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-Nouveaux GOMPO$68t notamment pour 14 traitement <!## tro-ables de la ooagulabilité aiinguineu.
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La présente invention a pour objet de nouveaux compo-
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née@ les -(eultobanzatl,j lf-désulto héparines et leur@ sels de
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métaux alcalins utilisables notamment pour le traitement due
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troubles de la coagulabilité sanguine. Les 1I'-C.ultobenzo;yl) J-dé8ulto héparine* répondent à la formule générale t
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dans laquelle R représente de l'hydrogène eu un atome de métal
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alcalin. Rai, R2# R3 et R4 représentent simultanément ou die- tinoüement un atome d'hydrogène ou un groupe 8ton1que libre ou salifia, étant exclu R1 . B2 m R3 a E4 0 hydrogène.
On connaît déjà don dérivés N-acylée de la N-déeulfo- héparine, télé que la 11-bonzoyl l-<1é8111to héparine, la N-p- nitro benzoyl N-déeulfa héparine, la X-3e5-diméthylbonzoyl N- désulto héparine, etc., décrits dans le brevet belge N 580.372
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possédant une acti-anticoagulante minime.
D'autre part, on sait également que la transormation de la N-désulfo héparine en urée substituée conduit comme décrit dans le brevet belge N 590.816 à des composée, télé que la
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n-butyl héparylurée, la phényl héparylurée ou la a-naphtyl hé parylurée, dotée d'une activité anticoagulante peu prononcée.
Il a été trouvé maintenant que le* N(eulfabenoyl N.bdésuli'o héparines et leurs sels alcaline, objet de l'invention, possèdent une activité anticoagulante nette et plue particuliè-
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rement une action anticoagulante prolongée, pouvant ne mgnit'ee ter pendant 6 à 10 heures après le moment d'administration
Le procédé de préparation de ces composée, qui fait également l'objet de l'invention, est caractérisé essentielle-
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ment en ce que l'on transforme la 1-déaulfo héparine en un sel d'ammonium quaternaire à longue chaîne de carbonée, fait réagir sur ce sel d'ammonium quaternaire l'anhydride ou un anhydride mixte d'un acide benzoïque mono- ou dieulfoné, et transforme
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finalement, le cas échéant,
l'amide résultant en sel d'un métal alcalin par action d'un acylate inférieur de métal alcalin.
Le schéma suivant résume les réactions
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de
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8)Sel d'ammonium qua- anhydt1/ d'acide amine N(aulfobensoy1) ternaire de la N- + benzoïque sulfone TTIIlt-i dé3ulfo héparine terti.ai- dcSsulto hcSparino re N..désulfo- hdparine 3) N.5ulfobanzoyl) acylate inférieur N-(Bulfobenzoy1) N-ddsulfo héparine alcalin N-désulfo héparine sel de métal alcalin
Dans ses modes d'exéoution, le procédé de préparation des N-(sulfobenzoyl) N-déaulfo héparines peut être caractérisé par les points suivante..
- Les solo d'ammonium quaternaires convenant particulièrement pour la préparation des sels d'ammonium quaternaires de la N- déaulfo héparine sont de préférenoe l'hyamine 2389 qui est un mélange de chlorures d'alcoyl tolyl méthyl triméthylammonium, l'Arquad 2C ou chlorure d'alcoyl dilauryl diméthylammonium et
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notamment l'hyamine 16'<'2 ou chlorure de di-isobutyl-phénoxy- éthoxy-6thyl-di mé thyl-1)enzylammonium;
- l'anhydride ou l'anhydride mixte d'un aoide benzoïque mono- ou disulfoné que l'on fait réagir sur le sel d'ammonium quater
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naire de la N-désulto héparine cet de préférence 1'Anehydride o-sulfobenzoïque, l'anhydride d'acide 2, 4-disulfobenzoïque, l'anhydride mixte de l'acide 3,5-disulfobenzoxque et de l'acide formique, ou l'anhydride mixte de l'acide m-aulfobonzoïque et de l'acide formique ; - l'aoylate inférieur d'un métal alcalin que l'on emploie pour
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l'obtention de sole alcaline de N-(8ultobenzoyl) N-déeulfo hé. parinea est de préférence l'acétate de sodium.
Les exemples suivante illustrent l'invention sana tout- tefois la limiter.
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Exemple l - Préparation du sel de sodium de la N- l2-sulfobenzoyl) N-désulfo héparine On introduit 9,07 g de N-dbeulfa héparine dans 50 om3 d'eau, puis ajoute 250cm3 d'une solution aqueuse à 10% d 'Hya- mine 1622, homogénéise le précipité formé, laisse au repos pen- dant une heure environ, essore et lave à l'eau. On obtient 28,5 g de sel d'Hyamine de N-désulto héparine que l'on emploie tel quel pour le stade suivant de la synthèse. On introduit, sous agitation, 3 g de composé ci-dessus dans 60 om3 de tétra- hydrofuran et agite jusqu'à dissolution. Puis, on ajoute suc- oessivement, et sous agitation, 3 om3 de triéthylamine et 1,5 g
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d'anhydride o-sulfobenzoïque. On continue l'agitation pendant quinze heures à température ambiante.
On évapore ensuite à sec
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sous vide, reprend le résidu par 30 em3 de n-butanol aqueux, extrait la solution n-butanolique à plusieurs reprises par une solution d'acétate de sodium à 20 %, filtre les extraits réunis, verse le filtrat dans le méthanol, laisse au repos pendant une heure environ, essore le précipité formé, le lave au méthanol et sèche. On obtient 1,047 g de sel de sodium de la N-(2-sul-
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fobenzoyl) N-désulfo héparine.
Spectre U.Ve 1 (acide ohlorhydrique N/10) absorption à 266 et 272 Mp correspondant à 1,3 - 1,4.10"3 molécule. d'acide o-eul-
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tobonzo±que par molécule, Ce produit ont soluble dans l'eau, insoluble dana l'alcool, l'éther, l'acétone, le benzène et le chloroforme, les acides diluéa aqueux l'hydrolysent. Les alcalis diluée aqueux le dégradent.
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Analyse 1 p?6H??07T4g11a15n .. (2 976,12)n calculé , S% 11,85 Trouvé 11,4 ,
Ce composé n'est pas décrit dans la littérature,
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Activité anticoagulante j a ,6w 5 ,+, 1, 5 UA5P/ag.
Exemple II 1 1)réparation- du Bel de sodium de la (2.4-disulfobenzoyl) N-d<eulfo héparine On dissout 17,88 g de sol de potassium de N-désulto héparine dans 100 om3 d'eau, puis ajoute 500 cm3 d'une solution
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aqueuse d'Hyamine 1622 à 10y, homogénéisé le mélange réactionnel, laisse au repos pendant une à deux heurte environ, eaeore le précipite, le lave à l'eau et sèche nous vide. On obtient 56 g
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de sel d'Hyamine de N-désulto héparine cl).
D'autre part, on prépare le sel d'Hyamine d'anhydride d'acide 2,4-âisulfobenzoïque (B), On dissout 70 g de sol de sodium d'acide 2,4-disulfobenzoïque dans 700 om3 d'eau et 70 a 3 d'acide formique, Puis on ajoute 1 550 cm3 d'une solution aqueu
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ae d'Hyamine à 10%, extrait à plusieurs reprises par le chlorure de méthylène, réunit les extraite, les évapore, chante l'eau par entraînement avec le benzène, reprend le résidu sec par 700 cm3 de trichloréthylène, porte au reflux jusqu'à dissolution laisse refroidir vers 50-60 C et introduit noue agitation 105 om3 de chlorure de thionyle.
On continue l'agitation pendant
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deux heures environ à une température située entre 75 1 80.0, distille au commencement sous pression normale, puis se de
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jusqutà ce qu'il n'y reste que des traces de ahlo 3 thio- nyle. On reprend ensuite le résidu par 700 cl) de t" 1dro-
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furan, traite la solution au noir animal, filtre et obtient la solution tétrahydrofuranique du sel d'Hyamine de l'anhydride
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d'acide 2,4-dieultobenzotque (B), que l'on emploie tel quel pour le stade suivant de la synthèse*
On introduit sous agitation 49 g de sel d'Hyamine 1622
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de N-désulfo héparine (A) dans 1 000 om3 de tétrahydrofuran puis ajoute,
après dissolution à température ambiante la solu- tion B préparée comme décrit précédemment et soumet le mélange réactionnel à l'agitation pendant dix-sept heures environ à tem- pérature ambiante. On évapore ensuite à sec nous vide, sans dé-
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passer 50pCx reprend le résidu par 500 cm 3 de n-butanol aqueux, extrait à plusieurs reprises par une solution aqueuse d'aoétate de sodium à 20%, réunit les extraits, les filtre,. ajoute 750em3 de méthanol et laisse au repos une heure à deux heures environ,
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puis filtre le précipité formé, le lave successivement au.méthd- nol et à l'éther, sèche et obtient le sel de sodium de la 1- (2,4-diau7.fabenzoyl) Ndésulto héparine brute.
On purifie oe produit par passage d'une solution aqueuse de celui-ci sur une résine éohangeuse d'anions fortement basique telle que celle possédant une structure fonctionnelle d'ammonium quaternaire.
On passe, sur la résine, la totalité de la solution aqueuse préparée ci-dessus mais ne recueille que la fraction donnant un test positif de précipitation à l'Hyamine, rince la colonne à l'eau distillée, réunit les éluats, les traite au noir animal, filtre, neutralise le filtrat par addition d'acide acé- tique, puis ajuste le pH à 7,8 par la lessive de soude, préoipi- te par addition de méthanol, sépare le précipité, l'essore, le lave successivement au méthanol et à l'éther, le sèche et ob-
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tient 16,7 g de sel de sodium de la N.(2,4-dieultabenzoyl)â désulto héparine, Teneur en soufre 8 12,65% (théorie ; 14,18%).
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Spectre tJ Vf 1 (en solution dans 01H tf/10) max. 221 au B II . 107 max, 263 1 ]Jn 11,2 max. 270 mu B ]ffi 12,4 max. 277 m E m . 11,1 Activité anticoagulants 66,2 UAT/mg Le produit est soluble dans l'eau, 1n801.81. 4aa8 à alcool, l'éther, l'acétone, le benzène et le chlorotorM..
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Ce composé n'est pas décrit dans la littérature.
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Exemple III 1 Préparation de la N. 3,a,3.P N.déeulio héparine {..1 d<e â.n3, a) Préparation de l'anhydride mixte de l'acide u19-.
ZOrQUe .
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Dans une fiole conique de 500 sm3, on d.laea.1 3,175 zig
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de 3, 5-dlsuliobenzoate de potassium dans 50 om3 d'ma &lwrtill6<< Le pH de la solution est ajusté à 10 par addition 4* p1 b On ajoute alors 160 om3 d'une solution a 10% 'asnime 1622. Le sel d'Hyamine de l'acide 3, 5-dïemlfo'ha' précipite. -On Il* recueille par filtration, puis l'épuisé à 2 a"e:px'iw!ew par XEom3 de chlorure de méthylène. La solution orgaalaîia e 3.<n l'eau puis séchée sur sulfate de sodium et êvee=40 itt<-<!< L'extrait sec est rediesous dans 30 ON3 de tëo la solution est transvasée dans un ballon à trois tabulur -et xqlm- froidie entre 0 et + 5"0 sous agitation et au= atmowphèfe d a-. zote. On ajuste le pH à 10 par addition de z1 ea wtac 63r1 amine puis ajoute 4,?5 om3 de ohloroformiate dlétlwle. Ou bzz tient l'agitation en atmosphère d'azote.
Au fctmt dre qu:Lu mi- nutea, on ajoute 1, 5 am3 d'une solution de fBfadat 4 trîithyl-e
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amine à 1096 dans le tétrahydrofuraa qui 4écctitp'&" 1" tt h3.ro'ormiata d'éthyle. On obtient ainsi 1m8 B3L<rton d tan- hydride mixte de l'acide â 5ieul.b.e.
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'b) Préparation de la ïfi- -di.euxtobenta 1 lrx3drtt.t bdp
On ajoute à la solution d'anhydride mixte préparée selon a) la solution suivante @
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N-déaulfo héparinate d' Hyamine 1622 ............. . 2 g Tétrahydrofuran ..................................... 30 cl) Triéthylamine .e.sws*.r..m.w..es.s...w.r*s..1 0,' OR3
On agite ensuite sous barbotage d'azote. La solution est ensuite évaporée à sec sous vide. On obtient la N-(3,5- dieulfobenzoyl) N-désulto héparine sous forme d'un résidu a- morphe.
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0) Préparation du sel de sodium de la 1.. -ddeulPobenzo 1
N-désulfo héparine.
Le résidu obtenu selon b) est dissous dans 30 cm3 de butanol saturé d'eau. On épuise cette solution à trois repri- ses avec 5 cm3 d'une solution aqueuse à 20 % d'acétate de sodium.
La solution aqueuse est filtrée puis versée dans 100 cm 3 de mé-
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thanol. Le sel de sodium de la N-(3,5-dieulfobenzoyl) N-désulto héparine précipite. On le recueille par filtration, l'essore, le lave par du méthanol à 20% d'eau et le sèche, On obtient ainsi 0,5 à 0,55 g de sel de sodium, soit un rendement de 55 à 60%. Le produit a été obtenu avec un taux d'acidification vari- ant entre 82 et 95%.
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Speotre U.Vo$ (acide ealohydrique H/10) inflexions à 270 et 230 mu environ.
Activité anticoagulante : 31 # 3 UAT/ag.
Le spectre U.V. indique la présence de 0,97 à 1,13.
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10¯ mol. d'acide 3, 5-disulfobenzoïqut par gramme de produit (théorie: t 1,1$. 103'g).
Ce composé n'est pas décrit dans la littérature.
Exemple IV 1 Fr épara tion du 1-- -atx torbews N.-déaulPo héparine (sel de sodium) a) Préparation du m..eulfobenxoata d'Hyamibe 1622
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Mana un erlenmeyer de 300 cm3, on introduit successif
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vement 5t2 de lZ1-eulfocenzoate de sodium, 125 om3 d'eau distil- lée et 2 5 om3 de lessive de soude. Le ae-eulo'banxoate de so- dium se dissout rapidement. On obtient une solution alcaline de pH voisin de 10. On ajoute alors 220 om3 d'une solution aqueuse
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à l4yG d'Hyamine 1622.
Le m..sultobenzoate d'Hyamine 1622 préci- pite, Le précipité amorphe séparé par filtration est épuisé à deux reprises par 100 cm3 de chlorure de méthylène, La solution organique est lavée à l'eau, séché@ sur sulfate de sodium et é- sec
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vaporée à sec z la pression atmosphérique* Le résidu/ de sel d'Hyamine 1622 est rediasous dans 50 ce 3 environ de tétrahydro ran. Après complète di8s01ution, on amène au volume exact de 100 o<a3 avec du tétrahydrofuran. b) Préparation de l'anhydride mixte.
Dans un ballon à trois tubulures, on introduit 50 cm3
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de la solution tétrahydrofur&nique de a-oulfobenzoate d'Hyamine 1622 préparée selon a). On refroidit à 5 C # 1 vous agitation et sous atmosphère d'azote. On ajuste le pH de la solution à
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10 avec de la tr1éthylaine puis on introduit 1 oal3 de ohloro-
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formiate d'éthyle redirt.llé. La température du milieu monte légèrement puis revient à 5 C. On maintient alors trente minu- tée à cette température. On ajoute ensuite 3 cm3 d'une solution
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de formiate de triêthylemine â z6 dans le tétrahydrofuran.
On obtient ainsi une solution d'anhydide mixte de l'acide m-eultobenzotque.
0) réparation du N-(3-aulfobenzoyl) N-désulfo héparine sel de sodium).
On ajoute 4 la solution d'anhydride mixte de l'acide m-aulfobenzoïque 30 cm3 d'une solution tétrahydrofuranique à 10% de N-désultohéparinate d'Hyamine 1622. On rince le récipient
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ayant contenu le N-désulfohéparinate d'Hyamine 1622 par 10 am3 de tétrahydro furan. On agite le mélange pendant une heure à
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+ 5 C sous atmosphère d'azote. Le mélange réactionnel ont en-
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suite évaporé à nec sous vide. Le résidu amorphe est redinsoue dans 50 am3 de butanol saturé d'eau. La solution de I-(m-sulto- benzoyl) N-désulfo héparine est alors épuisée par 10 cm3, 10 om3 et enfin 5 cm3 d'une solution aqueuse 4 20% d'acétate de sodium.
La phase aqueuse décanté* est filtrée et versée dans 100 cm3 de méthanol. Le précipita de sel de sodium est enfin sépare par filtration, essoré, lavé et séché. On obtient ainsi 1,05 g de
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N-(3'-aulfob<tnzoyl) N-déeulfdhéparine (sel de sodium), soit un rendement da 75* Teneur en -tü2 !, 49C (exprimé en N-désultobéparint) S 11,5%(théorie : 11,88)
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Spectre U.V. (acide chlorhydrique If/10) inflexions vers 230 e si% - 79, 5 vers 270 mu 31% m 6t6 Cette absorption correspond à 1,06. 10"' molli d'acide m-aulfobenzoque (théorie 1 1 35.i1"3j Le taux d'amidit1oation eet donc de l'ordre de 80%.
Activité anticoagulante : 29 UAT mg.
Ce composé n'est pas décrit dans la littérature.
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Ainsi qu'il a été indiqué plus haut, les N-(eulfobon- zoyl) N-désulto héparinea peuvent être utilisées pour le trai- tement des thromboses, des thrombophlébites, des embolie., des menaces d'infarctus pulmonaire ou cardiaque, des artérites, de
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l'angine de poitrine, des troubles trophiques poat-phebitiquee.
Elles possèdent notamment l'avantage sur l'héparine d'exercer une action prolongée qui évite les injections intra- veineuses répétées ou les perfusions veineuses continuée repré- sentant des doses d'héparine très élevées, Elles possèdent, en outre, l'avantage sur les anticoagulante dérivée de la dioouma- rine d'agir aveo rapidité et pendant un délai bien déterminé
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alors que les dérivés de la diooualarine qui inhibent la synthèse
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de la thrombine dans le foie (antagonistes de la vitamine K) sont d'une action tardive maie dont la durée ne peut tire prévue avec certitude*
Enfin, poufautant qu'on le esche, 1'action des N-
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(sulfobenzoyl)
N-déeili'o héparines se manifeste sur tous le@ stades de la coagulation, ce qui rend leur action plus ogre et moins dangereuse pour l'organisme.
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Les N-(sulobenzoyl) N-déaulfo héparines sont admi- nistrées par voie intraveineuse. Elles n'agissent pas par voie bubale.
La posologie utile s'échelonne entre 400 mg et 2 g par jour chez l'adulte en fonction de la voie d'administration.
Action retard par voie intraveineuse
Cette action a été étudiée chez le lapin. Elle a été mesurée en déterminant le tempe de ooagulation à intervalles régulière (2, 4, 6, 8, 10h après l'injection intraveineuse du composé étudié). Les composés ont été administrée aux doses de 10 mg/kg et de 20 mg/kg,, Les résultats suivants ont été ob- tenus :
Activité coagulante
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<tb> composé <SEP> 10 <SEP> mg <SEP> kg <SEP> 20 <SEP> mg/kg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> administré <SEP> Nombre <SEP> Durée <SEP> Nombre <SEP> Durée
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> d' <SEP> ui <SEP> /kg <SEP> d'action <SEP> d'UI <SEP> kg <SEP> d'action
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Héparine <SEP> 1 <SEP> 350 <SEP> 4 <SEP> h <SEP> 2 <SEP> 700 <SEP> 6-7 <SEP> h
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> N- <SEP> (2-sulfobenzoyl) <SEP> 340 <SEP> 6 <SEP> h <SEP> 680 <SEP> 9 <SEP> h
<tb>
<tb>
<tb> désulfo <SEP> héparine
<tb>
<tb>
<tb> N-(3-sulfobenzoyl) <SEP> 3 <SEP> h
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> désulfo <SEP> héparine
<tb>
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N(3,5-dieulfobenzoyïy déaulfo héparine h 3 h N.-(2,4-diaulfobenzoyl)
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<tb> désulfo <SEP> héparine <SEP> 220 <SEP> 6-7 <SEP> h <SEP> 440 <SEP> 9-10 <SEP> h
<tb>
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Ainsi qu'il ressort de ce tableau, les N-(eulfobon.
<Desc/Clms Page number 12>
zoyl) M-désulfo héparines possèdent une action anticoagulante prolongés à des douez anticoagulante* (exprimées en Unités Internationales) infiniment plue faibles que celles d'héparine nécessaires pour obtenir un effet du même ordre.
REVENDICATIONS
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T.- Les N.(eultobonzoyl) N-désulfo héparines et leurs sels de métaux alcaline de formule générale :
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dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou de métal
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alcalin, Rit R29 R3 et Ft représentent simultanément ou distinctement un atome d'hydrogène ou le groupe eulï'or,que li- bre ou salifié, étant exclu H. m R2 a Rq " R4 . hydrogène 20- La N-(2-sulfobenzoyl) N-déeulfo héparine et son sol de sodium.
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3"-' La N-(2o4-dieultobanzoyl) N..ddsulto héparine et non fiel de sodium.
EMI12.5
4 La N-(3,5-disulfobenzoyl) N-dénulfo héparine et non sel de sodium 50- La N-(3-sulfobenzoyl) N.-déau3.o héparine et non sol de sodium.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.
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-New GOMPO $ 68t in particular for 14 <! ## tro-ables treatment of aiinguineu ooagulability.
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The present invention relates to new compounds
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née @ les - (eultobanzatl, j lf-desulto heparins and their @ salts of
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alkali metals usable in particular for the treatment due
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blood coagulability disorders. The 1I'-C.ultobenzo; yl) J-dés8ulto heparin * correspond to the general formula t
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in which R represents hydrogen or a metal atom
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alkaline. R1, R2 # R3 and R4 simultaneously or automatically represent a hydrogen atom or a free or salify group, being excluded R1. B2 m R3 has E40 hydrogen.
We already know don N-acylated derivatives of N-deeulfo-heparin, such as 11-bonzoyl l- <1é8111to heparin, Np-nitro benzoyl N-deeulfa heparin, X-3e5-dimethylbonzoyl N-desulto heparin, etc. ., described in Belgian patent N 580.372
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possessing minimal anticoagulant activity.
On the other hand, it is also known that the transformation of N-desulfoheparin into substituted urea leads, as described in Belgian patent N 590,816 to compounds, such as
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n-butyl heparylurea, phenyl heparylurea, or α-naphthyl heparylurea, which has low anticoagulant activity.
It has now been found that * N (eulfabenoyl N.bdesuli'o heparins and their alkaline salts, object of the invention, have a clear and more particular anticoagulant activity.
EMI2.5
a prolonged anticoagulant action, which may not increase for 6 to 10 hours after the time of administration
The process for the preparation of these compounds, which is also the subject of the invention, is characterized essentially-
EMI2.6
ment in that the 1-deaulfo heparin is converted into a quaternary ammonium salt with a long carbon chain, reacts with this quaternary ammonium salt the anhydride or a mixed anhydride of a mono- or benzoic acid. dieulfoné, and transforms
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finally, if applicable,
the resulting amide in an alkali metal salt by the action of a lower alkali metal acylate.
The following diagram summarizes the reactions
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of
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8) Ammonium salt qua- anhydt1 / ternary N (aulfobensoy1) amino acid of N- + benzoic sulfone TTIIlt-i de3ulfo heparin terti.ai- dcSsulto hcSparino re N..desulfo- hdparine 3) N.5ulfobanzoyl) lower acylate N- (Bulfobenzoy1) N-ddsulfo alkali heparin N-desulfo heparin alkali metal salt
In its modes of execution, the process for preparing N- (sulfobenzoyl) N-deaulfo heparins can be characterized by the following points.
- The quaternary ammonium solos particularly suitable for the preparation of quaternary ammonium salts of N-deaulfo heparin are preferably hyamine 2389 which is a mixture of alkyl tolyl methyl trimethylammonium chlorides, Arquad 2C or chloride alkyl dilauryl dimethylammonium and
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in particular 16 '<' 2 hyamine or di-isobutyl-phenoxy-ethoxy-6yl-diethyl-1) enzylammonium chloride;
- the anhydride or mixed anhydride of a mono- or disulfonated benzoic acid which is reacted with the ammonium salt quater
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preferably O-sulfobenzoic anhydride, 2,4-disulfobenzoic acid anhydride, mixed anhydride of 3,5-disulfobenzoic acid and formic acid, or the mixed anhydride of m-aulfobonzoic acid and formic acid; - the lower aoylate of an alkali metal which is used for
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obtaining alkaline sole of N- (8ultobenzoyl) N-deeulfo hey. parinea is preferably sodium acetate.
The following examples illustrate the invention without, however, limiting it.
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Example 1 - Preparation of the sodium salt of N-l2-sulfobenzoyl) N-desulfo heparin 9.07 g of N-dbeulfa heparin are introduced into 50 ounces of water, then 250 cm3 of an aqueous solution at 10% d are added. 'Hya- mine 1622, homogenizes the precipitate formed, leaves to stand for about an hour, filtered off and washed with water. 28.5 g of N-desulto-heparin hyamine salt are obtained, which salt is used as it is for the following stage of the synthesis. 3 g of the above compound are introduced, with stirring, into 60 om3 of tetrahydrofuran and stirred until dissolved. Then, one adds successively, and with stirring, 3 om3 of triethylamine and 1.5 g
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o-sulfobenzoic anhydride. Stirring is continued for fifteen hours at room temperature.
Then evaporated to dryness
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under vacuum, the residue is taken up in 30 em3 of aqueous n-butanol, the n-butanol solution is extracted several times with a 20% solution of sodium acetate, filters the combined extracts, pours the filtrate into methanol, leaves in stand for about an hour, filter the precipitate formed, wash it with methanol and dry. 1.047 g of sodium salt of N- (2-sul-
EMI4.6
fobenzoyl) N-desulfo heparin.
U.Ve 1 spectrum (hydrochloric acid N / 10) absorption at 266 and 272 Mp corresponding to 1.3 - 1.4.10 "3 molecule of o-eul- acid
<Desc / Clms Page number 5>
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tobonzo ± only per molecule, This product is soluble in water, insoluble in alcohol, ether, acetone, benzene and chloroform, dilute aqueous acids hydrolyze it. The dilute aqueous alkalis degrade it.
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Analysis 1 p? 6H ?? 07T4g11a15n .. (2,976.12) n calculated, S% 11.85 Found 11.4,
This compound is not described in the literature,
EMI5.3
Anticoagulant activity j a, 6w 5, +, 1, 5 UA5P / ag.
Example II 1 1) repair of sodium Bel of (2.4-disulfobenzoyl) Nd <eulfo heparin 17.88 g of potassium sol of N-desulto heparin are dissolved in 100 om3 of water, then 500 cm3 of water are added. a solution
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aqueous Hyamine 1622 to 10y, the reaction mixture homogenized, left to stand for about one to two hours, precipitated, washed with water and dried, empty. We obtain 56 g
EMI5.5
N-desulto-heparin Hyamine salt (cl).
On the other hand, the Hyamine salt of 2,4-Aisulfobenzoic acid anhydride (B) is prepared, 70 g of sodium sol of 2,4-disulfobenzoic acid are dissolved in 700 om3 of water and 70 to 3 of formic acid, then add 1550 cm3 of an aqueous solution
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ae of Hyamine at 10%, extracted several times with methylene chloride, combines the extracted, evaporates them, sings the water by entrainment with benzene, takes up the dry residue in 700 cm3 of trichlorethylene, refluxed until when dissolved, allowed to cool to 50-60 C and introduced stirring 105 om3 of thionyl chloride.
We continue the agitation for
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approximately two hours at a temperature between 75 1 80.0, initially distilled under normal pressure, then
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until only traces of ahlo 3 thionyl remain. The residue is then taken up in 700 cl) of t "1dro-
<Desc / Clms Page number 6>
furan, treats the solution with animal charcoal, filters and obtains the tetrahydrofuranic solution of the hyamine salt of the anhydride
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2,4-dieultobenzotque acid (B), which is used as is for the next stage of the synthesis *
49 g of Hyamine 1622 salt are introduced with stirring
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of N-desulfoheparin (A) in 1000 om3 of tetrahydrofuran then add,
after dissolving at room temperature, solution B prepared as described above and subjecting the reaction mixture to stirring for about seventeen hours at room temperature. We then evaporate to dryness empty, without de-
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passing 50 μCx takes up the residue in 500 cm 3 of aqueous n-butanol, extracted several times with an aqueous solution of 20% sodium aoetate, combines the extracts, filters them ,. add 750em3 of methanol and leave to stand for about one hour to two hours,
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then filters the precipitate formed, washed successively with methdnol and ether, dried and the sodium salt of crude 1- (2,4-diau7.fabenzoyl) Ndesulto heparin is obtained.
The product is purified by passing an aqueous solution thereof over a strongly basic anion exchange resin such as that having a functional structure of quaternary ammonium.
All of the aqueous solution prepared above is passed over the resin, but only the fraction giving a positive hyamine precipitation test is collected, the column is rinsed with distilled water, the eluates are combined and treated with animal black, filter, neutralize the filtrate by adding acetic acid, then adjust the pH to 7.8 with sodium hydroxide solution, preoipitate by adding methanol, separate the precipitate, drain and wash it successively with methanol and ether, dry and ob-
EMI6.5
Holds 16.7 g of desultoheparin N (2,4-dieultabenzoyl) sodium salt, Sulfur content 8 12.65% (theory; 14.18%).
<Desc / Clms Page number 7>
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Spectrum tJ Vf 1 (in solution in 01H tf / 10) max. 221 to B II. 107 max, 263 1] Jn 11.2 max. 270 mu B] ffi 12.4 max. 277 m E m. 11.1 Anticoagulant activity 66.2 ATU / mg The product is soluble in water, 1n801.81. 4aa8 to alcohol, ether, acetone, benzene and chlorotorM ..
EMI7.2
This compound is not described in the literature.
EMI7.3
Example III 1 Preparation of N. 3, a, 3.P N.déeulio heparin {..1 d <e â.n3, a) Preparation of the mixed anhydride of u19- acid.
ZOrQUe.
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In a conical flask of 500 sm3, we d.laea.1 3.175 zig
EMI7.5
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of potassium 3, 5-dlsuliobenzoate in 50 om3 of ma & lwrtill6 << The pH of the solution is adjusted to 10 by addition of 4 * p1 b 160 om3 of a 10% solution of asnim 1622 are then added. Hyamine from 3, 5-emlfo'ha 'acid precipitates. - It * collects by filtration, then exhausted to 2 a "e: px'iw! Ew by XEom3 of methylene chloride. The solution orgaalaîia e 3. <n water then dried over sodium sulphate and evee = 40 itt <- <! <The dry extract is rediesous in 30 ON3 of teo the solution is transferred to a three tabular flask -and xqlm- cold between 0 and + 5 "0 with stirring and at = atmowphèfe d a-. zote. The pH is adjusted to 10 by adding z1 ea wtac 63r1 amine and then 4.5 om3 of dlétlwle ohloroformate is added. Or bzz holds the agitation in a nitrogen atmosphere.
To the fctmt dre qu: Lu minutea, one adds 1.5 am3 of a solution of fBfadat 4 trithyl
EMI7.7
amine at 1096 in tetrahydrofuraa which 4écctitp '& "1" tt h3.ro'ormiata ethyl. In this way 1m8 B3L <rton of mixed tanhydride of the 5ieul.b.e acid is obtained.
<Desc / Clms Page number 8>
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'b) Preparation of the ïfi- -di.euxtobenta 1 lrx3drtt.t bdp
The following solution is added to the mixed anhydride solution prepared according to a) @
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Hyamine 1622 N-deaulfo heparinate .............. 2 g Tetrahydrofuran ..................................... 30 cl) Triethylamine .e.sws *. r..mw.es.s ... wr * s..1 0, 'OR3
Then stirred under nitrogen bubbling. The solution is then evaporated to dryness under vacuum. N- (3,5-dieulfobenzoyl) N-desulto heparin is obtained as an morphine residue.
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0) Preparation of the sodium salt of 1 .. -ddeulPobenzo 1
N-desulfo heparin.
The residue obtained according to b) is dissolved in 30 cm3 of butanol saturated with water. This three-part solution is made up with 5 cc of a 20% aqueous solution of sodium acetate.
The aqueous solution is filtered and then poured into 100 cm 3 of m-
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thanol. The sodium salt of N- (3,5-dieulfobenzoyl) N-desulto heparin precipitates. It is collected by filtration, drained, washed with methanol at 20% water and dried. In this way 0.5 to 0.55 g of sodium salt is obtained, ie a yield of 55 to 60%. The product was obtained with an acidification rate varying between 82 and 95%.
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Speotre U.Vo $ (ealohydric acid H / 10) inflections at 270 and 230 mu approximately.
Anticoagulant activity: 31 # 3 UAT / ag.
The U.V. spectrum indicates the presence of 0.97 to 1.13.
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10¯ mol. of 3, 5-disulfobenzoic acid per gram of product (theory: t 1.1 $. 103 g).
This compound is not described in the literature.
Example IV 1 Preparation of 1-- -atx torbews N.-déaulPo heparin (sodium salt) a) Preparation of m..eulfobenxoata from Hyamibe 1622
<Desc / Clms Page number 9>
Mana a 300 cm3 Erlenmeyer flask, successive
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Add 5t2 of sodium lZ1-eulfocenzoate, 125 om3 of distilled water and 25 om3 of sodium hydroxide solution. Sodium ae-eulo'banxoate dissolves rapidly. An alkaline solution is obtained with a pH close to 10. 220 om3 of an aqueous solution are then added.
EMI9.2
at 14g of Hyamine 1622.
Hyamine 1622 m..sultobenzoate precipitates. The amorphous precipitate separated by filtration is depleted twice with 100 cm3 of methylene chloride, The organic solution is washed with water, dried over sodium sulphate and dried. - dry
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vaporized to dryness at atmospheric pressure * The residue / salt of Hyamine 1622 is dissolved in about 50 cc of tetrahydro ran. After complete di8s01ution, the volume is brought to the exact volume of 100 o <a3 with tetrahydrofuran. b) Preparation of the mixed anhydride.
50 cm3 is introduced into a three-nozzle flask
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of the tetrahydrofur & nique solution of a-oulfobenzoate of Hyamine 1622 prepared according to a). Cooled to 5 ° C. with stirring and under a nitrogen atmosphere. The pH of the solution is adjusted to
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10 with tr1ethylaine then introduced 1 oal3 of ohloro-
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redirt.llé ethyl formate. The temperature of the medium rises slightly then returns to 5 C. The temperature is then maintained for thirty minutes. Then add 3 cm3 of a solution
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of z6 triethylemine formate in tetrahydrofuran.
This gives a mixed anhydide solution of m-eultobenzotque acid.
0) repair of N- (3-aulfobenzoyl) N-desulfo heparin sodium salt).
The mixed anhydride solution of m-aulfobenzoic acid 30 cm3 of a 10% tetrahydrofuran solution of Hyamine N-desultheparinate 1622 is added. The container is rinsed.
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containing the N-desulfoheparin of Hyamine 1622 per 10 am3 of tetrahydro furan. The mixture is stirred for one hour at
<Desc / Clms Page number 10>
+ 5 C under a nitrogen atmosphere. The reaction mixture has in-
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then evaporated to nec under vacuum. The amorphous residue is redistributed in 50 am3 of water-saturated butanol. The solution of I- (m-sultobenzoyl) N-desulfoheparin is then exhausted with 10 cm3, 10 om3 and finally 5 cm3 of a 20% aqueous solution of sodium acetate.
The decanted aqueous phase * is filtered and poured into 100 cm3 of methanol. The precipitate of sodium salt is finally separated by filtration, drained, washed and dried. This gives 1.05 g of
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N- (3'-aulfob <tnzoyl) N-deeulfdhparin (sodium salt), i.e. a yield of 75 * -tü2! Content, 49C (expressed as N-desultobeparint) S 11.5% (theory: 11.88 )
EMI10.3
U.V. spectrum (hydrochloric acid If / 10) inflections towards 230 e if% - 79.5 towards 270 mu 31% m 6t6 This absorption corresponds to 1.06. 10 "'moli of m-aulfobenzoque acid (theory 1135.i1" 3j The rate of amidit1oation eet therefore of the order of 80%.
Anticoagulant activity: 29 UAT mg.
This compound is not described in the literature.
EMI10.4
As indicated above, N- (eulfobon-zoyl) N-desulto heparinea can be used for the treatment of thrombosis, thrombophlebitis, embolism, threats of pulmonary or cardiac infarction, arteritis
EMI10.5
angina pectoris, poat-phebitic trophic disorders.
They have in particular the advantage over heparin of exerting a prolonged action which avoids repeated intravenous injections or continuous venous infusions representing very high doses of heparin. They also have the advantage over the anticoagulants derived from dioouma- rine to act quickly and for a well-defined period
EMI10.6
while diooualarin derivatives which inhibit the synthesis
<Desc / Clms Page number 11>
thrombin in the liver (vitamin K antagonists) are late-acting but the duration cannot be predicted with certainty *
Finally, as long as it is baited, the action of the N-
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(sulfobenzoyl)
N-deili'o heparins are manifested in all stages of coagulation, which makes their action more ogre and less dangerous for the organism.
EMI11.2
The N- (sulobenzoyl) N-deaulfo heparins are administered intravenously. They do not act by the bubal route.
The useful dosage ranges between 400 mg and 2 g per day in adults depending on the route of administration.
Intravenous delayed action
This action has been studied in rabbits. It was measured by determining the ooagulation temple at regular intervals (2, 4, 6, 8, 10 h after the intravenous injection of the compound studied). The compounds were administered at doses of 10 mg / kg and 20 mg / kg, The following results were obtained:
Coagulant activity
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<tb> compound <SEP> 10 <SEP> mg <SEP> kg <SEP> 20 <SEP> mg / kg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> administered <SEP> Number <SEP> Duration <SEP> Number <SEP> Duration
<tb>
<tb>
<tb>
Action <SEP> ui <SEP> / kg <SEP> <SEP> UI <SEP> kg <SEP> <tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Heparin <SEP> 1 <SEP> 350 <SEP> 4 <SEP> h <SEP> 2 <SEP> 700 <SEP> 6-7 <SEP> h
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> N- <SEP> (2-sulfobenzoyl) <SEP> 340 <SEP> 6 <SEP> h <SEP> 680 <SEP> 9 <SEP> h
<tb>
<tb>
<tb> desulfo <SEP> heparin
<tb>
<tb>
<tb> N- (3-sulfobenzoyl) <SEP> 3 <SEP> h
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> desulfo <SEP> heparin
<tb>
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N (3,5-dieulfobenzoyïy deaulfo heparin h 3 h N .- (2,4-diaulfobenzoyl)
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<tb> desulfo <SEP> heparin <SEP> 220 <SEP> 6-7 <SEP> h <SEP> 440 <SEP> 9-10 <SEP> h
<tb>
EMI11.6
As can be seen from this table, the N- (eulfobon.
<Desc / Clms Page number 12>
zoyl) M-desulfo heparins have a prolonged anticoagulant action at anticoagulant levels * (expressed in International Units) infinitely lower than those of heparin necessary to obtain an effect of the same order.
CLAIMS
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T.- N. (eultobonzoyl) N-desulfo heparins and their alkali metal salts of general formula:
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in which R represents a hydrogen or metal atom
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alkali, Rit R29 R3 and Ft simultaneously or distinctly represent a hydrogen atom or the gold group, whether free or salified, being excluded H. m R2 a Rq "R4. hydrogen 20- La N- (2- sulfobenzoyl) N-deeulfo heparin and its sodium sol.
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3 "- 'La N- (204-dieultobanzoyl) N..ddsulto heparin and not sodium gall.
EMI12.5
4 N- (3,5-disulfobenzoyl) N-denulfo heparin and not sodium salt 50- N- (3-sulfobenzoyl) N.-dea3o heparin and not sodium sol.
** ATTENTION ** end of DESC field can contain start of CLMS **.