G Structuras des quatre principaux gang!îusides du cerveau des mammifères | ——1 ! t:vtnhnl& c^lnn i j aoreviation selon ÏÜPAC-ÎÜB R R j I Svennsrholn·* !

25 GM1 II3a-NeuAc-Gg0se Cer H H

ri x η λ i

_ II α-NeuAc-ïV -a-NeuAc-GgOse^Cer NANA H

GÜlb II°a-(NeuAc)-2Gg0se4Cer H NANA

GTlb II3a-(NeuAc)-2-IV3-a-NeuAc-GgOse4Cer NANA NANA

30 * (Svennerholm L., J. Neurochem. 10, 613 (1963)).

1,- Gang! i os i de

Le ganglioside GM1 présente la structure la plus simple des quatre gang!iosides principaux; les autres (GDla» GDlb, Gjlb) sont identiques à l'exception de l'addition de un ou plusieurs restes 35 sialosyles reliés par des liaisons glycosides au radical oligo saccharide.

1.1 Structure

Galßl + 3GalNAcßl -*· 4Gal(3 «- 2NeuAc)ßl 4Glcßl l'Cer i > . 5

Les substituants sur l'oligosaccharide de base sont donnés au début de leur nom par un chiffre romain qui indique le reste monosaccharide (à partir du céramide) sur lequel est situé le substituant, Un chiffre arabe sur-ajouté indique la position 5 de la liaison glycoside, 1.2 Formule empirique (Kuhn R.. Wiegandt. H. (1963). Chem. Ber.

96, 866) ^13^131^3^31 1.3 Poids moléculaire 10 1536,9, calculé sur la base de 2 Gai, 1 Glc, 1 NANA, 1 GalNAc, 1 sphingosine (C^g.j), 1 acide stéarique.

2.- Gangiioside Gg,_ 2.1 Structure

NeuAca2 + 3Ga 1 ßl + 3GalNAcsl -» 4Gal(3+2aNeuAc)ßl + 4Glcßl + l'Cer 15 2.2 Formule empirique (Kuhn R., Wiegandt H. (1963), Chem. Ber.

96, 866) CS4H148N4°39 2.3 Poids moléculaire 1838.0 calculé sur la base de ? Gal, 1 Glc, ? NANA, 1 GalNAc, ολ n ^ . t \ *» . * .1 4·'. · .. î *-v' λ * Üyvj i ^ 1 ~ *-**-! j '-λ.<Ϊ ï

Gangiioside Gülh 3.1 Structure

Gaiiîl > SGalNAcßl > 4Gal(3 · 2-NeuAc8 < 2aNe«4c)ßl > 4Glc?*l - l'Cer 3.2 Formule empirique (Kuhn R., Wieqandt H. (1963), Chem. Ber.

25 96, 866) ^84^148^4^39 3.3 Poids moléculaire 1838.0 ca! culé sur la base de 2 Gai, i Glc, 2 NANA, i GalNAc, 1 sphinaosine (C.„ ,), 1 acide stéarique.

30 4,- Gangiioside 4.1 Structure

NeuAca2 -* 3GalBl + 3GalNAcßl + 4Gal(3«-2oNeuAc8+2aNeuAc)ßl + 4Glcßl + l'Cer 4.2 Formule empirique (Kuhn R., Wiegandt H. (1963), Chem. Ber.

96, 866) 35 C95H165N5°47 4.3 Poids moléculaire 2129,4 calculé sur la base de 2 Gai, 3 NANA, 1 GalNAc, 1 sphingosine (C18.p, 3 acide stéarique.

6 !

On a maintenant trouvé qu'un mélange particulier de gangliosides procurait à la fois une activité de stimulation de réinnervation des nerfs et une activité analgésique. On a trouvé qu'un mélange dans un rapport spécifique des gangliosides S^, Gp(a, Gpjb et G^b présentait 5 une activité analgésique significative que l'on ne connaissait pas auparavant pour ces mélanges.

La présente invention a pour but de procurer une composition pharmaceutique constituée d'un mélange de gangliosides possédant une activité analgésique.

10 La présente invention a pour but également de procurer une compo sition pharmaceutique constituée d'un mélange des ganglioside G^, G^, Gp-jj, et Gyjb dans des rapports de poids spécifique tel que le mélange qui en résulte possède une activité analgésique supérieure à celle des composants individuels du mélange.

15 La présente invention a pour but en outre de procurer une méthode de traitement de la douleur occasionnée par des neurophaties périphériques par administration d'un composition constituée d'un mélange de gangliosides, en particulier un mélange des gangliosides G^, GDla» af Q ^ !ib’ 20 La présente invention a également pour objet un pansement permet tant l'application externe d'une composition pharmaceutique dans lequel il est. constitué de: \c.; l::: suppc-ï - aUsucpi. u appi :qyr= = :a pcaU, ν.υΠ(,ΰΠ«!:ι, une composition pharmaceutique; 25 (b) ladite composition pharmaceutique, constituée d'une part d'une quantité efficace pour le soulagement de la douleur, d'au moins un ganglioside choisi dans le groupe constitué par ®M1S Sla’ Slb et* Slb et’ c*'autre Part d'un véhicule ou excipient pharmar.eutiquement acceptable permettant à ces 30 gangliosides de passer à travers la peau.

Ces buts de l'invention et d'autres encore s'obtiennent pas la préparation d'une composition qui est un mélange des gangliosides G^, Sla* Slb et Slb dans un raPP°rt spécifique de poids. Cette composition présente une activité analgésique significative et elle est utile 35 au traitement et au soulagement de la douleur occasionnée par divers neuropathies périphériques.

Comme on l'a discuté ci-dessus, les gangliosides représentent une famille de molécules de glycolipides complexes, composants naturels des ) •Ί^ 7 t membranes cellulaires. Les gangliosides étant surtout associés à la membrane des neurones, il a été suggéré (Fishman et coll., Science, 194. 906-915) qu'ils pouvaient jouer un rôle dans le transfert de l'information par ces membranes. Cette suggestion a été confortée par une série 5 d'observations impliquant ces molécules dans toute une série d'événements liés à la membrane des cellules5 y compris le développement des neurones (Dimpfel W. et coll., "Gangliosides in Neurological and Neuro-muscular Function, Development and Repair". Eds. Rapport and Gorio,

Raven Press 119-134 (1981)), différentiation (Leon A. et coll., 1981a) 10 "Membranes in Growth & Development". Hoffman et coll., 311-320, (1981) et régénration (Gorio A. et coll. "Gangliosides in Neurological and Neuromuscular Function, Development and Repair", Eds. Rapport and Gorio, Raven Press 177-195).

Il a été démontré qu'un mélange des gangliosides G^·,, G^., Gjyiw 15 et Gj^ purifié en vue de leur utilisation parentérale possédait une activité de stimulation de la réinnervation due à l'amélioration du bourgeonnement nerveux (Gorio A. et coll. Brain Res. 197, 236-241 (1980)). L'activité de promotion du bourgeonnement nerveux a été confirmé à la fois sur des modèles de cultures de tissus de neurones in vitro 2G (Roisen F.J. et coll., Science, 214, 577-S7D (1981); Hauw 0.3. et coll, Neurophysiologie. C.R. Acad. Sc. Paris, 292, (8), 569-571 (1931)) et sur des modèles de dénervation animaux in vivo (Gorio et coll., Brain Res. 197 236-241, 1980), Gorio et col 1. "Nervous System Regeneration, Bircl; Defects; original article sériés". 19 (u), 157-174. 1931).

25 Les modèles animaux in vivo (dénervation d'un muscle du rat par écrasement du nerf sciatique, dënervation partielle du muscle soleus du rat par résection et dislocation de la racine nerveuse en L5) ont donné des preuves à la fois électrophysiologiques et morphologiques d'une amélioration du bourgeonnement des nerfs collatéraux, après traitement 30 par des gangliosides exogènes (5 à 50 mg/kg/j par injection IP), ce traitement conduisant ä une récupération fonctionnelle rapide.

: Des preuves électrophysiologiques et fonctionnelles d'une guérison accélérée de dommages nerveux produite par un traitement aux gangliosides a été décrite sur plusieurs modèles animaux, dont la récupération de 35 la fonction nerveuse sensorielle après transection des nerfs (Norido F. et coll., Experientia, 37, 301-302 (1981); la guérison d'un nerf cochlë-aire endommagé par le bruit (Aporti F. et coll. Nuovo Arch. Otol. Rinol. Laringol. 5, (1), 25-32 (1977); la guérison d'une neuropathie diabétique ! 8 ! chez des souris atteintes d'un diabète congénital (Norido F. et col!., Muscle & Nerve), 5, 107-110 (1982)); la guérison d'une intoxication par des toxines ayant endommagées les nerfs (Aporti F. et col 1 -, Acta Otolaryngologlca, 92, 433-437, (3981); Maroni M; et col!. Clinical 5 Toxicology 18, (12), 1475-1484 (1981).

Sur la base de ces données expérimentales, le mélange des ganglio-sides GM1, GDia, GD^b et est indiqué en thérapeutique comme étant utile dans une large gamme de conditions du système nerveux périphérique dans lesquelles on peut stimuler et accélérer la réinnervation.

10 Ces neuropathies périphériques comprennent:

Polyneuropathies dysmethaboliques

Neuropathie diabétique, Pozza G. et col!., "Gangliosides in Neuro-logical and Neuromuscular Function, Development and Rapair". Eds.

Rapport and Gario. Raven Press 253-258 (1981); Bassi S. et col!., Muscle 15 & Nerve, 5, 351-356 (1982); neuropathie urémique, Catizone L. et col!., Clin. Terap., 85, (4), 395 (1978).

Neuropathies mécaniques

Le syndrome dit. carpal tunnel syndrom, Trontel J.V. et coll., Effects of cerebral gangl iosides in carpal tunnel syndrome (1981).

20 Communication personnelle; radiculopathie compressive, Cubells J.M. et col!., Med. Clin. (Barcelona) 75, (4), 156-160 (1980); neuropathie traumatique. Gai A.M. et col!.. Eurcp Medicophys.. 15, (3) 221-231.

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Neuropathie iatrogénique due à la vincristine, Azzoni et coll. ï! 25 Policlinico-Sez. Medica 85, (4), 255-252 (1978); neuropathie alcoolique, Mamoli B. et coll. Europ. Neurol. 19, 320-326 (1980); Bassi S. et coll., Electrosnyographic study of diabêtie and alcohelic po! y neuropathie patients treated with gangliosides. Muscle & Nerve, 5, 351-356 (1982). Neuropathies diverses 30 (Bell's palsy, Negrin M. et coll., Min. Med., 69 (48), 3277-3282 (1978); syndromes menieriformes, Molino R. et coll., Giorn. It. Rie.

= Clin. Terap., 2, 102-106 (1978); ulcères neurotrophiques, Ferrandi C.,

Il Policlinico (Sez. Medica) 89 (3), 279-289 (1981)).

Methode de Préparation 35 Les composants individuels des gangliosides qui forment la compo sition selon l'invention peuvent s'extraire par divers modes opératoires connus en soi. Par exemple, le cortex du cerveau des bovins (tissu nerveux) extrait des animaux est homogénéisé dans un tampon de phosphate i *. 1 s à pH 6,8. Six (6) volumes de têtrafuranne sont alors ajoutés et Ton centrifuge le mélange qui en résulte. La fraction qui surnage ou flotte en surface est ré-extraite deux fois avec du tétrahydrofuranne. Après centrifugation, les matières non polaires ou apolaîres sont extraites 5 par fractionnement avec de 11 ëthyléther et Ton introduit la phase de tétrahydrofuranne aqueuse dans une colonne d'échange d'ions équilibrée par de l'éthanol à 50¾. Comme éluant, on utilise de l'éthanol (50¾). A T effluent de la colonne, on ajoute de T hydroxyde de baryum et quatre volumes d'éthanol glacé. Après 18 heures dans des conditions froides, on 10 recueille un précipité et Ton ajoute ensuite une petite quantité d'acide chlorhydrique pour la redissolution dans l'eau. Cette solution est ensuite dialysée et lyophilisée. Le rendement est d'environ 0,6 mg en ganglioside brut par gramme de tissu nerveux utilisé.

On disperse la poudre lyophilisée dans 20 volumes d'un mélange 15 chloroforme/méthanol (2/1), on filtre la solution pour qu'elle soit claire et on fractionne par addition de 0,2 volume de solution de chlorure de potassium dans Teau (0,88%). La phase supérieure est séparée, dialysée et lyophilisëe. Le rendement final est d'environ 0,3 mg de ganglioside par gramme de tissu nerveux.

20 Pour séparer les fractions gang!iosides individuelles, on utilise des colonnes d'acide silicique élué avec des mélanges mëthanol/chloroforme. Avant Tutilisation en thérapeutique humaine, il faut procéder à des essais sur la matière obtenue, ces essais devant établir l'absence d'activité pyrogenique de protéines, d'activités anaphyllactiques et 25 d'histamine.

Compositions pharmaceutiques

Pour l'application thérapeutique nouvelle selon l'invention, une formulation d'un mélange de ganglîosides doit contenir les gangliosides individuels dans les rapports suivants: 30 Sanqlioside 1ndiyiduel % en poids . Gjyjj ....................... environ 19 à 23 . Gß.|a...................... environ 36 à 44 . Gjyjb...................... environ 14 à 18 . G^...................... environ 17 à 21 35 Pour une formulation que l'on préfère particulièrement, les gangliosides individuels sont combinés dans le rapport pondéral suivant: • ....................... 21¾ ; 1 10 • GDla ...................... m • GDlb ...................... 16% • GTlb ...................... 19%

On a également trouvé que l'activité importante de soulagement de 5 la douleur selon la présente invention pouvait également s'obtenir par administration individuelle des gang!iosides ci-dessus, sous la forme de mélanges binaires ou sous la forme d'un mélange tertiaire. Ainsi, l'un quelconque de ces gangliosides peut s'administrer sous la forme d'une fraction unique ou l'on peut préparer diverses compositions par combi-10 naison de deux quelconques ou de trois quelconques de ces gangliosides. Par exemple, on peut administrer sous la forme de mélanges binaires le 0M et le GDla, ou le G^ et le G0]b.

Pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, la formulation doit, de préférence, contenir un titre total en 15 gangliosides (GM1 * GDla + GDlb h GT1 b) = à 95% (calculé par référence au poids sec). Les préparations peuvent être des solutions des composés gangliosides ou une poudre lyophilisée des composés associées à un ou plusieurs véhicules ou diluants pharmaceutiquement acceptables, et être contenues dans des milieux tamponnés b un pH convenable isosmotioue aux 20 liquides physiologiques. Chaque dose de mélange doit contenir d'environ 10 à 100 mg du mélange de gangliosides ou des fractions de gangliosides individuels ou de leurs mélanges binaires ou tertiaires. La dose particulière dépend de l'effet recherché et de la voie d'administration. La dose peut, par exemple, être comprise entre 0,143 et 1,43 mg de composé 25 actif par kg de poids du corps par jour, une dose unitaire étant comprise entre 10 et 100 mg/kg de poids du corps.

On donne ci-après quelques compositions pharmaceutiques possibles: Préparation n°l - une fiole de 1 ml contient: - rapport du mélange de gangliosides 100 mg 30 . GM1 ................ 21 % • GDla ........................... 40 % • gdi b........................... 16 % • GTlb ........................... 19 % - tampon de phosphate § pH 7,6M/100 35 dans de l'eau bi-distillée stérile à pyrogëne, q.s.................. 2 ml 1 11 J , x i

Préparation n°2 - une fiole de 2 ml contient: - rapport du mélange de gang!iosides 10 mg • gmi ............................ 21 * . G,„............................ 40 % u i d 5 * GD1 b ........................... 16 * ’ GTlb ........................... 19 % - tampon de phosphate à pH 7,6M/100 dans de l'eau bi-distillée stérile à pyrogène ; q = s,, 2 ml 10 Préparation n°3 - une fiole de 2 ml contient: - rapport du mélange de gang!iosides 25 mg Γ oio/ • bMl ............................ 2i * C Λ.Π <*.

b i a * Si b .......................·*** 16 * ]c ς 10¾

Xv? * 'Jyj ^ •CCtlCSSIttttlCItlIlttïlItt 1.3 ÎO

- tampon de phosphate à pH 7,6M/10G dans de l'eau bi-distillée stérile à pyrogène, q.s.................. 2 ml

Préparation n°4 - une fiole de 2 ml contient: 20 - rapport du mélange rie ganglInsides 75 ma R............ ....... 21 %

Pu . Gn,„ 40 % l> * a . G.,.. ..................... 15 * uib R m i

* "j ^ *v»«C.S4v*.i«*iee*6*»«eSSStî3 A 3 /O

i S

25 - tampon de phosphate à pH 7,6M/100 dans de l'eau bi-distillée stérile à pyrogêne, q.s.................. 2 ml

Préparation nc5 - une fiole de 2 ml contient: - monosialogangl ioside ......... 10 mg

30 - tampon de phosphate à pH 7,6M/1QQ

dans de l'eau bi-distillée stérile à pyrogène, q.s.................. 2 ml

Préparation n°6 - une fiole de 2 ml contient: - trisialoganglioside (G-p·^) ....... 10 mg 35 - tampon de phosphate à pH 7,6M/100 * 12 dans de l'eau bi-distillêe stérile à pyrogène, q.s.................. 2 ml

Préparation n°7 - une fiole de 2 ml contient: - un mélange binaire de fractions 5 individuelles dans le rapport suivant ............................. 30 mg - monosialoganglioside GM1 ......... 60 % - trisialoganglioside (Gy^) ....... 40 % - tampon de phosphate à pH 7.6M/100 10 dans de l'eau bi-distillée stérile à pyrogène, q.s.................. 2 ml

Préparation n°8 - une fiole de 2 ml contient: - un mélange binaire de fractions individuelles dans le rapport suivant 60 mg 15 - monosial ogangl ioside ......... 45 % - trisialogangl ioside (gj-j ^,) ....... 55 % - tampon de phosphate à pH 7,6M/100 dans de l'eau bi-distillée stérile à pyrogène, q.s.................. 2 ml 20 Préparation n°9 - une fiole de 2 ml contient: - un mélange ternaire de fractions individuelles dans le rapport suivant ............................. /5 mg - monosialoganglioside G^. ......... 30 % 25 - disial ogangl ioside (G^ ou Gp^) 45 % - tampon de phosphate à pH 7,6M/10Q dans de l'eau bi-distillée stérile à pyrogène, q.s.................. 2 ml

Préparation n°10 - chaque emplâtre contient: 30 - gangliosides ..................... 100 mg - glycérine ........................ 1,6 g - alcool polyvinylique ............. 0,2 g - polyvinylpyrrolidone ............. 0,1 g - excipient pour favoriser la pëné- 35 tration intradermique ............ 20 g i f 13

Préparation n°ll - 100 g de crème contiennent: - gangliosides dans 5 g de liposomes ou phospholipides mélangés ....... 4g - monostéarate de polyéthylène 5 glycol ........................... 15 g - glycérine ........................ 1,5 g - sorbitol ......................... 1,5 g - ester d'acide paraoxybenzoique ... 0,125 g - eau .............................. 72,9 g 10 Propriétés pharmacologiques

Comme on l'a décrit ci-dessus, on a constaté que la composition de mélanae de aanaliosides et les fr^ri ions imüvidii^lles et leurs méldru'es binaires et tertiaires selon l'invention était utile pour leur activité analgésique dans le soulagement des douleurs occasionnées par diverses 15 neuropathies périphériques. On a effectue les tests suivants pour montrer l'activité supérieure améliorée et inattendue de la composilion selon l'invention par comparaison aux composés de gangliosides individuels.

Activité de soulagement de 1 a douleur vérifié par le test de contorsions 20 occasionnées par la phénylbenzogulnone sur les souris

On mène l'étude en utilisant des souris Suisses mâles (26 à 28 g). On évalue la réaction douloureuse induite par injection intrapéritonéale de 0,25 ml/souris d'une solution de phénylquinone à 0,02% dans de l'alcool éthylique à 5% (contorsion).

25 Cette injection détermine une réaction pénible que l'on peut mesurer par la contorsion abdominale de l'animal.

L'étude évalue l'effet des gangliosides individuels G^, G^ , G_.u et G-t-iî-j aussi bien que du mélange spécifique selon l'invention décrit ci-dessus dans la préparation n° 1 et désignée ici en abrégé sous 30 le nom de GA. Chaque ganglioside à examiner et. le mélange (GA) sont administrés par voie sous-cutanée 30 mn avant la phénylquinone (solubilisation dans 10 ml/kg d'eau distillée).

Les animaux témoins reçoivent 10 ml/kg d'eau distillée par voie sous-cutanée.

35 On évalue le nombre de contorsions effectuées par chaque animal dans une période de 5 mn, (de la 5ëme à la lOême minutes après l'injection de phénylquinone, et l'on calcule ainsi le pourcentage d'inhibition de la réaction nerveuse par comparaison à celle des témoins.

., 14 Résultats du test de contorsion

Les résultats obtenus sont résumés sur le tableau 2.

TABLEAU 2 Résultats du test de contorsion par injection intrapéritonéale de 5 0,5 ml d'une solution de phënylbenzoquinone à 25¾ dans de l'alcool éthylique à 5¾ traitement dose nombre nombre de inhibition (S.C.) mg/kg d'animaux contorsion % 10 -----— contrôle (eau 10 ml par kg S.C.) — 60 33,9 ± 0,76 GA 1 6 30,3 ± 2,20 24,0 2.5 6 17,9 £ 0,72 55,1 15 56 13,0 ± 0,63 66,9 10 12 11,9 ± 0,76 70,1 20 6 16,6 ± 0,84 58,3 30 6 16,8 ± 1,47 57,9 50 6 26,8 ± 1,96 32,8 20 GK1 1 6 32,4 t 1,98 18,7 2.5 6 23,3 ± 1,40 41,6 5 6 19,8 ± 0,60 50,3 j 10 12 18,8 ± 1,28 52,8 20 6 19,1 * 0,89 52,1 25 30 6 19,5 + 0,43 51,1 G01s 5 6 34,2 ± 0,32 14,2 10 6 20,8 ±1,38 47,8 20 6 20,3 ± 1,12 49,1 30 6 20,2 ± 1,08 49,3 30 Gpi^ 5 6 40,1 ± 0,86 10 6 33,5 ± 1,43 16,0 20 12 20,8 ± 0,54 47,8 30 6 18,6 ± 1,09 53,3 GTlb 1 6 34,2 ± 0,68 14,2 35 2,5 6 26,8 ± 1,06 32,8 5 6 21,8 ±0,81 46,6 10 6 19,6 ± 1,12 50,8 20 6 18,1 ± 1,35 54,6 30 6 18,3 ± 1,20 54,1 .. 1 “ 15 D'après les données du tableau 2, on peut voir que l'activité analgésique du mélange de gangliosides (GA) et de ses fractions individuelles a tendance à produire un effet dépendant de la dose. On a observé que l'effet maximum s'obtenait à la dose de 10 mg/kg, tandis que 5 pour des doses plus élevées (20-30 et 50 mg/kg), l'activité diminuait progressivement, et conduisait à une courbe dose-effet en forme de cloche.

On a démontré, en outre, que l'activité analgésique des ganglio-. si des individuels était la suivante, en allant de la plus élevée 8. la 10 plus faible: GA > GM1 > GT] > GD]a > GDlb

Le pourcentage maximum de l'inhibition des contorsions obtenu» par chaque ganglioside individuel ne dépasse en aucun cas une valeur maximum de 55¾. En fait, l'activité a tendance à se stabiliser autour des 15 valeurs atteintes pour la dose de 10 mg/kg sans que l'on enregistre une augmentation significative de la réponse analgésique lorsque l'on augmente encore les doses.

Si on extrapole les données des courbes dose-effet, il est clair que l'activité du mélange de gangliosides est le résultat d'une interac-20 tion entre les quatre gangliosides associés, ce qui se caractérise par un phénomène de synergie dû au rapport spécifique entre les fractions individuelles constituant le mélange total de gangliosides bien qu'i’ soit également démontré que les fractions individuelles présentent une bonne activité de soulagement de la douleur.

25 Utilisation thérapeutique

Les résultats expérimentaux décrits ci-dessus mettent en évidence que le mélange particulier de gangliosides selon l'invention et ses fractions individuelles possèdent une activité de soulagement de la douleur ou analgésique significative. Il en résulte que le mélange de 30 gangliosides, ses fractions individuelles, ses mélanges binaires ou ses mélanges tertiaires, sont utiles pour soulager la douleur occasionnée par différentes neuropathies périphériques telles que les neuropathies diabétiques, les neuralgies trigéminales, la sciatique, la brachialgie cervicale, le zooster herpétique, les neuropathies post-thérapeutiques 35 et d'autres neuropathies présentant un composant douloureux extrêmement sérieux.

Pour le traitement des pathologies ci-dessus, les gangliosides que ’ ‘ 16 ce soit à titre individuel ou en mélanges binaire, tertiaire ou quaternaire, peuvent se préparer dans des formulations telles qu'en ampoule, fiole, emplâtre ou crème dûment préparées en combinaison avec un véhicule, un diluant ou un excipient pharmaceutiquement acceptable. Ces 5 formulations peuvent, en tant que de besoin, être administrées à un patient par diverses voies d'administration, y compris les voies sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, topique, injection, hypo-cutanëe, hypo-dermique. Par exemple, les composés de gangliosides peuvent se formuler sous la forme d'un mélange avec un excipient appro-10 prié et se préparer sous la forme de pansement que Ton applique ensuite directement à la peau et les composés passent à travers la peau à l'intérieur du patient.

L'invention ayant ainsi été décrite, il est évident que Ton peut la faire varier de diverses façons. Ces variantes ne doivent pas être 15 considérées comme s'écartant de l'esprit et de la portée de l'invention et toute modification qui sont évidentes pour l'homme de l'art doivent être comprises dans la portée des revendications suivantes.

ΛΛ i-v> 25 30 35

Claims (24)

1. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu' elle comprend une quantité, efficace pour le soulagement 5 de la douleur nerveuse périphérique, d'au moins un ganglio- side choisi dans le groupe constitué par GM1, GD^a/ GDlb et Grjipk ainsi qu'un excipient ou véhicule pharmaceutiquement acceptable pour l'application à la peau et le passage desdits gangliosides à travers la peau.

2. Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'élle est constiuée, en poids, d' environ 19 à 23% de GM^, d'environ 36 à 44% de GD^a, d'environ 14 à 18% de G^^ et environ 17 à 21% de GT1k*

3. Composition pharmaceutique selon la revendication 15 1, caractérisée en ce qu'elle est constituée, en poids, d'environ 21% de GM1, d'environ 36 à 40% de GDj_af d'environ 16% de Gq-^jj et d'environ 19% de

4. Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est constituée d'au moins 20 deux gangliosides.

5. Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est constituée d'au moins trois gangliosides.

6. Application d'au moins un ganglioside choisi dans 25 le groupe constitué par GM1, GDlar GDi]-, et GTlb Pour la fabrication d'une composition pharmaceutique pour le traitement de la douleur consistant à administrer à un hôte cette composition constituée d'une quantité efficace pour le soulagement de la douleur de cet au moins un ganglio-30 side.

7. Application d'au moins un ganglioside choisi dans le groupe constitué par GM1' GDla' GDlb et GTlb P°ur la fa‘ brication d'une composition pharmaceutique pour le traitement de la douleur occasionnée par des neuropathies péri-35 phériques consistant à administrer à un hôte cette composition comprenant une quantité efficace pour le soulagement de la douleur de cet au moins un ganglioside.

8. Application d'au moins un ganglioside choisi dans le groupe constitué par GM1, GQla, GDlb et GTlb pour la 40 fabrication d'une composition pharmaceutique comprenant - 18 - c* * ·* cet au moins un ganglioside en une quantité, efficace pour le soulagement de la douleur nerveuse, périphérique, ainsi qu'un excipient ou véhicule pharmaceutiquement acceptable 5 pour l'application à la peau et le passage desdits gan- gliosides à travers la peau.

9. Application selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisée en ce qu'elle utilise, en poids, environ 19 à 23% de GM1, environ 36 à 44% de GDla/ * 10 environ 14 à 18% de et environ 17 à 21% de G^^·

10. Application selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisée en ce qu'elle utilise, en poids, environ 21% de GM^, environ 36 à 40% de GD^a, environ 16% de GDlb et environ 19% de GTlb·

11. Application selon l'une quelconque des revendica tions 6 à 8, caractérisée en ce qu'elle utilise d'au moins deux gangliosides.

12. Application selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisée en ce qu'elle utilise d'au moins 20 trois gangliosides.

13. Pansement permettant l'application externe d'une composition pharmaceutique caractérisé en ce qu'il est constitué de: (a) un support susceptible d'être appliqué à la peau 25 contenant une composition pharmaceutique; (b) ladite composition pharmaceutique, constituée d'une part d'une quantité efficace pour le soulagement de la douleur, d'au moins un ganglioside choisi dans le groupe constitué par G^, GD^a, et

30 GTlb et' rï'autre Part d'un véhicule ou excipient » pharmaceutiquement acceptable permettant à ces gangliosides de passer à travers la peau.

14. Pansement selon la revendication 19, caractérisé en ce que ladite composition est constituée d'au moins 35 deux gangliosides.

15. Pansement selon la revendication 13, caractérisé en ce que ladite composition est constituée d'au moins trois gangliosides.

16. Pansement selon la revendication 13, caractérisé 40 en ce que ladite composition est constituée en poids d'en- î» c - 19 - viron 19 à 23% de GM1, environ 36 à 44% de GDla, environ 14 à 18% de Gnl, et environ 17 à 21% de Gm,, Dlb Tlb.

12. Pansement selon la revendication 13, caractérisé 5 en ce que ladite composition est constituée, en poids, d'environ 21% de GM1, environ 36 à 40% de GD1&, environ 16% de GDlb et environ 19% de GTlb·

18. Procédé de traitement de la douleur consistant à administrer à un hôte une composition constituée d'une 10 quantité efficace pour le soulagement de la douleur d'au moins un ganglioside choisi dans le groupe constitué par Si7 GDla' GDlb et GTlb*

19. Procédé de traitement de la douleur occasionnée par des neuropathies périphériques consistant à administrer 15 à un hôte une composition comprenant une quantité efficace pour le soulagement de la douleur d'au moins un ganglioside choisi dans le groupe constitué par G^^, GDba, GD^b et GTlb*

20. Procédé selon la revendication 18 ou 19, caracté-20 risé en ce que cette composition est constituée en poids d'environ 19 à 23% de G^, d'environ 36 à 44% de GDla, d'environ 14 à 18% de GQbb et d'environ 17 à 21% de G^b

21. Procédé selon la revendication 18 ou 19, caractérisé en ce que cette composition est constituée en poids 25 d'environ 21% de GMb, d'environ 36 à 40% de GDla, d'environ 16% de G_,., et d'environ 19% de Gm,, . Dlb Tlb

22. Procédé selon la revendication 18 ou 19, caractérisé en ce que cette composition comprend au moins deux gangliosides.

23. Procédé selon la revendication 18 ou 19, caracté risé en ce que cette composition comprend au moins deux gangliosides.