BE435158A - - Google Patents

Description

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  " Procédé de fabrication de préparations à base d'insuline   Il.   



   La présente invention a pour objet un procédé de fabrication de préparations à base de l'hormone hypoglyoémiante du pancréas, connue sous le nom d'insuline, laquelle est un produit parfaitement défini au point de vue chimique. 



   On connaît déjà des prooédés visant à prolonger l'action hypoglycémiante de l'hormone du pancréas dénommée insuline, procédés qui consistent à transformer l'hormone en un composé difficilement soluble dans le suc des tissus organiques et à provoquer, de cette manière, une résorption plus 

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 lente de l'hormone. Dans ce but, on a, par exemple, fait ré-    agir l'insuline avec des protamines et des histones ; enpro-   cédant ainsi on a obtenu des composés qu'on précipite par addition de substances tampons, composés qui sont connus sous le nom de protamine-insulines.

   On sait encore qu'on peut augmenter sensiblement l'action retardatrice des substances ainsi obtenues, par exemple des protamine-insulines, si l'on fait appel à des préparations d'insuline contenant du zinc, soit qu'on se serve à titre de matière de départ, de la zino-insuline obtenue à partir de l'hormone avec des sels de zinc, soit qu'on incorpore encore à ces substances davantage de sels de zinc. Dans la littérature spéciale, on a aussi décrit les composés de l'insuline contenant de l'aluminium et du calcium soit avec des protamines, soit sans protamines.

   Ces composés ainsi que d'autres composés métalliques de l'insuline n'ont pas été appliqués en pratique, tandis que les composés oorrespondants de protamine-zinc sont parvenus à une importance croissante au point de vue clinique, quoique les composés cités en dernier lieu laissent encore quelque peu à désirer en ce qui concerne leur toléranoe par l'organisme. 



   Or, la Demanderesse a trouvé qu'on peut faire réagir l'insuline de même qu'avec les sels de zinc, de calcium et d'autres sels métalliques, également avec les sels de magnésium ; en procédant de cette manière, on obtient des substances qui présentent une action retardatrice, telle que celle de l'insuline-zinc connue. La Demanderesse a trouvé encore que les composés de magnésium et d'insuline ainsi obtenue sont susceptibles de réagir avec les substances les plus diverses qui se prêtent à la fabrication de préparations d'insuline à action retardatrice telles que par exemple la protamine, l'histone etc... Dans tous ces cas, on obtient des substances à action retardatrice et dont la tolérance par l'or- 

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 ganisme dépasse, en partie, de beaucoup celle des composés de zinc correspondants. 



   On peut mettre en oeuvre le procédé de la façon suivante : on additionne l'insuline de sels de magnésium, par exemple de sulfate de magnésium, de ohlorure de magnésium, d' aoétate de magnésium et on ajoute aux solutions obtenues le corps aminogène correspondant ( protamine, histone   etc...);   on obtient les nouveaux composés en précipitant à l'aide d'un tampon. On peut également mettre en oeuvre le procédé, avec des résultats semblables, en faisant réagir des sels de magnésium avec les protamine-insulines exemptes de magnésium et en effectuant ensuite la précipitation à l'aide d'une solution tampon. 



   On peut faire appel au procédé décrit ci-dessus pour les modifications les plus diverses de l'insuline, tout particulièrement on peut l'appliquer aux protamines qui contiennent déjà une addition provoquant une résorption plus lente de l'hormone, par exemple à l'insuline-protamines ou à l'insuline-histone. On peut aussi utiliser des composés de l'insuline avec des protones ou des hydrolysats d'histone. Enfin, on peut appliquer ce procédé aussi aux composés de l'insuline avec des bases organiques à poids moléculaire élevé selon le brevet belge N  430.582 de la même demanderesse, en date du 11 ootobre 1938, intitulé   Il   Procédé de fabrication de préparations à base de l'hormone du pancréas abaissant le taux du sucre dans le sang ( Insuline ) ".

   Dans tous les cas précités on peut faire agir les sels de magnésium sur l'insuline à un stade quelconque du procédé. On peut appliquer ce procédé non seulement à l'insuline amorphe mais aussi à sa forme cristalline oontenant des quantités minimes de zinc. 



   Les divers composés de l'insuline qu'on obtient selon le procédé décrit ci-dessus, présentent une action retarda- 

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 trice prononcée tout en étant parfaitement bien tolérés. 



   EXEMPLE 1 :
On dissout 182 milligrammes d'insuline dans 1,4 cm3 d' acide chlorhydrique 1/10 normal ; ensuite on ajoute à la solution d'insuline 30 milligrammes de protamine dissoute dans une petite quantité d'eau et 62 milligrammes de sulfate de magnésium ( avec 7 H2O ). On étend alors le volume à 70   om,   on ajoute 2,0 grammes d'urée. Ensuite, on règle la solution à une valeur de pH de 6,5 au moyen de phosphate de sodium secondaire. Le dépôt qui s'est formé représente la protaminemagnésium-insuline, à action retardatrice. 



   EXEMPLE 2 :
On dissout 182 milligrammes d'insuline dans 1,4 cm3 d'acide chlorhydrique 1/10 normal, on ajoute à la solution d'insuline 7,6 milligrammes de chlorhydrate de bis-2-méthyle- 4-aminoquinolyl-6-carbamide dissous dans une petite quantité d'eau et en outre 50,8 milligrammes de ohlorure de magnésium ( avec 6 H20 ). Ensuite on porte le volume à 70 cm3, on ajou- te 2 grammes d'urée et on règle la solution à une valeur de   pH   de 6,5 , au moyen de phosphate de sodium seoondaire, pour étendre enfin le tout à 100 cm3 Le dépôt qui vient de se former constitue l'insuline à action retardatrice. 



   EXEMPLE 3 :
On dissout 182 milligrammes d'insuline dans 1,4 cm3 d'acide chlorhydrique 1/10 normal, on mélange la solution avec 50,8 milligrammes de chlorure de magnésium dissous dans une petite quantité d'eau et on ajoute enfin une solution de 7,6 milligrammes de chlorhydrate de bis-2-méthyle-4-aminoquinolyl-6-carbamide dans 5 cm3 d'eau. Ensuite, on porte le volume à l'aide d'eau à environ 70 cm3 et on règle la solution à une valeur de pH de 6,6 au moyen d'une solution de phosphate de sodium secondaire, et on étend alors le tout à 

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   100   cm3.On compte, pour   1 om ,   40 unités d'insuline. 



     EXEMPLE   4 :
Immédiatement après l'abattage, on prend sur des boeufs 20 kg de pancréas, on les débarrasse de la graisse et des tissus oonjonotifs, on les coupe en petits morceaux et on les introduit enfin dans un mélange de 6 Kg de glace finement broyée, de 4 litres d'eau et de 540 cm3. d'acide chlorhydrique concentré. On remue le tout vigoureusement jusqu'à ce que la majeure partie de la glace soit fondue et on fait congeler le tout dans un mélange frigorifique. On apporte la charge à ltétat congelé à ltendroit du traitement où on l'introduit en 1 démoulant dans un mélange refroidi à 0  de 54 litres d' alcool à 99,8 pour cent et 6,5 litres d'eau. On remue le tout pendant 12 heures à une température de 0  et on le filtre. 



  Tout en remuant encore pendant 2 heures à environ la , on ajoute encore au résidu 40 litres   d'alcool   + 28 litres d'eau + 100 cm3 d'acide chlorhydrique concentré et on le filtre de nouveau. On refroidit les extraits à 0 , on les règle par quantités de 15 litres à une valeur de pH de 7,4 - 7,6 à l'aide d'ammoniaque concentrée et on les oentrifuge ensuite rapidement jusqu'à ce qu'ils soient clairs. On règle alors les solutions olaires chaque fois au moyen d'acide sulfurique dilué à une valeur de pH de 3. On concentre les solutions acides réunies sous pression réduite ( la température à l'intérieur s'élevant à 20  C au maximum ) à 10 litres. On règle la réaction à une valeur de pH de 2,8 et on élimine la graisse par épuisement à l'éther.

   On précipite la solution claire avec 25 % de chlorure de sodium; après avoir fait reposer le précipité pendant une nuit, on le sépare par filtration, on le suspend dans 1200 cm3 d'eau et on le précipite au moyen de 15 % de ohlorure de sodium. On dissout le deuxième dépôt au chlorure de sodium dans 2 litres d'eau et on règle la 

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 solution à une valeur de pH de 7,2 - 7,4. On essore immédiatement le précipité floconneux, on le lave à l'eau et on le sèche à l'aide d'acétone et d'éther. En procédant de cette manière, on obtient 4 grammes d'une préparation qui contient environ 15 unités par milligramme et qui, injectée sous la forme d'une suspension aqueuse, présente une action retardatrice prononcée. 



   Par addition de 12,5 cm3 d'acide chlorhydrique normal, on dissout 10 grammes d'une préparation d'insuline ainsi obtenue dans 2 litres d'une solution de trichloro-butanol à 0,5 %. On y ajoute 1,3 gramme de chlorure de magnésium et 15 grammes de chlorure de sodium, ensuite on additionne le tout de 500 cm3 d'une solution contenant 14,4 grammes de phosphate de sodium secondaire + 8 cm3 de solution de soude caustique normale dans une solution de triohloro-butanol à 0,5 %. On obtient une suspension qui contient pour 1 cm3, 40 unités d'insuline et qui présente une valeur de pH d'environ   7.   



   EXEMPLE 5 :
On dissout dans 1/2 litre d'eau acidulée, 5 grammes d'une préparation d'insuline exempte de zinc, contenant environ 10 unités par milligramme. On additionne la solution d'un demi litre de phosphate-tampon ( 167,5 grammes de phosphate de sodium secondaire, 27,5 grammes de phosphate de potassium primaire selon Soerensen, pour 10 litres d'eau distillée ) + 40 cm d'acide chlorhydrique normal + 25 cm3 d'une solution de chlorure de magnésium à   1 % +   100 cm3 d' acétone et on règle le tout à une valeur de pH de 7 au moyen d'ammoniaque normale. On essore la floculation qui s'est formée pendant ce procédé et on règle la solution claire à une valeur de pH de 6.

   Si l'on fait reposer cette solution pendant une nuit dans une machine frigorifique, l'insuline 

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 se précipite sous forme micro-cristalline; on essore l'insuline et on la sèche à l'aide d'acétone et d'éther.

Claims (1)

1. RESUME.

   Procédé de fabrication de préparations à base d'insuline, caractérisé par les points suivants, ensemble ou séparément : 1. ) On fait réagir l'hormone avec un sel de magnésium.

   2. ) On additionne en outre l'insuline soit avant la réaction avec un sel de magnésium, soit après cette réaotion, d'une substance ( agent retardateur ) provoquant une résorption plus lente de l'hormone.

   3. ) On se sert à titre d'agent retardateur d'une substance telle qu'elle a été utilisée dans le brevet belge ? 430.582 de la même demanderesse, en date du 11 octobre 1938 intitulé " Procédé de fabrication de préparations à base de l'hormone du pancréas abaissant le taux du sucre dans le sang ( Insuline ) ".