AT352906B - Verfahren zur durchfuehrung eines radioimmuno- assay auf ionenaustauschersaeulen zur bestimmung von schilddruesenhormonen im blutserum - Google Patents
Verfahren zur durchfuehrung eines radioimmuno- assay auf ionenaustauschersaeulen zur bestimmung von schilddruesenhormonen im blutserumInfo
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Description
<Desc/Clms Page number 1> Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung der beiden Schilddrüsenhormone Trijodthyronin (Tg) bzw. Thyroxin (T) im Blutserum, bei dem die Abrennung der Schilddrüsenhormone von den Trägerproteinen des Blutserums mit Hilfe einer Ionenaustauschersäule durchgeführt wird und anschliessend die quantitative Bestimmung der auf der Säule verbleibenden Hormone mit Hilfe von spezifischen Anti- körpern und radioaktiv markiertem T3 und/oder T4 durchgeführt wird, wie es unter dem Sammelbegriff Radioimmunoassay oder RIA allgemein bekannt ist. Die Trennung der beiden Hormone vom Blutserum kann in bekannter Weise mit Hilfe einer mit einem Mischbettionenaustauscher gefüllten Säule durchgeführt werden (DE-OS 2126425). Zur Bestimmung von Trijodthyronin (T3) bzw. Thyroxin (T4) im Blutserum mit Hilfe eines Radioimmunoassay müssen die Hormone von ihren Trägerproteinen abgespalten werden, damit anschliessend die Reaktion mit dem betreffenden Antikörper ablaufen kann. Diese Abspaltung erfolgt üblicherweise durch Extraktion mit Äthanol, mittels Sephadex-Gelsäulen (DE-OS 2132112,2419884) oder mit Hilfe be- stimmte Chemikalien (8-Anilinonaphthalin-Sulfonsäure, Salicylat, Tetrachlorthyronin, Trichloracetat-NaOH u. a.). Diese Methoden sind entweder mit einem hohen Material- bzw. Arbeitsaufwand verbunden oder sie führen in Abhängigkeit von der Zusammensetzung des Blutserums zu systematischen Fehlern. Das Ziel der Erfindung besteht darin, ein neues Verfahren zur Abtrennung der Schilddrüsenhormone vom Blutserum zu entwickeln, mit Hilfe dessen ein Radioimmunoassay mit geringem Material- bzw. Arbeitsaufwand und ohne systematische Fehler durchgeführt werden kann. Erfindungsgemäss wird die Antikörper-Antigenreaktion auf der Ionenaustauschersäule ablaufen gelassen. Das Blutserum wird über die Ionenaustauschersäulen geschickt, wobei die Schilddrüsenhormone vom Austauscher gebunden werden, während die übrigen Serumbestandteile durchlaufen. Unmittelbar danach wird der betreffende Antikörper auf die Säule gegeben, so dass die Antikörper-Antigenreaktion ablaufen kann. Üblicherweise werden die Schilddrüsenhormone vom Ionenaustauscher jedoch so stark gebunden, dass die Reaktion mit dem Antikörper nicht ablaufen kann. Zweckmässigerweise besteht der Ionenaustauscher aus einem Mischbettaustauscher (Kationen-Ionenaustauscher) auf Dextranbasis. Besonders geeignet ist ein Mischbettaustauscher, der aus 10 bis 50 Gew.-% QAE-Sephadex A-25 und 90 bis 50% SP-Sephadex C-25 besteht. Vorteilhafterweise besteht die Lösung, in der die Antigen-Antikörper-Reaktion stattfindet, aus einem Puffergemisch von Tris (hydroxy-methyl)-aminomethan und Maleinsäure oder Maleinsäurehydrid in Wasser und weist einen PH-Wert zwischen 7, 0 und 8, 5 auf. Die Abtrennung der Hormone erfolgt dabei im alkalischen Milieu, während die Bindung an die entsprechenden Antikörper in dem Puffergemisch aus Tris (hydroxy-methyl)-aminomethan und Maleinsäure bei einem PH-Wert zwischen 7, 0 und 8, 5 durchgeführt wird. Mit Hilfe des erfindungsgemässen Verfahrens können die beiden Schilddrüsenhormone T3 und T4 entweder einzeln bestimmt werden, oder es können damit auch in einem Arbeitsgang beide Hormone bestimmt werden. Im Rahmen der Erfindung werden beispielsweise 50 bis 200 pi Blutserum mit Natronlauge und radioaktiv markiertem T 3 bzw. T4 versetzt und auf Ionenaustauschersäulen, bestehend aus einem Mischbettaustauscher auf Dextranbasis, gequollen in Natronlauge, aufgegeben. Die Schilddrüsenhormone werden auf der Säule zurückgehalten, während die übrigen Serumbestandteile vorteilhafterweise mit einem EMI1.1 der Säule gewaschen werden. Die Säule wird dadurch in einen für die Reaktion mit dem Antikörper optimalen Zustand gebracht. Anschliessend wird eine der beiden Antikörperlösungen auf die Säule gegeben. Die optimale Inkubationszeit zur Antikörper-Antigenreaktion beträgt 1 Stunde bei Raumtemperatur. Danach wird der gebildete Komplex mit dem Puffergemisch eluiert und dessen Radioaktivität gemessen. Soll auch das zweite Hormon bestimmt werden, wird anschliessend einfach die zweite Antikörperlösung auf die Säule aufgegeben und nach einer weiteren Stunde Inkubation der gebildete Komplex eluiert und seine Radioaktivität gemessen. Das nachfolgende Beispiel erläutert die Erfindung. Lösungen : 1. Tris-Maleinsäure-Puffer PH=7, 5 : Eine Lösung 0, lm Tris (hydroxy-methyl)-aminomethan und 0, 1m Maleinsäure wird mit 0, ln NaOH auf PH=7, 5 eingestellt. <Desc/Clms Page number 2> 2. 125J-T3- bzw. 125J-T4-Lösung in 0,1n NaOH. 3. Antikörperlösung: T3- bzw. T4-Antiserum wird mit Tris-Maleinsäure-Puffer PH=7, 5 1 : 3000 bzw. 1 : 300 verdünnt. lonenaustauschersäule : 7 mm Durchmesser, 20 mm hoch, gefüllt mit einer Mischung aus 30 Gew.-% EMI2.1 aufgegeben. Die Säule wird mit 1, 5 ml Tris-Maleinsäure-Puffer PH=7, 5 nachgewaschen. Nun werden 100 ul Ts-Antikörperlösung auf die Säule pipettiert und der sich bildende T3-Antikörperkomplex wird nach einer Stunde mit 1, 5 ml Puffer eluiert. Die Radioaktivität dieses Eluates wird gemessen. Nun werden 100 l T4-Antikörperlösung auf die Säule gegeben und der T4-Antikörperkomplex wird nach einer weiteren Stunde eluiert und seine Radioaktivität gemessen.
Claims (1)
- P A T EN T A N S P R Ü C H E : 1. Verfahren zur Bestimmung der beiden Schilddrüsenhormone Trijodthyronin (T3) bzw. Thyroxin (T4) im Blutserum, bei dem die Abtrennung der Schilddrüsenhormone von den Trägerproteinen des Blutserums mit Hilfe einer Ionenaustauschersäule durchgeführt wird und anschliessend die quantitative Bestimmung der auf der Säule verbleibenden Hormone mit Hilfe von spezifischen Antikörpern und EMI2.2 Ionenaustauscher aus einem Mischbettaustauscher (Kationen- und Anionenaustauscher) auf Dextranbasis besteht.3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t , dass die Lösung, in der die Antigen-Antikörper-Reaktion stattfindet, aus einem Puffergemisch von Tris (hydroxy- methyl)-aminomethan und Maleinsäure oder Maleinsäureanhydrid in Wasser besteht und einen pH-Wert zwischen 7, 0 und 8, 5 aufweist.
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