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Pénicillines.
La présente invention concerne les pénicillines, et elle concerne plus particulièrement un procédé pour la préparation de pénicillines [alpha]-amino substituées en partant de dérivés eilyle
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réactifs de l'acide 6-arainopéniclllanique.
Il a été maintenant trouvé que des pénicillines contenant des groupes amino libres dans la moitié acyle peuvent être
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préparées en partait a1 une solution homogène <*'un dérivé silyle réactif de l'acide 6-am1nopénic111an1que, par exemple un enter trialcoyloilyle de l'acide ô-N-tr1aleoyls11ylaminopeluc11lan1que dans un solvant organique anhydre avec ou sans une base organique présente, Il est possible de cette manière d'obtenir ces pénicil- lines avec des rendements dépassant ceux obtenus par les méthodes conventionnelles.
En conséquence,la présente invention prévoit un procédé pour la préparation de pénicillines de la formule générale
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et. leurs sels non toxiques, où R est un atome d'hydrogène ou un groupe alcoyle, aryle ou aralcoyie qui peut 8tre substitue., dans lequel procédé on fait réagir un composé de la formule générale :
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(où R1, R2 et R3 sont identiques ou différente,, et chacun d'eux , est un groupe alcoyle aryle ou aralcoyle ou une solution de ceux-ci* ou bien des mélanges bruts de réaction obtenus en faisant réagir
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l'acide 6-amino pénieillanique avec des agents de lilylation ou des solutions de ces mélanges) avec un dérivé réactif d'un acide carboxylique de la formule générale :
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et en enlevant ensuite les groupes silyle par solvolyse. Le
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groupe amino dans la formule III est empêcha de prendre part à la réaction par le fait qu'il est ou bien protoné, Inclue dans un anhydride cyclique tel que la oxazolid-2$5ione, ou bien condensé avec un hydroxyaldéhyde aromatique en une base Schiff.
Des exemples de dérivés réactifs comprennent les esters activer les chlorures ou bromures de l'acide carboxylique, des anhydrides acides ou des anhydrides mixtes aveo d'autres acides
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carboxyliques ault'aniquea ou anorganiques, ou des dérivés obtenus en partant d'un acide carboxylique et d'une carbodi1m1de ou N,N'-earbonyldi1midazole.
Les sels sont des sels non-toxiques comprenant des sels métalliques non-toxiques tels que des sels de sodium, potassium, calcium et aluminium, ammonium et des sels ammoniques substitués,
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par exemple des sels d'aminée non-toxiques tels que trialeoylantlnes, y compris la triethylamine, procaïne, dibenzylamine, N-benzyl-béta- l phénéth11am1ne, 1-dphênamine, N#N 1-dibenzyléthylènediamines déhydroabîètylamine, N$N 1 bie-dehydroabidtylêthylènediamine, et autres aminés qui ont été employées pour former des cela avec la benzylpénicilline,
Selon une forme de la présente invention,
des pénicillines contenant des groupes amino libres dans la moitié acyle ont été préparées avec de bons rendements en faisant réagir les dérivés
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silyle de l'acide 6-aminopénicillanique avec des anhydrides cycli- ques d'acides amino, par exempleoxazolid 2:5 diones, ou avec des
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chlorhydrates de chlorure aaidéamino.
Des bases organiques tertiaires telles que triéthylamine, N#N-diméthylanlline, éthylpiperidine, 2,6-lutidine, quinoléine ou même un excès du oomposé silyle peuvent être employées comme accepteurs de protone ou comme agents formateurs de sels.
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Les réactions avec les anhydrides sont généralement réalisées à des températures basses, et dans les conditions de réaction employées les acides carbamiques formée sont stabilisés sous forme de sel avec les bases. De cette manière, le groupe amino des anhydrides ne peut pas réagir davantage et on évite les réactions subsidiaires indésirables. Lorsqu'on laisse la température s'élever après que la réaction d'accouplement est achevée, le sel de l'acide carbamique se décompose et le groupe amino est libéré. Par addition d'eau ou d'un alcool, les groupes trialcoylsilyle sont hydrolyses et on obtient la pénicilline désirée.
Dans l'acylation avec les chlorhydrates de chlorure acide amino, la base employée ne doit pas être telle qu'elle enlève le chlorhydrate de l'acide amino. Après que la réaction d'accouple- ment est achevée, le chlorhydrate est facilement olivé par addition d'eau et réglage du pH.
Selon une autre forme de l'invention, une base Schiff d'un acide amino avec un hydroxyaldéhyde aromatique tel que 2-hydroxy-1-naphtaldéhyde ou 5-chlorosalicyladéhyde est traitée avec un essor d'acide chloroformique dans un solvant anhydre tel que dyméthyl-formamide, acétone, chloroforme ou tétrahydroturane à une température inférieure à 0 C et ensuite l'anhydride mixte obtenue est laissée réagir "in situ" avec un dérivé silyle réactif de l'acide 6-aminopénicillanique. Ensuite, l'eau est ajoutée et le mélange est acidifié jusqu'à un pH= 2 pendant un laps court de temps afin d'hyorolyser les groupes silyle et le groupe arylidène.
L'enlèvement des groupes silyle se fait très facilement par addition d'eau ou un alcool au mélange de réaction. Les groupes allyle sont ainsi immédiatement transformés en disiloxanes ou alcoxysilanes, qui sont solubles dans les solvants organiques et
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sont avantageusement enlevée du mélange do réaction.
L'enlèvement facile des groupes de protection employés selon la présente invention est en net contraste avec les difficultés rencontrées aveo d'autres groupes de protection, par exemple le groupe
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oarbobenzyloxy employé dans la synthèse conventionnelle d'amino pénicillines en partant de l'acide 6-aminopénioillanique,
Les produits préparés selon la présente invention peuvent être isolés et purifiés par les techniques employées avec d'autres
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aminop6n101l11nes.
Si l'acide de la formule générale III contient un ou
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plusieurs centres annymétriquens les pénicillines correspondantes peuvent exister sous formes diastéréolnométriquen, qui sont toutes biologiquement actives. Il est bien entendu que la présente invention comprend les diastéréosiomères ainsi que leurs mélanges.
Les dérivés 81lyle de l'acide 6-aminopeniclllanique employés comme matériaux de départ, dans le procédé selon la présente inven- tion sont préparés en faisant réagir l'acide 6-aminopénioillanique ou un sel de cet acide aveo un composé de la formule générale,
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oh R1, a2 et R3 ont la mame signification que ci-dessus et X est un halogène ou le groupe N R5 ou S - R5, oh R4 eat de l'hydrogène est R5 ou R1, * et R5 est de l'hydrogène, R1 ou
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Ainsi, les esters tfcialeoylsllyle de l'acide f-N-trialooyl- ellylaminopénieillanique peuvent être préparés en traitant un sel de l'acide 6-aminopénieillanique, par exemple le sel soI1JUe,
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potassique ou oaloique avec une chlorotrialcoyleilant dans un solvant organique tel que benzène, toluène,
t'arnam!,de ou diméthylformamide en présence d'une base organique tertiaire telle que trith11am111e, éthylpipéridine ou 2o6-lut-Adint. Après avoir agité pendant quelques heures, on obtient une solution du composé silyle qui peut, si on le désire, être utilisée pour la synthèse de la pénicilline. Si le solvant est enlevé "in vaouo", le composa silyle est laissé sous la forme d'un résidu huileux épais, qui pourra être cristallisé.
Une autre méthode pour la préparation de composés silyle
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implique le chauffage de l'acide 6-aminopénieillanique aveot= un excès d'une hexaalooyldlsilasane à température élevée pendant qu'on enlève de manière continue la base libérée.
Une autre méthode encore, qui constitue une méthode
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préférentielle, de préparation des dérivés tr1alooyles1l1le de l'acide 6-amlnopénioillaniqu'e consiste à chauffer un mélange d'acide 6-aminopénioillanique avec plus de deux moles d'une Y-trialcoyl- ellyldialcoylaminop telle que la N-trim'tbyls11yld1étbylam1ne ou N-triméthyls1lyld1méthylam1ne,. à une température comprise entre 50 et 170' C de sorte que la dialcoylamine qui est formée pendant la réaction se sépare par distillation. La réaction est en général achevée endéans une heure et l'excès de txialooylailyldialcoylamine est enlevé sous vide en laissant les dérivés trlalooylsilyle de l'acide 6-aminopénieillanique sous la forme d'une huile épaisse pouvant être cristallisée.
Les dérivés silyle sont solubles dans des solvants organi- ques tels que éther, tétrahydrofurane, dioxyane acétone, benzène, toluène, éther de pétrole, chlorure de méthylène, chloroforme,
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tormamide et dlméthylformaalde, est également dans les trialcoyl- ellyldialcoylamines qui peuvent être employés comme réactifs. En refroidissant les solution par exemple dans de l'éther diéthylique,
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éther de pétrole ou N-triméthylsilyl-diéthylamine, le dérivé silyle peut cristalliser.
Les groupes substitués silyle dans les composés sont facilement enlevés par addition d'eau ou d'un alcool tel que le méthanol ou l'éthanol et à cause de leur sensibilité à l'égard
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des agents d'hydroxylation Ils sont de préférence préparés d<uie ' conditions strictement anhydres.
Les exemples qui suivent; illustrent la présente invention : Exemple J.
4,3 gre, (OjC2 mole) d'acide 6-aminopénicillanique ont ê1 Mélangea avec 14,5 grue (0,1 mole) de N.tr1mthyl.llyld1êthYla!Yt:H;,' et chauffés avec agitation en faisant passer un courant lent -:< :1( sec dans le mélange de réaction. A 6070C une dissolution zaza de l'acide 6..aminopn10111Im1que s'est produite, et h 80*C ur liquide a commencé 4 se séparer par distillation. Après 20 mi utes la température a été graduellement élevée k 3.5a'C et maintenu oe niveau pendant 5 minutes pour achever la réaction. La durée t&r de la réaction a été de 45 minutes. On a laissé alors refroidir le mélange de réaction à 8000 et ensuite tous les constituants volatils ont été séparés par distillation, finalement sous vide, en laissant un résidu huileux.
Le résidu a été mis sous vide pendant une heure à 0,5 en donnant de l'ester triméthylsilyle de l'acide 6-N-trimth.ai.ßr;.. aminopénicillanique nous la forme d'une huile épaisse brunâtre.
(7,1 gr. correspondant à un rendement de 98,5% du produit brut),
La résidu a été dissous dans 30 ml. d'éther de pétrole sec (point d'ébullition 40/60 C) et une petite quantité de produite insolubles Déparé. par filtration Le dérivé triméthylsilyle s'est séparé noue
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forme de petite aiguilles cristallines incolores, qui furent recueillies par filtration dans des conditions rigoureusement sèches, Après lavage avec de l'éther de pétrole, et séchage dans un courant d'azote sec, on a obtenu 5,4 gr, du produit qui avait
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un point de fusion de 67 à 68* c Analyse CI,iIHS05ssi 060,57) 9 ut trouver 15,4 calculé$ 15,
56 Le composé se caractérisait par non spectre IR, lequel
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entre autres montrait des bandes d'absorption à 3390, 2970, 1775, 1720, 1S7O-5O et 840 cm"1, indiquant- la présence d'un groupe NU, de groupes méthyle, de liaison p-lactame, de groupes entera carboxyliques et groupes trimèthyleilyle respectivement, Le componé était soluble dans des solvants organiques anhydres tels . que les suivants s dléthylither, dioxane, tétrahydroturane, acétone, benzène, toluène, éther de pétrole, chloroforme, chlorure de méthylène, tormamide et dimdthyltormamides Par addition d'éthanol ou méthanol dans l'eau à ces solutions on a immédiatement produit un précipité blanc qui s'est dissous dans de l'alcali dilué et
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pouvait être ra..praipit6 par addition d'acide.
Le spectre IR de ce produit était sous tous rapports Identiques à celui de l'acide 6-amlnopéniolllanlque, La récupération de l'acide 6-arainopénicillanique était presque quantitative.
D'autres essais ont montré que la réaction pouvait être effectuée avec un résultat aussi bon en employant de 2 à 5 moles
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de N-tr1méthylsilyld1éth1lamine par mole d'acide 6-amino- pénieillanique et en employant une température de réaction variant entre 70 et 170 C.
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La. U-trlmdthylellyldièthylamine employée dans cet exemple
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au été préparée comme décrit par Sauer et Hasek, J. Am. Chem. 80000 68,241 (1946). exemple 4,7 grammes (0,01 mole) du sol de calcium de l'acide
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6*amlnopénielllanlque ont été mis vn suspension dans 25 ml. de benzène sec,# 2<03 gr. (0,02mole) de trléthylamîne sèche et 4,35 gr.
(0,04 mole) de triméthylohlorosilane ont été ajoutée et le mélange a été chauffé avec agitation pendant 3 heures à 60 C dans une atmosphère d'azote zec. Le mélange de réaction a été filtré en prenant des précautions pour éviter l'humidité et la solution claire résultante a été évaporée sous vide et on a
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obtenu 2,1 gr. (2gG) de l'ester trimdthyleilyle de l'acide 6-N-triméthylsilylamlnopénioillanique sous la forme de résidu huileux. Le spectre IR de ce produit était identique au produit obtenu dans l'exemple 1.
Le sel de calcium employé dans cet exemple a été obtenu en '
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dissolvant l'acide 6-aminopénieillanique avec une quantité calculée d'hydroxyde de calcium dans l'eau et en séchant avec congélation la solution résultante. Le sel présentait une pureté de 96% dé- terminée par l'essai hydroxylamine. Avant l'emploi, il a été séché sous vide sur du pentoxyde de phosphore.
En substituant 0,02 mole de sel de sodium de'l'acide
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6-aminopénieillanique à la place du sel de calcium dans cet exemple et en suivant la méthode ci-dessus, on a obtenu 1,8 gr* (25%) du dérivé bis#triméthylsilyle de l'acide 6'-aminopénioillanlque.
On a vérifié par analyse aux infra-rouges que ce produit était identique avec le produit de l'exemple 1.
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Exemple 3.
10,8 gr. (0,05 mole) d'acide 6-aminopénicillanique sec ont été mélangée avec 24,2 gr. (0,15 mole) de hexaméthyldisilazane et le mélange a été chauffé avec agitation pendant qu'on y faisait passer un courant lent d'azote sec* la réaction commençant a 90 C avec évolution d'ammoniac.
Après 3 heures à 120 C. le mélange de réaction a été laissé se refroidir à la température ambiante et on ajouté 25 ml. d'éthor sec, On a alors filtré le mélange à l'abri de l'humidité et la solution claire résultante a été concentrée joue vide pour donner 11,6 gr. correspondant à un rendement de 64,5% d'ester triméthylsilyle de l'acide 6-N-triméthyl- silylamino pénioillanique sous la forme d'une huile jaunâtre épais- se. L'analyse infra-rouge a montré que ce produit était identique au produit obtenu dans l'exemple 1. La hexaméthyldisilazane employée dans cet exemple a été préparée selon Sauer, J.Am.Chem.Soc.
66, 1707 (1944).
Exemple 4.
Préparation d'acide 6-([alpha]-aminophénylacétamide)-pénicillanique a) A une solution refroidie par de la glace de 0,01 mole d'ester triaéthylsilyle de l'acide 6-N-triméthylsilylamino- pénicillanique et 1,30 gr. (0,01 mole) de quinoléine redietillée dans 25 ml. de tétrahydroturane sèche on a ajouté avec agitation 2,06 gr.(0,01 mole) de chlorhydrate de [alpha]-aminophénylacéthylchlorure.
Le flacon de réaction a été refroidi dans un bain de glace et le mélange de réaction a été mis à l'abri de l'humidité. Après achèvement de l'addition, on a continué l'agitation pendant 15 minutes dans le bain de glace et ensuite pendant 60 minutes encore, à la température ambiante.
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100 ml. d'eau et 30 ml. d'une solution normale de bicarbmate de potassium ont alors été ajoutés et l'agitation a été contunu pendant 5 minutes encore. On a lavé la solution neutre deux foie avec de l'éther et on l'a analysée par la chromatographie au papier pour montrer la présence de la pénicilline en même temps qu'une petite quantité d'acide 6-aminopénicillanique. On a traité la solution par les méthodes conventionnelles pour donner 2,27 gr.
(65,3%) de la pénicilline sous la forme d'une poudre cristalline blanche d'une pureté de 80% telle que déterminée par des essais alcalimétriques. Le produit empêchait la croissance de Staph.aureus Oxford à une concentration de 0,03 mog./ml.
L'hydrochlorure [alpha]-aminophénylacéthylchlorure a été par en faisant réagir l'acide D, L-a-aminophénylaoétique aveu pentachlorure de phosphore dans le chlorure d'aoétyle pendant; 20 heures. Le produit a été isolé par filtration et après lavage à fond avec de l'éther de pétrole on a obtenu un produit blanc qui s'agglomérait au-dessus de 100 C, mais ne présentait pas de point de fusion précis.
Le produit contenait 34,2% chlore (Cale.pour C8H9C12NO 34,41% ci). b) En employant un excès double d'ester triméthylsilyle
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, par rapport %ui*V4 de l'acide N-t1méthyls11Ylam1nopén101l1aniquelà la quantité fi;...u. oblorhydrate -aminophénylacétylohlorure ometî- 7 de chlorhydrate de a-am1nophénylacétylohlorure et en omet*-
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base organique, mais en réalisant autrement la même opérât:'-.. celle décrite ci-dessus sous a), on a obtenu 2,14 gr.(74%) calculée par rapport à la quantité employée de cnlorhydafe a-aminophényl aoétylchlorure de 1,7 gr, (0,0085 mole). Le' -?-.x?-0 obtenu était Identique 4 celui de a). c) En partant de 4-pfidpZioxazolid-2:5-dione.
Une solution de 5,85 gr. (0,053 mole) de 4-phényl-oxa." - 2t5-dione dans 25 ml. de diméthyli'ormamide sèche a été ai". /\11
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avec agitation à une solution de 0,03 mole de triméthylsilylester
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de l'acide f-N..triméthylailylaminapénioillanique dans 25 ml. de diméthylformamide sèche, contenant >,54 gr. (0,033 mole) de 2,6-lutidine redistillée sèche. On a réalisé la réaction dans des conditions strictement anhydres et le flacon de réaction a été refroidi à -4o'C. L'addition a été achevée en 20 minutes et ensuite le mélange a été agité pendant trois heures. 5ml. d'eau et 50 ml. d'éther ont été alors ajoutés et le précipité formé a été isolé par filtration.
Après lavage et séchage on a obtenu 7,9 gr. d'une poudrer légèrement jaune laquelle ainsi que montré par la chroma-
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tographie au papier et par des essais m10robiolog1ques, contenait 30% de la pénicilline. Cela correspond z, un rendement total de 22%, La 4-phényl-oxazolid-2:5-dione a été préparée selon Louons et aeiger Ber.41$ 1722 (1908).
Exemple 5.
Prë aration dnçide 5 Da-nminophénylaaétam3da .. pénioillanique.
En partant de z gr. (0,2 mole) d'acide 6-amino- pénioillanique sec et 87,8 gr. (0,6 mole) de N-triméthy18ilyl- diéthylamine on a préparé de la manière précédemment décrite, pu mole de triméthylsilyester de l'acide -N-triméthyls31y7,.. aminopénic11lanique.
Cet ester a été dissous dans 250 ml. de tétrahydrofurane sèche en même temps que 33 gr. (0,254 mole) de quinoléine redistillée et on l'a refroidi dans de la glace. On a alors ajouté par petites portions 55,5 gr. (0,27 mole) de chlorhydrate de chlorure d'acide D-a-aminophénylacétique avec agitation, pendant 10 minutes. Pendant l'addition, la température s'est élevée jusqu'à environ 10 C. Après avoir agité pendant 4 minutes encore à la température ambiante, la solution résultante presque claire
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a été déversée dans 2 litres d'eau en agitant fortement. Le mélange a été neutralisé avec de l'hydroxyde sodique 2 N, filtre et lavé deux foie avec de l'éther, pour enlever la quinoléine.
Après avoir séché par congélation on a obtenu 7, gr. d'une poudre brunâtre ayant une pureté de 52% (essai à l'hydroxylamine). Cela correspond à un rendement corrigé de 57% de la péniollll.Le.
La chromatographie au papier a montré que le produit contenait la pénicilline requise comme seul composé antibiotique, La pénicilline a été ensuite obtenue avec une pureté de 85 (essai alcalimétrique). Ce produit avait une rotation optique 23 de a D - +257 (tampon au phosphate pH 7,0) et empêchait ? . croissance de 8taph.aureus Oxford une concentration de 0 C.-. mog.ml.
Le chlorhydrate de chlorure ri-a-aminophénylaaétyle employé dans cet exemple a été préparé en partant d'acide D-amino- phénylacdtique et de pentachlorure de phosphore. Il a été obtenu sous la forme d'un composé.labile incolore contenant 32,5% Cl (Calculé pour CHC12N0: 34,41"$ Cl). Selon son spectre infra-rouge il contenait probablement comme impureté une cert1' quantité de chlorhydrate de l'acide a-aminophny.ac,rtx4, Exemple 6.
Préparation d'acide 6-,a-amino-.a-phénipropionamido).. pén1olllanique.
A une solution refroidie par de la glace de 0,22 moli de triméthylsilylester de l'acide 6-N-triméthylsilylamino- pénieillanique et de 46,5 gr. (0,36 mole) de quinoléine 1"f"èt-:',,:', # iv1 dans 250 ml. de tétrahydrofurane sèche on a ajouté avec agitation pendant 10 minutes 59,1 gr. (0,268 mole) de chlorhydrate de chlorure D> -méthyl-a-aminophénylaeêtyle. Pendant l'addition,
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la température s'est élevée jusqu' environ 20 C et elle a été maintenue à ce niveau pendant 35 minutes encore. On a pris soin d'exclure l'humidité du mélange de réaction. La solution presque claire a été déversée dans deux litres d'eau et neutralisée avec do l'hydroxyde de sodium 2 N, filtrée et lavée deux fois avec de l'éther.
On a obtenu 2,53 litres de solution ayant une teneur en pénicilline de 25,1 mg/ml., ce qui correspond à 63,5 gr. de la pénicilline, c'est-à-dire à un rendement de 80%. La pénicilline a été Isolée avec une pureté de 73,2% (essai aloalimétrique) et elle empêchait la croissance de Staph. aureus Oxford à une concentration de 0,63 mog./ml.
On a préparé le chlorure acide en faisant réagir l'acide [alpha]-méthyl-[alpha]-aminophénylacétique avec du pentaohlorure de phosphore.
Ce chlorure acide a été obtenu sous la forme d'une poudre blanche ayant une teneur de C1 de 30,5% (C9H11C12NO demande 32,22% C1).
Selon son spectre IR il contenait le chlorhydrate d'acide a-méthyl-aminophénylacétique comme impureté.
Exemple 7.
En employant les chlorhydrates de chlorure connus de glycine et Dl-leuoine on a préparé les pénicillines correspondantes de la manière décrite dans l'exemple 6.
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<tb>
Rendement <SEP> Pureté <SEP> MIC
<tb>
<tb> [alpha]-aminométhylpénicilline <SEP> 55% <SEP> 65% <SEP> 0,63
<tb>
<tb> [alpha]-amino-#-méthylbutylpénicilline <SEP> 45% <SEP> 67% <SEP> 0,25
<tb>
= Concentration inhibitrice minimum à l'égard de Staph. aureus Oxford en mog./m.
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Exemple 8, Préparation d'acide 6f,,D-aamino'âméthylvaléramido .. fi n1011lan1que.
On a chauffé l'acide 6-aminopénioillanique (2,2 gr.) avec la N-triméthylsilyl-dléthylamlne (5,8 gr.) pendant 45 minutes 4 80*0. pendant que la diéthylamine formée était enlevée de maniy continue par distillation à une pression légèrement réduite, L'excès de N-trimthy18ilyl-diéthylamine a été enlevé sous vidç , en laissant le dérivé triméthylsilyle de l'acide Ó-am1nopénlcillsn sous la tosm e d'un résidu visqueux, qui i'ut dissous dans zur ml, d'éther 100. A cette solution on a ajouté de la quinoléine 1,," m suivi de chlorhydrate de chlorure D"leuoyle (2,4 gr.) tout en ap;1. tt..n,. et en refroidissant dans un bain de glace. Apres 45 minutes la mélange de réaction a été déversé dans 150 ml. d'eau, ner- #>-.-# -..ci avec de l'hydroxyde de sodium dilué et a été bien lavé avec de l'éther.
Par la chromatographie au papier on a trouvé que la phase aqueuse contenait 1,6 gr.(49%) d'un acide 6-(D-a-amino- "-mri. valérari,do)-pénia.ilanique avec 0,6 gr. d'acide 6-aminopénici.lx,t n'ayant pas réagi. La pénicilline a été isolée en concentrant la solution aqueuse sous vide à 200 C. après avoir réglé le pH à une valeur de 5,0.Une repréoipltation dans l'eau a donné 1,15 gr. avec une pureté de 69,8% (essai aloal1mtr1que). Par la chroma t ,1 au papier, on a montré que le produit était débarrassé :" ' 6-am1nQP4n101l1An1que.
On a trouvé que cette substance empêchait la oro 1 I!U':'.U\(". '. taPJ.'..t-!.':!.r.eu. ,x,f'ot4., une concentration de 0,25 mcg./ml. #4, contenait dans son spectre IR une forte bande a 1770 om 1 rcau t la présence d'un anneau p-laotame.
Le chlorhydrate de chlorure D-leucyle (Trouvé Cl l" \t 6Hl,C12NO demande Cl, 8,11%) a été préparé en faisant réagir lu D..leuc1ne avec une quantité équivalente de pentachlorure de ..:efx c dans du tétrachlorure de carbone,
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Exemple 9.
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Préparation d'acide 6- D-a-am1no- - h'n l P n101l1e.n1que.
L'acide 6-amlnopénioillaniquo (3,1 gr.) et N-tr1métby1811yl- dim6thylamine (10 gr.) ont été chauffés pendant 15 minutes à 60*C* pendant qu'on faisait passer un courant léger d'azote par le flacon de réaction pour enlever la diméthylamine a taeoure qu'elle était formée. L'exoèa de N-tr1mthyle11yld1méthylaDI1ne a été distillé tous vide en laissant le dérivé triméthyleilyle de l'acide 6-aminopénioillanique sous la forme d'un résidu visqueux qui a été
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dissous dans 25 ml. de bonxçne etc, On a ajouté la N,NMdxméthylanili.ne (,6 gr.) à la solution, suivi de chlorhydrate de chlorure T phény3.alaryle (3,0 gr. ) par petites portions pendant 5 minutes, tout en agitant et enretroidiasant dans un bain de glace.
Après avoir agité pendant une heure, on a dévers' le mélange de réaction presque clair dane 50 ml. d'eau, on a neutralisé par addition d'hydroxyde sodique 2 N et on a lavé à fond avec de l'éther. Par la ohromatographie au papier on a trouvé que la
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phase aqueuse contenait 3#1 gr.(86#) d'acide 6-(D-a''aM<lno-p- phénylpropionamido)-pénioillanique avec une petite quantité d'acide 6-amlnopénioillanique qui n'avait pas réagi. Après avoir acidifié à un pH égal à 5,0 on a concentré noue vide la solution aqueuse à 20 C et on a précipité ainsi 1,1 gr. de la pénicilline avec une
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pureté de 899% (essai à ltdroxylam1ne).
On a trouvé que cette substance empêchait la croionance de Btah. aUreul5,.pxto, à une concentration de 0,1.3 mon /rol, et qu'elle contenait dans non spectre IR une bande forte de 1780 cm-1
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montrant la présence d'un anneau p.aaotdme.
Le chlorhydrate de chlorure D-phénylalanyle (Trouvé ! Cl Q,2 CgRl1012NO demande Cl '2,2), a été préparé en agitant
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la D-phénylalanine avec un équivalent de pentachlorure de phosphore dans le chlorure de méthylène. Il contenait probablement une cer- taine quantité de chlorhydrate de phénylalanine comme impureté (absorption IR faible à 1720 cm-1).
Exemple 10.
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Préparation d'acide 5-(a-amino- -mdthiheptanamido péni c11lanique On a chauffé l'acide 6-aminopénicillanique (4,3 gr., 0,02 mole) avec la N-triméthYls11Yld1éthYlamine (14,5 gr.) pendant 45 minutes à 60'0 pendant qu'on enlevait de manière continuera diéthylamine formée en appliquant une légère aspiration aju flacon de réaction. L'excès de N-triméthylellYl...d1éthylaM1ne a été séparé par distillation sous vide laissant le dérivé triméthy1i1YJP de l'acide 6-aminopénicillanique comme résidu, lequel a été disons dans 50 ml. de benzène tee. On a ajouté N,N-diméthylaniline (2,4 gr. O,J2 mole) suivi d'une solution de chlorhydrate de chlorure a-amino- ,-mthyiheptanoyl(0,0 mole) dans 25 ml. de chlorure de méthylène, tout en agitant et en refroidissant dans un bain de glace.
Après 90 minutes, on a déversé le mélange de réaction dans 100 ml. d'eau, on a neutralisé par addition
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d'hydroxyde de sodium 2 N et on a lavé avec de l' éther. On a. t.,.: ¯1 "f.'! par la chromatographie au papier que la phase aqueuse oontenai'.
3*3 gr.(46%) de l'acide 6-(a-amino--méthylheptanamido)-' pénioillanique avec une certaine quantité d'acide 6-amino- pénioillanique qui n'avait pas réagi. On a réglé le pH à une valeur égale à 5,0 et on concentré la phase aqueuse sous vid- à la température ambiante pour donner 1,4 gr. de la pénicilline sous la forme d'un précipité blanc. Le produit présentait une
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pureté de bzz (essai à .l'hydroxylamine) et contenait environ 10% d'acide 6-aminopénicillanique.
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Il a été trouvé que ce produit empêchait la croissance
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de Staph. aureus Oxford à une concentration de O,6,mog,/ml. et qu'il contenait dans son spectre IR une forte bande 1776 cm-1, montrant la présence d'un anneau (3-lactame.
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Le chlorhydrate de chlorure ct-amino- @-m,6thylheptanoyie employé dans cet exemple a été préparé en faisant réagir l'acide oc-amino- - méthylheptanoique (3,2 gr., 0,02 mole) avec une quantité équivalente de pentaohlorure de phosphore dans du chlorure de méthylène jusqu'à obtenir une solution claire. Le solvant a et* séparé par distillation sous vide à 20 C afin d'enlever l'oxychlorure de phosphore formé et le résidu a été redissous dans du chlorure de méthylène et employé directement* Le spectre IR de cette solution présentait une forte bande à 1770 cm-1 pouvant être attribuée à une moitié de chlorure acide* Exemple 11.
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Préparation d'acide 6.(,a-amino-p-méthy.-"ppüdnylbutrramida)n3- cillanique.
On a chauffé l'acide 6-aminopdnlclllanique (1,5 gr.) pendant 45 minutes à 80*0 avec de la N-trlméthyl.11yl-dl'thylamine (7,0 r.) pendant qu'on faisait passer de l'azote sec à travers le flacon de réaction pour enlever la diéthylamine à mesure qu'elle était formée. L'excès de N-triméthylsilyl-aithylam1n. fut séparé par distillation sous vide et le résidu fut dissous dans 25 ml, de benzène sec, On a ajouté N,N-d1mthylan111ne (0,8? gr.) suivi de chlorhydrate de chlorure .am1no-p-m6thyl--Ph6nylbutyrpl.jJ).
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lm %444; ,v%;4J IlDuiü&JUIIV8 (2,2 gr.) avec agitation et refroidissement dans un bain de glace.
Après 1 heure, le mélange de réaction !'ut déversé
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dans 50 ml. d'eau, neutralisé et lavé avec de l'ether.0n..a trouvé par la chromatographie au papier que la phase aqueuse contenait comme seule substance antibiotique 1,9 gr. (70%) de l'acide
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6-ta-amino-p-méthyl-p-phénylbutyramido)-péniaillanique qui après
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acidification jusqu'à un pH- 5,0 au moyen d'acide chlorhydrique
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dilué, t'ut isolé en concentrant la solution sous vide à 2000. On a obtenu 0,8 gr. d'une pureté de 59% (hydroxylamine). ,
Il a été trouvé que cette substance empêchait la croissanc
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de Stah. aureue Oxford à une concentration de 6,25 mog./ml. et qu'elle contenait dans son spectre IR une forte bande à 1776 cm-1 prouvant la présence d'un anneau p-lactame..
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Le chlorhydrate de chlorure a-amino-p-méthy1-p-phénylbutyrylt (Trouvé ; CI 25,9; 11H1j12r0 demande Cl, 23, 5$) fut préparé en faisant réagir l'acide a-amino-p-méthyl-p-phénylbutyrlque avec uns; quantité équivalente de pentachlorure de phosphore dans du chlorure de méthylène. Il était probablement contaminé par une certain. quantité de chlorhydrate de l'acide amine (faible absorption IR à 1720 cm-1).
En utilisant la méthode décrite dans les exemples ; à 11, on a également préparé les amino-pénicillines suivantes :
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<tb> Rendement <SEP> d' <SEP> Pureté <SEP> MIC
<tb>
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acylation ¯¯¯¯¯¯¯¯¯ ,...,.,#, ..# Acide 6-(D-minoproPionam1do)- pênieîllanique 43 51 2,5 , Acide 6-L-a-aminopropionamido)- pén1oillan1que bzz, 38 1,25 Acide 6-(D-cx-amino-p-mê'thyl- butyramido)- pénïoillanique 35 44 â*:? :
Acide 6 (L-a-amino-méthyl-
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<tb> butyramido)-
<tb>
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pénieillanique 27 42 Acide 6-(L-a-amino- -mthyi.. valeramido)- pénîcillanique 34 39 2 Acide 6-(L-a-,-diam.novalrtml.do- pén1c111an1que 30 46 L2, Acide 6"(a-araino-p-phénylpropioit- amido) pénicillanique 83 50 0,b Acide 6-(L-o-araino-p-phényi- prop1onamido)- pén10111anique 53 51 g , ,
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Dans le tableau on a donné le rendement d'acylation tel que déterminé par la chromatographie au papier de la solution de réaction, la pureté du produit isole telle que déterminée par la méthode a l'hydroxylamine et la concentration inhibitoire minimum
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("MIC") en mcg./ml. du produit à l'égard de Staph.aureus Oxford.
Exemple 12.
Préparation d'acide 6-(a-amino '-mh lmerea,tc-butYramido 26nieillanique, On a dissous la N-(2-hydroxy.i-naphtai)-DL-mBthi,onine (3,0 gr.) dans 25 ml. de diméthyltormmide anhydre avec de la triéthylamine sèche (2,0 gr.). On a ajouté à cette solution de l'ester éthylique de l'acide chlorotormique (2,8gr,) aveo agitation à -10 C et, après 15 minutes, une solution dans 25 ml. d'éther . anhydre du dérivé trim4thylellyle de l'acide 6-eminopéàioillanique préparé comme décrit dans l'exemple 8 en partant de l'acide 6-amlnopéniclllanlque (2,2 gr.) et N-tr1méthyls11yl-diéthylamln, (7 gr.). Immédiatement après l'addition, on a élevé la température dans le mélange de réaction à 25 C, et on l'a maintenue à ce niveau pendant une heure.
On a ajouté de l'eau (75 ml.), on a acidifié le mélange à un pH= 2 et on l'a refroidi dans un bain de glace pendant 30 minutes tout en continuant l'agitation. Le mélange fut neutralisé et lavé à fond avec de l'éther. Par la ohromatographie au papier, on a trouvé que la solution aqueuse obtenue contenait
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0,9 gr. (25%) d'acide 6(a-amina- -méthylrneraaptobutyramido).. pénieillanique en même temps qu'une quantité égale d'acide 6-aminopénicillanique qui n'avait pas réagi. Après acidification à un pH= 5,0 la pénicilline fut précipitée en concentrant; la solution sous vide à 20 C. On a obtenu 0,5 gr. de la pénicilline avec une pureté de 41% (essai à l'hydroxylamine).Le produit conte-
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nait des traces d'acide 6-aminopénieillanique.
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Il a été trouvé que le produit empêchait la croissance de
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8te,ph.aureus Oxford à une concentration de 0,63 mog./mI. et qu'il contenait dans son spectre IR une torte bande à 1770 cm-1 prouvant la présence d'un anneau p-lactame.
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La N- t2.-hydroxy..,.-naphtal ) DLméthi.onlne, point fusion 161,5-163,0 C.(Trouve ! C 63,6; H 6,12; N 4,62} S li,,â.ClH1'l- . demandes 0 ?,34 H 5#65; N 4,62; S 10,S7) a été préparée en agitant la DL-méthionine avec un excès de 85% de 2-hydroxy-l- iiaphtalddhyle dans din)<thylfoM)aMide,ju6qu'& obtenir une solution ; limpide*On a enlevé le solvant sous vide et on a trituré le résidu avec du benzène sec.
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