WO2023093728A1 - Brm选择性降解剂化合物及其应用 - Google Patents

Brm选择性降解剂化合物及其应用 Download PDF

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WO2023093728A1
WO2023093728A1 PCT/CN2022/133547 CN2022133547W WO2023093728A1 WO 2023093728 A1 WO2023093728 A1 WO 2023093728A1 CN 2022133547 W CN2022133547 W CN 2022133547W WO 2023093728 A1 WO2023093728 A1 WO 2023093728A1
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古鹏
曾凡勋
于智勇
陈平
薛黎婷
唐任宏
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江苏先声药业有限公司
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    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • Patent application No. 202111395500.6 submitted to the State Intellectual Property Office of China on November 23, 2021;
  • Patent Application No. 202210192251.9 filed with the State Intellectual Property Office of China on February 28, 2022;
  • Patent application No. 202210784815.8 submitted to the State Intellectual Property Office of China on July 5, 2022.
  • the disclosure relates to a compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as a BRM selective degradation agent, a method for its preparation, a pharmaceutical composition containing the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the prevention or Use in the treatment of a disease or condition mediated by BRM.
  • SWI/SNF is an important nucleosome remodeling complex, which can hydrolyze ATP to generate energy and be used to break the interaction between DNA and histone in nucleosomes, thereby regulating gene expression and repairing gene damage.
  • Epigenetic abnormalities have been proved to be an important reason for the occurrence and development of many chronic diseases (such as cancer), and mutations of SWI/SNF complex components have been found in about 20% of cancers.
  • BRM SMARCA2
  • BRG1 SMARCA4
  • BRG1 deletion occurs in a variety of tumors, including lung cancer, gastric cancer, pancreatic cancer and other tumors with high malignancy and limited treatment options.
  • BRG1 mutations account for 5-10% of non-small cell lung cancer (NSCLC)
  • NSCLC non-small cell lung cancer
  • the most prevalent driver genes in NSCLC such as EGFR, ALK, MET, ROS1, and RET are mutually exclusive.
  • BRM Tumor cells with BRG1 mutation or loss of function are highly dependent on BRM, so they are more sensitive to BRM inhibitors and produce a synergistic lethal effect, while normal cells are well tolerated by BRM inhibitors, so BRM is a potential specific tumor target.
  • Protein degradation targeting chimeras is an emerging technology with good prospects, which is expected to turn many "undruggable” (undruggable) potential targets into “druggable”.
  • Traditional small-molecule drugs are often ineffective against proteins without enzyme function, which account for about 80% of human proteins, because these drugs usually need to bind to enzymes or receptors to function.
  • PROTACs consist of three parts: the ligand (anchor) that recruits E3 ubiquitin ligase, the ligand molecule (warhead) that binds to the target protein (protein of interest, POI), and the linker (linker) that connects the two parts.
  • the BRM and BRG1 proteins have two main functional regions, namely the ATPase region and the Bromodomain, and the amino acid residues in the corresponding functional regions of the two proteins have more than 90% homology. It is difficult for small molecule inhibitors to achieve selectivity to BRM and BRG1, so they will also have a strong ability to kill normal cells. There is an urgent clinical need for BRM protein-degrading PROTAC molecules with excellent stability and activity and good selectivity for BRG1.
  • the DIM is a ligand compound capable of binding E3 ubiquitin ligase
  • the Linker is a linking group that covalently binds at least one TL and at least one DIM;
  • the TL is a group as shown below:
  • X 3 is selected from CR 3 or N;
  • Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , X 1 are selected from one of the following five situations:
  • Y 1 is CR
  • Y 2 is selected from CR 2a or N
  • Y 3 is selected from CR 3a or N
  • Y 4 is selected from CR 4a or N
  • X 1 is selected from CR 1 or N;
  • Y 1 is selected from CR 1a or N
  • Y 2 is CR
  • Y 3 is selected from CR 3a or N
  • Y 4 is selected from CR 4a or N
  • X 1 is selected from CR 1 or N;
  • Y 1 is selected from CR 1a or N
  • Y 2 is selected from CR 2a or N
  • Y 3 is selected from CR 3a or N
  • Y 4 is CR
  • X 1 is selected from CR 1 or N;
  • Y 1 is selected from CR 1a or N
  • Y 2 is selected from CR 2a or N
  • Y 3 is selected from CR 3a or N
  • Y 4 is selected from CR 4a or N
  • X 1 is CR;
  • R is wherein n is selected from 0, 1, 2, 3 or 4;
  • R a is selected from halogen, OH, CN, NO 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, C 3 -C 6 ring Alkyl, NH 2 , NH(C 1 -C 6 alkyl) or N(C 1 -C 6 alkyl) 2 , wherein said C 1 -C 6 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 1 -C 6 alkoxy is optionally substituted by R b ;
  • the R 1a , R 2a , R 3a , R 4a , and R 1 are independently selected from H, halogen, NH 2 , NO 2 , CN, COOH, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy , C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, 4-8 membered heterocyclyl, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 - C 6 alkyl) 2 , NH(C 3 -C 6 cycloalkyl), NH-4-8 membered heterocyclyl, NH-5-10 membered heteroaryl, NH-(C 6 -C 10 aryl) , NHC(O)-4-8 membered heterocyclyl, NHC(O)(C 1 -C 6 alkyl), NHC(O)-O(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 -C 6 alky
  • the R 3 and R 4 are independently selected from H, OH, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, C 1 -C 6 alkane Oxygen, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, 4-8 membered heterocyclyl, C 3 -C 6 cycloalkyloxy, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 -C 6 alkyl) 2 , NH(C 3 -C 6 cycloalkyl), NHC(O)(C 1 -C 6 alkyl), NHC(O) (C 3 -C 6 cycloalkyl), NHC(O)-(C 6 -C 10 aryl), NHC(O)-5-10 membered heteroaryl, NHC(O)-4-8 membered heterocycle group, C(O)
  • R 1a and R 3 and their respective connected atoms together form a C 5 -C 10 cycloalkenyl or a 5-14 membered heterocyclic group, and the C 5 -C 10 cycloalkenyl or 5-14 membered heterocyclic group optionally substituted by R 7 ;
  • R 4a and R 4 and their respective connected atoms jointly form a C 5 -C 10 cycloalkenyl or a 5-14 membered heterocyclic group, and the C 5 -C 10 cycloalkenyl or 5-14 membered heterocyclic group optionally substituted by R 8 ;
  • R 2a and R 3a and their respective connected atoms jointly form a C 5 -C 10 cycloalkenyl group, a C 6 -C 10 aryl group, a 5-10 membered heteroaryl group or a 5-14 membered heterocyclic group, the C 5 -C 10 cycloalkenyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 5-14 membered heterocyclic group are optionally substituted by R 9 ;
  • R 1 and R 4 and their respective connected atoms jointly form a C 5 -C 10 cycloalkenyl or a 5-14 membered heterocyclic group, and the C 5 -C 10 cycloalkenyl or 5-14 membered heterocyclic group optionally substituted by R 10 ;
  • R 1a , R 2a , R 3a , R 4a , R 1 , R 3 , R 4 is not H; and when R 4 is H, R 3 is not optionally substituted or optionally substituted
  • composition comprising the compound described herein or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and pharmaceutically acceptable excipients.
  • a compound described herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition described herein for use in the prevention or treatment of a BRM-mediated disease is provided.
  • a method of treating a disease mediated by BRM comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of a compound described herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition described herein.
  • Figure 1 is the tumor growth curve of mice receiving test compounds in the A549 subcutaneous tumor model.
  • the present disclosure relates to a compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • the DIM is a ligand compound capable of binding E3 ubiquitin ligase
  • the Linker is a linking group that covalently binds at least one TL and at least one DIM;
  • the TL is a group as shown below:
  • X 3 is selected from CR 3 or N;
  • Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , X 1 are selected from one of the following five situations:
  • Y 1 is CR
  • Y 2 is selected from CR 2a or N
  • Y 3 is selected from CR 3a or N
  • Y 4 is selected from CR 4a or N
  • X 1 is selected from CR 1 or N;
  • Y 1 is selected from CR 1a or N
  • Y 2 is CR
  • Y 3 is selected from CR 3a or N
  • Y 4 is selected from CR 4a or N
  • X 1 is selected from CR 1 or N;
  • Y 1 is selected from CR 1a or N
  • Y 2 is selected from CR 2a or N
  • Y 3 is CR
  • Y 4 is selected from CR 4a or N
  • X 1 is selected from CR 1 or N;
  • Y 1 is selected from CR 1a or N
  • Y 2 is selected from CR 2a or N
  • Y 3 is selected from CR 3a or N
  • Y 4 is CR
  • X 1 is selected from CR 1 or N;
  • Y 1 is selected from CR 1a or N
  • Y 2 is selected from CR 2a or N
  • Y 3 is selected from CR 3a or N
  • Y 4 is selected from CR 4a or N
  • X 1 is CR;
  • R is wherein n is selected from 0, 1, 2, 3 or 4;
  • R a is selected from halogen, OH, CN, NO 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, C 3 -C 6 ring Alkyl, NH 2 , NH(C 1 -C 6 alkyl) or N(C 1 -C 6 alkyl) 2 , wherein said C 1 -C 6 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 1 -C 6 alkoxy is optionally substituted by R b ;
  • the R 1a , R 2a , R 3a , R 4a , and R 1 are independently selected from H, halogen, NH 2 , NO 2 , CN, COOH, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy , C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, 4-8 membered heterocyclyl, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 - C 6 alkyl) 2 , NH(C 3 -C 6 cycloalkyl), NH-4-8 membered heterocyclyl, NH-5-10 membered heteroaryl, NH-(C 6 -C 10 aryl) , NHC(O)-4-8 membered heterocyclyl, NHC(O)(C 1 -C 6 alkyl), NHC(O)-O(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 -C 6 alky
  • the R 3 and R 4 are independently selected from H, OH, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, C 1 -C 6 alkane Oxygen, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, 4-8 membered heterocyclyl, C 3 -C 6 cycloalkyloxy, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 -C 6 alkyl) 2 , NH(C 3 -C 6 cycloalkyl), NHC(O)(C 1 -C 6 alkyl), NHC(O) (C 3 -C 6 cycloalkyl), NHC(O)-(C 6 -C 10 aryl), NHC(O)-5-10 membered heteroaryl, NHC(O)-4-8 membered heterocycle group, C(O)
  • R 1a and R 3 and their respective connected atoms together form a C 5 -C 10 cycloalkenyl or a 5-14 membered heterocyclic group, and the C 5 -C 10 cycloalkenyl or 5-14 membered heterocyclic group optionally substituted by R 7 ;
  • R 4a and R 4 and their respective connected atoms jointly form a C 5 -C 10 cycloalkenyl or a 5-14 membered heterocyclic group, and the C 5 -C 10 cycloalkenyl or 5-14 membered heterocyclic group optionally substituted by R 8 ;
  • R 2a and R 3a and their respective connected atoms jointly form a C 5 -C 10 cycloalkenyl group, a C 6 -C 10 aryl group, a 5-10 membered heteroaryl group or a 5-14 membered heterocyclic group, the C 5 -C 10 cycloalkenyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 5-14 membered heterocyclic group are optionally substituted by R 9 ;
  • R 1 and R 4 and their respective connected atoms jointly form a C 5 -C 10 cycloalkenyl or a 5-14 membered heterocyclic group, and the C 5 -C 10 cycloalkenyl or 5-14 membered heterocyclic group optionally substituted by R 10 ;
  • R 1a , R 2a , R 3a , R 4a , R 1 , R 3 , R 4 is not H; and when R 4 is H, R 3 is not optionally substituted or optionally substituted
  • is selected from NC C, wherein X 4 is C.
  • X 3 is CR 3 .
  • X 3 is N.
  • R 1a , R 2a , R 3a , R 4a , R 1 are independently selected from H, halogen, NH 2 , CN, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, 4-8 membered heterocyclyl, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 -C 6 alkyl) 2 , NH(C 3 -C 6 cycloalkyl), NH-4-8 membered heterocyclyl, NH-5-10 membered heteroaryl, NH-(C 6 -C 10 aryl), NHC(O)(C 3 -C 6 cycloalkyl), NHC(O)-4-8 membered heterocyclyl, NHC(O)-(C 6 -C 10 aryl), NHC(O)-5- 10-membered heteroaryl, C
  • R 1a is selected from H, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 - C 6 alkyl) 2 , C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group, wherein the C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy radical, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group are optionally substituted by R 5 .
  • R 1a is selected from H, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, NH(C 1 -C 6 alkyl) or N(C 1 - C 6 alkyl) 2 , wherein said C 1 -C 6 alkyl is optionally substituted by R 5 .
  • R 2a is selected from H, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 - C 6 alkyl) 2 , NHC(O)(C 3 -C 6 cycloalkyl), NHC(O)-4-8 membered heterocyclyl, NHC(O)-(C 6 -C 10 aryl), NHC(O)-5-10 membered heteroaryl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group, wherein the C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group are optionally substituted by R 5 .
  • R 2a is selected from H, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 - C 6 alkyl) 2 , C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group, wherein the C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy radical, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group are optionally substituted by R 5 .
  • R 3a is selected from H, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 - C 6 alkyl) 2 , C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, 4-8 membered heterocyclyl, NH(C 3 -C 6 cycloalkyl ), NH-4-8 membered heterocyclyl, NH-5-10 membered heteroaryl, NH-(C 6 -C 10 aryl), NHC(O)(C 3 -C 6 cycloalkyl), NHC (O)-4-8 membered heterocyclic group, NHC(O)-(C 6 -C 10 aryl) or NHC(O)-5-10 membered heteroaryl group, wherein the C 1 -C 6 alkane radical, C 1 -C 6 alk
  • R 3a is selected from H, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 - C 6 alkyl) 2 , C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, 4-8 membered heterocyclyl, NH(C 3 -C 6 cycloalkyl ), NH-4-8 membered heterocyclic group, NH-5-10 membered heteroaryl group or NH-(C 6 -C 10 aryl), wherein the C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group are optionally substituted by R 5 .
  • R 3a is selected from H, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclyl, said C 3 - C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group are optionally substituted by R 5 .
  • R 3a is selected from H or a 4-8 membered heterocyclyl optionally substituted by R 5 .
  • R is selected from H or piperazinyl optionally substituted with R.
  • R 4a is selected from H, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 - C 6 alkyl) 2 , C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, 4-8 membered heterocyclyl, NHC(O)(C 3 -C 6 Cycloalkyl), NHC(O)-4-8 membered heterocyclyl, NHC(O)-(C 6 -C 10 aryl), NHC(O)-5-10 membered heteroaryl, C(O) NH(C 3 -C 6 cycloalkyl), C(O)NH-(C 6 -C 10 aryl), C(O)NH-5-10 membered heteroaryl or C(O)NH-4- 8-membered heterocyclic group, wherein the C 1 -C 6 alkyl, C 1
  • R 4a is selected from H, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, NHC(O)(C 3 -C 6 cycloalkyl), NHC (O)-4-8 membered heterocyclyl, NHC(O)-(C 6 -C 10 aryl), NHC(O)-5-10 membered heteroaryl, C(O)NH(C 3 -C 6 cycloalkyl), C(O)NH-(C 6 -C 10 aryl), C(O)NH-5-10 membered heteroaryl or C(O)NH-4-8 membered heterocyclic group,
  • the C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, 4-8 membered Heterocyclyl is optionally substituted by R 5 .
  • R 4a is selected from H, NH 2 , C 1 -C 6 alkoxy or NHC(O)(C 3 -C 6 cycloalkyl), wherein said C 1 -C 6 alkoxy or C 3 -C 6 cycloalkyl is optionally substituted by R 5 .
  • R 1 is selected from H, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 - C 6 alkyl) 2 , NHC(O)(C 3 -C 6 cycloalkyl), NHC(O)-4-8 membered heterocyclyl, NHC(O)-(C 6 -C 10 aryl), NHC(O)-5-10 membered heteroaryl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group, wherein the C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group are optionally substituted by R 5 .
  • R 1 is selected from H, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 - C 6 alkyl) 2 , C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group, wherein the C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy Base, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group are optionally substituted by R 5 .
  • R is selected from phenyl.
  • R la is selected from H.
  • R 2a is selected from H or NH 2 .
  • R 2a is selected from NH 2 .
  • R 3a is selected from H or
  • R 4a is selected from H, NH 2 , or OCH3 .
  • R1 is selected from H or NH2 .
  • R 3 is selected from H, OH, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, C 1 -C 6 alkoxy radical, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkyloxy, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 -C 6 alkyl) 2 , NH(C 3 - C 6 cycloalkyl), C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, 4-8 membered heterocyclyl, NHC(O)(C 1 -C 6 alkyl), NHC(O)( C 3 -C 6 cycloalkyl), NHC(O)-(C 6 -C 10 aryl), NHC(O)-5-10 membered heteroaryl, C(O)NH(C 1 -C 6 alkane radical), C(O)
  • R 3 is selected from H, OH, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, C 1 -C 6 alkoxy group, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 -C 6 alkyl) 2 , NH(C 3 -C 6 cycloalkyl), NHC(O) (C 3 -C 6 cycloalkyl ), C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, 4-8 membered heterocyclyl, NHC(O)(C 1 -C 6 alkyl), NHC(O)-(C 6 -C 10 aryl), NHC(O)-5-10 membered heteroaryl, C(O)NH(C 1 -C 6 alkyl), C(O)NH-(C 6 -C 10 aryl) or C (O) NH-5-10 membered heteroaryl, C(
  • R 3 is selected from H, OH, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, C 1 -C 6 alkoxy group, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 -C 6 alkyl) 2 , C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, 4-8 membered heterocyclyl, NHC (O)(C 1 -C 6 alkyl), NHC(O)-(C 6 -C 10 aryl), NHC(O)-5-10 membered heteroaryl, C(O)NH(C 1 - C 6 alkyl), C(O)NH-(C 6 -C 10 aryl) or C(O)NH-5-10 membered heteroaryl, wherein the C 1 -C 6 alkyl, C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, wherein the
  • R 3 is selected from H, NH 2 , NH(C 1 -C 3 alkyl), NH(C 3 -C 6 cycloalkyl), NHC(O) (C 3 -C 6 cycloalkane group), C 2 -C 3 alkenyl, C 2 -C 3 alkynyl or C(O)NH(C 1 -C 3 alkyl), wherein the C 2 -C 3 alkenyl, C 2 -C 3 alkynyl, C 1 -C 3 alkyl or C 3 -C 6 cycloalkyl is optionally substituted by R 6 .
  • R 3 is selected from H, NH 2 , NH(C 1 -C 3 alkyl), C 2 -C 3 alkenyl, C 2 -C 3 alkynyl, or C(O)NH(C 1 -C 3 alkyl), wherein said C 2 -C 3 alkenyl, C 2 -C 3 alkynyl or C 1 -C 3 alkyl is optionally substituted by R 6 .
  • R 3 is selected from H, NH 2 , C 2 -C 3 alkenyl, C 2 -C 3 alkynyl or C(O)NH(C 1 -C 3 alkyl), wherein said C 2 -C 3 alkenyl, C 2 -C 3 alkynyl or C 1 -C 3 alkyl is optionally substituted by R 6 .
  • R 4 is selected from H, OH, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 -C 6 alkyl) 2 , C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, 4-8 membered heterocyclyl, NHC(O)(C 1 - C 6 alkyl), NHC(O)-(C 6 -C 10 aryl), NHC(O)-5-10 membered heteroaryl, C(O)NH(C 1 -C 6 alkyl), C (O)NH-(C 6 -C 10 aryl) or C(O)NH-5-10 membered heteroaryl, wherein the C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 6 -C 10 aryl,
  • R 4 is selected from H, OH, halogen, NH 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl Base, 4-8 membered heterocyclic group, C(O)NH(C 1 -C 6 alkyl), C(O)NH-(C 6 -C 10 aryl) or C(O)NH-5-10 Member heteroaryl, wherein the C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, C 6 -C 10 aryl, 5-10 member heteroaryl or 4-8 member heterocyclic group are any Elected to be replaced by R 6 .
  • R 4 is selected from H, C 1 -C 3 alkyl, 4-8 membered heterocyclyl, C(O)NH(C 1 -C 3 alkyl) or C(O)NH-( C 6 -C 10 aryl), wherein the C 1 -C 3 alkyl, 4-8 membered heterocyclic group or C 6 -C 10 aryl is optionally substituted by R 6 .
  • R is selected from H, 4-8 membered heterocyclyl, C(O)NH(C 1 -C 3 alkyl) or C(O)NH-(C 6 -C 10 aryl) , wherein said C 1 -C 3 alkyl group, 4-8 membered heterocyclic group or C 6 -C 10 aryl group is optionally substituted by R 6 .
  • R 4 is selected from H, CH 3 , C(O)NH-phenyl, C(O)NH(C 1 -C 3 alkyl), azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidine Pyridyl or 8-azabicyclo[3.2.1]octyl, said methyl, phenyl, C 1 -C 3 alkyl, azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl or 8-nitrogen Heterobicyclo[3.2.1]octyl is optionally substituted by R.
  • R 4 is selected from H, CH 3 , C(O)NH-phenyl, C(O)NH(C 1 -C 3 alkyl), azetidinyl, or piperidinyl, so The methyl, phenyl, C 1 -C 3 alkyl, azetidinyl or piperidinyl groups are optionally substituted by R 6 .
  • R is selected from H, C(O)NH-phenyl, C(O)NH(C 1 -C 3 alkyl), azetidinyl or piperidinyl, the phenyl , C 1 -C 3 alkyl, azetidinyl or piperidinyl are optionally substituted by R 6 .
  • R 6 is selected from deuterium, halogen, OH, NH 2 , NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 -C 6 alkyl) 2 , CN, C 1 -C 6 alkane C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group, the C 1 -C 6 alkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl A group or a 4-8 membered heterocyclyl group is optionally substituted by R 5a .
  • R 6 is selected from halogen, OH, NH 2 , NH(C 1 -C 6 alkyl), N(C 1 -C 6 alkyl) 2 , CN, C 1 -C 6 alkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group, said C 1 -C 6 alkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclyl is optionally substituted by R 5a .
  • R 6 is selected from deuterium, C 1 -C 6 alkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclyl, said C 1 -C 6 alkyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group are optionally substituted by R 5a .
  • R 6 is selected from C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl or 4-8 membered heterocyclic group, the C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl A group or a 4-8 membered heterocyclyl group is optionally substituted by R 5a .
  • R 6 is selected from C 6 -C 10 aryl or 5-10 membered heteroaryl optionally substituted by R 5a .
  • R 6 is selected from deuterium, OH, halogen, C 1 -C 6 alkyl, pyridyl, pyrimidinyl, piperidinyl, azetidinyl or phenyl, and the C 1 -C 6 Alkyl, pyridyl, pyrimidinyl, piperidinyl, azetidinyl or phenyl is optionally substituted by R 5a .
  • R is selected from deuterium, halogen, C 1 -C 6 alkyl, pyridyl, pyrimidinyl, piperidinyl, azetidinyl or phenyl, and the C 1 -C 6 alkyl , pyridyl, pyrimidinyl, piperidinyl, azetidinyl or phenyl is optionally substituted by R 5a .
  • R6 is selected from pyridinyl, phenyl or piperidinyl optionally substituted with R5a .
  • R6 is selected from pyridyl or phenyl optionally substituted with R5a .
  • R is selected from deuterium, OH, fluorine, methyl, ethyl, n-propyl, n-butyl, n-pentyl, n-hexyl, pyrimidin-2-yl, pyridin-4-yl, pyridine -2-yl, piperidinyl, azetidinyl or phenyl.
  • R is selected from deuterium, fluorine, methyl, ethyl, n-propyl, n-butyl, n-pentyl, n-hexyl, pyrimidin-2-yl, pyridin-4-yl, pyridin-2 -yl, piperidinyl, azetidinyl or phenyl.
  • R is selected from pyridin-4-yl, phenyl, or piperidinyl.
  • R is selected from pyridin-4-yl or phenyl.
  • R6 is selected from phenyl.
  • R is selected from piperidinyl.
  • R is selected from pyridin-2-yl or pyrimidin-2-yl.
  • R 3 is selected from H, NH 2 , NHCH 3 , NHCD 3 , NHCH 2 CH 3 , NHCH 2 CF 3 , NHCH(CH 3 ) 2 , NHCH 2 CH 2 CH 3 ,
  • R 3 is selected from H, NH 2 , NHCH 3 , NHCD 3 , NHCH 2 CH 3 , NHCH 2 CF 3 , NHCH(CH 3 ) 2 , NHCH 2 CH 2 CH 3 ,
  • R 3 is selected from H, NH 2 , NHCH 3 ,
  • R 3 is selected from H, NH 2 ,
  • R 3 is selected from H, NH 2 , NHCH 3 , NHCD 3 , NHCH 2 CH 3 , NHCH 2 CF 3 , NHCH(CH 3 ) 2 , NHCH 2 CH 2 CH 3 ,
  • R 3 is selected from H, NH 2 or NHCH 3 .
  • R is selected from H
  • R is selected from H
  • R is selected from H
  • R is selected from
  • R is selected from
  • the membered heterocyclyl is optionally substituted by R 7 .
  • R 1a and R 3 and the atoms to which they are attached together form a 5-14 membered heterocyclyl optionally substituted with R 7 .
  • R 1a and R 3 and the atoms to which they are attached together form a 6-10 membered heterocyclyl optionally substituted with R 7 .
  • R 1a and R 3 and the atoms to which they are attached together form a 6-8 membered heterocyclyl optionally substituted with R 7 .
  • the C 1 -C 6 alkyl group, C 6 -C 10 aryl group, 5-10 membered heteroaryl group or 4-8 membered heterocyclic group is optionally further substituted by R 5a .
  • R 1a and R 3 together with the atoms to which they are attached form
  • R 4a and R 4 and their respective connected atoms together form a C 5 -C 10 cycloalkenyl or a 5-14 membered heterocyclic group, and the C 5 -C 10 cycloalkenyl or 5-14 The membered heterocyclyl is optionally substituted by R.
  • R 4a and R 4 and the atoms to which they are attached together form a 5-14 membered heterocyclyl optionally substituted by R 8 .
  • R 4a and R 4 and the atoms to which they are attached together form a 6-14 membered heterocyclyl optionally substituted with R 8 .
  • R 4a and R 4 and the atoms to which they are attached together form a 6-11 membered heterocyclyl optionally substituted by R 8 .
  • R 4a and R 4 and the atoms to which they are attached together form
  • R 4a and R 4 and the atoms to which they are attached together form And wherein X 4 is N.
  • R 2a and R 3a and the atoms to which they are attached together form a C 5 -C 10 cycloalkenyl, a C 6 -C 10 aryl, a 5-10 membered heteroaryl, or a 5-14 membered heterocycle
  • the C 5 -C 10 cycloalkenyl group, C 6 -C 10 aryl group, 5-10 membered heteroaryl group or 5-14 membered heterocyclic group is optionally substituted by R 9 .
  • R 2a and R 3a and their respective connected atoms together form a C 5 -C 10 cycloalkenyl or a 5-14 membered heterocyclic group, and the C 5 -C 10 cycloalkenyl or 5-14 The membered heterocyclyl is optionally substituted by R 9 .
  • R 2a and R 3a and the atoms to which they are attached together form a 5-10 membered heterocyclyl optionally substituted by R 9 .
  • R 2a and R 3a and the atoms to which they are attached together form a 5-8 membered heterocyclyl optionally substituted by R 9 .
  • the C 1 -C 6 alkyl group, C 6 -C 10 aryl group, 5-10 membered heteroaryl group or 4-8 membered heterocyclic group is optionally further substituted by R 5a .
  • R 2a and R 3a together with the atoms to which they are attached form
  • R 1 and R 4 and their respective connected atoms together form a C 5 -C 10 cycloalkenyl or a 5-14 membered heterocyclic group, and the C 5 -C 10 cycloalkenyl or 5-14 The membered heterocyclyl is optionally substituted by R 10 .
  • R and R together with the atoms to which they are attached form a 5-10 membered heterocyclyl optionally substituted with R.
  • R and R together with the atoms to which they are attached form a 5-8 membered heterocyclyl optionally substituted with R.
  • R and R together with the atoms to which they are attached form piperazinyl or piperidinyl optionally substituted with R.
  • R and R together with the atoms to which they are attached form
  • R and R together with the atoms to which they are attached form
  • R a is selected from halogen, OH, NH 2 , CN, C 1 -C 6 alkyl or C 1 -C 6 alkoxy, wherein said C 1 -C 6 alkyl or C 1 -C 6 alkoxy is optionally substituted by R b .
  • R a is selected from halogen, OH, NH 2 , or C 1 -C 6 alkyl optionally substituted with R b .
  • R a is selected from halogen, OH, NH 2 or halo C 1 -C 6 alkyl.
  • Ra is selected from F or Cl.
  • Ra is selected from F.
  • n is selected from 0, 1 or 2.
  • n is selected from 0 or 1.
  • n is selected from zero.
  • R is selected from
  • R is selected from
  • R is selected from
  • R is selected from
  • R is selected from
  • Y 1 is CR
  • Y 2 is selected from CR 2a or N
  • Y 3 is selected from CR 3a or N
  • Y 4 is selected from CR 4a or N
  • X 1 is selected from CR 1 or N.
  • Y 1 is CR
  • Y 2 is N
  • Y 3 is N
  • Y 4 is CR 4a
  • X 1 is CR 1 .
  • Y is CR and R is Y 2 is N, Y 3 is N, Y 4 is CR 4a , R 4a is -NH 2 or X1 is CH.
  • Y is CR and R is Y 2 is N, Y 3 is N, Y 4 is CR 4a , and R 4a and R 4 and the atoms to which they are attached together form an optionally substituted by R 8 X1 is CH.
  • Y 1 is selected from CR 1a or N
  • Y 2 is CR
  • Y 3 is selected from CR 3a or N
  • Y 4 is selected from CR 4a or N
  • X 1 is selected from CR 1 or N.
  • Y 1 is selected from CR 1a or N
  • Y 2 is CR
  • Y 3 is CH or N
  • Y 4 is CR 4a or N
  • X 1 is selected from CR 1 .
  • Y is selected from CH or N
  • Y is CR
  • R is Y 3 is selected from CR 3a or N
  • Y 4 is selected from CH, C-OCH 3 or N
  • X 1 is selected from CH or C-NH 2 .
  • Y is selected from CH or N, Y is CR, and R is Y 3 is CH, Y 4 is CH, X 1 is CR 1 , and R 1 and R 4 and the atoms to which they are attached together form a group optionally substituted by R 10
  • Y 1 is selected from CR 1a or N
  • Y 2 is selected from CR 2a or N
  • Y 3 is CR
  • Y 4 is selected from CR 4a or N
  • X 1 is selected from CR 1 or N.
  • Y 1 is N
  • Y 2 is N
  • Y 3 is CR
  • Y 4 is CR 4a
  • X 1 is selected from CR 1 or N.
  • Y 1 is N
  • Y 2 is N
  • Y 3 is CR
  • R is Y 4 is CH
  • X 1 is selected from CH or N.
  • Y 1 is N
  • Y 2 is N
  • Y 3 is CR
  • R is Y 4 is CH
  • X 1 is selected from CH or N.
  • Y 1 is N
  • Y 2 is N
  • Y 3 is CR
  • R is Y 4 is CH
  • X 1 is selected from N.
  • Y 1 is N
  • Y 2 is N
  • Y 3 is CR
  • R is Y 4 is CH
  • X 1 is selected from N.
  • Y 1 is selected from CR 1a or N
  • Y 2 is selected from CR 2a or N
  • Y 3 is selected from CR 3a or N
  • Y 4 is CR
  • X 1 is selected from CR 1 or N.
  • Y 1 is CR 1a
  • Y 2 is N
  • Y 3 is N
  • Y 4 is CR
  • X 1 is CR 1 .
  • Y 1 is CR 1a
  • Y 2 is N
  • Y 3 is N
  • Y 4 is CR
  • R is X 1 is CH
  • R 1a and R 3 and the atoms to which they are attached together form the optionally substituted by R 7
  • Y 1 is selected from CR 1a or N
  • Y 2 is selected from CR 2a or N
  • Y 3 is selected from CR 3a or N
  • Y 4 is selected from CR 4a or N
  • X 1 is CR
  • Y 1 is N
  • Y 2 is CR 2a
  • Y 3 is selected from CR 3a
  • Y 4 is CR 4a
  • X 1 is CR.
  • Y 1 is N
  • Y 2 is C-NH 2
  • Y 3 is selected from CH or CR 3a
  • R 3a is Y 4 is CH
  • X 1 is CR
  • R is
  • Y 1 is N
  • Y 2 is CR 2a
  • Y 3 is selected from CR 3a
  • Y 4 is CH
  • R 2a and R 3a and the atoms to which they are attached together form an optionally substituted
  • R 9 X1 is CR
  • R is
  • the TL is connected to the Linker through R 4 , that is, the TL is
  • the TL is connected to the Linker through R 3 , that is, the TL is
  • the TL is connected to the Linker through R 3a , that is, the TL is
  • the TL is connected to the Linker through R 4a , that is, the TL is
  • the TL is connected to the Linker through a ring atom of the ring jointly formed by R 4a and R 4 and their respective connected atoms, or connected to the Linker through a substituent R 8 on the ring.
  • the TL is connected to the Linker through R8 .
  • the TL is connected to the Linker through a ring atom of the ring jointly formed by R 1 and R 4 and their respective connected atoms, or connected to the Linker through a substituent R 10 on the ring.
  • the TL is connected to the Linker through R 10 .
  • the TL is connected to the Linker through a ring atom of the ring formed by R 1a and R 3 and their respective connected atoms, or connected to the Linker through a substituent R 7 on the ring.
  • the TL is connected to the Linker through a ring atom of the ring formed by R 2a and R 3a and their respective connected atoms, or connected to the Linker through a substituent R 9 on the ring.
  • the TL is connected to the Linker through a ring atom of the ring formed by R 2a and R 3a and their respective connected atoms.
  • the TL is further selected from the groups shown below:
  • R a , Y 2 , Y 3 , Y 4 , X 1 , X 3 , R 4 and n are as defined above.
  • the TL is further selected from the groups shown below:
  • R a , Y 1 , Y 3 , Y 4 , X 1 , X 3 , R 4 and n are as defined above.
  • the TL is further selected from the groups shown below:
  • R a , Y 1 , Y 2 , Y 4 , X 1 , X 3 , R 4 and n are as defined above.
  • the TL is further selected from the groups shown below:
  • R a , Y 1 , Y 2 , Y 3 , X 1 , X 3 , R 4 and n are as defined above.
  • the TL is further selected from the groups shown below:
  • R a , Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , X 3 , R 4 and n are as defined above.
  • the TL is selected from the following structures:
  • the TL is selected from the following structures
  • the TL is selected from
  • the Linker is a linker that covalently binds a TL and a DIM.
  • the Linker is selected from -LA -, -LB -, -R 1L -, -R 2L -, -Q 1 -, -Q 2 -,
  • -LA -, -LB - are independently selected from the bond, -O-, -S-, -NR 3' -, -CR 4' R 5' -, -C(O)-, -S (O)-, -S(O) 2 -, -C(S)-, -C(O)O- or -C(O)NR 6'- ;
  • R 3' is selected from H, alkyl, heteroalkyl, haloalkyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl;
  • R 6' is selected from H, alkyl, heteroalkyl, haloalkyl, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl or heteroaryl.
  • the Linker is selected from the following structures:
  • the Linker is selected from: bond, -O-, -C(O)-, -CH 2 -,
  • the Linker is selected from:
  • the Linker is selected from
  • the DIM is selected from a VHL ligand, ie, a binding moiety that binds a Von Hippel-Lindau-type E3 ubiquitin ligase; or a CRBN ligand, ie, a binding moiety that binds a cereblon-type E3 ubiquitin ligase.
  • the DIM is selected from CRBN ligands.
  • the DIM is selected from the structures shown in formula (DIM-1) or (DIM-2):
  • Y is a bond, or Y is selected from Y A , O, NH, NRE , C(O)O, C(O)NR E ', NRE 'C(O), Y A -NH, Y A -NR E , Y A -C(O), Y A -C(O)O, Y A -OC(O), Y A -C(O)NR E 'or Y A -NR E 'C(O), where Said Y A is selected from C 1 -C 6 alkylene, C 2 -C 6 alkenylene or C 2 -C 6 alkynylene;
  • X is selected from C(O) or C( RA ) 2 ;
  • Each R A is independently selected from H or C 1 -C 3 alkyl, said C 1 -C 3 alkyl is optionally substituted by C 6 -C 10 aryl or 5-10 membered heteroaryl;
  • Each RA ' is independently selected from C 1 -C 3 alkyl
  • Each R B is independently selected from H or C 1 -C 3 alkyl, or two R B and the atoms connected together form C(O), C 3 -C 6 cycloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkene Base or 4-6 membered heterocyclic group;
  • R C is selected from H, halogen or C 1 -C 3 alkyl
  • Each R D is independently selected from halogen, NO 2 , NH 2 , OH, COOH, C 1 -C 6 alkyl or C 1 -C 6 alkoxy;
  • Each RE is independently selected from C 1 -C 6 alkyl, C 2 -C 6 alkenyl, C 3 -C 8 cycloalkyl, 3-8 membered heterocycloalkyl, C(O)-C 1 - C 6 alkyl, C(O)-C 2 -C 6 alkenyl, C(O)-C 3 -C 8 cycloalkyl or C(O)-3-8 membered heterocycloalkyl, said R E Optionally substituted by a group selected from: halogen, N(R a ) 2 , NHC(O)R a , NHC(O)OR a , OR b , C 3 -C 8 cycloalkyl, 3-8 membered Heterocycloalkyl, C 6 -C 10 aryl or 5-10 membered heteroaryl, wherein said C 3 -C 8 cycloalkyl, 3-8 membered heterocycloalkyl, C 6 -C 10 aryl or
  • R E ' is selected from H, C 1 -C 6 alkyl, C 2 -C 6 alkenyl, C 3 -C 8 cycloalkyl or 3-8 membered heterocycloalkyl, the C 1 -C 6 alkyl , C 2 -C 6 alkenyl, C 3 -C 8 cycloalkyl or 3-8 membered heterocycloalkyl are optionally substituted by a group selected from: halogen, N(R a ) 2 , NHC(O) R a , NHC(O)OR a , OR b , C 3 -C 8 cycloalkyl, 3-8 membered heterocycloalkyl, C 6 -C 10 aryl or 5-10 membered heteroaryl, wherein C 3 -C 8 cycloalkyl, 3-8 membered heterocycloalkyl, C 6 -C 10 aryl or 5-10 membered heteroaryl are optionally further substituted by a group selected from
  • Each R a is independently selected from H or C 1 -C 6 alkyl
  • R b is selected from H or p-toluenesulfonyl
  • t is selected from 0 or 1;
  • n 0, 1, 2 or 3;
  • p is selected from 0, 1 or 2.
  • the DIM is further selected from the structures shown in formula (DIM-3) or (DIM-4):
  • the rings A, Y, RA , RA ', RB , RC , RD , m and p are as defined above.
  • the DIM is further selected from the structures shown in formula (DIM-5), (DIM-6), (DIM-7) or (DIM-8):
  • Y, X, X A -X B , R A , R A ', R B , R C , R D , m and p are as defined above.
  • the DIM is further selected from the structure shown in formula (DIM-9) or (DIM-10):
  • Y, X, X A -X B , R A , R A ', R B , R C , R D , m and p are as defined above.
  • the DIM is selected from the structure shown in formula (DIM-11):
  • X C is selected from a bond, -CH 2 -, -CHCF 3 -, -SO 2 -, -S(O)-, -P(O)R'-, -P(O)OR'-, -P(O )NR' 2 -, -C(O)-, -C(S)- or
  • X D is selected from C, N or Si
  • X E is selected from a bond, -CR' 2 -, -NR'-, -O-, -S- or -SiR' 2 -;
  • R F is absent, or R F is selected from H, deuterium, halogen, CN, -OR'-, -SR'-, -S(O)R'-, -S(O) 2R'- , -NR' 2 -, -P(O)(OR') 2 , -P(O)(NR' 2 )OR'-, -P(O)(NR' 2 ) 2 , -Si(OH) 2 R', - Si(OH)R' 2 , -SiR' 3 or C 1 -C 4 alkyl;
  • Each R G is independently selected from H, deuterium, R H , halogen, CN, -NO 2 , -OR', -SR', -NR' 2 , -SiR' 3 , -S(O) 2 R', -S(O) 2 NR' 2 , -S(O)R', -C(O)R', -C(O)OR', -C(O)NR' 2 , -C(O)N( R')OR', -C(R') 2 N(R')C(O)R', -C(R') 2 N(R')C(O)NR' 2 , -OC(O) R', -OC(O)NR' 2 , -OP(O)R' 2 , -OP(O)(OR') 2 , -OP(O)(OR') 2 , -OP(O)(OR')NR' 2 , -OP(O)(OR'
  • Each R H is independently selected from C 1 -C 6 alkyl, phenyl, 4-7 membered heterocyclyl or 5-6 membered heteroaryl;
  • L 1 is selected from a bond, a C 1 -C 3 alkylene group, a C 2 -C 3 alkenylene group or a C 2 -C 3 alkynylene group, wherein the C 1 -C 3 alkylene group, C 2 -C 3 Any 1 or 2 methylene groups in alkenylene or C 2 -C 3 alkynylene are optionally replaced by the following groups: -O-, -C(O)-, -C(S)-, - C(R') 2 -, -CH(R')-, -C(F) 2 -, -N(R')-, -S- or -S(O) 2 -;
  • Each R' is independently selected from H, C 1 -C 6 alkyl, phenyl, 4-7 membered heterocyclic group or 5-6 membered heteroaryl group, or two R's and the atoms connected to them together form a 4- 7-membered heterocyclic group or 5-6 membered heteroaryl group;
  • q is selected from 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 or 16.
  • the DIM is selected from the structure shown in formula (DIM-11'):
  • X C , RF , R G , q, ring E, ring F and ring G are as defined in formula (DIM-11).
  • the DIM is selected from the structure shown in formula (DIM-12):
  • the DIM is selected from the structure shown in (DIM-12'):
  • X C , RF , R G , k, ring E and ring H are as defined in the formula (DIM-12).
  • the DIM is selected from VHL ligands.
  • the DIM is selected from structures represented by formula (DIM-13), (DIM-14), (DIM-15), (DIM-16) or (DIM-17):
  • R J is selected from optionally substituted C 1 -C 6 alkyl, optionally substituted -(CH 2 ) j OH, optionally substituted -(CH 2 ) j SH, optionally substituted -(CH 2 ) j -O-(C 1 -C 6 )alkyl, optionally substituted -(CH 2 ) j -CH 2 OCH 2 -(C 0 -C 6 )alkyl, optionally substituted -(CH 2 ) j COOH , optionally substituted -(CH 2 ) j C(O)-(C 1 -C 6 alkyl), optionally substituted -(CH 2 ) j NR c R d , optionally substituted -(CH 2 ) j NHC(O)-R c , optionally substituted -(CH 2 ) j C(O)-NR c R d , optionally substituted -(CH 2 ) j OC(O)-NR
  • R c and R d are independently selected from H or C 1 -C 6 alkyl, and the C 1 -C 6 alkyl is optionally substituted by OH or halogen;
  • R s is selected from C 1 -C 6 alkyl, optionally substituted aryl, optionally substituted heteroaryl, optionally substituted heterocyclyl or -(CH 2 ) g NR c R d ;
  • R M is selected from optionally substituted C 1 -C 6 alkyl, optionally substituted -(CH 2 ) j -C(O) u (NR c ) v (SO 2 ) w -C 1 -C 6 alkyl , optionally substituted -(CH 2 ) j -C(O) u (NR c ) v (SO 2 ) w -NR 1N R 2N , optionally substituted -(CH 2 ) j -C(O) u ( NR c ) v (SO 2 ) w -NR c C(O)R 1N , optionally substituted -(CH 2 ) j -C(O) u (NR c ) v (SO 2 ) w -C(O) NR c R d , optionally substituted -(CH 2 ) j -C(O) u (NR c ) v (SO 2 ) w -
  • R 1N and R 2N are each independently H, C 1 -C 6 alkyl optionally substituted by OH and halogen, or optionally substituted -(CH 2 ) j -aryl, -(CH 2 ) j - Heteroaryl or -(CH 2 ) j -heterocyclyl;
  • V is O, S or NR c ;
  • R e is independently selected from H or C 1 -C 3 alkyl
  • g is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6;
  • j is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
  • n' is independently 0 or 1;
  • n' is independently 0 or 1;
  • u is independently 0 or 1;
  • v is independently 0 or 1;
  • w is independently 0 or 1.
  • R and J in the formula (DIM-14), (DIM-15), (DIM-16) or (DIM-17) are both OH.
  • the DIM is selected from the following structures:
  • the DIM is selected from the following structures:
  • the DIM is selected from
  • the DIM is selected from
  • the DIM is selected from
  • the compound of formula (I) of the present disclosure is selected from the following compounds:
  • the present disclosure provides a pharmaceutical composition, which comprises the compound represented by any one of the above general formulas in the present disclosure or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and pharmaceutically acceptable excipients.
  • the present disclosure provides a method for treating a disease mediated by BRM in a mammal, comprising administering a therapeutically effective amount of a compound represented by any of the above general formulas in the present disclosure or its A pharmaceutically acceptable salt, or a pharmaceutical composition thereof.
  • the present disclosure provides a method for treating tumors in mammals, comprising administering a therapeutically effective amount of a compound represented by any of the above general formulas or a pharmaceutically acceptable salt thereof, to a mammal in need of the treatment, preferably a human. or its pharmaceutical composition.
  • the present disclosure provides the use of the compound represented by any of the above general formulas or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof in the preparation of a medicament for preventing or treating a BRM-mediated disease.
  • the present disclosure provides the use of the compound represented by any of the above general formulas or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof in the preparation of a drug for preventing or treating tumors.
  • the present disclosure provides the use of the compound represented by any of the above general formulas or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof in preventing or treating BRM-mediated diseases.
  • the present disclosure provides the use of the compound represented by any of the above general formulas or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof in preventing or treating tumors.
  • the present disclosure provides any compound of the above-mentioned general formula or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof for preventing or treating BRM-mediated diseases.
  • the present disclosure provides any compound of the above general formula or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof for preventing or treating tumors.
  • the BRM-mediated disease is selected from tumors.
  • the tumor is selected from cancer.
  • the carbon atom marked with "*" in this paper represents a chiral carbon atom, which means that its absolute configuration is one of (S)-configuration or (R)-configuration.
  • capable of binding means capable of measurably binding to a target (eg, the ligand of the E3 ubiquitin ligase is capable of forming a covalent bond with a cysteine of the E3 ubiquitin ligase, etc.).
  • a target eg, the ligand of the E3 ubiquitin ligase is capable of forming a covalent bond with a cysteine of the E3 ubiquitin ligase, etc.
  • ubiquitin ligase refers to a family of proteins that facilitate the transfer of ubiquitin to a specific substrate protein to target the substrate protein for degradation. E3 ubiquitin ligases alone or in complex with E2 ubiquitin ligases are responsible for the transfer of ubiquitin to target proteins. Typically, ubiquitin ligases are involved in polyubiquitination such that a second ubiquitin is linked to a first ubiquitin; a third ubiquitin is linked to a second ubiquitin, and so on. Polyubiquitination marks proteins for degradation by the proteasome.
  • ubiquitination events that are limited to monoubiquitination, in which ubiquitin ligases add only a single ubiquitin onto a substrate molecule.
  • Monoubiquitinated proteins are not targeted to the proteasome for degradation, but can alter their cellular location or function, for example, by binding other proteins with domains capable of binding ubiquitin.
  • E3 ubiquitin ligases can target different lysines on ubiquitin to make chains.
  • target protein refers to proteins and peptides that have any biological function or activity, including structural, regulatory, hormonal, enzymatic, genetic, immune, contractile, storage, transport, and signal transduction.
  • a target protein represents a protein or polypeptide that binds a compound of the disclosure and can be degraded.
  • tautomer refers to isomers of functional groups resulting from the rapid movement of an atom in a molecule between two positions.
  • Compounds of the present disclosure may exhibit tautomerism.
  • Tautomeric compounds can exist in two or more interconvertible species. Tautomers generally exist in equilibrium and attempts to isolate a single tautomer usually result in a mixture whose physicochemical properties are consistent with the mixture of compounds. The position of equilibrium depends on the chemical properties within the molecule. For example, in many aliphatic aldehydes and ketones such as acetaldehyde, the keto form predominates; in phenols, the enol form predominates.
  • the present disclosure encompasses all tautomeric forms of the compounds.
  • stereoisomer refers to isomers resulting from differences in the arrangement of atoms in a molecule in space, including cis-trans isomers, enantiomers and diastereomers.
  • the compounds of the present disclosure may have asymmetric atoms such as carbon atoms, sulfur atoms, nitrogen atoms, phosphorus atoms or asymmetric double bonds, and thus the compounds of the present disclosure may exist in specific geometric or stereoisomeric forms.
  • Specific geometric or stereoisomeric forms may be cis and trans isomers, E and Z geometric isomers, (-)- and (+)-enantiomers, (R)- and (S )-enantiomers, diastereomers, (D)-isomers, (L)-isomers, and racemic or other mixtures thereof, such as enantiomers or diastereomers Enriched mixtures, all of the above isomers and mixtures thereof are within the definition of compounds of the present disclosure.
  • asymmetric carbon atoms there may be additional asymmetric carbon atoms, asymmetric sulfur atoms, asymmetric nitrogen atoms or asymmetric phosphorus atoms in substituents such as alkyl groups, and these isomers and their mixtures involved in all substituents are also included in Compounds of the disclosure are within the definition.
  • the asymmetric atom-containing compounds of the present disclosure can be isolated in optically pure form or in racemic form, the optically active form can be resolved from a racemic mixture, or by using a chiral starting material or a chiral reagent synthesis.
  • substituted means that any one or more hydrogen atoms on a specific atom are replaced by a substituent, which may include deuterium and hydrogen variants, as long as the valence of the specific atom is normal and the substituted compound is stable .
  • ethyl is “optionally” substituted with halogen , meaning that the ethyl group can be unsubstituted ( CH2CH3 ), monosubstituted ( CH2CH2F , CH2CH2Cl , etc.), polysubstituted ( CHFCH2F , CH2CHF2 , CHFCH2Cl , CH2CHCl2 , etc. ) or fully substituted ( CF2CF3 , CF2CCl3 , CCl2CCl3 , etc.) . It will be appreciated by those skilled in the art that for any group containing one or more substituents, no sterically impossible and/or synthetically impossible substitution or substitution pattern is introduced.
  • substituted means that a specified atom or group can be replaced by another atom or group as specified.
  • CH 2 in -CH 2 CH 2 CH 2 - can be replaced by O, S or NH to obtain -CH 2 OCH 2 -, -OCH 2 CH 2 -, -CH 2 SCH 2 -, -SCH 2 CH 2 -, -CH 2 NHCH 2 - or -NHCH 2 CH 2 - and the like.
  • any variable eg R a , R b
  • its definition is independent at each occurrence. For example, if a group is substituted by 2 R b , each R b has independent options; for the group N(C 1 -C 6 alkyl) 2 , when C 1 -C 6 alkyl is replaced by R When b is substituted, the two C 1 -C 6 alkyl groups have R b options independent of each other.
  • linking group When the number of a linking group is 0, such as -(CH 2 ) 0 -, it means that the linking group is a bond.
  • linking group mentioned herein does not indicate its linking direction
  • its linking direction is arbitrary.
  • L 1 in is selected from “C 1 -C 3 alkylene-O”
  • L 1 can connect ring Q and R 1 in the direction from left to right to form “ring QC 1 -C 3 alkylene Group -OR 1 "
  • ring Q and R 1 can also be connected from right to left to form “ring QOC 1 -C 3 alkylene-R 1 ".
  • R 1a , R 2a , R 3a , R 4a , R 1 , R 3 , and R 4 is not H
  • Y 1 is CR
  • Y 2 is selected from CR 2a
  • Y 3 is selected from N
  • Y 4 is selected from CR 4a
  • X 1 is selected from N
  • R 2a , R 4a , R 3 , R 4 have at least One group is not H.
  • the substituent When a bond of a substituent cross-links two atoms in a ring, the substituent may be bonded to any atom on the ring.
  • the structural unit Indicates that R a can remove OH and A substitution occurs at any position other than the attachment site.
  • C m -C n herein refers to having mn or an integer number of carbon atoms in the range of m to n.
  • C 1 -C 10 means that the group can have 1 carbon atom, 2 carbon atoms, 3 carbon atoms, 4 carbon atoms, 5 carbon atoms, 6 carbon atoms, 7 carbon atoms, 8 carbon atoms, 9 carbon atoms or 10 carbon atoms.
  • m-membered to n-membered means that the number of ring atoms is from m to n.
  • a 5-14-membered ring includes a 5-membered ring, a 6-membered ring, a 7-membered ring, an 8-membered ring, a 9-membered ring, a 10-membered ring, and a 11-membered ring.
  • alkyl refers to a hydrocarbon group of the general formula CnH2n +1 , which is a straight or branched chain group containing 1 to 20 carbon atoms, preferably containing 1 to 12 (eg 1, 2, 3 , 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 and 12) carbon atoms, more preferably an alkyl group containing 1 to 6 carbon atoms.
  • C 1 -C 10 alkyl is understood to mean a linear or branched saturated monovalent hydrocarbon radical having 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 carbon atoms.
  • alkyl group examples include, but are not limited to, methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, isopropyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, isopentyl, 2- Methylbutyl, 1-methylbutyl, 1-ethylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, neopentyl, 1,1-dimethylpropyl, 4-methylpentyl, 3-methylpentyl, 2-methylpentyl, 1-methylpentyl, 2-ethylbutyl, 1-ethylbutyl, 3,3-dimethylbutyl, 2,2-di Methylbutyl, 1,1-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbutyl or 1,2-dimethylbutyl, etc.; the term "C 1 -C 6 alkyl" can be understood as an
  • C 1 -C 4 alkyl is understood to mean a linear or branched saturated monovalent hydrocarbon radical having 1 to 4 carbon atoms.
  • C 1 -C 3 alkyl is understood to mean a linear or branched saturated monovalent hydrocarbon radical having 1 to 3 carbon atoms.
  • the "C 1 -C 10 alkyl” may include “C 1 -C 6 alkyl", “C 1 -C 4 alkyl” or “C 1 -C 3 alkyl", etc., the “C 1 -C 6 alkyl” may further include “C 1 -C 4 alkyl” or “C 1 -C 3 alkyl”, and the “C 1 -C 4 alkyl” may further include “C 1 -C 3 alkyl"base”.
  • heteroalkyl means that one or more -CH 2 - in the alkyl group is replaced by a heteroatom selected from NH, O and S, or one or more -CH- is replaced by N; wherein the alkyl base as defined above.
  • haloalkyl refers to a group obtained by further substituting the alkyl group with halogen, such as "C 1 -C 6 haloalkyl” refers to a C 1 -C 6 alkyl group further substituted with halogen.
  • hydroxyalkyl refers to a group obtained by further substituting the alkyl group with OH.
  • alkylene refers to a saturated straight or branched chain aliphatic hydrocarbon group having two disabilities derived from the removal of two hydrogen atoms from the same carbon atom or two different carbon atoms of a parent alkane, which is comprised of Linear or branched chain groups of 1 to 20 carbon atoms, preferably containing 1 to 12 (eg 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 and 12) carbon atoms An alkylene group, more preferably an alkylene group containing 1 to 6 carbon atoms.
  • Non-limiting examples of alkylene include, but are not limited to , methylene, -CH( CH3 )-, -CH2CH2- , -CH( CH2CH3 )-, -CH2CH ( CH3 )- , -CH 2 CH 2 CH 2 -, -CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 -, etc.
  • the term "C 1 -C 6 alkylene” is understood to mean an alkylene group having 1 to 6 carbon atoms.
  • C 1 -C 3 alkylene is understood to mean an alkylene group having 1 to 3 carbon atoms.
  • C 1 -C 6 alkylene may include "C 1 -C 3 alkylene”.
  • heteroalkylene refers to an alkylene group in which one or more -CH2- is substituted with a heteroatom selected from N, O and S; wherein the alkylene group is as defined above.
  • alkoxy refers to the monovalent group produced by the loss of the hydrogen atom on the hydroxyl group of straight-chain or branched alcohols, which can be understood as “alkyloxy” or “alkyl-O-", where the alkyl defined above.
  • C 1 -C 10 alkoxy can be understood as “C 1 -C 10 alkyloxy” or “C 1 -C 10 alkyl-O-”; the term “C 1 -C 6 alkoxy” It can be understood as “C 1 -C 6 alkyloxy” or "C 1 -C 6 alkyl-O-".
  • the "C 1 -C 10 alkoxy” may include “C 1 -C 6 alkoxy” and “C 1 -C 3 alkoxy” and other ranges, and the "C 1 -C 6 alkoxy”"C 1 -C 3 alkoxy” may be further included.
  • haloalkoxy refers to a group obtained by further substituting the alkoxy group with a halogen, such as "C 1 -C 6 haloalkoxy” refers to a C 1 -C 6 alkoxy group further substituted with a halogen.
  • alkenyl refers to a linear or branched unsaturated aliphatic hydrocarbon group consisting of carbon atoms and hydrogen atoms, containing 2 to 20 carbon atoms, and having at least one double bond.
  • C 2 -C 10 alkenyl is understood to mean a linear or branched unsaturated monovalent hydrocarbon radical containing one or more double bonds and having 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 carbon atoms
  • C 2 -C 6 alkenyl is understood to mean a straight-chain or branched unsaturated monovalent hydrocarbon radical containing one or more double bonds and having 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms.
  • C 2 -C 10 alkenyl is preferably “C 2 -C 6 alkenyl” or “C 2 -C 4 alkenyl”
  • C 2 -C 6 alkenyl is more preferably "C 2 -C 4 alkenyl” , more preferably C 2 or C 3 alkenyl. It is understood that where the alkenyl group contains more than one double bond, the double bonds may be separated from each other or conjugated.
  • alkenyl group examples include, but are not limited to, vinyl, allyl, (E)-2-methylvinyl, (Z)-2-methylvinyl, (E)-but-2-enyl , (Z)-but-2-enyl, (E)-but-1-enyl, (Z)-but-1-enyl, isopropenyl, 2-methylprop-2-enyl, 1 -Methylprop-2-enyl, 2-methylprop-1-enyl, (E)-1-methylprop-1-enyl or (Z)-1-methylprop-1-enyl wait.
  • alkenylene refers to a residue derived from two hydrogen atoms removed from the same carbon atom or two different carbon atoms of a parent alkene, wherein alkenyl is as defined above.
  • C 2 -C 6 alkenylene is understood to mean an alkenylene group having 2 to 6 carbon atoms.
  • C 2 -C 3 alkenylene is understood to mean an alkenylene group having 2 or 3 carbon atoms.
  • C 2 -C 6 alkenylene includes "C 2 -C 3 alkenylene”.
  • alkynyl refers to a straight or branched unsaturated aliphatic hydrocarbon group consisting of carbon atoms and hydrogen atoms, containing 2 to 20 carbon atoms, and having at least one triple bond.
  • C 2 -C 10 alkynyl is understood to mean a linear or branched unsaturated monovalent hydrocarbon group containing one or more triple bonds and having 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 carbon atoms.
  • C 2 -C 6 alkynyl is understood to mean a straight-chain or branched unsaturated monovalent hydrocarbon radical comprising one or more triple bonds and having 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms.
  • C 2 -C 6 alkynyl examples include, but are not limited to, ethynyl (-C ⁇ CH), propynyl (-C ⁇ CCH 3 , -CH 2 C ⁇ CH), but-1-ynyl, but -2-ynyl or but-3-ynyl.
  • C 2 -C 10 alkynyl may include “C 2 -C 6 alkynyl” or “C 2 -C 3 alkynyl”
  • C 2 -C 6 alkynyl may include “C 2 -C 3 alkynyl "
  • C 2 -C 3 alkynyl” examples include ethynyl (-C ⁇ CH), prop-1-ynyl (-C ⁇ CCH 3 ) or prop-2-ynyl (propargyl).
  • alkynylene refers to a residue derived from two hydrogen atoms removed from the same carbon atom or two different carbon atoms of a parent alkyne, wherein alkynyl is as defined above.
  • C 2 -C 6 alkynylene is understood to mean an alkynylene group having 2 to 6 carbon atoms.
  • C 2 -C 3 alkynylene is understood to mean an alkynylene group having 2 or 3 carbon atoms.
  • C 2 -C 6 alkynylene includes "C 2 -C 3 alkynylene".
  • cycloalkyl refers to a fully saturated carbocyclic ring in the form of a monocyclic ring, a double ring, a bridged ring, or a spiro ring. Unless otherwise indicated, the carbocycle is typically a 3 to 10 membered ring.
  • C 3 -C 10 cycloalkyl is understood to mean a saturated monovalent monocyclic, fused, spiro or bridged ring having 3 to 10 carbon atoms.
  • C 3 -C 8 cycloalkyl is understood to mean a saturated monovalent monocyclic, fused, spiro or bridged ring having 3 to 8 carbon atoms.
  • C 3 -C 6 cycloalkyl should be understood as meaning a saturated monovalent monocyclic ring, fused ring, spiro ring or bridged ring, which has 3 to 6 carbon atoms, and specific examples include but are not limited to cyclopropyl, Cyclobutyl, cyclopentyl or cyclohexyl etc.
  • C 5 -C 9 cycloalkyl is understood to mean a saturated monovalent monocyclic, fused, spiro or bridged ring having 5 to 9 carbon atoms.
  • C 5 -C 7 cycloalkyl is understood to mean a saturated monovalent monocyclic, fused, spiro or bridged ring having 5 to 7 carbon atoms.
  • Specific examples of said cycloalkyl include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, cyclononyl, cyclodecyl, norbornyl (bicyclo[2.2 .1] heptyl), bicyclo [2.2.2] octyl, adamantyl, spiro [4.5] decanyl, etc.
  • C 3 -C 10 cycloalkyl may include “C 3 -C 8 cycloalkyl", “C 3 -C 6 cycloalkyl”, “C 5 -C 9 cycloalkyl” or “C 5 - C 7 cycloalkyl”, the term “C 3 -C 8 cycloalkyl” may include “C 3 -C 6 cycloalkyl” or "C 5 -C 7 cycloalkyl”, the term “C 5 -C 9 cycloalkyl”"Alkyl” may include “C 5 -C 7 cycloalkyl”. .
  • cycloalkyloxy can be understood as “cycloalkyl-O-".
  • C 3 -C 6 cycloalkyloxy can be understood as “C 3 -C 6 cycloalkyl-O-”.
  • cycloalkenyl refers to a non-aromatic carbocyclic ring that is not fully saturated and exists in the form of a monocyclic ring, a double ring, a bridged ring, or a spiro ring. Unless otherwise indicated, the carbocycle is typically a 3 to 10 membered ring. Specific examples of the cycloalkenyl group include, but are not limited to, cyclopentenyl, cyclopentadienyl, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, cycloheptenyl or cycloheptadienyl and the like.
  • C 5 -C 10 cycloalkenyl refers to an incompletely saturated non-aromatic carbocyclic ring with 5-10 carbon atoms in the form of monocyclic, fused, bridged or spiro rings.
  • C 5 -C 9 cycloalkenyl refers to an incompletely saturated non-aromatic carbocyclic ring with 5-9 carbon atoms in the form of monocyclic ring, double ring, bridged ring or spiro ring.
  • C 5 -C 7 cycloalkenyl refers to an incompletely saturated non-aromatic carbocyclic ring with 5-7 carbon atoms in the form of monocyclic, fused, bridged or spiro rings.
  • C 3 -C 6 cycloalkenyl refers to an incompletely saturated non-aromatic carbocyclic ring with 3-6 carbon atoms in the form of monocyclic ring, double ring, bridged ring or spiro ring.
  • C 5 -C 10 cycloalkenyl may include “C 5 -C 9 cycloalkenyl” or “C 5 -C 7 cycloalkenyl”
  • C 5 -C 9 cycloalkenyl may include "C 5 -C 7 cycloalkenyl”.
  • 5-14 membered heterocyclic group refers to a heterocyclic group with 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or 14 ring atoms, and its ring atoms contain 1-5 independent selected from the heteroatoms or heteroatom groups described above.
  • “5-14 membered heterocyclic group” may include “6-14 membered heterocyclic group”, “6-11 membered heterocyclic group”, “6-10 membered heterocyclic group”, “6-8 membered heterocyclic group” , "5-10 membered heterocyclic group”, “5-9 membered heterocyclic group”, “5-8 membered heterocyclic group” or "5-7 membered heterocyclic group”.
  • 5-10 membered heterocyclic group may include “5-9 membered heterocyclic group”, “5-8 membered heterocyclic group”, “5-7 membered heterocyclic group”, “6-10 membered heterocyclic group” Or “6-8 membered heterocyclic group”.
  • the term “4-10 membered heterocyclic group” refers to a heterocyclic group with 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 ring atoms, and its ring atoms contain 1-5 heteroatoms or heteroatom groups independently selected from the above-mentioned.
  • 4-membered heterocyclic group includes “4-7 membered heterocyclic group", wherein, specific examples of 4-membered heterocyclic group include but Not limited to azetidinyl or oxetanyl; specific examples of 5-membered heterocyclic groups include, but are not limited to, tetrahydrofuranyl, dioxolyl, pyrrolidinyl, imidazolidinyl, pyrazolidine base, pyrrolinyl, 4,5-dihydrooxazolyl or 2,5-dihydro-1H-pyrrolyl; specific examples of 6-membered heterocyclic groups include, but are not limited to, tetrahydropyranyl, piperidinyl, Morpholinyl, dithianyl, thiomorpholinyl, piperazinyl, trithianyl, tetrahydropyridyl or 4H-[1,3,4]thiadiazinyl; specific examples of 7-membered heterocycl
  • the heterocyclic group can also be a bicyclic group, wherein, specific examples of 5,5-membered bicyclic groups include, but are not limited to, hexahydrocyclopenta[c]pyrrole-2 (1H)-yl; specific examples of 5,6-membered bicyclic groups include, but are not limited to, hexahydropyrrolo[1,2-a]pyrazin-2(1H)-yl, 5,6,7,8-tetrahydro -[1,2,4]triazolo[4,3-a]pyrazinyl or 5,6,7,8-tetrahydroimidazo[1,5-a]pyrazinyl.
  • the heterocyclic group may be a benzo-fused ring group of the above-mentioned 4-7 membered heterocyclic group, and specific examples include but are not limited to dihydroisoquinolyl, etc.
  • "4-10 membered heterocyclic group” may include "5- 10-membered heterocyclyl", “5-9-membered heterocyclyl", “5-8-membered heterocyclyl", “5-7-membered heterocyclyl”, "5-6-membered heterocyclyl”, “6- 10-membered heterocyclyl”, “6-8-membered heterocyclyl”, “4-8-membered heterocyclyl”, “4-7-membered heterocyclyl", "4-6-membered heterocyclyl", "4- 10-membered heterocycloalkyl”, “5-10-membered heterocycloalkyl”, “4-7-membered heterocycloalkyl”, “5-6-membered heterocycloalkyl”, “6-8-membered heterocycloal
  • heterocyclyloxy can be understood as “heterocyclyl-O-”.
  • heterocycloalkyl refers to a heterocycloalkyl group with 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 ring atoms, and its ring atoms contain 1-5 ring atoms independently selected from A heteroatom or heteroatom group as described above.
  • “3-10 membered heterocycloalkyl” includes “3-8 membered heterocycloalkyl", wherein specific examples of 4-membered heterocycloalkyl include, but are not limited to, azetidinyl, oxetanyl or thibutanyl; Specific examples of 5-membered heterocycloalkyl groups include, but are not limited to, tetrahydrofuranyl, tetrahydrothiophenyl, pyrrolidinyl, isoxazolidinyl, oxazolidinyl, isothiazolidinyl, thiazolidinyl, imidazolidinyl, or tetrahydrofuranyl.
  • 6-membered heterocycloalkyl include, but are not limited to, piperidinyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrothiopyranyl, morpholinyl, piperazinyl, 1,4-thiaxanyl , 1,4-dioxanyl, thiomorpholinyl, 1,3-dithianyl, or 1,4-dithianyl; specific examples of 7-membered heterocycloalkyl include, but are not limited to, aza Cycloheptyl, oxepanyl or thiepanyl.
  • heterocycloalkyloxy is understood to mean “heterocycloalkyl-O-”.
  • aryl refers to an all-carbon monocyclic or fused polycyclic aromatic ring group having a conjugated ⁇ -electron system.
  • the aryl group can have 6-20 carbon atoms, 6-14 carbon atoms or 6-12 carbon atoms.
  • C 6 -C 20 aryl should be understood as a monovalent aromatic monocyclic, bicyclic or tricyclic hydrocarbon ring having 6 to 20 carbon atoms.
  • C aryl rings with 6 carbon atoms
  • C aryl such as phenyl
  • rings with 9 carbon atoms such as indanyl or indenyl
  • rings with 10 a ring of 3 carbon atoms such as tetrahydronaphthyl, dihydronaphthyl, or naphthyl
  • a ring of 13 carbon atoms such as fluorenyl
  • is a ring having 14 carbon atoms (“C 14 aryl”), such as anthracenyl.
  • C 6 -C 10 aryl is understood as a monovalent aromatic all-carbon monocyclic or bicyclic group having 6 to 10 carbon atoms. Especially rings with 6 carbon atoms (“C aryl ”), such as phenyl; or rings with 9 carbon atoms (“C aryl ”), such as indenyl; or rings with 10 carbon atoms ring (“C 10 aryl”), such as naphthyl.
  • aryloxy is understood to mean “aryl-O-”.
  • heteroaryl refers to an aromatic monocyclic or fused polycyclic ring system, which contains at least one, preferably 1-4 ring atoms selected from N, O, S, and the remaining ring atoms are 5- 14-membered aromatic ring group.
  • the heteroaryl group is preferably 5-10 membered, more preferably 5-membered or 6-membered heteroaryl group.
  • the term “5-10 membered heteroaryl” is understood to include monovalent monocyclic or bicyclic aromatic ring systems having 5, 6, 7, 8, 9 or 10 ring atoms, in particular 5 or 6 or 9 or 10 ring atoms, and it contains 1-5, preferably 1-3 heteroatoms independently selected from N, O and S.
  • heteroaryl is selected from thienyl, furyl, pyrrolyl, oxazolyl, thiazolyl, imidazolyl, pyrazolyl, isoxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, triazolyl or thiazolyl Diazolyl, etc.
  • benzo derivatives such as benzofuryl, benzothienyl, benzothiazolyl, benzoxazolyl, benzisoxazolyl, benzimidazolyl, benzotriazole base, indazolyl, indolyl or isoindolyl, etc.; or pyridyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, or triazinyl, etc., and their benzo derivatives, such as quinolinyl, quinazole Linyl or isoquinolinyl, etc.; or azocinyl, indolizinyl, purinyl, etc.
  • 5-6 membered heteroaryl refers to an aromatic ring system having 5 or 6 ring atoms, and which contains 1-3, preferably 1-2, heteroatoms independently selected from N, O and S.
  • 6-membered heteroaryl refers to an aromatic ring system having 6 ring atoms, and which contains 1-3, preferably 1-2, heteroatoms independently selected from N, O and S.
  • the term “5-10 membered heteroaryl” may include “5-6 membered heteroaryl” or “6-membered heteroaryl”, and the term “5-6 membered heteroaryl” may include “6-membered heteroaryl”.
  • halo or halogen refers to fluorine, chlorine, bromine or iodine.
  • hydroxyl refers to a -OH group.
  • cyano refers to a -CN group.
  • amino refers to a -NH2 group.
  • nitro refers to a -NO2 group.
  • terapéuticaally effective amount means (i) treating or preventing a particular disease, condition or disorder, (ii) alleviating, ameliorating or eliminating one or more symptoms of a particular disease, condition or disorder, or (iii) preventing or delaying Amounts of a compound of the disclosure for the onset of one or more symptoms of a particular disease, condition or disorder described herein.
  • the amount of a compound of the disclosure that constitutes a “therapeutically effective amount” will vary depending on the compound, the disease state and its severity, the mode of administration, and the age of the mammal to be treated, but can be routinely determined by those skilled in the art. Personnel determined based on their own knowledge and this disclosure.
  • pharmaceutically acceptable refers to those compounds, materials, compositions and/or dosage forms which, within the scope of sound medical judgment, are suitable for use in contact with human and animal tissues without excessive Toxicity, irritation, allergic reaction, or other problems or complications, commensurate with a reasonable benefit/risk ratio.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to salts of pharmaceutically acceptable acids or bases, including salts formed between compounds and inorganic or organic acids, and salts formed between compounds and inorganic or organic bases.
  • composition refers to a mixture of one or more compounds of the present disclosure or salts thereof and pharmaceutically acceptable excipients.
  • the purpose of a pharmaceutical composition is to facilitate administration of a compound of the present disclosure to an organism.
  • pharmaceutically acceptable excipients refers to those excipients that have no obvious stimulating effect on the organism and will not impair the biological activity and performance of the active compound. Suitable excipients are well known to those skilled in the art, such as carbohydrates, waxes, water-soluble and/or water-swellable polymers, hydrophilic or hydrophobic materials, gelatin, oils, solvents, water and the like.
  • the disclosure also includes isotopically labeled compounds of the disclosure that are identical to those described herein, but with one or more atoms replaced by an atom of an atomic mass or mass number different from that normally found in nature.
  • isotopes that can be incorporated into compounds of the present disclosure include isotopes of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorus, sulfur, fluorine, iodine, and chlorine, such as 2 H, 3 H, 11 C, 13 C, 14 C, respectively. , 13 N, 15 N, 15 O, 17 O, 18 O, 31 P, 32 P, 35 S, 18 F, 123 I, 125 I and 36 Cl, etc.
  • isotopically labeled compounds of the disclosure are useful in compound and/or substrate tissue distribution assays. Tritiated (ie3H ) and carbon-14 ( ie14C ) isotopes are especially preferred for their ease of preparation and detectability.
  • Positron-emitting isotopes such as 15 O, 13 N, 11 C, and 18 F, can be used in positron emission tomography (PET) studies to determine substrate occupancy.
  • Isotopically labeled compounds of the disclosure can generally be prepared by following procedures similar to those disclosed in the Schemes and/or Examples below, by substituting an isotopically labeled reagent for a non-isotopically labeled reagent.
  • the pharmaceutical composition of the present disclosure can be prepared by combining the compound of the present disclosure with suitable pharmaceutically acceptable auxiliary materials, for example, it can be formulated into solid, semi-solid, liquid or gaseous preparations, such as tablets, pills, capsules , powder, granule, ointment, emulsion, suspension, suppository, injection, inhalant, gel, microsphere and aerosol, etc.
  • Typical routes of administration of a compound of the present disclosure, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof include, but are not limited to, oral, rectal, topical, inhalation, parenteral, sublingual, intravaginal, intranasal, intraocular, peritoneal Intramuscular, subcutaneous, intravenous administration.
  • the pharmaceutical composition of the present disclosure can be produced by methods well known in the art, such as conventional mixing methods, dissolving methods, granulating methods, emulsifying methods, freeze-drying methods and the like.
  • the pharmaceutical composition is in oral form.
  • the pharmaceutical compositions can be formulated by mixing the active compounds with pharmaceutically acceptable excipients well known in the art. These excipients enable the compounds of the present disclosure to be formulated into tablets, pills, lozenges, dragees, capsules, liquids, gels, slurries, suspensions and the like for oral administration to patients.
  • Solid oral compositions can be prepared by conventional methods of mixing, filling or tabletting. It can be obtained, for example, by mixing the active compound with solid excipients, optionally milling the resulting mixture, adding other suitable excipients if desired, and processing the mixture into granules to obtain tablets Or the core of the sugar coating.
  • Suitable auxiliary materials include but are not limited to: binders, diluents, disintegrants, lubricants, glidants or flavoring agents, etc.
  • the pharmaceutical composition may also be adapted for parenteral administration as a suitable unit dosage form of sterile solutions, suspensions or lyophilized products.
  • Dosages of the compounds or compositions used in the methods of treatment of the present disclosure will generally vary with the severity of the disease, the weight of the patient and the relative potency of the compound, however, as a general guide, the general formula (I) described herein Suitable daily doses of the compound administered are from 0.01 mg/kg to 1000 mg/kg.
  • the compounds of the present disclosure can be prepared by a variety of synthetic methods well known to those skilled in the art, including the specific embodiments listed below, the embodiments formed by combining them with other chemical synthesis methods, and those well known to those skilled in the art preferred embodiments include, but are not limited to, the examples of the present disclosure.
  • ratios indicated for mixed solvents are volume mixing ratios. Unless otherwise stated, % means wt%.
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • MS mass spectroscopy
  • THP tetrahydro-2H-pyran-2-yl
  • Pd(OAc) 2 palladium acetate
  • t-BuOH tert-butanol
  • t-BuOK potassium tert-butoxide
  • t-BuONa sodium tert-butoxide
  • DPPP 1,3-bis(diphenylphosphine)propane
  • TEA triethylamine
  • THF tetrahydrofuran
  • Pd/C palladium on carbon
  • TsOH p-toluenesulfonic acid
  • MeOH methanol
  • EtOH ethanol
  • DIAD Diisopropyl azodicarboxylate
  • DCM Dichloromethane
  • DCE Dichloroethane
  • DMF N,N-Dimethylformamide
  • DIEA N,N-Diisopropyl Ethylamine
  • HATU O-
  • the following eluents can be mixed eluents formed by two or more solvents, and the ratio is the volume ratio of each solvent.
  • “0-10% methanol/dichloromethane” means that in the gradient elution process, mixed eluents
  • the volume ratio of methanol and dichloromethane in the mixture is 0:100 ⁇ 10:100.
  • Step 1 Synthesis of tert-butyl N-(3,6-dichloropyridazin-4-yl)carbamate
  • Step 2 Synthesis of tert-butyl N-[6-chloro-3-(2-trimethylsilylethynyl)pyridazin-4-yl]carbamate
  • reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure, the organic phase was washed twice with saturated brine (200 mL), and the aqueous phase was extracted three times with ethyl acetate (200 mL). The collected organic layer was dried with anhydrous sodium sulfate, suction filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain the product N-[6-chloro-3-( tert-Butyl 2-trimethylsilylethynyl)pyridazin-4-yl]carbamate (7 g).
  • Step 3 Synthesis of tert-butyl 3-chloropyrrolo[3,2-c]pyridazine-5-carboxylate
  • Step 2 Synthesis of tert-butyl 4-(3-chloro-5H-pyrrolo[3,2-c]pyridazin-5-yl)piperidine-1-carboxylate
  • the reaction solution was diluted with ethyl acetate (80 mL) and water (80 mL), the organic phase was washed twice with saturated brine (80 mL), and the aqueous phase was extracted twice with ethyl acetate (80 mL).
  • Step 4 Synthesis of tert-butyl 4-(3-chloro-7-nitro-pyrrolo[3,2-c]pyridazin-5-yl)piperidine-1-carboxylate
  • Step 5 Synthesis of tert-butyl 4-[3-(2-hydroxyphenyl)-7-nitro-pyrrolo[3,2-c]pyridazin-5-yl]piperidine-1-carboxylate
  • reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure, and the product 4-[3-(2-hydroxyphenyl)-7-nitro-pyrrolo[3 , 2-c]pyridazin-5-yl]piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (170mg).
  • Step 6 Synthesis of tert-butyl 4-[7-amino-3-(2-hydroxyphenyl)pyrrolo[3,2-c]pyridazin-5-yl]piperidine-1-carboxylate
  • 4,6-Dihydroxypyridazine-3-carboxamide (5 g, 32.23 mmol) was dissolved in phosphorus oxychloride (50 mL). The reaction solution was reacted at 90° C. for 7 hours, and the reaction was detected by LCMS. The reaction solution was cooled to room temperature, and slowly added dropwise to cold water, stirred at room temperature for 30 minutes, extracted three times with dichloromethane (100 mL), combined organic phases, dried over anhydrous sodium sulfate, concentrated by filtration, and purified by column chromatography to obtain 4, 6-Dichloropyridazine-3-carbonitrile (4.43 g).
  • Step 4 Synthesis of tert-butyl 3-amino-6-chloro-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazine-1-carboxylate
  • Step 5 Synthesis of tert-butyl 3-amino-6-(2-(benzyloxy)phenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazine-1-carboxylate
  • Step 7 3-(3-Amino-6-(2-(benzyloxy)phenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl)azetidine-1 -Synthesis of tert-butyl carboxylate
  • Step 8 Preparation of tert-butyl 3-[3-amino-6-(2-hydroxyphenyl)pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl]azetidine-1-carboxylate synthesis
  • Step 9 Synthesis of 2-(3-amino-1-(azetidin-3-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-6-yl)phenol
  • the reaction liquid was dried with nitrogen, dichloromethane (5 mL) and water (2 mL) were added to the reaction liquid, and sodium carbonate was added to adjust the pH to 7, extracted twice with dichloromethane (15 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, and filtered. The filtrate was concentrated to dryness under reduced pressure.
  • Step 1 Synthesis of tert-butyl 4-(3-amino-6-chloro-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
  • Step 2 Synthesis of tert-butyl 4-(3-amino-6-(2-hydroxyphenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
  • reaction solution was reacted at 90° C. under nitrogen for 16 hours, and the reaction was detected by LCMS.
  • the reaction solution was cooled to room temperature, filtered, the filtrate was diluted with distilled water (15 mL), extracted three times with ethyl acetate (50 mL), the organic phases were combined, dried, concentrated, and purified by column chromatography to obtain 4-(3-amino-6-(2 -Hydroxyphenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl)piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (900 mg).
  • Step 3 Synthesis of 2-(3-amino-1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-6-yl)phenol
  • tert-butyl 4-(3-amino-6-(2-hydroxyphenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate (900mg, 2.19 mmol) was dissolved in dichloromethane (10 mL), and trifluoroacetic acid (5.00 g, 43.85 mmol) was added. The reaction solution was reacted at 20° C. for 3 hours, and the reaction was detected by LCMS. The reaction solution was concentrated, diluted with distilled water (10 mL), and solid sodium carbonate was added to adjust the pH to 7-8.
  • Step 1 Synthesis of 4,6-dichloropyridazin-3(2H)-one and 5,6-dichloropyridazin-3(2H)-one
  • 3,4,6-Trichloropyridazine (100 g, 545.19 mmol) was dissolved in acetic acid (400 mL). The reaction solution was reacted at 110° C. for 16 hours. TLC detects that the reaction is complete. The reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure. Slurry with petroleum ether (300mL) at 25°C for 16 hours to obtain a mixture of 4,6-dichloropyridazin-3(2H)-one and 5,6-dichloropyridazin-3(2H)-one (81.2g ).
  • Step 2 4,6-dichloro-2-(4-methoxybenzyl)pyridazin-3(2H)-one and 5,6-dichloro-2-(4-methoxybenzyl)pyridazine Synthesis of -3(2H)-one
  • Step 3 4-Amino-6-chloro-2-(4-methoxybenzyl)pyridazin-3(2H)-one and 5-amino-6-chloro-2-(4-methoxybenzyl) Synthesis of Pyridazin-3(2H)-one
  • Step 4 Synthesis of 4-amino-6-chloro-5-iodo-2-(4-methoxybenzyl)pyridazin-3(2H)-one
  • Step 5 Synthesis of (E)-4-amino-6-chloro-5-(2-ethoxyvinyl)-2-(4-methoxybenzyl)pyridazin-3(2H)-one
  • Step 9 Synthesis of 4,7-dichloro-1-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-d]pyridazine
  • Step 10 4-Chloro-N-(4-methoxybenzyl)-1-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-d ] Synthesis of pyridazin-7-amine
  • Step 11 2-(7-((4-methoxybenzyl)amino)-1-((2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-1H-pyrrolo[2,3 Synthesis of -d]pyridazin-4-yl)phenol
  • Step 2 Synthesis of tert-butyl N-[6-(2-methoxyphenyl)pyrrolo[1,2-b]pyridazin-2-yl]carbamate
  • reaction solution was poured into water (2 mL), the pH was adjusted to 8 with aqueous sodium bicarbonate, extracted three times with dichloromethane (2 mL), the organic phase was concentrated to dryness under reduced pressure, and the concentrate was purified by preparative liquid chromatography (Boston Prime C18, 5 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 150 mm length; use a mixture of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile (acetonitrile ratio: 25%-45%) as eluent) to give the product 2-(2-aminopyrrole [1,2-b]pyridazin-6-yl)phenol (6a) (1.41 mg).
  • Step 6 (E)-3-[7-(2-methoxyphenyl)-4-[(4-methoxyphenyl)methylamino]-1H-pyrrolo[2,3-d]pyridine Synthesis of ethyl oxazin-3-yl]prop-2-enoate
  • Step 8 (E)-3-[4-Amino-7-(2-methoxyphenyl)-1H-pyrrolo[2,3-d]pyridazin-3-yl]prop-2-enoic acid Synthesis
  • reaction solution was concentrated under reduced pressure to remove tetrahydrofuran, adjusted to pH 5-6 with 1M hydrochloric acid solution, and concentrated to dryness under reduced pressure to obtain the product (E)-3-[4-amino-7-(2-methoxyphenyl)- 1H-Pyrrolo[2,3-d]pyridazin-3-yl]prop-2-enoic acid (50 mg).
  • Step 9 5-(2-Methoxyphenyl)-3,6,7,9-tetraazatricyclo[6.4.1.04,13]trideca-1,4(13),5,7,11 Synthesis of -penten-10-one
  • the concentrate was purified by preparative liquid chromatography (Phenomenex C18, 3 ⁇ m silica, 30mm diameter, 75mm length; use a mixture of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile (acetonitrile ratio: 5%-45%) as eluent) to give the product 5-(2-hydroxyphenyl)-3,6,7 ,9-tetraazatricyclo[6.4.1.04,13]trideca-1,4(13),5,7,11-penten-10-one (7a) (0.82 mg).
  • Step 2 Synthesis of ethyl 2-amino-6-bromo-4-methoxy-pyrazolo[1,5-a]pyridine-3-carboxylate
  • Step 3 Synthesis of ethyl 2-[bis(tert-butoxycarbonyl)amino]-6-bromo-4-methoxy-pyrazolo[1,5-a]pyridine-3-carboxylate
  • Step 4 Synthesis of 6-bromo-2-(tert-butoxycarbonylamino)-4-methoxy-pyrazolo[1,5-a]pyridine-3-carboxylic acid
  • reaction solution was washed with ethyl acetate (2 mL), and the aqueous phase was adjusted to pH 5-6 with saturated aqueous citric acid solution, then extracted three times with ethyl acetate (15 mL), and the organic phase was concentrated to dryness under reduced pressure to obtain the product 6- Bromo-2-(tert-butoxycarbonylamino)-4-methoxy-pyrazolo[1,5-a]pyridine-3-carboxylic acid (140 mg).
  • Step 5 Synthesis of tert-butyl N-[6-bromo-4-methoxy-3-(phenylcarbamoyl)pyrazolo[1,5-a]pyridin-2-yl]carbamate
  • Step 7 Synthesis of 2-amino-6-(2-hydroxyphenyl)-4-methoxy-N-phenyl-pyrazolo[1,5-a]pyridine-3-carboxamide
  • N-[6-(2-hydroxyphenyl)-4-methoxy-3-(phenylcarbamoyl)pyrazolo[1,5-a]pyridin-2-yl]carbamate tert-butyl (12 mg, 25.29 ⁇ mol) was dissolved in dichloromethane (1 mL), trifluoroacetic acid (57.67 mg, 505.79 ⁇ mol) was added, and the reaction solution was stirred at 25° C. for 2 hours. LCMS showed the reaction was complete.
  • reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure, and the concentrate was purified by preparative liquid chromatography (Phenomenex C18, 3 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 75 mm length; using a mixture of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile (acetonitrile ratio: 26% -66%) as eluent) yielded the product 2-amino-6-(2-hydroxyphenyl)-4-methoxy-N-phenyl-pyrazolo[1,5-a]pyridine-3- Formamide (8a) (1.00 mg).
  • Step 7 Synthesis of 5-iodo-3-[2-(methoxymethoxy)phenyl]-7-(p-toluenesulfonyl)pyrrolo[2,3-c]pyridazine
  • Step 8 5-[2-(2-Fluoro-4-pyridyl)ethynyl]-3-[2-(methoxymethoxy)phenyl]-7-(p-toluenesulfonyl)pyrrolo[ Synthesis of 2,3-c]pyridazine
  • Step 10 Synthesis of 2-[5-[2-(2-fluoro-4-pyridyl)ethynyl]-7H-pyrrolo[2,3-c]pyridazin-3-yl]phenol
  • Step 1 5-[(Z)-2-(2-Fluoro-4-pyridyl)vinyl]-3-[2-(methoxymethoxy)phenyl]-7-(p-toluenesulfonyl ) Synthesis of pyrrolo[2,3-c]pyridazine
  • reaction solution was filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain the product 5-[(Z)-2-(2-fluoro-4-pyridyl)vinyl]-3-[2-(methoxymethoxy)phenyl]- 7-(p-Toluenesulfonyl)pyrrolo[2,3-c]pyridazine (67 mg, crude) was used directly in the next step.
  • Step 1 4-[3-Amino-6-[2-(methoxymethoxy)phenyl]pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl]piperidine-1-carboxylic acid Synthesis of tert-butyl ester
  • reaction solution was stirred and reacted at 90° C. for 16 hours under a nitrogen atmosphere. LCMS detected that the reaction was complete.
  • Step 2 4-[6-[2-(Methoxymethoxy)phenyl]-3-(methylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl]piper Synthesis of tert-butyl pyridine-1-carboxylate
  • Step 3 Synthesis of 2-[3-(methylamino)-1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-6-yl]phenol
  • 6-Chloro-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-3-amine 100 mg, 589.72 ⁇ mol was dissolved in N,N-dimethylformamide (2 mL), and benzyl bromide ( 151.29mg, 884.58 ⁇ mol) and anhydrous cesium carbonate (576.43mg, 1.77mmol), the reaction solution was heated to 80°C and stirred for 16 hours. LCMS detected that the reaction was complete.
  • Step 1 Synthesis of tert-butyl 3-(3-amino-6-chloro-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl)pyrrolidine-1-carboxylate
  • Step 2 tert-butyl 3-[3-amino-6-(2-hydroxyphenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl]pyrrolidine-1-carboxylate synthesis
  • Step 1 Synthesis of tert-butyl 3-(methylsulfonyloxy)piperidine-1-carboxylate
  • Step 2 Synthesis of tert-butyl 3-(3-amino-6-chloro-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
  • Step 3 tert-butyl 3-[3-amino-6-(2-hydroxyphenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl]piperidine-1-carboxylate synthesis
  • Step 4 Synthesis of 2-[3-amino-1-(piperidin-3-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-6-yl]phenol
  • Step 1 Synthesis of tert-butyl 3-methylsulfonyloxy-8-azabicyclo[3.2.1]octane-8-carboxylate
  • Step 3 3-[3-Amino-6-(2-hydroxyphenyl)pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl]-8-azabicyclo[3.2.1]octane- Synthesis of tert-butyl 8-carboxylate
  • reaction solution was reacted at 100° C. for 2 hours. The completion of the reaction was detected by LCMS.
  • Step 1 Synthesis of tert-butyl 4-[(3-amino-6-chloro-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl)methyl]piperidine-1-carboxylate
  • Step 2 4-[[3-Amino-6-(2-hydroxyphenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl]methyl]piperidine-1-carboxylic acid Synthesis of tert-butyl ester
  • Step 1 3-[3-Amino-6-[2-(methoxymethoxy)phenyl]-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl]pyrrolidine-1 -Synthesis of tert-butyl carboxylate
  • reaction solution was stirred and reacted at 100° C. for 4 hours under nitrogen atmosphere. LCMS detected that the reaction was complete.
  • Step 2 3-[6-[2-(Methoxymethoxy)phenyl]-3-(methylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl] Synthesis of tert-butyl pyrrolidine-1-carboxylate
  • Step 1 4-(3-((tert-butoxycarbonyl)amino)-6-(2-(methoxymethoxy)phenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazine- Synthesis of 1-yl)piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester
  • Step 2 4-[6-[2-(Methoxymethoxy)phenyl]-3-[(methyl-d 3 )amino]-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazine Synthesis of -1-yl]piperidine-1-carboxylate tert-butyl ester
  • tert-butyl piperidine-1-carboxylate 50mg, 90.15 ⁇ mol was dissolved in tetrahydrofuran (3mL), sodium hydrogen (18.03mg, 450.75 ⁇ mol, 60% purity) was added, the reaction solution was stirred at 25°C for 0.5 hours, and added Deuteroiodomethane (65.34 mg, 450.75 ⁇ mol). The reaction solution was reacted at 25° C. for 11.5 hours, and the reaction was completed by LCMS detection.
  • Step 3 2-[3-[(Methyl-d 3 )amino]-1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol[4,3-c]pyridazin-6-yl]phenol synthesis
  • reaction solution was concentrated, and subjected to preparative liquid chromatography (Phenomenex Luna C18 column, 3 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 75 mm length; using a mixture of water (containing 0.05% ammonia) and acetonitrile (acetonitrile content 19%-59%) as the eluent liquid) to obtain 2-[3-[(methyl-d 3 )amino]-1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazol[4,3-c]pyridazin-6-yl]phenol (18a) (1.02 mg).
  • Step 1 4-[3-(Ethylamino)-6-[2-(methoxymethoxy)phenyl]-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl] Synthesis of tert-butyl piperidine-1-carboxylate
  • Step 2 Synthesis of 2-[3-(ethylamino)-1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-6-yl]phenol
  • Step 1 4-[6-[2-(Methoxymethoxy)phenyl]-3-(propylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl] Synthesis of tert-butyl piperidine-1-carboxylate
  • Step 1 4-[3-(isopropylamino)-6-[2-(methoxymethoxy)phenyl]-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl Synthesis of ]piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester
  • Step 2 Synthesis of 2-[3-(isopropylamino)-1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-6-yl]phenol
  • reaction mixture was concentrated and subjected to preparative liquid chromatography (Phenomenex Luna C18 column, 3 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 75 mm length; using a mixture of water (containing 0.05% ammonia) and acetonitrile (acetonitrile content 32%-72%) as the elution liquid) to obtain 2-[3-(isopropylamino)-1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-6-yl]phenol (21a) (3.5 mg).
  • Step 1 4-[3-[bis(cyclopropanecarbonyl)amino]-6-[2-(methoxymethoxy)phenyl]pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl Synthesis of tert-butyl ]piperidine-1-carboxylate
  • reaction solution was stirred and reacted at 25° C. for 2 hours, and the reaction was detected by LCMS.
  • the reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure. Purification by high performance liquid chromatography (Phenomenex Luna column, 3 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 75 mm length; using a mixture of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile (acetonitrile content 0%-39%) as eluent) gave N -[6-(2-hydroxyphenyl)-1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-3-yl]cyclopropanecarboxamide (22a)( 2.02 mg).
  • Step 1 4-[3-Amino-6-(3-chloro-2-hydroxyphenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl]piperidine-1-carboxylic acid Synthesis of tert-butyl ester
  • reaction solution was stirred and reacted at 90° C. for 2 hours under nitrogen atmosphere. LCMS detected that the reaction was complete.
  • Step 2 Synthesis of 2-[3-amino-1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-6-yl]-6-chlorophenol
  • reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure, and was subjected to preparative liquid chromatography (Phenomenex Gemini C18 column: 5 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 80 mm length; use a mixture of water (containing 0.05% ammonia) and acetonitrile (acetonitrile content 30%-50%) ) as eluent) to give 2-[3-amino-1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-6-yl]-6-chlorophenol (23a) (2.41 mg).
  • the reaction solution was added with water (5 mL) and ethyl acetate (10 mL) for extraction, and the organic phase was concentrated to dryness under reduced pressure. Then it was dissolved in anhydrous methanol (2 mL) and water (2 mL), and sodium hydroxide solution (4M, 0.1 mL) was added, the reaction solution was stirred and reacted at 25°C for 2 hours, and the reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure.
  • Step 1 4-[3-Iodo-6-[2-(methoxymethoxy)phenyl]-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl]piperidine-1 -Synthesis of tert-butyl formate
  • Step 2 4-(3-(cyclopropylamino)-6-(2-(methoxymethoxy)phenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl ) Synthesis of piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester
  • Step 3 Synthesis of 2-[3-(cyclopropylamino)-1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-6-yl]phenol
  • reaction solution was concentrated and subjected to preparative liquid chromatography (Phenomenex Luna C18 column, 3 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 75 mm length; using a mixture of water (containing 0.05% ammonia) and acetonitrile (acetonitrile content 47%-87%) as the elution liquid) to obtain 2-[3-(cyclopropylamino)-1-(piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-6-yl]phenol (25a) (15mg).
  • Step 1 4-(3-((tert-butoxycarbonyl)(2,2,2-trifluoroethyl)amino)-6-(2-(methoxymethoxy)phenyl)-1H-pyridine Synthesis of tert-Butyl Azolo[4,3-c]pyridazin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
  • reaction solution was concentrated and subjected to high performance liquid chromatography (Phenomenex Luna C18 column, 3 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 75 mm length; using a mixture of water (containing 0.05% ammonia) and acetonitrile (acetonitrile content 33%-73%) as the elution liquid) to obtain 2-[1-(piperidin-4-yl)-3-[(2,2,2-trifluoroethyl)amino]-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazine -6-yl]phenol (26a) (20 mg).
  • Step 1 Synthesis of tert-butyl 3-methylsulfonyloxy-8-azabicyclo[3.2.1]octane-8-carboxylate
  • Step 3 3-[3-Amino-6-[2-(methoxymethoxy)phenyl]-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridazin-1-yl]-8-azepam Synthesis of tert-butyl heterobicyclo[3.2.1]octane-8-carboxylate

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Abstract

本公开内容涉及蛋白降解靶向嵌合体(PROTAC)分子，进一步涉及BRM选择性降解剂化合物，具体提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有本申请所述取代基和结构特征。本申请还描述了包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，以及所述化合物或其药学上可接受的盐在医药上的应用。

Description

BRM选择性降解剂化合物及其应用
相关申请的交叉引用
本申请要求以下3件中国发明专利申请的权益和优先权，在此将它们的全部内容以援引的方式整体并入本文中：
2021年11月23日向中国国家知识产权局提交的第202111395500.6号专利申请；
2022年2月28日向中国国家知识产权局提交的第202210192251.9号专利申请；以及
2022年7月5日向中国国家知识产权局提交的第202210784815.8号专利申请。
技术领域
本公开内容涉及作为BRM选择性降解剂的化合物或其可药用盐、其制备方法、含有该化合物或其可药用盐的药物组合物、以及所述化合物或其可药用盐在预防或治疗由BRM介导的疾病或病症中的用途。
背景技术
SWI/SNF是一种重要的核小体重塑复合物，可以水解ATP产生能量并用于打破核小体中DNA与组蛋白之间的相互作用，从而调控基因表达和修复基因损伤。表观遗传学异常已被证明是许多慢性疾病(如癌症)发生和发展的重要原因，约在20％的癌症中发现了SWI/SNF复合物组分的突变。BRM(SMARCA2)和BRG1(SMARCA4)均为SWI/SNF复合物的ATP酶亚基，是其核心组分，主要作用在于水解ATP为动员核小体提供能量，以调控基因转录、DNA复制以及DNA损伤修复。两个蛋白在复合物中功能相同但相互排斥，不同时存在于同一个SWI/SNF复合物中，同时抑制BRM和BRG1蛋白功能会导致细胞死亡，即合成致死。BRG1缺失发生在多种肿瘤中，包含肺癌、胃癌、胰腺癌等恶性程度高、治疗手段有限的瘤种，例如BRG1突变在非小细胞肺癌(NSCLC)中的比例为5～10％，且与NSCLC中最普遍的驱动基因(如EGFR、ALK、MET、ROS1和RET)互斥。BRG1突变或功能缺失的肿瘤细胞高度依赖BRM，因而对BRM抑制剂较为敏感，产生协同致死作用，而正常细胞对BRM抑制剂耐受性良好，因此BRM是潜在的特异性肿瘤靶点。
蛋白降解靶向嵌合体(Proteolysis-Targeting Chimeras,PROTACs)是一种具有良好前景的新兴技术，有望将很多“无成药性”(undruggable)的潜在靶点变成“有成药性”。传统的小分子药物对于约占人体蛋白80％的无酶功能的蛋白往往无能为力，因为这些药物通常需要结合酶或受体来发挥作用。PROTACs由三部分组成：招募E3泛素连接酶的配体(anchor)、与目标蛋白(protein of interest,POI)结合的配体分子(warhead)以及将两部分连接的连接子(linker)。传统小分子需要通过对靶点蛋白关键位点的占位(即occupancy-driven)来发挥药理作用，所以需要维持一定的体内药物浓度，且对小分子结合位点的要求较高。而PROTACs通过将目标蛋白降解来实现药效学作用，理论上并不需要非常高的药物浓度。
BRM和BRG1蛋白有两个主要的功能区域，分别为ATP酶区域和溴结构域(Bromodomain)，这两个蛋白相对应的功能区域氨基酸残基同源性大于90％。小分子抑制剂很难实现对BRM和BRG1的选择性，因此对正常细胞也会有较强的杀伤能力。临床亟需具有优异稳定性和活性且对BRG1具有良好选择性的BRM蛋白降解PROTAC分子。
发明内容
在一个方面，提供了式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，
TL-Linker-DIM
(I)
其中：
所述DIM是能够结合E3泛素连接酶的配体化合物；
所述Linker是共价结合至少一个TL和至少一个DIM的连接基团；
所述TL为如下所示的基团：
Figure PCTCN2022133547-appb-000001
其中：
Figure PCTCN2022133547-appb-000002
选自：C＝C-N，其中X 4为N；或N-C＝C，其中X 4为C；
X 3选自CR 3或N；
Y 1、Y 2、Y 3、Y 4、X 1选自以下五种情况之一：
(1)Y 1为CR，Y 2选自CR 2a或N，Y 3选自CR 3a或N，Y 4选自CR 4a或N，X 1选自CR 1或N；
(2)Y 1选自CR 1a或N，Y 2为CR，Y 3选自CR 3a或N，Y 4选自CR 4a或N，X 1选自CR 1或N；
(3)Y 1选自CR 1a或N，Y 2选自CR 2a或N，Y 3为CR，Y 4选自CR 4a或N，X 1选自CR 1或N；
(4)Y 1选自CR 1a或N，Y 2选自CR 2a或N，Y 3选自CR 3a或N，Y 4为CR，X 1选自CR 1或N；
(5)Y 1选自CR 1a或N，Y 2选自CR 2a或N，Y 3选自CR 3a或N，Y 4选自CR 4a或N，X 1为CR；
所述R为
Figure PCTCN2022133547-appb-000003
其中n选自0、1、2、3或4；R a选自卤素、OH、CN、NO 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、NH 2、NH(C 1-C 6烷基)或N(C 1-C 6烷基) 2，其中所述的C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 1-C 6烷氧基任选被R b取代；R b选自卤素、OH、＝O、NH 2、CN或COOH；
所述R 1a、R 2a、R 3a、R 4a、R 1独立地选自H、卤素、NH 2、NO 2、CN、COOH、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、NH(C 3-C 6环烷基)、NH-4-8元杂环基、NH-5-10元杂芳基、NH-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-4-8元杂环基、NHC(O)(C 1-C 6烷基)、NHC(O)-O(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基)C(O)-O(C 1-C 6烷基)、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、C(O)-(C 3-C 6环烷基)、C(O)-(C 6-C 10芳基)、C(O)-5-10元杂芳基、C(O)NH 2、C(O)NH(C 1-C 6烷基)、C(O)N(C 1-C 6烷基) 2、C(O)NH(C 3-C 6环烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)、C(O)NH-5-10元杂芳基或C(O)NH-4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基任选被R 5取代；
所述R 3、R 4独立地选自H、OH、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、C 3-C 6环烷基氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、NH(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)(C 1-C 6烷基)、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、NHC(O)-4-8元杂环基、C(O)NH(C 1-C 6烷基)、C(O)NH(C 3-C 6环烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)、C(O)NH-5-10元杂芳基或C(O)NH-4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基或C 3-C 6环烷基氧基任选被R 6取代；
或者，R 1a与R 3及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基任选被R 7取代；
或者，R 4a与R 4及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基任选被R 8取代；
或者，R 2a与R 3a及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或5-14元杂环基任选被R 9取代；
或者，R 1与R 4及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基任选被R 10取代；
R 5、R 6、R 7、R 8、R 9、R 10独立地选自氘、卤素、OH、＝O、NH 2、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、CN、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基进一步任选被R 5a取代；
所述R 5a选自卤素、OH、NH 2、＝O或C 1-C 3烷基；
条件是：R 1a、R 2a、R 3a、R 4a、R 1、R 3、R 4中至少有一个不为H；且当R 4为H时，R 3不为任选取代的
Figure PCTCN2022133547-appb-000004
或任选取代的
Figure PCTCN2022133547-appb-000005
在另一方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含本文所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料。
在另一方面，提供了本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物在制备预防或治疗BRM介导的疾病的药物中的用途，其中所述BRM介导的疾病优选为肿瘤。
在另一方面，提供了用于预防或治疗BRM介导的疾病的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物。
在另一方面，提供了本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物在预防或治疗BRM介导的疾病中的用途。
在另一方面，提供了治疗由BRM介导的疾病的方法，包括对有需要的个体给予治疗有效量的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物。
附图说明
图1为A549皮下瘤模型中接受受试化合物的小鼠的肿瘤生长曲线。
具体实施方式
下面通过具体的实施方案对本公开内容进行详细描述，但并不意味着对本公开内容的任何不利限制。本文已经详细地描述了本公开内容的各种具体实施方案，对本领域的技术人员而言，在不脱离本公开内容的精神和范围的情况下针对本公开内容的具体实施方案进行各种改变和改进将是显而易见的。
本公开内容涉及一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
TL-Linker-DIM
(I)
其中：
所述DIM是能够结合E3泛素连接酶的配体化合物；
所述Linker是共价结合至少一个TL和至少一个DIM的连接基团；
所述TL为如下所示的基团：
Figure PCTCN2022133547-appb-000006
其中：
Figure PCTCN2022133547-appb-000007
选自：C＝C-N，其中X 4为N；或N-C＝C，其中X 4为C；
X 3选自CR 3或N；
Y 1、Y 2、Y 3、Y 4、X 1选自以下五种情况之一：
(1)Y 1为CR，Y 2选自CR 2a或N，Y 3选自CR 3a或N，Y 4选自CR 4a或N，X 1选自CR 1或N；
(2)Y 1选自CR 1a或N，Y 2为CR，Y 3选自CR 3a或N，Y 4选自CR 4a或N，X 1选自CR 1或N；
(3)Y 1选自CR 1a或N，Y 2选自CR 2a或N，Y 3为CR，Y 4选自CR 4a或N，X 1选自CR 1或N；
(4)Y 1选自CR 1a或N，Y 2选自CR 2a或N，Y 3选自CR 3a或N，Y 4为CR，X 1选自CR 1或N；
(5)Y 1选自CR 1a或N，Y 2选自CR 2a或N，Y 3选自CR 3a或N，Y 4选自CR 4a或N，X 1为CR；
所述R为
Figure PCTCN2022133547-appb-000008
其中n选自0、1、2、3或4；R a选自卤素、OH、CN、NO 2、C 1-C 6烷基、 C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、NH 2、NH(C 1-C 6烷基)或N(C 1-C 6烷基) 2，其中所述的C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 1-C 6烷氧基任选被R b取代；R b选自卤素、OH、＝O、NH 2、CN或COOH；
所述R 1a、R 2a、R 3a、R 4a、R 1独立地选自H、卤素、NH 2、NO 2、CN、COOH、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、NH(C 3-C 6环烷基)、NH-4-8元杂环基、NH-5-10元杂芳基、NH-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-4-8元杂环基、NHC(O)(C 1-C 6烷基)、NHC(O)-O(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基)C(O)-O(C 1-C 6烷基)、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、C(O)-(C 3-C 6环烷基)、C(O)-(C 6-C 10芳基)、C(O)-5-10元杂芳基、C(O)NH 2、C(O)NH(C 1-C 6烷基)、C(O)N(C 1-C 6烷基) 2、C(O)NH(C 3-C 6环烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)、C(O)NH-5-10元杂芳基或C(O)NH-4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基任选被R 5取代；
所述R 3、R 4独立地选自H、OH、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、C 3-C 6环烷基氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、NH(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)(C 1-C 6烷基)、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、NHC(O)-4-8元杂环基、C(O)NH(C 1-C 6烷基)、C(O)NH(C 3-C 6环烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)、C(O)NH-5-10元杂芳基或C(O)NH-4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基或C 3-C 6环烷基氧基任选被R 6取代；
或者，R 1a与R 3及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基任选被R 7取代；
或者，R 4a与R 4及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基任选被R 8取代；
或者，R 2a与R 3a及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或5-14元杂环基任选被R 9取代；
或者，R 1与R 4及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基任选被R 10取代；
R 5、R 6、R 7、R 8、R 9、R 10独立地选自氘、卤素、OH、＝O、NH 2、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、CN、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基进一步任选被R 5a取代；
所述R 5a选自卤素、OH、NH 2、＝O或C 1-C 3烷基；
条件是：R 1a、R 2a、R 3a、R 4a、R 1、R 3、R 4中至少有一个不为H；且当R 4为H时，R 3不为任选取代的
Figure PCTCN2022133547-appb-000009
或任选取代的
Figure PCTCN2022133547-appb-000010
在一些实施方案中，R 5、R 6、R 7、R 8、R 9、R 10独立地选自卤素、OH、＝O、NH 2、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、CN、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基进一步任选被R 5a取代，所述R 5a选自卤素、OH、NH 2、＝O或C 1-C 3烷基。
在一些实施方案中，
Figure PCTCN2022133547-appb-000011
选自C＝C-N，其中X 4为N。
在一些实施方案中，
Figure PCTCN2022133547-appb-000012
选自N-C＝C，其中X 4为C。
在一些实施方案中，X 3为CR 3。
在一些实施方案中，X 3为N。
在一些实施方案中，R 1a、R 2a、R 3a、R 4a、R 1独立地选自H、卤素、NH 2、CN、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、NH(C 3-C 6环烷基)、NH-4-8元杂环基、NH-5-10元杂芳基、NH-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)-4-8 元杂环基、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、C(O)NH(C 3-C 6环烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)、C(O)NH-5-10元杂芳基或C(O)NH-4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5取代。
在一些实施方案中，R 1a选自H、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5取代。
在一些实施方案中，R 1a选自H、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、NH(C 1-C 6烷基)或N(C 1-C 6烷基) 2，其中所述的C 1-C 6烷基任选被R 5取代。
在一些实施方案中，R 2a选自H、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)-4-8元杂环基、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5取代。
在一些实施方案中，R 2a选自H、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5取代。
在一些实施方案中，R 3a选自H、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、NH(C 3-C 6环烷基)、NH-4-8元杂环基、NH-5-10元杂芳基、NH-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)-4-8元杂环基、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)或NHC(O)-5-10元杂芳基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5取代。
在一些实施方案中，R 3a选自H、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、NH(C 3-C 6环烷基)、NH-4-8元杂环基、NH-5-10元杂芳基或NH-(C 6-C 10芳基)，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5取代。
在一些实施方案中，R 3a选自H、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，所述C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5取代。
在一些实施方案中，R 3a选自H或任选被R 5取代的4-8元杂环基。
在一些实施方案中，R 3a选自H或任选被R 5取代的哌嗪基。
在一些实施方案中，R 4a选自H、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)-4-8元杂环基、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、C(O)NH(C 3-C 6环烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)、C(O)NH-5-10元杂芳基或C(O)NH-4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基任选被R 5取代。
在一些实施方案中，R 4a选自H、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)-4-8元杂环基、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、C(O)NH(C 3-C 6环烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)、C(O)NH-5-10元杂芳基或C(O)NH-4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基任选被R 5取代。
在一些实施方案中，R 4a选自H、NH 2、C 1-C 6烷氧基或NHC(O)(C 3-C 6环烷基)，其中所述的C 1-C 6烷氧基或C 3-C 6环烷基任选被R 5取代。
在一些实施方案中，R 1选自H、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)-4-8元杂环基、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5取代。
在一些实施方案中，R 1选自H、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 6-C 10芳基、 5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5取代。
在一些实施方案中，R 5选自卤素、OH、＝O、NH 2、CN、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 5选自卤素、OH、＝O、NH 2、CN、C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基，所述C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 5选自苯基。
在一些实施方案中，R 1a选自H。
在一些实施方案中，R 2a选自H或NH 2。
在一些实施方案中，R 2a选自NH 2。
在一些实施方案中，R 3a选自H或
Figure PCTCN2022133547-appb-000013
在一些实施方案中，R 4a选自H、NH 2、
Figure PCTCN2022133547-appb-000014
或OCH 3。
在一些实施方案中，R 4a选自H。
在一些实施方案中，R 1选自H或NH 2。
在一些实施方案中，R 3选自H、OH、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6环烷基氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、NH(C 3-C 6环烷基)、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、NHC(O)(C 1-C 6烷基)、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、C(O)NH(C 1-C 6烷基)、C(O)NH(C 3-C 6环烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)或C(O)NH-5-10元杂芳基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 6取代。
在一些实施方案中，R 3选自H、OH、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 1-C 6烷氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、NH(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、NHC(O)(C 1-C 6烷基)、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、C(O)NH(C 1-C 6烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)或C(O)NH-5-10元杂芳基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 6取代。
在一些实施方案中，R 3选自H、OH、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 1-C 6烷氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、NHC(O)(C 1-C 6烷基)、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、C(O)NH(C 1-C 6烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)或C(O)NH-5-10元杂芳基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 1-C 6烷氧基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 6取代。
在一些实施方案中，R 3选自H、NH 2、NH(C 1-C 3烷基)、NH(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、C 2-C 3烯基、C 2-C 3炔基或C(O)NH(C 1-C 3烷基)，其中所述的C 2-C 3烯基、C 2-C 3炔基、C 1-C 3烷基或C 3-C 6环烷基任选被R 6取代。
在一些实施方案中，R 3选自H、NH 2、NH(C 1-C 3烷基)、C 2-C 3烯基、C 2-C 3炔基或C(O)NH(C 1-C 3烷基)，其中所述的C 2-C 3烯基、C 2-C 3炔基或C 1-C 3烷基任选被R 6取代。在一些实施方案中，R 3选自H、NH 2、C 2-C 3烯基、C 2-C 3炔基或C(O)NH(C 1-C 3烷基)，其中所述的C 2-C 3烯基、C 2-C 3炔基或C 1-C 3烷基任选被R 6取代。
在一些实施方案中，R 4选自H、OH、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、NHC(O)(C 1-C 6烷基)、NHC(O)-(C 6-C 10 芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、C(O)NH(C 1-C 6烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)或C(O)NH-5-10元杂芳基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 6取代。
在一些实施方案中，R 4选自H、OH、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、C(O)NH(C 1-C 6烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)或C(O)NH-5-10元杂芳基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 6取代。
在一些实施方案中，R 4选自H、C 1-C 3烷基、4-8元杂环基、C(O)NH(C 1-C 3烷基)或C(O)NH-(C 6-C 10芳基)，其中所述的C 1-C 3烷基、4-8元杂环基或C 6-C 10芳基任选被R 6取代。
在一些实施方案中，R 4选自H、4-8元杂环基、C(O)NH(C 1-C 3烷基)或C(O)NH-(C 6-C 10芳基)，其中所述的C 1-C 3烷基、4-8元杂环基或C 6-C 10芳基任选被R 6取代。
在一些实施方案中，R 4选自H、CH 3、C(O)NH-苯基、C(O)NH(C 1-C 3烷基)、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基或8-氮杂双环[3.2.1]辛烷基，所述甲基、苯基、C 1-C 3烷基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基或8-氮杂双环[3.2.1]辛烷基任选被R 6取代。
在一些实施方案中，R 4选自H、CH 3、C(O)NH-苯基、C(O)NH(C 1-C 3烷基)、氮杂环丁基或哌啶基，所述甲基、苯基、C 1-C 3烷基、氮杂环丁基或哌啶基任选被R 6取代。
在一些实施方案中，R 4选自H、C(O)NH-苯基、C(O)NH(C 1-C 3烷基)、氮杂环丁基或哌啶基，所述苯基、C 1-C 3烷基、氮杂环丁基或哌啶基任选被R 6取代。
在一些实施方案中，R 6选自氘、卤素、OH、NH 2、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、CN、C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 6选自卤素、OH、NH 2、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、CN、C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 6选自氘、C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 6选自C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，所述C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 6选自C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基，所述C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 6选自氘、OH、卤素、C 1-C 6烷基、吡啶基、嘧啶基、哌啶基、氮杂环丁基或苯基，所述C 1-C 6烷基、吡啶基、嘧啶基、哌啶基、氮杂环丁基或苯基任选被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 6选自氘、卤素、C 1-C 6烷基、吡啶基、嘧啶基、哌啶基、氮杂环丁基或苯基，所述C 1-C 6烷基、吡啶基、嘧啶基、哌啶基、氮杂环丁基或苯基任选被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 6选自任选被R 5a取代的吡啶基、苯基或哌啶基。
在一些实施方案中，R 6选自任选被R 5a取代的吡啶基或苯基。
在一些实施方案中，R 6选自氘、OH、氟、甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、嘧啶-2-基、吡啶-4-基、吡啶-2-基、哌啶基、氮杂环丁基或苯基。
在一些实施方案中，R 6选自氘、氟、甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、嘧啶-2-基、吡啶-4-基、吡啶-2-基、哌啶基、氮杂环丁基或苯基。
在一些实施方案中，R 6选自吡啶-4-基、苯基或哌啶基。
在一些实施方案中，R 6选自吡啶-4-基或苯基。
在一些实施方案中，R 6选自苯基。
在一些实施方案中，R 6选自哌啶基。
在一些实施方案中，R 6选自吡啶-2-基或嘧啶-2-基。
在一些实施方案种，R 3选自H、NH 2、NHCH 3、NHCD 3、NHCH 2CH 3、NHCH 2CF 3、NHCH(CH 3) 2、 NHCH 2CH 2CH 3、
Figure PCTCN2022133547-appb-000015
在一些实施方案中，R 3选自H、NH 2、NHCH 3、NHCD 3、NHCH 2CH 3、NHCH 2CF 3、NHCH(CH 3) 2、NHCH 2CH 2CH 3、
Figure PCTCN2022133547-appb-000016
在一些实施方案中，R 3选自H、NH 2、NHCH 3、
Figure PCTCN2022133547-appb-000017
在一些实施方案中，R 3选自H、NH 2、
Figure PCTCN2022133547-appb-000018
在一些实施方案中，R 3选自H、NH 2、NHCH 3、NHCD 3、NHCH 2CH 3、NHCH 2CF 3、NHCH(CH 3) 2、NHCH 2CH 2CH 3、
Figure PCTCN2022133547-appb-000019
在一些实施方案中，R 3选自H、NH 2或NHCH 3。
在一些实施方案中，R 4选自H、
Figure PCTCN2022133547-appb-000020
Figure PCTCN2022133547-appb-000021
Figure PCTCN2022133547-appb-000022
在一些实施方案中，R 4选自H、
Figure PCTCN2022133547-appb-000023
Figure PCTCN2022133547-appb-000024
在一些实施方案中，R 4选自H、
Figure PCTCN2022133547-appb-000025
在一些实施方案中，R 4选自
Figure PCTCN2022133547-appb-000026
Figure PCTCN2022133547-appb-000027
Figure PCTCN2022133547-appb-000028
在一些实施方案中，R 4选自
Figure PCTCN2022133547-appb-000029
在一些实施方案中，R 1a与R 3及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基任选被R 7取代。
在一些实施方案中，R 1a与R 3及其各自相连的原子共同形成任选被R 7取代的5-14元杂环基。
在一些实施方案中，R 1a与R 3及其各自相连的原子共同形成任选被R 7取代的6-10元杂环基。
在一些实施方案中，R 1a与R 3及其各自相连的原子共同形成任选被R 7取代的6-8元杂环基。
在一些实施方案中，R 1a与R 3及其各自相连的原子共同形成任选被R 7取代的
Figure PCTCN2022133547-appb-000030
在一些实施方案中，R 7选自OH、＝O、NH 2、C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选进一步被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 7选自OH、＝O、NH 2、C 1-C 6烷基或4-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基或4-8元杂环基任选进一步被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 7选自＝O或任选被R 5a取代的4-8元杂环基。
在一些实施方案中，R 7选自＝O或任选被R 5a取代的哌嗪基。
在一些实施方案中，R 7选自＝O或
Figure PCTCN2022133547-appb-000031
在一些实施方案中，R 1a与R 3及其各自相连的原子共同形成
Figure PCTCN2022133547-appb-000032
在一些实施方案中，R 4a与R 4及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基任选被R 8取代。
在一些实施方案中，R 4a与R 4及其各自相连的原子共同形成任选被R 8取代的5-14元杂环基。
在一些实施方案中，R 4a与R 4及其各自相连的原子共同形成任选被R 8取代的6-14元杂环基。
在一些实施方案中，R 4a与R 4及其各自相连的原子共同形成任选被R 8取代的6-11元杂环基。
在一些实施方案中，R 4a与R 4及其各自相连的原子共同形成任选被R 8取代的
Figure PCTCN2022133547-appb-000033
Figure PCTCN2022133547-appb-000034
在一些实施方案中，R 8选自OH、＝O、NH 2、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选进一步被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 8选自OH、＝O、NH 2、C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基或4-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基或4-8元杂环基任选进一步被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 8选自＝O或任选被R 5a取代的4-8元杂环基。
在一些实施方案中，R 8选自＝O或任选被R 5a取代的哌嗪基。
在一些实施方案中，R 8选自＝O或
Figure PCTCN2022133547-appb-000035
在一些实施方案中，R 4a与R 4及其各自相连的原子共同形成
Figure PCTCN2022133547-appb-000036
Figure PCTCN2022133547-appb-000037
在一些实施方案中，R 4a与R 4及其各自相连的原子共同形成
Figure PCTCN2022133547-appb-000038
Figure PCTCN2022133547-appb-000039
且其中X 4为N。
在一些实施方案中，R 2a与R 3a及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或5-14元杂环基任选被R 9取代。
在一些实施方案中，R 2a与R 3a及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基任选被R 9取代。
在一些实施方案中，R 2a与R 3a及其各自相连的原子共同形成任选被R 9取代的5-10元杂环基。
在一些实施方案中，R 2a与R 3a及其各自相连的原子共同形成任选被R 9取代的5-8元杂环基。
在一些实施方案中，R 2a与R 3a及其各自相连的原子共同形成任选被R 9取代的
Figure PCTCN2022133547-appb-000040
在一些实施方案中，R 9选自OH、＝O、NH 2、C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选进一步被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 9选自OH、＝O、NH 2或C 1-C 6烷基，所述C 1-C 6烷基任选进一步被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 2a与R 3a及其各自相连的原子共同形成
Figure PCTCN2022133547-appb-000041
在一些实施方案中，R 1与R 4及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基任选被R 10取代。
在一些实施方案中，R 1与R 4及其各自相连的原子共同形成任选被R 10取代的5-10元杂环基。
在一些实施方案中，R 1与R 4及其各自相连的原子共同形成任选被R 10取代的5-8元杂环基。
在一些实施方案中，R 1与R 4及其各自相连的原子共同形成任选被R 10取代的
Figure PCTCN2022133547-appb-000042
在一些实施方案中，R 1与R 4及其各自相连的原子共同形成任选被R 10取代的哌嗪基或哌啶基。
在一些实施方案中，R 10选自OH、＝O、NH 2、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选进一步被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 10选自OH、＝O、NH 2、C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基或4-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 6-C 10芳基或4-8元杂环基任选进一步被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 10选自＝O或任选被R 5a取代的4-8元杂环基。
在一些实施方案中，R 10选自＝O、氮杂环丁基或哌嗪基，所述氮杂环丁基或哌嗪基任选被R 5a取代。
在一些实施方案中，R 10选自＝O、
Figure PCTCN2022133547-appb-000043
在一些实施方案中，R 1与R 4及其各自相连的原子共同形成
Figure PCTCN2022133547-appb-000044
在一些实施方案中，R 1与R 4及其各自相连的原子共同形成
Figure PCTCN2022133547-appb-000045
在一些实施方案中，R a选自卤素、OH、NH 2、CN、C 1-C 6烷基或C 1-C 6烷氧基，其中所述的C 1-C 6烷基或C 1-C 6烷氧基任选被R b取代。
在一些实施方案中，R a选自卤素、OH、NH 2或任选被R b取代的C 1-C 6烷基。
在一些实施方案中，R b选自卤素、OH或＝O。
在一些实施方案中，R a选自卤素、OH、NH 2或卤代C 1-C 6烷基。
在一些实施方案中，R a选自F或Cl。
在一些实施方案中，R a选自F。
在一些实施方案中，n选自0、1或2。
在一些实施方案中，n选自0或1。
在一些实施方案中，n选自0。
在一些实施方案中，R选自
Figure PCTCN2022133547-appb-000046
Figure PCTCN2022133547-appb-000047
在一些实施方案中，R选自
Figure PCTCN2022133547-appb-000048
在一些实施方案中，R选自
Figure PCTCN2022133547-appb-000049
在一些实施方案中，R选自
Figure PCTCN2022133547-appb-000050
在一些实施方案中，R选自
Figure PCTCN2022133547-appb-000051
在一些实施方案中，Y 1为CR，Y 2选自CR 2a或N，Y 3选自CR 3a或N，Y 4选自CR 4a或N，X 1选自CR 1或N。
在一些实施方案中，Y 1为CR，Y 2为N，Y 3为N，Y 4为CR 4a，X 1为CR 1。
在一些实施方案中，Y 1为CR，R为
Figure PCTCN2022133547-appb-000052
Y 2为N，Y 3为N，Y 4为CR 4a，R 4a为-NH 2或
Figure PCTCN2022133547-appb-000053
X 1为CH。
在一些实施方案中，Y 1为CR，R为
Figure PCTCN2022133547-appb-000054
Y 2为N，Y 3为N，Y 4为CR 4a，且R 4a与R 4及其各自相连的原子共同形成任选被R 8取代的
Figure PCTCN2022133547-appb-000055
X 1为CH。
在一些实施方案中，Y 1选自CR 1a或N，Y 2为CR，Y 3选自CR 3a或N，Y 4选自CR 4a或N，X 1选自CR 1或N。
在一些实施方案中，Y 1选自CR 1a或N，Y 2为CR，Y 3为CH或N，Y 4为CR 4a或N，X 1选自CR 1。
在一些实施方案中，Y 1选自CH或N，Y 2为CR，R为
Figure PCTCN2022133547-appb-000056
Y 3选自CR 3a或N，Y 4选自CH、C-OCH 3或N，X 1选自CH或C-NH 2。
在一些实施方案中，Y 1选自CH或N，Y 2为CR，R为
Figure PCTCN2022133547-appb-000057
Y 3为CH，Y 4为CH，X 1为CR 1，且R 1与R 4及其各自相连的原子共同形成任选被R 10取代的
Figure PCTCN2022133547-appb-000058
在一些实施方案中，Y 1选自CR 1a或N，Y 2选自CR 2a或N，Y 3为CR，Y 4选自CR 4a或N，X 1选自CR 1或N。
在一些实施方案中，Y 1为N，Y 2为N，Y 3为CR，Y 4为CR 4a，X 1选自CR 1或N。
在一些实施方案中，Y 1为N，Y 2为N，Y 3为CR，R为
Figure PCTCN2022133547-appb-000059
Y 4为CH，X 1选自CH或N。
在一些实施方案中，Y 1为N，Y 2为N，Y 3为CR，R为
Figure PCTCN2022133547-appb-000060
Y 4为CH，X 1选自CH或N。
在一些实施方案中，Y 1为N，Y 2为N，Y 3为CR，R为
Figure PCTCN2022133547-appb-000061
Y 4为CH，X 1选自N。
在一些实施方案中，Y 1为N，Y 2为N，Y 3为CR，R为
Figure PCTCN2022133547-appb-000062
Y 4为CH，X 1选自N。
在一些实施方案中，Y 1选自CR 1a或N，Y 2选自CR 2a或N，Y 3选自CR 3a或N，Y 4为CR，X 1选自CR 1或N。
在一些实施方案中，Y 1为CR 1a，Y 2为N，Y 3为N，Y 4为CR，X 1为CR 1。
在一些实施方案中，Y 1为CR 1a，Y 2为N，Y 3为N，Y 4为CR，R为
Figure PCTCN2022133547-appb-000063
X 1为CH，且R 1a与R 3及其各自相连的原子共同形成任选被R 7取代的
Figure PCTCN2022133547-appb-000064
在一些实施方案中，Y 1选自CR 1a或N，Y 2选自CR 2a或N，Y 3选自CR 3a或N，Y 4选自CR 4a或N，X 1为CR。
在一些实施方案中，Y 1为N，Y 2为CR 2a，Y 3选自CR 3a，Y 4为CR 4a，X 1为CR。
在一些实施方案中，Y 1为N，Y 2为C-NH 2，Y 3选自CH或CR 3a，R 3a为
Figure PCTCN2022133547-appb-000065
Y 4为CH，X 1为CR，R为
Figure PCTCN2022133547-appb-000066
在一些实施方案中，Y 1为N，Y 2为CR 2a，Y 3选自CR 3a，Y 4为CH，且R 2a与R 3a及其各自相连的原 子共同形成任选被R 9取代的
Figure PCTCN2022133547-appb-000067
X 1为CR，R为
Figure PCTCN2022133547-appb-000068
在一些实施方案中，所述TL通过R 4与Linker相连，即所述TL为
Figure PCTCN2022133547-appb-000069
在一些实施方案中，所述TL通过R 3与Linker相连，即所述TL为
Figure PCTCN2022133547-appb-000070
在一些实施方案中，所述TL通过R 3a与Linker相连，即所述TL为
Figure PCTCN2022133547-appb-000071
在一些实施方案中，所述TL通过R 4a与Linker相连，即所述TL为
Figure PCTCN2022133547-appb-000072
在一些实施方案中，所述TL通过R 4a与R 4及其各自相连的原子共同形成的环的环原子与Linker相连，或者通过环上的取代基R 8与Linker相连。
在一些实施方案中，所述TL通过R 8与Linker相连。
在一些实施方案中，所述TL通过R 1与R 4及其各自相连的原子共同形成的环的环原子与Linker相连，或者通过环上的取代基R 10与Linker相连。
在一些实施方案中，所述TL通过R 10与Linker相连。
在一些实施方案中，所述TL通过R 1a与R 3及其各自相连的原子共同形成的环的环原子与Linker相连，或者通过环上的取代基R 7与Linker相连。
在一些实施方案中，所述TL通过R 2a与R 3a及其各自相连的原子共同形成的环的环原子与Linker相连，或者通过环上的取代基R 9与Linker相连。
在一些实施方案中，所述TL通过R 2a与R 3a及其各自相连的原子共同形成的环的环原子与Linker相连。
在一些实施方案中，所述TL进一步选自如下所示的基团：
Figure PCTCN2022133547-appb-000073
其中：R a、
Figure PCTCN2022133547-appb-000074
Y 2、Y 3、Y 4、X 1、X 3、R 4和n如上文所定义。在一些实施方案中，所述TL进一步选自如下所示的基团：
Figure PCTCN2022133547-appb-000075
其中：R a、
Figure PCTCN2022133547-appb-000076
Y 1、Y 3、Y 4、X 1、X 3、R 4和n如上文所定义。在一些实施方案中，所述TL进一步选自如下所示的基团：
Figure PCTCN2022133547-appb-000077
其中：R a、
Figure PCTCN2022133547-appb-000078
Y 1、Y 2、Y 4、X 1、X 3、R 4和n如上文所定义。在一些实施方案中，所述TL进一步选自如下所示的基团：
Figure PCTCN2022133547-appb-000079
其中：R a、
Figure PCTCN2022133547-appb-000080
Y 1、Y 2、Y 3、X 1、X 3、R 4和n如上文所定义。在一些实施方案中，所述TL进一步选自如下所示的基团：
Figure PCTCN2022133547-appb-000081
其中：R a、
Figure PCTCN2022133547-appb-000082
Y 1、Y 2、Y 3、Y 4、X 3、R 4和n如上文所定义。在一些实施方案中，所述TL选自如下结构：
Figure PCTCN2022133547-appb-000083
Figure PCTCN2022133547-appb-000084
Figure PCTCN2022133547-appb-000085
Figure PCTCN2022133547-appb-000086
在一些实施方案中，所述TL选自如下结构
Figure PCTCN2022133547-appb-000087
Figure PCTCN2022133547-appb-000088
Figure PCTCN2022133547-appb-000089
在一些实施方案中，所述TL选自
Figure PCTCN2022133547-appb-000090
在一些实施方案中，所述Linker是共价结合一个TL和一个DIM的连接基团。
在一些实施方案中，所述Linker选自-L A-、-L B-、-R 1L-、-R 2L-、-Q 1-、-Q 2-、
Figure PCTCN2022133547-appb-000091
Figure PCTCN2022133547-appb-000092
Figure PCTCN2022133547-appb-000093
其中：-L A-、-L B-彼此独立地选自键、-O-、-S-、-NR 3’-、-CR 4’R 5’-、-C(O)-、-S(O)-、-S(O) 2-、-C(S)-、-C(O)O-或-C(O)NR 6’-；
R 1L和R 2L彼此独立地选自键、亚烷基、亚杂烷基、亚烯基和亚炔基，其中所述的亚烷基、亚杂烷基、亚烯基和亚炔基任选被选自以下的基团取代：卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、OH、羟烷基、CN、NH 2、＝O、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基；
Q 1、Q 2、Q 3和Q 4彼此独立地选自环烷基、杂环基、芳基、杂芳基或环烯基，其中所述的环烷基、杂环基、芳基、杂芳基和环烯基各自独立地任选被选自以下的基团取代：卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、OH、羟烷基、CN、NH 2、＝O、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基；
R 3’选自H、烷基、杂烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R 4’和R 5’各自独立地选自H、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、OH、羟烷基、CN、NH 2、＝O、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
R 6’选自H、烷基、杂烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基。
在一些实施方案中，所述Linker选自以下结构：
Figure PCTCN2022133547-appb-000094
Figure PCTCN2022133547-appb-000095
Figure PCTCN2022133547-appb-000096
Figure PCTCN2022133547-appb-000097
Figure PCTCN2022133547-appb-000098
Figure PCTCN2022133547-appb-000099
在一些实施方案中，所述Linker选自：键、-O-、-C(O)-、-CH 2-、
Figure PCTCN2022133547-appb-000100
Figure PCTCN2022133547-appb-000101
Figure PCTCN2022133547-appb-000102
Figure PCTCN2022133547-appb-000103
Figure PCTCN2022133547-appb-000104
Figure PCTCN2022133547-appb-000105
Figure PCTCN2022133547-appb-000106
Figure PCTCN2022133547-appb-000107
Figure PCTCN2022133547-appb-000108
Figure PCTCN2022133547-appb-000109
Figure PCTCN2022133547-appb-000110
在一些实施方案中，所述Linker选自：
Figure PCTCN2022133547-appb-000111
Figure PCTCN2022133547-appb-000112
Figure PCTCN2022133547-appb-000113
在一些实施方案中，所述Linker选自
Figure PCTCN2022133547-appb-000114
Figure PCTCN2022133547-appb-000115
Figure PCTCN2022133547-appb-000116
Figure PCTCN2022133547-appb-000117
在一些实施方案中，所述DIM选自VHL配体，即结合Von Hippel-Lindau型E3泛素连接酶的结合部分；或者CRBN配体，即结合cereblon型E3泛素连接酶的结合部分。
在一些实施方案中，所述DIM选自CRBN配体。
在一些实施方案中，所述DIM选自式(DIM-1)或(DIM-2)所示结构：
Figure PCTCN2022133547-appb-000118
其中：
Figure PCTCN2022133547-appb-000119
选自
Figure PCTCN2022133547-appb-000120
Y为键，或者Y选自Y A、O、NH、NR E、C(O)O、C(O)NR E’、NR E’C(O)、Y A-NH、Y A-NR E、Y A-C(O)、Y A-C(O)O、Y A-OC(O)、Y A-C(O)NR E’或Y A-NR E’C(O)，其中所述Y A选自C 1-C 6亚烷基、C 2-C 6亚烯基或C 2-C 6亚炔基；
X选自C(O)或C(R A) 2；X A-X B选自C(R A)＝N或C(R A) 2-C(R A) 2；
每一个R A独立地选自H或C 1-C 3烷基，所述C 1-C 3烷基任选被C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基取代；
每一个R A’独立地选自C 1-C 3烷基；
每一个R B独立地选自H或C 1-C 3烷基，或者两个R B与其相连的原子一起形成C(O)、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6环烯基或4-6元杂环基；
R C选自H、卤素或C 1-C 3烷基；
每一个R D独立地选自卤素、NO 2、NH 2、OH、COOH、C 1-C 6烷基或C 1-C 6烷氧基；
每一个R E独立地选自C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环烷基、C(O)-C 1-C 6烷基、C(O)-C 2-C 6烯基、C(O)-C 3-C 8环烷基或C(O)-3-8元杂环烷基，所述R E任选被选自以下的基团取代：卤素、N(R a) 2、NHC(O)R a、NHC(O)OR a、OR b、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环烷基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基，其中所述C 3-C 8环烷基、3-8元杂环烷基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选进一步被选自以下的基团取代：卤素、NH 2、CN、NO 2、OH、COOH、C 1-C 6烷基、C 1-C 6卤代烷基、C 1-C 6烷氧基或C 1-C 6卤代烷氧基；
R E’选自H、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环烷基，所述C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环烷基任选被选自以下的基团取代：卤素、N(R a) 2、NHC(O)R a、NHC(O)OR a、OR b、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环烷基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基，其中所述C 3-C 8环烷基、3-8元杂环烷基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选进一步被选自以下的基团取代：卤素、NH 2、CN、NO 2、OH、COOH、C 1-C 6烷基、C 1-C 6卤代烷基、C 1-C 6烷氧基或C 1-C 6卤代烷氧基；
每一个R a独立地选自H或C 1-C 6烷基；
R b选自H或对甲苯磺酰基；
t选自0或1；
m选自0、1、2或3；
p选自0、1或2。
在一些实施方案中，所述DIM进一步选自式(DIM-3)或(DIM-4)所示结构：
Figure PCTCN2022133547-appb-000121
其中，所述环A、Y、R A、R A’、R B、R C、R D、m和p如上文中所定义。
在一些实施方案中，所述DIM进一步选自式(DIM-5)、(DIM-6)、(DIM-7)或(DIM-8)所示结构：
Figure PCTCN2022133547-appb-000122
其中，所述Y、X、X A-X B、R A、R A’、R B、R C、R D、m和p如上文中所定义。
在一些实施方案中，所述DIM进一步选自式(DIM-9)或(DIM-10)所示结构：
Figure PCTCN2022133547-appb-000123
其中，所述Y、X、X A-X B、R A、R A’、R B、R C、R D、m和p如上文中所定义。
在一些实施方案中，所述DIM选自式(DIM-11)所示结构：
Figure PCTCN2022133547-appb-000124
其中：
X C选自键、-CH 2-、-CHCF 3-、-SO 2-、-S(O)-、-P(O)R’-、-P(O)OR’-、-P(O)NR’ 2-、-C(O)-、-C(S)-或
Figure PCTCN2022133547-appb-000125
X D选自C、N或Si；
X E选自键、-CR’ 2-、-NR’-、-O-、-S-或-SiR’ 2-；
R F不存在，或者R F选自H、氘、卤素、CN、-OR’-、-SR’-、-S(O)R’-、-S(O) 2R’-、-NR’ 2-、-P(O)(OR’) 2、-P(O)(NR’ 2)OR’-、-P(O)(NR’ 2) 2、-Si(OH) 2R’、-Si(OH)R’ 2、-SiR’ 3或C 1-C 4烷基；
每一个R G独立地选自H、氘、R H、卤素、CN、-NO 2、-OR’、-SR’、-NR’ 2、-SiR’ 3、-S(O) 2R’、-S(O) 2NR’ 2、-S(O)R’、-C(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NR’ 2、-C(O)N(R’)OR’、-C(R’) 2N(R’)C(O)R’、-C(R’) 2N(R’)C(O)NR’ 2、-OC(O)R’、-OC(O)NR’ 2、-OP(O)R’ 2、-OP(O)(OR’) 2、-OP(O)(OR’)NR’ 2、-OP(O)(NR’ 2) 2、-N(R’)C(O)OR’、-N(R’)C(O)R’、-N(R’)C(O)NR’ 2、-N(R’)S(O) 2R’、-NP(O)R’ 2、-N(R’)P(O)(OR’) 2、-N(R’)P(O)(OR’)NR’ 2或-N(R’)P(O)(NR’ 2) 2；
每一个R H独立地选自C 1-C 6烷基、苯基、4-7元杂环基或5-6元杂芳基；
环E、环F、环G彼此独立地选自苯基、6元杂芳基、C 5-C 7环烷基、C 5-C 7环烯基、5-7元杂环基或5-6元杂芳基，其中环E、环F和环G各自任选进一步被＝O取代；
L 1选自键、C 1-C 3亚烷基、C 2-C 3亚烯基或C 2-C 3亚炔基，其中所述C 1-C 3亚烷基、C 2-C 3亚烯基或C 2-C 3亚炔基中的任意1或2个亚甲基任选被置换为以下基团：-O-、-C(O)-、-C(S)-、-C(R’) 2-、-CH(R’)-、-C(F) 2-、-N(R’)-、-S-或-S(O) 2-；
每一个R’独立地选自H、C 1-C 6烷基、苯基、4-7元杂环基或5-6元杂芳基，或者两个R’与其相连的原子共同形成4-7元杂环基或5-6元杂芳基；
q选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。
在一些实施方案中，所述DIM选自式(DIM-11’)所示结构：
Figure PCTCN2022133547-appb-000126
其中所述X C、R F、R G、q、环E、环F和环G如式(DIM-11)中所定义。
在一些实施方案中，所述DIM选自式(DIM-12)所示结构：
Figure PCTCN2022133547-appb-000127
其中：环H选自C 5-C 9环烷基、C 5-C 9环烯基或5-9元杂环基，所述C 5-C 9环烷基、C 5-C 9环烯基或5-9元杂环基任选被＝O所取代；k选自0、1、2、3或4；X C、X D、X E、R F、R G、L 1和环E如式(DIM-11)中所定义。
在一些实施方案中，所述DIM选自(DIM-12’)所示结构：
Figure PCTCN2022133547-appb-000128
其中，所述X C、R F、R G、k、环E和环H如式(DIM-12)中所定义。
在一些实施方案中，所述DIM选自VHL配体。
在一些实施方案中，所述DIM选自式(DIM-13)、(DIM-14)、(DIM-15)、(DIM-16)或(DIM-17)所示结构：
Figure PCTCN2022133547-appb-000129
其中：
R J选自任选取代的C 1-C 6烷基、任选取代的-(CH 2) jOH、任选取代的-(CH 2) jSH、任选取代的-(CH 2) j-O-(C 1-C 6)烷基、任选取代的-(CH 2) j-CH 2OCH 2-(C 0-C 6)烷基、任选取代的-(CH 2) jCOOH、任选取代的-(CH 2) jC(O)-(C 1-C 6烷基)、任选取代的-(CH 2) jNR cR d、任选取代的-(CH 2) jNHC(O)-R c、任选取代的-(CH 2) jC(O)-NR cR d、任选取代的-(CH 2) jOC(O)-NR cR d、-(CH 2O) jH、任选取代的-(CH 2) jOC(O)-(C 1-C 6烷基)、任选取代的-(CH 2) jC(O)-O-(C 1-C 6烷基)、任选取代的-(CH 2O) jCOOH、任选取代的-(OCH 2) jO-(C 1-C 6烷基)、任选取代的-(CH 2O) jC(O)-(C 1-C 6烷基)、任选取代的-(OCH 2) jNHC(O)-R c、任选取代的-(CH 2O) jC(O)-NR cR d、-(CH 2CH 2O) jH、任选取代的-(CH 2CH 2O) jCOOH、任选取代的-(OCH 2CH 2) jO-(C 1-C 6烷基)、任选取代的-(CH 2CH 2O) jC(O)-(C 1-C 6烷基)、任选取代的-(OCH 2CH 2) jNHC(O)-R c、任选取代的-(CH 2CH 2O) jC(O)-NR cR d、任选取代的-SO 2R s、任选取代的-S(O)R s、NO 2、CN或卤素；
R c和R d彼此独立地选自H或C 1-C 6烷基，所述C 1-C 6烷基任选被OH或卤素取代；
R s选自C 1-C 6烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基或-(CH 2) gNR cR d；
X F和X G彼此独立地选自C＝O、C＝S、S(O)或S(O) 2；
R L选自任选取代的-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w(C 1-C 6)烷基、任选取代的-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) wNR 1NR 2N、任选取代的-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-芳基、任选取代的-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-杂芳基、任选取代的-(CH 2) j-(C＝O) vNR c(SO 2) w-杂环基、任选取代的 -NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-C 1-C 6烷基、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-NR 1NR 2N、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-NR cC(O)R 1N、任选取代的-NR e-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-芳基、任选取代的-NR e-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-杂芳基或任选取代的-NR e-(CH 2) j-(C＝O) vNR c(SO 2) w-杂环基、任选取代的-X R2’-C 1-C 6烷基、任选取代的-X R2’-芳基、任选取代的-X R2’-杂芳基或任选取代的-X R2’-杂环基；
R M选自任选取代的C 1-C 6烷基、任选取代的-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-C 1-C 6烷基、任选取代的-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-NR 1NR 2N、任选取代的-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-NR cC(O)R 1N、任选取代的-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-C(O)NR cR d、任选取代的-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-芳基、任选取代的-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-杂芳基、任选取代的-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-杂环、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-C 1-C 6烷基、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-NR 1NR 2N、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-NR cC(O)R 1N、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-芳基、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-杂芳基、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-杂环、任选取代的-O-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-C 1-C 6烷基、任选取代的-O-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-NR 1NR 2N、任选取代的-O-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-NR cC(O)R 1N、任选取代的-O-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-芳基、任选取代的-O-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-杂芳基或任选取代的-O-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-杂环、任选取代的-(CH 2) j-(V) n’-(CH 2) j-(V) n’-C 1-C 6烷基、任选取代的-(CH 2) j-(V) n’-(CH 2) n-(V) n’-芳基、任选取代的-(CH 2) j-(V) n’-(CH 2) j-(V) n’-杂芳基、任选取代的-(CH 2) j-(V) n’-(CH 2) j-(V) n’-杂环基、任选取代的-(CH 2) j-N(R 1’)(C＝O) m’-(V) n’-C 1-C 6烷基、任选取代的-(CH 2) j-N(R e)(C＝O) m’-(V) n’-芳基、任选取代的-(CH 2) j-N(R e)(C＝O) m’-(V) n’-杂芳基、任选取代的-(CH 2) j-N(R e)(C＝O) m’-(V) n’-杂环基、任选取代的-X R3’-C 1-C 6烷基、任选取代的-X R3’-芳基、任选取代的-X R3’-杂芳基或任选取代的-X R3’-杂环基；
其中R 1N和R 2N各自独立地是H、任选被OH和卤素取代的C 1-C 6烷基、或任选取代的-(CH 2) j-芳基、-(CH 2) j-杂芳基或-(CH 2) j-杂环基；
V是O、S或NR c；
R e独立地选自H或C 1-C 3烷基；
X R2’和X R3’各自独立地选自任选取代的-(CH 2) j-、-(CH 2) j-C(X v)＝C(X v)-、-(CH 2) j-C≡C-、-(CH 2CH 2O) j-或C 3-C 6环烷基，其中X v是H、卤素或任选取代的C 1-C 3烷基；
g独立地是0、1、2、3、4、5、6；
j独立地是0、1、2、3、4、5或6；
m’独立地是0或1；
n’独立地是0或1；
u独立地是0或1；
v独立地是0或1；
w独立地是0或1。
在一些实施方案中，所述式(DIM-14)、(DIM-15)、(DIM-16)或(DIM-17)中的R J均为OH。
在一些实施方案中，所述式(DIM-13)、(DIM-14)或(DIM-17)中的X F和X G均为C＝O。
在一些实施方案中，所述DIM选自式(DIM-13)、(DIM-14)或(DIM-17)所示结构，且X F和X G均为C＝O。
在一些实施方案中，所述DIM选自式(DIM-14)所示结构，且R J为OH，X F和X G均为C＝O。
在一些实施方案中，所述DIM选自如下结构：
Figure PCTCN2022133547-appb-000130
Figure PCTCN2022133547-appb-000131
Figure PCTCN2022133547-appb-000132
Figure PCTCN2022133547-appb-000133
Figure PCTCN2022133547-appb-000134
Figure PCTCN2022133547-appb-000135
Figure PCTCN2022133547-appb-000136
Figure PCTCN2022133547-appb-000137
在一些实施方案中，所述DIM选自如下结构：
Figure PCTCN2022133547-appb-000138
Figure PCTCN2022133547-appb-000139
Figure PCTCN2022133547-appb-000140
Figure PCTCN2022133547-appb-000141
在一些实施方案中，所述DIM选自
Figure PCTCN2022133547-appb-000142
Figure PCTCN2022133547-appb-000143
Figure PCTCN2022133547-appb-000144
Figure PCTCN2022133547-appb-000145
Figure PCTCN2022133547-appb-000146
在一些实施方案中，所述DIM选自
Figure PCTCN2022133547-appb-000147
Figure PCTCN2022133547-appb-000148
在一些实施方案中，所述DIM选自
Figure PCTCN2022133547-appb-000149
在一些实施方案中，本公开内容的式(I)化合物选自以下化合物：
Figure PCTCN2022133547-appb-000150
Figure PCTCN2022133547-appb-000151
Figure PCTCN2022133547-appb-000152
Figure PCTCN2022133547-appb-000153
Figure PCTCN2022133547-appb-000154
Figure PCTCN2022133547-appb-000155
Figure PCTCN2022133547-appb-000156
Figure PCTCN2022133547-appb-000157
Figure PCTCN2022133547-appb-000158
Figure PCTCN2022133547-appb-000159
Figure PCTCN2022133547-appb-000160
Figure PCTCN2022133547-appb-000161
Figure PCTCN2022133547-appb-000162
Figure PCTCN2022133547-appb-000163
Figure PCTCN2022133547-appb-000164
Figure PCTCN2022133547-appb-000165
Figure PCTCN2022133547-appb-000166
另一方面，本公开内容提供药物组合物，其包含本公开内容上述任一通式所示的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料。
另一方面，本公开内容提供治疗哺乳动物由BRM介导的疾病的方法，包括对需要该治疗的哺乳动物，优选人类，给予治疗有效量的本公开内容上述任一通式所示的化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物。
另一方面，本公开内容提供治疗哺乳动物的肿瘤的方法，包括对需要该治疗的哺乳动物，优选人类，给予治疗有效量的上述任一通式所示的化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物。
另一方面，本公开内容提供上述任一通式所示的化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物在制备预防或者治疗BRM介导的疾病的药物中的用途。
另一方面，另一方面，本公开内容提供上述任一通式所示的化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物在制备预防或者治疗肿瘤的药物中的用途。
另一方面，本公开内容提供上述任一通式所示的化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物在预防或者治疗BRM介导的疾病中的用途。
另一方面，本公开内容提供上述任一通式所示的化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物在预防或者治疗肿瘤方面的用途。
另一方面，本公开内容提供预防或者治疗BRM介导的疾病的上述任一通式化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物。
另一方面，本公开内容提供预防或者治疗肿瘤的上述任一通式化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物。
在一些实施方案中，BRM介导的疾病选自肿瘤。
在一些实施方案中，所述肿瘤选自癌症。
术语定义和说明
除非另有说明，本公开内容中所用的术语具有下列含义，本公开内容中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。一个特定的术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照本领域普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
本文中带有“*”标记的碳原子代表手性碳原子，是指其绝对构型为(S)-构型或(R)-构型中的一种。
本文中
Figure PCTCN2022133547-appb-000167
表示连接位点。对于本文中
Figure PCTCN2022133547-appb-000168
的
Figure PCTCN2022133547-appb-000169
当
Figure PCTCN2022133547-appb-000170
未与固定的环或原子相连时，表示其可与“[]”内的分子中含可被取代的氢原子(包括直接与环原子相连的氢原子、环原子的非氢取代基上的氢原子以及取代基上进一步的取代基中的氢原子)的任意位点失去该氢原子以后的基团相连，例如
Figure PCTCN2022133547-appb-000171
中
Figure PCTCN2022133547-appb-000172
的连接位置包括但不限于Y 1、R 4以及R 4上的取代基等。
术语“能够结合”是指能够可测量地结合至靶标(例如，E3泛素连接酶的配体能够与E3泛素连接酶的半胱氨酸形成共价键等)。
术语“泛素连接酶”是指促进泛素向特定底物蛋白质的转移以靶向底物蛋白质从而进行降解的蛋白质家族。单独的或与E2泛素连接酶复合的E3泛素连接酶负责将泛素转移至靶蛋白。通常，泛素连接酶参与多聚泛素化，使得第二泛素与第一泛素连接；第三泛素与第二泛素连接，依此类推。多聚泛素化标记蛋白质以被蛋白酶体降解。然而，存在一些限于单泛素化的泛素化事件，其中泛素连接酶仅将单个泛素添加到底物分子上。单泛素化的蛋白质不靶向蛋白酶体进行降解，而是可以改变其细胞位置或功能，例如，通过结合具有能够结合泛素的结构域的其他蛋白质。更为复杂的是，E3泛素连接酶可以靶向泛素上的不同赖氨酸来制造链。
术语“靶蛋白”是指具有任何生物功能或活性(包括结构、调节、激素、酶促、遗传、免疫、收缩、储存、运输和信号转导)的蛋白质和肽。在一些实施方案中，靶蛋白表示结合本公开内容的化合物并可被 降解的蛋白质或多肽。
本文中消旋体或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr，J.Chem.Ed.1985，62:114-120。除非另有说明，用楔形键和虚楔键
Figure PCTCN2022133547-appb-000173
表示一个立体中心的绝对构型，用黑实键和虚键
Figure PCTCN2022133547-appb-000174
表示一个立体中心的相对构型(如脂环化合物的顺反构型)。
术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。本公开内容的化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物，其理化性质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。本公开内容包含化合物的所有互变异构形式。
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和非对映异构体。
本公开内容的化合物可以具有不对称原子如碳原子、硫原子、氮原子、磷原子或不对称双键，因此本公开内容的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。特定的几何或立体异构体形式可以是顺式和反式异构体、E型和Z型几何异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，以及其外消旋混合物或其它混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，以上所有这些异构体以及它们的混合物都属于本公开内容的化合物的定义范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子、不对称硫原子、不对称氮原子或不对称磷原子，所有取代基中涉及到的这些异构体以及它们的混合物，也均包括在本公开内容的化合物的定义范围之内。本公开内容的含有不对称原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来，光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。
术语“被取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧代(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代，氧代不会发生在芳香基上。
术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可以发生或不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。例如，乙基“任选”被卤素取代，是指乙基可以是未被取代的(CH 2CH 3)、单取代的(CH 2CH 2F、CH 2CH 2Cl等)、多取代的(CHFCH 2F、CH 2CHF 2、CHFCH 2Cl、CH 2CHCl 2等)或完全被取代的(CF 2CF 3、CF 2CCl 3、CCl 2CCl 3等)。本领域技术人员可理解，对于包含一个或多个取代基的任何基团，不会引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。
术语“任选取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数量再化学上可以实现的基础上可以是任意的。
术语“被置换”指特定的原子或基团可以被替换为指定的其他原子或基团。如-CH 2CH 2CH 2-中的CH 2可以被O、S或NH置换得到-CH 2OCH 2-、-OCH 2CH 2-、-CH 2SCH 2-、-SCH 2CH 2-、-CH 2NHCH 2-或-NHCH 2CH 2-等。
当任何变量(例如R a、R b)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。例如，如果一个基团被2个R b所取代，则每个R b都有独立的选项；对于基团N(C 1-C 6烷基) 2，当C 1-C 6烷基被R b取代时，两个C 1-C 6烷基具有彼此独立的R b选项。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CH 2) 0-，表示该连接基团为键。
当其中一个变量选自化学键或不存在时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表键时表示该结构实际上是A-Z。
当本文中涉及到的连接基团若没有指明其连接方向，则其连接方向是任意的。例如当结构单元
Figure PCTCN2022133547-appb-000175
中的L 1选自“C 1-C 3亚烷基-O”时，此时L 1既可以按照与从左到右的方向连接环Q和R 1构成“环Q-C 1-C 3亚烷基-O-R 1”，也可以按照从右到左的方向连接环Q和R 1构成“环Q-O-C 1-C 3亚烷基-R 1”。
TL中，“R 1a、R 2a、R 3a、R 4a、R 1、R 3、R 4中至少有一个不为H”指当分子中包含这些基团时，至少有 一个基团不为H。例如，当Y 1为CR，Y 2选自CR 2a，Y 3选自N，Y 4选自CR 4a，X 1选自N时，则R 2a、R 4a、R 3、R 4中至少有一个基团不为H。
当一个取代基的键交叉连接到一个环上的两个原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合。例如，结构单元
Figure PCTCN2022133547-appb-000176
表示R a可在苯环上除OH和
Figure PCTCN2022133547-appb-000177
的连接位点外的任意一个位置发生取代。
本文中的C m-C n是指具有m-n或m至n范围中的整数个碳原子。例如“C 1-C 10”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子、9个碳原子或10个碳原子。同理，m元至n元表示环原子数为m至n个，例如5-14元环包括5元环、6元环、7元环、8元环、9元环、10元环、11元环、12元环、13元环和14元环，也包括n至m中的任何一个范围，例如5-14元环包括6-14元环、6-11元环、5-10元环、6-10元环、6-8元环等。
术语“烷基”是指通式为C nH 2n+1的烃基，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个)碳原子的烷基，更优选为含有1至6个碳原子的烷基。术语“C 1-C 10烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述烷基的具体实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1，2-二甲基丙基、新戊基、1，1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基或1，2-二甲基丁基等；术语“C 1-C 6烷基”可理解为表示具有1至6个碳原子的烷基，具体实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、新戊基、己基、2-甲基戊基等。术语术语“C 1-C 4烷基”可理解为表示具有1至4个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。术语“C 1-C 3烷基”可理解为表示具有1至3个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述“C 1-C 10烷基”可以包含“C 1-C 6烷基”、“C 1-C 4烷基”或“C 1-C 3烷基”等范围，所述“C 1-C 6烷基”可以进一步包含“C 1-C 4烷基”或“C 1-C 3烷基”，所述“C 1-C 4烷基”可以进一步包含“C 1-C 3烷基”。
术语“杂烷基”指烷基中的一个或多个-CH 2-被选自NH、O和S的杂原子所取代，或者一个或多个-CH-被N取代；其中所述的烷基如上所定义。
术语“卤代烷基”指所述烷基被卤素进一步取代后得到的基团，如“C 1-C 6卤代烷基”是指被卤素进一步取代的C 1-C 6烷基。术语“羟烷基”是指所述烷基被OH进一步取代后得到的基团。
术语“亚烷基”指饱和的直链或支链脂肪族烃基，其具有2个从母体烷的相同碳原子或两个不同的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残疾，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个)碳原子的亚烷基，更优选含有1至6个碳原子的亚烷基。亚烷基的非限制性实例包括但不限于亚甲基、-CH(CH 3)-、-CH 2CH 2-、-CH(CH 2CH 3)-、-CH 2CH(CH 3)-、-CH 2CH 2CH 2-、-CH 2CH 2CH 2CH 2-等。术语“C 1-C 6亚烷基”可理解为表示具有1至6个碳原子的亚烷基。术语“C 1-C 3亚烷基”可理解为表示具有1至3个碳原子的亚烷基。优选地，“C 1-C 6亚烷基”可以包含“C 1-C 3亚烷基”。术语“亚杂烷基”指亚烷基中的一个或多个-CH 2-被选自N、O和S的杂原子所取代；其中所述亚烷基如上所定义。
术语“烷氧基”是指直链或支链醇类失去羟基上的氢原子产生的一价基团，可理解为“烷基氧基”或“烷基-O-”，其中烷基的定义如上所述。术语“C 1-C 10烷氧基”可理解为“C 1-C 10烷基氧基”或“C 1-C 10烷基-O-”；术语“C 1-C 6烷氧基”可理解为“C 1-C 6烷基氧基”或“C 1-C 6烷基-O-”。所述“C 1-C 10烷氧基”可以包含“C 1-C 6烷氧基”和“C 1-C 3烷氧基”等范围，所述“C 1-C 6烷氧基”可以进一步包含“C 1-C 3烷氧基”。
术语“卤代烷氧基”指所述烷氧基被卤素进一步取代后得到的基团，如“C 1-C 6卤代烷氧基”是指被卤素进一步取代的C 1-C 6烷氧基。
术语“烯基”是指由碳原子和氢原子组成的、包含2至20个碳原子的直链或支链的且具有至少一个双键 的不饱和脂肪族烃基。术语“C 2-C 10烯基”应理解为表示直链或支链的不饱和一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，术语“C 2-C 6烯基”理解为表示直链或支链的不饱和一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2、3、4、5或6个碳原子。“C 2-C 10烯基”优选“C 2-C 6烯基”或“C 2-C 4烯基”，“C 2-C 6烯基”进一步优选“C 2-C 4烯基”，更进一步优选C 2或C 3烯基。应理解，在所述烯基包含多于一个双键的情况下，所述双键可相互分离或共轭。所述烯基的具体实例包括但不限于乙烯基、烯丙基、(E)-2-甲基乙烯基、(Z)-2-甲基乙烯基、(E)-丁-2-烯基、(Z)-丁-2-烯基、(E)-丁-1-烯基、(Z)-丁-1-烯基、异丙烯基、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、(E)-1-甲基丙-1-烯基或(Z)-1-甲基丙-1-烯基等。
术语“亚烯基”是指具有2个从母体烯的相同碳原子或两个不同的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基，其中烯基的定义如上所述。术语“C 2-C 6亚烯基”应理解为具有2至6个碳原子的亚烯基。术语“C 2-C 3亚烯基”应理解为具有2或3个碳原子的亚烯基。优选地，“C 2-C 6亚烯基”包含“C 2-C 3亚烯基”。
术语“炔基”是指由碳原子和氢原子组成的、包含2至20个碳原子的直链或支链的具有至少一个三键的不饱和脂肪族烃基。术语“C 2-C 10炔基”可理解为表示直链或支链的不饱和一价烃基，其包含一个或多个三键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子。术语“C 2-C 6炔基”可理解为表示直链或支链的不饱和一价烃基，其包含一个或多个三键并且具有2、3、4、5或6个碳原子。“C 2-C 6炔基”的实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(-C≡CCH 3、-CH 2C≡CH)、丁-1-炔基、丁-2-炔基或丁-3-炔基。“C 2-C 10炔基”可以包含“C 2-C 6炔基”或“C 2-C 3炔基”，“C 2-C 6炔基”可以包含“C 2-C 3炔基”，“C 2-C 3炔基”实例包括乙炔基(-C≡CH)、丙-1-炔基(-C≡CCH 3)或丙-2-炔基(炔丙基)。
术语“亚炔基”指具有2个从母体炔的相同碳原子或两个不同的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基，其中炔基的定义如上所示。术语“C 2-C 6亚炔基”应理解为具有2至6个碳原子的亚炔基。术语“C 2-C 3亚炔基”应理解为具有2或3个碳原子的亚炔基。优选地，“C 2-C 6亚炔基”包含“C 2-C 3亚炔基”。
术语“环烷基”是指完全饱和的且以单环、并环、桥环或螺环等形式存在的碳环。除非另有指示，该碳环通常为3至10元环。术语“C 3-C 10环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、并环、螺环或桥环，其具有3至10个碳原子。术语“C 3-C 8环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、并环、螺环或桥环，其具有3至8个碳原子。术语“C 3-C 6环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、并环、螺环或桥环，其具有3至6个碳原子，具体实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基或环己基等。术语“C 5-C 9环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、并环、螺环或桥环，其具有5至9个碳原子。术语“C 5-C 7环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、并环、螺环或桥环，其具有5至7个碳原子。所述环烷基的具体实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基，降冰片基(双环[2.2.1]庚基)、双环[2.2.2]辛基、金刚烷基、螺[4.5]癸烷基等。术语“C 3-C 10环烷基”可以包含“C 3-C 8环烷基”、“C 3-C 6环烷基”、“C 5-C 9环烷基”或“C 5-C 7环烷基”，术语“C 3-C 8环烷基”可以包含“C 3-C 6环烷基”或“C 5-C 7环烷基”，术语“C 5-C 9环烷基”可以包含“C 5-C 7环烷基”。。
术语“环烷基氧基”可理解为“环烷基-O-”。如“C 3-C 6环烷基氧基”可理解为“C 3-C 6环烷基-O-”。
术语“环烯基”是指不完全饱和的且以单环、并环、桥环或螺环等形式存在的非芳香族碳环。除非另有指示，该碳环通常为3至10元环。所述环烯基的具体实例包括但不限于环戊烯基、环戊二烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚烯基或环庚二烯基等。术语“C 5-C 10环烯基”是指不完全饱和的且单环、并环、桥环或螺环等形式存在的非芳香族碳环，其具有5-10个碳原子。术语“C 5-C 9环烯基”是指不完全饱和的且单环、并环、桥环或螺环等形式存在的非芳香族碳环，其具有5-9个碳原子。术语“C 5-C 7环烯基”是指不完全饱和的且单环、并环、桥环或螺环等形式存在的非芳香族碳环，其具有5-7个碳原子。术语“C 3-C 6环烯基”是指不完全饱和的且单环、并环、桥环或螺环等形式存在的非芳香族碳环，其具有3-6个碳原子。术语“C 5-C 10环烯基”可以包含“C 5-C 9环烯基”或“C 5-C 7环烯基”，术语“C 5-C 9环烯基”可以包含“C 5-C 7环烯基”。
术语“杂环基”是指完全饱和的或部分饱和的(整体上不是具有芳香性的杂芳族)一价单环、并环、螺环或桥环基团，其环原子中含有1-5个杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，所述“杂原子或杂原子团”包括但不限于氮原子(N)、氧原子(O)、硫原子(S)、磷原子(P)、硼原子(B)、-S(＝O) 2-、-S(＝O)-以及 任选被取代的-NH-、-S(＝O)(＝NH)-、-C(＝O)NH-、-C(＝NH)-、-S(＝O) 2NH-、S(＝O)NH-或-NHC(＝O)NH-等，其通常包含3至20个环原子。术语“5-14元杂环基”是指环原子数为5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的杂环基，且其环原子中含有1-5个独立选自上文所述的杂原子或杂原子团。“5-14元杂环基”可以包括“6-14元杂环基”、“6-11元杂环基”、“6-10元杂环基”、“6-8元杂环基”、“5-10元杂环基”、“5-9元杂环基”、“5-8元杂环基”或“5-7元杂环基”。术语“5-10元杂环基”可以包括“5-9元杂环基”、“5-8元杂环基、“5-7元杂环基”、“6-10元杂环基”或“6-8元杂环基”。术语“4-10元杂环基”是指环原子数目为4、5、6、7、8、9或10的杂环基，且其环原子中含有1-5个独立选自上文所述的杂原子或杂原子团。“4-10元杂环基”包括“4-7元杂环基”，其中，4元杂环基的具体实例包括但不限于氮杂环丁烷基或氧杂环丁烷基；5元杂环基的具体实例包括但不限于四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基、4,5-二氢噁唑基或2,5-二氢-1H-吡咯基；6元杂环基的具体实例包括但不限于四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基、三噻烷基、四氢吡啶基或4H-[1,3,4]噻二嗪基；7元杂环基的具体实例包括但不限于二氮杂环庚烷基。所述杂环基还可以是双环基，其中，5,5元双环基的具体实例包括但不限于六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基；5,6元双环基的具体实例包括但不限于六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪基或5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪基。任选地，所述杂环基可以是上述4-7元杂环基的苯并稠合环基，具体实例包括但不限于二氢异喹啉基等。“4-10元杂环基”可以包含“5-10元杂环基”、“5-9元杂环基”、“5-8元杂环基”、“5-7元杂环基”、“5-6元杂环基”、“6-10元杂环基”、“6-8元杂环基”、“4-8元杂环基”、“4-7元杂环基”、“4-6元杂环基”、“4-10元杂环烷基”、“5-10元杂环烷基”、“4-7元杂环烷基”、“5-6元杂环烷基”、“6-8元杂环烷基”等范围，“4-7元杂环基”进一步可以包含“4-6元杂环基”、“5-7元杂环基”、“5-6元杂环基”、“4-7元杂环烷基”、“4-6元杂环烷基”、“5-7元杂环烷基”、“5-6元杂环烷基”等范围。本公开内容中尽管有些双环类杂环基部分地含有一个苯环或一个杂芳环，但所述杂环基整体上仍是无芳香性的。
术语“杂环基氧基”可理解为“杂环基-O-”。
术语“杂环烷基”是指完全饱和的且以单环、并环、桥环或螺环等形式存在的一价环状基团，其环的环原子中含有1-5个杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，所述“杂原子或杂原子团”包括但不限于氮原子(N)、氧原子(O)、硫原子(S)、磷原子(P)、硼原子(B)、-S(＝O) 2-、-S(＝O)-以及任选被取代的-NH-、-S(＝O)(＝NH)-、-C(＝O)NH-、-C(＝NH)-、-S(＝O) 2NH-、S(＝O)NH-或-NHC(＝O)NH-等，其通常包含3至20个环原子。术语“3-10元杂环烷基”是指环原子数目为3、4、5、6、7、8、9或10的杂环烷基，且其环原子中含有1-5个独立选自上文所述的杂原子或杂原子团。“3-10元杂环烷基”包括“3-8元杂环烷基”，其中，4元杂环烷基的具体实例包括但不限于吖丁啶基、噁丁环基或噻丁环基；5元杂环烷基的具体实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、异噁唑烷基、噁唑烷基、异噻唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基或四氢吡唑基；6元杂环烷基的具体实例包括但不限于哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、哌嗪基、1,4-噻噁烷基、1,4-二氧六环基、硫代吗啉基、1,3-二噻烷基或1,4-二噻烷基；7元杂环烷基的具体实例包括但不限于氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基或硫杂环庚烷基。
术语“杂环烷基氧基”可理解为“杂环烷基-O-”。
术语“芳基”是指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环的芳香环基团。芳基可以具有6-20个碳原子，6-14个碳原子或6-12个碳原子。术语“C 6-C 20芳基”应理解为具有6～20个碳原子的一价芳香性单环、双环或三环烃环。特别是具有6个碳原子的环(“C 6芳基”)，例如苯基；或者具有9个碳原子的环(“C 9芳基”)，例如茚满基或茚基；或者具有10个碳原子的环(“C 10芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基；或者具有13个碳原子的环(“C 13芳基”)，例如芴基；或者是具有14个碳原子的环(“C 14芳基”)，例如蒽基。术语“C 6-C 10芳基”应理解为具有6～10个碳原子的一价芳香性的全碳单环或双环基团。特别是具有6个碳原子的环(“C 6芳基”)，例如苯基；或者具有9个碳原子的环(“C 9芳基”)，例如茚基；或者具有10个碳原子的环(“C 10芳基”)，例如萘基。
术语“芳基氧基”可理解为“芳基-O-”。
术语“杂芳基”是指具有芳香性的单环或稠合多环体系，其中含有至少一个、优选1-4个选自N、O、S的环原子，其余环原子为碳的5-14元芳香环基。杂芳基优选为5-10元、更优选为5元或6元杂芳基。术 语“5-10元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环或双环芳族环系：其具有5、6、7、8、9或10个环原子，特别是5或6或9或10个环原子，且其包含1-5个，优选1-3个独立选自N、O和S的杂原子。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基或噻二唑基等以及它们的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基或异吲哚基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基等以及它们的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基或异喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它们的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基或吩噁嗪基等。术语“5-6元杂芳基”指具有5或6个环原子的芳族环系，且其包含1-3个，优选1-2个独立选自N、O和S的杂原子。术语“6元杂芳基”指具有6个环原子的芳族环系，且其包含1-3个，优选1-2个独立选自N、O和S的杂原子。术语“5-10元杂芳基”可以包含“5-6元杂芳基”或“6元杂芳基”，术语“5-6元杂芳基”可包含“6元杂芳基”。
术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
术语“羟基”是指-OH基团。
术语“氰基”是指-CN基团。
术语“氨基”是指-NH 2基团。
术语“硝基”是指-NO 2基团。
术语“治疗有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本公开内容的化合物的用量。构成“治疗有效量”的本公开内容的化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的酸或碱的盐，包括化合物与无机酸或有机酸形成的盐，以及化合物与无机碱或有机碱形成的盐。
术语“药物组合物”是指一种或多种本公开内容的化合物或其盐与药学上可接受的辅料组成的混合物。药物组合物的目的是有利于对有机体给予本公开内容的化合物。
术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。
词语“包括(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprising应理解为开放的、非排他性的意义，即“包括但不限于”。
本公开内容还包括与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本公开内容的化合物。可结合到本公开内容的化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为 2H、 3H、 11C、 13C、 14C、 13N、 15N、 15O、 17O、 18O、 31P、 32P、 35S、 18F、 123I、 125I和 36Cl等。
某些同位素标记的本公开内容的化合物(例如用 3H及 14C标记)可用于化合物和/或底物组织分布分析中。氚化(即 3H)和碳-14(即 14C)同位素对于由于它们易于制备和可检测性是尤其优选的。正电子发射同位素，诸如 15O、 13N、 11C和 18F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究以测定底物占有率。通常可以通过与公开于下文的方案和/或实施例中的那些类似的下列程序，通过同位素标记试剂取代未经同位素标记的试剂来制备同位素标记的本公开内容的化合物。
本公开内容的药物组合物可通过将本公开内容的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。
给予本公开内容的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。
本公开内容的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、乳化法、冷冻干燥法等。
在一些实施方案中，药物组合物是口服形式。对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的辅料混合，来配制该药物组合物。这些辅料能使本公开内容的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。
可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体辅料混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅料，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂或矫味剂等。
药物组合物还可适用于肠胃外给药，如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。
本公开内容的治疗方法中所用的化合物或组合物的剂量通常将随疾病的严重性、患者的体重和化合物的相对功效而改变，不过，作为一般性指导，本文所述的通式(Ⅰ)化合物的合适的每天给药剂量为0.01mg/kg到1000mg/kg。
本公开内容的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其它化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本公开内容的实施例。
本公开内容的具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本公开内容的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本公开内容的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
本公开内容所使用的所有试剂是市售的，无需进一步纯化即可使用。
除非另作说明，混合溶剂表示的比例是体积混合比例。除非另作说明，否则，％是指wt％。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)和/或质谱(MS)来确定的。NMR位移的单位为10 -6(ppm)。NMR测定的溶剂为氘代二甲基亚砜、氘代氯仿、氘代甲醇等，内标为四甲基硅烷(TMS)；“IC 50”指半数抑制浓度，指达到最大抑制效果一半时的浓度。
术语或缩写说明：
THP：四氢-2H-吡喃-2-基；Pd(OAc) 2：醋酸钯；t-BuOH：叔丁醇；t-BuOK：叔丁醇钾；t-BuONa：叔丁醇钠；DPPP：1,3-双(二苯基磷)丙烷；TEA：三乙胺；THF：四氢呋喃；Pd/C：钯碳；TsOH：对甲苯磺酸；MeOH：甲醇；EtOH：乙醇；PPh 3：三苯基膦；DIAD：偶氮二羧酸二异丙酯；DCM：二氯甲烷；DCE：二氯乙烷；DMF：N,N-二甲基甲酰胺；DIEA：N,N-二异丙基乙胺；HATU：O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐；Boc：叔丁基氧基羰基；Boc 2O：二碳酸二叔丁酯；Ruphos Pd G 3：甲磺酸(2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)；NaBH(OAc) 3：三乙酰基硼氢化钠；HOAc：乙酸；EtOAc：乙酸乙酯；NH 4OAc：乙酸铵；NaOAc：乙酸钠；SFC：超临界流体色谱；TFA：三氟乙酸；PCC：氯铬酸吡啶鎓盐；MeCN：乙腈；Pd(PPh 3) 2Cl 2：双三苯基膦二氯化钯；Pd(dppf)Cl 2：1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯；Pd(dppf)Cl 2·DCM：1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯二氯甲烷络合物；Py：吡啶；Cu(OAc) 2：醋酸铜；DMAP：4-二甲氨基吡啶；t-AmOH：叔戊醇；TMSCHN 2：三甲基硅基重氮甲烷；MW：微波；Bn：苄基；Ts：对甲苯磺酰基；TsCl：对甲苯磺酰氯；Ms：甲磺酰基；Ms 2O：甲磺酸酐；BnBr：溴化苄；PPTS：吡啶对甲苯磺酸盐；TMS：三甲基硅基；MOM：甲氧基甲基；OTs：对甲苯磺酰氧基；TsCl/TosCl：对甲苯磺酰氯；OBn：苄氧基；FA：甲酸；PMBCl：对甲氧基氯苄；PMBNH 2：对甲氧基苄胺；NIS：N-碘代琥珀酰亚胺；SEMCl：2-(三甲基硅)乙氧基甲基氯；Pd 2(dba) 3：三(二亚苄基丙酮)二钯；Xphos：2-二叔丁基膦-2’,4’,6’-三异丙基联苯；T 3P：三正丙基环磷酸酐；Tf 2O：三氟甲磺酸酐；TfOH：三氟甲磺酸；NaHMDS：二(三甲基硅)氨基钠；dioxane：1,4-二氧六环；water：水；M：摩尔/升；L-proline：L-脯氨酸；DMSO：二甲基亚砜；tert-butyl nitrite：亚硝酸叔丁酯；Pd(PPh 3) 4：四(三苯基膦)钯；MOMO：甲氧基甲氧基；toluene：甲苯；ammonia：氨；MeMgCl：甲基氯化镁；STAB：三乙酰氧基硼氢 化钠；CbzCl：氯甲酸苄酯；MsCl：甲磺酰氯；t-BuBrettphos Pd G 3：甲磺酸(2-二叔丁基膦-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯基-2-基)钯(II)；Oxone：过氧单磺酸钾；Acetone：丙酮；BINAP：(R)-(+)-2,2-双(二苯膦基)-1,1-联萘；EDC：1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺；Xantphos：4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽；m-CPBA：间氯过氧苯甲酸；IBX：2-碘酰基苯甲酸；PhNTf 2：N-苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺；KHMDS：二(三甲基硅)氨基钾；PPTS：吡啶对甲苯磺酸盐；TES：三乙基硅烷；DMP：戴斯-马丁过碘烷；B 2Pin 2：双联频那醇硼酸酯；Alloc：烯丙氧羰基。
下文的洗脱剂可由两种或多种溶剂形成混合洗脱剂，其比值为各溶剂的体积比，如“0～10％甲醇/二氯甲烷”表示梯度洗脱过程中，混合洗脱剂中的甲醇与二氯甲烷的体积用量比为0:100～10:100。
实施例1：2-[5-(氮杂环丁烷-3-基)吡咯并[3,2-c]哒嗪-3-基]苯酚(1a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000178
步骤1：N-(3,6-二氯哒嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将4-氨基-3,6-二氯哒嗪(15.0g，91.47mmol)溶于二氯甲烷(250mL)，加入Boc酸酐(22.2g，101.5mmol)和4-二甲氨基吡啶(1.12g，9.15mmol)，反应液于25℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩干经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/7)得到N-(3,6-二氯哒嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯(21g)。
MS m/z(ESI):207.8[M+H-56] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.62(s,1H),8.22(s,1H),1.51(s,9H)。
步骤2：N-[6-氯-3-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)哒嗪-4-基]氨基甲酸叔丁酯的合成
将N-(3,6-二氯哒嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯(11.0g，41.7mmol)溶于甲苯(250mL)，在氮气氛围下加入三甲基硅乙炔(4.50g，45.8mmol)，三乙胺(10.5g，104mmol)，碘化亚铜(793mg，4.16mmol)和双三苯基膦二氯化钯(2.92g，4.16mmol)。反应液于50℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩干，有机相用饱和食盐水(200mL)洗涤两次，水相用乙酸乙酯(200mL)萃取三次。收集有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/8)得到产物N-[6-氯-3-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)哒嗪-4-基]氨基甲酸叔丁酯(7g)。
MS m/z(ESI):325.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝7.89(s,1H),7.31(s,1H),1.68(s,9H),0.38(s,9H)。
步骤3：3-氯吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-羧酸叔丁酯的合成
将N-[6-氯-3-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)哒嗪-4-基]氨基甲酸叔丁酯(7.00g，21.5mmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(130mL)中，加入碳酸钾(6.53g，47.3mmol)。反应液于60℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。反应液加入乙酸乙酯(300mL)稀释，有机相用水(300mL)洗涤两次，水相用乙酸乙酯(300mL)萃取三次。收集有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/20)得到产物3-氯吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-羧酸叔丁酯(1.6g)。
MS m/z(ESI):153.8[M+H-100] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.18(d,J＝3.9Hz,1H),8.03(s,1H),7.15(dd,J＝0.6,4.0Hz,1H),1.64(s,9H)。
步骤4：3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-5H-吡咯并[3,2-c]哒嗪的合成
将3-氯吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-羧酸叔丁酯(50.0mg，197μmol)和2-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4,4,5,5-四 甲基-1,3,2-二氧硼戊环(67.7mg，256μmol)溶于二氧六环(2mL)和水(0.5mL)，在氮气氛围下加入碳酸钾(81.7mg，591μmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(16.1mg，19.7μmol)。反应液于90℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩干，用甲醇(2mL)稀释，经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/2，展开剂加0.1％氨甲醇)得到产物3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-5H-吡咯并[3,2-c]哒嗪(36mg)。
MS m/z(ESI):256.0[M+H] +。
步骤5：3-[3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-5H-吡咯并[3,2-c]哒嗪(31.0mg，121μmol)和1-Boc-3-碘氮杂环丁烷(68.8mg，243μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，加入碳酸铯(119mg，364μmol)。反应液于60℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液用水(10mL)稀释，有机相用水(10mL)洗涤三次，水相用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。收集有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩后经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/2)得到产物3-[3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(40mg)。
MS m/z(ESI):411.1[M+H] +。
步骤6：2-[5-(氮杂环丁烷-3-基)吡咯并[3,2-c]哒嗪-3-基]苯酚的合成
将3-[3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(40.0mg，97.5μmol)溶于二氯甲烷(0.5mL)，在0℃加入三氟乙酸(0.5mL)。反应液于25℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成。加入氨甲醇(7M)，调节反应液pH至7，然后减压浓缩经制备液相色谱纯化(YMC Triart C18，5μm二氧化硅，25mm直径，150mm长度；使用水(含有氨水)和乙腈的的混合物(乙腈比例：5％-45％)作为洗脱液)得产物2-[5-(氮杂环丁烷-3-基)吡咯并[3,2-c]哒嗪-3-基]苯酚(1a)(1.02mg)。
MS m/z(ESI):267.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ＝8.56(s,1H),8.38(d,J＝2.3Hz,1H),7.86(dd,J＝1.7,8.1Hz,1H),7.41-7.26(m,1H),7.09-6.94(m,2H),6.71(d,J＝1.3Hz,1H),6.01(m,J＝7.3Hz,1H),4.50-4.40(m,2H),4.23-4.15(m,2H)。
实施例2：2-[7-氨基-5-(4-哌啶基)吡咯并[3,2-c]哒嗪-3-基]苯酚(2a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000179
步骤1：3-氯-5H-吡咯并[3,2-c]哒嗪的合成
将3-氯吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-羧酸叔丁酯(1.5g，5.91mmol)溶于二氧六环(15mL)，加入盐酸二氧六环(30mL，4M)。反应液在25℃搅拌反应16小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩干得产物3- 氯-5H-吡咯并[3,2-c]哒嗪(1g，粗品)。
MS m/z(ESI):153.8[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ＝8.51(d,J＝0.6Hz,1H),8.42(d,J＝3.5Hz,1H),7.12(d,J＝2.9Hz,1H)。
步骤2：4-(3-氯-5H-吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将3-氯-5H-吡咯并[3,2-c]哒嗪(1.50g，7.10mmol)和4-(对甲苯磺酰氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.05g，14.2mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(40mL)，加入碳酸铯(6.94g，21.3mmol)。反应液于100℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。反应液用乙酸乙酯(80mL)和水(80mL)稀释，有机相用饱和食盐水(80mL)洗涤两次，水相用乙酸乙酯(80mL)萃取两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝100/35)得到产物4-(3-氯吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.1g)。
MS m/z(ESI):337.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.19(s,1H),8.15(d,J＝3.5Hz,1H),6.95(d,J＝3.5Hz,1H),4.74-4.60(m,1H),4.13(d,J＝12.4Hz,2H),3.00-2.89(m,2H),1.99-1.81(m,4H),1.43(s,9H)。
步骤3：3-氯-7-硝基-5-(4-哌啶基)吡咯并[3,2-c]哒嗪的合成
将4-(3-氯-5H-吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.10g，3.27mmol)溶于硫酸(浓度98％，10mL)，在0℃冰浴下缓慢滴加硝酸(浓度68％，1.40g，22.2mmol)，反应液于25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液缓慢滴加到冰水(20mL)中淬灭，然后滴加饱和碳酸钠溶液将pH调节到7-8。减压浓缩干，加入甲醇(10mL)和二氯甲烷(100mL)。过滤，滤液减压浓缩干得产物3-氯-7-硝基-5-(4-哌啶基)吡咯并[3,2-c]哒嗪(460mg)。
MS m/z(ESI):281.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.28(s,1H),8.58(s,1H),4.76-4.53(m,1H),3.07(d,J＝12.4Hz,2H),2.71-2.58(m,2H),1.96-1.87(m,4H)。
步骤4：4-(3-氯-7-硝基-吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将3-氯-7-硝基-5-(4-哌啶基)吡咯并[3,2-c]哒嗪(460mg，1.63mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，加入Boc酸酐(428g，1.96mmol)和4-二甲氨基吡啶(19.95mg，163μmol)，反应液于25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液用二氯甲烷(10mL)和水(10mL)稀释，有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤一次再用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)洗涤三次，水相用二氯甲烷(10mL)萃取两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩得到产物4-(3-氯-7-硝基-吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(650mg)。
MS m/z(ESI):382.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.49-9.28(m,1H),8.68-8.49(m,1H),4.84-4.75(m,1H),4.14(d,J＝12.0Hz,2H),2.96-2.79(m,2H),2.06-1.92(m,4H),1.44(s,9H)。
步骤5：4-[3-(2-羟基苯基)-7-硝基-吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(3-氯-7-硝基-吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg，524μmol)和2-羟基苯硼酸(93.9mg，681μmol)溶于二氧六环(4mL)和水(1mL)，在氮气氛围下加入碳酸钾(217mg，1.57mmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(42.8mg，52.4μmol)。反应液于90℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩干，经柱层析色谱(二氧化硅/石油醚/四氢呋喃＝100/80)得到产物4-[3-(2-羟基苯基)-7-硝基-吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(170mg)。
MS m/z(ESI):440.1[M+H] +。
步骤6：4-[7-氨基-3-(2-羟基苯基)吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[3-(2-羟基苯基)-7-硝基-吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(70mg，159μmol)溶于乙醇(1.6mL)和水(0.2mL)，加入铁粉(44.5mg，796μmol)和氯化铵(51.1mg，956μmol)。反应液于90℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液过滤，滤液减压浓缩得到产物4-[7-氨基-3-(2-羟基苯基)吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg，粗品)。
MS m/z(ESI):410.3[M+H] +。
步骤7：2-[7-氨基-5-(4-哌啶基)吡咯并[3,2-c]哒嗪-3-基]苯酚的合成
将4-[7-氨基-3-(2-羟基苯基)吡咯并[3,2-c]哒嗪-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(50.0mg，122μmol)溶于二氯甲烷(1mL)，在0℃下加入三氟乙酸(0.25mL)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。加入氨甲醇(7M)，调节反应液的pH至7-8，然后减压浓缩经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，5μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有氨水)和乙腈的混合物(乙腈比例：21％-61％)作为洗脱液)得产物2-[7-氨基-5-(4-哌啶基)吡咯并[3,2-c]哒嗪-3-基]苯酚(2a)(1.07mg)。
MS m/z(ESI):310.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.75(s,1H),8.51(s,1H),8.15(d,J＝7.3Hz,1H),7.34-7.26(m,1H),7.19(s,1H),6.99-6.94(m,2H),4.75(s,2H),4.63-4.62(m,1H),3.14-3.11(m,1H),2.74-2.72(m,2H),2.44-2.41(m,2H),1.84-1.82(m,4H)。
实施例3：2-(3-氨基-1-(氮杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(3a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000180
步骤1：4,6-二羟基哒嗪-3-甲酰胺的合成
将4,6-二羟基哒嗪-3-甲酸乙酯(10g，54.30mmol)溶于7M氨甲醇(100mL)中。反应液在20℃反应16小时，薄层层析(石油醚/四氢呋喃＝1/2)检测反应完毕。反应液过滤，滤饼加入石油醚/乙酸乙酯(1/1，100mL)中，在25℃搅拌30分钟，过滤，滤饼干燥得到4,6-二羟基哒嗪-3-甲酰胺(9g)。
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz):δ＝10.50(br s,1H),8.52(br s,1H),7.39(br s,2H),5.21ppm(s,1H)。
步骤2：4,6-二氯哒嗪-3-甲腈的合成
将4,6-二羟基哒嗪-3-甲酰胺(5g,32.23mmol)溶于三氯氧磷(50mL)中。反应液在90℃反应7小时，LCMS检测反应完毕。将反应液冷却至室温，并缓慢滴加到冷水中，室温搅拌30分钟，用二氯甲烷(100mL)萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，经柱色谱纯化得到4,6-二氯哒嗪-3-甲腈(4.43g)。
MS m/z(ESI):212.0[M+K] +。
步骤3：6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺的合成
将4,6-二氯哒嗪-3-甲腈(4.7g，27.01mmol)溶于乙醇(50mL)中，加入85％水合肼(7.95g，135.07mmol)。反应液在100℃反应3小时，LCMS检测反应完毕。反应液冷却至室温，过滤，滤饼加入甲醇(50mL)中，25℃搅拌30分钟，过滤，滤饼干燥得到6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(5g)。
MS m/z(ESI):169.8[M+H] +。
步骤4：3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(4.3g,25.36mmol)溶于二氯甲烷(80mL)中，加入Boc酸酐 (126.79mmol,29.13mL)和三乙胺(126.79mmol,17.65mL)。反应液在20℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，柱层析纯化(二氧化硅,二氯甲烷/甲醇＝10/1)得3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-羧酸叔丁酯(2.10g)。
MS m/z(ESI):270.2[M+H] +。
步骤5：3-氨基-6-(2-(苄氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-羧酸叔丁酯(1.4g,5.19mmol)，2-苄氧基苯硼酸(1.66g,7.27mmol)和碳酸钾(1.43g,10.38mmol)溶于二氧六环(5.00mL)和水(1.00mL)中，氮气条件下加入四三苯基膦钯(599.87mg,519.12μmol)。反应液100℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，柱层析纯化(二氧化硅,石油醚/四氢呋喃＝2/1)得3-氨基-6-(2-(苄氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-羧酸叔丁酯(0.50g)。
MS m/z(ESI):318.2[M+H-100] +。
步骤6：6-(2-(苄氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺的合成
将反应物3-氨基-6-(2-(苄氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.20mmol)溶于无水二氯甲烷中(10mL)中，加入三氟乙酸(27.55mmol，2mL)。反应液于20℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。向反应液中加入二氯甲烷(15mL)，并用碳酸氢钠调节pH至7～8，加入乙酸乙酯(20mL)和无水硫酸钠后室温搅拌30分钟，抽滤，滤液减压浓缩至干，得6-(2-(苄氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(300mg)。
MS m/z(ESI):318.1[M+H] +。
步骤7：3-(3-氨基-6-(2-(苄氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将6-(2-(苄氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(300.00mg,567.21μmol)和1-Boc-3-碘-氮杂环丁烷(208.75mg,737.37μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺中(0.2mL)中，加入碳酸钾(235.17mg,1.70mmol)。反应液于100℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，经薄层层析纯化(二氧化硅,石油醚/四氢呋喃＝2/1)得3-(3-氨基-6-(2-(苄氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(180mg)。
MS m/z(ESI):473.2[M+H] +。
步骤8：3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将3-(3-氨基-6-(2-(苄氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(170mg,251.83μmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入湿钯碳(134.00mg,10％纯度)、湿氢氧化钯(176.83mg,10％纯度)和甲酸(24.20mg,503.66μmol,2.00eq)，反应液于20℃氢气环境下搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，得粗品3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(70mg)。
MS m/z(ESI):383.2[M+H] +。
步骤9：2-(3-氨基-1-(氮杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(60mg，156.90μmol)溶于二氯甲烷(1.0mL)中，加入三氟乙酸(232μL，3.14mmol)。在氮气保护下，反应液20℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。反应液氮气吹干，向反应液中加入二氯甲烷(5mL)和水(2mL)，加入碳酸钠调节pH到7，用二氯甲烷(15mL)萃取两次，无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩至干。经制备液相色谱纯化(BostonPrime C18，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有氨水)和乙腈的的混合物(乙腈比例：23％-43％)作为洗脱液)得2-(3-氨基-1-(氮杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(3a)(2.29mg)。
MS m/z(ESI):283.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ＝8.25(s,1H),8.00(dd,J＝1.5,8.3Hz,1H),7.42-7.32(m,1H),7.12-6.96(m,2H),5.66-5.58(m,1H),4.42-4.27(m,2H),4.08-3.98(m,2H)。
实施例4：2-(3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(4a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000181
步骤1：4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
将6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(4g，23.59mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，加入4-碘哌啶-1-甲酸叔丁酯(14.68g，47.18mmol)和碳酸铯(23.06g，70.77mmol)。反应液在60℃反应3小时，LCMS检测反应完毕。反应液冷却至室温，过滤，滤液用蒸馏水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL)萃取三次，合并有机相，干燥，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.5g)。
MS m/z(ESI):353.1[M+H] +。
步骤2：4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
将4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.4g，3.97mmol)溶于二氧六环(15mL)和蒸馏水(5mL)中，加入2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯酚(1.31g，5.95mmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(324.05mg，396.80μmol)和碳酸钾(1.10g，7.94mmol)。反应液在氮气下90℃反应16小时，LCMS检测反应完毕。反应液冷却至室温，过滤，滤液用蒸馏水(15mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相，干燥，浓缩，经柱色谱纯化得到4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(900mg)。
MS m/z(ESI):411.2[M+H] +。
步骤3：2-(3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(900mg，2.19mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(5.00g，43.85mmol)。反应液在20℃反应3小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，用蒸馏水(10mL)稀释，加入碳酸钠固体调节pH至7-8。用乙酸乙酯/四氢呋喃(1/1，10mL)萃取三次，合并有机相，干燥，浓缩得到粗品(700mg)，取粗品(30mg)经制备液相色谱(色谱柱：Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；流动相：[水(含0.225％FA)-ACN]；乙腈比例:0％-32％,9min)纯化得到2-(3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(4a)(2.09mg)。
MS m/z(ESI):311.1[M+H] +；
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz):δ＝13.88(br s,1H),8.48(s,1H),8.10(dd,J＝8.3,1.4Hz,1H),7.33-7.42(m,1H),6.96-7.06(m,2H),6.47(s,2H),4.71-4.65(m,1H),3.21(d,J＝11.6Hz,1H),2.82-2.78(m,4H),1.98-2.13(m,2H),1.91-1.89(m,2H)。
实施例5：2-(7-氨基-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-4-基)苯酚(5a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000182
步骤1：4,6-二氯哒嗪-3(2H)-酮和5,6-二氯哒嗪-3(2H)-酮的合成
将3,4,6-三氯哒嗪(100g，545.19mmol)溶于乙酸(400mL)中。反应液于110℃反应16小时。TLC检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。用石油醚(300mL)于25℃下打浆16小时，得到4,6-二氯哒嗪-3(2H)-酮和5,6-二氯哒嗪-3(2H)-酮混合物(81.2g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.61(s,1H),13.43(s,1H),8.04(s,1H),7.43(s,1H)。
步骤2：4,6-二氯-2-(4-甲氧苄基)哒嗪-3(2H)-酮和5,6-二氯-2-(4-甲氧基苄基)哒嗪-3(2H)-酮的合成
将4,6-二氯哒嗪-3(2H)-酮和5,6-二氯哒嗪-3(2H)-酮混合物(40g，20.14μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(500mL)中，于0℃下缓慢加入钠氢(19.39g，484.91mmol)。反应液于0℃搅拌1小时。在0℃下缓慢加入对甲氧基氯苄(56.96g，363.69mmol)，反应液于25℃下搅拌2小时。TLC检测反应完毕。向反应液中加入水(300mL)并用二氯甲烷(600mL)萃取三次，有机相用水(600mL)洗涤三次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到2/1)纯化得到4,6-二氯-2-(4-甲氧苄基)哒嗪-3(2H)-酮和5,6-二氯-2-(4-甲氧基苄基)哒嗪-3(2H)-酮的混合物(29g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.10-7.49(m,1H),7.32-7.21(m,2H),6.94-6.87(m,2H),5.19-5.08(m,2H),3.73(s,3H)。
步骤3：4-氨基-6-氯-2-(4-甲氧苄基)哒嗪-3(2H)-酮和5-氨基-6-氯-2-(4-甲氧基苄基)哒嗪-3(2H)-酮的合成
将4,6-二氯-2-(4-甲氧苄基)哒嗪-3(2H)-酮和5,6-二氯-2-(4-甲氧基苄基)哒嗪-3(2H)-酮的混合物(29g，20.14μmol)溶于氨水(200mL)中。反应液于140℃反应2小时。LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水(500mL)并用乙酸乙酯(900mL)萃取三次，有机相用水(900mL)洗涤三次并用无水硫酸钠干燥，然后减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到0/1)纯化得到4-氨基-6-氯-2-(4-甲氧苄基)哒嗪-3(2H)-酮和5-氨基-6-氯-2-(4-甲氧基苄基)哒嗪-3(2H)-酮的混合物(9.24g)。
MS m/z(ESI):266.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ7.24(d,J＝8.5Hz,2H),7.14-6.81(m,4H),6.21(s,1H),5.08(s,2H),3.73(s,3H)。
步骤4：4-氨基-6-氯-5-碘-2-(4-甲氧苄基)哒嗪-3(2H)-酮的合成
将4-氨基-6-氯-2-(4-甲氧苄基)哒嗪-3(2H)-酮和5-氨基-6-氯-2-(4-甲氧基苄基)哒嗪-3(2H)-酮的混合物(4.24g，15.96mmol)溶于乙腈(80mL)中，加入N-碘代琥珀酰亚胺(5.39g，23.94mmol)。反应液于80 ℃反应16小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，加入水(70mL)并用乙酸乙酯(150mL)萃取三次，有机相用水(150mL)洗涤三次，并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到2/1)得到4-氨基-6-氯-5-碘-2-(4-甲氧苄基)哒嗪-3(2H)-酮(6.7g)。
MS m/z(ESI):391.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ7.23(d,J＝8.8Hz,2H),7.14-6.93(m,2H),6.89(d,J＝8.6Hz,2H),5.08(s,2H),3.72(s,3H)。
步骤5：(E)-4-氨基-6-氯-5-(2-乙氧基乙烯基)-2-(4-甲氧苄基)哒嗪-3(2H)-酮的合成
将4-氨基-6-氯-5-碘-2-(4-甲氧苄基)哒嗪-3(2H)-酮(6.7g，17.11mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)和水(15mL)中，加入(E)-1-乙氧乙烯基-2-硼酸频哪醇酯(6.78g，34.22mmol)、磷酸钾(10.90g，51.33mmol)和1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(1.25g，1.71mmol)。经氮气置换三次后，反应液于90℃反应16小时。LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水(50mL)并用乙酸乙酯(90mL)萃取三次，有机相用水(90mL)洗涤三次并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到1/1)得到(E)-4-氨基-6-氯-5-(2-乙氧基乙烯基)-2-(4-甲氧苄基)哒嗪-3(2H)-酮(3.38g)。
MS m/z(ESI):335.9[M+H] +。
步骤6：4-氯-6-(4-甲氧苄基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-7(6H)-酮的合成
将(E)-4-氨基-6-氯-5-(2-乙氧基乙烯基)-2-(4-甲氧苄基)哒嗪-3(2H)-酮(3.38g，10.07mmol)溶于乙醇(60mL)中，加入浓盐酸(12.58mL，12M)。反应液于80℃反应4小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干得4-氯-6-(4-甲氧苄基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-7(6H)-酮(3.18g)。
MS m/z(ESI):289.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.10(s,1H),7.57(t,J＝2.8Hz,1H),7.25(d,J＝8.6Hz,2H),6.89(d,J＝8.8Hz,2H),6.52(dd,J＝2.0,2.6Hz,1H),5.23(s,2H),3.71(s,3H)；MS m/z(ESI):289.9[M+H] +。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.10(s,1H),7.57(t,J＝2.8Hz,1H),7.25(d,J＝8.6Hz,2H),6.89(d,J＝8.8Hz,2H),6.52(dd,J＝2.0,2.6Hz,1H),5.23(s,2H),3.71(s,3H)。
步骤7：4-氯-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-7(6H)-酮的合成
将4-氯-6-(4-甲氧苄基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-7(6H)-酮(3.18g,10.98mmol)溶于三氟乙酸(30mL)中，加入三氟甲磺酸(8.11g，54.03mmol)。反应液于25℃反应1小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，用甲醇(20mL)和水(40mL)于25℃下打浆1小时。过滤后得到4-氯-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-7(6H)-酮(2.2g)并直接用于下一步。
MS m/z(ESI):170.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.03(s,1H),12.56(s,1H),7.55(t,J＝2.8Hz,1H),6.51(dd,J＝2.0,2.8Hz,1H)。
步骤8：4,7-二氯-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪的合成
将4-氯-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-7(6H)-酮(2.2g，12.97mmol)溶于三氯氧磷(20mL)中。反应液于100℃反应2小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，溶于四氢呋喃(10mL)和甲醇(20mL)中并用氢氧化钠水溶液调节pH至8-9，将溶液减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，二氯甲烷/四氢呋喃＝1/0到10/1)得到4,7-二氯-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪(1.8g)。
MS m/z(ESI):188.1[M+H] +。
步骤9：4,7-二氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪的合成
将4,7-二氯-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪(400mg，2.13mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中，加入钠氢(170.18mg，4.26mmol)，反应液在25℃下搅拌反应1h，将2-(三甲基硅)乙氧基甲基氯(532.05mg，3.19mmol)加入至反应液中。反应液于25℃反应1小时。LCMS检测原料有剩余，有产物生成。向反应液中加入水(10mL)淬灭反应并用二氯甲烷(30mL)萃取三次，有机相用水(30mL)洗涤三次并用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化得到4,7-二氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪(280mg)。
MS m/z(ESI):318.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.17(d,J＝3.3Hz,1H),6.89(d,J＝3.1Hz,1H),5.87(s,2H),3.53(t,J＝7.9Hz,3H),0.82(t,J＝7.9Hz,2H),-0.11(s,9H)。
步骤10：4-氯-N-(4-甲氧苄基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-7-胺的合成
将4,7-二氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪(280mg，879.75μmol)和对甲氧基苄胺(120.68mg，879.75μmol)溶于甲苯(10mL)中，加入叔丁醇钠(253.63mg，2.64mmol)和甲烷磺酸(2-二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2,4,6-三异丙基-1,1-联苯)(2-氨基-1,1-联苯-2-基)钯(II)(79.75mg，87.97μmol)。经氮气置换三次后，反应液于100℃反应16小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到2/1)得到4-氯-N-(4-甲氧苄基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-7-胺(40mg)。
MS m/z(ESI):419.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ7.74(d,J＝3.1Hz,1H),7.35(d,J＝8.6Hz,2H),6.88(d,J＝8.7Hz,2H),6.68(t,J＝5.2Hz,1H),6.54(d,J＝3.1Hz,1H),5.71(s,2H),4.67-4.58(m,2H),3.72(s,3H),3.52-3.44(m,2H),0.77-0.68(m,2H),-0.11(s,9H)。
步骤11：2-(7-((4-甲氧苄基)氨基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-4-基)苯酚的合成
将4-氯-N-(4-甲氧苄基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-7-胺(40mg，95.47μmol)和2-羟基苯硼酸(19.75mg，143.20μmol)溶于1,4-二氧六环(1.6mL)和水(0.4mL)中，加入磷酸钾(60.79mg，286.40μmol)、[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(7.80mg，9.55μmol)。反应液于100℃反应16小时。LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水(10mL)并用二氯甲烷(15mL)萃取三次，有机相用水(15mL)洗涤三次并用无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干。经薄层色谱法纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到2-(7-((4-甲氧苄基)氨基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-4-基)苯酚(25.5mg)。
MS m/z(ESI):477.1[M+H] +。
步骤12：2-(7-氨基-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-4-基)苯酚的合成
将2-(7-((4-甲氧苄基)氨基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-4-基)苯酚(25.5mg，53.50μmol)溶于三氟乙酸(1mL)和三氟甲磺酸(0.1mL)中。反应液于25℃反应2小时。LCMS检测反应完毕。将反应液浓缩至干然后加入氨水调节pH至大于7。经高效液相色谱法纯化(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈比例：0％-34％)作为洗脱液)纯化得到2-(7-氨基-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-4-基)苯酚(5a)(6.66mg)。
MS m/z(ESI):226.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.67(br.s,1H),12.23(s,1H),7.86(d,J＝3.1Hz,1H),7.81(d,J＝7.0Hz,1H),7.48-7.12(m,3H),7.07-6.94(m,2H),6.91(d,J＝2.9Hz,1H)。
实施例6：2-(2-氨基吡咯并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯酚(6a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000183
步骤1：2-氯-6-(2-甲氧基苯基)吡咯并[1,2-b]哒嗪的合成
将3-氯-6-甲基哒嗪(1g，7.78mmol)和2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙酮(1.96g，8.56mmol)溶于乙醇(20mL)中，加入碳酸氢钠(1.96g，23.34mmol)，反应液在90℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得到产物2-氯-6-(2-甲氧基苯基)吡咯并[1,2-b]哒嗪(140mg)。
MS m/z(ESI):259.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.35(d,J＝1.5Hz,1H),8.04(d,J＝9.3Hz,1H),7.74(dd,J＝1.7,7.6Hz, 1H),7.30-7.29(m,1H),7.16-7.08(m,2H),7.06-6.98(m,1H),6.77(d,J＝9.3Hz,1H),3.91(s,3H)。
步骤2：N-[6-(2-甲氧基苯基)吡咯并[1,2-b]哒嗪-2-基]氨基甲酸叔丁酯的合成
将2-氯-6-(2-甲氧基苯基)吡咯并[1,2-b]哒嗪(120mg，463.85μmol)和氨基甲酸叔丁酯(65.21mg，556.62μmol)溶于二氧六环(6mL)中，在氮气环境下加入碳酸铯(302.27mg，927.71μmol)、2-二叔丁基膦-2’,4’,6’-三异丙基联苯(44.23mg，92.77μmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(42.48mg，46.39μmol)，反应液于80℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得到产物N-[6-(2-甲氧基苯基)吡咯并[1,2-b]哒嗪-2-基]氨基甲酸叔丁酯(90mg)。
MS m/z(ESI):340.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.04(d,J＝1.3Hz,1H),7.75(d,J＝15.9Hz,1H),7.68(d,J＝9.7Hz,1H),7.36(d,J＝9.7Hz,1H),7.09(d,J＝16.0Hz,1H),7.05-6.97(m,2H),6.82(d,J＝1.6Hz,1H),3.96-3.90(m,3H),1.53(s,9H)。
步骤3：2-(2-氨基吡咯并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将N-[6-(2-甲氧基苯基)吡咯并[1,2-b]哒嗪-2-基]氨基甲酸叔丁酯(30mg，88.39μmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，在0℃滴加三溴化硼(88.58mg，353.58μmol)，反应液在25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将反应液倒入水中(2mL)，用碳酸氢钠水溶液调节pH值至8，用二氯甲烷萃取(2mL)三次，将有机相减压浓缩至干，浓缩物经制备液相色谱纯化(Boston Prime C18，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的混合物(乙腈比例：25％-45％)作为洗脱液)得到产物2-(2-氨基吡咯并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯酚(6a)(1.41mg)。
MS m/z(ESI):226.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.93(d,J＝1.5Hz,1H),7.59-7.51(m,2H),7.04-6.98(m,1H),6.85(d,J＝7.8Hz,2H),6.72(d,J＝1.8Hz,1H),6.17(d,J＝9.3Hz,1H)。
实施例7：5-(2-羟基苯基)-3,6,7,9-四氮杂三环[6.4.1.04,13]十三碳-1,4(13),5,7,11-戊烯-10-酮(7a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000184
步骤1：4-羟基-1,6-二氢吡咯并[2,3-d]哒嗪-7-酮的合成
将1H-吡咯-2,3-二羧酸二甲酯(10g，54.60mmol)溶于甲醇(100mL)中，加入水合肼(14.43g，245.02mmol，85％纯度)，反应液于70℃搅拌2小时，TLC显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，得到4-羟基-1,6-二氢吡咯并[2,3-d]哒嗪-7-酮(8g)。
步骤2：4,7-二氯-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪的合成
将4-羟基-1,6-二氢吡咯并[2,3-d]哒嗪-7-酮(8g，52.94mmol)溶于三氯氧磷(80mL)中，反应液于100℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝3：2)得到产物4,7-二氯-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪(1.5g)。
MS m/z(ESI):187.8[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.23(br s,1H),7.97(d,J＝3.1Hz,1H),6.83(d,J＝2.9Hz,1H)。
步骤3：4-氯-7-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪的合成
将4,7-二氯-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪(1g，5.32mmol)和2-甲氧基苯硼酸(727.56mg，4.79mmol)溶于二氧六环(20mL)和水(4mL)中，在氮气环境下加入磷酸钾(2.26g，10.64mmol)和1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯二氯甲烷混合物(217.18mg，266.00μmol)，反应液在80℃搅拌12小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝2：1)得到产物4-氯-7-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪(700mg)。
MS m/z(ESI):259.9[M+H] +。
步骤4：4-氯-3-碘-7-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪的合成
将4-氯-7-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪(700mg，2.70mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入N-碘代琥珀酰亚胺(909.67mg，4.04mmol)，反应液于25℃搅拌2小时，薄层层析显示反应完成。反应液用水(8mL)和二氯甲烷(6mL)萃取三次，有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝3：2)得到产物4-氯-3-碘-7-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪(700mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.57(br s,1H),7.98-7.95(m,1H),7.62-7.54(m,1H),7.50(dd,J＝1.7,7.5Hz,1H),7.23(d,J＝8.3Hz,1H),7.18-7.12(m,1H),3.74(s,3H)。
步骤5：(E)-3-[4-氯-7-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-3-基]丙-2-烯酸乙酯的合成
将4-氯-3-碘-7-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪(700mg，1.82mmol)和3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)丙烯酰乙酯(451.46mg，2.00mmol)溶于二氧六环(8mL)和水(2mL)中，在氮气环境下加入碳酸钠(577.25mg，5.45mmol)和1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯二氯甲烷混合物(148.25mg，181.54μmol)，反应液在65℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝3：2)得到产物(E)-3-[4-氯-7-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-3-基]丙-2-烯酸乙酯(600mg)。
MS m/z(ESI):357.9[M+H] +。
步骤6：(E)-3-[7-(2-甲氧基苯基)-4-[(4-甲氧基苯基)甲氨基]-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-3-基]丙-2-烯酸乙酯的合成
将(E)-3-[4-氯-7-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-3-基]丙-2-烯酸乙酯(600mg，1.68mmol)和对甲氧基苄胺(460.09mg，3.35mmol)溶于二氧六环中(10mL),在氮气环境下加入叔丁醇钠(483.49mg，5.03mmol)，2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(159.89mg，335.39μmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(153.56mg，167.70μmol)和4A分子筛(600mg)，反应液于100℃搅拌4小时，LCMS显示反应完成。将反应液过滤，减压浓缩，浓缩物经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到产物(E)-3-[7-(2-甲氧基苯基)-4-[(4-甲氧基苯基)甲氨基]-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-3-基]丙-2-烯酸乙酯(160mg)。
MS m/z(ESI):459.1[M+H] +。
步骤7：(E)-3-[4-氨基-7-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-3-基]丙-2-烯酸乙酯的合成
将(E)-3-[7-(2-甲氧基苯基)-4-[(4-甲氧基苯基)甲氨基]-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-3-基]丙-2-烯酸乙酯(160mg，348.96μmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(397.89mg，3.49mmol)，反应液在50℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液中加入二氯甲烷(10mL)，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(4mL)洗涤，有机相减压浓缩至干，得到产物(E)-3-[4-氨基-7-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-3-基]丙-2-烯酸乙酯(120mg)。
MS m/z(ESI):339.1[M+H] +。
步骤8：(E)-3-[4-氨基-7-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-3-基]丙-2-烯酸的合成
将(E)-3-[4-氨基-7-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-3-基]丙-2-烯酸乙酯(120mg，354.65μmol)溶于四氢呋喃(2mL)中，加入氢氧化钠(2M，1.77mL)，反应液于40℃搅拌12小时，LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩除去四氢呋喃，用1M盐酸溶液调节pH值至5-6，减压浓缩至干得产物(E)-3-[4-氨基-7-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-3-基]丙-2-烯酸(50mg)。
MS m/z(ESI):311.1[M+H] +。
步骤9：5-(2-甲氧苯基)-3,6,7,9-四氮杂三环[6.4.1.04,13]十三碳-1,4(13),5,7,11-戊烯-10-酮的合成
将(E)-3-[4-氨基-7-(2-甲氧基苯基)1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪-3-基]丙-2-烯酸(40mg，128.90μmol)溶于二氧六环中(2mL)，加入三正丙基环磷酸酐的乙酸乙酯溶液(1.64g，2.58mmol，50％纯度)，反应液在110℃搅拌12小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，然后用二氯甲烷(2mL×3)和碳酸氢钠水溶液萃取(4mL)，有机相减压浓缩至干，浓缩物经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：2)得到产物5-(2-甲氧苯基)-3,6,7,9-四氮杂三环[6.4.1.04,13]十三碳-1,4(13),5,7,11-戊烯-10-酮(5mg)。
MS m/z(ESI):292.9[M+H] +。
步骤10：5-(2-羟基苯基)-3,6,7,9-四氮杂三环[6.4.1.04,13]十三碳-1,4(13),5,7,11-戊烯-10-酮的合成
将5-(2-甲氧苯基)-3,6,7,9-四氮杂三环[6.4.1.04,13]十三碳-1,4(13),5,7,11-戊烯-10-酮(5mg，17.11μmol)溶于二氯甲烷中(0.5mL)，在0℃滴加三溴化硼(12.86mg，51.32μmol)，反应液在25℃搅拌1小时，LCMS显示反应完成。反应液用二氯甲烷(10mL)稀释后用碳酸氢钠水溶液萃取(2mL)洗涤两次，将有机相减压浓缩至干，浓缩物经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的混合物(乙腈比例：5％-45％)作为洗脱液)得到产物5-(2-羟基苯基)-3,6,7,9-四氮杂三环[6.4.1.04,13]十三碳-1,4(13),5,7,11-戊烯-10-酮(7a)(0.82mg)。
MS m/z(ESI):278.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.34(s,1H),7.95(s,1H),7.73(s,1H),7.36-7.27(m,1H),7.10-6.87(m,3H),5.55(s,1H)。
实施例8：2-氨基-6-(2-羟基苯基)-4-甲氧基-N-苯基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺(8a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000185
步骤1：3-溴-5-甲氧基-吡啶-1-鎓-1-胺的合成
将O-(2,4-二硝基苯基)羟胺(5.30g，26.59mmol)溶于二氯甲烷(100mL)，加入3-溴-5-甲氧基吡啶(5g，26.59mmol)，反应液于25℃搅拌16小时，TLC显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，得到产物3-溴-5-甲氧基-吡啶-1-鎓-1-胺(3.8g)。
步骤2：2-氨基-6-溴-4-甲氧基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯的合成
将3-溴-5-甲氧基-吡啶-1-鎓-1-胺(2.8g，6.86mmol，50％纯度)和3-乙氧基-3-亚氨基丙酸乙酯(1.34g，6.86mmol)溶于乙醇(100mL)中，加入碳酸钾(3.79g，27.45mmol)，体系用氮气置换3次，反应液于 25℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。将反应液浓缩，然后加入乙酸乙酯(50mL)和水(60mL)，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝4：1)得到产物2-氨基-6-溴-4-甲氧基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯(200mg)。
MS m/z(ESI):313.9,315.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝8.02(d,J＝1.3Hz,1H),6.70(d,J＝1.3Hz,1H),5.29(br s,2H),4.33(q,J＝7.1Hz,2H),3.93(s,3H),1.39(t,J＝7.1Hz,3H)。
步骤3：2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-4-甲氧基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯的合成
将2-氨基-6-溴-4-甲氧基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯(150mg,477.50μmol)和二碳酸二叔丁酯(208.43mg,955.00μmol)溶于二氯甲烷(2mL)，加入三乙胺(144.95mg,1.43mmol)和4-二甲氨基吡啶(5.83mg,47.75μmol)，反应液在25℃搅拌12小时。反应液用水(2mL)洗涤三次，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝4：1)得到产物2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-4-甲氧基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯(190mg)。
步骤4：6-溴-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲氧基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸的合成
将2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-4-甲氧基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯(220mg,427.71μmol)溶于四氢呋喃(2mL)和水(2mL)中，加入氢氧化钠(68.43mg,1.71mmol)，反应液于50℃搅拌16小时，LCMS显示反应完成。反应液用乙酸乙酯(2mL)洗涤，水相用饱和柠檬酸水溶液调节pH值至5-6，然后用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，将有机相减压浓缩至干，得到产物6-溴-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲氧基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(140mg)。
MS m/z(ESI):408.0,410.0[M+Na] +。
步骤5：N-[6-溴-4-甲氧基-3-(苯基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯的合成
将6-溴-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲氧基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(90mg,233.04μmol)和苯胺(32.55mg，349.56μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，加入三乙胺(70.74mg，699.12μmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(106.33mg，279.65μmol)，反应液在25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液加入乙酸乙酯(4mL)和水(6mL)，然后用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，有机相浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚＝4：1)得到产物N-[6-溴-4-甲氧基-3-(苯基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(55mg)。
MS m/z(ESI):484.9,486.9[M+Na] +。
步骤6：N-[6-(2-羟基苯基)-4-甲氧基-3-(苯基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯的合成
将N-[6-溴-4-甲氧基-3-(苯基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(55mg，119.23μmol)和2-羟基苯硼酸(19.73mg，143.07μmol)溶于二氧六环(2mL)和水(0.5mL)中，在氮气环境下加入磷酸钾(50.62mg，238.45μmol)和1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯二氯甲烷混合物(9.74mg，11.92μmol)，反应液在80℃搅拌2小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，浓缩物经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝2：1)得到产物N-[6-(2-羟基苯基)-4-甲氧基-3-(苯基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(15mg)。
MS m/z(ESI):475.2[M+H] +。
步骤7：2-氨基-6-(2-羟基苯基)-4-甲氧基-N-苯基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺的合成
将N-[6-(2-羟基苯基)-4-甲氧基-3-(苯基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(12mg，25.29μmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入三氟乙酸(57.67mg，505.79μmol)，反应液在25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，浓缩物经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的混合物(乙腈比例：26％-66％)作为洗脱液)得到产物2-氨基-6-(2-羟基苯基)-4-甲氧基-N-苯基-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺(8a)(1.00mg)。
MS m/z(ESI):375.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.12(s,1H),9.89(br s,1H),8.40(d,J＝1.0Hz,1H),7.69(d,J＝7.5Hz,2H),7.49(dd,J＝1.5,7.8Hz,1H),7.35(t,J＝7.9Hz,2H),7.26-7.18(m,2H),7.06(t,J＝7.4Hz,1H),6.99(d,J ＝7.5Hz,1H),6.93(t,J＝7.3Hz,1H),6.45(s,2H),4.17(s,3H)。
实施例9：2-[5-[2-(2-氟-4-吡啶基)乙炔基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚(9a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000186
步骤1：2-(2-氟-4-吡啶基)乙炔基-三甲基硅烷的合成
将4-溴-2-氟吡啶(4g,22.73mmol)溶于甲苯(50mL)中，加入三甲基硅乙炔(2.46g,25.00mmol,3.46mL)、三乙胺(5.75g,56.82mmol,7.91mL)，碘化亚铜(432.87mg,2.27mmol)和双三苯基膦二氯化钯(1.60g,2.27mmol)。反应液在氮气保护下50℃并搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。反应液抽滤，滤饼减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)得2-(2-氟-4-吡啶基)乙炔基-三甲基硅烷(4.39g)。
MS m/z(ESI):193.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.25(d,J＝5.1Hz,1H),7.42-7.36(m,1H),7.28(s,1H),0.28-0.22(m,9H)。
步骤2：4-乙炔基-2-氟-吡啶的合成
将2-(2-氟-4-吡啶基)乙炔基-三甲基硅烷(1.38g,7.14mmol)溶于无水甲醇(140mL)中，加入氟化钾(829.56mg,14.28mmol,334.50μL)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。加入饱和食盐水(140mL)，用二氯甲烷(140mL)萃取三次。有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干得4-乙炔基-2-氟吡啶(654mg)。
MS m/z(ESI):121.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.27(d,J＝5.3Hz,1H),7.43(d,J＝5.0Hz,1H),7.35-7.30(m,1H),4.78(s,1H)。
步骤3：6-氯-4-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)哒嗪-3-胺的合成
将4-溴-6-氯-哒嗪-3-胺(20.0g，96.0mmol)溶于甲苯(400mL)，在氮气氛围下加入三甲基硅乙炔(10.4g，106mmol)、三乙胺(24.3g，240mmol)、碘化亚铜(1.83g，9.59mmol)和双三苯基膦二氯化钯(6.73g，9.59mmol)。反应液于25℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。反应液过滤，滤液减压浓缩经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/15)纯化得到产物6-氯-4-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)哒嗪-3-胺(14.5g)。
MS m/z(ESI):226.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ＝7.46(s,1H),0.31-0.28(m,9H)。
步骤4：3-氯-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪的合成
将6-氯-4-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)哒嗪-3-胺(14.5g，64.2mmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(150mL)中，加入叔丁醇钾(1M，109mL)和二甲氨盐酸盐(2M，32.1mL)。反应液于25℃搅拌0.5小时，然后升温至120℃反应2.5小时。LCMS显示反应完成。反应液加入饱和氯化铵溶液(50mL)稀释，过滤，滤液减压浓缩。加入乙酸乙酯(100mL)和水(70mL)稀释，有机相用水(70mL)洗涤两次，水相用乙酸乙酯(100mL)萃取两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝100/25)纯化得到产物3-氯-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪(4g)。
MS m/z(ESI):153.8[M+H] +；
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ＝7.91-7.81(m,2H),6.54(d,J＝3.3Hz,1H)。
步骤5：3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪的合成
将3-氯-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪(1.5g,9.77mmol)和2-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷(5.53g,14.65mmol,70％purity)溶于二氧六环(64mL)和水(16mL)中，加入碳酸钾(4.05g,29.30mmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(797.66mg,976.76μmol)。反应液在氮气保护下90℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。加入饱和食盐水(80mL)，用乙酸乙酯(80mL)萃取三次。有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干经柱层析色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)得产物3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪(1.04g)。
MS m/z(ESI):256.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝12.39(br s,1H),8.14(s,1H),7.92-7.84(m,1H),7.72(dd,J＝1.8,7.5Hz,1H),7.43-7.35(m,1H),7.27(d,J＝7.5Hz,1H),7.18-7.12(m,1H),6.58(d,J＝2.3Hz,1H),5.21(s,2H),3.29(s,3H)。
步骤6：5-碘-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7H-吡咯的合成
将3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪(700mg,2.74mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入N-碘代琥珀酰亚胺(740.34mg,3.29mmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。加入饱和食盐水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/50)得5-碘-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7H-吡咯(653mg)。
MS m/z(ESI):382.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝12.90(br s,1H),8.16(s,1H),7.88(s,1H),7.78(dd,J＝1.5,7.5Hz,1H),7.46-7.40(m,1H),7.27(d,J＝8.3Hz,1H),7.17(t,J＝7.3Hz,1H),5.25(s,2H),3.36(s,3H)。
步骤7：5-碘-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7-(对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-c]哒嗪的合成
将5-碘-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7H-吡咯(200mg,524.70μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入钠氢(37.78mg,944.47μmol,60％纯度)。反应液在氮气保护下在0℃搅拌0.5小时，加入对甲苯磺酰氯(180.06mg,944.47μmol)。反应液呈现在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。在0℃下加入水(3mL)进行淬灭。加入饱和食盐水(3mL)，用乙酸乙酯(3mL)萃取三次。有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/50)得产物5-碘-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7-(对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-c]哒嗪(205mg)。
MS m/z(ESI):536.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.52(s,1H),8.12(d,J＝8.3Hz,2H),7.96(s,1H),7.75(dd,J＝1.6,7.7Hz,1H),7.49-7.43(m,3H),7.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.20-7.14(m,1H),5.23(s,2H),3.33(s,3H),2.36(s,3H)。
步骤8：5-[2-(2-氟-4-吡啶基)乙炔基]-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7-(对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-c]哒嗪的合成
将5-碘-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7-(对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-c]哒嗪(180mg，336μmol)和4-乙炔基-2-氟-吡啶(81.4mg，672μmol)溶于甲苯(4mL)，在氮气氛围下加入三乙胺(102mg，1.01mmol)、碘化亚铜(6.40mg，33.6μmol)和双三苯基膦二氯化钯(23.6mg，33.6μmol)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/30)得到产物5-[2-(2-氟-4-吡啶基)乙炔基]-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7-(对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-c]哒嗪(160mg)。
MS m/z(ESI):529.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.83(s,1H),8.45(s,1H),8.33(d,J＝5.0Hz,1H),8.17(d,J＝8.3Hz,2H),7.70(dd,J＝1.6,7.7Hz,1H),7.52-7.44(m,5H),7.28(d,J＝8.0Hz,1H),7.18(t,J＝7.4Hz,1H),5.23(s,2H),3.29(s,3H),2.37(s,3H)。
步骤9：5-[2-(2-氟-4-吡啶基)乙炔基]-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪的合成
将5-[2-(2-氟-4-吡啶基)乙炔基]-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7-(对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-c]哒嗪(50mg，94.6μmol)溶于叔丁醇(1mL)，加入叔丁醇钾(31.9mg，284μmol)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液中加入乙酸，直到反应液的pH达到7，减压浓缩得到产物5-[2-(2-氟-4-吡啶基)乙炔基]-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪(30mg，粗品)直接用于下一步。
MS m/z(ESI):375.1[M+H] +。
步骤10：2-[5-[2-(2-氟-4-吡啶基)乙炔基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚的合成
将5-[2-(2-氟-4-吡啶基)乙炔基]-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪(30.0mg，80.1μmol)溶于二氯甲烷(1mL)，加入三氟乙酸(0.1mL)。反应液于25℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成。加入氨甲醇(7M)，将反应液的pH调节到7～8，然后减压浓缩经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的的混合物(乙腈比例：27％-67％)作为洗脱液)得产物2-[5-[2-(2-氟-4-吡啶基)乙炔基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚(9a)(2.05mg)。
MS m/z(ESI):331.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.60-13.20(m,2H),8.80(s,1H),8.60(s,1H),8.32(d,J＝5.1Hz,1H),8.20(d,J＝8.0Hz,1H),7.58(br d,J＝5.1Hz,1H),7.49(s,1H),7.38-7.30(m,1H),7.05-6.97(m,2H)。
实施例10：2-[5-[(Z)-2-(2-氟-4-吡啶基)乙烯基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚(10a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000187
步骤1：5-[(Z)-2-(2-氟-4-吡啶基)乙烯基]-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7-(对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-c]哒嗪的合成
将5-[2-(2-氟-4-吡啶基)乙炔基]-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7-(对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-c]哒嗪(60mg，114μmol)溶于甲醇(4mL)加入林德拉(Lindlar)催化剂(234mg，1.14mmol)，在H 2(15psi)氛围下25℃反应4小时。LCMS显示反应完成。反应液过滤，滤液减压浓缩得到产物5-[(Z)-2-(2-氟-4-吡啶基)乙烯基]-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7-(对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-c]哒嗪(67mg，粗品)直接用于下一步。
MS m/z(ESI):531.0[M+H] +。
步骤2：5-[(Z)-2-(2-氟-4-吡啶基)乙烯基]-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪的合成
将5-[(Z)-2-(2-氟-4-吡啶基)乙烯基]-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7-(对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-c]哒嗪(50mg，94.2μmol)溶于叔丁醇(1mL)，加入叔丁醇钾(31.7mg，283μmol)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液中加入乙酸，直到反应液的pH达到7，减压浓缩得到产物5-[(Z)-2-(2-氟-4-吡啶基)乙烯基]-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪(35mg，粗品)直接用于下一步。
MS m/z(ESI):376.1[M+H] +。
步骤3：2-[5-[(Z)-2-(2-氟-4-吡啶基)乙烯基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚的合成
将5-[(Z)-2-(2-氟-4-吡啶基)乙烯基]-3-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪(35.0mg，93.0μmol)溶于二氯甲烷(1mL)，加入三氟乙酸(0.8mL)。反应液于25℃搅拌4小时。LCMS显示反应完成。加入氨甲醇(7M)，将反应液的pH调节到7～8，然后减压浓缩经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的混合物(乙腈比例：16％-56％)作为洗脱液)得产物2-[5-[(Z)-2-(2-氟-4-吡啶基)乙烯基]-7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚(10a)(2.76mg)。
MS m/z(ESI):333.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.19(br s,1H),8.23(br s,1H),8.17-8.08(m,2H),7.59(d,J＝6.8Hz,1H),7.33(t,J＝7.2Hz,1H),7.26(d,J＝5.0Hz,1H),7.14-7.08(m,2H),7.00(d,J＝8.3Hz,1H),6.95(t,J＝7.0 Hz,1H),6.71(d,J＝12.0Hz,1H)。
实施例11：2-[3-(甲氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(11a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000188
步骤1：4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(3-氨基-6-氯吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.2g，3.40mmol)和2-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼环戊烷(1.35g，5.10mmol)溶于无水二氧六环(24mL)和水(6mL)中，加入碳酸铯(2.22g，6.80mmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(138.88mg，170.00μmol)。反应液在氮气氛围下90℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：1)纯化得到4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(490mg)。
MS m/z(ESI):455.3[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝7.93(s,1H),7.70(dd,J＝1.6,7.6Hz,1H),7.49-7.42(m,1H),7.28(d,J＝8.2Hz,1H),7.18(t,J＝7.4Hz,1H),6.30(s,2H),5.21(s,2H),4.71-4.51(m,1H),4.07(d,J＝12.2Hz,2H),3.30(s,3H),2.89(s,2H),1.94-1.80(m,4H),1.42(s,9H).
步骤2：4-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(30mg，66.00μmol)溶于无水二氧六环(1mL)中，加入吡啶(15.98μL，198.01μmol)和醋酸铜(23.98mg，132.01μmol)。混合物在25℃敞口搅拌0.5小时，再加入甲基硼酸(3.16mg，52.80μmol)。反应液在100℃搅拌反应5.5小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱(Phenomenex Gemini C18-1柱：5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：35％-55％)作为洗脱液)纯化得到4-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-(甲氨基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(10mg)。
MS m/z(ESI):469.2[M+H] +.
步骤3：2-[3-(甲氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(10mg，21.34μmol)溶于无水甲醇(1mL)中，加入盐酸甲醇(4M，1mL)。反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。减压浓缩至干，经制备液相色(Phenomenex Gemini C18-1柱：5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：8％-28％)作为洗脱液)谱纯化得到2-[3-(甲氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(11a)(7.39mg)。
MS m/z(ESI):325.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.77(br s,1H),8.45(s,1H),8.08(dd,J＝1.3,8.3Hz,1H),7.46-7.29(m,1H),7.12(d,J＝4.8Hz,1H),7.04-6.96(m,2H),4.75(t,J＝11.0Hz,1H),3.29(d,J＝9.8Hz,2H),2.96(d,J＝4.8Hz,3H),2.87(br s,2H),2.27-2.08(m,2H),1.94(d,J＝10.8Hz,2H).
实施例12：2-(3-氨基-1-苄基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(12a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000189
步骤1：1-苄基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺的合成
将6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(100mg，589.72μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入溴化苄(151.29mg，884.58μmol)和无水碳酸铯(576.43mg，1.77mmol)，反应液升温至80℃并搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。将反应液冷却至25℃，加入水(5mL),用乙酸乙酯(15mL)萃取两次，加入无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，经薄层层析(石油醚：乙酸乙酯＝1：1(千分之五氨甲醇溶液))纯化得到1-苄基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(110mg)。
MS m/z(ESI):260.0[M+H] +.
步骤2：2-(3-氨基-1-苄基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将1-苄基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(100mg，385.07μmol)溶于无水二氧六环(4mL)和水(1mL)中，加入2-羟基苯硼酸(79.69mg，577.60μmol)，无水磷酸钾(245.21mg，1.16mmol)，在氮气保护下加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(31.45mg，38.51μmol)。反应液加热至100℃下搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。将反应液冷却至25℃。加入水(5mL)，用乙酸乙酯(15mL)萃取两次，加入无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗残液经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有氨水(0.05％))和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：31％-71％)作为洗脱液)纯化得到2-(3-氨基-1-苄基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(12a)(11mg)。
MS m/z(ESI):318.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.64(s,1H),8.11(br d,J＝8.1Hz,1H),7.42-7.25(m,6H),7.08-6.97(m,2H),6.52(s,2H),5.46(s,2H).
实施例13：2-[3-氨基-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(13a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000190
步骤1：3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(500mg，2.95mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入1-Boc-3-碘吡咯烷(963.74mg，3.24mmol)和碳酸铯(2.88g，8.85mmol)。反应液于80℃搅拌反应2小时。经LCMS监测反应完全。往反应液中加入饱和亚硫酸钠水溶液(20mL)淬灭反应，向反应液中加入饱和食盐水(45mL)并用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，有机相用水(15mL)萃洗三次，并用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩至干，然后经柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(176mg)。
MS m/z(ESI):339.2[M+H] +.
步骤2：3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(176mg，519.49μmol)和2-羟基苯硼酸(107.48mg，779.24μmol)溶于二氧六环(8mL)和水(2mL)中，加入碳酸铯(338.52mg，1.04mmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(42.42mg，51.95μmol)。反应液在氮气环境下于90℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩至干，经柱层析纯化(石油醚/四氢呋喃＝1/1)得到3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(126mg)。
MS m/z(ESI):397.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.82(br s,1H),8.50(s,1H),8.07(d,J＝7.1Hz,1H),7.41-7.32(m,1H),7.06-6.94(m,2H),6.56(br s,2H),5.45-5.28(m,1H),3.82-3.33(m,6H),1.41(br d,J＝12.6Hz,9H).
步骤3：2-[3-氨基-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(126mg，317.83μmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(362.40mg，3.18mmol)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩至干得2-[3-氨基-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(13a) (125mg)。
MS m/z(ESI):296.9[M+H] +.
实施例14：2-[3-氨基-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(14a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000191
步骤1：3-(甲基磺酰氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将3-羟基-哌啶-1-羧酸叔丁基酯(2g，9.94mmol)溶于四氢呋喃中(40mL)，加入吡啶(1.57g，19.87mmol)和甲基磺酸酐(1.90g，10.93mmol)，反应液在25℃搅拌2小时，薄层层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)显示反应完成，反应液用乙酸乙酯(50mL)和水(60mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到产物3-(甲基磺酰氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.3g)。
步骤2：3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(100mg，589.72μmol)和3-(甲基磺酰氧基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯(247.11mg，884.58μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，加入碳酸铯(576.43mg，1.77mmol)和碘化钠(176.79mg，1.18mmol)。反应液于80℃反应12小时。经LCMS检测反应完全。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，将有机相减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到3/2)得到3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(20mg)。
MS m/z(ESI):353.0[M+H] +.
步骤3：3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(20mg，56.69μmol)和2-羟基苯硼酸(9.38mg，68.02μmol)溶于1,4-二氧六环(0.8mL)和水(0.2mL)中，加入碳酸铯(36.94mg，113.37μmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(4.63mg，5.67μmol)。经氮气置换后，反应液于100℃反应2小时。经LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，经薄层色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝2/1)纯化得到3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(14mg)。
MS m/z(ESI):411.3[M+H] +.
步骤4：2-[3-氨基-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(14mg，34.11μmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，85.27μL)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干得产物2-[3-氨基-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(10mg)。
MS m/z(ESI):311.0[M+H] +.
实施例15：2-[3-氨基-1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(15a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000192
步骤1：3-甲基磺酰氧基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的合成
将3-羟基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(2g，8.80mmol)溶于四氢呋喃中(30mL)，加入吡啶(1.39g，17.60mmol)和甲基磺酸酐(2.30g，13.20mmol)，反应液在25℃搅拌4小时，薄层层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)显示反应完成。反应液用乙酸乙酯(50mL×3)和水(50mL)萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到3/1)得到产物3-甲基磺酰氧基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(2.5g)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ5.11-4.99(m,1H),4.40-4.10(m,2H),3.00(d,J＝1.3Hz,3H),2.32-1.75(m,7H),1.71-1.63(m,1H),1.46(d,J＝7.1Hz,9H).
步骤2：3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的合成
将6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(100mg，589.72μmol)和3-甲基磺酰氧基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(216.11mg，707.67μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，加入碳酸铯(576.43mg，1.77mmol)和碘化钠(132.59mg，884.58μmol)。反应液于80℃反应12小时。经LCMS检测反应完全。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次后有机相减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到3/2)得到3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(60mg)。
MS m/z(ESI):379.2[M+H] +.
步骤3：3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的合成
将3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(60mg，158.37μmol)和2-羟基苯硼酸(26.21mg，190.05μmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)和水(0.5mL)中，加入碳酸铯(154.80mg，475.12μmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(12.93mg，15.84μmol)。经氮气置换后，反应液于100℃反应2小时。经LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，经薄层色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/1)纯化得到3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(30mg)。
MS m/z(ESI):437.4[M+H] +.
步骤4：2-[3-氨基-1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(30mg，68.73μmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，171.82μL)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干得产物2-[3-氨基-1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(15a)(30mg)。
MS m/z(ESI):337.2[M+H] +.
实施例16：2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(16a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000193
步骤1：4-[(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(100mg，589.72μmol)和1-叔丁氧羰基-4-溴甲基哌啶(196.86mg，707.67μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，加入碳酸铯(384.28mg，1.18mmol)。反应液于80℃反应16小时。经LCMS检测反应完全。向反应液中加入水(15mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。有机相减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到3/2)得到4-[(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg)。
MS m/z(ESI):367.1[M+H] +.
步骤2：4-[[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg，136.30μmol)和2-羟基苯硼酸(22.56mg，163.56μmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)和水(0.4mL)中，加入碳酸铯(88.82mg，272.59μmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(11.13mg，13.63μmol)。经氮气置换后，反应液于100℃反应2小时。经LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，经薄层色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/1)纯化得到4-[[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(45mg)。
MS m/z(ESI):425.3[M+H] +.
步骤3：2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(45mg，106.01μmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，265.02μL)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干得产物2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(16a)(50mg)。
MS m/z(ESI):325.0[M+H] +.
实施例17：2-[3-(甲氨基)-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(17a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000194
步骤1：3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(200mg，590.33μmol)，2-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷(187.10mg，708.40μmol)，1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(43.19mg，59.03μmol)和磷酸钾(375.92mg，1.77mmol)溶于二氧六环(4mL)和水(1mL)中。反应液在氮气氛围下100℃搅拌反应4小时。LCMS检测反应完毕。反应液浓缩至干，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：1)纯化得3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(100mg)。
MS m/z(ESI):441.2[M+H] +.
步骤2：3-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(50mg，113.51μmol)，甲基硼酸(6.79mg，113.51μmol)，吡啶(26.94mg，340.53μmol，27.49μL)和醋酸铜(41.23mg，227.02μmol)溶于二氧六环(4mL)中。反应液在氧气氛围下100℃搅拌反应6小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩干，经薄层色谱(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1:1)纯化得到3-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(30mg)。
MS m/z(ESI):455.2[M+H] +.
步骤3：2-[3-(甲氨基)-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(17a)的合成
将3-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(30mg，66.00μmol)溶于无水甲醇(1mL)和盐酸二氧六环(0.5mL，4M)中。反应液在25℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。反应液浓缩至干，得到2-[3-(甲氨基)-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(17a)(30mg)。
MS m/z(ESI):311.1[M+H] +.
实施例18：2-[3-[(甲基-d 3)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(18a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000195
步骤1：4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
将4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(300mg，660.04μmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入吡啶(57.43mg，726.04μmol)，4-二甲基氨基吡啶(8.06mg，66.00μmol)和Boc酸酐(144.05mg，660.04μmol)。反应液在25℃反应12小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(170mg)。
MS m/z(ESI):555.4[M+H] +.
步骤2：4-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-[(甲基-d 3)氨基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(50mg，90.15μmol)溶于四氢呋喃(3mL)中，加入钠氢(18.03mg，450.75μmol，60％纯度)，反应液在25℃搅拌0.5小时，加入氘代碘甲烷(65.34mg，450.75μmol)。反应液在25℃反应11.5小时，LCMS检测反应完毕。反应液加水(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到4-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-[(甲基-d 3)氨基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(30mg)。
MS m/z(ESI):572.2[M+H] +.
步骤3：2-[3-[(甲基-d 3)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-(6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-3-((甲基-d 3)氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(30mg，26.24μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入盐酸/二氧六环(65.60μL，262.38μmol)，反应液在25℃反应12小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经制备液相色谱(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量19％-59％)作为洗脱液)纯化得到2-[3-[(甲基-d 3)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(18a)(1.02mg)。
MS m/z(ESI):328.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.96(br s,1H),8.48(s,1H),8.13(d,J＝7.1Hz,1H),7.37(t,J＝7.0Hz,1H),7.05-6.96(m,3H),4.63(br t,J＝11.7Hz,1H),3.11(br d,J＝13.1Hz,2H),2.72-2.62(m,2H),2.02(dt,J＝8.2,11.9Hz,2H),1.85-1.77(m,2H).
实施例19：2-[3-(乙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(19a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000196
步骤1：4-[3-(乙基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg，110.01μmol)和乙醛(14.54mg，330.02μmol)溶于无水甲醇(1mL)中，加入乙酸(18.87μL，330.02μmol)。反应液在25℃搅拌反应3小时后，加入氰基硼氢化钠(20.74mg，330.02μmol)。反应液在25℃搅拌反应18小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝2：1)得到4-[3-(乙基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(40mg)。
MS m/z(ESI):483.3[M+H] +.
步骤2：2-[3-(乙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[3-(乙基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(40mg，82.89μmol)溶于无水甲醇(1mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，207.22μL)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，得到2-[3-(乙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(19a)(2.30mg)。
MS m/z(ESI):339.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.28(d,J＝8.3Hz,1H),8.90(d,J＝9.5Hz,1H),8.46(s,1H),7.78(br s,1H),7.45(t,J＝7.3Hz,1H),7.13(d,J＝8.3Hz,1H),7.05(t,J＝7.5Hz,1H),4.96(t,J＝10.8Hz,1H),3.42(d,J＝7.0Hz,2H),3.40-3.37(m,2H),3.12-2.94(m,2H),2.41-2.26(m,2H),2.09(d,J＝11.8Hz,2H),1.27(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例20：2-[1-(哌啶-4-基)-3-(丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(20a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000197
步骤1：4-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-(丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg，110.01μmol)和丙醛(19.17mg，330.03μmol)溶于无水甲醇(2mL)中，加入乙酸(18.88μL，330.03μmol)。反应液在25℃搅拌反应3小时后，加入氰基硼氢化钠(20.74mg，330.03μmol)。反应液在25℃搅拌反应18小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝2：1)得到4-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-(丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(44mg)。
MS m/z(ESI):497.2[M+H] +.
步骤2：2-[1-(哌啶-4-基)-3-(丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-(丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(44mg，88.60μmol)溶于无水甲醇(1mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，221.51μL)。反应液在25℃搅拌反应2 小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，得到2-[1-(哌啶-4-基)-3-(丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(20a)(2.65mg)。
MS m/z(ESI):353.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.35(d,J＝10.0Hz,1H),8.93(d,J＝10.5Hz,1H),8.46(s,1H),7.70(d,J＝7.5Hz,1H),7.52-7.39(m,1H),7.17(d,J＝8.0Hz,1H),7.06(t,J＝7.3Hz,1H),4.98(t,J＝11.0Hz,1H),3.45(d,J＝12.0Hz,2H),3.35(t,J＝7.0Hz,2H),3.02(q,J＝11.5Hz,2H),2.40-2.28(m,2H),2.09(d,J＝12.3Hz,2H),1.74-1.72(m,2H),0.96(t,J＝7.4Hz,3H).
实施例21：2-[3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(21a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000198
步骤1：4-[3-(异丙基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁基酯的合成
将4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁基酯(50mg，110.01μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入丙酮(19.17mg，330.02μmol)和乙酸(19.82mg，330.02μmol)，反应液在25℃搅拌3小时，然后加入氰基硼氢化钠(20.74mg，330.02μmol)。反应液在25℃反应9小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩得到粗产品，经薄层色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/1)纯化得到4-[3-(异丙基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁基酯(50mg)。
MS m/z(ESI):497.2[M+H] +.
步骤2：2-[3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[3-(异丙基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁基酯(20mg，40.27μmol)溶于甲醇(0.5mL)中，加入盐酸二氧六环(100.68μL，402.74μmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经制备液相色谱(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量32％-72％)作为洗脱液)纯化得到2-[3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(21a)(3.5mg)。
MS m/z(ESI):353.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.02(br s,1H),8.49(s,1H),8.13(br d,J＝7.5Hz,1H),7.40-7.32(m,1H),7.04-6.96(m,2H),6.91(d,J＝7.8Hz,1H),4.68-4.57(m,1H),4.02(qd,J＝6.6,13.5Hz,1H),3.10(br d,J＝12.3Hz,2H),2.71-2.61(m,2H),2.56-2.54(m,1H),2.05-1.94(m,2H),1.79(br d,J＝10.6Hz,2H),1.28(d,J＝6.5Hz,6H).
实施例22：N-[6-(2-羟基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]环丙烷甲酰胺(22a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000199
步骤1：4-[3-[双(环丙烷羰基)氨基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg，220.01 μmol)和三乙胺(66.79mg，660.04μmol，91.87μL)溶于无水二氯甲烷(2mL)中，然后加入环丙基甲酰氯(46.00mg，440.02μmol，40.00μL)。反应液在25℃搅拌反应2小时。薄层色谱检测反应完毕。反应液加入水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取，有机相减压浓缩干，经薄层色谱(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1:1)纯化得到4-[3-[双(环丙烷羰基)氨基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg)。
步骤2：N-[6-(2-羟基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]环丙烷甲酰胺的合成
将4-[3-[双(环丙烷羰基)氨基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg，84.65μmol)溶于无水甲醇(1mL)中，加入氢氧化钠溶液(4M，84.65μL)，反应液在25℃搅拌反应2小时，将反应液减压浓缩至干。然后加入无水甲醇(1mL)和盐酸二氧六环(0.5mL，4M)。反应液在25℃搅拌反应2小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Phenomenex Luna柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的混合物(乙腈含量0％-39％)作为洗脱液)纯化得到N-[6-(2-羟基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]环丙烷甲酰胺(22a)(2.02mg)。
MS m/z(ESI):379.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.13(s,1H),11.10(s,1H),8.76(s,1H),8.12(d,J＝8.3Hz,1H),7.45-7.29(m,1H),7.07-7.02(m,2H),4.94(t,J＝11.0Hz,1H),3.25(d,J＝12.4Hz,2H),2.83(t,J＝11.2Hz,2H),2.12-1.96(m,6H),0.93-0.84(m,4H).
实施例23：2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-6-氯苯酚(23a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000200
步骤1：4-[3-氨基-6-(3-氯-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg，141.72μmol)和3-氯-2-羟苯基硼酸(24.43mg，141.72μmol)溶于无水二氧六环(0.8mL)和水(0.2mL)中，加入碳酸铯(92.35mg，283.44μmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(11.57mg，14.17μmol)。反应液在氮气氛围下于90℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝2：1)得到4-[3-氨基-6-(3-氯-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(35mg)。
MS m/z(ESI):445.1[M+H] +.
步骤2：2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-6-氯苯酚的合成
将4-[3-氨基-6-(3-氯-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(20mg，44.95μmol)溶于无水甲醇(1mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，112.38μL)。反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱(Phenomenex Gemini C18柱：5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量30％-50％)作为洗脱液)纯化得到2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-6-氯苯酚(23a)(2.41mg)。
MS m/z(ESI):345.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.64(s,1H),8.20-8.08(m,1H),7.52(dd,J＝1.3,7.8Hz,1H),6.98(t,J＝7.9Hz,1H),6.61-6.44(m,2H),4.63(br s,1H),3.10(br s,2H),2.67(br d,J＝1.8Hz,2H),2.02-1.88(m,2H),1.87-1.76(m,2H).
实施例24：N-[6-(3-氯-2-羟基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]环丙烷甲酰胺(24a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000201
将4-[3-氨基-6-(3-氯-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(150mg，337.14μmol)、环丙基甲酰氯(140.97mg，1.35mmol，122.59μL)和三乙胺(102.35mg，1.01mmol，140.78μL)溶于无水二氯甲烷(4mL)中。反应液在25℃搅拌反应2小时,薄层色谱检测(石油醚：四氢呋喃＝1：1)反应完毕。反应液加入水(5mL)和乙酸乙酯(10mL)萃取，有机相减压浓缩干。然后溶于无水甲醇(2mL)和水(2mL)中，加入氢氧化钠溶液(4M，0.1mL)，反应液在25℃搅拌反应2小时，将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱纯化(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(37％-77％)作为洗脱液)，纯化得到N-[6-(3-氯-2-羟基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]环丙烷甲酰胺(24a)(50mg)。
MS m/z(ESI):413.1[M+H] +.
实施例25：2-[3-(环丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(25a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000202
步骤1：4-[3-碘-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
将4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(100mg，220.01μmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入碘单质(139.60mg，550.03μmol)，置换氮气，加入亚硝酸叔丁酯(45.38mg，440.02μmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液用饱和亚硫酸钠溶液(2mL)淬灭，真空除去二氯甲烷，加水(5mL)稀释。用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，干燥，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到4-[3-碘-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(120mg)。
MS m/z(ESI):566.0[M+H] +；
步骤2：4-(3-(环丙基氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
将4-[3-碘-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(110mg，194.55μmol)溶于二甲亚砜(6mL)中，加入碘化亚铜(18.53mg，97.28μmol)，磷酸钾(103.24mg，486.38μmol)和L-脯氨酸(22.40mg，194.55μmol)，置换氮气，加入环丙胺(77.75mg，1.36mmol)。反应液在80℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液冷却至室温，加水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，干燥，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到4-(3-(环丙基氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(80mg)。
MS m/z(ESI):495.1[M+H] +.
步骤3：2-[3-(环丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-(3-(环丙基氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(40mg，80.88μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入盐酸/二氧六环(202.19μL，808.76μmol)。反应液在25℃反应12小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经制备液相色谱(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量47％-87％)作为洗脱液)纯化得到2-[3-(环丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(25a)(15mg)。
MS m/z(ESI):351.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.97(br s,1H),8.50(s,1H),8.13(d,J＝7.3Hz,1H),7.42-7.33(m,2H),7.04-6.97(m,2H),4.70-4.58(m,1H),3.53-3.51(m,1H),3.10(br d,J＝12.4Hz,2H),2.80(qt,J＝3.4,6.8Hz,1H),2.69-2.62(m,2H),2.03(dq,J＝4.1,12.1Hz,2H),1.81(br d,J＝9.8Hz,2H),0.78-0.69(m,2H),0.63-0.56(m,2H).
实施例26：2-[1-(哌啶-4-基)-3-[(2,2,2-三氟乙基)氨基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(26a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000203
步骤1：4-(3-((叔丁氧羰基)(2,2,2-三氟乙基)氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
将4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(80mg，144.24μmol)溶于四氢呋喃(7mL)中，加入钠氢(28.84mg，721.19μmol，60％纯度)，反应液在25℃搅拌0.5小时，加入三氟甲磺酸三氟乙酯(133.91mg，576.95μmol)。反应液在25℃反应11.5小时，LCMS检测反应完毕。反应液用水(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，干燥，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到4-(3-((叔丁氧羰基)(2,2,2-三氟乙基)氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(75mg)。
MS m/z(ESI):637.2[M+H] +.
步骤2：2-[1-(哌啶-4-基)-3-[(2,2,2-三氟乙基)氨基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-(3-((叔丁氧羰基)(2,2,2-三氟乙基)氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(75mg，117.80μmol)溶于甲醇(2mL)中，加入4M盐酸/二氧六环(294.51μL，1.18mmol)。反应液在25℃反应12小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经高效液相色谱(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量33％-73％)作为洗脱液)纯化得到2-[1-(哌啶-4-基)-3-[(2,2,2-三氟乙基)氨基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(26a)(20mg)。
MS m/z(ESI):393.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.65(br s,1H),8.56(s,1H),8.13(dd,J＝1.4,8.3Hz,1H),7.83(t,J＝6.7Hz,1H),7.41-7.34(m,1H),7.05-6.99(m,2H),4.71-4.62(m,1H),4.32-4.20(m,2H),3.31-3.18(m,1H),3.09(br d,J＝12.0Hz,2H),2.68-2.61(m,2H),1.97(dq,J＝3.9,12.0Hz,2H),1.80(br d,J＝11.0Hz,2H).
实施例27：2-[1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(27a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000204
步骤1：3-甲基磺酰氧基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的合成
将3-羟基-8-氮杂环庚烯[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(3g，13.20mmol)和甲基磺酸酐(3.45g，19.80mmol)溶于四氢呋喃(60mL)中，加入吡啶(2.09g，26.40mmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。经薄层层析(石油醚：四氢呋喃＝3：1)监测反应完成。往反应液中加入水(50mL)并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩至干得3-甲基磺酰氧基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(3.79g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝5.04-4.90(m,1H),4.08(br d,J＝15.8Hz,2H),3.19(d,J＝17.0Hz,3H),2.06(br s,2H),1.96(br s,4H),1.75-1.69(m,1H),1.67-1.54(m,1H),1.40(d,J＝6.1Hz,9H).
步骤2：3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的合成
将3-甲基磺酰氧基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(4.9g，16.05mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(80mL)中，加入碘化钠(3.01g，20.06mmol)。反应液在25℃搅拌反应1.5小时。将6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(2.27g,13.37mmol)和碳酸铯(13.07g，40.11mmol)加入至反应液中。反应液于80℃搅拌反应10.5小时。LCMS监测反应完全。往反应液中加入水(100mL)并用乙酸乙酯(100mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥。经柱层析色谱纯化(石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(862mg)。
MS m/z(ESI):379.2[M+H] +.
步骤3：3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的合成
3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(200mg，527.91μmol)和2-(甲氧基甲氧基)苯硼酸(115.28mg，633.49μmol)溶于二氧六环(4mL)和水(1mL)中，加入碳酸钾(218.88mg，1.58mmol)和四(三苯基膦)钯(61.00mg，52.79μmol)。反应液于100℃搅拌12小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩至干，然后经柱层析色谱纯化(二氧化硅：石油醚/四氢呋喃＝1/1)得到3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(210mg)。
MS m/z(ESI):481.5[M+H] +.
步骤4：3-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的合成
将3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(100mg，208.09μmol)和甲基硼酸(9.97mg，166.47μmol)溶于无水二氧六环(5mL)中，然后加入吡啶(49.38mg，624.27μmol)和醋酸铜(75.59mg,416.18μmol)。反应液在氧气保护下于100℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干经薄层色谱纯化(二氧化硅：石油醚/四氢呋喃＝1/1)得到3-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔 丁酯(20mg)。
MS m/z(ESI):495.8[M+H] +.
步骤5：2-[1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将3-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(18mg，36.39μmol)溶于无水二氧六环(1mL)中，然后加入盐酸二氧六环(4M，90.99μL)。反应液在25℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干得2-[1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(27a)(10mg)。
MS m/z(ESI):351.1[M+H] +.
实施例28：2-氯-6-[3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(28a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000205
步骤1：4-[3-氨基-6-(3-氯-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(978mg，2.27mmol，82％纯度)和3-氯-2-羟苯基硼酸(470mg，2.73mmol)溶于二氧六环(20mL)和水(5mL)，在氮气氛围下加入碳酸铯(1.48g，4.54mmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(186mg，227μmol)。反应液于100℃搅拌3小时。LCMS监测反应完成。反应液减压浓缩，加入水(30mL)和二氯甲烷(30mL)稀释，水相用二氯甲烷(30mL)萃取两次，有机相用水(30mL)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/40)纯化得到标题化合物(320mg)。
MS m/z(ESI):445.2[M+H] +；
步骤2：4-[6-(3-氯-2-羟基苯基)-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[3-氨基-6-(3-氯-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg，450μmol)和丙酮(78.3mg，1.35mmol)溶于甲醇(4mL)中，加入醋酸(81.0mg，1.35mmol)，反应在60℃搅拌反应2小时，然后加入氰基硼氢化钠(141mg，2.25mmol)。反应在60℃搅拌反应16小时，LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝100/17)纯化得到标题化合物(77mg)。
MS m/z(ESI):487.2[M+H] +.
步骤3：2-氯-6-[3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[6-(3-氯-2-羟基苯基)-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(77mg，158μmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入盐酸二氧六环溶液(4M，791μL)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩得到2-氯-6-[3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(60mg，粗品)，直接用于下一步。
MS m/z(ESI):387.1[M+H] +.
实施例29：2-氟-6-[3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(29a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000206
步骤1：4-[6-氯-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，2.83mmol)和丙酮(1.65g，28.34mmol)溶于甲醇(25mL)中，加入醋酸(510.62mg，8.50mmol)和氰基硼氢化钠(534.34mg，8.50mmol)。反应液于25℃搅拌反应24小时。经LCMS监测反应完全。反应液中加入水(25mL)并用乙酸乙酯(25mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩至干，然后经柱层析纯化(石油醚/四氢呋喃＝5/1)得到标题化合物(524mg)。
MS m/z(ESI):395.1[M+H] +.
步骤2：4-[6-(3-氟-2-羟基苯基)-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[6-氯-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg，253.23μmol)和3-氟-2-羟基苯硼酸(47.38mg，303.88μmol)溶于二氧六环(4mL)和水(1mL)中，加入碳酸铯(165.01mg，506.46μmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(20.68mg，25.32μmol)。反应液在氮气氛围下于90℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。往反应液中加入水(5mL)并用乙酸乙酯(5mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩至干，经柱层析纯化(石油醚/四氢呋喃＝2/1)得到标题化合物(98mg)。
MS m/z(ESI):471.2[M+H] +.
步骤3：2-氟-6-[3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[6-(3-氟-2-羟基苯基)-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(98mg，208.27μmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，520.68μL)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩至干得2-氟-6-[3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(70mg)。
MS m/z(ESI):371.1[M+H] +.
实施例30：4-氟-2-(3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(30a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000207
步骤1：4-[6-(5-氟-2-羟基苯基)-3-(异丙基氨基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[6-氯-3-(异丙基氨基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg，253.23μmol)和5-氟-2-羟基苯硼酸(47.38mg，303.88μmol)溶于二氧六环(4mL)和水(1mL)中，加入碳酸铯(165.01mg，506.46μmol)和[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(20.68mg,25.32μmol)。反应液 在氮气环境下于90℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(5mL)并用乙酸乙酯(25mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，经柱层析纯化(石油醚/四氢呋喃＝2/1)得到标题化合物(77mg)。
MS m/z(ESI):471.2[M+H] +.
步骤2：4-氟-2-(3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-[6-(5-氟-2-羟基-苯基)-3-(异丙基氨基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(77mg，163.64μmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，409.11μL)。反应液于25℃搅拌2小时。薄层层析(石油醚：四氢呋喃＝2:1)监测反应完全。反应液减压浓缩至干得4-氟-2-(3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(60mg)。
MS m/z(ESI):371.2[M+H] +.
实施例31：2-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(31a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000208
步骤1：4-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[3-碘-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg，353.73μmol)溶于二甲基亚砜(4mL)中，加入碘化亚铜(33.68mg，176.87μmol)、磷酸钾(187.71mg，884.33μmol)、L-脯氨酸(40.72mg，353.73mg)和1-氨基-2-甲基-2-丙醇(189.18mg，2.12mmol)。反应液在氮气氛围下在80℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完毕。反应液用减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到标题化合物(200mg)。
MS m/z(ESI):527.2[M+H] +.
步骤2：2-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg，379.78μmol)溶于无水甲醇(3mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，949.44μL)。反应液在25℃搅拌反应3小时，LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干得2-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(200mg)。
MS m/z(ESI):383.1[M+H] +.
实施例32：2-氟-6-[1-(哌啶-4-基)-3-丙氨基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(32a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000209
步骤1：4-[3-氨基-6-(3-氟-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(373.37mg，1.06mmol)和3-氟-2-羟基苯硼酸(165mg，1.06mmol)溶于二氧六环(12mL)和水(3mL)中，加入碳酸铯(689.59mg，2.12mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(86.42mg，105.82μmol)。反应液在氮气环境下于80℃搅拌反应12小时。LCMS监测反应完全。往反应液中加入水(15mL)并用乙酸乙酯(15mL×3) 萃取，有机相用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩至干，经柱层析纯化(石油醚/四氢呋喃＝1/1)得到标题化合物(260mg)。
MS m/z(ESI):429.1[M+H] +.
步骤2：4-[6-(3-氟-2-羟基苯基)-3-丙氨基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[3-氨基-6-(3-氟-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(140mg，326.75μmol)溶于甲醇(1.5mL)中，加入醋酸(58.87mg，980.26μmol)。将丙醛(1.65g，28.34mmol)溶于甲醇(1.5mL)，加入反应液中。反应液于25℃搅拌反应0.5小时，然后加入氰基硼氢化钠(61.60mg，980.26μmol)。反应液于25℃搅拌反应12小时。经LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩至干，然后经柱层析纯化(石油醚/四氢呋喃＝1/1)得到标题化合物(104mg)。
MS m/z(ESI):471.2[M+H] +.
步骤3：2-氟-6-[1-(哌啶-4-基)-3-丙氨基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[6-(3-氟-2-羟基苯基)-3-丙氨基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(104mg，221.02μmol)溶于二氯甲烷(1.5mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，1.11mL)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩至干得2-氟-6-[1-(哌啶-4-基)-3-丙氨基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(78mg)。
MS m/z(ESI):371.6[M+H] +.
实施例33：2-氟-6-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(33a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000210
步骤1：4-[3-氨基-6-(3-氟-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(943.67mg，2.67mmol)和3-氟-2-甲氧基苯硼酸(500mg，2.9mmol)溶于二氧六环(20mL)和水(5mL)中，加入碳酸铯(1.74g，5.35mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(218.42mg，267.47μmol)。反应液在氮气环境下于80℃搅拌反应12小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干，经柱层析纯化(石油醚/四氢呋喃＝1/1)得到标题化合物(98mg)。
MS m/z(ESI):443.2[M+H] +.
步骤2：4-(6-(3-氟-2-甲氧基苯基)-3-碘-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
将4-[3-氨基-6-(3-氟-2-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(600mg，1.36mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，加入碘单质(860.39mg，3.39mmol)，在氮气保护下在0℃下加入亚硝酸叔丁酯(279.66mg，2.71mmol)。反应液在氮气环境下于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入饱和亚硫酸钠，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，经柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到标题化合物(612mg)。
MS m/z(ESI):554.1[M+H] +.
步骤3：4-[6-(3-氟-2-甲氧基苯基)-3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁 酯的合成
将4-(6-(3-氟-2-甲氧基苯基)-3-碘-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(610mg，1.10mmol)和1-氨基-2-甲基-2-丙醇(589.55mg，6.61mmol)溶于二甲基亚砜(12mL)中，加入碘化亚铜(104.97mg，551.17μmol)、磷酸钾(584.97mg，2.76mmol)和L-脯氨酸(126.91mg，1.10mmol)。反应液在氮气环境下于80℃搅拌反应12小时。LCMS监测反应完全。往反应液中加入水(12mL)并用乙酸乙酯(12mL×3)萃取，将有机相减压浓缩至干，经柱层析纯化(石油醚/四氢呋喃＝1/1)得到标题化合物(465mg)。
MS m/z(ESI):515.2[M+H] +.
步骤4：2-氟-6-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[6-(3-氟-2-甲氧基苯基)-3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(60mg，116.60μmol)溶于二氯甲烷(0.5mL)中，在0℃下加入三溴化硼(29.21mg，116.60μmol)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS监测反应完全。加入冰水浴淬灭，加入饱和碳酸氢钠调节pH至碱性，加入二氯甲烷/甲醇＝10/1进行萃取，有机相减压浓缩至干，经薄层色谱纯化(石油醚/四氢呋喃＝1/3)得到2-氟-6-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(25mg)。
MS m/z(ESI):401.1[M+H] +.
实施例34：2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-6-氟苯酚(34a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000211
将4-[3-氨基-6-(3-氟-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(300.00mg，700.18μmol)溶于无水甲醇(5mL)中，再加入盐酸二氧六环(4M，1.75mL)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，得到2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-6-氟苯酚(278.4mg)。
MS m/z(ESI):329.1[M+H] +.
实施例35：2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-4-氟苯酚(35a)盐酸盐的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000212
合成路线：
Figure PCTCN2022133547-appb-000213
步骤1：4-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg，283.43μmol)和5-氟-2-羟基苯硼酸(48.61mg，311.78μmol)溶于二氧六环(3mL)和水(1mL)中，加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(23.15mg，28.34μmol)和碳酸铯(184.70mg，566.86μmol)。反应液在氮气氛围下80℃搅拌反 应2小时。LCMS检测反应完毕。加入水(6mL)，用二氯甲烷(20mL×3)萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：1)纯化得标题化合物(61mg)。
MS m/z(ESI):429.1[M+H] +.
步骤2：2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-4-氟苯酚盐酸盐的合成
将4-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(60mg，140.04μmol)溶于无水二氯甲烷(2mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，385.26μL)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩干得2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-4-氟苯酚盐酸盐(56.9mg，粗品)。
MS m/z(ESI):329.0[M+H] +.
实施例36：4-氟-2-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(36a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000214
步骤1：4-[3-氨基-6-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，850.30μmol)和5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯硼酸(204.04mg，1.02mmol)溶于无水二氧六环(4mL)和水(1mL)中，加入碳酸铯(554.09mg，1.70mmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(69.44mg，85.03μmol)。反应液在氮气氛围下于100℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完毕，用水(10mL)稀释反应液并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥过滤后，滤液减压浓缩至干，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝3：2)纯化得到标题化合物(365.5mg)。
MS m/z(ESI):473.1[M+H] +.
步骤2：4-[6-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-碘-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[3-氨基-6-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(335mg，708.98μmol)溶于无水二氯甲烷(10mL)中，加入碘(449.86mg，1.77mmol，357.03μL)和亚硝酸叔丁酯(146.22mg，1.42mmol，168.65μL)。反应液在氮气氛围下于25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(45mL)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝3：2)纯化得到标题化合物(236.4mg)。
MS m/z(ESI):584.1[M+H] +.
步骤3：4-[6-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[6-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-碘-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(236.4mg，405.22μmol)溶于二甲亚砜(2mL)中，加入碘化亚铜(38.59mg，202.61μmol)、磷酸钾(215.03mg，1.01mmol)、 L-脯氨酸(46.65mg，405.22μmol)和1-氨基-2-甲基-2-丙醇(216.72mg，2.43mmol)。反应液在氮气氛围下于80℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕，用水(15mL)稀释并用二氯甲烷(45mL)将反应液萃取三次，有机相经无水硫酸钠干燥过滤后，滤液减压浓缩至干，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝4：1)纯化得到标题化合物(81.2mg)。
MS m/z(ESI):545.2[M+H] +.
步骤4：4-氟-2-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[6-[5-氟-2-(甲氧基甲氧基)苯基]-3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(81.2mg，124.94μmol)溶于无水甲醇(1mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，312.36μL)，反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完毕。反应液减压浓缩至干得4-氟-2-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(91.3mg)。
MS m/z(ESI):401.2[M+H] +.
实施例37：5-氟-2-(3-((2-羟基-2-甲基丙基)氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(37a)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000215
步骤1：4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯的合成
将6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(5g，24.27mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，加入碳酸铯(23.73g,72.80mmol)。搅拌20分钟后，加入4-甲磺酰氧基哌啶-1-羧酸苄酯(15.21g，48.54mmol)，升温至80℃反应4小时。经LC-MS监测反应完全后，加入水(100mL)，并用乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相合并，干燥，过滤，滤液浓缩，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯：1/1)纯化得到标题化合物(7.3g)。
MS m/z(ESI):387.10[M+H] +.
步骤2：4-(6-氯-3-碘吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯的合成
将4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯(4.6g,11.89mmol)和碘单质(2.11g，8.32mmol)溶于二氯甲烷(150mL)中；在搅拌状态下，缓慢加入亚硝酸叔丁酯(2.45g，23.78mmol)，于室温反应1小时；经LC-MS监测反应完全后，加入二氯甲烷(50mL)稀释溶液，用饱和亚硫酸钠溶液(50mL)淬灭反应；分液后有机相浓缩，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯：1/1)纯化得标题化合物(3g)。
MS m/z(ESI):498.00[M+H] +.
步骤3：4-(6-(4-氟-2-羟基苯基)-3-((2-羟基-2-甲基丙基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯的合成
将4-(6-氯-3-碘吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯(3g，6.03mmol)、碘化亚铜(573.97mg，3.01mmol)、L-脯氨酸(693.95mg，6.03mmol)和磷酸钾(3.19g，15.07mmol)溶于超干二甲基亚砜(120mL) 中；用氮气置换反应装置后，在搅拌状态下，加入1-氨基-2-甲基-2-丙醇(3.22g,36.17mmol)，升温至80℃反应过夜；经LC-MS监测反应完全后，加入水(80mL)和乙酸乙酯(120mL)，分液后水相用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相后，有机相用饱和氯化钠溶液(50mL×3)清洗，浓缩有机相，残留物经柱层析色谱(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇：20/1)纯化得标题化合物(2.04g)。
MS m/z(ESI):459.10[M+H] +.
步骤4：4-(6-(4-氟-2-羟基苯基)-3-((2-羟基-2-甲基丙基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯的合成
将4-(6-氯-3-((2-羟基-2-甲基丙基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯(250mg，0.55mmol)、4-氟-2-羟基苯硼酸(343mg，2.2mmol)、碳酸钾(700mg，5mmol)和Pd(dppf)Cl 2(55mg，0.07mmol)加至二氧六环(10mL)和水(2mL)中，氮气置换三次，85℃反应4h，然后减压浓缩，残留物中加入二氯甲烷(20mL×3)和水(20mL)萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-0％)得标题化合物(190mg)。
MS m/z(ESI):535.20[M+H] +.
步骤5：5-氟-2-(3-((2-羟基-2-甲基丙基)氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-(6-(4-氟-2-羟基苯基)-3-((2-羟基-2-甲基丙基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯(190g，0.36mmol)溶于甲醇(10mL)中，接着加入10％钯碳(20mg)，氢气交换三次，然后在氢气氛围中继续反应至原料消耗完全，反应液过滤，滤液浓缩得5-氟-2-(3-((2-羟基-2-甲基丙基)氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(90mg)。
MS m/z(ESI):401.10[M+H] +.
实施例38：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)乙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物001)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000216
Figure PCTCN2022133547-appb-000217
步骤1：(S)-[1-(4-溴苯基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯的合成
将(S)-1-(4-溴苯基)乙胺(30g，149.94mmol)和Boc酸酐(36.00g，164.94mmol)溶于二氯甲烷(300mL)中，加入三乙胺(30.35g，299.89mmol)。反应液于25℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。反应液经过500mL二氯甲烷和200mL水萃取，将有机相用饱和氯化钠溶液洗涤后有机相浓缩得到化合物(S)-[1-(4-溴苯基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(50g)。
MS m/z(ESI):244.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝7.49(d,J＝8.5Hz,2H),7.42(d,J＝7.8Hz,1H),7.24(d,J＝8.3Hz,2H),4.57(t,J＝7.2Hz,1H),1.35(s,9H),1.27(d,J＝7.0Hz,3H)。
步骤2：N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯的合成
将(S)-[1-(4-溴苯基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(39.5g，131.58mmol)和4-甲基噻唑(22.82g，230.17mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中，在氮气氛围下加入醋酸钾(22.59g，230.17mmol)和醋酸钯(1.29g，5.75mmol)。反应液于90℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。反应液经过500mL二氯甲烷和200mL水萃取，将有机相用饱和氯化钠溶液洗涤后有机相浓缩，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝3/1)得到化合物N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(30g)。
MS m/z(ESI):319.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ＝8.88(s,1H),7.43(d,J＝1.8Hz,4H),4.74(s,1H),1.44(s,9H),1.42(d,J＝7.0Hz,3H)。
步骤3：(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙胺的合成
将N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(30g，94.21mmol)溶于1,4-二氧六环(300mL)中，加入氯化氢1,4-二氧六环溶液(4M，235.53mL)。反应液于25℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干得化合物(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙胺(30g，粗品)。
MS m/z(ESI):219.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ＝10.11(s,1H),7.84-7.68(m,4H),4.63(q,J＝6.8Hz,1H),2.69(s,3H),1.73(d,J＝6.8Hz,3H)。
步骤4：(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
在0℃氮气氛围下将(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙胺(24g，94.20mmol)和(2S,4R)-1-Boc-4-羟基脯氨酸(23.96g，103.62mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(36.52g,282.60mmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(53.73g,141.30mmol)。反应液于25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。向反应液加入200mL水稀释，用450mL二氯甲烷萃取三次，有机相合并，浓缩。然后经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到化合物(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(31g)。
MS m/z(ESI):432.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ＝8.89(s,1H),7.47-7.43(m,4H),5.12-5.09(m,1H),4.42-4.34(m,2H),3.61-3.44(m,2H),2.27-2.19(m,1H),2.25(s,3H),1.98-1.94(m,1H),1.53(d,J＝7.0Hz,3H),1.46-1.40(m,9H)。
步骤5：(2S,4R)-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(31g，71.83mmol)溶于1,4-二氧六环(400mL)中，加入氯化氢-二氧六环溶液(4M,179.59mL)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，得到化合物(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(27g，粗品)。
MS m/z(ESI):332.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝9.98(s,1H),9.04(br d,J＝7.3Hz,1H),7.61-7.57(m,2H),7.56-7.51(m,2H),5.18-5.06(m,1H),4.59-4.49(m,2H),3.42-3.35(m,1H),3.30-3.27(m,1H),2.62(s,3H),2.56-2.39(m,1H),2.03-1.89(m,1H),1.54(d,J＝7.0Hz,3H)。
步骤6：N-[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基丙基]氨基甲酸叔丁酯的合成
将(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(27g，81.46mmol)和N-Boc-L-叔亮氨酸(18.84g，81.46mmol)溶于DMF(200mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(30.98g，81.46mmol)和N,N-二异丙基乙胺(31.59g，244.39mmol)。反应液于25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。向反应液中加入100mL水淬灭，过滤将滤液减压浓缩至干得化合物N-[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基丙基]氨基甲酸叔丁酯(30g，粗品)。
MS m/z(ESI):445.2[M+H-100] +；
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ＝8.88(s,1H),8.59(br d,J＝7.5Hz,1H),7.47-7.43(m,2H),7.43-7.40(m,2H),5.05-4.95(m,1H),4.59(t,J＝8.3Hz,1H),4.44(br s,1H),3.95-3.88(m,1H),3.86(br d,J＝11.0Hz,1H),3.78-3.70(m,1H),2.48(s,3H),2.08-1.88(m,2H),1.51(d,J＝7.0Hz,3H),1.44(s,9H),1.02(s,9H)。
步骤7：(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将N-[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(300mg，550.76umol)溶于无水二氧六环(3mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，1.38mL)。反应液呈现淡黄色在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。减压浓缩至干得淡黄色固体(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(280mg)。
步骤8：2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯的合成
将2-[3-氨基-1-(4-哌啶基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(50mg，161.11μmol)溶于无水二氧六环(5mL)中，加入溴乙酸叔丁酯(157.12mg，805.53μmol)和N,N-二异丙基乙胺(28.06μL,161.11μmol)。反应液升温至80℃并搅拌反应1小时。LCMS检测反应完毕。将反应液冷却至25℃。减压浓缩得到粗残液，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝1：2)纯化得到2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(22mg)。
MS m/z(ESI):425.2[M+H] +。
步骤9：2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]乙酸的合成
将2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(17mg，40.05μmol)溶于无水二氯甲烷(0.5mL)和三氟乙酸(250μL)中。反应液在25℃下搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。减压浓缩得到2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]乙酸(13mg)。
MS m/z(ESI):369.1[M+H] +。
步骤10：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)乙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]乙酸(13mg，150.02μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基))苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(16.98mg,35.29μmol)，O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(16.10mg,42.35μmol)和三乙胺(14.74μL,105.87μmol)。反应液在25℃并搅拌反应1小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干粗残液经制备液相色谱纯化(PhenomenexC18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈比例：30％-70％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)乙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物001)(2.18mg)。
MS m/z(ESI):795.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.98(s,1H),8.99(s,1H),8.55-8.45(m,2H),8.11(br d,J＝7.3Hz,1H),7.85(br d,J＝9.3Hz,1H),7.47-7.42(m,2H),7.40-7.34(m,3H),7.04-6.97(m,2H),6.57(s,2H),5.15(d,J＝2.8Hz,1H),4.90(br t,J＝7.2Hz,1H),4.64(br s,1H),4.55(br d,J＝9.8Hz,1H),4.47(t,J＝8.3Hz,1H),4.29(br s,1H),3.58(br s,4H),3.17-3.09(m,1H),3.06-2.93(m,3H),2.44-2.36(m,2H),2.33(br s,1H),2.23-2.04(m,3H),1.98-1.83(m,2H),1.80-1.70(m,1H),1.41(br d,J＝6.8Hz,3H),0.97(s,9H)。
实施例39：3-(4-(3-(4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)哌啶-1-基)丙基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-9-基)哌啶-2,6-二酮(化合物002)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000218
Figure PCTCN2022133547-appb-000219
步骤1：N-(4-甲氧苄基)-5-氧代四氢呋喃-2-甲酰胺的合成
将四氢-5-氧代-2-呋喃羧酸(5g，38.43mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，于0℃下加入草酰氯(5.85g，46.12mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(140.45mg，1.92mmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。将反应液减压浓缩至干后溶于二氯甲烷(20mL)中，加入对甲氧基苄胺(5.01g，36.51mmol)和三乙胺(7.78g，76.86mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完全。向反应液中加入水(200mL)洗涤两次，有机相减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到1/1)得到N-(4-甲氧苄基)-5-氧代四氢呋喃-2-甲酰胺(5.7g)。
MS m/z(ESI):250.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.65(br t,J＝5.4Hz,1H),7.26-7.11(m,2H),6.95-6.82(m,2H),4.89(dd,J＝5.7,7.9Hz,1H),4.23(d,J＝5.9Hz,2H),3.73(s,3H),2.56-2.51(m,2H),2.45-2.37(m,1H),2.16-2.02(m,1H)。
步骤2：3-羟基-1-(4-甲氧苄基)哌啶-2,6-二酮的合成
将N-(4-甲氧苄基)-5-氧代四氢呋喃-2-甲酰胺(3g，12.04mmol)溶于四氢呋喃(30mL)中，在氮气环境下于零下70℃下加入叔丁醇钾溶液(1M，12.28mL)，反应液于零下40℃反应2小时。经薄层层析检测反应完毕。将反应液倒入冷的饱和氯化铵水溶液(50mL)中，用乙酸乙酯(120mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到2/1)纯化得到3-羟基-1-(4-甲氧苄基)哌啶-2,6-二酮(1.67g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ7.15(d,J＝8.5Hz,2H),6.90-6.80(m,2H),5.83(d,J＝5.0Hz,1H),4.79-4.65(m,2H),4.32-4.21(m,1H),3.1(s,3H),2.78-2.65(m,2H),2.03(m,1H),1.89-1.74(m,1H)。
步骤3：1-(4-甲氧基苄基)-2,6-二氧哌啶-3-基三氟甲磺酸酯的合成
将3-羟基-1-(4-甲氧苄基)哌啶-2,6-二酮(500mg，2.01mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，于0℃下加入N,N-二异丙基乙胺(648.13mg，5.01mmol)和三氟甲磺酸酐(679.14mg，2.41mmol)。反应液于10℃反应1.5小时。经TLC检测反应完毕。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤后有机相减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到4/1)得到1-(4-甲氧基苄基)-2,6-二氧哌啶-3-基三氟甲磺酸酯(600mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.35(d,J＝8.6Hz,2H),6.82(d,J＝8.6Hz,2H),5.33-5.24(m,1H),4.89(s, 2H),3.78(s,3H),2.99(m,1H),2.73(m,1H),2.46-2.25(m,2H)。
步骤4：3-(4-溴-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-9-基)-1-(4-甲氧苄基)哌啶-2,6-二酮的合成
将4-溴-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚(200mg，809.42μmol)和十八冠醚-6(42.79mg，161.88μmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，在氮气环境下于零下30℃加入二(三甲基硅)氨基钠四氢呋喃溶液(1M，1.21mL)。反应液于零下30℃搅拌1小时。将1-(4-甲氧基苄基)-2,6-二氧哌啶-3-基三氟甲磺酸酯(462.98mg，1.21mmol)加入至反应液中。反应液于零下30℃搅拌反应2小时。经LCMS检测大部分原料反应完成。将反应液升温至25℃用水(20mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(60mL)萃取三次，有机相减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到4/1)得到3-(4-溴-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-9-基)-1-(4-甲氧苄基)哌啶-2,6-二酮(430mg)。
MS m/z(ESI):478.1[M+H] +。
步骤5：3-(4-溴-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-9-基)哌啶-2,6-二酮的合成
将3-(4-溴-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-9-基)-1-(4-甲氧苄基)哌啶-2,6-二酮(400mg，694.07μmol)溶于三氟乙酸(8mL)中，加入三氟甲磺酸(2.27g，15.10mmol)。反应液于50℃反应12小时。经LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩并加入饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，将有机相减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到4/1)得到3-(4-溴-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-9-基)哌啶-2,6-二酮(210mg)。
MS m/z(ESI):357.8[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.19(s,1H),8.57(d,J＝7.9Hz,1H),8.30(d,J＝5.3Hz,1H),7.72(br s,1H),7.63(br t,J＝7.5Hz,1H),7.56(d,J＝5.3Hz,1H),7.41(t,J＝7.9Hz,1H),6.10(br s,1H),3.17-2.95(m,2H),2.72(br d,J＝15.5Hz,1H),2.23-2.09(m,1H)。
步骤6：3-(9-(2,6-二氧哌啶-3-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)丙醛的合成
将3-(4-溴-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-9-基)哌啶-2,6-二酮(150mg，418.77μmol)和丙烯醇(1.4g，24.1mmol)溶于1,4-二氧六环(6mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(163.37mg，1.26mmol)，三叔丁基膦(254.17mg，125.53μmol，10％纯度)和三(二亚苄基丙酮)二钯(38.35mg，41.88μmol)。经氮气置换后，反应液于80℃反应2小时。经LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水(10mL)并用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干。经薄层色谱法纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到3-(9-(2,6-二氧哌啶)-3-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)丙醛(70mg)。
MS m/z(ESI):336.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.15(s,1H),9.83(s,1H),8.33(d,J＝5.0Hz,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.64(br s,1H),7.53(br t,J＝7.7Hz,1H),7.33(t,J＝7.7Hz,1H),7.12(d,J＝5.0Hz,1H),6.07(br s,1H),3.47(t,J＝7.4Hz,2H),3.19-2.97(m,4H),2.77-2.63(m,1H),2.11(m,1H)。
步骤7：2-(3-氨基-1-(1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将2-(3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(320mg，922.68μmol)和5-溴-2-氯嘧啶(214.17mg，1.11mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(477.00mg，3.69mmol)。反应液于100℃反应2小时。经LCMS检测反应完全。向反应液中加入水(15mL)，用二氯甲烷(30mL)萃取三次后有机相减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到1/1)得到2-(3-氨基-1-(1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(200mg)。
MS m/z(ESI):467.0[M+H] +。
步骤8：4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯的合成
将2-(3-氨基-1-(1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(80mg，171.19μmol)和4-(3,3,4,4-四甲基二氧硼戊环-1-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(58.23mg，188.31μmol)溶于1,4-二氧六环(1.6mL)和水(0.4mL)中，加入碳酸铯(167.33mg，513.57μmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(13.98mg，17.12μmol)。经氮气置换后，反应液于80℃反应2小时。经LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化得到4-(2-(4-(3- 氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(45mg)。
MS m/z(ESI):570.3[M+H] +。
步骤9：4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
将4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(20mg，35.11μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入湿钯碳(5mg，10％纯度)。经氢气置换后，反应液在氢气(15psi)环境下于25℃反应12小时。经LCMS检测反应完毕。将反应液过滤然后减压浓缩至干得4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(20mg)。
MS m/z(ESI):571.5[M+H] +。
步骤10：2-(3-氨基-1-(1-(5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(11mg，19.24μmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入三氟乙酸(43.88mg，384.84μmol)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干得2-(3-氨基-1-(1-(5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(9mg)。
MS m/z(ESI):472.5[M+H] +。
步骤11：3-(4-(3-(4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)哌啶-1-基)丙基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-9-基)哌啶-2,6-二酮的合成
将2-(3-氨基-1-(1-(5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(9mg，19.09μmol)和3-(9-(2,6-二氧哌啶)-3-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)丙醛(6.40mg，19.09μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙酸(5.73mg，95.43μmol)和醋酸硼氢化钠(12.14mg，57.26μmol)。反应液于25℃反应3小时。经LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水(0.5mL)淬灭反应。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Boston Prime C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈比例：25％-45％)作为洗脱液)得到3-(4-(3-(4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)哌啶-1-基)丙基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-9-基)哌啶-2,6-二酮(化合物002)(1.22mg)。
MS m/z(ESI):791.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.88(br s,1H),11.16(s,1H),8.53(s,1H),8.41-8.27(m,3H),8.22(d,J＝7.8Hz,1H),8.10(d,J＝7.3Hz,1H),7.65(br s,1H),7.54(br t,J＝7.9Hz,1H),7.40-7.30(m,2H),7.16(d,J＝4.8Hz,1H),7.05-6.95(m,2H),6.44(s,2H),6.06(br s,1H),4.98-4.86(m,1H),4.80(br d,J＝13.3Hz,2H),3.28(br d,J＝9.0Hz,4H),3.17-2.95(m,6H),2.71(br d,J＝15.1Hz,2H),2.58(br s,2H),2.45(br s,1H),2.10(br s,2H),2.02-1.86(m,6H),1.77(br s,2H)。
实施例40：3-(4-(3-(4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-9-基)哌啶-2,6-二酮(化合物003)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000220
步骤1：2-(3-氨基-1-(1-(5-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(15mg，26.33μmol)溶于二氯甲烷(0.5mL)中，加入三氟乙酸(60.05mg，526.63μmol)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完全。将反应液减压浓缩至干得2-(3-氨基-1-(1-(5-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(12mg)。
MS m/z(ESI):470.5[M+H] +。
步骤2：3-(4-(3-(4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-9-基)哌啶-2,6-二酮的合成
将2-(3-氨基-1-(1-(5-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(10mg，21.30μmol)和3-(9-(2,6-二氧哌啶)-3-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)丙醛(7.14mg，21.30μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)和四氢呋喃(0.3mL)中，加入乙酸(6.39mg，106.49μmol)和醋酸硼氢化钠(13.54mg，63.89μmol)。反应液于25℃反应3小时。经LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水(0.5mL)淬灭反应。经高效液相色谱法纯化(Boston Prime C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：25％-45％)作为洗脱液)得到3-(4-(3-(4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-9-基)哌啶-2,6-二酮(化合物003)(3.68mg)。
MS m/z(ESI):789.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.90(br s,1H),11.15(s,1H),8.56-8.50(m,3H),8.33(d,J＝5.0Hz,1H),8.21(d,J＝7.8Hz,1H),8.16(s,1H),8.11(d,J＝7.8Hz,1H),7.65(br s,1H),7.52(br t,J＝7.9Hz,1H),7.40-7.34(m,1H),7.30(t,J＝7.8Hz,1H),7.14(d,J＝5.0Hz,1H),7.05-6.97(m,2H),6.44(s,2H),6.14(br s,1H),6.08(brs,1H),4.98-4.80(m,3H),3.28-3.22(m,4H),3.16-2.95(m,6H),2.67(br d,J＝4.0Hz,2H),2.59(br d,J＝6.5Hz,2H),2.46-2.42(m,1H),2.10(br s,1H),1.96(m,6H)。
实施例41和41-1：反式-(2S,4R)-1-((S)-2-4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)环己烷甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺和顺式-(2S,4R)-1-((S)-2-4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡咯并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)环己烷甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑基-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000221
步骤1：4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)环己-3-烯-1-酸乙酯的合成
将2-[3-氨基-1-[1-(5-溴嘧啶-2-基)-4-哌啶基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(120mg，256.78μmol)和1-乙氧基羰基环己-3-烯-4-硼酸频哪醇酯(79.14mg，282.46μmol)溶于二氧六环(1.6mL)和水(0.4mL)中，在氮气环境下加入碳酸铯(106.47mg，326.77μmol)和1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(18.79mg，25.68μmol)反应液在80℃搅拌2小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝3：2)得到产物4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)环己-3-烯酸乙酯(65mg)。
MS m/z(ESI):541.1[M+H] +。
步骤2：4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-5-基]环己烷羧酸乙酯的合成
将4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)环己-3-烯酸乙酯(50mg，92.49μmol)溶于甲醇(1mL)中，在氢气环境下加入钯碳(50mg，10％纯度)，反应液在25℃，15psi氢气环境下反应12小时。LCMS显示反应完成。将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，得到产物4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-5-基]环己烷羧酸乙酯(45mg)。
MS m/z(ESI):543.3[M+H] +。
步骤3：4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-5-基]环己烷甲酸的合成
将4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-5-基]环己烷羧酸乙酯(45mg，82.93μmol)溶于四氢呋喃(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化钠(13.27mg,331.72μmol)，反应液于25℃搅拌12小时，LCMS显示反应完成。反应液用1M盐酸调节pH值至5-6，减压浓缩至干，得到产物4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-5-基]环己烷甲酸(40mg)。
MS m/z(ESI):515.3[M+H] +。
步骤4：反式-(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)环己烷甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺和顺式-(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基l)-1H-吡咯并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)环己烷甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑基-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-5-基]环己烷甲酸(10mg， 19.43μmol)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基))苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(9.35mg，19.43μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，加入三乙胺(7.87mg，77.73μmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(8.87mg，23.32μmol)，反应液在25℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩，浓缩物经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的的混合物(乙腈比例：27％-67％)作为洗脱液)得到质量为1.02mg和1.06mg的两种产物，即反式-(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)环己烷甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺和顺式-(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基l)-1H-吡咯并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)环己烷甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑基-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺。后进一步经HPLC分析(分析方法见下表)，确定二者其一的保留时间为4.386min(将此产物命名为化合物004)，另一为4.405min(将此产物命名为化合物004-1)。
HPLC分析方法：
Figure PCTCN2022133547-appb-000222
化合物004的图谱数据：
MS m/z(ESI):941.3[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.90(br s,1H),8.98(s,1H),8.54(s,1H),8.38(d,J＝7.8Hz,1H),8.31(s,2H),8.11(d,J＝7.5Hz,1H),7.74(br d,J＝10.0Hz,1H),7.48-7.41(m,2H),7.41-7.33(m,3H),7.04-6.97(m,2H),6.44(br s,2H),5.12(d,J＝3.4Hz,1H),4.99-4.86(m,2H),4.80(br d,J＝13.0Hz,2H),4.51(d,J＝8.9Hz,1H),4.43(t,J＝7.8Hz,1H),4.30(br s,1H),3.61(br s,2H),3.07(br s,2H),2.46(br s,5H),2.06-1.91(m,6H),1.88-1.73(m,4H),1.55-1.41(m,4H),1.38(br d,J＝6.8Hz,3H),0.95(s,9H)。
化合物004-1的图谱数据：
MS m/z(ESI):941.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.98(s,1H),8.54(s,1H),8.38(br d,J＝7.5Hz,1H),8.27(s,2H),8.00(br s,1H),7.63(br d,J＝9.0Hz,1H),7.47-7.35(m,5H),7.06-6.99(m,2H),4.92(br t,J＝7.2Hz,2H),4.79(br d,J＝12.5Hz,2H),4.55(d,J＝9.0Hz,1H),4.43(t,J＝8.0Hz,1H),4.29(br s,1H),3.62(br s,2H),3.06(br s,3H),2.45(s,3H),1.96(m,6H),1.87-1.73(m,4H),1.63(br s,3H),1.51(br d,J＝6.5Hz,2H),1.38(d,J＝6.8Hz,3H),0.95(s,9H)。
实施例42：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-5-基]环己-3-烯-1-羰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物005)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000223
步骤1：4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-5-基]环己-3-烯-1-羧酸的合成
将4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)环己-3-烯甲酸乙酯(12mg,22.20μmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)和水(0.5mL)中，加入氢氧化钠(2.79mg,69.86μmol)，反应液于25℃搅拌2小时，LCMS显示反应完成。反应液用1M盐酸调节pH值至5～6，减压浓缩至干，得到产物4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-5-基]环己-3-烯-1-羧酸(11mg)。
MS m/z(ESI):513.3[M+H] +。
步骤2：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-5-基]环己-3-烯-1-羰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-5-基]环己-3-烯-1-羧酸(9mg,17.56μmol)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(8.45mg,17.56μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，加入三乙胺(7.11mg,70.24μmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(7.34mg,19.31μmol)，反应液在25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩，浓缩物经制备液相色谱纯化(Boston Prime C18，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的的混合物(乙腈比例：37％-57％)作为洗脱液)得到产物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-5-基]环己-3-烯-1-羰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物005)(4.05mg)。
MS m/z(ESI):939.3[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.98(s,1H),8.98(s,1H),8.54(s,1H),8.49(s,2H),8.41(d,J＝8.0Hz,1H),8.09(br d,J＝7.3Hz,1H),7.93-7.83(m,1H),7.47-7.41(m,2H),7.41-7.34(m,3H),7.06-6.97(m,2H),6.49(br s,2H),6.13(br s,1H),5.15(br s,1H),4.98-4.87(m,2H),4.82(d,J＝12.3Hz,2H),4.59-4.50(m,1H),4.44(t,J＝7.2Hz,1H),4.29(br s,1H),3.62(br s,2H),3.15-3.04(m,2H),2.66-2.55(m,1H),2.45(s,5H),2.38(br s,1H),2.28(br s,1H),2.08-1.90(m,6H),1.79(m,1H),1.64(m,1H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),0.96(d,J＝3.8Hz,9H)。
实施例43：(2S,4R)-1-[2-[3-[9-[2-[[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-2-基]氧基]乙基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物007)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000224
步骤1：9-[5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的合成
将3-甲基-2-[3-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯(400mg,831.10μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，加入3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(253.69mg,997.32μmol)和N,N-二异丙基乙胺(322.24mg,2.49mmol,434.29μL)。反应液在80℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完成。反应液冷却至25℃，加入水(8mL)，然后用乙酸乙酯(12mL)萃取两次，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)得到9-[5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(150mg)。
MS m/z(ESI):436.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝6.24(s,1H),3.65(d,J＝2.3Hz,3H),3.33(d,J＝2.1Hz,4H),3.20-3.15(m,4H),2.35-2.22(m,1H),1.49(br s,4H),1.40(br d,J＝2.0Hz,14H),0.93(br d,J＝6.6Hz,3H),0.87-0.83(m,3H).
步骤2：2-[3-(9-叔丁氧羰基-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将9-[5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(150mg,344.39μmol)溶于甲醇(0.5mL)和水(0.5mL)中，加入氢氧化钠(27.55mg,688.78μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干，加入水(5mL)和乙酸乙酯(5mL)，然后用饱和柠檬酸溶液将pH调至6。用乙酸乙酯(10mL)萃取水相两次，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩得到2-[3-(9-叔丁氧羰基-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(140mg，粗品)。
MS m/z(ESI):444.2[M+Na] +.
步骤3：9-[5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]异噁唑-3-基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯的合成
将2-[3-(9-叔丁氧羰基-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(140mg,332.12μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯-2-甲酰胺(121.08mg,365.34μmol)，O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(151.54mg,398.55μmol)和三乙胺(100.82mg,996.37μmol，138.68μL)，反应液在25℃搅拌反应1小时，LCMS检测反应完成。加入水(5mL)，然后用乙酸乙酯(10mL)萃取水相两次，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干。经薄层层析色谱纯化(石油醚：四氢呋喃＝1：2)得到9-[5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]异噁唑-3-基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(70mg)。
MS m/z(ESI):735.4[M+H] +.
步骤4：(2S,4R)-1-[2-[3-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将9-[5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]异噁唑-3-基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(70mg，95.27μmol)溶于无水二氧六环(3mL)，加入盐酸二氧六环(4N，0.5mL)。反应液于25℃搅拌反应16小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩至干得(2S,4R)-1-[2-[3-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯-2-甲酰胺(70mg，粗品)。
MS m/z(ESI):635.6[M+H] +.
步骤5：4-(3-氨基-6-氯-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯的合成
将6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(5g，29.49mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中，加入4-碘哌啶-1-羧酸苄酯(20.36g，58.97mmol)和碳酸铯(28.82g，58.97mmol)。反应液于60℃搅拌反应3小时。LCMS显示反应完成。加入水(100mL)，然后用乙酸乙酯(150mL)萃取水相两次，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤。滤液减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到4-(3-氨基-6-氯-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯(1.5g)。
MS m/z(ESI):387.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝7.99(s,1H),7.41-7.31(m,5H),6.46(s,2H),5.12(s,2H),4.68-4.58(m,1H),3.08-2.90(m,4H),1.93-1.83(m,4H).
步骤6：4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-甲酸苄酯的合成
将4-(3-氨基-6-氯-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯(1.5g，3.88mmol)溶于二氧六环(40mL)和水(10mL)中，加入2-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼环戊烷(1.23g，4.65mmol)、碳酸钾(1.61g，11.63mmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(253.33mg，310.21μmol)，然后用氮气置换三次。反应液于90℃搅拌反应3小时。LCMS显示反应完成。加入水(50mL)，然后用乙酸乙酯(100mL)萃取水相两次，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤。滤液减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-甲酸苄酯(910mg)。
MS m/z(ESI):489.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.91(s,1H),7.68(dd,J＝1.8,7.6Hz,1H),7.43-7.41(m,1H), 7.37-7.32(m,4H),7.32-7.23(m,2H),7.16-7.14(m,1H),6.26(s,2H),5.18(s,2H),5.08(s,2H),4.63-4.61(m,1H),4.14-4.11(m,2H),3.27(s,3H),3.00-2.98(m,2H),1.96-1.80(m,4H).
步骤7：4-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸苄酯的合成
将4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-甲酸苄酯(910mg，1.86mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入二碳酸二叔丁酯(1.22g，5.59mmol)、4-二甲氨基吡啶(455.13mg，3.73mmol)和三乙胺(565.46mg，5.59mmol)。反应液于25℃搅拌反应12小时。LCMS显示反应完成。加入水(20mL)，然后用乙酸乙酯(40mL)萃取水相两次，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤。滤液减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到4-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸苄酯(800mg)。
MS m/z(ESI):689.3[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.40(s,1H),7.78(dd,J＝1.6,7.6Hz,1H),7.54-7.47(m,1H),7.38(d,J＝4.4Hz,4H),7.35-7.32(m,2H),7.25-7.20(m,1H),5.24(s,2H),5.12(s,2H),5.10-4.98(m,1H),4.18(br d,J＝13.1Hz,2H),3.26(s,3H),3.08(br s,2H),2.05-1.94(m,4H),1.38(s,18H).
步骤8：N-叔丁氧羰基-N-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]氨基甲酸叔丁酯的合成
将4-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羧酸苄酯(750mg，1.09mmol)溶于四氢呋喃(12mL)中，加入湿钯碳(350mg，10％)，用氢气置换三次，并在氢气(15Psi)氛围下于25℃搅拌反应16小时。LCMS显示反应完成。反应液通过硅藻土过滤，收集滤液，减压浓缩至干，得到N-叔丁氧羰基-N-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]氨基甲酸叔丁酯(450mg)。
MS m/z(ESI):555.2[M+H] +.
步骤9：4-溴-2-(2,2-二甲氧基乙氧基)吡啶的合成
将4-溴-2-氟吡啶(3g，17.05mmol)溶于乙腈(130mL)中，加入羟基乙醛二甲基缩醛(2.71g，25.57mmol)和碳酸铯(16.66mg，51.14mmol)。反应液于90℃搅拌反应16小时。薄层层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)显示反应完成。反应液冷却至25℃，减压浓缩至干。加入水(30mL)，然后用乙酸乙酯(60mL)萃取水相两次，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤。滤液减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得到4-溴-2-(2,2-二甲氧基乙氧基)吡啶(4.15g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.07(br d,J＝5.4Hz,1H),7.29-7.21(m,1H),7.16(s,1H),4.69(br t,J＝5.3Hz,1H),4.26(br d,J＝5.3Hz,2H),3.33(s,6H).
步骤10：N-叔丁氧羰基-N-[1-[1-[2-(2,2-二甲氧基乙氧基)-吡啶-4-基]-哌啶-4-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]氨基甲酸叔丁酯的合成
将4-溴-2-(2,2-二甲氧基乙氧基)吡啶(99.24mg，378.63μmol)溶于叔戊醇(10mL)中，加入N-叔丁氧羰基-N-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1-(4-哌啶基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]氨基甲酸叔丁酯(140mg，252.42μmol)、叔丁醇钠(48.52mg，504.84μmol)和甲磺酸(2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)，用氮气置换三次。反应液于110℃搅拌反应3小时。LCMS显示反应完成。反应液冷却至25℃，减压浓缩至干。加入水(4mL)，然后用乙酸乙酯(15mL)萃取水相两次，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干，经薄层层析色谱纯化(石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到N-叔丁氧羰基-N-[1-[1-[2-(2,2-二甲氧基乙氧基)-吡啶-4-基]-哌啶-4-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]氨基甲酸叔丁酯(70mg)。
MS m/z(ESI):636.5[M+H-Boc] +.
步骤11：2-[[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-哌啶-1-基]吡啶-2-基]氧基]乙醛的合成
将N-叔丁氧羰基-N-[1-[1-[2-(2,2-二甲氧基乙氧基)-吡啶-4-基]-哌啶-4-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]氨基甲酸叔丁酯(70mg，95.13μmol)溶于四氢呋喃(3mL)中，加入硫 酸溶液(1.90mL，1N)，反应液于70℃搅拌反应7小时。LCMS显示反应完成。反应液冷却至25℃，用饱和碳酸氢钠调节pH＝9左右，加入水(5mL)和乙酸乙酯(5mL)，然后用乙酸乙酯(15mL)萃取水相两次，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干，得到2-[[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-哌啶-1-基]吡啶-2-基]氧基]乙醛(50mg)。
MS m/z(ESI):446.2[M+H] +.
步骤12：(2S,4R)-1-[2-[3-[9-[2-[[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-哌啶-1-基]-吡啶-2-基]氧基]乙基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将((2S,4R)-1-[2-[3-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(30mg,47.26μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入2-[[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-哌啶-1-基]吡啶-2-基]氧基]乙醛(40mg,44.90μmol)和醋酸(134.81μg,2.25μmol)。反应液在25℃搅拌反应20分钟。加入醋酸硼氢化钠(28.55mg,134.70μmol)，反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有氨水0.05％)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：46％-86％)作为洗脱液)纯化得(2S,4R)-1-[2-[3-[9-[2-[[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-哌啶-1-基]-吡啶-2-基]氧基]乙基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物007)(2.34mg)。
MS m/z(ESI):532.8[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝8.94-8.84(m,1H),8.29(s,1H),8.05-7.98(m,1H),7.82(d,J＝6.3Hz,1H),7.46-7.41(m,3H),7.40-7.33(m,2H),7.06-6.97(m,2H),6.65(br d,J＝4.0Hz,1H),6.28(s,1H),6.16-6.06(m,1H),4.43(br d,J＝5.0Hz,4H),4.19-4.09(m,2H),3.89-3.68(m,2H),3.65-3.48(m,2H),3.27-3.13(m,7H),2.95(br s,2H),2.74(br s,4H),2.53-2.45(m,3H),2.42-2.32(m,2H),2.30-2.18(m,3H),2.02(br d,J＝10.4Hz,3H),1.67(br s,7H),1.56-1.49(m,3H),1.10-1.04(m,3H),0.91(m,3H).
实施例44：(2S,4R)-N-[(S)-3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-[1,4’-二哌啶]-1’-基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]-3-氧代丙基]-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物008)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000225
Figure PCTCN2022133547-appb-000226
步骤1：(3S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸的合成
将Boc-(S)-3-氨基-3-(4-溴苯基)-丙酸(5g，14.53mmol)和4-甲基噻唑(2.88g，29.05mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，加入乙酸钾(2.85g，29.05mmol)和醋酸钯(326.13mg，1.45mmol)。反应液在氮气氛围下于90℃搅拌反应3小时。反应液用乙酸乙酯(30mL)和水(60mL)萃取，减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到(3S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸(1.9g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝12.25(br s,1H),8.99(s,1H),7.51(d,J＝8.5Hz,1H),7.47-7.42(m,2H),7.42-7.37(m,2H),4.93(q,J＝7.7Hz,1H),2.71-2.58(m,2H),2.45(s,3H),1.36(s,9H).
步骤2：(3S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸甲酯的合成
将(3S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸(1.6g，4.41mmol)溶于无水甲醇(2mL)和无水二氯甲烷(18mL)中，冰浴(0℃)下逐滴滴加三甲基硅基重氮甲烷正己烷溶液(2M，6.62mL)。反应液在25℃搅拌反应4小时。LCMS检测反应完成。反应液加入醋酸(3mL)淬灭，减压浓缩至干得(3S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸甲酯(2.2g)。
MS m/z(ESI):377.1[M+H] +.
步骤3：(3S)-3-氨基-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸甲酯的合成
将(3S)-3-(叔丁氧羰基氨基)-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸甲酯(2.4g，6.38mmol)溶于无水二氯甲烷(20mL)中，加入三氟乙酸(9.44mL，127.50mmol)。反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干得(3S)-3-氨基-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸甲酯(4g，粗品)。
MS m/z(ESI):276.9[M+H] +.
步骤4：(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-3-甲氧基-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]-3-氧代丙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将(3S)-3-氨基-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸甲酯(2g，5.12mmol)和Boc-L-羟脯氨酸(1.18g，5.12mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(4.46mL，25.62mmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(2.92g，7.68mmol)。反应液在25℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完成。反应液用乙酸乙酯(20mL)和水(60mL)萃取，减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：2)得到(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-3-甲氧基-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]-3-氧代丙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.7g)。
MS m/z(ESI):490.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝8.89(s,1H),7.49-7.44(m,4H),5.52-5.34(m,1H),4.41-4.24(m,2H),3.65(s,3H),3.58-3.46(m,2H),3.05-2.98(m,1H),2.92-2.84(m,1H),2.48(s,3H),2.34-2.13(m,1H),1.98-1.90(m,1H),1.48-1.31(m,9H).
步骤5：(3S)-3-[[(2S,4R)-4-羟基吡咯-2-羰基]氨基]-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸甲酯的合成
将(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-3-甲氧基-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]-3-氧代-丙基]氨基甲酰基]吡咯-1-羧酸叔丁酯(1.7g，3.47mmol)溶于无水二氧六环(2mL)中，加入盐酸二氧六环溶液(4M，8.68mL)。反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完成。减压浓缩至干得(3S)-3-[[(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸甲酯(1.4g)。
MS m/z(ESI):390.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝9.94(s,1H),7.62-7.58(m,2H),7.58-7.54(m,2H),5.51-5.38(m,1H),4.62-4.46(m,2H),3.72(d,J＝11.0Hz,2H),3.67(s,3H),3.04-2.98(m,1H),2.98-2.93(m,1H),2.61(s,3H),2.54-2.46(m,1H),1.95-1.93(m,1H).
步骤6：2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸甲酯的合成
将2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸(5g，35.43mmol)溶于甲醇(50mL)中，加入浓硫酸(921.91mg，9.21mmol)。反应液在70℃反应2小时，TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)检测反应完成。反应液冷却至室温，浓缩，加蒸馏水(50mL)稀释，用碳酸钠固体调节pH至7-8，再用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合并有机相，干燥，浓缩得到2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸甲酯(4.8g)。
1H NMR(Methanol-d 4,400MHz):δ＝6.25(s,1H),3.90(s,2H),3.75(s,3H),2.28ppm(s,3H).
步骤7：3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸甲酯的合成
将2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸甲酯(500mg，3.22mmol)和叔丁醇钾(723.24mg，6.45mmol)溶于四氢呋喃(7mL)中，加入碘代异丙烷(766.96mg，4.51mmol)。反应液在25℃反应12小时，LCMS检测反应完成。反应液用饱和氯化铵(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相，干燥，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚，乙酸乙酯＝3/1)纯化得到3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸甲酯(320mg)。
MS m/z(ESI):198.2[M+H] +.
步骤8：3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸的合成
将3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸甲酯(300mg，1.52mmol)溶于四氢呋喃(3mL)和蒸馏水(3mL)中，加入一水合氢氧化锂(191.49mg，4.56mmol)。反应液在25℃反应3小时，LCMS检测反应完成。反应液用1M HCl调节pH到5-6，干燥，过滤，浓缩得到3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸(250mg)。
MS m/z(ESI):184.1[M+H] +.
步骤9：(3S)-3-[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-酰胺基]-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸甲酯的合成
将((3S)-3-[[(2S,4R)-4-羟基吡咯-2-羰基]氨基]-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸甲酯(425.17mg，1.09mmol)和3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸(200mg，1.09mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(950.75μL，5.46mmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟 磷酸盐(498.11mg，1.31mmol)。反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完成。反应液用乙酸乙酯(30mL)和水(60mL)萃取，减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：4)得到(3S)-3-[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-酰胺基]-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸甲酯(380mg)。
MS m/z(ESI):555.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ＝8.88(s,1H),7.47-7.38(m,4H),6.23(d,J＝9.5Hz,1H),5.37(t,J＝7.4,18.9Hz,1H),4.50-4.40(m,1H),3.73(d,J＝2.5Hz,3H),3.67-3.64(m,2H),3.06-2.99(m,1H),2.96-2.90(m,1H),2.48(s,3H),2.26(s,2H),2.24-2.21(m,2H),1.99-1.94(m,1H),1.40(s,3H),1.05(dd,J＝2.6,6.7Hz,3H),0.90-0.84(m,3H).
步骤10：(3S)-3-[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-酰胺基]-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸的合成
将(3S)-3-[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯-2-酰胺基]-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸甲酯(80mg，144.23μmol)溶于无水四氢呋喃(0.5mL)和水(0.5mL)中，加入氢氧化钠(17.31mg，432.70μmol)。反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完成。反应液用1.5M的盐酸调至pH＝3，用乙酸乙酯(2mL)和水(2mL)萃取，无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩得到(3S)-3-[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-酰胺基]-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸(60mg)。
MS m/z(ESI):541.1[M+H] +.
步骤11：4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-[3-氨基-1-(4-哌啶基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(500mg,1.61mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)和四氢呋喃(8mL)中，加入N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(358.20mg,1.93mmol)，醋酸(96.74mg,1.61mmol)。反应液在25℃并搅拌反应1小时。加入醋酸硼氢化钠(1.02g,4.83mmol)，反应液在25℃并搅拌反应11小时。LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水(15mL)和二氯甲烷：甲醇(20：2mL)，反应混合物分层，再用二氯甲烷：甲醇(20mL,体积比＝40：4)萃取水相两次，收集有机相，加入无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，得到黄色固体4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(680mg，粗品)。
MS m/z(ESI):494.3[M+H] +.
步骤12：2-[3-氨基-1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(680mg,1.38mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入盐酸二氧六环(2.07mL，4M)，反应液在25℃下搅拌2小时。反应液呈现黄色浑浊。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，得到黄色固体2-[3-氨基-1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(680mg，盐酸盐)。
MS m/z(ESI):394.1[M+H] +.
步骤13：(2S,4R)-N-[(S)-3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-[1,4’-二哌啶]-1’-基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]-3-氧代丙基]-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(3S)-3-[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-酰胺基]-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸(25mg，46.24μmol)和2-[1-[(1,4’-二哌啶基)-4-基]-3-氨基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(27.29mg，69.36μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入N，N-二异丙基乙胺(24.16μL，138.73μmol)，然后加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(21.10mg，55.49μmol)。反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱纯化(Phenomenex Gemini C18柱：5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：40％-60％)作为洗脱液)得到(2S,4R)-N-[(S)-3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-[1,4’-二哌啶]-1’-基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]-3-氧代丙基]-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物008)(1.32mg)。
MS m/z(ESI):938.5[M+Na] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝8.84(dd,J＝3.3,9.3Hz,1H),8.26(br s,1H),8.01(br s,1H),7.54-7.46(m,3H),7.46-7.40(m,1H),7.35(t,J＝7.8Hz,1H),7.04-6.97(m,2H),6.30-6.21(m,1H),5.45-5.28(m,1H),4.65-4.54(m,4H),4.52-4.41(m,2H),4.08(d,J＝11.5Hz,1H),3.95-3.83(m,1H),3.83-3.56(m,2H),3.24(d,J＝14.1Hz,2H),3.16-3.00(m,3H),2.99-2.84(m,2H),2.59(d,J＝12.5Hz,1H),2.55-2.49(m,3H),2.41(d,J＝7.0Hz,1H),2.30(br s,1H),2.28-2.23(m,3H),2.15(d,J＝7.3Hz,1H),1.98(d,J＝9.0Hz,5H),1.45-1.25(m,2H),1.10-1.03(m,3H),0.88(dd,J＝6.9,10.2Hz,3H).
实施例45：(2S,4R)-N-[(1S)-3-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]-3-氧代-丙基]-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物009)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000227
将2-[3-氨基-1-[1-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(19.13mg,30.83μmol,76％纯度)和(3S)-3-[(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-酰胺基]-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]丙酸(25mg,46.24μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(11.95mg,92.43μmol,16.10μL)和O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(17.58mg,46.24μmol)。反应液于25℃搅拌反应0.5小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：20％-60％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-N-[(1S)-3-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-基]-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]-3-氧代-丙基]-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物009)(6.20mg)。
MS m/z(ESI):498.0[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.03-8.95(m,2H),8.54(s,2H),8.47(d,J＝8.8Hz,1H),8.29(br s,2H),8.17(s,1H),7.98(br d,J＝1.5Hz,1H),7.42(br s,3H),7.06-7.02(m,3H),6.22(s,1H),5.30-5.21(m,1H),4.99-4.87(m,2H),4.76(br s,2H),4.54-4.50(m,1H),4.44-4.34(m,1H),4.29-4.25(m,1H),3.76-3.72(m,1H),3.07-3.01(m,4H),2.44(br s,3H),2.39(s,3H),2.20(s,3H),2.17(s,3H),1.94(br s,4H),1.23(s,1H),0.97(br d,J＝6.3Hz,6H),0.80(br d,J＝6.5Hz,3H),0.76(br d,J＝6.5Hz,3H).
实施例46：化合物010的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000228
步骤1：(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(909mg，3.02mmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.20g，3.62mmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(30mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(1.38g，3.62mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.95g，15.1mmol)。反应在25℃搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。加入乙酸乙酯(60mL)和水(60mL)稀释，水相用乙酸乙酯(60mL)萃取两次，有机相用水(60mL)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝100/55)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.84g)。
MS m/z(ESI):615.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.03-8.96(m,1H),8.48-8.27(m,1H),7.52-7.27(m,5H),6.17-6.08(m,1H),5.17-5.08(m,1H),4.96-4.84(m,1H),4.83-4.72(m,1H),4.46-4.33(m,1H),4.27(d,J＝3.5Hz,1H),4.12-4.07(m,2H),3.70-3.61(m,3H),3.58-3.52(m,2H),3.17(d,J＝5.3Hz,1H),2.46-2.44(m,3H),2.31-2.21(m,1H),2.03(dt,J＝4.1,7.8Hz,1H),1.83-1.70(m,1H),1.37-1.34(m,3H),1.14-1.09(m,6H),0.96(dd,J＝3.3,6.5Hz,3H),0.85-0.79(m,3H).
步骤2：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和(2S,4R)-1-[(2R)-2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(800mg)经过手性分离(DAICEL CHIRALPAK IG柱，10μm二氧化硅，30mm直径，250mm长度)；(使用40％乙醇(含有0.1％氨水)作为洗脱液)得到标题产物P1(230mg，命名为中间体9)和标题产物P2(320mg，命名为中间体10)。然后通过以下手性HPLC分析方法分别对两标题产物进行进一步分析。
手性HPLC分析方法：
Figure PCTCN2022133547-appb-000229
中间体9：
手性HPLC出峰时间为1.686分钟；
中间体10：
手性HPLC出峰时间为2.057分钟。
步骤3：中间体11的合成
将中间体10(150mg，244μmol)溶于四氢呋喃(4mL)中，加入稀硫酸(1M，4.88mL)。反应在60℃搅拌反应16小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩移除四氢呋喃，滴加饱和碳酸氢钠直到pH在7～8。水相用乙酸乙酯(5mL)萃取三次，收集有机层用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩得到标题化合物中间体11(130mg)。
MS m/z(ESI):541.4[M+H] +.
步骤4：化合物010的合成
将2-[3-氨基-1-[1-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]-哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(39.25mg,83.24μmol)和中间体11(15mg,27.75μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入1滴冰醋酸溶液和三乙酰氧基硼氢化钠(17.64mg,83.24μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18柱：5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：53％-73％)作为洗脱液)纯化得到标题化合物即化合物010(1.20mg)。
MS m/z(ESI):498.8[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.95-13.87(m,1H),9.00-8.95(m,1H),8.61-8.48(m,1H),8.45-8.38(m,1H),8.35-8.28(m,2H),8.17-8.07(m,1H),7.52-7.40(m,2H),7.39-7.32(m,3H),7.04-6.98(m,2H),6.62-6.35(m,2H),6.21-6.05(m,1H),5.15-5.07(m,1H),4.98-4.87(m,2H),4.83-4.74(m,2H),4.44-4.33(m,1H),4.32-4.22(m,3H),3.77-3.59(m,2H),3.45(br d,J＝11.0Hz,2H),3.10-2.97(m,5H),2.71(br s,2H),2.45 (s,3H),2.10(br t,J＝10.8Hz,2H),2.02-1.89(m,5H),1.74-1.62(m,4H),1.43-1.33(m,3H),1.28-1.16(m,1H),1.00-0.93(m,3H),0.85-0.77(m,3H).
实施例47：(2S,4R)-1-[2-[3-[4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物011)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000230
步骤1：2-[3-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将3-甲基-2-[3-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯(1.1g，2.29mmol)和4-(二甲氧基甲基)哌啶(400.31mg，2.51mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(886.15mg，6.86mmol)，反应液于80℃反应16小时，LCMS显示反应完成。反应液用乙酸乙酯(10mL×3)和水(20mL)萃取，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到5/1)得到产物2-[3-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(420mg)。
MS m/z(ESI):341.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ5.90(s,1H),4.05(d,J＝6.7Hz,1H),3.77-3.66(m,5H),3.47(d,J＝8.9Hz,1H),3.36(s,6H),2.88-2.73(m,2H),2.40-2.24(m,1H),1.87-1.71(m,3H),1.47-1.30(m,2H),0.99(d,J＝6.6Hz,3H),0.91(d,J＝6.7Hz,3H).
步骤2：2-[3-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-[4-(二甲氧基甲基)-1-哌啶基]异噻唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(500mg，1.47mmol)溶于四氢呋喃(4mL)和水(4mL)中，加入氢氧化钠(176.24mg，4.41mmol)，反应液于25℃反应2小时，LCMS显示反应完成。反应液用饱和柠檬酸溶液调节pH值至5～6，然后减压浓缩至干，得到产物2-[3-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成(460mg)。
MS m/z(ESI):294.9[M+H-MeOH] +.
步骤3：(2S,4R)-1-[2-[3-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯-2-甲酰胺的合成
将2-[3-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(460mg,1.41mmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯-2-甲酰胺(544.42mg,1.48mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺 (10mL)中，加入三乙胺(713.07mg，7.05mmol)和O-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(643.06mg，1.69mmol)，反应液于25℃反应1小时。LCMS显示反应完成，将反应液减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到3/1)得到产物(2S,4R)-1-[2-[3-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(520mg)。
MS m/z(ESI):662.1[M+Na] +.
步骤4：(2S,4R)-1-[2-[3-(4-甲酰基哌啶-1-基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-[2-[3-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯-2-甲酰胺(20mg，31.26μmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)中，加入硫酸溶液(1M，625.19μL)，反应液在65℃搅拌3小时。LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩，浓缩物用二氯甲烷(2mL×2)和碳酸氢钠水溶液(2mL)萃取,有机相减压浓缩至干，得到产物(2S,4R)-1-[2-[3-(4-甲酰基哌啶-1-基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(12mg)。
MS m/z(ESI):594.3[M+H] +.
步骤5：(2S,4R)-1-[2-[3-[4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(14.64mg，47.16μmol)和(2S,4R)-1-[2-[3-(4-甲酰基哌啶-1-基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(28mg，47.16μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙酸(2.83mg，47.16μmol)和醋酸硼氢化钠(29.98mg，141.48μmol)。反应液于25℃反应2小时。经LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Boston Green ODS柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度)；(使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：25％～45％)作为洗脱液)得到产物(2S,4R)-1-[2-[3-[4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物011)(7mg)。
MS m/z(ESI):888.3[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.10(br s,1H),9.01-8.96(m,1H),8.44-8.36(m,2H),8.01(br d,J＝8.2Hz,1H),7.48-7.34(m,5H),7.08-6.96(m,2H),6.57(br s,2H),6.18(s,1H),5.31-4.99(m,1H),4.95-4.78(m,2H),4.35(t,J＝7.9Hz,1H),4.29(br s,1H),3.79-3.63(m,6H),3.58(br d,J＝9.9Hz,1H),3.14-3.02(m,4H),2.87-2.76(m,2H),2.46(s,5H),2.26-2.20(m,1H),2.13(br d,J＝12.3Hz,2H),2.08-1.99(m,2H),1.88-1.76(m,3H),1.42-1.35(m,3H),1.32-1.23(m,2H),1.01-0.92(m,3H),0.83-0.75(m,3H).
实施例48：化合物012的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000231
步骤1：5-溴-4-甲基噻唑的合成
将4-甲基噻唑(10g，100.85mmol)于0℃溶于冰乙酸(100mL)中，加入液溴(32.23g，201.71mmol)。反应液于50℃反应16小时。将反应液减压浓缩，往反应液中加入饱和碳酸钠溶液调节pH至7淬灭反应。加入水(20mL)并用二氯甲烷(30mL)萃取三次，有机相用水(30mL)洗涤三次，用无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干得到5-溴-4-甲基噻唑(31.5g)。
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.92(s,1H),2.41(s,3H).
步骤2：4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)噻唑的合成
将5-溴-4-甲基噻唑(15g，20.14μmol)溶于1,4-二氧六环(300mL)中，加入双联频哪醇硼酸酯(42.79g，18.33μmol),乙酸钾(24.80g，252.74mmol)和1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(6.16g，8.42mmol)。经氮气置换后，反应液于100℃反应16小时。薄层层析(石油醚：四氢呋喃＝3：1)检测反应完毕。往反应液中加入水(700mL)，用二氯甲烷(1500mL)萃取三次，有机相用水(1500mL)洗涤三次，用无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化得到4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)噻唑(8.6g)。
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ9.06(s,1H),2.63(s,3H),1.20(s,12H).
步骤3：1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡嗪-2-基]乙酮的合成
将1-(5-氯吡嗪-2-基)乙酮(3g，19.16mmol)溶于1,4-二氧六环(80mL)和水(20mL)中，加入4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)噻唑(6.47g，28.74mmol)，磷酸钾(12.20g，57.48mmol)和1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(1.40g，1.92mmol)。经氮气置换后，反应液于100℃反应16小时。薄 层层析(石油醚：四氢呋喃＝5：1)检测反应完毕。往反应液中加入水(50mL)并用二氯甲烷(90mL)萃取三次，有机相用水(90mL)洗涤三次，用无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到5/1)得到1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡嗪-2-基]乙酮(2.66g)。
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ9.14(d,J＝1.6Hz,1H),9.07-9.04(m,2H),2.81(s,3H),2.70(s,3H).
步骤4：1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡嗪-2-基]乙胺的合成
将1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡嗪-2-基]乙酮(1g，4.56mmol)溶于甲醇(20mL)中，加入乙酸铵(3.52g，45.61mmol),乙酸钠(374.13mg，4.56mmol)，氰基硼氢化钠(429.91mg，6.84mmol)和乙酸(130.42μL，2.28mmol)。反应液于25℃反应16小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到0/1)纯化得到1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡嗪-2-基]乙胺(890mg)。
MS m/z(ESI):221.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ9.03(s,1H),9.00(d,J＝1.5Hz,1H),8.77(d,J＝1.5Hz,1H),4.73(q,J＝6.8Hz,1H),2.77(s,3H),1.68(d,J＝7.0Hz,3H).
步骤5：(2S,4R)-4-羟基-2-[[(R)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡嗪-2-基]乙基]氨甲酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯和(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡嗪-2-基]乙基]氨甲酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成
将1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡嗪-2-基]乙胺(690mg，3.13mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入(2S,4R)-1-(叔-丁氧羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(869.16mg，3.76mmol),0-(7-氮杂苯并三氮唑-1-YL)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(1.79g，4.70mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.73mL，15.66mmol)。反应液于25℃反应2小时。LCMS检测反应完毕。往反应液中加入水(50mL)并用二氯甲烷(90mL)萃取三次，有机相用水(90mL)萃洗三次，用无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到0/1)和薄层色谱法纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/2)两次，然后手性拆分(DAICEL CHIRALPAK IG柱，10μm二氧化硅，30mm直径，250mm长度，使用40％乙醇(含有0.1％氨水)作为洗脱液)得到黄色固体标题产物P1(174.2mg，出峰时间为1.731分钟)和标题产物P2(223.9mg，命名为中间体3，出峰时间为1.920分钟)。
中间体3：
MS m/z(ESI):434.1[M+H] +.
步骤6：中间体4的合成
将中间体3(223.9mg，516.47μmol)溶于二氧六环(2mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，1.29ml)。反应液于25℃反应16小时。LCMS检测反应完毕，将反应液减压浓缩至干得中间体4(195mg)。
MS m/z(ESI):334.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ9.50-9.41(m,1H),8.97(d,J＝1.5Hz,1H),8.76-8.67(m,1H),5.23(q,J＝6.9Hz,1H),4.57(s,1H),3.60(s,1H),3.38-3.33(m,2H),2.80(s,3H),2.59-2.47(m,1H),2.06-1.95(m,1H),1.62-1.58(m,3H).
步骤7：中间体5的合成
将中间体4(346mg,498.13μmol)和N-Boc-L-叔亮氨酸(138.25mg,597.75μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺((257.52mg,1.99mmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(284.11mg,747.19μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。往反应液中加入水(6mL)并用乙酸乙酯(6mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩至干，然后经柱层析色谱纯化(石油醚/四氢呋喃＝1/2)得到中间体5(311mg)。
MS m/z(ESI):569.2[M+Na] +.
步骤8：中间体6的合成
将中间体5(311mg,500.62μmol)溶于二氧六环(3mL)中，加入盐酸二氧六环溶液(4M,1.25mL)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干得中间体6(332mg)。
MS m/z(ESI):447.0[M+H] +.
步骤9：化合物012的合成
将中间体6(35.20mg,72.88μmol)和(4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶 -1-基]嘧啶-5-基]环己烷-1-羧酸(75mg,72.88μmol,50％纯度)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入N,N-二甲基甲酰胺(37.67mg,291.50μmol,50.77μL)和O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(41.56mg,109.31μmol)。反应液于25℃搅拌反应0.5小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：21％-61％)作为洗脱液)得到标题化合物012(4.20mg)。
MS m/z(ESI):943.8[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.10(d,J＝6.5Hz,1H),8.93-8.89(m,2H),8.81-8.64(m,2H),8.55-8.50(m,2H),8.35-8.32(m,1H),8.28-8.25(m,1H),8.07-7.89(m,1H),7.08-6.95(m,3H),5.03-4.86(m,2H),4.84-4.74(m,2H),4.59-4.41(m,2H),4.41-4.35(m,1H),3.72-3.62(m,2H),3.09-3.05(m,2H),2.71-2.68(m,3H),2.08-1.83(m,13H),1.67-1.59(m,2H),1.46(br t,J＝6.5Hz,4H),1.28-1.21(m,1H),0.95-0.90(m,9H).
实施例49：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]环己烷-1-酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物013)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000232
步骤1：1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙酮的合成
将2-氯-5-乙酰基-嘧啶(2.5g，15.97mmol)和4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)噻唑(7.19g，31.93mmol)溶于无水二氧六环(100mL)和水(25mL)中，加入碳酸铯(15.61g，47.90mmol)和1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(584.17mg，798.37μmol)。反应液在氮气氛围下于100℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝1：1)得到1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙酮(2g)。
MS m/z(ESI):219.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.30(s,2H),9.18(s,1H),2.88(s,3H),2.65(s,3H).
步骤2：1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙胺的合成
将1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙酮(1.7g，7.75mmol)溶于无水甲醇(60mL)中，加入乙酸铵(5.98g，77.53mmol)、乙酸钠(636.03mg，7.75mmol)、氰基硼氢化钠(730.85mg，11.63mmol)和 乙酸(221.71μL，3.88mmol)。反应液在25℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝2：1到0：1)得到1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙胺(1g)。
MS m/z(ESI):221.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.07(s,1H),8.91-8.86(m,2H),4.28(q,J＝6.8Hz,1H),2.84(s,3H),1.34(d,J＝6.4Hz,3H).
步骤3：(2S,4R)-4-羟基-2-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙胺(1g，4.54mmol)和(2S,4R)-1-叔丁氧羰基-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸(1.15g，4.99mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(25mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(2.37mL，13.62mmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(2.59g，6.81mmol)。反应液在25℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝5：1到0：1)得到(2S,4R)-4-羟基-2-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(840mg)。
MS m/z(ESI):434.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.08-9.03(m,1H),8.84-8.75(m,2H),5.05-4.86(m,2H),4.32-4.08(m,2H),3.46-3.36(m,1H),3.30-3.22(m,1H),2.84-2.80(m,3H),2.15-1.99(m,1H),1.49-1.42(m,3H),1.41-1.30(m,9H).
步骤4：(2S,4R)-4-羟基-N-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-4-羟基-2-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(120mg，276.80μmol)溶于无水二氧六环(1mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，692.00μL)。反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干得(2S,4R)-4-羟基-N-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(120g)。
MS m/z(ESI):334.2[M+H] +.
步骤5：(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯的合成
将(2S,4R)-4-羟基-N-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(100mg，299.93μmol)和(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3,3-二甲基丁酸(83.25mg，359.92μmol)溶于无水二甲基甲酰胺(4mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(156.73μL，899.80μmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(171.07mg，449.90μmol)。反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完成。减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：2)得到(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(40mg)。
MS m/z(ESI):569.1[M+Na] +.
步骤6：(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(40mg，73.17μmol)溶于无水二氧六环(1mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，182.92μL)。反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干得(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(30mg)。
MS m/z(ESI):447.4[M+H] +.
步骤7：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]环己烷酰胺基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(25mg，55.98μmol)和4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5- 基]环己烷甲酸(57.62mg，55.98mol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(29.25μL，167.95μmol)，然后加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(25.54mg，67.18μmol)。反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱纯化(Phenomenex Gemini C18柱：5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：40％-60％)作为洗脱液)得到(2S,4R)-1-[(2S)-2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]环己烷酰胺基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[1-[2-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-5-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物013)(4.0mg)。
MS m/z(ESI):943.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.05(s,1H),8.88-8.68(m,2H),8.56-8.47(m,2H),8.34-8.24(m,2H),8.16-8.03(m,1H),7.82-7.62(m,1H),7.37(t,J＝7.0Hz,1H),7.09-6.98(m,2H),6.49(br s,2H),5.13(br s,1H),4.96-4.87(m,2H),4.79(d,J＝13.1Hz,2H),4.58-4.47(m,1H),4.39(t,J＝8.2Hz,1H),4.29(br s,1H),3.62(brs,2H),3.07(d,J＝8.0Hz,2H),2.85-2.75(m,3H),2.64(br s,1H),2.56(br s,1H),2.09-1.90(m,6H),1.89-1.70(m,5H),1.69-1.48(m,4H),1.45(d,J＝7.0Hz,3H),0.94(s,9H).
实施例50：化合物014的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000233
步骤1：反式-4-[3-[[4-[4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]哌啶-1-甲酸叔丁基酯的合成
将反式-4-[3-[(4-溴吡啶-2-基)氧基]环丁氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(308.19mg，721.19μmol)和N-叔丁氧羰基-N-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，360.60μmol)溶于叔戊醇(20mL)中，加入(2-二环己基膦基-2,6-二异丙氧基-1,1-联苯基)[2-(2-氨基-1,1-联苯基)]钯(II)(30.16mg，36.06μmol)和叔丁醇钠(69.31mg，721.19μmol)。反应液在140℃微波反应2小时，LCMS检测反应完成。反应液过滤，浓缩，经薄层色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到反式-4-[3-[[4-[4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-2-基]氧 基]环丁氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(36mg)。
MS m/z(ESI):723.3[M+Na] +.
步骤2：反式-2-[3-氨基-1-[1-[2-[3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基]吡啶-4-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将反式-4-[3-[[4-[4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]哌啶-1-甲酸叔丁基酯(36mg，51.37μmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入盐酸/二氧六环(128.42μL，513.68μmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完成。反应液浓缩得到反式-2-[3-氨基-1-[1-[2-[3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基]吡啶-4-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(30mg)。
MS m/z(ESI):557.3[M+H] +.
步骤3：化合物014的合成
将反式-2-[3-氨基-1-[1-[2-[3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基]吡啶-4-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(20mg，33.72μmol)和中间体11(18.30mg，33.72μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入乙酸钠(11.06mg，134.88μmol)、乙酸(2.02mg，33.72μmol)和氰基硼氢化钠(10.60mg，168.60μmol)。反应液在25℃反应5小时，LCMS检测反应完成。反应液浓缩，经制备液相色谱(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量：36％-76％)作为洗脱液)纯化得到标题化合物即化合物014(1.5mg)。
MS m/z(ESI):1084.2[M+H] +；
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz):δ＝13.93(br s,1H),9.12(s,1H),8.93(s,1H),8.61(s,1H),8.52-8.56(m,2H),8.11(br d,J＝7.8Hz,1H),7.96(d,J＝5.7Hz,1H),7.37(br t,J＝7.6Hz,1H),6.99-7.04(m,2H),6.45(s,2H),6.24(s,1H),6.20(br d,J＝5.3Hz,1H),6.10(s,1H),5.11(d,J＝3.2Hz,1H),4.99(dd,J＝13.9,6.8Hz,1H),4.91(br s,2H),4.48(br d,J＝12.8Hz,3H),4.39(br t,J＝7.9Hz,2H),4.30(br s,3H),4.21(br s,2H),3.71(br d,J＝10.5Hz,3H),3.67-3.62(m,3H),3.03-2.95(m,2H),2.70(s,3H),2.16-2.08(m,4H),2.05-1.98(m,4H),1.93-1.85(m,4H),1.82-1.75(m,4H),1.46-1.42(m,3H),0.94(d,J＝6.6Hz,3H),0.79(d,J＝6.6Hz,3H).
实施例51：1-[[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]甲基]-N-[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]哌啶-4-甲酰胺(化合物015)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000234
步骤1：2-[3-氨基-1-[1-[5-(羟甲基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将2-氯-5-羟甲基嘧啶(83.84mg,579.98μmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入2-[3-氨基-1-[1-[5-(羟甲基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(150mg,483.32μmol)和N,N-二异丙基乙胺(336.74μL,1.93mmol)。反应液在100℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完成。反应液冷却至室温，加入水(8mL)，用乙酸乙酯(15mL)萃取2次，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干，经薄层层析色谱纯化(石油醚：四氢呋喃＝3：1，含千分之五氨甲醇溶液(7N))得到2-[3-氨基-1-[1-[5-(羟 甲基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(60mg)。
MS m/z(ESI):419.2[M+H] +.
步骤2：2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-甲醛的合成
将2-[3-氨基-1-[1-[5-(羟甲基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(20mg,47.80μmol)溶于二氯乙烷(3mL)中，加入活性二氧化锰(41.55mg,477.95μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完成。反应液通过硅藻土过滤得粗液，经减压浓缩至干得2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-甲醛(15mg)。
MS m/z(ESI):417.2[M+H] +.
步骤3：1-[[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]甲基]-N-[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]哌啶-4-甲酰胺的合成
将2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-甲醛(15mg,36.02μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)和四氢呋喃(4mL)中，加入N-[(S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]哌啶-4-甲酰胺(20.02mg,36.02μmol)和醋酸(108.15μg,1.80μmol)。反应液在25℃搅拌反应20分钟。加入醋酸硼氢化钠(22.90mg,108.06μmol),反应液在25℃搅拌反应2.5小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱纯化(BostonGreen ODS柱：5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：23％-43％)作为洗脱液)纯化1-[[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]甲基]-N-[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]哌啶-4-甲酰胺(化合物015)(2.12mg)。
MS m/z(ESI):979.5[M+Na] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝8.90(s,1H),8.40(s,2H),8.32(s,1H),8.04(br d,J＝8.1Hz,1H),7.49-7.42(m,4H),7.41-7.34(m,1H),7.06-7.01(m,2H),5.01-4.94(m,5H),4.59-4.54(m,1H),4.45(br s,1H),3.91-3.72(m,4H),3.26-3.14(m,4H),2.62-2.47(m,6H),2.29-2.09(m,4H),2.08-1.86(m,6H),1.53(d,J＝7.1Hz,3H),1.07(s,9H).
实施例52：1-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-羰基]-N-[(S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]哌啶-4-甲酰胺(化合物016)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000235
步骤1：2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-甲酸甲酯的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(150mg，483.32μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入2-氯嘧啶-5-甲酸甲酯(83.41mg，483.32μmol)和N,N-二异丙基乙胺(249.86mg，1.93mmol)。反应液在100℃反应2小时，LCMS检测反应完成。反应液冷却至室温，加入蒸馏水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合并有机相，干燥，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-甲酸甲酯(150mg)。
MS m/z(ESI):447.2[M+H] +.
步骤2：2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-甲酸的合成
将2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-甲酸甲酯(150mg，335.98μmol)溶于四氢呋喃(4mL)和蒸馏水(4mL)中，加入一水合氢氧化锂(42.30mg，1.01mmol)。反应液在25℃反应12小时，LCMS检测反应完成。反应液用1M盐酸调节pH到5-6，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-甲酸(120mg)。
MS m/z(ESI):433.2[M+H] +.
步骤3：4-[[(S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
将(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1g，2.08mmol)和1-叔丁氧羰基哌啶-4-甲酸(524.27mg，2.29mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(1.19g，3.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(806.01mg，6.24mmol)。反应液在25℃反应4小时，LCMS检测反应完成。反应液加蒸馏水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，干燥，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到4-[[(S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.4g)。
MS m/z(ESI):556.3[M+H] +.
步骤4：N-[(S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]哌啶-4-甲酰胺的合成
将4-[[(S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.4g，2.13mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，加入盐酸/二氧六环(5.34mL，21.35mmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完成。反应液浓缩得到N-[(S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]哌啶-4-甲酰胺(化合物016)(1.2g)。
MS m/z(ESI):578.2[M+Na] +.
步骤5：1-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-羰基]-N-[(S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]哌啶-4-甲酰胺的合成
将2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-甲酸(30mg，69.37μmol)和N-[(S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]哌啶-4-甲酰胺(45.19mg，76.31μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(39.57mg，104.06μmol)和N,N-二异丙基乙胺(35.86mg，277.50μmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完成。反应液浓缩，经制备液相色谱(PhenomenexC18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的混合物(乙腈含量：19％-59％)作为洗脱液)纯化得到1-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-羰基]-N-[(S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]哌啶-4-甲酰胺(化合物016)(5.7mg)。
MS m/z(ESI):970.5[M+H] +；
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz):δ＝14.16-13.46(m,1H),8.99(s,1H),8.55(s,1H),8.49-8.48(m,2H),8.40(br d,J＝7.8Hz,1H),8.08(br d,J＝7.6Hz,1H),7.86(br d,J＝9.1Hz,1H),7.46-7.43(m,2H),7.41-7.39(m,1H),7.40-7.34(m,3H),7.02(d,J＝7.8Hz,2H),6.52(br s,2H),4.99-4.87(m,5H),4.52(br d,J＝9.3Hz,1H),4.43(br t,J＝7.9Hz,1H),4.29(br s,1H),3.65-3.56(m,2H),3.16(br s,2H),2.46(s,3H),2.00(br s,7H),1.84-1.75(m,3H),1.68(br d,J＝11.8Hz,2H),1.59-1.45(m,2H),1.38(br d,J＝6.9Hz,3H),0.95(s,9H).
实施例53：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-基]乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物017)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000236
步骤1：2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-基]乙酸叔丁酯的合成
将2-[3-氨基-1-[1-[5-(4-哌啶基)嘧啶-2-基]-4-哌啶基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(40mg,84.83μmol)和2-溴乙酸叔丁酯(19.85mg,101.79μmol,15.04μL)溶于二氧六环(30mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(32.89mg,254.48μmol,44.33μL)。反应液在80℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干，经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-基]乙酸叔丁酯(20mg)。
MS m/z(ESI):586.4[M+H] +.
步骤2：2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-基]乙酸的合成
将2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-基]乙酸叔丁酯(20mg,34.15μmol)溶于二氯甲烷(1mL)和三氟乙酸(0.5mL)中。反应液于25℃搅拌反应4小时，经LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干得2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-基]乙酸(20mg)。
MS m/z(ESI):530.2[M+H] +.
步骤3：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-基]乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-基]乙酸(23mg,43.43μmol)、(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(23.17mg,52.12μmol)、O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(24.77mg,65.14μmol)和N,N-二异丙基乙胺(22.45mg,173.72μmol,30.26μL)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干，经高效液相色谱(Boston Green ODS柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：30％-50％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[(2S)-2-[2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-基]乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰 基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物017)(6.43mg)。
MS m/z(ESI):956.7[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.78-9.54(m,1H),9.09-8.90(m,1H),8.78(d,J＝9.5Hz,1H),8.54(s,1H),8.43(d,J＝8.6Hz,1H),8.36-8.28(m,2H),7.95(br s,1H),7.48-7.41(m,4H),7.41-7.35(m,3H),7.09-7.00(m,3H),5.02-4.89(m,2H),4.81(br d,J＝12.9Hz,2H),4.59(br d,J＝9.0Hz,1H),4.50-4.37(m,1H),4.32(br s,1H),4.07(br d,J＝14.4Hz,2H)3.85-3.47(m,4H),3.22-2.99(m,3H),2.83(s,1H),2.78-2.63(m,2H),2.44(br s,3H),2.33(s,1H),2.07(br d,J＝11.9Hz,2H),1.81(br s,1H),1.55-1.46(m,1H),1.39(d,J＝7.1Hz,4H),1.24(br s,1H),1.01-0.95(m,11H).
实施例54：(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物018)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000237
步骤1：4-甲基苯磺酸-2-(2-苄氧基乙氧基)乙酯的合成
将2-(2-苄氧基乙氧基)乙醇(5g，25.5mmol)溶入N,N二甲基甲酰胺(100mL)中，在0℃氮气氛围下加入钠氢(1.53g，38.2mmol，60％纯度)。反应液在0℃搅拌反应0.5小时。在0℃氮气氛围下加入4-甲苯磺酰氯(5.83g，30.6mmol)，反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。0℃下慢慢加入冰水淬灭反应，反应液用水(200mL)和乙酸乙酯(250mL)稀释，水相用乙酸乙酯(250mL)萃取两次。有机相用水(200mL)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩至干，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/20)纯化得到产物4-甲基苯磺酸-2-(2-苄氧基乙氧基)乙酯(3.5g)。
MS m/z(ESI):373.0[M+Na] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝7.78(d,J＝8.4Hz,2H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.36-7.22(m,5H),4.57-4.45(m,2H),4.18-4.12(m,2H),3.68-3.64(m,2H),3.55(s,4H),2.42(s,3H).
步骤2：2-[3-[2-(2-苄氧基乙氧基)乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将4-甲基苯磺酸-2-(2-苄氧基乙氧基)乙酯(968mg，2.76mmol)和2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(500mg，2.51mmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(20mL)，加入碳酸钾(1.04g，7.53mmol)。反应液于80℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液用水(40mL)和乙酸乙酯(40mL)稀释，水相用乙酸乙酯(40mL)萃取两次。有机相用水(40mL)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩至干，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/15)纯化得到产物2-[3-[2-(2-苄氧基乙氧基)乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(530mg)。
MS m/z(ESI):378.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝7.41-7.20(m,5H),6.12-5.94(m,1H),4.55(s,2H),4.39-4.28(m,2H),3.87-3.78(m,2H),3.74-3.67(m,5H),3.67-3.62(m,2H),3.57(d,J＝8.8Hz,1H),2.43-2.27(m,1H),0.99(d,J＝6.8Hz,3H),0.90(d,J＝6.8Hz,3H).
步骤3：2-[3-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-[3-[2-(2-苄氧基乙氧基)乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(300mg，795μmol)溶于二氯甲烷(8mL)，加入四氯化钛(196mg，1.03mmol)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液用水(10mL)稀释，水相用二氯甲烷(10mL)萃取两次。有机相用饱和碳酸氢钠(10mL)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩至干，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝100/30)纯化得到产物2-[3-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(210mg)。
MS m/z(ESI):288.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝5.62(s,1H),4.01-3.85(m,2H),3.46-3.37(m,2H),3.35-3.29(m,3H),3.29-3.24(m,2H),3.22-3.14(m,3H),2.06-1.83(m,1H),0.59(d,J＝6.6Hz,3H),0.50(d,J＝6.8Hz,3H).
步骤4：3-甲基-2-[3-[2-(2-甲基磺酰氧基乙氧基)乙氧基]异噁唑-5-基]丁酸甲酯的合成
将2-[3-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(210mg，731μmol)溶于四氢呋喃(5mL)，加入吡啶(173mg，2.19mmol)。然后在0℃下加入甲基磺酸酐(255mg，1.46mmol)，反应液于25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液用水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)稀释，有机相用水(10mL)洗涤两次，水相用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩得到产物3-甲基-2-[3-[2-(2-甲基磺酰氧基乙氧基)乙氧基]异噁唑-5-基]丁酸甲酯(250mg)，直接用于下一步。
MS m/z(ESI):366.1[M+H] +.
步骤5：2-[3-[2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将3-甲基-2-[3-[2-(2-甲基磺酰氧基乙氧基)乙氧基]异噁唑-5-基]丁酸甲酯(70.6mg，193μmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(50.0mg，161μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(2mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(62.5mg，483μmol)。反应液于80℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液用水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)稀释，水相用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。有机相用水(10mL)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩至干，经薄层色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/3，0.1％氨甲醇)纯化得到产物2-[3-[2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(58mg)。
MS m/z(ESI):580.4[M+H] +.
步骤6：2-[3-[2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-[2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(30mg，51.8μmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)和水(0.5mL)，加入一水合氢氧化锂(6.52mg，155μmol)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩至干，用水稀释后，滴加稀盐酸(1.5M)调节pH至5到6，之后减压浓缩得到产物2-[3-[2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(29mg)。
MS m/z(ESI):566.5[M+H] +.
步骤7：(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-[2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(29.0mg，51.3μmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(18.7mg，56.4μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(29.2mg，76.9μmol)和N,N-二异丙基乙胺(19.9mg，154μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液过滤，滤液减压浓缩经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的混合物(30％-50％)作为洗脱液)得到产物(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物018)(5.64mg)。
MS m/z(ESI):440.5[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.65(s,1H),9.43(s,1H),9.04-8.93(m,1H),8.48-8.35(m,2H),8.14(s,1H),7.48-7.34(m,4H),7.30(d,J＝8.1Hz,1H),7.09-6.96(m,2H),6.54(s,2H),6.18-6.06(m,1H),5.12(d,J＝3.4Hz,1H),4.96-4.72(m,2H),4.46-4.21(m,4H),3.94-3.48(m,9H),2.47-2.41(m,6H),2.19-1.98(m,4H),1.81-1.69(m,1H),1.43(d,J＝5.9Hz,1H),1.39-1.27(m,3H),0.95(d,J＝6.5Hz,3H),0.84-0.70(m,4H).
实施例55：(2S,4R)-1-[(S)-2-[8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物019)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000238
步骤1：8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛酸的合成
将2-(3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(50mg，161.11μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入8-溴辛酸(39.54mg，177.22μmol)和N,N-二异丙基乙胺(62.47mg，483.32μmol)。反应液在80℃反应4小时，LCMS检测反应完成。反应液冷却至室温，浓缩得到8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛酸(50mg)。
MS m/z(ESI):453.3[M+H] +.
步骤2：(2S,4R)-1-[(S)-2-[8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛酸(40mg，88.39μmol)和(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(42.52mg，88.39μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四 甲基脲六氟磷酸盐(50.75mg，133.47μmol)和N,N-二异丙基乙胺(34.27mg，265.17μmol)。反应液在25℃反应5小时，LCMS检测反应完成。反应液浓缩，经制备液相色谱(Phenomenex C18，5μm二氧化硅，25mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量：33％-73％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[(S)-2-[8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物019)(2.3mg)。
MS m/z(ESI):879.5[M+H] +；
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz):δ＝13.99(s,1H),8.99(s,1H),8.52(s,1H),8.39(d,J＝7.8Hz,1H),8.16-8.11(m,1H),7.84-7.78(m,1H),7.42-7.46(m,2H),7.40-7.34(m,3H),6.99(d,J＝8.1Hz,2H),6.46(s,2H),5.12(d,J＝3.4Hz,1H),4.92(t,J＝7.4Hz,1H),4.53(br d,J＝9.3Hz,2H),4.43(t,J＝8.0Hz,1H),4.28(br s,1H),3.66-3.57(m,2H),2.99(br s,2H),2.46(s,3H),2.34-2.23(m,3H),2.08(br s,6H),1.86-1.77(m,3H),1.51-1.41(m,4H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.28(br s,6H),0.94(s,9H).
实施例56：(2S,4R)-1-[(S)-2-[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丁酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物020)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000239
步骤1：4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丁酸乙酯的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(50mg,161.11μmol)和4-溴丁酸乙酯(37.71mg,193.33μmol,27.73μL)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(62.46mg,483.32μmol,84.18μL)。反应液在80℃搅拌反应12小时。薄层层析(石油醚：四氢呋喃＝1:1)检测反应完成。反应液用乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)萃取，减压浓缩至干，经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：2)得到4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丁酸乙酯(57mg)。
步骤2：4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丁酸的合成
将4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丁酸乙酯(40mg,94.23μmol)和氢氧化钠(15.08mg,376.92μmol)溶于甲醇(1mL)和水(1mL)中。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完成。反应液浓缩至干，加入水(2mL)溶解，用1M的HCl调节pH值为1后用乙酸乙酯(10mL)萃取，有机相减压浓缩至干得4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丁酸(30mg)。
MS m/z(ESI):397.1[M+H] +.
步骤3：(2S,4R)-1-[(S)-2-[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丁酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丁酸(30mg,75.67μmol)和(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(33.64mg,75.67μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.25mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(43.16mg,113.51μmol)和N,N-二异丙基乙胺(29.34mg,227.02μmol,39.54μL)。反应液在25℃搅拌反应5小时，LCMS检测反应完成。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱纯化(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：9％-49％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[(S)-2-[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丁酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物020)(1.5mg)。
MS m/z(ESI):823.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.80(s,1H),8.99(s,1H),8.46(s,1H),8.39(d,J＝7.8Hz,1H),8.08(d,J＝7.3Hz,1H),7.96(s,1H),7.48-7.41(m,2H),7.41-7.32(m,3H),7.06-6.97(m,2H),6.51(s,2H),5.13(s,1H),4.92(t,J＝6.9Hz,1H),4.70(s,1H),4.55(d,J＝9.4Hz,1H),4.43(t,J＝8.1Hz,1H),4.30(s,1H),3.70-3.53(m,2H),3.32-3.32(m,2H),2.46(s,5H),2.33(s,2H),2.25(s,4H),2.10-1.93(m,4H),1.87-1.76(m,2H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),0.96(s,9H).
实施例57：(2S,4R)-1-[(S)-2-[10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物021)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000240
步骤1：10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸酸的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(50mg，161.11μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入10-溴癸酸(44.51mg，177.22μmol)和N,N-二异丙基乙胺(62.47mg，483.32μmol)。反应液在80℃反应4小时，LCMS检测反应完成。反应液冷却至室温，浓缩得到10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸酸(50mg)。
MS m/z(ESI):481.3[M+H] +.
步骤2：(2S,4R)-1-[(S)-2-[10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸酸(50mg，104.04μmol)和(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(50.05mg，104.04μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(59.34mg，156.05μmol)和N,N-二异丙基乙胺(40.34mg，312.11μmol)。反应液在25℃反应5小时，LCMS检测反应完成。反应液浓缩，经制备液相色谱(Phenomenex C18，5μm二氧 化硅，25mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量：33％-73％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[(S)-2-[10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物021)(7.7mg)。
MS m/z(ESI):907.6[M+H] +；
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz):δ＝13.96(br s,1H),8.98(s,1H),8.50(s,1H),8.38(br d,J＝7.7Hz,1H),8.12(br d,J＝7.7Hz,1H),7.79(br d,J＝9.0Hz,1H),7.43(s,2H),7.39(br s,3H),6.99(br d,J＝8.1Hz,2H),6.45(br s,2H),5.11(br s,1H),4.92(br s,1H),4.52(br d,J＝9.3Hz,2H),4.43(s,1H),4.25-4.32(m,1H),3.61(br s,2H),3.02(br s,2H),2.46(s,3H),2.37-2.23(m,3H),2.15-2.00(m,6H),1.88-1.78(m,3H),1.52-1.44(m,4H),1.38(br d,J＝6.8Hz,3H),1.27(br s,10H),0.94(s,9H).
实施例58：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[12-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十二酰胺基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物022)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000241
步骤1：12-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十二烷酸的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(50mg，161.11μmol)和12-溴十二烷酸(49.48mg，177.22μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(62.47mg，483.32μmol)，反应液于100℃反应2小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，得到产物12-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十二烷酸(80mg，粗品)。
MS m/z(ESI):509.2[M+H] +.
步骤2：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[12-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十二酰胺基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将12-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十二烷酸(80mg，157.28μmol)和(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(83.22mg，173.01μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(40.65mg，314.56μmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(65.78mg，173.01μmol)，反应液于25℃反应1小时，LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度,使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：54％-94％)作为洗脱液)纯化得到产物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[12-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十二酰胺基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物022)(14.2mg)。
MS m/z(ESI):936.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ14.48-13.39(m,1H),8.98(s,1H),8.52(s,1H),8.37(br d,J＝7.7Hz,1H),8.12(br d,J＝7.4Hz,1H),7.79(br d,J＝9.2Hz,1H),7.46-7.41(m,2H),7.40-7.31(m,3H),7.02-6.94(m,2H),6.44(s,2H),5.12(br s,1H),4.91(m,1H),4.52(br d,J＝9.2Hz,2H),4.42(br t,J＝8.0Hz,1H),4.28(br s,1H),3.67-3.53(m,2H),3.04-2.93(m,2H),2.45(s,3H),2.35-2.23(m,3H),2.12-1.98(m,6H),1.88-1.75(m,3H),1.50-1.40(m,4H),1.37(br d,J＝6.9Hz,3H),1.25(br s,14H),0.93(s,9H).
实施例59：(2S,4R)-1-[(S)-2-[9-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]壬酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物023)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000242
步骤1：9-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]壬酸的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(50mg，161.11μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入9-溴壬酸(42.02mg，177.22μmol)，N,N-二异丙基乙胺(62.47mg，483.32μmol)。反应液在80℃反应4小时，LCMS检测反应完成。反应液冷却至室温，浓缩得到9-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]壬酸(50mg)。
MS m/z(ESI):467.3[M+H] +.
步骤2：(2S,4R)-1-[(S)-2-[9-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]壬酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将9-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]壬酸(40mg，88.39μmol)和(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(41.24mg，88.39μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(50.75mg，133.47μmol)和N,N-二异丙基乙胺(34.27mg，265.17μmol)。反应液在25℃反应5小时，LCMS检测反应完成。反应液浓缩，经制备液相色谱(Phenomenex C18，5μm二氧化硅，25mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量：33％-73％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[(S)-2-[9-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]壬酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物023)(2.5mg)。
MS m/z(ESI):893.5[M+H] +；
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz):δ＝13.99(s,1H),8.99(s,1H),8.52(s,1H),8.38(d,J＝7.9Hz,1H),8.13(d,J＝7.0Hz,1H),7.80(br d,J＝9.3Hz,1H),7.45-7.42(m,2H),7.40-7.34(m,3H),6.99(d,J＝8.3Hz,2H),6.46(s,2H),5.11(d,J＝3.4Hz,1H),4.95-4.89(m,1H),4.53(br d,J＝9.4Hz,2H),4.42(t,J＝8.0Hz,1H),4.29(br s,1H),3.65-3.57(m,2H),3.00(br d,J＝5.0Hz,2H),2.46(s,3H),2.35-2.24(m,3H),2.08(br d,J＝7.9Hz,6H),1.86-1.75(m,3H),1.52-1.43(m,4H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.28(br s,8H),0.94(s,9H).
实施例60：(2S,4R)-1-[2-[3-[3-[4-[1-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙基]苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物024)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000243
步骤1：(E)-1-[4-[3-[(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基]丙-1-烯-1-基]苯基]乙酮的合成
将4-碘苯乙酮(4g，16.3mmol)和2-丙烯氧基四氢-2H-吡喃(3.47g，24.4mmol)溶入叔丁醇(100mL)中，在氮气氛围下加入1,3-双(二苯基磷)丙烷(1.34g，3.25mmol)，三乙胺(4.94g，48.8mmol)和醋酸钯(365mg，1.63mmol)。反应液在100℃搅拌反应16小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩至干经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/8)得到产物(E)-1-[4-[3-[(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基]丙-1-烯-1-基]苯基]乙酮(650mg)。
MS m/z(ESI):261.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.91(d,J＝8.3Hz,2H),7.46(d,J＝8.3Hz,2H),6.68(d,J＝16.1Hz,1H),6.54-6.32(m,1H),4.71(t,J＝3.6Hz,1H),4.44(m,J＝1.5,5.3,13.6Hz,1H),4.18(m,J＝1.3,6.1,13.4Hz,1H),4.00-3.82(m,1H),3.62-3.44(m,1H),2.62-2.54(m,3H),1.93-1.81(m,1H),1.81-1.72(m,1H),1.65-1.53(m,4H).
步骤2：1-[4-[3-[(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基]丙基]苯基]乙酮的合成
将(E)-1-[4-[3-[(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基]丙-1-烯-1-基]苯基]乙酮(650mg，2.50mmol)溶于四氢呋喃(15mL)，加入钯碳(350mg，1.25mmol，10％纯度)，反应在氢气(15psi)氛围下，25℃搅拌反应2 小时。LCMS显示反应完成。反应液过滤，滤液减压浓缩得到产物1-[4-[3-[(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基]丙基]苯基]乙酮(620mg)，直接用于下一步。
MS m/z(ESI):263.2[M+H] +.
步骤3：1-[4-(3-羟丙基)苯基]乙酮的合成
将1-[4-[3-[(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基]丙基]苯基]乙酮(620mg，2.36mmol)溶于甲醇(15mL)，加入对甲苯磺酸(2.03g，11.8mmol)。反应液于50℃搅拌1小时。薄层层析(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)显示反应完成。反应液减压浓缩至干，加入水(10mL)和二氯甲烷(15mL)稀释，水相用二氯甲烷(15mL)萃取两次。有机相用饱和碳酸氢钠(15mL)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩至干经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/40)得到产物1-[4-(3-羟丙基)苯基]乙酮(310mg)。
步骤4：2-[3-[3-(4-乙酰苯基)丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
在0℃冰水浴下将1-[4-(3-羟丙基)苯基]乙酮(310mg，1.74mmol)、2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸甲酯(381mg，1.91mmol)和三苯基膦(684mg，2.61mmol)溶于甲苯(8mL)，在氮气保护下，将偶氮二羧酸二异丙酯(528mg，2.61mmol)的甲苯(2mL)溶液滴加到上述溶液中，反应液在100℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩至干，加入水(10mL)和二氯甲烷(10mL)稀释，水相用二氯甲烷(10mL)萃取两次。有机相用水(10mL)洗涤两次，稀盐酸(1M)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/20)得到产物2-[3-[3-(4-乙酰苯基)丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(300mg)。
MS m/z(ESI):360.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.89(d,J＝8.3Hz,2H),7.29(d,J＝8.3Hz,2H),5.94-5.84(m,1H),4.23(t,J＝6.3Hz,2H),3.81-3.64(m,3H),3.49(d,J＝8.6Hz,1H),2.90-2.77(m,2H),2.66-2.49(m,3H),2.42-2.28(m,1H),2.18-2.05(m,2H),1.00(d,J＝6.6Hz,3H),0.93(d,J＝6.8Hz,3H).
步骤5：2-[3-[3-[4-(1-羟乙基)苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-[3-[3-(4-乙酰苯基)丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(300mg，835μmol)溶于甲醇(5mL)，在0℃氮气氛围下加入硼氢化钠(0.32g，8.46mmol)，反应液于30℃搅拌48小时。LCMS显示反应完成。反应液加入饱和氯化铵(5mL)淬灭，用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到产物2-[3-[3-[4-(1-羟乙基)苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(226mg)。
MS m/z(ESI):384.2[M+Na] +；
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.19(d,J＝8.0Hz,2H),5.88(s,1H),4.88(q,J＝6.4Hz,1H),4.22(t,J＝6.3Hz,2H),3.80-3.64(m,3H),3.49(d,J＝8.8Hz,1H),2.76(t,J＝7.7Hz,2H),2.35(qd,J＝6.7,15.3Hz,1H),2.14-2.03(m,2H),1.49(d,J＝6.4Hz,3H),1.00(d,J＝6.8Hz,3H),0.92(d,J＝6.8Hz,3H).
步骤6：2-[3-[3-[4-(1-氯乙基)苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-[3-[3-[4-(1-羟乙基)苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(170mg，470μmol)溶于二氯甲烷(2mL)，在冰浴(0℃)下加入二氯亚砜(83.9mg，706μmol)。反应在25℃搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩至干，得到产物2-[3-[3-[4-(1-氯乙基)苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(170mg，粗品)，直接用于下一步。
MS m/z(ESI):344.1[M+H-HCl] +.
步骤7：2-[3-[3-[4-[1-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙基]苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-[3-[3-[4-(1-氯乙基)苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(170mg，448μmol)和2-[3-氨基-1-(4-哌啶基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(153mg，492μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(4mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(174mg，1.34mmol)。反应液于80℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。反应液用水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)稀释，水相用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。有机相用水(10mL)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩至干，经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃 ＝1/2)得到产物2-[3-[3-[4-[1-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙基]苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(74mg)。
MS m/z(ESI):654.5[M+H] +.
步骤8：2-[3-[3-[4-[1-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙基]苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-[3-[4-[1-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙基]苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(60mg，91.8μmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)和水(0.5mL)，加入一水合氢氧化锂(11.6mg，275μmol)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩至干，用水稀释后，滴加稀盐酸(1.5M)调节pH至5，之后减压浓缩得到产物2-[3-[3-[4-[1-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙基]苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(55mg)。
MS m/z(ESI):640.9[M+H] +.
步骤9：(2S,4R)-1-[2-[3-[3-[4-[1-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙基]苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-[3-[4-[1-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙基]苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(50.0mg，78.2μmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(31.1mg，93.8μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(1mL)中，加入HATU(35.7mg，93.8μmol)和N,N-二异丙基乙胺(30.3mg，234μmol)。反应在25℃搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液过滤，滤液减压浓缩经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量：44％-84％)作为洗脱液)得到产物(2S,4R)-1-[2-[3-[3-[4-[1-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙基]苯基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物024)(12.4mg)。
MS m/z(ESI):953.7[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.02(s,1H),9.01-8.89(m,1H),8.49(s,1H),8.45-8.26(m,1H),8.09(d,J＝8.3Hz,1H),7.48-7.29(m,5H),7.28-7.15(m,4H),7.02-6.90(m,2H),6.45(s,2H),6.10(s,1H),5.16-5.00(m,1H),4.99-4.75(m,1H),4.55-4.32(m,2H),4.27(s,1H),4.20-4.02(m,2H),3.79-3.62(m,1H),3.61-3.47(m,2H),3.03(s,1H),2.94(s,1H),2.74-2.63(m,2H),2.47-2.42(m,3H),2.31-2.20(m,1H),2.18-1.90(m,8H),1.86-1.71(m,3H),1.41-1.27(m,6H),1.01-0.90(m,3H),0.86-0.77(m,3H).
实施例61：(2S,4R)-1-[2-[3-[4-[[4-[[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-2-基]氧基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-((S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物025)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000244
步骤1：4-[(4-溴吡啶-2-基)氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
在0℃下，向4-羟基-N-Boc-哌啶(2g，9.94mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中加入氢化钠(476.67mg,11.92mmol,60％纯度)。反应液在室温搅拌30分钟，然后降温到0℃，向上述反应体系中滴加4-溴-2-氟吡啶(1.75g,9.94mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)。反应液在25℃下反应12小时。LCMS监测反应完毕。反应液降温到0℃，并用饱和氯化铵水溶液(15mL)进行淬灭，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相合并后用食盐水(10mL)洗涤两次后用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。残留物经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)纯化得4-[(4-溴吡啶-2-基)氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.2g)。
MS m/z(ESI):300.9,302.9[M+H-tBu] +；
1H NMR(400MHz,MeOD)δ＝8.00(d,J＝5.6Hz,1H),7.13(dd,J＝5.2Hz,1.6Hz,1H),7.02(s,1H),5.26-5.20(m,1H),3.79-3.74(m,2H),3.35-3.33(m,1H),3.31-3.29(m,1H),2.00-1.97(m,2H),1.72-1.67(m,2H),1.48(s,9H).
步骤2：4-[[4-[4-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-2-基]氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[(4-溴吡啶-2-基)氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(149.34g,418.02μmol)、N-叔丁氧基羰基-N-[6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1-(4-哌啶基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]氨基甲酸叔丁基酯(231.85mg,209.01μmol,50％纯度)、碳酸铯(136.20mg,418.02μmol)和甲磺酸(2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(17.48mg，20.90μmol)溶解在四氢呋喃(8mL)中，然后用氮气置换三次，黄色的反应液在80℃搅拌16小时。LCMS监测反应完毕。反应液降温到室温，用水(10mL)稀释后用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后过滤浓缩。残留物经薄层层析(二氧化硅,石油醚：乙酸乙酯＝2:1)纯化得4-[[4-[4-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-2-基]氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(75mg)。
MS m/z(ESI):753.3[M+Na] +.
步骤3：2-[3-氨基-1-[1-[2-(哌啶-4-基氧基)吡啶-4-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[[4-[4-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]-2-吡啶基]氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(75mg,102.62μmol)溶解在1,4-二氧六环(2mL)中，然后加入盐酸的二氧六环溶液(2mL,4M)。反应液在25℃下搅拌2小时。LCMS监测反应完毕。将反应液浓缩至干得2-[3-氨基-1-[1-[2-(哌啶-4-基氧基)吡啶-4-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(70mg，盐酸盐)，不经纯化直接用于下一步。
MS m/z(ESI):487.3[M+H] +.
步骤4：(2S,4R)-1-[2-[3-[4-[[4-[[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-2-基]氧基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-((S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-[2-[3-(4-甲酰基哌啶-1-基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(30.51mg,51.38μmol)和2-[3-氨基-1-[1-[2-(哌啶-4-基氧基)吡啶-4-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(50.00mg,51.38μmol,50％纯度)溶解在四氢呋喃(2mL)和N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。然后向反应体系中加入三乙酰基硼氢化钠(32.67mg,154.14μmol)和乙酸(308.55μg,5.14μmol)。反应液在50℃下搅拌反应4小时。LCMS监测反应完全，将反应液浓缩到干，然后经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量：50％-70％)作为洗脱液)得(2S,4R)-1-[2-[3-[4-[[4-[[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-2-基]氧基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-((S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物025)(3.9mg)。
MS m/z(ESI):1065.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,MeOD)δ＝8.90(s,1H),8.30(s,1H),8.04-8.02(m,1H),7.48-7.44(m,1H),7.40-7.36(m,3H),7.31-7.29(m,2H),7.04-7.01(m,2H),6.63-6.61(m,1H),6.25(s,1H),6.09-6.06(m,1H),5.06-5.02(m,2H),4.53-4.51(m,1H),4.16-4.13(m,2H),3.76-3.65(m,5H),3.22-3.18(m,2H),2.92-2.88(m,4H),2.51(s,3H),2.50-2.49(m,3H),2.23-2.21(m,3H),2.05-1.99(m,5H),1.86-1.84(m,3H),1.67-1.65(m,1H),1.55-1.53(m,3H),1.35-1.33(m,3H),1.29-1.25(m,4H),1.08-1.06(m,3H),0.93-0.89(m,3H).
实施例62：化合物026的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000245
步骤1：(2S,4R)-1-[(S)-2-[3-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和(2S,4R)-1-[(R)-2-[3-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
(2S,4R)-1-[2-[3-[4-(二甲氧基甲基)-1-哌啶基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基 噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(300.00mg，468.89μmol)经手性制备(DAICEL CHIRALPAK AD柱，10μm二氧化硅，30mm直径，250mm长度；使用异丙醇(含有0.1％氨水)作为洗脱液)纯化得到标题产物P1(75mg，命名为中间体1)和另一种标题产物P2(170mg，命名为中间体1-1)。然后通过以下手性HPLC分析条件分别对两标题产物进行进一步分析。
手性HPLC分析方法：
Figure PCTCN2022133547-appb-000246
中间体1：
手性HPLC出峰时间为1.744分钟；
MS m/z(ESI):640.4[M+H] +.
中间体1-1：
手性HPLC出峰时间为2.036分钟；
MS m/z(ESI):640.6[M+H] +.
步骤2：中间体2的合成
将中间体1(75.00mg，117.22μmol)溶于四氢呋喃(1mL)中，加入盐酸溶液(2M，586.12μL)，反应液在65℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩，浓缩物用乙酸乙酯(15mL×2)和碳酸氢钠水溶液(2mL)萃取，有机相减压浓缩至干，得到产物中间体2(65mg)。
MS m/z(ESI):594.5[M+H] +.
步骤3：化合物026的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(37.37mg,120.42μmol)和中间体2(65.00mg，109.48μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)和四氢呋喃(2mL)中，加入乙酸(6.57mg，109.48μmol)和醋酸硼氢化钠(69.61mg，328.43μmol)。反应液于25℃反应2小时。经LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Boston Green ODS柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度)；(使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：20％-40％)作为洗脱液)得到产物化合物026(47.5mg)。
MS m/z(ESI):888.3[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.66(br s,1H),9.02-8.96(m,1H),8.53-8.39(m,1H),8.30(br s,1H),8.14-7.96(m,1H),7.51-7.30(m,5H),7.06-6.96(m,2H),6.58-6.45(m,2H),6.18(br s,1H),5.14(d,J＝3.5Hz,1H),5.05-4.58(m,2H),4.56-4.37(m,1H),4.27(br s,1H),3.81-3.50(m,5H),3.05(br s,2H),2.77(br s,2H),2.45(s,5H),2.32-1.87(m,8H),1.87-1.58(m,4H),1.49-1.31(m,3H),1.23(br s,2H),0.96(d,J＝6.8Hz,3H),0.86-0.79(m,3H).
实施例63：化合物027的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000247
步骤1：中间体2-1的合成
将按实施例62方法制备的中间体1-1(140mg，218.82μmol)溶于四氢呋喃(2mL)中，加入盐酸溶液(2M，1.09mL)，反应液在65℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩，浓缩物用乙酸乙酯(20mL×2)和碳酸氢钠水溶液(2mL)萃取，有机相减压浓缩至干，得到标题产物中间体2-1(120mg)。
MS m/z(ESI):594.5[M+H] +.
步骤2：化合物027的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(69.00mg，222.32μmol)和中间体2-1(120mg，202.11μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)和四氢呋喃(3mL)中，加入乙酸(36.41mg，606.33μmol)和醋酸硼氢化钠(128.51mg，606.33μmol)。反应液于25℃反应2小时。经LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Boston Green ODS柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度)；(使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：20％-40％)作为洗脱液)得到标题产物化合物027(84.7mg)。
MS m/z(ESI):888.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.94(br s,1H),8.98(s,1H),8.50(br s,1H),8.42(d,J＝7.5Hz,1H),8.15-8.04(m,1H),7.48-7.41(m,2H),7.40-7.33(m,3H),7.04-6.96(m,2H),6.49(s,2H),6.14(s,1H),5.13(d,J＝3.8Hz,1H),4.91(t,J＝7.2Hz,1H),4.72-4.52(m,1H),4.36(t,J＝7.9Hz,1H),4.28(br s,1H),3.76-3.61(m,3H),3.57(d,J＝9.8Hz,1H),3.43(d,J＝10.8Hz,2H),3.21-2.88(m,2H),2.77(t,J＝11.9Hz,2H),2.46(s,3H),2.24-1.98(m,8H),1.95-1.83(m,2H),1.82-1.71(m,3H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.18(br s,2H),0.95(d,J＝6.4Hz,3H),0.79(d,J＝6.4Hz,3H).
实施例64：(2S,4R)-1-[2-[3-[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羰基]哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物028)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000248
步骤1：1-[5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基]哌啶-4-羧酸叔丁酯的合成
将4-Boc-哌啶(100mg,539.77μmol)和3-甲基-2-[3-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯(311.74mg,647.73μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(209.29mg，1.62mmol，282.06μL)。反应液于80℃搅拌反应2小时。经LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(5mL)并用二氯甲烷(15mL)萃取三次，有机相用水(5mL)萃洗三次，并用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩至干，然后经柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)得到1-[5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基]哌啶-4-羧酸叔丁酯(96mg)。
MS m/z(ESI):367.2[M+H] +.
步骤2：2-[3-(4-叔丁氧羰基-1-哌啶-1-基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将1-[5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基]哌啶-4-羧酸叔丁酯(76mg,207.39μmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)和水(0.5mL)。加入一水合氢氧化锂(14.90mg，622.18μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(3mL)并用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干，得到2-[3-(4-叔丁氧羰基-1-哌啶-1-基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(58mg)。
MS m/z(ESI):353.2[M+H] +.
步骤3：1-[5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]异噁唑-3-基]哌啶-4-羧酸叔丁酯的合成
将2-[3-(4-叔丁氧羰基-1-哌啶-1-基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(58mg,164.57μmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(60.55mg,164.57μmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(63.81mg，493.72μmol，86.00μL)和O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(93.86mg，246.86μmol)。反应液于25℃搅拌2小时，LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(3mL)并用二氯甲烷(15mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干。经薄层色谱法(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/2)纯化得到1-[5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5- 基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]异噁唑-3-基]哌啶-4-羧酸叔丁酯(48mg)。
MS m/z(ESI):666.3[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.01-8.95(m,1H),8.43-8.19(m,1H),7.49-7.30(m,4H),6.16-6.11(m,1H),5.13-4.99(m,1H),4.97-4.85(m,1H),4.46-4.33(m,1H),4.32-4.23(m,1H),3.74-3.66(m,1H),3.58-3.48(m,3H),3.49-3.38(m,1H),2.92-2.53(m,4H),2.45(d,J＝3.3Hz,3H),1.86-1.72(m,3H),1.56-1.42(m,3H),1.41-1.39(m,9H),1.38-1.33(m,3H),0.95(dd,J＝3.3,6.5Hz,3H),0.80(dd,J＝6.7,11.4Hz,3H).
步骤4：1-[5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]异噁唑-3-基]哌啶-4-羧酸的合成
将1-[5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]异噁唑-3-基]哌啶-4-羧酸叔丁酯(48mg,72.09μmol)溶于二氯甲烷(0.5mL)，加入三氟乙酸(82.20mg,720.89μmol,53.38μL)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干得1-[5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]异噁唑-3-基]哌啶-4-羧酸(40mg)。
MS m/z(ESI):632.2[M+H] +.
步骤5：(2S,4R)-1-[2-[3-[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羰基]哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将1-[5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]异噁唑-3-基]哌啶-4-羧酸(40mg，65.60μmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(20.36mg，65.60μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(25.44mg,196.81μmol，34.28μL)和O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(27.44mg，72.16μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干经高效液相色谱纯化(Phenomenex C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：40％-60％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-羰基]哌啶-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物028)(11.5mg)。
MS m/z(ESI):902.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.88(br s,1H),9.02-8.91(m,1H),8.51(s,1H),8.32(d,J＝12.4Hz,1H),8.09(br d,J＝7.8Hz,1H),7.47-7.31(m,5H),7.05-6.96(m,2H),6.50(br s,2H),6.20-6.12(m,1H),5.12(br d,J＝3.1Hz,1H),4.96-4.79(m,2H),4.66-4.52(m,1H),4.46-4.35(m,1H),4.32-4.13(m,2H),3.71-3.50(m,4H),3.04-2.78(m,4H),2.75-2.63(m,1H),2.47-2.44(m,3H),2.36-2.10(m,2H),2.03-1.89(m,4H),1.87-1.74(m,1H),1.71-1.58(m,4H),1.46(br d,J＝6.9Hz,1H),1.42-1.20(m,3H),0.96(br dd,J＝2.4,6.2Hz,3H),0.81(br dd,J＝6.7,10.7Hz,3H).
实施例65：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一酰氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物029)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000249
步骤1：11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一烷酸的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(50.0mg，161μmol)和11-溴十一烷酸(47.0mg，177μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(2mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(62.5mg，483μmol)。反应液于80℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液经浓缩得棕色液体11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一烷酸(63mg)，不经过纯化直接用于下一步。
MS m/z(ESI):495.4[M+H] +.
步骤2：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一酰氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一烷酸(63.0mg，127μmol)和(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(73.5mg，153μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(58.1mg，153μmol)和N,N-二异丙基乙胺(49.4mg，382μmol)。反应在25℃搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液过滤，滤液减压浓缩经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量：50％-90％)作为洗脱液)得到产物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一酰氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物029)(13.31mg)。
MS m/z(ESI):921.7[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.99(s,1H),8.98(s,1H),8.51(s,1H),8.38(d,J＝7.8Hz,1H),8.12(dd,J＝1.4,8.4Hz,1H),7.80(d,J＝9.3Hz,1H),7.55-7.23(m,5H),7.07-6.86(m,2H),6.46(s,2H),5.11(d,J＝3.5Hz,1H),4.99-4.85(m,1H),4.52(d,J＝9.3Hz,2H),4.41(t,J＝8.0Hz,1H),4.27(s,1H),3.65-3.53(m,2H),2.98(d,J＝6.0Hz,2H),2.45(s,3H),2.35-2.28(m,2H),2.28-2.18(m,1H),2.15-1.97(m,6H),1.87-1.75(m,3H),1.51-1.39(m,4H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.25(s,12H),0.93(s,9H).
实施例66：化合物030的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000250
将中间体11(40mg，76.25μmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(26.03mg，83.88μmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入一滴醋酸和三乙酰氧基硼氢化钠(48.48mg，228.76μmol)。混合物在25℃下搅拌2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱纯化(YMC-Pack CN柱：5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：20％-40％)作为洗脱液)纯化得到标题化合物即化合物030(14.8mg)。
MS m/z(ESI):835.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.99(br s,1H),8.98(s,1H),8.51(s,1H),8.43(d,J＝7.6Hz,1H),8.12(d,J＝7.1Hz,1H),7.45-7.40(m,2H),7.36(br d,J＝8.1Hz,3H),7.02-6.94(m,2H),6.46(s,2H),6.12(s,1H),4.97-4.88(m,1H),4.62-4.51(m,1H),4.38(t,J＝7.9Hz,1H),4.30-4.26(m,3H),3.71-3.63(m,2H),3.46(br d,J＝11.3Hz,3H),3.06(br d,J＝10.9Hz,3H),2.78(br t,J＝5.3Hz,2H),2.45(s,3H),2.30-2.22(m,3H),2.08(br dd,J＝12.1Hz,2.5,2H),1.84(br d,J＝9.1Hz,2H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),0.96(br d,J＝6.4Hz,3H),0.81(d,J＝6.6Hz,3H).
实施例67：(2S,4R)-1-[2-[3-[7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]庚氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物031)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000251
步骤1：2-[3-(7-溴庚氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
在0℃冰水浴下将2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸甲酯(300mg，1.51mmol)，7-溴-1-庚醇(323 mg，1.66mmol)和三苯基膦(593mg，2.26mmol)溶于甲苯(10mL)，在氮气保护下，将偶氮二羧酸二异丙酯(457mg，2.26mmol)的甲苯(1mL)溶液滴加到上述溶液中，反应液在100℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩至干，加入水(10mL)和二氯甲烷(10mL)稀释，水相用二氯甲烷(10mL)萃取两次。有机相用食盐水(10mL)洗涤一次，稀盐酸(0.5M)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/10)得到产物2-[3-(7-溴庚氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(430mg)。
MS m/z(ESI):377.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝5.99-5.76(s,1H),4.20(t,J＝6.6Hz,2H),3.81-3.63(s,3H),3.48(d,J＝8.8Hz,1H),3.41(t,J＝6.8Hz,2H),2.44-2.27(m,1H),1.92-1.71(m,4H),1.49-1.35(m,6H),1.00(d,J＝6.6Hz,3H),0.92(d,J＝6.8Hz,3H).
步骤2：2-[3-[7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]庚氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-[3-(7-溴庚氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(100mg，266μmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(82.5mg，266μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(3mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(103mg，797μmol)。反应液于80℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液用水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)稀释，水相用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。有机相用水(10mL)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩至干经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/1，0.1％氨甲醇)得到产物2-[3-[7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]庚氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(76mg)。
MS m/z(ESI):606.3[M+H] +.
步骤3：2-[3-[7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]庚氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-[7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]庚氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(76mg，125μmol)溶于四氢呋喃(1mL)和水(1mL)，加入一水合氢氧化锂(15.8mg，376μmol)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩至干，用水稀释后，滴加稀盐酸(1.5M)调节pH至5到6，之后减压浓缩得到产物2-[3-[7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]庚氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(74mg，粗品)直接用于下一步。
MS m/z(ESI):592.2[M+H] +.
步骤4：(2S,4R)-1-[2-[3-[7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]庚氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-[7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]庚氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(52.0mg，87.9μmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(32.0mg，96.7μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(40.1mg，105μmol)和N,N-二异丙基乙胺(34.1mg，264μmol)。反应在25℃搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液过滤，滤液减压浓缩经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量：43％-83％)作为洗脱液)得到产物(2S,4R)-1-[2-[3-[7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]庚氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物031)(30.8mg)。
MS m/z(ESI):905.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.00(s,1H),9.01-8.91(m,1H),8.51(s,1H),8.47-8.27(m,1H),8.19-8.07(m,1H),7.52-7.27(m,5H),7.05-6.93(m,2H),6.46(s,2H),6.17-6.02(m,1H),5.18-5.00(m,1H),4.94-4.73(m,1H),4.61-4.47(m,1H),4.46-4.34(m,1H),4.28(s,1H),4.20-4.05(m,2H),3.79-3.60(m,1H),3.60-3.50(m,1H),3.47-3.41(m,1H),2.99(s,2H),2.48-2.42(m,3H),2.37-2.21(m,3H),2.08(d,J＝6.8Hz,5H),1.88-1.62(m,5H),1.48-1.24(m,11H),1.02-0.90(m,3H),0.87-0.78(m,3H).
实施例68：(2S,4R)-1-[(2R)-2-[3-[9-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]壬氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和(2S,4R)-1-[(2S)-2-[3-[9-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]壬氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000252
步骤1：9-溴壬醛的合成
将9-溴-1-壬醇(1g，4.48mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入氯铬酸吡啶鎓盐(1.45g，6.72mmol)和二氧化硅(1.35g，22.41mmol)，反应液在25℃搅拌12小时，薄层层析(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝10:1)显示反应完成。将反应液过滤，减压浓缩至干，得到产物9-溴壬醛(1g)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ9.76(s,1H),3.40(t,J＝6.8Hz,2H),2.42(dt,J＝1.4,7.3Hz,2H),1.85(m,2H),1.63(br t,J＝6.7Hz,2H),1.48-1.38(m,2H),1.32(s,6H).
步骤2：9-溴-1,1-二甲氧基壬烷的合成
将9-溴壬醛(1g，4.52mmol)和原甲酸三甲酯(575.59mg，5.42mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，33.90μL)，反应液在65℃搅拌2小时，薄层层析(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝10:1)显示反应完成。反应液用碳酸氢钠(20mg)淬灭，浓缩，浓缩物用乙酸乙酯和水萃取，将有机相减压浓缩至干，得到产物9-溴-1,1-二甲氧基壬烷(1g)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ4.35(t,J＝5.7Hz,1H),3.40(t,J＝6.8Hz,2H),3.31(s,6H),1.85(m,2H),1.63-1.55(m,2H),1.41(d,J＝6.6Hz,2H),1.31(s,8H).
步骤3：2-[3-(9,9-二甲氧基壬氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将9-溴-1,1-二甲氧基壬烷(73.77mg，276.10μmol)和2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(50mg，251.00μmol)溶于乙腈(2mL)中，加入碳酸钾(69.38mg，502.00μmol)，反应液于60℃反应12小时，LCMS显示反应完成。将反应液过滤浓缩，浓缩物经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝3:1)得到产物2-[3-(9,9-二甲氧基壬氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(50mg)。
MS m/z(ESI):354.2[M-MeOH] +；
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ5.87(s,1H),4.35(t,J＝5.7Hz,1H),4.19(t,J＝6.5Hz,2H),3.72(s,3H),3.50-3.45(m,1H),3.31(s,6H),2.39-2.30(m,1H),1.80-1.70(m,2H),1.61-1.56(m,2H),1.45-1.38(m,2H),1.31(br s,8H),1.00(d,J＝6.6Hz,3H),0.92(d,J＝6.7Hz,3H).
步骤4：2-[3-(9,9-二甲氧基壬氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-(9,9-二甲氧基壬氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(50mg，129.70μmol)溶于四氢呋喃(1mL)和水(1mL)中，加入一水合氢氧化锂(5.44mg，129.70μmol)，反应液于25℃反应2小时，LCMS显示反应完成。反应液用1M盐酸溶液调节pH值至5～6，然后用乙酸乙酯(25mL×3)萃取，有机相减压浓缩至干，得到产物2-[3-(9,9-二甲氧基壬氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(45mg)。
MS m/z(ESI):340.1[M-MeOH] +.
步骤5：(2S,4R)-1-[2-[3-(9,9-二甲氧基壬氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-(9,9-二甲氧基壬氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(45mg，121.14μmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(49.02mg，133.26μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入三乙胺(36.77mg，363.42μmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(50.67mg，133.26μmol)，反应液于25℃反应1小时。LCMS显示反应完成，反应液用乙酸乙酯(15mL×3)和水(4mL)萃取，将有机相减压浓缩至干，浓缩物经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/2)得到(2S,4R)-1-[2-[3-(9,9-二甲氧基壬氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(29mg)。
MS m/z(ESI):653.2[M-MeOH] +.
步骤6：(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(9-氧代壬氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将((2S,4R)-1-[2-[3-(9,9-二甲氧基壬氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(29mg，42.34μmol)溶于四氢呋喃(1mL)中，加入盐酸溶液(2M，211.71μL)，反应液在25℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成。反应液用饱和碳酸氢钠溶液调节pH值至8～9，然后用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，有机相减压浓缩至干，得到产物(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(9-氧代壬氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(29mg)。
MS m/z(ESI):639.2[M+H] +.
步骤7：(2S,4R)-1-[(2R)-2-[3-[9-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]壬氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和(2S,4R)-1-[(2S)-2-[3-[9-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]壬氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(15.50mg，49.94μmol)和((2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(9-氧代壬氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(29mg，45.40μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙酸(2.73mg，45.40μmol)和醋酸硼氢化钠(28.86mg，136.19μmol)。反应液于25℃反应2小时。经LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Boston Green ODS柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：26％-46％)作 为洗脱液)得到标题产物P1(1.9mg，第一个峰，HPLC保留时间为4.472分钟，化合物032)和标题产物P2(11.6mg，第二个峰，HPLC保留时间为4.496分钟，化合物032-1)。
化合物032：
MS m/z(ESI):934.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.69(s,1H),9.26(br s,1H),9.04-8.92(m,1H),8.47-8.28(m,2H),8.00(br d,J＝7.9Hz,1H),7.45-7.28(m,5H),7.09-6.95(m,2H),6.54(br s,2H),6.15-5.97(m,1H),5.21-4.76(m,3H),4.41(t,J＝7.8Hz,1H),4.26(br s,1H),4.17-4.06(m,2H),3.79-3.63(m,3H),3.05(br d,J＝11.3Hz,3H),2.44(s,3H),2.35-2.27(m,3H),2.13(br d,J＝12.5Hz,3H),2.04(br d,J＝11.8Hz,1H),1.81-1.61(m,6H),1.37-1.28(m,13H),0.95(br d,J＝6.4Hz,3H),0.82(br d,J＝6.6Hz,3H).
化合物032-1：
MS m/z(ESI):933.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ14.11-12.66(m,1H),9.30(br s,1H),8.98(s,1H),8.48-8.34(m,2H),8.00(d,J＝8.3Hz,1H),7.48-7.40(m,2H),7.38-7.32(m,3H),7.07-6.96(m,2H),6.54(br s,2H),6.06(s,1H),5.21-4.75(m,3H),4.35(t,J＝7.9Hz,1H),4.28(br s,1H),4.13(m,2H),3.78-3.64(m,3H),3.11-3.03(m,3H),2.45(s,3H),2.38-2.28(m,3H),2.19-2.08(m,3H),2.07-1.97(m,1H),1.82-1.60(m,6H),1.37(d,J＝7.0Hz,4H),1.32(br s,9H),0.95(d,J＝6.4Hz,3H),0.83-0.77(m,3H).
实施例69：反式-(2S,4R)-1-[(S)-2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]环己烷-1-酰氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和顺式-(2S,4R)-1-[(S)-2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]环己烷-1-酰氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000253
步骤1：(S)-[1-(6-溴吡啶-3-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯的合成
将(S)-1-(6-溴吡啶-3-基)乙胺(900mg，4.48mmol)溶于二氯甲烷(45mL)中，加入三乙胺(1.36g，13.43mmol)并于0℃下搅拌0.5小时，然后将二碳酸二叔丁酯(1.47g，6.71mmol)加入至反应液中并于0℃下搅拌0.5小时。反应液于30℃搅拌反应2小时。往反应液中加入水(30mL)，用二氯甲烷(45mL)萃取三次，有机相用水(45mL)萃洗三次，并用无水硫酸钠干燥。将有机相过滤减压浓缩至干，然后经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到6/1)得到(S)-(1-(6-溴吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.11g)。
MS m/z(ESI):300.7[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.31(d,J＝2.3Hz,1H),7.70-7.58(m,2H),7.50(d,J＝7.5Hz,1H),4.68-4.56(m,1H),1.42-1.27(m,12H).
步骤2：(S)-[1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯的合成
将(S)-[1-(6-溴吡啶-3-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.1g，3.65mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)和水(5mL)中，加入4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)噻唑(1.64g，7.30mmol)、碳酸铯(3.57g，10.95mmol)和1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(267.24mg，365.00μmol)。反应液于100℃搅拌反应3小时。LCMS监测反应完全。往反应液中加入水(10mL)，用二氯甲烷(30mL)萃取三次，有机相用水(30 mL)萃洗三次，并用无水硫酸钠干燥。将有机相过滤减压浓缩至干，然后经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到2/1)得到(S)-[1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(700mg)。
MS m/z(ESI):320.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.00(s,1H),8.53(d,J＝1.6Hz,1H),7.81(dd,J＝2.3,8.3Hz,1H),7.71(d,J＝8.1Hz,1H),7.53(d,J＝7.6Hz,1H),4.74-4.63(m,1H),2.65(s,3H),1.37(s,12H).
步骤3：(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙胺的合成
将(S)-[1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(700mg，2.19mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，5.48mL)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干得(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙胺(690mg)。
MS m/z(ESI):220.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.14(s,1H),8.87(s,1H),8.77(d,J＝1.9Hz,2H),8.14(dd,J＝2.3,8.3Hz,1H),7.83(d,J＝8.3Hz,1H),3.16(s,1H),2.68(s,3H),1.58(d,J＝6.9Hz,3H).
步骤4：(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]氨基羰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成
将(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙胺(620mg，2.42mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(13mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(1.11g，2.91mmol)和N,N-二异丙基乙胺(939.89mg，7.27mmol)，反应液于25℃下搅拌0.5小时，往反应液中加入(2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(560.56mg，2.42mmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。往反应液中加入水(15mL)，用二氯甲烷(30mL)萃取三次，有机相用水(30mL)萃洗三次，并用无水硫酸钠干燥。将有机相过滤后减压浓缩至干，然后经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到1/2)得到(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]氨基羰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(630mg)。
MS m/z(ESI):433.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.93(s,1H),8.58(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(dd,J＝2.4,8.2Hz,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),5.10(q,J＝7.2Hz,1H),4.35(d,J＝7.5Hz,2H),3.94-3.87(m,1H),3.57-3.46(m,2H),2.67(s,3H),2.29-2.15(m,1H),1.55(d,J＝7.3Hz,3H),1.42(s,9H).
步骤5：(2S,4R)-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]氨基羰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(100mg，231.20μmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)中，加入盐酸二氧六环溶液(4M，577.99μL)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干，得到(2S,4R)-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(110mg)。
MS m/z(ESI):333.2[M+H] +.
步骤6：((S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]氨基羰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯的合成
将(2S,4R)-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(110mg，298.20μmol)和(S)-2-[(叔丁氧羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酸(68.97mg，298.20μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(136.06mg，357.84μmol)和N,N-二异丙基乙胺(115.62mg，894.60μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。往反应液中加入水(10mL)，用二氯甲烷(15mL)萃取三次，有机相用水(15mL)萃洗三次，并用无水硫酸钠干燥。将有机相过滤减压浓缩至干，然后经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到2/3)得到(((S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]氨基羰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(100mg)。
MS m/z(ESI):546.4[M+H] +.
步骤7：(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基)乙基)氨基羰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，183.25μmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，458.13μL)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干得(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(140mg)。
MS m/z(ESI):446.3[M+H] +；
步骤8：反式-(2S,4R)-1-[(S)-2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]环己烷-1-酰氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和顺式-(2S,4R)-1-[(S)-2-[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]环己烷-1-酰氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(40mg，49.79μmol)和4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]环己-1-羧酸(51.24mg，49.79μmol，50％纯度)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(22.72mg，59.75μmol)和N,N-二异丙基乙胺(32.17mg，248.94μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。往反应液中加入水(0.5mL)淬灭反应，然后经高效液相色谱纯化(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(0.225％甲酸)和乙腈的极性递减(31％-71％)的混合物作为洗脱液)纯化得到标题产物P1(2.6mg，第一个峰，LCMS保留时间为1.205分钟，化合物033)和另一个标题产物P2(8.4mg，第二个峰，LCMS保留时间为1.210分钟，化合033-1)。
化合物033：
MS m/z(ESI):942.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.91(s,1H),9.00(s,1H),8.54(s,2H),8.46(d,J＝7.1Hz,1H),8.34-8.28(m,2H),8.11(d,J＝7.9Hz,1H),7.83-7.67(m,3H),7.42-7.33(m,1H),7.05-6.97(m,2H),6.45(s,2H),5.12(s,1H),4.93(dd,J＝7.3,14.3Hz,2H),4.80(d,J＝12.0Hz,2H),4.54-4.47(m,1H),4.41(t,J＝7.9Hz,1H),4.28(s,1H),3.60(s,2H),3.12-3.02(m,2H),2.65(s,3H),2.04-1.44(m,16H),1.41(d,J＝7.0Hz,3H),0.95(s,9H).
化合物033-1：
MS m/z(ESI):942.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.91(s,1H),9.00(s,1H),8.59-8.49(m,2H),8.46(d,J＝7.5Hz,1H),8.27(s,2H),8.11(d,J＝7.5Hz,1H),7.79(dd,J＝2.1,8.4Hz,1H),7.69(d,J＝8.2Hz,1H),7.63(d,J＝9.4Hz,1H),7.40-7.33(m,1H),7.05-6.97(m,2H),6.45(s,2H),5.12(d,J＝2.6Hz,1H),5.01-4.86(m,2H),4.80(d,J＝12.6Hz,2H),4.58-4.49(m,1H),4.41(t,J＝8.1Hz,1H),4.28(s,1H),3.62(s,2H),3.14-2.96(m,2H),2.65(s,3H),2.09-1.45(m,16H),1.41(d,J＝7.0Hz,3H),0.95(s,9H).
实施例70：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[5-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]戊酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物034)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000254
步骤1：5-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]戊酸甲酯的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(50mg,161.11μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入5-溴戊酸甲酯(34.57mg，177.22μmol)和N,N-二异丙基乙胺(84.18μL，483.32μmol)。反应液在80℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液冷却至室温，加入水(8mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取2次，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干，经薄层层析色谱纯化(石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到5-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]戊酸甲酯(30mg)。
MS m/z(ESI):425.2[M+H] +.
步骤2：5-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]戊酸的合成
将5-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]戊酸甲酯(30mg，70.67μmol)溶于甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化钠(5.65mg，141.34μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液经减压浓缩至干，加入盐酸(1.5M)调节pH至3，加入水(2mL)和乙酸乙酯(2mL)，并用乙酸乙酯(4mL)萃取水相两次，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干，得到5-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]戊酸(20mg)。
MS m/z(ESI):411.2[M+H] +.
步骤3：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[5-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]戊酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将5-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]戊酸(15mg，36.54μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(16.25mg，36.54μmol)、O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(16.67mg，43.85μmol)和N,N-二异丙基乙胺(19.10μL，109.63μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱(Phenomenex C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：31％-71％)作为洗脱液)纯化得(2S,4R)-1-[(2S)-2-[5-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]戊酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物034)(3.2mg)。
MS m/z(ESI):837.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.99(s,1H),8.99(s,1H),8.52(s,1H),8.39(br d,J＝7.5Hz,1H),8.13(br d,J＝7.4Hz,1H),7.83(br d,J＝9.1Hz,1H),7.47-7.32(m,5H),6.99(br d,J＝8.0Hz,2H),6.47(br s,2H),5.12(br d,J＝3.1Hz,1H),4.98-4.88(m,1H),4.54(br d,J＝9.3Hz,2H),4.43(br t,J＝8.0Hz,1H),4.29(br s,1H),3.62(br s,2H),2.98(br s,2H),2.46(s,3H),2.29(br d,J＝6.8Hz,1H),2.21-1.98(m,6H),1.82(br d,J＝16.1Hz,3H), 1.59-1.41(m,5H),1.38(br d,J＝6.9Hz,3H),1.24(s,1H),0.95(s,9H).
实施例71：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[6-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物035)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000255
步骤1：6-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己酸的合成
将2-[3-氨基-1-(4-哌啶基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(40.0mg，128.89μmol)和6-溴己酸(27.65mg，141.77μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(0.8mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(49.97mg，386.66μmol)。反应液于80℃搅拌4小时。LCMS显示反应完成，反应液不经过处理直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):425.1[M+H] +.
步骤2：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[6-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将6-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己酸(40mg，94.23μmol)和(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(41.89mg，94.23μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(0.8mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(42.99mg，113.08μmol)和N,N-二异丙基乙胺(36.54mg，282.69μmol)。反应在25℃搅拌反应4小时。LCMS显示反应完成。反应液过滤，滤液减压浓缩经制备液相色谱(Phenomenex C18，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量：35％-65％)作为洗脱液)纯化得到产物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[6-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物035)(6.0mg)。
MS m/z(ESI):851.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.99(br s,1H),9.01-8.94(m,1H),8.51(s,1H),8.39(d,J＝7.9Hz,1H),8.12(d,J＝7.2Hz,1H),7.82(d,J＝9.3Hz,1H),7.46-7.41(m,2H),7.40-7.32(m,3H),7.02-6.96(m,2H),6.46(s,2H),5.12(br s,1H),4.91(t,J＝7.2Hz,1H),4.53(d,J＝9.3Hz,2H),4.42(t,J＝8.0Hz,1H),4.28(br s,1H),3.69-3.55(m,2H),2.99(br s,2H),2.45(s,3H),2.36-2.22(m,4H),2.10-2.00(m,5H),1.89-1.74(m,3H),1.48(td,J＝6.8,13.4Hz,4H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.31-1.24(m,2H),0.94(s,9H).
实施例72：(2S,4R)-1-[2-[3-[8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物036)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000256
步骤1：2-[3-(8-溴辛氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(300mg，1.51mmol)，8-溴辛烷-1-醇(377.93mg，1.81mmol，309.78μL)和三苯基膦(592.50mg，2.26mmol)溶于无水四氢呋喃(4mL)中，在氮气氛围下0℃加入偶氮二甲酸二异丙酯(456.79mg，2.26mmol，439.22μL)。反应液在65℃搅拌反应4小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝3：1)纯化得到2-[3-(8-溴辛氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(280mg)。
MS m/z(ESI):390.1,392.1[M+H] +.
步骤2：2-[3-[8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-[3-(8-溴辛氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(100mg，256.21μmol)和2-[3-氨基-1-(4-哌啶基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(87.47mg，281.83μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(99.34mg，768.62μmol，133.88μL)。反应液在80℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液用乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)萃取，减压浓缩至干，经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到2-[3-[8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(128mg)。
MS m/z(ESI):620.4[M+H] +.
步骤3：2-[3-[8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-[8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(128mg，206.53μmol)溶于甲醇(2mL)中，然后加入氢氧化钠水溶液(4M，206.53μL)。反应液在25℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完毕。反应液浓缩至干，加入水(2mL)溶解，用1M的HCl调节pH值为1后减压浓缩至干得2-[3-[8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(100mg)。
MS m/z(ESI):606.3[M+H] +.
步骤4：(2S,4R)-1-[2-[3-[8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-[8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(50mg，82.55μmol)、(2S,4R)-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(27.36mg，82.55μmol)、O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(37.66mg，99.05μmol)和N,N-二异丙基乙胺(32.01mg，247.64μmol，43.13μL)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，反应液在25℃搅拌反应2小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：49％-89％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-[8-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]辛氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物036)(3.2mg)。
MS m/z(ESI):919.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.95-8.82(m,1H),8.28(d,J＝3.5Hz,1H),8.07-7.94(m,1H),7.50-7.37(m,5H),7.07-6.96(m,2H),6.02(d,J＝7.8Hz,1H),5.03(d,J＝7.0,11.3Hz,1H),4.63-4.50(m,2H),4.24-4.10(m,2H),3.89-3.60(m,3H),3.24(d,J＝7.5Hz,2H),2.56(s,2H),2.52-2.48(m,3H),2.39(d,J＝6.8Hz,4H),2.27-2.16(m,1H),2.06-1.91(m,3H),1.85-1.72(m,2H),1.61(d,J＝7.0Hz,2H),1.52(d,J＝7.0,10.5Hz,4H),1.41(d,J＝7.0Hz,9H),1.07(d,J＝6.5Hz,3H),0.96-0.89(m,3H).
实施例73：(2S,4R)-1-[2-[3-[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物037)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000257
步骤1：2-[3-(4,4-二甲氧基丁氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(300mg，1.51mmol)、4-氯丁醛缩二甲醇(275.81mg，1.81mmol)和碳酸铯(1.47g，4.52mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中。反应液在80℃搅拌反应6小时。LCMS检测反应完毕。反应液用乙酸乙酯(40mL)和水(10mL)萃取。有机相合并后用饱和食盐水(10mL)洗三次，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，经薄层色谱(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：2)纯化得到2-[3-(4,4-二甲氧基丁氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(188mg)。
MS m/z(ESI):338.1[M+Na] +.
步骤2：2-[3-(4,4-二甲氧基丁氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-(4,4-二甲氧基丁氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(188mg，596.14μmol)和氢氧化钠(47.69mg，1.19mmol)溶于甲醇(1mL)和水(1mL)中。反应液在25℃搅拌反应4小时。LCMS检测反应完毕。反应液浓缩至干，加入水(2mL)溶解，用1M的HCl调节pH值为1后再用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，有机相减压浓缩至干得2-[3-(4,4-二甲氧基丁氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(188mg)。
MS m/z(ESI):324.1[M+Na] +.
步骤3：(2S,4R)-1-[2-[3-(4,4-二甲氧基丁氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-(4,4-二甲氧基丁氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(188mg，623.89μmol)、(2S,4R)-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(248.13mg，748.67μmol)、O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(355.83mg、935.84μmol)和N,N-二异丙基乙胺(241.90mg，1.87mmol，326.01μL)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。反应液在25℃搅拌反应4小时。LCMS检测反应完毕。反应液加入水(5mL)稀释，然后用乙酸乙酯(40mL)萃取，有机相减压浓缩至干，经薄层色谱(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1:2)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-(4,4-二甲氧基丁氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(100mg)。
MS m/z(ESI):637.3[M+Na] +.
步骤4：(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(4-氧代丁氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-[2-[3-(4,4-二甲氧基丁氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(100mg，162.67μmol)溶于无水四氢呋喃(2mL)和稀盐酸(2M，0.1mL)中。反应液在25℃搅拌反应4小时。LCMS检测反应完毕。反应液浓缩至干，得到(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(4-氧代丁氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(80mg)。
MS m/z(ESI):569.2[M+H] +.
步骤5：(2S,4R)-1-[2-[3-[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(4-氧代丁氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(80mg，140.68μmol)、2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(43.66mg，140.68μmol)和乙酸(16.90mg，281.35μmol，16.09μL)溶于无水四氢呋喃(0.5mL)中，反应液在25℃搅拌反应1小时，加入醋酸硼氢化钠(89.44mg，422.03μmol)。反应液在25℃搅拌反应15小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：12％-52％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物037)(13.2mg)。
MS m/z(ESI):863.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.99(s,1H),9.05-8.96(m,1H),8.52(s,1H),8.46-8.26(m,1H),8.13(d,J＝8.4Hz,1H),7.55-7.22(m,5H),7.06-6.91(m,2H),6.48(s,2H),6.09(d,J＝2.0Hz,1H),4.96-4.84(m,1H),4.64-4.49(m,1H),4.47-4.35(m,1H),4.27(s,1H),4.22-4.07(m,2H),3.80-3.53(m,4H),3.09-2.94(m,2H),2.48-2.43(m,3H),2.43-2.35(m,2H),2.31-2.21(m,1H),2.17-1.91(m,5H),1.90-1.60(m,5H),1.58(d,J＝13.4Hz,2H),1.47-1.30(m,3H),1.03-0.65(m,6H).
实施例74：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]庚酰胺基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物038)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000258
步骤1：7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]庚酸的合成
将2-[3-氨基-1-(4-哌啶基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(50mg，161.11μmol)和7-溴庚酸(37.05mg，177.22μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(62.47mg，483.32μmol)，反应液于80℃反应4小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，得到产物7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]庚酸(50mg，粗品)。
步骤2：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]庚酰胺基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]庚酸(50mg，114.02μmol)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(55.76mg，125.42μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(44.21mg，342.06μmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(47.69mg，125.42μmol)，反应液于25℃反应2小时，LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Phenomenex C18，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：45％-65％)作为洗脱液)得到产物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[7-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]庚酰胺基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物038)(17.4mg)。
MS m/z(ESI):865.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.99(s,1H),8.98(s,1H),8.51(s,1H),8.38(br d,J＝7.8Hz,1H),8.12(br d,J＝7.0Hz,1H),7.81(br d,J＝9.3Hz,1H),7.45-7.41(m,2H),7.39-7.32(m,3H),7.03-6.95(m,2H),6.46(s,2H),5.11(d,J＝3.5Hz,1H),4.99-4.85(m,1H),4.52(br d,J＝9.3Hz,2H),4.42(t,J＝8.0Hz,1H),4.32-4.23(m,1H),3.64-3.56(m,2H),3.32(br s,2H),2.98(br d,J＝5.0Hz,2H),2.45(s,3H),2.34-2.26(m,3H),2.07(br s,4H),1.86-1.75(m,3H),1.51-1.40(m,4H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.27(br s,4H),0.94(s,9H).
实施例75：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[13-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十三酰胺基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物039)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000259
步骤1：13-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十三烷酸的合成
将2-[3-氨基-1-(4-哌啶基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(50mg，161.11μmol)和12-溴十三烷酸(51.97mg，177.22μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(62.47mg，483.32μmol)，反应液于80℃反应2小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，得到产物13-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十三烷酸(59mg，粗品)。
MS m/z(ESI):523.3[M+H] +；
步骤2：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[13-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十三酰胺基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将13-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十三烷酸(59mg，112.88μmol)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(55.20mg,124.17μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(43.77mg，338.64μmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(47.21mg,124.17μmol)，反应液于25℃反应2小时，LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Phenomenex C18，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：65％-85％)作为洗脱液)得到产物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[13-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十三酰胺基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物039)(7.6mg)。
MS m/z(ESI):949.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.06-13.86(m,1H),9.05-8.92(m,1H),8.50(s,1H),8.37(br d,J＝7.8Hz,1H),8.20-8.04(m,1H),7.78(br d,J＝9.3Hz,1H),7.48-7.26(m,5H),7.08-6.89(m,2H),6.45(s,2H),5.10(d,J＝3.1Hz,1H),4.92-4.90(m,1H),4.51(br d,J＝9.3Hz,2H),4.41(t,J＝7.9Hz,1H),4.33-4.23(m,1H),3.66-3.54(m,2H),3.04-2.92(m,2H),2.45(s,3H),2.36-2.19(m,4H),2.13-1.98(m,6H),1.86-1.74(m,3H),1.57-1.39(m,5H),1.37(br d,J＝7.0Hz,3H),1.24(br s,14H),0.93(s,9H).
实施例76：(2S,4R)-1-[2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物040)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000260
步骤1：2-[3-(3-溴丙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(100mg，502.00μmol)和3-溴丙醇(76.75mg，552.20μmol)溶于甲苯(2mL)中，在0℃下加入三苯基膦(197.50mg，753.00μmol)。将偶氮二甲酸二异丙酯(152.26mg，753.00μmol)溶于甲苯(0.5mL)，在0℃加入至氮气保护下的反应液中。反应液在氮气保护下于100℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩至干，然后经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝3/1)得到2-[3-(3-溴丙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(160mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝6.21(s,1H),4.26(t,J＝6.1Hz,2H),3.713.65(m,4H),3.63(t,J＝6.6Hz,2H),2.33-2.19(m,3H),0.93(d,J＝6.8Hz,3H),0.85(d,J＝6.8Hz,3H).
步骤2：2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-[3-(3-溴丙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(60mg，187.40μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，加入2-[3-氨基-1-(4-哌啶基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(58.16mg，187.40μmol)和N,N-二异丙基乙胺(72.66mg，562.19μmol)。反应液在80℃搅拌反应4小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入饱和食盐水(6mL)并用乙酸乙酯(2mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干。然后经薄层色谱(石油醚/四氢呋喃＝1/1)纯化得到2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(32mg)。
MS m/z(ESI):550.5[M+H] +.
步骤3：2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(32mg，58.22μmol)溶于四氢呋喃(200μL)和水(200μL)。加入一水合氢氧化锂(7.33mg,174.67μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。用1.5M盐酸调节pH至3至4，反应液减压浓缩至干，得到2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(30mg)。
MS m/z(ESI):536.5[M+H] +.
步骤4：(2S,4R)-1-[2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(30mg，56.01μmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(18.56mg，56.01μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(21.72mg，168.04μmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(25.56mg，67.22μmol)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：30％-50％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物040)(1.2mg)。
MS m/z(ESI):850.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.88-13.59(m,1H),9.07-8.93(m,1H),8.51(s,2H),8.08(br d,J＝6.9Hz,1H),7.47-7.31(m,5H),7.05-6.96(m,2H),6.54(br s,2H),6.14-6.10(m,1H),5.19(s,1H),4.95-4.73(m,2H),4.48-4.33(m,1H),4.26(br d,J＝6.0Hz,3H),3.81-3.54(m,3H),3.50-3.38(m,3H),2.45(d,J＝4.1Hz,3H),2.40-2.34(m,2H),2.30-1.89(m,9H),1.83-1.69(m,1H),1.37(t,J＝7.1Hz,3H),0.97(dd,J＝2.8,6.5Hz,3H),0.85-0.78(m,3H).
实施例77：化合物041的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000261
步骤1：中间体11-1的合成
将中间体9(60mg,97.60μmol)溶于四氢呋喃(1.3mL)中，加入1.5M盐酸(1.3mL)。混合物在65℃下搅拌2小时。LCMS检测反应完毕。向反应液中加入饱和碳酸钠调节pH至8至9，然后加入饱和食盐水(2mL)，并用乙酸乙酯(2mL)萃取三次，有机相用水(2mL)洗涤三次后，有机相用无水硫酸钠干燥，有机相减压浓缩至干得标题化合物中间体11-1。
MS m/z(ESI):541.3[M+H] +.
步骤2：化合物041的合成
将中间体11-1(50mg，92.48μmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(31.57mg，101.73μmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入一滴醋酸和三乙酰氧基硼氢化钠(58.80mg，277.45μmol)。混合物在25℃下搅拌2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱(YMC-Pack CN柱：5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：40％-60％)作为洗脱液)纯化得到标题化合物即化合物041(12.4mg)。
MS m/z(ESI):835.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.09-13.83(m,1H),9.03-8.83(m,1H),8.58-8.43(m,1H),8.33(br d,J＝7.9Hz,1H),8.20-8.05(m,1H),7.51-7.26(m,5H),7.05-6.93(m,2H),6.51-6.36(m,2H),6.19-6.05(m,1H),5.17-5.01(m,1H),5.00-4.84(m,1H),4.63-4.48(m,1H),4.46-4.37(m,1H),4.32-4.19(m,3H),3.76(d,J＝8.6Hz,1H),3.60-3.42(m,2H),3.11-2.98(m,2H),2.79-2.65(m,2H),2.44(s,3H),2.32-2.20(m,3H),2.14-1.99(m,3H),1.93-1.72(m,3H),1.54-1.40(m,1H),1.35(d,J＝6.9Hz,2H),1.00-0.74(m,6H).
实施例78：(2S,4R)-1-[2-[3-[5-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]戊氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物042)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000262
步骤1：2-[3-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(300mg，1.51mmol)和2-(4-氯丁基)-1,3-二氧戊环(297.52mg，1.81mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中，加入碳酸钾(624.41mg，4.52mmol)。反应液于80℃搅拌反应2小时。薄层层析(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)检测反应完毕。向反应液中加入水(6mL)并用乙酸乙酯(6mL)萃取三次，有机相用饱和食盐水(6mL)萃洗三次，并用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩至干，然后经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到2-[3-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(273mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝6.19(s,1H),4.77(t,J＝4.7Hz,1H),4.14(t,J＝6.4Hz,2H),3.89-3.81(m,2H),3.80-3.70(m,2H),3.67-3.65(m,3H),3.31(s,1H),2.34-2.23(m,1H),1.78-1.68(m,2H),1.64-1.55(m,2H),1.50-1.40(m,2H),0.92(d,J＝6.6Hz,3H),0.84(d,J＝6.6Hz,3H).
步骤2：2-[3-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(173mg，528.45μmol)溶于四氢呋喃(1mL)和水(1mL)。加入一水合氢氧化锂(66.53mg，1.59mmol)。反应液在25℃搅拌反应1小时。LCMS监测反应完全。用1.5M盐酸调解pH至5-6，向反应液中加入水(2mL)并用乙酸乙酯(2mL)萃取三次，有机相用饱和食盐水(2mL)萃洗三次，有机相用无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干，得到2-[3-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(148mg)。
MS m/z(ESI):314.2[M+H] +.
步骤3：(2S,4R)-1-[2-[3-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4- 甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(148mg，472.32μmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(156.54mg，472.32μmol)溶于二氯甲烷(4mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(183.13mg，1.42mmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(215.51mg，566.7μmol)。反应液于25℃搅拌1小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(4mL)并用乙酸乙酯(4mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干。经柱层析色谱(石油醚/四氢呋喃＝1/2)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(150mg)。
MS m/z(ESI):627.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.04-8.88(m,1H),8.46-8.20(m,1H),7.44-7.32(m,3H),6.89-6.59(m,1H),6.17-6.03(m,1H),5.10(t,J＝3.8Hz,1H),4.98-4.86(m,1H),4.76(td,J＝4.8,9.9Hz,1H),4.55-4.32(m,1H),4.31-4.21(m,1H),4.16-4.04(m,2H),3.90-3.81(m,2H),3.77-3.61(m,3H),3.63-3.36(m,2H),2.46-2.43(m,3H),2.30-2.20(m,1H),2.18(s,1H),2.08-1.98(m,1H),1.82-1.65(m,3H),1.64-1.53(m,2H),1.48-1.37(m,4H),0.96(dd,J＝3.4,6.4Hz,3H),0.81(dd,J＝13.3,6.8Hz,3H).
步骤4：(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(5-氧代戊氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-[2-[3-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)丁氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(30mg，47.87μmol)溶于四氢呋喃(638.20μL)，加入1.5M盐酸(638.20μL)。反应液于65℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干得(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(5-氧代戊氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(24mg)。
MS m/z(ESI):583.3[M+H] +.
步骤5：(2S,4R)-1-[2-[3-[5-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]戊氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(5-氧代戊氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(24mg，41.19μmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(12.78mg，41.19μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙酸(2.47mg，41.19μmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(26.19mg，123.56μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：55％-75％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-[5-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]戊氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物042)(4.7mg)。
MS m/z(ESI):878.3[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.07-13.87(m,1H),9.01-8.78(m,1H),8.51(s,1H),8.43-8.26(m,1H),8.20-8.06(m,1H),7.52-7.26(m,5H),7.05-6.92(m,2H),6.45(s,2H),6.13-5.88(m,1H),5.14-4.97(m,1H),4.95-4.84(m,1H),4.62-4.47(m,1H),4.39(td,J＝7.8,18.3Hz,1H),4.27(br d,J＝1.5Hz,1H),4.20-4.08(m,2H),3.79-3.59(m,1H),3.59-3.39(m,2H),2.99(br s,2H),2.47-2.44(m,3H),2.39-2.26(m,3H),2.15-1.99(m,5H),1.87-1.67(m,5H),1.53-1.30(m,7H),0.96(br dd,J＝3.3,6.3Hz,3H),0.86-0.73(m,3H).
实施例79：(2S,4R)-1-[2-[3-[6-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物043)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000263
步骤1：2-[3-(6-溴己氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(300mg,1.51mmol)、6-溴-1-己醇(299.96mg，1.66mmol)和三苯基膦(592.50mg，2.26mmol)溶于无水甲苯(4mL)中，在氮气氛围下0℃加入偶氮二甲酸二异丙酯(456.79mg，2.26mmol)。反应液在100℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液用减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝5：1)得到2-[3-(6-溴己氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(240mg)。
MS m/z(ESI):362.0,363.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝6.18(s,1H),4.14(t,J＝6.5Hz,2H),3.68(s,1H),3.66(s,3H),3.53(t,J＝6.7Hz,2H),2.39-2.21(m,1H),1.83-1.82(m,2H),1.73-1.70(m,2H),1.49-1.33(m,4H),0.93(d,J＝6.6Hz,3H),0.84(d,J＝6.7Hz,3H).
步骤2：2-[3-[6-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯的合成
将2-[3-(6-溴己氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(100mg，276.05μmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(85.67mg，276.05μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(107.03mg，828.14μmol，144.25μL)。反应液在80℃搅拌反应4小时。LCMS检测反应完毕。反应液用乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)萃取，有机相减压浓缩至干，经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到2-[3-[6-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(110mg)。
MS m/z(ESI):592.2[M+H] +.
步骤3：2-[3-[6-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-[6-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(110mg，185.91μmol)溶于无水四氢呋喃(1mL)和水(1mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(23.40mg，557.72μmol)。反应液在25℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完毕。反应液浓缩至干，加入水(2mL)溶解，用1M的HCl调节pH值为3～4后减压浓缩至干得2-[3-[6-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(180mg)。
MS m/z(ESI):578.2[M+H] +.
步骤4：(2S,4R)-1-[2-[3-[6-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-[6-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(160mg，138.49μmol，50％)、(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(45.90mg，138.49μmol)、O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(63.19mg，166.18μmol)和N,N-二异丙基乙胺(53.70mg，415.46μmol，72.37μL)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，反应液在25℃搅拌反应2小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(KromasilEternity XT柱，10μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：32％-82％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-[6-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物043)(14.8mg)。
MS m/z(ESI):891.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.03-8.94(m,1H),8.51(s,1H),8.48-8.30(m,1H),8.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.54-7.27(m,5H),7.07-6.90(m,2H),6.47(s,2H),6.08(s,1H),4.95-4.83(m,1H),4.53(d,J＝6.0Hz,1H),4.46-4.33(m,1H),4.27(br s,1H),4.20-4.06(m,2H),3.80-3.61(m,2H),3.59-3.53(m,1H),2.98(br s,2H),2.47-2.43(m,3H),2.35-2.26(m,3H),2.06(br s,5H),1.88-1.61(m,5H),1.52-1.23(m,10H),1.01-0.90(m,3H),0.81(dd,J＝6.7,13.4Hz,3H).
实施例80：(2S,4R)-1-[(R)-2-[3-[10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和(2S,4R)-1-[(S)-2-[3-[10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000264
步骤1：2-[3-(10-溴癸氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(300mg，1.51mmol)和10-溴癸烷-1-醇(392.91mg，1.66mmol)溶于甲苯(10mL)中，加入偶氮二甲酸二异丙酯(456.79mg，2.26mmol)和三苯基膦(592.50mg，2.26mmol)。将反应液氮气置换三次后，反应液于100℃搅拌反应2小时。经LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到20/1)得到2-[3-(10-溴癸氧基)异 噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(260mg)。
MS m/z(ESI):418.2,420.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ6.00(s,1H),4.18(t,J＝6.5Hz,2H),3.72(s,3H),3.57(d,J＝8.8Hz,1H),3.44(t,J＝6.8Hz,2H),2.35(qd,J＝6.8,15.5Hz,1H),1.89-1.71(m,4H),1.49-1.32(m,12H),1.00(d,J＝6.8Hz,3H),0.91(d,J＝6.8Hz,3H).
步骤2：2-[3-[10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-[3-(10-溴癸氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(100mg，239.03μmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(74.18mg，239.03μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(92.68mg，717.08μmol)。反应液于80℃搅拌反应16小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干，然后经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到0/1)得到2-[3-[10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(110mg)。
MS m/z(ESI):648.9[M+H] +.
步骤3：2-[3-[10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-[10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(110mg，169.80μmol)溶于四氢呋喃(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化钠(20.38mg，509.41μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入稀盐酸调节pH＝3-4。将反应液减压浓缩至干得粗品2-[3-[10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(124mg)。
MS m/z(ESI):634.8[M+H] +.
步骤4：(2S,4R)-1-[(R)-2-[3-[10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和(2S,4R)-1-[(S)-2-[3-[10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-[10-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]癸氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(104mg，164.10μmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(38.07mg，114.87μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(74.87mg，196.91μmol)和N,N-二异丙基乙胺(63.62mg，492.29μmol)。反应液于25℃下搅拌1小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(0.1mL)淬灭反应。经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；(使用水(0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：28％-68％)作为洗脱液)得到标题产物P1(8.3mg，化合物044，LCMS保留时间为3.928分钟)和标题产物P2(7.96mg，化合物044-1，LCMS保留时间为3.961分钟)。
化合物044：
MS m/z(ESI):947.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.77(s,1H),9.01-8.97(m,1H),8.44(s,1H),8.43-8.29(m,1H),8.06(d,J＝8.1Hz,1H),7.50-7.28(m,6H),7.00(d,J＝8.2Hz,2H),6.51(s,2H),6.06(s,1H),5.11(s,1H),4.94-4.84(m,1H),4.71(s,1H),4.46-4.33(m,1H),4.27(s,1H),4.15-4.08(m,2H),2.45(s,3H),2.30-1.92(m,10H),1.82-1.51(m,7H),1.37-1.25(m,17H),0.96(d,J＝6.6Hz,3H),0.82(d,J＝6.7Hz,3H).
化合物044-1：
MS m/z(ESI):947.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.15(s,1H),8.99(s,1H),8.49-8.38(m,2H),7.91(s,1H),7.56-7.33(m,6H),7.27-7.18(m,1H),7.08-7.03(m,2H),6.99-6.93(m,1H),6.07(s,1H),4.96-4.82(m,2H),4.36(t,J＝7.9Hz,1H),4.28(s,1H),4.13(t,J＝6.3Hz,2H),3.73-3.62(m,3H),3.18-2.95(m,4H),2.45(s,3H),2.31-1.96(m,6H),1.70(d,J＝6.2Hz,4H),1.43-1.18(m,18H),0.95(d,J＝6.5Hz,3H),0.79(d,J＝6.6Hz,3H).
实施例81：(2S,4R)-1-[(R)-2-[3-[11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一烷氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和(2S,4R)-1-[(S)-2-[3-[11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一烷氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000265
步骤1：2-[3-(11-溴十一烷氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(300mg，1.51mmol)和11-溴十一烷-1-醇(416.14mg，1.66mmol)溶于甲苯(10mL)中，加入偶氮二甲酸二异丙酯(456.79mg，2.26mmol)和三苯基膦(592.50mg，2.26mmol)。反应液于100℃搅拌反应16小时。经LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(15mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，有机相用水(30mL)洗涤三次并用无水硫酸钠干燥后过滤减压浓缩至干。经柱层析(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到3/1)纯化得到2-[3-(11-溴十一烷氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(500mg)。
MS m/z(ESI):432.3,434.3[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ6.00(s,1H),4.17(t,J＝6.5Hz,2H),3.72(s,3H),3.57(d,J＝8.8Hz,1H),3.44(t,J＝6.8Hz,2H),2.41-2.28(m,1H),1.88-1.72(m,4H),1.47-1.30(m,14H),1.00(d,J＝6.8Hz,3H),0.91(d,J＝6.8Hz,3H).
步骤2：2-[3-[11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一烷氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-[3-(11-溴十一烷氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(100mg，231.27μmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(71.78mg，231.27μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(89.67mg，693.82μmol)。反应液于80℃搅拌反应4小时。LCMS监测反应完全。 向反应液中加入水(1mL)淬灭反应，将反应液减压浓缩至干，然后经柱层析(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到1/2)纯化得到2-[3-[11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一烷氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(200mg)。
MS m/z(ESI):662.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.27(s,1H),8.01(dd,J＝1.5,8.3Hz,1H),7.38-7.31(m,1H),7.03-6.97(m,2H),6.00(s,1H),4.53(s,1H),4.18(t,J＝6.5Hz,2H),3.71(s,3H),3.56(d,J＝8.8Hz,1H),3.19(s,2H),2.55-2.47(m,2H),2.42-2.29(m,5H),1.99(s,2H),1.82-1.71(m,2H),1.60(s,2H),1.35(s,14H),0.99(d,J＝6.7Hz,3H),0.90(d,J＝6.7Hz,3H).
步骤3：2-[3-[11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一烷氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-[11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一烷氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(100mg，151.10μmol)溶于四氢呋喃(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化钠(18.13mg，453.29μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入稀盐酸调节pH＝3～4。将反应液减压浓缩至干得粗品2-[3-[11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一烷氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(126mg)。
MS m/z(ESI):648.6[M+H] +.
步骤4：(2S,4R)-1-[(R)-2-[3-[11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一烷氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和(2S,4R)-1-[(S)-2-[3-[11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一烷氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-[11-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]十一烷氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(120mg，185.24μmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(61.39mg，185.24μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(84.52mg，222.29μmol)和N,N-二异丙基乙胺(71.82mg，555.72μmol)。反应液于25℃下搅拌16小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(0.5mL)淬灭反应。经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：30％-70％)作为洗脱液)纯化得到标题产物P1(5.8mg，化合物045，LCMS保留时间为4.740分钟)和标题产物P2(4.4mg，化合物045-1，LCMS保留时间为4.754分钟)。
化合物045：
MS m/z(ESI):962.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.77(s,1H),9.01-8.94(m,1H),8.44(s,1H),8.42-8.25(m,1H),8.06(d,J＝8.1Hz,1H),7.50-7.26(m,6H),7.03-6.98(m,2H),6.49(s,2H),6.06(s,1H),5.11(s,1H),4.93-4.82(m,1H),4.69(s,1H),4.39(td,J＝7.7,19.9Hz,1H),4.27(s,1H),4.15-4.09(m,2H),3.77-3.60(m,2H),2.45(d,J＝1.8Hz,3H),2.31-2.13(m,4H),2.10-1.89(m,4H),1.85-1.51(m,6H),1.38-1.24(m,20H),1.03-0.92(m,3H),0.91-0.80(m,3H).
化合物045-1：
MS m/z(ESI):962.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.17(s,1H),8.99(s,1H),8.40(s,1H),7.91(d,J＝5.5Hz,1H),7.50-7.33(m,6H),7.20(s,1H),7.07(s,1H),7.05(d,J＝6.6Hz,2H),6.94(s,1H),6.06(s,1H),4.94-4.83(m,2H),4.36(t,J＝7.6Hz,1H),4.28(s,1H),4.13(t,J＝6.4Hz,2H),3.77-3.66(m,4H),3.64(d,J＝9.8Hz,2H),3.05(d,J＝10.0Hz,2H),2.45(s,3H),2.14(d,J＝11.5Hz,4H),1.69(d,J＝6.3Hz,3H),1.39-1.25(m,22H),0.95(d,J＝6.4Hz,3H),0.79(d,J＝6.6Hz,3H).
实施例82：(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-2-氧代乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物046)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000266
步骤1：2-[3-(2-叔丁氧基-2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(200mg，1.00mmol)，溴乙酸叔丁酯(235.00mg，1.20mmol，178.03μL)和碳酸钾(416.28mg，3.01mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中。黑色反应液在80℃搅拌反应4小时。经薄层色谱(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)检测反应完毕。反应液用乙酸乙酯(40mL)和水(10mL)萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝3：1)得到2-[3-(2-叔丁氧基-2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(150mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ6.28(s,1H),4.73(s,2H),3.77-3.61(m,4H),2.39-2.21(m,1H),1.41(s,9H),0.93(d,J＝6.7Hz,3H),0.85(d,J＝6.7Hz,3H).
步骤2：2-[5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基]氧乙酸的合成
将2-[3-(2-叔丁氧基-2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(140mg，446.79μmol)溶于二氯甲烷(4mL)和三氟乙酸(2mL)中。反应液在25℃搅拌反应4小时。薄层色谱(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝3:1)监测反应完成。反应液浓缩至干得2-[5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基]氧乙酸(160mg)。
步骤3：2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-2-氧代乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-[5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基]氧乙酸(160mg，621.99μmol)、2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(193.04mg，621.99μmol)、O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(260.15mg，684.19μmol)和N,N-二异丙基乙胺(241.16mg，1.87mmol，325.02μL)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中。反应液在25℃搅拌反应4小时。LCMS检测反应完毕。反应液加入水(5mL)和乙酸乙酯(40mL)萃取，有机相减压浓缩干，经薄层色谱(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1:2)纯化得到2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-2-氧代乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(200mg)。
MS m/z(ESI):550.1[M+H] +.
步骤4：2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-2-氧代乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-2-氧代乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(100mg，181.96μmol)溶于无水甲醇(2mL)中，加入氢氧化钠溶液(4M，181.96μL)。 反应液在25℃搅拌反应4小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：16％-56％)作为洗脱液)纯化得到2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-2-氧代乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(20mg)。
MS m/z(ESI):536.1[M+H] +.
步骤5：(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-2-氧代乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-2-氧代乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(20mg，37.34μmol)、(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(14.85mg，44.81μmol)、O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(17.04mg,44.81μmol)和二异丙基乙胺(14.48mg,112.03μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，反应液在25℃搅拌反应2小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：18％-58％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-2-氧代乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物046)(13.75mg)。
MS m/z(ESI):849.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.05-8.93(m,1H),8.56-8.36(m,2H),8.00(s,1H),7.56-7.27(m,5H),7.13-6.93(m,2H),6.68(s,1H),6.18(d,J＝1.9Hz,1H),5.18-5.00(m,2H),4.96-4.78(m,2H),4.52(d,J＝11.9Hz,1H),4.47-4.36(m,1H),4.29(s,1H),3.90(s,1H),3.81-3.64(m,2H),3.62-3.41(m,4H),2.88-2.76(m,1H),2.46(t,J＝4.1Hz,4H),2.25(d,J＝5.9Hz,1H),2.10-1.85(m,5H),1.51-1.31(m,3H),1.03-0.74(m,6H).
实施例83：化合物047的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000267
将2-[3-(甲氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(30mg，55.49μmol)和中间体11(30mg，55.49μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和无水四氢呋喃(0.5mL)中，加入醋酸(3.17μL，55.49μmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(35.28mg，166.47μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱纯化(Boston Prime C18柱：5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.025％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：45％-65％)作为洗脱液)得到标题化合物即化合物047(6.8mg)。
MS m/z(ESI):849.3[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.98(br s,1H),8.98(s,1H),8.49(s,1H),8.43(d,J＝7.5Hz,1H),8.12(d,J＝7.8Hz,1H),7.49-7.41(m,2H),7.40-7.32(m,3H),7.08(d,J＝4.3Hz,1H),7.04-6.95(m,2H),6.13(s,1H),5.12(d,J＝3.5Hz,1H),4.97-4.85(m,1H),4.58(br s,1H),4.37(t,J＝7.9Hz,1H),4.29(br s,3H),3.78-3.62(m,2H),3.46(d,J＝10.8Hz,1H),3.08(br s,2H),2.96(d,J＝4.8Hz,3H),2.78(br s,2H),2.45(s,3H),2.31-2.08(m,5H),2.08-1.99(m,1H),1.90-1.73(m,3H),1.50-1.34(m,3H),1.01-0.93(m,3H),0.87-0.77(m,3H).
实施例84：化合物048的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000268
将中间体11(49.76mg，92.04μmol)和2-[3-氨基-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(50mg，101.24μmol)溶于四氢呋喃(200μL)和N,N-二甲基甲酰胺(200μL)中，加入醋酸(5.53mg，92.04μmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(58.52mg，276.11μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：30％-50％)作为洗脱液)纯化得到化合物048(7.5mg)。
MS m/z(ESI):821.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.95-13.75(m,1H),8.99(s,1H),8.53(s,1H),8.43(d,J＝7.6Hz,1H),8.06(dd,J＝1.4,8.3Hz,1H),7.46-7.42(m,2H),7.38-7.34(m,3H),7.03-6.96(m,2H),6.56(br s,2H),6.09(d,J＝2.4Hz,1H),5.34(br d,J＝4.5Hz,1H),5.12(d,J＝2.6Hz,1H),4.94-4.86(m,1H),4.39-4.26(m,4H),3.73-3.61(m,2H),3.45(br d,J＝9.5Hz,2H),3.01-2.76(m,4H),2.45(s,3H),2.31-2.09(m,4H),2.06-1.99(m,1H),1.77(ddd,J＝4.6,8.1,12.7Hz,1H),1.37(dd,J＝2.0,7.0Hz,3H),0.95(d,J＝6.5Hz,3H),0.78(d,J＝6.6Hz,3H).
实施例85：(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物049)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000269
步骤1：(R,E)-N-(4-溴-2-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的合成
将2-氟-4-溴苯甲醛(10g，49.26mmol)和(R)-(+)-2-甲基-2-丙亚磺酰胺(5.43g，44.78mmol)溶于二氯甲烷(200mL)中，加入吡啶对甲苯磺酸盐(562.68mg，2.24mmol)和硫酸镁(53.90g，447.81mmol)。反应液在25℃反应16小时，再加入硫酸镁(26.95g，223.90mmol)，反应液在25℃反应24小时，薄层层析(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)检测反应完毕。反应液过滤，滤液浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化得到(R,E)-N-(4-溴-2-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(4.9g)。
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝8.79(s,1H),7.96(t,J＝8.0Hz,1H),7.60-7.53(m,2H),1.29(s,9H).步骤2：(R)-N-[(S)-1-(4-溴-2-氟苯基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的合成
将(R,E)-N-(4-溴-2-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(4.9g，16.00mmol)溶于二氯甲烷(60mL)中，降温至-45℃，在氮气保护下加入甲基氯化镁(8mL，3M)。反应液在-45℃反应1小时，再加入甲基氯化镁(2.67mL，3M)，反应液在-45℃反应5小时，LCMS检测反应完毕。反应升温至0℃，用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭，加水(50mL)稀释，用二氯甲烷(30mL)萃取三次，合并有机相，干燥，浓缩得到(R)-N-[(S)-1-(4-溴-2-氟苯基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(4.8g)。
MS m/z(ESI):322.0,324.0[M+H] +.
步骤3：(S)-1-(4-溴-2-氟苯基)乙胺的合成
将(R)-N-[(S)-1-(4-溴-2-氟苯基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(4.8g，14.90mmol)溶于甲醇(50mL)中，加入盐酸二氧六环(7.45mL，4M)。反应液在25℃反应4小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，加入四氢呋喃(10mL)，在25℃搅拌30分钟，过滤，滤饼在真空中除去溶剂得到(S)-1-(4-溴-2-氟苯基)乙胺(3.3g，HCl盐)。
MS m/z(ESI):219.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.84(br s,3H),7.71(t,J＝8.3Hz,1H),7.64(dd,J＝1.9,10.0Hz,1H),7.54(dd,J＝1.8,8.4Hz,1H),4.56(br d,J＝6.3Hz,1H),1.52(d,J＝6.9Hz,3H).
步骤4：(2S,4R)-2-[[(S)-1-(4-溴-2-氟苯基)乙基]氨基甲酰基]-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将(S)-1-(4-溴-2-氟苯基)乙胺(3.1g，12.18mmol)和Boc-L-羟脯氨酸(3.10g，13.40mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(5.09g，13.40mmol)和N,N-二异丙基乙胺(4.72g，36.54mmol)。反应液在25℃反应4小时，LCMS检测反应完毕。反应液加水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合并有机相，干燥，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/1)纯化得到(2S,4R)-2-[[(S)-1-(4-溴-2-氟苯基)乙基]氨基甲酰基]-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(4g)。
MS m/z(ESI):432.8[M+H] +.
步骤5：(2S,4R)-2-[[(S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将(2S,4R)-2-[[(S)-1-(4-溴-2-氟苯基)乙基]氨基甲酰基]-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(210mg，486.91μmol)和4-甲基噻唑-5-硼酸频哪醇酯(164.41mg，730.36μmol)溶于二氧六环(4mL)和水(1mL)中，加入1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(35.63mg，48.69μmol)和磷酸钾(206.71mg，973.81μmol)。反应液在氮气保护下80℃反应12小时，LCMS检测反应完毕。反应液冷却至室温，过滤，滤液加水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合并有机相，干燥，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/2)纯化得到(2S,4R)-2-[[(S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(150mg)。
MS m/z(ESI):450.3[M+H] +.
步骤6：(2S,4R)-N-[(S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-2-[[(S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(150mg，333.68μmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入盐酸二氧六环(834.19μL，4M)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩得到(2S,4R)-N-[(S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(150mg)。
MS m/z(ESI):350.0[M+H] +.
步骤7：(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-N-[(1S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-N-[(S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(150mg，388.72μmol)和2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸(117.13mg，388.72μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(162.58mg，427.59μmol)和N,N-二异丙基乙胺(150.72mg，1.17mmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应加水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合并有机相，干燥，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/1)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-N-[(1S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(160mg)。
MS m/z(ESI):633.4[M+H] +.
步骤8：(2S,4R)-N-[(1S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-N-[(1S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(140mg，221.26μmol)溶于四氢呋喃(3mL)中，加入1M硫酸(0.2mL)。反应液在70℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液用饱和碳酸钠调节pH至7-8，加水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相，干燥，浓缩得到(2S,4R)-N-[(1S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(130mg)。
MS m/z(ESI):559.1[M+H] +.
步骤9：(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-N-[(1S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(40mg，71.60μmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(22.22mg，71.60μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入氰基硼氢化钠(22.50mg，358.02μmol)和乙酸(4.30mg，71.60μmol)。反应液在25℃反应5小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经制备液相色谱(column:Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：22％-62％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物049)(13.20mg)。
MS m/z(ESI):853.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.98(br s,1H),9.02(d,J＝5.5Hz,1H),8.58-8.41(m,2H),8.13(br d,J＝8.4Hz,1H),7.45-7.26(m,4H),6.99(br d,J＝7.9Hz,2H),6.45(br s,2H),6.12(d,J＝4.6Hz,1H),5.18-4.97(m,2H),4.61-4.51(m,1H),4.48-4.36(m,1H),4.29(br d,J＝5.6Hz,3H),3.79-3.64(m,1H),3.61-3.44(m,2H),3.07(br d,J＝11.1Hz,2H),2.83-2.74(m,2H),2.48-2.45(m,3H),2.32-2.21(m,3H),2.14-2.01(m,3H),1.89-1.72(m,3H),1.49-1.35(m,3H),1.01-0.80(m,6H).
实施例86：(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物050)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000270
步骤1：(S)-[1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯的合成
将(S)-[1-(5-溴吡啶-2-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(450mg，1.49mmol)和4-甲基噻唑(296.30mg，2.99mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入醋酸钯(16.77mg，74.71μmol)和醋酸钾(293.27mg，2.99mmol)。反应液在氮气保护下90℃反应16小时，LCMS检测反应完毕。反应液冷却至室温，过滤，滤液浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到(S)-[1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]氨基甲酯叔丁酯(430mg)。
MS m/z(ESI):320.1[M+H] +.
步骤2：(S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙胺的合成
将(S)-[1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]氨基甲酯叔丁酯(430mg，1.35mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入盐酸二氧六环(3.37mL，13.46mmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩得到(S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙胺(390mg)。
MS m/z(ESI):220.0[M+H] +.
步骤3：(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]氨甲酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成
将(S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙胺(390mg，1.78mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入(2S,4R)-1-叔丁氧羰基-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(493.48mg，2.13mmol)、O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(1.01g，2.67mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.15g，8.89mmol)。反应液在25℃反应16小时，LCMS检测反应完毕。反应液用蒸馏水(15mL)稀释，乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并有机相，干燥，浓缩,经柱色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/2)纯化得到(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]氨甲酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(510mg)。
步骤4：(2S,4R)-4-羟基-N-[(S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]氨甲酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(510mg，1.18mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入盐酸二氧六环(2.95mL，11.79mmol，4M)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩得到(2S,4R)-4-羟基-N-[(S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(580mg)。
MS m/z(ESI):333.2[M+H] +.
步骤5：(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(81.69mg，271.09μmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(100mg，271.09μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(113.38mg，298.20μmol)和N,N-二异丙基乙胺(105.11mg，813.27μmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液加水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合并有机相，干燥，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/2)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(90mg)。
MS m/z(ESI):616.5[M+H] +.
步骤6：(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(90mg，146.17μmol)溶于四氢呋喃(2mL)中，加入1M硫酸(176.33mg，1.80mmol)。反应液在70℃反应5小时，LCMS检测反应完毕。反应液用碳酸钠调节pH至7-8，干燥，过滤，滤液浓缩得到(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(75mg)。
MS m/z(ESI):560.1[M+NH 4] +.
步骤7：(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(40mg，73.85μmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(22.92mg，73.85μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入乙酸(443.50μg，7.39μmol)和氰基硼氢化钠(23.21mg，369.26μmol)。反应液在25℃反应4小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经制备液相色谱(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：6％-46％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基 -N-[(1S)-1-[5-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物050)(4.23mg)。
MS m/z(ESI):836.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.05(br s,1H),9.15-9.10(m,1H),8.74-8.63(m,1H),8.58-8.38(m,2H),8.17(br d,J＝8.3Hz,1H),8.01-7.88(m,1H),7.47-7.36(m,2H),7.07-7.01(m,2H),6.51(br s,2H),6.18(d,J＝1.9Hz,1H),5.23-4.92(m,2H),4.66-4.57(m,1H),4.54-4.43(m,1H),4.37-4.28(m,3H),3.84-3.71(m,1H),3.65-3.49(m,2H),3.11(br d,J＝11.5Hz,2H),2.87-2.76(m,2H),2.51(d,J＝4.8Hz,3H),2.31(br d,J＝13.4Hz,3H),2.18-2.05(m,3H),1.89(br d,J＝8.4Hz,3H),1.46(dd,J＝7.1,9.4Hz,3H),1.01(t,J＝6.8Hz,3H),0.87(dd,J＝6.7,13.7Hz,3H).
实施例87：(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物051)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000271
步骤1：(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(100mg，331.86μmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(110.32mg，331.86μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(151.42mg，398.23μmol)和N,N-二异丙基乙胺(128.67mg，995.57μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液过滤减压浓缩至干，然后经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到0/1)得到(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(110mg)。
MS m/z(ESI):616.5[M+H] +.
步骤2：(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(50mg，81.20μmol)溶于四氢呋喃(1mL)中，加入1M硫酸(1M，974.44μL)。反应液于70℃搅拌反应1小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入碳酸氢钠调节pH＝7-8，然后将反应液减压浓缩至干得粗品(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(62mg)。
MS m/z(ESI):542.3[M+H] +.
步骤3：(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]异噁唑 -5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(57mg，105.24μmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(26.13mg，84.19μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和四氢呋喃(1mL)中，加入醋酸硼氢化钠(66.91mg，315.72μmol)和乙酸(631.99μg，10.52μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干，经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：21％-61％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)吡啶-3-基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物051)(11.83mg)。
MS m/z(ESI):836.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.98(s,1H),9.04-8.97(m,1H),8.62-8.36(m,3H),8.13(d,J＝8.4Hz,1H),7.82-7.65(m,2H),7.37(t,J＝6.9Hz,1H),7.04-6.95(m,2H),6.45(s,2H),6.12(d,J＝5.1Hz,1H),5.12(d,J＝3.4Hz,1H),5.00-4.87(m,1H),4.64-4.49(m,1H),4.33-4.19(m,3H),3.30(s,3H),3.13-2.99(m,2H),2.85-2.73(m,2H),2.70-2.60(m,4H),2.36-2.22(m,3H),2.16-2.00(m,3H),1.89-1.71(m,3H),1.46-1.35(m,3H),0.97(t,J＝5.8Hz,3H),0.83(dd,J＝6.7,13.3Hz,3H).
实施例88：化合物052的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000272
步骤1：中间体7的合成
将按实施例48方法制备的中间体4(300.32mg，630.53μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(244.47mg，1.89mmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(287.69mg，756.63μmol)。反应液于25℃搅拌反应3小时。LCMS监测反应完全。将有机相减压浓缩至干，然后经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到3/2)得到标题中间体7化合物(280mg)。
MS m/z(ESI):617.3[M+H] +.
步骤2：中间体8的合成
将中间体7(50mg，81.07μmol)溶于四氢呋喃(1mL)中，加入稀硫酸(1M，972.88μL)。反应液于70℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入碳酸氢钠调节pH＝7-8，然后用乙酸乙酯(3mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥。将有机相过滤减压浓缩至干得标题中间体8化合物(43mg)。
MS m/z(ESI):543.5[M+H] +.
步骤3：化合物052的合成
将中间体8(38mg，70.03μmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(21.73mg， 70.03μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入醋酸硼氢化钠(44.53mg，210.10μmol)和乙酸(420.54μg，7.00μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干，然后经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：23％-63％)作为洗脱液)纯化得到标题化合物052(2.72mg)。
MS m/z(ESI):837.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ14.01(d,J＝2.3Hz,1H),9.15-9.09(m,1H),8.92(d,J＝11.0Hz,1H),8.63-8.55(m,1H),8.54-8.46(m,1H),8.13(d,J＝8.3Hz,1H),7.42-7.31(m,1H),6.99(d,J＝8.0Hz,2H),6.47(s,2H),6.16-6.08(m,1H),5.20-5.09(m,1H),5.06-4.89(m,1H),4.62-4.34(m,2H),4.33-4.21(m,3H),3.32(s,3H),3.07(d,J＝10.5Hz,2H),2.76(d,J＝18.3Hz,2H),2.72-2.66(m,4H),2.32-2.21(m,3H),2.15-2.00(m,3H),1.83(t,J＝11.8Hz,3H),1.49-1.40(m,3H),1.01-0.92(m,3H),0.83(dd,J＝6.7,13.9Hz,3H).
实施例89：化合物053的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000273
将2-[3-氨基-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(10mg，32.22μmol)和中间体11(17.42mg，32.22μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和四氢呋喃(1mL)中，加入乙酸(5.80mg，96.66μmol)、乙酸钠(5.29mg，64.44μmol)和醋酸硼氢化钠(20.49mg，96.66μmol)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水(0.2mL)淬灭反应。反应液减压浓缩至干，经高效液相色谱法纯化(Boston Green ODS柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：23％-43％)作为洗脱液)得到标题化合物即化合物053(3.7mg)。
MS m/z(ESI):835.7[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ14.03(br s,1H),8.98(s,1H),8.65-8.55(m,1H),8.47-8.37(m,1H),8.19-8.14(m,1H),7.47-7.41(m,2H),7.39-7.31(m,3H),7.07-6.88(m,2H),6.48(s,2H),6.10(d,J＝5.0Hz,1H),5.10(br s,1H),4.94-4.81(m,1H),4.75-4.62(m,1H),4.35(t,J＝7.9Hz,1H),4.27(br d,J＝5.0Hz,3H),3.73-3.60(m,2H),3.08(br d,J＝7.5Hz,2H),2.97(br s,2H),2.77(br s,2H),2.45(s,3H),2.23(m,2H),2.10-1.97(m,2H),1.92-1.63(m,4H),1.43-1.31(m,3H),1.01-0.88(m,3H),0.77(m,3H).
实施例90：化合物054的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000274
将2-[3-氨基-1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(15mg，40.23μmol)和中间体11(21.75mg，40.23μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙 酸(7.25mg，120.69μmol)、乙酸钠(9.90mg，120.69μmol)和醋酸硼氢化钠(25.58mg，120.69μmol)。反应液于25℃反应2小时。经LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水(0.2mL)淬灭反应。反应液减压浓缩至干，经高效液相色谱法纯化(Boston Green ODS柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：23％-43％)作为洗脱液)得到标题化合物即化合物054(5.13mg)。
MS m/z(ESI):861.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ14.06(br s,1H),8.98(s,1H),8.55(s,1H),8.47-8.39(m,1H),8.17-8.14(m,1H),7.47-7.41(m,2H),7.40-7.32(m,3H),7.05-6.94(m,2H),6.47(br d,J＝7.4Hz,2H),6.13(s,1H),5.12(br s,1H),4.97-4.77(m,2H),4.37(m,1H),4.31-4.21(m,3H),3.74-3.63(m,3H),2.86(br t,J＝5.8Hz,2H),2.45(s,3H),2.33-2.14(m,3H),2.09-1.89(m,5H),1.88-1.58(m,5H),1.38(br d,J＝7.0Hz,3H),0.96(br d,J＝6.4Hz,3H),0.85-0.77(m,3H).
实施例91：化合物055的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000275
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(20mg，55.43μmol)和中间体11(23.97mg，44.34μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙酸(3.33mg，55.43μmol)、乙酸钠(9.09mg，110.85μmol)和醋酸硼氢化钠(35.24mg，166.28μmol)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水(0.5mL)淬灭反应。反应液减压浓缩至干，经高效液相色谱法纯化(Boston Green ODS柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：18％-38％)作为洗脱液)得到标题化合物即化合物055(16.4mg)。
MS m/z(ESI):849.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.96(br s,1H),8.98(s,1H),8.49(s,1H),8.41(d,J＝7.8Hz,1H),8.12(dd,J＝1.6,8.4Hz,1H),7.47-7.42(m,2H),7.39-7.33(m,3H),7.02-6.96(m,2H),6.52-6.40(m,2H),6.07(s,1H),5.09(br s,1H),4.94-4.85(m,1H),4.36(t,J＝7.9Hz,1H),4.27(br s,1H),4.19(br t,J＝5.5Hz,2H),4.10(br d,J＝7.0Hz,2H),3.69(br dd,J＝4.4,10.6Hz,1H),3.63(d,J＝9.8Hz,1H),3.55-3.40(m,1H),2.87(d,J＝10.9Hz,2H),2.63(t,J＝5.5Hz,2H),2.45(s,3H),2.30-2.14(m,2H),2.02(m,1H),1.97-1.90(m,2H),1.77(m,1H),1.43(br d,J＝7.3Hz,2H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.31(m,2H),0.98-0.91(m,3H),0.82-0.74(m,3H).
实施例92：(2S,4R)-1-[2-[3-[[1-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丙-2-基]氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物056)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000276
步骤1：2-[3-(2-溴-1-甲基-乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(50mg，251.00μmol)和1-溴-2-丙醇(55.82mg，301.20μmol)溶于甲苯(5mL)中，在氮气环境下加入三苯基磷(98.75mg，376.50μmol)和偶氮二羧酸二异丙酯(76.13mg，376.50μmol)。反应液于100℃反应2小时。经LCMS检测反应完全。将反应液浓缩，浓缩物用二氯甲烷(3mL×3)和水(5mL)萃取,有机相减压浓缩至干。经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝3:1)得到产物2-[3-(2-溴-1-甲基-乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(40mg)。
MS m/z(ESI):319.7,321.7[M+H] +.
步骤2：2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-1-甲基-乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-[3-(2-溴-1-甲基-乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(40mg，124.93μmol)和2-[3-氨基-1-(4-哌啶基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(38.77mg，124.93μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中和N,N-二异丙基乙胺(48.44mg，374.79μmol)，反应液于80℃反应12小时。经LCMS检测反应完毕。反应液用二氯甲烷(15mL×3)和水(3mL)萃取，将有机相减压浓缩至干，经薄层色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝2/3)纯化得到2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-1-甲基-乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(10mg)。
MS m/z(ESI):550.1[M+H] +.
步骤3：2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-1-甲基-乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-1-甲基-乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(10mg，18.19μmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)和水(0.5mL)中，加入一水合氢氧化锂(2.29mg，54.58μmol)，反应液于25℃反应1小时，LCMS显示反应完成。反应液用1M盐酸溶液调节pH值至5～6，然后减压浓缩至干，得到产物2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-1-甲基-乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(10mg)。
MS m/z(ESI):536.4[M+H] +.
步骤4：(2S,4R)-1-[2-[3-[[1-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丙-2-基]氧基] 异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-1-甲基-乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(10mg，18.67μmol)和((2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(8.24mg，22.41μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入三乙胺(7.56mg，74.68μmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(7.10mg，18.67μmol)，反应液于25℃反应1小时。LCMS显示反应完成。往反应液中加入水(0.5mL)淬灭反应。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Boston Green ODS柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量：20％-40％)作为洗脱液)得到(2S,4R)-1-[2-[3-[[1-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]丙-2-基]氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物056)(3.01mg)。
MS m/z(ESI):849.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.87(s,1H),8.24(s,1H),7.99(br d,J＝7.5Hz,1H),7.43(d,J＝4.2Hz,3H),7.36-7.31(m,2H),7.00(br d,J＝8.1Hz,2H),6.07(s,1H),5.08-5.00(m,3H),4.58(br s,2H),4.52(br s,1H),4.44(br s,1H),3.71(br d,J＝9.9Hz,1H),3.64(br d,J＝10.5Hz,1H),3.53-3.41(m,2H),3.00(br d,J＝9.0Hz,2H),2.86(br s,1H),2.48(s,3H),2.39(br d,J＝13.3Hz,3H),2.25-2.15(m,1H),2.06(br d,J＝10.1Hz,2H),2.00-1.93(m,1H),1.52(dd,J＝1.8,7.0Hz,3H),1.43(br dd,J＝3.5,6.0Hz,3H),1.07(d,J＝6.5Hz,3H),0.91(br d,J＝6.7Hz,3H).
实施例93：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[2-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]乙氧基]乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物057)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000277
步骤1：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[2-(2-溴乙氧基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-(2-溴乙氧基)乙酸(50.0mg，273μmol)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(131mg，273μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(3mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(114mg，301μmol)和N,N-二异丙基乙胺(106mg，820μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液用水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)稀释，水相用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。有机相用水(10mL)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩干经薄层色谱纯化(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到产物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[2-(2-溴乙氧基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(57mg)。
MS m/z(ESI):608.9,610.9[M+H] +.
步骤2：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[2-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]乙氧基]乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-[(2S)-2-[2-(2-溴乙氧基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(27.2mg，44.6μmol)和2-[3-氨基-1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(15.0mg，44.6μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(1mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(17.3mg，134μmol)。反应液于80℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。反应液过滤，滤液经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量：39％-79％)作为洗脱液)得到产物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[2-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]乙氧基]乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物057)(1.92mg)。
MS m/z(ESI):865.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝8.90-8.83(m,1H),8.39(s,1H),8.08(d,J＝6.8Hz,1H),7.42-7.38(m,2H),7.37-7.31(m,3H),7.02-6.97(m,2H),4.69(s,1H),4.59-4.50(m,1H),4.43(s,1H),4.19-4.00(m,2H),3.89-3.77(m,3H),3.73(dd,J＝3.6,11.4Hz,1H),3.66-3.55(m,2H),2.95(s,2H),2.54(s,2H),2.48-2.45(m,3H),2.17(s,3H),2.08-1.90(m,4H),1.81(s,2H),1.42(d,J＝7.0Hz,3H),1.33-1.22(m,1H),1.05-1.01(m,9H).
实施例94：(2S,4R)-1-[2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]氮杂环丁烷-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物058)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000278
步骤1：3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(150mg，387μmol)和1-Boc-3-氮杂环丁酮(99.3mg，580μmol)溶于四氢呋喃(3mL)和N,N二甲基甲酰胺(3mL)中，加入乙酸(70.0mg，1.16mmol)，25℃搅拌30分钟。最后加入醋酸硼氢化钠(246mg，1.16mmol)。反应在25℃搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩，加入水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)稀释，水相用乙酸乙酯(10mL)萃取两次，有机相用水(10mL)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝100/35)纯化得到产物3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H- 吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(130mg)。
MS m/z(ESI):466.1[M+H] +.
步骤2：2-[3-氨基-1-[1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(130mg，279μmol)溶于二氯甲烷(2mL)，加入三氟乙酸(318mg，2.79mmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩得到产物2-[3-氨基-1-[1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(100mg，粗品)直接用于下一步。
MS m/z(ESI):366.1[M+H] +.
步骤3：2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]氮杂环丁烷-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将2-[3-氨基-1-[1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(100mg，274μmol)和3-甲基-2-[3-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯(145mg，301μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(2mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(212mg，1.64mmol)，反应液在80℃搅拌反应16小时。LCMS显示反应完成。加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)稀释，水相用乙酸乙酯(10mL)萃取两次，有机相用水(10mL)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝100/40)纯化得到产物2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]氮杂环丁烷-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(50mg，50％纯度)。
MS m/z(ESI):547.4[M+H] +.
步骤4：2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]氮杂环丁烷-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]氮杂环丁烷-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(50mg，45.7μmol，50％纯度)溶于四氢呋喃(0.5mL)和水(0.5mL)，加入一水合氢氧化锂(5.76mg，137μmol)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液用乙酸乙酯(3mL)萃取两次，有机相(3mL)用水洗涤两次，水相滴加柠檬酸(1.5M)调节pH至5到6，之后减压浓缩得到产物2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]氮杂环丁烷-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(25mg，粗品)直接用于下一步。
MS m/z(ESI):533.4[M+H] +.
步骤5：(2S,4R)-1-[2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]氮杂环丁烷-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]氮杂环丁烷-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(25.0mg，47.0μmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(31.1mg，93.9μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(1mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(21.4mg，56.3μmol)和N,N-二异丙基乙胺(36.4mg，282μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液过滤，滤液经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量：27％-67％)作为洗脱液)得到产物(2S,4R)-1-[2-[3-[3-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]氮杂环丁烷-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物058)(5.32mg)。
MS m/z(ESI):846.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.96(s,1H),9.03-8.91(m,1H),8.50(s,1H),8.46-8.20(m,1H),8.12(d,J＝8.1Hz,1H),7.52-7.29(m,5H),6.99(d,J＝7.9Hz,2H),6.46(s,2H),6.00-5.75(m,1H),5.16-4.99(m,1H),4.97-4.82(m,1H),4.65-4.50(m,1H),4.47-4.32(m,1H),4.28(s,1H),4.02-3.87(m,2H),3.77-3.64(m,3H),3.63-3.39(m,3H),2.99-2.86(m,2H),2.45(d,J＝3.0Hz,3H),2.29-2.18(m,1H),2.12-1.99(m,5H),1.96-1.70(m,3H),1.51-1.30(m,3H),1.01-0.85(m,3H),0.85-0.74(m,3H).
实施例95：(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[6-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶 -1-基]己酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物059)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000279
步骤1：6-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己酸的合成
将2-[3-(甲氨基)-1-(4-哌啶基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(30.0mg，92.5μmol)和6-溴己酸(36.1mg，185μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(1mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(59.8mg，462μmol)。反应液于80℃搅拌3小时。LCMS显示反应完成。将反应液浓缩得棕色液体6-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己酸(40mg)，不经纯化直接用于下一步。
MS m/z(ESI):439.3[M+H] +.
步骤2：(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[6-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将6-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己酸(40.0mg，91.2μmol)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(60.8mg，137μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(1mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(41.6mg，109μmol)和N,N-二异丙基乙胺(58.9mg，456μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液过滤，滤液经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量：34％-74％)作为洗脱液)得到产物(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[6-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]己酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物059)(6.78mg)。
MS m/z(ESI):865.7[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.99(s,1H),8.98(s,1H),8.49(s,1H),8.38(d,J＝7.8Hz,1H),8.13(d,J＝7.0Hz,1H),7.82(d,J＝9.3Hz,1H),7.46-7.42(m,2H),7.40-7.33(m,3H),7.07(d,J＝5.0Hz,1H),7.02-6.95(m,2H),5.12(d,J＝3.3Hz,1H),4.97-4.84(m,1H),4.60-4.48(m,2H),4.42(t,J＝8.0Hz,1H),4.28(s,1H),3.60(s,2H),3.03-2.94(m,5H),2.36-2.24(m,4H),2.19-1.97(m,6H),1.88-1.75(m,3H),1.58-1.41(m,5H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.35-1.21(m,3H),0.95(s,9H).
实施例96：化合物301的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000280
将2-[3-[(甲基-d 3)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(18a)(15mg，41.22μmol)和中间体2-1(24.48mg，41.22μmol)溶于甲醇(1.5mL)中，加入乙酸钠(13.53mg，164.90μmol)，乙酸(247.56μg，4.12μmol)和氰基硼氢化钠(12.95mg，206.12μmol)。反应在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经制备液相色谱(Boston Prime C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量35％-75％)作为洗脱液)纯化得到化合物301(12.83mg)。
MS m/z(ESI):905.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.99(s,1H),8.99(s,1H),8.50(s,1H),8.42(d,J＝7.6Hz,1H),8.13(br d,J＝7.1Hz,1H),7.49-7.32(m,6H),7.05-6.98(m,3H),6.13(s,1H),5.13(d,J＝3.6Hz,1H),4.95-4.88(m,1H),4.61-4.53(m,1H),4.37(t,J＝7.8Hz,1H),4.29(br s,1H),3.72(br dd,J＝4.2,10.3Hz,1H),3.64(br d,J＝11.8Hz,2H),3.57(d,J＝9.9Hz,1H),3.43(br d,J＝11.1Hz,1H),3.00(br d,J＝8.9Hz,2H),2.76(br t,J＝11.2Hz,2H),2.46(s,3H),2.25-2.17(m,4H),2.13(br t,J＝11.2Hz,3H),2.07-2.01(m,1H),1.86-1.76(m,5H),1.39(d,J＝6.9Hz,3H),1.16(br d,J＝11.0Hz,2H),0.99-0.94(m,3H),0.85-0.79(m,3H).
实施例97：化合物303的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000281
将2-[1-(哌啶-4-基)-3-(丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(20a)(35.37mg，90.95μmol)，中间体2-1(45mg，75.79μmol)，乙酸(13.65mg，227.37μmol，13.00μL)和乙酸钠(18.65mg,227.37μmol)溶于无水四氢呋喃(1.5mL)和无水N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入醋酸硼氢化钠(89.44mg,422.03μmol)。反应液在25℃搅拌反应4小时，LCMS检测反应完毕，将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱纯化(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量48％-88％)作为洗脱液)纯化得到化合物303(28.73mg)。
MS m/z(ESI):930.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ14.02(s,1H),8.99(s,1H),8.56-8.39(m,2H),8.18-8.09(m,1H),7.51-7.30(m,5H),7.13(br t,J＝5.7Hz,1H),7.05-6.94(m,2H),6.13(s,1H),5.12(d,J＝3.6Hz,1H),4.92(br t,J＝6.9Hz,1H),4.57(br s,1H),4.42-4.23(m,2H),3.79-3.53(m,4H),3.49-3.38(m,2H),3.00(br d,J＝8.3Hz,2H),2.76(br t,J＝11.6Hz,2H),2.46(s,5H),2.22(br d,J＝7.0Hz,3H),2.14-2.08(m,3H),2.07-1.97(m,1H), 1.88-1.65(m,8H),1.39(d,J＝7.0Hz,2H),1.28-1.03(m,3H),1.01-0.92(m,6H),0.86-0.77(m,3H).
实施例98：化合物305的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000282
将N-[6-(2-羟基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]环丙酰胺(22a)(34.42mg，90.95μmol)，中间体2-1(45mg，75.79μmol)，乙酸(9.10mg，151.58μmol)和乙酸钠(12.43mg，151.58mol)溶于无水四氢呋喃(1.5mL)和无水N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，反应液在25℃搅拌反应1小时，加入醋酸硼氢化钠(48.19mg,227.37μmol)。反应液在25℃搅拌反应3小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱纯化(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量35％-75％)作为洗脱液)纯化得到化合物305(38.63mg)。
MS m/z(ESI):957.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.25(s,1H),11.08(s,1H),8.99(s,1H),8.81(s,1H),8.43(d,J＝7.5Hz,1H),8.15(d,J＝6.9Hz,1H),7.52-7.30(m,5H),7.09-6.82(m,2H),6.13(s,1H),5.17-4.99(m,1H),4.92(t,J＝7.3Hz,1H),4.81(s,1H),4.37(t,J＝7.9Hz,1H),4.29(s,1H),3.78-3.68(m,1H),3.68-3.50(m,3H),3.48-3.40(m,1H),3.01(s,2H),2.83-2.69(m,2H),2.46(s,3H),2.24(d,J＝5.9Hz,3H),2.18-2.08(m,4H),2.02(d,J＝12.3Hz,2H),1.98-1.86(m,2H),1.84-1.64(m,4H),1.39(d,J＝7.0Hz,3H),1.16(d,J＝9.9Hz,2H),1.00-0.93(m,3H),0.92-0.86(m,4H),0.86-0.77(m,3H).
实施例99：化合物310的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000283
将2-[3-(环丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(20mg，51.70μmol)和中间体2-1(30.69mg，51.70μmol)溶于甲醇(2mL)中，加入乙酸钠(16.96mg，206.78μmol)，乙酸(310.44μg，5.17μmol)和氰基硼氢化钠(16.24mg，258.48μmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经制备液相色谱(Boston Prime C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量39％-79％)作为洗脱液)纯化得到化合物310(11.89mg)。
MS m/z(ESI):928.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.98(s,1H),8.99(s,1H),8.51(s,1H),8.42(br d,J＝7.6Hz,1H),8.13(br d,J＝7.4Hz,1H),7.47-7.35(m,7H),7.02-6.98(m,2H),6.13(s,1H),5.13(d,J＝3.6Hz,1H),4.92(br t,J＝7.2Hz,1H),4.59(br s,1H),4.37(br t,J＝7.8Hz,1H),4.29(br s,1H),3.72(br dd,J＝4.3,10.8Hz,2H),3.64(br d,J＝11.9Hz,2H),3.57(br d,J＝9.8Hz,2H),3.01(br d,J＝9.5Hz,3H),2.81(dt,J＝3.3,6.8Hz,2H),2.75(br d,J＝10.9Hz,2H),2.46(s,3H),2.23(br d,J＝2.9Hz,2H),2.17-2.10(m,3H),1.86(br d,J＝9.8Hz,2H),1.78(br d,J＝8.8Hz,3H),1.39(br d,J＝7.0Hz,3H),1.16(br d,J＝9.9Hz,2H),0.98-0.94(m,3H),0.80(br d,J＝6.6Hz,3H),0.77-0.72(m,2H),0.62-0.57(m,2H).
实施例100：化合物311的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000284
将2-[1-(哌啶-4-基)-3-[(2,2,2-三氟乙基)氨基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(26a)(15mg，34.98μmol)和中间体2-1(20.77mg，34.98μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入乙酸钠(11.48mg，139.91μmol)，乙酸(210.05ug，3.50μmol)和氰基硼氢化钠(10.99mg，174.89μmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经制备液相色谱(Phenomenex Luna C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的混合物(乙腈含量35％-75％)作为洗脱液)纯化得到化合物311(8.48mg)。
MS m/z(ESI):970.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.50-13.01(m,1H),9.01-8.98(m,1H),8.47(s,1H),8.42(d,J＝7.5Hz,1H),8.06-7.96(m,2H),7.49-7.43(m,2H),7.42-7.36(m,3H),7.07-7.01(m,2H),6.19(s,1H),4.96-4.85(m,2H),4.36(t,J＝7.9Hz,1H),4.33-4.19(m,3H),3.77-3.67(m,5H),3.59(br d,J＝9.8Hz,1H),3.51-3.46(m,2H),3.32-3.20(m,2H),3.14-3.02(m,4H),2.82(br t,J＝11.3Hz,2H),2.46(s,3H),2.29-2.18(m,1H),2.14(br d,J＝12.8Hz,2H),2.09-1.98(m,2H),1.87-1.76(m,3H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.33-1.22(m,2H),0.96(br d,J＝6.3Hz,3H),0.83-0.77(m,3H).
实施例101：化合物313的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000285
将2-[3-[(甲基-d 3)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(18a)(15mg，41.22μmol)和中间体11(22.29mg，41.22μmol)溶于甲醇(1.5mL)中，加入乙酸钠(13.53mg，164.90μmol)，乙酸(247.56μg，4.12μmol)和氰基硼氢化钠(12.95mg，206.12μmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经制备液相色谱(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量34％-74％)作为洗脱液)纯化得到化 合物313(9.34mg)。
MS m/z(ESI):852.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.01-13.96(m,1H),8.99(s,1H),8.49(s,1H),8.43(br d,J＝7.5Hz,1H),8.16-8.10(m,1H),7.49-7.33(m,6H),7.05-6.98(m,3H),6.13(s,1H),5.12(d,J＝3.6Hz,1H),4.97-4.88(m,1H),4.58(br t,J＝11.0Hz,1H),4.38(br t,J＝7.9Hz,1H),4.32-4.27(m,3H),3.75-3.64(m,2H),3.46(br d,J＝10.0Hz,2H),3.08(br d,J＝10.1Hz,2H),2.78(br t,J＝4.8Hz,2H),2.46(s,3H),2.30-2.23(m,2H),2.22-2.11(m,2H),2.04(br t,J＝8.9Hz,1H),1.88-1.75(m,2H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.00-0.95(m,3H),0.86-0.80(m,3H).
实施例102：(2S,4R)-1-[(S)-2-[2-[4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物223)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000286
步骤1：4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(240.11mg，773.66μmol)和1-BOC-4-哌啶甲醛(150mg，703.32μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)和四氢呋喃(2mL)中，加入醋酸(42.24mg，703.32μmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(447.19mg，2.11mmol)。反应液于25℃搅拌反应1小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，加入5mL乙酸乙酯在25℃下搅拌2小时，将滤饼减压浓缩至干得4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(205mg)。
MS m/z(ESI):508.3[M+H] +.
步骤2：2-[3-氨基-1-[1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(205mg，403.84μmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，504.80μL)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，得到2-[3-氨基-1-[1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(228mg)。
MS m/z(ESI):408.1[M+H] +.
步骤3：2-[4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酸叔丁酯的合成
将2-[3-氨基-1-[1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(80mg，196.31μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(76.12mg，588.94μmol)。在0℃下加入溴乙酸叔丁酯(38.29mg，196.31μmol)，反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。向反应 液中加入水(2mL)并用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩至干，然后经薄层色谱纯化(二氧化硅：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到2-[4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4，3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酸叔丁酯(58mg)。
MS m/z(ESI):522.3[M+H] +.
步骤4：2-[4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酸的合成
将2-[4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酸叔丁酯(30mg，57.51μmol)溶于二氯甲烷(0.5mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，71.89μL)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干得2-[4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酸(20mg)。
MS m/z(ESI):466.2[M+H] +.
步骤5：(2S,4R)-1-[(S)-2-[2-[4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4，3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4，3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酸(8mg，17.18μmol)和(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(8.40mg，18.90μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(8.88mg，68.74μmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟膦盐(7.19mg，18.90μmol)，反应液在25℃搅拌反应2小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量50％-70％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[(S)-2-[2-[4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物223)(2.68mg)。
MS m/z(ESI):892.8[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.03-13.95(m,1H),8.98(s,1H),8.56-8.45(m,2H),8.13(br d,J＝7.3Hz,1H),7.76(br d,J＝9.8Hz,1H),7.46-7.41(m,2H),7.38-7.34(m,3H),7.02-6.96(m,2H),6.46(br s,2H),5.14(d,J＝3.4Hz,1H),4.89(quin,J＝6.9Hz,1H),4.57-4.37(m,3H),4.31-4.24(m,1H),3.64-3.53(m,2H),3.03-2.93(m,3H),2.91-2.80(m,3H),2.45(s,3H),2.22(br d,J＝6.9Hz,2H),2.08(br s,5H),1.85-1.73(m,5H),1.60-1.44(m,2H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.25-1.11(m,3H),0.94(s,9H).
实施例103：(2S,4R)-4-羟基-1-[2-[3-[2-[3-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5)-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物228)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000287
步骤一：(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(300mg，488.00μmol)溶于无水四氢呋喃(6.5mL)中，加入1.5M盐酸(6.51mL)。反应液于60℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液中加入饱和碳酸氢钠调节pH至7-8，反应液减压浓缩至干，向反应液中加入水(7mL)并用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，有机相用水(7mL)萃洗三次，并用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩至干得(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(260mg)。
MS m/z(ESI):541.6[M+H] +.
步骤二：(2S,4R)-4-羟基-1-[2-[3-[2-[3-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5)-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(7.16mg，18.50μmol)和(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(10mg，18.5μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和无水四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙酸(1.11mg，18.50μmol)，醋酸钠(4.55mg，55.49μmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(11.76mg，55.49μmol)，反应液在25℃搅拌反应2小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Phenomenex C18-1柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水和碳酸氢铵)和乙腈的混合物(乙腈含量50％-70％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-4-羟基-1-[2-[3-[2-[3-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5)-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物228)(1.1mg)。
MS m/z(ESI):875.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.01-8.95(m,1H),8.54-8.49(m,1H),8.46-8.28(m,1H),8.21-8.13(m,1H),7.45-7.29(m,5H),7.10-7.04(m,1H),7.02-6.98(m,1H),6.16-6.04(m,2H),4.99-4.75(m,2H),4.47-4.33(m,1H),4.30-4.20(m,3H),3.00-2.91(m,4H),2.84-2.77(m,2H),2.45(s,3H),2.34-2.25(m,4H),2.05-1.86(m,6H),1.80-1.72(m,1H),1.68-1.60(m,2H),1.49-1.42(m,1H),1.36(br dd,J＝7.0,11.8Hz,3H),1.23(s,2H),0.96(br dd,J＝3.4,6.4Hz,3H),0.84-0.78(m,3H).
实施例104：化合物304的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000288
将2-[3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(28.82mg，74.11μmol)和中间体2-1(40mg，67.37μmol)溶于四氢呋喃(1mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入醋酸(12.14mg，202.11μmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(42.84mg，202.11μmol)和无水乙酸钠(42.84mg，202.11μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干经高效液相色谱纯化(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量49％-89％)作为洗脱液)纯化得到化合物304(25.01mg)。
MS m/z(ESI):930.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.03(br s,1H),9.02-8.95(m,1H),8.49(s,1H),8.42(d,J＝7.8Hz, 1H),8.16-8.10(m,1H),7.49-7.40(m,2H),7.39-7.31(m,3H),7.03-6.94(m,2H),6.92(d,J＝7.6Hz,1H),6.13(s,1H),5.12(d,J＝3.6Hz,1H),4.91(q,J＝6.9Hz,1H),4.61-4.52(m,1H),4.36(t,J＝7.8Hz,1H),4.31-4.23(m,1H),4.08-3.98(m,1H),3.71(br dd,J＝4.5,10.5Hz,1H),3.63(br d,J＝11.6Hz,2H),3.56(d,J＝9.9Hz,1H),3.46-3.40(m,1H),3.04-2.95(m,2H),2.82-2.68(m,2H),2.45(s,3H),2.25-2.00(m,8H),1.88-1.61(m,6H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.28(d,J＝6.4Hz,6H),1.21-1.09(m,2H),0.99-0.92(m,3H),0.85-0.75(m,3H).
实施例105：化合物306的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000289
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-6-氯苯酚(31.79mg，83.37μmol)和中间体2-1(45mg，75.79μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和无水四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙酸钠(8.65mg，227.37μmol)，醋酸(13.00μL，227.37μmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(48.19mg，227.37μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱纯化(BostonLuna C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的混合物(乙腈含量15％-55％)作为洗脱液)得到化合物306(6.8mg)。
MS m/z(ESI):923.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ15.51(br s,1H),8.98(s,1H),8.63(s,1H),8.43(d,J＝7.5Hz,1H),8.19-8.13(m,1H),7.54(d,J＝6.8Hz,1H),7.49-7.41(m,2H),7.39-7.34(m,2H),7.01(t,J＝7.9Hz,1H),6.57(br s,2H),6.16-5.97(m,1H),5.13(br s,1H),4.91(quin,J＝6.8Hz,1H),4.74-4.51(m,1H),4.36(t,J＝7.8Hz,1H),4.29(br s,1H),3.76-3.53(m,3H),2.99(br d,J＝4.8Hz,2H),2.75(br t,J＝11.4Hz,2H),2.52(d,J＝1.8Hz,3H),2.45(s,3H),2.26-2.17(m,3H),2.13-1.98(m,4H),1.91-1.62(m,6H),1.49-1.33(m,3H),1.14(br d,J＝11.3Hz,2H),0.99-0.92(m,3H),0.85-0.76(m,3H).
实施例106：化合物308的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000290
将N-[6-(3-氯-2-羟基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基]环丙烷甲酰胺(13.91mg，33.69μmol)，中间体2-1(20mg，33.69μmol)，乙酸(6.07mg，101.06μmol，5.78μL)和乙酸钠(8.29mg,101.06μmol)溶于无水四氢呋喃(0.5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，反应液在25℃搅拌反应1小时，加入醋酸硼氢化钠(21.42mg，101.06μmol)。反应液在25℃搅拌反应3小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的混合物(乙腈含量36％-76％)作为洗脱液)纯化得到化合物308(13.2mg)。
MS m/z(ESI):496.1[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.85(s,1H),11.16(s,1H),8.97(d,J＝12.4Hz,2H),8.42(d,J＝7.6Hz,1H),8.19(d,J＝7.3Hz,1H),7.58(d,J＝7.9Hz,1H),7.49-7.29(m,4H),7.06(t,J＝7.9Hz,1H),6.13(s,1H),5.12(d,J＝3.6Hz,1H),4.97-4.76(m,2H),4.36(t,J＝7.8Hz,1H),4.28(s,1H),3.77-3.53(m,4H),3.48-3.40(m,1H),3.02(d,J＝4.8Hz,2H),2.76(t,J＝11.5Hz,2H),2.46(s,3H),2.23(d,J＝5.5Hz,3H),2.16-1.91(m,8H),1.86-1.64(m,4H),1.38(d,J＝6.9Hz,3H),1.16(d,J＝10.6Hz,2H),1.01-0.74(m,10H).
实施例107：化合物318的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000291
将2-[3-氨基-1-[1-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(9.53mg，20.21μmol)，中间体2-1(10mg，16.84μmol)，乙酸(3.03mg，50.53μmol，2.89μL)和乙酸钠(4.14mg，50.53μmol)溶于无水四氢呋喃(1.5mL)和无水N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入醋酸硼氢化钠(10.71mg，50.53μmol)。反应液在25℃搅拌反应4小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱纯化(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.5％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量43％-83％)作为洗脱液)纯化得到化合物318(7.8mg)。
MS m/z(ESI):1049.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.93(s,1H),9.12-8.94(m,1H),8.55(s,1H),8.43(d,J＝7.6Hz,1H),8.33(s,2H),8.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.49-7.33(m,5H),7.06-6.97(m,2H),6.48(s,2H),6.13(s,1H),5.13(d,J＝3.3Hz,1H),4.92(t,J＝7.3Hz,2H),4.80(d,J＝13.0Hz,2H),4.37(t,J＝7.8Hz,1H),4.28(s,1H),3.75-3.68(m,1H),3.63(d,J＝12.5Hz,2H),3.57(d,J＝10.0Hz,1H),3.43(d,J＝10.4Hz,1H),3.14-3.01(m,2H),2.95(d,J＝9.9Hz,2H),2.75(t,J＝11.5Hz,2H),2.46(s,3H),2.29-2.12(m,4H),2.06-1.90(m,7H),1.84-1.59(m,8H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.25-1.05(m,2H),1.02-0.91(m,3H),0.84-0.73(m,3H).
实施例108：化合物318-1的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000292
将2-[3-氨基-1-[8-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(参照实施例116合成)(10mg，18.72μmol)和中间体2-1(11.11mg，18.72μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和四氢呋喃(1mL)中，加入乙酸(3.37mg，56.16μmol)，乙酸钠(4.61mg，56.16μmol)和醋酸硼氢化钠(11.90mg，56.16μmol)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水(0.2mL)淬灭反应。反应液减压浓缩至干，经高效液相色谱法纯化(Boston Prime C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量 55％-95％)作为洗脱液)得到化合物318-1(2.2mg)。
MS m/z(ESI):538.8[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ14.02(s,1H),9.02-8.96(m,1H),8.60(s,1H),8.34(s,2H),8.17(d,J＝7.5Hz,1H),7.49-7.34(m,5H),7.24-6.93(m,2H),6.5(s,1H),5.32(t,J＝4.4Hz,1H),5.25-5.08(m,2H),4.91(br t,J＝7.0Hz,1H),4.74(br s,2H),4.44-4.25(m,2H),3.72-3.53(m,5H),2.96(br s,1H),2.75(br s,2H),2.45(br s,3H),2.27-1.94(m,13H),1.89-1.59(m,9H),1.52-1.28(m,6H),1.18-1.06(m,3H),0.95(br d,J＝6.5Hz,3H),0.79(br d,J＝6.8Hz,3H).
实施例109：化合物319的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000293
步骤1：4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯的合成
将2-[1-[1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(参照实施例115制备)(180mg，373.95μmol)和N-Boc-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(138.75mg，448.74μmol)溶于1,4-二氧六环(4mL)和水(1mL)中，加入碳酸铯(365.52mg，1.12mmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(30.54mg，37.40μmol)。反应液于100℃搅拌反应16小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(10mL)并用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相并用水(15mL)萃洗三次，用无水硫酸钠干燥后过滤减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到2/1)得到4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(97mg)。
MS m/z(ESI):584.2[M+H] +.
步骤2：4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(87mg，149.05μmol)溶于四氢呋喃(2mL)中，加入钯碳(10％纯度，50mg)。反应液于25℃搅拌反应16小时。LCMS监测反应完全。将反应液过滤后减压浓缩至干得4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(190mg)。
MS m/z(ESI):586.1[M+H] +.
步骤3：2-[3-(甲氨基)-1-[1-[5-(4-哌啶基)嘧啶-2-基]-4-哌啶基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(70mg，119.52μmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，298.79μL)。反应液于25℃搅拌反应16小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干得4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(84mg)。
MS m/z(ESI):486.2[M+H] +.
步骤4：化合物319的合成
将4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(79.13mg，75.79μmol，50％纯度盐酸盐)和中间体2-1(30mg，50.53μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙酸硼氢化钠(32.13mg，151.58μmol)，乙酸钠(8.29mg，101.06μmol)和乙酸(303.43μg，5.05μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩去除四氢呋喃后经高效液相色谱纯化(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(0.225％甲酸)和乙腈的混合物(乙腈含量15％-55％)作为洗脱液)纯化得到化合物319(17.52mg)。
MS m/z(ESI):1064.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.92(s,1H),9.00-8.95(m,1H),8.52(s,1H),8.42(d,J＝7.5Hz,1H),8.32(s,2H),8.16-8.09(m,1H),7.46-7.41(m,2H),7.40-7.33(m,3H),7.08(d,J＝5.0Hz,1H),7.04-6.97(m,2H),6.12(s,1H),5.13(d,J＝3.5Hz,1H),4.93-4.80(m,4H),4.36(t,J＝7.9Hz,1H),4.28(s,1H),3.75-3.52(m,4H),3.07(t,J＝11.0Hz,3H),3.01-2.93(m,2H),2.91(d,J＝5.0Hz,3H),2.74(t,J＝11.5Hz,2H),2.45(s,3H),2.21(s,3H),2.08-1.86(m,8H),1.79-1.61(m,8H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.13(d,J＝10.5Hz,2H),0.94(d,J＝6.8Hz,3H),0.79(d,J＝6.5Hz,3H).
实施例110：化合物322的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000294
步骤1：2-[1-[1-(5-溴吡啶-2-基)哌啶-4-基]-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将2-[3-(甲氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(300mg，831.39μmol，盐酸盐)溶于 二甲亚砜(10mL)中，加入5-溴-2-氟吡啶(175.58mg，997.67μmol)和N,N-二异丙基乙胺(217.22μL，1.25mmol)。反应液在100℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完毕。加入水(15mL)，用乙酸乙酯(20mL)萃取两次，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干，经柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)得2-[1-[1-(5-溴吡啶-2-基)哌啶-4-基]-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(300mg)。
MS m/z(ESI):471.9,481.9[M+H] +.
步骤2：4-[6-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-3',6'-二氢-[3,4'-二吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯的合成
将2-[1-[1-(5-溴-2-吡啶基)-4-哌啶基]-3-(甲氨基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(300mg，624.53μmol)溶于无水二氧六环(12mL)和水(3mL)中，加入N-Boc-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(386.22mg，1.25mmol)，无水碳酸铯(610.46mg，1.87mmol)。在氮气的保护下，加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(51mg，62.45μmol)，反应液升温至90℃并搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。将反应液冷却至25℃，减压浓缩至干，经薄层层析(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)纯化得到4-[6-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-3',6'-二氢-[3,4'-二吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(310mg)。
MS m/z(ESI):583.2[M+H] +.
步骤3：4-[6-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-3-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[6-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-3',6'-二氢-[3,4'-二吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(260mg，446.20μmol)溶于四氢呋喃(10mL)和甲醇(10mL)中，加入湿钯碳(400mg，446.20μmol)，并用氢气(15Psi)置换，反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液通过硅藻土过滤，收集滤液，减压浓缩至干，得4-[6-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-3-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(310mg，粗品)。
MS m/z(ESI):585.3[M+H] +.
步骤4：2-[3-(甲氨基)-1-[1-[5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[6-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-3-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg，171.02μmol)溶于甲醇(2mL)和二氯甲烷(4mL)中，加入盐酸二氧六环(427.56μL，4M)，在25℃下搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕，减压浓缩至干，得到2-[3-(甲氨基)-1-[1-[5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(100mg，盐酸盐)。
MS m/z(ESI):485.2[M+H] +.
步骤5：化合物322的合成
将2-[3-(甲氨基)-1-[1-[5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(10mg，20.64μmol，盐酸盐)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入中间体2-1(12.65mg，20.64μmol)，乙酸(1.24mg，20.64μmol)和乙酸钠(6.77mg，82.54μmol)。在25℃搅拌反应0.5小时。加入醋酸硼氢化钠(13.12mg，61.91μmol)，在25℃搅拌反应2.5小时，LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。经制备液相色谱纯化(Phenomenex Luna C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有氨水(0.5％)和乙腈的混合物(乙腈含量52％-92％)作为洗脱液)得化合物322(4.24mg)。
MS m/z(ESI):532.1[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.94(s,1H),9.02-8.94(m,1H),8.52(s,1H),8.42(d,J＝7.8Hz,1H),8.12(d,J＝7.6Hz,1H),8.02(d,J＝2.1Hz,1H),7.51-7.41(m,3H),7.36(br d,J＝8.3Hz,3H),7.09(br d,J＝4.9Hz,1H),7.03-6.95(m,2H),6.88(br d,J＝8.8Hz,1H),6.16-5.97(m,1H),5.16-5.01(m,1H),4.98-4.79(m,2H),4.47(br d,J＝12.8Hz,2H),4.36(t,J＝7.9Hz,1H),4.28(br s,1H),3.71(br d,J＝6.3Hz,1H),3.66-3.52(m,3H),3.46-3.38(m,3H),3.03-2.87(m,7H),2.74(br t,J＝11.6Hz,2H),2.45(s,3H),2.23-2.12(m,3H),2.08-1.88(m,6H),1.80-1.59(m,8H),1.37(br d,J＝7.0Hz,3H),1.19-1.09(m,2H),1.00-0.89(m,3H),0.84-0.74(m,3H).
实施例111：化合物323-1的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000295
步骤1：2-[1-[1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将2-[3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(106mg，272.57μmol)和2-氯-5-溴嘧啶(57.99mg，299.8μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(140.91mg，1.09mmol)。反应液于80℃搅拌反应2小时。经LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(3mL)并用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩至干，然后经薄层色谱纯化(二氧化硅：石油醚/四氢呋喃＝3/1)得到2-[1-[1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(121mg)。
MS m/z(ESI):509.0,511.0[M+H] +.
步骤2：4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-[1-[1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(121mg，237.53μmol)和N-Boc-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(88.14mg，285.04μmol)溶于二氧六环(4mL)和水(1mL)中，加入碳酸钾(98.49mg，712.60μmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(19.40mg，23.75μmol)。反应液在氮气环境下于80℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩至干，经柱层析纯化(石油醚/四氢呋喃＝3/1)得到4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-1-羧酸叔丁酯(115mg)。
MS m/z(ESI):612.3[M+H] +.
步骤3：4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-1-羧酸叔丁酯(25mg，40.87μmol)溶于四氢呋喃(3mL)中，加入湿钯碳(40.87μmol，10％purity)。反应液在氢气保护下于25℃搅拌12小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩至干得4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(22mg)。
MS m/z(ESI):614.3[M+H] +.
步骤4：2-[3-(异丙基氨基)-1-[1-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(22mg，35.85μmol)溶于二氯甲烷(0.4mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，179.23μL)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS监测反应完全，反应液减压浓缩至干得2-[3-(异丙基氨基)-1-[1-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(16mg)。
MS m/z(ESI):514.3[M+H] +.
步骤5：化合物323-1的合成
将2-[3-(异丙基氨基)-1-[1-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(16mg，31.15μmol)和中间体11(16.84mg，31.15μmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入醋酸(1.87mg，31.15μmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(19.81mg，93.45μmol)和醋酸钠(7.67mg，93.45μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量51％-91％)作为洗脱液)纯化得到化合物323-1(11.25mg)。
MS m/z(ESI):1038.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.94(s,1H),8.98(s,1H),8.51(s,1H),8.43(br d,J＝7.8Hz,1H),8.32(s,2H),8.11(br d,J＝7.8Hz,1H),7.49-7.41(m,2H),7.39-7.33(m,3H),7.04-6.96(m,2H),6.91(br d,J＝7.5Hz,1H),6.12(s,1H),5.12(d,J＝3.3Hz,1H),4.93-4.80(m,4H),4.42-4.21(m,4H),4.05-3.93(m,1H),3.79-3.60(m,3H),3.14-2.96(m,4H),2.71(br s,2H),2.45(s,3H),2.16-1.85(m,8H),1.82-1.62(m,5H),1.37(brd,J＝7.0Hz,3H),1.23(br d,J＝6.5Hz,7H),0.96(br d,J＝6.5Hz,3H),0.80(br d,J＝6.5Hz,3H).
实施例112：化合物323-2的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000296
将2-[3-(异丙基氨基)-1-[1-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(20.38mg，37.05μmol)和中间体2-1(20mg，33.69μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙酸(6.07mg，101.06μmol)，乙酸钠(8.29mg，101.06μmol)和醋酸硼氢化钠(21.42mg，101.06μmol)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。向反应液中加入水(0.2mL)淬灭反应。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量59％-99％)作为洗脱液)得到化合物323-2(10.11mg)。
MS m/z(ESI):1092.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.94(br s,1H),8.98(s,1H),8.51(s,1H),8.42(br d,J＝7.5Hz,1H),8.31(s,2H),8.11(d,J＝8.0Hz,1H),7.47-7.41(m,2H),7.40-7.33(m,3H),7.05-6.96(m,2H),6.90(d,J＝7.8Hz,1H),6.19-5.94(m,1H),5.13(br s,1H),4.97-4.76(m,4H),4.36(t,J＝7.8Hz,1H),4.28(br s,1H),3.99(qd,J＝6.5,13.5Hz,1H),3.76-3.68(m,1H),3.66-3.53(m,4H),3.07(br t,J＝10.4Hz,2H),2.95(br d,J＝10.0Hz,2H),2.74(br t,J＝11.4Hz,2H),2.45(s,3H),2.39(br s,1H),2.29-2.12(m,3H),2.06-1.88(m,7H),1.85-1.55(m,8H),1.49-1.33(m,3H),1.23(d,J＝6.5Hz,6H),1.13(br d,J＝11.8Hz,2H),1.01-0.90(m,3H),0.85-0.74(m,3H).
实施例113：化合物227的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000297
将2-[3-(甲基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(15mg，46.24μmol)和中间体2-1(27.46mg，46.24μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL)和四氢呋喃(0.6mL)中，加入醋酸硼氢化钠(29.40mg，138.73μmol)和乙酸(2.78mg，46.2μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干，然后经高效液相色谱(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量29％-69％)作为洗脱液)纯化得到化合物227(7.63mg)。
MS m/z(ESI):902.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.10-13.90(m,1H),8.99(s,1H),8.50(s,1H),8.42(br d,J＝7.6Hz,1H),8.13(br d,J＝7.5Hz,1H),7.49-7.41(m,2H),7.39-7.31(m,3H),7.08(br d,J＝4.9Hz,1H),7.04-6.95(m,2H),6.13(s,1H),5.12(d,J＝3.5Hz,1H),5.01-4.86(m,1H),4.62-4.53(m,1H),4.40-4.23(m,2H),3.75-3.54(m,4H),3.48-3.38(m,2H),3.06-2.93(m,5H),2.84-2.70(m,2H),2.25-1.95(m,9H),1.87-1.69(m,6H),1.48-1.35(m,3H),1.28-1.07(m,3H),0.98-0.91(m,3H),0.83-0.73(m,3H).
实施例114：(2S,4R)-4-羟基-1-[2-[3-[2-[3-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]吡咯烷-1-基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物229)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000298
将2-[3-(甲氨基)-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(6.89mg，22.20μmol)，(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(10.00mg，18.50μmol)，乙酸(2.22mg，37.00μmol,2.12μL)和乙酸钠(4.55mg，55.50μmol)溶于无水四氢呋喃(0.5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，反应液在25℃搅拌反应1小时，加入醋酸硼氢化钠(11.76mg，55.50μmol)。反应液在25℃搅拌反应3小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱纯化(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量34％-74％)作为洗脱液)得到(2S,4R)-4-羟基-1-[2-[3-[2-[3-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]吡咯烷-1-基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物229)(2.28mg)。
MS m/z(ESI):835.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.87(br s,1H),9.10-8.93(m,1H),8.52(br d,J＝3.1Hz,1H),8.46-8.24(m,1H),8.06(br d,J＝7.9Hz,1H),7.58-7.26(m,6H),7.11(br d,J＝4.5Hz,1H),7.04-6.90(m,2H),6.14-6.01(m,1H),5.29(s,1H),5.11(s,1H),4.98-4.79(m,1H),4.40-4.21(m,4H),3.83-3.59(m,3H),3.02-2.80(m,7H), 2.47-2.44(m,3H),2.29-2.12(m,3H),2.10-1.97(m,1H),1.78(s,1H),1.49-1.30(m,4H),0.96(d,J＝3.4Hz,3H),0.80(d,J＝13.6Hz,3H).
实施例115：化合物278的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000299
步骤1：2-[1-[1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将2-[3-(甲氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(340mg，800.91μmol，85％纯度盐酸盐)和5-溴-2-氯-嘧啶(185.90mg，961.09μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(310.54mg，2.40mmol)。反应液于100℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(20mL)并用二氯甲烷(100mL)萃取两次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥后过滤减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，四氢呋喃/二氯甲烷＝1/0到1/50)得到2-[1-[1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(400mg)。
MS m/z(ESI):481.0,482.9[M+H] +.
步骤2：4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯的合成
将2-[1-[1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(180mg，373.95μmol)和N-Boc-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(138.75mg，448.74μmol)溶于1,4-二氧六环(4mL)和水(1mL)中，加入碳酸铯(365.52mg，650.34μmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(30.54mg，37.40μmol)。反应液用氮气置换三次后于氮气环境下在100℃搅拌反应16小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(10mL)并用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，合并有机相并用水(15mL)萃洗三次后过滤减压浓缩至干。经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到2/1)得到4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(97mg)。
MS m/z(ESI):584.2[M+H] +.
步骤3：4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(87mg，149.05μmol)溶于四氢呋喃(2mL)中，加入钯碳(10％纯度，50mg)。反应液于25℃搅拌反应16小时。LCMS监测反应完全。将反应液过滤后减压浓缩至干得粗品4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(190mg)。
MS m/z(ESI):586.1[M+H] +.
步骤4：2-[3-(甲氨基)-1-[1-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(90mg，153.66μmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)中，加入盐酸二氧六环溶液(4M，384.16μL，1.54mmol)。反应液于25℃搅拌反应16小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干得盐酸盐固体粗品2-[3-(甲氨基)-1-[1-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(110mg)。
MS m/z(ESI):486.2[M+H] +.
步骤5：化合物278的合成
将2-[3-(甲氨基)-1-[1-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(57.94mg，55.49μmol，50％纯度盐酸盐)和中间体11(25mg，46.24μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙酸硼氢化钠(29.40mg，138.73μmol)，乙酸钠(7.59mg，92.48μmol)和乙酸(277.69μg，4.62μmol)。反应液于25℃搅拌反应16小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩除去四氢呋喃后经高效液相色谱(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(0.225％甲酸)和乙腈的混合物(乙腈含量15％-55％)作为洗脱液)纯化得到化合物278(11.94mg)。
MS m/z(ESI):1011.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.92(s,1H),8.98(s,1H),8.52(s,1H),8.44(d,J＝7.5Hz,1H),8.32(s,2H),8.12(d,J＝7.3Hz,1H),7.49-7.33(m,6H),7.09(d,J＝5.0Hz,1H),7.04-6.97(m,2H),6.12(s,1H),5.12(s,1H),4.96-4.79(m,4H),4.37(t,J＝7.7Hz,1H),4.27(d,J＝5.3Hz,3H),3.75-3.62(m,2H),3.45(d,J＝11.0Hz,2H),3.11-2.98(m,4H),2.91(d,J＝4.8Hz,3H),2.70(s,2H),2.45(s,3H),2.14-1.91(m,7H),1.84-1.58(m,5H),1.37(d,J＝7.3Hz,3H),0.96(d,J＝6.3Hz,3H),0.80(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例116：化合物281的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000300
步骤1：2-[3-氨基-1-[8-(5-溴嘧啶-2-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将2-[3-氨基-1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(83mg，246.74μmol)和2- 氯-5-溴嘧啶(52.50mg，271.41μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(127.56mg，986.95μmol)。反应液于80℃搅拌反应2小时。经LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩至干，然后经薄层色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到2-[3-氨基-1-[8-(5-溴嘧啶-2-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(68mg)。
MS m/z(ESI):493.0,494.9[M+H] +.
步骤2：4-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯的合成
将2-[3-氨基-1-[8-(5-溴嘧啶-2-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(75mg，152.02μmol)和N-Boc-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(47.01mg，152.02μmol)溶于二氧六环(2mL)和水(0.5mL)中，加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(12.41mg，15.20μmol)和碳酸钾(63.03mg，456.06μmol)。反应液在氮气保护下于100℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(石油醚/四氢呋喃＝1/1)得到4-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(32mg)。
MS m/z(ESI):596.4[M+H] +.
步骤3：4-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(32mg，53.72μmol)溶于无水甲醇(3mL)中，加入湿钯碳(537.19μmol，10％纯度)。反应液于25℃搅拌12小时。LCMS监测反应完全。反应液过滤，滤液减压浓缩至干，得到4-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(15mg)。
MS m/z(ESI):598.5[M+H] +.
步骤4：2-[3-氨基-1-[8-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(15mg，25.10μmol)溶于无水二氯甲烷(2mL)中，然后加入盐酸二氧六环(4M，31.37μL)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干得2-[3-氨基-1-[8-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(10mg)。
MS m/z(ESI):498.4[M+H] +.
步骤5：化合物281的合成
将2-[3-氨基-1-[8-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(10mg，18.72μmol)和中间体11(10.12mg，18.72μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和无水四氢呋喃(0.5mL)中，加入醋酸(1.12mg，18.72μmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(11.91mg，56.17μmol)，反应液在25℃搅拌反应2小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(PhenomenexC18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈含量50％-70％)作为洗脱液)纯化得到化合物281(1.1mg)。
MS m/z(ESI):512.1[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.04-13.84(m,1H),9.02-8.90(m,1H),8.62-8.41(m,1H),8.38-8.26(m,3H),8.20-8.03(m,1H),7.50-7.30(m,5H),7.05-6.90(m,2H),6.59-6.44(m,2H),6.19-6.09(m,1H),5.22-5.09(m,1H),4.97-4.85(m,1H),4.80-4.64(m,3H),4.47-4.34(m,1H),4.31-4.20(m,3H),3.06-2.98(m,4H),2.45(br s,3H),2.16-1.99(m,11H),1.97-1.89(m,2H),1.87-1.78(m,2H),1.76-1.61(m,5H),1.46(br d,J＝6.9Hz,1H),1.39-1.35(m,2H),1.26-1.13(m,1H),1.03-0.91(m,3H),0.82(br dd,J＝6.8,13.4Hz,3H).
实施例117：(2S,4R)-4-羟基-1-[2-[3-[[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙基]-甲基氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物284)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000301
步骤1：2-[3-[(2,2-二甲氧基乙基)(甲基)氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的合成
将3-甲基-2-[3-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯(300mg，623.33μmol)和2,2-二甲氧基-N-甲基-乙胺(81.70mg，685.66μmol)溶于N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中，加入三乙胺(189.22mg，1.87mmol)，反应液于80℃反应12小时，LCMS显示反应完成。反应液用乙酸乙酯(8mL×3)和水(10mL)萃取，有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤后减压浓缩至干，浓缩物经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝3/1)得到2-[3-[(2,2-二甲氧基乙基)(甲基)氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(57mg)。
MS m/z(ESI):301.1[M+H] +；
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ5.86(s,1H),4.53(t,J＝5.3Hz,1H),3.72(s,3H),3.46(d,J＝8.8Hz,1H),3.40(s,6H),3.33(t,J＝5.1Hz,2H),2.34(qd,J＝6.8,15.5Hz,1H),1.00(d,J＝6.7Hz,3H),0.92(d,J＝6.7Hz,3H).
步骤2：2-[3-[(2,2-二甲氧基乙基)(甲基)氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的合成
将2-[3-[(2,2-二甲氧基乙基)(甲基)氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(55mg，183.12mmol)溶于四氢呋喃(1mL)中，加入一水合氢氧化锂水溶液(2M，274.68μL)，反应液于25℃反应1小时，LCMS显示反应完成。反应液用2M盐酸溶液调节pH值至5～6，然后用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，有机相减压浓缩至干，得到2-[3-[(2,2-二甲氧基乙基)(甲基)氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(50mg)。
MS m/z(ESI):287.1[M+H] +.
步骤3：(2S,4R)-1-[2-[3-[(2,2-二甲氧基乙基)(甲基)氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[3-[(2,2-二甲氧基乙基)(甲基)氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(50mg，174.63mmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(70.67mg，192.09mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入三乙胺(88.35mg，873.14μmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟膦盐(73.04mg，192.09mmol)，反应液于25℃反应1小时。LCMS显示反应完成，反应液用水(3mL)淬灭，然后用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，将有机相减压浓缩至干，经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/2)得到(2S,4R)-1-[2-[3-[(2,2-二甲氧基乙基)(甲基)氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基 丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(52mg)。
MS m/z(ESI):600.2[M+H] +.
步骤4：(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-[甲基(2-氧代乙基)氨基]异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-[2-[3-[(2,2-二甲氧基乙基)(甲基)氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(50mg，83.37μmol)溶于四氢呋喃(1mL)中，加入盐酸溶液(2M，416.85μL)，反应液在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将反应液用碳酸氢钠水溶液调节pH至8～9，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次,有机相减压浓缩至干，得到(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-[甲基(2-氧代乙基)氨基]异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(34mg)。
MS m/z(ESI):576.2[M+Na] +.
步骤5：(2S,4R)-4-羟基-1-[2-[3-[[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙基]-甲基氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将((2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-[甲基(2-氧代乙基)氨基]异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(34mg，61.41μmol)和2-[3-(甲氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(24.37mg，67.55μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和四氢呋喃(1mL)中，加入乙酸(11.06mg，184.22μmol)，乙酸钠(15.11mg，184.22μmol)和醋酸硼氢化钠(39.04mg，184.22μmol)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。反应液用水(0.2mL)淬灭，减压浓缩至干。经高效液相色谱法(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物(乙腈含量36％-76％)作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-4-羟基-1-[2-[3-[[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]乙基]-甲基氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物284)(9.66mg)。
MS m/z(ESI):862.3[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.98(s,1H),9.01-8.93(m,1H),8.52-8.46(m,1H),8.45-8.23(m,1H),8.12(br d,J＝8.3Hz,1H),7.50-7.39(m,2H),7.39-7.28(m,3H),7.08(br d,J＝4.8Hz,1H),7.02-6.95(m,2H),6.12-5.91(m,1H),5.12(d,J＝3.5Hz,1H),4.96-4.83(m,1H),4.56(br s,1H),4.47-4.34(m,1H),4.28(br s,1H),3.77-3.64(m,1H),3.55(br d,J＝10.0Hz,1H),3.49-3.37(m,2H),3.32-3.21(m,2H),3.05(br s,2H),2.98-2.92(m,3H),2.91-2.83(m,3H),2.45(s,3H),2.32-1.93(m,7H),1.81(br dd,J＝9.0,13.3Hz,3H),1.48-1.31(m,3H),1.03-0.90(m,3H),0.85-0.76(m,3H).
实施例118：化合物302的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000302
将中间体2-1(38.5mg，64.84μmol)和2-(3-(乙氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(26.33mg，77.81μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，25℃加入乙酸钠(15.96mg，194.53μmol)和乙酸(11.68mg，194.53μmol，11.13μL)，反应液在25℃搅拌反应1.5小时。然后加入醋酸硼氢化钠(41.23mg，194.53μmol)，反应液在25℃搅拌反应0.5小时。LCMS显示反应完成。将反 应液减压浓缩，浓缩物经制备液相色谱纯化(Boston Prime C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有氨水0.05％)和乙腈的混合物(乙腈含量55％-75％)作为洗脱液)得化合物302(22.16mg)。
MS m/z(ESI):916.7[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.00(s,1H),8.99(s,1H),8.50(s,1H),8.41(d,J＝7.9Hz,1H),8.13(d,J＝7.5Hz,1H),7.47-7.42(m,2H),7.38(d,J＝8.3Hz,3H),7.08(t,J＝5.6Hz,1H),7.03-6.97(m,2H),6.13(s,1H),5.11(d,J＝3.6Hz,1H),4.96-4.88(m,1H),4.57(br s,1H),4.38(t,J＝8.0Hz,1H),4.29(br s,1H),3.72(br dd,J＝4.4,10.8Hz,1H),3.64(br d,J＝11.9Hz,2H),3.57(d,J＝9.9Hz,1H),3.45-3.41(m,2H),3.00(br d,J＝7.9Hz,2H),2.83-2.72(m,2H),2.46(s,3H),2.22(br d,J＝6.4Hz,4H),2.18-2.08(m,5H),1.87-1.74(m,6H),1.39(d,J＝7.0Hz,3H),1.27(t,J＝7.1Hz,3H),1.17(br d,J＝9.8Hz,2H),0.96(br d,J＝6.5Hz,3H),0.80(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例119：(2S,4R)-4-羟基-1-[(S)-2-[2-[4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物309)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000303
步骤1：4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
将2-[3-(甲基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(270mg，832.36μmol)和4-甲酰基哌啶-1-甲酸叔丁酯(213.02mg，998.83μmol)溶于二氯甲烷(1.5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，25℃加入乙酸(249.92mg，4.16mmol，238.02μL)，反应液在25℃搅拌反应1小时。25℃加入三乙酸氧基硼氢化钠(529.23mg，2.50mmol)，反应液在25℃搅拌反应15分钟。LCMS显示反应完成。反应液用碳酸钠水溶液调节pH＝8，乙酸乙酯萃取三次(20mL)，有机相减压浓缩，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，四氢呋喃/石油醚(四氢呋喃比例0-38％)作为洗脱液)得4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(412mg)。
MS m/z(ESI):522.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝13.99(s,1H),8.50(s,1H),8.52-8.47(m,1H),8.13(dd,J＝1.5,8.4Hz,1H),7.40-7.33(m,1H),7.07(q,J＝4.8Hz,1H),7.03-6.97(m,2H),4.62-4.51(m,1H),3.94(br d,J＝10.1Hz,4H),3.24(t,J＝5.8Hz,1H),2.97(d,J＝4.9Hz,3H),2.80-2.59(m,4H),2.18(br d,J＝5.0Hz,2H),2.14-2.07(m,2H),1.86-1.79(m,2H),1.74-1.69(m,2H),1.62(br d,J＝13.6Hz,2H),1.39(s,9H).
步骤2：2-[3-(甲基氨基)-1-[1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-((4-(6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(412mg，789.80μmol)溶于甲醇(5mL)中，然后加入盐酸二氧六环(4M，1.97mL)，反应液在25℃搅拌反应1小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩得2-[3-(甲基氨基)-1-[1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(332mg)。
MS m/z(ESI):422.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.70(br s,1H),9.21(br s,1H),9.10(br d,J＝7.5Hz,1H),7.91(br s,1H),7.44(br t,J＝7.1Hz,1H),7.15(br d,J＝8.1Hz,1H),7.02(t,J＝7.3Hz,1H),4.96(br t,J＝11.4Hz,1H),3.72(br d,J＝10.9Hz,4H),3.27-3.23(m,3H),3.07(br d,J＝5.1Hz,2H),2.98(s,2H),2.87-2.77(m,4H),2.17-2.01(m,4H),1.76(br d,J＝11.5Hz,2H),1.50(br d,J＝11.8Hz,2H).
步骤3：2-[4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酸叔丁酯的合成
将2-[3-(甲基氨基)-1-[1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(210mg，498.18μmol)和N,N-二异丙基乙胺(193.16mg，1.49mmol，260.32μL)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，在0℃氮气保护下加入溴乙酸叔丁酯(97.17mg，498.18μmol，73.61μL)，反应液在25℃下搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液用水(10mL)稀释，乙酸乙酯萃取三遍(20mL)，有机相减压浓缩，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，四氢呋喃/石油醚(四氢呋喃比例0-46％)作为洗脱液)得2-[4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酸叔丁酯(137mg)。
MS m/z(ESI):536.3[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝14.00(s,1H),8.50(s,1H),8.13(d,J＝7.3Hz,1H),7.40-7.32(m,1H),7.09(br d,J＝5.0Hz,1H),6.99(d,J＝8.0Hz,2H),4.62-4.49(m,1H),3.22(t,J＝5.8Hz,1H),3.06(s,2H),2.96(br d,J＝5.0Hz,4H),2.81(br d,J＝10.5Hz,2H),2.19-2.06(m,8H),1.82(br d,J＝10.3Hz,2H),1.68(brd,J＝12.3Hz,2H),1.41(s,9H),1.36(s,3H).
步骤4：2-[4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酸的合成
将2-[4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酸叔丁酯(137mg，255.75μmol)溶于二氯甲烷(1.5mL)中，25℃下加入三氟乙酸(291.61mg，2.56mmol，189.35μL)，反应液在25℃搅拌反应16小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩得2-[4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酸(122mg)。
MS m/z(ESI):480.5[M+H] +.
步骤5：(2S,4R)-4-羟基-1-[(S)-2-[2-[4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酸(40mg，83.41μmol)和(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(44.50mg，100.09μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，25℃加入N,N-二异丙基乙胺(53.90mg，417.04μmol，72.64μL)和O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟膦盐38.06mg，100.09μmol)，反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩，浓缩物经制备液相色谱纯化(Boston Prime C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有氨水0.05％)和乙腈的混合物(乙腈含量50％-70％)作为洗脱液)得(2S,4R)-4-羟基-1-[(S)-2-[2-[4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]哌啶-1-基]乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物309)(18.57mg)。
MS m/z(ESI):906.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝13.99(br s,1H),8.99(s,1H),8.52-8.42(m,2H),8.13(br d,J＝7.3Hz,1H),7.77(br d,J＝9.6Hz,1H),7.48-7.41(m,2H),7.40-7.31(m,3H),7.07(br d,J＝5.0Hz,1H),7.03-6.95(m,2H),5.14(d,J＝3.4Hz,1H),4.90(q,J＝7.1Hz,1H),4.62-4.41(m,3H),4.29(br s,1H),3.65-3.53(m,2H), 3.06-2.93(m,6H),2.92-2.77(m,3H),2.46(s,3H),2.26-2.02(m,9H),1.88-1.69(m,5H),1.59-1.46(m,1H),1.43-1.31(m,3H),1.25-1.09(m,2H),0.95(s,9H).
实施例120：(2S,4R)-1-[(S)-2-[[2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧基]乙酰氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物211)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000304
步骤1：2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧基乙酸叔丁酯的合成
将2-(2-氯嘧啶-5-基)氧基乙酸叔丁酯(100mg，408.71μmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(126.84mg，408.71μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(158.47mg，1.23mmol)。反应液于120℃搅拌反应16小时，LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干，然后经薄层色谱法纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到标题化合物(45mg)。
MS m/z(ESI):519.4[M+H] +.
步骤2：2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧乙酸的合成
将2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧基乙酸叔丁酯(45mg，86.78μmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入三氟乙酸(462.00mg，4.05mmol)。反应液于25℃搅拌反应16小时，LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干得到标题化合物(74mg)。
MS m/z(ESI):463.1[M+H] +.
步骤4：(2S,4R)-1-[(S)-2-[[2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧基]乙酰氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物211)的合成
将2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧乙酸(64mg，111.02μmol)和(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(42.72mg，88.81μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟膦盐(46.43mg，122.12μmol)和N,N-二异丙基乙胺(71.74mg，555.09μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时，LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(0.1mL)淬灭反应，然后经高效液相色谱(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例16％-56％)的混合物作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[(S)-2-[[2-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧基]乙酰氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(25.93mg)。
MS m/z(ESI):889.7[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.98(s,1H),8.99(s,1H),8.54(s,1H),8.46(d,J＝7.8Hz,1H),8.25(s, 2H),8.08(d,J＝8.3Hz,1H),7.92(d,J＝9.3Hz,1H),7.46-7.35(m,6H),7.01(d,J＝7.8Hz,2H),6.52(s,2H),5.15(s,1H),4.92(t,J＝7.2Hz,2H),4.71(d,J＝13.8Hz,3H),4.66(s,2H),4.58(d,J＝9.3Hz,1H),4.45(t,J＝8.2Hz,1H),4.29(s,1H),3.63-3.55(m,2H),3.06(t,J＝10.9Hz,2H),2.45(s,3H),1.95-1.88(m,3H),1.78(ddd,J＝4.8,8.5,12.8Hz,1H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),0.95(s,9H).
实施例121：化合物331的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000305
步骤1：反式-4-(3-((4-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将哌啶-4-醇(0.94g,9.36mmol)、反式-4-(3-((4-溴吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2g,4.68mmol)、叔丁醇钾(1.05g,9.36mmol)和Ruphos-Pd-G 3(391.27mg，468.02μmol)加入到四氢呋喃(20mL)中。在氮气氛围下反应液于70℃搅拌18h。LCMS显示反应完全。将反应液冷却后倒入水(20mL)中，用乙酸乙酯(30mL*3)萃取，合并有机层并用水(40mL*2)洗涤，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，经柱色谱(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到标题化合物(1.1g)。
MS m/z(ESI):448.3[M+H] +.
步骤2：反式-4-(3-((4-(4-((甲磺酰基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将反式-4-(3-((4-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.1g，2.46mmol)和三乙胺(541mg，4.92mmol)加入到二氯甲烷(5mL)中，冰水浴下加入甲基磺酰氯(561mg，4.92mmol)，反应液于25℃搅拌2h。LCMS显示反应完全。向反应液中加入30mL水稀释，用乙酸乙酯(50mL*3)萃取，合并有机层并用水(40mL*2)洗涤，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，经柱色谱(二氧化硅，乙酸乙酯/石油醚＝5/1)纯化得到标题化合物(600mg)。
MS m/z(ESI):526.3[M+H] +.
步骤3：反式-4-(3-((4-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1))-基)哌啶-1-基)吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(650.24mg，2.40mmol)、反式-4-(3-((4-(4-((甲磺酰基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(700mg，1.33mmol)和碳酸钾(865.58mg，2.66mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，反应液于80℃反应18h。LCMS显示反应完全。向反应液中加入20mL水稀释，用乙酸乙酯(20mL*3)萃取，合并有机层并用水(30mL*2)洗涤，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，经柱色谱(二氧化硅，乙酸乙酯/石油醚＝9/1)纯化得到标题化合物(400mg)。
MS m/z(ESI):701.4[M+H] +.
步骤4：反式-2-(3-氨基-1-(1-(2-(3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基)吡啶-4-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将反式-4-(3-((4-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1))-基)哌啶-1-基)吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(350mg，499.41μmol)加入到甲醇(2mL)和二氯甲烷(2mL)中。室温下向反应液中加入4M的盐酸二氧六环溶液(6mL)。反应液于室温搅拌2小时。LCMS显示反应完全。将反应液浓缩，冰水浴下加入30mL饱和碳酸氢钠水溶液调pH＝8，使用二氯甲烷：甲醇＝10：1(20mL*3)萃取，合并有机层并用水(40mL*2)洗涤，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到标题化合物(270mg)。
MS m/z(ESI):557.3[M+H] +.
步骤5：化合物331的合成
将中间体2-1(20mg，33.69μmol)、反式-2-(3-氨基-1-(1-(2-(3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基)吡啶-4-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(18.75mg，33.69μmol)和乙酸(202.11μg,3.37μmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，冰水浴下加入三乙酰氧基硼氢化钠(28.43mg，134.74μmol)。反应液于50℃搅拌2h。LCMS显示反应完全。将反应液浓缩，然后经制备液相色谱(Phenomenex C18，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.05％碳酸氢铵)和乙腈的混合物(乙腈含量：60％-70％)作为洗脱液)纯化得到化合物331(3mg)。
MS m/z(ESI):1134.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.90(s,1H),8.99(s,1H),8.52(s,1H),8.45–8.38(m,1H),8.13–8.06(m,1H),7.82–7.76(m,1H),7.50–7.40(m,2H),7.42–7.32(m,3H),7.06–6.97(m,2H),6.65–6.58(m,1H),6.47(s,2H),6.22–6.16(m,1H),6.11(s,1H),5.23–5.18(m,1H),5.15–5.10(m,1H),4.95–4.87(m,2H),4.41–4.26(m,4H),4.14–4.06(m,2H),3.73–3.68(m,1H),3.64–3.52(m,3H),3.46–3.41(m,3H),3.11–3.00(m,2H),2.78–2.70(m,2H),2.46(s,3H),2.33–2.28(m,4H),2.14–2.07(m,2H),2.06–1.93(m,4H),1.93–1.85(m,2H),1.82–1.74(m,3H),1.75–1.67(m,2H),1.66–1.61(m,1H),1.48–1.40(m,2H),1.41–1.34(m,3H),1.08–1.02(m,4H),1.00–0.91(m,3H),0.88–0.75(m,3H).
实施例122：化合物332的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000306
步骤1：反式-4-[3-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]嘧啶-5-基]氧基环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-[3-氨基-1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(200mg，536.41μmol)和反式-4-[3-(2-氯嘧啶-5-基)氧基环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(205.91mg，536.41μmol)溶于二甲亚砜(5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(5mL)。反应液在140℃反应48小时，LCMS检测反应完毕。反应液 冷却至室温，加水(15mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL*3)萃取，合并有机相，用硫酸钠干燥，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/1)纯化得到标题化合物(42mg)。
MS m/z(ESI):684.3[M+H] +.
步骤2：反式-2-[3-氨基-1-[8-[5-[3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基]嘧啶-2-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将反式-4-[3-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]嘧啶-5-基]氧基环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(42mg，61.42μmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入盐酸二氧六环(153.55μL，614.22μmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩得到标题化合物(40mg)。
MS m/z(ESI):584.3[M+H] +.
步骤3：化合物332的合成
将反式-2-[3-氨基-1-[8-[5-[3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基]嘧啶-2-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(30mg，48.38μmol)和中间体2-1(25.85mg，43.54μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和四氢呋喃(1mL)中，加入醋酸硼氢化钠(30.76mg，145.13μmol)、醋酸钠(15.87mg，193.50μmol)和醋酸(2.91mg，48.38μmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经制备液相色谱(Phenomenex C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例：57％-97％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物332(7.4mg)。
MS m/z(ESI):1161.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.01(s,1H),8.99(s,1H),8.57(s,1H),8.41(d,J＝7.6Hz,1H),8.19-8.14(m,3H),7.48-7.43(m,2H),7.41-7.36(m,3H),7.05-6.98(m,2H),6.44(s,2H),6.11(s,1H),5.21-5.12(m,1H),5.11(d,J＝3.7Hz,1H),4.92(br t,J＝7.2Hz,1H),4.82(br t,J＝5.2Hz,1H),4.67(br s,2H),4.40-4.32(m,2H),4.28(br s,1H),3.75-3.68(m,1H),3.66-3.54(m,4H),2.78-2.68(m,4H),2.46(s,3H),2.36(br t,J＝5.7Hz,4H),2.26-2.18(m,4H),2.14(br s,6H),2.01(br d,J＝10.1Hz,3H),1.80(br d,J＝8.1Hz,5H),1.71(br d,J＝12.8Hz,3H),1.46(br d,J＝6.8Hz,2H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.10(br d,J＝11.9Hz,2H),0.95(br d,J＝6.6Hz,3H),0.79(d,J＝6.6Hz,3H).
实施例123：化合物333的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000307
步骤1：3-羟基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的合成
将N-Boc-降托品酮(25g，110.97mmol)溶于无水甲醇(300mL)中，在0℃加入硼氢化钠(8.41g，222.22mmol)。反应液在0℃搅拌反应2小时。薄层层析(石油醚：四氢呋喃＝2：1)检测反应完全。将反应液用饱和氯化铵(70mL)淬灭，浓缩后加入乙酸乙酯(50mL)和水(200mL)稀释，然后用乙酸乙酯(60mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干得标题化合物(20g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝4.62-4.49(m,1H),4.08-3.95(m,2H),3.93-3.84(m,1H),3.33(s,1H),2.11(br d,J＝4.0Hz,1H),1.78(br s,4H),1.60(br d,J＝12.3Hz,2H),1.41-1.37(m,9H).
步骤2：3-羟基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸烯丙酯的合成
将3-羟基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(10g，43.99mmol)溶于无水甲醇(50mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，65.99mL)。反应液在25℃搅拌反应4小时。薄层层析(石油醚：四氢呋喃＝3：1，高锰酸钾)检测反应完毕。反应液用减压浓缩至干得粗残物。将粗残物溶于无水四氢呋喃(60mL)和水(30mL)中，加入碳酸钠(8.03g，75.77mmol)，在0℃加入氯甲酸烯丙酯(5.02g，41.68mmol)的四氢呋喃(40mL)溶液。反应液在25℃搅拌反应12小时。薄层层析(石油醚：四氢呋喃＝3：1)检测反应完毕。 将反应液减压浓缩至干，加入乙酸乙酯(20mL)和水(100mL)，然后用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干得标题化合物(2.5g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝6.04-5.82(m,1H),5.27(ddd,J＝1.6,8.5,17.2Hz,1H),5.22-5.14(m,1H),4.63-4.48(m,3H),4.11(br s,2H),3.95-3.85(m,1H),2.15(br d,J＝3.3Hz,1H),1.83(br s,4H),1.64(br d,J＝18.1Hz,2H),1.35(br s,1H).
步骤3：3-((甲基磺酰基)氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸烯丙酯的合成
将3-羟基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸烯丙酯(2.5g，11.83mmol)溶于无水四氢呋喃(25mL)中，加入吡啶(2.87mL，35.50mmol)，在0℃加入甲基磺酸酐(3.09g，17.75mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液。反应液在25℃搅拌反应3小时。薄层层析(石油醚：四氢呋喃＝3：1，高锰酸钾)检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，加入乙酸乙酯(20mL)和水(100mL)，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干得标题化合物(2.8g)。
MS m/z(ESI):290.1[M+H] +.
步骤4：3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-羧酸烯丙酯的合成
将3-((甲基磺酰基)氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸烯丙酯(10g，34.56mmol)溶于二甲基甲酰胺(47mL)中，加入碘化钠(5.18g，34.56mmol)。反应液在25℃搅拌反应1小时后，向反应中加入碳酸铯(15.01g，46.08mmol)和6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(3.91g，23.04mmol)。反应液在80℃搅拌反应15小时。LCMS检测反应完毕。向反应液中加入二氯甲烷(50mL)和水(700mL)，用二氯甲烷(70mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，经柱层析色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得标题化合物(2.5g)。
MS m/z(ESI):363.1[M+H] +.
步骤5：3-[3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氯吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸烯丙酯的合成
将3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-羧酸烯丙酯(2.5g，6.89mmol)溶于二氯甲烷(25mL)中，加入Boc酸酐(4.51g，20.67mmol)、吡啶(2.18g，27.56mmol)和4-二甲氨基吡啶(168.36mg，1.36mmol)。反应液在25℃搅拌反应12小时后。LCMS检测反应完毕。将反应液用水(20mL)洗涤三次，有机相减压浓缩，经柱层析色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得标题化合物(3.01g)。
MS m/z(ESI):563.2[M+H] +.
步骤6：3-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸烯丙酯的合成
将3-[3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-氯吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸烯丙酯(3.01g，5.35mmol)溶于甲醇(8mL)和水(8mL)中，加入氢氧化钠(1.82g，45.44mmol)。反应液在25℃搅拌反应12小时后。LCMS检测反应完毕。向反应液中倒入水(10mL)，用乙酸乙酯(18mL)萃取三次，有机相用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到标题化合物(1.8g，粗品)。
MS m/z(ESI):463.2[M+H] +.
步骤7：(1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将3-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸烯丙酯(1.8g，3.89mmol)和(2-(甲氧基甲氧基)苯基)硼酸(849.11mg，4.67mmol)溶于二氧六环(20mL)和水(20mL)中，加入碳酸钾(1.61g，11.66mmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(635.06mg，777.66μmol)。反应液在80℃搅拌反应15小时后。LCMS检测反应完毕。将反应液浓缩，再用二氯甲烷溶解，过滤，经柱层析色谱纯化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)得到标题化合物(1.8g)。
MS m/z(ESI):481.3[M+H] +.
步骤8：反式-2-(3-氨基-1-(8-(6-3-(哌啶-4-氧基)环丁氧基)吡啶-3-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将(1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基)氨基甲酸叔丁酯(127.03mg，297.27μmol)和反式-4-(3-((5-溴吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(127.03mg，297.27μmol)溶于二氧六环(1mL)中，加入叔丁醇钠(85.71mg，891.81μmol)和甲磺酸(2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(50.32mg，59.45mol)。反应混合物经氮气置换三次，然后在氮气氛围下在110℃下搅拌15小时。将反应液过滤，得到粗残物。将所得粗残物溶于乙酸乙酯(0.5mL)中，加入盐酸的乙酸乙酯溶液(4M，256.29μL)。在25℃下搅拌反应1小时。LCMS监测反应完毕。反应液直接浓缩，经制备型高效液相色谱(Phenomenex C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例：45％-85％)的混合物作为洗脱液)纯化得到标题化合物(25.4mg)。
MS m/z(ESI):583.3[M+H] +.
步骤9：化合物333的合成
将反式-2-(3-氨基-1-(8-(6-(3-(哌啶-4-氧基)环丁氧基)吡啶-3-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(25mg，42.90μmol)和中间体2-1(21.23mg，35.75μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)和四氢呋喃(0.3mL)中，加入乙酸钠(4.40mg，53.63μmol)。25℃下反应半小时后加入醋酸(6.44mg，107.26μmol，6.13μL)和醋酸硼氢化钠(22.73mg，107.26μmol)。在25℃下搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液直接过滤，经制备型高效液相色谱(Phenomenex C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例：57％-97％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物333(2.73mg)。
MS m/z(ESI):581.0[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝8.88(s,1H),8.70(br s,1H),8.43(s,1H),8.26-8.01(m,2H),7.54-7.15(m,5H),7.11-6.95(m,2H),6.80(br d,J＝9.01Hz,1H),6.10(s,1H),4.54-4.37(m,4H),3.94-3.81(m,3H),3.73-3.44(m,7H),2.93-2.73(m,4H),2.52(br s,1H),2.49(s,3H),2.47-2.34(m,4H),2.24(br d,J＝6.88Hz,2H),2.20-2.03(m,7H),1.94-1.78(m,4H),1.66-1.57(m,3H),1.53(br d,J＝7.13Hz,3H),1.45-1.14(m,8H),1.11-0.80(m,6H).
实施例124：化合物334-1的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000308
步骤1：外型-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-醇盐酸盐的合成
向外型-3-羟基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(4g,17.6mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入盐酸二氧六环(4M,8.00mL)，混合物在25℃搅拌2小时。将混合物浓缩至干，残余物用乙醚打浆，真空干燥，得到标题化合物(2.88g)。
MS m/z(ESI):128.2[M+H] +.
步骤2：外型-3-羟基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸苄酯的合成
向外型-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-醇盐酸盐的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三乙胺(890mg，8.80mmol,1.23mL)和氯甲酸苄酯(564mg，3.30mmol)，混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用二氯甲烷稀释，用水和盐水洗涤，干燥并浓缩至干得到粗产物，将其经柱层析(二氧化硅，二氯甲烷：甲醇＝20：1)纯化得到标题化合物(340mg)。
MS m/z(ESI):262.1[M+H] +.
步骤3：外型-3-甲基磺酰氧基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的合成
向外型-3-羟基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸苄酯(340mg，1.30mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)中加入甲磺酰氯(223mg，1.95mmol)和三乙胺(394mg，3.9mmol)。将混合物在室温搅拌3小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。残余物通过硅胶色谱法纯化(二氧化硅，二氯甲烷:甲醇＝20:1)，得到标题化合物(330mg)。
MS m/z(ESI):340.1[M+H] +.
步骤4：内型-3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的合成
向6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(2.4g,11.65mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入外型-3-甲基磺酰氧基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(2.77g，8.15mmol)和碳酸铯(15.14g，46.59mmol)。将混合物在80℃搅拌16小时。混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。残余物通过硅胶色谱法纯化(二氧化硅，石油醚:乙酸乙酯＝1:2)，得到标题化合物(3g)。
MS m/z(ESI):413.1[M+H] +.
步骤5：内型-3-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的合成
将内型-3-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(3g，5.81mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入二碳酸二叔丁酯(5.07g，23.25mmol)、三乙胺(1.76g，17.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(1.42g，11.63mmol)，反应液于25℃搅拌反应12小时。反应液经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚:乙酸乙酯＝2:1)纯化得到标题化合物。
MS m/z(ESI):613.1[M+H] +.
步骤6：内型-3-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的合成
将内型-3-[3-[双(叔丁氧羰基)氨基]-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(1.9g，3.10mmol)溶于甲醇(20mL)中，加入碳酸钾(1.28g，9.30mmol)。将混合物在80℃搅拌1小时。混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。残余物通过硅胶色谱法纯化(二氧化硅，石油醚:乙酸乙酯＝1:1)，得到标题化合物(1.4g)。
MS m/z(ESI):513.2[M+H] +.
步骤7：内型-3-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯的合成
将内型-3-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(1.4g,2.73mmol)和[2-(甲氧基甲氧基)苯基]硼酸(744mg，4.09mmol)溶解于二氧六环(20mL)和水(5mL)中，向其中加入磷酸钾(1.74g,8.19mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(222mg，272μmol)。混合物用氮气置换3次并在氮气氛围下在80℃搅拌12小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，干燥并浓缩至干得到粗产物，残余物通过硅胶色谱法纯化(二氧化硅，石油醚:乙酸乙酯＝1:1)得到标题化合物(1.5g)。
MS m/z(ESI):615.2[M+H] +.
步骤8：(1-(内型-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将内型-3-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸苄酯(820mg，1.33mmol)溶于甲醇(10mL)中，向其中加入钯碳(70mg，10％wt)，将混合物置换氢气3次并在氢气球下于室温下搅拌12小时。过滤混合物并将滤液浓缩至干得到粗产物，残余物通过硅胶色谱法纯化(二氧化硅，二氯甲烷：甲醇＝10：1)得到标题化合物(442mg)。
MS m/z(ESI):481.2[M+H] +.
步骤9：4-[反式-3-[[4-[内型-3-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
在氮气氛围下，向(1-(内型-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，416μmol)和4-[(1r,3r)-3-[(4-溴吡啶-2-基)氧基]环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(177.85mg，416μmol)的二氧六环(10mL)溶液中加入甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(51mg，62μmol)和叔丁醇钾(139mg，1.25mmol)。将混合物用氮气置换3次并在氮气氛围下于100℃搅拌12小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，干燥并浓缩至干，得到粗产物，将其用快速色谱法(二氧化硅，石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得到标题化合物(100mg)。
MS m/z(ESI):827.4[M+H] +.
步骤10：2-[3-氨基-1-[内型-8-[2-[反式-3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基]吡啶-4-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[反式-3-[[4-[内型-3-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(180mg，217μmol)溶于二氯甲烷(5mL)和甲醇(1mL)，向其加入盐酸二氧六环(4M,1mL)，并在25℃下搅拌2小时。将反应液旋干，用二氯甲烷和碳酸氢钠水溶液萃取，有机相干燥旋干得到标题化合物(105mg)。
MS m/z(ESI):583.2[M+H] +.
步骤11：化合物334的合成
将2-[3-氨基-1-[内型-8-[2-[反式-3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基]吡啶-4-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(40mg，68.65μmol)和(2S,4R)-1-[(2R)-2-[3-(4-甲酰基-1-哌啶基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(40.76mg，68.65μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，向其中加入醋酸(4.12mg，68μmol)和醋酸硼氢化钠(43mg，205μmol)，并将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物过滤并通过制备型HPLC(Phenomenex C18，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.05％碳酸氢铵)和乙腈的混合物(乙腈含量：60％-70％)作为洗脱液)纯化，得到化合物334-1(33mg)。
MS m/z(ESI):1160.6[M+H] +；
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ13.83(s,1H),9.02–8.97(m,1H),8.44–8.39(m,1H),8.26(s,1H),8.06–8.00(m,1H),7.82–7.77(m,1H),7.47–7.43(m,2H),7.38–7.32(m,3H),7.00–6.94(m,2H),6.56–6.51(m,1H),6.51–6.47(m,2H),6.14–6.09(m,2H),5.25–5.20(m,1H),5.13–5.10(m,1H),4.94–4.90(m,1H),4.70–4.64(m,1H),4.39–4.34(m,3H),4.33–4.27(m,2H),3.73–3.69(m,1H),3.63–3.59(m,2H),3.57–3.55(m,1H),3.44–3.40(m,2H),2.76–2.65(m,4H),2.57–2.55(m,1H),2.48–2.45(m,3H),2.37–2.27(m,4H),2.23–2.16(m,3H),2.13–2.08(m,2H),2.06–1.87(m,8H),1.82–1.76(m,3H),1.74–1.68(m,2H),1.68–1.59(m,1H),1.47–1.40(m,2H),1.40–1.36(m,3H),1.14–1.05(m,2H),0.98–0.92(m,3H),0.82–0.74(m,3H).
实施例125：化合物334-2的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000309
步骤1：4-(反式-3-((4-(内型-3-羟基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将内型-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-醇(1.18g,9.36mmol)、4-(反式-3-((4-溴吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2g,4.68mmol)、叔丁醇钾(1.05g,9.36mmol)和Ruphos-Pd-G 3(391.27mg，468.02μmol)加入到四氢呋喃(20mL)中。反应液在氮气氛围下于70℃搅拌18h。LCMS显示反应完全。将反应液冷却后倒入水(20mL)中，用乙酸乙酯(30mL*3)萃取，合并有机层并用水(40mL*2)洗涤，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，经柱色谱(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到标题化合物(400mg)。
MS m/z(ESI):474.2[M+H] +.
步骤2：4-(反式-3-((4-(内型-3-((甲基磺酰基)氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(反式-3-((4-(内型-3-羟基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(380.00mg，802.36μmol)和三乙胺(243.57mg，2.41mmol)加入到二氯甲烷(5mL)中，冰水浴下加入甲磺酰氯(183.82mg，1.60mmol)，反应液于25℃搅拌2h。LCMS显示反应完全。向反应液中加入30mL水稀释，用乙酸乙酯(50mL*3)萃取，合并有机层并用水(40mL*2)洗涤，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，经柱色谱(二氧化硅，乙酸乙酯/石油醚＝5/1)纯化得到)标题化合物(300mg)。
MS m/z(ESI):552.3[M+H] +.
步骤3：4-(反式-3-((4-(外型-3-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(221.27mg，815.67μmol)、4-(反式-3-((4-(内型-3-((甲基磺酰基)氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(300.00mg，543.78μmol)和碳酸钾(353.46mg，1.09mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，反应液于80℃反应18h。LCMS显示反应完全。向反应液中加入20mL水稀释，用乙酸乙酯(20mL*3)萃取，合并有机层并用水(20mL*2)洗涤，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，经柱色谱(二氧化硅，乙酸乙酯/石油醚＝9/1)纯化得到标题化合物(55mg)。
MS m/z(ESI):727.4[M+H] +.
步骤4：2-(3-氨基-1-(外型-8-(2-(反式-3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基)吡啶-4-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-(反式-3-((4-(外型-3-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(52mg，71.54μmol)溶于二氯甲烷(1mL)和甲醇(1mL)中，室温下加入4M HCl的二氧六环溶液(1mL)。反应液于室温搅拌2h。LCMS显示反应完成。将反应液直接减压浓缩得到标题化合物(62mg)。
MS m/z(ESI):583.3[M+H] +.
步骤5：化合物334-2的合成
将中间体2-1(40mg，48.05μmol)、2-(3-氨基-1-(外型-8-(2-(反式-3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基)吡啶-4-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(35.66mg，48.05μmol)和乙酸(514.85μg,4.81μmol)加入到四氢呋喃(1mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。反应液于50℃搅拌2h。LCMS显示反应完全。将反应液浓缩，然后经制备液相色谱纯化(Phenomenex C18，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.05％碳酸氢铵)和乙腈的混合物(乙腈含量：60％-70％)作为洗脱液)纯化得到化合物334-2(4mg)。
MS m/z(ESI):1060.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ14.03(s,1H),8.98(s,1H),8.56(s,1H),8.44–8.37(m,1H),8.17–8.10(m,1H),7.82–7.76(m,1H),7.55–7.29(m,5H),7.07–6.96(m,2H),6.54–6.46(m,3H),6.13–6.07(m,2H),5.26–5.19(m,1H),5.14–5.08(m,2H),4.96–4.87(m,1H),4.48–4.43(m,2H),4.39–4.24(m,3H),4.15–4.07(m,2H),3.76–3.68(m,1H),3.65–3.52(m,3H),3.20–3.14(m,6H),2.78–2.65(m,4H),2.48–2.43(m,3H),2.39–2.25(m,4H),2.25–2.15(m,4H),2.15–2.05(m,4H),2.05–1.89(m,2H),1.84–1.67(m,5H),1.49–1.35(m,4H),1.14–1.06(m,2H),1.00–0.92(m,3H),0.89–0.76(m,3H).
实施例126：化合物340的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000310
步骤1：4-(反式-3-((2-(甲硫基)嘧啶-5-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将5-溴-2-(甲硫基)嘧啶(1.13g,5.53mmol)、4-(反式-3-羟基环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.84mmol)、碳酸铯(1.20g，3.69mmol)和甲磺酸-2-(二叔丁基膦基)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(155.70mg，184.26μmol)加入到甲苯(8mL)中，在氮气氛围下反应液于100℃搅拌18h。LCMS显示反应完全。将反应液冷却后倒入水(20mL)中，用乙酸乙酯(30mL*3)萃取，合并有机层并用水(40mL*2)洗涤，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝3/2)纯化得到标题化合物(166mg)。
MS m/z(ESI):396.2[M+H] +.
步骤2：4-(反式-3-((2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(反式-3-((2-(甲硫基)嘧啶-5-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg，252.83μmol)加入到四氢呋喃(3mL)中，将过氧单磺酸钾(621.97mg，1.01mmol)溶于H 2O(5mL)然后在0℃下缓慢滴加到反应液中。反应液于室温搅拌3h。LCMS显示反应完全。向反应液中加入5mL饱和亚硫酸钠溶液淬灭，乙酸乙酯萃取(15mL*3)，干燥、过滤，滤液浓缩得到标题化合物(103mg)。
MS m/z(ESI):450.2[M+Na] +.
步骤3：4-(反式-3-((2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(反式-3-((2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg，116.96μmol)、哌啶-4-醇(236.59mg，2.34mmol)和碳酸钾(161.40mg，1.17mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)和乙腈(2mL)中，反应液于100℃搅拌18h。LCMS显示反应完成。将反应液冷却至室温，加入15mL水稀释，乙酸乙酯萃取(20mL*3)，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝3/2)纯化得到标题化合物(10mg)。
步骤4：4-(反式-3-((2-(4-((甲磺酰基)氧基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(反式-3-((2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(420mg，936.34μmol)和三乙胺(284.25mg，2.81mmol)加入二氯甲烷(5mL)中，冰水浴下加入甲基磺酰氯(214.52mg，1.87mmol)。反应液室温搅拌2小时。LCMS显示反应完全。加入30mL水稀释，乙酸乙酯萃取(30mL*3)，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到标题化合物(40mg)。
步骤5：4-(反式-3-((2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1)-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(29.36mg，108.23μmol)、4-(反式-3-((2-(4-((甲磺酰基)氧基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(38mg，72.15μmol)和碳酸铯(70.35mg，216.46μmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。反应液于80℃搅拌18h。LCMS显示反应完全。加入30mL水稀释，乙酸乙酯萃取(30mL*3)，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/9)纯化得到标题化合物(23mg)。
MS m/z(ESI):702.4[M+H] +.
步骤6：2-(3-氨基-1-(1-(5-(反式-3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-(反式-3-((2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1)-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(20mg，28.50μmol)加入到二氯甲烷(0.3mL)和甲醇(0.1mL)中，室温下加入4M HCl二氧六环溶液(2mL)。反应液于25℃搅拌1h。LCMS显示反应完全。将反应液浓缩，冰水浴下加入30mL饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝8，使用二氯甲烷：甲醇＝10：1(20mL*3)萃取，合并有机层并用水(40mL*2)洗涤，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到标题化合物(23mg)。
MS m/z(ESI):558.3[M+H] +.
步骤7：化合物340的合成
将2-(3-氨基-1-(1-(5-(反式-3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(20mg，35.87μmol)、中间体2-1(17.04mg，28.69μmol)和乙酸(215.19μg，3.59μmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，冰水浴下加入三乙酰氧基硼氢化钠(30.41mg，143.46μmol)。反应液于50℃搅拌2h。LCMS显示反应完全。将反应液浓缩，然后经制备液相色谱(Phenomenex C18，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.05％碳酸氢铵)和乙腈的混合物(乙腈含量：60％-70％)作为洗脱液)纯化得到化合物340(1.5mg)。
MS m/z(ESI):1135.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.87(s,1H),8.28(s,1H),8.05(s,2H),8.04–7.98(m,1H),7.48–7.31(m,5H),7.04–6.95(m,2H),6.10(s,1H),5.08–4.98(m,2H),4.63–4.38(m,5H),3.89–3.79(m,2H),3.78–3.66(m,3H),3.65–3.58(m,4H),3.21–3.07(m,4H),2.94–2.83(m,3H),2.82–2.75(m,1H),2.49–2.28(m,7H),2.21–2.10(m,4H),2.06–1.90(m,5H),1.90–1.72(m,4H),1.56–1.46(m,2H),1.41–1.23(m,4H),1.08–1.02(m,3H),0.92–0.85(m,3H).
实施例127：化合物346的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000311
步骤1：4-[反式-3-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧基环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-[3-(异丙氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(300mg，771.42μmol)和4-[反式-3-(2-氯嘧啶-5-基)氧基环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(325.74mg，848.56μmol)溶于二甲亚砜(3mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(498.50mg，3.86mmol)。反应在140℃反应16小时，LCMS检测反应完毕。反应液冷却至室温，加水(15mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL*3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到标题化合物(150mg)。
MS m/z(ESI):700.4[M+H] +.
步骤2：2-[3-(异丙氨基)-1-[1-[5-[反式-3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基]嘧啶-2-基]哌啶-4-基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[反式-3-[2-[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧基环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(150mg，214.33μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入盐酸二氧六环(535.84μL，2.14mmol)。反应液在25℃反应12小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，得到标题化合物(150mg，235.78μmol)。
MS m/z(ESI):600.2[M+H] +.
步骤3：化合物346的合成
将2-[3-(异丙氨基)-1-[1-[5-[反式-3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基]嘧啶-2-基]哌啶-4-基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(30mg，47.16μmol)和中间体2-1(28.00mg，47.16μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入醋酸硼氢化钠(29.98mg，141.47μmol)、醋酸钠(15.47mg，188.62μmol)和醋酸(2.83mg，47.16μmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经制备液相色谱(Phenomenex C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减(乙腈比例28％-68％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物346(13.01mg)。
MS m/z(ESI):1177.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.95(br s,1H),9.01-8.98(m,1H),8.52(s,1H),8.41(d,J＝7.5Hz,1H),8.14-8.11(m,3H),7.48-7.43(m,2H),7.39-7.35(m,3H),7.03-6.99(m,2H),6.90(d,J＝7.8Hz,1H),6.11(s,1H),4.94-4.85(m,2H),4.81(t,J＝5.3Hz,1H),4.74(br d,J＝12.3Hz,2H),4.40-4.28(m,3H),4.00(dd,J＝6.5,14.1Hz,1H),3.72(br d,J＝5.8Hz,1H),3.59(br dd,J＝10.5,19.1Hz,2H),3.11-3.02(m,2H),2.76-2.69(m,2H),2.46(s,3H),2.34(br t,J＝5.5Hz,5H),2.28-2.15(m,2H),2.11(br d,J＝6.8Hz,2H),2.05-1.93(m,8H),1.85-1.74(m,4H),1.74-1.58(m,4H),1.49-1.42(m,2H),1.38(br d,J＝7.0Hz,3H),1.24(d,J＝6.5Hz,6H),1.10(br d,J＝10.3Hz,3H),0.98-0.93(m,3H),0.82-0.76(m,3H).
实施例128：化合物366的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000312
步骤1：6-氯-N-异丙基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺的合成
将6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(100mg,589μmol)和丙酮(205mg,3.54mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入醋酸(0.1mL)和三乙酰基硼氢化钠(749mg,3.54mmol)。将混合物于室温下搅拌3小时。将反应液用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，干燥并浓缩至干，得到粗产物，将其用快速柱层析色谱法(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝1：1)纯化得到标题化合物(40mg)。
MS m/z(ESI):212.1[M+H] +.
步骤2：N-异丙基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺的合成
将6-氯-N-异丙基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(30mg,141.74μmol)和[2-(甲氧基甲氧基)苯基]硼酸(38mg,212μmol)溶于二氧六环(1mL)和水(0.2mL)中，加入磷酸钾(90mg,425μmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(9.95mg,14.17μmol)。混合物用氮气置换3次，在氮气氛围下80℃搅拌12小时。将混合物用乙酸乙酯(40mL)稀释，用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，干燥并浓缩至干得到粗产物，残余物通过硅胶柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝1：1)得到标题化合物(40mg)。
MS m/z(ESI):314.1[M+H] +.
步骤3：4-[反式-3-[[4-[4-[3-(异丙基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[反式-3-[[4-(4-甲磺酰氧基哌啶-1-基)吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(550mg，1.05mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，加入N-异丙基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(393.44mg，1.26mmol)和碳酸铯(1.02g,3.14mmol)。将混合物在80℃搅拌16小时。过滤混合物并浓缩至干，将残余物通过制备高效液相色谱(色谱柱：Gemini NX C18 5μm*10*150mm；流动相：A:0.05％TFA v/v,B:乙腈；B％:40％-45％,12min)纯化，得到标题化合物(800mg)。
MS m/z(ESI):743.4[M+H] +.
步骤4：2-[3-(异丙氨基)-1-[1-[2-[反式-3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基]吡啶-4-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[反式-3-[[4-[4-[3-(异丙基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(30mg，40.38μmol)溶于甲醇(0.5mL)和二氯甲烷(2mL)中，向其加入盐酸二氧六环(4M,1mL)，并将反应液在25℃搅拌2小时。将混合物浓缩至干，残余物用乙醚洗涤并真空干燥，得到标题化合物(30mg)。
MS m/z(ESI):599.3[M+H] +.
步骤5：化合物366的合成
将2-[3-(异丙氨基)-1-[1-[2-[反式-3-(哌啶-4-基氧基)环丁氧基]吡啶-4-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(15mg，25.05μmol)和中间体2-1(17.85mg，30.06μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，向其加入乙酸(1.50mg，25.05μmol)和三乙酰基硼氢化钠(15.93mg，75.16μmol)。将混合物在室温搅拌16小时。将混合物浓缩至干，残余物通过薄层色谱法纯化(二氧化硅，二氯甲烷:甲醇＝10:1)得 到化合物366(9.8mg)。
MS m/z(ESI):1176.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.72–9.57(m,1H),9.00(s,1H),8.51(s,1H),8.43(d,J＝7.6Hz,1H),8.00(d,J＝7.9Hz,1H),7.93(d,J＝7.3Hz,1H),7.49–7.31(m,6H),7.17–7.00(m,3H),6.96(d,J＝7.5Hz,1H),6.32(s,1H),6.17(s,1H),5.31–5.26(m,1H),5.09–4.87(m,3H),4.45–4.26(m,6H),4.01–3.93(m,2H),3.05–2.88(m,5H),2.84–2.71(m,3H),2.46(s,3H),2.12–1.95(m,10H),1.83–1.74(m,4H),1.40–1.36(m,3H),1.27–1.20(m,14H),0.97–0.92(m,3H),0.80–0.76(m,3H).
实施例129：化合物375的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000313
将2-[3-(环丙氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(25.05mg，64.74μmol)和中间体11(35mg，64.74μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和四氢呋喃(1mL)中，加入乙酸钠(21.24mg，258.96μmol)、乙酸(3.89mg，64.74μmol)和醋酸硼氢化钠(41.16mg，194.22μmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经制备液相色谱(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减(乙腈比例14％-54％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物375(16.20mg)。
MS m/z(ESI):875.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.98(br s,1H),8.99(s,1H),8.51(s,1H),8.43(d,J＝7.8Hz,1H),8.13(d,J＝7.0Hz,1H),7.49-7.41(m,3H),7.40-7.35(m,3H),7.07-6.96(m,2H),6.18-5.94(m,1H),4.92-4.88(m,1H),4.70-4.55(m,1H),4.38(t,J＝7.9Hz,1H),4.30(br s,3H),3.76-3.63(m,2H),3.46(br d,J＝10.3Hz,2H),3.08(br d,J＝9.8Hz,2H),2.86-2.73(m,3H),2.46(s,3H),2.31-2.16(m,5H),2.08-1.99(m,1H),1.91-1.75(m,3H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.00-0.94(m,3H),0.86-0.79(m,3H),0.77-0.69(m,2H),0.63-0.53(m,2H).
实施例130：化合物378的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000314
将2-氯-6-[3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(25.0mg，59.1μmol)和中间体2-1(31.9mg，53.7μmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入乙酸钠(13.2mg，161μmol)、醋酸(9.67mg，161μmol)和醋酸硼氢化钠(34.1mg，161μmol)，反应在25℃搅拌反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液过滤，滤液经制备液相色谱(Boston Prime C18，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的混合物(乙腈比例65％-85％)作为洗脱液)纯化得到化合物378(18.24mg)。
MS m/z(ESI):964.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝15.56(s,1H),8.98(s,1H),8.60(s,1H),8.42(d,J＝7.8Hz,1H),8.15(d,J＝8.3Hz,1H),7.54(d,J＝7.0Hz,1H),7.49-7.41(m,2H),7.40-7.32(m,2H),7.11-6.94(m,2H),6.19-5.95(m,1H),5.18-5.00(m,1H),4.91(m,J＝6.9Hz,1H),4.65-4.51(m,1H),4.36(t,J＝7.8Hz,1H),4.28(s,1H),4.01(qd,J＝6.6,13.6Hz,1H),3.71(dd,J＝4.1,10.4Hz,1H),3.63(d,J＝11.5Hz,2H),3.56(d,J＝10.0Hz,1H),3.47-3.40(m,1H),3.00(d,J＝8.3Hz,2H),2.75(t,J＝11.2Hz,2H),2.45(s,3H),2.26-1.98(m,8H),1.90-1.66(m,6H),1.51-1.33(m,3H),1.28(d,J＝6.3Hz,6H),1.15(d,J＝12.0Hz,2H),1.01-0.90(m,3H),0.87-0.75(m,3H).
实施例131：化合物386的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000315
步骤1：4-(4-氯吡啶-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-溴-4-氯-吡啶(1g，5.20mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.61g，5.20mmol)溶于二氧六环(8mL)和水(2mL)中，加入1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(76.04mg，103.93μmol)和碳酸钠(1.65g，15.59mmol)。反应液在氮气氛围下90℃反应4小时，LCMS检测反应完毕。反应液冷却至室温，过滤，滤液加水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL*3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化得到标题化合物(1.5g)。
MS m/z(ESI):239.0[M+H-56] +.
步骤2：4-(4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯的合成
将(6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，660.04μmol)和4-(4-氯-2-吡啶基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(214.02mg，726.04μmol)溶于二氧六环(8mL)中，加入(2-二环己基膦基-2,6-二异丙氧基-1,1-联苯基)[2-(2-氨基-1,1-联苯基)]钯(II)(55.20mg，66.00μmol)和叔丁醇钾(222.19mg，1.98mmol)。反应液在氮气下100℃反应12小时，LCMS检测反应完毕。反应液冷却至室温，过滤，滤液加水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL*3)萃取，合并有机相， 无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/2)纯化得到标题化合物(190mg)。
MS m/z(ESI):713.4[M+H] +.
步骤3：4-[4-[4-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-2-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(190mg，266.54μmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，加入湿钯碳(100mg，26.65μmol)。反应液在15psi氢气下25℃反应6小时，LCMS检测反应完全。反应液过滤，滤液浓缩得到粗品，粗品加甲醇(5mL)溶解，加入二氯二氰基苯醌(90.76mg，399.81μmol)，在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/1)纯化得到标题化合物(150mg)。
MS m/z(ESI):717.2[M+H] +.
步骤4：2-[3-氨基-1-[1-[2-(哌啶-4-基)吡啶-4-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[4-[4-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-2-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(150mg，209.83μmol)溶于甲醇(3mL)中，加入盐酸二氧六环(524.58μL，2.10mmol)。反应液在25℃反应12小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，得到标题化合物(140mg)。
MS m/z(ESI):471.2[M+H] +.
步骤5：化合物386的合成
将2-[3-氨基-1-[1-[2-(哌啶-4-基)吡啶-4-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(30mg，59.17μmol)和中间体2-1(31.62mg，53.25μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和四氢呋喃(1mL)中，加入醋酸硼氢化钠(37.62mg，177.50μmol)、醋酸钠(19.42mg，236.67μmol)和醋酸(3.55mg，59.17μmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经制备液相色谱(Boston Prime C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例44％-84％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物386(13.2mg)。
MS m/z(ESI):1048.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.90(br s,1H),8.99(s,1H),8.52(s,1H),8.41(d,J＝7.7Hz,1H),8.13-8.08(m,2H),7.48-7.42(m,2H),7.40-7.34(m,3H),7.04-6.99(m,2H),6.81-6.72(m,2H),6.47(s,2H),6.12(s,1H),5.12(br d,J＝3.1Hz,1H),4.96-4.85(m,2H),4.37(t,J＝7.9Hz,1H),4.29(br s,1H),4.17(br d,J＝12.8Hz,2H),3.71(br dd,J＝4.2,10.5Hz,1H),3.63(br d,J＝11.5Hz,2H),3.56(br d,J＝9.9Hz,1H),3.06(brt,J＝12.0Hz,2H),2.95(br d,J＝10.1Hz,2H),2.75(br t,J＝11.3Hz,2H),2.46(s,3H),2.26-2.15(m,3H),2.09-1.89(m,8H),1.85-1.66(m,9H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.13(br d,J＝10.5Hz,2H),0.99-0.92(m,3H),0.86-0.76(m,3H).
实施例132：化合物394的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000316
步骤1：4-[[(4-溴吡啶-2-羰基)氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-溴吡啶-2-甲酸(2g，9.90mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(80mL)中，加入4-氨甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.12g，9.90mmol)、O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟膦盐(4.52g，11.88mol)和N,N-二异丙基乙胺(5.17mL，29.70mmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。加入水(200mL)，用乙酸乙酯(200mL)萃取该反应混合物两次，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干。经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)纯化得标题化合物(3.06g)。
MS m/z(ESI):341.9,343.9[M+H-56] +；
步骤2：4-((4-(4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)))哌啶-1-基)吡啶酰胺)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将(6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，440.02μmol)和4-[[(4-溴吡啶-2-羰基)氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(210.31mg，528.03μmol)溶于甲苯(2mL)中，加入碳酸铯(200.72mg，616.03μmol)、(R)-(+)-2,2-双(二苯膦基)-1,1-联萘(54.80mg，88.00μmol)和醋酸钯(19.76mg，88.00μmol)。反应液在氮气下100℃反应16小时，LCMS检测反应完毕。反应液冷却至室温，过滤，滤液用水(15mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL*3)萃取，合并有机相，干燥，过滤，滤液浓缩，经薄层色谱(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/1)纯化得到标题化合物(50mg)。
MS m/z(ESI):772.2[M+H] +.
步骤3：4-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)-N-(哌啶-4-基甲基)吡啶酰胺的合成
将4-((4-(4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)吡啶酰胺)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg，64.77μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入盐酸二氧六环(161.94μL，647.75μmol)。反应液在25℃反应12小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，得到标题化合物(50mg)。
MS m/z(ESI):528.5[M+H] +.
步骤4：化合物394的合成
将4-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)-N-(哌啶-4-基甲基)吡啶酰胺(30mg，53.18μmol)和中间体2-1(31.58mg，53.18μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和四氢呋喃(1mL)中，加入醋酸硼氢化钠(45.09mg，212.74μmol)、醋酸钠(21.81mg，265.92μmol)和醋酸(3.19mg，53.18μmol)。反应液在25℃反应2小时，LCMS检测反应完毕。反应液浓缩，经制备液相色谱(PhenomenexC18：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减(乙腈比例6％-46％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物394(8.66mg)。
MS m/z(ESI):1105.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.88(s,1H),8.99(s,1H),8.67(br t,J＝6.0Hz,1H),8.52(s,1H),8.41(d,J＝7.5Hz,1H),8.24(d,J＝6.0Hz,1H),8.10(d,J＝7.5Hz,1H),7.52(s,1H),7.44(d,J＝8.3Hz,2H),7.40-7.35(m,3H),7.09(br d,J＝3.5Hz,1H),7.05-6.99(m,2H),6.47(s,2H),6.11(s,1H),4.96-4.88(m,2H),4.37(t,J＝7.7Hz,1H),4.29(s,1H),4.22(br d,J＝13.3Hz,2H),3.72(br d,J＝6.0Hz,1H),3.63-3.55(m,2H),3.21-3.12(m,3H),2.83(br d,J＝9.5Hz,2H),2.73(br t,J＝10.8Hz,2H),2.46(s,3H),2.28-2.10(m,5H),2.07-1.97(m,5H),1.91-1.76(m,4H),1.71(br d,J＝11.5Hz,3H),1.61(br d,J＝12.8Hz,3H),1.38(d,J＝7.3Hz,3H),1.24-1.08(m,5H),0.95(br d,J＝6.5Hz,3H),0.82-0.77(m,3H).
实施例133：化合物398的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000317
步骤1：2-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]乙酸乙酯的合成
在0℃下将4-(二甲氧基甲基)哌啶(5g，31.40mmol)溶于乙腈(100mL)中，加入溴乙酸乙酯(6.29g，37.68mmol)和N,N-二异丙基乙胺(16.41mL，94.21mmol)。反应液在25℃搅拌反应5小时。LCMS检测反应完毕。反应液体减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(石油醚：四氢呋喃＝1：1)得标题化合物(3.64g)。
MS m/z(ESI):246.2[M+1] +.
步骤2：2-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]乙酸的合成
将2-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]乙酸乙酯(3.64g，14.84mmol)溶于无水四氢呋喃(15mL)和水(15mL)中，加入一水合氢氧化锂(1.87g，44.51mmol)，反应液升温至25℃，搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。向反应液滴加稀盐酸(1.5M)至pH＝6，减压浓缩至干，得到标题化合物(3.22g，粗品)。
MS m/z(ESI):217.9[M+H] +.
步骤3：(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]乙酸(1.45g，6.65mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(3.2g，6.65mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(1.53g,7.98mmol)和吡啶(15mL)。在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氯甲烷：甲醇＝10：1)得到标题化合物(2g)。
MS m/z(ESI):644.3[M+H] +；
步骤4：(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-甲酰基哌啶-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-(二甲氧基甲基)哌啶-1-基]乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1g，1.55mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，加入稀盐酸(4.66mL，2M)，在50℃下搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕，向反应混合物加入碳酸氢钠固体至pH＝8，加入水(8mL),水相用乙酸乙酯(20mL)萃取两次，加入无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干,得到标题化合物(750mg)。
MS m/z(ESI):598.3[M+H] +
步骤5：化合物398的合成
将(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-甲酰基哌啶-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(45mg，75.28μmol)和2-(3-(乙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(31.04mg，82.81μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙酸(13.56mg，225.84μmol)和乙酸钠(12.35mg，150.56μmol)，反应液于25℃反应1小时，加入醋酸硼氢化钠(47.86mg，225.84μmol)，然后在25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。往反应液中加入水(0.2mL)淬灭反应。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例45％-85％)的混合物作为洗脱液)得到化合物398(20.81mg)。
MS m/z(ESI):920.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ14.00(s,1H),8.98(s,1H),8.49(s,1H),8.45(d,J＝7.5Hz,1H),8.12(d,J＝7.0Hz,1H),7.76(d,J＝9.5Hz,1H),7.47-7.41(m,2H),7.40-7.32(m,3H),7.07(t,J＝5.5Hz,1H),7.03-6.96(m,2H),5.13(d,J＝3.5Hz,1H),4.89(t,J＝7.2Hz,1H),4.61-4.40(m,3H),4.28(br s,1H),3.66-3.52(m,2H),3.42(br d,J＝6.0Hz,2H),3.05-2.94(m,3H),2.91-2.77(m,3H),2.45(s,3H),2.23-2.03(m,9H),1.88-1.70(m,5H),1.53(br s,1H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.26(t,J＝7.0Hz,3H),1.21-1.10(m,2H),0.94(s,9H).
实施例134：化合物400的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000318
将(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-甲酰基哌啶-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(45mg，75.28μmol)和2-(1-(哌啶-4-基)-3-(丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(32.20mg，82.81μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙酸(13.56mg，225.84μmol)和乙酸钠(12.35mg，150.56μmol)，反应液于25℃反应1小时，加入醋酸硼氢化钠(47.86mg，225.84μmol)，然后在25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。往反应液中加入水(0.2mL)淬灭反应。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例48％-88％)的混合物作为洗脱液)得到化合物400(29.32mg)。
MS m/z(ESI):934.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ14.00(s,1H),8.98(s,1H),8.51-8.42(m,2H),8.12(d,J＝7.3Hz,1H),7.76(br d,J＝9.8Hz,1H),7.48-7.40(m,2H),7.39-7.31(m,3H),7.14-7.06(m,1H),7.02-6.95(m,2H),5.13(d,J＝3.3Hz,1H),4.89(t,J＝7.0Hz,1H),4.61-4.48(m,2H),4.45(t,J＝8.4Hz,1H),4.28(br s,1H),3.58(br d,J＝7.5Hz,2H),3.46-3.40(m,2H),3.05-2.94(m,3H),2.91-2.77(m,3H),2.45(s,3H),2.24-2.03(m,9H),1.87-1.67(m,7H),1.53(br s,1H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.14(br s,2H),1.00-0.91(m,12H).
实施例135：化合物401的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000319
将(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-(4-(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-甲酰基哌啶-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(46.35mg，77.54μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)和四氢呋喃(1.5mL)中，加入2-(3-(环丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(30mg，69.96μmol，盐酸盐)、乙酸(4.66mg，77.54μmol)和乙酸钠(25.44mg，310.18μmol)。在25℃搅拌反应1小时。加入醋酸硼氢化钠(49.30mg，232.63μmol)，在25℃搅拌反应1小时，LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。经制备液相色谱(Phenomenex C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有氨水(0.5％)和乙腈的极性递减(乙腈比例45％-85％)的混合物作为洗脱液)纯化得化合物401(13.80mg)。
MS m/z(ESI):932.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝8.77(s,1H),8.12(s,1H),7.89(br d,J＝7.9Hz,1H),7.36-7.27(m,4H),7.22(br t,J＝7.5Hz,1H),6.92-6.85(m,2H),4.91(q,J＝6.8Hz,1H),4.54-4.46(m,5H),4.43-4.32(m,2H),3.82-3.72(m,1H),3.65(br dd,J＝3.3,11.0Hz,1H),3.00(br d,J＝11.8Hz,2H),2.94(br d,J＝1.4Hz,2H),2.86-2.76(m,2H),2.75-2.68(m,1H),2.37(s,3H),2.34-2.26(m,2H),2.23(br d,J＝6.6Hz,2H),2.16-2.07(m,4H),1.88-1.82(m,2H),1.74(br t,J＝12.4Hz,2H),1.55-1.46(m,1H),1.42(br d,J＝7.0Hz,2H),1.32-1.17(m,2H),1.00-0.90(m,9H),0.70(br d,J＝5.4Hz,2H),0.54(br s,2H).
实施例136：化合物402的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000320
将(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-(4-(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-甲酰基哌啶-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(50mg，83.64μmol)和2-(3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(26.80mg，76.04μmol)溶于四氢呋喃(0.2mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中，加入醋酸(13.70mg，228.12μmol)，反应液于25℃搅拌反应2小时，加入三乙酰氧基硼氢化钠(48.35mg，228.12μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干，经高效液相色谱(Boston Prime C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例48％-88％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物402(10.27mg)。
MS m/z(ESI):934.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝8.96-8.81(m,1H),8.27-8.14(m,1H),8.07-7.93(m,1H),7.54-7.26(m,6H),7.07-6.90(m,2H),4.61(br s,5H),4.52-4.42(m,2H),4.17-4.02(m,1H),3.90-3.69(m,2H),3.16-3.02(m,4H),2.97-2.87(m,2H),2.48(br s,3H),2.37(br s,3H),2.28-2.21(m,3H),1.95(br d,J＝2.5Hz,3H),1.90-1.73(m,3H),1.52(br s,3H),1.35(br s,9H),1.29(br s,3H),1.06(br s,9H).
实施例137：化合物409的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000321
将中间体2-1(40mg，67.37μmol)和2-氟-6-[3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(32.89mg，80.84μmol)溶于四氢呋喃(1mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入醋酸(12.14mg，202.11μmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(42.84mg，202.11μmol)和醋酸钠(16.58mg，202.11μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干经高效液相色谱(PhenomenexC18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例63％-83％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物409(26.06mg)。
MS m/z(ESI):948.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.78-14.62(m,1H),8.97(s,1H),8.54(s,1H),8.43-8.33(m,1H),7.99-7.93(m,1H),7.43(br d,J＝8.3Hz,2H),7.39-7.28(m,3H),7.02-6.92(m,2H),6.20-6.05(m,1H),5.16-5.05(m,1H),4.98-4.88(m,1H),4.64-4.52(m,1H),4.42-4.34(m,1H),4.29(br s,1H),4.09-3.96(m,1H),3.72(br d,J＝6.4Hz,1H),3.673.55(m,3H),3.09-2.94(m,3H),2.81-2.65(m,3H),2.45(s,3H),2.22(br s,3H),2.13(br d,J＝3.9Hz,3H),1.88-1.72(m,6H),1.46(br d,J＝7.1Hz,1H),1.38(br d,J＝7.1Hz,3H),1.28(br d, J＝6.2Hz,6H),1.19-1.10(m,2H),0.95(br d,J＝6.4Hz,3H),0.80(br d,J＝6.1Hz,3H).
实施例138：化合物410的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000322
将中间体2-1(45mg，75.79μmol)和4-氟-2-(3-(异丙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(56.54mg，83.37μmol)溶于四氢呋喃(1mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入醋酸(13.65mg，227.37μmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(48.19mg，227.37μmol)和乙酸钠(18.65mg，227.37μmol)。混合物在25℃下搅拌2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱(Boston PrimeC18柱：5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例63％-83％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物410(35.30mg)。
MS m/z(ESI):948.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.86-13.78(m,1H),9.02-8.93(m,1H),8.55-8.47(m,1H),8.43-8.34(m,1H),8.04-7.95(m,1H),7.43(br d,J＝6.8Hz,2H),7.39-7.33(m,2H),7.26-7.18(m,1H),6.98(br d,J＝6.7Hz,1H),6.93-6.86(m,1H),6.19-6.06(m,1H),5.14-4.99(m,1H),4.96-4.85(m,1H),4.60-4.48(m,1H),4.45-4.24(m,2H),4.12-3.97(m,1H),3.72(br dd,J＝4.3,10.2Hz,1H),3.67-3.59(m,2H),3.59-3.54(m,1H),3.07-2.94(m,3H),2.84-2.70(m,3H),2.45(br s,3H),2.21(br d,J＝1.5Hz,3H),2.10(br d,J＝6.6Hz,3H),2.02-1.96(m,1H),1.86-1.70(m,6H),1.38(br d,J＝6.5Hz,3H),1.28(br d,J＝5.9Hz,6H),1.19-1.11(m,2H),0.95(br d,J＝5.3Hz,3H),0.79(br d,J＝6.1Hz,3H).
实施例139：化合物412的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000323
将2-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(35.28mg，58.95μmol)和中间体2-1(35mg，58.95μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和无水四氢呋喃(1mL)中，加入乙酸钠(9.67mg，117.90μmol)，醋酸(10.11μL，176.85μmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(37.48mg，176.85μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减(乙腈比例11％-51％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物412(13.0mg)。
MS m/z(ESI):960.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.05-13.78(m,1H),8.98(s,1H),8.50(s,1H),8.40(d,J＝7.8Hz,1H),8.12(d,J＝7.5Hz,1H),7.48-7.42(m,2H),7.40-7.33(m,3H),7.05-6.95(m,2H),6.68-6.59(m,1H),6.16-5.98 (m,1H),5.11(br s,1H),4.92(br t,J＝7.3Hz,1H),4.70-4.50(m,2H),4.41-4.24(m,2H),3.76-3.53(m,4H),3.39(br d,J＝6.0Hz,4H),2.99(br d,J＝6.5Hz,2H),2.76(br t,J＝11.3Hz,2H),2.46(s,3H),2.25-1.98(m,9H),1.88-1.72(m,6H),1.48-1.36(m,3H),1.20(s,6H),0.99-0.92(m,3H),0.85-0.77(m,3H).
实施例140：化合物418的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000324
步骤1：4-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6.81g,36.57mmol)、5-溴-2-(甲硫基)嘧啶(5g，24.38mmol)、叔丁醇钠(4.68g,48.76mmol)和乙酸钯(546.14mg，2.44mmol)加入到甲苯(50Ml)中。反应液在氮气氛围下于100℃搅拌反应18小时。LCMS检测反应完毕。将反应液冷却至室温，加入80mL水稀释，用乙酸乙酯(50mL*3)萃取，合并有机层并用水(40mL*2)洗涤，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩经乙酸乙酯：石油醚＝10：1(10mL)打浆得到标题化合物(6.1g)。
MS m/z(ESI):311.2[M+H] +.
步骤2：4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(705.88mg，1.93mmol)加入二氯甲烷(5mL)中，冰水浴下加入间氯过氧苯甲酸(997.38mg，5.80mmol)。反应液于室温搅拌2h。LCMS显示反应完全。向反应液中加入30mL饱和亚硫酸钠水溶液淬灭，用乙酸乙酯(50mL*3)萃取，合并有机层并用水(40mL*2)洗涤，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，经柱色谱(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/5)纯化得到标题化合物(300mg)。
MS m/z(ESI):343.1[M+H] +.
步骤3：4-(2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将哌啶-4-醇(14.77g,146.02mmol)、4-(2-(甲磺酰基)嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.5g，7.30mmol)和碳酸钾(10.08g，73.01mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)和乙腈(10mL)中，反应液于100℃搅拌24h。LCMS显示反应完全。将反应液冷却至室温，向反应液中加入100mL水稀释，用乙酸乙酯(100mL*3)萃取，合并有机层并用水(40mL*2)洗涤，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，经柱色谱(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到标题化合物(320mg)。
MS m/z(ESI):364.3[M+H] +.
步骤4：4-(2-(4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg，825.42μmol)和三乙胺(167.05mg，1.65mmol)加入到二氯甲烷(5mL)中，冰水浴下加入甲基磺酰氯(189.10mg，1.65mmol)。反应液于 室温搅拌1小时。LCMS显示反应完全。向反应液中加入30mL水稀释，用乙酸乙酯(50mL*3)萃取，合并有机层并用水(40mL*2)洗涤，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，经柱色谱(二氧化硅，乙酸乙酯/石油醚＝5/1)纯化得到标题化合物(170mg)。
步骤5：4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(2-(4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，226.48μmol)、6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(77.19mg，339.72μmol)和碳酸铯(147.21mg，452.96μmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。反应液于80℃搅拌18h。LCMS显示反应完全。向反应液中加入20mL水稀释，用乙酸乙酯(20mL*3)萃取，合并有机层并用水(20mL*2)洗涤，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，经柱色谱(二氧化硅，乙酸乙酯/石油醚＝9/1)纯化得到标题化合物(75mg)。
MS m/z(ESI):617.4[M+H] +.
步骤6：2-(3-氨基-1-(1-(5-(哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(70mg，122.24μmol)加入到甲醇(0.3mL)和二氯甲烷(0.3mL)中。室温下向反应液中加入4M HCl的二氧六环溶液(1mL)。反应液于室温搅拌2小时。LCMS显示反应完全。将反应液浓缩，冰水浴下加入30mL饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝8，使用二氯甲烷：甲醇＝10：1(20mL*3)萃取，合并有机层并用水(40mL*2)洗涤，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到标题化合物(57mg)。
MS m/z(ESI):473.3[M+H] +.
步骤7：化合物418的合成
将2-(3-氨基-1-(1-(5-(哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(25.47mg，43.12μmol)，中间体2-1(20mg，26.95μmol)和乙酸(161.69μg，2.69μmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，冰水浴下加入三乙酰氧基硼氢化钠(22.74mg，107.79μmol)。反应液于50℃搅拌2h。LCMS显示反应完全。将反应液浓缩，然后经制备液相色谱(Phenomenex C18，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.05％碳酸氢铵)和乙腈的混合物(乙腈含量：60％-70％)作为洗脱液)纯化得到化合物418(12mg)。
MS m/z(ESI):1050.5[M+H] +；
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ13.92(s,1H),9.01–8.97(m,1H),8.54(s,1H),8.43–8.38(m,1H),8.23(s,2H),8.14–8.09(m,1H),7.49–7.42(m,2H),7.39–7.34(m,3H),7.04–6.98(m,2H),6.45(s,2H),6.12(s,1H),5.13–5.09(m,1H),4.96–4.84(m,2H),4.74–4.64(m,2H),4.39–4.34(m,1H),4.31–4.26(m,1H),3.74–3.69(m,1H),3.65–3.60(m,3H),3.61–3.54(m,1H),3.47–3.40(m,1H),3.07–3.00(m,6H),2.79–2.72(m,3H),2.48–2.44(m,3H),2.27–2.18(m,3H),2.07–1.87(m,6H),1.83–1.73(m,4H),1.48–1.43(m,1H),1.40–1.36(m,2H),1.25–1.22(m,1H),1.17–1.12(m,2H),0.99–0.93(m,3H),0.87–0.77(m,3H).
实施例141：化合物421的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000325
步骤1：4-(甲氧基亚甲基)环己醇的合成
将甲氧基甲基三苯基氯化磷(14.42g，42.05mmol)和叔丁醇钾(9.83g，87.61mmol)溶于无水四氢呋喃(100mL)，在0℃搅拌1小时，然后在0℃加入4-羟基环己酮(4.46g，15.81mmol)的无水四氢呋喃(40mL)溶液，在0℃搅拌1小时后升温至25℃搅拌14小时。薄层层析(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)检测反应完毕。反应液用饱和氯化铵水溶液(100mL)淬灭，加入乙酸乙酯(80mL*2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝3：1)得到标题化合物(2.82g)。
步骤2：4-(甲氧基亚甲基)环己酮的合成
将4-(甲氧基亚甲基)环己醇(300mg，2.11mmol)溶于乙腈(10mL)中，加入2-碘酰基苯甲酸(886.16mg，3.16mmol)。反应液呈白色浑浊在80℃搅拌反应3小时。薄层层析(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)检测反应完毕。反应液过滤，滤液减压浓缩至干得标题化合物(340mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝6.06(s,1H),3.58-3.50(m,3H),2.44-2.38(m,2H),2.29-2.24(m,6H).
步骤3：(E)-[-4-(甲氧基亚甲基)环己-1-烯-1-基]三氟甲磺酸酯的合成
将4-(甲氧基亚甲基)环己酮(340mg，2.43mmol)溶于无水四氢呋喃(10mL)，在零下78℃氮气氛围下加入二(三甲基硅)氨基钾(1M，2.91mL)，然后在零下78℃搅拌半个小时，然后在零下78℃氮气氛围下加入N-苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺(1.04g，2.91mmol)无水四氢呋喃(10mL)溶液。反应液在氮气氛围下零下78℃搅拌反应2小时。薄层层析(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)检测原料消失。反应液用饱和氯化铵水溶液(5mL)淬灭，用乙酸乙酯(5mL*3)和水(10mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝3：1)得到标题化合物(450mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝6.13-6.01(m,1H),5.94-5.83(m,1H),3.53(d,J＝4.0Hz,3H),2.85(brd,J＝1.9Hz,1H),2.73(br d,J＝2.5Hz,1H),2.41-2.36(m,1H),2.33(br d,J＝4.8Hz,2H),2.27-2.22(m,1H).
步骤4：(E)-2-[4-(甲氧基亚甲基)环己-1-烯-1-基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷的合成
将(E)-[-4-(甲氧基亚甲基)环己-1-烯-1-基]三氟甲磺酸酯(450mg，1.65mmol)和双联嚬哪醇硼酸酯(629.62mg，2.48mmol)溶于无水二氧六环(15mL)中，加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(67.49mg，82.65μmol)和乙酸钾(324.45mg，3.31mmol)。反应液呈现黑色在氮气氛围下80℃搅拌反应16小时。薄层层析(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝5：1)得到标题化合物(353mg)。
MS m/z(ESI):251.2[M+H] +.
步骤5：(E)-2-[3-氨基-1-[1-[5-[-4-(甲氧基亚甲基)环己-1-烯-1-基]嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将2-[3-氨基-1-[1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(390mg，834.54μmol)和(E)-2-[4-(甲氧基亚甲基)环己-1-烯-1-基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷(313.13mg，1.25mmol)溶于无水二氧六环(12mL)和水(3mL)中，加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(68.15mg，83.45μmol)和碳酸铯(543.82mg，1.67mmol)。反应液呈现黑色在氮气氛围下90℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。反应液用水(5mL)稀释后用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到标题化合物(350mg)。
MS m/z(ESI):511.3[M+H] +.
步骤6：2-[3-氨基-1-[1-[5-[4-(二甲氧基甲基)环己-1-烯-1-基]嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将(E)-2-[3-氨基-1-[1-[5-[-4-(甲氧基亚甲基)环己-1-烯-1-基]嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(300mg，352.53μmol)溶于无水甲醇(10mL)中，加入对甲苯磺酸(60.71mg，352.53μmol)。反应液在60℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完毕。反应液用二氯甲烷(6mL*3)和饱和碳酸氢钠溶液(6mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝2：1)得到标题化合物(90mg)。
MS m/z(ESI):543.2[M+H] +.
步骤7：2-[3-氨基-1-[1-[5-[4-(二甲氧基甲基)环己基]嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将2-[3-氨基-1-[1-[5-[4-(二甲氧基甲基)环己-1-烯-1-基]嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(90mg，165.86μmol)溶于无水甲醇(2mL)和无水四氢呋喃(2mL)中，加入湿钯碳(100mg，10％)。反应液在氢气(15psi)氛围下25℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完毕。反应液过滤，滤液减压浓缩至干得标题化合物(90mg)。
MS m/z(ESI):545.4[M+H] +.
步骤8：4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]环己烷-1-甲醛的合成
将2-[3-氨基-1-[1-[5-[4-(二甲氧基甲基)环己基]嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(85mg，156.06μmol)溶于无水甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入吡啶对甲苯磺酸盐(78.44mg，312.13μmol)。反应液呈棕色，在60℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完毕。反应液浓缩至干，用乙酸乙酯(1mL*3)和水(5mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干得标题化合物(40mg)。
MS m/z(ESI):499.3[M+H] +.
步骤9：(2S,4R)-1-[2-[3-[4-[[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]环己基]甲基]哌嗪-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]环己烷-1-甲醛(30 mg，30.09μmol)和(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(18.15mg，30.09μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.8mL)和无水四氢呋喃(0.8mL)中，加入醋酸(1.72μL，30.09μmol)、乙酸钠(4.94mg，60.17μmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(19.13mg，90.26μmol)。反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Boston Prime C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减(乙腈比例30％-50％)的混合物作为洗脱液)纯化得到(2S,4R)-1-[2-[3-[4-[[4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]环己基]甲基]哌嗪-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.6mg)。
MS m/z(ESI):1049.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.91(br s,1H),9.02-8.96(m,1H),8.53(s,1H),8.43-8.20(m,3H),8.11(d,J＝7.7Hz,1H),7.51-7.29(m,5H),7.06-6.96(m,2H),6.45(s,2H),6.15(d,J＝7.0Hz,1H),5.19-4.97(m,1H),4.95-4.86(m,2H),4.79(br d,J＝12.3Hz,2H),4.70-4.33(m,1H),4.28(br s,1H),3.70(br d,J＝8.4Hz,1H),3.62-3.50(m,1H),3.20-3.01(m,5H),2.57-2.52(m,3H),2.45(d,J＝2.6Hz,3H),2.44-2.32(m,5H),2.27(br d,J＝6.6Hz,1H),2.14(br dd,J＝6.6,16.1Hz,2H),2.03(br d,J＝11.9Hz,1H),1.94(br s,6H),1.79(br d,J＝6.2Hz,3H),1.58(br s,2H),1.46(br d,J＝6.6Hz,2H),1.43-1.33(m,3H),0.95(br dd,J＝3.0,6.5Hz,3H),0.84-0.75(m,3H).
实施例142：化合物429的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000326
步骤1：4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯的合成
将6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(5g,24.27mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，加入碳酸铯(23.73g,72.80mmol)搅拌20分钟后，加入4-甲磺酰氧基哌啶-1-羧酸苄酯(15.21g,48.54mmol)，升温至80℃反应4小时，经LC-MS监测反应完全后，加入水(100mL)，并用乙酸乙酯萃取(150mL*3)，有机相合并，干燥，过滤，滤液浓缩，经柱层析(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯：1/1)得到标题化合物(7.30g)。
MS m/z(ESI):387.10[M+H] +
步骤2：4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯的合成
将4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯(1.20g,3.10mmol)、2-(甲氧基甲氧基 苯基)硼酸(1.13g,6.20mmol)和磷酸钾(2.63g,12.41mmol)溶于1,4-二氧六环(30mL)和水(6mL)中；用氮气置换反应瓶后，加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(253mg,310.10μmol)，升温至100℃反应过夜；经LC-MS监测反应完全后，分液，有机相减压浓缩至干，残余物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯：1/1)纯化，得到标题化合物(960mg)。
MS m/z(ESI):489.10[M+H] +
步骤3：6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺的合成
将4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-羧酸苄酯(560mg,1.15mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入钯碳(56mg,46.10μmol,10％纯度)。反应装置抽真空，用氢气置换3次，于氢气气氛下室温反应4小时。经过LC-MS监测反应完全后，过滤，滤液浓缩得到粗产品即标题化合物(421mg)。
MS m/z(ESI):355.10[M+H] +
步骤4：4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-[1,4'-联哌啶]-1'-羧酸叔丁酯的合成
将6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(220mg,620.76μmol)和4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(495mg,2.48mmol)溶于四氢呋喃(6mL)和N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，加入醋酸(111mg,1.86mmol)和醋酸钠(153mg,1.86mmol)后室温搅拌1小时后加入三乙酰氧基硼氢化钠(395mg,1.86mmol)反应过夜。经LC-MS监测反应完全后，加水(6mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(10mL*3)，有机相合并，经无水硫酸钠干燥后过滤，滤液浓缩至干，残余物经柱层析(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯:1/1)纯化得标题化合物(165mg)。
MS m/z(ESI):538.20[M+H] +
步骤5：2-(1-([1,4'-联哌啶]-4-基)-3-氨基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-[1,4'-联哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(157mg,292.01μmol)溶于二氯甲烷(3mL)和甲醇(1.5mL)中，加入氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4M,3.5mL)，于室温反应过夜；经LC-MS监测反应完全后，将反应液浓缩，依次加入二氯甲烷(5mL)和饱和碳酸氢钠溶液(10mL)，调节pH为碱性；随后加入二氯甲烷萃取(5mL×3)，有机相合并，干燥，过滤，滤液浓缩得到粗产品即标题化合物(69mg)。
MS m/z(ESI):394.20[M+H] +
步骤6：化合物429的合成
将2-(1-([1,4'-联哌啶]-4-基)-3-氨基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(40mg,101.66μmol)和(2S,4R)-1-((R)-2-(3-(4-甲酰基哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(24mg,40.66μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中；向其中加入醋酸(609μg,10.17μmol)，于室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(64mg,304.97μmol)，于室温搅拌2小时。经LC-MS监测反应完全后，经高效制备液相色谱(Phenomenex C18，5μm二氧化硅，30mm直径，80mm长度；使用水(含有0.05％碳酸氢铵)和乙腈的混合物(乙腈含量：60％-70％)作为洗脱液)纯化得到化合物429(10.4mg)。
MS m/z(ESI):971.50[M+H] +；
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ8.85–8.64(m,1H),8.27–8.05(m,1H),8.00–7.79(m,1H),7.42–7.17(m,5H),7.00–6.76(m,2H),6.15–5.86(m,1H),4.52–4.25(m,3H),3.61–3.48(m,3H),3.12–2.92(m,3H),2.83–2.66(m,2H),2.44–2.33(m,5H),2.26–2.08(m,5H),1.95–1.80(m,6H),1.74–1.65(m,2H),1.58–1.50(m,2H),1.45–1.41(m,2H),1.23–1.14(m,8H),1.00–0.92(m,3H),0.86–0.73(m,6H).
实施例143：化合物430的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000327
步骤1：4-((4-(3-(异丙基氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将N-异丙基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(113mg,285.00μmol)和4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(91mg,427.51μmol)溶于四氢呋喃(5mL)中；加入醋酸(1.7mg,28.50μmol)，随后分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(181mg,855.01μmol)，于室温反应2小时；经LC-MS检测反应完全后，加水(5mL)淬灭，浓缩除去四氢呋喃后，用二氯甲烷(5mL*3)萃取浓缩，通过柱层析(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇：10/1)纯化得标题化合物(132mg)。
MS m/z(ESI):594.40[M+H] +
步骤2：2-(3-(异丙基氨基)-1-(1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-((4-(3-(异丙基氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(98mg,165.72μmol)溶于二氯甲烷/甲醇(2/1,2mL)中；加入盐酸的1,4-二氧六环(4M,2mL)，在室温搅拌2小时；经LC-MS监测反应完全后，浓缩得粗产品即标题化合物(52mg)。
MS m/z(ESI):450.20[M+H] +
步骤3：化合物430的合成
将2-(3-(异丙基氨基)-1-(1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(30mg,66.73μmol)和(2S,4R)-1-((R)-2-(3-(4-甲酰基哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(50mg,66.73μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中；加入醋酸(400μg,6.67μmol)，搅拌10分钟，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(42mg,200.18μmol)，室温反应2小时；经过LC-MS监测反应完全后，经高效液相色谱(Boston Prime C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例65％-85％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物430(10mg)。
MS m/z(ESI):1027.50[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.09-13.91(m,1H),8.98(s,1H),8.48(s,1H),8.41(br d,J＝7.5Hz,1H),8.12(br d,J＝7.8Hz,1H),7.48-7.40(m,2H),7.40-7.30(m,3H),7.03-6.95(m,2H),6.88(br d,J＝7.5Hz,1H),6.14-5.96(m,1H),5.15-4.99(m,1H),4.96-4.86(m,1H),4.62-4.48(m,1H),4.36(br t,J＝7.9Hz,1H),4.28(br s,1H),4.10-3.97(m,1H),3.71(br d,J＝6.6Hz,1H),3.66-3.54(m,3H),2.96(br d,J＝8.3Hz,2H),2.81(brd,J＝9.5Hz,2H),2.73(br t,J＝11.3Hz,2H),2.45(s,3H),2.29-1.96(m,11H),1.92-1.77(m,5H),1.75-1.63(m,5H),1.48-1.42(m,1H),1.40-1.33(m,3H),1.27(br d,J＝6.3Hz,6H),1.23-1.21(m,1H),1.11(br d,J＝8.1Hz,3H),0.94(br d,J＝6.3Hz,3H),0.85-0.76(m,3H).
实施例144：化合物431的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000328
步骤1：4-((2-氯嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-羧酸苄酯的合成
将2-氯-5-羟基嘧啶(2.6g，20mmol)和4-(甲磺酰氧基)哌啶-1-羧酸苄酯(6.3g，20mmol)溶于DMF(50mL)中，然后加入碳酸钾(5.6g，40mmol)，100℃反应6h，反应液中加入水(200mL)和乙酸乙酯(200mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩得标题化合物粗品6.5g，不经纯化直接用于下一步。
MS m/z(ESI):348.10[M+H] +.
步骤2：4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-羧酸苄酯的合成
将4-((2-氯嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-羧酸苄酯(6.5g，18.7mmol)和4-羟基哌啶(3.8g，38mmol)溶于DMF(80mL)中，然后加入碳酸钾(5.6g，40mmol)，100℃反应12h，反应液中加入水(200mL)和乙酸乙酯(200mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-20％)得标题化合物(5.4g)。
MS m/z(ESI):413.10[M+H] +.
步骤3：1-(5-(哌啶-4-基氧基)嘧啶-2-基)哌啶-4-醇的合成
将4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-羧酸苄酯(5.4g)溶于甲醇(100mL)，加入钯碳(500mg)，氢气交换三次，然后在氢气氛围中继续反应至原料消耗完全，反应液过滤，滤液浓缩得标题化合物(3.2g)。
MS m/z(ESI):279.10[M+H] +.
步骤4：3-(4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-基)-5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基异噁唑2-鎓三氟甲磺酸盐的合成
将3-溴-5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基异噁唑-2-鎓三氟甲磺酸盐(2.15g，5mmol)溶于甲醇(30mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(5mL)，冷却至0℃，然后加入1-(5-(哌啶-4-基氧基)嘧啶-2-基)哌啶-4-醇(2g，)的甲醇溶液(10mL)，加入完毕升温至室温，继续反应16h，反应液减压浓缩得标题化合物粗品(8g)，不经纯化直接用于下一步。
MS m/z(ESI):474.20[M+H] +.
步骤5：2-(3-(4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯的合成
将3-(4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-基)-5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基异噁唑2-鎓三氟甲磺酸盐(8g)加入甲苯(100mL)中，100℃反应36h，反应液减压浓缩，残留物中加入水(100mL)和乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-60％)得标题化合物(1.1g)。
MS m/z(ESI):460.20[M+H] +.
步骤6：3-甲基-2-(3-(4-((2-(4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)丁酸甲酯的合成
将2-(3-(4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(1.1g，2.4mmol)溶于DCM(30mL)中，加入三乙胺(1.1g，10mmol)冷却至0℃，然后缓慢加入甲基磺酰氯(541mg，4.8mmol)，加入完毕，缓慢升温至室温反应1h，然后加入水(50mL)和DCM(50mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-30％)得标题化合物(1.0g)。
MS m/z(ESI):538.10[M+H] +.
步骤7：2-(3-(4-((2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯的合成
将3-甲基-2-(3-(4-((2-(4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)丁酸甲酯(600mg，1.1mmol)和6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(300mg，1.1mmol)溶于DMF(5mL)中，然后加入碳酸铯(750mg，2mmol)，氮气置换三次，80℃反应12h，然后反应体系中加入水(60mL)和乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-0％)得标题化合物(90mg)。
MS m/z(ESI):713.30[M+H] +.
步骤8：2-(3-(4-((2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸的合成
将2-(3-(4-((2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(90mg，0.11mmol)溶于THF/H 2O(3mL/1mL)的混合溶剂中，然后加入一水合氢氧化锂(21mg，0.5mmol)水溶液(1mL)，室温反应过夜，加入0.1M稀盐酸调节pH至7，反应液减压浓缩，残留物经反相色谱纯化(色谱柱：C18spherical,40-60μm,100A,40g；洗脱剂：乙腈/水＝5％-95％)，得标题化合物(15mg)。
MS m/z(ESI):699.30[M+H] +.
步骤9：(2S,4R)-1-(2-(3-(4-((2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-(3-(4-((2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸(15mg，0.02mmol)、(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]四氢吡咯-2-甲酰胺(14mg，0.04mmol)溶于DMF(1mL)中，然后加入HATU(15.4mg，0.04mmol)，室温反应过夜，反应液中加入水(10mL) 和乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩得标题化合物(45mg)，不经纯化直接用于下一步。
MS m/z(ESI):506.8[M+2H] 2+.
步骤10：化合物431的合成
将(2S,4R)-1-(2-(3-(4-((2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(45mg)溶于甲醇(1mL)中，然后加入4M的盐酸二氧六环溶液(1mL)，室温反应1h，LC-MS检测反应完全，反应液减压浓缩，残留物经制备色谱(Boston Prime C18柱：3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例44％-84％)的混合物作为洗脱液)纯化得化合物431(2.2mg)。
MS m/z(ESI):484.7[M+2H] 2+.
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.88-8.90(m,1H),8.32(s,1H),8.22(s,1H),8.20(s,1H),8.03-8.05(m,1H),7.44–7.49(m,3H),7.36–7.41(m,2H),7.01–7.04(m,2H),6.16-6.18(m,1H),5.04-5.07(m,1H),4.60-4.62(m,1H),4.53-4.56(m,1H),4.45-4.47(m,1H),3.86-3.88(m,1H),3.72-3.77(m,2H),3.66-3.71(m,2H),3.64-3.66(m,1H),3.61-3.64(m,2H),3.59–3.61(m,1H),3.43–3.45(m,1H),3.17–3.21(m,2H),2.48-2.52(m,3H),2.40–2.43(m,1H),2.17–2.21(m,2H),2.05-2.09(m,2H),1.98-2.01(m,2H),1.80-1.84(m,2H),1.51-1.57(m,3H),1.31-1.33(m,2H),1.06-1.11(m,3H),0.91-0.96(m,3H).
实施例145：化合物432的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000329
步骤1：2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-甲醛的合成
将2-氯嘧啶-5-甲醛(2.84g，20mmol)和4-羟基哌啶(2.02g，20mmol)溶于乙腈(100mL)中，然后加入三乙胺(3.03g，30mmol)，90℃反应12h，减压浓缩得标题化合物(6.5g)，不经纯化直接用于下一步。
MS m/z(ESI):208.10[M+H] +.
步骤2：4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-甲醛(6.5g，20mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.8g，20mmol)溶于DCM(80mL)中，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(6.4g，30mmol)，室温反应5h，反应 液中加入饱和氯化铵水溶液(200mL)和DCM(200mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-20％)得标题化合物(5.4g)。
MS m/z(ESI):378.20[M+H] +.
步骤3：1-(5-(哌嗪-1-基甲基)嘧啶-2-基)哌啶-4-醇的合成
将4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.4g，)溶于DCM(50mL)，冷却至0℃，然后加入4M盐酸二氧六环溶液(20mL)，加入完毕，升温至室温继续反应4h，反应液减压浓缩得标题化合物粗品(8.2g)。不经纯化直接用于下一步。
MS m/z(ESI):278.10[M+H] +.
步骤4：3-(4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-基)-5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基异噁唑2-鎓三氟甲磺酸盐的合成
将3-溴-5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基异噁唑-2-鎓三氟甲磺酸盐(2.15g，5mmol)溶于甲醇(30mL)中，加入三乙胺(5mL)，冷却至0℃，然后加入1-(5-(哌嗪-1-基甲基)嘧啶-2-基)哌啶-4-醇(4g)的甲醇溶液(20mL)，加入完毕升温至室温，继续反应16h，反应液减压浓缩得标题化合物(9.5g)，不经纯化，直接用于下一步。
MS m/z(ESI):473.30[M+H] +.
步骤5：2-(3-(4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯的合成
将3-(4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-基)-5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基异噁唑2-鎓三氟甲磺酸盐(9.5g)加入甲苯(150mL)中，100℃反应36h，反应液减压浓缩，残留物中加入水(100mL)和乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-60％)得标题化合物(500mg)。
MS m/z(ESI):459.10[M+H] +.
步骤6：3-甲基-2-(3-(4-((2-(4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)丁酸甲酯的合成
将2-(3-(4-((2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(500mg，1.1mmol)溶于DCM(30mL)中，加入三乙胺(500mg，5mmol)，冷却至0℃，然后缓慢加入甲基磺酰氯(270mg，2.4mmol)，加入完毕，缓慢升温至室温反应1h，然后加入水(50mL)和DCM(50mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-20％)得标题化合物(350mg)。
MS m/z(ESI):537.20[M+H] +.
步骤7：2-(3-(4-((2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯的合成
将3-甲基-2-(3-(4-((2-(4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)丁酸甲酯(350mg，0.65mmol)和6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(180mg，0.66mmol)溶于DMF(5mL)中，然后加入碳酸铯(422mg，1.3mmol)，氮气置换三次，90℃反应12h，然后反应体系中加入水(60mL)和乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-0％&DCM:MeOH＝10:1)得标题化合物(262mg)。
MS m/z(ESI):712.30[M+H] +.
步骤8：2-(3-(4-((2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸的合成
将2-(3-(4-((2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(262mg，0.37mmol)溶于THF/H 2O(3mL/1mL)的混合溶剂中，然后加入一水合氢氧化锂(84mg，2mmol)水溶液(1mL)，室温反应过夜，加入0.1M稀盐酸调节pH至7，反应液减压浓缩，残留物经反相色谱(色谱柱：C18spherical,40-60μm,100A,40g；洗脱剂：乙腈/水＝5％-95％)纯化，得标题化合物(100mg)。
MS m/z(ESI):698.30[M+H] +.
步骤9：(2S,4R)-1-(2-(3-(4-((2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
将2-(3-(4-((2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸(100mg，0.14mmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(47mg，0.14mmol)溶于DMF(1mL)中。然后加入HATU(108mg，0.28mmol)，室温反应过夜。反应液中加入水(10mL)和乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩得标题化合物(70mg)，不经纯化直接用于下一步。
MS m/z(ESI):506.20[M+2H] 2+.
步骤10：化合物432的合成
将(2S,4R)-1-(2-(3-(4-((2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(70mg)溶于甲醇(1mL)中，然后加入4M的盐酸二氧六环溶液(1mL)，室温反应1h，LC-MS检测反应完全，反应液减压浓缩，残留物经制备色谱得(2S,4R)-1-(2-(3-(4-((2-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)甲基)哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4)-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(2.5mg)。
MS m/z(ESI):484.20[M+2H] 2+.
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.85-8.88(m,1H),8.32-8.34(m,1H),8.30-8.32(m,1H),8.01-8.03(m,1H),7.40–7.496(m,3H),7.32–7.39(m,3H),6.98–7.02(m,2H),6.11-6.13(m,1H),5.00-5.04(m,1H),4.57-4.61(m,2H),4.49-4.53(m,1H),4.42-4.45(m,1H),3.82-3.85(m,1H),3.69-3.75(m,2H),3.59-3.64(m,2H),3.45-3.47(m,1H),3.41-3.43(m,1H),3.16–3.20(m,2H),2.51-2.62(m,5H),2.46–2.49(m,2H),2.11–2.20(m,4H),1.94-2.03(m,4H),1.47-1.53(m,3H),1.27-1.31(m,2H),1.02-1.08(m,3H),0.87-0.93(m,3H).
实施例146：化合物435的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000330
步骤1：4-(2-氯嘧啶-4-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯的合成
将2,4-二氯嘧啶(300mg，2.01mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(622.66mg，2.01mmol)溶于二氧六环(6mL)和水(2mL)中，在氮气环境下加入碳酸钠(533.58mg，5.03mmol)和1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(147.34mg，201.37μmol)，反应液在80℃搅拌4小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，然后用乙酸乙酯(5mL*3)和水(10mL)萃取，有机相减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到2/1)得到标题化合物(360mg)。
MS m/z(ESI):296.1[M+H] +；
步骤2：4-[2-[4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-4-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯的合成
将4-(2-氯嘧啶-4-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(150mg，507.16μmol)和(6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基)氨基甲酸叔丁酯(230.51mg，507.16μmol)溶于二甲基亚砜(4mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(262.18mg，2.03mmol)，反应液在100℃搅拌12小时，LCMS显示反应完成。反应液用乙酸乙酯(50mL*3)和水(10mL)萃取，有机相减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到3/2)得到标题化合物(46mg)。
MS m/z(ESI):614.2[M+H] +.
步骤3：4-[2-[4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-4-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[2-[4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-4-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(45mg，73.32μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入钯碳(30mg，73.32μmol，10％纯度)和三乙基硅烷(85.26mg，733.25μmol)，反应液在25℃搅拌12小时，LCMS显示反应完成。将反应液过滤，浓缩得到标题化合物(45mg)。
MS m/z(ESI):616.2[M+H] +.
步骤4：2-[3-氨基-1-[1-[4-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[2-[4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-4-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(45mg，73.08μmol)溶于甲醇(2mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，182.71μL)，反应液在25℃搅拌2小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，得到标题化合物(35mg)。
MS m/z(ESI):472.2[M+H] +.
步骤5：化合物435的合成
将2-[3-氨基-1-[1-[4-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(35mg，68.90μmol)和中间体2-1(40.91mg，68.90μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和四氢呋喃(1mL)中，加入乙酸(12.41mg，206.69μmol)、乙酸钠(16.96mg，206.69μmol)和醋酸硼氢化钠(43.81mg，206.69μmol)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。反应液加入水(0.2mL)淬灭，减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减(乙腈比例15％-55％)的混合物作为洗脱液)得到化合物435(15.7mg)。
MS m/z(ESI):1049.9[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.91(br s,1H),8.98(s,1H),8.54(s,1H),8.43-8.33(m,1H),8.29(d,J＝5.0Hz,1H),8.11(d,J＝7.9Hz,1H),7.48-7.40(m,2H),7.40-7.33(m,3H),7.05-6.97(m,2H),6.58(d,J＝5.0Hz,1H),6.44(s,2H),6.15-5.97(m,1H),5.11(br s,1H),4.97-4.80(m,4H),4.35(t,J＝7.9Hz,1H),4.27(br s,1H),3.70(br d,J＝5.6Hz,1H),3.65-3.53(m,4H),3.12-3.00(m,3H),2.93(br d,J＝9.4Hz,2H),2.78-2.69(m,2H),2.45(s,3H),2.30-2.11(m,4H),1.96(br s,7H),1.84-1.64(m,7H),1.37(br d,J＝7.0Hz,3H),1.12(br d,J＝10.6Hz,2H),0.94(br d,J＝6.5Hz,3H),0.84-0.75(m,3H).
实施例147：化合物436的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000331
步骤1：4-(2-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成
将2,4-二氯嘧啶(1g，6.71mmol)和三乙胺(407.53mg，4.03mmol)溶于二氯甲烷中(3mL)，在 0℃加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.38g，7.38mmol)的二氯甲烷溶液(3mL)中，反应液在0℃搅拌2小时，LCMS显示反应完成。反应液用水洗涤(10mL)然后减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到3/1)得到标题化合物(230mg)。
MS m/z(ESI):298.9[M+H] +；
步骤2：4-[2-[4-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(2-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(72.31mg，242.01μmol)和(6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，220.01μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(85.30mg，660.04μmol)，反应液在110℃搅拌12小时，LCMS显示反应完成。反应液用乙酸乙酯(30mL*3)和水(5mL)萃取，有机相减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到3/2)得到标题化合物(41mg)。
MS m/z(ESI):717.3[M+H] +.
步骤3：2-[3-氨基-1-[1-(4-哌嗪-1-基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[2-[4-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(41mg，57.20μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，142.99μL)，反应液在25℃搅拌2小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，得到标题化合物(40mg)。
MS m/z(ESI):473.2[M+H] +.
步骤4：化合物436的合成
将2-[3-氨基-1-[1-(4-哌嗪-1-基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(40mg，78.58μmol)和中间体2-1(46.66mg，78.58μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和四氢呋喃(1mL)中，加入乙酸(14.16mg，235.75μmol)、乙酸钠(12.89mg，157.17μmol)和醋酸硼氢化钠(49.97mg，235.75μmol)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。反应液加入水(0.2mL)淬灭，减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例45％-85％)的混合物作为洗脱液)得到化合物436(6.2mg)。
MS m/z(ESI):1050.8[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.91(s,1H),8.98(s,1H),8.52(s,1H),8.40(d,J＝7.4Hz,1H),8.11(d,J＝7.8Hz,1H),7.91(d,J＝6.0Hz,1H),7.48-7.41(m,2H),7.40-7.32(m,3H),7.06-6.96(m,2H),6.43(s,2H),6.15-5.96(m,2H),5.16-5.00(m,1H),4.96-4.73(m,4H),4.35(t,J＝7.9Hz,1H),4.27(br s,1H),3.75-3.68(m,1H),3.65-3.50(m,8H),2.97(br t,J＝11.4Hz,2H),2.74(br t,J＝11.1Hz,2H),2.45(s,3H),2.39(br s,4H),2.18(br d,J＝6.1Hz,3H),2.07-1.86(m,5H),1.83-1.65(m,4H),1.47-1.32(m,3H),1.13(br d,J＝9.8Hz,2H),1.00-0.88(m,3H),0.84-0.74(m,3H).
实施例148：化合物438的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000332
步骤1：反式-4-羟甲基环己烷甲酸甲酯的合成
将反式-1,4-环己烷二甲酸单甲酯(500mg，2.69mmol)溶于无水四氢呋喃(8mL)，在0℃加入硼烷四氢呋喃溶液(1M，4.03mL)。反应液在25℃搅拌反应2小时。薄层层析(石油醚:四氢呋喃＝1:1)检测原料消失。反应液在0℃加入2mL甲醇然后50℃搅拌30分钟，减压浓缩至干，加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)，然后用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干得反式-4-羟甲基环己烷甲酸甲酯(320mg)。
步骤2：反式-4-甲酰基环己烷羧酸甲酯的合成
将二甲亚砜(435.53μL，5.57mmol)加入到二氯甲烷(1mL)中，在氮气氛围下零下78℃加入草酰氯(243.97μL，2.79mmol)二氯甲烷溶液(1mL)。混合物在零下78℃搅拌30分钟，然后加入反式-4-羟甲基环己烷甲酸甲酯(320mg，9.29mmol)二氯甲烷溶液(1mL)。混合物在零下78℃搅拌30分钟，然后加入三乙胺(1.29mL，9.29mmol)。反应液在零下78℃搅拌1小时后升温至0℃搅拌1小时。薄层层析(石油醚：乙酸乙酯＝1：1，硝基苯肼显色)检测原料消失。反应液加入盐酸(1M，2mL)淬灭后，用二氯甲烷(10mL)和水(10mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干得反式-4-甲酰基环己烷羧酸甲酯(280mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.61-9.49(m,1H),3.58-3.55(m,3H),2.31-2.22(m,2H),1.94-1.85(m,4H),1.43-1.34(m,2H),1.21-1.14(m,2H).
步骤3：反式-4-((4-(3-乙氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)环己烷羧酸甲酯的合成
将反式-4-甲酰基环己烷羧酸甲酯(100mg，587.53μmol)和2-[3-乙氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(198.22mg，528.77μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和无水四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙酸钠(96.39mg，1.18mmol)、乙酸(33.60μL，587.53μmol)和醋酸硼氢化钠(373.56mg，1.76mmol)。反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。反应液用减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝2：1)得到标题化合物(120mg)。
MS m/z(ESI):493.2[M+H] +.
步骤4：反式-4-[[4-[3-乙氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]环己烷甲酸的合成
将反式-4-((4-(3-乙氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)环己烷羧酸甲酯(120mg，243.60μmol)溶于无水甲醇(2mL)和水(2mL)中，加入氢氧化钠(19.49mg，487.20μmol)。 反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。反应液用盐酸(1M)调至pH＝7，减压浓缩至干得标题化合物(200mg)。
MS m/z(ESI):479.2[M+H] +.
步骤5：化合物438的合成
将反式-4-[[4-[3-乙氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]环己烷甲酸(160mg，167.16μmol)和(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(80.41mg，167.16μmol)溶于无水二甲基甲酰胺(3mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟膦盐(50.85mg，133.73μmol)，然后加入N,N-二异丙基乙胺(87.35μL，501.48μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经制备液相色谱(Boston Prime C18柱：5μm二氧化硅，150mm直径，30mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例58％-78％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物438(20.4mg)。
MS m/z(ESI):905.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.99(s,1H),8.98(s,1H),8.48(s,1H),8.39(d,J＝7.8Hz,1H),8.18-8.06(m,1H),7.66(br d,J＝9.0Hz,1H),7.46-7.40(m,2H),7.40-7.32(m,3H),7.07(t,J＝5.5Hz,1H),7.02-6.95(m,2H),5.12(d,J＝3.5Hz,1H),5.00-4.83(m,1H),4.61-4.47(m,2H),4.43(t,J＝8.0Hz,1H),4.28(br s,1H),3.66-3.53(m,2H),3.47-3.39(m,4H),3.34(br s,1H),2.96(br d,J＝8.5Hz,2H),2.45(s,3H),2.21-1.95(m,8H),1.88-1.61(m,8H),1.46(br d,J＝6.8Hz,1H),1.37(br d,J＝7.0Hz,3H),1.26(t,J＝7.0Hz,3H),0.94(s,9H).
实施例149：化合物442的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000333
将2-氟-6-[1-(哌啶-4-基)-3-丙氨基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(20mg，49.15μmol)和中间体2-1(29.18mg，49.15μmol)溶于四氢呋喃(0.2mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中，加入醋酸(8.86mg，147.46μmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(31.25mg，147.46μmol)和醋酸钠(12.10mg，147.46μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干经高效液相色谱(Boston PrimeC18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例60％-80％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物442(27.2mg)。
MS m/z(ESI):948.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.83-14.65(m,1H),8.98(s,1H),8.55(br s,1H),8.47-8.35(m,1H),8.01-7.93(m,1H),7.44(br d,J＝8.0Hz,2H),7.40-7.31(m,3H),7.22-7.14(m,1H),7.02-6.92(m,1H),6.20-6.04(m,1H),5.18-4.99(m,1H),4.96-4.85(m,1H),4.62-4.52(m,1H),4.39-4.25(m,2H),3.75-3.68(m,1H),3.64(br d,J＝9.0Hz,2H),3.56(br d,J＝9.9Hz,1H),3.42(br d,J＝10.1Hz,1H),3.03-2.96(m,2H),2.80-2.72(m,2H),2.46(br s,3H),2.21(br s,4H),2.11(br d,J＝1.1Hz,4H),1.84-1.74(m,5H),1.73-1.66(m,3H),1.46(br d,J＝7.3Hz,1H),1.38(br d,J＝6.1Hz,3H),1.24-1.03(m,3H),0.95(br d,J＝6.5Hz,6H),0.79(br d,J＝6.3Hz,3H).
实施例150：化合物443的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000334
将2-氟-6-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(25mg，62.43μmol)和中间体2-1(37.07mg，62.4μmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入醋酸(11.25mg，187.29μmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(39.69mg，187.29μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干经高效液相色谱(Boston Prime C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例53％-73％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物443(10.5mg)。
MS m/z(ESI):978.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.75-14.48(m,1H),9.01-8.94(m,1H),8.57(s,1H),8.44-8.35(m,1H),7.96(br d,J＝7.9Hz,1H),7.49-7.27(m,5H),7.02-6.92(m,1H),6.78-6.65(m,1H),6.15-5.98(m,1H),5.19-4.99(m,1H),4.96-4.86(m,1H),4.71-4.52(m,2H),4.44-4.20(m,2H),3.85-3.44(m,5H),3.04-2.93(m,2H),2.76(br t,J＝11.8Hz,2H),2.45(s,3H),2.15(br s,9H),1.96-1.53(m,7H),1.47-1.36(m,3H),1.20(s,6H),1.15(br dd,J＝1.7,12.6Hz,2H),0.95(br d,J＝6.3Hz,3H),0.86-0.74(m,3H).
实施例151：化合物444的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000335
步骤1：2-[3-氨基-1-[1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-6-氟苯酚的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-6-氟苯酚(278.4mg，763.15μmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(6mL)中，加入N-乙基二异丙胺(295.89mg，2.29mmol，398.78μL)和5-溴-2-氯-嘧啶(177.14mg，915.78μmol)。反应液于80℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液过滤后减压浓缩至干，用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(60mL)萃取三次，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩至干后得到标题化合物(260.7mg)。
MS m/z(ESI):485.1,487.1[M+H] +.
步骤2：4-[2-[4-[3-氨基-6-(3-氟-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯的合成
将2-[3-氨基-1-[1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-6-氟苯酚(260mg，535.74μmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(248.48mg，803.61μmol)溶于无水二氧六环(4mL)和水(1mL)中，加入碳酸铯(349.11mg，1.07mmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(43.75mg，53.57μmol)。反应液在氮气氛围下于100℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕，用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)将反应液萃取三次，有机相经无水硫酸钠干燥过滤后，减压浓缩至干，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：1)纯化得到标题化合物(211.2mg)。
MS m/z(ESI):588.2[M+H] +.
步骤3：4-[2-[4-[3-氨基-6-(3-氟-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[2-[4-[3-氨基-6-(3-氟-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(211mg，244.16μmol)溶于无水四氢呋喃(1mL)和无水甲醇(1mL)中，加入钯/碳(200mg，10％纯度)，反应液在氢气氛围下于25℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。反应液过滤，减压浓缩至干得到标题化合物(199.6mg)。
MS m/z(ESI):590.3[M+H] +.
步骤4：2-[3-氨基-1-[1-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-6-氟-苯酚的合成
将4-[2-[4-[3-氨基-6-(3-氟-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(199.6mg，338.50μmol)溶于无水甲醇(3mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，6.25μL)，反应液于25℃搅拌2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干得到标题化合物(264mg)。
MS m/z(ESI):490.2[M+H] +.
步骤6：化合物444的合成
将中间体2-1(40mg，7μmol)、2-[3-氨基-1-[1-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-6-氟-苯酚(56.86mg，7.37μmol)和无水醋酸钠(16.58mg，202.11μmol)溶于无水四氢呋喃(1mL)和无水N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入醋酸(12.14mg，202.11μmol，11.56μL)和醋酸硼氢化钠(42.84mg，202.11μmol)，反应液于25℃搅拌2小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(C18-1柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例38％-78％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物444(3.58mg)。
MS m/z(ESI):534.1[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.00-8.98(m,1H),8.61(s,1H),8.42(d,J＝7.48Hz,1H),8.33(s,2H),7.96(d,J＝8.14Hz,1H),7.48-7.42(m,2H),7.40-7.31(m,3H),7.00(td,J＝8.03,5.28Hz,1H),6.52(s,2H),6.12(s,1H),5.13(d,J＝3.74Hz,1H),4.96-4.87(m,2H),4.80(br d,J＝12.32Hz,2H),4.37(t,J＝7.81Hz,1H),4.29(br d,J＝3.30Hz,1H),3.72(br dd,J＝10.34,3.96Hz,1H),3.66-3.54(m,4H),3.12-3.02(m,2H),2.99-2.91(m,2H),2.75(br t,J＝11.66Hz,2H),2.45(br s,4H),2.25-2.13(m,3H),2.07-1.90(m,8H),1.85-1.61(m,9H),1.38(d,J＝6.82Hz,3H),0.95(br d,J＝6.38Hz,3H),0.79(d,J＝6.82Hz,3H).
实施例152：化合物445的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000336
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-6-氟苯酚(60mg，164.47μmol)和中间体2-1(97.65mg，164.47μmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入醋酸(29.63mg，493.41μmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(104.57mg，493.41μmol)和醋酸钠(40.48mg，493.41μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干经高效液相色谱纯化(BostonPrime C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例48％-68％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物445(42.29mg)。
MS m/z(ESI):906.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.81-14.54(m,1H),8.98(s,1H),8.61-8.53(m,1H),8.40(br d,J＝7.1Hz,1H),7.97(br d,J＝7.9Hz,1H),7.47-7.41(m,2H),7.40-7.31(m,3H),7.03-6.94(m,1H),6.52(br s,2H),6.12(s,1H),5.16-4.98(m,1H),4.97-4.87(m,1H),4.64-4.51(m,1H),4.36(br t,J＝7.8Hz,1H),4.32-4.24(m,1H),3.72(br dd,J＝3.7,10.4Hz,1H),3.63(br d,J＝11.0Hz,2H),3.56(br d,J＝9.8Hz,1H),3.43(br d,J＝10.1Hz,2H),3.05-2.93(m,2H),2.76(br t,J＝11.3Hz,2H),2.45(s,3H),2.22(br d,J＝1.3Hz,3H),2.10(br s,3H),2.01(br dd,J＝4.3,8.8Hz,1H),1.87-1.68(m,6H),1.38(br d,J＝7.0Hz,3H),1.19-1.07(m,2H),0.95(brd,J＝6.5Hz,3H),0.83-0.74(m,3H).
实施例153：化合物446的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000337
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-4-氟苯酚盐酸盐(46.9mg，128.56μmol)和中间体2-1(91.60mg，154.27μmol)溶于无水四氢呋喃(1.5mL)和无水N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入醋酸硼氢化钠(81.74mg，385.69μmol)，醋酸(23.16mg，385.69μmol)和醋酸钠(31.64mg，385.69μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例45％-85％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物446(33.5mg)。
MS m/z(ESI):906.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.98(s,1H),8.55(s,1H),8.41(d,J＝7.6Hz,1H),8.00(dd,J＝3.0,10.5Hz,1H),7.48-7.41(m,2H),7.39-7.34(m,2H),7.20(br dd,J＝2.8,8.4Hz,1H),7.00(dd,J＝5.1,9.0Hz,1H),6.48(br s,2H),6.12(s,1H),5.12(d,J＝3.5Hz,1H),4.91(br t,J＝7.1Hz,1H),4.54(br s,1H),4.37(t,J＝7.9Hz,1H),4.28(br s,1H),3.76-3.68(m,1H),3.63(br d,J＝11.5Hz,2H),3.56(d,J＝9.8Hz,1H),3.42(br dd,J＝5.3,10.2Hz,2H),2.99(br d,J＝4.9Hz,2H),2.76(br t,J＝11.6Hz,2H),2.27-2.16(m,4H),2.09(br s,4H),1.88-1.72(m,6H),1.46(d,J＝7.0Hz,1H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.14(br d,J＝11.1Hz,3H),0.98-0.91(m, 3H),0.83(br d,J＝6.6Hz,1H),0.79(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例154：化合物449的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000338
步骤1：3-(2-氯嘧啶-5-基)氧基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-氯-5-羟基嘧啶(300mg，2.30mmol)，1-BOC-3-(羟基)氮杂环丁烷(437.89mg，2.53mmol)和三苯基膦(904.21mg，3.45mmol)溶于无水甲苯(6mL)中，在氮气氛围下0℃加入偶氮二甲酸二异丙酯(697.10mg，3.45mmol)。反应液在100℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液用减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)得到标题化合物(360mg)。
MS m/z(ESI):286.0[M+H] +；
步骤2：3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(132.41mg，381.80μmol)和3-(2-氯嘧啶-5-基)氧基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(120mg，419.98μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(148.04mg，1.15mmol)。反应液在80℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完毕。反应液用乙酸乙酯(5mL)和水(5mL)萃取，有机相减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)得到标题化合物(53mg)。
MS m/z(ESI):560.2[M+H] +.
步骤3：2-[3-氨基-1-[1-[5-(氮杂环丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(40mg，71.48μmol)溶于二氯甲烷(0.5mL)中，加入三氟乙酸(81.50mg，714.77μmol)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩至干得标题化合物(30mg)。
MS m/z(ESI):460.2[M+H] +.
步骤4：化合物449的合成
将2-[3-氨基-1-[1-[5-(氮杂环丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(30mg，52.31μmol)和中间体2-1(31.06mg，52.31μmol)溶于四氢呋喃(0.2mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中，加入醋酸(9.42mg，156.92μmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(33.26mg，156.92μmol)和醋酸钠(12.87mg，156.92μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干经高效液相色谱(Boston Prime C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例44％-84％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物449(19.8mg)。
MS m/z(ESI):1037.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.95-13.83(m,1H),8.98(s,1H),8.53(s,1H),8.40(br d,J＝7.8Hz, 1H),8.18-8.09(m,3H),7.48-7.41(m,2H),7.37(br d,J＝8.0Hz,3H),7.04-6.95(m,2H),6.44(br s,2H),6.11(s,1H),5.14-4.99(m,1H),4.96-4.83(m,2H),4.81-4.75(m,1H),4.70(br d,J＝13.5Hz,2H),4.36(br t,J＝7.6Hz,1H),4.28(br s,1H),3.71(br t,J＝6.4Hz,3H),3.64-3.53(m,3H),3.42(br d,J＝10.0Hz,1H),3.05(br t,J＝10.9Hz,2H),2.97(br t,J＝5.6Hz,2H),2.72(br t,J＝11.8Hz,2H),2.45(s,3H),2.35(br d,J＝6.5Hz,2H),2.26-2.18(m,1H),2.03-1.89(m,5H),1.83-1.74(m,1H),1.70(br d,J＝11.8Hz,2H),1.45(br d,J＝6.9Hz,1H),1.38(br d,J＝6.9Hz,3H),1.21-1.10(m,2H),0.94(br d,J＝6.3Hz,3H),0.84-0.74(m,3H).
实施例155：化合物453的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000339
步骤1：6-(羟甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
将2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-羧酸(150mg，621.68μmol)溶于四氢呋喃(4mL)中，在0℃加入硼烷四氢呋喃溶液(1M，1.87mL)，反应液在25℃搅拌2小时，薄层色谱(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)显示反应完成。将反应液冷却至0℃，缓慢滴加乙醇(4mL)淬灭，然后升温至60℃，搅拌0.5小时，减压浓缩至干，然后用乙酸乙酯(20mL*3)和水(3mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干得到标题化合物(130mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ4.78(br s,1H),3.92(s,2H),3.82(s,2H),3.55(d,J＝6.3Hz,2H),2.40-2.29(m,1H),2.28-2.17(m,2H),1.99-1.89(m,2H),1.42(s,9H).
步骤2：6-甲酰基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
将6-(羟甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(120mg，527.94μmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，在0℃加入戴斯-马丁过碘烷(335.88mg，791.91μmol)，反应液在25℃搅拌2小时，薄层色谱(石油醚： 乙酸乙酯＝1:1)显示反应完成。反应液用二氯甲烷(50mL)稀释后用饱和亚硫酸钠溶液(5mL*2)洗涤，有机相合并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到4/1)得到标题化合物(60mg)。
步骤3：6-[[4-[3-(乙基氨基)-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]-2-氮杂螺环[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
将6-甲酰基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(50mg，221.94μmol)和2-[3-(乙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(91.52mg，244.14μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)和四氢呋喃(2mL)中，加入乙酸(39.98mg，665.83μmol)、乙酸钠(36.41mg，443.89μmol)和醋酸硼氢化钠(141.12mg，665.83μmol)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。反应液用二氯甲烷(30mL*3)和水(8mL)萃取，有机相减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到2/1)得到标题化合物(87mg)。
MS m/z(ESI):548.3[M+H] +.
步骤4：2-[1-[1-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基甲基)哌啶-4-基]-3-乙氨基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将6-[[4-[3-(乙基氨基)-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]-2-氮杂螺环[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(30mg，54.78μmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入三氟乙酸(124.91mg，1.10mmol)，反应液在25℃搅拌1小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，得到标题化合物(24mg)。
MS m/z(ESI):448.2[M+H] +.
步骤5：N-[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基丙基]氨基甲酸苯酯的合成
将(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(200mg，416μmol，一盐酸盐)溶于二氯甲烷(2mL)和吡啶(1mL)，降温至0℃，然后缓慢滴加氯甲酸苯酚酯(65.1mg，416μmol)的二氯甲烷(2mL)溶液。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液加入水(5mL)和二氯甲烷(5mL)稀释，水相用二氯甲烷(5mL)萃取两次，有机相用水(5mL)洗涤两次。收集有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/1)得到标题化合物(110mg)。
MS m/z(ESI):565.6[M+H] +；
步骤6：化合物453的合成
将2-[1-[1-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基甲基)哌啶-4-基]-3-乙氨基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(24mg，53.62μmol)和[(S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸苯酯(33.31mg，58.98μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(34.65mg，268.11μmol)。反应液于80℃反应2小时。经LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例48％-88％)的混合物作为洗脱液)得到化合物453(13.1mg)。
MS m/z(ESI):918.4[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.98(s,1H),8.50(s,1H),8.40(br d,J＝7.9Hz,1H),8.11(d,J＝7.8Hz,1H),7.47-7.40(m,2H),7.39-7.31(m,3H),7.03(br t,J＝5.5Hz,1H),6.99-6.90(m,2H),5.56(br d,J＝9.4Hz,1H),4.94-4.87(m,1H),4.56-4.39(m,2H),4.33-4.25(m,2H),3.94-3.80(m,3H),3.74(br d,J＝6.5Hz,2H),3.66-3.55(m,4H),2.92(br d,J＝5.1Hz,2H),2.45(s,3H),2.35(br s,2H),2.23(br s,2H),2.16-1.89(m,6H),1.87-1.70(m,5H),1.37(d,J＝6.9Hz,3H),1.25(t,J＝7.1Hz,3H),0.94-0.88(m,9H).
实施例156：化合物460的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000340
将4-氟-2-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(30mg，74.92μmol)、(2S,4R)-1-[(2R)-2-[3-(4-甲酰基-1-哌啶基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(44.48mg，74.92μmol)和无水醋酸钠(18.44mg，224.75μmol)溶于无水四氢呋喃(1mL)和无水N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入醋酸(13.50mg，224.75μmol，12.85μL)和醋酸硼氢化钠(47.63mg，224.75μmol)，反应液于25℃搅拌2小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Boston Prime C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例42％-72％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物460(32.2mg)。
MS m/z(ESI):978.7[M+H]+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.78-13.73(m,1H),8.98(s,1H),8.54(s,1H),8.43(br d,J＝7.48Hz,1H),8.00(dd,J＝10.56,3.08Hz,1H),7.46-7.42(m,2H),7.39-7.35(m,2H),7.22(td,J＝8.36,3.08Hz,1H),7.00(dd,J＝8.80,5.06Hz,1H),6.67(br t,J＝5.83Hz,1H),6.13(s,1H),5.14(d,J＝3.74Hz,1H),4.92(br t,J＝7.26Hz,1H),4.68(s,1H),4.61-4.49(m,1H),4.37(t,J＝7.92Hz,1H),4.29(br s,1H),3.64(br d,J＝11.88Hz,3H),3.57(br d,J＝9.90Hz,1H),3.00(br d,J＝7.26Hz,2H),2.76(br t,J＝11.33Hz,2H),2.46(s,3H),2.34-1.97(m,10H),1.89-1.64(m,7H),1.39(d,J＝7.04Hz,3H),1.21(s,6H),1.18-1.10(m,2H),0.95(br d,J＝6.60Hz,3H),0.85-0.78(m,3H).
实施例157：化合物461的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000341
步骤1：2-[3-氨基-1-[1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-4-氟苯酚的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-4-氟苯酚盐酸盐(390mg，1.19mmol)和2-氯-5-溴嘧啶(298.68mg，1.54mmol)溶于无水二甲基甲酰胺(4mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(517.22μL，2.97mmol)。反应液在80℃下搅拌反应12小时。LCMS检测反应完毕。反应液用二氯甲烷(50mL)和水(200mL)萃取，减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝2：1)得到标题化合物(380mg)。
MS m/z(ESI):485.0,486.9[M+H] +.
步骤2：4-[2-[4-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯的合成
将2-[3-氨基-1-[1-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-4-氟苯酚(360mg，741.79μmol)和N-Boc-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸嚬哪醇酯(275.24mg，890.15μmol)溶于无水二氧六环(8mL)和水(3.2mL)中，加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(60.58mg，74.18μmol)和碳酸铯(483.38mg，1.48mmol)。反应液在氮气氛围下90℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到标题化合物(410mg)。
MS m/z(ESI):588.3[M+H] +.
步骤3：4-[2-[4-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[2-[4-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(410mg，697.70μmol)溶于无水甲醇(10mL)和无水四氢呋喃(10mL)中，加入湿钯碳(700mg，10％纯度)。反应液在25℃下氢气氛围中(15psi)搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。反应液过滤，滤液减压浓缩至干得标题化合物(400mg)。
MS m/z(ESI):590.2[M+H] +.
步骤4：2-[3-氨基-1-[1-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-4-氟-苯酚盐酸盐的合成
将4-[2-[4-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(400mg，678.35μmol)溶于无水甲醇(5mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，1.70mL)。反应液呈红色在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。反应液用减压浓缩至干得标题化合物(400mg)。
MS m/z(ESI):490.2[M+H] +.
步骤7：化合物461的合成
将2-[3-氨基-1-[1-[5-(哌啶-4-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]-4-氟-苯酚盐酸盐(20mg，38.02μmol)和中间体2-1(22.58mg，38.02μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和无水四氢呋喃(0.5mL)中，加入醋酸(2.17μL，38.02μmol)、乙酸钠(6.24mg，76.04μmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(24.18mg，114.07μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例51％-91％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物461(7.8mg)。
MS m/z(ESI):534.5[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.73(br s,1H),9.10-8.71(m,1H),8.57(s,1H),8.40(br d,J＝7.6Hz,1H),8.32(s,2H),7.98(dd,J＝2.8,10.4Hz,1H),7.50-7.40(m,2H),7.40-7.33(m,2H),7.22(dt,J＝2.9,8.4Hz,1H),7.01(dd,J＝5.1,8.9Hz,1H),6.47(br s,2H),6.17-5.95(m,1H),5.21-4.85(m,3H),4.80(br d,J＝12.8Hz,2H),4.71-4.33(m,1H),4.29(br s,1H),3.78-3.68(m,1H),3.67-3.53(m,3H),3.12-3.00(m,2H),2.94(br d,J＝10.0Hz,2H),2.74(br t,J＝11.6Hz,2H),2.45(s,3H),2.41-2.34(m,1H),2.30-2.04(m,4H),2.03-1.87(m,7H),1.84-1.57(m,8H),1.48-1.34(m,3H),1.13(br d,J＝11.3Hz,2H),0.95(br d,J＝6.5Hz,3H),0.86-0.76(m,3H).
实施例158：化合物473的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000342
步骤1：3-(三氟甲磺酰氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-8-羧酸叔丁酯的合成
将N-Boc-降托品酮(2g，8.88mmol)溶于无水四氢呋喃(30mL)，在零下78℃氮气氛围下加入二(三甲基硅)氨基钾(1M，10.65mL)，然后在零下78℃搅拌半个小时，然后在零下78℃氮气氛围下加入N-苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺(3.81g，10.65mmol)无水四氢呋喃(20mL)溶液。反应液在氮气氛围下零下78℃搅拌反应2小时。薄层层析(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)检测原料消失。反应液用饱和氯化铵水溶 液(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(20mL*3)和水(60mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝3：1)得到标题化合物(3.5g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝6.33(d,J＝5.5Hz,1H),4.48-4.20(m,2H),2.90(br d,J＝15.2Hz,1H),2.18(br s,2H),1.91(br s,2H),1.69(br d,J＝12.5Hz,1H),1.39(s,9H).
步骤2：3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-2-烯-8-羧酸叔丁酯的合成
将3-(三氟甲磺酰氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-8-羧酸叔丁酯(2.5g，7.00mmol)和双联频那醇硼酸酯(2.66g，10.49mmol)溶于无水二氧六环(70mL)中，加入乙酸钾(1.37g，13.99mmol)和[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(285.66mg，349.80μmol)。反应液在氮气氛围下80℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，用水(300mL)稀释，加入乙酸乙酯(100mL*3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝5：1)得到标题化合物(1.36g)。
MS m/z(ESI):280.0[M+H-56] +.
步骤3：3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-8-羧酸叔丁酯的合成
将3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-2-烯-8-羧酸叔丁酯(242.11mg，577.76μmol)和2-[3-氨基-1-[1-(5-溴嘧啶-2-基)-4-哌啶基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(180mg，385.17μmol)溶于无水二氧六环(0.8mL)和水(0.2mL)中，加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(31.45mg，38.52μmol)和碳酸铯(250.99mg，770.35μmol)。反应液在氮气氛围下90℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：1)得到标题化合物(110mg)。
MS m/z(ESI):596.2[M+H] +.
步骤4：3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯的合成
将3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-8-羧酸叔丁酯(110mg，184.66μmol)溶于无水四氢呋喃(10mL)中，加入湿钯碳(200mg，10％纯度)。反应液在40℃搅拌反应8小时。LCMS检测反应完毕。反应液用减压浓缩至干得标题化合物(89mg)。
MS m/z(ESI):598.2[M+H] +.
步骤5：2-(1-(1-(5-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-3-氨基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(89mg，148.90μmol)溶于无水甲醇(2mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，372.25μL)。反应液在呈红色在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，得到标题化合物(120mg)。
MS m/z(ESI):498.2[M+H] +.
步骤6：化合物473的合成
将2-(1-(1-(5-(8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-3-氨基-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(55.35mg，67.37μmol)和中间体2-1(40mg，67.37μmol)溶于无水四氢呋喃(1mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入乙酸(67.37μmol，3.85μL)、乙酸钠(11.05mg，134.74μmol)，超声至变色，再加入三乙酰氧基硼氢化钠(42.84mg，202.11μmol)。反应液在25℃下搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液用减压浓缩至干，经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例18％-58％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物473(7.2mg)。
MS m/z(ESI):1075.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.98-13.78(m,1H),9.02-8.94(m,1H),8.84-8.75(m,1H),8.55-8.48(m,1H),8.48-8.31(m,2H),8.14-8.04(m,1H),7.42(s,2H),7.39-7.30(m,3H),7.06-6.94(m,2H),6.54-6.34(m,2H),6.15-5.95(m,1H),5.21-5.02(m,1H),5.00-4.82(m,4H),4.70-4.32(m,1H),4.32-4.23(m,1H),3.78-3.66 (m,1H),3.64-3.52(m,4H),3.21-3.10(m,4H),2.85-2.77(m,2H),2.77-2.67(m,2H),2.47-2.42(m,3H),2.28-2.17(m,1H),2.12-1.90(m,7H),1.85-1.59(m,8H),1.57-1.47(m,1H),1.46(br s,3H),1.23-1.05(m,4H),0.99-0.89(m,3H),0.84-0.73(m,3H).
实施例159：化合物475的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000343
步骤1：4-(6-(2-羟基苯基)-3-(丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-[1,4'-联哌啶]-1'-羧酸叔丁酯的合成
将2-[1-(哌啶-4-基)-3-(丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(120mg，340.49μmol)和N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(135.68mg，680.98μmol)溶于四氢呋喃(2mL)和N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入醋酸(20.45mg，340.49μmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(72.16mg，340.49μmol)和醋酸钠(83.80mg，1.02mmol)。反应液于25℃搅拌反应12小时。经LCMS监测反应完全。往反应液中加入饱和碳酸氢钠调节pH至8-9左右，并用二氯甲烷/甲醇＝10/1(15mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩至干，然后经柱层析纯化(石油醚/四氢呋喃＝1/2)得到标题化合物(139mg)。
MS m/z(ESI):536.3[M+H] +.
步骤2：2-(1-([1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-(6-(2-羟基苯基)-3-(丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)-[1,4'-联哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(139mg，259.48μmol)溶于无水甲醇(1.5mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，1.30mL)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩至干得标题化合物(110mg)。
MS m/z(ESI):436.2[M+H] +.
步骤3：化合物475的合成
将2-(1-([1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(丙基氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(36mg，76.27μmol)和中间体2-1(45.28mg，76.27μmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入醋酸(13.74mg，228.80μmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(48.49mg，228.80μmol)和醋酸钠(18.77mg，228.80μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干经高效液相色谱纯化(BostonPrime C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例60％-80％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物475(25.5mg)。
MS m/z(ESI):507.6[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.00(br s,1H),8.98(s,1H),8.48(s,1H),8.40(br d,J＝7.6Hz,1H),8.12(br d,J＝8.0Hz,1H),7.48-7.40(m,2H),7.39-7.31(m,3H),7.09(br t,J＝5.5Hz,1H),7.03-6.93(m,2H),6.11(s,1H),5.16-4.98(m,1H),4.91(quin,J＝6.9Hz,1H),4.58-4.47(m,1H),4.36(br t,J＝7.7Hz,1H),4.28(br s,1H),3.76-3.67(m,1H),3.65-3.52(m,3H),3.40(br s,2H),3.01(br d,J＝9.0Hz,2H),2.89(br d,J＝8.8Hz,2H),2.73(br t,J＝11.6Hz,2H),2.45(s,3H),2.41-2.17(m,5H),2.16-1.99(m,5H),1.93-1.78(m,5H), 1.77-1.63(m,7H),1.53-1.35(m,5H),1.17-1.03(m,2H),1.01-0.91(m,6H),0.84-0.73(m,3H).
实施例160：化合物482的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000344
步骤1：4-(6-氯吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-氯-5-碘-吡啶(2g，8.35mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.56g，8.35mmol)溶于无水二氧六环(40mL)中，加入叔丁醇钠(1.61g，16.71mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(764.88mg，835.28μmol)和4,5-双(二苯基磷)-9,9-二甲基氧杂蒽(966.62mg，1.67mmol)。反应液在氮气氛围下90℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。将反应液用水(20mL)稀释后用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩至干，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝2：1)纯化得标题化合物(618.1mg)。
MS m/z(ESI):298.0[M+H] +.
步骤2：4-[6-[4-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-3-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(6-氯吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(518mg，1.74mmol)和(6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基)氨基甲酸叔丁酯(658.88mg，1.45mmol)溶于二氧六环(14mL)，加入叔丁醇钠(417.94mg，4.35mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(121.24mg，144.96μmol)和4,5-双(二苯基磷)-9,9-二甲基氧杂蒽(167.72mg，0.29mmol)。反应液在100℃氮气保护下搅拌反应16小时。薄层层析(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1:1)检测反应完毕。将反应液用水(10mL)稀释后用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤后滤液浓缩干得标题化合物(457.7mg)。
MS m/z(ESI):716.3[M+H] +.
步骤3：2-(3-氨基-1-(1-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-[6-[4-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-3-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(457.7mg，639.39μmol)溶于无水甲醇(5mL)，加入盐酸二氧六环(4M， 1.60mL)，反应液在50℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液浓缩至干得标题化合物(505.6mg，粗品)。
MS m/z(ESI):472.3[M+H] +.
步骤4：化合物482的合成
将2-(3-氨基-1-(1-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(235.30mg，463.17μmol)和中间体2-1(250mg，421.06μmol)溶于无水四氢呋喃(4mL)和无水N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入醋酸(75.86mg，1.26mmol，72.31μL)、醋酸钠(103.62mg，1.26mmol)和醋酸硼氢化钠(267.72mg，1.26mmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例43％-83％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物482(144.4mg)。
MS m/z(ESI):525.5[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.93(br s,1H),9.01-8.92(m,1H),8.51(s,1H),8.42(br d,J＝7.5Hz,1H),8.14-8.03(m,1H),7.90-7.80(m,1H),7.48-7.40(m,2H),7.34(br s,3H),7.29(br dd,J＝1.9,8.8Hz,1H),7.05-6.96(m,2H),6.85(br d,J＝9.3Hz,1H),6.52-6.35(m,2H),6.15-5.95(m,1H),5.19-5.12(m,1H),4.97-4.75(m,2H),4.43-4.24(m,4H),3.76-3.69(m,1H),3.61(br d,J＝11.4Hz,3H),3.56(br d,J＝9.8Hz,4H),3.08-2.88(m,6H),2.81-2.67(m,2H),2.45(s,3H),2.30-1.94(m,7H),1.87(br d,J＝9.9Hz,2H),1.83-1.61(m,4H),1.49-1.32(m,3H),1.22-1.04(m,2H),1.01-0.90(m,3H),0.84-0.73(m,3H).
实施例161：化合物493的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000345
步骤1：6-氯-3',6'-二氢-[3,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯的合成
将2-氯-5-碘-吡啶(500mg，2.09mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(710.26mg，2.30mmol)溶于二氧六环(16mL)和水(4mL)中，在氮气环境下加入碳酸铯(1.36g，4.18mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(170.53mg，208.82 μmol)，反应液在100℃搅拌2小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，然后用乙酸乙酯(50mL*3)和水(50mL)萃取，有机相减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到5/1)得到标题化合物(295mg)。
MS m/z(ESI):295.0[M+H] +.
步骤2：6-(4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)-3',6'-二氢-[3,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯的合成
将6-氯-3',6'-二氢-[3,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(150mg，330.02μmol)溶于二氧六环(6mL)中，在氮气环境下加入叔丁醇钠(95.15mg，990.05μmol)和甲磺酸-(2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(27.60mg，33.00μmol)，反应液于100℃反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压浓缩至干，浓缩物用二氯甲烷(15mL*3)和水(5mL)萃取，有机相减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到2/1)得到标题化合物(95mg)。
MS m/z(ESI):713.5[M+H] +.
步骤3：4-[6-[4-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-3-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将6-(4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)-3',6'-二氢-[3,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(95mg，133.27μmol)溶于四氢呋喃(2mL)中，加入钯碳(30mg，133.27μmol，10％纯度)和三乙基硅烷(305.52mg，1.33mmol)，反应液在25℃搅拌2小时，LCMS显示反应完成。将反应液过滤，浓缩得到标题化合物(90mg)。
MS m/z(ESI):715.2[M+H] +.
步骤4：2-(3-氨基-1-(1-(5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-[6-[4-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡啶-3-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(45mg，62.95μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，157.38μL)，反应液在25℃搅拌2小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，得到标题化合物(30mg)。
MS m/z(ESI):471.1[M+H] +.
步骤5：化合物493的合成
将2-(3-氨基-1-(1-(5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(28.18mg，55.58μmol)和中间体2-1(30mg，50.53μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)和四氢呋喃(1.5mL)中，加入乙酸(9.10mg，151.58μmol)、乙酸钠(12.43mg，151.58μmol)和醋酸硼氢化钠(32.13mg，151.58μmol)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。反应液加入水(0.2mL)淬灭，减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例50％-90％)的混合物作为洗脱液)得到化合物493(8.9mg)。
MS m/z(ESI):1048.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.92(br s,1H),9.03-8.74(m,1H),8.53(s,1H),8.41(d,J＝7.8Hz,1H),8.11(d,J＝7.5Hz,1H),8.03(d,J＝2.1Hz,1H),7.52-7.41(m,3H),7.39-7.29(m,3H),7.06-6.97(m,2H),6.88(d,J＝8.9Hz,1H),6.45(s,2H),6.17-5.95(m,1H),5.20-5.00(m,1H),4.96-4.81(m,2H),4.45(br d,J＝13.4Hz,2H),4.37(t,J＝7.8Hz,1H),4.29(br s,1H),3.71(br dd,J＝4.2,10.4Hz,1H),3.66-3.53(m,3H),3.43(br s,2H),3.07-2.89(m,4H),2.82-2.69(m,2H),2.45(s,3H),2.30-2.13(m,3H),2.07-1.85(m,7H),1.83-1.57(m,8H),1.49-1.34(m,3H),1.13(br d,J＝10.6Hz,2H),1.00-0.91(m,3H),0.86-0.74(m,3H).
实施例162：化合物494的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000346
步骤1：1-(6-氯哒嗪-3-基)哌啶-4-醇的合成
将3,6-二氯哒嗪(2g，13.42mmol)和哌啶-4-醇(1.49g,14.77mmol)溶于乙醇(40mL)中，升温至80℃反应过夜。经LCMS监测反应完全，真空浓缩后得标题化合物(3.2g)。
MS m/z(ESI):214.10[M+H] +.
步骤2：4-[6-(4-羟基哌啶-1-基)哒嗪-3-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-1-羧酸叔丁酯的合成
将1-(6-氯哒嗪-3-基)哌啶-4-醇(2.87g,13.43mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(6.23g，20.15mmol)、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(1.10g，1.34mmol)和磷酸钾(11.39g，53.73mmol)溶于1,4-二氧六环(200mL)和水(40mL)中。装置用氮气进行置换后升温至100℃反应过夜。经LCMS监测反应完全，分液后有机相真空浓缩，经柱层析(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇：20/1)纯化得标题化合物(3.47g)。
MS m/z(ESI):361.20[M+H] +.
步骤3：4-[6-(4-羟基哌啶-1-基)哒嗪-3-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[6-(4-羟基哌啶-1-基)哒嗪-3-基]-3,6-二氢吡啶-1(2H)-1-羧酸叔丁酯(3.4g，9.43mmol)和钯碳(340mg，279.94μmol，10％纯度)溶于甲醇(50mL)中，升温至50℃反应过夜。经LCMS监测反应完全，过滤真空浓缩后得标题化合物(3.2g)。
MS m/z(ESI):363.20[M+H] +.
步骤4：4-[6-(4-甲磺酰氧基哌啶-1-基)哒嗪-3-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[6-(4-羟基哌啶-1-基)哒嗪-3-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.38mmol)和甲基磺酰氯(237mg，2.07mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，加入三乙胺(418mg，4.14mmol)，于室温反应2小时，经LCMS监测反应完全，真空浓缩后经柱层析(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯：1/1)纯化得标题化合物(227mg)。
MS m/z(ESI):441.10[M+H] +.
步骤5：4-[6-[4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基]哒嗪-3-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(133mg，646.91μmol)和碳酸铯(421mg，1.29mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，搅拌10分钟后，加入4-[6-(4-甲磺酰氧基哌啶-1-基)哒嗪-3-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(190mg，431.27μmol)，升温至80℃反应过夜。经LCMS监测反应完全，真空浓缩后经柱层析(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯：1/1)纯化得标题化合物(190mg)。
MS m/z(ESI):514.20[M+H] +.
步骤6：4-[6-[4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]哒嗪-3-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-[6-[4-(3-氨基-6-氯-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基]哒嗪-3-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(180mg，350.18μmol)、2-(甲氧基甲氧基)苯硼酸(127mg，700.36μmol)、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(28mg，35.02μmol)和磷酸钾(296mg，1.40mmol)溶于1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)中，对装置进行氮气置换后升温至100℃反应4小时。经LCMS监测反应完全，分液后有机相浓缩，经柱层析(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇：20/1)纯化得标题化合物(164mg)。
MS m/z(ESI):616.30[M+H] +.
步骤7：2-[3-氨基-1-[1-[6-(哌啶-4-基)哒嗪-3-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[6-[4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]哒嗪-3-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(164mg，266.35μmol)溶于二氯甲烷(2mL)和甲醇(1mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，2mL)，于室温反应6小时，经LCMS监测反应完全。浓缩后，加入二氯甲烷(5mL)、甲醇(0.5mL)和饱和碳酸氢钠溶液(5mL)，调节pH为弱碱性，萃取、干燥、过滤后滤液浓缩后得粗产品即标题产物(110mg)。
MS m/z(ESI):472.20[M+H] +.
步骤8：化合物494的合成
将2-[3-氨基-1-[1-[6-(哌啶-4-基)哒嗪-3-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(50mg，106.03μmol)和中间体2-1(37mg，63.62μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入醋酸(636μg，10.60μmol)。在-20℃搅拌30分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(67mg，318.10μmol)，恢复至室温反应4小时，经LCMS监测反应完全，经制备液相色谱纯化(YMC-ActusTriartC18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减(乙腈比例60％-70％)的混合物作为洗脱液)得化合物494(7.6mg)。
MS m/z(ESI):1049.50[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.90(s,1H),8.99(s,1H),8.55(s,1H),8.44–8.36(m,1H),8.16–8.09(m,1H),7.63–7.53(m,1H),7.48–7.42(m,2H),7.40–7.30(m,4H),7.08–6.96(m,2H),6.46(s,2H),6.13(s,1H),5.15–5.07(m,1H),4.98–4.86(m,2H),4.60–4.48(m,2H),4.42–4.33(m,1H),4.33–4.26(m,1H),3.77–3.68(m,1H),3.68–3.53(m,3H),3.48–3.40(m,1H),3.17–3.04(m,2H),3.02–2.91(m,2H),2.83–2.68(m,3H),2.46(s,3H),2.32–2.14(m,3H),2.12–1.89(m,6H),1.86–1.67(m,6H),1.50–1.42(m,1H),1.42–1.34(m,2H),1.29–1.05(m,3H),1.03–0.91(m,3H),0.90–0.74(m,3H).
实施例163：化合物495的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000347
步骤1：4-(5-氯吡嗪-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯的合成
将2-溴-5-氯吡嗪(1g,5.1mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(3.1g，10mmol)、碳酸钾(4.2g，30mmol)和Pd(dppf)Cl 2(550mg，0.76mmol)加入二氧六环(50mL)和水(10mL)中，氮气交换三次，85℃反应4h，然后减压浓缩，残留物中加入DCM(100mL×3)和水(100mL)萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE：EA＝1：0至1：1)得标题化合物(1.3g)。
MS m/z(ESI):240.00[M+H-56] +.
步骤2：4-(5-(4-羟基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯的合成
将4-(5-氯吡嗪-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.1g，3.7mmol)和4-羟基哌啶(740mg，7.4mmol)溶于DMF(10mL)中，然后加入碳酸钾(2.1g，15mmol)，100℃反应12h。然后加入乙酸乙酯(100mL×3)和水(100mL)萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-10％)得标题化合物(700mg)。
MS m/z(ESI):361.20[M+H] +.
步骤3：4-(5-(4-羟基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(5-(4-羟基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(700mg，1.94mmol)溶于甲醇(10mL)中，接着加入10％钯碳(70mg)，氢气交换三次，然后在氢气氛围中继续反应至原料消耗完全，反应液过滤，滤液浓缩得标题化合物(650mg)。
MS m/z(ESI):363.20[M+H] +.
步骤4：4-(5-(4-甲磺酰氧基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(5-(4-羟基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(650g，1.8mmol)溶于DCM(10mL)中，加入三乙胺(500g，5mmol)，冷却至0℃，然后缓慢加入甲基磺酰氯(370mg，3.2mmol)，加入完毕，缓慢升温至室温反应1h，然后加入水(50mL)和DCM(50mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-50％)得标题化合物(520mg)。
MS m/z(ESI):441.10[M+H] +.
步骤5：4-(5-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)吡嗪-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(5-(4-甲磺酰氧基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(520mg，1.2mmol)和6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(326mg，1.2mmol)溶于DMF(5mL)中，然后加入碳酸铯(750mg，2mmol)，氮气置换三次，85℃反应12h，然后反应体系中加入水(60mL)和乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-0％)得标题化合物(350mg)。
MS m/z(ESI):616.30[M+H] +.
步骤6：2-(3-氨基-1-(1-(5-(哌啶-4-基)吡嗪-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-(5-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)吡嗪-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(350mg，0.57mmol)溶于甲醇(3mL)中，然后加入盐酸二氧六环溶液(4M，3mL)，室温反应1h，反应液减压浓缩，残留物加入甲醇溶解，然后加入三乙胺(1mL)中和30min，最后减压浓缩得标题化合物(260mg)。
MS m/z(ESI):472.20[M+H] +.
步骤7：化合物495的合成
将2-(3-氨基-1-(1-(5-(哌啶-4-基)吡嗪-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(50mg，0.11mmol)溶于DMF(3mL)中，加入三乙胺(1mL)，接着加入中间体2-1(50mg，0.08mmol)，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(63mg，0.3mmol)室温反应12h，反应液减压浓缩，残留物经制备色谱纯化得化合物495(22mg)。
MS m/z(ESI):350.70[1/3M+H] +；
1H NMR(600MHz,CD 3OD)δ8.09(s,1H),8.32(s,1H),8.25(s,1H),8.07(s,1H),8.03-8.05(m,1H), 7.44-7.48(m,3H),7.35-7.38(m,2H),7.01-7.04(m,2H),6.13(s,1H),5.05–5.09(m,2H),4.52-4.57(m,4H),4.44-4.48(m,2H),3.86–3.88(m,2H),3.70-3.75(m,3H),3.62-3.65(m,3H),3.43–3.46(m,1H),3.17–3.23(m,4H),2.88–2.91(m,2H),2.50(s,3H),2.38-2.43(m,2H),2.24-2.27(m,2H),2.19-2.22(m,2H),2.03-2.07(m,2H),1.93-1.97(m,3H),1.86-1.90(m,2H),1.52-1.56(m,3H),1.29-1.33(m,2H),1.05-1.09(m,3H),0.89-0.93(m,3H).
实施例164：化合物496的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000348
步骤1：1-(5-溴噻唑-2-基)哌啶-4-醇的合成
将2,5-二溴噻唑(3g，12.5mmol)、4-羟基哌啶(3g，30mmol)和三乙胺(6g，60mmol)溶于二氧六环(100mL)中，90℃反应48h，然后减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-20％)得标题化合物(2.6g)。
MS m/z(ESI):264.90[M+H] +.
步骤2：4-(2-(4-羟基哌啶-1-基)噻唑-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯的合成
将1-(5-溴噻唑-2-基)哌啶-4-醇(2g，7.6mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(4.6g，15.2mmo)、碳酸钾(4.2g，30mmol)和Pd(dppf)Cl 2(550mg，0.76mmol)加入二氧六环(100mL)和水(20mL)中，氮气交换三次，85℃反应4h。然后减压浓缩，残留物中加入DCM(100mL×3)和水(100mL)萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-50％)得标化合物(1.8g)。
MS m/z(ESI):366.10[M+H] +.
步骤3：4-(2-(4-羟基哌啶-1-基)噻唑-5-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(2-(4-羟基哌啶-1-基)噻唑-5-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.6g，4.4mmol)溶于甲醇(100mL)中，接着加入10％钯碳(320mg)，氢气交换三次，然后在氢气氛围中继续反应至原料消耗完全，反应液过滤，滤液浓缩得标题化合物(1.3g，收率为81.3％)。
MS m/z(ESI):368.20[M+H] +.
步骤4：4-(2-(4-甲磺酰氧基哌啶-1-基)噻唑-5-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(2-(4-羟基哌啶-1-基)噻唑-5-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.2g，3.2mmol)溶于DCM(30mL)中，加入三乙胺(1.1g，10mmol)冷却至0℃，然后缓慢加入甲基磺酰氯(741mg，6.4mmol)，加入完毕，缓慢升温至室温反应1h，然后加入水(50mL)和DCM(50mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-50％)得标题化合物(1.4g)。
MS m/z(ESI):446.10[M+H] +.
步骤5：4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)噻唑-5-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(2-(4-甲磺酰氧基哌啶-1-基)噻唑-5-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(446mg，1mmol)和6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺(272mg，1mmol)溶于DMF(5mL)中，然后加入碳酸铯(750mg，2mmol)，氮气置换三次，85℃反应12h，然后反应体系中加入水(60mL)和乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经柱色谱纯化(PE:EA＝100％-0％)得标题化合物(385mg)。
MS m/z(ESI):621.20[M+H] +.
步骤6：2-(3-氨基-1-(1-(5-(哌啶-4-基)噻唑-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚的合成
将4-(2-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基)哌啶-1-基)噻唑-5-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(385mg，0.62mmol)溶于甲醇(3mL)中，然后加入盐酸二氧六环溶液(4M，3mL)，室温反应1h，反应液减压浓缩，残留物加入甲醇溶解，然后加入三乙胺(1mL)中和30min，最后减压浓缩得2-(3-氨基-1-(1-(5-(哌啶-4-基)噻唑-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(300mg)。
MS m/z(ESI):477.20[M+H] +.
步骤7：化合物496的合成
将2-(3-氨基-1-(1-(5-(哌啶-4-基)噻唑-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(50mg，0.11mmol)溶于DMF(3mL)中，加入三乙胺(1mL)，接着加入中间体2-1(50mg，0.08mmol)，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(63mg，0.3mmol)室温反应12h，反应液减压浓缩，残留物经制备色谱(YMCC18，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有5mmol碳酸氢铵)和乙腈混合物(乙腈比例30％-60％)作为洗脱液)纯化得化合物496(20mg)。
MS m/z(ESI):527.70[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.89(s,1H),8.30(s,1H),8.00-8.05(m,1H),7.40–7.49(m,4H),7.34–7.39(m,1H),6.99–7.06(m,2H),6.87-6.91(m,1H),6.11(s,1H),5.03-5.08(m,1H),4.50-4.57(m,1H),4.44-4.49(m,1H),4.07-4.15(m,2H),3.84-3.90(m,1H),3.67-3.74(m,2H),3.60-3.66(m,2H),2.98-3.05(m,2H),2.83-2.91(m,2H),2.72–2.79(m,1H),2.50(s,3H),2.25–2.44(m,6H),1.94–2.23(m,9H),1.69-1.90(m,6H),1.52-1.61(m,3H),1.25-1.33(m,2H),1.03-1.10(m,3H),0.88-0.95(m,3H).
实施例165：化合物499的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000349
将2-[3-[(2-羟基-2-甲基丙基)氨基]-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(20mg，47.74μmol)、(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-[3-(哌嗪-1-基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(28.80mg，47.74μmol)和1,2-二溴乙烷(9.87mg，52.52μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(30.85mg，238.71μmol)，反应液于60℃反应12小时，经LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例36％-76％)的混合物作为洗脱液)得到化合物499(3.9mg)。
MS m/z(ESI):975.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.90(br s,1H),9.02-8.96(m,1H),8.49(s,1H),8.23(m,1H),8.12(d,J＝7.7Hz,1H),7.49-7.41(m,2H),7.40-7.30(m,3H),7.05-6.95(m,2H),6.65(br s,1H),6.15(d,J＝4.8Hz,1H),5.22-4.99(m,1H),4.90(br dd,J＝6.9,12.9Hz,1H),4.65(s,1H),4.55(br s,1H),4.45-4.34(m,1H),4.28(br s, 1H),3.69(br d,J＝9.2Hz,1H),3.59(m,2H),3.57-3.45(m,8H),3.34-3.30(m,2H),3.15(m,4H),3.02(br s,2H),2.45(d,J＝4.2Hz,3H),2.30-1.98(m,6H),1.87-1.71(m,3H),1.45-1.32(m,3H),1.19(s,6H),1.01-0.91(m,3H),0.85-0.76(m,3H).
实施例166：化合物504的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000350
将5-氟-2-(3-((2-羟基-2-甲基丙基)氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基)苯酚(50mg，0.11mmol)溶于DMF(3mL)中，加入三乙胺(1mL)和中间体2-1(50mg，0.08mmol)，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(63mg，0.3mmol)，室温反应12h，反应液减压浓缩，残留物经制备色谱(YMCC18，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有5mmol碳酸氢铵)和乙腈混合物(乙腈含量30％-60％)作为洗脱液)纯化得化合物504(7mg)。
MS m/z(ESI):489.80[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.89(s,1H),8.20(s,1H),8.04-8.09(m,2H),7.44–7.48(m,3H),6.73–6.77(m,2H),6.13(m,1H),5.05-5.07(m,1H),4.53-4.55(m,1H),4.45-4.47(m,1H),3.85-3.89(m,2H),3.70-3.75(m,3H),3.62-3.66(m,2H),3.55-3.57(m,2H),3.13-3.17(m,2H),2.87-2.91(m,2H),2.50(s,3H),2.35–2.40(m,4H),2.27–2.30(m,1H),2.19–2.22(m,1H),1.95–2.01(m,3H),1.87–1.91(m,2H),1.81-1.86(m,2H),1.53-1.57(m,3H),1.29-1.36(m,8H),1.06-1.09(m,3H),0.90-0.93(m,3H).
实施例167：化合物515的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000351
步骤1：4-((2-氯嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-氯嘧啶-5-醇(500mg，3.83mmol)和4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.16g，5.75mmol)溶于无水甲苯(30mL)中，加入偶氮二甲酸二异丙酯(929.46mg，4.60mmol，893.71μL)和三苯基膦(1.21g，4.60mmol)。反应液在氮气保护下于100℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干,经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝2：1)得到标题化合物(768mg)。
MS m/z(ESI):258.0[M+H-56] +.
步骤2：4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧基哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-((2-氯嘧啶-5-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.59mmol)和2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(494.54mg，1.59mmol)溶于二甲亚砜(10mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(617.84mg，4.78mmol，832.67μL)，反应液于140℃搅拌反应14小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干得标题化合物(160mg)。
MS m/z(ESI):588.6[M+H] +.
步骤3：2-[3-氨基-1-[1-[5-(哌啶-4-基氧基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧基哌啶-1-羧酸叔丁酯(130mg，221.21μmol)溶于无水甲醇(2mL)中，加入盐酸二氧六环(2.21mmol，553.03μL，4M)。反应液25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完成。反应液减压浓缩至干得标题化合物(112.2mg)。
MS m/z(ESI):488.3[M+H] +.
步骤4：化合物515的合成
将2-[3-氨基-1-[1-[5-(哌啶-4-基氧基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(90mg，184.59μmol)和中间体2-1(109.60mg，184.59μmol)溶于无水四氢呋喃(1mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入乙酸(11.09mg，184.59μmol，10.56μL)、乙酸钠(30.29mg，369.19μmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(117.37mg，553.78μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Boston Prime C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例47％-87％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物515(19.6mg)。
MS m/z(ESI):1065.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.02-13.79(m,1H),9.07-8.88(m,1H),8.57-8.48(m,1H),8.47-8.35(m,1H),8.29-8.16(m,2H),8.14-8.03(m,1H),7.47-7.39(m,2H),7.39-7.27(m,3H),7.08-6.90(m,2H),6.54-6.34(m,2H),6.14-5.97(m,1H),5.15(br d,J＝3.0Hz,1H),5.08-4.81(m,3H),4.75-4.67(m,2H),4.38(brt,J＝7.8Hz,1H),4.33-4.26(m,1H),4.22-4.14(m,1H),3.72(br d,J＝6.1Hz,2H),3.61-3.54(m,4H),3.05(br t,J＝11.4Hz,2H),2.78-2.62(m,4H),2.46-2.38(m,3H),2.24-2.07(m,5H),2.01-1.84(m,6H),1.71(br d,J＝11.9Hz,2H),1.59(br d,J＝8.9Hz,3H),1.47-1.33(m,3H),1.15-1.03(m,2H),1.01-0.89(m,3H),0.83(br d,J＝6.6Hz,3H).
实施例168：化合物516的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000352
步骤1：3-((2-氯嘧啶-5-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-氯嘧啶-5-醇(200mg，1.53mmol)和3-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(430.32mg，2.30mmol)溶于无水四氢呋喃(8mL)中，加入三苯基膦(602.82mg，2.30mmol)和偶氮二甲酸二异丙酯(464.74mg，2.30mmol，446.86μL)。反应液在氮气氛围下25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液用水(2mL)淬灭，然后用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩至干，经柱层析色谱(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：1)纯化得标题化合物(900mg，粗品)。
MS m/z(ESI):300.10[M+H] +.
步骤2：3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(100mg，322.21μmol)和3-((2-氯嘧啶-5-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(231.80mg，386.66μmol，50％纯度)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(124.93mg，966.64μmol，168.37μL)。反应液在100℃搅拌反应16小时。薄层层析(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝1:2)检测反应完毕。反应液过滤浓缩干得标题化合物(55.6mg)。
步骤3：2-[3-氨基-1-[1-(5-吡咯烷-3-基氧基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将3-[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-基]氧基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(50mg，87.16μmol)溶于无水二氯甲烷(1mL)，加入盐酸二氧六环(4M，217.90μL)，反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液浓缩至干，得到标题化合物(57.4mg，粗品)。
MS m/z(ESI):474.1[M+H] +.
步骤4：化合物516的合成
将2-[3-氨基-1-[1-(5-吡咯烷-3-基氧基)嘧啶-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(25mg，49.02μmol)和中间体2-1(29.11mg，49.02μmol)溶于无水四氢呋喃(0.5mL)和无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入醋酸(8.83mg，147.06μmol，8.41μL)、醋酸钠(12.06mg，147.06μmol)和醋酸硼氢化钠(31.17mg，147.06μmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时，LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Phenomenex Luna C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例53％-73％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物516(23.7mg)。
MS m/z(ESI):526.4[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.90(s,1H),8.99-8.95(m,1H),8.54-8.51(m,1H),8.40(d,J＝7.6Hz,1H),8.20(s,2H),8.13-8.08(m,1H),7.48-7.40(m,2H),7.39-7.34(m,3H),7.04-6.95(m,2H),6.48-6.39(m,2H),5.99(s,1H),5.14-4.99(m,1H),4.97-4.79(m,3H),4.75-4.67(m,2H),4.41-4.32(m,1H),4.31-4.24(m,1H),3.76-3.67(m,1H),3.65-3.52(m,3H),3.49-3.41(m,1H),3.10-2.99(m,2H),2.85-2.61(m,5H),2.45(s,3H),2.43-2.38(m,1H),2.31-2.14(m,4H),2.05-1.88(m,5H),1.84-1.69(m,4H),1.68-1.55(m,1H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.19-1.07(m,2H),1.00-0.90(m,3H),0.85-0.75(m,3H).
实施例169：化合物518的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000353
步骤1：4-(5-氯吡嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将2,5-二氯吡嗪(200mg，1.34mmol)和1-Boc-哌嗪(275.04mg，1.48mmol)溶于二甲亚砜(5mL)中，加入碳酸钾(556.62mg，4.03mmol)。反应液于80℃搅拌反应16小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(20mL)并用二氯甲烷(30mL)萃取三次，合并有机相并用水(30mL)萃洗三次后加入无水硫酸钠干燥，过滤后滤液减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到13/1)得到标题化合物(244mg)。
MS m/z(ESI):199.1[M+H-Boc] +.
步骤2：4-[5-[4-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡嗪-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将4-(5-氯吡嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(98.60mg，330.02μmol)和(6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，220.01μmol)溶于1,4-二氧六环(3mL)中，加入叔丁醇钠(63.43mg，660.04μmol)和(2-二环己基膦基-2,6-二异丙氧基-1,1-联苯基)[2-(2-氨基-1,1-联苯基)]钯(II)(18.40mg，22.00μmol)。反应液经氮气置换后于100℃搅拌反应16小时。LCMS监测反应完全。向反应液中加入水(20mL)并用二氯甲烷(60mL)萃取三次，合并有机相，有机相用水(60mL)洗三次后加入无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到3/1)得到标题化合物(80mg)。
MS m/z(ESI):717.5[M+H] +.
步骤3：2-[3-氨基-1-[1-(5-哌嗪-1-基)吡嗪-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[5-[4-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]吡嗪-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，111.60μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入盐酸二氧六环溶液(4M，279.01μL)。反应液于25℃搅拌反应16小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩至干得标题化合物(90mg，60％纯度)。
MS m/z(ESI):473.2[M+H] +.
步骤4：化合物518的合成
将2-[3-氨基-1-[1-(5-哌嗪-1-基)吡嗪-2-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(30mg，35.36μmol，60％纯度盐酸盐)和中间体2-1(21.00mg，35.36μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入乙酸钠(8.70mg，106.09μmol)、乙酸(2.12mg，35.36μmol)和醋酸硼氢化钠(14.99mg，70.73μmol)。反应液于25℃搅拌反应1小时。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩除去四氢呋喃后，经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例44％-84％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物518(6.3mg)。
MS m/z(ESI):1050.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.95-13.85(m,1H),8.97(s,1H),8.52(s,1H),8.42(d,J＝7.5Hz,1H),8.10(d,J＝7.3Hz,1H),8.01(s,1H),7.92(s,1H),7.49-7.40(m,2H),7.36(d,J＝7.9Hz,3H),7.05-6.95(m,2H),6.45(s,2H),6.12(s,1H),5.14(d,J＝3.3Hz,1H),4.91(s,2H),4.41-4.23(m,4H),3.70(s,2H),3.65-3.48(m,12H),3.04-2.89(m,2H),2.81-2.71(m,2H),2.45(s,3H),2.19(s,3H),2.10-2.00(m,2H),1.92(s,2H),1.75(d,J＝11.7Hz,4H),1.38(d,J＝7.5Hz,3H),1.15(s,2H),0.94(d,J＝6.6Hz,3H),0.85-0.75(m,3H).
实施例170：化合物519的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000354
步骤1：4-(6-氯哒嗪-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将3,6-二氯哒嗪(1g，6.71mmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.38g，7.38mmol)溶于二氧六环(15mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(1.30g，10.07mmol)，反应液在80℃搅拌12小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到3/1)得到标题化合物(1g)。
MS m/z(ESI):298.8[M+H] +.
步骤2：4-[6-[4-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]哒嗪-3-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将(6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，440.02μmol)和4-(6-氯哒嗪-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(170.90mg，572.03μmol)溶于二氧六环(6mL)中，在氮气环境下加入叔丁醇钠(126.86mg，1.32mmol)和甲磺酸(2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(36.80mg，44.00μmol)，反应液在120℃搅拌12小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，浓缩物用二氯甲烷(10mL*3)和水(10mL)萃取，有机相减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/0到3/2)得到标题化合物(135mg)。
MS m/z(ESI):717.0[M+H] +.
步骤3：2-[3-氨基-1-[1-(6-哌嗪-1-基)哒嗪-3-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将4-[6-[4-[3-(叔丁氧羰基氨基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]哒嗪 -3-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(40mg，55.80μmol)溶于甲醇(1mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，139.50μL)，反应液在25℃搅拌12小时，LCMS显示反应完成。将反应液减压浓缩至干，得到标题化合物(30mg)。
MS m/z(ESI):473.1[M+H] +.
步骤4：化合物519的合成
将2-[3-氨基-1-[1-(6-哌嗪-1-基)哒嗪-3-基]哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(30mg，58.94μmol)和中间体2-1(34.99mg，58.94μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和四氢呋喃(1mL)中，加入乙酸(10.62mg，176.82μmol)、乙酸钠(14.50mg，176.82μmol)和醋酸硼氢化钠(37.47mg，176.82μmol)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。反应液加入水(0.2mL)淬灭，减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例39％-79％)的混合物作为洗脱液)得到化合物519(22.8mg)。
MS m/z(ESI):1050.6[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.93(s,1H),9.04-8.93(m,1H),8.53(s,1H),8.41(br d,J＝7.3Hz,1H),8.11(d,J＝7.9Hz,1H),7.50-7.41(m,2H),7.40-7.21(m,5H),7.06-6.95(m,2H),6.46(br s,2H),6.19-5.97(m,1H),5.12(d,J＝3.5Hz,1H),4.98-4.81(m,2H),4.42-4.22(m,4H),3.78-3.54(m,4H),3.45-3.37(m,7H),3.02(br t,J＝12.3Hz,2H),2.76(br t,J＝11.9Hz,2H),2.45(s,5H),2.20(br d,J＝4.6Hz,3H),2.14-1.97(m,3H),1.91(br d,J＝9.7Hz,2H),1.77(br d,J＝13.4Hz,4H),1.45-1.33(m,3H),1.15(br d,J＝9.7Hz,2H),0.95(br d,J＝6.6Hz,3H),0.84-0.74(m,3H).
实施例171：化合物523的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000355
步骤1：2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-羧酸甲酯的合成
将2-[3-氨基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(200mg，519.01μmol)和2-氯嘧啶-5-羧酸甲酯(134.35mg，778.52μmol)溶于二甲亚砜(4mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(201.24mg，1.56mmol，271.21μL)。反应液于140℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，经柱层析色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝2：1，后用二氯甲烷：四氢呋喃＝5：1)得到标题化合物(150mg)。
MS m/z(ESI):447.2[M+H] +.
步骤2：2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-羧酸的合成
将2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-羧酸甲酯(135mg，302.38μmol)溶于水(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)中，加入氢氧化锂(10.86mg)的水溶液(10mL)。反应 液于25℃搅拌反应14小时。LCMS检测反应完毕。反应液用1M盐酸调节pH到5，然后减压浓缩至干得标题化合物(320mg)。
MS m/z(ESI):433.2[M+H] +.
步骤3：4-[[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-酰氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
将2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-羧酸(290mg，272.13μmol)和4-(氨甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(64.15mg，299.34μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟膦盐(124.17mg，326.55μmol)和N,N-二异丙基乙胺(105.51mg，816.39μmol，142.20μL)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完成。加入少量水淬灭，用乙酸乙酯(30mL*3)和水(30mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝1：2)得到标题化合物(130mg)。
MS m/z(ESI):629.5[M+H] +.
步骤4：2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-N-(哌啶-4-基甲基)嘧啶-5-甲酰胺的合成
将4-[[2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]嘧啶-5-酰氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(130mg，206.77μmol)溶于无水甲醇(4mL)，加入盐酸二氧六环(56.92μL，4M)。反应液在25℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干得标题化合物(100mg)。
MS m/z(ESI):529.3[M+H] +.
步骤5：化合物523的合成
将2-[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]-N-(哌啶-4-基甲基)嘧啶-5-甲酰胺(90mg，170.26μmol)和中间体2-1(101.09mg，170.26μmol)溶于无水四氢呋喃(2mL)和N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，先加入乙酸(10.22mg，170.26μmol，9.75μL)和乙酸钠(27.93mg，340.52μmol)，超声至溶液变色，再加入醋酸硼氢化钠(108.25mg，510.78μmol)，再超声直到溶液变成棕色悬浮液，25℃反应2小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Boston Prime C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例42％-82％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物523(15mg)。
MS m/z(ESI):1106.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.98-13.78(m,1H),9.02-8.94(m,1H),8.84-8.75(m,2H),8.55-8.48(m,1H),8.48-8.31(m,2H),8.14-8.04(m,1H),7.42(s,2H),7.39-7.30(m,3H),7.06-6.94(m,2H),6.54-6.34(m,2H),6.15-5.95(m,1H),5.21-5.02(m,1H),5.00-4.82(m,4H),4.70-4.32(m,1H),4.32-4.23(m,1H),3.78-3.66(m,1H),3.64-3.52(m,4H),3.21-3.10(m,4H),2.85-2.77(m,2H),2.77-2.67(m,2H),2.47-2.42(m,3H),2.28-2.17(m,1H),2.12-1.90(m,7H),1.85-1.59(m,8H),1.57-1.47(m,1H),1.46(br s,3H),1.23-1.05(m,4H),0.99-0.89(m,3H),0.84-0.73(m,3H).
实施例172：化合物529的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000356
步骤1：2-[4-(甲氧基亚甲基)环己基]乙酸乙酯的合成
将甲氧基甲基三苯基氯化膦(2.79g，8.14mmol)溶于四氢呋喃中(30mL)，在0℃分批加入叔丁醇钾(1.52g，13.57mmol)，反应液在0℃搅拌1小时。然后在0℃滴加4-氧代环己基乙酸乙酯(1g，5.43mmol)的四氢呋喃溶液(10mL)，反应液在0℃搅拌1小时，然后升温至25℃搅拌10小时。薄层色谱(石油醚：四氢呋喃＝3:1)显示反应完成。反应液用饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL*2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝0～10％)得到标题化合物(140mg)。
步骤2：2-(4-甲酰基环己基)乙酸乙酯的合成
将2-[4-(甲氧基亚甲基)环己基]乙酸乙酯(50mg，235.53μmol)溶于四氢呋喃(1mL)中，加入盐酸溶液(2M，1.18mL)，反应液于25℃搅拌1小时。薄层色谱(石油醚：四氢呋喃＝3:1)显示反应完成。反应液用乙酸乙酯(20mL*2)和水(5mL)萃取，有机相减压浓缩至干，得到标题化合物(45mg)。
步骤3：2-[4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]环己基]乙酸乙酯的合成
将2-(4-甲酰基环己基)乙酸乙酯(20mg，100.88μmol)和2-[3-(甲氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(40.04mg，110.97μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)和四氢呋喃(1.5mL)中，加入乙酸(18.17mg，302.64μmol)、乙酸钠(24.83mg，302.64μmol)和醋酸硼氢化钠(64.14mg，302.64μmol)。反应液于25℃反应1小时。经LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干，浓缩物用二氯甲烷(20mL*3)和水(5mL)萃取，有机相减压浓缩至干，浓缩物经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝2/1)得到标题化合物(30mg)。
MS m/z(ESI):507.1[M+H] +.
步骤4：2-[4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]环己基]乙酸的合成
将2-[4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]环己基]乙酸乙酯(30mg，59.21μmol)溶于四氢呋喃(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化钠(7.11mg，177.64μmol)，反应液于25℃反应12小时，LCMS显示反应完成。反应液用1M盐酸溶液调节pH值至5～6，然后减压浓缩至干，得到标题化合物(30mg)。
MS m/z(ESI):479.3[M+H] +.
步骤5：化合物529的合成
将2-[4-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]环己基]乙酸(30mg，62.68μmol)和(2S,4R)-1-[(S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(33.17mg，68.95μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入N,N-二异丙基乙 胺(40.51mg，313.42μmol)和O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟膦盐(28.60mg，75.22μmol)，反应液于25℃反应1小时。LCMS显示反应完成，反应液加入水(0.2mL)淬灭，然后减压浓缩至干，浓缩物经高效液相色谱法纯化(Phenomenex C18，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例48％-88％)的混合物作为洗脱液)得到化合物529(13.1mg)。
MS m/z(ESI):906.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.98(br s,1H),8.98(br s,1H),8.49(br s,1H),8.39(br s,1H),8.12(br d,J＝6.6Hz,1H),7.77(br d,J＝9.2Hz,1H),7.40(br d,J＝15.0Hz,5H),7.12-6.93(m,3H),5.10(br s,1H),4.91(br s,1H),4.63-4.38(m,3H),4.28(br s,1H),3.61(br s,2H),2.96(br s,5H),2.45(br s,3H),2.34-1.94(m,8H),1.86-1.55(m,7H),1.38(br s,7H),0.94(br s,12H).
实施例173：化合物530的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000357
将2-[3-氨基-1-[1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(20mg，45.05μmol)和中间体2-1(26.75mg，45.05μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和无水四氢呋喃(1mL)中，加入醋酸(2.58μL，45.05μmol)、乙酸钠(7.39mg，90.10μmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(28.64mg，135.14μmol)。反应液在25℃搅拌反应3小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例46％-86％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物530(11.63mg)。
MS m/z(ESI):985.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝13.97(br s,1H),9.00-8.95(m,1H),8.82-8.38(m,2H),8.16-8.08(m,1H),7.48-7.41(m,2H),7.39-7.32(m,3H),7.04-6.93(m,2H),6.44(br s,2H),6.15-5.91(m,1H),5.20-4.99(m,1H),4.98-4.60(m,1H),4.54(br s,1H),4.36(t,J＝7.8Hz,1H),4.28(br s,1H),3.71(br dd,J＝4.2,10.3Hz,1H),3.66-3.52(m,4H),2.94(br d,J＝4.6Hz,2H),2.80(br d,J＝10.6Hz,2H),2.73(br t,J＝11.4Hz,2H),2.45(s,3H),2.20-2.02(m,10H),1.82(br s,5H),1.74-1.64(m,5H),1.45-1.36(m,3H),1.23-1.01(m,5H),1.00-0.91(m,3H),0.85-0.75(m,3H).
实施例174：化合物531的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000358
将2-[3-氨基-1-[1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(22.08mg，49.74μmol)、(2S,4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)丁酰基]-N-[(S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(30.00mg，49.74μmol)和1,2-二溴乙烷(14.02mg，74.61μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(32.14mg，248.68μmol)，反应液于60℃反应12小时，经LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。经高效液相色谱法纯化(Phenomenex C18柱，3μm二氧化硅，30mm 直径，75mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例40％-80％)的混合物作为洗脱液)得到化合物531(3.4mg)。
MS m/z(ESI):500.9[M+2H] 2+；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.97(br s,1H),9.02-8.88(m,1H),8.54-8.47(m,1H),8.44-8.18(m,1H),8.12(d,J＝7.0Hz,1H),7.51-7.26(m,5H),7.03-6.95(m,2H),6.44(br s,2H),6.20-6.09(m,1H),5.32-4.99(m,1H),4.98-4.82(m,1H),4.60-4.48(m,1H),4.47-4.32(m,1H),4.28(br s,1H),3.76-3.65(m,1H),3.60-3.51(m,1H),3.46-3.36(m,2H),3.31-3.23(m,2H),3.12(d,J＝16.5Hz,4H),2.95(d,J＝5.1Hz,2H),2.85(d,J＝7.1Hz,2H),2.46-2.36(m,8H),2.28-1.99(m,9H),1.95-1.76(m,5H),1.67(br d,J＝12.1Hz,2H),1.47-1.33(m,3H),1.16-1.03(m,2H),0.86-0.75(m,3H),1.00-0.72(m,3H).
实施例175：N-[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基丙基]-7-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺(化合物532)的合成
Figure PCTCN2022133547-appb-000359
步骤1：7-(羟甲基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯的合成
将2-叔丁氧羰基-2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸(200mg，742.57μmol)溶于无水四氢呋喃(5mL)中，在0℃下加入硼烷四氢呋喃(1M，2.23mL)。反应液在25℃搅拌反应2小时。薄层层析(石油醚：四氢呋喃＝2:1)检测反应完毕，反应液降温至0℃，加入无水乙醇(3mL)淬灭，在60℃下搅拌0.5小时，反应液减压浓缩至干，用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(3mL)萃取三次，有机相经无水硫酸钠干燥过滤后，减压浓缩至干，得到标题化合物(165mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ3.61(s,2H),3.57(s,2H),3.47(d,J＝6.16Hz,2H),1.93(br d,J＝13.20Hz,2H),1.78-1.80(m,2H),1.50-1.42(m,12H),1.05-0.91(m,2H).
步骤2：7-甲酰基-2-氮杂螺环[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯的合成
将7-(羟甲基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(60mg，234.97μmol)溶于无水二氯甲烷(10mL)中，加入氯铬酸吡啶(75.97mg，352.45μmol)和二氧化硅(70.59mg，1.17mmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。薄层层析(二氧化硅，石油醚：四氢呋喃＝2：1)检测反应完毕。反应液过滤后减压浓缩至干，得到标题化合物(100mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ9.65(br s,1H),3.63-3.53(m,4H),2.15(s,1H),1.96-1.86(m,4H),1.55-1.44(m,13H).
步骤3：7-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]-2-氮杂螺环[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯的合成
将7-甲酰基-2-氮杂螺环[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(90mg，213.16μmol)和2-[3-(甲氨基)-1-(哌啶-4-基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(69.14mg，213.16μmol)溶于无水四氢呋喃(2mL)和无水N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入无水乙酸钠(52.46mg，639.47μmol)、乙酸(38.40mg，639.47μmol，36.61μL)和醋酸硼氢化钠(135.53mg，639.47μmol)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕，反应液减压浓缩至干，用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，有机相经无水硫酸钠干燥后过滤，浓缩至干，经薄层色谱(二氧 化硅，石油醚：四氢呋喃＝2：1)纯化得标题化合物(24mg)。
MS m/z(ESI):562.2[M+H] +.
步骤4：2-[1-[1-(2-氮杂螺[3.5]壬基-7-基甲基)-4-哌啶基]-3-(甲氨基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚的合成
将7-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲基氨基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]-2-氮杂螺环[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(24mg，42.73μmol)溶于无水甲醇(1mL)中，加入盐酸二氧六环(4M，106.82μL)。反应液于25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕，反应液减压浓缩至干得标题化合物(24mg)。
MS m/z(ESI):462.4[M+H] +.
步骤5：N-[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基丙基]-7-[[4-[6-(2-羟基苯基)-3-(甲氨基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-1-基]哌啶-1-基]甲基]-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺的合成
将2-[1-[1-(2-氮杂螺[3.5]壬基-7-基甲基)-4-哌啶基]-3-(甲氨基)吡唑并[4,3-c]哒嗪-6-基]苯酚(20mg，40.16μmol)和N-[(1S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基丙基]氨基甲酸苯酯(22.68mg，40.16μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(25.95mg，200.78μmol，34.97μL)，反应液于60℃搅拌2小时。LCMS检测反应完毕。将反应液减压浓缩至干，残留物经高效液相色谱(Boston Prime C18柱，5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减(乙腈比例55％-75％)的混合物作为洗脱液)纯化得到化合物532(10.1mg)。
MS m/z(ESI):954.6[M+Na] +；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.99(s,1H),8.50(s,1H),8.41(d,J＝7.6Hz,1H),8.15-8.11(m,1H),7.46-7.42(m,2H),7.40-7.33(m,3H),7.09(br d,J＝5.0Hz,1H),7.02-6.97(m,2H),5.55(br d,J＝9.4Hz,1H),5.13(d,J＝3.5Hz,1H),4.91(br t,J＝7.2Hz,1H),4.62-4.51(m,1H),4.43(t,J＝8.1Hz,1H),4.34-4.26(m,2H),3.64-3.55(m,3H),3.51(br d,J＝7.5Hz,2H),3.46(br d,J＝7.8Hz,1H),2.97(br d,J＝4.9Hz,5H),2.46(s,3H),2.20-1.97(m,8H),1.87-1.66(m,8H),1.45(br d,J＝3.9Hz,1H),1.43-1.35(m,5H),0.93(s,9H).
生物学活性及相关性质测试例
测试例1：TR-FRET结合试验
实验使用SMARCA2TR-FRET Assay Kit试剂盒(BPS Bioscience,cat#40342)进行测试，BRM、Bromodomain Ligand 2、Tb-labeled donor和Dye-labeled acceptor使用1X BRD TR-FRET Assay buffer溶解。PFI-3(Selleck,CAS No.1819363-80-8)作为阳性对照药，DMSO组作为阴性对照组，无BRM组作为空白对照组。将待测化合物用DMSO配制成10mM母液，然后使用ddH 2O将待测化合物母液进行三倍的梯度稀释，取2μL稀释后的待测化合物溶液和3μL BRM加入到96孔白板(Cisbio,cat#66PL96025)，于室温条件下孵育10分钟。随后分别加入5μL Bromodomain Ligand 2、5μL Tb-labeled donor和5μL Dye-labeledacceptor，使用振荡器震荡30秒后于1000rpm/分钟下短暂离心，室温孵育30分钟后使用Envision多功能酶标仪(购自PerkinElmer)进行测试，通过GraphPad软件对TR-FRET比值(655nm/622nm)进行数据分析，浓度-效应曲线采用非线性四参数曲线拟合，并计算得到化合物的EC 50，计算方法如下：
Figure PCTCN2022133547-appb-000360
其中：
FRET Sample：加化合物组各孔的FRET值；
FRET Blank：空白对照组的FRET值；
FRET DMSO：阴性对照组的FRET值；
按照以上测试方法测试了本公开内容的化合物与BRM的结合活性(EC 50)，部分结果总结于表1。
表1
化合物 EC 50(nM)
2a 672
3a 506
4a 26
5a 186
11a 78
19a 151
20a 99
21a 86
22a 86
23a 161
测试例2：降解活性测试
试验原理：利用In-Cell Western技术检测化合物对BRM和BRG1降解的影响。
试验方法：
调整细胞浓度(A549：5000细胞/孔，SW1573：8000细胞/孔，均购自ATCC)种于384孔板中，并置于37℃、5％CO 2的条件下过夜培养；DMSO溶解化合物(初始浓度10mM)，依次用DMSO和培养基(DMEM培养基(Thermo fisher，货号11995073)，含10％FBS(Thermo fisher，货号11995073)和1％Penicillin-Streptomycin Solution(Thermo fisher，货号15140-122))稀释化合物并转移至细胞板中，稀释终浓度为10μm，3倍稀释，共10个剂量浓度。置于37℃、5％CO 2条件下继续培养16-18小时。
384孔板中每孔加50μL预冷的PBS(购自Hyclone，货号SH30256.01)清洗；弃液，加50μL 4％的多聚甲醛固定液(购自Biosharp，货号BL539A)，室温孵育20分钟；弃固定液，加50μL 0.1％Triton X-100(购自SIGMA，货号93443-100mL)的PBS溶液，室温孵育30分钟；弃液，加50μL Li-Cor blocking buffer(购自Li-Cor，货号927-70001)，室温孵育1小时；弃封闭液，加50μL一抗(兔抗BRM/BRG1(1：500；BRM抗体购自CST，货号11966S；BRG1抗体购自CST，货号49360S)；鼠抗a-Tubulin(1:2000，购自CST，货号49360S))，4℃孵育过夜。
弃一抗，加50μL PBST(购自medicago，货号09-9410-100)清洗4次；弃液，加50μL二抗(goatα-rabbitIRDye 800CW(购自CST，货号5366P)；goatα-mouse IRDye 680RD(购自CST，货号5151P)(1:5000))，室温避光孵育1-1.5小时；弃二抗，加50μL PBST清洗4次，弃液。用Sapphire双模式多光谱激光成像系统(购自Azure Biosystems)进行荧光扫描；使用Azure Spot分析软件，把每一个孔的荧光强度转化成数值，用XLfit根据化合物的浓度和荧光强度值计算各浓度化合物对BRM和BRG1蛋白降解的抑制。
根据以上所述测试方法测试了本公开内容的化合物对BRM和BRG1的降解活性，部分活性数据总结在表2中。
表2
Figure PCTCN2022133547-appb-000361
Figure PCTCN2022133547-appb-000362
Figure PCTCN2022133547-appb-000363
Figure PCTCN2022133547-appb-000364
注：“-”代表未测试；“NDE”代表在测试浓度下未观察到降解。
测试结果将对照化合物ACBI1(购自MCE，货号HY-128359-1mg，CAS No.:2375564-55-7)的BRM最大降解率(D max)设定为Negtive control(100％降解)，只加了DMSO的细胞组设置为Positive control(0％降解)，以此来计算本公开内容的化合物的DC 50和D max。
结果表明，化合物004、004-1和005均可以高效地降解A549细胞的BRM，其也可以高效地降解SW1573细胞的BRM。然而，化合物004、004-1和005降解SW1573细胞的BRG1的活性较低。
此外，待测化合物可以高效地降解A549细胞的BRM，如化合物004、005、011和027降解A549细胞的BRM的DC 50小于10nM且D max大于90％。化合物047、227、301、302、303、313、375、409和410降解A549细胞的BRM的DC 50小于1nM且D max大于75％。待测化合物可以高效降解SW1573的BRM，降解BRG1的活性则较弱或未表现出明显的降解活性，如化合物010、030、037、042、048、049、054、058和059降解SW1573细胞的BRM的DC 50小于10nM且D max在90％左右，同时这些化合物在10μM对SW1573细胞未表现出明显的BRG1降解活性或降解率小于50％，表现出了很好的选择性。化合物004、005、011、017、025、027、028和056降解SW1573细胞的BRM的DC 50小于10nM且D max大于90％，降解SW1573细胞的BRG1的DC 50大于10nM且D max小于90％，表现出了较好的选择性。化合物047降解SW1573细胞的BRM的DC 50为0.21nM且D max为98％，降解SW1573细胞的BRG1的DC 50为3.4nM且D max为84％，具有16倍左右的选择性。化合物227、278、301、303、304、306、309、311、318、318-1、 319、322、323-2降解SW1573细胞的BRM的DC 50小于1nM且D max大于或等于80％，降解SW1573细胞的BRG1的DC 50大于1nM且D max小于或等于80％，表明其选择性在10倍以上。化合物310和313降解SW1573细胞的BRM的DC 50小于0.1nM且D max为80％左右，降解SW1573细胞的BRG1的DC 50大于0.6nM且D max为70％左右，二者都有10倍左右的选择性。化合物375、378、398、401、409、410和412降解SW1573细胞的BRM的DC 50小于1nM且D max大于90％，降解SW1573细胞的BRG1的DC 50均大于3nM且D max均小于90％，都体现出了9倍以上的选择性。以上结果表明本公开内容的化合物可以选择性地降解BRM，对BRG1则影响较小或没有影响。
测试例3、利用HiBiT detection技术检测化合物对BRM和BRG1蛋白降解活性
1.细胞系构建：
利用HiBiT detection技术检测化合物对BRM和BRG1蛋白降解的影响。将HiBiT标签插入BRM和BRG1蛋白的起始密码子之后或终止密码子之前，当化合物对BRM或BRG1蛋白产生降解，可以通过检测HiBiT标签的表达量来量化BRM和BRG1蛋白的降解。根据HiBiT的插入位点，设计BRM和BRG1的sgRNA和donor DNA；准备Cas9转染试剂(TrueCut TMCas9Protein v2，A36498，Invitrogen；Lipofectamine TMCRISPRMAX TMCas9转染试剂，CMAX00003,Invitrogen；Opti-MEM TMI Reduced Serum Medium，31985070，Thermofisher)，按照对应的量计算所需的各种试剂和sgRNA，donor DNA的量，按照Cas9转染protocol在SW1573细胞上进行转染，24h后换成正常培养液；继续培养至转染后3天，将每个组细胞扩增，用Nano Glo HiBiT Lytic Detection System(N3050，Promega)检测pool中HiBiT标签的表达量；并将HiBiT标签表达量高的细胞pool以单克隆形式种在96孔板中扩增，用Nano Glo HiBiT Lytic Detection System(N3050，Promega)检测单克隆中HiBiT标签的表达量；如果此时检测到的由单克隆细胞扩增的HiBiT标签荧光值很高，则表示这组细胞有可能成功连接了HiBiT标签。将这些单克隆细胞扩增并测序，确定HiBiT序列成功连接且是纯合子，即可用于后续降解实验。
2.细胞种板：
调整细胞浓度(SW1573 BRM/BRG1 knock in cell line：9000细胞/孔)种于384孔板中，并置于37℃,5％CO 2的条件下过夜培养；DMSO溶解化合物，依次用DMSO和培养基稀释化合物并转移至细胞板中，终浓度为1μM，3倍稀释。置于37℃，5％CO 2条件下继续培养16-18小时。
3.蛋白降解检测：
384孔板中每孔加入15μL反应液(Nano Glo HiBiT Lytic Detection System(N3050，Promega)按照protocol配置)，室温孵育10min，用Envision多功能酶标仪(购自PerkinElmer)扫描分析。
4.降解DC 50计算
药物作用终浓度1000nM，3倍稀释，10个浓度点，用EXCEL XLfit5.4.0分别计算每个浓度的蛋白降解率，每个浓度点有2个重复。
蛋白降解率(％)＝(High control-对应孔读值)/(High control-Low control)*100
High control＝0.1％DMSO，定为0％抑制
Low control＝PBS(无细胞)，定为100％抑制
通过10个浓度点的降解率，生成降解曲线，并计算降解DC 50和D max值。
表3
Figure PCTCN2022133547-appb-000365
Figure PCTCN2022133547-appb-000366
Figure PCTCN2022133547-appb-000367
测试结果表明，待测化合物可以高效降解SW1573的BRM，降解BRG1的活性则较弱或未表现出明显的降解活性。如化合物429、430、432、475、482、494、530和532降解SW1573细胞的BRM的DC 50小于1nM且D max大于90％，同时这些化合物降解SW1573细胞的BRG1的DC 50大于5nM且D max小于90％，均表现出了15倍以上的选择性。化合物211、334-1、394、438、444、445、449、461、515和518降解SW1573细胞的BRM的DC 50小于10nM且D max大于80％，同时这些化合物在1000nM下降解SW1573细胞的BRG1的DC 50均小于50％，表现出了100倍以上的选择性。
测试例4：抗增殖试验
试验原理：利用CELL TITER-GLO发光法检测待测化合物对A549和MIA PaCa-2细胞系增殖的影响。
试验方法：
调整细胞浓度(A549&MIA PaCa-2(均购自ATCC)：300细胞/孔)种于96孔板中，并置于37℃,5％CO 2的条件下过夜培养；DMSO(购自Sigma，货号D2650-100mL)溶解化合物(初始浓度10mM)，依次用DMSO和培养基(DMEM培养基(Thermo fisher，货号11995073)，含10％FBS(Thermo fisher，货号10099141C)和1％Penicillin-Streptomycin Solution(Thermo fisher，货号15140-122))稀释化合物并转移至细胞板中，稀释终浓度为10μm，3倍稀释，共10个剂量浓度。置于37℃，5％CO 2条件下继续培养7天。取出细胞板，每孔加入50μL CellTiter-Glo TM(购自Promega，货号G7573)试剂，室温孵育10min，用Envision多功能酶标仪(购自PerkinElmer)扫描分析，读取发光信号值，用XLfit根据化合物的浓度和发光信号值计算各化合物的抑制活性IC 50。
根据以上所述测试方法测试了本公开内容化合物对A549和MIA PaCa-2细胞的抗增殖活性，部分活性数据总结在表4中。
表4
化合物 IC 50(nM,A549细胞) IC 50(nM,MIA PaCa-2细胞)
004 15 -
004-1 141 -
005 20 >10000
007 236 >10000
010 7.7 >10000
011 3.2 >10000
012 340 >10000
013 220 >10000
014 418 >10000
015 746 4305
016 631 >10000
017 38 >10000
018 232 >10000
019 51 2397
021 112 4850
023 151 3867
025 32 3412
027 2.3 2064
028 27 >10000
030 18 >10000
031 95 4793
032-1 72 >10000
033 98 >10000
037 27 >10000
040 15 >1000
042 31 4238
043 26 5372
047 <1.5 >10000
048 27 >10000
049 76 -
053 121 >10000
054 38 >10000
056 37 -
058 97 -
059 70 -
211 39 -
223 38 -
227 1.1 -
228 16 -
229 13 -
278 5.4 -
281 18 -
284 13 -
301 0.73 -
302 0.6 -
303 2.1 -
304 0.6 -
306 12 -
308 74 -
309 5.3 -
310 0.76 -
311 1.4 -
313 1.5 -
318 4.9 -
318-1 8.1 -
319 2.1 -
322 1.9 -
323-1 9.2 -
323-2 4.3 -
332 10 -
334-2 31 -
375 4.0 -
378 5.3 -
398 11 -
400 21 -
401 11 -
402 21 -
409 3.8 -
410 3.7 -
412 5.0 -
443 16 -
449 25 -
473 14 -
注：“-”代表未测试。
由以上结果可以看出，待测化合物对A549细胞(BRG1突变)的抑制活性较强，对MIA PaCa-2细胞(BRM突变)的抑制活性则较弱或未表现出明显的抑制活性。例如，化合物004、004-1和005对A549细胞(BRG1突变)的抑制活性很强，且化合物005未表现出明显的对MIA PaCa-2细胞(BRM突变)的抑制活性；化合物005、010、011、017、028、030、031、032-1和033对A549细胞的IC 50小于100nM，对MIA PaCa-2细胞的IC 50则大于100nM；化合物019、025、027、031和042对A549细胞的IC 50小于100nM，对MIA PaCa-2细胞的IC 50则大于2000nM，选择性均大于50倍。以上结果表明，本公开内容的化合物可以通过选择性地降解BRM来抑制BRG1突变的肿瘤细胞的增殖，产生合成致死效应。
测试例5：抗增殖试验
试验原理：利用CELL TITER-GLO发光法检测待测化合物对SW1573和NCI-H1581细胞系增殖的影响。
试验方法：
调整细胞浓度(SW1573&NCI-H1581(均购自ATCC)；SW1573：2000细胞/孔，NCI-H1581：3000细胞/孔)种于96孔板中，并置于37℃,5％CO 2的条件下过夜培养；DMSO(购自Sigma，货号D2650-100mL)溶解化合物，依次用DMSO和细胞对应培养基(SW1573细胞培养基DMEM，NCI-H1581细胞培养基RPMI 1640，均含10％FBS和1％双抗；均购自Thermo fisher，DMEM培养基货号11965092，RPMI 1640培养基货号11875119，FBS货号10099141C，双抗货号15140-122)稀释化合物并转移至细胞板中，终浓度为10μM，3倍稀释。置于37℃，5％CO 2条件下继续培养7天。取出细胞板，每孔加入50μL CellTiter-Glo TM(购自Promega，货号G7573)试剂，室温孵育10min，用Envision多功能酶标仪(购自PerkinElmer)扫描分析。
计算增殖抑制IC50：
药物作用终浓度10000nM，3倍稀释，共10个dose，用EXCEL XLfit5.4.0分别计算每个浓度的细胞增殖抑制率，每个浓度点有2个重复。
细胞增殖抑制效率(％)＝(High control-对应孔读值)/(High control-Low control)*100
High control＝0.1％DMSO，set as 0％Inhibition
Low control＝PBS(no cells),set as 100％Inhibition
通过10个浓度点的细胞增殖抑制率，生成增殖抑制曲线，并计算IC 50值。
表5
化合物 IC 50(nM,SW1573细胞) IC 50(nM,NCI-H1581细胞)
010 - >10000
318 >10000 2044
482 >10000 >10000
由以上结果可以看出，可以选择性降解BRM的化合物010、318和482(降解SW1573细胞的BRM活性较强，其DC 50小于7nM且D max大于85％；同时这些化合物降解SW1573细胞的BRG1的活性较弱，其DC 50大于70nM且D max小于65％，选择性均大于100倍。)对NCI-H1581细胞(BRM-DEL和BRG1-DEL)的抑制活性较弱，IC 50均大于2μM，说明上述化合物没有显著的脱靶活性。化合物318和482未表现出明显的对SW1573细胞(BRM-WT和BRG1-WT)的抑制活性，在10μM浓度下也没有观察到明显的对SW1573细胞的抑制作用，说明上述化合物对BRG1有良好的选择性。
测试例6：小鼠药代动力学试验
一、试验材料
Balbc nude小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
NMP(N-甲基吡咯烷酮)、Solutol HS15(聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯)、PEG400(聚乙二醇)、HP-β-CD (羟丙基-β-环糊精)、格列吡嗪购自Sigma，甲醇、乙腈和甲酸购自Merck(USA)。K 2EDTA抗凝采血管购自江苏新康医疗器械有限公司。
二、试验方法
1.动物试验
对于每种待测化合物，各选择雌性Balbc nude小鼠3只(20-30g，4-6周)，尾静脉注射给予待测化合物(化合物303、313、318、323-2、331、375和412的溶媒为30％PEG400+70％的HP-β-CD(50％，w/v)水溶液，化合物482的溶媒为5％NMP+15％PEG400+80％的HP-β-CD(20％，w/v)水溶液，其余化合物的溶媒为5％NMP+15％PEG400+80％的Solutol HS15(20％，w/v)水溶液)。对于给药剂量为10mg/kg的化合物，将化合物溶于相应的溶媒配制成2mg/mL的溶液，每只鼠的给药体积均为5ml/kg。对于化合物011，将化合物配制成0.6mg/mL的溶液，每只鼠的给药体积均为5ml/kg。对于化合物278、306、311，将化合物配制成0.2mg/mL的溶液，每只鼠的给药体积均为5ml/kg。试验前，动物正常喂食喂水。试验时，每组小鼠于给药前及给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24h进行静脉采血。采集的全血样品置于K 2EDTA抗凝管中，离心5min(4000rpm,4℃)，取血浆待测。
2.样品处理及生物分析
取小鼠血浆样品10μL，加入150μL甲醇/乙腈(1：1，v/v)溶剂(含内标格列吡嗪)沉淀蛋白，涡旋5min后，离心5min(14000rpm，4℃)，取上清液用含0.1％甲酸(v/v)的水稀释2倍，采用LC-MS/MS系统(AB Sciex Triple Quad 6500+)进行定量检测。在测定样品浓度时随行雌性Balbc nude小鼠血浆标准曲线和质控样品。对20x稀释样品，取2μL样品加入38μL的空白血浆，涡旋1min后，加入600μL甲醇/乙腈(1：1，v/v)溶剂(含内标格列吡嗪)沉淀蛋白，其余处理步骤与上述步骤相同。
3.数据处理
采用Phoenix WinNonlin 8.0软件(Certara,USA)的非房室模型统计矩法进行药代动力学参数的计算。
表6本公开内容的化合物小鼠PK
Figure PCTCN2022133547-appb-000368
Figure PCTCN2022133547-appb-000369
测试例7：大鼠药代动力学试验
一、试验材料
SD大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
NMP(N-甲基吡咯烷酮)、Solutol HS15(聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯)、PEG400(聚乙二醇)、HP-β-CD(羟丙基-β-环糊精)、格列吡嗪购自Sigma，甲醇、乙腈和甲酸购自Merck(USA)。K 2EDTA抗凝采血管购自江苏新康医疗器械有限公司。
二、试验方法
1.动物试验
对于每种待测化合物，各选择雄性SD大鼠3只(200-300g，6-8周)，尾静脉注射给予待测化合物(化合物010和318的溶媒为30％PEG400+70％的HP-β-CD(50％，w/v)水溶液，化合物304的溶媒为5％NMP+15％PEG400+80％的Solutol HS15(20％，w/v)水溶液，化合物303和412的溶媒为5％NMP+15％PEG400+80％的Solutol HS15(10％，w/v)水溶液，化合物482的溶媒为5％NMP+15％PEG400+80％的HP-β-CD(20％，w/v)水溶液。)。对于给药剂量为1、5、10或40mg/kg的化合物，将化合物溶于相应的溶媒分别配制成0.2、1、2或8mg/mL的溶液，每只鼠的给药体积均为5mL/kg。试验前，动物正常喂食喂水。试验时，每组大鼠于给药前及给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、24、48(仅化合物303和318)和72(仅化合物303)h进行静脉采血。采集的全血样品置于K 2EDTA抗凝管中，离心5min(4000rpm,4℃)，取血浆待测。
2.样品处理及生物分析
取大鼠血浆样品10μL，加入150μL甲醇/乙腈(1：1，v/v)溶剂(含内标格列吡嗪)沉淀蛋白，涡旋5min后，离心5min(14000rpm，4℃)，取上清液用含0.1％甲酸(v/v)的水稀释2倍，采用LC-MS/MS系统(AB Sciex Triple Quad 6500+)进行定量检测。在测定样品浓度时随行雄性SD大鼠血浆标准曲线和质控样品。对20x稀释样品，取2μL样品加入38μL的空白血浆，涡旋1min后，加入600μL甲醇/乙腈(1：1，v/v)溶剂(含内标格列吡嗪)沉淀蛋白，其余处理步骤与上述步骤相同。
3.数据处理
采用Phoenix WinNonlin 8.0软件(Certara,USA)的非房室模型统计矩法进行药代动力学参数的计算。
表7本公开内容的化合物大鼠PK
Figure PCTCN2022133547-appb-000370
测试例8：犬药代动力学试验
一、试验材料
Beagle犬购自江苏兆生源生物技术有限公司。
NMP(N-甲基吡咯烷酮)、PEG400(聚乙二醇)、HP-β-CD(羟丙基-β-环糊精)、格列吡嗪购自Sigma，甲醇、乙腈和甲酸购自Merck(USA)。K 2EDTA抗凝采血管购自江苏新康医疗器械有限公司。
二、试验方法
1.动物试验
对于每种待测化合物，各选择雄性Beagle犬3只(8-12kg，年龄>6个月)，静脉注射给予待测化合物(化合物303和309的溶媒为30％PEG400+70％的HP-β-CD(50％，w/v)水溶液，其余化合物的溶媒为5％NMP+15％PEG400+80％的HP-β-CD(20％，w/v)水溶液。)。对于给药剂量为1或5mg/kg的化合物，将化合物溶于相应的溶媒分别配制成0.5或2.5mg/mL的溶液，每只犬的给药体积均为2mL/kg。试验前，动物正常喂食喂水。试验时，每组犬于给药前及给药后0.033、0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、24、48(仅303和318)h进行静脉采血。采集的全血样品置于K 2EDTA抗凝管中，离心5min(4000rpm,4℃)，取血浆待测。
2.样品处理及生物分析
取犬血浆样品20μL，加入300μL甲醇/乙腈(1：1，v/v)溶剂(含内标格列吡嗪)沉淀蛋白，涡旋5min后，离心5min(14000rpm，4℃)，取上清液用含0.1％甲酸(v/v)的水稀释2倍，采用LC-MS/MS系统(AB Sciex Triple Quad 6500+)进行定量检测。在测定样品浓度时随行雄性Beagle犬血浆标准曲线和质控样品。对20x稀释样品，取2μL样品加入38μL的空白血浆，涡旋1min后，加入600μL甲醇/乙腈(1：1，v/v)溶剂(含内标格列吡嗪)沉淀蛋白，其余处理步骤与上述步骤相同。
3.数据处理
采用Phoenix WinNonlin 8.0软件(Certara,USA)的非房室模型统计矩法进行药代动力学参数的计算。
表8本公开内容的化合物犬PK
Figure PCTCN2022133547-appb-000371
测试例9：猴药代动力学试验
一、试验材料
食蟹猴购自广西桂东灵长类开发实验有限公司。
NMP(N-甲基吡咯烷酮)、PEG400(聚乙二醇)、HP-β-CD(羟丙基-β-环糊精)购自国药集团化学试剂有限公司，格列吡嗪购自Sigma，甲醇、乙腈和甲酸购自Merck(USA)。K 2EDTA抗凝采血管购自上海澳翔医疗科技有限公司。
二、试验方法
1.动物试验
对于每种待测化合物，各选择雄性食蟹猴2只(4.5-6.0kg，年龄>3岁)，静脉注射给予待测化合物(溶媒均为5％NMP+15％PEG400+80％的HP-β-CD(20％，w/v)水溶液)。对于给药剂量为1或5mg/kg的化合物，将化合物溶于相应的溶媒配制成0.5或2.5mg/mL的溶液，每只猴的给药体积均为2mL/kg。试验时，每组猴于给药前及给药后0.033、0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24h进行静脉采血。采集的全血样品置于K 2EDTA抗凝管中，离心10min(3000g,4℃)，取血浆待测。
2.样品处理及生物分析
取猴血浆样品20μL，加入300μL甲醇/乙腈(1：1，v/v)溶剂(含内标格列吡嗪)沉淀蛋白，涡旋5min后，离心5min(14000rpm，4℃)，取上清液用含0.1％甲酸(v/v)的水稀释2倍，采用LC-MS/MS系统(AB Sciex Triple Quad 6500+)进行定量检测。在测定样品浓度时随行雄性食蟹猴血浆标准曲线和质控样品。对10x稀释样品，取2μL样品加入18μL的空白血浆，涡旋1min后，加入300μL甲醇/乙腈(1：1，v/v)溶剂(含内标格列吡嗪)沉淀蛋白，其余处理步骤与上述步骤相同。
3.数据处理
采用Phoenix WinNonlin 8.0软件(Certara,USA)的非房室模型统计矩法进行药代动力学参数的计算。
表9本公开内容的化合物猴PK
Figure PCTCN2022133547-appb-000372
测试例10、本公开内容的化合物在肝微粒体中的代谢稳定性测定
一、试验材料及仪器
1.肝微粒体来源：人肝微粒体(Corning 452117)，雄性CD-1小鼠肝微粒体(Corning 452701)，雄性Beagle犬肝微粒体(Corning 452601)，雄性Sprague-Dawley大鼠(Corning 452501)，雄性食蟹猴肝微粒体(Corning 452413)
2.NADPH(Solarbio 1216C022)
3.阳性对照化合物维拉帕米(Sigma MKBV4993V)
4.AB Sciex Triple Quad 4000液质联用仪
二、试验步骤
1.100mM磷酸缓冲液(PBS)的配制：称取7.098g Na 2HPO 4，加入500mL纯水超声溶解，作为溶液A。称取3.400g KH 2PO 4，加入250mL纯水超声溶解，作为溶液B。将A溶液放置在搅拌器上缓慢加入B溶液，直到pH值达到7.4配制成100mM的PBS缓冲液。
2.反应体系的配制
按下表配制反应体系：
Figure PCTCN2022133547-appb-000373
3.将反应体系置于37℃水浴中预孵育10分钟。向反应体系中加入40μL 10mM NADPH溶液(NADPH由100mM的磷酸缓冲液溶解)，NADPH的最终浓度为1mM。用40μL磷酸缓冲液代替NADPH溶液作为阴性对照。阴性对照的作用是排除化合物自身化学稳定性的影响。
4.在反应体系中加入4μL 100μM(溶媒为DMSO)的本公开内容的化合物和阳性对照化合物维拉帕米启动反应，化合物的最终浓度为1μM。
5.在0.5、5、15、30和60分钟，涡旋振荡器充分混匀后，分别取出50μL孵育样品，用4倍的含有内标的冰乙腈终止反应。样品在3220g转速下离心45分钟。离心结束后转移90μL上清液到进样板，加入90μL超纯水混匀，用于LC-MS/MS分析。
所有的数据均通过Microsoft Excel软件进行计算。通过提取离子图谱检测峰面积。通过对母药消除百分比的自然对数与时间进行线性拟合，检测母药的体外半衰期(t 1/2)。
体外半衰期(t 1/2)通过斜率计算：
in vitro t 1/2＝0.693/k
体外固有清除率(CL int)通过下述公式计算：
in vitro CL int＝(0.693/t 1/2)*(孵育体积/蛋白量)
(注：孵育体积单位为μl；蛋白量单位为mg)
经上述公式计算得到的体外半衰期和体外固有清除率值见表10。
表10本公开内容的化合物在肝微粒体稳定性中的体外半衰期和体外固有清除率
Figure PCTCN2022133547-appb-000374
Figure PCTCN2022133547-appb-000375
Figure PCTCN2022133547-appb-000376
Figure PCTCN2022133547-appb-000377
测试例11、本公开内容的化合物与人、狗、大鼠、小鼠和猴的血浆蛋白结合率测定
一、试验材料及仪器
1.试剂及仪器
Figure PCTCN2022133547-appb-000378
2.血浆(EDTA K 2，-80℃储存)
种属 品系/性别 批号 来源
人 男女混合 HUMANPLK2PNNV20210806 通过伦理审批后在本地医院采集
狗 比格犬；雌雄混合 BGL119670 BioIVT
大鼠 SD；雌雄混合 RAT476542 BioIVT
小鼠 CD-1；雌雄混合 M220080 BioIVT
猴 食蟹猴；雌雄混合 PH-Monkey-20220828 北京日新科技有限公司
二、实验步骤
1.浓度为100mM磷酸钠盐和150mM NaCl的缓冲液的配制
用超纯水配制浓度为14.2g/L磷酸氢二钠和8.77g/L氯化钠的碱性溶液，该碱性溶液可以在4℃条件下保存7天。用超纯水配制浓度为12.0g/L磷酸二氢钠和8.77g/L氯化钠的酸性溶液，该酸性溶液可以在4℃条件下保存7天。用酸性溶液滴定碱性溶液至pH值为7.4，该缓冲液可以在4℃保存7天。实验当天测试缓冲液pH值，如果超出7.4±0.1范围，则调节其pH值。
2.透析膜的准备
将透析膜浸泡在超纯水中60分钟以便将膜分离成两片，然后用20％乙醇浸泡20分钟，最后用透析所用缓冲液浸泡20分钟。
3.血浆的准备
将冷冻的血浆迅速在室温下解冻。
将血浆在4℃、3,220g离心力下离心10分钟去除凝块，并将上清收集到新的离心管中。测定和记录血浆的pH值。
注意：a)只能使用解冻不超过两次的血浆。b)只能使用pH值为7至8的血浆。
4.储备液和工作液的配制
配制待测物和对照药华法林钠的10mM DMSO储备液。用98μL DMSO稀释2μL储备液(10mM)得到工作液(200μM)。取3μL工作液，加入597μL人、狗、大鼠、小鼠或猴血浆，终浓度为1μM(0.5％DMSO)，充分涡匀。
5.平衡透析步骤
按照操作说明将透析装置组装起来。在透析膜的一侧加入120μL加药血浆样品，另一侧加入等体积的透析液(磷酸盐缓冲液)。实验为双平行。封上透析板，放入孵育装置，在37℃，5％CO 2，大约100rpm转速下孵育6小时。孵育结束后，揭掉封膜，在每个孔的缓冲液和血浆侧吸取50μL到新板子的不同孔中。
6.样品分析步骤
在磷酸盐缓冲液样品中加入50μL空白血浆，在血浆样品中加入等体积的空白磷酸盐缓冲液。加300μL室温淬灭剂(含内标乙腈(IS，500nM拉贝洛尔，100nM阿普唑仑和2μM酮洛芬))沉淀蛋白。涡旋5分钟。在4℃下，以3,220g离心力将样品板离心30分钟。转移100μL上清液到新板子。根据待测物的液质响应信号和峰形，可能用100μL或200μL水对上清液进行稀释。混匀，利用液质进行样品分析。
三、数据分析
确定待测物和对照药在缓冲液侧和血浆侧的峰面积，计算待测物和对照药的血浆蛋白结合率公式如下：
游离率％＝(待测物或对照药峰面积与内标峰面积比值 缓冲液侧/待测物或对照药峰面积与内标峰面积比值 血浆 侧)*100％
结合率％＝100％-游离率％
所有的数据均通过Microsoft Excel软件进行计算。计算得到的本公开内容的化合物的血浆蛋白结合率值见表11。
表11本公开内容的化合物在不同种属血浆中的蛋白结合率值
Figure PCTCN2022133547-appb-000379
Figure PCTCN2022133547-appb-000380
测试例12、本公开内容的化合物对细胞色素P450酶CYP2C9、CYP2D6和CYP3A4的抑制作用一、试验材料与试验设备
1.试剂
Figure PCTCN2022133547-appb-000381
2.肝微粒体
Figure PCTCN2022133547-appb-000382
3.试验设备
Figure PCTCN2022133547-appb-000383
二、实验步骤
1.将受试物粉末制备成30mM的DMSO储备液，通过用DMSO梯度稀释得到如下浓度：0、4、20、100、400、2000和10000μM。受试物在最终孵育体系中的浓度为0、0.02、0.1、0.5、2、10和50μM。随受试物引入测试体系中的有机溶剂浓度为0.5％。阳性抑制剂在反应体系中的最终浓度信息见下表13。
表12阳性抑制剂的工作液浓度
Figure PCTCN2022133547-appb-000384
表13阳性抑制剂在反应体系中的最终浓度
Figure PCTCN2022133547-appb-000385
2.底物储备液的制备
底物储备液的具体制备和各个酶亚型孵育时间见表14，储备液配好后放于-20℃冰箱保存。在使用之前放于室温融化。
表14底物储备液信息
Figure PCTCN2022133547-appb-000386
3.磷酸盐缓冲盐(100mM，pH 7.4)的制备
先称取7.098g磷酸氢二钠，加入500mL纯水超声溶解，作为溶液A。称取3.400g磷酸二氢钾，加入250mL纯水超声溶解，作为溶液B。将A溶液放置在搅拌器上缓慢加入B溶液直到pH值达到7.4。磷酸盐缓冲液储存在4℃备用。
4. 10mM NADPH配制
试验前现称取适量NADPH，用磷酸盐溶液配制浓度为10mM的工作液，NADPH在试验体系中的最终浓度为1mM。
5.孵育体系的制备
孵育体系的制备见下表，在使用前于37℃水浴预热15分钟。
Figure PCTCN2022133547-appb-000387
6.试验方法
整个孵育过程将于96孔深孔板中进行。先在深孔板中加入179μL孵育体系，之后再加入1μL化合物溶液或者溶媒(DMSO)。在用20μL 10mM NADPH溶液起始反应之前，先将孵育体系于37℃预热15分钟。加入NADPH起始反应后，于37℃孵育相应的时间。试验样品进行双平行制备。
在相应的时间，加入400μL的冰甲醇(IS，500nM Labetalol，100nM Alprazolam和2μM Ketoprofen)对反应进行终止。涡旋混匀后，将深孔板于3220g、4℃离心40分钟。转移100μL上清液到新板子上，加入100μL纯水混匀，用于LC-MS/MS分析。
三、数据分析
生成的代谢产物用LC-MS/MS分析。通过样品与内标峰面积比值来比较加药组比对照组代谢物生成的减少，并基于剩余活性百分比用Excel XLfit 5.3.1.3计算IC 50值。
用下列公式计算剩余活性百分比：
剩余活性百分比(％)＝代谢产物峰面积与内标峰面积比值 受试物/代谢产物峰面积与内标峰面积比值 空白溶剂×100％。
试验结果如表15所示。
表15本公开内容的化合物对细胞色素P450酶的抑制作用
Figure PCTCN2022133547-appb-000388
测试例13、应用手动膜片钳技术评估测试物对hERG钾离子通道电流的影响
一、材料和仪器
Figure PCTCN2022133547-appb-000389
Figure PCTCN2022133547-appb-000390
二、实验步骤
1.细胞系和细胞培养
稳定表达hERG离子通道的HEK293细胞株(货号：K1236)购自Invitrogen公司。该细胞株培养于含85％DMEM、10％透析胎牛血清、0.1mM非必需氨基酸溶液、100U/mL青霉素-链霉素溶液、25mMHEPES、5μg/mL杀稻瘟菌素和400μg/mL遗传霉素的培养基中。待细胞密度增长至培养皿底面积的40％～80％时，采用胰蛋白酶进行消化传代，每周传代三次。在实验前，细胞按照5×10 5的密度培养在6cm培养皿中，加入1μg/mL强力霉素诱导48小时，然后将细胞消化并接种在玻片上以备后续的手动膜片钳实验(注：用于安全评价实验的细胞代数<70代)。
2.溶液配制
1)细胞外液(以mM为单位)：132氯化钠，4氯化钾，3氯化钙，0.5氯化镁，11.1葡萄糖和10HEPES(用氢氧化钠调节pH至7.35)。
2)细胞内液(以mM为单位)：140氯化钾，2氯化镁，10EGTA，5ATP-镁盐和10HEPES(用氢氧化钾调节pH至7.35)。
注：溶液渗透压控制在280～300mOsmol/kg之间。溶液在使用前需要过滤并放在4℃保存。ATP-镁盐先配成100mM储备液，分装保存于-20℃冰箱。在实验当天，取一定量加入到细胞内液中，现配现用。
3.待测化合物溶液配制
1)按照SOP-ADMET-MAN-007标准操作规程，待测化合物用DMSO溶解并配制成终浓度为10mM的储备液。
2)用DMSO将储备液以1:3比例梯度稀释成其他三个中间浓度溶液，浓度分别为3.33mM、1.11mM和0.37mM。
3)实验开始前，用细胞外液将待测化合物储备液及中间溶液稀释1000倍得到系列浓度为10μM、3.33μM、1.11μM和0.37μM的工作溶液，同时用细胞外液将10mM储备液稀释333.33倍得到30μM的工作溶液。工作溶液中DMSO的含量为0.1-0.3％(体积比)(注：工作溶液中DMSO的含量应控制在1％(体积比)以内，避免细胞毒性)。
4)工作液配制完成后，肉眼观察工作液中是否有沉淀或者浑浊。如有，可能是由于化合物在生理溶液中溶解性不佳所致，可将其进一步水浴超声30分钟，以改善溶液的澄清度。
5)测定测试物在30μM、10μM、3.33μM、1.11μM和0.37μM这5个浓度下对hERG通道的潜在抑制作用并拟合量效曲线以及计算IC 50。
4.膜片钳操作
1)将培养皿中载有HEK293细胞的小玻片放置于显微操作台的灌流槽中。
2)在Olympus IX51，IX71或IX73倒置显微镜下将合适的细胞调置于视野中央，使用×10倍物镜找到玻璃电极的尖端，并置于视野的中央。然后使用微操纵器下移电极，同时调整粗准焦螺旋，使电极慢慢接近细胞。
3)当快接近细胞时，转换为×40倍物镜进行观察，通过微操纵器微调档，使电极逐渐接近细胞的表面。
4)给予负压，使电极尖与细胞膜之间形成电阻高于1GΩ的封接。
5)在电压钳模式下对瞬时电容电流Cfast进行补偿。然后重复给予短促的负压进行破膜，最终形成全细胞记录模式。
6)在膜电位钳制于-60mV的条件下，对缓慢电容电流Cslow、细胞膜电容(Cm)和输入膜电阻(Ra)分别进行补偿。
7)细胞稳定后，将钳制电压改为-90mV，采样频率设置为20kHz，过滤频率为10kHz。漏电流的检测条件为钳制电压转为-80mV，时程500ms。
8)hERG电流测试方法如下：施加4.8秒去极化命令电压将膜电位从-80mV去极化至+30mV，然后瞬间施加5.2秒的复极化电压使膜电位降至-50mV以去除通道失活，从而得以观察到hERG尾电流。尾电流的峰值为hERG电流的大小。
9)用于检测待测化合物的hERG电流在给药前均被持续记录120秒以评估受试细胞产生hERG电流的稳定性。只有在评价标准接受范围以内的稳定细胞才能进入后续化合物检测。
10)测定待测化合物对hERG电流的抑制作用：首先将在含0.1％DMSO的细胞外液中测定得到的hERG电流作为检测基线。在hERG电流保持稳定至少5分钟后将含有待测化合物的溶液从低浓度到高浓度依次灌注于细胞周围。每次灌流结束后等待约5分钟以使化合物充分作用于细胞并同步记录hERG电流。待记录电流趋于稳定后记录最后5个hERG电流值，并取其平均值作为其最终在特定浓度下的电流值。在测试完化合物后，加入150nM多菲莱德至同一个细胞上，将其电流完全抑制，作为该细胞的阳性对照。同时，阳性化合物多菲莱德在测试化合物实验结束前后用同一膜片钳系统进行同步检测，以确保整个检测系统的可靠性和灵敏性。
三、数据分析
数据由PatchMaster软件输出，按以下步骤进行分析：
1)灌注空白溶剂或化合物梯度溶液后，稳定得到的5个连续电流值，求取平均值，分别作为“尾电流大小 空白”和“尾电流大小 化合物”；
2)电流抑制百分率通过以下公式进行计算：
Figure PCTCN2022133547-appb-000391
量效曲线通过Graphpad Prism 8.0软件进行拟合并计算IC 50值。结果如表16所示。
表16本公开内容的化合物对hERG钾离子通道电流的影响
化合物 IC 50(μM) 化合物 IC 50(μM)
010 >30 318 >30
303 >30 323-2 >30
304 5.7 482 >30
309 12.3    
测试例14、化合物对A549皮下异种移植瘤的生长抑制实验
一、实验试剂
人非小细胞肺癌A549细胞(中国科学院上海生命科学院)；F-12K培养液(Gibco，货号21127-022)；胎牛血清(Gibco，货号10091-148)；青霉素-链霉素双抗(Penicillin-streptomycin)(Gibco，货号15140-122)；0.25％胰酶-EDTA(Gibco，货号25200-072)；磷酸盐缓冲溶液(DPBS)(Hyclone，货号SH30256.01)；基质胶(Corning，货号356234)。
二、实验方法
动物信息：Balb/c裸小鼠，雌性，7-9周，体重约18-22克，动物购自北京维通利华实验动物技术有限公司，将小鼠饲养在SPF级的环境中，每个笼位单独送排风，所有动物都可以自由获取标准认证的商业实验室饮食和自由饮水。
细胞培养：人非小细胞肺癌A549细胞株体外培养，培养条件为F-12K中加入10％胎牛血清，Penicillin-streptomycin，37℃、5％CO 2孵箱。一周两次用0.25％胰酶-EDTA消化液进行常规消化处理传代。当细胞汇合度为85％-95％，数量达到要求时，收取细胞，计数。
细胞接种：将0.1ml/(含5×10 6)A549细胞悬液(DPBS加基质胶，体积比为1:1)皮下接种于每只小鼠的右侧腰背部。在接种细胞后第16天，依据肿瘤体积随机分组给药，分组当天为Day 0。
给药：组1给予溶媒，5ml/kg，每周两次x2周；组2给予化合物304，给药剂量为40mg/kg，Day 0和Day 3各给一次；组3给予化合物047，给药剂量为40mg/kg，每周给药一次(QW)x2周；组4给予化合物047，给药剂量为40mg/kg，每周给药两次(BIW)x2周；组5给予化合物027，给药剂量为40mg/kg，每周给药两次(BIW)x2周。每组6只小鼠，给药方式均为尾静脉注射给药。
三、肿瘤测量和实验指标
每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a x b 2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。每周两次测量小鼠体重。
化合物的抑瘤疗效用肿瘤生长抑制率TGI(％)来评价。
TGI(％)＝[(1-(某处理组给药结束时平均瘤体积-该处理组开始给药时平均瘤体积)/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积-溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)]x100％。
四、实验结果
见表17和图1，在小鼠皮下移植瘤A549模型给药过程中，组2小鼠体重波动比较明显，但停药后小鼠体重都能够恢复。其他各组小鼠在各自给药方案下，均可耐受。各给药组相对于溶媒对照组均能够显著抑制肿瘤生长(P<0.0001)；一周两次给予40mg/kg化合物047相比于该化合物同剂量下一周一次给药的抑瘤作用更为显著(P<0.01)。
表17 A549皮下瘤模型肿瘤体积
Figure PCTCN2022133547-appb-000392
除非明确排除或以其它方式限制，本文中引用的每一篇文献，包括任何交叉引用的专利或专利申请、本申请对其要求优先权的任何专利申请或专利，均据此全文以引用方式并入本文。此外，当本文中术语的任何含义或定义与以引用方式并入的文献中相同术语的任何含义或定义矛盾时，应当服从在本文中赋予该术语的含义或定义。
虽然已举例说明和描述了本公开内容的具体实施方案，但是本领域技术人员应知晓，在可行的情况下，一个实施方案中描述的技术特征可以应用于另一实施方案，或与另一实施方案中描述的技术特征相组合，因此，本领域技术人员能够在不脱离本公开内容的实质和范围的情况下对本公开内容的实施方案作出各种变化和修改。

Claims (31)

  1. 式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，
    TL-Linker-DIM
    (I)
    其中：
    所述DIM是能够结合E3泛素连接酶的配体化合物；
    所述Linker是共价结合至少一个TL和至少一个DIM的连接基团；
    所述TL为如下所示的基团：
    Figure PCTCN2022133547-appb-100001
    其中：
    Figure PCTCN2022133547-appb-100002
    选自：C＝C-N，其中X 4为N；或N-C＝C，其中X 4为C；
    X 3选自CR 3或N；
    Y 1、Y 2、Y 3、Y 4、X 1选自以下五种情况之一：
    (1)Y 1为CR，Y 2选自CR 2a或N，Y 3选自CR 3a或N，Y 4选自CR 4a或N，X 1选自CR 1或N；
    (2)Y 1选自CR 1a或N，Y 2为CR，Y 3选自CR 3a或N，Y 4选自CR 4a或N，X 1选自CR 1或N；
    (3)Y 1选自CR 1a或N，Y 2选自CR 2a或N，Y 3为CR，Y 4选自CR 4a或N，X 1选自CR 1或N；
    (4)Y 1选自CR 1a或N，Y 2选自CR 2a或N，Y 3选自CR 3a或N，Y 4为CR，X 1选自CR 1或N；
    (5)Y 1选自CR 1a或N，Y 2选自CR 2a或N，Y 3选自CR 3a或N，Y 4选自CR 4a或N，X 1为CR；
    所述R为
    Figure PCTCN2022133547-appb-100003
    其中n选自0、1、2、3或4；R a选自卤素、OH、CN、NO 2、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、NH 2、NH(C 1-C 6烷基)或N(C 1-C 6烷基) 2，其中所述的C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 1-C 6烷氧基任选被R b取代；R b选自卤素、OH、＝O、NH 2、CN或COOH；
    所述R 1a、R 2a、R 3a、R 4a、R 1独立地选自H、卤素、NH 2、NO 2、CN、COOH、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、NH(C 3-C 6环烷基)、NH-4-8元杂环基、NH-5-10元杂芳基、NH-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-4-8元杂环基、NHC(O)(C 1-C 6烷基)、NHC(O)-O(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基)C(O)-O(C 1-C 6烷基)、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、C(O)-(C 3-C 6环烷基)、C(O)-(C 6-C 10芳基)、C(O)-5-10元杂芳基、C(O)NH 2、C(O)NH(C 1-C 6烷基)、C(O)N(C 1-C 6烷基) 2、C(O)NH(C 3-C 6环烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)、C(O)NH-5-10元杂芳基或C(O)NH-4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基任选被R 5取代；
    所述R 3、R 4独立地选自H、OH、卤素、NH 2、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、C 3-C 6环烷基氧基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、NH(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)(C 1-C 6烷基)、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、NHC(O)-4-8元杂环基、C(O)NH(C 1-C 6烷基)、C(O)NH(C 3-C 6环烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)、C(O)NH-5-10元杂芳基或C(O)NH-4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基或C 3-C 6环烷基氧基任选被R 6取代；
    或者，R 1a与R 3及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基任选被R 7取代；
    或者，R 4a与R 4及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基任选被R 8取代；
    或者，R 2a与R 3a及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或5-14元杂环基任选被R 9取代；
    或者，R 1与R 4及其各自相连的原子共同形成C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基，所述C 5-C 10环烯基或5-14元杂环基任选被R 10取代；
    R 5、R 6、R 7、R 8、R 9、R 10独立地选自氘、卤素、OH、＝O、NH 2、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、CN、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基进一步任选被R 5a取代；
    所述R 5a选自卤素、OH、NH 2、＝O或C 1-C 3烷基；
    条件是：R 1a、R 2a、R 3a、R 4a、R 1、R 3、R 4中至少有一个不为H；且当R 4为H时，R 3不为任选取代的
    Figure PCTCN2022133547-appb-100004
    或任选取代的
    Figure PCTCN2022133547-appb-100005
  2. 根据权利要求1所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，
    Figure PCTCN2022133547-appb-100006
    选自C＝C-N，其中X 4为N。
  3. 根据权利要求1或2所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，
    Figure PCTCN2022133547-appb-100007
    选自N-C＝C，其中X 4为C。
  4. 根据权利要求1至3中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1a、R 2a、R 3a、R 4a、R 1独立地选自H、卤素、NH 2、CN、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基、4-8元杂环基、NH(C 1-C 6烷基)、N(C 1-C 6烷基) 2、NH(C 3-C 6环烷基)、NH-4-8元杂环基、NH-5-10元杂芳基、NH-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)(C 3-C 6环烷基)、NHC(O)-4-8元杂环基、NHC(O)-(C 6-C 10芳基)、NHC(O)-5-10元杂芳基、C(O)NH(C 3-C 6环烷基)、C(O)NH-(C 6-C 10芳基)、C(O)NH-5-10元杂芳基或C(O)NH-4-8元杂环基，其中所述的C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 6-C 10芳基、5-10元杂芳基或4-8元杂环基任选被R 5取代。
  5. 根据权利要求1至4中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1a与R 3及其各自相连的原子共同形成任选被R 7取代的5-14元杂环基。
  6. 根据权利要求1至5中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 4a与R 4及其各自相连的原子共同形成任选被R 8取代的6-14元杂环基。
  7. 根据权利要求1至6中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 2a与R 3a及其各自相连的原子共同形成任选被R 9取代的5-10元杂环基。
  8. 根据权利要求1至7中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1与R 4及其各自相连的原子共同形成任选被R 10取代的5-10元杂环基。
  9. 根据权利要求1至8中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，R a选自卤素、OH、NH 2或任选被R b取代的C 1-C 6烷基，n选自0、1或2。
  10. 根据权利要求1至9中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述TL为
    Figure PCTCN2022133547-appb-100008
    其中R 4与所述Linker相连。
  11. 根据权利要求1至10中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述TL为
    Figure PCTCN2022133547-appb-100009
    其中R 3与所述Linker相连。
  12. 根据权利要求1至11中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述TL为
    Figure PCTCN2022133547-appb-100010
    其中R 3a与所述Linker相连。
  13. 根据权利要求1至12中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述TL为
    Figure PCTCN2022133547-appb-100011
    其中R 4a与所述Linker相连。
  14. 根据权利要求1至13中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述TL为如下结构所示的基团：
    Figure PCTCN2022133547-appb-100012
    其中：R a、
    Figure PCTCN2022133547-appb-100013
    Y 2、Y 3、Y 4、X 1、X 3、R 4和n如权利要求1中所定义。
  15. 根据权利要求1至14中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述TL为如下结构所示的基团：
    Figure PCTCN2022133547-appb-100014
    其中：R a、
    Figure PCTCN2022133547-appb-100015
    Y 1、Y 3、Y 4、X 1、X 3、R 4和n如权利要求1中所定义。
  16. 根据权利要求1至15中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述TL为如下结构所示的基团：
    Figure PCTCN2022133547-appb-100016
    其中：R a、
    Figure PCTCN2022133547-appb-100017
    Y 1、Y 2、Y 4、X 1、X 3、R 4和n如权利要求1中所定义。
  17. 根据权利要求1至16中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述TL为如下结构所示的基团：
    Figure PCTCN2022133547-appb-100018
    其中：R a、
    Figure PCTCN2022133547-appb-100019
    Y 1、Y 2、Y 3、X 1、X 3、R 4和n如权利要求1中所定义。
  18. 根据权利要求1至17中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述TL为如下结构所示的基团：
    Figure PCTCN2022133547-appb-100020
    其中：R a、
    Figure PCTCN2022133547-appb-100021
    Y 1、Y 2、Y 3、Y 4、X 3、R 4和n如权利要求1所定义。
  19. 根据权利要求1至18中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述TL选自如下结构之一：
    Figure PCTCN2022133547-appb-100022
    Figure PCTCN2022133547-appb-100023
    Figure PCTCN2022133547-appb-100024
    Figure PCTCN2022133547-appb-100025
    更加优选为如下结构之一：
    Figure PCTCN2022133547-appb-100026
  20. 根据权利要求1至19中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述Linker是共价结合一个TL和一个DIM的连接基团。
  21. 根据权利要求1至20中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述Linker选自-L A-、-L B-、-R 1L-、-R 2L-、-Q 1-、-Q 2-、
    Figure PCTCN2022133547-appb-100027
    Figure PCTCN2022133547-appb-100028
    Figure PCTCN2022133547-appb-100029
    其中：
    -L A-、-L B-彼此独立地选自键、-O-、-S-、-NR 3’-、-CR 4’R 5’-、-C(O)-、-S(O)-、-S(O) 2-、-C(S)-、-C(O)O-或-C(O)NR 6’-；
    R 1L和R 2L彼此独立地选自键、亚烷基、亚杂烷基、亚烯基和亚炔基，其中所述的亚烷基、亚杂烷基、亚烯基和亚炔基任选被选自以下的基团取代：卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、OH、羟烷基、CN、NH 2、＝O、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基；
    Q 1、Q 2、Q 3和Q 4彼此独立地选自环烷基、杂环基、芳基、杂芳基或环烯基，其中所述的环烷基、杂环基、芳基、杂芳基和环烯基各自独立地任选被选自以下的基团取代：卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、OH、羟烷基、CN、NH 2、＝O、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基；
    R 3’选自H、烷基、杂烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
    R 4’和R 5’各自独立地选自H、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、OH、羟烷基、CN、NH 2、＝O、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
    R 6’选自H、烷基、杂烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基。
  22. 根据权利要求1至21中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述DIM选自VHL配体或者CRBN配体。
  23. 根据权利要求1至22中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述DIM选自式(DIM-1)或(DIM-2)所示结构：
    Figure PCTCN2022133547-appb-100030
    其中：
    Figure PCTCN2022133547-appb-100031
    选自
    Figure PCTCN2022133547-appb-100032
    Y为键，或者Y选自Y A、O、NH、NR E、C(O)O、C(O)NR E’、NR E’C(O)、Y A-NH、Y A-NR E、Y A-C(O)、Y A-C(O)O、Y A-OC(O)、Y A-C(O)NR E’或Y A-NR E’C(O)，其中所述Y A选自C 1-C 6亚烷基、C 2-C 6亚烯基或C 2-C 6亚炔基；
    X选自C(O)或C(R A) 2；X A-X B选自C(R A)＝N或C(R A) 2-C(R A) 2；
    每一个R A独立地选自H或C 1-C 3烷基，所述C 1-C 3烷基任选被C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基取代；
    每一个R A’独立地选自C 1-C 3烷基；
    每一个R B独立地选自H或C 1-C 3烷基，或者两个R B与其相连的原子一起形成C(O)、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6环烯基或4-6元杂环基；
    R C选自H、卤素或C 1-C 3烷基；
    每一个R D独立地选自卤素、NO 2、NH 2、OH、COOH、C 1-C 6烷基或C 1-C 6烷氧基；
    每一个R E独立地选自C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环烷基、C(O)-C 1-C 6烷基、C(O)-C 2-C 6烯基、C(O)-C 3-C 8环烷基或C(O)-3-8元杂环烷基，所述R E任选被选自以下的基团取代：卤素、N(R a) 2、NHC(O)R a、NHC(O)OR a、OR b、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环烷基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基，其中所述C 3-C 8环烷基、3-8元杂环烷基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选进一步被选自以下的基团取代：卤素、NH 2、CN、NO 2、OH、COOH、C 1-C 6烷基、C 1-C 6卤代烷基、C 1-C 6烷氧基或C 1-C 6卤代烷氧基；
    R E’选自H、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环烷基，所述C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环烷基任选被选自以下的基团取代：卤素、N(R a) 2、NHC(O)R a、NHC(O)OR a、OR b、C 3-C 8环烷基、3-8元杂环烷基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基，其中所述C 3-C 8环烷基、3-8元杂环烷基、C 6-C 10芳基或5-10元杂芳基任选进一步被选自以下的基团取代：卤素、NH 2、CN、NO 2、OH、COOH、C 1-C 6烷基、C 1-C 6卤代烷基、C 1-C 6烷氧基或C 1-C 6卤代烷氧基；
    每一个R a独立地选自H或C 1-C 6烷基；
    R b选自H或对甲苯磺酰基；
    t选自0或1；
    m选自0、1、2或3；
    p选自0、1或2。
  24. 根据权利要求1至23中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述DIM选自式(DIM-11)所示结构：
    Figure PCTCN2022133547-appb-100033
    其中：
    X C选自键、-CH 2-、-CHCF 3-、-SO 2-、-S(O)-、-P(O)R’-、-P(O)OR’-、-P(O)NR’ 2-、-C(O)-、-C(S)-或
    Figure PCTCN2022133547-appb-100034
    X D选自C、N或Si；
    X E选自键、-CR’ 2-、-NR’-、-O-、-S-或-SiR’ 2-；
    R F不存在，或者R F选自H、氘、卤素、CN、-OR’-、-SR’-、-S(O)R’-、-S(O) 2R’-、-NR’ 2-、-P(O)(OR’) 2、-P(O)(NR’ 2)OR’-、-P(O)(NR’ 2) 2、-Si(OH) 2R’、-Si(OH)R’ 2、-SiR’ 3或C 1-C 4烷基；
    每一个R G独立地选自H、氘、R H、卤素、CN、-NO 2、-OR’、-SR’、-NR’ 2、-SiR’ 3、-S(O) 2R’、-S(O) 2NR’ 2、-S(O)R’、-C(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NR’ 2、-C(O)N(R’)OR’、-C(R’) 2N(R’)C(O)R’、-C(R’) 2N(R’)C(O)NR’ 2、-OC(O)R’、-OC(O)NR’ 2、-OP(O)R’ 2、-OP(O)(OR’) 2、-OP(O)(OR’)NR’ 2、-OP(O)(NR’ 2) 2、-N(R’)C(O)OR’、-N(R’)C(O)R’、-N(R’)C(O)NR’ 2、-N(R’)S(O) 2R’、-NP(O)R’ 2、-N(R’)P(O)(OR’) 2、-N(R’)P(O)(OR’)NR’ 2或-N(R’)P(O)(NR’ 2) 2；
    每一个R H独立地选自C 1-C 6烷基、苯基、4-7元杂环基或5-6元杂芳基；
    环E、环F、环G彼此独立地选自苯基、6元杂芳基、C 5-C 7环烷基、C 5-C 7环烯基、5-7元杂环基或5-6元杂芳基，其中环E、环F和环G各自任选进一步被＝O取代；
    L 1选自键、C 1-C 3亚烷基、C 2-C 3亚烯基或C 2-C 3亚炔基，其中所述C 1-C 3亚烷基、C 2-C 3亚烯基或C 2-C 3亚炔基中的任意1或2个亚甲基任选被置换为以下基团：-O-、-C(O)-、-C(S)-、-C(R’) 2-、-CH(R’)-、-C(F) 2-、-N(R’)-、-S-或-S(O) 2-；
    每一个R’独立地选自H、C 1-C 6烷基、苯基、4-7元杂环基或5-6元杂芳基，或者两个R’与其相连的原子共同形成4-7元杂环基或5-6元杂芳基；
    q选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。
  25. 根据权利要求1至24中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述DIM选自式(DIM-13)、(DIM-14)、(DIM-15)、(DIM-16)或(DIM-17)所示结构：
    Figure PCTCN2022133547-appb-100035
    其中：
    R J选自任选取代的C 1-C 6烷基、任选取代的-(CH 2) jOH、任选取代的-(CH 2) jSH、任选取代的-(CH 2) j-O-(C 1-C 6)烷基、任选取代的-(CH 2) j-CH 2OCH 2-(C 0-C 6)烷基、任选取代的-(CH 2) jCOOH、任选取代的-(CH 2) jC(O)-(C 1-C 6烷基)、任选取代的-(CH 2) jNR cR d、任选取代的-(CH 2) jNHC(O)-R c、任选取代的-(CH 2) jC(O)-NR cR d、任选取代的-(CH 2) jOC(O)-NR cR d、-(CH 2O) jH、任选取代的-(CH 2) jOC(O)-(C 1-C 6烷基)、任选取代的-(CH 2) jC(O)-O-(C 1-C 6烷基)、任选取代的-(CH 2O) jCOOH、任选取代的-(OCH 2) jO-(C 1-C 6烷基)、任选取代的-(CH 2O) jC(O)-(C 1-C 6烷基)、任选取代的-(OCH 2) jNHC(O)-R c、任选取代的-(CH 2O) jC(O)-NR cR d、-(CH 2CH 2O) jH、任选取代的-(CH 2CH 2O) jCOOH、任选取代的-(OCH 2CH 2) jO-(C 1-C 6烷基)、任选取代的-(CH 2CH 2O) jC(O)-(C 1-C 6烷基)、任选取代的-(OCH 2CH 2) jNHC(O)-R c、任选取代的-(CH 2CH 2O) jC(O)-NR cR d、任选取代的-SO 2R s、任选取代的-S(O)R s、NO 2、CN或卤素；
    R c和R d彼此独立地选自H或C 1-C 6烷基，所述C 1-C 6烷基任选被OH或卤素取代；
    R s选自C 1-C 6烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基或-(CH 2) gNR cR d；
    X F和X G彼此独立地选自C＝O、C＝S、S(O)或S(O) 2；
    R L选自任选取代的-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w(C 1-C 6)烷基、任选取代的-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) wNR 1NR 2N、任选取代的-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-芳基、任选取代的-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-杂芳基、任选取代的-(CH 2) j-(C＝O) vNR c(SO 2) w-杂环基、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-C 1-C 6烷基、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-NR 1NR 2N、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-NR cC(O)R 1N、任选取代的-NR e-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-芳基、任选取代的-NR e-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-杂芳基或任选取代的-NR e-(CH 2) j-(C＝O) vNR c(SO 2) w-杂环基、任选取代的-X R2’-C 1-C 6烷基、任选取代的-X R2’-芳基、任选取代的-X R2’-杂芳基或任选取代的-X R2’-杂环基；
    R M选自任选取代的C 1-C 6烷基、任选取代的-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-C 1-C 6烷基、任选取代的-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-NR 1NR 2N、任选取代的-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-NR cC(O)R 1N、任选取代的-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-C(O)NR cR d、任选取代的-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-芳基、任选取代的-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-杂芳基、任选取代的-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-杂环、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-C 1-C 6烷基、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-NR 1NR 2N、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-NR cC(O)R 1N、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-芳基、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-杂芳基、任选取代的-NR e-(CH 2) j-C(O) u(NR c) v(SO 2) w-杂环、任选取代的-O-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-C 1-C 6烷基、任选取代的-O-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-NR 1NR 2N、任选取代的-O-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-NR cC(O)R 1N、任选取代的-O-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-芳基、任选取代的 -O-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-杂芳基或任选取代的-O-(CH 2) j-(C＝O) u(NR c) v(SO 2) w-杂环、任选取代的-(CH 2) j-(V) n’-(CH 2) j-(V) n’-C 1-C 6烷基、任选取代的-(CH 2) j-(V) n’-(CH 2) n-(V) n’-芳基、任选取代的-(CH 2) j-(V) n’-(CH 2) j-(V) n’-杂芳基、任选取代的-(CH 2) j-(V) n’-(CH 2) j-(V) n’-杂环基、任选取代的-(CH 2) j-N(R 1’)(C＝O) m’-(V) n’-C 1-C 6烷基、任选取代的-(CH 2) j-N(R e)(C＝O) m’-(V) n’-芳基、任选取代的-(CH 2) j-N(R e)(C＝O) m’-(V) n’-杂芳基、任选取代的-(CH 2) j-N(R e)(C＝O) m’-(V) n’-杂环基、任选取代的-X R3’-C 1-C 6烷基、任选取代的-X R3’-芳基、任选取代的-X R3’-杂芳基或任选取代的-X R3’-杂环基；
    其中R 1N和R 2N各自独立地是H、任选被OH和卤素取代的C 1-C 6烷基、或任选取代的-(CH 2) j-芳基、-(CH 2) j-杂芳基或-(CH 2) j-杂环基；
    V是O、S或NR c；
    R e独立地选自H或C 1-C 3烷基；
    X R2’和X R3’各自独立地选自任选取代的-(CH 2) j-、-(CH 2) j-C(X v)＝C(X v)-、-(CH 2) j-C≡C-、-(CH 2CH 2O) j-或C 3-C 6环烷基，其中X v是H、卤素或任选取代的C 1-C 3烷基；
    g独立地是0、1、2、3、4、5、6；
    j独立地是0、1、2、3、4、5或6；
    m’独立地是0或1；
    n’独立地是0或1；
    u独立地是0或1；
    v独立地是0或1；
    w独立地是0或1。
  26. 根据权利要求1至25中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述化合物具有选自如下之一的结构：
    Figure PCTCN2022133547-appb-100036
    Figure PCTCN2022133547-appb-100037
    Figure PCTCN2022133547-appb-100038
    Figure PCTCN2022133547-appb-100039
    Figure PCTCN2022133547-appb-100040
    Figure PCTCN2022133547-appb-100041
    Figure PCTCN2022133547-appb-100042
    Figure PCTCN2022133547-appb-100043
    Figure PCTCN2022133547-appb-100044
    Figure PCTCN2022133547-appb-100045
    Figure PCTCN2022133547-appb-100046
    Figure PCTCN2022133547-appb-100047
    Figure PCTCN2022133547-appb-100048
    Figure PCTCN2022133547-appb-100049
    Figure PCTCN2022133547-appb-100050
    Figure PCTCN2022133547-appb-100051
    Figure PCTCN2022133547-appb-100052
  27. 一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-26中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料。
  28. 权利要求1-26中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求27所述的药物组合物在制备预防或治疗BRM介导的疾病的药物中的用途，其中所述BRM介导的疾病优选为肿瘤。
  29. 用于预防或治疗BRM介导的疾病的权利要求1-26中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求27所述的药物组合物，其中所述BRM介导的疾病优选为肿瘤。
  30. 权利要求1-26中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求27所述的药物组合物在预防或治疗BRM介导的疾病中的用途，其中所述BRM介导的疾病优选为肿瘤。
  31. 治疗由BRM介导的疾病的方法，包括对有需要的个体给予治疗有效量的权利要求1-26中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求27所述的药物组合物，其中所述BRM介导的疾病优选为肿瘤，任选地其中，所述个体是哺乳动物，优选人类。
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