WO2023234624A1 - 파네라 페니실릴로바 추출물을 이용한 지방간 질환 개선용 조성물 - Google Patents

파네라 페니실릴로바 추출물을 이용한 지방간 질환 개선용 조성물 Download PDF

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WO2023234624A1
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panera
penicillova
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이주상
이치헌
진유미
김영규
이성현
이은경
이소영
이상우
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조아제약주식회사
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Definitions

  • the present invention relates to a composition for improving fatty liver disease using Phanera penicilliloba extract.
  • Fatty liver refers to a condition in which fat is excessively accumulated within liver cells, and the main causes of its development include drinking, obesity, diabetes, and hyperlipidemia.
  • fatty liver can be divided into alcoholic fatty liver disease (ALD) and non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Both diseases have a similar pathological spectrum ranging from simple steatosis, steatohepatitis, cirrhosis, and liver cancer, but when alcohol is the cause, it is called ALD, and when it shows histological damage similar to alcoholic liver disease without a history of alcohol abuse, it is called NAFLD. .
  • Fat accumulation in the liver is caused by increased fat inflow into the liver due to excessive intake of dietary fat or calories, increased lipolysis in adipose tissue, resulting in excessive influx of free fatty acids (FFAs) into the liver, and new substances in the liver. It is caused by disorders in several fat metabolic pathways, such as increased fat synthesis, decreased triglyceride outflow through very low density lipoprotein (VLDL) in the liver, and decreased fatty acid oxidation in the liver.
  • VLDL very low density lipoprotein
  • Oxidative stress also plays a major role in the development of liver disease. If oxidative stress continues with excessive accumulation of fat in the liver, an excessive inflammatory response occurs and the possibility of developing chronic liver diseases such as cirrhosis and liver cancer increases. In particular, in alcoholic liver disease, alcohol is oxidized by CYP2E1. ROS inhibits fatty acid oxidation in mitochondria and induces fat accumulation.
  • Panera penicilliloba is a shrub plant belonging to the legume family (Fabaceae), also called Bauhinia penicilliloba , and grows naturally in Thailand, Cambodia, Western Laos, and Vietnam. Locally, it is called Sieo daeng, and it is known to have been used for stomatitis in northeastern Thailand and diarrhea in Laos. Looking at literature data, it has been confirmed that the extract of Panera penicillova has immunomodulatory, antibacterial, and antioxidant effects, and as a result of toxicity evaluation in animal models, it has been confirmed that it does not show acute or chronic toxicity, but it is related to research on alcoholic and non-alcoholic ingredients. There is no literature to be found.
  • Fabaceae also called Bauhinia penicilliloba
  • the present invention discloses the fatty liver disease improving activity of Panera penicillova extract, etc.
  • the purpose of the present invention is to provide a composition for improving fatty liver disease using Panera penicillova extract.
  • Panera penicillova extract inhibits neutral fat accumulation, promotes neutral fat decomposition, and reduces oxidative stress in a cell test using HepG2 cells, which are human liver cancer cells. It was completed by confirming that it prevents damage to liver cells.
  • the present invention can be viewed as a composition for improving fatty liver disease containing Panera penicillova extract as an active ingredient, and in another aspect, Panera penicillova extract as an active ingredient. It can be understood as a composition for preventing liver damage or protecting the liver.
  • Panta penicillova extract refers to the whole plant, leaf, branch, stem, fruit, root, or a mixture thereof of Panera penicillova as the extraction object, and water and a low-carbon solution of 1 to 4 carbon atoms as the extraction solvent.
  • Alcohol methanol, ethanol, butanol, etc.
  • methylene chloride ethylene, acetone, hexane, ether, chloroform, ethyl acetate, butyl acetate, N,N-dimethylformamide (DMF), dimethyl sulfoxide (DMSO), 1,3 -
  • an extract obtained by leaching using butylene glycol, propylene glycol, or a mixed solvent thereof an extract obtained using a supercritical extraction solvent such as carbon dioxide, pentane, or a fraction obtained by fractionating the extract
  • the extraction method refers to the active substance Considering the polarity, degree of extraction, and degree of preservation, any method such as cold immersion, reflux, heating, ultrasonic radiation, or supercritical extraction can be applied.
  • the extract is suspended in a specific solvent and then mixed with a solvent of different polarity to form a fraction obtained by adsorbing the crude extract onto a column filled with silica gel and then mixed with a hydrophobic solvent, a hydrophilic solvent, or a mixture of these. It is meant to include fractions obtained using the mobile phase.
  • the meaning of the extract includes concentrated liquid extract or solid extract from which the extraction solvent has been removed by methods such as freeze-drying, vacuum drying, hot air drying, and spray drying.
  • it refers to an extract obtained using water, an alcohol having 1 to 4 carbon atoms, or a mixed solvent thereof as an extraction solvent, and more preferably, an extract obtained using a mixed solvent of water and an alcohol having 1 to 4 carbon atoms as an extraction solvent. do.
  • active ingredient refers to an ingredient that exhibits the desired activity alone or can exhibit activity in combination with a carrier that is not active on its own.
  • fatty liver disease includes simple steatosis, fatty liver, and steatohepatitis accompanied by inflammation, and particularly non-alcoholic fatty liver disease.
  • “improvement of fatty liver disease” includes prevention and treatment of fatty liver disease, and inhibition of fat accumulation in liver tissue.
  • prevention of liver damage means suppressing or recovering from damage such as death of liver cells caused by heavy metals, carbon tetrachloride, reactive oxygen species, etc. that cause liver cell toxicity.
  • the composition for improving fatty liver disease or preventing liver damage of the present invention may be included in any amount (effective amount) depending on the use, formulation, purpose of formulation, etc., as long as the active ingredient can exhibit fatty liver improvement activity, liver damage prevention activity, etc.
  • a typical effective amount will be determined within the range of 0.001% by weight to 20.0% by weight based on the total weight of the composition.
  • the “effective amount” refers to the intended functional and pharmacological effects, such as the effect of improving fatty liver and preventing liver damage, when the composition of the present invention is administered to mammals, preferably humans, to which it is applied during the administration period according to the suggestions of medical experts, etc. It refers to the amount of the active ingredient included in the composition of the present invention, which can represent. Such effective amounts can be determined experimentally within the scope of the ordinary ability of those skilled in the art.
  • the composition of the present invention provides convenience of taking or ingestion by increasing or reinforcing the fatty liver improvement effect or by adding similar activities such as anti-obesity activity, blood pressure control activity, blood lipid improvement activity, and fatigue improvement activity.
  • similar activities such as anti-obesity activity, blood pressure control activity, blood lipid improvement activity, and fatigue improvement activity.
  • any compounds or natural extracts whose safety has already been proven in the art and known to have the corresponding activity may be additionally included.
  • These compounds or extracts include compounds, extracts, and pharmaceuticals listed in compendial documents such as the Pharmacopoeia of each country (in Korea, the “Korean Pharmacopoeia”) and the Code of Health Functional Foods of each country (in Korea, it is the “Standards and Specifications for Health Functional Foods” notified by the Ministry of Food and Drug Safety).
  • BNR17 Lactobacillus gasseri BNR17
  • L-carnitine tartrate green mate extract
  • green coffee bean extract perilla leaf extract
  • soybean germ extract etc.
  • ginseng leaf alcohol extract powder lactoferrin (milk purified protein), lemon balm extract mixed powder , mate thermal water extract, seaweed and other complex extracts (xanthigen), fermented vinegar pomegranate complex, pu-erh tea extract, soybean peptide complex, vegetable oil diglyceride, wild mango seed extract, medium chain fatty acid (MCFA)-containing oil
  • Complex extracts such as coleus forskohlli extract, chitooligosaccharide, finger root extract powder, hibiscus, etc., GABA-containing powder derived from L-glutamic acid recognized for its functionality in 'blood pressure regulation', katsuobushi oligopeptide, Natto bacteria culture powder, Seomoktae ( Peptide complex, salmon peptide, olive leaf extract, sardine peptide, casein hydrolyzate, coenzyme Q10, grape seed enzymatically decomposed extract powder, Haitai oligopeptide, etc., DHA concentrated oil and
  • One or more of these compounds or extracts may be included in the composition of the present invention along with the active ingredient.
  • composition of the present invention can be regarded as a food composition in a specific aspect.
  • the food composition of the present invention can be manufactured in any form, for example, beverages such as tea, juice, carbonated drinks, and electrolyte drinks, processed oils such as milk and yogurt, gums, rice cakes, Korean snacks, bread, It can be manufactured into foods such as snacks and noodles, and health functional food preparations such as tablets, capsules, pills, granules, liquids, powders, flakes, pastes, syrups, gels, jellies, bars, etc.
  • the food composition of the present invention can have any product classification in terms of legal and functional classification as long as it complies with the enforcement laws and regulations at the time of manufacture and distribution. For example, it is a health functional food according to the Korean ⁇ Act on Health Functional Foods ⁇ , or confectionery, pulses, tea, etc. according to each food type according to the food code of the Korean ⁇ Food Sanitation Act ⁇ (“Food Standards and Specifications” notified by the Ministry of Food and Drug Safety). These may be beverages, special purpose foods, etc.
  • the food composition of the present invention may contain food additives in addition to the active ingredients.
  • Food additives can generally be understood as substances that are added to, mixed with, or infiltrated into food when manufacturing, processing, or preserving food. Since they are consumed daily and for a long period of time with food, their safety must be guaranteed.
  • Food Additives Code of Laws of each country that regulates the manufacturing and distribution of food in Korea, it is the Food Sanitation Act
  • food additives with guaranteed safety are limited in terms of ingredients or functions.
  • food additives are classified into chemical synthetics, natural additives, and mixed preparations in terms of composition. These food additives are classified as sweeteners and flavoring agents in terms of function. , preservatives, emulsifiers, acidulants, thickeners, etc.
  • Sweeteners are used to impart an appropriate sweetness to foods, and both natural and synthetic ones can be used in the food composition of the present invention.
  • a natural sweetener is used, and natural sweeteners include sugar sweeteners such as corn syrup solids, honey, sucrose, fructose, lactose, and maltose.
  • Flavoring agents are used to improve taste or aroma, and both natural and synthetic ones can be used.
  • natural products are used. When using natural products, they can serve the purpose of enhancing nutrition in addition to flavor.
  • Natural flavoring agents may be obtained from apples, lemons, tangerines, grapes, strawberries, peaches, etc., or may be obtained from green tea leaves, coriander leaves, bamboo leaves, cinnamon, chrysanthemum leaves, jasmine, etc. You can also use things obtained from ginseng (red ginseng), bamboo shoots, aloe vera, and ginkgo nuts.
  • Natural flavoring agents may be liquid concentrates or solid extracts. In some cases, synthetic flavoring agents may be used, and as synthetic flavoring agents, esters, alcohols, aldehydes, terpenes, etc. may be used.
  • Preservatives include calcium sorbate, sodium sorbate, potassium sorbate, calcium benzoate, sodium benzoate, potassium benzoate, EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), etc.
  • emulsifiers include acacia gum, carboxymethyl cellulose, xanthan gum, and pectin. etc. may be used, and as acidulants, acidic acid, malic acid, fumaric acid, adipic acid, phosphoric acid, gluconic acid, tartaric acid, ascorbic acid, acetic acid, phosphoric acid, etc. may be used.
  • acidulants may be added to ensure that the food composition has an appropriate acidity for the purpose of suppressing the growth of microorganisms.
  • a thickening agent a suspending agent, settling agent, gel forming agent, bulking agent, etc. may be used.
  • the food composition of the present invention may contain bioactive substances or minerals known in the art and whose safety is guaranteed as food additives for the purpose of supplementing and reinforcing functionality and nutrition.
  • physiologically active substances include catechins contained in green tea, vitamins such as vitamin B1, vitamin C, vitamin E, and vitamin B12, tocopherol, dibenzoylthiamine, etc.
  • minerals include calcium preparations such as calcium citrate and magnesium stearate.
  • Magnesium preparations such as iron citrate, iron preparations such as chromium chloride, potassium iodine, selenium, germanium, vanadium, zinc, etc. are included.
  • the food composition of the present invention may contain the above-described food additives in an appropriate amount to achieve the purpose of addition depending on the product type.
  • composition of the present invention may be considered a pharmaceutical composition in other specific embodiments.
  • the pharmaceutical composition of the present invention contains a pharmaceutically acceptable carrier in addition to the active ingredient and can be prepared into an oral formulation or a parenteral formulation depending on the route of administration by a conventional method known in the art.
  • pharmaceutically acceptable means that it does not inhibit the activity of the active ingredient and does not have toxicity beyond what is acceptable for the subject of application (prescription).
  • the pharmaceutical composition of the present invention when prepared as an oral dosage form, it can be prepared as powder, granules, tablets, pills, dragees, capsules, solutions, gels, syrups, suspensions, and wafers using a suitable carrier according to methods known in the art.
  • suitable pharmaceutically acceptable carriers include sugars such as lactose, glucose, sucrose, dextrose, sorbitol, mannitol, and xylitol, starches such as corn starch, potato starch, and wheat starch, cellulose, methylcellulose, ethylcellulose, Cellulose such as sodium carboxymethylcellulose and hydroxypropylmethylcellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, magnesium stearate, mineral oil, malt, gelatin, talc, polyol, vegetable. Yu, etc. can be mentioned.
  • diluents and/or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants may be included in the formulation.
  • the pharmaceutical composition of the present invention when prepared as a parenteral formulation, it can be formulated in the form of eye drops, injections, transdermal administration, nasal inhalation, or suppositories along with a suitable carrier according to methods known in the art.
  • suitable carriers include sterile water, saline solution, and isotonic solutions such as 5% dextrose. If necessary, benzalkonium chloride, methylparaben, ethylparaben, etc. can be added for preservative purposes.
  • suitable carriers include sterile water, ethanol, polyols such as glycerol or propylene glycol, or mixtures thereof, preferably Ringer's solution, phosphate buffered saline (PBS) containing triethanol amine, or sterile for injection.
  • PBS phosphate buffered saline
  • Isotonic solutions such as water or 5% dextrose can be used.
  • transdermal administration it can be formulated in the form of ointments, creams, lotions, gels, external solutions, paste preparations, linear preparations, and aerol preparations.
  • nasal inhalation it can be formulated in the form of an aerosol spray using suitable propellants such as dichlorofluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetrafluoroethane, and carbon dioxide.
  • propellants such as dichlorofluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetrafluoroethane, and carbon dioxide.
  • the base is Wethepsol ( witepsol), Tween 61, polyethylene glycols, cocoa fat, laurel paper, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, polyoxyethylene stearates, sorbitan fatty acid esters, etc. can be used.
  • the preferred dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is in the range of 0.001 mg/kg to 10 g/kg per day, preferably 0.001 mg/kg to 1 g, depending on the patient's condition, weight, gender, age, patient's severity, and administration route. It may be in the /kg range. Administration can be done once a day or divided into several times. These dosages should not be construed as limiting the scope of the invention in any respect.
  • composition for improving fatty liver disease using Panera penicillova extract can be provided.
  • the composition for improving fatty liver disease of the present invention can be commercialized as functional foods, drugs, etc.
  • Figure 1 shows the results of evaluating the degree of toxicity of Panera penicillova extract on HepG2 cells, human liver cancer cells, in terms of cell survival rate.
  • Figure 2 shows the results of evaluating the degree to which fat accumulation was suppressed by treatment with Panera penicillova extract in HepG2 cells in which fat accumulation was induced with free fatty acids (FFAs).
  • FFAs free fatty acids
  • Figure 3 shows the results of evaluating the degree of triglyceride decomposition according to treatment with Panera penicillova extract in HepG2 cells in which fat accumulation was induced with free fatty acids (FFAs).
  • FFAs free fatty acids
  • Figure 4 shows the results of evaluating the extent to which cell damage is recovered following treatment with Panera penicillova extract in HepG2 cells induced by oxidative stress.
  • Panera penicillova extract exhibits hepatocellular toxicity.
  • human liver cancer cells HepG2 cells
  • Panera penicillova extract which is a sample of the example, was treated at various concentrations (10 to 400 ⁇ g/mL) and cultured for 2 hours.
  • the absorbance of the reactant was measured at 540 nm using a spectrophotometer, and the cell survival rate was calculated as a ratio compared to the untreated sample.
  • Oil red O staining method was used to confirm the efficacy of Panera penicillova extract in inhibiting lipid accumulation in hepatocytes.
  • 10 ⁇ M of silibinin as a positive control and/or Panera penicillova extract of the example were treated at various concentrations (1 to 100 ⁇ g/mL) and cultured for 2 hours.
  • Fat accumulation in hepatocytes was induced by treatment with 0.5mM free fatty acid mixture (FFAs mix), which is a mixture of palmitic acid and oleic acid in a ratio of 1:2.
  • FFAs mix free fatty acid mixture
  • the absorbance of the reactant was measured at 492 nm using a spectrophotometer, and the degree of fat accumulation was quantified as a ratio compared to the untreated group.
  • panera penicillova extract in suppressing lipid accumulation in hepatocytes, the amount of glycerol released outside the cells was measured.
  • HepG2 cells were cultured in a 12-well plate, then treated with 10 ⁇ M of positive control silibinin and/or PPE at various concentrations (1 to 200 ⁇ g/mL) and cultured for 2 hours. Fat accumulation in hepatocytes was induced by treatment with 0.5mM FFAs mix. The concentration of free glycerol in the cell culture medium was measured using an assay kit and is shown in Figure 3.
  • Panera penicillova extract of the example decomposes fat accumulated in hepatocytes and induces the release of glycerol.
  • Panera penicillova extract inhibits hepatocellular toxicity caused by H 2 O 2 in a concentration-dependent manner.

Abstract

본 발명은, 인체 간암세포인 HepG2 세포를 이용한 세포시험에서 중성지방 축적을 억제하고 중성지방 분해를 촉진하며, 산화스트레스에 의한 간 세포의 손상 등을 방지하는 활성을 가진, 파네라 페니실릴로바 추출물을 이용한 지방간 질환 개선용 조성물을 개시한다.

Description

파네라 페니실릴로바 추출물을 이용한 지방간 질환 개선용 조성물
본 발명은 파네라 페니실릴로바(Phanera penicilliloba) 추출물을 이용한 지방간 질환 개선용 조성물에 관한 것이다.
지방간은 간세포 내에 지방질이 과도하게 축적된 상태를 말하며, 발병의 주요 원인은 음주, 비만, 당뇨병, 고지혈증 등이 있다.
지방간은 발병 원인에 따라 알코올성 지방간 질환(ALD, alcoholic fatty liver disease)과 비알코올성 지방간 질환(NAFLD, non alcoholic fatty liver disease)으로 나눌 수 있다. 두 질환 모두 단순 지방증, 지방간염, 간경변, 간암에 이르는 유사한 병리학적 스펙트럼을 갖지만, 알코올이 원인인 경우를 ALD, 알코올 남용력이 없으면서도 알코올성 간질환과 유사한 조직학적 손상을 보이는 경우를 NAFLD라고 한다.
간에서의 지방 축적은 식이 지방 또는 칼로리의 과다 섭취에 의한 간으로의 지방 유입 증가, 지방조직에서 지방분해의 증가와 이로 인한 간으로 유리 지방산(FFAs, free fatty acids)의 과도한 유입, 간에서 신규 지방 합성 증가, 간에서 초저밀도지질단백질(Very low densitiy lipoprotein, VLDL)을 통한 중성지방(triglyceride) 유출의 감소, 간에서 지방산 산화의 감소 등 여러 지방 대사 경로의 장애에 의해 일어난다.
산화스트레스도 간 질환 발병에 주요한 역할을 한다. 간 내 지방이 과잉 축적된 상태에서 산화스트레스가 지속되면 과도한 염증반응이 일어나고, 간경변, 간암과 같은 만성 간질환으로 진행될 가능성이 높아지며, 특히 알코올성 간질환에서는 알코올이 CYP2E1에 의해 산화되는 과정에서 발생하는 ROS가 미토콘드리아에서 지방산 산화를 억제시켜 지방 축적을 유도한다.
한편 파네라 페니실릴로바는 콩과(Fabaceae)에 속하는 관목식물로서 Bauhinia penicilliloba라고도 하며, 태국, 캄보디아, 서라오스, 베트남에서 자생한다. 현지에서는 Sieo daeng이라고 불리고 태국 북동부 지방에서는 구강염에, 라오스에서는 설사에 사용해온 것으로 알려져 있다. 문헌자료들을 살펴보면 파네라 페니실릴로바의 추출물은 면역조절, 항균, 항산화 효능이 있는 것으로 확인되고, 동물모델에서의 독성평가 결과 급성 및 만성 독성이 나타나지 않은 것으로 확인되나, 알코올성 및 비알코올성 성분연구 관련 문헌도 찾아볼 수 없다.
본 발명은 파네라 페니실릴로바 추출물의 지방간 질환 개선 활성 등을 개시한다.
본 발명의 목적은 파네라 페니실릴로바 추출물을 이용한 지방간 질환 개선용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.
본 발명은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 파네라 페니실릴로바 추출물이 인체 간암세포인 HepG2 세포를 이용한 세포시험에서 중성지방 축적을 억제하고 중성지방 분해를 촉진하며, 산화스트레스에 의한 간 세포의 손상 등을 방지함을 확인함으로써 완성된 것이다.
전술한 바를 고려할 때, 본 발명은 일 측면에 있어서, 파네라 페니실릴로바 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방간 질환 개선용 조성물로 파악할 수 있으며, 또 다른 측면에 있어서는 파네라 페니실릴로바 추출물을 유효성분으로 하는 간 손상 방지 또는 간 보호용 조성물로 파악할 수 있다.
본 명세서에서, "파네라 페니실릴로바 추출물"이란 추출 대상으로 파네라 페니실릴로바의 전초, 잎, 가지 줄기, 열매, 뿌리 또는 이들의 혼합물을 사용하고 추출 용매로서 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜(메탄올, 에탄올, 부탄올 등), 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방법을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 탄소수 1 내지 4의 알콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물, 더 바람직하게는 추출용매로서 물과 탄소수 1 내지 4의 알콜의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.
또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
또 본 명세서에서 "지방간 질환"이란 단순 지방증인 지방간과 염증을 동반하는 지방간염을 포함하는 의미이며, 특히 비알코올성 지방간 질환을 의미한다.
또 본 명세서에서 "지방간 질환의 개선"은 지방간 질환의 예방과 치료, 그리고 간 조직에서의 지방 축적 억제를 포함하는 의미이다.
또 본 명세서에서, "간 손상 방지"는 간세포의 독성을 일으키는 중금속, 사염화탄소, 활성산소종 등에 의한 간세포의 사멸 등의 손상을 억제하거나 회복하는 것을 의미한다.
본 발명의 지방간 질환 개선용 조성물이나 간 손장 방지용 조성물은 그 유효성분을 지방간 개선 활성, 간 손상 방지 활성 등을 나타낼 수 있는 한, 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함될 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 20.0 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게 의료 전문가 등의 제언에 의한 투여 기간 동안 본 발명의 조성물이 투여될 때, 지방간 개선 효과, 간 손상 방지 효과 등 의도한 기능적·약리학적 효과를 나타낼 수 있는, 본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물은 유효성분 이외에, 지방간 개선 효과 등의 상승·보강을 위하여 또는 항비만 활성, 혈압 조절 활성, 혈중 지질 개선 활성, 피로 개선 활성 등 유사활성의 부가를 통한 복용이나 섭취의 편리성을 증진시키기 위하여, 당업계에서 이미 안전성이 검증되고 해당 활성을 갖는 것으로 공지된 임의의 화합물이나 천연 추출물을 추가로 포함할 수 있다.
이러한 화합물 또는 추출물에는 각국 약전(한국에서는 「대한민국약전」), 각국 건강기능식품공전(한국에서는 식약처 고시인 「건강기능식품 기준 및 규격」임) 등의 공정서에 실려 있는 화합물 또는 추출물, 의약품의 제조·판매를 규율하는 각국의 법률(한국에서는 「약사법」임)에 따라 품목 허가를 받은 화합물 또는 추출물, 건강기능식품의 제조·판매를 규율하는 각국 법률(한국에서는 「건강기능식품에관한법률」임)에 따라 기능성이 인정된 화합물 또는 추출물이 포함된다.
예컨대 한국 「건강기능식품에관한법률」에 따라, '체지방 감소'로 기능성이 인정된 가르시니아캄보지아 껍질 추출물, 공액 리놀렌산(유리지방산), 공액 리놀렌산(트리글리세라이드), 녹차 추출물, 키토산, 락토바실러스 가세리 BNR17(Lactobacillus gasseri BNR17), L-카르니틴타르트레이트, 그린마떼 추출물, 그린커피빈 추출물, 깻잎 추출물, 대두배아 추출물 등의 복합물, 돌외잎 주정 추출 분말, 락토페린(우유 정제 단백질), 레몬 밤 추출물 혼합 분말, 마테 열수 추출물, 미역 등 복합 추출물(잔티젠), 발효 식초 석류 복합물, 보이차 추출물, 서목태(쥐눈이콩) 펩타이드 복합물, 식물성 유지 디글리세라이드, 와일드망고 종자 추출물, 중쇄지방산(MCFA) 함유 유지, 콜레우스포스콜리 추출물, 키토올리고당, 핑거루트 추출 분말, 히비스커스 등의 복합추출물 등과, '혈압 조절'로 기능성이 인정된 L-글루타민산 유래 GABA 함유 분말, 가쯔오부시 올리고펩타이드, 나토균배양 분말, 서목태(쥐눈이콩) 펩타이드 복합물, 연어 펩타이드, 올리브 잎 추출물, 정어리 펩타이드, 카제인 가수분해물, 코엔자임 Q10, 포도씨 효소 분해 추출 분말, 해태 올리고펩티드 등과, '혈중 중성지방 개선' 기능성이 인정된 DHA 농축 유지, 글로빈 가수분해물, 난소화성 말토덱스트린, 대나무 잎 추출물, 식물성 유지 디글리세라이드, 정어리 정제 어유, 정제 오징어유 등과, '혈당 조절'로 기능성이 인정된 L-arabinose, nopal 추출물, 계피 추출 분말, 구아바 잎 추출물, 난소화성 말토덱스트린, 동결 건조 누에 분말, 마 주정 추출물, 바나바 잎 추출물, 상엽 추출물 등과, '피로 개선'으로 기능성이 인정된 발효 생성 아미노산 복합물, 헛개나무 과병 추출물, 홍경천 추출물 등과, '항스트레스'로 기능성이 인정된 L-테아닌, 아쉬아간다 추출물, 유단백가수분해물, 돌외 잎 추출물 등이 이러한 화합물 또는 추출물에 해당할 것이다.
이러한 화합물 또는 추출물은 본 발명의 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.
본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서 식품 조성물로서 파악할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구루트 등의 가공 유류(乳類), 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다. 또 본 발명의 식품 조성물은 법률상·기능상의 구분에 있어서 제조·유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 띨 수 있다. 예컨대 한국 「건강기능식품에관한법률」에 따른 건강기능식품이거나, 한국 「식품위생법」의 식품공전(식약처 고시 「식품의 기준 및 규격」임)상 각 식품유형에 따른 과자류, 두류, 다류, 음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다. 식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해될 수 있는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 섭취되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품의 제조·유통을 규율하는 각국 법률(한국에서는 「식품위생법」임)에 따른 식품첨가물공전에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 성분 면에서 또는 기능 면에서 한정적으로 규정되어 있다. 한국 식품첨가물공전(식약처 고시 「식품첨가물 기준 및 규격)에서는 식품첨가물이 성분 면에서 화학적 합성품, 천연 첨가물 및 혼합 제제류로 구분되어 규정되어 있는데, 이러한 식품첨가물은 기능 면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분된다.
감미제는 식품에 적당한 단맛을 부여하기 위하여 사용되는 것으로, 천연의 것이거나 합성된 것 모두 본 발명의 식품 조성물에 사용할 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위한 용도로 사용되는 것으로, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제로서는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.
보존제로서는 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등이 사용될 수 있으며, 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다. 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 전술한 바의 식품첨가물 이외에, 기능성과 영양성을 보충·보강할 목적으로 당업계에 공지되고 식품첨가물로서 안정성이 보장된 생리활성 물질이나 미네랄류를 포함할 수 있다.
그러한 생리활성 물질로서는 녹차 등에 포함된 카테킨류, 비타민 B1, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 B12 등의 비타민류, 토코페롤, 디벤조일티아민 등을 들 수 있으며, 미네랄류로서는 구연산칼슘 등의 칼슘 제제, 스테아린산마그네슘 등의 마그네슘 제제, 구연산철 등의 철 제제, 염화크롬, 요오드칼륨, 셀레늄, 게르마늄, 바나듐, 아연 등을 들 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 전술한 바의 식품첨가물이 제품 유형에 따라 그 첨가 목적을 달성할 수 있는 적량으로 포함될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에 포함될 수 있는 기타의 식품첨가물과 관련하여서는 각국 법률에 따른 식품공전이나 식품첨가물공전을 참조할 수 있다.
본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응 가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.
본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 약제학적으로 허용되는 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 및/또는 부형제를 포함하여 제제화할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 점안제, 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제, 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 점안제로 제제화활 경우 적합한 담체로서는 멸균수, 식염수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있으며 필요에 따라 염화벤잘코늄, 메필파라벤, 에틸파라벤 등을 방부 목적으로 첨가할 수 있다. 주사제로 제제화할 경우 적합한 담체로서는 멸균수, 에탄올, 글리세롤이나 프로필렌 글리콜 등의 폴리올 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화할 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화할 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등을 사용할 수 있다.
약제학적 조성물의 구체적인 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.
본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001mg/kg ~ 10g/kg 범위, 바람직하게는 0.001mg/kg ~ 1g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 파네라 페니실릴로바 추출물을 이용한 지방간 질환 개선용 조성물을 제공할 수 있다. 본 발명의 지방간 질환 개선용 조성물 등은 기능성 식품, 약품 등으로 제품화될 수 있다.
도 1은 파네라 페니실릴로바 추출물이 인체 간암세포인 HepG2 세포에 미치는 독성 정도를 세포 생존율로 평가한 결과이다.
도 2는 유리 지방산(FFAs)으로 지방 축적을 유도한 HepG2 세포에서 파네라 페니실릴로바 추출물 처리에 따라 지방의 축적이 억제된 정도를 평가한 결과이다.
도 3은 유리 지방산(FFAs)으로 지방 축적을 유도한 HepG2 세포에서 파네라 페니실릴로바 추출물 처리에 따라 중성지방 분해 정도를 평가한 결과이다.
도 4는 산화적 스트레스를 가해 손상을 유도한 HepG2 세포에서 파네라 페니실릴로바 추출물 처리에 따라 세포 손상이 회복되는 정도를 평가한 결과이다.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예> 파네라 페니실릴로바 추출물의 지방간 개선 활성 및 간 보호 활성 평가
1. 파네라 페니실릴로바 추출물의 제조
파네라 페니실릴로바 전초 건조분말(200 g)에 메탄올(1.5 L)을 가하고 초음파 추출기로 30회 추출(15분 추출, 2시간 정치, 10회/1일)하였다. 추출액을 무형광 솜을 이용하여 여과하여 회전감압농축기 및 진공원심농축기를 이용하여 농축함으로써 고형상의 파네라 페니실릴로바 추출물(Phanera penicilliloba extract, PPE)을 얻었다.
2. 세포독성 평가
파네라 페니실릴로바 추출물이 간세포 독성을 나타내는지 확인하기 위해 MTT assay를 수행하였다. 인간 간암세포(HepG2 cell)를 96-well plate에 배양한 후, 실시예의 시료인 파네라 페니실릴로바 추출물을 농도별로(10 ~ 400 μg/mL) 처리하고 2시간 배양하였다. MTT 시약을 처리하여 4시간 반응시킨 후 분광광도계를 이용하여 반응물의 흡광도를 540 nm에서 측정하고 시료 무처리군 대비 비율로 세포 생존율을 구하였다.
결과를 도 1에 나타내었다. 도 1의 결과는 파네라 페니실릴로바 추출물이 최대 처리 농도인 400 μg/mL까지 세포독성을 나타내지 않음을 보여준다.
3. 간세포에서의 지방 축적 억제 효과
(1) 지질 염색법
파네라 페니실릴로바 추출물의 간세포 내 지질 축적 억제 효능을 확인하기 위해 oil red O 염색법을 사용하였다. HepG2 cell을 12-well plate에 배양한 후, 양성대조군인 실리비닌(silibinin) 10 μM 및/또는 실시예의 파네라 페니실릴로바 추출물을 농도별로(1 ~ 100 μg/mL) 처리하고 2시간 배양하였다. 팔미트산(palmitic acid)과 올레산(oleic acid)을 1:2의 비율로 혼합한 0.5 mM의 유리 지방산 혼합액(FFAs mix)을 처리하여 간세포 내 지방 축적을 유도하였다. Oil red O 시약을 이용하여 간세포 내 지질을 염색한 뒤 분광광도계를 이용하여 반응물의 흡광도를 492 nm에서 측정하고 시료 무처리군 대비 비율로 지방 축적 정도를 정량화하였다.
결과를 도 2에 나타내었으며, 도 2의 결과는 실시예의 파네라 페니실릴로바 추출물이 양성대조군 수준으로 간세포 내 지질 축적을 억제시킴을 보여준다.
(2) 글리세롤 정량법
파네라 페니실릴로바 추출물의 간세포 내 지질 축적 억제 효능을 확인하기 위해 세포 외부로 방출된 글리세롤(glycerol)의 양을 측정하였다. HepG2 cell을 12-well plate에 배양한 후, 양성대조군 실리비닌(silibinin) 10 μM 및/또는 PPE를 농도별로(1 ~ 200 μg/mL) 처리하고 2시간 배양하였다. 0.5 mM의 FFAs mix를 처리하여 간세포 내 지방 축적을 유도하였다. Assay kit를 이용하여 세포배양액 내 free glycerol의 농도를 측정하여 도 3에 나타내었다.
도 3을 참조하여 보면, 실시예의 파네라 페니실릴로바 추출물은 간세포 내에 축적된 지방을 분해하여 글리세롤의 방출을 유도시키는 것을 확인할 수 있었다.
4. 간 손상 방지 또는 간 보호 효과의 평가
파네라 페니실릴로바 추출물의 간 손상 방지 또는 간 보호 효과의 평가하기 위하여, 산화스트레스에 의한 간세포 독성 억제 효과를, MTT assay를 통해 확인하였다. HepG2 cell을 96-well plate에 배양한 후, PPE를 농도별로(0.5 ~ 200 μg/mL) 처리하고 1시간 배양하였다. 100 μM의 과산화수소(hydrogen peroxide, H2O2)를 처리하여 산화스트레스에 의한 세포독성을 유발하였다. MTT 시약을 처리하여 4시간 반응시킨 후 분광광도계를 이용하여 반응물의 흡광도를 540 nm에서 측정하고 시료 무처리군 대비 비율로 세포 생존율을 구하였다.
결과를 도 4에 나타내었다. 도 4를 참조하여 보면, 파네라 페니실릴로바 추출물이 H2O2에 의한 간세포 독성을 농도 의존적으로 억제시키는 것을 확인할 수 있었다.

Claims (9)

  1. 파네라 페니실릴로바 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방간 개선용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 추출물은 물, 탄소수 1~4의 알콜 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 얻어진 것을 특징으로 하는 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 지방간 질환은 비알코올성 지방간인 것을 특징으로 하는 조성물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 식품 조성물인 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 약제학적 조성물인 조성물.
  6. 파네라 페니실릴로바 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 손상 방지 또는 간 보호용 조성물.
  7. 제5항에 있어서,
    상기 추출물은 물, 탄소수 1~4의 알콜 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 얻어진 것을 특징으로 하는 조성물.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서,
    상기 조성물은 식품 조성물인 조성물.
  9. 제6항 또는 제7항에 있어서,
    상기 조성물은 약제학적 조성물인 조성물.
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