BE1023340B1 - Composes - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne le composé 6-amino-9-[5-(4- pipéridinyl)pentyl]-2-[(1S)-1-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one ou un sel pharmacetiquement acceptable de celui-ci.

Description

COMPOSÉS Déclaration concernant les recherches subventionnées par le gouvernement fédéral

Les aspects de la présente invention ont été obtenus avec le support du gouvernement des Etats-Unis conformément au contrat NIH HHSN272200900036C, le gouvernement des Etats-Unis pouvant avoir certains droits sur la présente invention. Référence croisée à des brevets ou demandes de brevets associés

Ceci est une demande de traité de coopération en matière de brevets et revendique le bénéfice de la demande US provisoire No. de série 62/079 027 déposée le 13 novembre 2014.

Contexte de l’invention

La présente invention concerne des composés, des procédés pour les préparer, des compositions les contenant et leur utilisation thérapeutique comme adjuvants de vaccin et dans le traitement de divers troubles.

Le système immunitaire inné reconnaît les microbes par l’intermédiaire d’un nombre limité de récepteurs de reconnaissance de motifs moléculaires (PRR) codés par les lignées germinales, ces récepteurs ayant un certain nombre de caractéristiques importantes.

Les récepteurs de type Toll (TLR) forment une famille de PRR structurellement apparentés qui détectent les composants microbiens hautement conservés, communs à une grande classe de pathogènes. Les TLR sont exprimés sur les cellules immunitaires et, après activation, mobilisent les mécanismes de défense qui ont pour but d’éliminer les pathogènes envahissants. Parmi les plus de dix TLR connus qui ont été identifiés chez les humains, certains semblent être restreints aux compartiments cytoplasmiques et impliqués dans la détection des acides nucléiques du non-soi (TLR 3, 7, 8 et 9). Voir, par exemple, Akira et al., Nat Rev Immunol 2004, 4, 499-511 ; O'Neill, et al., Nat Rev Immunol 2013,13, 453-460. L’activation des TLR régule les voies de signalisation intracellulaire aboutissant l’expression de cytokines/chimiokines inflammatoires et d’interférons de type I (IFNa/β), ce qui peut entraîner le renforcement préférentiel des réponses immunitaires à médiation humorale spécifiques d’un antigène et à médiation cellulaire. TLR7 et TLR8 sont des membres du sous-groupe des TLR (TLR 3, 7, 8 et 9) localisés dans le compartiment endosomique des cellules. TLR7 joue un rôle crucial dans la défense antivirale par la reconnaissance des ARNss (Diebold S.S. et al, Science, 2004 : 303, 1529-1531 ; et Lund J. M. et al, PNAS, 2004 : 101, 5598-5603). TLR7 présente un profil d’expression restreint chez l’homme et est exprimé principalement par les lymphocytes B et les cellules dendritiques plasmacytoïde (pDC) et, dans une moindre mesure, par les monocytes. Les DC plasmacytoïde sont une population unique des cellules dendritiques d’origine lymphoïde (traditionnellement, 0,2 % à 0,8 % des cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC)) et sont les principales cellules produisant l’interféron de type I en sécrétant des taux élevés d’interféron-alpha (IFNa) et d’interféron-bêta (IFNP) en réponse aux infections virales (Liu Y-i,Annu. Rev. Immunol., 2005 : 23, 275-306).

Il a été décrit des agonistes à petites molécules de TLR7 pouvant induire des cytokines chez les animaux et chez les hommes (Takeda K. et al, Annu. Rev. Immunol., 2003 : 21, 335-76). Les agonistes de TLR7 comprennent des composés d’imidazoquinoline, tels que l’imiquimod et le résiquimod, des analogues d’oxoadénine et également des analogues de nucléoside, tels que la loxoribine et la 7-thia-8-oxoguanosine, qui sont connus pour induire l’interféron alpha. La publication de demande de brevet internationale numéro WO 2007/034 882 (PCT/JP 2006/318 758 ; Dainippon Sumitomo Pharma Co. Ltd./AstraZeneca Aktiebolag) décrit certains composés d’adénine identifiés comme étant utiles comme médicament.

Certains composés dérivés de l’adénine se sont avérés induire l’interféron humain. Les composés qui induisent l’interféron humain peuvent être utiles comme adjuvants de vaccin, ainsi que dans le traitement de divers troubles, comme les maladies infectieuses, l’asthme, le cancer, les affections inflammatoires et les maladies allergiques. Il est donc souhaitable de proposer des composés présentant une sélectivité pour TLR7/8 et/ou une activité sur TLR7/8 et une induction de cytokines relativement élevée. Résumé de l’invention

Dans un premier aspect, il est proposé un composé de formule (I) :

dans laquelle ; R1 est un butoxy ou un méthylbutoxy ; R2 est un groupe ayant la structure :

où n est un nombre entier ayant une valeur de 5 ;

Het est un hétérocycle saturé à six chaînons contenant cinq atomes de carbone et un atome d’azote, dans lequel Het est lié au fragment -(CH2)n- sur le carbone en position 4 de l’hétérocycle ; et R3 est un hydrogène ; ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Dans un autre aspect de l’invention, R1 est choisi parmi le 1-méthylbutoxy et le (15)-1-méthylbutoxy.

Dans un autre aspect de l’invention, R1 est le 1-méthylbutoxy.

Dans un autre aspect de l’invention, R1 est le (15)-1-méthylbutoxy.

Un aspect supplémentaire de l’invention est un composé de formule (I), dans laquelle R1 est le (15)-1-méthylbutoxy ; R2 est un groupe ayant la structure :

où n est un nombre entier ayant une valeur de 5 ;

Het est une pipéridine, dans laquelle Het est lié au fragment -(CH2)n- sur le carbone en position 4 de l’hétérocycle ; et

R3 est un hydrogène ; ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Un aspect supplémentaire de l’invention est le composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Il est proposé, comme aspect supplémentaire de l’invention, un composé de formule (I), ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour son utilisation en thérapie. Il sera compris que, quand un composé de formule (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci est utilisé en thérapie, il est utilisé comme agent thérapeutique actif.

Il est proposé, comme aspect supplémentaire, de l’invention le composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour son utilisation en thérapie. Il sera compris que, quand le composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, est utilisé en thérapie, il est utilisé comme agent thérapeutique actif.

Il est donc également proposé un composé de formule (I), ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour son utilisation dans le traitement des maladies allergiques ou d’autres affections inflammatoires, des maladies infectieuses ou du cancer.

Il est donc également proposé le composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour son utilisation dans le traitement des maladies allergiques ou d’autres affections inflammatoires, des maladies infectieuses ou du cancer.

Il est donc également proposé un composé de formule (I), ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour son utilisation dans le traitement de la rhinite allergique.

Il est également proposé le composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour son utilisation dans le traitement de la rhinite allergique.

Il est donc également proposé un composé de formule (I), ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour son utilisation dans le traitement de l’asthme.

Il est donc également proposé le composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour son utilisation dans le traitement de l’asthme.

Il est proposé en outre une composition immunogène comprenant un antigène ou une composition d’antigènes et un composé de formule (I), ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Il est proposé en outre une composition immunogène comprenant un antigène ou une composition d’antigènes et le composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Il est proposé en outre une composition de vaccin comprenant un antigène ou une composition d’antigènes et un composé de formule (I), ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Il est proposé en outre une composition de vaccin comprenant un antigène ou une composition d’antigènes et le composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Il est proposé en outre un procédé de traitement ou de prévention d’une maladie, comprenant l’administration à un sujet humain souffrant ou susceptible de souffrir d’une maladie, d’une composition immunogène comprenant un antigène ou une composition d’antigènes et un composé de formule (I), ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Il est proposé en outre un procédé de traitement ou de prévention d’une maladie, comprenant l’administration à un sujet humain souffrant ou susceptible de souffrir d’une maladie, d’une composition immunogène comprenant un antigène ou une composition d’antigènes et le composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Il est proposé en outre un procédé de traitement ou de prévention d’une maladie, comprenant l’administration à un patient humain souffrant ou susceptible de souffrir d’une maladie, d’une composition de vaccin comprenant un antigène ou une composition d’antigènes et un composé de formule (I), ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Il est proposé en outre un procédé de traitement ou de prévention d’une maladie, comprenant l’administration à un patient humain souffrant ou susceptible de souffrir d’une maladie, d’une composition de vaccin comprenant un antigène ou une composition d’antigènes et le composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Il est proposé en outre l’utilisation d’un composé de formule (I), ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour la préparation d’une composition immunogène comprenant un antigène ou une composition d’antigènes, pour le traitement ou la prévention d’une maladie.

Il est proposé en outre l’utilisation du composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour la préparation d’une composition immunogène comprenant un antigène ou une composition d’antigènes, pour le traitement ou la prévention d’une maladie.

Il est proposé en outre l’utilisation d’un composé de formule (I), ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour la préparation d’une composition de vaccin comprenant un antigène ou une composition d’antigènes, pour le traitement ou la prévention d’une maladie.

Il est proposé en outre l’utilisation du composé 6-amino-9-[5-(4- pipéridinyl)pentyl]-2-[(l S)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour la préparation d’une composition de vaccin comprenant un antigène ou une composition d’antigènes, pour le traitement ou la prévention d’une maladie.

Il est proposé en outre l’utilisation d’un composé de formule (I), ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour la préparation d’un médicament destiné au traitement des maladies allergiques ou d’autres affections inflammatoires, des maladies infectieuses ou du cancer.

Il est proposé en outre l’utilisation du composé 6-amino-9-[5-(4- pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour la préparation d’un médicament destiné au traitement des maladies allergiques ou d’autres affections inflammatoires, des maladies infectieuses ou du cancer.

Il est proposé en outre l’utilisation d’un composé de formule (I), ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour la préparation d’un médicament destiné au traitement de la rhinite allergique.

Il est proposé en outre l’utilisation du composé 6-amino-9-[5-(4- pipéridinyl)pentyl]-2-[(l S)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour la préparation d’un médicament destiné au traitement de la rhinite allergique.

Il est proposé en outre l’utilisation d’un composé de formule (I), ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour la préparation d’un médicament destiné au traitement de l’asthme.

Il est proposé en outre l’utilisation du composé 6-amino-9-[5-(4- pipéridinyl)pentyl]-2-[(l S)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour la préparation d’un médicament destiné au traitement de l’asthme.

Il est proposé en outre un procédé de traitement des maladies allergiques ou d’autres affections inflammatoires, des maladies infectieuses ou du cancer, ledit procédé comprenant l’administration à un sujet humain en ayant besoin d’une quantité thérapeutiquement efficace d’un composé de formule (I), ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Il est proposé en outre un procédé de traitement des maladies allergiques ou d’autres affections inflammatoires, des maladies infectieuses ou du cancer, ledit procédé comprenant l’administration à un sujet humain en ayant besoin d’une quantité thérapeutiquement efficace du composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Il est proposé en outre un procédé de traitement de la rhinite allergique, ledit procédé comprenant l’administration à un sujet humain en ayant besoin d’une quantité thérapeutiquement efficace d’un composé de formule (I), ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Il est proposé en outre un procédé de traitement de la rhinite allergique, ledit procédé comprenant l’administration à un sujet humain en ayant besoin d’une quantité thérapeutiquement efficace du composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Il est proposé en outre un procédé de traitement de l’asthme, ledit procédé comprenant l’administration à un sujet humain en ayant besoin d’une quantité thérapeutiquement efficace d’un composé de formule (I), ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.

Il est proposé en outre un procédé de traitement de l’asthme, ledit procédé comprenant l’administration à un sujet humain en ayant besoin d’une quantité thérapeutiquement efficace du composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci. L’invention propose, dans un aspect supplémentaire, une combinaison comprenant un composé de formule (I), ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, conjointement avec au moins un autre agent thérapeutiquement actif. L’invention propose, dans un aspect supplémentaire, une combinaison comprenant le composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthyl-butyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, conjointement avec au moins un autre agent thérapeutiquement actif.

Il est proposé en outre une composition pharmaceutique comprenant un composé de formule (I), ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, et un ou plusieurs diluants ou supports pharmaceutiquement acceptables.

Il est proposé en outre une composition pharmaceutique comprenant le composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9- dihydro-8H-purin-8-one, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, et un ou plusieurs diluants ou supports pharmaceutiquement acceptables.

Il est également proposé un procédé de préparation d’une composition pharmaceutique qui comprend le mélange d’un composé de formule (I), ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, avec un ou plusieurs diluants ou supports pharmaceutiquement acceptables.

Il est également proposé un procédé de préparation d’une composition pharmaceutique qui comprend le mélange du composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)-pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, avec un ou plusieurs diluants ou supports pharmaceutiquement acceptables.

Les composés de l’invention et leurs sels peuvent être préparés par la méthodologie décrite dans le présent document, qui constitue un aspect supplémentaire de la présente invention.

Par conséquent, il est proposé un procédé de préparation d’un composé de formule (I), ou du composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthyl-butyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ledit procédé comprenant la déprotection d’un composé de formule (II) :

dans laquelle R1 et R2 sont tels que définis ci-dessus pour un composé de formule (I) et R4 est un alkyle en Ci à Ce, et ensuite, si nécessaire, la mise en œuvre d’une ou de plusieurs des étapes facultatives suivantes : (i) l’élimination d’un quelconque groupe protecteur nécessaire ; (ii) la préparation d’un sel du composé ainsi formé.

Il est proposé en outre un procédé de préparation d’un composé de formule (I), ou du composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ledit procédé comprenant la conversion d’un composé de formule (II) en un composé supplémentaire de formule (IIP) et ensuite, si nécessaire, la mise en œuvre d’une ou de plusieurs des étapes facultatives suivantes : (i) l’élimination d’un quelconque groupe protecteur nécessaire ; (ii) la préparation d’un sel du composé ainsi formé.

Dans un autre mode de réalisation, un composé de formule (I), ou le composé 6-amino-9-[5 -(4-pipéridinyl)pentyl] -2- [( 1 S)-1 -méthylbutyl] oxy] -7,9-dihydro-8H-purin-8-one, peut également être préparé par la déprotection d’un composé de formule (IIP) :

dans laquelle R1 est tel que défini ci-dessus pour un composé de formule (I), R4 est tel que défini ci-dessus pour un composé de formule (II), et R2P est un groupe R2 protégé dans lequel le groupe protecteur est un groupe protecteur approprié, par exemple un groupe tert-butoxycarbonyle (Boc) ou un groupe carbobenzyloxy, et ensuite, si nécessaire, la mise en œuvre d’une ou de plusieurs des étapes facultatives suivantes : (i) l’élimination d’un quelconque groupe protecteur nécessaire ; (ii) la préparation d’un sel du composé ainsi formé.

La présente invention couvre toutes les combinaisons des modes de réalisation et des aspects décrits dans le présent document.

Description des dessins

La figure 1 est un graphique représentant la réponse NFKB de cellules (A) HEK293-hTLR7 et (B) HEK293-hTLR8 traitées pendant 24 heures avec les composés d’oxoadénine 3a à 3g ; (C) présente les valeurs de CE50 de hTLR7 et de hTLR8 pour les oxoadénines 3a à 3 g. Les nombres entourés par un cercle sur le graphique indiquent la longueur du lieur à base de carbone de chaque composé.

La figure 2 (A) présente l’induction du TNFalpha dans les hPBMC et (B) l’expression d’IL-6 dans les mDC après stimulation avec les composés d’oxoadénine 3a à 3g. L’expérience a été réalisée en triple dans des hPBMC provenant de trois donneurs différents en bonne santé. Les nombres entourés par un cercle indiquent la longueur du lieur à base de carbone de chaque composé.

La figure 3 est un graphique représentant l’induction d’IFNalpha dans des hPBMC après stimulation avec les oxoadénines 3a à 3g.

La figure 4 est un graphique représentant la réponse NFkB de cellules (A) HEK293-hTLR7 et (B) HEK293-hTLR8 traitées pendant 24 heures avec les composés d’oxoadénine 3b, 3f ou 3x, ou l’imidazoquinoline CRX642.

La figure 5 est un graphique représentant l’induction de TNFalpha à partir de 1 PBMC humaines par stimulation avec différents composés d’oxoadénine (3b, 3f ou 3x), ou rimidazoquinoline CRX642, ou le composé AGP CRX601.

La figure 6 est un graphique représentant l’induction d’IFN-alpha dans des PBMC humaines par stimulation avec différents composés d’oxoadénine (3b, 3f ou 3x) ou l’AGP CRX601 ou CRX642 (imidazoquinaline).

La figure 7 représente l’induction d’IFNalpha dans des pDC provenant de trois donneurs différents, telle que mesurée par ICS (coloration de cytokine intracellulaire), par stimulation avec différentes oxoadénines (3b, 3f ou 3x), à différents dosages.

La figure 8A est un graphique représentant l’induction d’IL-12p70 chez des PBMC humaines par différentes oxoadénines (3b, 3f ou 3x) ou l’AGP CRX601 (agoniste de TLR4) ou CRX642 (imidazoquinaline). La figure 8B est un graphique représentant l’induction d’IL-12p70 chez des PBMC humaines par différentes oxoadénines (3b, 3f ou 3x) en combinaison avec CRX601 (agoniste de TLR4), ou CRX642 (imidazoquinaline) en combinaison avec CRX601.

La figure 9 est le schéma I présentant la synthèse du composé d’oxoadénine 3x, un composé de formule (I).

Description détaillée de l’invention

Il est décrit ici la synthèse de composés d’oxoadénine substituée en position C9 avec un fragment pipéridinylalkyle, et contenant un butoxy ou un méthylbutoxy en C2. Une évaluation in vitro avec des cellules HEK293 transfectées avec le TLR7 humain ou le TLR8 humain, et avec des PBMC humaines, a montré que la sélectivité pour/1’activité sur hTLR7/8 et l’induction de cytokines pouvaient être modulées en faisant varier la longueur du lieur à base de carbone. En outre, il a été déterminé que l’introduction d’un groupe méthyle sur le premier carbone du butoxy en C2 (pour obtenir un méthylbutoxy) affecte à la fois l’activité de TLR7 et de TLR8.

Des agonistes oligonucléotides de TLR7 et de TLR9, et des agonistes à petite molécule à base de purine de TLR7, ont été décrits, lesquels peuvent induire l’interféron alpha à partir de ces types cellulaires chez les animaux et chez l’homme, (Takeda K. et al, Annu. Rev. Immunol., 2003 : 21, 335-76). Des agonistes de TLR7 comprennent des composés d’imidazoquinoline, tels que l’imiquimod et le résiquimod, des analogues d’oxoadénine et également des analogues de nucléoside, tels que la loxoribine et la 7-thia-8-oxoguanosine, qui sont connus pour induire l’interféron alpha. La publication de demande de brevet internationale numéro WO 2007/034 882 (PCT/JP 2006/318 758 ; Dainippon Sumitomo Pharma Co. Ltd./AstraZeneca Aktiebolag) décrit certains composés d’adénine identifiés comme étant utiles comme médicament.

Certains composés dérivés de l’adénine décrits dans le document WO 2010/018 134 (PCT/EP 2009/060 267) se sont avérés être des inducteurs d’interféron humain et peuvent posséder un profil amélioré (par rapport à certains autres inducteurs connus d’interféron humain), par exemple une meilleure activité thérapeutique, et peuvent être plus sélectifs pour l’IFNG que le facteur alpha de nécrose tumorale (TNFD). Par exemple, certains composés sont 1000 fois plus sélectifs pour l’induction de l’IFND que pour l’induction du TNFD. Les composés qui induisent l’interféron humain peuvent être utiles comme adjuvants de vaccin. Les composés qui induisent l’interféron humain peuvent être utiles dans le traitement de divers troubles, notamment des maladies infectieuses, du cancer, des affections inflammatoires et des maladies allergiques. Les composés qui induisent l’interféron humain peuvent être utiles dans le traitement de la rhinite allergique ou de l’asthme.

La présente invention est décrite en termes connus et compris par l’homme du métier. Pour plus de commodité, certains termes sont définis ci-après dans le présent document. Cependant, le fait que certains termes soient définis ne devrait pas être considéré comme étant une indication que les termes définis sont utilisés d’une manière contradictoire avec les significations ordinaires ou, en variante, qu’un terme quelconque qui est non défini est indéterminé ou non utilisé dans le cadre de la signification ordinaire et acceptée. Au contraire, tous les termes utilisés dans le présent document sont censés décrire l’invention, de telle manière que l’homme du métier puisse apprécier la portée de la présente invention. Les définitions suivantes sont destinées à clarifier, mais pas à limiter, les termes définis.

Le terme « alkyle » fait référence à la fois aux isomères aliphatiques à chaîne linéaire et à chaîne ramifiée de l’alkyle correspondant contenant jusqu’à huit atomes de carbone, par exemple jusqu’à six atomes de carbone, ou jusqu’à quatre atomes de carbone, ou jusqu’à deux atomes de carbone, ou un atome de carbone. De telles références au terme « alkyle » sont aussi applicables quand un groupe alkyle fait partie d’un autre groupe, par exemple un groupe alkylamino ou alcoxy. Des exemples de tels groupes alkyle et de groupes contenant des groupes alkyle sont un groupe alkyle en Ci à Cs, alkyle en Ci à Ce, alkylamino en Ci à Ce et alcoxy en Ci à Ce.

Le terme « hétérocycle » ou « hétérocyclyle » fait référence aux cycles aliphatiques hétérocycliques monocycliques saturés contenant cinq atomes de carbone et au moins un hétéroatome, ledit hétéroatome étant l’azote, l’oxygène ou le soufre. Ces cycles hétérocycliques comprennent la pipéridine ou le pipéridinyle, le cycle contenant cinq atomes de carbone et un azote en tant qu’hétéroatome.

Tel qu’utilisé dans le présent document en ce qui concerne les composés de formule I, le terme « lieur à base de carbone » fait référence au fragment -(CH2)n-, et peut être autrement nommé « lieur à base d’alkyle ». Par conséquent, un lieur à « cinq carbones » est -(CH2)5-.

Tout au long du présent mémoire, le système de numérotation des atomes du squelette de la purine généralement accepté est utilisé :

La liste suivante donne les définitions de certaines abréviations utilisées dans le présent document. La liste n’est pas exhaustive ; la signification des abréviations non définies ci-dessous sera facilement apparente à l’homme du métier. DCM dichlorométhane DMF N,N-diméthylformamide DMSO diméthylsulfoxyde ELISA méthode immuno-enzymatique

EtOAc acétate d’éthyle H heure HCl acide chlorhydrique

Et3N triéthylamine L litre LCSM chromatographie liquide -spectrométrie de masse

Mins minute SM spectrométrie de masse

NFkB facteur nucléaire kappa B RMN résonnance magnétique nucléaire RMNss résonnance magnétique nucléaire à l’état solide PBMC cellules mononucléaires du sang périphérique PBS solution physiologique tamponnée au phosphate PRR récepteur de reconnaissance de motifs moléculaires TA température ambiante

Retiré élimination du solvant sous pression réduite TFA acide trifluoroacétique TLR récepteur de type Toll TA température ambiante

Il est entendu que les références dans le présent document aux composés de l’invention signifient un composé de formule (I) sous forme de base libre ou sous forme de sel, par exemple un sel pharmaceutiquement acceptable.

Les sels des composés de formule (I) comprennent les sels pharmaceutiquement acceptables et les sels qui peuvent ne pas être pharmaceutiquement acceptables mais qui peuvent être utiles dans la préparation des composés de formule (I) et des sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci. Les sels peuvent être dérivés de certains acides inorganiques ou organiques, ou de certaines bases inorganiques ou organiques. L’invention comprend dans sa portée toutes les formes stœchiométriques et non stœchiométriques possibles des sels des composés de formule (I).

Des exemples de sels sont les sels pharmaceutiquement acceptables. Les sels pharmaceutiquement acceptables comprennent les sels d’addition à un acide et les sels d’addition à une base. Pour une vue d’ensemble sur les sels appropriés, voir Berge et al., J. Pharm. Sci., 66 : 1-19 (1977).

Des exemples de sels d’addition à un acide pharmaceutiquement acceptables d’un composé de formule (I) comprennent les sels de bromhydrate, chlorhydrate, sulfate, p-toluènesulfonate, méthanesulfonate, naphtalènesulfonate et phénylsulfonate.

Des exemples de sels de bases pharmaceutiquement acceptables comprennent les sels de métaux alcalins, tels que ceux de sodium et de potassium, et les sels de métaux alcalino-terreux, tels que ceux de calcium et de magnésium.

Les sels peuvent être formés en utilisant des techniques bien connues dans l’art, par exemple par précipitation dans une solution suivie d’une filtration, ou par évaporation du solvant. Généralement, un sel d’addition à un acide pharmaceutiquement acceptable peut être formé par réaction d’un composé de formule (I) avec un acide fort approprié (tel que les acides bromhydrique, chlorhydrique, sulfurique, p-toluènesulfonique, méthanesulfonique ou naphtalènesulfonique), facultativement dans un solvant approprié, tel qu’un solvant organique, pour donner le sel qui est habituellement isolé, par exemple par cristallisation et filtration.

Il sera compris que de nombreux composés organiques peuvent former des complexes avec les solvants dans lesquels ils sont mis à réagir ou avec lesquels ils sont précipités ou cristallisés. Ces complexes sont appelés « solvatés ». Par exemple, un complexe avec de l’eau est appelé « hydrate ». Des solvants ayant des points d’ébullition élevés et/ou des solvants ayant une forte tendance à former des liaisons hydrogène, tels que l’eau, l’éthanol, l’alcool isopropylique et la N-méthyl pyrrolidinone, peuvent être utilisés pour former des solvatés. Les procédés d’identification de solvatés comprennent, mais sans s’y limiter, la RMN et la microanalyse. Les composés et les sels de l’invention peuvent exister sous des formes solvatées et non solvatées. Tel qu’utilisé dans le présent document, le terme « solvaté » englobe les solvatés à la fois d’un composé une forme de base libre et de n’importe quel sel de celui-ci.

Certains des composés de l’invention peuvent contenir des atomes chiraux et/ou des liaisons multiples, et peuvent donc exister sous une ou plusieurs formes stéréoisomères. La présente invention englobe tous les stéréoisomères des composés de l’invention, y compris les isomères optiques, qu’ils soient des stéréoisomères individuels ou des mélanges de ceux-ci, y compris les modifications racémiques. Un stéréoisomère quelconque peut contenir moins de 10 % en poids, par exemple moins de 5 % en poids, ou moins de 0,5 % en poids, d’un autre stéréoisomère quelconque. Par exemple, un isomère optique quelconque peut contenir moins de 10 % en poids, par exemple moins de 5 % en poids, ou moins de 0,5 % en poids, de son antipode.

Certains des composés de l’invention peuvent exister sous des formes tautomères. Il est entendu que la présente invention englobe tous les tautomères des composés de l’invention, qu’ils soient des tautomères individuels ou des mélanges de ceux-ci, que cela soit indiqué explicitement ou non dans les présentes formules.

Les composés de l’invention peuvent être sous une forme cristalline ou amorphe. En outre, certaines des formes cristallines des composés de l’invention peuvent exister sous forme de polymorphes, lesquels sont tous inclus dans la portée de la présente invention. La forme ou les formes polymorphes les plus thermodynamiquement stables des composés de l’invention présentent un intérêt particulier.

Les formes polymorphes des composés de l’invention peuvent être caractérisées et différenciées au moyen d’un certain nombre de techniques analytiques classique telles que, mais sans s’y limiter, la diffraction des rayons X sur poudre (XRPD), la spectroscopie infrarouge (IR), la spectroscopie RAMAN, l’analyse calorimétrique différentielle à compensation de puissance (DSC), l’analyse thermogravimétrique (TGA) et la résonance magnétique nucléaire à l’état solide (RMNss).

Il sera compris d’après ce qui précède que les hydrates, les isomères et les formes polymorphes des composés de formule (I) et de leurs sels sont inclus dans la portée de l’invention.

Des exemples d’états pathologiques sur lesquels les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci ont des effets potentiellement bénéfiques comprennent les maladies allergiques et d’autres affections inflammatoires (par exemple, la rhinite allergique et l’asthme), les maladies infectieuses et le cancer. Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent également être potentiellement utilisés comme adjuvants de vaccin.

En tant que modulateurs de la réponse immunitaire, les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent également être utiles comme agent thérapeutique, soit seuls, soit en combinaison avec d’autres composés, dans le traitement et/ou la prévention de maladies médiées par l’immunité comme, mais sans s’y limiter, les maladies inflammatoires ou allergiques, telles que l’asthme, la rhinite allergique et la rhinoconjonctivite, l’allergie alimentaire, les réactions d’hypersensibilité pulmonaire, la pneumonie à éosinophiles, les troubles d’hypersensibilité retardée, l’athérosclérose, la pancréatite, la gastrite, la colite, l’ostéoarthrose, le psoriasis, la sarcoïdose, la fibrose pulmonaire, le syndrome de détresse respiratoire, la bronchiolite, la bronchopneumopathie chronique obstructive, la sinusite, la fibrose kystique, la kératose actinique, la dysplasie cutanée, l’urticaire chronique, l’eczéma et tous les types de dermatite.

Tel qu’utilisé dans le présent document, le terme «prévention» (ou « prophylaxie ») fait référence à l’administration ou à l’utilisation d’un composé ou d’une composition chez un sujet, avant que le sujet ne développe une maladie particulière, afin de réduire le risque chez le sujet de développer la maladie ou de réduire la gravité de la maladie si le sujet la développe. Par conséquent, bien qu’une prévention ou qu’une prophylaxie ne puisse pas empêcher le développement d’une maladie chez chaque sujet traité, la survenue ou la gravité de la maladie dans un groupe de sujets traités sera améliorée par rapport à un groupe témoin de sujets non traités.

Les composés de formule (I) ou les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent également être utiles dans le traitement et/ou la prévention des réactions contre les infections respiratoires telles que, mais sans s’y limiter, les exacerbations virales des voies respiratoires et l’amygdalite. Les composés peuvent également être utiles dans le traitement et/ou la prévention des maladies autoimmunes telles que, mais sans s’y limiter, la polyarthrite rhumatoïde, l’arthrite psoriasique, le lupus érythémateux disséminé, le syndrome de Sjôegren, la spondylarthrite ankylosante, la sclérodermie, la dermatomyosite, le diabète, le rejet de greffe, notamment la réaction de greffe contre l’hôte, les affections abdominales inflammatoires telles que, mais sans s’y limiter, la maladie de Crohn et le recto-colique hémorragique.

Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent également être utiles dans le traitement des maladies infectieuses telles que, mais sans s’y limiter, celles provoquées par les virus de l’hépatite (par exemple, le virus de l’hépatite B, le virus de l’hépatite C), le virus de l’immunodéficience humaine, les papillomavirus, les herpèsvirus, les virus respiratoires (par exemple, les influenzavirus, le virus respiratoire syncytial, le rhinovirus, le métapneumovirus, le parainfluenzavirus, le SRAS) et le virus du Nil occidental. Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent également être utiles dans le traitement des infections microbiennes provoquées, par exemple, par les bactéries, les champignons ou les protozoaires. Celles-ci comprennent, mais sans s’y limiter, la tuberculose, la pneumonie bactérienne, l’aspergillose, l’histoplasmose, la candidose, la pneumocystose, la lèpre, la chlamydia, une maladie à cryptocoque, la cryptosporidiose, la toxoplasmose, la leishmaniose, le paludisme et la trypanosomiase.

Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent également être utiles dans le traitement de divers cancers, en particulier le traitement des cancers qui sont connus pour être sensibles à une immunothérapie et comprenant, mais sans s’y limiter, le cancer à cellules rénales, le cancer du poumon, le cancer du sein, le cancer colorectal, le cancer de la vessie, le mélanome, la leucémie, les lymphomes et le cancer des ovaires.

Un « sujet », tel qu’utilisé dans le présent document, comprend les sujets mammifères, et inclut les sujets mammifères non primates, les sujets primates et les sujets humains. Tel qu’utilisé dans le présent document, la thérapie ou le traitement d’une maladie fait référence à une action capable d’améliorer les symptômes de la maladie et/ou de prolonger l’espérance de vie attendue ou la survie sans maladie d’un sujet souffrant de la maladie. Les références, dans le présent document, à un traitement ou à une thérapie peuvent s’étendre, en fonction de l’affection, à un traitement prophylactique pour réduire le risque qu’un sujet contracte ou développe une maladie.

Comme mentionné dans le présent document, les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent être utiles comme agent thérapeutique.

Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent être formulés à des fins d’administration par n’importe quelle voie commode.

Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent être formulés, par exemple, pour une administration orale, topique, par inhalation, intranasale, buccale, parentérale (par exemple, intraveineuse, sous-cutanée, intradermique ou intramusculaire) ou rectale. Dans un aspect, les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci sont formulés pour une administration orale. Dans un aspect supplémentaire, les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci sont formulés pour une administration topique, par exemple une administration intranasale ou par inhalation.

Les comprimés et les capsules pour une administration orale peuvent contenir des excipients classiques, tels que des agents liants, par exemple un sirop, la gomme arabique, la gélatine, le sorbitol, la gomme adragante, le mucilage d’amidon, la cellulose ou la polyvinylpyrrolidone ; des charges, par exemple le lactose, la cellulose microcristalline, un sucre, l’amidon de maïs, le phosphate de calcium ou le sorbitol ; des lubrifiants, par exemple le stéarate de magnésium, l’acide stéarique, le talc, le polyéthylèneglycol ou la silice ; des défilants, par exemple l’amidon de pomme de terre, la croscarmellose sodique ou le glycolate d’amidon de sodium ; ou des agents mouillants, tels que le laurylsulfate de sodium. Les comprimés peuvent être enrobés selon les procédés bien connus dans l’art.

Les préparations liquides orales peuvent se présenter sous la forme, par exemple, de suspensions, de solutions, d’émulsions aqueuses ou huileuses, de sirops ou d’élixirs, ou peuvent se présenter sous la forme d’un produit sec pour reconstitution avec de l’eau ou un autre véhicule approprié avant l’utilisation. De telles préparations liquides peuvent contenir des additifs classiques, tels que des agents de mise en suspension, par exemple le sirop de sorbitol, la méthylcellulose, le sirop de glucose/sucre, la gélatine, l’hydroxyméthylcellulose, la carboxyméthylcellulose, un gel de stéarate d’aluminium ou des graisses comestibles hydrogénées ; des agents émulsifiants, par exemple la lécithine, le monooléate de sorbitane ou la gomme arabique ; des véhicules non aqueux (qui peuvent comprendre des huiles comestibles), par exemple l’huile d’amande douce, l’huile de coco fractionnée, des esters huileux, le propylèneglycol ou l’alcool éthylique ; ou des conservateurs, par exemple, les p-hydroxybenzoates de méthyle ou de propyle ou l’acide sorbique. Les préparations peuvent également contenir des sels tampons, des agents aromatisants, des colorants et/ou des édulcorants (par exemple, le mannitol) le cas échéant.

Les formulations pour administration intranasale comprennent les formulations aqueuses administrées dans le nez par des gouttes ou par une pompe pressurisée. Les formulations appropriées contiennent de l’eau comme diluant ou support à cette fin. Les compositions pour administration dans le poumon ou le nez peuvent contenir un ou plusieurs excipients, par exemple un ou plusieurs agents de mise en suspension, un ou plusieurs conservateurs, un ou plusieurs tensioactifs, un ou plusieurs agents d’ajustement de la tonicité, un ou plusieurs cosolvants, et peuvent comprendre des composants pour ajuster le pH de la composition, par exemple un système tampon. En outre, la composition peut contenir d’autres excipients, tels que des antioxydants, par exemple le métabisulfite de sodium, et des agents de masquage de goût. Les compositions peuvent également être administrées dans le nez ou dans d’autres régions des voies respiratoires par nébulisation.

Les compositions intranasales peuvent permettre au(x) composé(s) de formule (I) ou au(x) sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci d’être délivrés à toutes les zones des cavités nasales (le tissu cible) et, en outre, peuvent permettre au(x) composé(s) de formule (I) ou au(x) sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci de rester en contact avec le tissu cible pendant des périodes de temps plus longues. Un régime de dosage approprié pour les compositions intranasales serait que le patient inhale lentement par le nez après le nettoyage de la cavité nasale. Pendant l’inhalation, la composition peut être administrée dans une narine, tandis que l’autre est manuellement compressée. Cette procédure peut ensuite être répétée pour l’autre narine. Traditionnellement, une ou deux pulvérisations par narine peuvent être administrées en suivant la procédure susmentionnée, une, deux ou trois fois par jour, idéalement une fois par jour. Les compositions intranasales appropriées pour une administration une fois par jour présentent un intérêt particulier.

Le ou les agents de mise en suspension, s’ils sont inclus, seront habituellement présents en une quantité de 0,1 % à 5 % (en poids/poids), comme 1,5 % à 2,4 % (en poids/poids), sur la base du poids total de la composition. Des exemples d’agents de mise en suspension pharmaceutiquement acceptables comprennent, mais sans s’y limiter, l’AVICEL® (cellulose microcristalline et carboxyméthylcellulose sodique), la carboxyméthylcellulose sodique, le veegum, la gomme adragante, la bentonite, la méthylcellulose, la gomme xanthique, le carbopol et les polyéthylèneglycols.

Les compositions pour administration dans le poumon ou le nez peuvent contenir un ou plusieurs excipients et peuvent être protégées contre une contamination et croissance microbienne ou fongique par l’inclusion d’un ou de plusieurs conservateurs. Des exemples d’agents antimicrobiens ou de conservateurs pharmaceutiquement acceptables comprennent, mais sans s’y limiter, les composés d’ammonium quaternaire (par exemple, le chlorure de benzalkonium, le chlorure de benzéthonium, le cétrimide, le chlorure de cétylpyridinium, le chlorure de lauralkonium et le chlorure de myristylpicolinium), les agents au mercure (par exemple, le nitrate phénylmercurique, l’acétate phénylmercurique et le thimérosal), les agents alcooliques (par exemple, la chlorobutanol, l’alcool phényléthylique et l’alcool benzylique), les esters antibactériens (par exemple, les esters d’acide para-hydroxybenzoïque), les agents chélatants telles que l’édétate disodique (EDTA) et d’autres agents antimicrobiens comme la chlorhexidine, le chlorocrésol, l’acide sorbique et ses sels (comme le sorbate de potassium) et la polymyxine. Des exemples d’agents antifongiques ou conservateurs pharmaceutiquement acceptables comprennent, mais sans s’y limiter, le benzoate de sodium, l’acide sorbique, le propionate de sodium, le méthylparabène, l’éthylparabène, le propylparabène et le butylparabène. Le ou les conservateurs, s’ils sont inclus, peuvent être présents en une quantité de 0,001 % à 1 % (en poids/poids), comme 0,015 % à 0,5 % (en poids/poids), sur la base du poids total de la composition.

Les compositions (par exemple, dans lesquelles au moins un composé est en suspension) peuvent comprendre un ou plusieurs tensioactifs dont la fonction est de faciliter la dissolution des particules de médicament dans la phase aqueuse de la composition. Par exemple, la quantité de tensioactif utilisée est une quantité qui ne provoquera pas un moussage pendant le mélange. Des exemples de tensioactifs pharmaceutiquement acceptables comprennent les alcools, esters et éthers gras, tels que le monooléate de sorbitane de polyoxyéthylène (20) (Polysorbate 80), les éthers de macrogol et les poloxamères. Le tensioactif peut être présent en une quantité située entre environ 0,01 % à 10 % (en poids/poids), comme 0,01 % à 0,75 % (en poids/poids), par exemple d’environ 0,5 % (en poids/poids), sur la base du poids total de la composition.

Un ou plusieurs agents d’ajustement de la tonicité peuvent être inclus pour atteindre une tonicité avec les fluides corporels, par exemple les fluides de la cavité nasale, ce qui permet de réduire les irritations. Des exemples d’agents d’ajustement de la tonicité pharmaceutiquement acceptables comprennent, mais sans s’y limiter, le chlorure de sodium, le dextrose, le xylitol, le chlorure de calcium, le glucose, la glycérine et le sorbitol. Un agent d’ajustement de la tonicité, s’il est présent, peut être inclus en une quantité de 0,1 % à 10 % (en poids/poids), comme 4,5 % à 5,5 % (en poids/poids), par exemple d’environ 5,0 % (en poids/poids), sur la base du poids total de la composition.

Les compositions de l’invention peuvent être tamponnées par l’ajout d’agents tampons appropriés, tels que le citrate de sodium, l’acide citrique, le trométamol, les phosphates tels que le phosphate disodique (par exemple, les formes dodécahydratées, heptahydratées, dihydratées et anhydres), ou le phosphate de sodium et leurs mélanges.

Un agent tampon, s’il est présent, peut être inclus en une quantité de 0,1 % à 5 % (en poids/poids), par exemple de 1 % à 3 % (en poids/poids) sur la base du poids total de la composition.

Des exemples d’agents de masquage de goût comprennent le sucralose, le saccharose, la saccharine ou un sel de celle-ci, le fructose, le dextrose, le glycérol, le sirop de maïs, l’aspartame, l’acésulfame-K, le xylitol, le sorbitol, l’érythritol, le glycyrrhizinate d’ammonium, la thaumatine, le néotame, le mannitol, le menthol, l’huile d’eucalyptus, le camphre, un agent aromatisant naturel, un agent aromatisant artificiel et leurs combinaisons.

Un ou plusieurs cosolvants peuvent être inclus pour faciliter la solubilisation du ou des composés médicamenteux et/ou des autres excipients. Des exemples de cosolvants pharmaceutiquement acceptables comprennent, mais sans s’y limiter, le propylène glycol, le dipropylène glycol, l’éthylène glycol, le glycérol, l’éthanol, les polyéthylèneglycols (par exemple, le PEG300 ou le PEG400) et le méthanol. Dans un mode de réalisation, le cosolvant est le propylène glycol.

Le ou les cosolvants, s’ils sont présents, peuvent être inclus en une quantité de 0,05 % à 30 % (en poids/poids), comme 1 % à 25 % (en poids/poids), par exemple d’un 1 % à 10 % (en poids/poids) sur la base du poids total de la composition.

Les compositions pour administration par inhalation comprennent des mélanges aqueux, organiques ou aqueux/organiques, une poudre sèche ou des compositions cristallines administrés dans les voies respiratoires par une pompe pressurisée ou un inhalateur, par exemple les inhalateurs de poudre sèche à réservoir, les inhalateurs de poudre sèche monodose, les inhalateurs de poudre sèche à multidoses préalablement mesurées, les inhalateurs nasaux ou les inhalateurs, nébuliseurs ou insufflateurs d’aérosol sous pression. Les compositions appropriées contiennent de l’eau en tant que diluant ou support à cette fin et peuvent être pourvues d’excipients classiques tels que des agents tampons, des agents modifiant la tonicité et équivalents. Des compositions aqueuses peuvent également être administrées dans le nez et d’autres régions des voies respiratoires par nébulisation. Ces compositions peuvent être des solutions ou suspensions aqueuses ou des aérosols délivrés à partir d’emballages pressurisés, comme un inhalateur-doseur, à l’aide d’un propulseur liquéfié approprié.

Les compositions pour administration topique dans le nez (par exemple, pour le traitement d’une rhinite) ou dans le poumon comprennent les compositions d’aérosol pressurisé et les compositions aqueuses délivrées dans les cavités nasales par une pompe pressurisée. Les compositions qui ne sont pas pressurisées et qui sont appropriées pour une administration par voie topique dans la cavité nasale présentent un intérêt particulier. Les compositions appropriées contiennent de l’eau en tant que diluant ou support à cette fin. Les compositions aqueuses pour administration dans le poumon ou le nez peuvent être pourvues d’excipients classiques tels que des agents tampons, des agents modifiant la tonicité et équivalents. Des compositions aqueuses peuvent également être administrées dans le nez par nébulisation.

Un distributeur de fluide peut traditionnellement être utilisé pour délivrer une composition fluide aux cavités nasales. La composition fluide peut être aqueuse ou non aqueuse, mais généralement aqueuse. Un tel distributeur de fluide peut avoir une buse de distribution ou un orifice de distribution à travers lequel une dose de la composition fluide est distribuée lors de l’application d’une force appliquée par l’utilisateur à un mécanisme de pompe du distributeur de fluide. De tels distributeurs de fluide sont généralement dotés d’un réservoir contenant de multiples doses de la composition fluide, les doses étant distribuées lors de l’actionnement séquentiel de la pompe. La buse ou l’orifice de distribution peut être conçu pour être inséré dans les narines de l’utilisateur afin d’introduire par pulvérisation la composition fluide dans la cavité nasale. Un distributeur de fluide du type susmentionné est décrit et illustré dans la publication de demande de brevet internationale numéro WO 2005/044 354 (Glaxo Group Limited). Dans un mode de réalisation, le distributeur de fluide est du type général illustré sur les figures 30 à 40 du document WO 2005/044 354.

Les compositions aqueuses contenant un composé de formule (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci peuvent également être délivrées par une pompe telle que décrite dans la publication de demande de brevet internationale numéro WO 2007/138 084 (Glaxo Group Limited), par exemple comme décrit en se référant aux figures 22 à 46 de ce document, ou telle que décrite dans le document WO 2011/098 451 (Glaxo Group Limited, GB 0 723 418.0), par exemple comme décrit en se référant aux figures 7 à 32 de ce document. La pompe peut être actionnée par un actionneur tel que décrit sur les figures 1 à 6 du document WO 2011/098 451.

Les compositions de poudre sèche pour administration topique dans le poumon par inhalation peuvent être présentées, par exemple, dans des capsules ou des cartouches par exemple de gélatine, ou dans des emballages coques composés, par exemple, d’une feuille d’aluminium stratifiée, à des fins d’utilisation dans un inhalateur ou un insufflateur. Les compositions de mélange de poudres contiennent généralement un mélange de poudres pour inhalation du composé de formule (I) ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci et une poudre de base appropriée (substance de support/diluant/excipient), comme des mono-, di- ou poly-saccharides (par exemple, le lactose ou l’amidon). Les compositions de poudre sèche peuvent également comprendre, en plus du médicament et du support, un excipient supplémentaire (par exemple, un agent ternaire tel qu’un ester de sucre, par exemple l’octoacétate de cellobiose, le stéarate de calcium ou le stéarate de magnésium).

Dans un mode de réalisation, une composition appropriée pour une administration par inhalation peut être incorporée dans une pluralité de récipients scellés pour dose disposée sur un ou plusieurs emballages de médicament montés à l’intérieur d’un dispositif d’inhalation approprié. Les récipients peuvent être ouverts par rupture, pelage ou d’une autre manière un à la fois et les doses de la composition pulvérulente sèche peuvent être administrées par inhalation sur un embout buccal du dispositif d’inhalation, comme cela est connu dans l’art. L’emballage de médicament peut prendre différentes formes, par exemple une forme de disque ou une bande allongée. Des dispositifs d’inhalation représentatifs sont les dispositifs DISKHALER™ et DISKUS™, commercialisés par GlaxoSmithKline.

Une composition pulvérulente sèche inhalable peut également être fournie sous la forme d’un réservoir en vrac dans un dispositif d’inhalation, le dispositif étant alors doté d’un mécanisme de dosage servant à mesurer une dose de la composition provenant du réservoir vers un canal d’inhalation où la dose peut être inhalée par un patient par l’intermédiaire d’un embout buccal du dispositif. Des exemples de dispositifs de ce type commercialisés sont TURBUHALER™ (AstraZeneca), TWISTHALER™ (Schering) et CLICKHALER™ (Innovata.)

Un autre procédé d’administration d’une composition pulvérulente sèche inhalable consiste à introduire des doses de la composition dans des capsules (une dose par capsule) qui sont ensuite chargées dans un dispositif d’inhalation , généralement par le patient à la demande. Le dispositif comporte un moyen pour ouvrir par rupture, perçage ou autre la capsule afin que la dose puisse être entraînée dans les poumons du patient quand il inhale par l’embout buccal. On peut citer comme exemple de tels dispositifs commercialisés le ROTAHALER™ (GlaxoSmithKline) et l’HANDIHALER™ (Boehringer Ingelheim.)

Les compositions d’aérosols pressurisées appropriées pour l’inhalation peuvent être soit une suspension, soit une solution et peuvent contenir un composé de formule (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci et un gaz propulseur approprié, tel qu’un fluorocarbone ou un chlorofluorocarbone contenant de l’hydrogène ou des mélanges de ceux-ci, en particulier des hydrofluoroalcanes, en particulier le 1,1,1,2- tétrafluoroéthane, le 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoro-n-propane ou un mélange de ceux-ci. La composition d’aérosol peut facultativement contenir des excipients de composition supplémentaires bien connus dans l’art, tels que des tensio-actifs, par exemple l’acide oléique, la lécithine ou un acide oligolactique ou un dérivé de ceux-ci, par exemple comme décrit dans le document WO 94/21 229 et le document WO 98/34 596 (Minnesota Mining and Manufacturing Company) et des cosolvants, par exemple l’éthanol. Les compositions pressurisées seront généralement retenues dans une boîte (par exemple, une boîte en aluminium) fermée avec une valve (par exemple, une valve-doseuse) et installées dans un actionneur doté d’un embout buccal.

Les pommades, les crèmes et les gels peuvent être formulés, par exemple, avec une base aqueuse ou huileuse avec l’ajout d’un agent épaississant et/ou gélifiant approprié et/ou des solvants. De telles bases peuvent donc comprendre, par exemple, de l’eau et/ou une huile, telle que l’huile de paraffine, ou une huile végétale, telle que l’huile d’arachide ou l’huile de ricin, ou un solvant, tel que le polyéthylèneglycol. Les agents épaississants et les agents gélifiants qui peuvent être utilisés en fonction de la nature de la base comprennent la paraffine tendre, le stéarate d’aluminium, l’alcool cétostéarylique, les polyéthylèneglycols, la lanoline, la cire d’abeille, le carboxypolyméthylène et les dérivés cellulosiques, et/ou le monostéarate de glycéryle et/ou des agents émulsifiants non ioniques.

Les lotions peuvent être formulées avec une base aqueuse ou huileuse et contiendront également en règle générale un ou plusieurs agents émulsifiants, agents stabilisants, agents dispersants, agents de mise en suspension ou agents épaississants.

Les poudres destinées à une application externe peuvent être formées à l’aide d’une base de poudre appropriée quelconque, par exemple le talc, le lactose ou l’amidon. Les gouttes peuvent être formulées avec une base aqueuse ou non-aqueuse comprenant également un ou plusieurs agents dispersants, agents solubilisants, agents de mise en suspension ou conservateurs.

Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent, par exemple, être formulés pour une administration transdermique par une composition en timbres transdermiques ou d’autres dispositifs (par exemple, des dispositifs à gaz sous pression) qui libèrent le composant actif dans la peau.

Pour l’administration buccale, les compositions peuvent se présenter sous la forme de comprimés ou de tablettes formulés d’une manière classique.

Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent également être formulés sous forme de suppositoires contenant, par exemple, des bases classiques pour suppositoires, tels que le beurre de cacao ou d’autres glycérides.

Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent également être formulés pour une administration parentérale par injection bolus ou par perfusion continue et peuvent se présenter sous une forme unidose, par exemple sous forme d’ampoules, de flacons, de perfusions de petit volume ou de seringues préremplies, ou dans des récipients multidoses avec un conservateur ajouté. Les compositions peuvent être sous forme de solutions, de suspensions ou d’émulsions dans des véhicules aqueux ou non aqueux, et peuvent contenir des agents de formulation, tels que des antioxydants, des tampons, des agents antimicrobiens et/ou des agents d’ajustement de la tonicité. En variante, le principe actif peut être sous la forme d’une poudre pour réhydratation avec un véhicule approprié, par exemple de l’eau apyrogène stérile, avant l’utilisation. La présentation solide sèche peut être préparée par introduction d’une poudre stérile en conditions stériles dans des récipients individuels stériles ou par introduction d’une solution stérile en conditions stériles dans chaque récipient et lyophilisation.

Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent également être formulés avec des vaccins en tant qu’adjuvants. De telles compositions peuvent contenir un ou plusieurs anticorps ou fragments d’anticorps ou un composant antigénique tel que, mais sans s’y limiter, une protéine, un ADN, des bactéries et/ou des virus vivants ou morts ou des particules virales, conjointement avec un ou plusieurs composants ayant une activité adjuvante tels que, mais sans s’y limiter, des sels d’aluminium, des émulsions à l’huile et à l’eau, des protéines de choc thermique, des préparations de lipide A et des dérivés, des glycolipides, d’autres agonistes de TLR tels que l’ADN de CpG ou des agents similaires, des cytokines telles que le facteur de stimulation des colonies de granulocytes-macrophages (GM-CSF) ou l’interleukine 12 (IL-12) ou des agents similaires.

Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent être employés seuls ou en combinaison avec d’autres agents thérapeutiques. Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci et le ou les autres agents pharmaceutiquement actifs peuvent être administrés conjointement ou séparément et, quand ils sont administrés séparément, l’administration peut avoir lieu simultanément ou séquentiellement, dans un ordre quelconque. Les quantités du ou des composés de formule (I) ou du ou des sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci et du ou des autres agents pharmaceutiquement actifs et les moments relatifs d’administration seront choisis dans le but d’obtenir l’effet thérapeutique combiné désiré. L’administration d’une combinaison d’un composé de formule (I) et d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci avec d’autres agents de traitement peut être effectuée en combinaison par administration concomitante dans une composition pharmaceutique unitaire contenant les deux composés, ou dans des compositions pharmaceutiques séparées contenant chacune l’un des composés. En variante, la combinaison peut être administrée séparément d’une manière séquentielle dans laquelle un agent de traitement est administré en premier puis le second agent ou inversement. Une telle administration séquentielle peut être rapprochée dans le temps ou éloignée dans le temps.

Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent être utilisés en combinaison avec un ou plusieurs agents utiles dans la prévention ou le traitement des infections virales. Des exemples de tels agents comprennent, mais sans s’y limiter, les inhibiteurs de polymérase tels que ceux décrits dans le document WO 2004/037 818-A1, ainsi que ceux décrits dans les documents WO 2004/037 818 et WO 2006/045 613 ; JTK-003, JTK-019, NM-283, HCV-796, R-803, RI728, RI626, ainsi que ceux décrits dans les documents WO 2006/018 725, WO 2004/074 270, WO 2003/095 441, US 2005/0 176 701, WO 2006/020 082, WO 2005/080 388, WO 2004/064 925, WO 2004/065 367, WO 2003/007 945, WO 02/04 425, WO 2005/014 543, WO 2003/000 254, EP 1 065 213, WO 01/47 883, WO 2002/057 287, WO 2002/057 245 et des agents similaires ; les inhibiteurs de réplication tels que l’acyclovir, le famciclovir, le ganciclovir, le cidofovir, la lamivudine et des agents similaires ; les inhibiteurs de protéase tels que les inhibiteurs de protéase du VIH : le saquinavir, le ritonavir, l’indinavir, le nelfmavir, l’amprénavir, le fosamprénavir, le brécanavir, l’atazanavir, le tipranavir, le palinavir, le lasinavir, et les inhibiteurs de protéase du VHC : BILN2061, VX-950, SCH503034 ; et des agents similaires ; les inhibiteurs nucléosidiques et nucléotidiques de transcriptase inverse tels que : la zidovudine, la didanosine, la lamivudine, la zalcitabine, l’abacavir, la stavidine, l’adéfovir, l’adéfovir dipivoxil, la fozivudine, le todoxil, l’emtricitabine, l’alovudine, l’amdoxovir, l’elvucitabine et des agents similaires ; les inhibiteurs non nucléosidiques de transcriptase inverse (y compris un agent ayant une activité antioxydante tel que Fimmunocal, l’oltipraz, etc.) tels que : la névirapine, la délavirdine, l’éfavirenz, la loviride, Fimmunocal, Foltipraz, la capravirine, le TMC-278, le TMC-125, Fétravirine et des agents similaires ; les inhibiteurs d’entrée tels que Fenfuvirtide (T-20), le T-1249, le PRO-542, le PRO-140, le TNX-355, le BMS-806, le 5-Helix et des agents similaires ; les inhibiteurs d’intégrase tels que L-870,180 et des agents similaires; les inhibiteurs de bourgeonnement tels que PA-344 et PA-457, et des agents similaires ; les inhibiteurs des récepteurs des chimiokines tels que le vicriviroc (Sch-C), Sch-D, TAK779, le maraviroc (UK-427,857), TAK449, ainsi que ceux décrits dans les documents WO 02/74 769, WO 2004/054 974, WO 2004/055 012, WO 2004/055 010, WO 2004/055 016, WO 2004/055 011 et WO 2004/054 581, et des agents similaires ; les inhibiteurs de neuraminidase tels que le CS-8958, le zanamivir, Foseltamivir, le peramivir et des agents similaires ; les bloquants des canaux ioniques tels que l’amantadine ou la rimantadine et des agents similaires ; et un ARN interfèrent et les oligonucléotides anti-sens tels que FISIS-14803 et des agents similaires ; les agents antiviraux de mécanisme d’action indéterminé, par exemple ceux décrits dans le document WO 2005/105 761, WO 2003/085 375 et WO 2006/122 011, la ribavirine et des agents similaires. Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent également être utilisés en combinaison avec un ou plusieurs autres agents qui peuvent être utiles dans la prévention ou le traitement des infections virales, par exemple des immunothérapies (par exemple, l’interféron ou d’autres cytokines/chimiokines, des modulateurs des récepteurs des cytokines/chimiokines, des agonistes ou antagonistes de cytokines et des agents similaires) ; et des vaccins thérapeutiques, des agents antifibrogènes, des agents antiinflammatoires tels que les corticostéroïdes, ou des anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) et des agents similaires.

Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent être utilisés en combinaison avec un ou plusieurs autres agents qui peuvent être utiles dans la prévention ou le traitement des maladies allergiques, des maladies inflammatoires, des maladies auto-immunes, par exemple : une immunothérapie antigénique, des antihistaminiques, des stéroïdes, des antiinflammatoires non stéroïdiens (AINS), des bronchodilatateurs (par exemple, des agonistes bêta 2, des agonistes adrénergiques, des agents anticholinergiques, la théophylline), le méthotrexate, des modulateurs des leucotriènes et des agents similaires ; une thérapie aux anticorps monoclonaux telle qu’un anti-immunoglobuline E (IgE), un anti-TNF, un anti-IL-5, un anti-IL-6, un anti-IL-12, un anti-IL-1 et des agents similaires ; des thérapies aux récepteurs, par exemple, l’entanercept et des agents similaires ; des immunothérapies non-spécifiques aux antigènes (par exemple, l’interféron ou d’autres cytokines/chimiokines, des modulateurs des récepteurs des cytokines/chimiokines, des agonistes ou des antagonistes de cytokines, des agonistes de TLR et des agents similaires).

Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent être utilisés en combinaison avec un ou plusieurs autres agents qui peuvent être utiles dans la prévention ou le traitement du cancer, par exemple des agents chimiothérapiques tels que des agents alkylants, des inhibiteurs de topoisomérase, des antimétabolites, des agents antimitotiques, des inhibiteurs de kinases et des agents similaires ; une thérapie aux anticorps monoclonaux telle que le trastuzumab, le gemtuzumab et d’autres agents similaires ; et une hormonothérapie telle que le tamoxifène, la goséreline et des agents similaires.

Les compositions pharmaceutiques selon l’invention peuvent également être utilisées seules ou en combinaison avec au moins un autre agent thérapeutique dans d’autres zones thérapeutiques, par exemple une maladie gastro-intestinale. Les compositions selon l’invention peuvent également être utilisées en combinaison avec une thérapie de remplacement de gène. L’invention comprend, dans un aspect supplémentaire, une combinaison comprenant un composé de formule (I), ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, conjointement avec au moins un autre agent thérapeutiquement actif.

Les combinaisons mentionnées ci-dessus peuvent se présenter de manière commode pour une utilisation sous la forme d’une composition pharmaceutique et, par conséquent, les compositions pharmaceutiques comprenant une combinaison telle que définie ci-dessus conjointement avec au moins un diluant ou support pharmaceutiquement acceptable représentent un aspect supplémentaire de l’invention.

Une quantité thérapeutiquement efficace d’un composé de formule (I) ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci dépendra d’un certain nombre de facteurs. Par exemple, l’espèce, l’âge et le poids du receveur, l’affection précise nécessitant le traitement ainsi que sa gravité, la nature de la composition, et la voie d’administration sont tous des facteurs à prendre en compte. La quantité thérapeutiquement efficace devra finalement dépendre de l’appréciation du médecin traitant. Quoi qu’il en soit, une quantité efficace d’un composé de la présente invention pour le traitement des êtres humains est généralement située dans la plage allant de 0,0001 à lOOmg/kg de poids corporel du receveur par jour. Plus habituellement, la quantité efficace est située dans la plage allant de 0,001 à 10 mg/kg de poids corporel par jour. Par conséquent, pour un adulte de 70 kg, un exemple de quantité réelle par jour est habituellement de 7 mg à 700 mg. Pour une administration par voie intranasale et par inhalation, les doses habituelles pour un adulte de 70 kg sont situées dans la plage allant de 1 microgramme à 1 mg par jour. Cette quantité peut être donnée en une seule dose par jour ou en un certain nombre (comme deux, trois, quatre, cinq ou plus) de sous-doses par jour de telle sorte que la dose quotidienne totale soit la même. Une quantité efficace d’un sel pharmaceutiquement acceptable d’un composé de formule (I) peut être déterminée comme étant une proportion de la quantité efficace du composé de formule (I) ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci en soi. Des doses similaires sont appropriées pour le traitement des autres affections citées dans le présent document.

Les composés de formule (I) et les sels pharmaceutiquement acceptables de ceux-ci peuvent également être administrés à une fréquence appropriée quelconque, par exemple 1 à 7 fois par semaine. Le régime posologique précis dépendra bien sûr de facteurs tels que l’indication thérapeutique, l’âge et l’état du patient, et la voie d’administration particulière choisie.

Les compositions pharmaceutiques peuvent se présenter sous des formes unidoses contenant une quantité prédéterminée de principe actif par unidose. Une telle unidose peut contenir, à titre d’exemple non limitatif, 0,5 mg à 1 g d’un composé de formule (I) ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en fonction de l’affection à traiter, de la voie d’administration, et de l’âge, du poids et de l’état du patient. Les compositions unidoses préférées sont celles contenant une dose ou sous-dose quotidienne, comme mentionné ci-dessus dans le présent document, ou une fraction appropriée de celle-ci, d’un principe actif De telles compositions pharmaceutiques peuvent être préparées par l’un quelconque des procédés bien connus dans l’art de la pharmacie.

Il est donc proposé en outre une composition pharmaceutique comprenant un composé de formule (I), ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, et un ou plusieurs diluants ou supports pharmaceutiquement acceptables.

Il est également proposé un procédé de préparation d’une telle composition pharmaceutique, comprenant le mélange d’un composé de formule (I), ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, avec un ou plusieurs diluants ou supports pharmaceutiquement acceptables.

Tout au long de la description et des revendications qui suivent, sauf indication contraire, le terme « comprendre », et ses variations telles que « comprend » et « comprenant », seront compris comme impliquant l’inclusion d’un entier ou d’une étape ou d’un groupe d’entiers stipulé, mais sans exclure un autre entier ou une autre étape ou un autre groupe d’entiers ou d’étapes.

Des procédés de préparation de composés d’oxoadénine et de leurs sels sont décrits dans le document WO 2010/018 134, dont la totalité du contenu est incorporée à la présente à titre de référence. Des procédés de préparation des composés de formule(I) et de préparation de la 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(lS)-l-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one, ou d’un sel pharmaceutiquement acceptable de ceux-ci, sont décrits dans le présent document et constituent un aspect supplémentaire de la présente invention.

Exemples

Exemple I : synthèse d’oxoadénines substituées en position 9

Dans le cas de l’activation de TLR7 et de TLR8, un nombre restreint de différentes classes de mimétiques à petite molécule des ligands naturels de type ARNss viral riche en uridine et/ou en guanosine a été identifié, notamment des 1H-imidazo[4,5-c]quinolones et des 8-hydroxyadénines. voir Heil, et al., Eur. J. Immunol. 2003, 33, 2987-2997 ; Hemmi, et al., Nat Immunol 2002, 5, 196-200 ; Lee, et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 2006,103, 1828-1833 ; Gerster, et al., J. Med. Chem. 2005, 48, 3481-3491 ; Hirota, et al., J. Med. Chem. 2002, 45, 5419-5422. Diverses évaluations des relations structure-activité ont été effectuées sur les oxoadénines. voir Isobe, et al., Bioorganic & Médicinal Chemistry 2003,11, 3641-3647 ; Kurimoto, et al., Bioorganic & Médicinal Chemistry 2003,11, 5501-5508 ; Kurimoto, et al., Bioorganic & Médicinal Chemistry 2004, 12, 1091-1099 ; Isobe, et al., J. Med. Chem. 2006, 49, 2088-2095 ; Jin, et al., Bioorganic & Médicinal Chemistry Letters 2006, 16, 4559-4563 ; Pryde, et al., R. Med. Chem. Commun. 2011, 2, 185-189 ; Kurimoto, et al., J. Med. Chem. 2010, 53, 2964-2972. Nakamura, et al., Bioorganic & Médicinal Chemistry Letters 2013, 23, 669-672 ; Weterings, et al., Bioorganic & Médicinal Chemistry Letters 2009, 19, 2249-2251.

Les présents inventeurs ont entrepris une étude de relation structure-activité sur les oxoadénines substituées avec des groupes non aromatiques en position 9. Des études antérieures ont examiné quelques dérivés 9-alkyle et ont montré que l’introduction d’un alkyle (i-propyle, butyle, c-pentyle, c-hexyle) en position 9 donnait une activité faible et diminuait l’activité (Hirota, et al., J. Med. Chem. 2002, 45, 5419-5422 ; Isobe, et al., J. Med. Chem. 2006, 49, 2088-2095). Les présentes études se sont concentrées sur la synthèse et l’évaluation biologique d’une série de sept oxoadénines de formule I :

où R1 est un n-butoxy et où R2 est un fragment pipéridinylalkyle dans lequel la longueur du lieur à base de carbone est de 0 à 6 carbones :

Ces composés (3a-g) ont été évalués in vitro pour leur sélectivité pour TLR7/8 et l’induction de cytokines. Le composé 3a ne contient pas de lieur à base de carbone (n = 0); 3b contient un lieur à un carbone (n= 1); 3c contient un lieur à deux carbones (n = 2) ; 3d contient un lieur à trois carbones (n = 3) ; 3e contient un lieur à quatre carbones (n = 4) ; 3f contient un lieur à cinq carbones (n = 5) et 3g contient un lieur à six carbones (n = 6).

Les 9-pipéridinylalkyl oxoadénines 3a-g ont été synthétisées comme indiquer sur le schéma 1 via l’intermédiaire avancé commun (CAI) 6. (Tanji et al., Science 2013, 339, 1426-1429.) Le CAI 6 a été préparé facilement sur une échelle de plusieurs dizaines de grammes en 6 étapes et avec un rendement global supérieur à 50 % à partir de la dichloropurine 7 dans le commerce (schéma 2). Sur le schéma 2, la dichloropurine 7 a été protégée sous la forme du dérivé de 9-tétrahydropyranyle et substituée en position 6 par un traitement avec du NH3 2M dans l’isopropanol à 60 °C pour donner la 2-chloro adénine 8 avec un rendement de 86 %. La réaction de 8 avec du tert-butoxyde de sodium dans le n-butanol à 100 °C a donné l’adénine fonctionnalisée 9 avec un rendement de 85 %. L’adénine 9 protégée par THP a été convertie en CAI 6 en 3 étapes et avec un rendement global de 87 % par bromation en position 8, déplacement du brome avec du méthoxyde et déprotection du THP avec de l’acide trifluoroacétique (TFA). L’alkylation de CAI 6 avec les divers bromures de N-pipéridinyle protégés par un /rvt-butyloxycarbonyle (Boc), 5b-g, en présence de carbonate de potassium dans la diméthylformamide (DMF), puis une déprotection en milieu acide des groupes Boc et méthyle avec du HCl 4N dans le dioxane, ont donné les oxoadénines 3b-g souhaitées avec des rendements de 41 % à 84 % (schéma 1). L’alkylation de CAI 6 avec le bromure 5a n’a pas fonctionné et l’oxoadénine 3a a été préparée à la place avec un rendement de 38 % par la réaction de Mitsunobu de CAI 6 avec l’alcool 4a en présence de DIAD et de PPI13 à 70 °C, puis par déprotection en milieu acide (schéma 1).

Schéma 1

Réactifs : {a} TEA, PPU,. D!AD, D\!F.. "C'C. 1SU; (h) CBn. PPl·.,. CHXt,. TA, l b (.-} K.-CO,, DMF. 50 ®C. 20h, (d> 4N HCl dicxsni. MeOH.TA, lh.

Le composé 3a ne contient pas de lieur à base de carbone (n = 0) ; 3b contient un lieur à un carbone (n = 1) ; 3c contient un lieur à deux carbones (n = 2) ; 3d contient un lieur à trois carbones (n = 3) ; 3e contient un lieur à quatre carbones (n = 4) ; 3f contient un lieur à cinq carbones (n = 5) et 3g contient un lieur à six carbones (n = 6).

Schéma 2 : synthèse de l’intermédiaire 6 avancé commun

Réactifs: pT*OH. AtO», »3 *C, 2h, ¢5 ÎM NMj<an« IW. K· *C, ? k COtBuGXa nBuOH JOC*C, !>t C4)NB5, CH.C1..TA îh: {*) XaOMs, MeOH. leflus. 4 li: <f) TFA. MtOK. TA K>1

Quand ils n’étaient pas disponibles dans le commerce, les bromures (5b-d, f-g) ont été préparés avec un rendement de plus de 90 % par bromation des alcools correspondants en utilisant les conditions d’Appel (PhsP/CBrQ. Les alcools 4f-g n’étaient pas disponibles dans le commerce et ont été préparés en 3 étapes à partir de la bromopyridine 8 par (i) couplage croisé de 10 avec les alcools acétyléniques llf ou 11g, (ii) réduction de 12f et 12g avec de l’hydrogène en présence de 5 % de catalyseur au Rh/C et (iii) protection par un Boc du groupe amine (schéma 3).

Schéma 3 : synthèse des alcools 4f et 4g

11f, n = 3 12f, n = 3, 82% 4f, n = 3. 80% 10 11g, n = 4 12g, n = 4, 21% 4g, n * 4, 80% Réactifs : (a) {PPhjJPrfCK. Cul ΊΤ.Λ. Λ, HOnuts {t>)H Cutw V. C, H;. Λ.-ΟΗ 90 O) BOC^O, ΤΕΛ, CH,CU. TA. 3Ù miiwtes

Exemple 2 : synthèse du composé d’oxoadénine 3x

Une oxoadénine supplémentaire (composé 3x) de formule I a été préparée, où :

où R1 est un (lS)-l-méthylbutoxy, et où R2 est un fragment pipéridinylalkyle dans lequel la longueur du lieur à base de carbone est de 5 carbones. Composé 3x :

Des oxoadénines et des procédés de préparation d’oxoadénines sont également décrits dans le document WO 2010/018 134, dont le contenu est incorporé à la présente dans sa globalité.

La synthèse de l’oxoadénine 3x a été réalisée comme décrit sur le schéma 4 (voir également la figure 20) et comme décrit ci-dessous. Les composés intermédiaires 1, 2, 40, 41, 42 et 43 sont décrits en outre dans le document WO 2010/018 134 (ces intermédiaires sont numérotés de la même manière dans le présent document et dans le document WO 2010/018 134).

Schéma 4

Comme on peut le voir sur le schéma 4, le chlorhydrate de 4-bromopyridine A (2,5 g) a été partagé entre de l’hydroxyde de sodium 1 N (20 ml) et de l’acétate d’éthyle (3 x 20 ml). La phase organique a été séparée, séchée sur Na2SÛ4 et concentrée sous vide. L’huile résultante a été dissoute dans de la TEA (2,6 M) et dégazée sous azote. Le 4-pentyn-l-ol (1,1 éq) a été ajouté, puis le chlorure de bis(triphénylphosphine)palladium (II) (0,01 éq) et l’iodure de cuivre (I) (0,02 éq), et le mélange réactionnel a été laissé sous agitation à reflux pendant 20 minutes. Un traitement final en milieu aqueux (acétate d’éthyle/eau) et une purification par chromatographie sur gel de silice (gradient de 0 % à 30 % d’acétate d’éthyle dans l’heptane) ont donné B avec un rendement de 82 %. B a été dissous dans de l’acide acétique (0,05 M) et la solution a été hydrogénée en utilisant le réacteur d’hydrogénation à écoulement continue H-CUBE® (ThalesNano) (cartouche de 20 % de Pd(OH)2/C, 100 bar de H2, 90 °C, 1 ml/min).

Une fois l’hydrogénation terminée, le mélange réactionnel a été concentré et séché sous vide. Le produit brut résultant a été dissous dans du CH2CI2 (0,4 M), et mis à réagir avec de l’FUN (1,5 éq) et les dicarbonate de di-f-butyle (1,2 éq) à température ambiante pendant 30 minutes. Après un traitement final en milieu aqueux (CH2CI2/H2O) et une purification par chromatographie sur gel de silice (gradient de 0 % à 30 % d’acétate d’éthyle dans l’heptane), C a été isolé avec un rendement de 80 % : RMN 'H (400 MHz, CDCI3) d 4,06 (s, 2H), 3,64 (t, 2H), 2,66 (t, 2H), 1,541,66 (m, 5H), 1,45 (s, 9H), 1,24-1,39 (m, 8H), 1,08 (m, 2H).

Du CBr4 (1,6 éq) et du PPI13 (1,2 éq) ont été ajoutés lentement (réaction exothermique) à une solution contenant C dans le CH2CI2 (0,45 M) à 0 °C. Après 5 minutes, le mélange réactionnel a été laissé à se réchauffer jusqu’à température ambiante, a été agité à température ambiante pendant 45 minutes, concentré et purifié directement par chromatographie sur gel de silice (gradient de 0 % à 30 % d’acétate d’éthyle dans l’heptane) pour donner D avec un rendement de 92 %.

Du K2CO3 (325 mesh, 3,0 éq) a été ajouté à une solution contenant 43 dans le DMF (0,25 M) et le mélange réactionnel a été sonifié plusieurs secondes obtenir une suspension fine, puis laissé sous agitation à 60 °C pendant 1 heure. Après refroidissement jusqu’à 50 °C, D (1,2 éq) a été ajouté et le mélange réactionnel a été laissé sous agitation pendant une nuit à 50 °C. Après refroidissement jusqu’à température ambiante et un traitement final en condition aqueuse (acétate d’éthyle/eau), le produit brut résultant a été purifié par chromatographie sur gel de silice (gradient de 0 % à 10 % de méthanol dans le chloroforme).

Le produit purifié E a été dissous dans du méthanol (0,1 M) et mis à réagir avec du HCl 4 N dans le dioxane (6,0 éq) à température ambiante pendant 1 heure. Le mélange réactionnel a été concentré et séché sous vide, et le résidu a été purifié par chromatographie sur gel de silice (0 % à 100 % de CHCI3/CH3OH/H2O 90/10/0,5 dans CHCI3/CH3OH/H2O 85/15/1,0) pour donner F avec un rendement de 64% (2 étapes). RMN (400 MHz, CD3OD) gamma 5,14 (m, 1H), 3,81 (t, 2H), 3,36/3,32 (m, 4H), 2,97(d de t, 2H), 1,92 (m, 2H), 1,75 (p, 2H), 1,72 (m, 1H), 1,57 (m, 2H) 1,51,3 (m, 14H), 0,95 (t, 3H) ; ES TOF positif-SM calculé pour [M+H]+ 391,28222, trouvé 391,0843.

Exemple 3 - Préparation des intermédiaires représentés sur le schéma 4

Les composés intermédiaires 1, 2, 40, 41, 42 et 43 (voir le schéma 4 et la figure 20) sont décrits en outre dans le document WO 2010/018 134 ; ces intermédiaires sont numérotés de la même manière dans le présent document et dans le document WO 2010/018 134. Les systèmes LCSM A-D sont tels que décrits dans le document WO 2010/018 134.

Intermédiaire 1 :2.6-dichloro-9-ttétrahvdro-277-pvran-2-vl)-9//-purine

A la 2,6-dichloropurine (25,0 g) (disponible, par exemple, chez Aldrich, UK) ont été ajoutés de l’acétate d’éthyle (260 ml) puis de l’acide p-toluènesultonique (0,253 g). Le mélange a été chauffé à 50 °C et ensuite le 3,4-dihydro-2//-pyrane (16,8 g) a été ajouté. Le mélange réactionnel a ensuite été chauffé à 50 °C pendant 4 heures. Le mélange réactionnel a été évaporé sous vide pour donner la 2,6-dichloro-9-(tétrahydro-2//-pyran-2-yl)-9/7-purine sous la forme d’un solide jaune (36,9 g). RMN *H (CDCI3) : δ 8,35 (1H, s), 5,77 (1H, dd), 4,20 (1H, m), 3,79 (1H, m), 2,20-1,65 (6H, m).

Intermédiaire 2 : 2-chloro-9-(tétrahydro-2//-pvran-2-yl)-9//-purin-6-amine

La 2,6-dichloro-9-(tétrahydro-2/7-pyran-2-yl)-9//-purine (36,9 g) a été chauffée avec de l’ammoniaque 2 M dans l’isopropanol (250 ml) à 50 °C pendant 5 heures. Après repos à température ambiante pendant une nuit, une quantité supplémentaire d’ammoniaque 2M dans l’isopropanol (100 ml) a été ajoutée pour dissoudre le gâteau résultant et le mélange réactionnel a été chauffé pendant 9 heures supplémentaires jusqu’à ce que la réaction soit terminée. Au mélange réactionnel a été ajouté de l’eau (70 ml) et le solide jaune a été retiré par fdtration. Le solide a été lavé avec le mélange alcool isopropylique/eau (5/1 (v/v), 60 ml), puis séché à l’air sous aspiration pour donner un premier lot. Le filtrat a été filtré de nouveau après repos pendant une nuit pour isoler le précipité et les deux solides ont été séchés sous vide. Le premier lot était pur et le second lot contenait une très petite quantité d’impureté (signal large isolé à 3,5 ppm absent du premier lot) mais était par ailleurs identique. Premier lot d’un solide (28,4 g), second lot de solide (3,42 g). RMN 'H (CDCls) : 8,01 (1¾ s), 5,98 (2H, s large), 5,70 (1¾ dd), 4,16 (1¾ m), 3,78 ('H, m), 2,15-1,60 (frH, m de chevauchement).

Intermédiaire 2 (procédé alternatif) : 2-chloro-9-(tétrahvdro-2/7-pvran-2-yl)-9//-purin-6-amine

A une solution contenant de la 2,6-dichloropurine (25 g) (disponible, par exemple, chez Aldrich, UK) dans l’acétate d’éthyle anhydre (200 ml) a été ajouté de l’acidep-toluènesulfonique monohydraté (235 mg). La réaction a été chauffée à 50 °C et le 3,4-dihydro-27/-pyrane (18,1 ml) a été ajouté en une seule fois. La réaction a été laissée sous agitation à 50 °C pendant 1 heure et le solvant a été éliminé sous pression réduite. Ceci a donné un solide jaune. Une suspension de ce solide (~36 g) dans de l’ammoniaque 2,0 M dans l’isopropanol (460 ml) a été chauffée sous azote à 60 °C pendant 4 heures avec un condenseur attaché. La réaction a été versée dans de l’eau (50 ml) et laissée à refroidir pendant une nuit. Le précipité a été filtré et séché au moyen d’un évaporateur rotatif (60 °C) pendant 30 minutes pour donner la 2-chloro-9-(tétrahydro-2//-pyran-2-yl)-9//-purin-6-arnine sous la forme d’un solide blanc cassé, 31 g (93 %, 2 étapes). SM calculée pour (Ci0Hi2C1N5O)+ = 254, 256 SM trouvée (électropulvérisation) : (M)+ = 254, 256 (3/1) RMN !H ((CD3)2SO) : 08,43 (¾ s), 7,82 (2H, s), 5,55 (1¾ dd), 4,00 (1¾ m), 3,69 (1¾ m), 2,21 (¾ m), 1,95 (2H, m), 1,74 (¾ m), 1,56 (2H, m).

Intermédiaire 40 : 2-{[(l .SV 1 -méthvlbutynoxy}-9-ftétrahvdro-2//-pvran-2-yl )-9//-purin-6-amine

Procédé A :

Du t-butoxyde de sodium (48,5 g, 505 mmol) a été ajouté par portions au (5)-2-pentanol (185 ml) (disponible, par exemple, chez Julich Chiral Solutions, Allemagne) sous agitation à température ambiante jusqu’à homogénéité (remarque : la réaction est exothermique). La 2-chloro-9-(tétrahydro-2//-pyran-2-yl)-9//-purin-6-amine (32 g, 126 mmol) a été ajoutée et le mélange réactionnel a été chauffé à 70 °C pendant 72 heures. La réaction a été refroidie jusqu’à température ambiante et partagée entre de l’acétate d’éthyle (500 ml) et de l’eau (500 ml).

La phase organique a été lavée avec une solution saturée en chlorure de sodium (100 ml), séchée (MgSCL), filtrée et évaporée. Le résidu a été trituré avec de l’éther et la matière solide a été filtrée. Le précipité a été lavé de nouveau avec de l’éther et les filtrats ont été combinés et évaporés. La substance brute (environ 30 g) a été dissoute dans le mélange DMSO/méthanol (1/1) et purifiée par chromatographie sur une colonne de phase inversée (Cis) (330 g) en utilisant un gradient allant de 25 % à 65 % d’acétonitrile (+ 0,1 % de TFA)-eau (+ 0,1 % de TFA) avec 8 volumes de colonne, les fractions ont été immédiatement neutralisées avec une solution aqueuse saturée en carbonate de sodium. Les fractions appropriées ont été combinées et partagées entre du dichlorométhane et de l’hydrogénocarbonate de sodium aqueux saturé. La phase organique a été séchée par passage à travers un fritté hydrophobe, filtrée et évaporée pour donner la 2-{[(lS)-l-méthylbutyl]oxy}-9-(tétrahydro-2//-pyran-2-yl)-97/-purin-6-amine sous la forme d’une mousse crème pâle (14,97 g). LCSM (système B) : îret = 2,21 minutes ; MH+ 306

Procédé B :

Du t-butoxyde de sodium (206 g, 2,144 mol) a été ajouté au (5)-2-pentanol (720 ml, 6,58 mol) (disponible, par exemple, chez Julich Chiral Solutions, Allemagne) dans un ballon à fond rond de 2 litres. Le mélange a été laissé sous agitation à 50°C jusqu’à la dissolution totale du t-butoxyde de sodium. La 2-fluoro-9-(tétrahydro-27/-pyran-2-yl)-9/7-purin-6-amine (130 g, 548 mmol) a ensuite été ajoutée par portions une période de 5 minutes.

Après 3 heures, une analyse par LCSM a montré la consommation totale du composé de départ et le mélange a été versé dans un mélange glace/eau (3 1) et ensuite extrait avec du méthyl t-butyl éther. Ceci a entraîné la formation d’une émulsion et le mélange a été filtré à travers de la célite et la phase organique a été séparée. La phase aqueuse a ensuite été traitée avec du NaCl solide, puis ré-extraite avec du méthyl t-butyl éther. Les extraits organiques ont été combinés et lavés avec de la saumure, séchés sur sulfate de magnésium, filtrés et évaporés pour donner la 2-{[(lS)-l-méthylbuty]]oxy}-9-(tétrahydro-2//-pyran-2-yl)-9/7-purin-6-amine sous la forme d’une gomme marron clair (158,59 g). LCSM (système D) : îret = 2,65 minutes ; MH+ 306

Intermédiaire 41 : 8-bromo-2-(r( 15)-1-méthylbutylloxy)-9-(tétrahydro-2//-pyran-2-yl)-9//-purin-6-amine

Du N-bromosuccinimide (12,16g, 68,3 mmol) a été ajouté par portions sur une période de 5 minutes à une solution sous agitation de 2-{[(lS)-l-méthylbutyI|oxy}-9-(tétrahydro-27/-pyran-2-yl)-9H-purin-6-aminc (14,9 g, 48,8 mmol) dans le chloroforme (80 ml) à une température inférieure à 5 °C sous une atmosphère d’azote. Le mélange réactionnel a été laissé sous agitation à une température inférieure à 5 °C pendant 5 heures, puis lavé avec une solution saturée en hydrogénocarbonate de sodium (80 ml) puis de l’eau (80 ml). La mousse a été dissoute dans du DCM (50 ml) et lavée avec de l’eau (50 ml) puis de la saumure (50 ml). Les phases aqueuses combinées ont été lavées avec du DCM (50 ml). Les phases organiques combinées ont été séchées à travers un fritté hydrophobe, et le solvant a été éliminé sous vide pour donner la 8-bromo-2-{ [( 15)-1 -méthylbutyljoxy}-9-(tétrahydro-2//-pyran-2-yl)-9//-purin-6-amine sous la forme d’une mousse orange (18,5 g). LCSM (système D) : tRi-ri = 3,06 minutes ; MH+ 384/386

Intermédiaire 42 : 2-(Γ( 153-1-méthvlbutylloxy j-8-(méthvloxy)-9-(tétrahydro-2//-pvran-2-vl)-9//-purin-6-ami ne

La 8-bromo-2- {[(15)-1 -méthylbutyl] oxy}-9-(tétrahydro-2//-pyran-2-yl)-9/7- purin-6-amine (7,1 g, 18,48 mmol) a été dissoute dans du méthanol anhydre (70 ml) et une solution de méthoxyde de sodium (25 %) dans le méthanol (8 ml) a été ajoutée goutte-à-goutte sous une atmosphère d’azote. La solution a été chauffée à reflux à 90 °C pendant 4 heures sous une atmosphère d’azote. Du méthoxyde de sodium supplémentaire dans le méthanol (solution à 25 %, 3 ml) a été ajouté et la réaction a été laissée sous agitation à 60 °C pendant 16 heures supplémentaires. Une portion supplémentaire de méthoxyde de sodium dans le méthanol (solution à 25 %, 5 ml) a été ajoutée et la réaction a été laissée sous agitation à 90 °C pendant 7 heures supplémentaires. Le solvant a été éliminé au moyen d’un évaporateur rotatif et le produit brut a été partagé entre de l’EtOAc (75 ml) et une solution saturée en chlorure d’ammonium (75 ml). La phase organique a été lavée avec de la saumure (75 ml). Le solvant a été éliminé au moyen d’un évaporateur rotatif pour donner la 2-{[(15)-1-méthylbutyl]oxy}-8-(méthyIoxy)-9-(tétrahydro-2//-pyran-2-yl)-9//-purin-6-amine sous la forme d’une mousse orange pâle (6 g). LCSM (système D) : îret = 3,08 minutes ; MH+ 336

Intermédiaire 43 : trifluoroacétate de 2-1 [Π 5V1-méthylbutyl loxvi-8-tméthyloxy)-9//-purin-6-amine

La 2- {[( 1 S)-1 -méthylbutyl]oxy } -8-(méthyloxy)-9-(tétrahydro-277-pyran-2-yl)-97/-purin-6-amine (6 g, 17,89 mmol) a été dissoute dans du méthanol (50 ml). De l’acide trifluoroacétique (20,67 ml, 268 mmol) a été ajouté goutte-à-goutte, et le mélange a été laissé sous agitation à 2 °C pendant 72 heures sous une atmosphère d’azote. Le solvant a été éliminé sous vide, et le solide résultant a été lavé avec de l’acétate d’éthyle et filtré. Le filtrat a été extrait de son solvant et le résidu a été lavé avec de l’acétate d’éthyle. Les résidus solides combinés ont été séchés dans une étuve à vide pendant 2 heures pour donner le trifluoroacétate de 2-{[(15)-1-méthyl-butyl]oxy}-8-(méthyloxy)-9i7-purin-6-amine sous la forme d’un solide blanc cassé (5,3 g). LCSM (système C) : îret = 0,76 minute ; MH+ 252

La préparation de composés supplémentaires utiles comme intermédiaire dans la production d’oxoadénines, ainsi que la préparation de composés d’oxoadénine supplémentaire, sont décrites dans le document WO 2010/018 134, dont la totalité du contenu est incorporée à la présente à titre de référence.

Exemple 4 : essai pour l’induction d’interféron-alpha au moyen de cellules mononucléaires humaines du sang périphérique (PBMC) cryoconservées

Le procédé suivant a été utilisé pour tester l’activité biologique in vitro des composés d’oxadénine.

Préparation des composés

Les composés ont été dissous dans du DMSO. Des dilutions en série par 2 avec du DMSO ont été préparées et 0,25 El a été introduit dans des plaques de polypropylène Greiner de 384 puits transparents.

Préparation des PBMC

Des échantillons de sang d’un volume allant jusqu’à 200 ml ont été prélevés sur des donneurs humains en bonne santé. Du sang entier à un volume de 25 ml a été étalé sur 15 ml de gradient Ficoll dans des tubes Leucosep, et centrifugé à 1000 g pendant 20 minutes. Les cellules se trouvant dans la bande à l’interface plasma/histopaque ont été retirées avec précaution et lavées deux fois avec du PBS (centrifugé à 400 g pendant 5 minutes pour la collecte). Le culot final a été remis en suspension dans un milieu de congélation (90 % de sérum inactivé par chauffage, 10 % de DMSO) à une concentration en cellules de 4 x 107cellules/ml. Les cellules remises en suspension ont ensuite été cryoconservées (congelées) en utilisant un congélateur à vitesse contrôlée et stockées à -140°C pendant 4 mois au maximum.

Incubation et essai pour l’interféron-alpha

Immédiatement avant l’essai, des fioles de PBMC cryoconservées (congelées) ont été décongelées rapidement dans un bain d’eau à 37 °C. Une dilution à 1/10 des cellules dans du bleu trypan a été préparée et comptée. Les PBMC ont ensuite été diluées dans un milieu de croissance [RPMI 1640 contenant 10 % de sérum de veau fœtal (invitrogen), pénicilline + streptavidine (Gibco, numéro de catalogue 25030024, 1 : 50), de la L-glutamine 2mM, et 1000 unités/ml d’IFN-gamma humain recombinant (Preprotech, numéro de catalogue 300-02)] à une densité de 1 x 106 cellules/ml, et 50 μΐ/puits introduits dans les puits (des plaques de polypropylène) contenant soit 0,25 Fl de DMSO, soit un composé testé dans 0,25 I I de DMSO. Une concentration finale haute du composé était généralement de 50 μΜ ou de 5 μΜ (pour obtenir un ajustement de courbe pour les composés très actifs). Les plaques ont été incubées pendant 24 heures à 37 °C sous 5 % de CO2.

Un essai immunologique à multiples isoformes a été utilisé pour quantifier l’IFN-alpha dans les surnageants de PBMC. Un anticorps polyclonal de lapin dirigé contre l’IFN-alpha humain (numéro de catalogue 31101, Stratech Scientific) a été dilué à 1/10000 dans le tampon d’essai (RPMI 1640 contenant 10 % de sérum de veau fœtal, Invitrogen) et 20 μΐ ont été ajoutés à chaque puits d’une plaque à puits MSD (Meso-Scale Discovery, Gaithersburg, MD, USA) à petit monospot de GAR (revêtue d’un anticorps anti-lapin de chèvre). La plaquette a été incubée pendant 1 heure à température ambiante sous agitation vigoureuse. Après trois lavages avec du PBS, 20 μΐ de surnageant cellulaire ont été ajoutés à chaque puits de la plaque. La plaque ensuite été incubée pendant 1 heure à température ambiante sous agitation vigoureuse. Une paire d’anticorps monoclonaux dirigés contre IFN- alpha (numéros de catalogue 21100 et 21112, Stratech Scientific) a été marquée avec le SULFO-TAG (TM) (MSD), diluée à 1/1000 dans le tampon d’essai, et 20 μΐ ont été ajoutés à chaque puits de la plaque. La plaque a été incubée une nouvelle fois pendant 1 heure à température ambiante sous agitation vigoureuse. Après trois lavages avec du PBS, 30 μΐ de tampon T x2 (MSD) ont été ajoutés à chaque puits et la plaque a été lue sur un lecteur de plaques MSD Sector 6000.

Les données ont été normalisées par rapport à des témoins internes de plaque, c’est-à-dire 1 μΜ de résiquimod (n = 16) et du DMSO (n = 16). Les valeurs de pCE50 ont été obtenues par un ajustement de courbe à 4 paramètres avec IRLS (moindres carrés repondérés de manière itérative) dans le logiciel ActivityBase, à partir de 11 points obtenus avec une dilution en série par deux des composés testés.

Exemple 5 : essai pour l’induction d’Interféron-alpha et de TNF-alpha au moyen de cellules mononucléaires humaines du sang périphérique (PBMC) fraîches

Préparation des composés

Les composés ont été dissous dans du glycérol à 2 % dans l’eau pour obtenir des concentrations de travail commençant à 10 μΜ, diluées en série jusqu’à 0,00013 μΜ par des dilutions par 5. Cette préparation de composés a été ajoutée à des plaques à fond plat de 96 puits à un volume de 10 μΐ. 10 μΐ supplémentaires de milieu ont été ajoutés à ces puits, ou une autre préparation de composé si une co-stimulation était envisagée.

Préparation des PBMC

Des échantillons de sang provenant de donneurs humains ont été collectés dans des seringues héparinisées de 60 ce, et divisés en aliquotes de 20 ml dans des tubes coniques de culture de 50 ml. Les aliquotes de sang entier ont ensuite été diluées avec 15 ml de PBS, puis étalées sur 15 ml d’HISTOPAQUE(TM). Les échantillons ont été centrifugés à 800 g pendant 30 minutes sans interruption et l’interface de la couche leucocyto-plaquettaire a été retirée avec précaution. Les cellules collectées ont été centrifugées à 1500 tours/minute pendant 5 minutes et le culot a été remis en suspension dans 10 ml de PBS. Les cellules ont été rassemblées et lavées une nouvelle fois deux fois avec du PBS pour éliminer tout l’HISTOPAQUE(TM) des échantillons. Après le lavage final, les cellules combinées ont été introduites dans 20 ml de milieu complet (RPMI 1640 complété avec 10 % en v/v de sérum de bovin fœtal inactivé par chauffage (FBS), 100 U/ml de pénicilline G, 100 pg/ml de streptomycine, 10 mM de L-glutamine), comptées au moyen d’un compteur automatique de cellules Countess (Invitrogen, Life Technologies) et diluées pour donner une concentration finale de 2,8x106/ml. Cette suspension de cellules a été ajoutée à la plaque de culture contenant les préparations de composés (voir ci-dessus), à un volume de 180 μΐ, pour obtenir un volume total dans le puits de 200 μΐ.

Incubation et essais pour l’interféron-alpha et le TNF-alpha

Après 24 heures d’incubation (37 °C, 95 % d’air, 5 % de CO2), les surnageants ont été retirés avec précaution et testés pour l’induction de cytokines/chimiokines au moyen de kits multiplex (FLUOROKINE(TM) kits multiplex disponibles chez R&amp;D

Systems [bio-techne], Minneapolis, MN) et kit ELISA VERIKINE(TM) pour l’IFNa humain (Pestka Biomédical Laboratories, Inc., Piscataway, NJ).

Exemple 6 : dosage des cytokines mené par allereène en utilisant des cellules mononucléaires humaines du sang périphérique (PBMC) fraîches provenant de volontaires atopiques

Un essai basé sur une co-culture de cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) provenant de donneurs humains atopiques avec un allergène et des composés testés a été développé. Après une culture de 5 à 6 jours, diverses cytokines ont été dosées dans les surnageants de cellules.

Préparation des composés

Les composés ont été dissous dans du DMSO, puis dilués en série dans le milieu de croissance (milieu RPMI 1640 complété avec 100 U/ml de pénicilline G, 100 pg/ml de streptomycine, 10 mM de L-glutamine) pour donner 4x de la plage de concentrations requise en présence de 0,04 % de DMSO. Chaque composé a été testé en triple à toutes les concentrations.

Préparation des PBMC

Du sang humain défibriné provenant d’un volontaire connu pour être allergique à la fléole des prés a été centrifugé à 2500 tours/minute pendant 15 minutes. La phase supérieure de sérum a été collectée et inactivée par chauffage à 56 °C pendant 30 minutes (sérum autologue HI). La phase inférieure de cellules a été remise en suspension dans 50 ml de PBS (+Ca +Mg), 25 ml de sang dilué ont été étalés sur 20 ml de LYMPHOPREP(TM) dans des tubes de 50 ml, puis centrifugés à 2500 tours/minute pendant 20 minutes à TA. La bande à l’interface sérum/LYMPHOPREP(TM) a été retirée avec précaution. Les cellules collectées ont été lavées avec du PBS et remise en suspension à 4x 106/ml dans le milieu de croissance avec du sérum autologue HI. Les PBMC ont été introduites à 0,4 x 106 cellules/puits dans des plaques à fond plat de 96 puits en présence de 10 pg/ml d’antigène de fléole des prés (Alk-Abello, Danemark) et des composés testés à des concentrations appropriées dans un volume total de 200 pl.

Incubation et dosage des cytokines

Les plaques ont été incubées à 37 °C sous 5 % de CO2 pendant 6 jours au maximum. Le milieu cellulaire provenant de chaque puits a été collecté et stocké à -20 °C avant l’analyse. Les cytokines et les chimiokines se trouvant dans les surnageants ont été détectées en utilisant des plaques à spot MESO SCALE DISCOVER Y™ 10 pour les cytokines TH1/Th2 humaines.

Exemple 7 : activité sur TLR7/8 des oxoadénines 3a à 3g L’activité des oxoadénines 3a-g sur TLR7/8 humain (h) a été évaluée par un dosage de gène rapporteur en utilisant des cellules HEK293 transfectées de manière stable avec hTLR7 ou hTLR8, et avec le rapporteur NFkB SEAP (phosphatase alcaline embryonnaire sécrétée).

Les cellules HEK293 exprimant TLR7 ou TLR8 humain, et le gène rapporteur SEAP sensible à NFkB, ont été obtenues auprès d’ïnvivoGen (San Diego, CA). Ces cellules ont été maintenues dans un milieu de culture contenant le milieu Eagle modifié Dulbecco (DMEM) (Invitrogen, Grand Island, NY), 10 % de sérum de bovin fœtal (FBS) (Sigma, St. Louis, Missouri) et une sélection d’antibiotiques (Invitrogen et InvivoGen). Les cellules HEK293 transfectées de manière stable ont été introduites dans des plaques de culture à fond plat de 96 puits à lE5/puits et stimulées pendant 24 heures avec une plage de doses de formulations aqueuses des composés en commençant à partir de 200 μΜ, dilués en série jusqu’à 0,012 μΜ avec des dilutions par 2 (sauf si les conditions de formulation garantissaient des concentrations de départ plus basses). Les surnageants de culture ont été collectés et testés pour l’activation de NFkB en utilisant le kit de détection colorimétrique de SEAP QUANTI-BLUE (une marque d’InvivoGen). L’essai a mesuré la production de SEAP médiée par NFkB après l’activation spécifique de TLR7 ou de TLR8. La spécificité pour hTLR7 et hTLR8 et l’activité (CE50) des oxoadénines 3a-g sont présentées sur les figures 1A-C.

Il doit être noté que l’essai HEK n’est pas optimal pour évaluer TLR7, car les signaux de TLR7 passent à la fois par l’intermédiaire des voies de NFkB (conduisant à l’induction des cytokines inflammatoires) et d’IRF7 (conduisant à l’induction d’IFN) et le système HEK mesure seulement le côté NFkB de la signalisation de TLR7. L’oxoadénine 3a n’était pas active sur hTLR7 ou hTLR8, mais les autres oxoadénines 3b-g étaient toutes actives. Bien que l’augmentation de la longueur du lieur au-delà de 1 carbone augmente la puissance de hTLR7, aucune corrélation linéaire entre la longueur du lieur à base de carbone et la puissance de hTLR7 n’a été observée dans cet essai. L’oxoadénine 3f à lieur à 5 carbones était le plus puissant agoniste de hTLR7 de la série (voir la figure IC), tandis que l’oxoadénine 3b à lieur à 1 carbone était l’agoniste le plus puissant de hTLR8 de la série, la puissance de hTLR8 diminuant significativement avec les lieurs à base de carbone plus longs.

La perte de l’activité de hTLR8 observée après stimulation avec des doses plus élevées d’oxoadénines 3e-g suggère une possible toxicité cellulaire chez les cellules HEK293-hTLR8. La coloration Aqua fixable LIVE/DEAD(TM) a été utilisée pour évaluer la mort cellulaire potentielle après stimulation de HEK293-hTLR8 avec les oxoadénines 3e-g. Une toxicité cellulaire significative a été observée aux doses plus élevées d’oxoadénines 3e-g (données non présentées). Cette toxicité cellulaire n’était pas observée après 24 heures de stimulation avec les oxoadénines 3b-d à lieur à base d’un carbone plus court (données non présentées). L’induction des cytokines dans les cellules mononucléaires humaines du sang périphérique (hPBMC) après 24 heures de stimulation avec les oxoadénines 3e-g a ensuite été évaluée au moyen d’une ELISA pour cytokines et une coloration de cytokines intracellulaires (ICS). L’induction de TNFD est présentée sur la figure 2A. Une augmentation manifeste de la sécrétion de TNFD avec l’augmentation de la longueur de la chaîne de carbone est observée, la sécrétion maximale de TNFD étant observée pour le lieur à cinq carbones. L’ICS a également été utilisée pour examiner l’état d’activation et les contributions des cytokines de sous-ensembles cellulaires distincts. Un profil similaire a été observé avec les cellules dendritiques myéloïdes (mDC) par rapport à l’induction de l’IL-6 (figure 2B), du TNFD et de l’IFN CD Prises ensemble, ces données suggèrent fortement une augmentation des cytokines proinflammatoires quand le lieur à base de carbone augmente jusqu’à cinq carbones. L’oxoadénine 3g à lieur à 6 carbones induit moins de TNFD que 3f mais plus que Foxoadénine 3e à lieur à 4 carbones. L’induction d’IFND à partir des hPBMC après stimulation avec les oxoadénines 3a-g a également été évaluée. Etant donné la relation non linéaire observée entre la longueur des lieurs à base de carbone et les valeurs de DE50 pour hTLR7 obtenues avec les oxoadénines 3a-g dans le système HEK293 (qui indique le côté NFDB de la signalisation de TLR7), on s’attendait à ce que l’induction d’IFND à partir des hPBMC soit plus représentative de l’activité de ces composés sur hTLR7. Un profil unique pour l’expression d’IFND a été observé pour les composés 3a-g (figure 3).

Chacun des composés 3a-g présentait une courbe dose-réponse en forme de cloche du sommet jusqu’à la base au sein d’une plage de doses de 100 CM, sauf l’oxoadénine 3a qui était inactive. Les oxoadénines ayant une longueur croissante de lieur à base de carbone étaient des inducteurs d’IFNC] plus puissants, comme l’indique la dose plus basse nécessaire pour atteindre une réponse maximale d’IFND, mais des concentrations plus élevées d’oxoadénines étaient associées à une diminution de la réponse à la dose pour IFNCL Dans le même temps, les taux de TNFD dans les mêmes surnageants de culture cellulaire ont augmenté d’une manière dose-dépendante. pDC est le principal type cellulaire responsable de plus de 90 % de la sécrétion d’IFN, par conséquent la suppression de la voie de signalisation de TLR7-IRF7 par l’intermédiaire d’une boucle de rétroaction de régulation pour restreindre l’importance de l’activation d’IFNDBu d’une mort cellulaire induite par activation (AICD) spécifique d’un type cellulaire pourrait être responsable du profil unique cytokines observé dans cette étude.

Pour évaluer ces hypothèses, des hPBMC ont été stimulées avec diverses doses de 3b (lieur à 1 carbone) ou de 3f (lieur à 5 carbones) et les cellules ont été évaluées pour l’apoptose induite par activation par coloration à l’annexine-V. 3f était associé à une augmentation dépendante de la dose dans la coloration à l’annexine-V chez les pDC mais non chez les mDC. Au contraire, seule la dose la plus élevée de 3b (10 mM) a été associée à des cellules positives à l’annexine-V à la fois dans les sous-ensembles pDC et mDC. Cette apoptose observée spécifique d’un type cellulaire est corrélée aux courbes d’induction dose-dépendante de l’IFND et du TNFD.

Pour encore confirmer l’effet de l’apoptose des pDC lors de l’induction de l’IFND, une co-stimulation avec des quantités équimolaires de 3b et de 3f a été évaluée chez des hPBMC. Comme attendu, la combinaison d’une dose élevée (-0,3 CM) de 3f et de 3b réduit le pic d’IFND par rapport à 3b seul, tandis que la combinaison d’une dose plus basse de 3f et de 3b (-0,003 DM) ne modifie pas la réponse maximale de l’IFND par 3f seul (données non représentées). Globalement, ces résultats démontrent que l’augmentation de la longueur du lieur à base de carbone de 1 à 5 carbones augmente la puissance d’induction de l’IFNO à partir des pDC, mais réduit également le seuil de dose pour l’apoptose tout en laissant l’induction du TNFD à partir des mDC largement inaltérée.

En résumé, la relation structure-activité de sept oxoadénines (3a-3g) substituées en position 9 avec un fragment pipéridinyl alkyle a été étudiée. Au minimum, un lieur à 1 carbone était nécessaire pour l’activation de hTLR7 et de hTLR8. L’oxoadénine à lieur à 5 carbones est l’agoniste de hTLR7 le plus puissant, tandis que le lieur à 1 carbone est l’agoniste de hTLR8 le plus puissant de la série. L’induction des cytokines proinflammatoires et d’IFND chez les hPBMC augmente avec l’augmentation de la longueur de la chaîne de carbone jusqu’à 5 carbones, l’oxoadénine à lieur à 5 carbones étant le plus puissant inducteur de cytokines. Ces résultats indiquent qu’il est possible de moduler l’activité de hTLR7/8 et l’induction des cytokines avec la série d’oxoadénines contenant des groupes non aromatiques sur N-9 par le biais d’une modification structurelle mineure.

Exemple 8 : spécificité pour TLR7 et TLR8 et puissance du composé 3x

Le composé 3x est présenté pour avoir une meilleure puissance sur TLR7 et une meilleure activité agoniste sur TLR7 par rapport aux autres oxoadénines étudiées.

Par rapport à l’oxoadénine 3b, la puissance de 3f et de 3x sur TLR7 est respectivement 50 et 100 plus élevée (figure 4A), et leur activité est plus faible sur TLR8 (figure 4B). L’influence du substituant en C2 peut être observée en comparant 3f et 3x : l’introduction d’un groupe (S)-méthyle sur le premier carbone de la chaîne butoxy en C2 augmente l’activité à la fois sur TLR7 et sur TLR8.

Quand ils sont évalués pour l’induction des cytokines chez les hPBMC, les composés 3f et 3x présentent une puissance élevée (DE50 plus basse) et une réponse de TNF-alpha (figure 5). Le même résultat est observé pour les autres cytokines proinflammatoires (données non représentées).

Comme attendu sur la base de l’EDso basse pour TLR7 observée dans l’essai HEK293 pour les composés 3f et 3x, les deux oxoadénines induisent l’IFN-alpha à des doses très faibles (de l’ordre de ~lnM) (figure 6).

La figure 7 présente induction d’IFN-alpha par les oxoadénines, telle que mesurée par ICS. L’induction des cytokines été analysée en pourcentage de cellules pDC vivantes totales pour IFN-alpha. Les doses utilisées étaient de 360 picomolaires, 11 nanomolaires, 330 nanomolaires et 10 micromolaires.

Précédemment observés avec les autres oxoadénines (voir le document WO 2010/018 134), la synergie avec AGP CRX601 pour IL12-p70 était relativement faible par rapport au composé d’imidazoquinoline CRX642 (voir les documents WO 2010/048 520; PCT/US 2009/061 867 ; US 8 624 029) en combinaison avec CRX601. Cependant, les composés 3x et 3f ont fait preuve de synergie avec CRX601 sur une vaste plage de doses (figures 8A et 8B).

Le tableau 2 résume les données mentionnées ci-dessus. Prêter attention au composé 3x pour sa DE50 basse pour TLR7 et l’induction relativement élevée d’IFN-alpha et d’IL-12p70.

Tableau 2

* à **** ; du niveau d’induction de cytokines le plus bas au plus élevé ;

Claims (12)

1. REVENDICATIONS

   1. Composé de formule (I) :

   dans laquelle ; R1 est est le 1-méthylbutoxy ou le (1<S)-1-méthylbutoxy ; R2 est un groupe ayant la structure :

   où n est un nombre entier ayant une valeur de cinq ; Het est un hétérocycle saturé à six chaînons contenant cinq atomes de carbone et un atome d’azote, dans lequel Het est lié au fragment -(CH2)n- sur le carbone en position 4 de l’hétérocycle ; et R3 est un hydrogène ; ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.
2. 2. Composé de formule (I), dans laquelle R1 est le (1<S)-1-méthylbutoxy ; R2 est un groupe ayant la structure :

   où n est un nombre entier ayant une valeur de 5 ; Het est une pipéridine, dans lequel Het est lié au fragment -(CH2)n- sur le carbone en position 4 de l’hétérocycle ; et R3 est un hydrogène ; ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.
3. 3. Composé 6-amino-9-[5-(4-pipéridinyl)pentyl]-2-[(1S)-1-méthylbutyl]oxy]-7,9-dihydro-8H-purin-8-one ou sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.
4. 4. Composé tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 3, pour son utilisation dans le traitement des maladies allergiques ou d’autres affections inflammatoires.
5. 5. Composition pharmaceutique comprenant un composé tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 3, et un ou plusieurs diluants ou supports pharmaceutiquement acceptables.
6. 6. Composition immunogène comprenant un composé tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 3, et un antigène ou une composition d’antigènes.
7. 7. Utilisation d’un composé tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 3, pour la préparation d’une composition immunogène comprenant un antigène ou une composition d’antigènes, pour le traitement ou la prévention d’une maladie.
8. 8. Utilisation d’un composé tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 3, pour la préparation d’un médicament destiné au traitement des maladies allergiques ou d’autres affections inflammatoires, des maladies infectieuses ou du cancer.
9. 9. Utilisation d’un composé tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 3, pour la préparation d’un médicament destiné au traitement de la rhinite allergique ou de l’asthme.
10. 10. Composition comprenant un composé tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 3, et comprenant en outre un composant choisi parmi : (a) au moins un autre agent thérapeutiquement efficace, (b) un diluant pharmaceutiquement acceptable, et (c) un support pharmaceutiquement acceptable.
11. 11. Composition comprenant un composé tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 3, pour son utilisation en thérapie.
12. 12. Utilisation d’un composé tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 3, pour la préparation d’un médicament destiné à être utilisé en thérapie.