AT408150B - Verfahren zur immobilisierung eines analyten an einer festen oberfläche - Google Patents

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AT408150B AT0065600A AT6562000A AT408150B AT 408150 B AT408150 B AT 408150B AT 0065600 A AT0065600 A AT 0065600A AT 6562000 A AT6562000 A AT 6562000A AT 408150 B AT408150 B AT 408150B
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Description


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   Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Immobilisierung eines Analyten an einer festen Ober- fläche sowie Konjugate mit an festen Oberflächen gebundenen Analyten. 



   Die Bindung von Analyten an festen Oberflächen wird häufig unter Verwendung von Linker- Molekülen realisiert, welche die Oberfläche mit dem Analyten verbinden. Derartige Crosslinker wer- den vor allem dann bevorzugt, wenn der Analyt, der an die feste Oberfläche gebunden werden soll, sehr klein ist bzw. wenn zur Wechselwirkung des Analyten mit einem Liganden, der an den Analy- ten gebunden werden soll, eine erhöhte freie Beweglichkeit des Analyten erwünscht ist. 



   Bevorzugte Einsatzgebiete für derartige Analyt-/Festphasenkonjugate sind einerseits Reini- gungsverfahren, bei welchen aus komplexen Gemischen zu isolierende Liganden an den immobi- lisierten Analyten gebunden werden können, andererseits werden solche Konjugate im analy- tisch/diagnostischen Bereich, insbesondere im Rahmen von Screening-Verfahren, verwendet, bei- spielsweise zum Nachweis seltener Liganden in biologischen Flüssigkeiten oder für diagnostische Verfahren im Bereich der DNA-Technologie. In Letzterer kommen Festphasenkonjugate in immer stärkerer Zahl als Biochips zur Anwendung. 



   Verfahren zur Herstellung derartiger Chips sind beispielsweise in der WO 98/20967, EP 947 819 A, WO 99/27140 A, DE 19823876 A1, WO 99/57310 A, sowie EP 890 651 A1, be- schrieben. 



   Die im Stand der Technik beschriebenen Konjugate sind jedoch entweder äusserst aufwendig und kostspielig in ihrer Herstellung oder aber weisen unbefriedigende sterische Eigenschaften auf, wie z. B mangelnde Beweglichkeit der Analyten, ungenügender Abstand zur Oberfläche der Fest- phase (wodurch sich unerwünschte elektrostatische Wechselwirkungen mit der Oberfläche erge- ben können) oder schlecht oder gar nicht kontrollierbare Anordnung und Verteilung der Analyten auf der festen Oberfläche. 



   Es ist daher Aufgabe der vorliegenden Erfindung Konjugate zur Verfügung zu stellen, die gegenüber dem bekannten Stand der Technik verbessert sind und die insbesondere eine einfache, möglichst risikoarme Herstellung erlauben und trotzdem den Analyten in zufriedenstellender dreidi- mensionaler Anordnung zur Verfügung stellen. 



   Diese Aufgabe wird gelöst durch ein Verfahren zur Immobilisierung eines Analyten an einer festen Oberfläche, welches durch die folgenden Schritte gekennzeichnet ist: - Binden eines Cyclodextrin-Moleküls mit mindestens zwei funktionellen Gruppen an eine feste 
Oberfläche, so dass noch mindestens eine funktionelle Gruppe des Cyclodextrin-Moleküls mit einem Analyten kovalent gebunden werden kann, und - kovalentes Binden des Analyten an das Oberflächen-gebundene Cyclodextrin-Molekül. 



   Alternativ kann die Immobilisierung des Analyten an einer festen Oberfläche auch durch - kovalentes Binden eines Cyclodextrin-Moleküls mit mindestens zwei funktionellen Gruppen an einen Analyten, so dass noch mindestens eine funktionelle Gruppe des Cyclodextrin-Molekuls an eine feste Oberfläche gebunden werden kann, und - Binden des Cyclodextrin-Moleküls mit dem gebundenen Analyten an eine feste Oberfläche bewerkstelligt werden. 



   Mit der vorliegenden Erfindung werden erstmals Festphasenkonjugate von Analyten zur Verfü- gung gestellt, die Cyclodextrin-Linker aufweisen. Cyclodextrine sind zwar eine in der industriellen Chemie weit verbreitete Molekülart, die für die Komplexierung von einer Vielzahl von Biomolekülen verwendet werden, auf Grund des Mangels an gezielt mit funktionellen Gruppen ausgestatteten Cyclodextrin-Molekülen konnten bislang aber für die Cyclodextrin-Moleküle derartige Verwendun- gen nicht erschlossen werden. Erst mit der Einführung von chemisch definierbaren, mit funktionel- len Gruppen ausgestatteten Cyclodextrin-Molekülen (vgl. EP 0 697 415 A1) war es überhaupt möglich, Cyclodextrine an festen Phasen zu konjugieren, wobei sie aber nach wie vor zur Kom- plexierung organischer Substanzen verwendet worden sind. 



   Die mit dem erfindungsgemässen Verfahren herstellbaren Konjugate, also Konjugate umfas- send eine feste Oberfläche, ein daran gebundenes Cyclodextrin und einen kovalent an das Cyclo- dextrin gebundenen Analyten, weisen gegenüber den im Stand der Technik bekannten Konjugaten verschiedene Vorteile auf. So gestattet das relativ grosse Cyclodextrin-Molekül bedingt durch die erhöhte Spacerlänge, eine weitgehend uneingeschränkte freie Beweglichkeit des Analyten, wo- durch nicht nur die Wechselwirkung zwischen Crosslinker und Analyten entscheidend verbessert (und damit die Kopplungsreaktion erleichtert), sondern auch die Wechselwirkung mit dem Ligan- 

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 den-Molekül massgeblich erleichtert wird.

   Weiters sind Cyclodextrine biokompatibel, nicht-toxisch und temperatur-resistent bis zu 200 C und gestatten damit ein leichtes, ungefährliches Arbeiten und eine gute Stabilität des erfindungsgemäss zur Verfügung gestellten Konjugates. 



   Weiters gestattet die Verwendung von Cyclodextrinen als Crosslinker zwischen Festphase und Analyten eine hohe Bindungskapazität, geringe unspezifische Adsorption und - beispielsweise bei Fluoreszenzdetektion - einen niedrigen (Mess-)Hintergrund der durch die Wahl geeigneter Fest- phasen noch weiter verringert werden kann. 



   Gegebenenfalls können selbstverständlich zwischen Cyclodextrin und Festphase bzw. Cyclo- dextrin und Analyten weitere Crosslinker vorgesehen werden, z.B. indem ein weiterer Crosslinker bereits an der festen Oberfläche sitzt oder indem der Analyt bereits mit einem weiteren Crosslinker modifiziert worden ist. Beispiele für derartige weitere Crosslinker sind im Stand der Technik aus- führlich beschrieben (z.B. Dihydrazide, ...) 
Als Analyten können erfindungsgemäss sämtliche kovalent an das Cyclodextrin zu bindenden Moleküle, insbesondere Biomoleküle, verwendet werden. Bevorzugt kommen erfindungsgemäss als Analyten Nukleinsäuren, insbesondere DNS, Peptide, Proteine, Enzyme, insbesondere Oxidore- duktasen, Transferasen und Hydrolasen, Antigene, Antikörper, Rezeptoren, Mikroorganismen (z.

   B. prokaryontische oder eukaryontische Zellen, Viren, etc. ) oder Mischungen dieser Analyten zum Einsatz. 



   Bevorzugterweise werden als feste Oberfläche ein Chromatographiematerial, ein Metallfilm (z. B. dünne Goldfilme), eine Kunststoffoberfläche oder Glas verwendet. 



   Besonders bevorzugt sind selektiv maskierte Kunststoffoberflächen und selektiv geätzte Glas- oberflächen, bei welchen nur Teile der Oberfläche chemisch aktiviert werden und somit nur auf ganz bestimmten Positionen auf der Oberfläche Crosslinker und somit Analyten bereitgestellt wer- den Die Wahl der für die jeweilige Fragestellung optimalen Oberfläche kann jedoch der Fachmann ohne weiteres auf Grund seiner Kenntnisse bzw. auf Grund des Standes der Technik vornehmen. 



  Speziell bei der DNA-Chip-Technologie kommen bevorzugterweise die, gemäss der eingangs zitier- ten Patentanmeldung geoffenbarten Trägermaterialien zum Einsatz. 



   Biochips, vor allem DNA-Chips, werden beispielsweise zur Analyse pathologisch veränderter Genaktivität, zur Aufklärung von Krankheitsmechanismen oder zur Identifizierung neuer Arzneimit- tel-Kandidaten, in der Diagnostik und Resistenzanalyse von Infektionskrankheiten, aber auch im Umweltbereich zur Identifizierung pathogener Keime eingesetzt. 



   Bei der Chipherstellung werden DNA-Trägermoleküle entweder in situ mittels photolithographi- scher Techniken unter Verwendung physikalischer Masken auf der Matrix synthetisiert oder durch verschiedene Verfahren aufgedrückt. Die Herstellung von gedruckten DNA-Mikroarrays gliedert sich in die Schritte der Aktivierung bzw. Beschichtung der festen Chipmatrix, an die Biomoleküle über eine geeignete Kopplungschemie fixiert werden. 



   DNA kann mittels Adsorption, photolithographischer Entschützung und kovalenter und ioni- scher Bindung an Trägermaterial immobilisiert werden. Als Trägermaterialien werden controlled pore glass (CPG) , Si02-Schichten oder Polymere verwendet. CPG und Si02-Oberflächen werden meist angeätzt, um freie OH-Gruppen an der Oberfläche zu erzeugen, die direkt mit den DNA- Sequenzen zur Reaktion gebracht oder in andere funktionelle Gruppen umgewandelt werden können. Bei Polymeren als Trägersubstanzen unterscheidet man Copolymere, die funktionelle Gruppen enthalten, Polymere, in die durch chemische Modifizierung funktionelle Gruppen einge- führt werden können, chemisch inerte Polymere wie Polysulfone oder Teflon, die durch Bestrah- lung (z. B. UV, Co 60) aktiviert werden können, und chemisch inerte Polymere, die mit funktionellen Copolymeren bedeckt werden. 



   Polymere, die bereits funktionelle Gruppen besitzen, deren Aktivierung und Überführung in andere funktionelle Gruppen beschrieben ist, sind beispielsweise Polyamid, Polyacrylamid und Polyester. Unreaktive Polymere, wie z.B. Polyethylen, können mit einem reaktiven Monomer, wie z. B. Glycidylmethacrylat oder N-Vinylformamid, gepfropft werden. Eine sehr elegante Methode zur 
Einführung funktioneller Gruppen ist die Oberflächenmodifizierung durch Plasmabehandlung. Bei 
Polypropylen wird durch verschiedene Unterarten der Plasmabehandlung eine Einführung von Amino-, Hydroxy- oder Thiolgruppen möglich. Zur Verwendung von Glas als Trägermaterial werden Objektträger angeätzt und amino- oder epoxysilanisiert. 



   Zur Herstellung spezifischer Arrays, z. B. Oligonukleotid-Arrays, werden z.B. Filtermaterialien, 

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 wie Nitrozellulose oder Nylon (Clontech, USA) mit Polylysin oder mit verschiedenen Silanen deri- vatisierte Glas-Objektträger, carboxymethylierte Dextrane (Biacore AB, Schweden) oder Polyacry- lamidgel-Pads (Packard/ Motorola, USA) verwendet. Nylonmembranen zeichnen sich im Gegen- satz zu Glasoberflächen durch eine hohe Bindungskapazität aus, weisen aber bei fluoreszenter Detektion einen gegenüber Glas erhöhten Hintergrund auf. Polyacrylamid und Dextran sind drei- dimensionale Hydrogele, die im Unterschied zu flachen Oberflächen wie Glas eine sehr hohe Bindungskapazität und eine geringe unspezifische Bindung aufweisen. 



   Gemäss der vorliegenden Erfindung ist die Wahl des spezifischen Cyclodextrin-Moleküls bzw. der funktionelle Gruppen in der Regel nicht kritisch, es können also insbesondere Ó- &num;-, oder y-Cyclodextrine verwendet werden. Als bevorzugte reaktive Gruppen auf dem Cyclodextrin-Molekül sind ausgewählt aus Halogen-, Amin-, Thiol-, Isothiocyanat- und Sulfonsäuregruppen, aromatische Gruppen, vorzugsweise Aromaten mit Heteroatomen, insbesondere mit den vorstehenden funktio- nellen Gruppen, oder Kombinationen derselben. Ein geeignetes Cyclodextrin zur Verwendung im Rahmen der vorliegenden Erfindung ist ein Monochlorotriazinyl, substituiertes   &num;-Cyclodextrin,   wel- ches bereits als Vernetzungsmittel oder Oberflächen-modifizierendes Mittel, beispielsweise auf Textilien oder Papieren, bekannt ist.

   Dieses   &num;-Cyclodextrin-Derivat   kann leicht, beispielsweise durch Behandlung von Cyanurinchlorid mit   &num;-Cyclodextrin   in Wasser, hergestellt werden. 



   Vorzugsweise enthält ein erfindungsgemäss eingesetztes Cyclodextrin-Molekül 2 bis 4 funktio-   neile   Gruppen, insbesondere identische funktionelle Gruppen. Bevorzugterweise kann somit auch die Bindung zur festen Phase kovalent erfolgen. Bei mehr als zwei funktionellen Gruppen pro Cyc- lodextrin-Molekül können auch mehrere Analyten an ein Cyclodextrin-Molekül gebunden werden. 



   Gemäss einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung ein Konjugat umfassend eine feste Oberfläche, ein daran gebundenes Cyclodextrin und ein kovalent an das Cyclodextrin gebun- dener Analyt. Dieses Konjugat ist erhältlich gemäss dem oben beschriebenen erfindungsgemässen Verfahren. 



   Bevorzugterweise ist das erfindungsgemässe Konjugat als Biochip ausgebildet, d. h., die feste Oberfläche sowie die Analyten sind gemäss den für Biochips bekannten etablierten Methoden aus- geführt und in für derartige Biochips angepassten Methoden eingebaut, insbesondere, was die Soft- und Hardware-mässige Erfassung der Reaktionen an der festen Oberflächen anlangt (vgl. die bereits etablierten Biochip-Produkte der Firmen Affimetrix Inc. und Incyte). 



   Das erfindungsgemässe Konjugat umfasst bevorzugterweise vor allem bei der praktischen Anwendung weiters ein am Analyten spezifisch gebundenes Liganden-Molekül, beispielsweise eine komplementäre Nukleinsäure, ein Antikörper, ein Antigen, ein Rezeptor-Ligand, ein Rezeptor, und dgl. 



   Vor allem, wenn das erfindungsgemässe Konjugat als Biochip ausgebildet ist, umfasst das erfin- dungsgemässe Konjugat eine ganze Reihe (eine Bibliothek) an Analyten, wobei die Analyten-Biblio- thek bevorzugterweise in einer Weise auf der festen Oberfläche aufgebracht ist, dass die Loka- lisierung der verschiedenen Analyten räumlich exakt möglich ist. 



   Gemäss einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur spezifischen Detektion und gegebenenfalls Isolierung eines Liganden-Moleküls aus einer Probe, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass eine Probe, enthaltend das zu detektierende bzw. isolierende Liganden-Molekül (bzw eine Probe, die ein derartiges Liganden-Molekül enthalten kann) mit einem erfindungsgemässen Konjugat kontaktiert wird, das Liganden-Molekül spezifisch an den gebunde- nen Analyten gebunden wird und diese spezifische Bindung durch an sich bekannte Massnahmen verifiziert wird, worauf das Liganden-Molekül gegebenenfalls vom Konjugat gelöst und isoliert wird. 



  Die Verifizierung der spezifischen Bindung kann dabei an das jeweilige Liganden-/Analytensystem angepasst werden oder aber durch allgemein gängige Methoden vollzogen werden, wie (Sekun- där-) Antikörperreaktionen, Farbstoffreaktionen, Signalgebungsmethoden über die Festphase (Bio- chip), Radioaktivitäts- oder Fluoreszenzmarkierung, etc. 



   Die Erfindung wird anhand des nachfolgenden Beispiels sowie der Zeichnungsfiguren, auf die sie selbstverständlich nicht eingeschränkt ist, näher erläutert. 



   Es zeigen:   Fig. 1 : Bindung von Oligonukleotiden auf PVA/Palam, und   
Fig. 2: Die Bindung von Oligonukleotiden auf PVA/Palam/MCT, 

 <Desc/Clms Page number 4> 

 
Beispiel: 
Biomoleküle wie Enzyme, Antikörper, Mikroorganismen und Oligonukleotide (DNA, RNA) können durch Adsorption oder Einbetten in Polyvinylalkohol (PVA) immobilisiert werden. Polyvinyl- alkohol weist eine grosse, poröse Oberfläche auf, in die Biomoleküle eingelagert werden können. 



  Die Porengrösse kann durch basische bzw. saure Katalyse bei der Gelvernetzung bestimmt wer- den Es entstehen dreidimensionale Netzwerke, die mechanisch stabil sind und ein exzellentes Quellverhalten in Wasser aufweisen. PVA-Gele können durch Crosslinking mit Glutaraldehyd kova- lent vernetzt werden, was zu einer Erhöhung der Gelhärte führt. Ausserdem können leicht funktio- nelle, reaktive Gruppen durch Acetylierung oder Acylierung in Polyvinylalkohol eingebracht werden. 



  PVA mit Styrylpyridinium-Gruppen beispielsweise ist photosensitiv und schliesst Biomoleküle bei Bestrahlung durch Cyclodimerisierung in seine Poren ein. Für Biosensoren werden auch PVA- Gele, die mit Polyallylamin und Polyacrylsäure vernetzt sind, verwendet. Aufgrund der grossen Poren von PVA und der Eigenschaft, in Wasser zu einem dreidimensionalen Netzwerk aufzuquel- len, wird eine hohe   Immobilisierungskapazität   erreicht. Allerdings führt die grossporige Matrix auch dazu, dass immobilisierte Biomoleküle sehr leicht ausgewaschen werden. 



   1. Für die Immobilisierung von Biomolekülen, speziell der Immobilisierung von Oligonukleo- tiden auf Biochips, wurde eine dünne Schicht PVA/Polyallylamin auf einen Objektträger aufgezogen und darauf das unmodifizierte Oligonukleotid (DNA, RNA) aufgetragen. Die- ses bindet elektrostatisch über die Phosphatgruppe an das Amin. Die Bindung wird durch 
UV-Crosslinking gefestigt. 



   2. Um PVA kovalent zu vernetzen und   Biomoleküle,   im speziellen Oligonukleotide (DNA/RNA), kovalent an PVA zu binden, werden Polymere bestehend aus PVA, Polyallyl- amin (und Polyacrylsäure) und   Monochlortriazinyl-&num;-Cyclodextrin,   Na-Salz (MCT) herge- stellt. MCT enthält 2 bis 3 reaktive Chlortriazinylgruppen pro Cyclodextrin-Molekül und bindet kovalent an Polyallylamin und das aminmodifizierte Oligonukleotid. MCT stellt einen bifunktionellen Crosslinker dar, der einerseits über Polyallylamin mit PVA kovalent vernetzt ist, andererseits kovalent an ein Biomolekül, das nukleophile Gruppen wie-OH und -NH2 aufweist, binden kann. 



   Die Vorteile dieser Methoden sind: 
Die beschriebenen PVA-Gele sind stabil, hydrophil und porös. Bei Kontakt mit einer wässeri- gen Lösung quellen sie auf. Dadurch wird die Oberfläche vergrössert und die Immobilisierungs- kapazität erhöht. Der hydrophile Charakter des Gels ermöglicht einen leichten und schnellen Zugang der Biomoleküle zu der Polymeroberfläche und vermindert die unspezifische Adsorption. 



  Biomoleküle können in PVA in einer hydrophilen, dreidimensionalen, porösen Matrix in einem lösungsähnlichen Zustand immobilisiert werden. Aufgrund der darauf resultierenden grösseren Bewegungsfreiheit verhalten sich in PVA immobilisierte Biomoleküle reaktiver als auf planaren Oberflächen. Durch die kovalente Vernetzung des Gels und die kovalente Bindung der Biomole- küle an das Gel (s. 2. ), kann das Auswaschen der Biomoleküle unterbunden werden. 



   Die Anwendbarkeit der PVA-Gele, die nicht nur zur Immobilisierung von Oligonukleotiden (DNA, RNA), sondern auch zur Immobilisierung von Antikörpern, Enzymen und Mikroorganismen geeignet ist, wurde an Hand eines 16S rRNA-Chips gezeigt. 



   Die Oligonukleotide, die auf   PVA/Palam   bzw PVA/Palam/MCT gespottet wurden, blieben auch nach Waschen in Hybridisierungslösung (20 mM Tns, pH 7,4,0,01 % Laurylsulfat, 0,9 M NaCI und 35 % Formamid) gebunden. 



   87 % des auf   PVA/Palam   aufgetragenen Oligonukleotids blieb nach exzessivem Waschen in 
Hybridisierungslösung bei 60 C immobilisiert (Fig. 1) 
Auf PVA/Polyallylamin/MCT konnten   #90   % des ursprünglich aufgetragenen Oligonukleotids nach Waschen in Hybridlösung bei 60 C immobilisiert werden (Fig. 2). 

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Claims (1)

  1. PATENTANSPRÜCHE: 1. Verfahren zur Immobilisierung eines Analyten an einer festen Oberfläche, gekennzeichnet durch die folgenden Schritte <Desc/Clms Page number 5> - Binden eines Cyclodextrin-Moleküls mit mindestens zwei funktionellen Gruppen an eine feste Oberfläche, so dass noch mindestens eine funktionelle Gruppe des Cyclodextrin- Moleküls mit einem Analyten kovalent gebunden werden kann, und - kovalentes Binden des Analyten an das Oberflächen-gebundene Cyclodextrin-Molekül 2.
    Verfahren zur Immobilisierung eines Analyten an einer festen Oberfläche, gekennzeichnet durch die folgenden Schritte : - kovalentes Binden eines Cyclodextrin-Moleküls mit mindestens zwei funktionellen Gruppen an einen Analyten, so dass noch mindestens eine funktionelle Gruppe des Cyclodextrin-Moleküls an eine feste Oberfläche gebunden werden kann, und - Binden des Cyclodextrin-Moleküls mit dem gebundenen Analyten an eine feste Ober- fläche 3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass als Analyten Nuklein- säuren, insbesondere DNS, Enzyme, insbesondere Oxidoreduktasen, Transferasen und Hydrolasen, Antigene, Antikörper, Rezeptoren, Rezeptor-Liganden oder Mischungen die- ser Moleküle eingesetzt werden.
    4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass als feste Oberfläche ein Chromatographiematerial, eine Kunststoffoberfläche, ein Metallfilm oder Glas verwendet werden.
    5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass eine selektiv maskierte Kunststoffoberfläche als feste Oberfläche verwendet wird.
    6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass eine selektiv geätzte Glasoberfläche als feste Oberfläche verwendet wird.
    7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass das Cyclo- dextrin ein &num;-Cyclodextrin ist.
    8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass das Cyclo- dextrin reaktive Gruppen aufweist, die ausgewählt sind aus Halogen-, Amin-, Thiol-, Iso- thiocyanat- und Sulfonsäuregruppen, aromatische Gruppen, vorzugsweist Aromaten mit Heteroatomen, insbesondere mit den vorstehenden funktionellen Gruppen, oder Kombina- tionen derselben.
    9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass als Cyclo- dextrin ein Monochlorotriazinyl-&num;-Cyclodextrin verwendet wird.
    10. Konjugat, umfassend eine feste Oberfläche, ein daran gebundenes Cyclodextrin und einen kovalent an das Cyclodextrin gebundenen Analyten.
    11. Konjugat nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass es erhältlich ist gemäss einem Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 9.
    12. Konjugat nach Anspruch 10 oder 11, dadurch gekennzeichnet, dass es als Biochip ausge- bildet ist.
    13. Konjugat nach einem der Ansprüche 10 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass es weiters ein am Analyten spezifisch gebundenes Liganden-Molekül umfasst.
    14. Konjugat nach einem der Ansprüche 10 bis 13, dadurch gekennzeichnet, dass es eine Bibliothek an Analyten umfasst.
    15. Verfahren zur spezifischen Detektion und gegebenenfalls Isolierung eines Liganden-Mole- küls aus einer Probe, dadurch gekennzeichnet, dass eine Probe, enthaltend das Liganden- Molekül, mit einem Konjugat nach einem der Ansprüche 10 bis 14 kontaktiert wird, das Liganden-Molekül spezifisch an den gebundenen Analyten gebunden wird und diese spezifische Bindung durch an sich bekannte Massnahmen verifiziert wird, worauf das Liganden-Molekül gegebenenfalls vom Konjugat gelöst und isoliert wird.
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