WO2024117770A1 - 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 - Google Patents

유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 Download PDF

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WO2024117770A1
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colored rice
active ingredient
composition
extract
immunity
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채성욱
지건영
김기모
김태수
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한국 한의학 연구원
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    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants

Definitions

  • the present invention relates to a composition for improving immunity containing colored rice extract as an active ingredient.
  • Immunity is a series of self-protection mechanisms that occur in the human body to exclude substances other than its own from disrupting the body's homeostasis or threatening itself, and is largely divided into innate immunity and acquired immunity.
  • Innate immunity also known as natural immunity, is composed of white blood cells including macrophages and natural killer cells, various cytokines such as TNF- ⁇ , mucus tissue, and complement present in the blood before acquired immunity occurs. It plays a primary protective immune role by causing phagocytosis against infectious pathogens such as microorganisms and virus invasions, as well as aged normal cells and cancer cells.
  • Acquired immunity which plays a role in reinforcing innate immunity, is also called adaptive immunity. It is achieved when T cells recognize antigens presented by phagocytosis by antigen-presenting cells, and includes cellular immunity involving T cells and antibodies produced by B cells. It consists of a humoral immune response. In this way, the human body is designed to maintain homeostasis by appropriately fighting innate and acquired immunity against invasion or infection by foreign substances such as foreign antigens.
  • the spleen is an important immune organ that forms various immune cells such as lymphocytes, macrophages, and natural killer cells.
  • the spleen mounts an immune response to antigens derived from the blood and also plays a role in removing aged and damaged cells.
  • Macrophages are the first to recognize intrusion of foreign substances and are involved in humoral and cellular immunity. When activated, their proliferation and spreading ability is improved, and their phagocytic ability is improved.
  • cytokines such as NO (nitric oxide), TNF- ⁇ , IL-1 ⁇ , and IL-6
  • NO nitric oxide
  • TNF- ⁇ IL-1 ⁇
  • IL-6 IL-6
  • Korea Patent Publication No. 2022-0089947 discloses a composition for immunity enhancement containing an extract of Sangdong tree as an active ingredient
  • Korean Patent No. 2308618 discloses a composition containing Hydrangea hydrangea extract as an active ingredient.
  • the present invention was developed in response to the above-mentioned needs, and the present invention provides a composition for enhancing immunity containing colored rice extract as an active ingredient, and provides a composition obtained from a mutant rice plant (KCTC 18500P) capable of producing seeds with yellow seed coat.
  • the present invention was completed by confirming that the colored rice extract of the present invention proliferates macrophages.
  • the present invention provides a health functional food composition for improving immunity containing colored rice extract as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating diseases caused by decreased immunity, containing colored rice extract as an active ingredient.
  • the present invention provides a feed composition for immunity enhancement containing colored rice extract as an active ingredient.
  • the present invention provides a veterinary composition for preventing or treating diseases caused by decreased immunity, containing colored rice extract as an active ingredient.
  • the present invention relates to a composition for improving immunity containing a colored rice extract as an active ingredient.
  • the colored rice extract of the present invention obtained from a mutant rice plant (KCTC 18500P) capable of producing seeds with yellow seed coat promotes the proliferation of macrophages. It has an effect.
  • Figure 1 shows the proliferation effect of macrophages according to treatment with the colored rice extract of the present invention.
  • CRMu Water is a water extract of colored rice
  • CRMu EtOH is an ethanol extract of colored rice.
  • a shows a statistically significant increase in cell proliferation in the LPS-treated group and colored rice extract-treated group compared to the untreated control group (Con)
  • b shows a statistically significant increase in cell proliferation in the colored rice extract-treated group compared to the LPS-treated group.
  • Low means p ⁇ 0.05.
  • Figure 2 shows the effect of increasing NO production according to treatment with the colored rice extract of the present invention.
  • CRMu Water is a water extract of colored rice
  • CRMu EtOH is an ethanol extract of colored rice.
  • a shows a statistically significant increase in NO production in the LPS-treated group or colored rice extract-treated group compared to the untreated control group (Con)
  • b shows a statistically significant increase in NO production in the colored rice extract-treated group compared to the LPS-treated group.
  • Low means p ⁇ 0.05.
  • Figure 3 shows the effect of increasing the S phase of the cell cycle according to treatment with the colored rice extract of the present invention.
  • (A) and (C) are colored rice water extracts (CRMu Water), and
  • (B) and (D) are colored rice ethanol extracts (CRMu EtOH).
  • a shows a statistically significant increase in the cell cycle S phase of the colored rice extract treated group compared to the untreated control group (Con), p ⁇ 0.05.
  • the present invention provides a health functional food composition for improving immunity containing colored rice extract as an active ingredient.
  • the colored rice is preferably colored rice obtained from a mutant rice plant (KCTC 18500P) capable of producing seeds with yellow seed coat, but is not limited thereto.
  • the colored rice extract can be prepared by a method including the following steps, but is not limited to this:
  • step (3) Concentrating and drying the filtered extract of step (2) to prepare an extract.
  • the extraction solvent is preferably selected from water, C 1 -C 4 lower alcohol, or a mixture thereof, more preferably water or ethanol, but is not limited thereto.
  • the extraction solvent is preferably added at 1 to 20 times the weight of the colored rice for extraction, and more preferably at 5 to 15 times the weight of the colored rice.
  • the extraction time is preferably 0.5 to 10 hours, more preferably 0.5 to 5 hours, but is not limited to this.
  • the vacuum concentration in step (3) is preferably performed using a vacuum vacuum concentrator or a vacuum rotary evaporator, but is not limited thereto.
  • drying is preferably performed by reduced pressure drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying, or freeze drying, but is not limited thereto.
  • composition is preferably manufactured in a dosage form selected from powder, granule, pill, tablet, capsule, candy, syrup and beverage, but is not limited thereto.
  • the colored rice extract can be added as is or used together with other foods or food ingredients, and can be used appropriately according to conventional methods.
  • the mixing amount of the active ingredient can be appropriately determined depending on the purpose of use (prevention, health, or therapeutic treatment).
  • the composition of the present invention is added in an amount of 15 parts by weight or less, preferably 10 parts by weight or less, based on the raw materials.
  • the amount may be below the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount above the above range. There are no special restrictions on the types of foods above.
  • Examples of foods to which the extract can be added include meat, sausages, bread, chocolate, candies, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, dairy products including ice cream, various soups, beverages, tea, drinks, These include alcoholic beverages and vitamin complexes, and include all health functional foods in the conventional sense.
  • composition of the present invention When used as a health drink, it may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional ingredients like conventional drinks.
  • natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as textrin and cyclotenstrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • a sweetener natural sweeteners such as thaumatin and stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin or aspartame, etc. can be used.
  • the ratio of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g, per 100 g of the composition of the present invention.
  • the composition of the present invention contains various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal neutralizer, pH adjuster, stabilizer, preservative, glycerin, alcohol, carbonic acid. It may contain carbonating agents used in beverages. Additionally, the composition of the present invention may contain pulp for the production of natural fruit juice, fruit juice beverages, and vegetable beverages. These ingredients can be used independently or in combination. The ratio of these additives is not very important, but the composition of the present invention is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating diseases caused by decreased immunity, containing colored rice extract as an active ingredient.
  • Diseases caused by decreased immunity may include cold, asthma, sinusitis, pneumonia, sepsis, osteomyelitis, meningitis, herpes simplex, shingles, stomatitis, allergy, autoimmunity, inflammatory bowel disease, rheumatoid arthritis, atopy, rhinitis, or psoriasis. , but is not limited to this.
  • composition of the present invention is preferably prepared in any one formulation selected from capsules, powders, granules, tablets, suspensions, emulsions, syrups, and aerosols, but is not limited thereto.
  • composition of the present invention may further include pharmaceutically acceptable carriers, excipients, or diluents in addition to the above active ingredients, and may be in various oral or parenteral dosage forms. When formulated, it is prepared using diluents or excipients such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants. Solid preparations for oral administration include capsules, powders, granules, tablets, pills, etc. These solid preparations contain one or more compounds and at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, sucrose, or lactose ( It is prepared by mixing lactose, gelatin, etc.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, emulsions, syrups, and aerosols.
  • simple diluents such as water and liquid paraffin
  • various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included.
  • Preparations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories.
  • Non-aqueous solvents and suspension solvents may include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate.
  • injectable ester such as ethyl oleate.
  • suppositories witepsol, macrogol, tween 61, cacao, laurel, glycero gelatin, etc. can be used.
  • composition according to the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat a disease with a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and the level of the effective amount is determined by a variety of factors including the type and severity of the disease; Activity of the drug, sensitivity to the drug, time of administration, route of administration and rate of excretion; This may depend on factors including duration of treatment, concurrent medications used, and other factors well known in the medical field.
  • the composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered singly or multiple times. Considering all of the above factors, it is important to administer an amount that can achieve maximum effect with the minimum amount without side effects, and this can be easily determined by a person skilled in the art.
  • the dosage of the composition of the present invention varies depending on the patient's weight, age, gender, health condition, diet, administration time, administration method, excretion rate, and severity of the disease, and the daily dosage is based on the amount of colored rice extract. It is 0.01 to 2,000 mg/kg, preferably 30 to 500 mg/kg, and more preferably 50 to 300 mg/kg, and can be administered 1 to 6 times a day.
  • the composition of the present invention can be used alone or in combination with surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy, and methods using biological response modifiers.
  • the present invention provides a feed composition for immunity enhancement containing colored rice extract as an active ingredient.
  • the term 'feed' may mean any natural or artificial diet, meal, etc., or a component of the meal, for or suitable for eating, ingestion, and digestion by animals.
  • the type of feed is not particularly limited, and feed commonly used in the art can be used.
  • Non-limiting examples of the feed include plant feeds such as grains, roots and fruits, food processing by-products, algae, fiber, pharmaceutical by-products, oils and fats, starches, cucurbits or grain by-products;
  • animal feeds such as proteins, inorganic substances, fats and oils, minerals, fats and oils, single-cell proteins, zooplanktons or food. These may be used alone or in combination of two or more types.
  • the present invention provides a veterinary composition for preventing or treating diseases caused by decreased immunity, containing colored rice extract as an active ingredient.
  • the veterinary composition containing the colored rice extract of the present invention may further include appropriate excipients and diluents according to conventional methods.
  • Excipients and diluents that may be included in the veterinary composition containing the colored rice extract of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginate, gelatin, Calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, cetanol, stearyl alcohol, liquid paraffin. , sorbitan monostearate, polysorbate 60, methylparaben, propylparaben, and mineral oil.
  • the veterinary composition containing the colored rice extract according to the present invention may further include fillers, anti-coagulants, lubricants, wetting agents, spices, emulsifiers, preservatives, etc.
  • the veterinary composition according to the present invention is active after being administered to animals.
  • the veterinary composition according to the present invention may vary depending on the age, sex, and weight of the animal, but can be administered once or several times a day, and the dosage increases or decreases depending on the route of administration, degree of disease, sex, weight, age, etc. It can be. Accordingly, the above dosage does not limit the scope of the present invention in any way.
  • the macrophage cell line used in the present invention RAW 264.7 cells (Murine macrophage cell line), was purchased from the Korean Cell Line Bank (KCLB, Seoul, Korea).
  • the cell culture medium used was DMEM (Dulbecco'Modified Eagle'Media; Gibco) containing 10% FBS (Fetal Bovine Serum; Gibco) and 1% penicillin-streptomycin, and cultured at 37°C and 5% CO 2 for 48 hours. cultured for a while.
  • RAW 264.7 cells were seeded in a 96-well plate at a concentration of 5 ⁇ 10 3 cells/well and stabilized for 24 hours.
  • 1 ⁇ g/ml LPS (Lipopolysaccharide; Sigma) and the colored rice extract of the present invention were treated at each concentration (12.5, 25, 50, 100 and 200 ⁇ g/ml) and cultured for 24 hours, followed by MTS assay (Promega). Changes in cell proliferation were analyzed using this method.
  • the cells were seeded in a 96-well plate at a concentration of 1 ⁇ 10 cells/well in DMEM containing 10% FBS (Fetal Bovine Serum; Gibco) and 1% penicillin-streptomycin (100U/ml) and stabilized for 24 hours. . Afterwards, LPS (1 ⁇ g/ml) and the colored rice extract of the present invention were treated with different concentrations (12.5, 25, 50, 100 and 200 ⁇ g/ml) and cultured in an incubator at 37°C and 5% CO 2 for 24 hours.
  • FBS Fetal Bovine Serum
  • penicillin-streptomycin 100U/ml
  • the amount of NO production was significantly increased only in the group treated with high concentration colored rice hot water extract (100 and 200 ⁇ g/ml) compared to the control group (Con), but the inflammatory group Compared to (LPS), the amount of NO production was confirmed to be significantly lower in the colored rice extract treatment group (CRMu water and CRMu EtOH) ( Figure 2).
  • RAW 264.7 cells were seeded in a 6-well plate at a concentration of 2 ⁇ 10 5 cells/well and stabilized for 24 hours.
  • the colored rice extract of the present invention was treated at different concentrations (12.5, 25, 50, 100 and 200 ⁇ g/ml) and cultured for 24 hours, then stained with PI (Propidium iodide) to analyze cell cycle changes.
  • PI Propidium iodide
  • the cell cycle in the colored rice extract treated group (CRMu water and CRMu EtOH) of the present invention compared to the control group (Con) The middle S phase increased. Since the S phase is a stage in which the number of cells increases through cell division, it was determined that the colored rice extract of the present invention increases the number of macrophages.

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Abstract

본 발명은 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 노란색 종피를 갖는 종자를 생산할 수 있는 돌연변이 벼 식물체(KCTC 18500P)로부터 얻은 유색미를 대상으로 제조한 본 발명의 유색미 추출물은 대식세포를 증식시키는 효과가 우수하므로, 면역증진용 건강기능식품 조성물, 면역증진을 위한 동물용 사료 첨가제 또는 면역력 저하에 의한 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물
본 발명은 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물에 관한 것이다.
면역은 인체가 자기 성분 이외의 물질이 생체의 항상성을 깨뜨리거나 자기를 위협하는 것을 배제하기 위해 일어나는 일련의 자기 보호기작으로, 크게 선천적 면역(innate immunosurveillance)과 획득 면역(adaptive immunosurveillance)으로 구분된다.
자연 면역이라고도 하는 선천적 면역은 대식 세포, 자연살해 세포 등을 포함하는 백혈구, TNF-α 등의 다양한 사이토카인, 점액조직, 혈액에 존재하는 보체(complement) 등으로 구성되어 있어 획득 면역이 발생하기 전에 미생물, 바이러스 침입 등의 감염성 병원체뿐만 아니라 노화된 정상세포와 암세포 등에 대해 대식작용(phagocytosis)을 일으켜 1차적인 방어 면역 역할을 담당한다. 선천 면역을 보강하는 역할을 하는 획득 면역은 적응 면역이라고도 하는데, 항원 제시 세포가 포식하여 제시한 항원을 T 세포가 인식하면서 이루어지며, T 세포가 관여하는 세포성 면역과 B 세포가 생산하는 항체에 의한 체액성 면역반응으로 이루어진다. 이처럼 인체는 외부 항원과 같은 외래 물질의 침입 혹은 감염에 대하여 선천적 면역 및 획득 면역이 적절하게 대항하여 항상성을 유지하도록 설계되어 있다.
비장은 림프구와 대식 세포, 자연살해 세포 등 다양한 면역 세포를 형성하는 중요한 면역기관이다. 비장은 혈액에서 유래된 항원에 대해 면역반응을 하며, 노화된 세포 및 손상된 세포를 제거하는 역할도 수행한다.
선천 면역에서 비장 등에 존재하는 대식 세포가 가장 중요한 역할을 담당하는데, 대식 세포는 외부물질 침입을 가장 먼저 인지하여 체액성 면역과 세포성 면역에 관여하며, 활성화되면 증식과 확산능력의 향상, 대식 능력 증강뿐만 아니라 NO(nitric oxide), TNF-α, IL-1β, IL-6 등의 사이토카인을 분비하여 각종 미생물, 바이러스 등 감염성 병원체의 증식을 억제하고 암세포 등에 대해서도 독성을 나타내는 것으로 알려져 있다.
한편, 면역력의 저하는 본래 우리 몸이 가지고 있는 자연치유기능을 점차 약화시켜 다양한 질환 또는 증상을 유발한다. 이를 해결하기 위해서는 근본적으로 면역력 증진이 요구되지만, 면역력은 개인별로 차이가 있어, 장기적인 관점에서 접근할 필요가 있다. 현재까지 면역증진을 목적으로 하는 다양한 치료제 또는 보조제가 개발되어 시판되고 있으나, 부작용 문제들이 있고, 주로 시판되는 것은 예방보다는 치료용으로 복용되는 것으로, 부작용 없이 장기 복용이 가능하고, 예방용으로도 적합한 면역증진용 조성물이 요구되는 실정이다.
면역증진 관련된 선행기술로는 한국공개특허 제2022-0089947호에 상동나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증진용 조성물이 개시되어 있고, 한국등록특허 제2308618호에 산수국 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증진용 조성물이 개시되어 있지만, 본 발명의 '유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물'에 대해서는 아직까지 개시된 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명은 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물을 제공하고, 노란색 종피를 갖는 종자를 생산할 수 있는 돌연변이 벼 식물체(KCTC 18500P)로부터 얻은 본 발명의 유색미 추출물이 대식세포를 증식시키는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역력 저하에 의한 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 사료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역력 저하에 의한 질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 노란색 종피를 갖는 종자를 생산할 수 있는 돌연변이 벼 식물체(KCTC 18500P)로부터 얻은 본 발명의 유색미 추출물은 대식세포를 증식시키는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 유색미 추출물 처리에 따른 대식세포의 증식 효과를 나타낸 것이다. (A) CRMu Water는 유색미 물 추출물이고, (B) CRMu EtOH은 유색미 에탄올 추출물이다. a는 아무것도 처리하지 않은 대조군(Con) 대비 LPS 처리군 및 유색미 추출물 처리군의 세포증식이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것이고, b는 LPS 처리군 대비 유색미 추출물 처리군의 세포증식이 통계적으로 유의미하게 낮다는 것으로, p<0.05이다.
도 2는 본 발명의 유색미 추출물 처리에 따른 NO 생성 증가 효과를 나타낸 것이다. (A) CRMu Water는 유색미 물 추출물이고, (B) CRMu EtOH은 유색미 에탄올 추출물이다. a는 아무것도 처리하지 않은 대조군(Con) 대비 LPS 처리군 또는 유색미 추출물 처리군의 NO 생성량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것이고, b는 LPS 처리군 대비 유색미 추출물 처리군의 NO 생성량이 통계적으로 유의미하게 낮다는 것으로, p<0.05이다.
도 3은 본 발명의 유색미 추출물 처리에 따른 세포주기 S기의 증가 효과를 나타낸 것이다. (A) 및 (C)는 유색미 물 추출물(CRMu Water)이고, (B) 및 (D)는 유색미 에탄올 추출물(CRMu EtOH)이다. a는 아무것도 처리하지 않은 대조군(Con) 대비 유색미 추출물 처리군의 세포주기 S기가 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것이고, p<0.05이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 유색미는 노란색 종피를 갖는 종자를 생산할 수 있는 돌연변이 벼 식물체(KCTC 18500P)로부터 얻은 유색미인 것이 바람직하지만, 이에 한정하지 않는다.
상기 유색미 추출물은 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있으나, 이에 한정하지 않는다:
(1) 유색미에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
(2) 단계 (1)의 추출물을 여과하는 단계; 및
(3) 단계 (2)의 여과한 추출물을 농축하고 건조하여 추출물을 제조하는 단계.
상기 단계 (1)에서 추출용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물 중에서 선택하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 물 또는 에탄올이지만 이에 한정하지 않는다.
상기 제조방법에 있어서, 추출방법은 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 당업계에 공지된 모든 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 상기 추출용매는 유색미 중량의 1~20배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 5~15배 첨가하는 것이다. 추출시간은 0.5~10시간인 것이 바람직하며, 0.5~5시간이 더욱 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 (3)의 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하지만, 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무 건조 또는 동결 건조하는 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.
상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만 이에 제한하는 것은 아니다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 유색미 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합체 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명의 조성물을 건강 음료로 사용할 경우, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 텍스트린, 사이클로텐스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제, 사카린 또는 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100g당 일반적으로 약 0.01~0.04g, 바람직하게는 약 0.02~0.03g이다. 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 중점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물은 100 중량부 당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역력 저하에 의한 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 면역력 저하에 의한 질환은 감기, 천식, 부비동염, 폐렴, 패혈증, 골수염, 수막염, 단순포진, 대상포진, 구내염, 알레르기, 자가면역, 염증성장질환, 류마티스관절염, 아토피, 비염, 또는 건선일 수 있지만, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 조성물은 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 및 에어로졸 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 조성물은 상기 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 환제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제 및 현탁 용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 비경구 투여 시 피부 외용 또는 복강 내, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사 방식을 선택하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효량의 수준은 질환의 종류 및 중증도; 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율; 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 유색미 추출물의 양을 기준으로 0.01~2,000mg/kg이고, 바람직하게는 30~500mg/kg이고, 더욱 바람직하게는 50~300mg/kg이며, 하루 1~6회 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 단독으로 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 사료 조성물을 제공한다.
본 발명에서 용어 '사료'는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다. 상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역력 저하에 의한 질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 유색미 추출물을 포함하는 수의학적 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 유색미 추출물을 포함하는 수의학적 조성물에 포함될 수 있는 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 세탄올, 스테아릴알콜, 유동파라핀, 솔비탄모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 메칠파라벤, 프로필파라벤 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명에 따른 유색미 추출물을 포함하는 수의학적 조성물은 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향신료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있는데, 본 발명에 의한 수의학적 조성물은 동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있고, 제형은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 좌제, 멸균 주사용액, 멸균 외용제 등의 형태일 수 있다.
본 발명에 의한 수의학적 조성물은 동물의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 1일 1회 내지 수회 투여할 수 있고, 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
이하, 본 발명의 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
제조예 1. 유색미 추출물의 제조
(1) 유색미 열수 추출물의 제조
노란색 종피를 갖는 종자를 생산할 수 있는 돌연변이 벼 식물체(KCTC 18500P)로부터 얻은 유색미 1kg에 대하여 10배수의 증류수를 가하고, 3시간 동안 환류 추출하였다. 추출물은 여과한 후 감압농축기로 농축하고 동결건조기를 이용하여 얻은 유색미 추출물(CRMu Water)을 하기 실험에 사용하였다. 추출물은 실험에 사용하기 위하여 10%(v/v) DMSO에 녹여 사용하였다.
(2) 유색미 에탄올 추출물의 제조
노란색 종피를 갖는 종자를 생산할 수 있는 돌연변이 벼 식물체(KCTC 18500P)로부터 얻은 유색미 1kg에 대하여 10배수의 70%(v/v) 에탄올을 가하고, 3시간 동안 환류 추출하였다. 추출물은 여과한 후 감압농축기로 농축하고 동결건조기를 이용하여 얻은 유색미 추출물(CRMu EtOH)을 하기 실험에 사용하였다. 추출물은 실험에 사용하기 위하여 10%(v/v) DMSO에 녹여 사용하였다.
실시예 1. 유색미 추출물 처리에 따른 면역증진 효능 확인
본 발명에 사용된 대식세포주인 RAW 264.7 세포(Murine macrophage cell line)는 한국세포주은행(KCLB, Korean Cell Line Bank, Seoul, Korea)으로부터 분양받아 사용하였다. 세포배양 배지는 10% FBS(Fetal Bovine Serum; Gibco) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신이 포함된 DMEM(Dulbecco’Modified Eagle’Media; Gibco)을 사용하였으며, 37℃, 5% CO2 조건으로 48시간 동안 배양하였다.
RAW 264.7 세포를 96웰 플레이트에 5×103 세포/웰의 농도로 분주하여 24시간 동안 안정화시켰다. 1㎍/㎖의 LPS(Lipopolysaccharide; Sigma) 및 본 발명의 유색미 추출물을 농도별(12.5, 25, 50, 100 및 200㎍/㎖)로 각각 처리하여 24시간 배양한 후 MTS 어세이(Promega)를 이용하여 세포증식 변화를 분석하였다.
그 결과, 대조군(Con)과 비교하여 유색미 추출물 처리군(CRMu water 및 CRMu EtOH)에서 세포증식이 증가되었으며, LPS를 처리하여 염증반응을 유도한 실험군과 비교하여 낮은 세포증식 증가를 나타내었다. 유색미 추출물 처리에 의해 RAW 264.7 세포의 세포증식이 대조군보다 증가하지만, LPS를 처리한 염증군보다는 낮은 수준의 세포증식을 통해 면역증진 효능이 있음을 확인하였다(도 1).
실시예 2. 유색미 추출물 처리에 따른 NO(Nitric oxide) 생성량 변화 확인
10% FBS(Fetal Bovine Serum; Gibco), 1% 페니실린-스트렙토마이신(100U/㎖)을 포함하는 DMEM에 1×104 세포/웰의 농도로 96-웰 플레이트에 분주한 후 24시간 동안 안정화시켰다. 이후 LPS(1㎍/㎖) 및 본 발명의 유색미 추출물을 농도별(12.5, 25, 50, 100 및 200㎍/㎖)로 처리하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 배양한 후 상등액 100㎕를 새로운 96-웰 플레이트에 옮기고 동일한 양의 그리스 시약(Griess reagent) 혼합액(Stock-I: 0.2% naphylendia HCl, Stock-II: 2% sulfanilamide in 5% H3PO4)을 첨가하여 15분 후, ELISA 마이크로플레이트 리더(Infinite 200 pro, TECAN, Austria)를 사용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 표준품으로 질산나트륨(sodium nitrate)를 사용하였다.
본 발명의 유색미 추출물 처리에 따른 NO 생성량 변화를 확인한 결과, 대조군(Con)과 비교하여 고농도의 유색미 열수 추출물(100 및 200㎍/㎖) 처리군에서만 NO의 생성량이 유의적으로 증가하였으나, 염증군(LPS)과 비교하여 유색미 추출물 처리군(CRMu water 및 CRMu EtOH)에서 NO 생성량이 유의적으로 낮음을 확인하였다(도 2). 이는 유색미 추출물 처리에 의한 RAW 264.7 세포의 세포증식이 염증반응(NO 생성량 증가)에 의한 세포증식이 아닌 면역증진에 의한 효능임을 의미한다.
실시예 3. 유색미 추출물 처리에 따른 세포주기 변화 확인
RAW 264.7 세포를 6-웰 플레이트에 2×105 세포/웰의 농도로 분주하여 24시간 동안 안정화시켰다. 본 발명의 유색미 추출물을 농도별(12.5, 25, 50, 100 및 200㎍/㎖)로 각각 처리하여 24시간 배양한 후 PI(Propidium iodide)로 염색하여 세포주기의 변화를 분석하였다.
그 결과, 도 3에 개시한 바와 같이 실시예 1의 유색미 추출물 처리에 따른 세포증식 변화와 유사하게, 대조군(Con)과 비교하여 본 발명의 유색미 추출물 처리군(CRMu water 및 CRMu EtOH)에서 세포주기 중 S기가 증가되었다. S기는 세포분열을 통해 세포수를 증식하는 단계이므로, 본 발명의 유색미 추출물이 대식세포의 수를 증가시키는 것으로 판단하였다.

Claims (9)

  1. 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 건강기능식품 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 유색미는 노란색 종피를 갖는 종자를 생산할 수 있는 돌연변이 벼 식물체(KCTC 18500P)로부터 얻은 유색미인 것을 특징으로 하는 면역증진용 건강기능식품 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 이용하여 추출한 것을 특징으로 하는 면역증진용 건강기능식품 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 면역증진용 건강기능식품 조성물.
  5. 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역력 저하에 의한 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 면역력 저하에 의한 질환은 감기, 천식, 부비동염, 폐렴, 패혈증, 골수염, 수막염, 단순포진, 대상포진, 구내염, 알레르기, 자가면역, 염증성장질환, 류마티스관절염, 아토피, 비염, 또는 건선인 것을 특징으로 하는 면역력 저하에 의한 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 제5항에 있어서, 상기 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 면역력 저하에 의한 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  8. 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 사료 조성물.
  9. 유색미 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역력 저하에 의한 질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물.
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