WO2023149509A1 - 魚類又は甲殻類用飼料 - Google Patents

魚類又は甲殻類用飼料 Download PDF

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WO2023149509A1
WO2023149509A1 PCT/JP2023/003415 JP2023003415W WO2023149509A1 WO 2023149509 A1 WO2023149509 A1 WO 2023149509A1 JP 2023003415 W JP2023003415 W JP 2023003415W WO 2023149509 A1 WO2023149509 A1 WO 2023149509A1
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WO
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feed
fish
present
crustaceans
feed according
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PCT/JP2023/003415
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雅浩 林
昌史 和才
祐貴 川嶋
俊郎 益本
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Ｅｎｅｏｓ株式会社
国立大学法人高知大学
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
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    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
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    • Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
    • Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
    • Y02A40/818—Alternative feeds for fish, e.g. in aquacultures

Definitions

  • the present invention relates to a carotenoid-containing fish or crustacean feed.
  • the present invention provides a fish or crustacean feed containing at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, a vegetable protein, and a carotenoid, and the growth of fish or crustaceans using the feed. It relates to a method of stimulating or increasing weight.
  • the main protein source used in fish farming feed is fishmeal.
  • Fishmeal which is obtained by drying and pulverizing fish such as anchovy and Japanese jack mackerel, is used as aquaculture feed.
  • the purpose of the present invention is to provide a feed for culturing fish or crustaceans, and a method for cultivating fish or crustaceans using the feed.
  • the present inventor conducted extensive research and found a feed for fish or crustaceans with a reduced content of fishmeal. That is, the present invention includes the following.
  • a feed for fish or crustaceans comprising at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, a vegetable protein, and a carotenoid.
  • the feed according to [1] or [2], wherein the nucleotide is at least one selected from the group consisting of inosinic acid, guanylic acid and xanthylic acid.
  • the amino acid is at least one selected from the group consisting of alanine, proline, glutamic acid, taurine, leucine, histidine, lysine, threonine, valine, isoleucine, phenylalanine, arginine, proline and methionine [1] to [3] or the amino acid is selected from the group consisting of alanine, proline, glutamic acid, taurine, leucine, histidine, lysine, threonine, valine, isoleucine, phenylalanine, arginine, proline, methionine and cysteine
  • the feed according to any one of [1] to [3], which is at least one.
  • [15] A method for deepening the skin, shell or meat of fish or crustaceans using the feed according to any one of [1] to [12].
  • [16] Use of the feed according to any one of [1] to [12] for increasing body weight of fish or crustaceans.
  • [17] Use of the feed according to any one of [1] to [12] for coloring the skin, shell or meat of fish or crustaceans.
  • a feed for fish or crustaceans having a reduced content of fishmeal is provided.
  • the feed provided by the present invention can be used as feed for sustainable aquaculture because it can contain less fishmeal than conventional feed.
  • a fish or crustacean feed for stimulating the growth of a fish or crustacean and a method for increasing the body weight of a fish or crustacean are provided.
  • Feed of the present invention is a feed for fish or crustaceans containing at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, a vegetable protein, and a carotenoid. Or a feed composition.
  • the feed of the present invention can be used for fish or crustacean farming.
  • the present invention provides a feed that utilizes a vegetable protein as a protein to be added to a feed for fish or crustaceans, wherein the feed further contains at least one additive selected from the group consisting of nucleotides and amino acids and a carotenoid. , fish or crustaceans.
  • the feed of the present invention was shown in the Examples to have feed efficiency equal to or greater than that of the conventional feed. Therefore, the feed of the invention can be used to stimulate or promote the growth of fish or crustaceans.
  • the feed of the present invention may have a reduced animal protein content compared to conventional feeds.
  • the feed of the present invention may contain less animal protein than is to be contained in a typical fish or crustacean feed, or may contain no animal protein.
  • the animal protein contained in the feed can be, for example, protein from fish, crustaceans, insects, birds or mammals.
  • fishmeal is usually used as an animal protein source.
  • the feed of the present invention may contain fishmeal, although the amount of fishmeal may be reduced compared to conventional feeds.
  • the feed of the present invention may contain less fishmeal than is to be contained in typical fish or crustacean feeds.
  • the feed of the present invention does not contain fishmeal.
  • the feed of the present invention may be used with fishmeal or conventional feed containing fishmeal.
  • Amount of animal protein that should be contained in general fish or crustacean feed or “amount of fishmeal that should be contained in general fish or crustacean feed” Or when fish or crustaceans are raised using a feed for crustaceans, at least one selected from vegetable proteins, nucleotides and amino acids, and carotenoids are not contained. The minimum content of animal protein or fishmeal that does not cause a decline in growth of fish.
  • the content of animal protein in the feed of the present invention can be appropriately determined according to various conditions such as the type of target fish or crustacean and growth stage (for example, fry stage, adult stage).
  • the animal protein content in the feed of the present invention can be reduced compared to conventional feeds by adjusting the content of animal protein sources.
  • the content of the animal protein source in the feed of the present invention is, for example, 50% (w/w) or less, 40% (w/w) or less, 30% (w/w) or less, 25% (w/w) or less. , 20% (w/w) or less, 15% (w/w) or less, 10% (w/w) or less, 5% (w/w) or less, or 0% (w/w).
  • the content of animal protein sources in the feed of the present invention is preferably 10% (w/w) or less.
  • the content of fishmeal in the feed of the present invention can be appropriately determined according to various conditions such as the type of target fish or crustacean and growth stage (for example, juvenile stage, adult stage).
  • the content of fishmeal in the feed of the present invention is, for example, 60% (w/w) or less, 50% (w/w) or less, 40% (w/w) or less, 30% (w/w) or less, 20% (w/w) or less, 10% (w/w) or less, 5% (w/w) or less, or 0% (w/w).
  • the content of fishmeal in the feed of the present invention is, for example, 0% (w/w) or more, 5% (w/w) or more, 10% (w/w) or more, 20% (w/w) or more, It may be 30% (w/w) or more, or 40% (w/w) or more.
  • Fishmeal can be included in the feed as an animal protein source.
  • the type of fish or crustacean is not particularly limited.
  • fish include yellowtail (yellowtail), red sea bream, amberjack, tuna, tiger puffer, flounder, striped trevally, Japanese trevally, amberjack, striped bream, filefish, rockfish, sea bass, black bream, grunt, croaker, eel, chub mackerel, grouper, longtooth grouper, eel,
  • Examples include catfish, sweetfish, sea bass, rainbow trout, carp, Pacific salmon, coho salmon, and trout salmon.
  • Crustaceans include, for example, tiger prawns, vannamei prawns, bull prawns, white leg shrimps, crab crabs, and Shanghai crabs.
  • grouper may be grouper.
  • the tuna may be bluefin tuna.
  • fish belonging to Perciformes are preferred.
  • fish belonging to the order Perciformes include, but are not limited to, tuna, grouper, red sea bream, yellowtail, and greater amberjack.
  • the vegetable protein is not particularly limited as long as it is used for culturing fish or crustaceans.
  • proteins derived from soybeans eg, concentrated soy protein, soybean meal, etc.
  • corn eg, corn gluten meal
  • rapeseed rapeseed meal
  • barley e.g., wheat, and rice
  • the vegetable protein is preferably soybean-derived protein.
  • the vegetable protein a commercially available product may be used, or one obtained by appropriately manufacturing may be used.
  • a method for producing a vegetable protein is not particularly limited, and a known method can be used.
  • the content of vegetable protein in the feed of the present invention can be appropriately determined according to various conditions such as the type of target fish or crustacean and growth stage (for example, fry stage, adult stage).
  • the content of vegetable protein in the feed of the present invention is, for example, 10% (w/w) or more, 20% (w/w) or more, 30% (w/w) or more, 40% (w/w) or more, It may be 50% (w/w) or more, 60% (w/w) or more, or 70% (w/w) or more.
  • the content of vegetable protein in the feed of the present invention is, for example, 80% or less, 70% (w/w) or less, 60% (w/w) or less, 50% (w/w) or less, 40% ( w/w) or 30% (w/w) or less.
  • amino acids can be added as appropriate depending on the amino acid composition constituting the vegetable protein and the type of fish or crustacean. If the amino acid composition of the vegetable protein is insufficient compared to that of the fishmeal, the relevant amino acids should be included in the feed. For example, when the amount of sulfur-containing amino acids such as methionine and cysteine contained in vegetable protein is lower than that of fishmeal, growth promotion is expected by adding methionine and cysteine to the feed. For example, soybeans are often deficient in methionine, lysine, and tryptophan, so methionine, lysine, and/or tryptophan may be added when soybean-derived proteins are used.
  • amino acids can be added as appropriate depending on the type of fish or crustacean. Amino acids may be added to feed according to the characteristics of amino acid-metabolizing enzymes and amino-acid-producing enzymes possessed by fish or crustaceans. For example, fish such as yellowtail and crustaceans cannot metabolize methionine to taurine, so taurine may be added to the feed.
  • the amino acids include at least one selected from the group consisting of alanine, proline, glutamic acid, taurine, leucine, histidine, lysine, threonine, valine, isoleucine, phenylalanine, arginine, proline, methionine, and cysteine.
  • the amino acids include, for example, one or more selected from alanine, proline, lysine, methionine, glutamic acid and taurine, and all six of these.
  • Amino acids may be in L-form, D-form or racemic form.
  • the amino acid may be in free form or salt form.
  • nucleotides can be added as appropriate.
  • Nucleotides used in the present invention are preferably tasty nucleotides.
  • Tasty nucleotides include, for example, inosinic acid, guanylic acid and xanthylic acid.
  • the tasty nucleotide is preferably inosinic acid.
  • Inclusion of one or more taste-appropriate nucleotides in the feed is expected to stimulate the feeding ability of fish and promote growth (weight gain).
  • Succinic acid may be included in the feed for the purpose of stimulating the feedability of the fish.
  • the number of phosphates bound to a nucleotide is not limited, for example 1, 2 or 3.
  • the nucleotide is preferably a purine nucleotide with one phosphate bound to the 5'-position of ribose and -OH at the 6-position.
  • the feed of the present invention contains at least one selected from the group consisting of the above nucleotides and amino acids.
  • the feed of the present invention may contain at least one nucleotide or at least one amino acid, or both.
  • the feed of the present invention preferably comprises at least one nucleotide and at least one amino acid. Commercially available nucleotides and amino acids may be used, or those obtained by appropriate production may be used.
  • nucleotides or amino acids can be produced by chemical synthesis, enzymatic reactions, or a combination thereof.
  • nucleotides or amino acids can be produced by culturing microorganisms capable of producing nucleotides or amino acids and recovering the nucleotides or amino acids from the culture.
  • nucleotides or amino acids can be produced by recovering from agricultural and livestock products containing nucleotides or amino acids.
  • the content of nucleotides in the feed of the present invention can be appropriately determined according to various conditions such as the type and growth stage of the target fish or crustacean (eg juvenile stage, adult stage).
  • the content of nucleotides in the feed of the present invention is, for example, 0.1% to 5% (w/w), 0.5% to 5% (w/w), 1% to 5% (w/w) or 1 .5% to 3% (w/w).
  • the content of amino acids in the feed of the present invention can be appropriately determined according to various conditions such as the type of target fish or crustacean and the growth stage (eg juvenile stage, adult stage).
  • the content of amino acids in the feed of the present invention is, for example, 0.1% to 10% (w/w), 1% to 10% (w/w), 2% to 10% (w/w), 3% to It may be 10% (w/w), 4%-10% (w/w) or 5%-10% (w/w).
  • the carotenoids contained in the feed of the present invention may be chemically synthesized synthetic carotenoids, or may be naturally derived carotenoids from animals, plants, microorganisms, and the like. Those skilled in the art can produce carotenoids by known methods such as chemical synthesis methods or methods using microorganisms such as bacteria and yeast. Carotenoids may be purified products or partially produced products. Incorporation of carotenoids in the feed of the present invention is expected to promote growth (weight gain) by reducing in vivo oxidation and stimulating immunity. In addition, by adding carotenoids to the feed of the present invention, it is expected that the skin, shell or meat of fish or crustaceans will be colored.
  • carotenoids may be used, or those obtained by appropriately manufacturing may be used.
  • Commercially available synthetic carotenoids include CAROPHYLL® Pink (DSM), Lucantin® Pink (BASF), and the like.
  • Carotenoid-producing microorganisms are not particularly limited as long as they are carotenoid-producing microorganisms, and include green algae Haematococcus pluvialis, red yeast Phaffia rhodozyma, bacteria belonging to the genus Paracoccus, bacteria belonging to the genus Brevundimonas, and Erythrobacter. (Erythrobacter) bacteria belonging to the genus.
  • bacteria belonging to the genus Paracoccus bacteria belonging to the genus Blebundimonas, or bacteria belonging to the genus Erythrobacter are preferably used, and bacteria belonging to the genus Paracoccus are more preferably used.
  • the genera Paracoccus, Blebundimonas, and Erythrobacter are all classified into the phylum Proteobacteria and Alphaproteobacteria, and since there is commonality in bacterial taxonomy, bacteria belonging to these genera can be used.
  • carotenoids derived from bacteria belonging to the genus Paracoccus can be preferably used.
  • Paracoccus carotinifaciens are preferably used as bacteria belonging to the genus Paracoccus, and Paracoccus carotinifaciens is particularly preferably used.
  • Examples of specific strains of bacteria belonging to the genus Paracoccus include Paracoccus carotinifaciens E-396 strain (FERM BP-4283) and Paracoccus bacterium A-581-1 strain (FERM BP-4671), and mutant strains thereof is also preferably used in the present invention.
  • Examples of carotenoid-producing bacteria belonging to the genus Brevundimonas include Brevundimonas SD212 strain (JP 2009-27995), Brevundimonas FERM P-20515, 20516 strain (JP 2006-340676), Brevundimonas vesicularis (Gene, Vol.379, p 101-108, 1 Sep 2006).
  • Examples of carotenoid-producing bacteria belonging to the genus Erythrobacter include Erythrobacter JPCC M species (Japanese Unexamined Patent Publication No. 2008-259452) and Erythrobacter JPCC O species (Japanese Unexamined Patent Publication No. 2008-259449).
  • the carotenoid-producing bacterium is preferably a bacterium that has substantially the same nucleotide sequence as the 16S ribosomal RNA of strain E-396.
  • substantially identical means that the nucleotide sequence is preferably 90% or more, 95% or more, more preferably 96% or more, further preferably 97%, considering the error frequency etc. in determining the base sequence. It means homology of 98% or more, particularly preferably 99% or more, particularly preferably 99% or more. Identity/homology can be determined by, for example, gene analysis software Clustal W.
  • Nucleotide sequence of 16S ribosomal RNA of Paracoccus carotinifaciens E-396 strain and other carotenoid-producing bacteria Nucleotide sequence of 16S ribosomal RNA of Paracoccus carotinifaciens E-396 strain and other carotenoid-producing bacteria, Paracoccus marcusii DSM 11574 strain, Paracoccus genus N-81106 strain, Paracoccus haeundaensis BC 74171 strain, Paracoccus genus A-581- 1 strain, Paracoccus zeaxanthinifaciens ATCC 21588 strain, and Paracoccus sp. , 95.7%, and 95.4%, indicating that these strains are taxonomically very closely related. Therefore, it can be said that these strains form a group of carotenoid-producing bacteria. Therefore, these strains are preferably used in the present invention and can efficiently produce carotenoids.
  • a carotenoid-producing microorganism can be appropriately cultured, and the resulting culture can be used as a carotenoid.
  • Any method for culturing the microorganism may be used as long as it is capable of producing carotenoids, and a person skilled in the art can appropriately select and change the method from known methods.
  • Those skilled in the art can further concentrate, dry, pulverize, extract or purify the culture based on known techniques, and use the resulting precipitated concentrate, dried bacterial cells, extracts or purified products, or combinations thereof as carotenoids. can be used in the present invention as
  • commercial products can also be used as the dried cells of carotenoid-producing microorganisms.
  • examples of such commercial products include Panaferd-P and Panaferd-AX (ENEOS Techno Materials Co., Ltd.).
  • Astaxanthin is preferably mentioned as a carotenoid.
  • the type of carotenoid contained in the carotenoid-producing microorganism is not particularly limited as long as it contains astaxanthin, and may contain adonirubin, adonixanthin, and the like.
  • the amount of carotenoid contained in the carotenoid-producing microorganism of the present invention is not particularly limited.
  • the content of astaxanthin in the microorganism is 0.005-20%, preferably 0.01-10%, more preferably 0.1-5%.
  • the content of adonirbin in microorganisms is, for example, 0.001 to 7%, preferably 0.03 to 4%, more preferably 0.3 to 2%, and the content of adonixanthin in microorganisms is, for example, 0.0001 to 2%. , preferably 0.001 to 1%, more preferably 0.01 to 0.5%.
  • the content of astaxanthin in dry cells is 0.05-20%, preferably 0.1-10%, more preferably 0.5-5%, and most preferably 1-3%.
  • the content of adonibin in dry cells is, for example, 0.01 to 7%, preferably 0.03 to 4%, more preferably 0.2 to 3%, and most preferably 0.5 to 2%.
  • the content in dry cells is, for example, 0.005-2%, preferably 0.01-1%, more preferably 0.05-0.5%, and most preferably 0.1-0.3%.
  • the content of carotenoids in the feed of the present invention can be appropriately determined according to various conditions such as the type of target fish or crustacean and growth stage (for example, juvenile stage, adult stage).
  • the content of carotenoids in the feed of the present invention is, for example, 0.01% to 5% (w/w), 0.01% to 1% (w/w), 0.01% to 0.5% (w/ w) or 0.05% to 0.3% (w/w).
  • the content of astaxanthin in the feed of the present invention can be appropriately determined according to various conditions such as the type of target fish or crustacean and growth stage (for example, fry stage, adult stage).
  • the content of astaxanthin in the feed of the present invention is, for example, 0.1 to 2000 ppm, 0.5 to 1500 ppm, 0.5 to 1000 ppm, 1 to 500 ppm, 1 to 150 ppm, 10 to 150 ppm, 1 to 100 ppm, 10 to 100 ppm, or It may be 50-100 ppm.
  • astaxanthin is contained in the feed at 1-150 ppm or 1-100 ppm.
  • a carotenoid containing astaxanthin in the above content can be used in the feed.
  • composition of the feed of the present invention is not particularly limited as long as the feed of the present invention contains at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, vegetable protein and carotenoid, and can be ingested by fish or crustaceans. .
  • the feed of the present invention preferably contains a tasty nucleotide, one or more amino acids selected from alanine, proline, lysine, methionine, glutamic acid and taurine, a soybean-derived protein, and astaxanthin.
  • the types of ingredients contained in the feed of the present invention can be appropriately selected according to various conditions such as the type and growth stage of the target fish or crustacean.
  • the feed of the present invention contains at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, vegetable proteins, and carotenoids, as well as components similar to those contained in ordinary fish or crustacean feeds.
  • You may have Specific examples of ingredients for ordinary fish or crustacean feed include fish meal, fish oil, vitamin mixtures, mineral mixtures, metals, basic substances, calcium phosphate, wheat flour, wheat gluten, ⁇ -starch, binding agents, and bone meal. , yeast, eicosapentaenoic acid, docosahexaenoic acid, and the like.
  • the content of fish oil can be adjusted in the feed of the present invention.
  • the fish oil content can be increased over the normal feed.
  • the fish oil content can be reduced from the normal feed amount as long as sufficient growth promotion is possible.
  • the feed of the present invention is produced by combining other ingredients so as to contain at least one selected from the group consisting of vegetable proteins, amino acids or nucleotides, and carotenoids.
  • the method for producing the feed of the present invention is not particularly limited.
  • the feed of the present invention contains at least one selected from the group consisting of vegetable proteins, amino acids or nucleotides, and carotenoids, and the ingredients of the above-described ordinary fish or crustacean feed (basic feed) They can be made by similar methods using similar ingredients.
  • the form of the feed of the present invention is not particularly limited as long as it can be ingested by the target fish or crustaceans. That is, the feed of the present invention may be in any form such as powder, granules, pellets, cubes, paste and liquid.
  • the feed of the present invention may be formed, for example, as pellets such as dry pellets and moist pellets. Further excipients and additives such as thickeners may be added based on the form.
  • the present invention includes a feed composition containing at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, a vegetable protein, and a carotenoid.
  • the feed composition of the invention can be used for fish or crustaceans.
  • the feed composition of the present invention can be used to prevent or reduce reduced growth of fish or crustaceans, or to stimulate or promote growth of fish or crustaceans.
  • the feed composition of the present invention can also be used to enhance the skin, shell or meat of fish or crustaceans.
  • feed or feed composition of the present invention can be used to farm fish or crustaceans by feeding them.
  • Feeing the feed (or feed composition) of the present invention is not limited to feeding the previously prepared feed of the present invention, but when feeding a combination of the ingredients contained in the feed of the present invention described above. including.
  • the ingredients may be prepared individually before compounding and mixed before or during feeding, or each may be fed separately.
  • the feed of the present invention may be fed once a day or divided into multiple times. Alternatively, the feed of the present invention may be fed once every few days.
  • the feeding amount of the feed of the invention at each feeding may be constant or may vary.
  • the feeding amount of the feed of the present invention is not particularly limited. A person skilled in the art can make appropriate adjustments based on the type of fish or crustacean, the body of the fish, and the breeding method.
  • the composition of the feed of the invention at each feeding may be constant or may vary.
  • the content of at least one selected from the group consisting of vegetable proteins, nucleotides or amino acids and carotenoid contained in the feed of the present invention at each feeding may be constant or may vary.
  • the feeding method of the feed of the present invention can be appropriately selected depending on the type of fish, the degree of growth, water temperature, and the like.
  • manual feeding may be used, or mechanical feeding such as feeding by boat or automatic feeding may be used.
  • mechanical feeding such as feeding by boat or automatic feeding may be used.
  • one skilled in the art can adjust the amount and timing of feeding based on the energy requirements of the fish and the like.
  • the period during which the feed of the present invention is fed can be appropriately selected according to various conditions such as the type of target fish or crustacean.
  • the feed of the present invention may be continuously fed during the entire period of aquaculture, or may be fed only during a part of the period.
  • the feed of the present invention may be repeatedly fed and interrupted for any period of time.
  • the period of feeding the feed of the present invention is not limited, but may be, for example, 1 to 12 months or 1 to 4 months, and may be about 1 month or about 2 months.
  • the “partial period” may be, for example, 10% or more, 20% or more, 30% or more, 50% or more, 70% or more, or 90% or more of the entire culture period.
  • the farming of fish or crustaceans can be carried out by a normal method for raising fish or crustaceans, except for feeding the feed of the present invention.
  • Aquaculture can be carried out, for example, in fish cages on the sea or water tanks on land.
  • aquaculture includes aquaculture that only produces juvenile fish and aquaculture that produces parent fish.
  • the fish or crustaceans cultured using the feed of the present invention can be collected from aquaculture environments such as fish cages on the sea and water tanks on land. Recovery can be carried out by a conventionally known method.
  • the amount of animal protein or fishmeal in the feed is reduced by feeding the feed of the present invention to cultivate or raise fish or crustaceans. Feed efficiency of fish or crustaceans can be increased in some cases.
  • the amount of animal protein or fishmeal is reduced, and the feed efficiency of fish or crustaceans is increased compared to feeding a feed to which no carotenoid is added. can be done. Therefore, one aspect of the method of the present invention is a method of increasing the feed efficiency of a feed having a reduced amount of animal protein or fishmeal in the feed, comprising feeding the feed of the present invention to fish or crustaceans. be.
  • one aspect of the method of the present invention is at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, vegetable protein and , the use of carotenoids; or the use of the feed of the invention or the feed composition of the invention.
  • one aspect of the method of the present invention is at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids for use in a method for increasing the feed efficiency of a feed with a reduced amount of animal protein or fishmeal, a vegetable protein and a carotenoid; or a feed of the invention or a feed composition of the invention.
  • feeding the feed of the present invention to farm or raise the fish or crustaceans increases the feed efficiency of the fish or crustaceans when vegetable protein is added to the feed.
  • Feeding the feed of the present invention increases the feed efficiency of fish or crustaceans compared to feeding a feed containing the same amount of vegetable protein as the feed of the present invention, but without added carotenoids. be able to.
  • one aspect of the method of the present invention is a method of increasing the feed efficiency of a feed containing plant protein comprising feeding a feed of the present invention to a fish or crustacean.
  • one aspect of the method of the present invention uses at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, a vegetable protein, and a carotenoid to increase the feed efficiency of a feed containing vegetable protein; or The use of the feed of the invention or the feed composition of the invention.
  • one aspect of the method of the present invention is at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, a vegetable protein, and a carotenoid for use in a method for increasing the feed efficiency of a feed containing vegetable protein. or a feed of the invention or a feed composition of the invention.
  • the feed efficiency of fish or crustaceans can be increased by feeding the feed of the present invention to cultivate or raise fish or crustaceans.
  • the feed efficiency of fish or crustaceans can be increased as compared to feeding normal feed.
  • another aspect of the method of the present invention is a method of increasing the feed efficiency of a feed comprising feeding the feed of the present invention to a fish or crustacean.
  • one aspect of the method of the present invention is the use of at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, a vegetable protein, and a carotenoid for increasing the feed efficiency of the feed; or the feed of the present invention or Use of the feed composition of the invention.
  • one aspect of the method of the present invention is at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, a vegetable protein, and a carotenoid for use in a method for increasing feed efficiency of feed; A feed or a feed composition of the present invention.
  • Increased feed efficiency includes, for example, fish or crustaceans reaching a given size or weight faster than a control or reaching a given size or weight with less feed than a control.
  • Feed efficiency can be evaluated by FCR (feed conversion ratio).
  • FCR feed conversion ratio
  • FCR is also called a meat gain factor, and means the amount of feed (kg) required to obtain 1 kg of fish meat.
  • a smaller FCR value indicates that a smaller amount of feed is used to effectively increase the body weight of the fish.
  • FCR is calculated by dividing the feed amount per fish by the weight gain.
  • the FCR is also called a meat gain factor, and the smaller the FCR value, the more efficiently the body weight of the fish increases with a smaller amount of feed.
  • the feed of the present invention can increase feed efficiency, it prevents the growth of fish or crustaceans from being reduced by reducing the amount of animal protein or fish meal in the feed or by adding vegetable protein. or can be reduced. Therefore, one aspect of the feed of the present invention can be an agent for preventing or reducing growth deterioration of fish or crustaceans.
  • the present invention also includes a method for preventing or reducing reduced growth of fish or crustaceans, comprising feeding the feed of the present invention to fish or crustaceans.
  • the method of preventing or reducing under-growth of fish or crustaceans may further comprise raising or farming the fish or crustaceans.
  • one aspect of the method of the present invention is the use of at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, a vegetable protein, and a carotenoid for preventing or reducing reduced growth of fish or crustaceans; or The use of the feed of the invention or the feed composition of the invention.
  • one aspect of the method of the present invention is at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, a vegetable protein, and a carotenoid for use in a method for preventing or reducing reduced growth of fish or crustaceans. or a feed of the invention or a feed composition of the invention.
  • the feed of the present invention can increase the feed efficiency, by feeding the feed of the present invention to farm or raise fish or crustaceans, It can promote or stimulate growth or increase body weight in fish or crustaceans.
  • the feed of the invention can be used to promote or stimulate the growth of fish or crustaceans.
  • One aspect of the feed of the present invention may be a fish or crustacean growth promoter or growth stimulant.
  • the present invention also includes a method for promoting or stimulating the growth of fish or crustaceans comprising feeding the feed of the present invention to the fish or crustaceans.
  • the invention is a method of increasing body weight in a fish or crustacean comprising feeding the fish or crustacean a feed of the invention.
  • one aspect of the method of the present invention comprises at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, vegetable proteins, and carotenoids for promoting or stimulating the growth of fish or crustaceans. or the use of the feed of the invention or the feed composition of the invention.
  • one embodiment of the method of the present invention comprises at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, and a plant-derived a protein and a carotenoid; or a feed of the invention or a feed composition of the invention.
  • Another aspect of the method of the present invention is the use of at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, a vegetable protein, and a carotenoid for increasing the body weight of fish or crustaceans; or the feed of the present invention. Or the use of the feed composition of the present invention.
  • one aspect of the method of the present invention is at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, a vegetable protein, and a carotenoid; The feed of the invention or the feed composition of the invention. Growth of fish or crustaceans can be confirmed by measuring body weight or weight or length. Growth can be evaluated as accelerated or stimulated when the rate of increase in body weight or weight or length is faster than in controls.
  • the feed of the present invention contains carotenoids, it is expected to enhance the color of the skin, shell, or meat of fish or crustaceans even if the feed contains little or no fishmeal. Therefore, in another aspect of the present invention, fish or crustacean skins, shells or meat can be enhanced by cultivating or rearing fish or crustaceans by feeding the feed of the present invention.
  • One aspect of the feed of the present invention may be a fish or crustacean color enhancer.
  • the present invention also includes a method for enhancing the color of fish or crustacean skin, shell or meat comprising feeding the feed of the present invention to the fish or crustacean.
  • one aspect of the method of the present invention is the use of at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, a vegetable protein, and a carotenoid for coloring the skin, shell, or meat of fish or crustaceans. or the use of the feed of the invention or the use of the feed composition of the invention.
  • one aspect of the method of the present invention is at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, and a vegetable protein for use in a method for deepening the skin, shell or meat of fish or crustaceans. , a carotenoid; or a feed of the invention or a feed composition of the invention.
  • the color of the skin, shell or meat of fish or crustaceans can be evaluated by measuring the amount of carotenoid pigment contained in the skin, shell or meat. Alternatively, it can be evaluated by measuring the skin, shell or meat with a chromometer.
  • a person skilled in the art can determine the amount of carotenoids contained in skin, shell or meat based on known methods. For example, carotenoids are extracted from the skin, shell, or meat obtained from fish or crustaceans, and the amount of carotenoids contained in the skin, shell, or meat is determined by measuring the absorbance or liquid chromatography analysis after appropriately treating the extract. can be calculated.
  • Test feed Table 1 shows the composition of the feed used in the following tests.
  • Parenter powder is Panaferd-AX (ENEOS Techno-Materials Co., Ltd., astaxanthin content: 2%. As other carotenoids, it contains 0.9% adonirubin and 0.3% adonixanthin. ) was used, and as “synthetic astaxanthin”, Carophyll Pink (DSM) containing 8% astaxanthin was used.
  • the fish meal added in section (1) was from Chile. Soy Protein Concentrates from ADM was used as the concentrated soy protein added in sections (2) to (6).
  • a raw material obtained by mixing each component with the composition shown in Table 1 was subjected to extruder processing (from pressure processing to drying), pelletized, and fed to fish as a test feed. It is expected that feeding to fish will be facilitated by molding the powder into pellets. In addition, since the feed is pressurized and heated by the extruder, it is expected that the feed will be easier for fish to digest.
  • the test feed was processed under the following conditions to produce extruder pellets.
  • Raw material supply rate 70 ⁇ 90g/min Addition amount of water 26 ⁇ 30g/min Pressure about 0.5Mpa
  • Raw material temperature 90 ⁇ 96°C Dry at 90°C for 2-4 hours
  • Test Method There were six test plots: (1) fishmeal section (feeding section of fishmeal-containing feed); (2) No additive group (no fish meal, feeding group of feed without astaxanthin addition); (3) Group with 50 ppm natural astaxanthin (no fishmeal, feeding group with Panaferd-AX (paracoccus bacteria powder) added to contain astaxanthin at a concentration of 50 ppm).
  • Red sea bream juveniles (about 60g) were used as test fish.
  • the feeding period was 8 weeks from September to November.
  • Methods for measuring carotenoid content Cut the red sea bream into 3 pieces, peel off the skin from the right and left sides, and use the obtained skin as a sample.
  • Carotenoids were extracted from the skin with acetone, and a mixed solvent of diethyl ether:hexane (1:1 (v/v)) and water were added to the extract for partition, and the solvent layer was recovered. After evaporating the solvent, the residue was redissolved in hexane and the absorbance at 470 nm was measured.
  • Extinction coefficient of astaxanthin was used to calculate the amount of astaxanthin in hexane assuming total carotenoids.
  • the hexane redissolved solution was subjected to HPLC analysis. The conditions were as follows.
  • a peak with a retention time of about 2 to 3 minutes is defined as (1) a yellow carotenoid ester (total of tunaxanthin, lutein, and zeaxanthin) peak, and a peak with a retention time of about 4 minutes is defined as (2) an astaxanthin diester peak with a retention time of 5.
  • the peak of ⁇ 6 minutes was regarded as the peak of (3) astaxanthin monoester, and the peak of retention time 13 minutes was regarded as the peak of (4) astaxanthin (free form).
  • the area ratio of the peak of (1) was defined as the carotenoid ratio of the yellow pigment, and the total area ratio of the peaks of (2) to (4) was defined as the carotenoid ratio of the red pigment.
  • TBARS (thiobarbituric acid reactant) measurement method 1 g of feed was collected from each group, 5 mL of phosphate buffer (pH 7.4) was added, homogenized with a Teflon homogenizer, and the homogenate was subjected to TBA reaction. 0.2 mL of a 7% sodium dodecylsulphate aqueous solution was added to 0.5 mL of the homogenate solution and mixed. 2 mL of 0.1N HCl was added and mixed to dissolve evenly. Then 0.3 mL of 10% phosphotungstic acid was added. 1 mL of 0.5% thiobarbituric acid (TBA) aqueous solution was added, mixed and heated at 95° C. for 45 minutes.
  • TBA thiobarbituric acid
  • Table 2 shows the values for each of the 18 tanks in Sections (1) to (6) and the average value (avg) for each section.
  • “Initial” and “Final” indicate the weight of the fish at the start and end of the test, respectively, and “gain” indicates the weight gain.
  • “Feed/fish” indicates the feed amount per fish.
  • “DFR” (daily feed ratio) (%) was calculated by dividing the amount of feed per fish (feed/fish) by the number of days of feeding, dividing by the weight of the fish, and multiplying by 100.
  • the fish weight was the average of the initial weight (at the start of the test) and the final weight (at the end of the test).
  • FCR feed conversion ratio
  • feed conversion ratio is a value obtained by dividing the feed amount per fish (feed/fish) by the weight gain (gain).
  • the FCR is also called a meat gain factor, and the smaller the FCR value, the more efficiently the body weight of the fish increases with a smaller amount of feed.
  • the FCR was higher in group (2) (soybean protein feed) than in group (1) (fish meal group) (1.32 in group (1) and 1.41 in group (2)). It was found that fish meat could not be obtained with the same efficiency as the fish meal-added feed with soybean protein (and amino acids, nucleotides, etc.) instead of fish meal.
  • the FCR of groups (3) to (6) (astaxanthin-added group) was smaller than that of group (2) (soybean protein feed group). Therefore, it was shown that when soybean protein (and amino acids, nucleotides, etc.) is used instead of fishmeal, fish meat can be efficiently obtained with a small amount of feed by further adding carotenoids such as astaxanthin.
  • the FCR of groups (3) to (6) was comparable to or lower than the FCR of group (1) (fishmeal group).
  • the natural astaxanthin-added section (5) (contains 100 ppm of astaxanthin from Paracoccus cells) had the lowest FCR (1.25). Therefore, according to the present invention, it was shown that fish meat can be efficiently obtained with a smaller amount of feed than in the case of feeding with a normal fishmeal-containing feed.
  • the feed of the present invention containing at least one selected from the group consisting of nucleotides and amino acids, a vegetable protein, and a carotenoid has good feed efficiency and stimulates (weight gain) or accelerates the growth of fish or crustaceans. It was shown that it can be used to
  • the natural astaxanthin dried Paracoccus spp. is used, and the dried Paracoccus spp. contains not only astaxanthin but also red pigments such as adonirbin and adonixanthin.
  • Tunaxanthin is a yellow carotenoid metabolized from astaxanthin in the body of red sea bream. Therefore, it was found that even if the feed does not contain fishmeal, the feed of the present invention can effectively enhance the color of the fish skin.
  • the feeds of groups (3) to (6) containing astaxanthin showed a lower degree of lipid oxidation. rice field. Therefore, it was shown that the feed of the present invention is a feed that is difficult to oxidize.
  • sections (3) to (6) (astaxanthin addition section), sections (3) (50 ppm addition section) and (5) section (100 ppm addition section), which are natural astaxanthin addition sections, are synthetic astaxanthin addition sections.
  • the TBARS values were lower than those in (4) (50 ppm addition) and (6) (100 ppm addition), indicating that the degree of lipid oxidation was small.
  • feed containing oxidized fish oil can reduce the growth rate. Since the feed of the present invention is a feed that is difficult to oxidize, it was shown that it can be a feed capable of promoting growth.
  • a feed for fish or crustaceans having a reduced content of fishmeal is provided.
  • the feed provided by the present invention can be used as feed for sustainable aquaculture because it can contain less fishmeal than conventional feed.
  • a fish or crustacean feed for stimulating the growth of a fish or crustacean and a method for increasing the body weight of a fish or crustacean are provided.

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Abstract

本発明は、魚類又は甲殻類の養殖用飼料の提供を目的とする。本発明は、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドとを含む、魚類又は甲殻類用飼料を提供する。

Description

魚類又は甲殻類用飼料
　本発明は、カロテノイドを含有する魚類又は甲殻類用飼料に関する。詳しくは、本発明は、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドとを含む、魚類又は甲殻類用飼料、及び当該飼料を用いる魚類又は甲殻類の成長を刺激する方法又は体重を増加させる方法に関する。
　魚類の養殖用飼料に使用されている主なタンパク質源は魚粉である。養殖用飼料には、特に、カタクチイワシやマアジなどの魚を乾燥して粉砕した魚粉が用いられている。
　近年では、魚粉の供給不足や魚粉の価格高騰が懸念されている。世界では、一人当たりの食用魚介類の消費量が過去半世紀で約２倍に増加し、近年においてもそのペースは衰えていない（農林水産省令和2年度水産白書）。魚粉の供給不足や価格高騰は、魚肉の需要増加により水産資源が減少する中で、魚粉の原料となる魚の量も減少することに起因する。
　また、魚粉の原料となる魚の乱獲に伴って生物多様性が損なわれてしまうという環境問題が生じ得る。
　このような懸念や環境問題に即した持続可能な養殖のための飼料を開発する取り組みが進められている。
農林水産省令和2年度水産白書
　本発明は、魚類又は甲殻類の養殖用飼料、及び当該飼料を用いる魚類又は甲殻類の養殖方法の提供を目的とする。
　本発明者は、鋭意研究を行い、魚粉の含有量を低減した魚類又は甲殻類用飼料を見出した。すなわち、本発明は以下を包含する。
［１］
　ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドとを含む、魚類又は甲殻類用飼料。
［２］
　前記ヌクレオチドが、呈味性ヌクレオチドである、［１］に記載の飼料。
［３］
　前記ヌクレオチドが、イノシン酸、グアニル酸及びキサンチル酸からなる群から選ばれる少なくとも１種である、［１］又は［２］に記載の飼料。
［４］
　前記アミノ酸が、アラニン、プロリン、グルタミン酸、タウリン、ロイシン、ヒスチジン、リシン、スレオニン、バリン、イソロイシン、フェニルアラニン、アルギニン、プロリン及びメチオニンからなる群から選ばれる少なくとも１種である、［１］～［３］のいずれか一項に記載の飼料、又は
　前記アミノ酸が、アラニン、プロリン、グルタミン酸、タウリン、ロイシン、ヒスチジン、リシン、スレオニン、バリン、イソロイシン、フェニルアラニン、アルギニン、プロリン、メチオニン及びシステインからなる群から選ばれる少なくとも１種である、［１］～［３］のいずれか一項に記載の飼料。
［５］
　前記植物性タンパク質が大豆由来のタンパク質である、［１］～［４］のいずれか一項に記載の飼料。
［６］
　前記カロテノイドがアスタキサンチンを含む、［１］～［５］のいずれか一項に記載の飼料。
［７］
　前記カロテノイドが、飼料に対して１～１５０ｐｐｍのアスタキサンチンを含む、［１］～［６］のいずれか一項に記載の飼料。
［８］
　前記カロテノイドが、パラコッカス属に属する細菌に由来する、［１］～［７］のいずれか一項に記載の飼料。
［９］
　前記飼料における動物性タンパク質源の含有量が１０％（ｗ／ｗ）以下である、［１］～［８］のいずれか一項に記載の飼料。
［１０］
　魚粉を含有しない、［１］～［９］のいずれか一項に記載の飼料。
［１１］
　前記魚類が、スズキ目に属する魚類である、［１］～［１０］のいずれか一項に記載の飼料。
［１２］
　前記スズキ目に属する魚類が、マグロ、ハタ、マダイ、ブリ又はカンパチである、［１１］に記載の飼料。
［１３］
　魚類又は甲殻類の成長を刺激するための、［１］～［１２］のいずれか一項に記載の飼料。
［１４］
　［１］～［１２］のいずれか一項に記載の飼料を用いて、魚類又は甲殻類の体重を増加させる方法。
［１５］
　［１］～［１２］のいずれか一項に記載の飼料を用いて、魚類又は甲殻類の皮、殻又は肉を色揚げする方法。
［１６］
　魚類又は甲殻類の体重を増加させるための、［１］～［１２］のいずれか一項に記載の飼料の使用。
［１７］
　魚類又は甲殻類の皮、殻又は肉を色揚げするための、［１］～［１２］のいずれか一項に記載の飼料の使用。
　本発明によれば、魚粉の含有量を低減した魚類又は甲殻類用の飼料が提供される。本発明により提供される飼料は、従来の飼料よりも魚粉の含有量を減らすことが可能であるため、持続可能な養殖のための飼料として使用し得る。
　本発明の別の態様において、魚類又は甲殻類の成長を刺激するための魚類又は甲殻類用の飼料及び魚類又は甲殻類の体重を増加させる方法が提供される。
　また、本発明の別の態様において、魚類又は甲殻類の皮、殻又は肉を色揚げする方法が提供される。
　以下、本発明を詳細に説明する。
１．本発明の飼料
　本発明の飼料（又は本発明の飼料組成物）は、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドとを含む、魚類又は甲殻類用の飼料又は飼料組成物である。本発明の飼料は、魚類又は甲殻類の養殖に用いることができる。
　本発明は、魚類又は甲殻類用の飼料に加えるタンパク質として植物性タンパク質を利用する飼料において、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種の添加剤とカロテノイドとをさらに飼料に含有させることにより、魚類又は甲殻類に使用し得る飼料を提供するものである。本発明の飼料は、実施例において従来の飼料と同程度又は同程度以上の飼料効率を有することが示された。したがって、本発明の飼料は魚類又は甲殻類の成長を刺激又は促進するために用いることができる。
　本発明の飼料は、従来の飼料と比べて動物性タンパク質の含有量が低減されていてもよい。本発明の飼料は、一般的な魚類又は甲殻類用の飼料に含有されるべき動物性タンパク質の量よりも少ない動物性タンパク質を含有してもよく、動物性タンパク質を含有していなくてもよい。飼料に含まれる動物性タンパク質は、例えば、魚類、甲殻類、昆虫、鳥類又は哺乳類由来のタンパク質であり得る。
　魚類又は甲殻類用の飼料では、通常、動物性タンパク質源として魚粉が用いられる。本発明の一態様において、本発明の飼料は魚粉を含み得るが、従来の飼料と比べて魚粉の量が低減されていてもよい。本発明の飼料は、一般的な魚類又は甲殻類用の飼料に含有されるべき魚粉の量よりも少ない魚粉を含有してもよい。別の態様において、本発明の飼料は、魚粉を含有しない。さらに別の態様において、本発明の飼料は魚粉又は魚粉入りの従来の飼料と共に用いてもよい。
　「一般的な魚類又は甲殻類の飼料に含有されるべき動物性タンパク質の量」又は「一般的な魚類又は甲殻類の飼料に含有されるべき魚粉の量」は、一般的な魚粉主体の魚類又は甲殻類用の飼料を用いて魚類又は甲殻類を飼育した場合と比較して、植物性タンパク質、ヌクレオチド及びアミノ酸から選ばれる少なくとも１種、及びカロテノイドを含有させない条件の飼料を用いて飼育した場合に生育低下を招かない最低限の含有量の動物性タンパク質又は魚粉をいう。
　本発明の飼料における動物性タンパク質の含有量は、対象の魚類又は甲殻類の種類や生育ステージ（例えば、稚魚期、成魚期）等の諸条件に応じて適宜決定することができる。本発明の飼料における動物性タンパク質の含有量は、動物性タンパク質源の含有量を調整することにより、従来の飼料と比べて低減させることができる。本発明の飼料における動物性タンパク質源の含有量は、例えば５０％（ｗ／ｗ）以下、４０％（ｗ／ｗ）以下、３０％（ｗ／ｗ）以下、２５％（ｗ／ｗ）以下、２０％（ｗ／ｗ）以下、１５％（ｗ／ｗ）以下、１０％（ｗ／ｗ）以下、５％（ｗ／ｗ）以下、又は０％（ｗ／ｗ）であってよい。
　本発明の飼料における動物性タンパク質源の含有量は、好ましくは１０％（ｗ／ｗ）以下である。
　本発明の飼料における魚粉の含有量は、対象の魚類又は甲殻類の種類や生育ステージ（例えば、稚魚期、成魚期）等の諸条件に応じて適宜決定することができる。本発明の飼料における魚粉の含有量は、例えば６０％（ｗ／ｗ）以下、５０％（ｗ／ｗ）以下、４０％（ｗ／ｗ）以下、３０％（ｗ／ｗ）以下、２０％（ｗ／ｗ）以下、１０％（ｗ／ｗ）以下、５％（ｗ／ｗ）以下、又は０％（ｗ／ｗ）であってよい。また、本発明の飼料における魚粉の含有量は、例えば０％（ｗ／ｗ）以上、５％（ｗ／ｗ）以上、１０％（ｗ／ｗ）以上、２０％（ｗ／ｗ）以上、３０％（ｗ／ｗ）以上、又は４０％（ｗ／ｗ）以上でもよい。魚粉は動物性タンパク質源として飼料に含有され得る。
　本発明において、魚類又は甲殻類の種類は特に限定されない。魚類として、例えば、ブリ(ハマチ)、マダイ、カンパチ、マグロ、トラフグ、ヒラメ、シマアジ、マアジ、ヒラマサ、イシダイ、カワハギ、メバル、スズキ、チダイ、イサキ、オオニベ、イジナ、マサバ、ハタ、クエ、ウナギ、ナマズ、アユ、シーバス、ニジマス、コイ、タイヘイヨウサケ、ギンザケ、マスノサケなどが挙げられる。甲殻類として、例えば、クルマエビ、バナメイエビ、ウシエビ、ホワイトレッグシュリンプ、ガザミ、上海蟹が挙げられる。本発明において、ハタはマハタでもよい。また、マグロはクロマグロでもよい。
　本発明において、魚類はスズキ目に属する魚類が好ましい。スズキ目に属する魚類は、例えば、マグロ、ハタ、マダイ、ブリ、カンパチが挙げられるが、これらに限定されない。
　本発明において、植物性タンパク質は、魚類又は甲殻類の養殖に使用されるものであれば特に限定されない。例えば大豆（例えば濃縮大豆タンパク質、大豆油粕など）、トウモロコシ（例えばコーングルテンミール）、菜種（菜種油粕）、大麦、小麦、米由来のタンパク質を用いることができる。本発明において、植物性タンパク質は好ましくは大豆由来のタンパク質である。
　植物性タンパク質としては、市販品を用いてもよく、又は適宜製造して取得したものを用いてもよい。植物性タンパク質の製造方法は特に限定されず、公知の方法を利用できる。
　本発明の飼料における植物性タンパク質の含有量は、対象の魚類又は甲殻類の種類や生育ステージ（例えば、稚魚期、成魚期）等の諸条件に応じて適宜決定することができる。本発明の飼料における植物性タンパク質の含有量は、例えば１０％（ｗ／ｗ）以上、２０％（ｗ／ｗ）以上、３０％（ｗ／ｗ）以上、４０％（ｗ／ｗ）以上、５０％（ｗ／ｗ）以上、６０％（ｗ／ｗ）以上、又は７０％（ｗ／ｗ）以上でもよい。また、本発明の飼料における植物性タンパク質の含有量は、例えば８０％以下、７０％（ｗ／ｗ）以下、６０％（ｗ／ｗ）以下、５０％（ｗ／ｗ）以下、４０％（ｗ／ｗ）以下又は３０％（ｗ／ｗ）以下であってよい。
　本発明において、植物性タンパク質を構成するアミノ酸組成や魚類又は甲殻類の種類に応じて、アミノ酸を適宜追加することができる。植物性タンパク質のアミノ酸組成が魚粉に比べて不十分な場合は、該当するアミノ酸を飼料に含有すればよい。例えば、植物性タンパク質に含まれるメチオニンやシステインなどの含硫アミノ酸が魚粉よりも少ない場合は、メチオニンやシステインを追加して飼料に含有させることにより、成長促進が期待される。例えば、大豆はメチオニン、リジン、トリプトファンが不足することが多いことから、大豆由来のタンパク質を用いる場合にメチオニン、リジン、及び／又はトリプトファンを添加してもよい。トウモロコシはリジンとトリプトファンが不足することが多いことから、トウモロコシ由来のタンパク質を用いる場合にリジン及び／又はトリプトファンを添加してもよい。
　また、本発明において、魚類又は甲殻類の種類に応じてアミノ酸を適宜追加することができる。魚類又は甲殻類の有するアミノ酸代謝酵素やアミノ酸産生酵素の特徴に応じて、飼料にアミノ酸を添加してもよい。例えば、ブリなどの魚類や甲殻類は、メチオニンをタウリンに代謝できないため、飼料にタウリンを添加してもよい。
　前記アミノ酸として、アラニン、プロリン、グルタミン酸、タウリン、ロイシン、ヒスチジン、リシン、スレオニン、バリン、イソロイシン、フェニルアラニン、アルギニン、プロリン、メチオニン及びシステインからなる群から選ばれる少なくとも１種が挙げられる。前記アミノ酸は、例えば、アラニン、プロリン、リシン、メチオニン、グルタミン酸及びタウリンから選択される１種以上、例えばこれら６種全てが挙げられる。アミノ酸はＬ体、Ｄ体、ラセミ体のいずれであってもよい。また、アミノ酸はフリー体又は塩の形態であってもよい。
　本発明において、ヌクレオチドを適宜加えることができる。本発明において用いられるヌクレオチドは、好ましくは呈味性ヌクレオチドである。呈味性ヌクレオチドには、例えば、イノシン酸、グアニル酸及びキサンチル酸が挙げられる。呈味性ヌクレオチドは好ましくはイノシン酸である。呈味性ヌクレオチドの１種以上を飼料に含有させることにより魚の摂餌性が刺激され、成長促進（体重増加）が期待される。魚の摂餌性を刺激する目的でコハク酸を飼料に含有させてもよい。
　ヌクレオチドに結合するリン酸の数は、限定されず、例えば、１、２または３である。
　本発明の別の態様において、ヌクレオチドはリボースの５’位にリン酸が１つ結合し、６位が－ＯＨのプリンヌクレオチドが好ましい。
　本発明の飼料は、上記のヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種を含む。本発明の飼料はヌクレオチドの少なくとも１種又はアミノ酸の少なくとも１種を含んでもよいし、両方を含んでもよい。本発明の飼料は、ヌクレオチドの少なくとも１種及びアミノ酸の少なくとも１種を含むことが好ましい。
　ヌクレオチドやアミノ酸は、市販品を用いてもよく、適宜製造して取得したものを用いてもよい。
　ヌクレオチド又はアミノ酸の製造方法は特に制限されず、公知の方法を利用できる。例えば、ヌクレオチド又はアミノ酸は、化学合成、酵素反応又はその組み合わせにより製造することができる。また、例えば、ヌクレオチド又はアミノ酸は、ヌクレオチド又はアミノ酸の生産能を有する微生物を培養し、培養物かヌクレオチド又はアミノ酸を回収することで製造することができる。また、例えば、ヌクレオチド又はアミノ酸は、ヌクレオチド又はアミノ酸を含有する農水畜産物から回収することで製造することができる。
　本発明の飼料におけるヌクレオチドの含有量は、対象の魚類又は甲殻類の種類や生育ステージ（例えば、稚魚期、成魚期）等の諸条件に応じて適宜決定することができる。本発明の飼料におけるヌクレオチドの含有量は、例えば０．１％～５％（ｗ／ｗ）、０．５％～５％（ｗ／ｗ）、１％～５％（ｗ／ｗ）又は１．５％～３％（ｗ／ｗ）であってよい。
　本発明の飼料におけるアミノ酸の含有量は、対象の魚類又は甲殻類の種類や生育ステージ（例えば、稚魚期、成魚期）等の諸条件に応じて適宜決定することができる。本発明の飼料におけるアミノ酸の含有量は、例えば０．１％～１０％（ｗ／ｗ）、１％～１０％（ｗ／ｗ）、２％～１０％（ｗ／ｗ）、３％～１０％（ｗ／ｗ）、４％～１０％（ｗ／ｗ）又は５％～１０％（ｗ／ｗ）であってよい。
　本発明の飼料に含有されるカロテノイドは、化学的に合成された合成カロテノイドであってもよく、あるいは、動物、植物、微生物等の天然由来のカロテノイドであってもよい。当業者であれば化学合成法、又は細菌や酵母等の微生物を用いた方法等の公知の方法でカロテノイドを製造することができる。カロテノイドは、精製された生成物又は部分的に生成された生成物であってもよい。本発明の飼料にカロテノイドを含有させることにより、生体内酸化の低減や免疫賦活による成長促進（体重増加）が期待される。また、本発明の飼料にカロテノイドを含有させることにより、魚類または甲殻類の皮、殻又は肉の色揚げが期待される。
　カロテノイドは、市販品を用いてもよく、適宜製造して取得したものを用いてもよい。市販されている合成カロテノイドとして、CAROPHYLL（登録商標）ピンク（DSM社）、Lucantin（登録商標）ピンク（BASF社）等が挙げられる。
　本発明において、カロテノイドを産生する微生物に由来するカロテノイドを用いることができる。カロテノイドを産生する微生物は、カロテノイドを産生する微生物であれば特に限定されず、緑藻類Haematococcus pluvialis、赤色酵母Phaffia rhodozyma、Paracoccus（パラコッカス）属に属する細菌、Brevundimonas（ブレブンディモナス）属に属する細菌、Erythrobacter（エリスロバクター）属に属する細菌等が挙げられる。本発明においては、好ましくはパラコッカス属に属する細菌、ブレブンディモナス属に属する細菌又はエリスロバクター属に属する細菌が用いられ、より好ましくはパラコッカス属に属する細菌が用いられる。パラコッカス属、ブレブンディモナス属及びエリスロバクター属は、いずれもProteobacteria門、Alphaproteobacteria鋼に分類され、細菌分類学上の共通性があるため、これらの属に属する細菌を使用することが可能である。
　本発明において、パラコッカス属に属する細菌に由来するカロテノイドを好ましく用いることができる。
　本発明において、パラコッカス属に属する細菌は、Paracoccus carotinifaciens、Paracoccus marcusii、Paracoccus haeundaensis及びParacoccus zeaxanthinifaciensが好ましく用いられ、特にParacoccus carotinifaciensが好ましく用いられる。
　パラコッカス属に属する細菌の具体的な菌株の例として、Paracoccus carotinifaciens E-396株（FERM BP-4283）及びParacoccus属細菌A-581-1株（FERM BP-4671）が挙げられ、これらの変異株も本発明に好ましく用いられる。ブレブンディモナス属に属するカロテノイド産生細菌としては、例えばBrevundimonas SD212株（特開2009-27995）、Brevundimonas FERM P-20515, 20516株（特開2006-340676）、Brevundimonas vesicularis（Gene, Vol.379, p.101-108, 1 Sep 2006）などが挙げられる。エリスロバクター属に属するカロテノイド産生細菌としては、例えばErythrobacter JPCC M種（特開2008-259452）、Erythrobacter JPCC O種（特開2008-259449）などが挙げられる。
　本発明において、カロテノイドを産生する細菌は、好ましくはE-396株の１６ＳリボソームＲＮＡの塩基配列と実質的に同一である細菌が用いられる。ここで、「実質的に同一」とは、塩基配列決定の際のエラー頻度等を考慮し、塩基配列が好ましくは９０％以上、９５％以上、より好ましくは９６％以上、さらに好ましくは９７％以上、特に好ましくは９８％以上、最も好ましくは９９％以上相同であることを意味する。同一性・相同性は、例えば、遺伝子解析ソフトClustal Wにより決定することができる。
　この１６ＳリボソームＲＮＡの塩基配列の同一性・相同性に基づいた微生物の分類法は、近年主流になっている。従来の微生物の分類法は、従来の運動性、栄養要求性、糖の資化性など菌学的性質に基づいているため、自然突然変異による形質の変化等が生じた場合に、微生物を誤って分類する場合があった。これに対し、１６ＳリボソームＲＮＡのの塩基配列は遺伝的に安定であるので、その同一性・相同性に基づく分類法は従来の分類法に比べて分類の信頼度が格段に向上する。
　Paracoccus carotinifaciens E-396株の１６ＳリボソームＲＮＡの塩基配列と、他のカロテノイド産生細菌である、Paracoccus marcusii DSM 11574株、Paracoccus属細菌N-81106株、Paracoccus haeundaensis BC 74171株、Paracoccus属細菌A-581-1株、Paracoccus zeaxanthinifaciens ATCC 21588株、及びParacoccus sp. PC-1株の16SリボソームRNAの塩基配列との相同性は、それぞれ９９．７％、９９．７％、９９．６％、９９．４％、９５．７％、及び９５．４％であり、これらは分類学上極めて近縁な菌株であることが分かる。よって、これらの菌株はカロテノイドを産生する細菌として一つのグループを形成しているといえる。このため、これらの菌株は本発明に好ましく用いられ、カロテノイドを効率的に産生することができる。
　本発明においては、カロテノイドを産生する微生物を適宜培養し、得られた培養物を、カロテノイドとして用いることができる。微生物の培養方法は、カロテノイドを産生する条件であればいずれの方法でもよく、当業者であれば、公知の方法から適宜選択、変更することができる。当業者は、公知技術に基づき、培養物をさらに濃縮、乾燥、粉砕、抽出又は精製などを行い、得られた沈殿濃縮物、乾燥菌体、抽出物もしくは精製物、又はそれらの組み合わせ等をカロテノイドとして本発明に使用することができる。
　本発明において、カロテノイドを産生する微生物の乾燥菌体は、市販品を使用することもできる。そのような市販品としては、例えば、Panaferd-P又はPanaferd-AX（ENEOSテクノマテリアル株式会社）を挙げることができる。
　カロテノイドとしては、アスタキサンチンが好ましく挙げられる。本発明において、カロテノイドを産生する微生物に含まれるカロテノイドの種類は、アスタキサンチンを含む限り特に限定されず、アドニルビン、アドニキサンチン等を含んでいてもよい。
　また、本発明のカロテノイドを産生する微生物に含まれるカロテノイドの量は特に限定されない。例えば、アスタキサンチンの含有量は、微生物中、0.005～20％、好ましくは0.01～10％、より好ましくは0.1～5％である。また、アドニルビンの微生物中の含有量は、例えば0.001～7％、好ましくは0.03～4％、より好ましくは0.3～2％であり、アドニキサンチンの微生物中の含有量は、例えば0.0001～2％、好ましくは0.001～1％、より好ましくは0.01～0.5％である。さらに例えば、乾燥菌体中のアスタキサンチンの含有量は、0.05～20％、好ましくは0.1～10％、より好ましくは0.5～5％、最も好ましくは1～3％である。また、アドニルビンの乾燥菌体中の含有量は、例えば0.01～7％、好ましくは0.03～4％、より好ましくは0.2～3％であり、最も好ましくは0.5～2％であり、アドニキサンチンの乾燥菌体中の含有量は、例えば0.005～2％、好ましくは0.01～1％、より好ましくは0.05～0.5％であり、最も好ましくは0.1～0.3％である。
　本発明の飼料におけるカロテノイドの含有量は、対象の魚類又は甲殻類の種類や生育ステージ（例えば、稚魚期、成魚期）等の諸条件に応じて適宜決定することができる。本発明の飼料におけるカロテノイドの含有量は、例えば０．０１％～５％（ｗ／ｗ）、０．０１％～１％（ｗ／ｗ）、０．０１％～０．５％（ｗ／ｗ）又は０．０５％～０．３％（ｗ／ｗ）であってよい。
　本発明の飼料におけるアスタキサンチンの含有量は、対象の魚類又は甲殻類の種類や生育ステージ（例えば、稚魚期、成魚期）等の諸条件に応じて適宜決定することができる。本発明の飼料におけるアスタキサンチンの含有量は、例えば０．１～２０００ｐｐｍ、０．５～１５００ｐｐｍ、０．５～１０００ｐｐｍ、１～５００ｐｐｍ、１～１５０ｐｐｍ、１０～１５０ｐｐｍ、１～１００ｐｐｍ、１０～１００ｐｐｍ又は５０～１００ｐｐｍであってよい。一態様において、アスタキサンチンは、１～１５０ｐｐｍ又は１～１００ｐｐｍで飼料に含有される。本発明において、飼料に対して上記含有量のアスタキサンチンを含むカロテノイドを用いることができる。
　上記のとおり、本発明ではアミノ酸やヌクレオチドを添加剤として使用することができる。本発明の飼料の組成は、本発明の飼料が、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドとを含み、魚類又は甲殻類が摂取できる限り、特に限定されない。本発明の飼料は、好ましくは、呈味性ヌクレオチドと、アラニン、プロリン、リシン、メチオニン、グルタミン酸及びタウリンから選択される１種以上のアミノ酸と、大豆由来タンパク質と、アスタキサンチンとを含む。
　本発明の飼料が含有する成分の種類は、対象の魚類又は甲殻類の種類や生育ステージ等の諸条件に応じて適宜選択することができる。例えば、本発明の飼料は、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドに加えて、通常の魚類又は甲殻類用飼料が含有する成分と同様の成分を含有していてもよい。通常の魚類又は甲殻類用飼料の成分として、具体的には、例えば、魚粉、魚油、ビタミン混合物、ミネラル混合物、金属、塩基性物質、リン酸カルシウム、小麦粉、小麦グルテン、αデンプン、粘結剤、骨粉、酵母、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸等が挙げられる。
　さらに、本発明の飼料において、魚油の含有量を調整することができる。例えば、本発明の飼料は、魚粉を含まない又は低含量の魚粉を含む場合、魚油の含有量を通常の飼料よりも増加させることができる。あるいは、十分な成長促進が可能な限度において、魚油の含有量を通常の飼料の量から減少させることができる。
　本発明の飼料は、植物性タンパク質、アミノ酸又はヌクレオチドからなる群から選ばれる少なくとも１種及びカロテノイドが含有されるように、その他の成分を組み合わせることにより製造される。本発明の飼料の製造方法は特に限定されない。例えば、本発明の飼料は、植物性タンパク質、アミノ酸又はヌクレオチドからなる群から選ばれる少なくとも１種、及びカロテノイド添加すること以外は、上述の通常の魚類又は甲殻類用飼料（基本飼料）の成分と同様の成分を用い、同様の方法によって製造することができる。
　また、本発明の飼料の形態は、対象の魚類又は甲殻類が摂取可能な態様である限り、特に制限されない。すなわち、本発明の飼料は、粉末状、顆粒状、ペレット状、キューブ状、ペースト状、液状等のいかなる形態であってもよい。本発明の飼料は、例えば、ドライペレットやモイストペレット等のペレットとして成形されてよい。形態に基づき、増粘剤などの賦形剤や添加剤をさらに加えることもできる。
　本発明は、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドとを含む飼料組成物を含む。本発明の一態様において、本発明の飼料組成物は、魚類又は甲殻類に用いることができる。また、本発明の別の態様において、本発明の飼料組成物は、魚類又は甲殻類の生育低下を防止又は低減するため、又は魚類又は甲殻類の成長を刺激又は促進するために用いることができる。また、本発明の別の態様において、本発明の飼料組成物は、魚類又は甲殻類の皮、殻又は肉の色揚げに用いることができる。
　本発明の飼料又は飼料組成物は、魚類又は甲殻類に給餌することにより魚類又は甲殻類を養殖することができる。「本発明の飼料（又は飼料組成物）を給餌する」とは、予め調製された本発明の飼料を給餌する場合に限られず、上述した本発明の飼料に含まれる成分を組み合わせて給餌する場合を含む。例えば、配合前の成分をそれぞれ準備し、給餌前又は給餌時に混合して、あるいはそれぞれ別個に、給餌してもよい。
　本発明の飼料は、１日１回又は複数回に分けて給餌されてよい。また、本発明の飼料は、数日に１回給餌されてもよい。各給餌時の本発明の飼料の給餌量は、一定であってもよく、変動してもよい。本発明の飼料の給餌量は特に限定されない。当業者は、魚類又は甲殻類の種類や魚体、飼育方法に基づき適宜調整することができる。各給餌時の本発明の飼料の組成は、一定であってもよく、変動してもよい。各給餌時の本発明の飼料に含まれる植物性タンパク質、ヌクレオチド又はアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも１種及びカロテノイドの含有量は一定であっても良く、変動してもよい。
　本発明の飼料の給餌方法は、魚の種類や成長度合、水温などに依拠して適宜選択することができる。例えば、手まき給餌でもよいし、給餌船給餌や自動給餌などの機械給餌でもよい。また、当業者は、魚のエネルギー要求量などに基づき給餌量や給餌タイミングを調整できる。
　本発明の飼料を給餌する期間は、対象の魚類又は甲殻類の種類等の諸条件に応じて適宜選択することができる。本発明の飼料は、養殖の全期間において継続して給餌されてもよく、一部の期間にのみ給餌されてもよい。また、本発明の飼料は、任意の期間で給餌の継続と中断を繰り返してもよい。本発明の飼料を給餌する期間は、限定されないが、例えば１～１２月間又は１～４月間であってよく、約１月又は約２月であってもよい。「一部の期間」とは、例えば、養殖の全期間の１０％以上、２０％以上、３０％以上、５０％以上、７０％以上、又は９０％以上の期間であってよい。
　魚類又は甲殻類の養殖は、本発明の飼料を給餌すること以外は、魚類又は甲殻類を飼育する通常の方法により行うことができる。養殖は、例えば、海上の生簀や陸上の水槽で行うことができる。また、養殖には、稚魚生産のみを行う増養殖及び親魚までの生産を行う養殖が含まれる。
　本発明の飼料を用いて養殖された魚類又は甲類は、海上の生簀や陸上の水槽などの養殖環境から回収され得る。回収は、従来公知の方法で実施することができる。
２．本発明の飼料の用途及び方法
　本発明の一態様において、本発明の飼料を給餌して魚類又は甲殻類を養殖又は飼育することにより、飼料中の動物性タンパク質又は魚粉の量が低減されている場合の、魚類又は甲殻類の飼料効率を上昇させることができる。本発明の飼料を給餌することにより、動物性タンパク質又は魚粉の量が低減され、かつ、カロテノイドが添加されていない飼料を給餌する場合と比較して、魚類又は甲殻類の飼料効率を上昇させることができる。したがって、本発明の方法の一態様は、本発明の飼料を魚類又は甲殻類に給餌することを含む、飼料中の動物性タンパク質又は魚粉の量が低減された飼料の飼料効率を上昇させる方法である。また、本発明の方法の一態様は、動物性タンパク質又は魚粉の量が低減された飼料の飼料効率を上昇させるための、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドの使用；又は本発明の飼料若しくは本発明の飼料組成物の使用である。また、本発明の方法の一態様は、動物性タンパク質又は魚粉の量が低減された飼料の飼料効率を上昇させる方法に使用するための、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイド；又は本発明の飼料若しくは本発明の飼料組成物である。
　本発明の別の態様において、本発明の飼料を給餌して魚類又は甲殻類を養殖又は飼育することにより、植物性タンパク質が飼料に添加されている場合の、魚類又は甲殻類の飼料効率を上昇させることができる。本発明の飼料を給餌することにより、植物性タンパク質を本発明の飼料と同程度含むが、カロテノイドが添加されていない飼料を給餌する場合と比較して、魚類又は甲殻類の飼料効率を上昇させることができる。したがって、本発明の方法の一態様は、本発明の飼料を魚類又は甲殻類に給餌することを含む、植物性タンパク質を含む飼料の飼料効率を上昇させる方法である。また、本発明の方法の一態様は、植物性タンパク質を含む飼料の飼料効率を上昇させるための、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドの使用；又は本発明の飼料若しくは本発明の飼料組成物の使用である。また、本発明の方法の一態様は、植物性タンパク質を含む飼料の飼料効率を上昇させる方法に使用するための、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイド；又は本発明の飼料若しくは本発明の飼料組成物である。
　本発明の別の態様において、本発明の飼料を給餌して魚類又は甲殻類を養殖又は飼育することにより、魚類又は甲殻類の飼料効率を上昇させることができる。本発明の飼料を給餌することにより、通常の飼料を給餌する場合と比較して、魚類又は甲殻類の飼料効率を上昇させることができる。したがって、本発明の方法の別の態様は、本発明の飼料を魚類又は甲殻類に給餌することを含む、飼料の飼料効率を上昇させる方法である。また、本発明の方法の一態様は、飼料の飼料効率を上昇させるための、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドの使用；又は本発明の飼料若しくは本発明の飼料組成物の使用である。また、本発明の方法の一態様は、飼料の飼料効率を上昇させる方法に使用するための、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイド；又は本発明の飼料若しくは本発明の飼料組成物である。
　飼料効率の上昇は、例えば、魚類又は甲殻類が所定の大きさ又は体重に対照よりも早く到達すること又は所定の大きさ又は体重に対照よりも少ない飼料量で到達することを含む。飼料効率は、ＦＣＲ（feed conversion ratio）によって評価することができる。ＦＣＲは増肉係数とも称され、１kgの魚肉を得るために必要な飼料量(kg)を意味する。ＦＣＲの値が小さいほど少ない飼料量で効率的に魚の体重が増加することを示す。
　ＦＣＲは、１尾あたりの給餌量を体重の増重量で除することで算出される。ＦＣＲは増肉係数とも称され、ＦＣＲの値が小さいほど少ない飼料量で効率的に魚の体重が増加することを示す。
　また、本発明の飼料は、飼料効率を上昇させ得ることができることから、飼料中の動物性タンパク質又は魚粉の量の低減による生育低下又は植物性タンパク質の添加による魚類又は甲殻類の生育低下を防止又は低減することができる。したがって、本発明の飼料の一態様は、魚類又は甲殻類の生育低下の防止剤又は低減剤であり得る。また、本発明は、本発明の飼料を魚類又は甲殻類に給餌することを含む、魚類又は甲殻類の生育低下を防止又は低減する方法を含む。魚類又は甲殻類の生育低下を防止又は低減する方法は、魚類又は甲殻類を飼育又は養殖することをさらに含んでもよい。また、本発明の方法の一態様は、魚類又は甲殻類の生育低下を防止又は低減するための、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドの使用；又は本発明の飼料若しくは本発明の飼料組成物の使用である。また、本発明の方法の一態様は、魚類又は甲殻類の生育低下を防止又は低減する方法に使用するための、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイド；又は本発明の飼料若しくは本発明の飼料組成物である。
　本発明の別の態様において、本発明の飼料は、飼料効率を上昇させ得ることができることから、本発明の飼料を給餌して魚類又は甲殻類を養殖又は飼育することにより、魚類又は甲殻類の成長を促進又は刺激、あるいは魚類又は甲殻類の体重を増加させることができる。したがって、一態様において、本発明の飼料は、魚類又は甲殻類の成長を促進又は刺激するために用いることができる。本発明の飼料の一態様は、魚類又は甲殻類の成長の促進剤又は成長刺激剤であり得る。また、本発明は、本発明の飼料を魚類又は甲殻類に給餌することを含む、魚類又は甲殻類の成長促進方法又は成長刺激方法を含む。別の態様において、本発明は、本発明の飼料を魚類又は甲殻類に給餌することを含む魚類又は甲殻類の体重を増加させる方法である。また、本発明の方法の一態様は、魚類又は甲殻類の成長を促進するための又は成長を刺激するための、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドの使用；又は本発明の飼料若しくは本発明の飼料組成物の使用である。また、本発明の方法の一態様は、魚類又は甲殻類の成長を促進するため方法又は成長を刺激する方法に使用するための、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイド；又は本発明の飼料若しくは本発明の飼料組成物である。
　本発明の方法の別の態様は、魚類又は甲殻類の体重を増加させるための、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドの使用；又は本発明の飼料若しくは本発明の飼料組成物の使用である。また、本発明の方法の一態様は、魚類又は甲殻類の体重を増加させる方法に使用するための、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイド；又は本発明の飼料若しくは本発明の飼料組成物である。魚類又は甲殻類の成長は、体重若しくは重量又は体長を測定することにより確認することができる。対照と比較して体重若しくは重量又は体長の増加速度が速い場合に成長が促進又は刺激されたと評価することができる。
　本発明の飼料はカロテノイドを含有するため、魚粉の含有量が少ない又は含有しない飼料であっても、魚類又は甲殻類の皮、殻又肉を色揚げすることが期待される。したがって、本発明の別の態様において、本発明の飼料を給餌して魚類又は甲殻類を養殖又は飼育することにより、魚類又は甲殻類の皮、殻又は肉を色揚げすることができる。本発明の飼料の一態様は、魚類又は甲殻類の色揚げ剤であり得る。また、本発明は、本発明の飼料を魚類又は甲殻類に給餌することを含む、魚類又は甲殻類の皮、殻又は肉の色揚げ方法を含む。また、本発明の方法の一態様は、魚類又は甲殻類の皮、殻又は肉を色揚げするための、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドの使用；又は本発明の飼料の使用若しくは本発明の飼料組成物の使用である。また、本発明の方法の一態様は、魚類又は甲殻類の皮、殻又は肉を色揚げする方法に使用するための、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイド；又は本発明の飼料若しくは本発明の飼料組成物である。
　魚類又は甲殻類の皮、殻又肉の色は、皮、殻又は肉に含まれるカロテノイド色素の量を測定することにより、評価することができる。あるいは、皮、殻又は肉を色素計で測定することにより評価することもできる。
　当業者は、公知の方法に基づき皮、殻又は肉に含まれるカロテノイドの量を測定することができる。例えば、魚類又は甲殻類から取得した皮、殻又は肉からカロテノイドを抽出し、抽出液を適宜処理した後、吸光度の測定や液体クロマトグラフィー分析により、皮、殻又は肉に含まれるカロテノイドの量を算出することができる。
　本明細書において、数値範囲について「～」を用いた記載では、特に断りがない限り、下限値及び上限値を含むものとする。例えば、「１～４０」という記載では、下限値である「１」、上限値である「４０」のいずれも含むものとする。すなわち、「１～４０」は、「１以上４０以下」と同じ意味である。
　本明細書において、「％」及び「ｐｐｍ」の値は、重量比を意味する。本明細書において、「１ｍｇ／ｋｇ」は「１ｐｐｍ」と同じ意味である。本明細書において、含有量は、特に断りがない限り、質量又は重量比で表される。
１．飼料組成及び方法
１－１．試験飼料
　以下の試験において使用した飼料の組成を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
  
　表１中、「パラコッカス菌粉末」は、Panaferd-AX（ENEOSテクノマテリアル株式会社、アスタキサンチン含量２％。なお、その他のカロテノイドとして、アドニルビンを０．９％、アドニキサンチンを０．３％含む。）を用い、「合成アスタキサンチン」は、アスタキサンチンを８％含有するカロフィル　ピンク（DSM社）を用いた。
　また、（１）区で添加した魚粉は、チリ産のものを用いた。（２）～（６）区で添加した濃縮大豆タンパク質は、ADM社のSoy Protein Concentratesを用いた。
　表１の組成で各成分を混合した原料をエクストルーダー処理（圧力処理～乾燥）し、ペレット化したものを、試験飼料として魚に給餌した。
　粉状のものをペレット状に成型することにより、魚への給餌が容易になることが期待される。また、エクストルーダー処理によって加圧、加熱されるため、魚が飼料を消化しやすくなることが期待される。
　試験飼料は以下の条件で処理し、エクストルーダーペレットを製造した。
　　　　原料供給量　70～90ｇ/min
　　　　添加水量　　26～30ｇ/min
　　　　圧力　　　　約0.5Mpa
　　　　原料温度　　90～96℃
　　　　乾燥　　　　90℃ 2～4時間
１－２．試験方法
　試験区は以下の６つであった：
（１）魚粉区（魚粉含有飼料の給餌区）；
（２）無添加区（魚粉無し、アスタキサンチン添加無しの飼料の給餌区）；
（３）天然アスタキサンチン50ppm添加区（魚粉無し、アスタキサンチンを50ppmの濃度で含有するようにPanaferd-AX（パラコッカス菌粉末）を添加した飼料の給餌区。なお、当該試験区はアドニルビンを23ppm、アドニキサンチンを7.5ppm含む。）；
（４）合成アスタキサンチン50ppm添加区（魚粉無し、アスタキサンチンを50ppmの濃度で含有するように合成アスタキサンチンを添加した飼料の給餌区）；
（５）天然アスタキサンチン100ppm添加区（魚粉無し、アスタキサンチンを100ppmの濃度で含有するようにPanaferd-AX（パラコッカス菌粉末）を添加した飼料の給餌区。なお、当該試験区はアドニルビンを45ppm、アドニキサンチンを15ppm含む。）；及び
（６）合成アスタキサンチン100ppm添加区（魚粉無し、アスタキサンチンを100ppmの濃度で含有するように合成アスタキサンチンを添加した飼料の給餌区）。
　供試魚として、マダイ稚魚（60g程度）を用いた。
　給餌期間は、9月～１１月の８週間実施した。
　飼育条件：
　高知大学海洋研究施設の陸上飼育施設で飼育した。飼育海水は生海水（ろ過や殺菌なし）を使用した。２００Ｌ水槽１８基（6試験区×３反復）に1水槽あたりマダイ稚魚を5尾ずつ収容し、週５日給餌し、８週間飼育した。給餌量を毎日記録するとともに試験開始時及び給餌終了時に体重を測定した。
　試験終了時には、全５尾の体重を測定した。
　カロテノイドの含有量の測定方法：
　マダイを3枚におろし、右身及び左身から皮をはぎ、得られた皮をサンプルとした。皮からカロテノイドをアセトンで抽出し、抽出液にジエチルエーテル：ヘキサン（１：１（ｖ／ｖ））混合溶媒と水を加え分配し、溶媒層を回収した。溶媒を蒸発させた後、残渣をヘキサンで再溶解し、470 nmの吸光度を測定した。アスタキサンチンの吸光係数：
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000002
  
を使用し、ヘキサン中のアスタキサンチン量を総カロテノイドと仮定して計算した。また、ヘキサン再溶解液をHPLC分析に供した。条件は以下のとおりとした。
　カラム：Silica gel（製品名：COSMOSIL５SL-II 4.6 IDX250 nm NACALAI TESQUE INC）
　溶媒：アセトン：ヘキサン（１５：８５ｖ／ｖ）
　流速：1.0mL/minインジェクトボリューム：１００μL
　検出：450nm
　システム　Pomp LC-10AD VP Shimadzu, Detector L-7420　HITACHI 
　保持時間約２～３分のピークを（１）黄色系カロテノイドエステル（ツナキサンチン、ルテイン、ゼアキサンチンのトータル）のピークとし、保持時間約４分のピークを（２）アスタキサンチンジエステルのピーク、保持時間５～６分のピークを（３）アスタキサンチンモノエステルのピーク、保持時間１３分のピークを（４）アスタキサンチン（フリー体）のピークとみなした。
　（１）のピークの面積比を黄色系色素のカロテノイド比率とし、（２）～（４）のピークの合計の面積比を赤系色素のカロテノイド比率とした。
　ＴＢＡＲＳ（チオバルビツール酸反応物質）測定方法：
　各区の飼料１ｇを採取し、リン酸緩衝液（pH7.4）5mLを加え、テフロンホモジナイザーでホモジナイズし、そのホモジネートをTBA反応に供した。ホモジネート液0.5mLに７％ sodium dodecylsulphate水溶液0.2mLを添加、混合した。0.1N HCl 2mLを添加し、混合し、均一に溶かした。その後、10％リンタングステン酸0.3mLを添加した。0.5％チオバルビツール酸（TBA）水溶液1mLを加え、混合し、95℃で45分加熱した。冷却後、ｎ－ブタノール5mLを加え、TBA色素をブタノール層に抽出した。遠心後、ブタノール層の吸光度（532nm)を測定した。n＝3で分析を行った。
２．結果１：成長の促進効果
　魚の体重と給餌量を表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
  
　表２は、（１）区～（６）区の水槽１８基それぞれにおける値と区毎の平均値（avg）を示す。表２において、「Initial」及び「Final」は、それぞれ試験開始時及び試験終了時の魚の体重を示し、「gain」は増重量を示す。「Feed/fish」は、1尾当たりの給餌量を示す。「ＤＦＲ」（daily feed ratio）（％）は、１尾当たりの給餌量（feed/fish）を給餌日数で割り、さらに魚体重で割って１００をかけて算出した。ここで、魚体重は初期体重（試験開始時）と最終体重（試験終了時）の平均とした。また、「ＦＣＲ」（feed conversion ratio）は、１尾あたりの給餌量（feed/fish）を増重量（gain）で割った値である。ＦＣＲは増肉係数とも称され、ＦＣＲの値が小さいほど少ない飼料量で効率的に魚の体重が増加することを示す。
　（１）区（魚粉区）に比べて（２）区（大豆タンパク飼料）はＦＣＲが高かった（（１）区１．３２に対し（２）区１．４１）。魚粉に替えて大豆タンパク質（及びアミノ酸、ヌクレオチド等）を添加した飼料では、魚粉添加飼料と同等の効率で魚肉が得られないことが分かった。
　（３）～（６）区(アスタキサンチン添加区)のＦＣＲは、（２）区(大豆タンパク飼料区)と比べて小さかった。したがって、魚粉の替わりに大豆タンパク質（及びアミノ酸、ヌクレオチド等）を用いる場合、アスタキサンチン等のカロテノイドをさらに添加することにより、少ない飼料量で効率的に魚肉が得られることが示された。
　また、（３）～（６）区(アスタキサンチン添加区)のＦＣＲは、（１）区（魚粉区）のＦＣＲ同程度又はそれよりも小さかった。特に、天然アスタキサンチン添加区である（５）区（パラコッカス菌体によりアスタキサンチンを100ppm含有）は、もっとも小さいＦＣＲ（１．２５）であった。したがって、本発明により、通常の魚粉含有飼料で給餌する場合よりも少ない飼料量で効率的に魚肉が得られることが示された。
　以上より、ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドとを含む本発明の飼料は飼料効率が良く、魚類又は甲殻類の成長を刺激（体重増加）又は促進するために用いることができることが示された。
３．結果２：皮の色揚げ効果
　表３は、皮中のカロテノイド含有量を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
  
　天然アスタキサンチン添加区（（３）区及び（５）区）及び合成アスタキサンチン添加区（（４）区及び（６）区）において、皮にアスタキサンチン等の赤系色素が高濃度で蓄積していた。なお、天然アスタキサンチンとしてパラコッカス菌乾燥物を使用しており、パラコッカス菌乾燥物には、アスタキサンチンだけなく、アドニルビン、アドニキサンチン等の赤系色素も含まれる。また、ツナキサンチンは、マダイの体内でアスタキサンチンから代謝される黄色のカロテノイドである。
　したがって、魚粉を含まない飼料であっても、本発明の飼料により、効率的に魚の皮の色揚げが可能であることが分かった。
４．結果３：脂質酸化
　飼料中の脂質の過酸化度を、ＴＢＡ（チオバルビツール酸）を用いた吸光光度法であるＴＢＡ法で測定した。ＴＢＡＲＳは脂質過酸化度の指標であり、値が低いほど酸化されていないことを示す。結果を表４に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
  
　（１）区（魚粉区）又は（２）区(大豆タンパク飼料区)の飼料に比べて、アスタキサンチンを含有する（３）～（６）区の飼料は脂質酸化の程度が小さいことが示された。したがって、本発明の飼料は酸化しにくい飼料であることが示された。
　また、（３）～（６）区(アスタキサンチン添加区)について、天然アスタキサンチン添加区である（３）区（50ppm添加区）及び（５）区（100ppm添加区）は、合成アスタキサンチンである添加区である（４）区（50ppm添加区）及び（６）区（100ppm添加区）よりもそれぞれＴＢＡＲＳ値が小さく、脂質の酸化程度が小さいことが示された。
　魚油は不飽和脂肪酸を多く含むために酸化しやすい特性を有し、酸化した魚油を飼料中に含む飼料は成長率を低下させ得ることが知られている。本発明の飼料は、酸化しにくい飼料であることから、成長促進が可能な飼料になり得ることが示された。
　本発明によれば、魚粉の含有量を低減した魚類又は甲殻類用の飼料が提供される。本発明により提供される飼料は、従来の飼料よりも魚粉の含有量を減らすことが可能であるため、持続可能な養殖のための飼料として使用し得る。
　本発明の別の態様において、魚類又は甲殻類の成長を刺激するための魚類又は甲殻類用の飼料及び魚類又は甲殻類の体重を増加させる方法が提供される。
　また、本発明の別の態様において、魚類又は甲殻類の皮、殻又は肉を色揚げする方法が提供される。 

Claims (17)

  1. 　ヌクレオチド及びアミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも1種と、植物性タンパク質と、カロテノイドとを含む、魚類又は甲殻類用飼料。
  2. 　前記ヌクレオチドが、呈味性ヌクレオチドである、請求項１に記載の飼料。
  3. 　前記ヌクレオチドが、イノシン酸、グアニル酸及びキサンチル酸からなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１又は２に記載の飼料。
  4. 　前記アミノ酸が、アラニン、プロリン、グルタミン酸、タウリン、ロイシン、ヒスチジン、リシン、スレオニン、バリン、イソロイシン、フェニルアラニン、アルギニン、プロリン、メチオニン及びシステインからなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１～３のいずれか一項に記載の飼料。
  5. 　前記植物性タンパク質が大豆由来のタンパク質である、請求項１～４のいずれか一項に記載の飼料。
  6. 　前記カロテノイドがアスタキサンチンを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の飼料。
  7. 　前記カロテノイドが、飼料に対して１～１５０ｐｐｍのアスタキサンチンを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の飼料。
  8. 　前記カロテノイドが、パラコッカス属に属する細菌に由来する、請求項１～７のいずれか一項に記載の飼料。
  9. 　前記飼料における動物性タンパク質源の含有量が１０％（ｗ／ｗ）以下である、請求項１～８のいずれか一項に記載の飼料。
  10. 　魚粉を含有しない、請求項１～９のいずれか一項に記載の飼料。
  11. 　前記魚類が、スズキ目に属する魚類である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の飼料。
  12. 　前記スズキ目に属する魚類が、マグロ、ハタ、マダイ、ブリ又はカンパチである、請求項１１に記載の飼料。
  13. 　魚類又は甲殻類の成長を刺激するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の飼料。
  14. 　請求項１～１２のいずれか一項に記載の飼料を用いて、魚類又は甲殻類の体重を増加させる方法。
  15. 　請求項１～１２のいずれか一項に記載の飼料を用いて、魚類又は甲殻類の皮、殻又は肉を色揚げする方法。
  16. 　魚類又は甲殻類の体重を増加させるための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の飼料の使用。
  17. 　魚類又は甲殻類の皮、殻又は肉を色揚げするための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の飼料の使用。 
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