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Procédé de préparation de 1pacide 6-aminopénicillanique. présente invention concerne la transformation par des moyens purement chimiques de certaines pénicillines
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en acide 6-aminopénj.cillanique, et en pe.:rticulierp la trrms... formation en acide 6-aminop6nioillanique de certaines or- thf)-nitropënioillines par réduction du groupe nitro.
L'acide 6-aminopênicillan1que est avantageux pour être utilisa dans la production de pénicillines synthéti- ques qui ne peuvent pas être fabriquées par fermentation directe en utilisant des précurseurs appropriés.
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La production de l'acide 6-aminopènieillanïque par fermentation de Pénicillium phrysoeenum sans ajouter de précurseurs a été réalisée, mais est rendue difficile
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par les problèmes inhérents à l'extraction de l'acide
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6-aminopénicillanique à partir de ces bouillons de fer- mentation et par l'absence d'une stimulation du rendement, cornue celle qu'on observe lorsqu'on ajoute de l'acide phénylacétique comme précurseur pour produire de la ben-
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zyll)c:
nioi1 line , L'hydrolyse ou la "séparation" de l'acide 6-aminopénicillanique d'avec des pénicillines telles que la benzylpémicilline ou la phénoxyniéthylpénicilline a été ' réalisée par voie enzymatique, maie'ce procédé nécessite l'utilisation de techniques et de moyens pour traiter les microorganismes à partir desquels ces enzymes doivent être
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obtE .-: s, La synthèse purement chimique de l'acide 6-amino-
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pénioillanique implique de nombreux stades dans le schéma de la réaction et elle n'est pas considérée comme étant commercialement réalisable.
Les seules dégradations chimie ques publiées d'une pénicilline en acide 6-aminopénicil- lanique sont celles dans lesquelles la pénicilline pro- prement dite est obtenue chimiquement par synthèse à par-
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tir de l'acide 6-aminopénioillanique, c'est-à-dire à par- tir de la benzyloxypénicilline ou à partir de l'acide tri- tylaminopénioillanique comme décrit dans le brevet britan- nique NO 894 368 du 30 Octobre 1959 et dans le brevet des Etats-Unis d 1 Am:t'i<1ue NO a28 379 du i Avril 1962.
La présente invention de propose notamment de fournir un procédé purement chimique pour la dégradation
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en acide 6-auinopénicillanique d'une pénicilline qui peut être produite en un rendement élevé par la fermentation
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de Pénicillium qhrysoenum ou de microorganismes équiva- lents en présence d'un précurseur approprié.
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On atteint le but de la présente invention grâce au procédé de réduction en un groupe hydroxylamino ou amine d'un groupe nitro situé sur le noyau benzénique ou naphtalénique d'une pénicilljne présentant un groupe ni- trophényle ou nitronaphtyle fixé dans la position ortho par rapport au groupe nitro par une liaison directe ou par un atome d'oxygène ou de soufre à la méthylpénicilli- ne, et en maintenant ultérieurement la pénicilline ré- duite en solution dans un milieu liquide pour obtenir l'acide 6-aminopénicillanique, et si on le désire, en ré- cupérant ledit acide 6-aminopénicillanique à partir dudit milieu liquide.
Une forme de réalisation préférée de la présen- te invention comprend le procéde de production de l'acide 6-aminopénicillanique, qui condtste à réduire en un grou- pe hydroxylamino ou amine, de préférence par hydrogéna- tion catalytique, le groupe nitro situé en position ortho d'une nitropénicilline choisie dans le groupe comprenant les acides répondant aux formules :
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dans lesquelles R1, R et R3 représentent chacun un élé- ment choisi dans le groupe comprenant un atome d'hydro- gène, les radicaux alkyle inférieur, alcoxy inférieur, un atome de chlore, de brome, d'iode, les radicaux tri- fluorométhyl.e, cyano, nitro, di(alkyl inférieur)amine, méthylsulforyle, alcanoyle inférieur, (alkyl inférieur)-
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thio, phénoxy, benzyloxy, allyloxy et carbalcoxy et leurs sels, et en maintenant ultérieurement le produit réactionnel de ladite réduction en solution dans un mi- lieu liquide, de préférence à un pH compris entre 1 et 6, pendant au moins une brève période de temps.
Les procédés proférés de la présente invention sont ceux permettant de produire de l'acide 6-aminopé- nicillanique qui consistent à réduire en un groupe hy- droxylamine ou amine, de préférence par hydrogénation catalytique, le groupe nitro d'une "nitropénicilline" ré- pondant aux formules :
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et à maintenir ultérieurement le produit réectionnel de ladite réduction en solution dans un milieu liquide, de préférence à un pH compris entre 1 et 6 pendant au moins une brève période de temps,
La transformation d'une nitropénicilline en acide 6-aminopénicillanique suivant la présente invention peut être illustrée de la façon suivante
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où X représente -NH2 ou. -NHOH, Z représente -N- ou -N-
H OH
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et PA représente un acide pé1ioillar.ique 6-suhstitué de formule ;
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La formation du. noyau stable de benzoxazine est supposée ê une stimulation pour la réaction.
Des composés bi- cycliques analogues pont formés à partir de l'ortho-
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nitrophénylthioinéthylp6nicilline (orthc-nitro-pénicilline S) et de 1'ortho-nitrobenzylp.nici,lline (ortho-nitro-péni- cilline G).
On peut effectuer la réduction du groupe nitro par l'un quelconque des procédés connus pour réduire un tel groupe nitro aromatique en un groupe hydroxylamine ou amine sans destruction du noyau de la pénicilline comme déterminé par un simple essai. Les procédés préférés com- prennent l'hydrogénation en présence soit d'un cataly- seur comprenant un métal noble, soit du nickel de Raney et une réduction en utilisant des borohydrures en pré- sence du palladium.
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Des borohydrures appropriés comprennent le
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borohydrure de sodium et le borohydrure de potassium. Le borohydrure de sodium (NaBH4) est une poudre micro cria- talline de couleur gris blanc contenant quatre moles d'hydrogène disponible par mole. Il.est stable à l'air anhydre, se décompose très lentement dans l'air humide, et réagit d'une façon négligeable avec l'eau à la tempe-' rature ambiante, mais rapidement à 50 C ou en présence d'acides ou de certains cations métalliques tels que Co++ et Ni ++, Les solvants préféras pour les utiliser avec le borohydrure de sodium sont l'eau (55), les alcools ,car exemple le méthanol, l'éthanol (4RL), l'alcool iso- propylique (0,25 RL)¯7, les amines /par exemple l'iso- propylamine (10),
la morpholine (1), la pyridine (3)¯7, le dioxane, le tétrahydrofurane (LS), et le diméthyl-Cel- losolve (0,8). Les chiffres entre parenthèses désignent les solubilités approximatives en grammes pour 100 g de solvant à 20 C ; RL signifie réaction lentù ; L3 signi- fie légèrement soluble. Le borohydrure de sodium est gé-
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néralement insoluble dans les thors, les hydrocarbures et les chlorures d'alkyle.
La présente invention englobe en particulier
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dans son cadre l'utilisation de pCnicillin.es qu'on appel- lera, dans la présente demande Ilorthonitropénicillines" qui sont des ortlon3.trozaaphtylm tlaylpÉnic.ll.nes, des or- thonitronaphtyl :ymthylpzzici.lines, des orthonitronaph- tylthiométhylp!1 icillines, et en particulier les ortho- nitrobenzylpénieillines, les orthonitropho noxymdthylp6ni- cillines et orthonitrophdnylthiométhylpënicillines préfé- rées dont chacune est, ou bien non substituée à un autre endroit sur les noyaux benzéniques et naphtyliques, ou est
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également 'substituée sur les noyaux benzéniques ou naphty- liques par un, ou deux, ou trois substituants choisis dans le groupé comprenant des radicaux alkyle inférieur, alcox inférieur, des atomes de chlore,
de brome, d'iode, des groupes trifluorom6thyle, cyano, nitro, di(alkyl in- férieur)amine, méthylsulfonyle, alcanoyl inférieur, (alkyl inférieur)thio, phénoxy, benzyloxy, allyloxy, et 'carbalcoxy, tels que carbéthoxy.
On prépare les "orthonitropénicillines" utili- sées comme matières de départ dans le procédé de la pré- sente invention suivant les procèdes'connue par exemple comme décrit dans les brevets des Etats-Unis d'Amérique N 2 479 295 -------- N 2 479 296 ------------, N 2 562 410 du 31 Juillet 1951 et N 2 623 876 du 30 Décembre 1952.
Le milieu liquide préféré dans lequel l'hydro- xylamino ou l'aminopénicilline est maintenue pour permet- tre de la séparer spontanément en benzoxazine ou composé analogue et un acide 6-aminopénicillanique est un acide aqueux dilué, ayant de préférence un pH compris entre 1 et 6. La température peut être de 50 C ou inférieure, par exemple celle d'un bain glacé. La durée n'a pas d'impor- tance, et elle peut être très courte ; en effet, certai- nes de ces hydroxylamino pénicillines et de ces amino- pénicillines semblent se séparer en acide 6-aminopénicil- lanique pratiquement d'une façon aussi rapide qu'elles sont formées pendant la réduction, en particulier si ladite réduction est effectuée à un pH du côté acide ou un pH équivalent.
Les "nitropénicillincs" utilisées comme matière de départ peuvent être sous la forme de l'acide libre ou
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de l'un des nombreux Sels connus. Il est souvent plus commode d'utiliser le sel sodique ou potassique.
Les exemples suivants sont donnés à titre illustratif mais non limitatif de la. présente invention.
EXEMPLE ¯ l'
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préparation de i,'..16.-cm.ro,Sn.c.a,n.ue h rtir du 6- ortho-nitrohFYnOÓ- nt d pçtessi (orthotqp9i1ne y PO. sique)
On dissout 3,0 g (5,9 millimoles) de 6-ortho-
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n3.crophe:noyac çt,mido } rdnic...4na,o de potassium (ortho. nitropcnioil,lino V potassique) d2ns 70 ml d'eau (le pH étant de 6,2), et on traite cette solution au moyen de 3,0 g d'un catalyseur prhydrog6n6 à 30 de Pd sur do la terre d'infusoires et 30 nil d'eau sous une pression mano. métrique d' Y3,? rogène de J,5? kg/cm2 à la terapdrature am- biante pendant une heure. On ajoute 100 ml de méthy iso-
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butyl cétone. On place le m1'1n.;,() dans un bain glacé, et on règle le pH de 9,0 à 2,0 avec une solution aqueuse à 20 % d'acide chlorhydrique.
On filtre le malange à travers un entonnoir préalablement enduit au moyen d'un adjuvant de filtration (Sil-Flo). La c@uche aqueuse contient un nou- veau composé @I'acide ortho-aminopénicilline V, 6-(ortho.
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aminophénoxyacétamido)pénieillanique-7, suivant la chroma- tographie en couche mince, On règle la phase aqueuse à un pH de 3,0 et on la distille sous une pression réduite pour la réduire à un quart environ de son volume initial.
Après un emmagasinage de 16 heures dans un ré-
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frigurateur, 0,53 g d'un solide orist.'l..n rose se eGps,ro do la solution aqueuse aorâs. â'Un chromatogramme en
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couche mince (en. utilisant 95 % d'acétone 5 % d'acide acétique comme solvant) de ce solide révèle deux zones principales, Rf de 0,76 et de 0,57,et une zone secon-
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daire, Rf de 0,12 (10 Rf do l'acide 6-amin,apnici.lan,qug étant de 0,47).
On mélange le filtrat obtenu à partir du solide
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cristallin rosé oi-desous avec 3,1 g de di(2-éthylhexyl)- sulfosucoinate d# sodium (Aérosol OT) dissous dans 30 ml de métyl isobutyl cétone à un pH de 2,0 et entre 5 et 1000 pendant quelques minutes. On sépare la couche organi- que, la sèche sur du sulfate de sodium anhydre (froid), la filtre et on règle le filtrat à un pH de 5,2 avec de la triéthylamine, Après agitation au froid pendant une courte
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période de temps, l'acide 6-aminopénioillanique brut se sdp4ra sous forme d'un solide amorphe et on le rocueillcè Il pèse 0,10 g. On obtientune seconde fraction de ce pro- duit solide en ajoutant des alcanes inférieurs (Skelly- s. e B) au filtrat ; elle pèse 0,15g.
Ces produira présentent des chromatograrames en couche mince identiques avec deux zones principales, Rf de 0,57 et 0,47 (ce- dernier correspondant à la position pour l'acide 6-aminopénicillanique authentique). La pre- mière fraction présente un pouvoir chimique par rapport
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à l'acide 6-aminopnicillanique de 210 mi crogrammes/mg.
Son spectre d'absorption des rayons infrarouges révèle une rais pour le groupe bêta-lactame carbonyle, La secon- de fraction présente un pouvoir chimique par rapport 4
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l'acide 6 am,nopn.o..lnn,,uo de 253 nicro6rnmnes/mg,
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EXEMPLE 2,
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Préparation de l'acide 6-aminopûnicillaninue à partir du 6- ortho-nitrophC:noxyacétamida)pénicillanate de potassium iortho-nitropénjcilline V poth:::
rigue) On dissout 10,0 g (0,023 mole) de 6-(ortho- nitrophéncxyacttar.ido)pén3.a.llanata de potassium (ortho- nitropénicilline V potassique) dans 100 ml d'eau, et on traite la solution au moyen de 10,0 g d'un catalyseur pré- hydrogéné à 30 % de Pd sur de la terre d'infusoires, et 90 ml d'eau sous une pression manométrique d'hydrogène d 3,815 kg/cm2 pendant une heure à la température ambian- te. La pression diminue de 0,385 kg/cm2 pendant cette pé- riode. On ajoute 200 ml de méthyl isobutyl cétone, on place le mélange dans un bain slacé, et on règle le pH de 9, 0 à 2,0 avec une solution aqueuse à 50% d'acide chlorhy-
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drique.
On filtre le cclnge t travers un entonnoir prés- lablement enduit de "Sil-Flo", et on traite la couche aqueuse (qui présente une zone pour l'ortho-aminopénicil- line V sur une plaque de gel de silice) au moyen d'une so-
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lution de 10,2 s (0,023 mole) de di(2-éthylhcxyl)sulfosuo- cinate de sodium (Aérosol OT) dans 100 ml de m6thyl iso- butyl cotone à un pH de 2,0 d2.110 un b:'.in glacé pendant quelques minutes. On refroidit la couche organique, la sè- che sur du sulfate de'sodium anhydre et la filtre.
On rè- gle le filtrat . un pH de 5,2 avec de la triéthylamine, et on emmagasine ;';. solution trouble ainsi obtenue à 36 C pendant 3 heures, On recueille l'acide 6-aminopénicilla- nique séparé sous forme d'un selide amorphe de couleur marron sur un entonnoir-filtre, on le lave avec de la
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mé'bhyl iG obu1.iylcêt one , et avec des 8.1cr.nee inférieurs (Skellysolvo B), et le sèche dans une étuve à vide à 45 C ;
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il pèse 1,97 g.
Un chromatogramme en couche mince de cet acide 6-aminopénicillanique solide révèle une zone prin- cipale dans la même position dans laquelle se trouve celle de l'acide 6-aminopénicillanique et une 'zone secondaire plus étroite qui est très probablement celle de l'ortho- aminopénicilline V. Son pouvoir chimique par rapport à l'acide 6-amino-pénicillanique est de 440 microgrammes/mg.
Préparation dela phénéthicilline
On met en suspension 1,95 g (9 millimoles) de l'acide 6-aminopénicillanique ci-dessus ayant un pouvoir chimique de 440 microgrames/mg dans 260 ml d'eau, et 104 ml de méthyl isobutyl cétone à un pH de 3,0 et entre 10 et 20 C tandis qu'on ajoute 2,1 ml (2,4 g ; 13,0 mil- limoles) de chlorure d'alpha-phénoxypropionyle en une seu- le portion. On maintient le pH à 3,0 en ajoutant une solu- tion aqueuse à 10 % d'hydroxyde de sodium.
On ajoute lo mélange à froid pendant 25 minutes, puis on enlève le bain glacé et on l'agite pendant 15 minutes supplémentaires, On règle le pH à 7,0 et on filtre le mélange à travers un entonnoir préalablement enduit avec du "Sil-Flo". On ex- trait la couche aqueuse à un pH do 2,0 avec 100 ml de mé- thyl isobutyl cétone, On fait passer la couche organique à travers un entonnoir préalablement enduit avec du "Sil- Flo". puis on la traite au moyen de 10 ml d'une solution aqueuse saturée d'acétate de potassium. On agite le mé- lange ainsi obtenu à 3000 pendant deux heures et demie.
On recueille la phénéthicilline/potassique @6-(alpha-pbenoxy- propionamido)pénicillanate de potassium] qui se sépare sous forme d'un solide cristallin blanc sur un entonnoir- filtru, on la lave avec de la méthyl isobutyl cétone, du butnol et de l'acétone, et on la sèche dans une étuve à
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vide à 40 C; elle pèse 0,37 g. Elle est homogène, sui- vant la chromatographie en couche mince, et la. zone pré- sente le même Rf que lapH énicthicillinc authentique. Son spectre d'absorption des rayons infrarouges est identique à celui de la phénéthicilline.
On obtient une seconde fraction de solide cristallin on ajoutant 10 ml d'une so- lution aqueuse saturée d'acétate de potassium au filtrat de la première fraction. On l'asile pendant 4 heures à 30 C.
Le solide qui se sépare pesé 0,035 g et est identique à la première fraction, suivant son chromatogramme en cou- che mince,
On combine les fractions ci-dessus de la phéné- thicilline et on les dissout dans 7 ml de butanol et 1 ml d'eau. On truite la solution au moyen d'une trace de char- bon de bois ("Darco KB") et on la filtre. On distille le filtrat sous une pression réduite jusqu'à ce que des ai- guilles blanches de phénéthicilline commencent à se sépa- rer. On les recueille, les lave avec du butanol et les sèche ; elles pèsent C,14 g, leur pouvoir chimique étant de 660 microgroammes/mg et leur pouvoir biologique étant de 860 microgrammes/mg.
On obtient une seconde fraction d'aiguilles blanches (0,10 g) par distillation supplémen- taire du filtrat. Elle s'avère être de la phénéthicilline analytiqument pure ; par rapport à la phénéthicilline, le pouvoir chimique est de 840 microgrammes/mg, et le pou- voir biologique est de 860 microgrcmmes/mg.
Analyse : Calculé pour C17H19O5N2SK:
C, 50,8;H, 4,76 ; N, 6,97
Trouve : C, 50,82 ; H, 4,74 ; N, 7,04.
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EXEMPLE
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Préparation de l'acide 6-mninopénicillapique à partir du 6- ortho-nitro hénox actamida énic3.llanate de potassium (ortho-nitropénicilline V potF',ssique) et isolement d'un frrment 3,4-dihydro-2H-1 ,4-benzoxazine-3-one.
On dissout 10,0 g (0,023 mole) de 6-(ortho-nitro- pllénoxyacétamido)pénicillanate de potassium (ortho-nitro- pénicilline V potassique) dans 50 ml seulement d'oau, et on l'hydrogène comme dans l'exemple 2, excepté que le temps est ramené à 20 minutes. On isole 1,94 g d'acide
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6-aminopénioillanique amorphe, et il présente un pouvoir chimique par rapport à l'acide 6-arainopénicillanique de 320 microgxr:mmes/mg, On extrait le filtrat (de la solution d'Aérosol OT à partir de laquelle on a enlevé l'acide 6- aminopénioillanique après précipitation), avec 30 ml d'une solution aqueuse à 5% d'hydroxyde.de sodium. On acidifie la couche aqueuse jusqu'à ce que le tournesol devienne rouge a une solution aqueuse à 50 % d'acide chlorhydrique.
On reprend dans de l'éther un solide bla.nc qui se sépare.
On sèche la solution éthérée sur du sulfate de sodium, et la distille à la pression atmosphérique jusqu'à ce qu'il reste un solide jaune. Il pèse 0,4 g. On le recristallise une fois dans l'eau chaude et une fois dans l'eau chaude en utilisant du charbon de bois ("Darco KB"). On obtient 0,08 g d'aiguilles blanches qui fondent entre 171,0 et 174,8 C, et elles pr6sentent un chromatogramme en couche mince et un spectre d'absorption des rayons infrarouges qui sont identiques à ceux de la 3,4-dihydro-2H-1,4-benzo- xazine-3-one authentique préparée par réduction au moyen du zinc et d'un acide de l'acide orthonitrophénoxyacéti- que.
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EXEMPLE 4.
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Pré aration de l'acide 6-aminoPéniciliinigue à partir du 6-ortho-nitrothGnyl:cta;.ido)pênicillanate e potassium (ortho-nitropénicilline G ota8sigue).
On hydrogène du 6-(ortho-nitrophénylacétawido)- pénicill.anate de potassium (ortho-nitropénicilline G po- tassique) de la même façon que le 6-(ortho-nitrophénoxy-
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actmido)pénicillanate de potassium (ortho-nitropénicil- line V potassique) dans l'exeuple 1, excepte qu'on limite
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la période d'hydrogénation a 30 minutes. La couche aqueuse à un pH de 2,0 contient de l'orthoaninobenzylpénicilline suivant la chromatographie en cuuche mince, et présente un Rf de 0,68 dans un solvant contenant 95 % d'acétone et 5 % d'acide acétique. Le Rf la l'acide 6-aminopénicilla- nique dans ce solvant est de .47 environ.
Dans un autre solvant, la soluticn aqueuse présente une plus faible va-
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leur de Rf que la iù:ltièr\ô. de dbp3.rt. On traite la solu- tion aqueuse présentant un pH de 2,0 au moyen d'une quan- tité équimolaire "d'Aérosol OT" dissous dans de la mthyl isobutyl cétone, puis au moyen de triéthylamine, de la mê- me fçon que le produit d'hydrogénation du 6-(ortho-nitro-
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phénoxyac6tamido)pénicillan,,,to- de potassium (ortho-nitro- pénicilline V potassique) de l'exemple 2.
On emmagasine la solution organique ainsi obtenue dans un réfrigérateur pendant 4 jours pendant lesquels une gomme de couleur foncée se sér 'et On lave la gomme avec de la méthyl iso-
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bu'cyl cétone ! G de l'acétone, e'c on la sèche pour obtenir un solide amorphe de couleur foncée. Ce dernier contient l'acide 6-aminopénicilla.nique comme indiqué par son chro- matogramme en couche mince ainsi que de la matière de dé- part (ortho-aminopenicilline G).
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EXEMPLE,¯5.
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Préparation, de l'acide 6-aminopênillanique à partir du 6-(ortho-nitrophénylthioacétamido)pénicillanate de potas- sium (ortho-nitroPÓnicil1ine S), On hydrogène le 6-(ortho-nitrophénylthioacétamido)" pénicillanate de potassium (ortho-nitropénioilline S) de la façon décrite dans l'exemple 2 excepté que le mélange est deux fois plus concentré et que la. durée de la réac- tion n'est que de 40 minutes. La solution aqueuse ayant
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un pH de 2,0 contient de l'ortho-q.minopénicillint1 S acide 6-(ortho-aminophénylthio-acdtamidd)pénicillanique-7, suivant son chromatograrame en couche mince (Rf 0,75 dans un solvant
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contenant 95 % d'acétor, et 5 jeta d'acide acétique).
Le fait,qu'elle soit soluble dans de l'eau ayant un pH de 2,0 indique que la matière de départ est réduite. On divise la solution en deux portions égales.
On règle la première portion à un pH de 4,0 et l'emmagasine pendant 1 jour dans un réfrigérateur, puis pendant un jour à 25 C. Au bout de ce -temps, un chromato- gramme en couche mince de la solution indique une zone dans la position de l'acide 6-aminopénicillanique (Rf 0,53) ain- si que la zone initiale (Rf 0,74).
On traite la seconde portion de la solution aqueu- se ayant un pH de 2,0 au moyen de "Aérosol OT" dissous dans de la méthyl isobutyl cétone, puis en la neutralisant avec la triéthylamine comme dans l'exemple 2. On remarque une
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zone dans la position de l'acide 6-aminopénici.llanique sur le chromatogramme en couche mince de la solution après vieillissement pendant un jour dans un réfrigérateur et pendant un jour 4 25 C.
Bien qu'on ait décrit en détail diverses formes
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de réalisation de la présente invention, il est évident qu'elle est susceptible de recevoir diverses variantes sans sortir de son cadre. On peut utiliser certains réac- tifs, composés, catalyseurs, agents reducteurs, solvants et autres détails décrits ou équivalents à ceux décrits dans l'un quelconque des procèdes donnés à titre d'exemple pour la mise en oeuvre de la présente invention comme le verront
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les spécialistes à la lecture ds la présente description.
EXUMMB-''--69 9r4nJ.rfitio.n..de l'a.cideL9-awinQPÓnë*1+nniQue À rti . ortho-n3.l;roohnox acétar .o n.c Z anat de .potaas3.tu (ol'tpo-tropén1ci1line V PQ.tnBsinue),¯EJE o'b 5 % de ?d sur du carbone.
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A 0,75 g (14 millimoles) de KBH4' dissous dans 70 ml d'eau, on ajoute 0,05 g d'un catalyseur à 5 % de Pd sur du carbone. On fait barboter de l'azote à travers la suspension ainsi obtenue et on l'agite et la refroidit à 5 C.
On règle le pH entre 8,0 et 8,6 en ajoutant du HOl 6N et on le maintient à ce niveau tout en ajoutant rapide- ment une solution de 3,0 g (6,9 millimoles) de 6-(ortho-
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nitophénoxyacétamido)pénicil1anate' de potassium (ortho- nitropénicilline V potassique) dans 30 ml d'eau (pendant 1 à 3 minutes), Il se produit un dégagement de gaz impor- tant et la ,température monte spontanément jusqu'à 12 C.
On agite alors le mélange à froid pendant 15 minutes, On ajoute 100 ml de méthyl isobutyl cétone (MIBC), et on abaisse le pH jusqu'à 2,0 en ajoutant du HC1 6N, On enlève le catalyseur par filtration à travers un papier-filtre durci et on extrait la couche aqueuse à deux reprises avec au total 150 ml de MIBC, On combine les solutions aqueuses de MIBC et on les laisse reposer à la température
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ambiante pendant deux heures environ. Un solide cristallin. commence à se séparer. On refroidit la suspension dans un bain glace et on la filtre.
On lave minutieusement le gâ- teau critstllins avec de la MIBC et des alcanes inférieurs (Skellysolve B; au cours des derniers essais, on a uti- lisa la MIBC et l'acétone), et on le sèche dans une 6tuve à vide à 40 C;} il pèse 0,43 g et présente un point de fusion compris entre 195,9 ot 198,5 C avec décomposition (corrige) ; le pouvoir chimique (par rapport à l'aoide 6-amincpénicillanique) est de 980 microgrammes/mg. Le chromatogramme en couche mince et le spectre d'absorption des rayons infrarouges de ce solide de couleur marron clair sont identiques à ceux de l'acide 6-aminopénicillanique authentique. Le rendement est de 29 %.