KR102464580B1 - 테트라세라 로우레리 추출물을 이용한 항비만용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은, 마우스 전구지방세포인 3T3-L1의 지방세포로의 분화를 농도 의존적으로 억제하고, 또 지방세포 분화 관련 인자인 PPARγ, aP2, Fas, resistin, ADD1/SREBP1c, 아디포넥틴(adiponectin) 발현을 억제하는 활성을 가진 테트라세라 로우레리 추출물을 이용한 항비만용 조성물을 개시한다.

Description

테트라세라 로우레리 추출물을 이용한 항비만용 조성물{Composition for Anti-obesity Using an Extract of Tetracera loureiroi}

본 발명은 테트라세라 로우레리(Tetracera loureiroi) 추출물을 이용한 항비만용 조성물에 관한 것이다.

비만은 에너지 섭취와 소비 간의 불균형으로 인해 과도하게 체지방이 축적되어 지방세포의 수와 크기가 증가하는 것으로(Cell.104:531-543 2001), 체내 에너지는 지방세포에 중성지방(triglyceride) 형태로 저장되었다가 에너지원이 고갈되면 저장되었던 지방이 유리지방산과 글리세롤로 분해되어 에너지원으로 사용되게 되지만, 에너지의 과잉 섭취는 지방세포의 분화를 촉진하고 체내 저장 지방량을 증가시켜 비만의 직접적인 원인이 된다(Metabolism. 30: 425-427 1981; Biochem J. 1;435(3):723-32 2011).

비만은 내장과 복부의 지방축적에 따른 체형의 변화뿐만 아니라 각종 질환의 발병률을 증가시키는 위험요소로 작용한다(Korean J. Pediatr.48:126-137. 2005). 내장지방이 과도하게 쌓이게 되면 체내 당 대사에 문제가 생기게 되며, 호르몬 분비 이상, 사이토카인 분비 이상 등의 증상이 발생하게 된다. 비만으로 인해 중성지방과 LDL-콜레스테롤의 증가, HDL-콜레스테롤의 감소는 체내 지방 대사 이상을 가져오고, 조직에 존재하는 인슐린 수용체를 감소시키며, 인슐린 민감도 또한 감소시켜 세포 내로 이동되는 포도당의 운반이 억제되면서 고혈당, 당뇨병을 유발하기도 한다. 또한 비만은 고지혈증, 심혈관계 질환, 암, 호흡기 장애, 뇌졸중, 골관절염(osteoarthritis)등의 대사질환의 발생과 관계가 깊은 것으로 알려져 있다(Med. Int. 22 385-388 1994;.Ann. Intern. Med. 103:1024-1029 1985).

지방세포는 지방전구세포로부터 분화하여 만들어지는데, 이러한 지방세포 분화 시 중성지방의 축적이 일어나고 지방세포 특이적 단백질(aP2, FAS, GLUT4, LPL, leptin)의 발현이 유도되며, 이에는 PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptor γ), C/EBP family(CCAAT/enhancer binding proteins; C/EBRα, C/EBRβ 및 C/EBRδ), ADD1/SREBP1c(adipocyte determination differentiation factor 1)/(sterol regulatory element binding protein 1c)라고 불리는 전사인자들이나 지방세포 신호전달물질(adipokines) 등이 중추적인 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다(Genes De 2000, 14(11) 1293~1307)(Physiol Rev 1998, 78(3):783~809; Annu Rev Biochem 2008, 77:289~312; Genes Dev 1996, 10:1096~1107).

지방지방세포인 3T3-L1은 Green과 Meuth에 의해 처음으로 3T3 세포로부터 분리되었고(Cell. 3(2):127-33. 1974), 생물학적 특성과 적절한 배양 조건으로 지방세포로 분화하는 성질이 밝혀진 후 지방세포의 분화과정과 축적된 지방의 분해에 대한 연구를 수행하는데 널리 이용되고 있다. 지방전구세포인 3T3-L1 세포는 성숙 지방세포로 분화되면서 관련 유전자의 발현과 관련 효소 활성의 증가로 세포 내 중성지방을 축적하게 된다(J Nutr 130: 3116S-3121S, 2000; J Nutr 130: 3122S-3126S, 2000). 기능성 소재 개발 연구를 위해서 지방조직 내의 중성지방의 과도한 축적 저해를 목표로 3T3-L1 세포를 이용하여 분화 과정을 억제하거나 지방 분해를 촉진하는 소재를 탐색하는 방법이 널리 사용되고 있다(Biotechnology and Bioprocess Engineering 20(1):157-167, 2015; Prev Nutr Food Sci (17):1~7, 2012: J Antibiot 58(10): 634-39, 2005).

기존의 오르리스타트(orlistat)과 시부트라민(sibutramin) 등의 항비만 약물은 구토, 변비, 위장장애, 심혈관 질환 등 심각한 부작용을 지닌 것으로 알려졌기 때문에(Int J Obes Relat Metab Disord. Jul;25(7):1095-9. 2001; Obes Res. 8(6):431-7. 2000; Lancet. 6;369(9555):71-7. 2007;Front Physiol. 2014 Jun 24;5:228. 2014), 효과적이고 안전한 물질 개발 노력이 지속되고 있다. 레티놀, 비타민 E, 비타민 U, 산초나무 추출물 등이 지방 세포 분화를 억제 기능을 하는 물질로써 보고된 바 있으며(Mol Cell Biol. 16:15671575. 1996;Ann Dermatol. Feb;24(1):39-44 2012; J Nutr. 139(1):51-7 2009; Ann Dermatol. 24(1):39-44 2012) 안전하고 지속적인 섭취가 가능한 천연물 소재의 항비만제 개발 연구가 활발하게 이루어지고 있다.

본 발명은 테트라세라 로우레리 추출물의 항비만 활성을 개시한다.

본 발명의 목적은 테트라세라 로우레리 추출물을 이용한 항비만용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.

본 발명은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 테트라세라 로우레리 추출물이 마우스 전구지방세포인 3T3-L1의 지방세포로의 분화를 농도 의존적으로 억제하고, 또 지방세포 분화 관련 인자인 PPARγ, aP2, Fas, resistin, ADD1/SREBP1c, 아디포넥틴(adiponectin) 발현을 억제함을 확인함으로써 완성된 것이다.

전술한 바의 실험 결과를 고려할 때, 본 발명의 항비만용 조성물은 테트라세라 로우레리 추출물을 그 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.

본 명세서에서, "테트라세라 로우레리 추출물"이란 추출 대상인 테트라세라 로우레리 잎, 줄기, 지상부, 근경, 뿌리, 지하부 또는 이들의 혼합물을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜(메탄올, 에탄올, 부탄올 등), 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방법을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물, 더 바람직하게는 추출용매로서 물과 에탄올의 알콜의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.

또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

또 본 명세서에서, "항비만"이란 체지방의 감소, 체지방 축적 억제, 및/또는 체중의 감소를 의미한다. 따라서 비만의 예방, 비만의 치료를 포함하는 의미이며, 나아가 체중이 비만이나 과체중으로 분류되지 않지만 미용이나 건강 목적으로(일명 다이어트 목적으로) 체중/체지방을 감소시키는 것을 포함한다.

또한 본 명세서에서, 상기 "비만"이란, 그것이 유전적 요인에 의한 비만이든 또는 환경적 요인에 의한 비만이든 지방조직이 비정상적으로 증가된 상태를 의미하며, 체질량지수(BMI)의 구분에 따를 때는 고도 비만(BMI이 30.0 이상인 경우)과 비만(BMI 25~30인 경우) 그리고 과체중(BMI이 23~25인 경우)을 포함하는 의미이다.

본 발명의 항비만용 조성물은 그 유효성분을 항비만 활성을 나타낼 수 있는 한, 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함될 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 20.0 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게 의료 전문가 등의 제언에 의한 투여 기간 동안 본 발명의 조성물이 투여될 때, 항비만 효과 등 의도한 기능적·약리학적 효과를 나타낼 수 있는, 본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 항비만 조성물은 유효성분 이외에, 항비만 효과의 상승·보강을 위하여 또는 혈압 조절 활성 등 유사활성의 부가를 통한 복용이나 섭취의 편리성을 증진시키기 위하여, 당업계에서 이미 안전성이 검증되고 해당 활성을 갖는 것으로 공지된 임의의 화합물이나 천연 추출물을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 화합물 또는 추출물에는 각국 약전(한국에서는 "대한민국약전"), 각국 건강기능식품공전(한국에서는 식약처 고시인 "건강기능식품 기준 및 규격"임) 등의 공정서에 실려 있는 화합물 또는 추출물, 의약품의 제조·판매를 규율하는 각국의 법률(한국에서는 "약사법"임)에 따라 품목 허가를 받은 화합물 또는 추출물, 건강기능식품의 제조·판매를 규율하는 각국 법률(한국에서는 「건강기능식품에관한법률」임)에 따라 기능성이 인정된 화합물 또는 추출물이 포함된다.

예컨대 한국 "건강기능식품에관한법률"에 따라, '체지방 감소'로 기능성이 인정된 가르시니아캄보지아 껍질 추출물, 공액 리놀렌산(유리지방산), 공액 리놀렌산(트리글리세라이드), 녹차 추출물, 키토산, 락토바실러스 가세리 BNR17(Lactobacillus gasseri BNR17), L-카르니틴타르트레이트, 그린마떼 추출물, 그린커피빈 추출물, 깻잎 추출물, 대두배아 추출물 등의 복합물, 돌외잎 주정 추출 분말, 락토페린(우유 정제 단백질), 레몬 밤 추출물 혼합 분말, 마테 열수 추출물, 미역 등 복합 추출물(잔티젠), 발효 식초 석류 복합물, 보이차 추출물, 서목태(쥐눈이콩) 펩타이드 복합물, 식물성 유지 디글리세라이드, 와일드망고 종자 추출물, 중쇄지방산(MCFA) 함유 유지, 콜레우스포스콜리 추출물, 키토올리고당, 핑거루트 추출 분말, 히비스커스 등의 복합추출물 등과 '혈압 조절'로 기능성이 인정된 L-글루타민산 유래 GABA 함유 분말, 가쯔오부시 올리고펩타이드, 나토균배양 분말, 서목태(쥐눈이콩) 펩타이드 복합물, 연어 펩타이드, 올리브 잎 추출물, 정어리 펩타이드, 카제인 가수분해물, 코엔자임 Q10, 포도씨 효소 분해 추출 분말, 해태 올리고펩티드 등과, '혈중 중성지방 개선' 기능성이 인정된 DHA 농축 유지, 글로빈 가수분해물, 난소화성 말토덱스트린, 대나무 잎 추출물, 식물성 유지 디글리세라이드, 정어리 정제 어유, 정제 오징어유 등과, '혈당 조절'로 기능성이 인정된 L-arabinose, nopal 추출물, 계피 추출 분말, 구아바 잎 추출물, 난소화성 말토덱스트린, 동결 건조 누에 분말, 마 주정 추출물, 바나바 잎 추출물, 상엽 추출물 등과, '피로 개선'으로 기능성이 인정된 발효 생성 아미노산 복합물, 헛개나무 과병 추출물, 홍경천 추출물 등과, '항스트레스'로 기능성이 인정된 L-테아닌, 아쉬아간다 추출물, 유단백가수분해물, 돌외 잎 추출물 등이 이러한 화합물 또는 추출물에 해당할 것이다.

본 발명의 항비만용 조성물은 구체적인 양태에 있어서 식품 조성물로 파악할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구르트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다.

또 본 발명의 식품 조성물은 법률상·기능상의 구분에 있어서 제조·유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 띨 수 있다. 예컨대 한국 「건강기능식품에관한법률」에 따른 건강기능식품이거나, 한국 「식품위생법」의 식품공전(식약처 고시 「식품의 기준 및 규격」)상 각 식품유형에 따른 과자류, 두류, 다류, 음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다. 식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해될 수 있는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 섭취되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품의 제조·유통을 규율하는 각국 법률(한국에서는 「식품위생법」임)에 따른 식품첨가물공전에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 성분 면에서 또는 기능 면에서 한정적으로 규정되어 있다. 한국 식품첨가물공전(식약처 고시 「식품첨가물 기준 및 규격」)에서는 식품첨가물이 성분 면에서 화학적 합성품, 천연 첨가물 및 혼합 제제류로 구분되어 규정되어 있는데, 이러한 식품첨가물은 기능 면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분된다.

감미제는 식품에 적당한 단맛을 부여하기 위하여 사용되는 것으로, 천연의 것이거나 합성된 것 모두 본 발명의 식품 조성물에 사용할 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.

풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위한 용도로 사용되는 것으로, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제로서는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.

보존제로서는 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등이 사용될 수 있으며, 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다. 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 전술한 바의 식품첨가물 이외에, 기능성과 영양성을 보충·보강할 목적으로 당업계에 공지되고 식품첨가물로서 안정성이 보장된 생리활성 물질이나 미네랄류를 포함할 수 있다.

그러한 생리활성 물질로서는 녹차 등에 포함된 카테킨류, 비타민 B1, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 B12 등의 비타민류, 토코페롤, 디벤조일티아민 등을 들 수 있으며, 미네랄류로서는 구연산칼슘 등의 칼슘 제제, 스테아린산마그네슘 등의 마그네슘 제제, 구연산철 등의 철 제제, 염화크롬, 요오드칼륨, 셀레늄, 게르마늄, 바나듐, 아연 등을 들 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 전술한 바의 식품첨가물이 제품 유형에 따라 그 첨가 목적을 달성할 수 있는 적량으로 포함될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에 포함될 수 있는 기타의 식품첨가물과 관련하여서는 각국 식품공전이나 식품첨가물 공전을 참조할 수 있다.

본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 투여 경로는 국소 경로, 경구 경로, 정맥 내 경로, 근육 내 경로, 및 점막 조직을 통한 직접 흡수를 포함하는 임의의 적절한 경로일 수 있으며, 두 가지 이상의 경로를 조합하여 사용할 수도 있다. 두 가지 이상 경로의 조합의 예는 투여 경로에 따른 두 가지 이상의 제형의 약물이 조합된 경우로서 예컨대 1차로 어느 한 약물은 정맥 내 경로로 투여하고 2차로 다른 약물은 국소 경로로 투여하는 경우이다.

약학적으로 허용되는 담체는 투여 경로나 제형에 따라 당업계에 주지되어 있으며, 구체적으로는 "대한민국약전"을 포함한 각국의 약전을 참조할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유, 에탄올, 그리세롤 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라적절한 결합제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 희석제 등을 포함시킬 수 있다. 적절한 결합제로서는 전분, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페리스트, 젤라틴, 메틸셀룰로스, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 글루코스, 옥수수 감미제, 소듐 알지네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등을 들 수 있고, 윤활제로서는 올레산나트륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산마그네슘, 벤조산나트륨, 초산나트륨, 염화나트륨, 실리카, 탈쿰, 스테아르산, 그것의 마그네슘염과 칼슘염, 폴리데틸렌글리콜 등을 들 수 있으며, 붕해제로서는 전분, 메틸 셀룰로스, 아가(agar), 벤토나이트, 잔탄 검, 전분, 알긴산 또는 그것의 소듐 염 등을 들 수 있다. 또 희석제로서는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 소비톨, 셀룰로스, 글라이신 등을 들 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화할 경우 적합한 담체로서는 수성 등장 용액 또는 현탁액을 사용할 수 있으며, 구체적으로는 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화할 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화할 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 담체로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등을 사용할 수 있다.

약제학적 조성물의 구체적인 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.

본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001mg/kg ~ 10g/kg 범위, 바람직하게는 0.001mg/kg ~ 1g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 테트라세라 로우레리 추출물을 이용한 항비만용 조성물을 제공할 수 있다. 본 발명의 항비만용 조성물은 기능성 식품, 약품 등으로 제품화될 수 있다.

도 1는 테트라세라 로우레리 추출물이 마우스 전구지방세포인 3T3-L1의 지방세포로의 분화를 억제함을 보여주는 결과이다.
도 2 내지 4는 테트라세라 로우레리 추출물이 지방세포 분화 관련 인자의 발현을 억제함을 보여주는 결과이다.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 > 테트라세라 로우레리 추출물의 제조

건조된 테트라세라 로우레이리(Tetracera loureiroi) 줄기 100 g에 50% 에탄올 1 L를 가하여 상온에서 24 시간 1회 침지추출 후 여과지로 여과하였다. 얻어진 50% 에탄올 여액을 감압 농축 후 동결 건조하여 테트라세라 로우레이리 추출물(NIBR No. 153)을 얻었다. 상기 추출용매로 50% 에탄올을 사용한 것은, 에탄올 함량별(30%, 40%, 50%, 60%, 70% 및 80%) 추출용매로 얻어진 추출물들을 이용하여 마우스 전구지방세포인 3T3-L1의 지방세포로의 분화 억제 활성에 대한 예비실험을 하였을 때 50% 에탄올에 의한 추출물이 가장 활성이 우수한 것으로 평가되었기 때문이다.

< 실험예 > 테트라세라 로우레리 추출물의 비만 개선 활성 실험

<실험예 1> 지방세포 분화 억제 활성 실험

마우스 지방전구세포인 3T3-L1(Zenbio SP-L1-F)은 3T3-L1 Preadipocyte Medium(Zenbio PM-1-L1) 배지를 넣고 37℃, 5% CO₂의 조건에서 배양하였다. 3T3-L1 지방전구세포를 24 well plate에 5×10⁴cells/well의 세포수로 분주한 후 100% confluency 시점이 되면 2일 동안 더 유지시켰다. 지방전구세포는 MDI (Isobutylmethylxanthine, dexamethasone, insulin)를 포함하는 3T3-L1 Differentiation Medium(Zenbio DM-2-L1) 배지로 지방세포 분화를 2일 동안 유도하였고 배양 48 시간 후, 2일 마다 6일 동안 3T3-L1 Adipocyte Medium(Zenbio AM-1-L1)으로 배양액으로 교체하면서 배양하였다. 지방세포 분화 유도 동안 시료를 농도별로 각 배양액에 처리하였고, 분화가 완성되는 시점인 8일째에 지방세포 분화 정도를 관찰하였다. 지방세포 분화 정도는 Oil Red O 염색을 통해 1차적으로 현미경을 통해 확인하였고, 지방세포 염색 정도는 510 nm 흡광도에서 세포의 분화된 지방량을 측정하였다. 결과는 농도별 3번 반복실험을 통하여 산출하였다.

결과를 도 1에 나타내었는데, 도 1을 참조하여 보면 테트라세라 로우레리 추출물이 농도 의존적으로 지방전구세포의 지방세포로의 분화 억제 활성과 지방 축적 억제 활성을 가짐을 알 수 있다.

<실험예 2> 지방세포 분화 관련 인자의 단백질 수준에서의 발현 억제 활성 평가

지방세포 분화 유도 방법과 같이 3T3-L1 세포에 시료를 처리한 후 세포를 PBS로 두 번 wash하고 protease inhibitor(1mM PMSF, 2mM Na3VO4, 50mM NaF)가 포함된 RIPA buffer(Sigma, St. Louis, MO)를 이용하여 세포를 용해시켰다. 13,000 rpm에서 30분간 원심 분리하여 단백질을 추출 정량하여 8 % SDS-PAGE gel을 이용하여 전기 영동했다. 전기 영동된 protein들을 membrane에 이동시킨 후 5% skim milk를 포함하는 TBST로 blocking했다. 1차 항체는 anti-PPARγ, anti-C/EBPα(Cell signaling technology)를 사용하였고 2차 항체는 HRP-conjugated anti-rabbit을 사용하였다. 각각의 단백질 발현양은 SuperSignal®west pico chemiluminescent substrate(Thermo Scientific, Rockford, IL, USA)와 Amersharm image 600(GE Healthcare Life Sciences, Chicago, Illinois, USA)을 통해 분석하였고 PPARγ 및 C/EBPα 단백질의 발현 정도를 β-actin의 발현 정도와 비교하여 평가하였다.

결과를 도 2에 나타내었다. PPARγ과 C/EBPα 발현이 테트라세라 로우레리 추출물의 처리 농도에 비례하여 감소함을 알 수 있다.

<실험예 3> 지방세포 분화 관련 인자의 유전자 수준에서의 발현 억제 활성 평가

지방세포 분화 억제 활성 측정방법과 동일한 방법으로 8일 동안 지방세포를 분화를 시켜 PPARγ, C/EBRα, aP2, Fas, resistin, ADD1/SREBP1c 및 adiponectin 발현 정도를 Real-time PCR로 확인하였다. 8일 동안 분화된 3T3-L1 세포는 TRIzol reagent(Invitrogen, CA, USA)를 이용하여 total RNA를 분리하였다. 추출 된 RNA는 SuperScript®III First-Strand Synthesis System을 이용하여 cDNA를 합성한 후 SYBR green(Takara)과 아래 [표 1]의 primer를 이용하여 Real-time PCR을 했고 대조군 유전자로 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)를 사용하였다. Bio-Rad MyiQ program을 이용하여 형광신호를 정량하였다.

프라이머

Gene name	Forward primer	Reverse primer
GAPDH	5’-GTATGACTCCACTCACGGCAAA-3’	5’-GGTCTCGCTCCTGGAAGATG-3’
PPARγ	5’-CGCTGATGCACTGCCTATGA-3’	5’-AGAGGTCCACAGAGCTGATTCC-3’
C/EBPα	5’-AGGTGCTGGAGTTGACCAGT-3’	5’-CAGCCTAGAGATCCAGCGAC-3’
aP2	5’-CATGGCCAAGCCCAACAT-3’	5’-CGCCCAGTTTGAAGGAAATC-3’
Fas	5’-CTGAGATCCCAGCACTTCTTGA-3’	5’-GCCTCCGAAGCCAAATGAG-3’
resistin	5’-TCAACTCCCTGTTTCCAAATGC-3’	5’-TCTTCACGAATGTCCCACGA-3’
ADD1/SREBP1c	5’-CAAACTGCCCATCCACCGAC-3’	5’-TGCCTCCTCCACTGCCACAA-3’
adiponectin	5’-AGCCTGGAGAAGCCGCTTAT-3’	5’-TTGCAGTAGAACTTGCCAGTGC-3’

결과를 도 3 및 도 4에 나타내었다. PPARγ, aP2, Fas, resistin, ADD1/SREBP1c, adiponectin 발현이 테트라세라 로우레리 추출물의 처리 농도에 비례하여 감소함을 보여준다.

Claims (4)

1. 테트라세라 로우레리 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 식품 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 테트라세라 로우레리 추출물은 테트라세라 로우레리 줄기를 추출 대상으로 하고 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 얻어진 것을 특징으로 하는 항비만용 식품 조성물.
   
3. 테트라세라 로우레리 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 약제학적 조성물.
   
4. 제3항에 있어서,
   상기 테트라세라 로우레리 추출물은 테트라세라 로우레리 잎을 추출 대상으로 하고 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 얻어진 것을 특징으로 하는 항비만용 약제학적 조성물.
   
   

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