BE867095A - Nouveaux derives sesquiterpeniques utiles notamment comme inhibiteurs du systeme complementaire et leurs procedes de preparation - Google Patents

Description

  Nouveaux dérivés sesquiterpéniques utiles notamment comme inhibiteurs du système complémentaire et leurs procédés de préparation. 

  
La présente invention concerne des dérivés sesquiterpéniques et leurs sels acceptables pour l'usage pharmaceutique, doués d'activité inhibitrice du système complémentaire des animaux (activité anticomplémentaire et antitumeur) et qui sont utiles comme ingrédients actifs dans des compositions thérapeutiques contre les maladies auto-immunitaires, la néphrite, le rhumatisme, les maladies du collagène, les maladies allergiques, les cancers, etc., ou comme intermédiaires pour la production de ces ingrédients actifs.

  
Le terme "complément" désigne un groupe complexe de protéines des humeurs de l'organisme qui, agissant avec les anticorps ou autres facteurs, jouent un rôle important comme médiateurs des réactions immunologiques, allergiques, immunochimiques et/ou immunopathologiques. Les réactions dans lesquelles le complément participe ont lieu dans le sérum sanguin ou dans d'autres humeurs de l'organisme et sont donc considérées comme des réactions humorales.

  
Il a été signalé que le système complémentaire intervenait dans l'inflammation, la coagulation, la fibrinolyse, les réactions antigène-anticorps,

  
 <EMI ID=1.1> 

  
n[deg.] 4 021 544 Bull World Health Org., 39, 935-938 (1968), Scientific American,
929 (n[deg.] 5), 54-6 (1973), Medical World News, october 11, 53-58, 64-66 (1974), Harvey Lectures, 66, 75-104 (1972), the New England Journal of Medic. 287, 
489-495, 545-549, 592-596, 642-646 (1972), the Johns Hopkins Med. J., 128, 57-74
(1971), and Fédération Proceedings, 32 134-137 (1973)).

  
On connaît divers composés ayant une activité anticomplémentaire, tels que l'acide éthylènediamine-tétracétique (EDTA), le saldox, la phlorizine
(comme décrit par Borsos dans J. Immunol. 94 (4), 629 (1964)), les dérivés de

  
 <EMI ID=2.1> 

  
(1968), les guanidines et phénoxyacétamides (comme décrit par B.R. Baker dans  J. Med. Chem. 12, page 408 (1968)), les esters phosphoniques (comme décrit par E.L. Becker dans B.B.A. 147, page 289 (1967)), la chlorophylline, la glycirrhizine, etc. Cependant, ces composés ne sont pas satisfaisants pour l'usage pratique parce qu'ils sont fortement toxiques ou qu'ils ont une faible activité anticomplémentaire. Pour autant qu'on le sache actuellement, on ne dispose pas dans le commerce de composé ou agent anticomplémentaire.

  
L'invention a donc pour objet de nouveaux dérivés sesquiterpéniques et leurs sels, qui possèdent une activité anticomplémentaire élevée et une faible toxicité.

  
L'invention concerne également un procédé pour la préparation de ces dérivés sesquiterpéniques.

  
L'invention concerne également des compositions pharmaceutiques comprenant comme ingrédient actif ces dérivés sesquiterpéniques ou leurs sels, et les formes d'administration de ces compositions. 

  
L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description qui suit, en référence aux dessins annexés, dans lesquels :
- les figures 1 et 2 sont des microphotographies de

  
 <EMI ID=3.1> 

  
formule (la) selon l'invention;
- la figure 3 est une microphotographie de Stachybotrys complementi nov. sp. T-789;
- la figure 4 est une microphotographie de Stachybotrys echinata var. sp. T-791;
- la figure 5 représente un spectre de résonance magné- <EMI ID=4.1> 
- les figures 6 à 8 représentent les spectres de résonance magnétique nucléaire du composé (Ib) obtenu à l'exemple 5 ci-après, dans trois solvants différents; et
- la figure 9 représente le spectre de résonance magnétique nucléaire du composé obtenu à l'exemple 9 ci-après.

  
On décrit ci-après en détail les dérivés sesquiterpéniques

  
 <EMI ID=5.1> 

  
éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle et tert-butyle.

  
Les groupes alcanoyle inférieurs représentés par R

  
 <EMI ID=6.1> 

  
qu'acétyle, propionyle, butyryle et isobutyryle.

  
Les groupes (alcanoyloxy inférieur)méthyle représentés par R2 et R3 comprennent les groupes méthyle substitués par les groupes alcanoyloxy correspondant aux groupes alcanoyle inférieurs décrits ci-dessus, tels qu'acétyloxyméthyle, propionyloxyméthyle, butyryloxyméthyle et isobutyryloxyméthyle.

  
Les groupes (alcoxy inférieur)carbonyle représentés

  
par R 7 et R8 comprennent les groupes alcoxycarbonyle à chaîne droite ou ramifiée en C2-CS tels que méthoxycarbonyle, éthoxycarbonyle, n-propoxycarbonyle, n-butoxycarbonyle et tert-butoxycarbonyle.

Les groupes alcanoyloxy inférieurs représentés par

  
R et comprennent les groupes alcanoyloxy à chaîne droite ou ramifiée

  
en C2-C4 tels qu'acétoxy, propionyloxy, butyryloxy et isobutyryloxy. 

  
L'invention concerne donc de nouveaux dérivés sesquiterpéniques représentés par la formule générale : 

  

 <EMI ID=7.1> 


  
 <EMI ID=8.1> 

  
rieur ou alcanoyle inférieur, R <2> et R <3> sont identiques ou différents et représentent chacun un groupe formyle, hydroxyméthyle, hydroxy, carboxy, alcanoyl-

  
 <EMI ID=9.1> 

  
identiques ou différents et représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe cyano, alcoxycarbonyle inférieur ou carboxy, ou bien R <2> et R <3> pris
-R9 0 <EMI ID=10.1> 

  
sont identiques ou différents et représentent chacun un groupe hydroxy ou

  
 <EMI ID=11.1> 

  
R et R , pris ensemble, peuvent former un reste oxo et R et R , pris ensemble, peuvent former un groupe alkylidènedioxy.- 

  
L'invention concerne également les sels des dérivés

  
 <EMI ID=12.1> 

  
réaction de ces dérivés avec des composés basiques.

  
L'invention concerne également les procédés pour la

  
 <EMI ID=13.1> 

  
comme décrit en détail ci-après, utilisant comme produit de départ un composé de formule générale (la) ci-après.

  
L'invention concerne également des compositions pharmaceutiques contenant une quantité thérapeutiquement active des dérivés sesquiterpéniques de formule générale (I) ci-dessus pour produire une activité anticomplémentaire chez les animaux et les formes d'administration de ces compositions, en particulier pour traiter les troubles néphritiques chez

  
les animaux atteints de ces troubles. 

  
 <EMI ID=14.1> 

  
benzofuranne),

  
(13) 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-décahydro-

  
 <EMI ID=15.1> 

  
benzofuranne),

  
(14) 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-décahydro-

  
naphtalène-1-spiro-2'-(6'-carboxy-7'-formyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuranne),

  
 <EMI ID=16.1> 

  
naphtalène-1-spiro-2'-(7'-carboxy-6'-formyl-4'-méthoxy-2',3'-dihydrobenzofuranne),

  
 <EMI ID=17.1> 

  
dihydrobenzofuranne],

  
(17) 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8a-décahydro-

  
 <EMI ID=18.1> 

  
hydronaphtalène-1-spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-propionyloxy-2',3'-dihydrobenzofuranne),

  
 <EMI ID=19.1> 

  
naphtalène-1-spiro-2'-[6',7'-di-(2-cyano-2-carboxyvinyl)-4'-acétoxy2',3'-dihydrobenzofuranne], Les groupes alkylidènedioxy inférieurs représentés par R4 et R6 comprennent les groupes alkylidène à cnaîne droite ou ramifiée en

  
 <EMI ID=20.1> 

  
isopropylidènedioxy et butylidènedioxy.

  
On donne ci-après quelques exemples caractéristiques non limitatifs des dérivés sesquiterpéniques de l'invention :

  
(1) 6,7-dihydroxy-2,5,5-Sa-tétraméthyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-décahydro-

  
 <EMI ID=21.1> 

  
furanne),

  
(2) 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-décahydro-

  
naphtalène-1-spiro-2'-(4',6',7'-trihydroxy-2',3'-dihydrobenzofuranne),

  
 <EMI ID=22.1> 

  
dihydrobenzofuranne],

  
(4) 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-décahydro-

  
 <EMI ID=23.1> 

  
hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuranne],

  
(6) 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-décahydro-

  
 <EMI ID=24.1> 

  
dihydrobenzofuranne],

  
(8) 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-décahydro-

  
 <EMI ID=25.1> 

  
dihydrobenzofuranne], 

  
(9) 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl- 1,2,3,4,4a,5,6,7,8a-décahydro-

  
 <EMI ID=26.1>   <EMI ID=27.1> 

  
hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuranne],

  
(37) 6,7-isopropylidènedioxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-

  
 <EMI ID=28.1> 

  
hydronaphtalène-l-spiro-2 '-[6 ' ,7 '-di-(2-carboxyvinyl)-4 '-hydroxy-2',3 'dihydrobenzofuranne],

  
(39) 6,7-isopropylidènedioxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-

  
 <EMI ID=29.1> 

  
4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuranne]&#65533; 

  
(24) 6,7-diacétoxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-décahydro-

  
 <EMI ID=30.1> 

  
benzofuranne),

  
(26) 7-acétoxy-6-hydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-décahydro-

  
 <EMI ID=31.1> 

  
benzofuranne),

  
(29) 6,7-diacétoxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-décahydro-

  
naphtalène-1-apiro-2'-[6',7'-di-(2,2-dicyanovinyl)-4'-éthoxy-2',3'dihydrobenzofuranne],

  
 <EMI ID=32.1> 

  
hydronaphtalène-1-spiro-2'-[6',7'-di-(2-cyano-2-carboxyvinyl)-4'propoxy-2',3'-dihydrobenzofuranne],

  
 <EMI ID=33.1> 

  
2',3'-dihydrobenzofuranne],

  
(34) 6,7-éthylènedioxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-décahydro-

  
naphtalène-1-spiro-2'-[6',7'-di-(2-cyano-2-éthoxycarbonylvinyl)-4L hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuranne],

  
 <EMI ID=34.1> 

  
vinyl)-4'-acétoxy-2',3'-dihydrobenzofuranne],  <EMI ID=35.1> 

  
(65) 6-hydroxy-4-acétyloxy-8-oxo-2,3,6,8-tétrahydro-furo[3,4-g]benzofuranne-

  
2-spiro-l'-(6',7'-isopropylidènedioxy-2',5',5',8'a-tétraméthyl-l',2',-

  
 <EMI ID=36.1> 

  
dihydrobenzofuranne)..

  
La nomenclature des composés ci-dessus est basée sur les numéros

  
 <EMI ID=37.1> 

  
générale (I) dans laquelle R <2> et R <3> pris ensemble avec les deux atomes de carbone auxquels ils sont liés forment un cycle lactonique sont nommés selon les numéros de positions dans la formule de base suivante

  

 <EMI ID=38.1> 


  
On décrit en détail ci-dessous les procédés de préparation des dérivés sesquiterpéniques de formule générale (I) selon l'invention. 

  
 <EMI ID=39.1> 

  
hydronaphtalène-1-spiro-2'-[6',7'-di-(2-cyano-2-isopropoxycarbonylvinyl)-4'-méthoxy-2',3'-dihydrobenzofuranne],

  
 <EMI ID=40.1> 

  
8',8'a-décahydronaphtalène),

  
(56) 4,6-dihydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tétrahydro-furo[3,4-g]benzofuranne-2-

  
 <EMI ID=41.1>  (2) Stachybotrys sp. T-789

  
Cette souche a été isolée dans le sol à Naruto City, Tokushima, Japon.

  
(3) Stachybotrys sp. T-791

  
Cette souche a été isolée dans le sol à Tokushima City, Tokushima, Japon.

  
Caractéristiques sur divers milieux de culture

  
 <EMI ID=42.1> 

  
Les caractéristiques de culture de cette souche sur divers milieux de culture, d'après les examens visuel :et microscopique (figures 1 et 2) sont les suivantes :

  
Observation visuelle

  
On observe une très bonne croissance sur divers milieux de culture habituellement utilisés dans la culture des moisissures, mais l'adhérence des phialospores n'est pas nécessairement bonne, sauf sur le milieu farine d'avoine-gélose. Les conditions de croissance sur les milieux caractéristiques sont indiquées ci-dessous.

  
(i) Milieu extrait de malt-gélose :

  
 <EMI ID=43.1> 

  
 <EMI ID=44.1> 

  
à 35 mm. La colonie pousse en forme circulaire et sa périphérie a une 

  
forme fortement érodée. La surface de la colonie est lisse et les hyphes aériennes s'étirent en épaisseur comme un mat circulaire au centre de la colonie et poussent avec une forte densité. La colonie vire progressivement du blanc dans le stade initial de la culture à l'ivoire clair (ivoire clair, 2ca). Deux semaine après le début de la culture, les phialospores

  
 <EMI ID=45.1> 

  
Il n'y a pas de formation de Sclérotium et d'autres organes sexuels sporogènes. La couleur de l'envers de la colonie va de l'incolore.au marron cuivre (marron cuivre 5ie).

  
Il y a production d'un pigment soluble (marron cuivre 5ie).

  
 <EMI ID=46.1> 

  
colonie est convexe au centre et la périphérie a une forme érodée. La colonie pré' sente un plissement en cercles concentriques. partir du centre de la colonie. 

  
Préparation des composés de formule (la)

  

 <EMI ID=47.1> 


  
Les dérivés sesquiterpéniques de formule générale (I) selon l'invention peuvent être préparés par divers procédés selon les types de substituants présents dans leur molécule. Par exemple un composé de

  
 <EMI ID=48.1> 

  
représenté par la formule générale (Ia) ci-dessus peut être préparé en utilisant les micro-organismes connus suivants appartenant au genre Stachybotrys, ou des micro-organismes du genre Stachybotrys récemment

  
isolés par la demanderesse :

  
Stachybotrys alternans IFO 9355,

  
S tachybotrys chartarum IFO 5369,

  
Stachybotrys chartarum IFO 7222,

  
Stachybotrys cylindrospora 8858,

  
Stachybotrys echinata 7525 et

  
Stachybotrys reniformis 7067.

  
Les micro-organismes récemment isolés sont de nouvelles souches appartenant au genre Stachybotrys, comme décrit ci-dessous et ont

  
été dénommés Stachybotrys complementi nov. sp. K-76, Stachybotrys complementi nov. sp. T-789 et Stachybotrys échina ta var. sp. T- 791, plus brièvement ciaprès Stachybotrys sp. K-76, Stachybotrys sp. T-789 et.Stachybotrys sp. T-791.

  
Habitat

  
(1) Stachybotrys sp. K-76

  
Cette souche a été isolée dans le sol à Ishigaki City, Okinawa, Japon. 

  
sp. K-76. Cependant, il y a des différences dans les propriétés sur les milieux de culture. Les caractéristiques sont très nettement différentes sur les deux milieux suivants : 

  
Observation visuelle.

  
(i) Milieu extrait de malt-gélose :

  
La croissance est très lente et, par culture à 27[deg.]C pendant 30 jours, la dimension de la colonie atteint 17 à 20 mm. La périphérie de la colonie pousse de manière ondulée et elle est restreinte. La colonie présente en son centre une protubérance et un pli radial sur la périphérie. Les'hyphes aériennes adhèrent sur une faible épaisseur à toute la surface de la colonie. Dans le stade initial de culture, les hyphes sont

  
 <EMI ID=49.1> 

  
de la colonie prend une couleur taupe (1) et les conidies poussent de manière dense. La formation des conidies est annulaire vers la périphérie de la colonie. La couleur de l'envers est marron-liège (4ie). Le pigment soluble est abondant et de couleur ambre (31e).

  
(ii) Milieu gélosé de Czapek :

  
La croissance est bonne et, par culture à 27[deg.]C pendant

  
30 jours, la colonie atteint 45 mm. Le centre est convexe et la colonie forme un pli radial. La portion périphérique de la colonie présente une croissance  ondulée. Des hyphes aériennes blanches adhèrent en faible épaisseur de manière circulaire concentrique vers l'extérieur, depuis la portion centrale

  
convexe de la colonie.Des conidies se forment concentriquement seulement à

  
la partie périphérique de la colonie. Les hyphes sont à l'état dissous sur

  
la portion convexe et sont très hygroscopiques. La couleur de l'envers de la surface de la colonie est brun-moutarde (2pi). Il n'y a pas de formation

  
de pigment soluble.

  
(3) Stachybotrys sp. T-791 

  
Les caractéristiques de culture de T-791 qui appartient aux Fungi Imperfecti, sur divers milieux de culture, d'après l'examen

  
visuel et microscopique (figure 4) sont les suivantes 

  
Observation visuelle.

  
(i) Milieu extrait de malt-gélose :

  
La croissance est rapide et irrégulière. La couleur de

  
 <EMI ID=50.1> 

  
plate et la formation de contâtes est bonne. La couleur des hyphes est biscuit (2ec) à marron (3ie) et l'on observe des gouttelettes liquides Dès le stade initial de la culture, la colonie est fortement recouverte d'hyphes blanc à rose perle (rose perle 4ca). Au cours de la culture, la couleur de la colonie devient gris-noir (gris i). Il se forme un grand nombre de masses de spores stérigmateux. On observe de grandes quantités de gouttelettes liquides. La couleur de l'envers varie du marron rouille

  
 <EMI ID=51.1> 

  
y a production d'un pigment soluble de couleur beurre-whisky (beurrewhisky 3ne), mais de couleur pâle.

  
(iii) Milieu gélosé de Czapek-Dox ;

  
 <EMI ID=52.1> 

  
30 jours, la dimension de la colonie atteint 40 à 45 mm. La colonie présente un plissement concentrique et une protubérance en son centre.

  
La périphérie de la colonie est ondulée. La couleur de l'envers de la

  
colonie est marron bagage (4ne). Sur la surface de la colonie des hyphes incolores à blanches adhèrent sur une faible épaisseur, suivant une forme concentrique depuis la partie centrale qui n'est pas recouverte d'hyphes aériennes ayant une couleur marron grillé (41g). On n'observe pas de gouttelettes liquides, mais la partie centrale de la colonie est très hygroscopique. Il n'y a presque pas de formation de phialospores. Le pigment soluble est

  
 <EMI ID=53.1> 

  
(iv) Milieu farine d'avoine-gélose :

  
 <EMI ID=54.1> 

  
pendant 30 jours, la dimension de la colonie atteint 60 à 70 mm. La colonie est mince et plate études le stade initial de culture, il se forme des hyphes incolores à blanches sur toute sa surface. Des hyphes dressées de

  
 <EMI ID=55.1> 

  
ne sont pas denses. Deux semaines après le début de la culture, l'adhérence des phialospores s 'étend sur toute la surface de la colonie et

  
 <EMI ID=56.1> 

  
colonie est brun-beige (3ig) à marron (3ie). Le pigment soluble

  
produit est jaune colonial pâle (2ca).

  
(2) Stachybotrys sp. T-789

  
Les caractéristiques de culture de la souche T-789, qui fait partie des Fungi Imperfecti, sur divers milieux de culture sont observées à l'oeil nu et au microscope (figure 3); les résultats obtenus sont décrits ci-dessous. Les caractéristiques morphologiques de la souche T-789 à l'examen microscopique concordent bien avec celles de Stachybotrys Propriétés morphologiques.

  
(1) Stachybotrys sp. K-76

  
Les figures 1 et 2 indiquent clairement les propriétés suivantes.

  
On n'observe pas de sclérotium et d'autres organes

  
de reproduction sexuelle sur divers milieux de culture, mais on observe

  
la formation de spores asexuées du type phialospores.

  
Des hyphes se forment sur divers milieux de culture,

  
à ramifications compliquées et s'étirent longitudinalement et transversale-

  
 <EMI ID=57.1> 

  
Les phialophores se ramifient simplement à partir des hyphes (pas de ramification d'un phialophore à un autre) et possèdent 3 à

  
4 septes à partir des cellules du pied de la base. Ils s'étirent pressés Ou

  
 <EMI ID=58.1> 

  
sont légèrement renflées et, à partir des extrémités du phialophore, il se forme 3 à 7 phialides dressés elliptiques claviformes de 7,9-9,3 x 3,6-4,7 u.

  
 <EMI ID=59.1> 

  
phialospores sont formées ramifiées vers la base, depuis les extrémités des phialides. Les phialospores ne forment pas de chaînes droites mais de

  
 <EMI ID=60.1> 

  
sous-globuléux à ovales avec des dimensions de 4,9-8,0 x 3,3-4,7 u et la surface des phialophores est rugueuse à verruqueuse et leur

  
couleur est. lierre foncé (24 po) à noir grisâtre. On n'observe pas sur les masses de phialospores de membrane due à une matière muqueuse.

  
L'état taxonomique de cette souche ayant les propriétés microbiologiques ci-dessus a été étudié par G. L. Barron, dans The

  
 <EMI ID=61.1> 

  
(1968), J. C. Gilman dans A Manual of Soil Fungi, The Iowa State University Press (1971) Ames, Iowa, Etats-Unis d'Amérique, et par J. A. von Arx dans

  
The Genera of Fungi Sporelating in Pure Culture (1970) Verlag von J. Cremer
3301 Lehre. Selon le système taxonomique de Saccardo, cette souche appartient à la classe des hyphomycetes, famille des dématiacées, genre Stachybotrys. Autrement dit, les propriétés de cette souche caractérisées par l'absence d'ascocarpes et autres organes sexuels de reproduction, la formation de phialospores brun foncé à partir des phialides et le rassemblement des phialospores résultantes en une forme semi-circulaire aux qui exsudent. Il n'y a pas de production de pigment soluble.

  
(ii) Milieu pomme de terre-glucose :

  
La croissance est très rapide et, par culture à 27[deg.]C pendant 30 jours, la dimension de la colonie atteint 70 mm. La partie périphérique de la colonie s'étend sous forme dendritique et l'on observe des hyphes blanches diluées. Les gouttelettes liquides sont très nettes. On n'observe presque pas de formation de spore. La surface de l'envers de la colonie est ambre clair (3ie). Il n'y a pas de formation de pigment soluble.

  
(iii) Milieu gélosé de Czapek-Dox :

  
La croissance est mauvaise.

  
(iv) Milieu mucor synthétique-gélose :

  
La croissance est mauvaise.

  
(v) Milieu farine d'avoine-gélose :

  
La croissance est très bonne,de sorte qu'en 2 semaines la boite de Petri est recouverte. La colonie est mince et plate. La formation d'hyphes est abondante dès le stade initial de culture et la formation des

  
 <EMI ID=62.1> 

  
brun foncé (3pn) au cours de la culture. De grandes quantités de gouttelettes liquides apparaissent sur les hyphes. Il n'y a pas de formation de pigment soluble.

  
Propriétés physiologiques.

  
Stachybotris K-76, T-789 et T-691 sont toutes des souches aérobies et elles ont les propriétés physiologiques suivantes.

  

 <EMI ID=63.1> 
 

  
milieu gélosé de Czapek-Dox. Cependant, la formation de phialospores

  
sur le milieu gélosé de Czapek est rarement observée pour les deux premières souches. Ceci est d'un différence de culture.

  
En outre, comme indiqué en comparaison avec Stachybotrys sp. K-76 ci-dessus, les propriétés morphologiques de cette souche sont évidemment différentes de celles de Stachybotrys lobulata. En outre, la gamme

  
de pH de croissance optimale pour cette souche est de 4,5-10,5. De ce point

  
de vue,également, cette souche diffère de la souche K-76.

  
Pour les raisons ci-dessus, on a donc considéré cette souche comme une nouvelle souche et on l'a nommée Stachybotrys sp. T"789.

  
(3) Stachybotrys sp. T-791

  
Les propriétés suivantes ressortent de la figure 4.Les phialophores sont ramifiés simplement et restent dressés. Les extrémités des phialophores sont légèrement renflées en forme de bâtonnets. Cependant, le renflement n'est pas si important qu'on l'observe dans les souches standards Stachybotrys echinata IFO 7525 et 8856. Cette souche présente, une largeur

  
 <EMI ID=64.1> 

  
phialophores qui se ramifient sont dressés avec des cellules au pied à partir d'hyphes végétatives ou aériennes ayant 2 à 3 septes et une largeur de 40-80 x 3,0-3,5&#65533;. La paroi cellulaire du phialophore n'est pas échinulée, mais lisse.

  
Trois à six phialides se forment à partir de la

  
portion renflée aux extrémités des phialophores. En outre, des

  
phialospores d'une cellule ayant une protubérance échinulée et des dimensions de 4,3-5,2 x 3,0-4,2 u se forment continuellement vers la base aux extrémités des phialides et une chaîne de 24 à 70 conidies est formée. Les phialides sont claviformes et ont des dimensions de 6,9-10,7 x 3,5-4,7u. Les phialides et phialospores sont incolores et les phialides ont une couleur café (3pn) à noire.

  
Le statut taxonomique de cette souche ayant les propriétés microbiologiques décrites ci-dessus a été étudié dans les manuels indiqués ci-dessus, dans le paragraphe traitant de la souche K-76. On a trouvé, en conséquence, que cette souche appartient au genre Stachybotrys
(genre Menmoniella). Plus particulièrement, cette souche ne possède pas d'ascocarpes.et d'autres organes de reproduction sexuelle et des phialospores brun foncé se forment en continu à partir des phialides, ,

  
Les longues chaînes de spore sont formées. Les propriétés de cette souche extrémités supérieurs des phialides sont bien conformes avec les propriétés du genre S tachybotrys.

  
 <EMI ID=65.1> 

  
tifiées en référence aux manuels décrits ci-dessus et avec des références de la littérature telles que:G.R. BISBY Trans. Brit. Mycol. Soc. 26, pages 133-143

  
 <EMI ID=66.1> 

  
39,pages 153-157 (1961) et en comparaison avec les souches standards conservées à l'IFO (Institute for fermentation Osaka,Japon). En conséquence, on a estimé que la souche K-76 est très semblable à Stachybotrys lobulata IFO 5369, parce que les phialospores de la souche K-76 ont une protubérance varriqueuse et

  
sont de forme ovale à ellipsoïdale. Cependant, il existe des différences :
Stachybotrys lobulata possède des phialophores pouvant atteindre 1 mm et, tandis que la souche K-76 présente une ramification simple, la souche S tachybotrys lobulata possède la propriété qu'un autre phialophore se ramifie et s'étend à partir d'un phialophore. Par rapport à la croissance sur divers milieux de culture, la souche K-76 produit une grande quantité de pigments solubles

  
et la formation de conidies est très mauvaise sur les milieux à la gélose,

  
sauf sur le milieu pomme de terre-glucose-gélose et le milieu farine d'avoine-gélose. De plus, S tachybotrys lobulata pousse très rapidement sur divers milieux de culture et il se forme une colonie plate sans pli. La

  
 <EMI ID=67.1> 

  
de Czapek-Dox, .de manière à caractériser la couleur de la colonie. Il n'y a pas de production de pigment soluble, ou seulement en très faible quantité.

  
D'après les différences ci-dessus, on a estimé que la souche K-76 est une nouvelle souche différente de Stachybotrys lobulata et on l'a appelée Stachybotrys sp. K-76.

  
(2) S tachybotrys sp. T-789 

  
Les caractéristiques suivantes ressortent de la figure 3. Cette souche a tout à fait la même morphologie que Stachybotrys sp. K-76, bien qu'il y ait une certaine différence dans la dimension de la colonie.

  
De la même manière que chez S tachybotrys sp. K-76, on a comparé les propriétés microbiologiques ci-dessus avec les manuels de rechercha et les références de la littérature mentionnés ci-dessus et avec les souches standards de l'IFO. On a trouvé en conséquence que cette souche est très semblable à Stachybotrys lobulata IFO 5369 et à Stachybotrys sp. K-76. Cette souche présente une bonne formation de phialospores sur le ' Production du composé de formule (la) par les micro-organismes du genre S tachybotrys.

  
Plus particulièrement, la préparation du composé de formule (Ia) par les micro-organismes du genre Stachybotrys décrits cidessus s'effectue de la manière suivante.

  
On cultive d'àbord les micro-organismes dans un milieu contenant des substances nutritives et additifs ordinaires. Les sources d'azote, généralement utilisées comme substrat de culture, comprennent

  
par exemple la poudre de soja, l'huile de soja, la liqueur de trempage

  
de maïs, l'extrait de levure, la levure séchée,la farine d'avoine, l'extrait de viande, la caséine hydrolysée, les sels d'ammonium et les nitrates.

  
Des exemples de sources de carbone appropriées sont le glucose, le glycérol, le maltose, l'amidon, le lactose, le saccharose et les mélasses. Des exemples d'additifs au milieu de culture comprennent des sels inorganiques tels que carbonate de calcium, chlorure de sodium, sulfate de magnésium et acide phosphorique. Si nécessaire, le milieu de culture peut en outre contenir de faibles quantités de sels de métaux tels que fer, cuivre, manganèse et zinc. la culture peut s'effectuer dans un milieu aqueux ordinaire contenant le substrat ci-dessus en utilisant une technique de culture de surface ou de culture submergée avec aération et agitation.

  
On préfère la culture submergée avec aération et agitation. On peut

  
 <EMI ID=68.1> 

  
de préférence 20 à 32[deg.]C, pendant une durée ordinairement comprise entre environ 3 et 7 jours dans des conditions ordinaires d'aération, en maintenant le pH du milieu de culture à environ 3,5-11,5, de préférence 4,5-9,5.

  
Après la culture, on récupère la substance produite

  
du bouillon de culture. La méthode de récupération n'est pas particulièrement limitée et on peut utiliser diverses méthodes connues utilisant les propriétés physicochimiques des substances produites. On peut récupérer le produit, par exemple,par une méthode utilisant les différences de solubilités entre les produits et les impuretés, une méthode utilisant les différences de pouvoirs d'adsorption et d'affinité pour des adsorbants ordinaires, tels que le charbon activé, le XAD-2, le gel de silice, les résines échangeuses d'ions ou la résine Sephadex (Pharmacia Fine Chemicals), une méthode utilisant les différences de coefficients de distribution entre deux phases liquides, et les combinaisons de ces méthodes.

  
Plus particulièrement, on filtre ou on centrifuge le bouillon de culture, d'une manière classique, pour séparer les cellules. 

  
T-791 sont conformes à celles du genre Stachybotrys (genre Menmoniella).

  
Les diverses propriétés de cette souche ont été étudiées dans les manuels de recherche ci-dessus et les références de la littérature comme R. K. ZUCK dans Mycologia, 38, pages 69-76 (1964)et G. Smith T rans. Brit. Mycol. Soc., 45, pages 387-394 (1962). et en comparaison avec les souches standards conservées à l'IFO. On a, en conséquence, estimé que, puisque les phialospores sont formées en continu et vers

  
la base à partir des phialides, la souche T-791 appartient au genre

  
 <EMI ID=69.1> 

  
de R. K. ZUCK et Smith ci-dessus, la souche T-791 a été considérée

  
comme une souche analogue à Stachybotrys echinata. On l'a donc comparée avec Stachybotrys echinata IFO 7525 et 8856.

  
Sur le plan morphologique, les protubérances échinulées caractéristiques de deux types de souches ne sent pas observées sur les

  
parois cellulaires des phialophorès de la souche T-791. En outre, dans les souches standards, les extrémités des phialophores sont renflées à deux à troie fois la largeur de l'hyphe des phialophores; cependant, on n'observe pas de renflement marqué dans la souche de l'invention. De plus, les deux

  
souches standards présentent une bonne croissance sur divers milieux

  
de culture, en particulier sur le milieu pomme de terre-glucose-gélose,

  
et forment des colonies circulaires un peu dressées et les hyphes adhèrent abondamment. De plus, on observe une certaine formation visible de conidies. Par contre, la souche selon l'invention présente une croissance dendritique irrégulière, comme indiqué ci-dessus, et on observe une mauvaise formation d'hyphes et de conidies. A partir des différences microbiologiques ci-dessus,

  
on a considéré que la souche selon l'invention est une nouvelle souche et

  
on l'a nommée Stachybotrys sp. T-791.

  
L'indication des couleurs dans ce qui précède et dans

  
la description qui suit est conforme à la méthode décrite dans Color

  
Harmony Manual, Container Corporation of America (1958).

  
Des échantillons des nouvelles souches Stachybotrys

  
sp. K-76, Stachybotrys sp. 6-789 et Stachybotrys sp. T-791 ont été déposées

  
au Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Japon, sous les numéros de dépôt FERM-P n[deg.] 3801, 3802 et 3803, respectivement. 

  
un agent oxydant. On peut utiliser n'importe quels agents oxydants inorganiques et organiques classiques. Des exemples caractéristiques d'agents oxydants inorganiques que l'on peut utiliser comprennent les permanganates, l'oxyde de manganèse, le pyrophosphate de manganèse, l'acide chromique,

  
les chromates, l'oxyde d'argent, le nitrate d'argent, les réactifs de Tollens, l'oxyde d'or, le peroxyde de nickel, le dioxyde de sélénium,

  
le chlore, le brome, l'iode, l'acide hypochloreux, l'acide hypobromeux, l'acide perchlorique, l'acide periodique, les sels, les acides hypohalogéneux et perhalogéniques ci-dessus, l'acide nitrique, l'acide nitreux, les oxydes d'azote, les sels de cobalt tels que sulfate cobaltique, acétate cobaltique, les sels de cérium, tels que sulfate de cérium, oxyde de

  
cérium et perchlorate de cérium, le peroxyde d'hydrogène et l'ozone. Les exemples d'agents oxydants organiques que l'on peut utiliser sont le N-bromosuccinimide, le N-chlorosuccinimide, le N-chloro-p-toluènesulfonamide de sodium, le N-chlorobenzènesulfonamide de sodium, les composés azoïques

  
tels qu'azodicarboxylate d'éthyle et 4-phényl-l,2,4-triazoline-3,5-dione

  
et les acides percarboxyliques tels qu'acide performique, acide peracétique, acide monoperphtalique, acide trifluoroperacétique, acide perbenzo'ique

  
et acide m-chloroperbenzo'ique.

  
Parmi ces agents oxydants, on préfère les permanganates, l'oxyde d'argent, le peroxyde d'hydrogène; l'acide chromique, l'acide peracétique et l'acide perbenzo'ique et, plus particulièrement, les permanganates.

  
De préférence, le procédé d'oxydation utilisant un agent oxydant est mis en oeuvre dans un solvant convenable. Des exemples de solvants convenables sont l'eau et les solvants organiques hydratés et anhydres, par exemple les alcools tels que méthanol et éthanol, la pyridine, les éthers tels que dioxanne, tétrahydrofuranne et éther éthylique, les  cétones telles qu'acétone et méthyléthylcétone, les acides carboxyliques tels qu'acide acétique et acide propionique, les esters tels que l'acétate d'éthyle, les hydrocarbures aromatiques tels que benzène ou chlorobenzène, l'hexaméthylphosphorotriamide, le diméthylformamide et le diméthylsulfoxyde. La quantité appropriée d'agent oxydant est d'environ 1 à 10 équivalents,

  
de préférence 1 à 2 équivalents,par groupe formyle du composé de départ (IA). Dn peut effectuer la réaction entre environ -10 et 100[deg.]C, de préférence

  
à 0-50[deg.]C, pendant environ 30 min à 24 h.

  
On peut mettre en oeuvre le procédé d'oxydation par contact utilisant un gaz contenant de l'oxygène tel que l'air ou l'oxygène Ensuite, on ajoute du méthanol à la liqueur surnageante et on agite le mélange et on le laisse reposer pendant 2 à 3 h. On sépare à nouveau le précipité par centrifugation. On extrait le résidu avec son volume d'acétate d'éthyle et on élimine le solvant par distillation. On dissout l'extrait dans le méthanol et on fait passer la solution sur une colonne de charbon activé et on chasse le solvant de l'éluat par distillation. On filtre le

  
 <EMI ID=70.1> 

  
à un essai d'activité anticomplémentaire décrit ci-après. On recueille les fractions actives et on chasse le solvant par distillation. On peut ainsi

  
 <EMI ID=71.1> 

  
naphtalène-1-spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuranne) pur de formule développée (la) ci-dessus.

  
Préparation d'autres composés de formule générale (i).

  
On peut préparer des dérivés sesquiterpéniques de formule

  
 <EMI ID=72.1> 

  
du composé de formule (la) comme composé de départ, par l'un des procédés décrits ci-après ou par une combinaison de deux ou plusieurs de ces procédés.

  
Procédé (1) :

  
 <EMI ID=73.1> 

  
dans.laquelle l'un ou les deux restes R <2> et R3 représentent des groupes carboxy, qui sont dénommés ci-après composés (IB),en oxydant des composés

  
 <EMI ID=74.1> 

  
 <EMI ID=75.1> 

  
composé (la).

  
On peut effectuer la réaction d'oxydation selon des

  
 <EMI ID=76.1> 

  
partir d'aldéhydes aromatiques. Les exemples de procédés d'oxydation utilisables comprennent les procédés utilisant un agent oxydant, les  procédés par irradiation en l'absence de catalyseur, les procédés d'oxydation par contact en présence d'un catalyseur, en utilisant l'air ou l'oxygène, les procédés d'oxydation électrolytique en présence d'un composé de cuivre ou d'acide sulfurique et les procédés enzymatiques. Pour la simplicité des opérations, etc., la facilité de séparation et de purification du produit de réaction et le rendement, etc., les procédés utilisant un agent oxydant et les procédés d'oxydation par contact utilisant l'air ou l'oxygène sont avantageux.

  
Il n'y a pas limitation particulière aux agents oxydants qui peuvent être utilisés pour la mise en oeuvre du procédé utilisant 
 <EMI ID=77.1> 
 Les formules ci-dessus représentent un exemple du composé

  
 <EMI ID=78.1> 

  
hydroxy.

  
Cette structure a été confirmée par dissolution du composé (Ibl) (composé cristallisé) dans le diméthylsulfoxyde et tracé de son spectre de RMN au cours du temps. 20 min après la dissolution, on observe un pic à 9,89 ppm,qui est un signal caractéristique d'un proton aldéhydique (-CHO) en plus d'un pic à 6,36 ppm caractéristique du cycle lactol. Le rapport intégré de ce dernier pic au premier est d'environ 73:27. 2 h après la dissolution, le pic à 9,89 ppm a augmenté un peu, le rapport intégré a atteint environ 70:30. Ce rapport intégré atteint 2 h après la dissolution lui-même, par exemple par barbotage d'oxygène ou d'air dans une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium ou de potassium, en l'absence de catalyseur, ou par barbotage d'air ou d'oxygène dans une solution aqueuse en présence d'un sel inorganique catalyseur, comme le nitrate de cobalt, l'acétate

  
de manganèse ou l'acétate de cobalt, ou en présence d'un initiateur radicalaire, tel que le peroxyde de benzoyle ou sous irradiation. Parmi ces procédés, un procédé d'auto-oxydation par contact comprenant le barbotage d'air ou d'oxygène en l'absence de catalyseur, dans une solution alcaline aqueuse, est particulièrement avantageux. On peut effectuer cette réaction en agitant le système réactionnel, ordinairement de la température normale
(environ l-30[deg.]C) à 100[deg.]C de préférence 40 à 50[deg.]C pendant environ 30 min à 24 h, ordinairement d'environ 30 min à 2 h.

  
Après la réaction d'oxydation ci-dessus, on décompose l'agent oxydant éventuel avec un agent réducteur et, ensuite, on sépare les sous-produits inorganiques par filtration, neutralisation, distillation sous vide, etc. Lorsque l'on opère par barbotage d'air, etc., dans le système de réaction, on traite de préférence le mélange de réaction avec le charbon activé et on acidifie ensuite, par exemple par l'acide chlorhydrique pour précipiter des cristaux. On extrait le mélange de

  
 <EMI ID=79.1> 

  
on le soumet à un procédé classique de séparation-purification tel que chromatographie sur colonne ou cristallisation fractionnée. On peut ainsi séparer et récupérer le composé désiré (IB).

  
Parmi les composés obtenus par le procédé décrit cidessus, le composé dans lequel l'un des restes R <2> et R <3> est un groupe formyle et l'autre un groupe carboxy, composé dénommé ci-après composé (Ib),  possède, à l'état cristallin, la structure à noyau lactol (Ibl) et en solution, en particulier dans un solvant basique, le composé (Ib) existe 

  
 <EMI ID=80.1> 

  
mère, l'acide monocarboxylique (Ib2) ci-dessous. 

  
faisant passer un courant continu sous 2 à 12 V, de préférence 4 à 6 V, dans une solution neutre ou alcaline contenant le composé.

  
Parmi les méthodes de réduction ci-dessus, la méthode utilisant un agent réducteur est avantageuse pour sa facilité de manimulations et le coût raisonnable du traitement. L'utilisation de borohydrure de sodium comme agent réducteur est la plus avantageuse. Plus particulièrement, on met en oeuvre cette méthode dans un solvant inerte, par exemple une solution aqueuse d'un alcali, tel qu'hydroxyde de sodium ou

  
 <EMI ID=81.1> 

  
éther tel que tétrahydrofuranne ou dioxanne,ou leurs mélanges. La quantité convenable de l'agent réducteur utilisée est ordinairement d'au moins

  
1 équivalent, de préférence 1 à 8 équivalents, par rapport aux groupes formyle du composé de départ à réduire. La température de réaction est

  
 <EMI ID=82.1> 

  
la réaction est terminée en environ 30 min à 10 h.

  
Lorsque l'on utilise le composé (Ib) comme composé de départ dans la réaction de réduction, une substance basique doit être introduite au préalable dans le .système de réaction pour l'ouverture du cycle lactol, parce que, en conditions neutres ou acides, le composé (Ib) est

  
présent sous la forme lactol représentée par le composé de structure (Ibl) ci-dessus, qui est très stable et ne peut pas être facilement réduite. 

  
A cet effet, on doit utiliser des agents réducteurs, les solvants et les conditions réactionnelles décrites ci-dessus en présence d'une substance basique telle qu'hydroxyde de sodium, hydroxyde de potassium, carbonate

  
de sodium, carbonate de potassium ou hydrogénocarbonate de sodium en

  
quantité d'environ 1 mole ou plus par mole du composé de départ. De préférence, en présence de la substance basique, on chauffe le composé de départ ci-dessus en agitant à environ 0-80[deg.]C, de préférence 40-60[deg.]C, pendant

  
environ 1 à 8 h, avec au moins environ 4 équivalents, de préférence 4 à

  
16 équivalents, de borohydrure de sodium comme agent réducteur, dans un

  
solvant inerte classique tel que l'eau,le méthanol, l'éthanol, le tétrahydrofuranne et le dioxanne, seuls ou en mélange.

  
La réduction des groupes carboxy dans le composé (IB)

  
ou dans un composé (IC) obtenu parle procédé décrit ci-dessus, où l'un

  
des restes R <2> et R <3> est un groupe hydroxyméthyle et l'autre est un groupe carboxy, ces groupes étant combinés pour former un noyau lactone, composés dénommés ci-après composé (ID), peut s'effectuer de la manière suivante. On fait réagir

  
 <EMI ID=83.1> 

  
d'hydrure de lithium-aluminium par équivalent du composé (ID) comme agent varie rarement par la suite. Ce résultat montre que le composé (Ibl) et le com-

  
 <EMI ID=84.1> 

  
solvant ci-dessus. Lorsqu'on utilise comme solvant le méthanol ou la pyridine,

  
 <EMI ID=85.1> 

  
la présence du composé (Ib2) qui est un tautomère du composé (Ibl).

  
Procédé (2) :

  
 <EMI ID=86.1> 

  
des restes R <2> et R3 représente un groupe hydroxyméthyle, dénommés ci-après composés (IC), peuvent être préparés par (1) réduction des groupes formyle ou carboxy des composés (IA) ou (IB) ou (2) réduction des composés de formule

  
 <EMI ID=87.1> 

  
R9 0

  
il 

  
nique de formule -CH-O-C-, dans laquelle R est l'atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, ci-après dénommés composés (ID).

  
La réduction ci-dessus peut s'effectuer par les deux procédés suivants.

  
On peut effectuer la réduction des groupes formyle en utilisant diverses méthodes classiques pour la réduction des aldéhydes aromatiques en alcools aromatiques, par exemple en utilisant un agent réducteur, une méthode de réduction catalytique ou une méthode de réduction électrolytique.

  
Dans la méthode utilisant un agent réducteur, des exemples d'agents réducteurs appropriés, que l'on peut utiliser, sont les hydrures d'aluminium tels que l'hydrure de lithium-aluminium, l'hydrure

  
 <EMI ID=88.1> 

  
de bis(2-méthoxyéthoxy)aluminium, les hydrures de bore, tels que borohydrure de sodium, borohydrure de lithium, borohydrocyanure de sodium et diborane, les organohydrures d'étain tels qu'hydrure de tri-n-butylétain, hydrure de diphénylétain et hydrure de diéthylétain et les hydrosilanes tels que diméthylphénylsilane et triéthylsilane.

  
On peut utiliser divers catalyseurs classiques dans

  
la méthode de réduction catalytique. Des exemples de catalyseurs convenables que l'on peut utiliser sont le noir de palladium, le charbon palladié, le nickel de Raney et l'oxyde de platine. On peut utiliser les catalyseurs en

  
 <EMI ID=89.1> 

  
départ IA, IB ou ID.

  
On peut mettre en oeuvre la méthode de réduction  électrolytique, par exemple en utilisant le mercure, le plomb, le platine, le zinc, le nickel, le palladium, le graphite, etc. comme cathode et, en  <EMI ID=90.1> 

  
catalyseur.

  
On peut effectuer la réaction de déshydrocondensation

  
en l'absence de solvant. Cependant, on peut avantageusement mettre en

  
oeuvre la réaction de déshydrocondensation dans un solvant inerte classique,

  
par exemple une solution aqueuse d'un alcali, tel que l'hydroxyde de sodium, l'eau, un alcool tel que méthanol ou éthanol, un éther tel que dioxanne

  
ou tétrahydrofuranne,un hydrocarbure aromatique tel que benzène ou toluène,

  
une amine tertiaire telle que pyridine ou triéthylamine ou un hydrocarbure halogéné tel que chlorure de méthylène, chloroforme ou tétrachlorure de carbone. Si on utilise comme solvant une solution aqueuse d'alcali, la pyridine ou la triéthylamine, elles agissent également comme catalyseur; il n'est donc pas nécessaire d'ajouter un autre catalyseur. Lorsqu'on utilise d'autres solvants, on doit utiliser un catalyseur, par exemple un aminoacide tel que la P-alanine, une amine cyclique telle que pipéridine ou morpholine, l'ammoniac, une amine telle qu'éthylamine, diéthylamine ou butylamine, des acétates de ces amines, un acétate de métal alcalin tel qu'acétate de sodium ou de potassium ou un alcoolate de métal alcalin tel qu'éthylate ou méthylate de sodium, en quantité de 0,01% à un gros excès, de préférence 0,05 à 30% du poids du composé de départ.

  
La température et la durée de réaction sont déterminées 

  
par le solvant utilisé. Lorsqu'on utilise un solvant non polaire, tel que

  
le benzène ou le chloroforme, on effectue généralement la réaction en

  
chauffant le système réactionnel à une température voisine du point d'ébullition du solvant et, tandis qu'on sépare sous forme d'azéotrope l'eau

  
formée dans la réaction, on continue la.réaction jusqu'à ce que l'on ait

  
séparé une quantité théorique d'eau. Lorsqu'on utilise un solvant bien

  
 <EMI ID=91.1> 

  
effectuer la réaction habituellement entre la température ambiante et environ 120[deg.]C, de préférence 30 à 60[deg.]C, pendant environ 30 min à 24 h, généralement 30 min à 3 h, sans séparer l'eau formée dans la réaction.

  
La quantité du composé a méthylène actif de formule générale (II) utilisée dans la réaction de déshydrocondensation ci-dessus est d'au moins environ 1 équivalent, de préférence 1 à 2 équivalents, par rapport aux groupes formyle du composé de départ (IA).

  
Procédé (5) : 

  
On peut facilement préparer les composés de formule

  
 <EMI ID=92.1>  réducteur dans un solvant inerte classique tel que dioxanne ou éther éthylique à environ 0-60[deg.]C, de préférence 5 à 25[deg.]C, pendant environ 30 min à 10 h.

  
Procédé (3) :

  
On peut facilement préparer les composés de formule (I) dans laquelle R <2> et R3 pris ensemble forment un noyau lactone de formule

  
0

  
Il <EMI ID=93.1>  posés de formule (IC) obtenus par'la méthode décrite ci-deseus, dans lesquels l'un des restes R <2> et R3 représente un groupe hydroxyméthyle et l'autre un groupe carboxy, en l'absence de solvant ou en présence d'un solvant convenable.

  
On peut effectuer la réaction ci-dessus de déshydratation cyclisante en chauffant directement le produit de départ à environ 100-
200[deg.]C. On peut également dissoudre le composé de départ dans un solvant 

  
inerte convenable et chauffer en présence d'une quantité catalytique (environ

  
 <EMI ID=94.1> 

  
24 h, généralement 2-10 h. Des exemples de solvants convenables que l'on peut utiliser selon les hydrocarbures aromatiques tels que benzène

  
 <EMI ID=95.1> 

  
éthane et chloroforme, les éthers tels qu'éther méthylique, tétrahydrofuranne et dioxanne et glycols tels qu'éthylèneglycol et les alcools inférieurs tels qu'éthanol et méthanol. Des exemples de composés acides convenables qu'on peut utiliser comprennent par exemple le chlorure d'hydrogène, l'acide chlorhydrique, l'acide phosphorique, l'acide polyphosphorique, le trifluorure

  
de bore, l'acide perchlorique, l'acide trichlorométhanesulfonique, l'acide trifluoroacétique, l'acide naphtalènesulfonique, l'acide p-toluènesulfonique, l'acide benzènesulfonique, le chlorure de thionyle et le diméthylacétal d'acétone.

  
Procédé (4) :

  
 <EMI ID=96.1> 

  
composés dénommés ci-après composés (IE), par déshydrocondensation de composés (IA) avec des composés à méthylène actif de formule générale :

  

 <EMI ID=97.1> 
 

  
basiques utiles comprennent par exemple le carbonate* de* sodium, le carbonate de potassium, l'hydrogénocarbonate de sodium et les amines tertiaires telles que la pyridine, la quinoléine, la N,N-diméthylaniline ou la triéthylamine. Le composé basique peut être utilisé en quantité d'au moins 1 mole, de préférence 1 à 2 moles par mole du composé de départ lorsque l'agent acylant est un halogénure

  
 <EMI ID=98.1> 

  
acylant est un anhydride.

  
La réaction peut s'effectuer à une température d'environ -60 à 150[deg.]C, de préférence de 0 à 100[deg.]C, et elle est terminée en environ 1 à 20 h. La quantité de l'agent acylant est d'au moins environ 1 équivalent, ordinairement 1 à 10 équivalents, par rapport aucgroupes hydroxy du composé (IF) de départ.

  
Lorsqu'on utilise comme composé de départ dans la

  
réaction d'acylation ci-dessus un composé de formule (IF), dans laquelle

  
 <EMI ID=99.1> 

  
représentent des groupes hydroxy, le ou les autres groupes hydroxy sont parfois également acylés, selon les conditions d'acylation, en particulier selon le choix de la température de réaction ou de la quantité de l'agent acylant. Si l'on désire acyler sélectivement les restes R <2> et R3 dans le  cas d'un tel composé de départ, on peut protéger, avant la réaction,le ou les autres groupes hydroxy au moyen de techniques classiques appropriées et

  
 <EMI ID=100.1> 

  
Procédé (7) :

  
On peut préparer les composés de formules (IA) à (IG) dans lesquelles R représente un groupe alkyle inférieur, obtenus par les procédés décrits ci-dessus,en faisant réagir les composée correspondants,

  
 <EMI ID=101.1> 

  
Des exemples d'agents d'alkylation convenables, que l'on peut utiliser, comprennent les halogénures d'alkyle, tels qu'iodure de méthyle, bromure d'éthyle, bromure de propyle, bromure d'isopropyle, iodure de butyle et bromure de tertiobutyle, les sulfates de dialkyle tels que sulfate de diméthyle ou sulfate de diéthyle et les diazoalcanes tels que diazométhane et diazoéthane.

  
La réaction d'alkylation peut s'effectuer entre la

  
 <EMI ID=102.1> 

  
solvant inerte classique, par exemple une cétone telle qu'acétone ou méthyléthylcétone, un éther tel que tétrahydrofuranne ou dioxanne, ou un alcool inférieur tel que méthanol ou éthanol, en présence d'un composé basique

  
 <EMI ID=103.1> 

  
10 moles, de préférence 1 à 2 moles, par mole d'agent acylant. La réaction est

  
 <EMI ID=104.1>  groupes hydroxy, composés dénommés ci-après composés (IF), par réaction des composés (IA) avec des peroxydes dans un solvant inerte.

  
Des exemples de solvants inertes convenables qu'on

  
peut utiliser sont les solutions aqueuses d'alcalis tels qu'hydroxyde de sodium et de potassium, l'eau, la pyridine, le méthanol, l'éthanol, l'acide acétique, l'acide propionique, le chloroforme, le chlorure de méthylène, l'acétate de méthylène, l'acétate d'éthyle, le benzène et le toluène. Des peroxydes convenables que l'on peut utiliser sont les peroxydes organiques ouinorganiques tels que peroxyde d'hydrogène, acide peracétique, acide trifluoroperacétique, acide m-chloroperbenzolque, acide perbenzdique et acide perfumarique.

  
La température de réaction ordinairement d'environ 0

  
 <EMI ID=105.1> 

  
tion du système de réaction pendant environ 1 à 24 h. La quantité de peroxyde est d'au moins environ 2 moles, de préférence 2 à 3 moles, par mole du composé de départ (IA). Après la réaction, on ajoute un agent neutralisant convenable et on concentre le mélange sous pression réduite. On ajoute le résidu à de l'eau glacée et on recueille par filtration les cristaux

  
bruts précipités, on lave à l'eau et on sèche. On dissout les cristaux bruts

  
 <EMI ID=106.1> 

  
par chromatographie sur colonne. On obtient ordinairement le composé (IF) désiré sous forme d'une fraction d'éluat méthanolique.

  
Procédé (6) :

  
 <EMI ID=107.1> 

  
 <EMI ID=108.1> 

  
inférieur)méthyle, ci-après dénommés composés (IG), par acylation des

  
composés (IF) obtenus dans le procédé (5) décrit ci-dessus. 

  
On peut utiliser, par exemple, comme agents acylants dans la réaction ci-dessus les acides alcandlques inférieurs, tels qu'acétique, propionique, butyrique, isobutyrique, etc., leurs anhydrides ou leurs halogénures d'acide tels que chlorure d'acétyle, bromure de propanoyle, de butyryle, d'isobutyryle, etc. On préfère les anhydrides et halogénures d'acides alcanolques inférieurs. On peut effectuer la réaction d'acylation en l'absence d'un solvant ou en présence d'un solvant inerte classique en présence d'un composé basique. Des exemples de solvants inertes appropriés que l'on peut utiliser sont les hydrocarbures aromatiques tels que benzène et toluène, les éthers tels qu'éther

  
 <EMI ID=109.1>  
 <EMI ID=110.1> 
 <EMI ID=111.1> 

  
peut s'effectuer en présence d'un catalyseur, en l'absence d'un solvant ou en présence d'un solvant convenable. Des exemples de solvants appropriés

  
que l'on peut utiliser sont les hydrocarbures aromatiques, tels que benzène et toluène, les éthers tels qu'éther éthylique et dioxanne, les hydrocarbures halogénés tels que chloroforme et chlorure de méthylène, et les cétones, telles qu'acétone et méthyléthylcétone. Des exemples de catalyseurs appropriés que l'on peut utiliser comprennent les halogénures d'hydrogène tels que chlorure d'hydrogène et bromure d'hydrogène, les acides de

  
Lewis tels que l'acide sulfurique concentré, le chlorure d'aluminium anhydre, le chlorure de zinc anhydre et le trifluorure de bore et l'acide p-toluène-

  
 <EMI ID=112.1> 

  
préférence 5 à 10%, du poids du composé de départ. Les composés de formules générales(III) et (IV) utilisés pour la réaction sont ordinairement utilisés en excès par rapport aux composés de formules générales (IA) à (IG), puisqu'ils agissent également comme solvants. La température de réaction appropriée-est

  
 <EMI ID=113.1> 

  
conditions, la réaction est terminée en environ 30 min à 6 h.

  
Procédé (11) :

  
On peut obtenir les composés de formules générales (IA)

  
à (IG), dans lesquelles R4 et R5 pris ensemble représentent un reste oxo, par oxydation des composés correspondants dans lesquels R est un groupe hydroxy et R5 est un atome d'hydrogène.

  
La réaction d'oxydation peut s'effectuer en utilisant  divers agents oxydants connus qui sont utilisés pour oxyder. les groupes hydroxy d'alcools secondaires en groupes carbonyle. Des exemples d'agents oxydants appropriés que l'on peut utiliser sont l'acide chromique, l'acide bichromique, les sels métalliques de ces acides tels que sels de sodium

  
ou de potassium, l'acide nitrique, les halogènes tels que brome ou chlore, les agents oxydants d'Oppenauer et les réactifs de Jones.

  
On effectue la réaction de préférence dans un solvant convenable. Des exemples de solvants appropriés sont l'eau, les alcools

  
tels que méthanol et éthanol, les éthers tels que dioxanne, tétrahydrofuranne  <EMI ID=114.1> 

  
de composés (IA) à (IG) de départ. Lorsqu'on utilise le diazométhane comme agent d'alkylation, on peut supprimer l'utilisation du composé basique.

  
Procédé (8) :

  
On peut obtenir les composés de formules (IA) à (IG)

  
 <EMI ID=115.1> 

  
 <EMI ID=116.1> 

  
un atome d'hydrogène.

  
La réaction d'acylation peut s'effectuer selon le procédé(6) décrit ci-dessus.

  
Si l'on utilise comme produits de départ des composés de formule générale (I) ayant un groupe hydroxy en une position autre que la position 4', ce groupe hydroxy est vraisemblablement aussi acylé

  
dans les conditions d'acylation décrites ci-dessus pour le procédé (6). Par conséquent, dans l'acylation de ces composés de départ, le groupe hydroxy en position autre que la position 4' est de préférence protégé de manière classique avec un groupement protecteur convenable.

  
Procédé (9) :

  
On peut préparer les composés de formules générales (IA)

  
 <EMI ID=117.1> 

  
acylation des composés correspondants, dans lesquels R et R sont des groupes hydroxy. Dans cette réaction, également, on peut utiliser les conditions d'acylation, de protection des autres groupes fonctionnels et d'élimination ultérieure des groupements protecteurs décrites dans le procédé (6) ci-dessus.

  
Procédé (10) :

  
On peut préparer les composés de formules générales (IA)

  
 <EMI ID=118.1> 

  
générale

  

 <EMI ID=119.1> 


  
 <EMI ID=120.1>  et 3,4-diméthoxyphénéthylamine.

  
On peut effectuer facilement la formation de sel en utilisant des composés basiques dans un solvant convenable, par des techniques classique de salification. Des exemples de solvants convenables que l'on

  
peut utiliser sont l'eau, les alcools inférieurs tels que méthanol, éthanol et propanol, les éthers tels que dioxanne et tétrahydrofuranne, l'acétone,

  
le benzène, l'acétate d'éthyle, le diméthylsulfoxyde, le diméthylformamide, le chlorure de méthylène et le chloroforme. La salification peut s'effectuer entre la température ambiante et environ 100[deg.]C, de préférence entre la température et 50[deg.]C, pendant environ 5 min à 6 h, ordinairement dans un milieu ouvert à l'atmosphère ou à l'abri de l'oxygène, de préférence dans une atmosphère de gaz inerte tel que l'azote ou l'argon. La quantité de composé basique utilisée n'est par particulièrement limitée, mais une quantité convenable est ordinairement d'au moins 1 équivalent, de préférence 1 à

  
2 équivalents, par rapport aux groupes acides du composé de départ.

  
Lorsque les réactions décrites ci-dessus sont terminées, on peut facilement séparer et purifier le composé final en utilisant des techniques classiques de séparation connues. Par exemple, on peut utiliser

  
la distillation du solvant, l'extraction par solvant, la précipitation,

  
la recristallisation, la chromatographie sur colonne et la chromatographie préparative.

  
Agents thérapeutiques :

  
Les dérivés sesquiterpéniques de formule générale (I)

  
et leurs sels selon l'invention sont utiles comme agents pour le traitement de la néphrite et, lorsqu'on les utilise pour le traitement de la néphrite,

  
on les incorpore dans des compositions pharmaceutiques avec des supports acceptables en pharmacie ordinaires. Des supports appropriés que l'on peut utiliser sont, par exemple, des diluants ou excipients tels que charges, diluants, liants, agents mouillants, agents désagrégeants, agents tensioactifs et lubrifiants, qui sont ordinairement utilisés pour préparer ces médicaments, selon la méthode d'administration ou la forme de dosage.

  
On peut choisir diverses méthodes d'administration ou formes de dosage des agents thérapeutiques selon l'invention pour le traitement de la néphrite, selon les buts de la thérapie. Des formes de dosage caractéristiques qui peuvent être utilisées sont les tablettes, pilules, poudres, préparations liquides, suspensions, émulsions, granulés, capsules, suppositoires et préparations injectables (solutions, émulsions, suspensions, etc.). 

  
et éther éthylique, les cétones telles qu'acétone et méthyléthylcétone, est acides organiques tels qu'acide acétique et acide propionique, les esters tels qu'acétate d'éthyle, les hydrocarbures aromatiques tels que benzène et chlorobenzène, les hydrocarbures halogénés tels que dichloroéthane et dichlorométhane, le diméthylformamide, le diméthylsulfoxyde et la pyridine.

  
La quantité de l'agent oxydant peut être choisie de manière convenable, dans une large gamme. On utilise ordinairement un excès de l'agent oxydant.

  
La réaction peut être effectuée entre environ -10 et

  
 <EMI ID=121.1> 

  
30 min à 6 h.

  
Si, dansla réaction d'oxydation décrite ci-dessus,

  
on utilise des composés de départ ayant des groupes pouvant être affectés par la réaction d'oxydation, tels qu'un groupe formyle ou hydroxy, il est souhaitable de protéger ces groupes par des groupements protecteurs appropriés,de manière classique, comme dans le procédé (6) décrit ci-dessus. L'élimination des groupements protecteurs après la réaction peut facilement s'effectuer de manière classique.

  
 <EMI ID=122.1> 

  
(1) à (11) décrits ci-dessus, dans un ordre convenable et, si on le désire, par protection des sites réactifs suivie d'élimination des groupements protecteurs et en utilisant diverses techniques de séparation et de purifica tion.

  
Parmi les dérivés sesquiterpéniques de formule CI) selon l'invention, ceux contenant des groupes acides, c'est-à-dire un groupe hydroxy phénolique et/ou un groupe carboxy, peuvent réagir facilement avec  des composés basiques pour former des sels. L'invention concerne également les sels des dérivés sesquiterpéniques de formule générale (I).

  
Des exemples de composés basiques que l'on peut utiliser dans la production des sels des dérivés sesquiterpéniques de formule géné-

  
 <EMI ID=123.1> 

  
alcalino-terreux.tels qu'hydroxyde de sodium, de potassium ou de calcium, carbonate de sodium ou de potassium et hydrogénocarbonate de sodium. On

  
peut également utiliser comme composés basiques des amines telles que méthylamine, éthylamine, isopropylamine, morpholine, pipérazine, pipéridine de préférence, stérilisées et sont isotoniques par rapport au sérum. Dans la formulation sous forme de solutions.ou suspensions, on peut 

  
utiliser tous les diluants habituellement utilisés dans cette technique. Des exemples de diluants convenables sont l'eau, l'éthanol, le propylèneglycol, l'alcool isostéarylique éthoxylé, le polyoxyéthylènesorbitol et les esters de sorbitanne. On peut incorporer du chlorure de sodium, du glucose ou du glycérol dans un agent thérapeutique, par exemple pour le traitement de la néphrite, en quantité suffisante pour préparer des solutions isotoniques.

  
La composition thérapeutique peut en outre contenir des dissolvants, tampons, entalgiques et conservateurs ordinaires et, facultativement, des colorants, des parfums, des arômes, des agents édulcorants et d'autres médicaments.

  
La quantité du composé de formule générale (I) ou de son sel selon l'invention à incorporer comme ingrédient actif dans une composition pharmaceutique utile pour le traitement de la néphrite n'est pas particulièrement limitée et peut varier dans une large gamme. Une quantité thérapeutiquement efficace convenable est ordinairement d'environ

  
 <EMI ID=124.1> 

  
total de la composition.

  
Il n'y a pas de limitation particulière quant au

  
mode d'utilisation du médicament selon l'invention pour le traitement

  
de la néphrite et on peut l'administrer par les voies appropriées pour

  
les formes particulières de l'agent thérapeutique. Par exemple, on peut administrer par voie orale les tablettes, pilules, préparations liquides, suspensions, émulsions, granules et capsules. Les préparations injectables sont administrées par voie intraveineuse soit seules, soit en mélange avec un agent auxiliaire ordinaire, tel que glucose et aminoacides. De plus,  l'agent thérapeutique peut être simplement administré, selon le besoin, par voie intramusculaire, intracutanée, sous-cutanée et/ou intrapéritonéale. Le suppositoire est administré par voie rectale.

  
La dose de l'agent de traitement de la néphrite est choisie convenablement selon le but à atteindre, les .symptômes, etc. Ordinairement, une dose journalière du composé de l'invention est d'environ 0,5 à 20 ma/kg de poids corporel, en dose simple ou multiple.

  
 <EMI ID=125.1> 

  
rhumatismales qui font toutes intervenir le système de complément. 

  
Dans la mise sous forme de tablettes d'une composition pharmaceutique contenant les dérivés sesquiterpéniques de formule générale (I) ou leurs sels comme ingrédients actifs, on peut utiliser une large gamme de supports connus de l'homme de l'art. Des exemples de supports appropriés comprennent des excipients tels que lactose, saccharose, chlorure de sodium, solution de glucose, urée, amidon, carbonate de calcium, kaolin, cellulose cristalline et acide silicique, des liants tels qu'eau, éthanol, propanol, sirop simple, glucose, solution d'amidon, solution de gélatine, carboxyméthylcellulose, gomme laque, méthylcellulose, phosphate de potassium, et polyvinylpyrrolidone, des agents désagrégeants tels qu'amidon s&#65533;&#65533;

  hé, alginate de sodium, poudre de gélose, poudre de laminaires, hydrogénocarbonate de sodium, carbonate de calcium, "Tween", laurylsulfate de sodium, monoglycérides d'acide stéarique, amidon et lactose, inhibiteurs de désagrégation tels que saccharose, stéarate de glycéryle, beurre de cacao et huiles hydrogénées, des activateurs d'absorption tels que des bases d'ammonium quaternaire et le laurylsulfate de sodium, des agents humectants, tels que glycérol et amidon, des adsorbants tels qu'amidon, lactose, kaolin, bentonite et acide silicique colloïdal et des agents lubrifiants tels que talc purifié, sels d'acide stéarique, acide borique en poudre, Macrogols

  
et polyéthylèneglycols solides.

  
Dans la mise sous forme de pilules de la composition pharmaceutique, on peut utiliser une grande variété de supporta classiques connus de l'homme de l'art. Des exemples de supports appropriés sont

  
des excipients tels que glucose, lactose, amidon, beurre de cacao, des .huiles végétales durcies, le kaolin et le talc, des liants tels que gomme arabique en poudre, gomme adragante en poudre, gélatine et éthanol et des agents désagrégeants tels que laminaires et gélose. Si on le désire, les tablettes peuvent être enduites sous forme de tablettes à revêtement de sucre, ou de gélatine, ou à revêtement entérique, tablettes à film de revêtement ou tablettes revêtues de deux ou plusieurs couches.

  
Dans la mise sous forme de suppositoires de la composition pharmaceutique, on peut utiliser une grande variété de supports connus de l'homme de l'art. Des exemples de supports appropriés comprennent le polyéthylèneglycol, le beurre de cacao, les alcools supérieurs, les esters d'alcools supérieurs, la gélatine et les glycérides semisynthétiques.

  
Lorsque la composition pharmaceutique a la forme d'une préparation injectable, les solutions et suspensions résultantes sont, Le composé n[deg.] 11 répond à la formule suivante

  

 <EMI ID=126.1> 


  
Le composé n[deg.] 12 répond à la formule suivante

  

 <EMI ID=127.1> 


  
Activité anticomplémentaire :

  
L'activité anticomplémentaire est mesurée et confirmée par la

  
 <EMI ID=128.1> 

  
Kagaku" (Immuno-chimie), par Yuichi Yamamura et coll. pages 830-834, éditée chez Asakura Shoten Tokyo, Japon (1973). Plus particulièrement, on charge un tube à essais avec 0,5 ml d'une dispersion aqueuse de chacun des composés essayés,

  
0,5 ml d'érythrocytes sensibilisés (EA) contenant 1.108 cellules/ml, 1 ml d'une solution diluée 5 fois d'une solution tampon de Véronal contenant de la gélatine,

  
 <EMI ID=129.1> 

  
pendant 60 min. On ajoute ensuite 5 ml de sérum physiologique glacé et on centrifuge le mélange. On mesure l'absorption du liquide surnageant séparé

  
 <EMI ID=130.1> 

  
sensibilisés par le composé essayé. La valeur d'activité inhibitrice d'hémo-

  
 <EMI ID=131.1> 

  
tableau II ci-après pour chaque composé essayé. 

  
On indique ci-après les résultats d'essais sur les effets pharmacologiques des composés de l'invention de formule générale (I) et leurs sels.

  
Composés essayés :

  
On soumet aux essais les composés n[deg.] 1 à 12 selon l'invention, comme indiqué ci-dessous. Les composés n[deg.] 1 à 10 répondant à la formule

  
 <EMI ID=132.1> 

  
TABLEAU 1

  

 <EMI ID=133.1> 


  
 <EMI ID=134.1>  

  
On mesure le taux de protéinurie (quantité totale excrétée dans les urines par période de 24 h) en utilisant la méthode turbidimétrique utilisant la sérum-albumine bovine comme composé témoin, au moyen de l'acide sulfosalicylique. Les résultats obtenus sont indiqués dans le tableau III ci-après.

TABLEAU III

  

 <EMI ID=135.1> 


  
* Le nombre de jours est compté à partir de l'instant d'administration du

  
composé essayé qui était 1 h avant l'application de la NT.

  
 <EMI ID=136.1>  

  
Toxicité aiguë :

  
 <EMI ID=137.1> 

  
par administration intraveineuse à des souris : les résultats obtenus sont également indiqués dans le tableau II ci-après.- 

  
 <EMI ID=138.1> 

  

 <EMI ID=139.1> 


  
Effet thérapeutique sur la néphrite du type néphrotoxine :
On obtient, comme décrit ci-dessous, de la néphrotoxine de rat (en abrégé ci-après "NT"). On homogénéise le cortex rénal de rat avec une égale quantité de sérum physiologique. On mélange l'homogénéisât avec un égal volume de l'adjuvant complet de Freund fabriqué par la Société Difco Company. On injecte par voie intramusculaire 2 ml du mélange résultant à

  
un lapin pesant 3 100 g pour immuniser le lapin. Un mois et demie plus tard, on prélève le sang du coeur du lapin et on obtient du sérum. Le sérum

  
 <EMI ID=140.1> 

  
solution aqueuse de sulfate d'ammonium saturé' 40%-et on fractionne. On

  
 <EMI ID=141.1> 

  
On effectue l'évaluation en utilisant des rats Wistar mâles pesant 150 à 160 g, en répétant l'essai trois fois pour chaque composé. On administre le composé par voie intrapéritonéale une fois par 24 h, pendant

  
7 jours. Une heure après l'administration du composé, le troisième jour, on injecte la NT par voie intraveineuse en quantité de 1 ml dans la veine caudale de chaque rat. On utilise la chlorophylline (CP) comme composé comparatif et le sérum physiologique poue l'essai à blanc. 

TABLEAU IV

  

 <EMI ID=142.1> 


  
Deux à trois semaines après le début de l'essai, les poids corporels des rats augmentent à 400-500 g et il semble que le taux de protéinurie normal est de 5 à 15 mg/jour. Comme on peut le voir dans le ta tableau IV, les composés selon l'invention peuvent guérir la néphrite du type Heymann.

  
Lorsqu'on effectue les mêmes essais avec les composés n[deg.] 3 à 5 et 7 à 12 selon l'invention, on trouve qu'ils ont également une activité notable. 

  
Le taux de protéinurie chez le rat en.bonne santé est de 0,5 à 5 mg/jour. Lorsque le taux de protéinurie dépasse cette gamme, en particulier lorsqu'il est de plus de 10 mg/jour, on peut dire avec certitude qu'il y a néphrite. Comme on peut le voir dans les résultats du tableau III, la néphrite se produit dans le lot témoin et, dans le cas des composés de l'invention et de la CP, le taux de protéinurie depuis l'instant d'administration jusqu'à 10 jours après l'administration de la NT est sensiblement le même que celui d'un rat en bonne santé. On peut donc voir que l'administration

  
des composés selon l'invention inhibte les réactions primaires et secondaires.

  
Lorsque l'on effectue le même essai avec les composés

  
n[deg.] 3 à 5 et 7 à 12 selon l'invention, on trouve que tous ces composés inhibent la réaction primaire de néphrite du type néphrotoxine.

Effets thérapeutiques sur la néphrite du type Heymann :

  
On utilise, dans l'essai, des rats mâles Wistar pesant

  
180 à 200 g. On extrait le cortex rénal du rat et on homogénéise avec

  
un égal volume de sérum physiologique. On centrifuge l'homogénéisat

  
à 1 500 g pendant 1 h. On purifie le liquide surnageant selon la méthode

  
de T. S. Edgington et coll., Journal of Expérimental Medicine, 127 (1968), page 555, et on mélange avec l'adjuvant complet de Freund 37 Ra de la

  
Société Difco Company dans un rapport 0,4:1 en volume. On injecte le mélange résultant par voie intrapéritonéale aux rats isologues, en quantité de

  
0,5 ml par rat. Ensuite, on administre la même quantité de l'adjuvant,

  
toutes les deux semaines, jusqu'à ce que le taux de protéinurie dépasse

  
100 mg par jour (cette durée est d'environ 6 à 8 semaines).

  
On administre par voie intrapéritonéale chacun des

  
composés essayés indiqués dans le tableau IV ci-après, à des rats pesant

  
300 à 350 g atteints de néphrite du type Heymann, une fois par jour

  
pendant 7 jours et on mesure ensuite le taux de protéinurie *de la même manière que décrit ci-dessus. On utilise la CP comme composé comparatif

  
et le sérum physiologique pour les animaux témoins*. On effectue l'essai chaque fois pour chaque composé.

  
Les résultats obtenus sont indiqués dans le tableau IV ci-après. 

  
 <EMI ID=143.1> 

  
benzofuranne), une substance jaune clair, légèrement acide, présentant une activité anticomplémentaire. L'identité du composé a été confirmée par les mesures physicochimiques ci-après :

  

 <EMI ID=144.1> 


  
 <EMI ID=145.1> 

  
Le spectre de résonance magnétique nucléaire est représenté dans la figure 5 des dessins annexés. Les conditions de mesure étaient les suivantes :

  

 <EMI ID=146.1> 


  
 <EMI ID=147.1> 

  
EXEMPLE 2

  
Dans une fiole de Sakaguchi de 500 ml, on introduit 100 ml d'un milieu de culture à la composition ci-après et on cultive Stachybotrys chartarum

  
 <EMI ID=148.1> 

  
sous secousses.

  

 <EMI ID=149.1> 
 

  
Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois en limiter la portée ; dans ces exemples, les indications de parties et de pourcentages s'entendent en poids sauf mention contraire. Lorsqu'on parle de température ambiante, il s'agit d'une température de 15 à 25[deg.]C.

  
EXEMPLE 1

  
Dans une fiole de Sakaguchi de 500 ml, on introduit 100 ml d'un milieu de culture à la composition ci-après et on cultive Stachybotrys sp. K-76 à 28[deg.]C et à pH 6 pendant 4 jours sous secousses.

  

 <EMI ID=150.1> 


  
A l'aide de la culture obtenue, on ensemence 20 1 d'un milieu

  
 <EMI ID=151.1> 

  
pendant 5 jours sous agitation à la vitesse de 300 tr/min et sous aération au débit de 1 litre/min et pour 5 1 du milieu de culture. On centrifuge le bouillon de culture obtenu à la vitesse de 8000 tr/min et on recueille les cellules microbiennes. Au liquide surnageant, on ajoute 5 1 de méthanol, on agite et on laisse reposer pendant 3 h. On centrifuge le mélange, on sépare le précipité et on extrait le liquide surnagent par un volume égal d'acétate d'éthyle. A partir de l'extrait, on distille l'acétate d'éthyle sous vide. On reprend le résidu dans le méthanol et on fait passer sur une colonne de charbon actif. On concentre l'éluat à sec sous vide. On redissout la masse sèche dans un mélange chloroforme/acétate d'éthyle, 1:1 en volume, et on filtre sur une colonne de Sephadex LH-20.

   On soumet la filtrat à chromatographie sur couche mince en utilisant comme solvant de développement un mélange d'acétate d'éthyle, de chloroforme et d'acide acétique 50:50:2 en volume ; on recueille une fraction ayant une activité anticomplémentaire et correspondant à Rf 0,34. Dans un autre essai, on a soumis le filtrat à chromatographie sur couche mince en utilisant comme solvant de développement un mélange de benzène, de butanol et d'acide acétique, 60:15:5 en volume ; on a recueilli une fraction présentant une activité anticomplémentaire et

  
 <EMI ID=152.1>  anticomplémentaire. Les propriétés physicochimiques de ce composé sont les mêmes que celles du composé isolé et purifié dans l'exemple 1.

  
EXEMPLE 4

  
On cultive Stachybotrys sp. T-791 et on purifie comme décrit dans l'exemple 1 sauf pour la composition du milieu de culture réglé à pH 5,5 et pour la température de culture qui est de 25[deg.]C.

  

 <EMI ID=153.1> 


  
On obtient le 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-déca-

  
 <EMI ID=154.1> 

  
furanne), substance jaune clair, légèrement acide, ayant une activité anticomplémentaire. Les propriétés physicochimiques du composé sont les mêmes que celles du composé obtenu dans l'exemple 1.

  
EXEMPLE 5

  
On dissout 2,1 g de nitrate d'argent dans 1 ml d'eau et on ajoute 3,5 ml d'une solution aqueuse 5,8 M d'hydroxyde de sodium. On agite à température ambiante pendant 20 min. On ajoute ensuite une solution de 1,0 g de

  
 <EMI ID=155.1> 

  
pendant 1 h 30 min et on ajuste le pH à 2 environ par l'acide chlorhydrique 2N. On extrait le mélange réactionnel par un volume égal d'acétate d'éthyle et on distille le solvant de l'extrait sous vide. On purifie le résidu par chromatographie sur une colonne de gel de silice (gel de silice "Wako C-200" de la firme Wako Junyaku Kabuahiki Kaisha) en utilisant comme éluant un mélange chloroforme/acétate d'éthyle/acide acétique, 100:50:2 en volume. On recueille une fraction correspondant à Rf 0,37 à la chromatographie sur couche mince
(par utilisation d'un mélange d'acétate d'éthyle, de chloroforme et d'acide acétique, 50:50:2 en volume, comme solvant de développement), ou une fraction

  
 <EMI ID=156.1>  On utilise deux fioles de la culture obtenue pour ensemencer
20 1 d'un milieu de culture à la même composition dans un fermenteur de 30 1 et on cultive à 28[deg.]C pendant 5 jours en agitant à la vitesse de 300 tr/min sous aération au débit de 1 litre/min et par litre du milieu de culture. On sépare les cellules microbiennes par centrifugation du bouillon de culture

  
à 8000 tr/min. Au liquide surnageant, on ajoute 5 1 de méthanol, on agite et on laisse reposer pendant 3 h. On sépare le précipité par centrifugation du mélange et on extrait le liquide sur nageant par un volume égal d'acétate d'éthyle. On élimine l'acétate d'éthyle par évaporation à sec sous vide. On redissout la résidu dans le méthanol et on fait passer sur une colonne de charbon actif. On concentre l'éluat à sec sous vide, on le redissout dans un mélange chloroforme-acétate d'éthyle, 1:1 en volume

  
et on filtre sur une colonne de Sephadex L&#65533;-20. On recueille les fractions présentant des maxima d'activité correspondant aux valeurs de Rf indiquées dans l'exemple 1 à la chromatographie sur couche mince. L'évaporation du

  
 <EMI ID=157.1> 

  
furanne), substance jaune clair, légèrement acide, présentant une activité anticomplémentaire. Ce composé a les mêmes caractéristiques physicochimiques que le composé de l'exemple 1, ce qui confirmé son identité.

  
EXEMPLE 3

  
On cultive Stachybotrys sp. T-789 et on purifie dans des conditions analogues à celles de l'exemple 1 sauf pour la composition du milieu de culture réglé à pH 7,5 donnée ci-après et pour la température de culture

  
 <EMI ID=158.1> 

  

 <EMI ID=159.1> 


  
 <EMI ID=160.1> 

  
furanne), substance jaune clair, légèrement acide, présentant une activité On agite à la môme température pendant 1 h et on lave le précipité à cinq reprises par 10 ml d'eau à chaque fois. On combine les lavages et le filtrat et

  
 <EMI ID=161.1> 

  
filtre les cristaux qui ont précipité, on les lave à cinq reprises avec 10 ml d'eau glacée et on les sèche. On redissout la poudre cristalline sèche dans
50 ml d'acétate d'éthyle et on filtre les insolubles. On concentre le filtrat à volume final de 5 ml sous vide. On ajoute 50 ml d'éther de pétrole, on agite

  
 <EMI ID=162.1> 

  
les lave à deux reprises avec 20 ml d'éther de pétrole et on sèche ; on obtient 1,01 g de 4,6-dihydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tétrahydro-furo[3,4-g]-benzofuranne-2-

  
 <EMI ID=163.1> 

  
8'a-décahydronaphtalène). Les propriétés physicochimiques du composé sont les mêmes que celles du composé obtenu dans l'exemple 5.

  
EXEMPLE 7

  
On dissout 1,0 g de 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-l,2,3,4,

  
 <EMI ID=164.1> 

  
dihydrobenzofuranne) dans 50 ml de solution aqueuse d'hydroxyde de sodium à

  
 <EMI ID=165.1> 

  
on filtre les cristaux qui ont précipité. On les lave à cinq reprises par 10 ml d'eau froide et on les sèche. On les redissout dans 50 ml d'acétate d'éthyle et on filtre les insolubles. On traite le filtrat sur charbon actif et on concentre a volume final de 5 ml sous vide. On coule la solution concentrée dans
50 ml d'éther de pétrole sous agitation vigoureuse. On filtre les cristaux qui précipitent, on les lave à l'éther de pétrole et on les sèche ; on obtient 0,72 g de 4,6-dihydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tétrahydro-furo[3,4-g]benzofuranne-2-

  
 <EMI ID=166.1> 

  
8'a-décahydronaphtalène). Les propriétés physicochimiques de ce composé sont les mêmes que celles du composé de l'exemple 5.

  
EXEMPLE 8

  
 <EMI ID=167.1> 

  
dihydrobenzofuranne) dans 25 ml de solution aqueuse N d'hydroxyde de potassium et on ajoute par portions, sous agitation, 50 ml d'une solution aqueuse de 0,578 g de permanganate de potassium. Lorsque la coloration du permanganate

  
a disparu, on arrête l'agitation. On filtre le précipité sur Celite. On acidifie le filtrat à pH 2 à 3 environ par l'acide chlorhydrique. On filtre les cristaux d'un mélange de benzène, de butanol et d'acide acétique, 60:15:5 en volume, comme solvant de développement). L'évaporation du solvant de la fraction donne
700 mg de 4,6-dihydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tétrahydro-furo[3,4-g]benzofuranne-2-

  
 <EMI ID=168.1> 

  
8',8'a-décahydronaphtalène), substance cristalline jaune clair. L'identité

  
du composé a été confirmée par les mesures physicochimiques dont les résultats sont rapportés ci-après :

  

 <EMI ID=169.1> 


  
avec CD30D (DSS) comme solvant ; ce spectre de résonance magnétique nucléaire est représenté dans la figure 6 des dessins annexés.

  
On a également pris le spectre de résonance magnétique nucléaire en utilisant la pyridine-d6 (DSS) comme solvant ; le spectre de résonance magnétique nucléaire correspondant est représenté dans la figure 7 des dessins annexés.

  
Finalement, on a utilisé le diméthylsulfoxyde-d6 comme solvant et on a pris le spectre de résonance magnétique nucléaire 2 h et

  
63 h, respectivement, après dissolution. Les deux spectres sont identiques et on les a rapportés dans la figure 8 des dessins annexés.

  
Les conditions observées pour la prise de ces spectres de résonance magnétique nucléaire sont les suivantes :

  

 <EMI ID=170.1> 


  
EXEMPLE 6

  
On met en suspension 0,65 g d'oxyde d'argent dans une solution

  
 <EMI ID=171.1>  

  

 <EMI ID=172.1> 


  
EXEMPLE 10

  
On dissout 418 mg de 4,6-dihydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tétrahydro-

  
 <EMI ID=173.1> 

  
d'éthyle et on ajoute sous agitation 0,33 mole d'une solution aqueuse 6N d'hydroxyde de sodium. On agite pendant 10 min à température ambiante dans un courant d'azote. On filtre les cristaux qui ont précipité, on les lave à trois reprises par 10 ml d'acétate d'éthyle et on les sèche. On obtient 390 mg de

  
 <EMI ID=174.1> 

  
 <EMI ID=175.1> 

  
chimiques de ce composé sont les marnas que celles du composé de l'exemple 9. EXEMPLE 11

  
On dissout 4,02 g de 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-l,2,3,

  
 <EMI ID=176.1> 

  
dihydrobenzofuranne) dans une solution aqueuse N d'hydroxyde de sodium et on

  
 <EMI ID=177.1> 

  
 <EMI ID=178.1> 

  
On filtre les cristaux qui ont précipité, on les lave à l'eau et on les sèche.

  
Les cristaux bruts sont chromatographiés sur une colonne de gel de silice à l'aide d'un mélange de chloroforme et de méthanol (9:1 en volume) comme éluant. On recueille l'éluat final et on concentre à sec sous vide. On reprend le résidu dans l'eau, on filtre les cristaux, on lave à l'eau et on sèche. On obtient 0,80 g de 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-

  
 <EMI ID=179.1> 

  
à l'état de cristaux de couleur brune. Lorsqu'on tente de prendre le point de fusion, on constate une décomposition progressive aux environs de 2500C. Les propriétés physicochimiques du composé, rapportées ci-après, confirment son identité :

  

 <EMI ID=180.1> 
 

  
 <EMI ID=181.1> 

  
On redissout les cristaux secs dans 30 ml d'acétate d'éthyle, on filtre les insolubles et on décolore le filtrat sur charbon actif, puis on le concentre sous-vide. A la solution concentrée, on ajoute 50 ml d'éther de pétrole et on agite. On filtre les cristaux qui précipitent, on les lave à l'éther de pétrole et on les sèche à 60[deg.]C sous vide. On obtient 0,9 g de 4,6-dihydroxy-8-oxo-2,3,6,8tétrahydrofuro[3,4-g]benzofuranne-2-spiro-l'-(6',7'-dihydroxy-2',5',5',8'a-tëtraméthyl-l',2',3',4',4'a,5',6',7',8',8'a-décahydronaphtalène). Les propriétés physicochimiques de ce composé sont les mêmes que celles du composé obtenu

  
dans l'exemple 5.

  
EXEMPLE 9

  
A 5 ml d'une solution aqueuse 0,4N d'hydroxyde de sodium et 5 ml d'éthanol, on ajoute 418 mg de 4,6-dihydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tétrahydro-furo[3,4-g]-

  
 <EMI ID=182.1> 

  
un courant d'azote. On distille ensuite le solvant sous vide. On sèche le résidu et on y ajoute 10 ml d'acétone. On sépare la solution acétonique par filtration et on recueille des cristaux bruts. On recristallise par addition progressive d'acétone à la solution aqueuse ; on obtient 342 g de sel disodique du 6,7-

  
 <EMI ID=183.1> 

  
spiro-2'-(7'-carboxylate-6'-formyl-4'-oxyde-2',3'-dihydrobenzofuranne) à l'état de cristaux jaune clair. Le composé possède les propriétés physicochimiques ci-après qui confirment son identité : 

  

 <EMI ID=184.1> 


  
Le spectre a été pris avec D20 (DSS) comme solvant. Le spectre de résonance magnétique nucléaire est représenté dans la figure 9 des dessins annexés. Les conditions opératoires étaient les suivantes :

  

 <EMI ID=185.1> 
 

  
EXEMPLE 13

  
On dissout 2,01 g de 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-l,2,3,4,4a,

  
 <EMI ID=186.1> 

  
dihydrobenzofuranne) dans 50 ml d'éthanol et on ajoute 3 ml de cyanacétate d'éthyle. On catalyse par trois gouttes de pipéridine et on agite à 60[deg.]C

  
 <EMI ID=187.1> 

  
petite proportion d'acide chlorhydrique dilué N, on lave à l'eau et on sèche ; on obtient des cristaux bruts qu'on redissout dans 50 ml d'un mélange de méthanol

  
 <EMI ID=188.1> 

  
un volume égal d'eau ; il y a précipitation de cristaux qu'on filtre, qu'on

  
 <EMI ID=189.1> 

  
 <EMI ID=190.1> 

  
cristaux de couleur pale. Les propriétés physicochimiques ci-après confirment l'identité du composé :

  

 <EMI ID=191.1> 


  
 <EMI ID=192.1> 

  
 <EMI ID=193.1> 

  
 <EMI ID=194.1> 

  
a l'eau. On redissout les cristaux bruts dans 100 ml d'une solution aqueuse de bicarbonate de sodium 10.%..On filtre les insolubles et on acidifie le filtrat

  
 <EMI ID=195.1>  

  
(4) Spectre d'absorption dans l'infrarouge :

  
 <EMI ID=196.1> 

  
3450 (i), 2980 (i), 2980 (ép), 1640 (m), 1480 (m), 1400 (f), 1330 (f), 1260 (f),
1220 (f), 1140 (f), 1120 (f), 1060 (f), 1020 (f), 1010 (f), 910 (f), 890 (f),
760 (f).

  
(L'abréviation "i" indique une absorption intense, "m" une absorption moyenne et "f" une absorption faible, et ép indique un épaulement ; ces abréviations seront encore utilisées avec les mêmes significations ci-après).

  
EXEMPLE 12

  
 <EMI ID=197.1> 

  
concentre ensuite & volume final de 10 ml sous vide et on laisse refroidir. On filtre les cristaux qui ont précipité et on les lave à l'éthanol froid (2-5[deg.]C). On redissout les cristaux bruts dans 50 ml de solution aqueuse N d'hydroxyde de sodium et on traite par le charbon actif. On acidifie la solution (pH 2-3) par l'acide

  
 <EMI ID=198.1> 

  
cristaux jaunes. Ce composé présente les propriétés physicochimiques ci-après qui confirment son identité :

  

 <EMI ID=199.1> 


  
 <EMI ID=200.1> 

  
1520 (f), 1470 (m), 1400 (m), 1380 (m), 1360 (m), 1340 (m), 1260 (m), 1200 (f), 
1050 (m), 1020 (f), 1000 (f), 980 (f), 960 (f), 940 (f), 900 (f), 840 (f), 760 (f). 

  
EXEMPLE 16

  
On dissout 1,0 g de borohydrure de sodium dans 20 ml de solution aqueuse 0,1 N d'hydroxyde de sodium. On ajoute une solution de 0,9 g de 4,6-

  
 <EMI ID=201.1> 

  
naphtalène) dans 10 ml d'une solution aqueuse à 1 % d'hydroxyde de sodium. On

  
 <EMI ID=202.1> 

  
on acidifie par l'acide chlorhydrique N, On concentre la solution à sec sous vide et on reprend le résidu dans 50 ml d'acétate d'éthyle. On filtre les insolubles. On lave le filtrat à l'eau et on le sèche sur sulfate de sodium anhydre. On filtre le sulfate de sodium et on concentre le filtrat à sec sous vide. On recristallise le résidu dans 1C ml d'un mélange à volumes égaux de méthanol et d'eau, on obtient 0,28 g de 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,

  
 <EMI ID=203.1> 

  
3'-dihydrobenzofuranne) à l'état de cristaux incolores.

  
L'identité du composé est confirmée par les propriétés physicochimiques ci-après :

  

 <EMI ID=204.1> 


  
 <EMI ID=205.1> 

  
3450 (i), 2950 (ép), 2920 (m), 2900 (ép), 1740 (i), 1620 (m), 1475 (i),

  
1400 (f), 1360 (f), 1340 (m), 1260 (f), 1140 (f), 1080 (m), 1050 (f), 1030 (f),

  
 <EMI ID=206.1> 

  
 <EMI ID=207.1> 

  
de diéthyle et on catalyse par une goutte de pipéridine. On élimine l'eau par distillation azéotropique de 4 h ; on recueille presque la quantité théorique d'eau ; on concentre ensuite le mélange sous vide. Le résidu goudronneux est lavé à l'éther éthylique ; on filtre l'insoluble dans l'éther, on le sèche et on le recristallise dans un mélange éther éthylique./eau, 1:2 en volume. On obtient

  
 <EMI ID=208.1>   <EMI ID=209.1> 

  
est confirmée par les propriétés physicochimiques ci-après :

  

 <EMI ID=210.1> 


  
3450 (i), 2950 (m), 2870 (ép), 2240 (f), 1710 (i), 1660 (m), 1510 (i), 1580 (m),
1460 (m), 1440 (m), 1400 (m), 1300 (m), 1250 (m), 1200 (ép), 1120 (f), 1100 (f),
1040 (f), 880 (f).

  
EXEMPLE 15

  
On dissout 1,0 g de 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-l,2,3,4,

  
 <EMI ID=211.1> 

  
dihydrobenzofuranne) dans 10 ml de pyridine, on ajoute 1,0 g d'acide malonique et on catalyse par trois gouttes de pipéridine. On chauffe au reflux pendant 4 h.

  
 <EMI ID=212.1> 

  
laisse refroidir. On recueille la matière goudronneuse qui a précipité,_on la lave à l'eau, on la redissout dans 100 ml de méthanol, on traite par la charbon actif et on concentre & sec sous vide. On recristallise le résidu dans un mélange à volumes égaux de méthanol et d'eau ; on obtient 0,58 g de 6,7-dihydroxy-2,5,

  
 <EMI ID=213.1> 

  
brun clair. L'identité du composé est confirmée par les propriétés physicochimiques ci-après : 

  

 <EMI ID=214.1> 


  
 <EMI ID=215.1>  

  
EXEMPLE 19

  
On dissout 1,00 g de 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-1,2,3,4,

  
 <EMI ID=216.1> 

  
2',3'-dihydrobenzofuranne) dans 50 ml de méthanol. On ajoute cette solution goutte à goutte à 20 ml d'une solution fraîchement préparée de 1,0 g de diazométhane dans l'éther éthylique, à l'aide d'une ampoule à brome, à température ambiante. On agite à température ambiante pendant 2 h, puis on refroidit à la glace.(environ 2-5[deg.]C). On décompose l'excès de diazométhane par barbotage de chlorure d'hydrogène gazeux. On ajoute 100 ml d'eau et on concentre à sec sous vide. On ajoute au résidu 10 ml de solution aqueuse 0,1 N d'hydroxyde de sodium, on filtre la substance insoluble, on la lave à l'eau et on la sèche. On recueille

  
 <EMI ID=217.1> 

  
naphtalène-l-spiro-2'-(6',7'-dihydroxyméthyl-4'-méthoxy-2',3'-dihydrobenzofuranne) à l'état de cristaux incolores. L'identité du composé est confirmée par les propriétés physicochimiques ci-après :

  

 <EMI ID=218.1> 


  
max 

  
3320 (i), 2920 (m), 2880 (m), 1720 (f), 1620 (m), 1600 (i), 1500 (ép), 1450 (m),
1420 (m), 1390 (f), 1320 (m), 1230 (m), 1200 (f), .1120 (i), 1040 (m), 1000 (m),
940 (f), 820 (f).

  
EXEMPLE 20

  
On dissout 2,00 g de 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétramé&#65533;hyl-1,2,3,4,

  
 <EMI ID=219.1> 

  
hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuranne) dans 50 ml d'acétate d'éthyle, on ajoute

  
10 ml d'acide p-toluènesulfonique et on chauffe au reflux. On refroidit ensuite à température ambiante, on lave avec 10 ml de solution aqueuse N d'hydroxyde de sodium, puis, avec soin, à l'eau, et on sèche sur sulfate de sodium anhydre. On filtre le sulfate de sodium et on concentre le filtrat à sec sous vide. On obtient 1,45 g de 4-hydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tétrahydro-furo[3,4-g]benzofuranne-2-

  
 <EMI ID=220.1> 

  
décahydronaphtalène) à l'état de cristaux incolores. L'identité du composé est confirmée par les propriétés physicochimiques ci-après : 

  
 <EMI ID=221.1> 

  
3'-dihydrobenzofuranne] à l'état de cristaux incolores. L'identité du composé est confirmée par les propriétés physicochimiques ci-après :

  

 <EMI ID=222.1> 


  
 <EMI ID=223.1> 

  
1630 (ép), 1500 (i), 1470 (m), 1440 (m), 1400 (m), 1320 (m), 1250 (i), 1120 (f),
1100 (f), 1080 (f), 1050 (f), 1020 (f), 970 (f), 950 (f), 890 (f), 760 (m).

  
 <EMI ID=224.1> 

  
On dissout 1,0 g de borohydrure de sodium dans 50 ml d'une solution aqueuse N d'hydroxyde de sodium et on ajoute à température ambiante une solution

  
 <EMI ID=225.1> 

  
glace (environ 2-5[deg.]C). On filtre les cristaux qui ont précipité, on les lave à l'eau et on les sèche. On recristallise les cristaux bruts dans 50 ml d'un  mélange méthanol/eau, 1:5 en volume ; on obtient 2,51 g de 6,7-dihydroxy-2,5, <EMI ID=226.1>  beige. L'identité du composé est confirmée par les propriétés physicochimiques ci-après :

  

 <EMI ID=227.1> 


  
 <EMI ID=228.1> 

  
1260 (m), 1200 (f), 1100 (m), 1040 (f), 1000 (f), 980 (f), 940 (f), 830 (f). 

  
 <EMI ID=229.1> 

  
acétyloxyméthyl-4'-acétyloxy-2',3'-dihydrobenzofuranne) à l'état de cristaux blancs. L'identité du composé est confirmée par les propriétés physicochimiques ci-après :

  

 <EMI ID=230.1> 


  
 <EMI ID=231.1> 

  
2920 (m), 2880 (ép), 1760 (ép), 1750 (ép), 1730 (i), 1624 (ép), 1603 (m),

  
 <EMI ID=232.1> 

  
1260 (ép), 1220 (i), 1195 (i), 1150 (ép), 1125 (f), 1095 (i), 1035 (ép),
1020 (i), 980 (ép), 953 (i), 915 (m), 895 (ép), 870 (ép), 820 (f), 765 (f),
715 (f), 686 (f), 657 (f), 618 (ép)., 596 (m), 583 (m).

  
EXEMPLE 23

  
On dissout 100 mg de 7-acétyloxy-6-hydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-

  
 <EMI ID=233.1> 

  
4'-acétyloxy-2',3'-dihydrobenzofuranne) dans 5 ml d'acétone et on ajoute, en refroidissant à la glace, 0,1 ml de réactif de Jones ; on agite pendant 1 h. On décompose l'excès de réactif de Jones par addition goutte à goutte d'isopropanol. On ajoute ensuite de l'eau glacée et on extrait par l'acétate d'éthyle. On lave la couche organique à l'eau et on distille le solvant. On recristallise le résidu dans un mélange acétone/n-hexane ; on obtient 72 mg

  
 <EMI ID=234.1> 

  
benzofuranne) à l'état de cristaux blancs. L'identité du composé est confirmée par les propriétés physicochimiques ci-après :

  

 <EMI ID=235.1> 
 

  

 <EMI ID=236.1> 


  
 <EMI ID=237.1> 

  
3280 (i), 2950 (m), 2890 (m), 1730 (i), 1610 (m), 1460 (i), 1330 (i), 1240 (f),
1130 (f), 1080 (m), 1040 (f), 1000 (f), 940 (m), 750 (m).

  
EXEMPLE 21

  
On dissout 100 mg de 6,7-dihydroxy-2,5,5,8a-tétraméthyl-l,2,3,4,

  
 <EMI ID=238.1> 

  
2',3'-dihydrobenzofuranne) dans 2 ml de pyridine sèche et on ajoute 1 ml d'anhydride acétique. On laisse reposer une nuit à température ambiante, puis on ajoute de l'eau glacée. On filtre le précipité et on le recristallise par addition de n-hexane à la solution dans l'acétate d'éthyle. On obtient ainsi 105 mg de 7-

  
 <EMI ID=239.1> 

  
l'état de cristaux blancs. L'identité du composé est confirmée par les propriétés physicochimiques ci-après :

  

 <EMI ID=240.1> 


  
 <EMI ID=241.1>  EXEMPLE 25

  
 <EMI ID=242.1> 

  
2',3'-dihydrobenzofuranne) dans 2 ml d'acétone sèche et on ajoute 1 ml de 2,2diméthoxypropane et 5 mg d'acide p-toluènesulfonique anhydre. On agite pendant
30 min à température ambiante. On ajoute de l'eau glacée et on extrait par l'acétate d'éthyle. On lave la couche organique à l'aide d'une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium, puis à l'eau, et on distille le solvant. On purifie le résidu par chromatographie sur une colonne de gel de silice et on recristallise par addition de n-hexane à la solution dans l'acétate d'éthyle ; en obtient

  
 <EMI ID=243.1> 

  
benzofuranne) à l'état de cristaux blancs. L'identité du composé est confirmée par les propriétés physicochimiques ci-après :

  

 <EMI ID=244.1> 


  
 <EMI ID=245.1> 

  
 <EMI ID=246.1> 

  
sec et on ajoute, en refroidissant à la glace, 5 mg d'hydrure de lithium et d'aluminium. On agite pendant 1 h. On ajoute de l'eau glacée et on acidifie légèrement (pH 3-5) par l'acide chlorhydrique N, puis on extrait à l'acétate d'éthyle. On lave la couche organique à l'eau et on distille le solvant. On re-

  
 <EMI ID=247.1>  
 <EMI ID=248.1> 
 max 

  
2900 (m), 2880 (ép), 1766 (ép), 1750 (i), 1720 (i), 1628 (ép), 1500 (m),
1456 (i), 1427 (i), 1380 (ép), 1363 (i), 1340 (ép), 1300 (i), 1265 (ép),
1220 (i), 1185 (i), 1120 (m), 1083 (i), 1070 (ép), 1030 (i), 1013 (ép),

  
 <EMI ID=249.1> 

  
854 (ép), 827 (f), 780 (f), 766 (f), 738 (f), 712 (f), 666 (f), 610 (f),
588 (f). 

  
EXEMPLE 24

  
On dissout 100 mg de 4-hydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tétrahydro-furo[3,4-g]benzofuranne-2-spiro-l'-(6',7'-dihydroxy-2',5',5'-8'a-tétraméthyl-l',

  
 <EMI ID=250.1> 

  
et on ajoute 1 ml de 2,2-diméthoxypropane, puis 5 mg d'acide p-toluènesulfonique anhydre. On agite à température ambiante pendant 2 h. On ajoute de l'eau et on extrait par l'acétate d'éthyle. On lave la couche organique par une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium, puis par l'eau. On évapore le solvant et on recristallise le résidu dans un mélange acétate d'éthyle/nhexane ; on obtient 83 mg de 4-hydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tétrahydro-furo[3,4-g]benzo-

  
 <EMI ID=251.1> 

  
3',4',4'a,5',6',7',8',8'a-décahydronaphtalène) à l'état de cristaux blancs. L'identité du composé est confirmée par les propriétés physicochimiques ci-après :

  

 <EMI ID=252.1> 


  
3280 (f), 2920 (m), 2880 (ép), 1760 (ép), 1733 (i), 1620 (ép), 1608 (m), 1463 (i),
1387 (ép), 1368 (m), 1354 (i), 1330 (i), 1300 (ép), 1255 (ép), 1238 (m), 1216 (i),
1178 (f), 1153 (f), 1124 (f), 1106 (f), 1080 (m), 1060 (m), 1043 (i), 1016 (m),

  
 <EMI ID=253.1> 

  
768 (ép), 753 (m). 

  
EXEMPLE 32 

  
Comprimé revêtu

  

 <EMI ID=254.1> 


  
stéarate de magnésium et on broie ; on met ensuite en comprimés à l'aide d'un mortier à dragéifier (R - 10 mm) de la firme Kikusui Seisakusho Co. Les comprimés sont revêtus d'une pellicule constituée du mélange du TC-5, du polyéthylèneglycol 6000, de l'huile de ricin et du méthanol.

  
EXEMPLE 33

  
Comprimé à revêtement entérique

  

 <EMI ID=255.1> 


  
stéarate de magnésium, on broie et on met en comprimés à l'aide de la machine

  
 <EMI ID=256.1> 

  
revêtus d'une pellicule du mélange constitué du polymère acrylate de méthyle/acide méthacrylique, de la triacétine et de l'éthanol. EXEMPLE 34

  
Comprimé revêtu
 <EMI ID=257.1> 
 de ce composé sont les marnes que celles du composé obtenu dans l'exemple 29.

  
Les exemples qui suivent illustrent des compositions thérapeutiques contenant comme composants actifs des composés selon l'invention.

  
EXEMPLE 27

  
Solution injectable

  

 <EMI ID=258.1> 


  
l'invention avec le glucose dans l'eau distillée pour injection. On introduit la solution dans une ampoule de 5 ml. On purge l'ampoule à l'azote et on la chauffe à 121[deg.]C pendant 15 min pour stérilisation.

  
EXEMPLE 28

  
Solution injectable

  

 <EMI ID=259.1> 


  

 <EMI ID=260.1> 


  
EXEMPLE 30

  
Suppositoire

  

 <EMI ID=261.1> 


  
 <EMI ID=262.1> 

  
 <EMI ID=263.1> 

  
EXEMPLE 31

  
Suppositoire

  

 <EMI ID=264.1> 
 

REVENDICATIONS

  
 <EMI ID=265.1> 

  
à la formule générale :

  

 <EMI ID=266.1> 


  
dans laquelle R représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle inférieur

  
 <EMI ID=267.1> 

  
chacun un groupe formyle, hydroxyméthyle, hydroxy, carboxy, alcanoyloxy-

  
 <EMI ID=268.1> 

  
identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène, un

  
groupe cyano, un groupe alcoxycarbonyle inférieur ou un groupe carboxyle,

  
ou bien R <2> et R <3> forment ensemble un cycle lactonique de formule

  
R9 0
-CH-O-C dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy ;

  
 <EMI ID=269.1> 

  
 <EMI ID=270.1> 

  
 <EMI ID=271.1> 

  
former ensemble un groupe alkylidène-dioxy inférieur, et leurs sels acceptables

  
pour l'usage pharmaceutique.

Claims (1)

1. 2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il répond

   à la formule : <EMI ID=272.1>

   et ses sels acceptables pour l'usage pharmaceutique. <EMI ID=273.1>

   On mélange le composé n[deg.] 6, l'acide citrique, le lactose, le phosphate dicalcique, le Pluronic F-68 et le laurylsulfate de sodium. On tamise le mélange sur un tamis à ouverture de mailles de 0,25 mm et on met <EMI ID=274.1>

   polyvinylpyrrolidone, du Carbowax 1500 et du Carbowax 6000. Eventuellement, on ajoute encore de l'éthanol pour mettre la poudre à l'état pâteux. On ajoute l'amidon de mats et on poursuit le mélange jusqu'à obtention de particules uniformes. On fait passer les particules sur un tamis à ouverture de mailles

   <EMI ID=275.1>

   100[deg.]C pondant'12 à 14 h. On fait passer les particules sèches sur un tamis

   <EMI ID=276.1>

   sodium sec et le stéarate de magnésium sec. On met le mélange à l'état de comprimés à la forme voulue dans une machine à comprimés.

   Sur les comprimés ainsi obtenus, on applique un vernis et on saupoudre de talc afin d'empêcher l'absorption d'humidité. L'application d'une couche d'apprêt et d'un vernis est répétée à un nombre de reprises suffisant pour permettre l'administration perorale. Pour donner aux comprimés une surface bien lisse, on applique à nouveau une couche d'apprêt et un revêtement de lissage, éventuellement coloré. Après séchage, on polit les comprimés revêtus de manière à leur donner un brillant uniforme. <EMI ID=277.1>

   0

   Il

   <EMI ID=278.1>

   le procédé se caractérisant en ce que l'on soumet le composé de formule (la)

   à déshydrocondensation à l'aide d'un composé à groupe méthylène actif répondant à la formule :

   <EMI ID=279.1>

   dans laquelle R 7 et R8 ont les significations indiquées dans la revendication 1, en présence d'un catalyseur.

   <EMI ID=280.1>

   :revendication 1, dans laquelle R2 et/ou R3 représentent un groupe hydroxy,

   .\le procédé se caractérisant en ce que l'on fait réagir le composé de formule (la) ;avec un peroxyde dans un solvant inerte.

   :13. Procédé de préparation des composés de formule (I) selon la :.revendication 1, dans laquelle R2 et/ou R3 représentent un groupe alcanoyloxyméthyle inférieur, le procédé se caractérisant en ce que l'on soumet à acylation un composé de formule (I) dans laquelle et/ou R <3> représentent un groupe

   .hydroxy, obtenu par un procédé selon la revendication 12.

   <EMI ID=281.1>

   risé en ce que l'on convertit en outre les composés obtenus en sels acceptables pour l'usage pharmaceutique,

   15. Procédé de préparation des composés de formule (I) dans laquelle

   <EMI ID=282.1>

   que l'on fait réagir le composé correspondant,dans lequel R représente un atome d'hydrogène, avec un agent alkylant.

   16. Procédé de préparation des composés de formule (I) dans laquelle R représente un groupe alcanoyloxy inférieur, le procédé se caractérisant en ce que l'on acyle le composé correspondant dans lequel R représente un

   atome d'hydrogène.

   17. Procédé de préparation des composés de formule (I) dans laquelle R 4 et R 6 représentent des groupes alcanoyloxy inférieur, le procédé se caracté-

   <EMI ID=283.1>

   représentent des groupes hydroxy. <EMI ID=284.1>

   selon la revendication 2, ce procédé se caractérisant en ce que l'on soumet

   à culture aérobie un micro-organisme du genre Stachybotrys dans un milieu de culture contenant des sources assimilables d'azote, de carbone, des sels minéraux et des oligo-éléments à un pH d'environ 3,5 à 11,5 et une température d'environ 15 à 35[deg.]C, et on recueille la composé de formule (Ia) à partir du bouillon de culture.

   4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'on convertit en outre le composé obtenu en un sel acceptable pour l'usage pharmaceutique.

   5. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que le microorganisme est choisi dans le groupe formé par Stachybotrys altermans IFO 9355, Stachybotrys charlarum IFO 5369, Stachybotrys cnartarum IFO 7222, Stachybotrys

   <EMI ID=285.1>

   Stachybotrys sp. X-76, Stachybotrys sp. T-789 et Stachybotrys sp. T-791.

   6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que le microorganisme est choisi dans le groupe formé par Stachybotrys sp. K-76, Stachybotrys sp. T-789 et Stachybotrys sp. T-791.

   7. Procédé de préparation des composés de formule (I) selon la revendication 1, dans laquelle R <2> et/ou R <3> représentent un groupe carboxyle, ce procédé se caractérisant en ce que l'on soumet le composé de formule (la)

   à oxydation.

   8. Procédé de préparation des composés de formule (I) selon la revendication 1, dans laquelle R<2> et/ou R3 représentent un groupe hydroxyméthyle, le procédé se caractérisant en ce que l'on réduit les groupes formyle du composé de formule (la) ou les groupes carboxyle des composés obtenus par le procédé selon la revendication 7.

   9. Procédé de préparation des composés de formule (I) selon la revendication 1, dans laquelle R2 et/ou R3 représentent des.groupes hydroxyméthyle, le procédé se caractérisant en ce que l'on réduit un composé de formule (I) dans laquelle R<2> et R3 forment ensemble un cycle lactone

   <EMI ID=286.1>

   Procédé de préparation des composés de formule (I) selon la

   <EMI ID=287.1>

   <EMI ID=288.1>

   le procédé se caractérisant en ce que l'on soumet à déshydrocycli-

   sation un composé de formule (I) selon la revendication 1, dans laquelle l'un des symboles R <2> et R <3> représente un groupe hydroxyméthyle et l'autre un groupe 18. Procédé de préparation des composés de formule (I) dans laquelle R4 et R 6 représentent un groume alkylidènedioxy, le procédé se caractérisant en ce que l'on fait réagir le composé correspondant dans lequel R4 et R6 sont des groupes hydroxy, avec une cétone répondant à la formule :

   <EMI ID=289.1>

   <EMI ID=290.1>

   alkyle inférieur, ou avec un acétal répondant à la formule :

   <EMI ID=291.1>

   <EMI ID=292.1>

   d'un catalyseur.

   19. Procédé de préparation des composés de formule (I) selon la

   <EMI ID=293.1>

   procédé se caractérisant en ce que l'on oxyde le composé correspondant

   <EMI ID=294.1>

   20. A titra de médicaments nouveaux, utiles notamment en raison

   <EMI ID=295.1>

   revendication 1 et leurs sels acceptables pour l'usage pharmaceutique.

   21. Compositions thérapeutiques, caractérisées en ce qu'elles contiennent en tant que substance active un composé selon la revendication 1.

   22. Composition thérapeutique selon la revendication 21, caracté-

   <EMI ID=296.1>

   revendication 1, avec des véhicules ou diluants acceptables pour l'usage pharmaceutique.

   23. Composition thérapeutique selon la revendication 21 ou 22, destinée au traitement de la néphrite.

   24. Formes d'administration des compositions thérapeutiques selon l'une quelconque des revendications 21 à 23.

   25. Formes d'administration selon la revendication 24, permettant une posologie quotidienne d'environ 0,5 à 20 mg/kg de poids corporel.